(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-15
(45)【発行日】2024-04-23
(54)【発明の名称】家畜腸内細菌叢改善剤
(51)【国際特許分類】
A23K 20/142 20160101AFI20240416BHJP
A61P 1/12 20060101ALI20240416BHJP
A61K 31/198 20060101ALI20240416BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240416BHJP
A61K 31/7024 20060101ALI20240416BHJP
A61K 36/87 20060101ALI20240416BHJP
A61K 36/82 20060101ALI20240416BHJP
A23K 20/111 20160101ALI20240416BHJP
A23K 10/30 20160101ALI20240416BHJP
A23K 50/30 20160101ALI20240416BHJP
A23K 50/60 20160101ALI20240416BHJP
【ＦＩ】
A23K20/142
A61P1/12 171
A61K31/198
A61P43/00 121
A61K31/7024
A61K36/87
A61K36/82
A23K20/111
A23K10/30
A23K50/30
A23K50/60
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2020135089
(22)【出願日】2020-08-07
(65)【公開番号】P2022030822
(43)【公開日】2022-02-18
【審査請求日】2023-04-27
(73)【特許権者】
【識別番号】000000066
【氏名又は名称】味の素株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002000
【氏名又は名称】弁理士法人栄光事務所
(72)【発明者】
【氏名】シャルボン デマーシー トリスタン
(72)【発明者】
【氏名】立石 木綿子
(72)【発明者】
【氏名】佐藤 和
(72)【発明者】
【氏名】坂内 慎
(72)【発明者】
【氏名】太田 康博
【審査官】星野 浩一
(56)【参考文献】
【文献】特開平０６－２５６１８０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０５－００００５１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特許第５８８１８０１（ＪＰ，Ｂ２）
【文献】松本光晴，腸内細菌由来ポリアミンを機能性成分とした健康寿命伸長食品の開発，生物工学，第９７巻第１０号，日本，2019年，第５９９－６０２頁，https://www.sbj.or.jp/wp-content/uploads/file/sbj/9710/9710_tokushu_2.pdf
【文献】個々の腸内細菌の生き残り戦略が組み合わさることで、機能性物質ポリアミンが産生されていることを発見～ポリアミンで予防・軽減が期待される疾患（心血管疾患など）への応用が期待される～，京都大学 最新の研究成果を知る，日本，京都大学，2018年07月06日，第１－５頁，https://www.kyoto-u.ac.jp/ja/research-news/2018-07-06-0
【文献】栗原新，ヒト腸内細菌最優勢種の腸管内腔におけるポリアミン生産機構の遺伝学的解析，科学研究費助成事業 研究成果報告書，日本，2020年07月10日，第１－１３頁，https://kaken.nii.ac.jp/file/KAKENHI-PROJECT-17H05026/17H05026seika.pdf
【文献】吉田隆志 外２名，天然ナノ分子タンニン －その構造と機能－，有機合成化学協会誌，第６２巻第５号，日本，2004年，第５００－５０７頁，https://www.jstage.jst.go.jp/article/yukigoseikyokaishi1943/62/5/62_5_500/_pdf
【文献】柿と牛乳を混ぜた際の凝固作用における品種間差について，みんなのひろば，日本，日本植物整理学会，2015年12月25日，第１－2頁，https://jspp.org/hiroba/q_and_a/detail.html?id=3411
【文献】奥田拓男，タンニンの効用，日本釀造協會雜誌，第78巻第10号，日本，1983年10月15日，第７２８－７３２頁，https://www.jstage.jst.go.jp/article/jbrewsocjapan1915/78/10/78_10_728/_article/-char/ja/
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ２３Ｋ ２０／１４２
Ａ６１Ｐ １／１２
Ａ６１Ｋ ３１／１９８
Ａ６１Ｐ ４３／００
Ａ６１Ｋ ３１／７０２４
Ａ６１Ｋ ３６／８７
Ａ６１Ｋ ３６／８２
Ａ２３Ｋ ２０／１１１
Ａ２３Ｋ １０／３０
Ａ２３Ｋ ５０／３０
Ａ２３Ｋ ５０／６０
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アルギニン及びタンニンを有効成分として含有する、家畜腸内乳酸菌の増殖用家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項2】
さらに、バリン、ロイシン、イソロイシン、シスチン、グルタミン、及びスレオニンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含む、請求項１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項3】
タンニンがブドウまたは茶の抽出物由来である、請求項１または２に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項4】
剤の全量を基準にして、アルギニンを、遊離体換算量で２５．０～５５．０質量％含有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項5】
剤の全量を基準にして、タンニンを１．０～１０．０質量％含有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項6】
アルギニンが家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５～１．１ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、請求項１～５のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項7】
タンニンが家畜飼料１ｋｇあたり０．０１～０．２ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、請求項１～６のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項8】
アルギニンとタンニンの含有比率が、質量基準で２．５：１～５５．０：１である、請求項１～７のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項9】
前記家畜が単胃の家畜である、請求項１～８のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項10】
前記家畜が離乳期の豚である、請求項１～９のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
【請求項11】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤と、飼料原料とを含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物。
【請求項12】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加する工程を含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物の調製方法。
【請求項13】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
【請求項14】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内の乳酸菌を増殖させる方法。
【請求項15】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加し、得られる家畜飼料組成物を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
【請求項16】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜の健康増進方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、家畜用の腸内細菌叢改善剤に関する。詳細には、家畜腸内細菌叢改善剤、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物、その調製方法、家畜腸内細菌叢を改善する方法、家畜腸内の乳酸菌を増殖させる方法、及び家畜の健康増進方法に関する。
【背景技術】
【0002】
家畜の飼育上の問題として、家畜の出生前または出生後幼若期に生じる種々のストレスにより、家畜の生育が低下することが挙げられる。家畜の体重は売上げに直結し商業上重要であるため、かかる問題は畜産農家にとって深刻である。
【0003】
例えば、豚は、免疫系や消化管系が未成熟な状態で出生し、各種感染病や下痢等に罹患しやすい。また、子豚は離乳期における母乳から固形飼料への切り替え時のストレス等により、消化管等の内臓が虚弱化し、飼料摂取量の低下または栄養成分の消化と吸収を著しく低下、腸内細菌叢の撹乱や免疫力の低下によって、細菌や原虫などの病原体に感染しやすくなる。その結果、疾病の発生や成長（増体）の低下などの生産性低下、および生産物の品質への影響が問題となっている。
【0004】
上記問題に対しては、例えば腸内細菌叢のうち有用菌である乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属）やビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）を増やすことで、免疫機能や消化生理機能を向上させることにより、生産性の低下を防ぐことが考えられる。例えば、特許文献１ではビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）の細胞壁の酵素消化物を有効成分とする家畜の下痢の予防、治療剤が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】特開昭５６－１０８７１７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
特許文献１に記載の発明は家畜の腸内に元来棲息している有用細菌を培養し、その有効成分のみをとりだして、また宿主にもどすことで、家畜腸内の有用細菌を増やし、腸内細菌叢を改善するものである。ここで用いられているビフィドバクテリウムは、偏性嫌気性細菌であって原料となる細菌細胞の培養には嫌気操作が必要となり操作が繁雑であり、しかも生育にはビタミン等高価な原料を必要とし、菌体収量も低くコスト高となる欠点を有する。
従って、本発明は、より簡易に家畜の腸内細菌叢を改善することを目的とする。
従って、本発明は、より簡易に家畜の腸内細菌叢を改善することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、アルギニンとタンニンとを組み合わせて家畜に給与することにより、驚くべきことに家畜の腸内細菌叢を改善することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0008】
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．アルギニン及びタンニンを有効成分として含有する、家畜腸内細菌叢改善剤。
２．さらに、バリン、ロイシン、イソロイシン、シスチン、グルタミン、及びスレオニンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含む、上記１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
３．タンニンがブドウまたは茶の抽出物由来である、上記１または２に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
４．剤の全量を基準にして、アルギニンを、遊離体換算量で２５．０～５５．０質量％含有する、上記１～３のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
５．剤の全量を基準にして、タンニンを１．０～１０．０質量％含有する、上記１～４のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
６．アルギニンが家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５～１．１ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、上記１～５のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
７．タンニンが家畜飼料１ｋｇあたり０．０１～０．２ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、上記１～６のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
８．アルギニンとタンニンの含有比率が、質量基準で２．５：１～５５．０：１である、上記１～７のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
９．前記家畜が単胃の家畜である、上記１～８のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１０．前記家畜が離乳期の豚である、上記１～９のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１１．前記家畜腸内細菌叢改善が、家畜腸内乳酸菌の増殖である、上記１～１０のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１２．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤と、飼料原料とを含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物。
１３．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加する工程を含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物の調製方法。
１４．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
１５．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内の乳酸菌を増殖させる方法。
１６．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加し、得られる家畜飼料組成物を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
１７．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜の健康増進方法。
１．アルギニン及びタンニンを有効成分として含有する、家畜腸内細菌叢改善剤。
２．さらに、バリン、ロイシン、イソロイシン、シスチン、グルタミン、及びスレオニンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含む、上記１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
３．タンニンがブドウまたは茶の抽出物由来である、上記１または２に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
４．剤の全量を基準にして、アルギニンを、遊離体換算量で２５．０～５５．０質量％含有する、上記１～３のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
５．剤の全量を基準にして、タンニンを１．０～１０．０質量％含有する、上記１～４のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
６．アルギニンが家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５～１．１ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、上記１～５のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
７．タンニンが家畜飼料１ｋｇあたり０．０１～０．２ｇ含まれるように飼料原料に添加されるための、上記１～６のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
８．アルギニンとタンニンの含有比率が、質量基準で２．５：１～５５．０：１である、上記１～７のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
９．前記家畜が単胃の家畜である、上記１～８のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１０．前記家畜が離乳期の豚である、上記１～９のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１１．前記家畜腸内細菌叢改善が、家畜腸内乳酸菌の増殖である、上記１～１０のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤。
１２．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤と、飼料原料とを含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物。
１３．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加する工程を含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物の調製方法。
１４．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
１５．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜腸内の乳酸菌を増殖させる方法。
１６．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を飼料原料に添加し、得られる家畜飼料組成物を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法。
１７．上記１～１１のいずれか１に記載の家畜腸内細菌叢改善剤を家畜に給与する、家畜の健康増進方法。
【発明の効果】
【0009】
本発明の一実施形態の家畜腸内細菌叢改善剤はアルギニン及びタンニンを有効成分として含有するため、当該剤を家畜に給与することにより、家畜の腸内細菌叢を改善させることができる。これにより、家畜の健康を増進でき、ひいては家畜の増体重量の低下を抑制できると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図3】図３は、試験開始１４日目（ｄ１４）における飼料区ごとの豚の体重（Ａ）、試験開始１４日目までの飼料区ごとの豚の増体重量（Ｂ）、試験開始１４日目までの飼料区ごとの飼料効率（Ｃ）、試験開始１４日目までの１日あたりの飼料摂取量（Ｄ）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下、本発明の具体的な実施形態について詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。
本明細書において、「改善」とは、悪化した状態または症状を緩和すること、改善すること、若しくは回復を促進することを意味する。具体的には、家畜腸内細菌叢の「改善」とは、家畜腸内に存在する腸内細菌叢の菌数、および菌種の比率が悪化した状態または症状を緩和すること、改善すること、若しくは回復を促進することを意味する。
本明細書において、「改善」とは、悪化した状態または症状を緩和すること、改善すること、若しくは回復を促進することを意味する。具体的には、家畜腸内細菌叢の「改善」とは、家畜腸内に存在する腸内細菌叢の菌数、および菌種の比率が悪化した状態または症状を緩和すること、改善すること、若しくは回復を促進することを意味する。
【0012】
本実施形態の家畜腸内細菌叢改善剤（以下、改善剤または単に剤ともいう）は、アルギニン及びタンニンを有効成分として含有する。本発明者らは、アルギニンとタンニンとを組み合わせて家畜に摂取させることにより、家畜の腸内細菌叢を改善することを見出した。具体的には、後述する実施例に示すように、アルギニンとタンニンとを組み合わせて家畜に摂取させることで、家畜腸内の乳酸菌を増殖させることができた。そして、かかる効果は、アルギニン単独あるいはタンニン単独で家畜に摂取させる場合と比較して高いものであった。このように、アルギニンとタンニンの組み合わせにより家畜の腸内細菌叢を改善できる理由については明らかではないが、家畜がアルギニンおよびタンニンの両方を摂取すると、後述する実施例に示すように、家畜体内でアルギニンとタンニンとが複合体を形成することにより、腸管まで分解されることなく到達し、アルギニンおよびタンニンの両者ともに腸内に吸収されやすくなることに起因していると推測される。
【0013】
本実施形態の改善剤が含有するアルギニンは、遊離アルギニンまたはペプチドを形成する非遊離アルギニンのいずれの形態として含まれていてよい。
また、遊離アルギニンまたはペプチドは、塩であってもなくてもよい。遊離アルギニンまたはペプチドの塩としては、例えば、無機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩および有機塩基との塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、ハロゲン化水素酸（例、塩酸）、硫酸、硝酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸等との塩が挙げられる。有機塩基との塩としては、例えば、ヌクレオチド（例、プリン誘導体、ピリミジン誘導体）、アルカロイドが挙げられる。遊離アミノ酸およびペプチドはまた、水和物または溶媒和物であっても、なくてもよい。
また、遊離アルギニンまたはペプチドは、塩であってもなくてもよい。遊離アルギニンまたはペプチドの塩としては、例えば、無機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩および有機塩基との塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、ハロゲン化水素酸（例、塩酸）、硫酸、硝酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸等との塩が挙げられる。有機塩基との塩としては、例えば、ヌクレオチド（例、プリン誘導体、ピリミジン誘導体）、アルカロイドが挙げられる。遊離アミノ酸およびペプチドはまた、水和物または溶媒和物であっても、なくてもよい。
【0014】
アルギニンの含有量は、剤の全量を基準にして、遊離体換算量で２５．０質量％以上であることが好ましい。アルギニンの含有量が２５．０質量％以上であることで本発明の効果を得るために必要な量を供給できる。より好ましくは３０．０質量％以上であり、さらに好ましくは３５質量％以上である。
アルギニンの含有量は、剤の全量を基準にして、遊離体換算量で５５．０質量％以下であることが好ましい。アルギニンの含有量が５５．０質量％以下であることで、過剰添加による悪影響を防ぐことが可能となる。より好ましくは５０．０質量％以下であり、さらに好ましくは４５．０質量％以下である。
また、アルギニンの含有量は、剤の全量を基準にして、遊離体換算量で２５．０～５５．０質量％であることが好ましく、３０．０～５０．０質量％であることがより好ましく、３５．０～４５．０質量％であることがさらに好ましい。
アルギニンの含有量は、剤の全量を基準にして、遊離体換算量で５５．０質量％以下であることが好ましい。アルギニンの含有量が５５．０質量％以下であることで、過剰添加による悪影響を防ぐことが可能となる。より好ましくは５０．０質量％以下であり、さらに好ましくは４５．０質量％以下である。
また、アルギニンの含有量は、剤の全量を基準にして、遊離体換算量で２５．０～５５．０質量％であることが好ましく、３０．０～５０．０質量％であることがより好ましく、３５．０～４５．０質量％であることがさらに好ましい。
【0015】
また、本実施形態の改善剤は、アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．３０ｇ以上であり、さらに好ましくは０．３５ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で１．１ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で１．１ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰添加による悪影響を防ぐことが可能であるためである。より好ましくは１．０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．９ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５～１．１ｇ含まれるように飼料原料に添加される用途で用いられることが好ましく、０．３０～１．０ｇ含まれることがより好ましく、０．３５～０．９ｇ含まれることがさらに好ましい。
本実施形態の改善剤は、アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で１．１ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で１．１ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰添加による悪影響を防ぐことが可能であるためである。より好ましくは１．０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．９ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、アルギニンが、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．２５～１．１ｇ含まれるように飼料原料に添加される用途で用いられることが好ましく、０．３０～１．０ｇ含まれることがより好ましく、０．３５～０．９ｇ含まれることがさらに好ましい。
【0016】
ここで、飼料原料とは、本発明の一実施形態における改善剤を添加する前の飼料を意味し、すなわち改善剤が添加される対象の飼料を意味する。
また、家畜飼料とは、本発明の一実施形態における改善剤を添加した後の飼料を意味し、すなわち飼料原料と改善剤とを合わせた飼料全体を意味する。
また、改善剤におけるアルギニンの含有量（遊離体換算）は、例えばアミノ酸分析計（日立ハイテクサイエンス社製、高速アミノ酸分析計、ＬＡ８０８０ Ａｍｉｎｏ ＳＡＡＹＡや島津製作所社製、ＬＣ／ＭＳ高速アミノ酸分析システムＵＦ－Ａｍｉｎｏ ｓｔａｔｉｏｎ）によって測定することができる。
また、家畜飼料とは、本発明の一実施形態における改善剤を添加した後の飼料を意味し、すなわち飼料原料と改善剤とを合わせた飼料全体を意味する。
また、改善剤におけるアルギニンの含有量（遊離体換算）は、例えばアミノ酸分析計（日立ハイテクサイエンス社製、高速アミノ酸分析計、ＬＡ８０８０ Ａｍｉｎｏ ＳＡＡＹＡや島津製作所社製、ＬＣ／ＭＳ高速アミノ酸分析システムＵＦ－Ａｍｉｎｏ ｓｔａｔｉｏｎ）によって測定することができる。
【0017】
本実施形態の改善剤が含有するタンニンとは、植物の幹、皮、葉、実等から抽出される天然物であり、ポリフェノール化合物の総称である。タンニンにはピロガロール系の加水分解型タンニンとカテコール系の縮合型タンニンがある。タンニンの由来植物としては、ブドウ、茶、柿、カカオ、ゆず、イモ、リンゴ、ブルーベリー、バナナ、栗皮、タマリンド、ミモザ、五倍子等が挙げられる、特に限定されるものではない。本実施形態においては、タンニンを含有する植物からの抽出物を使用することができる。
なかでも好ましくはブドウまたは茶の抽出物由来のタンニンであり、より好ましくはブドウの抽出物由来のタンニンである。
なかでも好ましくはブドウまたは茶の抽出物由来のタンニンであり、より好ましくはブドウの抽出物由来のタンニンである。
【0018】
本実施形態の改善剤において、タンニンは、原料から抽出後、乾燥して粉末として用いられてもよく、粉末のタンニンを水に溶解したものをタンニン水溶液として用いてもよく、あるいは原料からの抽出液をそのままタンニン水溶液として用いてもよい。
【0019】
タンニンの原材料（例えば、ブドウ、茶や熱水抽出物）には、タンニン以外に各種の糖、有機酸、アミノ酸等が含まれているため、必要に応じて精製して、これらの不純物を除去したものを用いることが好ましい。
【0020】
タンニンの含有量は、剤の全量を基準にして、１．０質量％以上であることが好ましい。タンニンの含有量が１．０質量％以上であることで本発明の効果を得るために必要な量を供給できる。より好ましくは１．２質量％以上であり、さらに好ましくは１．３質量％以上である。
タンニンの含有量は、剤の全量を基準にして、１０．０質量％以下であることが好ましい。タンニンの含有量が１０．０質量％以下であることで過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは５．０質量％以下であり、さらに好ましくは３．５質量％以下である。
また、タンニンの含有量は、剤の全量を基準にして、１．０～１０．０質量％であることが好ましく、１．２～５．０質量％であることがより好ましく、１．３～３．５質量％であることがさらに好ましい。
タンニンの含有量は、剤の全量を基準にして、１０．０質量％以下であることが好ましい。タンニンの含有量が１０．０質量％以下であることで過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは５．０質量％以下であり、さらに好ましくは３．５質量％以下である。
また、タンニンの含有量は、剤の全量を基準にして、１．０～１０．０質量％であることが好ましく、１．２～５．０質量％であることがより好ましく、１．３～３．５質量％であることがさらに好ましい。
【0021】
また、本実施形態の改善剤は、タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０１ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０１ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．０１２ｇ以上であり、さらに好ましくは０．０１４ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．２ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．２ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．１０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．０７ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０１ｇ～０．２ｇ含まれるように飼料原料に添加されることが好ましく、０．０１２～０．１０ｇ含まれることがより好ましく、０．０１４～０．０７ｇ含まれることがさらに好ましい。
本実施形態の改善剤は、タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．２ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．２ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．１０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．０７ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、タンニンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０１ｇ～０．２ｇ含まれるように飼料原料に添加されることが好ましく、０．０１２～０．１０ｇ含まれることがより好ましく、０．０１４～０．０７ｇ含まれることがさらに好ましい。
【0022】
本実施形態の改善剤におけるタンニンの含有量は、例えばフォーリン・デニス法（Ｆｏｌｉｎ Ｄｅｎｉｓ）よって測定することができる。フォーリン・デニス法はフォーリン試薬（フェノール試薬）を用いる吸光光度法で、ワインや蒸留酒のタンニン分析法としてＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの公定法（ＡＯＡＣ Ｍｅｔｈｏｄ ９５２．０３，９５５．２５）に採用されている（栗林剛、工業技術総合センター 食品技術部門加工食品部，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｉｔｃ．ｐｒｅｆ．ｎａｇａｎｏ．ｌｇ．ｊｐ／ｐｄｆ／ｇｉｊｕｔｕｊｏｈｏ２７５．ｐｄｆ）。
【0023】
本実施形態の改善剤は、アルギニン（遊離体換算量）とタンニンの含有比率が、質量基準で２．５：１～５５．０：１であることが好ましい。アルギニンとタンニンの含有比率が、質量基準で「２．５：１」以上であることによりアルギニンの不足を防ぐことができ、「５５．０：１」以下であることによりアルギニンの過剰を防ぐためである。より好ましくは３：１～３０：１であり、さらに好ましくは４：１～２５：１である。
【0024】
本実施形態の改善剤は、アルギニンの他にも、さらにバリン、ロイシン、イソロイシン、シスチン、グルタミン、及びスレオニンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含むことが好ましい。これらのアミノ酸を含有することにより、更なる効果を期待できる。
本実施形態の改善剤は、バリン、ロイシン、イソロイシン、及びシスチンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含むことがより好ましい。
本実施形態の改善剤は、バリン、ロイシン、イソロイシン、及びシスチンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含むことがより好ましい。
【0025】
上記アミノ酸も、アルギニンと同様に、遊離アミノ酸またはペプチドを形成する非遊離アミノ酸のいずれの形態として含まれていてよい。また、遊離アミノ酸またはペプチドは、塩であってもなくてもよい。また、水和物または溶媒和物であってもなくてもよい。
【0026】
本実施形態の改善剤は、バリン、ロイシン、イソロイシン、シスチン、グルタミン、及びスレオニンからなる群より選ばれる少なくとも一種のアミノ酸を含む場合、かかるアミノ酸は家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．７ｇ以上であり、さらに好ましくは１ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で３ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で２．５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止するためである。より好ましくは２ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．５～３ｇ含まれるように飼料原料に添加されることが好ましく、０．７～２．５ｇ含まれることがより好ましく、１～２ｇ含まれることがさらに好ましい。
本実施形態の改善剤は、当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で３ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で２．５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止するためである。より好ましくは２ｇ以下である。
また、本実施形態の改善剤は、当該アミノ酸が、家畜飼料１ｋｇあたり遊離体換算量で０．５～３ｇ含まれるように飼料原料に添加されることが好ましく、０．７～２．５ｇ含まれることがより好ましく、１～２ｇ含まれることがさらに好ましい。
【0027】
また、本実施形態の改善剤は、バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０３８ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０３８ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．０５６ｇ以上であり、さらに好ましくは０．０７５ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．３８ｇ以下であり、さらに好ましくは０．３ｇ以下である。
本実施形態の改善剤は、バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。バリンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．３８ｇ以下であり、さらに好ましくは０．３ｇ以下である。
【0028】
また、本実施形態の改善剤は、ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０７５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０７５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．１１ｇ以上であり、さらに好ましくは０．１５ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．９０ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．９０ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．７５ｇ以下であり、さらに好ましくは０．６ｇ以下である。
本実施形態の改善剤は、ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．９０ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。ロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．９０ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．７５ｇ以下であり、さらに好ましくは０．６ｇ以下である。
【0029】
また、本実施形態の改善剤は、イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０３８ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０３８ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．０５６ｇ以上であり、さらに好ましくは０．０７５ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．３８ｇ以下であり、さらに好ましくは０．３ｇ以下である。
本実施形態の改善剤は、イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。イソロイシンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．４５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．３８ｇ以下であり、さらに好ましくは０．３ｇ以下である。
【0030】
また、本実施形態の改善剤は、シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．０５ｇ以上含まれるように飼料原料に添加されることで、本発明の効果を得るために必要な量を供給できるためである。より好ましくは０．０７５ｇ以上であり、さらに好ましくは０．１ｇ以上である。
本実施形態の改善剤は、シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．７５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．７５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．６３ｇ以下であり、さらに好ましくは０．５ｇ以下である。
本実施形態の改善剤は、シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．７５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。シスチンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．７５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．６３ｇ以下であり、さらに好ましくは０．５ｇ以下である。
【0031】
本実施形態の改善剤は、グルタミンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．１５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることが好ましい。グルタミンが、家畜飼料１ｋｇあたり０．１５ｇ以下含まれるように飼料原料に添加されることで、過剰による嗜好性低下を防止する。より好ましくは０．１３ｇ以下であり、さらに好ましくは０．１ｇ以下である。
【0032】
本実施形態の改善剤は、１５日間以上継続して給与することが好ましく、２１日間以上継続して給与することがより好ましく、３５日間以上継続して給与することがさらに好ましい。また、上限は特に制限されないが、例えば、６０日間以下継続して給与する。また、離乳後０～２１日の期間で投与されることが好ましく、０～３５日の期間で投与されることがより好ましい。
【0033】
本実施形態の改善剤は、本発明の効果を損なわない範囲であれば、賦形剤、増量剤、栄養補強剤、その他の任意の成分を配合することもできる。賦形剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロース等のセルロース誘導体が挙げられ、増量剤としては、例えば、デキストリンやデンプン等が挙げられ、栄養補強剤としては、例えば、ビタミン類やミネラル類が挙げられ、その他の任意の成分としては、例えば、酵素剤等が挙げられる。
【0034】
本実施形態の改善剤を適用できる家畜としては、特に制限されないが、反芻動物の第１胃での分解の可能性を避けるため単胃の家畜であることが好ましい。単胃の家畜としては、例えば、豚、家禽、ウマ等が挙げられる。より好ましくは、豚、家禽である。
また、哺乳動物にあっては、離乳期に適用することが好ましい。ここで離乳期とは家畜の発育状態によるが、家畜の消化生理が成熟した状態になった時期のことを示し、豚においては、２１～２８日齢を経過したもののことをいう。
また、家禽にあっては、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、及びガチョウ等が挙げられ、ニワトリであることがより好ましい。
また、哺乳動物にあっては、離乳期に適用することが好ましい。ここで離乳期とは家畜の発育状態によるが、家畜の消化生理が成熟した状態になった時期のことを示し、豚においては、２１～２８日齢を経過したもののことをいう。
また、家禽にあっては、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、及びガチョウ等が挙げられ、ニワトリであることがより好ましい。
【0035】
本実施形態の改善剤を家畜に給与することにより、家畜腸内細菌叢を改善することができる。また、家畜腸内の乳酸菌を増殖させることができる。そして、家畜腸内細菌叢が改善することにより、腸の消化・栄養吸収機能を最適化することができ、その結果、家畜の健康を増進することができる。
【0036】
本実施形態の改善剤は、後述するように飼料原料に添加して、家畜飼料組成物を得てから家畜に給与してもよいし、当該改善剤を直接家畜に給与してもよい。
【0037】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を飼料原料に添加し調製された家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物（以下、単に飼料組成物ともいう）を提供する。
飼料原料としては、特に制限されないが、例えば、とうもろこし、大麦、小麦、ライ麦、ソルガム、大豆、黄粉などの穀類、大豆油かす、大豆蛋白、油脂、スキムミルク、魚粉、肉骨粉、血粉、血漿蛋白、ホエー、米ぬか、ふすま、砂糖などの糖類やその他の甘味料、ミネラル、ビタミン、食塩などの原料を単独あるいは組み合わせたものを用いることができる。
飼料原料としては、特に制限されないが、例えば、とうもろこし、大麦、小麦、ライ麦、ソルガム、大豆、黄粉などの穀類、大豆油かす、大豆蛋白、油脂、スキムミルク、魚粉、肉骨粉、血粉、血漿蛋白、ホエー、米ぬか、ふすま、砂糖などの糖類やその他の甘味料、ミネラル、ビタミン、食塩などの原料を単独あるいは組み合わせたものを用いることができる。
【0038】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を飼料原料に添加する工程を含む、家畜腸内細菌叢改善用飼料組成物の調製方法を提供する。上記改善剤を飼料原料に添加する方法は特に制限されず、従来公知の方法を使用できる。例えば、マッシュへの添加、ペレット化が挙げられる。また、飼料原料は上述したものを用いることができる。
【0039】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法を提供する。かかる方法においては、飼料原料に改善剤を添加することなく、剤自体を直接家畜に給与してよい。家畜に給与する改善剤の量や、給与する日数等は、上述したとおりである。上記改善剤を家畜に給与することにより、家畜腸内細菌叢を改善することができる。
【0040】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を家畜に給与する、家畜腸内の乳酸菌を増殖させる方法を提供する。かかる方法においては、飼料原料に改善剤を添加することなく、剤自体を直接家畜に給与してよい。家畜に給与する改善剤の量や、給与する日数等は、上述したとおりである。上記改善剤を家畜に給与することにより、家畜腸内の乳酸菌を増殖させることができる。
【0041】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を飼料原料に添加し、得られる家畜飼料組成物を家畜に給与する、家畜腸内細菌叢を改善する方法を提供する。飼料原料は上述したものを用いることができる。また、家畜に給与する飼料組成物の量や、給与する日数等も、上述したとおりである。上記家畜飼料組成物を家畜に給与することにより、家畜腸内細菌叢を改善することができる。
【0042】
本発明の別の実施形態として、上記改善剤を家畜に給与する、家畜の健康増進方法を提供する。家畜に給与する改善剤の量や、給与する日数等は、上述したとおりである。上記改善剤を家畜に給与することにより、家畜腸内細菌叢が改善し、さらに腸の消化・栄養吸収機能を最適化することができ、その結果、家畜の健康を増進することができる。
【0043】
本発明における腸内細菌叢としては、例えば乳酸菌、ビフィズス菌が挙げられる。乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレストコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ルコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、および、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属のいずれかに分類される細菌が挙げられる。
【実施例】
【0044】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明は下記例に制限されるものではない。実施例における各項目の計測は下記の方法で実施した。
【0045】
［初期体重、最終体重、増体重量］
各個体の体重は、試験開始時と終了時に畜産用はかりを用いて測定し、各群で相加平均を算出した。
各個体の体重は、試験開始時と終了時に畜産用はかりを用いて測定し、各群で相加平均を算出した。
【0046】
［１日あたりの飼料摂取量（ＤＦＩ）］
一定日数の給餌量と残餌量の差から摂取量を計測した。日数および豚数で割り、群ごとに１日あたりの平均飼料摂取量を算出した。
一定日数の給餌量と残餌量の差から摂取量を計測した。日数および豚数で割り、群ごとに１日あたりの平均飼料摂取量を算出した。
【0047】
［１日あたりの増体重量（ＡＤＧ）］
一定日数における体重増加を日数で割り、１日あたりの増体重量を算出した。
一定日数における体重増加を日数で割り、１日あたりの増体重量を算出した。
【0048】
［飼料効率（ＦＣＲ）］
１日あたりの飼料摂取量を１日あたりの増体重量で割り、飼料効率を算出した。
１日あたりの飼料摂取量を１日あたりの増体重量で割り、飼料効率を算出した。
【0049】
［生存率］
全頭数に対する一定日数経過後の豚の生存数を算出し、生存率とした。
全頭数に対する一定日数経過後の豚の生存数を算出し、生存率とした。
【0050】
［乳酸菌数］
一定日数経過後の各ペンから豚の糞便を収集し、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の菌数をカウントした。
一定日数経過後の各ペンから豚の糞便を収集し、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の菌数をカウントした。
【0051】
試験例１：アルギニンとタンニンの結合試験
（試験例１－１）
本試験例では、以下の手順でアルギニンとタンニンの結合性を確認した。
１． １ｍｇ／ｍＬのブドウ抽出物（タンニン含量６８．５％）と１００ｍＭのＡＡ（Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＢＣＡＡ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎのいずれか一種）を混合し、以下の１）～３）の条件でそれぞれ反応させた。
１）ｐＨ５で２時間反応
２）ｐＨ６で２時間反応
３）ｐＨ７で２時間反応
２． 上記１）～３）の条件で反応させた各溶液２００μｌを９６ウェルプレート（ＵＶ－ＳＴＡＲプレート、Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ社製）に３回に分けて分注した。
３． ２８０ｎｍにおける吸光度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓｓ社製））を用いて測定した。各溶液（ＡＡ＋ブドウ抽出物）の吸光度を、ブドウ抽出物のみを含む溶液（コントロール）の吸光度に対する相対値で表した。結果を図１に示す。
図１の結果からも分かるとおり、アミノ酸の中でも、特にアルギニンをブドウ抽出物と混合させた場合に、最も吸光度が高くなっており、これはアルギニンとブドウ抽出物（タンニン）との結合性が高いことを示している。
（試験例１－１）
本試験例では、以下の手順でアルギニンとタンニンの結合性を確認した。
１． １ｍｇ／ｍＬのブドウ抽出物（タンニン含量６８．５％）と１００ｍＭのＡＡ（Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＢＣＡＡ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎのいずれか一種）を混合し、以下の１）～３）の条件でそれぞれ反応させた。
１）ｐＨ５で２時間反応
２）ｐＨ６で２時間反応
３）ｐＨ７で２時間反応
２． 上記１）～３）の条件で反応させた各溶液２００μｌを９６ウェルプレート（ＵＶ－ＳＴＡＲプレート、Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ社製）に３回に分けて分注した。
３． ２８０ｎｍにおける吸光度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓｓ社製））を用いて測定した。各溶液（ＡＡ＋ブドウ抽出物）の吸光度を、ブドウ抽出物のみを含む溶液（コントロール）の吸光度に対する相対値で表した。結果を図１に示す。
図１の結果からも分かるとおり、アミノ酸の中でも、特にアルギニンをブドウ抽出物と混合させた場合に、最も吸光度が高くなっており、これはアルギニンとブドウ抽出物（タンニン）との結合性が高いことを示している。
【0052】
（試験例１－２）
本試験例では、以下の手順でアルギニンとタンニン（ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１、ＫｉｎｇＢｒｏｗｎ（登録商標））の結合性を確認した。
１． １ｍｇ／ｍＬのタンニン（ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ ＮａｔｕｒａｌＳｐｅｃｉａｌｉｔｉｅｓ社製）、ＫｉｎｇＢｒｏｗｎ（Ｋｉｎｇｔｒｅｅ社製）のいずれか一種）と１００ｍＭのＡＡ（Ａｒｇ）を混合し、以下の１）～３）の条件でそれぞれ反応させた。
１）ｐＨ５で２時間反応
２）ｐＨ６で２時間反応
３）ｐＨ７で２時間反応
２．上記１）～３）の条件で反応させた各溶液の上清１ｍｌに、それぞれ０．７５ｍｌの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．６）と、０．４ｍｌのニヒドリン（３．５ｍｇ／ｌ）とを混合し、３７℃で２５分間インキュベートした。
３．５７０ｎｍにおける吸光度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓｓ社製）を用いて測定した。各溶液（Ａｒｇ＋タンニン）の吸光度を、タンニンのみを含む溶液（コントロール）の吸光度に対する相対値で表した。結果を図２に示す。
図２の結果からも分かるとおり、アルギニンは、ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１、及びＫｉｎｇＢｒｏｗｎのいずれと混合した場合でも吸光度が高く、これはアルギニンとタンニンとの結合性が高いことを示している。
本試験例では、以下の手順でアルギニンとタンニン（ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１、ＫｉｎｇＢｒｏｗｎ（登録商標））の結合性を確認した。
１． １ｍｇ／ｍＬのタンニン（ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ ＮａｔｕｒａｌＳｐｅｃｉａｌｉｔｉｅｓ社製）、ＫｉｎｇＢｒｏｗｎ（Ｋｉｎｇｔｒｅｅ社製）のいずれか一種）と１００ｍＭのＡＡ（Ａｒｇ）を混合し、以下の１）～３）の条件でそれぞれ反応させた。
１）ｐＨ５で２時間反応
２）ｐＨ６で２時間反応
３）ｐＨ７で２時間反応
２．上記１）～３）の条件で反応させた各溶液の上清１ｍｌに、それぞれ０．７５ｍｌの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．６）と、０．４ｍｌのニヒドリン（３．５ｍｇ／ｌ）とを混合し、３７℃で２５分間インキュベートした。
３．５７０ｎｍにおける吸光度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓｓ社製）を用いて測定した。各溶液（Ａｒｇ＋タンニン）の吸光度を、タンニンのみを含む溶液（コントロール）の吸光度に対する相対値で表した。結果を図２に示す。
図２の結果からも分かるとおり、アルギニンは、ブドウ抽出物、ＴＡＮＡＬ０１、及びＫｉｎｇＢｒｏｗｎのいずれと混合した場合でも吸光度が高く、これはアルギニンとタンニンとの結合性が高いことを示している。
【0053】
試験例２：離乳期の豚に対する給与試験
試験動物として、平均日齢が２５日、平均体重が６．９２ｋｇである、計２４０頭の交雑種（Ｌａｎｄｒａｃｅ ｘ Ｌａｒｇｅ Ｗｈｉｔｅ ｘ Ｄｕｒｏｃ）の離乳子豚を用いた。これらの離乳子豚をＴ１～Ｔ４の４つの飼料給与態様に分類した。各試験区は１０ペンで構成され、１ペンあたり６頭（３頭の雄＋３頭の雌）／ペン）とし、ランダムに割り当てた。各ペンのサイズは１．５ｍ×２．０ｍとした。
Ｔ１～Ｔ４の試験区の飼料給与態様について、表１に示す。
試験動物として、平均日齢が２５日、平均体重が６．９２ｋｇである、計２４０頭の交雑種（Ｌａｎｄｒａｃｅ ｘ Ｌａｒｇｅ Ｗｈｉｔｅ ｘ Ｄｕｒｏｃ）の離乳子豚を用いた。これらの離乳子豚をＴ１～Ｔ４の４つの飼料給与態様に分類した。各試験区は１０ペンで構成され、１ペンあたり６頭（３頭の雄＋３頭の雌）／ペン）とし、ランダムに割り当てた。各ペンのサイズは１．５ｍ×２．０ｍとした。
Ｔ１～Ｔ４の試験区の飼料給与態様について、表１に示す。
【0054】
【表1】
【0055】
・Ｔ１試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ；表３に組成を示す）を豚に給与し、後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ（表３に組成を示す）を豚に給与した。
・Ｔ２試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に０．１重量％のＡＡミックス（表２に組成を示す）を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓを豚に給与した。
・Ｔ３試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に、８５重量ｐｐｍのブドウ種子抽出物、及び１５重量ｐｐｍのブドウ皮抽出物を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓを豚に給与した。
・Ｔ４試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に、０．１重量％のＡＡミックス、８５重量ｐｐｍのブドウ種子抽出物、及び１５重量ｐｐｍのブドウ皮抽出物を含有する剤を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ豚に給与した。
なお、上記剤中にアルギニンは遊離体換算量で３７．９重量％、タンニンは９．１重量％含まれていた。また、家畜飼料１ｋｇ中には、アルギニンが遊離体換算量で０．４２ｇ、タンニンが遊離体換算量で０．１ｇ含まれていた。また、家畜飼料の給与は、自由給餌とした。
・Ｔ２試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に０．１重量％のＡＡミックス（表２に組成を示す）を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓを豚に給与した。
・Ｔ３試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に、８５重量ｐｐｍのブドウ種子抽出物、及び１５重量ｐｐｍのブドウ皮抽出物を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓを豚に給与した。
・Ｔ４試験区：最初の２週間（ｄ０～ｄ１４）は基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）に、０．１重量％のＡＡミックス、８５重量ｐｐｍのブドウ種子抽出物、及び１５重量ｐｐｍのブドウ皮抽出物を含有する剤を添加した家畜飼料を調製し、豚に給与した。後半の３週間（ｄ１４～ｄ３５）はＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ豚に給与した。
なお、上記剤中にアルギニンは遊離体換算量で３７．９重量％、タンニンは９．１重量％含まれていた。また、家畜飼料１ｋｇ中には、アルギニンが遊離体換算量で０．４２ｇ、タンニンが遊離体換算量で０．１ｇ含まれていた。また、家畜飼料の給与は、自由給餌とした。
【0056】
ＡＡミックスの組成は表２に示す。
基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）およびＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓの組成は表３に示す。なお、表３中の「－」は原料を含有しないことを示す。
基礎食（Ｐｒｅ－ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓ）およびＣｏｍｍｏｎ ｓｔａｒｔｅｒ ｆｅｅｄｓの組成は表３に示す。なお、表３中の「－」は原料を含有しないことを示す。
【0057】
【表2】
【0058】
【表3】
【0059】
初期体重、最終体重、増体重量、１日あたりの飼料摂取量、１日あたりの増体重量、飼料効率、及び生存率について、０～１４日目（ｄ０～ｄ１４）までの結果を表４及び図３、１４～３５日目（ｄ１４～ｄ３５）までの結果を表５、０～３５日目（ｄ０～ｄ３５）までの結果を表６及び図４に示す。
【0060】
【表4】
【0061】
【表5】
【0062】
【表6】
【0063】
また、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）及びビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）数について、１４日目（ｄ１４）および３５日目（ｄ３５）の結果を表７及び図５に示す。
【0064】
【表7】
【0065】
本発明のアルギニン及びタンニンの両方を含有する剤を添加したＴ４試験区では、アルギニン及びタンニンのいずれも含まない飼料を給与したＴ１試験区、アルギニンまたはタンニンを単独で含有する剤を添加した飼料を給与したＴ２およびＴ３試験区と比較して、増体重量が高くなり、また腸内の乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の菌数が増大することがわかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】