▶ ハーバー・バイオメド・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-11
(45)【発行日】2024-04-19
(54)【発明の名称】抗ＣＤ７３抗体およびその適用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240412BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240412BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240412BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240412BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240412BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240412BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240412BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240412BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240412BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240412BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240412BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20240412BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240412BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20240412BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240412BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240412BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20240412BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C07K16/28
C07K16/46
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61P35/00
A61K35/12
A61K35/76
A61K31/7088
A61P35/02
A61P43/00 111
C12P21/08
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2022510988
(86)(22)【出願日】2020-08-20
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-25
(86)【国際出願番号】 CN2020110340
(87)【国際公開番号】W WO2021032173
(87)【国際公開日】2021-02-25
【審査請求日】2022-03-24
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2019/101837
(32)【優先日】2019-08-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】520223321
【氏名又は名称】ハーバー・バイオメド・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＨＡＲＢＯＵＲ ＢＩＯＭＥＤ （ＳＨＡＮＧＨＡＩ） ＣＯ．， ＬＴＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(74)【代理人】
【識別番号】100221545
【弁理士】
【氏名又は名称】白江 雄介
(72)【発明者】
【氏名】シー，レイ
(72)【発明者】
【氏名】ガン，シン
(72)【発明者】
【氏名】シャン，チェンチェン
(72)【発明者】
【氏名】ロン，イーピン
(72)【発明者】
【氏名】ホァ，ユン
【審査官】山本 晋也
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１７－５３４６４８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５３７６２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５０１１９７（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／１３７５９８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／２３７１５７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０６８９０７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／２１５５３５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／１８７５１２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１３１９５０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Bertrand ALLARD et al.，“Targeting CD73 Enhancesthe Antitumor Activity of Anti-PD-1 and Anti-CTLA-4 mAbs”，Clinical Cancer Research，2013年10月14日，Vol. 19, No. 20，p.5626-5635，DOI:10.1158/1078-0432.CCR-13-0545
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
Ｃ１２Ｎ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
(１)配列番号９６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；(２)配列番号１０４の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(３)配列番号１０５の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(４)配列番号１０６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(５)配列番号１０７の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(６)配列番号１０４の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(７)配列番号１０５の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(８)配列番号１０６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(９)配列番号１０７の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１０)配列番号９６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１１)配列番号９５の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１２)配列番号９９の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１３)配列番号１０１の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１４)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１５)配列番号１０３の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１６)配列番号９５の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１４の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１７)配列番号１００の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１４の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１８)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１４の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１９)配列番号１０３の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１４の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(２０)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１８の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(２１)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１１９の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(２２)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１２０の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(２３)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１２１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；または
(２４)配列番号１０２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域、および配列番号１２２の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域、
を含む、ＣＤ７３に結合する単離抗原結合タンパク質。
【請求項2】
(１)それぞれ配列番号７、１８および３５に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５５、６６および７８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；(２)それぞれ配列番号７、２３および３８に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５５、６６および７８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(３)それぞれ配列番号７、２３および３９に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５５、６６および７８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(４)それぞれ配列番号７、２４および３８に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５５、６６および７８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(５)それぞれ配列番号７、２４および３９に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５５、６６および７８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(６)それぞれ配列番号６、１７および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および７７に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(７)それぞれ配列番号６、２１および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および７７に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(８)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および７７に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(９)それぞれ配列番号６、１７および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８１に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１０)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８１に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１１)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８４に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１２)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８５に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１３)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８６に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；
(１４)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８７に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域；または
(１５)それぞれ配列番号６、２２および３４に示すアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３領域；および配列番号５４、６５および８８に示すアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３領域、
を含む、請求項１に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項3】
重鎖可変領域ＶＨおよび軽鎖可変領域ＶＬを含み、(１)該ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；
(２)該ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；
(３)該ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；
(４)該ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；
(５)該ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；
(６)該ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む；
(７)該ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む；
(８)該ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む；
(９)該ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む；
(１０)該ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む；
(１１)該ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；
(１２)該ＶＨは配列番号９９に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；
(１３)該ＶＨは配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；
(１４)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；
(１５)該ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；
(１６)該ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；
(１７)該ＶＨは配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；
(１８)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；
(１９)該ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；
(２０)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む；
(２１)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１１９に示すアミノ酸配列を含む；
(２２)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１２０に示すアミノ酸配列を含む；
(２３)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１２１に示すアミノ酸配列を含む；または
(２４)該ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＶＬは配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項4】
ａ. ヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に同等の結合親和性で結合できる；ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；
ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；
ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；
ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；および
ｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる
性質の１種類以上を有する、請求項１～３の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項5】
該抗原結合タンパク質が抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１～４の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項6】
該抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ)２、Ｆｖフラグメント、Ｆ(ａｂ’)２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖおよび／またはｄＡｂを含む、請求項５に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項7】
該抗体がモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および完全ヒト抗体から選択される、請求項５または６に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項8】
該抗体が重鎖ＨＣおよび軽鎖ＬＣを含み、(１)該ＨＣが配列番号１２４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含む；
(２)該ＨＣが配列番号１３２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含む；
(３)該ＨＣが配列番号１３３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含む；
(４)該ＨＣが配列番号１３４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含む；
(５)該ＨＣが配列番号１３５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含む；
(６)該ＨＣが配列番号１３２に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含む；
(７)該ＨＣが配列番号１３３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含む；
(８)該ＨＣが配列番号１３４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含む；
(９)該ＨＣが配列番号１３５に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含む；
(１０)該ＨＣが配列番号１２４に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含む；
(１１)該ＨＣが配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含む；
(１２)該ＨＣが配列番号１２７に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含む；
(１３)該ＨＣが配列番号１２９に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含む；
(１４)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含む；
(１５)該ＨＣが配列番号１３１に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含む；
(１６)該ＨＣが配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含む；
(１７)該ＨＣが配列番号１２８に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含む；
(１８)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含む；
(１９)該ＨＣが配列番号１３１に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含む；
(２０)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含む；
(２１)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含む；
(２２)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含む；
(２３)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１４９に示すアミノ酸配列を含む；または
(２４)該ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み、かつ該ＬＣが配列番号１５０に示すアミノ酸配列を含む、
請求項５に記載の単離抗原結合タンパク質。
【請求項9】
請求項１～８の何れか一項に記載の該単離抗原結合タンパク質をコードする、１以上の単離核酸分子。
【請求項10】
請求項９に記載の該１以上の単離核酸分子を含む、１以上のベクター。
【請求項11】
請求項９に記載の該１以上の単離核酸分子、または請求項１０に記載の該１以上のベクターを含む、細胞。
【請求項12】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質を産生する方法であって、請求項１１に記載の細胞を請求項１～８の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養することを含む、方法。
【請求項13】
請求項１～８の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質、請求項９に記載の１以上の核酸分子、請求項１０に記載の１以上のベクターおよび／または請求項１１に記載の細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項14】
腫瘍の予防、軽減および／または治療のための医薬の製造における、請求項１～８の何れか一項に記載の該単離抗原結合タンパク質、請求項９に記載の該１以上の核酸分子、請求項１０に記載の該１以上のベクター、請求項１１に記載の該細胞および／または請求項１３に記載の該医薬組成物の使用
【請求項15】
該腫瘍が、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む、請求項１４に記載の使用。
【請求項16】
ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害するための医薬の製造における、請求項１～８の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質の使用。
【請求項17】
ＣＤ７３内在化を媒介するための医薬の製造における、請求項１～８の何れか一項に記載の単離抗原結合タンパク質の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
発明の背景
５’－ヌクレオチダーゼとしても知られる分化抗原群７３、ＣＤ７３は、ヒトにおいてＮＴ５Ｅ遺伝子によりコードされる酵素である。ＣＤ７３は、原形質膜の外表面にグリコシルホスファチジルイノシトール結合により結合した２個の同一の７０kDサブユニットの二量体からなる。
５’－ヌクレオチダーゼとしても知られる分化抗原群７３、ＣＤ７３は、ヒトにおいてＮＴ５Ｅ遺伝子によりコードされる酵素である。ＣＤ７３は、原形質膜の外表面にグリコシルホスファチジルイノシトール結合により結合した２個の同一の７０kDサブユニットの二量体からなる。
【0002】
ＣＤ７３は、細胞外ヌクレオシド一リン酸の、アデノシンなどのヌクレオシドへの脱リン酸化を触媒することが知られている。細胞外アデノシンは癌組織に蓄積し、腫瘍免疫回避の重要な機構を構成する。数ある作用の中で、腫瘍由来アデノシンは、アデニリルシクラーゼ活性化Ａ２Ａ受容体を介して浸潤エフェクターＴ細胞を大きく阻害する(Ohta, et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA 103:13132-13137)。ＣＤ７３発現は、白血病、膀胱癌、神経膠腫、神経膠芽腫、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、甲状腺癌、食道癌および乳癌を含む広範な腫瘍細胞で報告されている(Jin et al., Cancer Res 2010; 70:2245-55およびStagg et al., PNAS 2010; 107:1547-52)。
【0003】
ＣＤ７３は、腫瘍細胞の細胞－細胞および細胞－マトリックス相互作用を制御することが示されているが、ＣＤ７３発現および活性はまた、Ｔ細胞応答の減少とも結びつけられ、薬物耐性と関連づけられている。他の問題は、一般にＣＤ７３阻害剤と称される抗体は、ＣＤ７３のエクト－５’ヌクレオチダーゼ活性の調節によっては作用し得ないことである。ある抗体、７Ｇ２(ｍＩｇＧ２アイソタイプ、Life Technologies)は、ＣＤ７３を阻害することが報告されているが、この抗体はフローサイトメトリーで細胞表面ＣＤ７３と結合せずまたはせいぜい極めて低い親和性で結合するだけである。ＣＤ７３に結合する他の抗体であるクローンＡＤ２(マウスＩｇＧ１アイソタイプ)は、受容体クラスター形成および細胞内内在化を引き起こすが、酵素活性に対する効果はわずかであることが報告されている。さらに別の薬剤である１Ｅ９(マウスＩｇＧ３アイソタイプ、Santa Cruz Biotechnology, Inc.)は、酵素阻害と無関係にＴ細胞シグナル伝達を促進することが報告されている。さらなるｍＡｂである４Ｇ４(ＩｇＧ１アイソタイプ、Novus Biologicals)は、Ｔ細胞表面からのＣＤ７３シェディングを誘導することが報告されている。１剤のみが、さらなる特徴づけはされていないが、組み換えＣＤ７３を使用するアッセイで酵素を遮断する部分的能力を有することが報告されており(Sachsenmeier et al. ((2012) J. Biomed. Screening 17:993-998)、後に、細胞内在化を誘導する抗体として報告された(Rust et al. (2013) Mol. Cancer 12:11)。加えて、さらに一つの複雑にする因子は、文献に記載された抗体が、一般にＦｃγ受容体により結合され得るマウスアイソタイプであり、何らかの可能性のある遮断効果をＦｃ媒介効果と分離することが困難であることである。Ｆｃγ受容体により結合する抗ＣＤ７３抗体は、例えばＣＤ７３発現腫瘍細胞(およびおそらくＣＤ７３発現免疫サプレッサー細胞)の枯渇(例えばＡＤＣＣによる)を媒介することができおよび／または何らかの真の遮断効果よりむしろ炎症促進性サイトカインの産生を誘導し得る。故に、ＣＤ７３のターゲティングが興味深いにも関わらず、最も有効な抗ＣＤ７３抗体の特徴は、未確定のままである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
ＣＤ７３のための新規アッセイおよび抗体が、新規治療標的としてのその可能性のために必要である。
【課題を解決するための手段】
【0005】
発明の概要
本発明は、次の性質の１以上を有する単離抗原結合タンパク質を提供する：ａ. ヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる；ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；およびｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる。さらに、本発明はまた、単離抗原結合タンパク質を産生する方法ならびに腫瘍の予防、軽減および／または治療における単離抗原結合タンパク質の医薬使用も提供する。
本発明は、次の性質の１以上を有する単離抗原結合タンパク質を提供する：ａ. ヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる；ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；およびｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる。さらに、本発明はまた、単離抗原結合タンパク質を産生する方法ならびに腫瘍の予防、軽減および／または治療における単離抗原結合タンパク質の医薬使用も提供する。
【0006】
ある態様において、本発明は、次の性質の１以上を有する単離抗原結合タンパク質を提供する：ａ. 同等な結合親和性でヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる；ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；およびｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる。
【0007】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１６８の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0008】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１６９の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0009】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【0010】
ある実施態様において、該抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ)２、Ｆｖフラグメント、Ｆ(ａｂ’)２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖおよび／またはｄＡｂを含む。
【0011】
ある実施態様において、該抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体から選択される。
【0012】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0013】
ある実施態様において、該ＶＨは配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0014】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0015】
ある実施態様において、該ＶＬは配列番号１１１および１１５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0016】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ３は配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含む。
【0017】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ３は配列番号３５、３８および３９の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0018】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ２は配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含む。
【0019】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ２は配列番号１８、２３および２４の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0020】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含む。
【0021】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は重鎖可変領域ＶＨを含み、該ＶＨは配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含む。
【0022】
ある実施態様において、該ＶＨは配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0023】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣは配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0024】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含む。
【0025】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含む。
【0026】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含む。
【0027】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は軽鎖可変領域ＶＬを含み、ここで、該ＶＬは配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含む。
【0028】
ある実施態様において、該ＶＬは配列番号１１１および１１５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0029】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣは配列番号１３９および１４３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0030】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0031】
ある実施態様において、該ＶＨは配列番号９５、９９、１００、１０１、１０２および１０３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0032】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１５５の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0033】
ある実施態様において、該ＶＬは配列番号１１０、１１４、１１８、１１９、１２０、１２１および１２２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0034】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含む。
【0035】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ２は配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含む。
【0036】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ２は配列番号１７、２１および２２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0037】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含む。
【0038】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は重鎖可変領域ＶＨを含み、ここで、ＶＨは配列番号１５６に示すアミノ酸配列を含む。
【0039】
ある実施態様において、該ＶＨは配列番号９５、９９、１００、１０１、１０２および１０３の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0040】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣは配列番号１２３、１２７、１２８、１２９、１３０および１３１の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0041】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ３は配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含む。
【0042】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ３は配列番号７７、８１、８４、８５、８６、８７および８８の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0043】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含む。
【0044】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含む。
【0045】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は軽鎖可変領域ＶＬを含み、ここで、該ＶＬは配列番号１５５に示すアミノ酸配列を含む。
【0046】
ある実施態様において、該ＶＬは配列番号１１０、１１４、１１８、１１９、１２０、１２１および１２２の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0047】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣは配列番号１３８、１４２、１４６、１４７、１４８、１４９および１５０の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【0048】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0049】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は配列番号１１６の重鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３領域の何れか一つを含む。
【0050】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含む。
【0051】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含む。
【0052】
ある実施態様において、該ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む。
【0053】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は重鎖可変領域ＶＨを含み、該ＶＨは配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含む。
【0054】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含む。
【0055】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含む。
【0056】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含む。
【0057】
ある実施態様において、該ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含む。
【0058】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は軽鎖可変領域ＶＬを含み、該ＶＬは配列番号１１６の何れかに示すアミノ酸配列を含む。
【0059】
ある実施態様において、該単離抗原結合タンパク質は抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣは配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含む。
【0060】
他の態様において、本発明は、該単離抗原結合タンパク質をコードする１以上の単離核酸分子を提供する。
【0061】
他の態様において、本発明は、該１以上の単離核酸分子を含む１以上のベクターを提供する。
【0062】
他の態様において、本発明は、該１以上の単離核酸分子または該１以上のベクターを含む細胞を提供する。
【0063】
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件下で細胞を培養することを含む、単離抗原結合タンパク質を産生する方法を提供する。
【0064】
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質、１以上の核酸分子、１以上のベクターおよび／または細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
【0065】
他の態様において、本発明は、腫瘍の予防、軽減および／または治療のための医薬の製造における、本発明の該単離抗原結合タンパク質、該１以上の核酸分子、該１以上のベクター、該細胞および／または該医薬組成物の使用を提供する。
【0066】
ある実施態様において、該腫瘍は、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む。
【0067】
他の態様において、本発明は、腫瘍の予防、軽減および／または治療のための方法であって、それを必要とする対象に本発明の単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。
【0068】
ある実施態様において、該腫瘍は、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む。
【0069】
他の態様において、本発明は、本発明の単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害する方法を提供する。
【0070】
他の態様において、本発明は、本発明の単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、ＣＤ７３内在化を媒介する方法を提供する。
【0071】
他の態様において、本発明は、腫瘍の予防、軽減および／または治療のための医薬の製造における、該単離抗原結合タンパク質、該１以上の核酸分子、該１以上のベクター、該細胞および／または該医薬組成物の使用を提供する。
【0072】
ある実施態様において、腫瘍は、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む。
【0073】
他の態様において、本発明は、腫瘍の予防、軽減および／または治療のための方法であって、それを必要とする対象に本発明の単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。
【0074】
本発明のさらなる態様および利点は、本発明の説明的実施態様のみが示され、記載される、次の詳細な記載から、当分野の当業者には容易に明らかとなる。認識されるとおり、本発明は、他のおよび別の実施態様が可能であり、そのいくつかの詳細は、種々の明らかな点で修飾が可能であり、全て、本開示から逸脱しない。従って、図面および明細書は、本質的に説明的であり、限定的とみなしてはならない。
【0075】
引用による組み込み
本明細書に記載する全ての刊行物、特許および特許出願は、ここでは、引用により、各個々の刊行物、特許または特許出願が具体的にかつ個々に引用により包含されると示されたのと同程度に、引用により本明細書に包含させる。
本明細書に記載する全ての刊行物、特許および特許出願は、ここでは、引用により、各個々の刊行物、特許または特許出願が具体的にかつ個々に引用により包含されると示されたのと同程度に、引用により本明細書に包含させる。
【図面の簡単な説明】
【0076】
本発明の新規特性を、特に、添付する特許請求の範囲と共に示す。本発明の特性および利点の良好な理解は、本発明の原則が用いられる説明的実施態様を示す次の詳細な記載および以下のとおりである、添付する図面(ここでは「図」とも称する)を参照して、得られる。
【0077】
【0078】
【0079】
【0080】
【0081】
【0082】
【0083】
【0084】
【0085】
【0086】
【0087】
【0088】
【0089】
【0090】
【発明を実施するための形態】
【0091】
詳細な記載
本発明の種々の実施態様がここに示され、記載されているが、このような実施態様は単なる例として提供されることは、当業者は明らかである。本発明から逸脱することなく、多くの変動、変化および置換が当業者にはわかり得る。ここに記載する本発明の実施態様の種々の代替を用い得ることは、理解されるべきである。
本発明の種々の実施態様がここに示され、記載されているが、このような実施態様は単なる例として提供されることは、当業者は明らかである。本発明から逸脱することなく、多くの変動、変化および置換が当業者にはわかり得る。ここに記載する本発明の実施態様の種々の代替を用い得ることは、理解されるべきである。
【0092】
ここで使用する単数表現は、一般に、文脈から他の解釈が明確に支持されない限り、複数対象も含む。
【0093】
ここで使用する用語「ＣＤ７３」は、５’エクトヌクレオチダーゼとしても知られ、一般に、細胞外ヌクレオシド５’一リン酸をヌクレオシド、すなわちアデノシン一リン酸(ＡＭＰ)をアデノシンに変換できる酵素(ヌクレオチダーゼ)をいう。ＣＤ７３の主機能は、細胞外ヌクレオチド(例えば、５’－ＡＭＰ)から、高度に免疫抑制性分子であるアデノシンへの変換である。用語「ＣＤ７３」は、細胞により天然に発現されるＣＤ７３のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。ＣＤ７３またはその何れかのバリアントおよびアイソフォームは、それを天然に発現する細胞もしくは組織から単離されてよくまたは当分野で周知のおよび／またはここに記載する技術を使用して組み換えにより産生されてよい。従って、ここに記載する抗原結合タンパク質は、ヒト以外の種のもの(例えば、カニクイザルＣＤ７３)と交差反応し得る。あるいは、抗体はヒトＣＤ７３に特異的であってよく、他種と何ら交差反応性を示さなくてよい。ヒトＣＤ７３のアミノ酸配列は、GenBank under accession number AAH65937.1(５’－ヌクレオチダーゼ、エクト)、NP_002517(アイソフォーム１プレプロタンパク質)またはNP_001191742(アイソフォーム２プレプロタンパク質)に示される。
【0094】
ここで使用する用語「Ｔａｂ１」またはＰＲ００２０７８は、一般に抗ＣＤ７３抗体をいう。Ｔａｂ１の重鎖アミノ酸配列は配列番号１３７に示し、Ｔａｂ１の軽鎖アミノ酸配列は配列番号１４５に示した。
【0095】
ここで使用する用語「Ｔａｂ２」またはＰＲ０００７５２は、一般に抗ＣＤ７３抗体をいう。Ｔａｂ２の重鎖アミノ酸配列は配列番号１２６に示し、Ｔａｂ３の軽鎖アミノ酸配列は配列番号１４１に示した。
【0096】
ここで使用する用語「Ｔａｂ３」またはＰＲ０００６９０は、一般に抗ＣＤ７３抗体をいう。Ｔａｂ３の重鎖アミノ酸配列は配列番号１２５に示し、Ｔａｂ３の軽鎖アミノ酸配列は配列番号１４０に示した。
【0097】
ここで使用する用語「内在化」は、細胞の細胞外表面から細胞の細胞内表面への分子の移動の過程と関連する分子、生化学および細胞的事象をいう。本過程は、とりわけ、細胞外分子(例えばホルモン、抗体および小有機分子)；膜関連分子(例えば細胞－表面受容体)；および細胞外分子に結合した膜関連分子の複合体(例えば、膜貫通受容体に結合したリガンドまたは膜関連分子に結合した抗体)の内在化を含み得る。
【0098】
ここで使用する用語「抗原結合タンパク質」は、一般に、抗原に結合する部分および、所望により、抗原結合部分が抗原への抗原結合タンパク質の結合を促進する立体配座を採ることを可能とする足場またはフレームワーク部分を含む、タンパク質をいう。抗原結合タンパク質の例は、抗体、抗体フラグメント(例えば、抗体の抗原結合部分)、抗体誘導体および抗体アナログを含む。抗原結合タンパク質は、例えば、天然に存在する免疫グロブリンの構造を有し得る。「免疫グロブリン」は、四量体分子である。天然に存在する免疫グロブリンにおいて、各四量体は、ポリペプチド鎖の２個の同一の対からなり、各対は、１個の軽鎖(ＬＣ)および１個の重鎖(ＨＣ)を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う約１００～１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能を担う定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、κまたはλ軽鎖と分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεと分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとしての抗体のアイソタイプを規定する。天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される３個の超可変領域に連結した比較的保存されたフレームワーク領域(ＦＲ)の同じ一般的構造を示す。Ｎ末端からＣ末端方向で、軽鎖および重鎖両者は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【0099】
ここで使用する用語「ＣＤＲ」は、一般に抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列をいう。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分に３個の重鎖および３個の軽鎖ＣＤＲ(またはＣＤＲ領域)がある。ＣＤＲ配列には種々のナンバリングシステム、例えば、Chothia(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883)、Kabat(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))があることが当業者には明らかである。Chothiaナンバリングシステムを、本発明の抗体における残基のナンバリングに使用する。
【表1】
【0100】
ここで、Ｌａａ－Ｌｂｂは、Ｎ末端からａａ番からｂｂ番のアミノ酸配列をいう。例えば、Ｌ２４－Ｌ３４は、軽鎖の２４番から３４番のアミノ酸配列をいう。
【0101】
用語「単離」は、核酸またはタンパク質に適用するとき、該核酸またはタンパク質が、天然状態では関連している他の細胞成分が実質的にないことをいう。
【0102】
ここで使用する用語「ＫＤ」または「ＫＤ」は、一般に複合体がその成分分子に崩壊するときのような、大きな物体が可逆性に小さな成分に離れる(解離する)傾向を測定する、特定のタイプの平衡定数である解離定数をいう。解離定数は、結合定数の逆である。抗体結合と抗原の特定の場合、通常、用語親和定数は結合定数をいう。
【0103】
ここで使用する用語「抗原結合フラグメント」は、一般に免疫グロブリン分子の部分をいう。抗原結合フラグメントは、１個の軽鎖および単一抗原結合部位を伴う重鎖の一部を含み得る。抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン分子のパパイン消化により得られ得る。例えば、抗原結合は、重鎖および軽鎖各々の１個の定常および１個の可変ドメインからなり得る。可変ドメインは、免疫グロブリン分子のアミノ末端に相補性決定領域のセットを含むパラトープ(抗原結合部位)を含み得る。酵素パパインを使用して、免疫グロブリン分子を２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃフラグメントに開裂し得る。酵素ペプシンは、ヒンジ領域の下を開裂し、したがって、Ｆ(ａｂ’)２フラグメントおよびｐＦｃ’フラグメントが形成される。二価Ｆ(ａｂ)２またはＦ(ａｂ’)２フラグメントは、ジスルフィド結合により結合した２個の抗原結合領域を有する。Ｆ(ａｂ)２またはＦ(ａｂ’)２フラグメントの還元は、他の分子へのコンジュゲーションに有用である遊離スルフヒドリル基を有する２個の一価ＦａｂまたはＦａｂ’フラグメントを産生する。
【0104】
ここで使用する用語「Ｆｖフラグメント」は、一般にＩｇＧおよびＩｇＭクラス抗体の酵素開裂から製造される最小フラグメントをいう。
【0105】
ここで使用する用語「ＳｃＦｖ」は、一般に一本鎖抗体フラグメントをいう。ＳｃＦｖは、抗体の軽鎖および重鎖可変領域が直接またはペプチドリンカーを介して接続されている組み換え一本鎖ポリペプチド分子をいう。
【0106】
ここで使用する用語「完全ヒト抗体」は、一般に抗原特異性がインビボで遺伝子修飾マウスの使用によりまたはスクリーニングと組み合わせた抗体エンジニアリング過程により選択されている、完全ヒトアミノ酸配列由来抗体領域治療剤を有する抗体をいう。
【0107】
ここで使用する用語「１以上の単離核酸分子」は、一般に天然環境から単離されたまたは人工的に合成された、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはそのアナログの何れかの、あらゆる長さのヌクレオチドの重合形態をいう。
【0108】
ここで使用する用語「１以上のベクター」は、一般にタンパク質をコードするポリヌクレオチドが挿入され、かつ発現され得る、核酸媒体をいう。ベクターに載せられる遺伝物質要素は、宿主細胞をベクターで形質転換、形質導入または形質移入することにより、宿主細胞で発現され得る。ベクターの実施態様は、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体(ＹＡＣ)、細菌人工染色体(ＢＡＣ)またはＰ１由来人工染色体(ＰＡＣ)などの人工染色体、λファージまたはＭ１３ファージなどのファージおよび動物ウイルスを含む。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択要素およびレポーター遺伝子を含む、発現を制御する種々の要素を含み得る。さらに、ベクターは、複製起点も含み得る。ベクターが、ウイルス粒子、リポソームまたはタンパク質殻などであるが、これら物質だけではない、細胞への侵入を助ける成分を含むことも可能である。
【0109】
ここで使用する用語「細胞」は、一般に本発明の１以上のベクターの保持に使用し得るまたは本発明の抗体、抗原結合フラグメントもしくはバリアントの発現もしくは産生に使用し得る、細胞をいう。本発明の細胞は宿主細胞であり得る。細胞は、大腸菌および枯草菌などの原核生物細胞、酵母細胞またはアスペルギルス細胞などの真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ細胞またはＳｆ９などの昆虫細胞またはＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞または抗体発現に適する他の細胞などの他の細胞であり得る。
【0110】
ここで使用する用語「発現を可能とする条件」は、一般に、本発明の単離抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件をいう。ある実施態様において、このような条件は、インキュベーション時間、温度および培養培地を含み得るが、これらに限定されず、細胞型に依存し得て、当業者により容易に決定され得る。
【0111】
単離抗原結合タンパク質
【0112】
ある態様において、本発明は、同等な結合親和性でヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる可能性がある単離抗原結合タンパク質を提供する。ここで使用する用語「同等な結合親和性」は、一般に抗体の２つの結合親和性の比が、約０.０１nM～約１００nM、例えば、約０.０２nM～約５０nM、約０.０５nM～約３０nM、約０.１nM～約２０nM、約０.１nM～約１０nM、約０.２nM～約１０nM、約０.５nM～約３nMであることをいう。抗体とＣＤ７３の結合親和性は、例えば、ＦＡＣＳ分析で、ＣＤ７３安定発現細胞株(例えば、ＣＨＯ－Ｋ１細胞株)を使用して評価し得る。
【0113】
単離抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる可能性がある。単離抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３媒介アデノシン産生を阻害、すなわち、ＡＭＰからアデノシンへのＣＤ７３介在異化反応の阻害をし得る。これは、試験抗体がＡＭＰからアデノシンへの変換を、直接的または間接的に、遮断する能力により評価され得る。ある場合、単離抗原結合タンパク質は、細胞ベースのＣＤ７３の活性を阻害し得る。これは、ＣＤ７３を安定に発現する細胞株、例えば、ＣＨＯ－Ｋ１細胞株の構築により測定され得る。例えば、単離抗原結合タンパク質は、実施例に記載のとおり、約０.０１nM～約１００nM、例えば、約０.０２nM～約５０nM、約０.００１nM～約１０nM、約０.００１nM～約１nM、約０.０１nM～約０.５nM、約０.０１nM～約０.３nM、約０.０５nM～約０.２５nMの濃度で細胞ベースのＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を５０％阻害し得る。他の場合、単離抗原結合タンパク質は、可溶性組換えＣＤ７３の活性を阻害し得る。例えば、酵素産物無機リン酸の定量により、単離抗原結合タンパク質は、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも４０％減少、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも５０％減少、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも６０％減少、ＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも７０％減少またはＡＭＰからアデノシンへの変換の少なくとも９０％減少を引き起こし得る。
【0114】
単離抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３内在化を媒介することができる可能性がある。ある場合、内在化のパーセントを、フローサイトメトリーで測定して、細胞表面、例えば、ＮＣＩ－Ｈ２９２のＣＤ７３の残存により評価し得る。例えば、抗体と４時間インキュベート後、ＣＤ７３の約４０％～約９９％(例えば、約４０％～約９０％、約４０％～約８０％、約４０％～約７０％、約４０％～約６０％、約４０％～約５５％または約５０％)が細胞間で内在化した。他の場合、内在化は、実施例に記載するとおり、内在化キットにより測定され得る。抗体と３日間インキュベート後、ＣＨＯ－Ｋ１表面のＣＤ７３は内在化し、ＣＤ７３の抗体介在内在化の最高レベルは、抗体の濃度に依存して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％またはそれ以上であり得る。
【0115】
単離抗原結合タンパク質の活性は、リンパ球の活性を調節する、例えばリンパ球活性のＡＭＰ介在抑制を軽減するまたはリンパ球増殖を引き起こす能力について、間接アッセイでも測定し得る。ある場合、単離抗原結合タンパク質は、リンパ球増殖を調節する能力について間接アッセイで評価し得る。リンパ球は、ヘルパーＴ細胞(例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞)を含むＴ細胞であり得る。これは、例えば、ＦＡＣＳ分析を使用して、取り組み得る。
【0116】
単離抗原結合タンパク質は、血清で少なくとも１５日間比較的安定な濃度であり得る。ここで使用する「比較的安定」は、一般に血清における抗体濃度が、対照濃度、例えば、抗体の血清の初期濃度と比較して、５０％を超える変化がないことをいう。抗体の血清における安定性は、薬物動態分析により決定され得る。例えば、本発明の単離抗原結合タンパク質のｔ１／２は、ＰＫ分析に記載するとおり、約１５日である。
【0117】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２のＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲを含み得る。
【0118】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ３を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号１５４(Ｘ１Ｘ２ＱＷＧＳＲＬＤＹ(配列番号１５４)；ここで、Ｘ１＝ＤまたはＥ；Ｘ２＝ＧまたはＡである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0119】
ある場合、ＤＧＱＷＧＳＲＬＤＹとしての抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３と比較して、ＨＣＤＲ３は、次のものから選択される少なくとも１個のアミノ酸置換を含み得る：Ｘ１およびＸ２でのアミノ酸置換であって、ここで、Ｘ１でのアミノ酸はＥに置換されてよく、Ｘ２でのアミノ酸はＡに置換されてよい。
【0120】
例えば、ＨＣＤＲ３は、配列番号３５、３８および３９の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0121】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ２を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５３(ＷＹＸ３Ｘ４ＳＦ(配列番号１５３)；ここで、Ｘ３＝ＤまたはＥ；Ｘ４＝ＧまたはＡである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0122】
例えば、ＨＣＤＲ２は、配列番号１８、２３および２４の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0123】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７(ＧＦＴＦＳＤＹ(配列番号７))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0124】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１を含み得て、Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は該ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ１は配列番号２(ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＡＱＰＧＲＳＬＳＬＳＣＡＡＳ(配列番号２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0125】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ２を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は該ＨＣＤＲ１と該ＨＣＤＲ２の間に位置し、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２(ＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ(配列番号１２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0126】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ３を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は該ＨＣＤＲ２と該ＨＣＤＲ３の間に位置し、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８(ＥＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＳＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ(配列番号２８))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0127】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ４を含み得て、該Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は該ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３(ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ(配列番号４３))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0128】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨを含み得て、ＶＨは配列番号１５２(ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＡＱＰＧＲＳＬＳＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＸ５４Ｘ５５ＳＦＥＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＳＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＸ９９Ｘ１００ＱＷＧＳＲＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ(配列番号１５２)；ここで、Ｘ５４＝ＤまたはＥ；Ｘ５５＝ＧまたはＡ；Ｘ９９＝ＤまたはＥ；およびＸ１００＝ＧまたはＡである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0129】
例えば、ＶＨは、配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0130】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖定常領域を含み得て、抗体重鎖定常領域はヒトＩｇＧ定常領域を含む。ある場合、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域に由来し得る。例えば、抗体重鎖定常領域は配列番号１６７(ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ(配列番号１６７))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0131】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖(ＨＣ)を含み得て、ＨＣは配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む。例えば、ＨＣは、配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0132】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５１のＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲを含み得る。
【0133】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ３を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８(ＱＱＲＳＮＷＩＦＴ(配列番号７８))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0134】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ２を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６(ＤＡＳＮＲＡＴ(配列番号６６))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0135】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ１を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５(ＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＡ(配列番号５５))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0136】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１を含み得て、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は該ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８(Ｘ１ＩＶＸ４ＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ(配列番号４８)；ここで、Ｘ１＝ＫまたはＥ；およびＸ４＝ＭまたはＬである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0137】
ある場合、配列番号４７に示す抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１と比較して、Ｌ－ＦＲ１は、次のものから選択される少なくとも１個のアミノ酸置換を含み得る：Ｘ１および／またはＸ４のアミノ酸置換であって、ここで、Ｘ１でのアミノ酸はＥに置換されてよく、Ｘ４でのアミノ酸はＬに置換されてよい。
【0138】
例えば、Ｌ－ＦＲ１は、配列番号４８および５１の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0139】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ２を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は該ＬＣＤＲ１と該ＬＣＤＲ２の間に位置し、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１(ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ(配列番号６１))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0140】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ３を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は該ＬＣＤＲ２と該ＬＣＤＲ３の間に位置し、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２(ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ(配列番号７２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0141】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ４を含み得て、該Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は該ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０(ＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ(配列番号９０))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0142】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＬを含み得て、ＶＬは配列番号１５１(Ｘ１ＩＶＸ４ＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＩＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ(配列番号１５１)、ここで、Ｘ１＝ＫまたはＥ；Ｘ４＝ＭまたはＬである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0143】
例えば、ＶＬは、配列番号１１１および１１５の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0144】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖定常領域を含み得て、抗体軽鎖定常領域はヒトＩｇκ定常領域を含む。例えば、抗体軽鎖定常領域は配列番号１６６(ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ(配列番号１６６))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0145】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖(ＬＣ)を含み得て、ＬＣは配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＣは、配列番号１３９および１４３の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0146】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0147】
ある場合、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号７の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８、２３、２４の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５、３８および３９の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0148】
例えば、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0149】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0150】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0151】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0152】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0153】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0154】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0155】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0156】
ある場合、Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号９０の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0157】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３およびＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0158】
ある場合、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８、２３および２４の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５、３８および３９の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣＤＲ１は配列番号５５の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0159】
例えば、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0160】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0161】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４およびＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0162】
ある場合、Ｈ－ＦＲ１は配列番号２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号９０の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0163】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0164】
ある場合、ＶＨは配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１および１１５の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0165】
ある場合、ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0166】
ある場合、ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0167】
ある場合、ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0168】
ある場合、ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0169】
ある場合、ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0170】
ある場合、ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0171】
ある場合、ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0172】
ある場合、ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0173】
ある場合、ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0174】
ある場合、ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0175】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0176】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣは配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0177】
ある場合、ＨＣは配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣ定常領域は配列番号１３９および１４３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0178】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号３３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0179】
ある場合、抗原結合タンパク質はＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８、２３および２４の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５、３８および３９の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８および５１に示す何れかのアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１および１１５に示すアミノ酸配列の何れかを含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９および１４３の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0180】
例えば、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００５０６のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２４に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0181】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４３のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３２に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0182】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４４のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３３に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0183】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４５のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３４に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0184】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４６のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３５に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0185】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４７のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３２に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0186】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４８のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３３に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0187】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８４９のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列領域番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０６に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３４に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0188】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８５０のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３９に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３５に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0189】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８５１のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９６に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２４に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0190】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６のＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲを含み得る。
【0191】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ３を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４(ＧＧＤＬＬＴＧＰＮＡＦＤＩ(配列番号３４))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0192】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ２を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５８(ＷＹＸ３Ｘ４ＳＫ(配列番号１５８)）；ここで、Ｘ３＝ＤまたはＥ；Ｘ４＝ＧまたはＡである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0193】
例えば、ＨＣＤＲ２は、配列番号１７、２１および２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0194】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６(ＧＦＴＦＳＳＹ(配列番号６))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0195】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１を含み得て、Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は該ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ１は配列番号１(ＱＶＱＶＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳ(配列番号１))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0196】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ２を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は該ＨＣＤＲ１と該ＨＣＤＲ２の間に位置し、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１(ＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＴ(配列番号１１))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0197】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ３を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は該ＨＣＤＲ２と該ＨＣＤＲ３の間に位置し、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７(ＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＫＭＮＳＬＲＧＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫ(配列番号２７))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0198】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ４を含み得て、該Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は該ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２(ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ(配列番号４２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0199】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨを含み得て、ＶＨは配列番号１５６(ＱＶＱＸ４ＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＴＷＹＸ５Ｘ６ＳＫＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＸ７ＭＮＳＬＲＸ８Ｘ９ＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＧＤＬＬＴＧＰＮＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ(配列番号１５６)）；ここで、Ｘ４＝ＬまたはＶ、Ｘ５＝ＤまたはＥ；Ｘ６＝ＧまたはＡ；Ｘ７＝ＫまたはＱ；Ｘ８＝ＧまたはＡ；およびＸ９＝ＤまたはＥである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0200】
例えば、ＶＨは、配列番号９５、９９、１００、１０１、１０２および１０３の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0201】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖定常領域を含み得て、抗体重鎖定常領域はヒトＩｇＧ定常領域を含む。ある場合、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域に由来し得る。例えば、抗体重鎖定常領域は配列番号１６７(ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ(配列番号１６７))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0202】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖(ＨＣ)を含み得て、ＨＣは配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含む。例えば、ＨＣは、配列番号１２３、１２７、１２８、１２９、１３０および１３１の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0203】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５５のＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲを含み得る。
【0204】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ３を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号１５７(ＱＱＹＤＸ５ＹＸ６ＮＴ(配列番号１５７)）、ここで、Ｘ５＝Ｍ、Ｎ、Ｑ、ＳまたはＴ；およびＸ６＝Ｅ、Ｋ、Ｓ)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0205】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ２を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５(ＫＡＳＳＬＥＳ(配列番号６５))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0206】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ１を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４(ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ(配列番号５４))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0207】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１を含み得て、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は該ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７(ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ(配列番号４７))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0208】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ２を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は該ＬＣＤＲ１と該ＬＣＤＲ２の間に位置し、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０(ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ(配列番号６０))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0209】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ３を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は該ＬＣＤＲ２と該ＬＣＤＲ３の間に位置し、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１(ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣ(配列番号７１))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0210】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ４を含み得て、該Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は該ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９(ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ(配列番号８９))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0211】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＬを含み得て、ＶＬは配列番号１５５(ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＤＸ１ＹＸ４ＮＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ(配列番号１５５)）、ここで、Ｘ１＝Ｍ、Ｎ、Ｑ、ＳまたはＴ；Ｘ４＝Ｅ、ＫまたはＳである)に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0212】
例えば、ＶＬは、配列番号１１０、１１４、１１８、１１９、１２０、１２１および１２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0213】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖定常領域を含み得て、抗体軽鎖定常領域はヒトＩｇκ定常領域を含む。例えば、抗体軽鎖定常領域は配列番号１６６(ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ(配列番号１６６))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0214】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖(ＬＣ)を含み得て、ＬＣは配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含む。例えば、ＬＣは、配列番号１３８、１４２、１４６、１４７、１４８、１４９および１５０の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0215】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0216】
ある場合、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号６の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７、２１、２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0217】
例えば、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0218】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0219】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0220】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0221】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0222】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0223】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0224】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0225】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0226】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0227】
例えば、抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0228】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号１６４に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号１６５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0229】
例えば、Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0230】
例えば、Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0231】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0232】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３およびＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0233】
ある場合、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７、２１および２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７、８１、８４、８５、８６、８７および８８の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0234】
例えば、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0235】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0236】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0237】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0238】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0239】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0240】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0241】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0242】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0243】
他の例について、抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0244】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４およびＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号１６４に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号１６５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0245】
ある場合、Ｈ－ＦＲ１は配列番号１および３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７および３１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0246】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１５６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１５５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0247】
ある場合、ＶＨは配列番号９５、９９、１００、１０１、１０２および１０３の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０、１１４、１１８、１１９、１２０、１２１および１２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0248】
ある場合、ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0249】
ある場合、ＶＨは配列番号９９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0250】
ある場合、ＶＨは配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0251】
ある場合、ＶＨは配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0252】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0253】
ある場合、ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0254】
ある場合、ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0255】
ある場合、ＶＨは配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0256】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0257】
ある場合、ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0258】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0259】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0260】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１２０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0261】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１２１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0262】
ある場合、ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0263】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0264】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣは配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0265】
ある場合、ＨＣは配列番号１２３、１２７、１２８、１２９、１３０および１３１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣ定常領域は配列番号１３８、１４２、１４６、１４７、１４８、１４９および１５０の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0266】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１６４に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１５６に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１５５に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0267】
ある場合、抗原結合タンパク質はＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７、２１、２２の何れかに示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１および３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９５、９９、１００、１０１、１０２および１０３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２３、１２７、１２８、１２９、１３０および１３１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１０、１１４、１１８、１１９、１２０、１２１および１２２の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８、１４２、１４６、１４７、１４８、１４９および１５０の何れか一つに示すアミノ酸配列を含み得る。
【0268】
例えば、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００４９７のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0269】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８１５のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９９に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２７に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0270】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８１６のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２８に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0271】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８１７のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２９に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0272】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８１８のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0273】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８１９のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３１に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0274】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８２０のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0275】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８２２のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１２８に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0276】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８２４のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0277】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８２５のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３１に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0278】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ０００８３２のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0279】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ００３８３３のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８５に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１９に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0280】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ００３８３４のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８６に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１２０に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0281】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ００３８３５のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８７に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１２１に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0282】
他の例について、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ００３８３６のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４２に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８８に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号４７に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７１に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号８９に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１５０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0283】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８のＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲを含み得る。
【0284】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ３を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０(ＥＲＳＳＳＦＹＹＹＹＧＭＤＶ(配列番号４０))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0285】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ２を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５(ＷＹＤＧＳＮ(配列番号２５))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0286】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号１０(ＧＦＴＦＹＳＹ(配列番号１０))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0287】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１を含み得て、Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は該ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ１は配列番号３(ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳ(配列番号３))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0288】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ２を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は該ＨＣＤＲ１と該ＨＣＤＲ２の間に位置し、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１５(ＧＭＨＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩ(配列番号１５))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0289】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ３を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は該ＨＣＤＲ２と該ＨＣＤＲ３の間に位置し、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３２(ＮＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ(配列番号３２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0290】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ４を含み得て、該Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は該ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４５(ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ(配列番号４５))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0291】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨを含み得て、ＶＨは配列番号１０８(ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＹＳＹＧＭＨＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＷＹＤＧＳＮＮＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＥＲＳＳＳＦＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ(配列番号１０８))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0292】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖定常領域を含み得て、抗体重鎖定常領域はヒトＩｇＧ定常領域を含む。ある場合、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域に由来し得る。例えば、抗体重鎖定常領域は配列番号１６７(ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ(配列番号１６７))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0293】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体重鎖(ＨＣ)を含み得て、ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含む。
【0294】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１１６のＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲを含み得る。
【0295】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ３を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２(ＱＱＬＮＳＹＰＹＴ(配列番号８２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0296】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ２を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９(ＡＡＳＴＬＱＳ(配列番号６９))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0297】
本発明において、抗原結合タンパク質は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからのＬＣＤＲ１を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５８(ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ(配列番号５８))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0298】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１を含み得て、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は該ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ１は配列番号５２(ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ(配列番号５２))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0299】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ２を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は該ＬＣＤＲ１と該ＬＣＤＲ２の間に位置し、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０(ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ(配列番号６０))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0300】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ３を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は該ＬＣＤＲ２と該ＬＣＤＲ３の間に位置し、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７５(ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ(配列番号７５))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0301】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ４を含み得て、該Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は該ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合しており、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９３(ＦＧＱＧＴＥＬＥＩＫ(配列番号９３))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0302】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＬを含み得て、ＶＬは配列番号１１６(ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＥＬＥＩＫ(配列番号１１６))に示すアミノ酸配列を含み得る。例えば、配列は、Chothia定義に従い決定され得る。
【0303】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖定常領域を含み得て、抗体軽鎖定常領域はヒトＩｇκ定常領域を含む。例えば、抗体軽鎖定常領域は配列番号１６６(ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ(配列番号１６６))に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0304】
本発明において、抗原結合タンパク質は抗体軽鎖(ＬＣ)を含み得て、ＬＣは配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含む。
【0305】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0306】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0307】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0308】
本発明において、抗原結合タンパク質はＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｌ－ＦＲ１は配列番号５２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0309】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣＤＲ１～３およびＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0310】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨ－ＦＲ１～４およびＬ－ＦＲ１～４を含み得る。Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0311】
本発明において、抗原結合タンパク質はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0312】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0313】
本発明において、抗原結合タンパク質は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣは配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0314】
本発明において、抗原結合タンパク質はＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0315】
例えば、抗原結合タンパク質は抗体ＰＲ００１４０８のものと同じＨＣおよびＬＣを含み得る。ＨＣはＶＨおよび重鎖定常領域を含み得る。ＶＨはＨＣＤＲ１～３およびＨ－ＦＲ１～４を含み得て、ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｈ－ＦＲ１は配列番号３に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ２は配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ３は配列番号３２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｈ－ＦＲ４は配列番号４５に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＨは配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含み得る；重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得る；ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含み得る；およびＶＬはＬＣＤＲ１～３およびＬ－ＦＲ１～４を含み得て、ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み得る；Ｌ－ＦＲ１は配列番号５２に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ２は配列番号６０に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ３は配列番号７５に示すアミノ酸配列を含み得て、Ｌ－ＦＲ４は配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み得る；ＶＬは配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含み得る；軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る；ＬＣは配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含み得る；
【0316】
ある種の抗ＣＤ７３抗体
本発明において、抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３への結合についてある種の抗ＣＤ７３抗体と競合し得る。ある実施態様において、本発明の抗原結合タンパク質はある種の抗ＣＤ７３抗体と同じアミノ酸配列を含む抗体を含み得る。
本発明において、抗原結合タンパク質は、ＣＤ７３への結合についてある種の抗ＣＤ７３抗体と競合し得る。ある実施態様において、本発明の抗原結合タンパク質はある種の抗ＣＤ７３抗体と同じアミノ酸配列を含む抗体を含み得る。
【0317】
ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体は配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲ領域および配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲ領域を含み得る。
【0318】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号７に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含み得る。ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0319】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0320】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0321】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣ定常領域は配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0322】
ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体は配列番号１５６の重鎖可変領域ＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲ領域および配列番号１５５の軽鎖可変領域ＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲ領域を含み得る。
【0323】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み得る。ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５４に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0324】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１５６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１５５に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0325】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0326】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣ定常領域は配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0327】
ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体は配列番号１０８の重鎖可変領域ＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲ領域および配列番号１１６の軽鎖可変領域ＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲ領域を含み得る。
【0328】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＨＣＤＲ１～３を含み得る。ＨＣＤＲ１は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ２は配列番号２５に示すアミノ酸配列を含み得て、ＨＣＤＲ３は配列番号４０に示すアミノ酸配列を含み得る。ある場合、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＬＣＤＲ１～３を含み得る。ＬＣＤＲ１は配列番号５８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ２は配列番号６９に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣＤＲ３は配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0329】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体はＶＨおよびＶＬを含み得る。ＶＨは配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含み得て、ＶＬは配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0330】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含み得て、軽鎖定常領域は配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0331】
本発明において、ある種の抗ＣＤ７３抗体は重鎖(ＨＣ)および軽鎖(ＬＣ)を含み得る。ＨＣは配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含み得て、ＬＣ定常領域は配列番号１４４に示すアミノ酸配列を含み得る。
【0332】
本発明の抗原結合タンパク質は、それと実質的に同じ機能／性質を有するそのホモログ(homolog)またはバリアントも包含し得る。ある場合、ホモログまたはバリアントは、少なくとも１アミノ酸抗原結合タンパク質と異なるポリペプチドであり得る。例えば、ホモログまたはバリアントは、１以上のアミノ酸、例えば１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１５、１～１４、１～１３、１～１２、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３または１～２アミノ酸の付加、欠失または置換により抗原結合タンパク質と異なるポリペプチドであり得る。
【0333】
ある場合、抗原結合タンパク質は、生殖系列化およびＰＴＭ除去過程によりさらに最適化され得る。用語「生殖系列化」は、抗体の対応する生殖系列配列への逆進の体細胞超変異の過程をいう。用語「ＰＴＭ除去」は、配列ライアビリティのリスクを低減するためのＰＴＭモチーフの変異の過程をいう。
【0334】
翻訳後修飾(ＰＴＭ)は哺乳動物細胞で発現されるタンパク質で広範に観察され、これは分子を不安定かつ不均一とし得る。配列ライアビリティを低減するために、ＰＴＭモチーフを変異により除去し得る。ＰＴＭ除去部位は、異性化モチーフ、例えば、ＣＤＲにおけるＤＧであり得る。ある場合、ＰＴＭ除去部位はＨＣＤＲにおけるＤ５４、Ｇ５５、Ｄ９９および／またはＧ１００から選択される一か所以上を含み得る。ある場合、Ｄ５４におけるＰＴＭ除去はＤ５４Ｅであり得る。ある場合、Ｇ５５におけるＰＴＭ除去はＧ５５Ａであり得る。ある場合、Ｄ９９におけるＰＴＭ除去はＤ９９Ｅであり得る。ある場合、Ｇ１００におけるＰＴＭ除去はＧ１００Ａであり得る。
【0335】
ＰＴＭ除去後の抗体は、類似するまたは高い化学安定性または生理活性を有し得る。ある場合、ＰＴＭ除去後の抗体は、類似するまたは高い結合親和性、酵素活性、Ｔ細胞活性化活性腫瘍阻害活性および／または血清安定性を有し得る。例えば、ＰＴＭ除去抗体(例えば、ＰＲ０００８４４、ＰＲ０００８４６)は、ＰＴＭ抗体(例えば、ＰＲ０００５０６)と同等な結合親和性を有する。
【0336】
ある場合、ホモログまたはバリアントは、抗原結合タンパク質と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり得る。例えば、ホモログまたはバリアントは、抗体またはその抗原結合フラグメントと少なくとも８０％(例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上)の配列同一性を有するポリペプチドであり得る。
【0337】
ここで同定されるポリペプチド配列において使用される用語「パーセント(％)配列同一性」は、一般に、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を整列し、必要であれば、ギャップを導入後、第二の対照ポリペプチド配列またはその一部のアミノ酸残基またはヌクレオチドと同一である、クエリー配列におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドのパーセンテージをいい、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない。パーセントアミノ酸／ヌクレオチド配列同一性決定目的でのアラインメントは、当業者の技術の範囲内である種々の方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥまたはＭｅｇａｌｉｇｎ(ＤＮＡＳＴＡＲ)ソフトウェアなどの公になっているコンピュータソフトウェアを使用して、達成され得る。当業者は、比較する配列の全長にわたり最大アラインメントを達成するのに必要な何らかのアルゴリズムを含む、同一性決定のための適切なパラメータを決定できる。パーセント同一性は、規定ポリペプチド／ポリヌクレオチド配列全体の長さにわたり測定できまたは短い長さ、例えば、大型の規定ポリペプチド／ポリヌクレオチド配列から取ったフラグメントの全長にわたり測定し得る。表、図または配列表においてここに示す配列により支持される、あらゆるフラグメント長を、パーセンテージ同一性を測定すべき長さをいうために使用し得ることは理解される。
【0338】
核酸、ベクターおよび細胞
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質をコードする１以上の単離核酸分子を提供する。
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質をコードする１以上の単離核酸分子を提供する。
【0339】
単離核酸は、各々抗原結合タンパク質をコードする１以上の核酸分子を含み得る。例えば、単離核酸は、一つは抗体重鎖またはそのフラグメントをコードし、一つは抗体軽鎖またはそのフラグメントをコードする少なくとも２個の核酸分子を含み得る。
【0340】
１以上の単離核酸を、当分野で周知の組み換え技術を使用して、合成し得る。例えば、１以上の単離核酸を、自動化ＤＮＡシンセサイザーで合成し得る。標準組み換えＤＮＡおよび分子クローニング技術は、Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, (1989) (Maniatis) and by T. J. Silhavy, M. L. Bennan, and L. W. Enquist, Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1984) and by Ausubel, F. M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, pub. by Greene Publishing Assoc. and Wiley-Interscience (1987)により記載のものを含む。簡潔には、対象核酸をゲノムＤＮＡフラグメント、ｃＤＮＡおよびＲＮＡから調製でき、その全て細胞から調節しても、ＰＣＲおよびＲＴ－ＰＣＲを含むが、これらに限定されない種々の増幅過程により組み換えにより産生されてもよい。
【0341】
核酸の直接化学合成は、一般に成長中のヌクレオチドポリマー鎖の末端５’－ヒドロキシル基への３’－遮断および５’－遮断ヌクレオチドモノマーの連続的付加を含み、ここで、各付加は、一般にホスホトリエステル、ホスホラミダイトなどのリン誘導体である付加モノマーの３’位上の成長中の鎖の末端５’－ヒドロキシル基の求核性攻撃により実施される。例えば、Matteuci et al., Tet. Lett. 521:719 (1980)；Caruthers et al.の米国特許４,５００,７０７；およびSouthern et al.の米国特許５,４３６,３２７および５,７００,６３７参照。
【0342】
他の態様において、本発明は、１以上の単離核酸分子を含む、１以上のベクターを提供する。
【0343】
ベクターは、あらゆる直鎖状核酸、プラスミド、ファージミド、コスミド、ＲＮＡベクター、ウイルスベクターなどであり得る。ウイルスベクターの非限定的例は、レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスを含み得る。ある実施態様において、ベクターは発現ベクター、例えば、プラスミドである。
【0344】
発現ベクターは、特定のタイプの宿主細胞における使用に適し、他での使用に適さないかもしれない。例えば、発現ベクターを宿主生物に導入し、次いで、生存能およびベクターに含まれた何らかの遺伝子／ポリヌクレオチドの発現をモニターし得る。
【0345】
発現ベクターは、発現により、発現ベクターを担持する宿主細胞の選択またはその他同定に有用である１以上の表現型形質を付与する１以上の選択可能マーカー遺伝子も含み得る。真核生物細胞のための適当な選択可能マーカーの非限定的例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼおよびネオマイシン耐性を含む。
【0346】
対象ベクターを、種々の確立された技術により宿主細胞に安定にまたは一過性に導入し得る。例えば、一つの方法は、発現ベクターがカルシウム沈殿を介して導入される、塩化カルシウム処理を含む。他の塩、例えばリン酸カルシウムも、類似する方法に従い使用し得る。さらに、エレクトロポレーション(すなわち、細胞の核酸透過性を増加させるための電流の適用)を使用し得る。形質転換方法の他の例は、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥデキストラン介在形質転換および酢酸リチウム存在下のヒートショックを含む。脂質複合体、リポソームおよびデンドリマーも、宿主細胞のトランスフェクトに使用し得る。
【0347】
他の態様において、本発明は、本発明の１以上の単離核酸分子または本発明の１以上のベクターを含む、細胞(例えば、宿主細胞などの単離細胞)を提供する。細胞は、本発明の抗原結合タンパク質を発現し得る。細胞は真核生物細胞でも原核生物細胞でもよい。適切な細胞を、本発明の核酸またはベクターで形質転換またはトランスフェクトし、抗原結合タンパク質の発現および／または分泌に使用し得る。例えば、細胞はＨＥＫ２９３細胞、他の細菌宿主細胞、酵母細胞または種々の高級真核生物細胞であり得る。
【0348】
他の態様において、本発明は、本発明の細胞を抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養することを含む、本発明の抗原結合タンパク質を産生する方法を提供する。方法は、所望により本発明の抗原結合タンパク質を取得することをさらに含み得る。
【0349】
医薬組成物、使用および方法
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質、１以上の核酸分子、１以上のベクターおよび／または細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、単離抗原結合タンパク質、１以上の核酸分子、１以上のベクターおよび／または細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
【0350】
ここで使用する、「薬学的に許容される担体」は、任意かつ全ての防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含む。微生物の存在を、滅菌方法、上記および種々の抗細菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含により、確実に防止し得る。組成物に糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を包含することが望ましいこともあり得る。さらに、注射用医薬形態の長期吸収を、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によりもたらし得る。
【0351】
医薬組成物は、一般に無菌かつ製造および保存条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高薬物濃度に適する他の秩序だった構造(other ordered structure)に製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど)および適当なそれらの混合物を含む、溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性を、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散体の場合必要な粒子径の維持によりおよび界面活性剤の使用により維持し得る。多くの場合、組成物に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを包含させるのが好ましい。注射用組成物の長期吸収を、モノステアリン酸塩およびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によりもたらし得る。
【0352】
ここに開示する医薬組成物は、癌の治療に使用する他の化合物、薬物および／または薬剤を含み得る。このような化合物、薬物および／または薬剤は、例えば、化学療法薬物、小分子薬物またはある癌に対する免疫応答を刺激する抗体を含み得る。ある場合、医薬組成物は、例えば、組み合わせ治療のセクションに挙げる薬剤の１以上を含み得る。例えば、組み合わせ治療は、少なくとも１個の他の抗癌剤および／またはＴ細胞刺激剤(例えば、活性化剤)と組み合わせた、ここに記載する抗ＣＤ７３抗体を含む。組み合わせ治療に使用できる治療剤の例は、ここに記載する抗体の使用についてのセクションに、詳述する。
【0353】
単離抗原結合タンパク質および／または医薬組成物を、腫瘍の予防、軽減および／または治療に使用し得る。腫瘍は固形腫瘍および／または血液腫瘍である。
【0354】
他の態様において、本発明は、さらに、腫瘍の予防、軽減および／または治療を含む、腫瘍用の方法であって、それを必要とする対象に、対象が治療される、例えば、腫瘍増殖が阻止もしくは低減されるおよび／または腫瘍が退行するように、単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。単離抗原結合タンパク質を単独で癌腫瘍の増殖の阻害に使用し得る。あるいは、単離抗原結合タンパク質を、当分野で知られる他の薬剤、例えば、他の免疫原性剤、標準癌治療または他の抗体と組み合わせて使用し得る。従って、本発明は、対象における、例えば、腫瘍細胞増殖阻害による、腫瘍の予防、軽減および／または治療のための方法であって、対象に治療有効量のここに記載する抗原結合タンパク質またはその抗原結合部分を投与することを含む、方法を提供する。
【0355】
本発明はまた次の実施態様を開示する：
１. 次の性質の１以上を有する単離抗原結合タンパク質：
ａ. 同等な結合親和性でヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる；
ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；
ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；
ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；
ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；および
ｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる。
２. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲ領域を含む、実施態様１の単離抗原結合タンパク質。
３. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ３を含む、実施態様１～２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ２を含む、実施態様１～３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
５. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１を含む、実施態様１～４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
６. 該ＶＨが配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
７. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲ領域を含む、実施態様１～６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
８. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ３を含む、実施態様１～７の何れかの単離抗原結合タンパク質。
９. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ２を含む、実施態様１～８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１０. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１を含む、実施態様１～９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１１. 該ＶＬが配列番号１１１および１１５の何れかに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～１０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１２. 抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、実施態様１～１１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１３. 該抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ)２、Ｆｖフラグメント、Ｆ(ａｂ’)２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖおよび／またはｄＡｂを含む、実施態様１２の単離抗原結合タンパク質。
１４. 該抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体から選択される、実施態様１～１３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１５. 該ＨＣＤＲ３が配列番号３５、３８および３９の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様３～１４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１６. 該ＨＣＤＲ２が配列番号１８、２３および２４の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様４～１５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１７. 軽鎖可変領域ＶＬを含み、抗原結合タンパク質の該ＶＬがフレームワーク領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３およびＬ－ＦＲ４を含む、実施態様１～１６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１８. 該Ｌ－ＦＲ１のＣ末端が該ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｌ－ＦＲ１が配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７の単離抗原結合タンパク質。
１９. 該Ｌ－ＦＲ１が配列番号４８および５１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～１８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２０. 該Ｌ－ＦＲ２がＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に位置し、該Ｌ－ＦＲ２が配列番号６１に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～１９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２１. 該Ｌ－ＦＲ３がＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に位置し、該Ｌ－ＦＲ３が配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～２０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２２. 該Ｌ－ＦＲ４のＮ末端が該ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｌ－ＦＲ４が配列番号９０に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～２１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２３. 抗原結合タンパク質の該ＶＬが配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２４. 抗原結合タンパク質の該ＶＬが配列番号１１１および１１５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２５. 抗体軽鎖定常領域を含み、該抗体軽鎖定常領域がヒトＩｇκ定常領域を含む、実施態様１～２４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２６. 該抗体軽鎖定常領域が配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２５の単離抗原結合タンパク質。
２７. 抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣが配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２８. 抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣが配列番号１３９および１４３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２７の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２９. 重鎖可変領域ＶＨを含み、ここで、抗原結合タンパク質の該ＶＨがフレームワーク領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３およびＨ－ＦＲ４を含む、実施態様１～２８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３０. Ｈ－ＦＲ１のＣ末端が該ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｈ－ＦＲ１が配列番号２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９の単離抗原結合タンパク質。
３１. 該Ｈ－ＦＲ２がＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に位置し、該Ｈ－ＦＲ２が配列番号１２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３２. 該Ｈ－ＦＲ３がＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に位置し、該Ｈ－ＦＲ３が配列番号２８に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３３. Ｈ－ＦＲ４のＮ末端が該ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｈ－ＦＲ４が配列番号４３に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３４. 抗原結合タンパク質の該ＶＨが配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３５. 抗原結合タンパク質の該ＶＨが配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３６. 抗体重鎖定常領域を含み、該抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含む、実施態様１～３５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３７. 抗体重鎖定常領域を含み、該抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施態様１～３６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３８. 該抗体重鎖定常領域が配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含む、実施態様３７の単離抗原結合タンパク質。
３９. 抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４０. 抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣが配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４１. 実施態様１～４０の何れかの該単離抗原結合タンパク質をコードする、１以上の単離核酸分子。
４２. 実施態様４１の該１以上の単離核酸分子を含む、１以上のベクター。
４３. 実施態様４１の該１以上の単離核酸分子または実施態様４２の該１以上のベクターを含む、細胞。
４４. 実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質を産生する方法であって、実施態様４３の細胞を実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養することを含む、方法。
４５. 実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質、実施態様４１の１以上の核酸分子、実施態様４２の１以上のベクターおよび／または実施態様４３の細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
４６. 腫瘍の予防、軽減および／または治療のための医薬の製造における、実施態様１～４０の何れかの該単離抗原結合タンパク質、実施態様４１の該１以上の核酸分子、実施態様４２の該１以上のベクター、実施態様４３の該細胞および／または実施態様４５の該医薬組成物の使用。
４７. 該腫瘍が、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む、実施態様４６の使用。
４８. 腫瘍の予防、軽減および／または治療のための方法であって、それを必要とする対象に実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、方法。
１. 次の性質の１以上を有する単離抗原結合タンパク質：
ａ. 同等な結合親和性でヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３両方に結合できる；
ｂ. ＣＤ７３の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を阻害できる；
ｃ. ＣＤ７３内在化を媒介することができる；
ｄ. Ｔ細胞増殖を促進できる；
ｅ. 血清において、少なくとも１５日間、比較的安定な濃度を有する；および
ｆ. 腫瘍増殖および／または腫瘍細胞増殖を阻害できる。
２. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからの少なくとも１個のＨＣＤＲ領域を含む、実施態様１の単離抗原結合タンパク質。
３. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ３を含む、実施態様１～２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ２を含む、実施態様１～３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
５. 配列番号１５２の重鎖可変領域ＶＨからのＨＣＤＲ１を含む、実施態様１～４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
６. 該ＶＨが配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れかに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
７. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからの少なくとも１個のＬＣＤＲ領域を含む、実施態様１～６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
８. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ３を含む、実施態様１～７の何れかの単離抗原結合タンパク質。
９. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ２を含む、実施態様１～８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１０. 配列番号１５１の軽鎖可変領域ＶＬからのＬＣＤＲ１を含む、実施態様１～９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１１. 該ＶＬが配列番号１１１および１１５の何れかに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～１０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１２. 抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、実施態様１～１１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１３. 該抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ)２、Ｆｖフラグメント、Ｆ(ａｂ’)２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖおよび／またはｄＡｂを含む、実施態様１２の単離抗原結合タンパク質。
１４. 該抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体から選択される、実施態様１～１３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１５. 該ＨＣＤＲ３が配列番号３５、３８および３９の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様３～１４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１６. 該ＨＣＤＲ２が配列番号１８、２３および２４の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様４～１５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１７. 軽鎖可変領域ＶＬを含み、抗原結合タンパク質の該ＶＬがフレームワーク領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３およびＬ－ＦＲ４を含む、実施態様１～１６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
１８. 該Ｌ－ＦＲ１のＣ末端が該ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｌ－ＦＲ１が配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７の単離抗原結合タンパク質。
１９. 該Ｌ－ＦＲ１が配列番号４８および５１の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～１８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２０. 該Ｌ－ＦＲ２がＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に位置し、該Ｌ－ＦＲ２が配列番号６１に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～１９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２１. 該Ｌ－ＦＲ３がＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に位置し、該Ｌ－ＦＲ３が配列番号７２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～２０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２２. 該Ｌ－ＦＲ４のＮ末端が該ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｌ－ＦＲ４が配列番号９０に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１７～２１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２３. 抗原結合タンパク質の該ＶＬが配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２４. 抗原結合タンパク質の該ＶＬが配列番号１１１および１１５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２５. 抗体軽鎖定常領域を含み、該抗体軽鎖定常領域がヒトＩｇκ定常領域を含む、実施態様１～２４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２６. 該抗体軽鎖定常領域が配列番号１６６に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２５の単離抗原結合タンパク質。
２７. 抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣが配列番号１５９に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２８. 抗体軽鎖ＬＣを含み、該ＬＣが配列番号１３９および１４３の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～２７の何れかの単離抗原結合タンパク質。
２９. 重鎖可変領域ＶＨを含み、ここで、抗原結合タンパク質の該ＶＨがフレームワーク領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３およびＨ－ＦＲ４を含む、実施態様１～２８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３０. Ｈ－ＦＲ１のＣ末端が該ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｈ－ＦＲ１が配列番号２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９の単離抗原結合タンパク質。
３１. 該Ｈ－ＦＲ２がＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に位置し、該Ｈ－ＦＲ２が配列番号１２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３０の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３２. 該Ｈ－ＦＲ３がＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に位置し、該Ｈ－ＦＲ３が配列番号２８に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３１の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３３. Ｈ－ＦＲ４のＮ末端が該ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接的または間接的に結合し、該Ｈ－ＦＲ４が配列番号４３に示すアミノ酸配列を含む、実施態様２９～３２の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３４. 抗原結合タンパク質の該ＶＨが配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３３の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３５. 抗原結合タンパク質の該ＶＨが配列番号９６、１０４、１０５、１０６および１０７の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３４の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３６. 抗体重鎖定常領域を含み、該抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含む、実施態様１～３５の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３７. 抗体重鎖定常領域を含み、該抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施態様１～３６の何れかの単離抗原結合タンパク質。
３８. 該抗体重鎖定常領域が配列番号１６７に示すアミノ酸配列を含む、実施態様３７の単離抗原結合タンパク質。
３９. 抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３８の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４０. 抗体重鎖ＨＣを含み、該ＨＣが配列番号１２４、１３２、１３３、１３４および１３５の何れか一つに示すアミノ酸配列を含む、実施態様１～３９の何れかの単離抗原結合タンパク質。
４１. 実施態様１～４０の何れかの該単離抗原結合タンパク質をコードする、１以上の単離核酸分子。
４２. 実施態様４１の該１以上の単離核酸分子を含む、１以上のベクター。
４３. 実施態様４１の該１以上の単離核酸分子または実施態様４２の該１以上のベクターを含む、細胞。
４４. 実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質を産生する方法であって、実施態様４３の細胞を実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養することを含む、方法。
４５. 実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質、実施態様４１の１以上の核酸分子、実施態様４２の１以上のベクターおよび／または実施態様４３の細胞および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
４６. 腫瘍の予防、軽減および／または治療のための医薬の製造における、実施態様１～４０の何れかの該単離抗原結合タンパク質、実施態様４１の該１以上の核酸分子、実施態様４２の該１以上のベクター、実施態様４３の該細胞および／または実施態様４５の該医薬組成物の使用。
４７. 該腫瘍が、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含む、実施態様４６の使用。
４８. 腫瘍の予防、軽減および／または治療のための方法であって、それを必要とする対象に実施態様１～４０の何れかの単離抗原結合タンパク質を投与することを含む、方法。
【0356】
実施例
【0357】
次の実施例は、本発明をどのように行いかつ使用するかの完全な開示および記載を当業者に提供するために示し、本願発明者らが発明とみなしている範囲を限定する意図も、下記実験が実施した全てまたは唯一の実験を表すことを意図するものでもない。使用する数値(例えば量、温度など)に関しては正確を期すよう努力しているが、ある程度の実験誤差および偏差は考慮されるべきである。特に断らない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧近傍である。標準的略語例えば、ｂｐ、塩基対；ｋｂ、キロベース；ｐｌ、ピコリットル；ｓまたはｓｅｃ、秒；ｍｉｎ、分；ｈまたはｈｒ、時間；ａａ、アミノ酸；ｎｔ、ヌクレオチド；ｉ.ｍ.、筋肉内；ｉ.ｐ.、腹腔内；ｓ.ｃ.、皮下；などを使用できる。
【0358】
実施例１ 抗ＣＤ７３抗体の産生
免疫化
ＣＤ７３タンパク質を、Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスを使用して、免疫化における抗ＣＤ７３抗体を産生するための免疫原として使用した。各マウスに、初回ブーストとしてタンパク質５０μgおよびその後のブーストについては２５μgを、アジュバント(Sigma, S6322)と共にｓ.ｃ.およびｉ.ｐ.で投与した。このような免疫化を、週に２回、６回実施した。最終免疫化をＰＢＳで希釈した免疫原で、ｉ.ｐ.により実施した。血清力価を、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを使用してヒトＣＤ７３で検定した。指定された時点で、マウス血清をサンプリングし、ＣＤ７３またはＣＤ７３安定発現細胞株に対する結合を試験するためにＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ分析で力価測定した。良好な血清力価がタンパク質免疫化コホートで観察された。
免疫化
ＣＤ７３タンパク質を、Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスを使用して、免疫化における抗ＣＤ７３抗体を産生するための免疫原として使用した。各マウスに、初回ブーストとしてタンパク質５０μgおよびその後のブーストについては２５μgを、アジュバント(Sigma, S6322)と共にｓ.ｃ.およびｉ.ｐ.で投与した。このような免疫化を、週に２回、６回実施した。最終免疫化をＰＢＳで希釈した免疫原で、ｉ.ｐ.により実施した。血清力価を、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを使用してヒトＣＤ７３で検定した。指定された時点で、マウス血清をサンプリングし、ＣＤ７３またはＣＤ７３安定発現細胞株に対する結合を試験するためにＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ分析で力価測定した。良好な血清力価がタンパク質免疫化コホートで観察された。
【0359】
ハイブリドーマ
【0360】
免疫化マウスから単離したマウス脾臓細胞を、細胞融合ジェネレーター(BEX-LF301)を使用する電場ベースのエレクトロポレーターでマウス骨髄腫細胞株ＳＰ２／０(ATCC, CRL-1581)と融合させ、ハイブリドーマを得た。通常融合９～１４日後、個々のウェルをヒト抗ＣＤ７３抗体についてスクリーニングした。ハイブリドーマサブクローニング後、ＣＤ７３に対する良好な結合活性を示す単一クローン３８Ｈ６を、シーケンシングのために選択した。重鎖可変領域および軽鎖可変領域を同定し、取得した。次いで、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を合成し、それぞれヒトＩｇＧ１定常領域をコードするプラスミドおよびヒトＩｇκ領域をコードするプラスミドにクローン化した。
【0361】
実施例２ 抗体産生および精製
標的抗体をコードする組み換えプラスミドを、ＰＥＩ(Polyscience, 24885)を使用して、ＨＥＫ２９３－６Ｅまたは２９３－Ｆ細胞培養物に一過性に共トランスフェクトした。３０μgのプラスミドを混合し、１２０μLのＰＥＩと室温で１５分間インキュベートした。次に、混合物をＯｐｔｉ－ＭＥＭに１×１０６細胞／mLで懸濁した３０mLの２９３細胞に滴下した。トランスフェクション後、細胞を、３７℃で５％ＣＯ２および１２０rpmで振盪しながらインキュベートした。６～７日目に採取した細胞培養上清を精製に使用した。
標的抗体をコードする組み換えプラスミドを、ＰＥＩ(Polyscience, 24885)を使用して、ＨＥＫ２９３－６Ｅまたは２９３－Ｆ細胞培養物に一過性に共トランスフェクトした。３０μgのプラスミドを混合し、１２０μLのＰＥＩと室温で１５分間インキュベートした。次に、混合物をＯｐｔｉ－ＭＥＭに１×１０６細胞／mLで懸濁した３０mLの２９３細胞に滴下した。トランスフェクション後、細胞を、３７℃で５％ＣＯ２および１２０rpmで振盪しながらインキュベートした。６～７日目に採取した細胞培養上清を精製に使用した。
【0362】
標的抗体含有上清を、トランスフェクション６～７日後、遠心分離および濾過により採取した。モノクローナル抗体を、固定rProtein A(GE, 17-1279-02)カラム(Bio-Rad, 7311550)を通して精製した。プロテインＡカラムを、０.２mLのrProtein A樹脂を１カラムに充填し、次いで１０カラム体積のｄｄＨ２Ｏおよび１０カラム体積のＰＢＳで洗浄することにより調製した。細胞培養上清をカラムに載せ、続いて１０カラム体積のＰＢＳで洗浄した。次いで、タンパク質を８カラム体積の溶出緩衝液(Thermo, 21004)で溶出し、溶出直後、６４０μLの中和緩衝液(１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ９.０；Teknova, T1090)と混合した。緩衝液を、３８００rpmで４℃の遠心分離(Eppendorf, 5810R)により、濃縮器(Millipore, UFC903024)中、ＤＰＢＳで５００倍を超える交換により交換し、最後に適切な体積に濃縮した。精製抗ＬＡＧ３抗体の濃度を、２８０nm(NanoDrop)のＵＶ吸光度により決定した。抗体純度をＳＥＣ－ＨＰＬＣおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥにより試験した。１個の組み換え抗体ＰＲ０００５０６は、完全に発現され、特徴づけのための精製に成功した。
【0363】
実施例３ 抗体工学
【0364】
抗ＣＤ７３抗体ＰＲ０００５０６のＶＨおよびＶＬ配列を、生殖系列化およびＰＴＭ除去過程によりさらに最適化した。
【0365】
生殖系列化方法において、抗体ＶＨまたはＶＬ配列をまず例えばＮＣＢＩ／Ｉｇ－ＢＬＡＳＴなどのアルゴリズムにより最も近いヒト生殖系列配列と整列させ、該生殖系列配列と異なる残基を有するフレームワーク領域のｎ位を、生殖系列配列の対応残基で置き換えた。生殖系列化後の配列バリアントからなる抗体を、次いで、十分に確立された分子生物学技術による組み換えにより産生した。
【0366】
翻訳後修飾(ＰＴＭ)は、哺乳動物細胞で発現されるタンパク質で広範に観察される。抗体における保存ＰＴＭ部位、例えばＩｇＧ１抗体ＣＨ２ドメインの保存Ｎ－グリコシル化部位以外、抗体抗原結合部位(すなわちＣＤＲ領域)内で生ずる他のＰＴＭ部位は抗原結合活性を低減または化学的安定性を低減し得る。例えば、脱アミド化または異性化は、分子を不安定かつ不均一とし得る。配列ライアビリティを低減するために、ＰＴＭモチーフを変異により除去し得る。ＶＨまたはＶＬ配列を、ＰＴＭモチーフ、例えば、異性化モチーフ(例えばＤＧ)の存在についてスキャンした。次いで、「ホットスポット」残基(例えば、ＤＧモチーフのＤまたはＧ)を生殖系列配列の対応残基または類似する生物物理学的性質を有する他の残基に変異させた。ＰＴＭ除去後の配列バリアントからなる抗体を、次いで、十分に確立された分子生物学技術による組み換えにより産生した。
【0367】
ＰＲ０００５０６、ＰＲ０００４９７およびＰＲ００１４０８の配列分析を表２に示した。生殖系列化およびＰＴＭ除去によるＰＲ０００５０６からの設計されたバリアントを表３に示した。抗ＣＤ７３抗体のアミノ酸配列は表４に示し、ここで、ＰＲ０００８１５～ＰＲ０００８２０、ＰＲ０００８２２、ＰＲ０００８２４、ＰＲ０００８２５およびＰＲ００３８３２～ＰＲ００３８３６は、ＰＲ０００４９７から誘導体化したＰＴＭ除去抗体であった。ＰＲ００２０７８はＴａｂ１、ＰＲ０００７５２はＴａｂ２およびＰＲ０００６９０はＴａｂ３である。
【表2】
【表3】
【表4】
【0368】
実施例４ 抗ＣＤ７３抗体のＣＤ７３への結合
抗体の安定発現細胞株で発現されているｈＣＤ７３およびｃｙｎｏＣＤ７３への結合を、フローサイトメトリーにより特徴づけした。細胞を種々の濃度の抗体(最高濃度は５０nM、８点、３倍希釈)と１時間、４℃でインキュベートした。ＰＢＳで２回洗浄し、次いで二次抗体ヤギ抗ヒト(Ｈ＋Ｌ)(Thermo fisher, A11013)を加え、３０分間、４℃でインキュベートした。そして蛍光強度をFACSMachine(BD FACS CantoII)で読んだ。中央蛍光強度のプロットと結合ＥＣ５０を適合させ、GraphPad Prism 5により計算した。結果を図１～５および表５～８に示す。
抗体の安定発現細胞株で発現されているｈＣＤ７３およびｃｙｎｏＣＤ７３への結合を、フローサイトメトリーにより特徴づけした。細胞を種々の濃度の抗体(最高濃度は５０nM、８点、３倍希釈)と１時間、４℃でインキュベートした。ＰＢＳで２回洗浄し、次いで二次抗体ヤギ抗ヒト(Ｈ＋Ｌ)(Thermo fisher, A11013)を加え、３０分間、４℃でインキュベートした。そして蛍光強度をFACSMachine(BD FACS CantoII)で読んだ。中央蛍光強度のプロットと結合ＥＣ５０を適合させ、GraphPad Prism 5により計算した。結果を図１～５および表５～８に示す。
【0369】
図１および図３は、抗ＣＤ７３抗体のＣＨＯ－Ｋ１－ヒトＣＤ７３安定発現細胞株への結合活性を示す。表５および表６は、ＣＨＯ－Ｋ１－ｈＣＤ７３安定発現細胞株へのＰＴＭ除去抗体ＥＣ５０を示す。表７はＰＴＭ除去抗体ＥＣ５０対ＰＲ０００５０６ ＥＣ５０比を示す。図２は抗ＣＤ７３抗体のＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ７３安定発現細胞株への結合活性を示す。表８はＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ７３安定発現細胞株に対するＰＴＭ除去抗体ＥＣ５０を示す。図４および図５は抗ＣＤ７３抗体のＣＨＯ－Ｋ１－ヒトＣＤ７３安定発現細胞株に対する結合活性を示す。結果は、抗体全てが細胞ベースのＣＤ７３と同等な親和性を有することを示す。
【表5】
【表6】
【表7】
【表8】
【0370】
実施例５ 抗ＣＤ７３抗体による５’エクトヌクレオチダーゼ阻害
５.１ 抗ＣＤ７３抗体による細胞ベースのＣＤ７３酵素活性の阻害
抗ＣＤ７３抗体の機能的活性を、ＣＨＯ－Ｋ１－ｈＣＤ７３安定発現細胞株におけるアデノシンへのＣＤ７３触媒ＡＭＰ加水分解の阻害を測定するインビトロアッセイで決定した。細胞をトリプシン－ＥＤＴＡで消化し、次いで１０００rpmで５分間遠心分離し、細胞を無血清Ｆ１２Ｋ培地に懸濁し、細胞を細胞カウンター(Thermofisher, CountessTM II Automated Cell Counter)で計数し、次いで５０００細胞／１００μlで９６ウェルフラットプレート(corning, 3599)に播種し、４倍希釈抗体(８点、無血清培地により１／５希釈)をプレートに加え、３０分間、３７℃でインキュベートした。次いで、５０μl ４×ＡＭＰ(２００μM)をプレートに加え、次いで１時間、３７℃でインキュベートした。プレートを１５００rpmで３分間遠心分離し、次いで５０μl 培養上清を黒色９６ウェルプレート(PerkinElmer, 6005225)に加え、２×ＡＴＰ(６５μM)を次いで加えた。Cell Titer-Glo(PROMEGA, G7573)を、製造者の指示に従い、１００μl／ウェル添加した。そして発光をPE Enspireワークステーションにより記録した。遮断活性を、下式を用いて計算した。
註：最大発光ウェルは、細胞存在下、ＡＭＰ、ＡＴＰを添加した。最小発光ウェルは細胞非存在下ＡＭＰ、ＡＴＰを添加した。
５.１ 抗ＣＤ７３抗体による細胞ベースのＣＤ７３酵素活性の阻害
抗ＣＤ７３抗体の機能的活性を、ＣＨＯ－Ｋ１－ｈＣＤ７３安定発現細胞株におけるアデノシンへのＣＤ７３触媒ＡＭＰ加水分解の阻害を測定するインビトロアッセイで決定した。細胞をトリプシン－ＥＤＴＡで消化し、次いで１０００rpmで５分間遠心分離し、細胞を無血清Ｆ１２Ｋ培地に懸濁し、細胞を細胞カウンター(Thermofisher, CountessTM II Automated Cell Counter)で計数し、次いで５０００細胞／１００μlで９６ウェルフラットプレート(corning, 3599)に播種し、４倍希釈抗体(８点、無血清培地により１／５希釈)をプレートに加え、３０分間、３７℃でインキュベートした。次いで、５０μl ４×ＡＭＰ(２００μM)をプレートに加え、次いで１時間、３７℃でインキュベートした。プレートを１５００rpmで３分間遠心分離し、次いで５０μl 培養上清を黒色９６ウェルプレート(PerkinElmer, 6005225)に加え、２×ＡＴＰ(６５μM)を次いで加えた。Cell Titer-Glo(PROMEGA, G7573)を、製造者の指示に従い、１００μl／ウェル添加した。そして発光をPE Enspireワークステーションにより記録した。遮断活性を、下式を用いて計算した。
【数1】
【0371】
グラフおよびＥＣ５０をGraphPad Prismで分析した。結果を図６に示す。図６Ａ～６Ｂは、抗ＣＤ７３抗体によるＣＨＯ－Ｋ１のＣＤ７３酵素活性の阻害を示す。表９および表１０は、ＣＨＯ－Ｋ１安定発現細胞株に対する抗ＣＤ７３抗体ＥＣ５０を示す。全抗体が細胞ベースのＣＤ７３の酵素活性を遮断する能力を有することが見られ得る。そしてＰＲ０００５０６の遮断活性はＴａｂ１より良好である。
【表9】
【表10】
【0372】
５.２ 抗ＣＤ７３抗体によるｓＣＤ７３酵素活性の阻害
マラカイトグリーンアッセイを使用する可溶性組み換えＣＤ７３活性測定のために、１２.５μlの１nM組み換えＣＤ７３および１２.５μlの１nM抗体何れかを３８４ウェルプレート(Corning, 3799)に加え、アッセイ緩衝液(２５mM Ｔｒｉｓ ｐＨ７.５、５mM ＭｇＣｌ２、０.００５％Ｔｗｅｅｎ－２０)で１時間、室温でインキュベートした。２５μlのＡＭＰ(最高濃度２００μM、アッセイ緩衝液中８点１／２希釈)を加え、サンプルを１５分間、室温でインキュベートした。無機リン酸の濃度を、製造者の指示に従いマラカイトグリーンアッセイを使用して決定した。そして光学密度値をPE Envisionワークステーションで６２０nmで記録した。グラフをGraphPad Prismにより分析した。結果を図７および図８に示した。全抗体が可溶性ＣＤ７３の酵素活性を遮断し、かつＣＤ７３がＡＭＰをアデノシンに脱リン酸化を阻害する能力を見ることができる。
マラカイトグリーンアッセイを使用する可溶性組み換えＣＤ７３活性測定のために、１２.５μlの１nM組み換えＣＤ７３および１２.５μlの１nM抗体何れかを３８４ウェルプレート(Corning, 3799)に加え、アッセイ緩衝液(２５mM Ｔｒｉｓ ｐＨ７.５、５mM ＭｇＣｌ２、０.００５％Ｔｗｅｅｎ－２０)で１時間、室温でインキュベートした。２５μlのＡＭＰ(最高濃度２００μM、アッセイ緩衝液中８点１／２希釈)を加え、サンプルを１５分間、室温でインキュベートした。無機リン酸の濃度を、製造者の指示に従いマラカイトグリーンアッセイを使用して決定した。そして光学密度値をPE Envisionワークステーションで６２０nmで記録した。グラフをGraphPad Prismにより分析した。結果を図７および図８に示した。全抗体が可溶性ＣＤ７３の酵素活性を遮断し、かつＣＤ７３がＡＭＰをアデノシンに脱リン酸化を阻害する能力を見ることができる。
【0373】
実施例６ 抗ＣＤ７３抗体によるＣＤ７３の内在化
６.１ フローサイトメトリーによる抗体介在ＣＤ７３内在化アッセイ
ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を、５０nM抗体または陰性対照アイソタイプＩｇＧ１存在下で３７℃で４時間または３０分間インキュベートした。ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、次いで抗体５０nMの１００μlをアイソタイプ対照ウェルに加え、プレートを４℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、洗浄緩衝液を吸引し、ウェルあたり二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ(Ｈ＋Ｌ)(Thermofisher, A-21445)を有する１００μlのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、３０分間、４℃でインキュベートした。ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、細胞を１００μl ＰＢＳに懸濁し、そして中央蛍光強度をFACSMachine(BD FACS CantoII)により読み取り、表面残存％を下式により計算した。
表面残存％＝[抗体４時間／(アイソタイプ４時間＋抗体)]×１００
６.１ フローサイトメトリーによる抗体介在ＣＤ７３内在化アッセイ
ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を、５０nM抗体または陰性対照アイソタイプＩｇＧ１存在下で３７℃で４時間または３０分間インキュベートした。ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、次いで抗体５０nMの１００μlをアイソタイプ対照ウェルに加え、プレートを４℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、洗浄緩衝液を吸引し、ウェルあたり二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ(Ｈ＋Ｌ)(Thermofisher, A-21445)を有する１００μlのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、３０分間、４℃でインキュベートした。ＰＢＳによりプレートを２回洗浄し、細胞を１００μl ＰＢＳに懸濁し、そして中央蛍光強度をFACSMachine(BD FACS CantoII)により読み取り、表面残存％を下式により計算した。
表面残存％＝[抗体４時間／(アイソタイプ４時間＋抗体)]×１００
【0374】
【0375】
６.２ 内在化キットによる抗体介在ＣＤ７３内在化アッセイ
細胞ＣＨＯ－Ｋ１－ｈＣＤ７３をトリプシン－ＥＤＴＡで消化し、次いで１０００rpmで５分間遠心分離し、細胞を１０％ＦＢＳ含有Ｆ１２Ｋ培地に再懸濁した。細胞カウンター(Thermofisher, CountessTM II Automated Cell Counter)を使用して細胞をカウントし、次いで９６ウェル平黒色透明底ＴＣプレート(PerkinElmer, 6005225)に９０μlあたり５０００細胞で播種した。一夜、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。１０倍希釈抗体(最高濃度１０nM、６点、完全Ｆ１２Ｋ培地により１／５希釈)をプレートに加え、５０μg／ml(５０×)濃度でＨｕ－ｚａｐ緩衝液を調製した。２μlをウェルに加え、最終濃度は１μg／mlである。３日間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。Cell Titer-Glo(PROMEGA, G7573)を製造者の指示に従い１００μl／ウェルで加えた。そして発光をPE Enspireワークステーションにより記録した。結果をＣＤ７３内在化％により計算した。註：対照ウェルは細胞のみ播種した。グラフをGraphPad Prismにより分析した。
細胞ＣＨＯ－Ｋ１－ｈＣＤ７３をトリプシン－ＥＤＴＡで消化し、次いで１０００rpmで５分間遠心分離し、細胞を１０％ＦＢＳ含有Ｆ１２Ｋ培地に再懸濁した。細胞カウンター(Thermofisher, CountessTM II Automated Cell Counter)を使用して細胞をカウントし、次いで９６ウェル平黒色透明底ＴＣプレート(PerkinElmer, 6005225)に９０μlあたり５０００細胞で播種した。一夜、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。１０倍希釈抗体(最高濃度１０nM、６点、完全Ｆ１２Ｋ培地により１／５希釈)をプレートに加え、５０μg／ml(５０×)濃度でＨｕ－ｚａｐ緩衝液を調製した。２μlをウェルに加え、最終濃度は１μg／mlである。３日間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。Cell Titer-Glo(PROMEGA, G7573)を製造者の指示に従い１００μl／ウェルで加えた。そして発光をPE Enspireワークステーションにより記録した。結果をＣＤ７３内在化％により計算した。註：対照ウェルは細胞のみ播種した。グラフをGraphPad Prismにより分析した。
【0376】
【0377】
実施例７ 抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖アッセイのＡＭＰ介在抑制を阻害した
７.１ 新鮮ヒトＰＢＭＣから単離したＣＤ４＋Ｔ細胞
ＰＢＭＣを、予め冷却したＰＢＳで２回、１０分間、４℃で３００×ｇの遠心分離により洗浄した。上清を廃棄し、細胞を２０mlの予め冷却したＰＢＳに懸濁した。生存可能細胞を決定し、次いで３００×ｇで７分間ペレット化した。上清を完全に吸引した。製造者のプロトコール(Miltenyi, 130-045-101)を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。
７.１ 新鮮ヒトＰＢＭＣから単離したＣＤ４＋Ｔ細胞
ＰＢＭＣを、予め冷却したＰＢＳで２回、１０分間、４℃で３００×ｇの遠心分離により洗浄した。上清を廃棄し、細胞を２０mlの予め冷却したＰＢＳに懸濁した。生存可能細胞を決定し、次いで３００×ｇで７分間ペレット化した。上清を完全に吸引した。製造者のプロトコール(Miltenyi, 130-045-101)を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。
【0378】
７.２ ＣＦＳＥ標識
CellTraceTM原液(Invitrogen, C34554)を、CellTraceTM試薬(成分Ａ)の１バイアルに適切な体積のＤＭＳＯ(成分Ｂ)を加え、十分混合することにより使用直前調製し、よく混合し、CellTraceTM ＤＭＳＯ原液(５mM)を予め温めた(３７℃)リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)または他の無タンパク質緩衝液で１μM(５０００倍)に希釈し、細胞を製造者の指示に従い、標識した。
CellTraceTM原液(Invitrogen, C34554)を、CellTraceTM試薬(成分Ａ)の１バイアルに適切な体積のＤＭＳＯ(成分Ｂ)を加え、十分混合することにより使用直前調製し、よく混合し、CellTraceTM ＤＭＳＯ原液(５mM)を予め温めた(３７℃)リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)または他の無タンパク質緩衝液で１μM(５０００倍)に希釈し、細胞を製造者の指示に従い、標識した。
【0379】
７.３ Ｔ細胞活性化および拡大
各ドナーからの細胞を、温かい完全培養培地で２回洗浄し、２×１０６細胞／mLで懸濁し、DynabeadsヒトＴアクティベーターＣＤ３／ＣＤ２８(life, 11131D)を１×１０６／mlで懸濁し、細胞懸濁液とDynabeadsを１：１混合した。細胞とビーズの混合物を１００μl／ウェルで９６ウェル平底プレートに加えた。
各ドナーからの細胞を、温かい完全培養培地で２回洗浄し、２×１０６細胞／mLで懸濁し、DynabeadsヒトＴアクティベーターＣＤ３／ＣＤ２８(life, 11131D)を１×１０６／mlで懸濁し、細胞懸濁液とDynabeadsを１：１混合した。細胞とビーズの混合物を１００μl／ウェルで９６ウェル平底プレートに加えた。
【0380】
７.４ ４×抗体添加
４×抗体５０μl、抗体濃度：６点(最高濃度は２０nM、ＲＰＭＩ１６４０完全培地で６点１／１０希釈)を添加。プレートを３０分間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
４×抗体５０μl、抗体濃度：６点(最高濃度は２０nM、ＲＰＭＩ１６４０完全培地で６点１／１０希釈)を添加。プレートを３０分間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【0381】
７.５ ４×ＡＭＰ添加
４×ＡＭＰ(Sigma)５０μL(最終濃度は６５０μMまたは８００μMである)を加え、プレートを９６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
４×ＡＭＰ(Sigma)５０μL(最終濃度は６５０μMまたは８００μMである)を加え、プレートを９６時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【0382】
７.６ ＦＡＣＳ分析
細胞を、３５０ｇで５分間遠心分離によりペレット化し、２００μl ＰＢＳで１回洗浄し、最後にBD FACS Canto IIでのフローサイトメトリー分析のために２００μl ＰＢＳに懸濁した。ＡＭＰ不含ＣＦＳＥ ＣＤ４＋Ｔ細胞(ビーズのみ)ウェルを使用して、細胞分裂をしている細胞を同定した。
細胞を、３５０ｇで５分間遠心分離によりペレット化し、２００μl ＰＢＳで１回洗浄し、最後にBD FACS Canto IIでのフローサイトメトリー分析のために２００μl ＰＢＳに懸濁した。ＡＭＰ不含ＣＦＳＥ ＣＤ４＋Ｔ細胞(ビーズのみ)ウェルを使用して、細胞分裂をしている細胞を同定した。
【0383】
【0384】
実施例８ ＰＫ分析
８.１ プレートコーティング
抗原ＣＤ７３を、ＰＢＳで５μg／mLに希釈した。５０μL／ウェルでＥＬＩＳＡプレートに添加した。プレートを密封し、一夜、４℃でインキュベートした。プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄した。２００μl／ウェルのアッセイ希釈剤を加え、室温で１～３時間インキュベートした。プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄した。
８.１ プレートコーティング
抗原ＣＤ７３を、ＰＢＳで５μg／mLに希釈した。５０μL／ウェルでＥＬＩＳＡプレートに添加した。プレートを密封し、一夜、４℃でインキュベートした。プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄した。２００μl／ウェルのアッセイ希釈剤を加え、室温で１～３時間インキュベートした。プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄した。
【0385】
８.２ 標品、ＱＣ、試験サンプルの調製およびサンプルインキュベーション
標品：５％貯留マウス血清で２倍連続希釈を行った。５０～０.３９１ng／mL範囲の８標品とした。０.３９１ng／mL標品が基準点であった。ＱＣ調製：２セットのＱＣを、５％貯留マウス血清で調製した。ＨＱＣ(４０ng／mL)、ＭＱＣ(１０ng／mL)およびＬＱＣ(２ng／mL)。サンプル調製：全血清サンプルをまずアッセイ希釈剤で２０倍希釈した。５％貯留マウス血清でさらに希釈した。５０μLの標品、ＱＣおよびサンプルをＥＬＩＳＡプレートに加えた。プレートを密封し、３７℃で約１時間インキュベートした。
標品：５％貯留マウス血清で２倍連続希釈を行った。５０～０.３９１ng／mL範囲の８標品とした。０.３９１ng／mL標品が基準点であった。ＱＣ調製：２セットのＱＣを、５％貯留マウス血清で調製した。ＨＱＣ(４０ng／mL)、ＭＱＣ(１０ng／mL)およびＬＱＣ(２ng／mL)。サンプル調製：全血清サンプルをまずアッセイ希釈剤で２０倍希釈した。５％貯留マウス血清でさらに希釈した。５０μLの標品、ＱＣおよびサンプルをＥＬＩＳＡプレートに加えた。プレートを密封し、３７℃で約１時間インキュベートした。
【0386】
８.３ 検出試薬反応
プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄。ＨＲＰコンジュゲート検出抗体作業溶液調製：抗体溶液をアッセイ希釈剤で１：５０００希釈。１００μl／ウェルの検出抗体作業溶液をアッセイプレートに添加。プレートを密封し、３７℃で３０分間インキュベートした。
プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄。ＨＲＰコンジュゲート検出抗体作業溶液調製：抗体溶液をアッセイ希釈剤で１：５０００希釈。１００μl／ウェルの検出抗体作業溶液をアッセイプレートに添加。プレートを密封し、３７℃で３０分間インキュベートした。
【0387】
８.４ 基質反応およびプレート読み込み
プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄。ＴＭＢ作業溶液調製：使用前３０分間、基質を室温にした。等体積の基質Ａと基質Ｂを混合。１００μl／ウェルの前混合ＴＭＢ基質を加え、室温で約６分間インキュベート。１００μL／ウェルのＥＬＩＳＡ停止溶液を添加。プレートを混合し、SpectraMax M2を使用して４５０／６３０nm波長で読む。Soft Max Pro GxPを使用して、データ処理。標準曲線を４－ＰＬモデルを使用して１／ｙの荷重因子を用いて、フィッティングした。
プレートを３回３００μlの洗浄緩衝液で洗浄。ＴＭＢ作業溶液調製：使用前３０分間、基質を室温にした。等体積の基質Ａと基質Ｂを混合。１００μl／ウェルの前混合ＴＭＢ基質を加え、室温で約６分間インキュベート。１００μL／ウェルのＥＬＩＳＡ停止溶液を添加。プレートを混合し、SpectraMax M2を使用して４５０／６３０nm波長で読む。Soft Max Pro GxPを使用して、データ処理。標準曲線を４－ＰＬモデルを使用して１／ｙの荷重因子を用いて、フィッティングした。
【0388】
図１４Ａおよび表１１は、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス(Ｎ＝６／時間点)に５mg／kgのＰＲ０００５０６をＩＶ後の個々の濃度－時間プロファイルを示す。図１４Ｂおよび表１２は、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス(Ｎ＝３／時間点)に１０mg／kgのＰＲ０００８４６をＩＶ投与後の個々の濃度－時間プロファイルを示す。血清中のＰＲ０００５０６ｔ１／２は１７.４日であり、ＰＲ０００８４６は１８.１日である。図１４Ｃおよび表１３は、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス(Ｎ＝６／時間点)に５mg／kgのＰＲ０００４９７をＩＶ投与後の個々の血清濃度－時間プロファイルを示す。
【表11】
【表12】
【表13】
【0389】
実施例９ インビボ腫瘍阻害
ＮＣＧマウスに、０日目にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞およびＰＢＭＣをｓ.ｃ.接種し、腫瘍モデルを得た。腫瘍担持マウスを数群に分けた：群アイソタイプ対照、群ｔａｂ１；群ＰＲ０００５０６、群Ｔａｂ３、群ＰＲ０００８４６および群ＰＲ０００４９７。各群で、マウスを対応する化合物で、１０mpkで週２回、３週間治療した。腫瘍体積および体重を選択した時間に測定した。
ＮＣＧマウスに、０日目にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞およびＰＢＭＣをｓ.ｃ.接種し、腫瘍モデルを得た。腫瘍担持マウスを数群に分けた：群アイソタイプ対照、群ｔａｂ１；群ＰＲ０００５０６、群Ｔａｂ３、群ＰＲ０００８４６および群ＰＲ０００４９７。各群で、マウスを対応する化合物で、１０mpkで週２回、３週間治療した。腫瘍体積および体重を選択した時間に測定した。
【0390】
結果を図１５および１６に示した。抗ＣＤ７３抗体が腫瘍増殖の阻害効果を有することが示された。
【0391】
実施例１０ ＰＲ０００８４６によるＣＤ７３のエピトープの決定
本実施例において、抗ＣＤ７３抗体ＰＲ０００８４６と結合するＣＤ７３のエピトープを、水素・重水素交換質量分析(ＨＤＸ－ＭＳ)により決定し、エピトープの重要なアミノ酸をＣＤ７３タンパク質のアラニン変異により確認した。
本実施例において、抗ＣＤ７３抗体ＰＲ０００８４６と結合するＣＤ７３のエピトープを、水素・重水素交換質量分析(ＨＤＸ－ＭＳ)により決定し、エピトープの重要なアミノ酸をＣＤ７３タンパク質のアラニン変異により確認した。
【0392】
水素・重水素交換質量分析(ＨＤＸ－ＭＳ)
ＨＤＸ－ＭＳ実験を、先に記載されたとおり、Genechemにより実施した(Park IH, et al., J . Chem. Inf.Model.; 55(9): 1914-1925 (2015); Chalmers MJ, et al., Anal. Chem.; 78(4): 1005-14 (2006))。抗体抗原複合体を、４℃で一夜インキュベーションにより調製し、１：１モル比で使用した。
ＨＤＸ－ＭＳ実験を、先に記載されたとおり、Genechemにより実施した(Park IH, et al., J . Chem. Inf.Model.; 55(9): 1914-1925 (2015); Chalmers MJ, et al., Anal. Chem.; 78(4): 1005-14 (2006))。抗体抗原複合体を、４℃で一夜インキュベーションにより調製し、１：１モル比で使用した。
【0393】
室温オン交換実験を、２μIの０.５mg／ml ｒｈＣＤ７３タンパク質(Novoprotein, C446)または２μIのモル等量のＣＤ７３－ｍＡｂ複合体を３６μlのＤ２Ｏ緩衝液に手で加えることにより実施した。サンプルを３０秒、１２０秒、６００秒、１８００秒、７２００秒の室温でのイン交換後、４０μl氷冷保存停止緩衝液(４Ｍグアニジン塩酸塩(Sangon Biotech, A510243-0500)、０.５Ｍ ＴＥＣＰ(Aladdin, T107252、０.２Ｍ リン酸、ｐＨ２.５、０℃)を加えて停止させた。クロマトグラフィー系のプレカラムにサンプルを充填し、オンラインペプシン消化した。マススペクトルを得て、ペプチドを同定した。ペプチド同定を、生データをProteomeDiscoverer2.1を使用して.mgfに変換し、重水素化の定量のために結果をHDExaminerにインポートした。
図１７～２０は、遊離対結合状態で異なる水素交換を受ける、ＣＤ７３およびＰＲ０００８４６の領域を示す、水素重水素交換ＭＳ(ＨＤＸ－ＭＳ)分析の結果を示す。
図１７～２０は、遊離対結合状態で異なる水素交換を受ける、ＣＤ７３およびＰＲ０００８４６の領域を示す、水素重水素交換ＭＳ(ＨＤＸ－ＭＳ)分析の結果を示す。
【0394】
図１７：各データ点は、ＣＤ７３＋ＰＲ０００８４６複合体(ｙ軸の正の値)とＣＤ７３単独(ｙ軸の負の値)の間の重水素取り込みの差異を示す。縦棒は暴露時間－点にわたる取り込み差異の合計を示す。水平軸は、Ｎ末端からＣ末端方向(左から右)の分析ペプチドに対応する。遊離および複合体化ＣＤ７３の交換の反応速度の比較は、ＰＲ０００８４６と結合したとき、重水素取り込み減少を示す、ｓＣＤ７３のＮ末端ドメイン内に位置する３つの領域を明らかにした(領域１：ａａ１１５～１６４；領域２：ａａ１６８～１９１；領域３：ａａ２２２～２５４)。
【0395】
図１８～２０は、領域１、２、３を包含するペプチド内の重水素暴露時間の関数としての相対的重水素取り込み(ダルトンでの質量変化)を表わすプロットを記載する。ペプチド配列、位置および質量をプロットボックス内に示す。水素交換における交換を表し、エピトープを形成するであろうことが予測される配列を含む領域を絞るために、重複ペプチドにおける相対的質量交換を深くした。例えば、領域２において、位置１６８～１８６に及ぶペプチドは、差示的交換を示すが、１６８～１８１に及ぶペプチドに差はなかった。故に、１８２の上流の残基は差示的に標識されなかったと判断された。次いで、これら３領域を、ＰＲ０００８４６に結合したとき重水素取り込みの減少を示すアミノ酸(ａａ)１３２～１４６(ＹＬＰＹＫＶＧＤＥＶＶＧ)および１８２～１８９(ＫＴＬＮＶＮＫＩ)および２４０～２５４(ＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡ)に絞った。
【0396】
実施例１１ ＣＤ７３のアラニン変異体
エピトープのより精密な、残基レベルマッピングを得るために、アラニンスキャニングをＣＤ７３のこれら３領域に適用した。これら３領域にアラニン変異体ＣＤ７３をコードするプラスミドを構築し、これらのプラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、発現させた。次いで、次のとおりエピトープの重要なアミノ酸を同定するためにＥＬＩＳＡを使用。０.５μg／ml抗ｈｉｓ抗体(TransGen, HT501-02)を加え、３％ミルクＰＢＳで２時間、３７℃で遮断し、ＣＤ７３変異体の１００μl上清を加え、３０分間、３７℃でインキュベートして、ＣＤ７３変異体上清の結合を３回繰り返すことにより飽和；次いで、連続希釈ＰＲ０００８４６(出発濃度は１００nMである)を３７℃で１時間添加；０.５％遮断緩衝液による抗ＣＤ７３抗体１：５０００を添加し、次いで３７℃で１時間インキュベート；ＰＢＳＴ(０.０５％Ｔｗｅｅｎ ２０)で３回洗浄、１００μl ＴＭＢ(ＫＰＬ)添加、約５分間、室でインキュベート、次いで５０μl停止溶液添加。各ウェルの吸光度(４５０nmの光学密度)をプレートリーダーで読んだ。
エピトープのより精密な、残基レベルマッピングを得るために、アラニンスキャニングをＣＤ７３のこれら３領域に適用した。これら３領域にアラニン変異体ＣＤ７３をコードするプラスミドを構築し、これらのプラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、発現させた。次いで、次のとおりエピトープの重要なアミノ酸を同定するためにＥＬＩＳＡを使用。０.５μg／ml抗ｈｉｓ抗体(TransGen, HT501-02)を加え、３％ミルクＰＢＳで２時間、３７℃で遮断し、ＣＤ７３変異体の１００μl上清を加え、３０分間、３７℃でインキュベートして、ＣＤ７３変異体上清の結合を３回繰り返すことにより飽和；次いで、連続希釈ＰＲ０００８４６(出発濃度は１００nMである)を３７℃で１時間添加；０.５％遮断緩衝液による抗ＣＤ７３抗体１：５０００を添加し、次いで３７℃で１時間インキュベート；ＰＢＳＴ(０.０５％Ｔｗｅｅｎ ２０)で３回洗浄、１００μl ＴＭＢ(ＫＰＬ)添加、約５分間、室でインキュベート、次いで５０μl停止溶液添加。各ウェルの吸光度(４５０nmの光学密度)をプレートリーダーで読んだ。
【0397】
図２１および２２：ＥＬＩＳＡ結合データは、領域１のＫ１３６、Ｖ１３７、Ｌ１３８、Ｄ１４２、Ｅ１４３、Ｖ１４４および領域２のＫ１８０、Ｖ１８６、Ｎ１８７、Ｋ１８８および領域３またはその周辺のＹ２２３、Ｐ２３８、Ｉ２４０が、ＰＲ０００８４６へのＣＤ７３結合の一次エピトープ残基であることを明らかにする。そして領域１におけるＶ１３７、Ｄ１４２は重要なエピトープ残基である。ＭＥＤＩ９４４７(ＴＡＢ１)へのＣＤ７３結合に重要なエピトープ残基であるＮ１８５は、ＰＲ０００８４６へのＣＤ７３結合のためのエピトープ残基ではない。
【0398】
本発明の好ましい実施態様がここに示され、記載されているが、このような実施態様は単なる例として提供されることは当業者には明らかである。本発明は、本明細書に提供される具体例により限定されることを意図されていない。本発明は上記明細書と関連させて記載されているが、ここでの実施態様の記載および説明は、限定的意味で解釈されることを意図されていない。本発明から逸脱することなく、多くの変動、変化および置換が当業者にはわかり得る。さらに、本発明の全態様は、ここに記載する特定の表現、配置または相対的比率に限定されず、種々の条件および変化に依存することが理解されるべきである。ここに記載する本発明の実施態様の種々の改変が、本発明の実施に際して、用いられ得る。従って、本発明は、あらゆるこのような改変、修飾、変動または均等物を包含することが意図される。次の特許請求の範囲は本発明を規定し、これら特許請求の範囲およびその均等物の範囲内の方法および構造はそれによりカバーされることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14-1】
【図14-2】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【配列表】