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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-11
(45)【発行日】2024-04-19
(54)【発明の名称】ナノ粒子の製造方法
(51)【国際特許分類】
A61K 47/34 20170101AFI20240412BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20240412BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20240412BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240412BHJP
A61K 31/12 20060101ALI20240412BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240412BHJP
B82Y 5/00 20110101ALI20240412BHJP
B82Y 40/00 20110101ALI20240412BHJP
【ＦＩ】
A61K47/34
A61K47/32
A61K9/14
A61K47/10
A61K31/12
A61P29/00
B82Y5/00
B82Y40/00
【請求項の数】
6
(21)【出願番号】P 2019114079
(22)【出願日】2019-06-19
(65)【公開番号】P2020125279
(43)【公開日】2020-08-20
【審査請求日】2022-06-14
(31)【優先権主張番号】P 2019017631
(32)【優先日】2019-02-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】517235993
【氏名又は名称】村上 正裕
(74)【代理人】
【識別番号】110000109
【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス
(72)【発明者】
【氏名】村上 正裕
(72)【発明者】
【氏名】松本 昭博
【審査官】辰己 雅夫
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１０－１８０１４５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１２－５２１４１２（ＪＰ，Ａ）
【文献】再公表特許第２０１６／０８４８４９（ＪＰ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１７／０２６４２６（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ９／００－９／７２
Ａ６１Ｋ４７／００－４７／６９
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
乳酸重合体または乳酸・グリコール酸共重合体を含む塩化メチレン溶液を、ポリビニルアルコールと、プロピレングリコール、ブチレングリコールまたはポリエチレングリコールとの水溶液中において、乳化してエマルションを得る工程Ａ、および、工程Ａで得られたエマルションから有機溶媒を除去する工程Ｂを含む、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法であって、前記水溶液中におけるポリビニルアルコールの濃度が５質量％を超え、２５質量％以下であり、
前記水溶液中におけるプロピレングリコールまたはブチレングリコールの濃度が、６０質量％以上７０質量％以下であるか、または前記水溶液中におけるポリエチレングリコールの濃度が５０質量％である、
方法。
【請求項2】
乳酸重合体が、重合度３～１９のオリゴ乳酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
塩化メチレン溶液が、生理活性物質をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
塩化メチレン溶液が、クルクミンをさらに含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項5】
工程Ｂにおいて、工程Ａで得られたエマルションを、有機溶媒の飽和溶解度以上の量の水で希釈することにより、有機溶媒を除去する、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項6】
工程Ｂにおいて、風乾、加熱、または減圧の手段により乾燥を行うことにより、エマルションをフィルム化する、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、キュムラント平均径が１０～１００ｎｍまたは体積基準のメジアン径が１０～１００ｎｍであるナノ粒子の製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
高分子ナノスフェアは、内包薬物の徐放化だけでなく、組織浸透性や膜透過性の高さや病巣部へのターゲティングの可能性といった点で注目されている。高分子ナノスフェアの調製法として、マイクロフルイダイザーといった高圧乳化機の使用(Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology edt by D.L.Wise, Marcel Dekker, Inc.,New York, 2000, pp 435-357)や溶媒拡散法(Y.Kawashima, Hnadbook of powder technology vol.9 edt by D.Chulia,M.Deleuil, Y.Pourcelot, Elsevier,Amsterdam,1994,pp493-512)といった方法が提唱されている。しかしながら、その粒子径は２００ｎｍ前後であり、１００ｎｍ以下の高分子ナノスフェアの調製は困難となっている。また、水溶性薬物については包含が困難となっている。
【0003】
一般に、高分子微粒子は無菌化が困難とされている。それらの多くは、高圧蒸気滅菌や放射線による滅菌により高分子の分解や微粒子の凝集が発生するためである。そのため、無菌製剤として高分子微粒子を用いるには高度な製造管理が必要な無菌操作法で製造されるのが一般的である。一方で、無菌化には上述の滅菌法の他に菌を除去するろ過法がある。ろ過法を適用するためには微粒子の粒子径を２００ｎｍ以下とする必要がある。すなわち、微粒子の粒子径を２００ｎｍ以下とすることによってろ過法による滅菌法が適用できるため、微粒子を無菌製剤として利用する場合、製造性と無菌性確保の確実性の面から意義が大きい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【文献】Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology edt by D.L.Wise, Marcel Dekker, Inc.,New York, 2000, pp 435-357
【文献】Y.Kawashima, Hnadbook of powder technology vol.9 edt by D.Chulia,M.Deleuil, Y.Pourcelot, Elsevier,Amsterdam,1994,pp493-512
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
１００ｎｍ以下の微粒子化については、上述の無菌性に対する意義に限らず、経口吸収率向上においても意義がある。腸管内部は粘液層で保護されているが、その粘液層は網目構造を有し、そのろ過機能により細菌などの粒子が生体内に吸収されないような防御の仕組みとなっている。一方で、この仕組みにおいては、微粒子の粒子径が２００ｎｍ以下となると粘液層中の拡散係数が大きくなることが報告されている。そのことを利用すると、２００ｎｍ以下のナノ微粒子化により、難吸収性の薬物の経口吸収率向上が期待できる。２００ｎｍ以下のナノ微粒子の吸収促進については、経口に限ったものではなく、口腔といった他の粘膜や、経鼻、経肺、経皮での吸収率の向上も期待できる。
【0006】
上記の通り、２００ｎｍ以下の領域のナノ粒子は様々な利点を有するが、合成以外の方法によりナノ微粒子を製造する方法は限られており、その限られた方法では、２００ｎｍ前後の微粒子は製造できても１００ｎｍ以下の微粒子製造は困難である。
本発明の課題は、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法を提供することである。
本発明の課題は、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
そこで、本発明者らは、好ましくは１００ｎｍ以下の高分子微粒子を製造する方法の開発に取り組んだ。我々は、ナノ粒子の製造にあたっては、乳化時の油‐水の界面張力を下げる必要があると考え、調査した結果、エマルションの製造の分野に用いられている乳化法のひとつにＤ相乳化法があることに行き当たった。Ｄ相乳化法は、高濃度の界面活性剤のブチレングリコールなどのポリオール溶液中に油相を乳化しＯ／Ｄエマルションを形成させた後、水を加えてＯ／Ｗ型エマルションを得る方法である（岩澤ら、界面ハンドブック、エヌ・ティー・エス、９０－９２）。この方法は、マイクロオーダーの分散相を有するエマルションの製造方法であるが、その原理として、高濃度の界面活性剤を使用することとポリオールで水の極性を低くすることで界面張力を低くなることを利用している。
【0008】
一方、ナノ微粒子においては、製造液中では安定であっても、乾燥すると凝集を起こし、乾燥前の粒子径が得られなくなるといったハンドリングの難しさが問題となっている。このことは、ナノ微粒子の製造の困難さとともに適用拡大を阻害している要因となっている。
そこで、我々は、Ｄ相乳化法を参考に鋭意検討の結果、分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、プロピレングリコール、ブチレングリコール、またはポリエチレングリコール水溶液中で乳化したのち、有機溶媒を留去することにより、キュムラント平均径が１０～１００ｎｍまたは体積基準のメジアン径が１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造できることを見出した。この粒子径では、容易にろ過滅菌でき、工業上有利な特性である。さらに、乳化液を薄膜化すると油相中溶媒の乾燥が促進されるのと同時に、水相中の水分も乾燥され、固形物としてフィルム形成できること、そのフィルムを水に溶解すると乾燥前の粒子径と同等なナノ微粒子が放出されることを見出し、ハンドリングの面でも有利であることを見出した。
そこで、我々は、Ｄ相乳化法を参考に鋭意検討の結果、分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、プロピレングリコール、ブチレングリコール、またはポリエチレングリコール水溶液中で乳化したのち、有機溶媒を留去することにより、キュムラント平均径が１０～１００ｎｍまたは体積基準のメジアン径が１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造できることを見出した。この粒子径では、容易にろ過滅菌でき、工業上有利な特性である。さらに、乳化液を薄膜化すると油相中溶媒の乾燥が促進されるのと同時に、水相中の水分も乾燥され、固形物としてフィルム形成できること、そのフィルムを水に溶解すると乾燥前の粒子径と同等なナノ微粒子が放出されることを見出し、ハンドリングの面でも有利であることを見出した。
【0009】
すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
＜１＞ 分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質との水溶液中において、乳化してエマルションを得る工程Ａ、および、工程Ａで得られたエマルションから有機溶媒を除去する工程Ｂを含む、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法。
＜２＞ ６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質が、プロピレングリコール、ブチレングリコールまたはポリエチレングリコールである、＜１＞に記載の方法。
＜３＞ 分子量２００以上の分子が、生分解性高分子である、＜１＞または＜２＞に記載の方法。
＜４＞ 分子２００以上の分子が、乳酸重合体、乳酸・グリコール酸共重合体、またはアクリル酸を含む重合体である、＜１＞から＜３＞の何れか一に記載の方法。
＜５＞ 分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液が、重合度３～１９のオリゴ乳酸を含む有機溶媒溶液である、＜１＞から＜４＞の何れか一に記載の方法。
＜６＞ 分子量２００以上の分子が、生理活性物質である、＜１＞から＜５＞の何れか一に記載の方法。
＜７＞ 有機溶媒が、塩化メチレンである、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の方法。
＜８＞ 分子２００以上の分子が、クルクミンを含む、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の方法。
＜９＞ 前記水溶液中におけるポリビニルアルコールの濃度が５質量％を超え、２５質量％以下である、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の方法。
＜１０＞ 前記水溶液中におけるプロピレングリコールまたはブチレングリコールの濃度が、５０質量％を超え、７０質量％以下である、＜１＞から＜９＞の何れか一に記載の方法。
＜１１＞ 工程Ｂにおいて、工程Ａで得られたエマルションを、有機溶媒の飽和溶解度以上の量の水で希釈することにより、有機溶媒を除去する、＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載の方法。
＜１２＞ 工程Ｂにおいて、風乾、加熱、または減圧の手段により乾燥を行うことにより、エマルションをフィルム化する、＜１＞から＜１１＞の何れか一に記載の方法。
＜１３＞ ＜１＞から＜１２＞の何れか一に記載の方法により製造される、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子。
＜１４＞ ＜１＞から＜１２＞の何れか一に記載の方法により製造される、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるヤヌス微粒子。
＜１＞ 分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質との水溶液中において、乳化してエマルションを得る工程Ａ、および、工程Ａで得られたエマルションから有機溶媒を除去する工程Ｂを含む、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法。
＜２＞ ６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質が、プロピレングリコール、ブチレングリコールまたはポリエチレングリコールである、＜１＞に記載の方法。
＜３＞ 分子量２００以上の分子が、生分解性高分子である、＜１＞または＜２＞に記載の方法。
＜４＞ 分子２００以上の分子が、乳酸重合体、乳酸・グリコール酸共重合体、またはアクリル酸を含む重合体である、＜１＞から＜３＞の何れか一に記載の方法。
＜５＞ 分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液が、重合度３～１９のオリゴ乳酸を含む有機溶媒溶液である、＜１＞から＜４＞の何れか一に記載の方法。
＜６＞ 分子量２００以上の分子が、生理活性物質である、＜１＞から＜５＞の何れか一に記載の方法。
＜７＞ 有機溶媒が、塩化メチレンである、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の方法。
＜８＞ 分子２００以上の分子が、クルクミンを含む、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の方法。
＜９＞ 前記水溶液中におけるポリビニルアルコールの濃度が５質量％を超え、２５質量％以下である、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の方法。
＜１０＞ 前記水溶液中におけるプロピレングリコールまたはブチレングリコールの濃度が、５０質量％を超え、７０質量％以下である、＜１＞から＜９＞の何れか一に記載の方法。
＜１１＞ 工程Ｂにおいて、工程Ａで得られたエマルションを、有機溶媒の飽和溶解度以上の量の水で希釈することにより、有機溶媒を除去する、＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載の方法。
＜１２＞ 工程Ｂにおいて、風乾、加熱、または減圧の手段により乾燥を行うことにより、エマルションをフィルム化する、＜１＞から＜１１＞の何れか一に記載の方法。
＜１３＞ ＜１＞から＜１２＞の何れか一に記載の方法により製造される、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子。
＜１４＞ ＜１＞から＜１２＞の何れか一に記載の方法により製造される、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるヤヌス微粒子。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、キュムラント平均径および体積基準のメジアン径のいずれかが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【発明を実施するための形態】
【0012】
本発明の実施の形態について説明する。
本発明によるナノ微粒子を製造する方法は、キュムラント平均径がおよび体積基準のメジアン径のいずれかがが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法であって、分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質との水溶液中において、乳化してエマルションを得る工程Ａ、および、工程Ａで得られたエマルションから有機溶媒を除去する工程Ｂを含む方法である。
本発明によるナノ微粒子を製造する方法は、キュムラント平均径がおよび体積基準のメジアン径のいずれかがが１０～１００ｎｍであるナノ微粒子を製造する方法であって、分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質との水溶液中において、乳化してエマルションを得る工程Ａ、および、工程Ａで得られたエマルションから有機溶媒を除去する工程Ｂを含む方法である。
【0013】
粒子径については、キュムラント解析による平均粒子径は２００ｎｍ以下であり、好ましくは１８０ｎｍ以下であり、より好ましくは１５０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１３０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１００ｎｍ以下である。キュムラント解析による平均粒子径の下限は特に限定されないが、一般的には１０ｎｍ以上、または２０ｎｍ以上である。
【0014】
体積基準のメジアン径は１０～１００ｎｍであり、好ましくは１０ｎｍ～８０ｎｍであり、より好ましくは１０ｎｍ～５０ｎｍである。粘液の網目構造の目開きが１０～５００ｎｍ、粘液の主成分のＭＵＣ２のＮ末端での会合体の内部空隙のサイズが３５ｎｍとの報告（Ｄ．Ａｍｂｏｒｔ ら、ＰＮＡＳ，１０９，５６４５－５６５０）から考察すると、粘液層透過微粒子に求められるサイズは５０ｎｍ以下と考えられる。
【0015】
キュムラント解析による平均粒子径は、動的光散乱粒度測定装置を用いて、動的光散乱（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ、ＤＬＳ）法によって測定することができる。
体積基準のメジアン径とは、体積基準で積算粒子径分布の値が５０％に相当する粒子径である。体積基準のメジアン径は、例えば、動的光散乱法（ＤＬＳ）、レーザー散乱法、遠心沈降法、ｆｉｅｌｄ－ｆｌｏｗ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ法、電気的検知体法等を用いて測定することができ、好ましくは動的光散乱粒度測定装置を用いて測定することができる。
体積基準のメジアン径とは、体積基準で積算粒子径分布の値が５０％に相当する粒子径である。体積基準のメジアン径は、例えば、動的光散乱法（ＤＬＳ）、レーザー散乱法、遠心沈降法、ｆｉｅｌｄ－ｆｌｏｗ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ法、電気的検知体法等を用いて測定することができ、好ましくは動的光散乱粒度測定装置を用いて測定することができる。
【0016】
本発明においては、分子量２００以上の分子を含む有機溶媒溶液を、ポリビニルアルコールと、６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質との水溶液中において、乳化してエマルションを得る（工程Ａ）。
【0017】
分子量２００以上の分子は、微粒子の基剤である。微粒子の基剤は、水不溶性であることが好ましい。水不溶性の観点から、分子量２００以上の分子は、好ましくは分子量５００以上であり、より好ましくは分子量（重量平均分子量）１０００以上の高分子である。
【0018】
また、微粒子の基剤である上記分子は、生分解性高分子であることも好ましい。微粒子の基剤である上記分子の具体例としては、乳酸重合体、乳酸・グリコール酸共重合体、またはアクリル酸を含む重合体を挙げることができる。上記分子の別の具体例としては、オリゴ乳酸（重合度は例えば３～１９である）を挙げることができる。特定の分子量領域にある鎖状及び環状オリゴ乳酸は、嫌気的解糖系を阻害することで、抗がん作用、ミトコンドリア機能亢進作用、抗アレルギー作用、繊維化抑制作用、放射線からの保護作用等の様々な生理活性作用を示すことが明らかとなっており、生理活性を有する高分子材料として注目されている。
【0019】
また微粒子を構成する成分として、生理活性を有するものであってもよい。例えば、微粒子の基剤である分子量２００以上の分子は、生理活性物質であってもよい。また、水不溶性である分子量２００以上の分子とともに、水溶性物質である生理活性物質を含んでいてもよい。生理活性物質の例としては、ビタミンＢ１２、クルクミンなどを使用することができる。
【0020】
生理活性物質としては、特に限定されないが、以下の成分を使用することができる。
（抗炎症剤）
アスピリン、アセトアミノフェン、エトドラック、メフェナミック、メクロフェナミック、ピロキシカム、イソプロピルアンチピリン、トラネキサム酸、イブプロフェン等
（催眠・鎮静剤）
ニトラゼパム、トリアゾラム、フェノバルビタール、アミバルビタ－ル、アリルイソプロピルアセチル尿素、ブロムワレニル尿素、フルニトラゼパム、ゾルピデム酒石酸塩、アルプラゾラム、エチゾラム、パロキセチン塩酸塩水和物、ロラゼパム、ロフラゼプ酸エチル、エスシロプラムシュウ酸塩等
（抗てんかん剤）
フェニトイン、メタルビタール、プリミドン、クロナゼパム、カルバマゼピン、バルプロ酸等
（鎮うん剤）
塩酸メクリジン、ジメンヒドリナート等
（抗うつ剤）
イミプラニン、ノキシプチリン、フェネルジン等
（精神神経用剤）
ハロペリドール、メプロバメート、クロルジアゼポキシド、ジアゼバム、オキサゼバム、スルピリド、リスペリドン、アリピプラゾール、オランザピン、クエチアピンフマル酸塩、パリペリドン、ペロスピロン塩酸塩水和物、デュロキセチン塩酸塩、パロキセチン、塩酸セルトラリン、アモキサピン等
（鎮けい剤）
パパベリン、アトロピン、エトミドリン等
（強心剤）
ジゴキシン、ジギトキシン、メチルジゴキシン、ユビデカレノン等
（不整脈剤）
ピンドロール、アジマリン、ジソピラミド等
（利尿剤）
ヒドロクロロチアジド、スピロノラクトン、トリアムテレン、フロセミド、ブメタニド等
（抗炎症剤）
アスピリン、アセトアミノフェン、エトドラック、メフェナミック、メクロフェナミック、ピロキシカム、イソプロピルアンチピリン、トラネキサム酸、イブプロフェン等
（催眠・鎮静剤）
ニトラゼパム、トリアゾラム、フェノバルビタール、アミバルビタ－ル、アリルイソプロピルアセチル尿素、ブロムワレニル尿素、フルニトラゼパム、ゾルピデム酒石酸塩、アルプラゾラム、エチゾラム、パロキセチン塩酸塩水和物、ロラゼパム、ロフラゼプ酸エチル、エスシロプラムシュウ酸塩等
（抗てんかん剤）
フェニトイン、メタルビタール、プリミドン、クロナゼパム、カルバマゼピン、バルプロ酸等
（鎮うん剤）
塩酸メクリジン、ジメンヒドリナート等
（抗うつ剤）
イミプラニン、ノキシプチリン、フェネルジン等
（精神神経用剤）
ハロペリドール、メプロバメート、クロルジアゼポキシド、ジアゼバム、オキサゼバム、スルピリド、リスペリドン、アリピプラゾール、オランザピン、クエチアピンフマル酸塩、パリペリドン、ペロスピロン塩酸塩水和物、デュロキセチン塩酸塩、パロキセチン、塩酸セルトラリン、アモキサピン等
（鎮けい剤）
パパベリン、アトロピン、エトミドリン等
（強心剤）
ジゴキシン、ジギトキシン、メチルジゴキシン、ユビデカレノン等
（不整脈剤）
ピンドロール、アジマリン、ジソピラミド等
（利尿剤）
ヒドロクロロチアジド、スピロノラクトン、トリアムテレン、フロセミド、ブメタニド等
【0021】
（抗高血圧剤）
レセルピン、メシル酸ジヒドロエルゴトキシン、塩酸プラゾシン、メトプロロール、プロプラノロール、アテノロール、カンデサルタンレキセチル、テルミサルタン、アジルサルタン、オルメサルタン、ビソプロロールフマル酸塩、カルベジロール、バルサルタン、エナラプリル、イミダプリル、アムロジピンベシル酸塩、ジルチアゼム塩酸塩、ドキサシン、トリクロルメチアジド等
（冠血管拡張剤）
ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、ジルチアゼム、ニフェジピン、ジピリダモール等
（鎮咳剤）
ノスカピン、サルブタモール、プロカテロール、ツロプテロール、トラニラスト、臭化水素酸デキストロメトルファン、リン酸ジヒドロコデイン、リン酸コデイン等
（去痰剤）
ブロムヘキシン塩酸塩、アンブロキソール塩酸塩、グアイフェネシン等
（脳循環改善剤）
ニカルジピン、ピンポセチン等
（交感神経興奮剤）
塩酸メチルエフェドリン等
（糖尿病治療薬）
グリメピリド、ボグリボース、メトホルミン、ミチグリニドカルシウム水和物、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、シダグリプチンリン酸塩水和物、トレラグリプチンコハク酸塩等
（抗病原微生物剤）
エリスロマイシン、ジョサマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、リファンピシン、グリセオフルビン、レボフロキサシ、セフジトレンピボキシル、セフカペンピボキシル、トスフロキサシントシル酸塩水和物、セフジニル、アジスロマイシン水和物、アモキシシリン、バンコマイシン、オフロキサシン、メトロニダゾール、アシクロビル、バラシクロビル、ミコナゾー、イトラコナゾール等
（抗ヒスタミン剤）
ジフェンヒドラミン、プロメタジン、メキタジン、クレマスチンフマル酸塩、ベボタスチンベシル酸塩、フェキソフェナジン、オロパタジン、セチリジン塩酸塩、ロラタジン等
（ステロイド剤）
トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プレドニソロン、ダナゾール、メチルテストステロン、酢酸クロルマジノン等
レセルピン、メシル酸ジヒドロエルゴトキシン、塩酸プラゾシン、メトプロロール、プロプラノロール、アテノロール、カンデサルタンレキセチル、テルミサルタン、アジルサルタン、オルメサルタン、ビソプロロールフマル酸塩、カルベジロール、バルサルタン、エナラプリル、イミダプリル、アムロジピンベシル酸塩、ジルチアゼム塩酸塩、ドキサシン、トリクロルメチアジド等
（冠血管拡張剤）
ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、ジルチアゼム、ニフェジピン、ジピリダモール等
（鎮咳剤）
ノスカピン、サルブタモール、プロカテロール、ツロプテロール、トラニラスト、臭化水素酸デキストロメトルファン、リン酸ジヒドロコデイン、リン酸コデイン等
（去痰剤）
ブロムヘキシン塩酸塩、アンブロキソール塩酸塩、グアイフェネシン等
（脳循環改善剤）
ニカルジピン、ピンポセチン等
（交感神経興奮剤）
塩酸メチルエフェドリン等
（糖尿病治療薬）
グリメピリド、ボグリボース、メトホルミン、ミチグリニドカルシウム水和物、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、シダグリプチンリン酸塩水和物、トレラグリプチンコハク酸塩等
（抗病原微生物剤）
エリスロマイシン、ジョサマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、リファンピシン、グリセオフルビン、レボフロキサシ、セフジトレンピボキシル、セフカペンピボキシル、トスフロキサシントシル酸塩水和物、セフジニル、アジスロマイシン水和物、アモキシシリン、バンコマイシン、オフロキサシン、メトロニダゾール、アシクロビル、バラシクロビル、ミコナゾー、イトラコナゾール等
（抗ヒスタミン剤）
ジフェンヒドラミン、プロメタジン、メキタジン、クレマスチンフマル酸塩、ベボタスチンベシル酸塩、フェキソフェナジン、オロパタジン、セチリジン塩酸塩、ロラタジン等
（ステロイド剤）
トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プレドニソロン、ダナゾール、メチルテストステロン、酢酸クロルマジノン等
【0022】
（ビタミン剤）
ビタミンＡ類、ビタミンＢ類、ビタミンＣ類（アスコルビン酸等）、ビタミンＤ類、ビタミンＥ類、ビタミンＫ類、葉酸（ビタミンＭ類）等
（消化器系疾患治療剤）
タンニン酸、タンニン酸アルブミン、ベルベリン、メサラジン、ジメチコン、ボノプラザン、ファモチジン、ラニチジン、シメチジン、ニザチジン、メトクロプラミド、ファモチジン、オメプラゾール、ドンペリドン、スルピリド、トレピブトン、スクラルファート、活性生菌剤（例えば、ラクトミン、ビフィズス菌等）、制酸剤（例えば、水酸化アルミニウム、合成ヒドロタルサイト、酸化マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、ポリカルボフィルカルシウム等
（その他）
アレンドロン酸ナトリウム水和物、ラロキシフェン、カフェイン、ジクマロール、シンナリジン、クロフィブラート、ゲファルナート、ブロベネシド、メルカプトプリン、メトトレキサート、シクロスポリンA、タクロリムス、ウルソデスオキシコール酸、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、グルクロノラクトン、γ－アミノ酪酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ラクトフェリン、乳性タンパク、システイン、コラーゲン、核酸（DNA、si-RNA、RNAデコイ、cDNA、アンチセンスRNAなど）、生理活性ペプチド(インスリン、カルシトニンなど)、生理活性タンパク質(ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ガンマグロブリン、成長ホルモン、インターフェロンなど)等
ビタミンＡ類、ビタミンＢ類、ビタミンＣ類（アスコルビン酸等）、ビタミンＤ類、ビタミンＥ類、ビタミンＫ類、葉酸（ビタミンＭ類）等
（消化器系疾患治療剤）
タンニン酸、タンニン酸アルブミン、ベルベリン、メサラジン、ジメチコン、ボノプラザン、ファモチジン、ラニチジン、シメチジン、ニザチジン、メトクロプラミド、ファモチジン、オメプラゾール、ドンペリドン、スルピリド、トレピブトン、スクラルファート、活性生菌剤（例えば、ラクトミン、ビフィズス菌等）、制酸剤（例えば、水酸化アルミニウム、合成ヒドロタルサイト、酸化マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、ポリカルボフィルカルシウム等
（その他）
アレンドロン酸ナトリウム水和物、ラロキシフェン、カフェイン、ジクマロール、シンナリジン、クロフィブラート、ゲファルナート、ブロベネシド、メルカプトプリン、メトトレキサート、シクロスポリンA、タクロリムス、ウルソデスオキシコール酸、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、グルクロノラクトン、γ－アミノ酪酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ラクトフェリン、乳性タンパク、システイン、コラーゲン、核酸（DNA、si-RNA、RNAデコイ、cDNA、アンチセンスRNAなど）、生理活性ペプチド(インスリン、カルシトニンなど)、生理活性タンパク質(ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ガンマグロブリン、成長ホルモン、インターフェロンなど)等
【0023】
ポリビニルアルコールは、界面活性剤または乳化安定剤として使用される。水溶液中におけるポリビニルアルコールの濃度は５～２５質量％であることが好ましく、より好ましくは５～１５質量％である。
【0024】
６０％以上の水溶液濃度でポリビニルアルコールとゲル形成する物質は、そのような特性を有するものであれば、特に限定しないが、好ましくは、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ブチレングリコールであり、さらに好ましくは、プロピレングリコールである。これら物質を乳化に用いる連続相に用いる際は、操作性の観点から、ポリビニルアルコールとゲルまたは固化しない水溶液濃度の状態で用いるが、好ましくは、ゲルまたは固化を起こす臨界濃度により近く、ゲル化または固化を起こさない濃度で用いるのが好ましい。水溶液中におけるプロピレングリコールまたはブチレングリコールの濃度は、好ましくは２０～７０質量％であり、より好ましくは６０～７０質量％である。
【0025】
有機溶媒は、特に限定されないが、塩化メチレン、または塩化メチレンとメタノールの混合溶媒などを挙げることができる。
【0026】
乳化は、汎用される乳化機を用いることができる。
【0027】
工程Ｂにおいては、工程Ａで得られたエマルションから、有機溶媒を除去する。
有機溶媒の除去のため方法としては、以下の２つの方法を採用することができる。
第一の方法は、エマルションを水で希釈し、液中乾燥を行う方法である。添加する水は攪拌が容易となる粘度となるように設定すればよい。好ましくはエマルションンの２倍量以上である。好ましくは、有機溶媒の飽和溶解度以上の量の水で希釈する。
有機溶媒の除去のため方法としては、以下の２つの方法を採用することができる。
第一の方法は、エマルションを水で希釈し、液中乾燥を行う方法である。添加する水は攪拌が容易となる粘度となるように設定すればよい。好ましくはエマルションンの２倍量以上である。好ましくは、有機溶媒の飽和溶解度以上の量の水で希釈する。
【0028】
第二の乾燥方法は、エマルションをそのまま乾燥して有機溶媒を除去する方法である。加熱や減圧により乾燥を行うことにより、エマルションをフィルム化してもよい。即ち、乾燥効率を上げるため、適切なシートに展延しフィルム化してもよいが、乾燥後に得られる組成物を利用しやすいように、固形製剤の造粒における結合剤と代わりとして用い、造粒物として乾燥する方法、適切な粒子や錠剤表面に塗布し表面にフィルム形成させる方法、多孔質材料、好ましくはフィルム状あるいは粒状、とくに好ましくは多孔性マイクロスフェアに含侵させた後に乾燥する方法、などを採用してもよい。
【0029】
以下の実施例により本発明を具体的に説明するか、本発明の範囲は実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【0030】
＜実施例１＞
オリゴ乳酸（ＣＰＬ、重合度３～１９分子量２３６～１３６０）の混合物、株式会社主命堂）０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ，ＪポバールＪＰ－０３、日本酢ビ・ポバール株式会社）を６０％ブチレングリコール（ＢＧ）水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックス（Ｔ１８デジタル、ＩＫＡ）で２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置（ＥＬＳＺ、大塚電子）で粒度測定を行った。
オリゴ乳酸（ＣＰＬ、重合度３～１９分子量２３６～１３６０）の混合物、株式会社主命堂）０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ，ＪポバールＪＰ－０３、日本酢ビ・ポバール株式会社）を６０％ブチレングリコール（ＢＧ）水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックス（Ｔ１８デジタル、ＩＫＡ）で２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置（ＥＬＳＺ、大塚電子）で粒度測定を行った。
【0031】
＜比較例１＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。プルロニックＦ１２７を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置（ＳＡＬＤ２２００、島津製作所）で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。プルロニックＦ１２７を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置（ＳＡＬＤ２２００、島津製作所）で粒度測定を行った。
【0032】
＜比較例２＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００、和光純薬工業）を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００、和光純薬工業）を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0033】
＜比較例３＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０（ＨＣＯ６０、日光ケミカル）を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０（ＨＣＯ６０、日光ケミカル）を６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0034】
【表1】
ｂ）キュムラント径
ｃ）体積基準
平均±Ｓ．Ｄ．（３バッチ）
【0035】
表１の結果より、ＰＶＡを乳化剤として用いることで、体積基準のメジアン径が１００ｎｍ以下となることがわかった。
【0036】
＜実施例２＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％プロピレングリコール（ＰＧ）水溶液で１０質量％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％プロピレングリコール（ＰＧ）水溶液で１０質量％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0037】
＜実施例３＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ ＰＥＧ４００水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ ＰＥＧ４００水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0038】
＜実施例４＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ＰＥＧ４００水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ＰＥＧ４００水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0039】
＜比較例４＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを精製水で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを精製水で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、レーザー回折型粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0040】
＜比較例５＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％グリセリン水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％グリセリン水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0041】
＜比較例６＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＥＧ４００水溶液で１０％とした液１０ｍＬを調製したところ、この溶液が固化したため油相を注入、乳化することができなかった。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＥＧ４００水溶液で１０％とした液１０ｍＬを調製したところ、この溶液が固化したため油相を注入、乳化することができなかった。
【0042】
【表2】
【0043】
ａ）乳化剤１０％ＰＶＡ
ｂ）キュムラント径
ｃ）体積基準
ｄ）乳化剤２０％ＰＶＡ
平均±Ｓ．Ｄ．（３バッチ）、実施例４のみ１バッチ
ｂ）キュムラント径
ｃ）体積基準
ｄ）乳化剤２０％ＰＶＡ
平均±Ｓ．Ｄ．（３バッチ）、実施例４のみ１バッチ
【0044】
表２の結果より、ＰＶＡを溶解する溶媒として、ブチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールを用いることで、キュムラント解析による平均粒子径が１００ｎｍ以下、体積基準のメジアン径が１００ｎｍ以下のナノ微粒子が得られることが分かった。一方で、ポリオールを含有していない乳化水相ではナノオーダーの微粒子が得られなかった。また、グリセリンを用いた場合も、ナノオーダーの粒子を得ることはできたが、キュムラント平均径または体積基準のメジアン径が１００ｎｍ以下となる微粒子を得ることができなかった。ポリオールとして、ＰＥＧ４００をもちいた場合、比較例６に示す通り、ＰＶＡを溶解するＰＥＧ４００水溶液の濃度が６０％を超過すると、室温でＰＶＡ－ポリオール水溶液がゲル化および固化したため、乳化ができなかった。
【0045】
＜比較例７＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを５０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0046】
＜比較例８＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを４０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを４０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0047】
＜実施例５＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを７０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを７０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0048】
＜比較例９＞
ＣＰＬ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを２０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを２０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0049】
＜比較例１０＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを８０％ブチレングリコール水溶液で１０％とした液１０ｍＬを調製したが、この液が固化したため、油相注入及び乳化ができなかった。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを８０％ブチレングリコール水溶液で１０％とした液１０ｍＬを調製したが、この液が固化したため、油相注入及び乳化ができなかった。
【0050】
【表3】
【0051】
（ａ) １０％ＰＶＡ
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
【0052】
前述の比較例６のＰＥＧ４００と同様に、ＰＶＡを溶解するブチレングリコール溶液も８０％以上でゲル化および固化し、乳化できなかった（比較例１０）。それ以下のＢＧ濃度では、２０％を超える濃度で目的とする粒子径のナノ微粒子が得られることがわかった。
【0053】
＜実施例６＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0054】
＜実施例７＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液１５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0055】
＜実施例８＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0056】
【表4】
【0057】
(ａ)１０％ＰＶＡ－６０％ ＢＧ水溶液
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
【0058】
表４は、乳化の際のＰＶＡ－ポリオール水溶液の液量の影響を示している。油相の溶媒量が１．５ｍＬであることを考慮すると、油相／水相比率が１／２以上で粒子径の変動がないことが分かり、本製造方法における油相／水相比率の要因に対しては、頑健性が高いと言える。
【0059】
＜比較例１１＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で５％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で５％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0060】
＜実施例９＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0061】
＜実施例１０＞
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２５％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
ＣＰＬ ０．５ｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２５％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して凝集物とゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。
【0062】
【表5】
【0063】
（ａ）６０％ ＢＧ水溶液中
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３ バッチ）
【0064】
ＰＶＡの濃度については、表５に示す通り、５％を超える濃度で目的とする粒子径が得られ、濃度が上がることで粒子径が小さくなることが分かった。なお、２５％以上では、ＰＶＡ－ポリオール水溶液の粘度が高く、乳化時の油相の攪拌ができず不適と考えられる。
【0065】
＜実施例１１＞
乳酸・グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ５０２０分子量２０Ｋ，和光純薬）０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２（分子量１３５５）５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過法にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
乳酸・グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ５０２０分子量２０Ｋ，和光純薬）０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２（分子量１３５５）５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過法にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
【0066】
＜実施例１２＞
ＰＬＧＡ５０２０ ０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２ ５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、一晩乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。分散した液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
ＰＬＧＡ５０２０ ０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２ ５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、一晩乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。分散した液について、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
【0067】
＜比較例１２＞
溶媒拡散法：ＰＬＧＡ５０２０ ０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２ ５ｍｇをアセトン１０ｍＬメタノール２．２ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。０．５％ＰＶＡを１００ｍＬ中に、調製した油相を注入し、スターラー攪拌、気流下、３時間減圧乾燥することで溶媒を留去した。得られた液を０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
溶媒拡散法：ＰＬＧＡ５０２０ ０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２ ５ｍｇをアセトン１０ｍＬメタノール２．２ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。０．５％ＰＶＡを１００ｍＬ中に、調製した油相を注入し、スターラー攪拌、気流下、３時間減圧乾燥することで溶媒を留去した。得られた液を０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
【0068】
＜実施例１３＞
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＬＰＯ（Ｒoｈｍ）０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２（分子量１３５５）５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０質量％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、一晩乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。分散した液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＬＰＯ（Ｒoｈｍ）０．１９５ｇおよびビタミンＢ１２（分子量１３５５）５ｍｇを塩化メチレン２ｍＬメタノール１．１ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０質量％とした液１０ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、一晩乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。分散した液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。１ｍＬ当たり５０ｍｇのマンニトールを溶解し凍結乾燥した。微粒子中のビタミンＢ１２含量は、凍結乾燥した微粒子を塩化メチレン１ｍＬで溶解し、５ｍＬの精製水で抽出し、上清について３６０ｎｍで吸光度を測定することによって、定量した。
【0069】
【表6】
【0070】
乳酸・グリコール酸コポリマーを用いた薬物包含ナノスフェアの調製においては、重量基準のメジアン径が３０ｎｍ以下となるナノ微粒子が得られた（実施例１１、１２）。また、ＥｕｄｒａｇｉｔＲＬＰＯでは重量基準のメジアン径が２０ｎｍ以下となった（実施例１３）。一方、溶媒拡散法では、より微細になるように過剰の溶媒量で調製したにもかかわらず、体積基準のメジアン径を１００ｎｍ以下とすることはできなかった（比較例１２）。包含率については、低くかったが、水溶性のビタミンＢ１２は、２０％ＰＶＡ－６０％プロピレングリコール水溶液中に溶解しないため、乳化時、および実施例１２、１３のフィルム形成時は、ビタミンＢ１２連続相に漏出していないと思われるが、水洗に１日かかったため、その間にビタミンＢ１２が漏出したものと考えられる。なお、実施例１２では、乳化液を乾燥し固形化された混合物を精製水で溶解分散させた。乾燥状態を経ても、分散液の状態の実施例１１と同等の粒子径が得られたことから、実施例１２は、ナノ粒子を放出できる固形製剤であることが証明できた。
【0071】
＜実施例１４＞
Ｅｕｄｒａｇｉｔ RSPO（Ｒoｈｍ）６０ｍｇおよびLABRAFIL M2130CS（ガテホセ）１２０ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬとエタノール０．２ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬおよび０．１Ｍ塩酸溶液０．１ｍＬの混液を、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、溶媒を留去した。得られた液について、限外ろ過を行い、溶媒を０．０００１Ｍ 塩酸に置換、濃縮した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。キュムラント平均粒子径は８９．３ｎｍ、散乱強度Ｄ５０は９４．６ｎｍ、体積分布Ｄ５０は５５．３ｎｍ、個数分布Ｄ５０は４３．５ｎｍであった。透過型電子顕微鏡観察を行ったところヤヌス粒子が形成られていることが確認できた（図１）。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ RSPO（Ｒoｈｍ）６０ｍｇおよびLABRAFIL M2130CS（ガテホセ）１２０ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬとエタノール０．２ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で２０％とした液１０ｍＬおよび０．１Ｍ塩酸溶液０．１ｍＬの混液を、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、溶媒を留去した。得られた液について、限外ろ過を行い、溶媒を０．０００１Ｍ 塩酸に置換、濃縮した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度測定を行った。また、得られた液は、５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去し、限外ろ過にて、脱水、洗浄して、微粒子懸濁液を得た。キュムラント平均粒子径は８９．３ｎｍ、散乱強度Ｄ５０は９４．６ｎｍ、体積分布Ｄ５０は５５．３ｎｍ、個数分布Ｄ５０は４３．５ｎｍであった。透過型電子顕微鏡観察を行ったところヤヌス粒子が形成られていることが確認できた（図１）。
【0072】
＜実施例１５＞
クルクミン（分子量３６８．３８ ナカライテスク）１０ｍｇおよびＰＬＧＡ５０２０９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した（調製直後品）。また、０．８μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去したのち、ろ過膜５００ＫＤａをもちいて限外ろ過を行い、精製水に溶媒置換後、７ｍＬに濃縮した。マンニトールを３５０ｍｇ加えて、凍結乾燥を行い凍結乾燥した。凍結乾燥品についても、精製水に再懸濁し、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
クルクミン（分子量３６８．３８ ナカライテスク）１０ｍｇおよびＰＬＧＡ５０２０９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過してゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した（調製直後品）。また、０．８μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去したのち、ろ過膜５００ＫＤａをもちいて限外ろ過を行い、精製水に溶媒置換後、７ｍＬに濃縮した。マンニトールを３５０ｍｇ加えて、凍結乾燥を行い凍結乾燥した。凍結乾燥品についても、精製水に再懸濁し、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0073】
＜実施例１６＞
クルクミン １０ｍｇおよびＰＬＧＡ５０２０ ９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
クルクミン １０ｍｇおよびＰＬＧＡ５０２０ ９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１００ｍＬ中に溶解した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0074】
【表7】
【0075】
水不溶性の化合物であるクルクミンを用いて、乳酸・グリコール酸コポリマーを用いた薬物包含ナノスフェアを調製した。その結果、体積基準のメジアン径が約４０ｎｍのクルクミン含有ナノ粒子が得られた。実施例１５では、従来一般に用いられるマンニトールと凍結乾燥することで、再分散性可能なナノ粒子が得られることがわかった。実施例１６は乳化直後に乾燥させた固形製剤であるが、乾燥状態を経ても、再分散させると実施例１５と同等の粒子径が得られたことから、実施例１６は、ナノ粒子を放出できる固形製剤であることが証明できた。
【0076】
＜実施例１７＞
クルクミン １０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００（Ｒoｈｍ） １０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置を測定した。
クルクミン １０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００（Ｒoｈｍ） １０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置を測定した。
【0077】
【表8】
【0078】
＜実施例１８＞
クルクミン １０ｍｇおよびヒプロメロースフタル酸エステル（ＨＰ５５、信越化学）９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１０ｍＬ中に溶解した。得られた液を、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した（調製直後品）。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。また一方、その液をリン酸緩衝液でｐＨ６．８とし（処理品）、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
クルクミン １０ｍｇおよびヒプロメロースフタル酸エステル（ＨＰ５５、信越化学）９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＢＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１０ｍＬ中に溶解した。得られた液を、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した（調製直後品）。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。また一方、その液をリン酸緩衝液でｐＨ６．８とし（処理品）、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0079】
＜実施例１９＞
クルクミン １０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００（Ｒoｈｍ） ９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１０ｍＬ中に溶解した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した（調製直後品）。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。また一方、その液をリン酸緩衝液でｐＨ６．８とし（処理品）、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
クルクミン １０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００（Ｒoｈｍ） ９０ｍｇをエタノール０．５ｍＬと塩化メチレン１．５ｍＬの混液に溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、テフロン(登録商標)シート上に広げ、３日間乾燥した。乾燥して得られたフィルムを精製水１０ｍＬ中に溶解した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した（調製直後品）。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。また一方、その液をリン酸緩衝液でｐＨ６．８とし（処理品）、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した後、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0080】
【表9】
【0081】
腸溶性高分子（ＨＰ５５、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００）とともに本発明の調製法で製造したところ、水に再分散させると目的のナノ粒子を得ることができなかったが、その液にｐＨ６．８のリン酸緩衝液加えると体積基準Ｄ５０が実施例１８では１１．２ｎｍ、実施例１９では２５ｎｍとなった。このことは、本製剤を内服すると、小腸で、腸溶性高分子が溶解し、内包されていたナノ化したクルクミンが放出されることを示唆している。
【0082】
＜実施例２０＞
ＣＰＬ １５０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬに、調製した油相をウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬの精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ １５０ｍｇおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬに、調製した油相をウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬの精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0083】
【表10】
【0084】
＜実施例２１＞
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
【0085】
＜実施例２２＞
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ（Ｒoｈｍ） １００ｍｇおよびＣＰＬ ４００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ（Ｒoｈｍ） １００ｍｇおよびＣＰＬ ４００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
【0086】
＜実施例２３＞
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ ２５０ｍｇおよびＣＰＬ ２５０ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ ２５０ｍｇおよびＣＰＬ ２５０ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
【0087】
＜実施例２４＞
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ ４００ｍｇおよびＣＰＬ １００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ ４００ｍｇおよびＣＰＬ １００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに１００ｍＬ精製水中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、ゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度とζ電位を測定した。
【0088】
【表11】
【0089】
カチオン性高分子Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯをオリゴ乳酸ＣＰＬに配合し、本発明でナノ粒子化した。Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ／ＣＰＬ＝０／５００～１００／４００までは粒子径に影響はなく、２５０／２５０、４００／１００とＥｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯの量が増えると粒子径低下が認められた。図２には実施例２１についてネガティブ染色後の透過型電子顕微鏡写真を示す。粒子は球形であることが確認でき、電子顕微鏡写真から算出される個数基準Ｄ５０は２５．６ｎｍであった。ζ電位を測定したところ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳＰＯ／ＣＰＬ＝２５０／２５０、４００／１００でそれぞれ１４．６８ｍＶ、２０．１０ｍＶと電位が高くなったことから、安定性が増し、製造時の凝集が抑えられたため、粒子径が小さくなったと推察している。
【0090】
＜実施例２５＞
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0091】
＜実施例２６＞
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で２０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0092】
＜実施例２７＞
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ５００ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに０．１４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0093】
【表12】
【0094】
乳化液を精製水中に投入したとき、ＣＰＬが含有する酸性物質によりｐＨ３．３と酸性となった。すなわち、負の電荷を有するＣＰＬ粒子においては、酸性条件下では電位が低くなり、粒子同士が凝集傾向にあると考えられる。そこで、中和を目的に予め水酸化ナトリウムを投入することで、最終の分散液のｐＨを６．８～７．８になるように調整した。その結果、凝集物の量が減ったのと同時に、体積基準Ｄ５０、個数基準Ｄ５０が低下することがわかった。分散液のｐＨが中性になることで、粒子の負の電位が高まり粒子間の反発力が強まった結果、製造時における、粒子同士の融合や凝集が抑えられたものと考えられる。
【0095】
＜実施例２８＞
ＣＰＬ１５０ｍｇとＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ１５０ｍｇとＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0096】
＜実施例２９＞
ＣＰＬ１５０ｍｇとＰＬＧＡ５０２０ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ１５０ｍｇとＰＬＧＡ５０２０ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0097】
＜実施例３０＞
ＣＰＬ１５０ｍｇとＰＥＧ６０００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
ＣＰＬ１５０ｍｇとＰＥＧ６０００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ＰＧ水溶液で１０％とした液３ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0098】
【表13】
【0099】
＜実施例３１＞
シクロスポリン５０ｍｇとＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
シクロスポリン５０ｍｇとＥｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００ ５０ｍｇを塩化メチレン１．５ ｍＬに溶解し油相を調製した。ＰＶＡを６０％ ＰＧ水溶液で１５％とした液５ｍＬを、ウルトラタラックスで２０，０００ｒｐｍ攪拌しているところに、調製した油相を注入し、そのまま５分間乳化してエマルションを得た。得たエマルションは、直ちに精製水１００ｍＬ中に投入し、スターラー攪拌下３時間、塩化メチレンを留去した。得られた液は、０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して、凝集物とゴミを除去した。その液について、動的光散乱粒度測定装置で粒度を測定した。
【0100】
【表14】
【図1】
【図2】
