特許 7476115 新規の塩および結晶

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-04-19

(45)【発行日】2024-04-30

(54)【発明の名称】新規の塩および結晶

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/16 20060101AFI20240422BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20240422BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240422BHJP

   A61P 25/18 20060101ALI20240422BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20240422BHJP

【ＦＩ】

C07D471/16

A61K31/4985

A61P43/00 114

A61P25/18

A61P25/24

【請求項の数】 6

(21)【出願番号】P 2020567784

(86)(22)【出願日】2019-06-06

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-10-11

(86)【国際出願番号】 US2019035845

(87)【国際公開番号】W WO2019236889

(87)【国際公開日】2019-12-12

【審査請求日】2022-05-30

(31)【優先権主張番号】62/681,534

(32)【優先日】2018-06-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】507401225

【氏名又は名称】イントラ－セルラー・セラピーズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＴＲＡ－ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＩＥＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ポン・リ

【審査官】三須 大樹

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１１－５１３４８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１１／０１１２１０５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／０３１５３５（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オンの二トシル酸塩の製造方法であって、
（ａ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基とトルエンスルホン酸とを２－ブタノンからなる有機溶媒中にて反応させること（ここで、該ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸は１：１のモル比で合わせられる）；および
（ｂ）このようにして形成された塩を回収すること
を含む、方法。

【請求項2】

反応がＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸の２－ブタノン溶媒中スラリーを使用して行われる、請求項１記載の方法。

【請求項3】

ＩＴＩ－００７遊離塩基の濃度が２－ブタノン溶媒２０ｍＬあたり１ｇである、請求項２記載の方法。

【請求項4】

反応が室温で行われる、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

回収された塩に含まれる他のＩＴＩ－００７トシル酸塩形態（一トシル酸塩または三トシル酸塩を含む）が該塩の３重量％未満または２重量％未満または１重量％未満または０.５重量％未満である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

回収された塩に含まれるＩＴＩ－００７の非晶質形態が１０重量％未満である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１８年６月６日に出願された米国仮出願第６２／６８１,５３４号（その内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部とする）の利益及び優先権を主張する国際出願である。

【0002】

分野
本開示は、置換複素環縮合γカルボリンの塩および結晶形態、その製造、その医薬組成物、ならびに、例えば５－ＨＴ_2A受容体、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）、および／またはドパミンＤ₁／Ｄ₂受容体シグナル伝達経路が関与しているかまたはそれにより媒介されている疾患または異常状態の治療における、その使用に関する。

【背景技術】

【0003】

１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４':４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（しばしば、４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピリド[３',４':４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８(７Ｈ)－イル)－１－(４－フルオロフェニル)－１－ブタノンと称され、ルマテペロンまたはＩＴＩ－００７としても知られている）は、以下の構造：

【化1】

を有する。

【0004】

ＩＴＩ－００７は、ドパミン（ＤＡ）Ｄ２受容体（Ｋ_i＝３２ｎＭ）およびセロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）（Ｋ_i＝６２ｎＭ）に対して強い親和性を有する強力な５－ＨＴ_2A受容体リガンド（Ｋ_i＝０.５ｎＭ）であるが、抗精神病薬（例えば、Ｈ１ヒスタミン作動薬、５－ＨＴ_2C、およびムスカリン作用薬）の認知的および代謝的副作用に関連する受容体への結合はごくわずかである。ＩＴＩ－００７は、ドパミンＤ１受容体（Ｋ_i＝５２ｎＭ）でも活性であり、この相互作用を介して間接的に、ＩＴＩ－００７は、脳において、特に内側前頭前皮質（ｍＰＦＣ）において、ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡシグナル伝達を増強させることが判明している。ＩＴＩ－００７は、現在、例えば統合失調症、うつ、および他の精神的障害の治療のための、臨床試験中である。ＩＴＩ－００７は有望な薬物であるが、その製造および製剤化には課題がある。ＩＴＩ－００７は、遊離塩基形態では、水溶性に乏しい、油性で粘着性のある固体である。該化合物の塩を作ることは非常に難しいことが証明されている。ＩＴＩ－００７の塩酸塩形態は特許文献１に開示されているが、この特定の塩形態は吸湿性であり、安定性が低いことが示されている。それはジエチルエーテルからの沈殿により得られた。最終的にはＩＴＩ－００７のトルエンスルホン酸付加塩（トシル酸塩）が同定され、特許文献２および特許文献３（特許文献４）に記載されている。

【0005】

ＩＴＩ－００７の代替の安定で薬学的に許容される塩および多形体が必要とされている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】米国特許第７,１８３,２８２号

【文献】国際公開第２００９／１１４１８１号

【文献】米国特許出願公開第２０１１／０１１２１０５号

【文献】米国特許第８,６４８,０７７号

【発明の概要】

【0007】

ＩＴＩ－００７の新しい塩および多形体を見つけるための努力において、広範な塩スクリーニングを行った。ＩＴＩ－００７は、遊離塩基のさまざまな有機溶媒への良好な溶解性にもかかわらず、他の一般的な薬学的に許容される酸とは容易には塩を形成しない。最初に、国際公開第２００９／１１４１８１号および米国特許出願公開第２０１１／０１１２１０５号に記載しているように、トルエンスルホン酸付加塩（トシル酸塩）を調製したが、他の安定な塩は見出せなかった。最終的に、大規模な塩スクリーニングを行い、そこでは、遊離塩基化合物をさまざまな溶媒系でさまざまな条件下で研究し、次いで、さまざまな条件下でさまざまな溶媒、共溶媒および抗溶媒系で１００種類を超える酸の選択を使用して体系的にスクリーニングして、新しい可能性のある塩の形態を特定した。広範なスクリーニングおよび実験の後、新しい二トシル酸塩多形体を発見した。この新しい二トシル酸塩形態は、結晶性であり、安定している。

【0008】

したがって、本開示は、ガレヌス製剤（galenic formulations）の調製における使用に特に有利なＩＴＩ－００７の新規の二トシル酸塩形態、ならびにその製造方法および使用方法を提供する。本開示は、ＩＴＩ－００７のこの新規な二トシル酸塩形態が、ＩＴＩ－００７の遊離塩基形態から、およびＩＴＩ－００７の一トシル酸塩形態からを含む様々な条件下で調製され得ることを示す。

【0009】

本発明のさらなる適用領域は、以下に提供される詳細な説明から明らかになる。詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施態様を示す一方で、例示のみを目的とすることを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図するものではないと解されるべきである。

【0010】

本発明は、詳細な説明および添付の図面からより完全に理解できるようになる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、実施例１から（ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸の１：１モル混合物から）得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン（上方の曲線）を、ＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶の既知のＸＲＰＤパターン（下方の曲線）を参照として重ね合わせて示す。

【図2】図２は、実施例１から得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶のＴＧＡ－ＤＳＣサーモグラムを示す。

【図3】図３は、実施例１から得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す。

【図4】図４は、実施例１から得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶のＦＴＩＲスペクトルを示す。

【図5】図５は、実施例２から（ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸の２：１モル混合物から）得られたＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン（上方の曲線）を、ＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶の既知のＸＲＰＤパターン（下方の曲線）を参照として重ね合わせて示す。

【図6】図６は、実施例２から得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶のＴＧＡ－ＤＳＣサーモグラムを示す。

【図7】図７は、実施例２から得られたＩＴＩ－００７二トシル酸塩結晶の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

詳細な説明

【0013】

以下の好ましい実施態様の記載は、本質的に単なる例示であり、如何なる場合も、本発明、その用途、または使用を制限することを意図するものではない。

【0014】

全体を通して使用されるように、範囲は、範囲内にあるすべての値を記載するための省略形として使用される。範囲内のいずれの値も、範囲の末端として選択することができる。さらに、本明細書で引用されるすべての参考文献は、出典明示によりその全体として本明細書の一部とする。本開示における定義と引用された参考文献の定義とが矛盾する場合、本開示が支配する。

【0015】

特記しない限り、本明細書および本明細書の他の場所で表現されるすべての百分率および量は、重量百分率を指すものと解されるべきである。記載された量は、物質の活性重量に基づいている。

【0016】

第１の実施態様では、本発明は、安定な二トシル酸塩形態の１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４':４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）（塩１）を提供する。さらなる実施態様では、本発明は、また、以下のものを提供する：

【0017】

１.１．固体形態である、塩１。

【0018】

１.２．結晶形態、例えば乾燥結晶形態である、塩１または１.１。

【0019】

１.３．例えばＩＴＩ－００７の他の形態を含まないかまたは実質的に含まない、例えば非晶質形態を含まないかまたは実質的に含まない、例えば含まれる非晶質形態が１０重量％未満、好ましくは約５重量％未満、より好ましくは約２重量％未満、さらに好ましくは約１重量％未満、さらに好ましくは約０.１％未満、最も好ましくは約０.０１重量％未満である、均質な結晶形態である、塩１.２。

【0020】

１.４．２－ブタノン溶媒から結晶化された結晶形態である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0021】

１.５．溶媒和物、例えば２－ブタノン溶媒和物である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0022】

１.６．溶媒和物ではない、上記のいずれかの形態の塩１。

【0023】

１.７．水和物である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0024】

１.８．水和物ではない、上記のいずれかの形態の塩１。

【0025】

１.９．ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸を、１：１～１：３のモル比、例えば１：１～１：２.２、または１：１～１：２、または１：１～１：１.５のモル比、または約１：１、または約１：１.５、または約１：２、または約１：２.２のモル比で、合わせることによって形成される、上記のいずれかの形態の塩１。

【0026】

１.１０．ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸の２－ブタノン溶媒中スラリーから形成される、上記のいずれかの形態の塩１。

【0027】

１.１１．該塩のＤＳＣ／ＴＧＡ分析が、約１８４℃で１つの吸熱事象、および約２５８℃で１つの発熱事象を示し、例えば該ＤＳＣ／ＴＧＡ分析が、およそＴ_開始＝１７８℃、Ｔ_ピーク＝１８４℃およびΔＥ＝－８８Ｊ／ｇで第１の吸熱事象を示し、およそＴ_開始＝２４２℃、Ｔ_ピーク＝２５８℃およびΔＥ＝１２２Ｊ／ｇで第２の発熱事象を示し、例えば該第１の吸熱事象が融解であり、該第２の発熱事象が再結晶である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0028】

１.１２．該塩が、下記の表のｄ間隔および／または角度（２θ）値に対応するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態であり、例えば該パターンが、例えば試料の純度および装置のバリエーションに起因する潜在的なバリエーション、例えばＸ線の波長のバリエーションに起因する２θシフトを考慮して、該値のうち少なくとも５つ、または少なくとも６つ、または少なくとも７つ、または少なくとも８つを含んでおり、例えば該Ｘ線粉末回折パターンが銅アノードおよびニッケルフィルターを有するＸ線回折計を用いて作成されたものであり、例えば少なくとも、少なくとも０.４、少なくとも０.５、または少なくとも０.６の相対強度を有するピークを含むか、またはピーク１、２、６、７、８および９を含んでいる、上記のいずれかの形態の塩１：

【表1】

【0029】

１.１３．例えば試料の純度および装置のバリエーションに起因する潜在的なバリエーション、例えばＸ線の波長のバリエーションに起因する２θシフトを考慮して、図１に対応するＸ線粉末回折パターン（上方の曲線）、例えば銅アノードおよびニッケルフィルターを有するＸ線回折計を使用して作成された図１に対応するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0030】

１.１４．塩が、試料の純度および装置のバリエーションに起因する潜在的なバリエーションを考慮して、約６.３５、８.３９、１０.４５、１３.７９、１４.２６、１４.６６、１４.９２、１５.４０、１５.９３、１６.５１、１７.１１、１７.９０、１８.６５、１９.２０、２０.４９、２０.６７、２０.８６、２２.４７、２２.９０、２３.９７、２５.１１、２５.９２、２７.０３、２７.４２、２８.７４、２９.１４、３０.１３、３１.６５、３３.４３、３５.４１、３６.４８、３９.６７、４２.６２および４３.５６からなる群から選択される角度（２θ）値を有する少なくとも５つ、または少なくとも６つ、または少なくとも７つ、または少なくとも８つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態であり、例えば該Ｘ線粉末回折パターンが銅アノードおよびニッケルフィルターを有するＸ線回折計を使用して作成されたものである、上記のいずれかの形態の塩１。

【0031】

１.１５．塩が、試料の純度および装置のバリエーションに起因する潜在的なバリエーションを考慮して、約１３.９１、１０.５３、８.４６、６.４２、６.２１、６.０４、５.９３、５.７５、５.５６、５.３７、５.１８、４.９５、４.７５、４.６２、４.３３、４.２９、４.２６、３.９５、３.８８、３.７１、３.５４、３.４４、３.３０、３.２５、３.１０、３.０６、２.９６、２.８３、２.６８、２.５３、２.４６、２.２７、２.１２および２.０７からなる群から選択されるｄ間隔値を有する少なくとも５つ、または少なくとも６つ、または少なくとも７つ、または少なくとも８つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態であり、該Ｘ線粉末回折パターンが銅アノードおよびニッケルフィルターを有するＸ線回折計を使用して作成されたものである、上記のいずれかの形態の塩１。

【0032】

１.１６．塩１.１４および／または１.１５において提供された角度（２θ）値および／またはｄ間隔値を有する少なくとも５つ、または少なくとも６つ、または少なくとも７つ、または少なくとも８つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0033】

１.１７．塩が、少なくとも、１０.２～１０.５（例えば、１０.３～１０.５、または約１０.３、または約１０.４または約１０.４５、または約１０.５）の角度（２θ）値で相対強度２５％のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶の形態であり、場合によっては、該ピークが少なくとも３０％または少なくとも４０％または少なくとも５０％、または約２５％または約３０％、または約３５％の相対強度を有する、上記のいずれかの形態の塩。

【0034】

１.１８．塩が、実施態様１.１２の表に示されている相対的な角度（２θ）値を有するＸ線粉末回折粉末（X-ray powder diffraction powder）を有する結晶の形態であり、ここで、該値が最大±０.２°シフトされ、例えば該値が実質的に均一に最大±０.２°シフトされる、上記のいずれかの形態の塩１。

【0035】

１.１９．図１の上方の曲線において示されているかまたは実質的に示されているＸ線回折パターンを有する結晶の形態である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0036】

１.２０．図２に示されているかまたは実質的に示されているＤＳＣ／ＴＧＡサーモグラムを有する結晶の形態である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0037】

１.２１．図３に示されているかまたは実質的に示されているプロトンＮＭＲスペクトルを有する、上記のいずれかの形態の塩１。

【0038】

１.２２．例えば（スペクトルをＤＭＳＯ－ｄ６溶媒中にて４００ＭＨｚで取った場合に）約４：２：４：２の積分比で約７.１１ｐｐｍ、７.３６ｐｐｍ、７.４９ｐｐｍおよび８.０３ｐｐｍでのＮＭＲプロトンピーク（すなわち、これらのｐｐｍに中心がある多重項）によって示されている、ＩＴＩ－００７塩基部分当たり約２つのトルエンスルホン酸分子の存在を示しているプロトンＮＭＲスペクトルを有している、上記のいずれかの形態の塩１。

【0039】

１.２３．図４に示されているかまたは実質的に示されているＦＴＩＲスペクトルを有する、上記のいずれかの形態の塩１。

【0040】

１.２４．含まれる他のＩＴＩ－００７トシル酸塩形態（例えば、一トシル酸塩または三トシル酸塩）が塩１の１０重量％未満、例えば５重量％未満または３重量％未満または２重量％未満または１重量％未満または０.５重量％未満である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0041】

１.２５．含まれるＩＴＩ－００７遊離塩基形態が塩１の１０重量％未満、例えば５重量％未満または３重量％未満または２重量％未満または１重量％未満または０.５重量％未満である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0042】

１.２６．ＩＴＩ－００７が重水素化されており、例えば分子内の１つ以上の特定の位置における重水素：プロチウム比が、天然の同位体比または該分子内の他の位置における同位体比よりも有意に高い、例えば少なくとも２倍、例えば少なくとも１０倍高い、上記のいずれかの形態の塩１；例えば、例えば国際公開第２０１５／１５４０２５号（および米国特許出願公開第２０１７／０１８３３５０号）または国際公開第２０１７／１６５８４３号（米国特許出願第１６／０８８,３９７号と同等）（各記載内容は出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるように、ＩＴＩ－００７のメチル化された窒素部分に隣接するおよび／またはカルボニル部分に隣接する－ＣＨ₂－が重水素化されており、例えば天然の重水素：プロチウム同位体比または該分子内の他の位置における重水素：プロチウム同位体比よりも有意に高いレベルで－ＣＨＤ－または－ＣＤ₂－の形態である、および／または、該メチル基が、例えば天然の重水素：プロチウム同位体比または該分子内の他の位置における重水素：プロチウム同位体比よりも有意に高いレベルで、重水素化されており、例えばＣＤ₃－である、上記のいずれかの形態の塩１。

【0043】

１.２７．１.１～１.２６に記載されている特徴の組合せを示す、上記のいずれかの形態の塩１。

【0044】

別の実施態様では、本発明は、塩１の製造方法であって、
（ａ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基とトルエンスルホン酸とを、例えば有機溶媒（例えば、２－ブタノンを含む）と一緒に、反応させること（例えば、ここで、該ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸はモル比が１：１～１：３、例えば１：１～１：２.２、または１：１～１：２、または１：１～１：１.５、または約１：１、または約１：１.５、または約１：２、または約１：２.２である）；および
（ｂ）このようにして形成された塩を回収すること、例えば塩１または塩１.１～１.２７のいずれかを回収すること
を含む、方法（方法１）を提供する。

【0045】

方法１の別の実施態様では、反応工程（ａ）は、有機溶媒、例えば２－ブタノンにＩＴＩ－００７遊離塩基を溶解または懸濁すること、およびそれにトルエンスルホン酸を添加することを含む。方法１の別の実施態様では、反応工程（ａ）は、ＩＴＩ－００７遊離塩基をトルエンスルホン酸と合わせること、およびそれに有機溶媒、例えば２－ブタノンを添加することを含む。

【0046】

方法１のいくつかの実施態様では、方法工程（ａ）は、バッチ法として行われ、他の実施態様では、方法工程（ａ）は、連続（フロー）法として行われる。

【0047】

別の実施態様では、本発明は、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは併せて活性成分として塩１または塩１.１～１.２７のいずれかを含む医薬組成物を提供する。

【0048】

別の実施態様では、本発明は、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは併せて活性成分として塩１または塩１.１～１.２７のいずれかを含む医薬組成物であって、該塩が、主に、または全体的にもしくは実質的に全体的に、乾燥結晶形態である、医薬組成物を提供する。

【0049】

特定の実施態様では、本発明は、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは併せて活性成分として塩１または塩１.１～１.２７のいずれかを含む医薬組成物であって、例えばＩＴＩ－００７の徐放を提供するための、注射用デポー剤の剤形である、医薬組成物を提供する。

【0050】

別の実施態様では、本発明は、
（１）（ａ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基、または
（ｂ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基の酸付加塩、および
（２）存在する１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）の量に基づいて少なくとも１モル当量のトルエンスルホン酸
を含む、医薬組成物（組成物２）を提供する。

【0051】

場合により、（１）（ｂ）部分におけるＩＴＩ－００７の酸付加塩はＩＴＩ－００７の塩酸塩である。

【0052】

別の実施態様では、本発明は、組成物２の調製方法であって、
（１）（ａ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基、または
（ｂ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基の酸付加塩を
（２）存在する１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）の量に基づいて少なくとも１モル当量のトルエンスルホン酸
と合わせる工程、および
（３）これらの成分と少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤または担体とを混合して組成物を形成する工程
を含む、方法を提供する。

【0053】

別の実施態様では、本発明は、５－ＨＴ_2A受容体、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）、および／またはドパミンＤ₁／Ｄ₂受容体シグナル伝達経路が関与しているかまたはそれにより媒介されている疾患または異常状態、例えば肥満症、食欲不振、過食症、うつ、不安、精神病、統合失調症、片頭痛、強迫性障害、性障害、双極性うつ病、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、睡眠障害、頭部痛関連状態、社会恐怖症および／または認知症から選択される障害の治療において用いるための、塩１もしくは塩１.１～１.２７のいずれか、または塩１もしくは塩１.１～１.２７のいずれかを含む医薬組成物を提供する。

【0054】

別の実施態様では、本発明は、５－ＨＴ_2A受容体、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）、および／またはドパミンＤ₁／Ｄ₂受容体シグナル伝達経路が関与しているかまたはそれにより媒介されている疾患または異常状態、例えば肥満症、食欲不振、過食症、うつ、不安、精神病、統合失調症、片頭痛、強迫性障害、性障害、双極性うつ病、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、睡眠障害、頭部痛関連状態、社会恐怖症および／または認知症から選択される障害に罹患しているヒトの予防または治療の方法であって、該予防または治療を必要としている患者に塩１または塩１.１～１.２７のいずれかの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

【実施例】

【0055】

例示した塩形態を単離して特徴付けるために以下の装置および方法を使用する：

【0056】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）： Ｘ線粉末回折試験は、Ｂｒａｇｇ－Ｂｒｅｎｔａｎｏ型Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ２ ＰＨＡＳＥＲ装置＃１５４９／＃２３５３を使用して行う。該装置は３０ｋＶ、１０ｍＡのＣｕアノード；試料ステージ標準器回転、Κβフィルター（０.５％Ｎｉ）による単色化を使用する。スリット： 固定発散スリット１.０ｍｍ（＝０.６１°）、一次軸ソーラースリット２.５°、二次軸ソーラースリット２.５°。検出器： 受容スリット５°検出器開口を備えた線形検出器ＬＹＮＸＥＹＥ。標準試料ホルダー（（５１０）シリコンウェハーにおける０.１ｍｍキャビティ）は、バックグラウンドシグナルへの寄与が最小である。測定条件： 走査範囲５～４５°２θ、試料回転５ｒｐｍ、０.５秒／ステップ、０.０１０°／ステップ、３.０ｍｍ検出器スリット；および全測定条件を装置制御ファイルに記録する。システム適性として、コランダム試料Ａ２６－Ｂ２６－Ｓ（ＮＩＳＴ標準）を毎日測定する。データ収集に使用したソフトウェアはＤｉｆｆｒａｃ．Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ２.０.２６である。データ分析はＤｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａ ｖ１.４を使用して行う。該パターンにバックグラウンド補正または平滑化は適用しない。

【0057】

同時熱重量測定（ＴＧＡ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）またはＴＧＡ／ＤＳＣ分析： ＴＧＡ／ＤＳＣ試験は、オートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ１ Ｓｔａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ装置＃１５４７を使用し、ピンホールを開けた４０μｌのＡｌるつぼを使用して行う。測定条件： ５分、３０.０℃、１０℃／分で３０.０～３５０.０℃、４０ｍｌ／分のＮ₂流。装置制御およびデータ分析に使用したソフトウェアはＳＴＡＲｅ ｖ１２.１０である。

【0058】

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）： ＤＳＣ試験は、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＳＣ１ ＳＴＡＲｅ Ｓｙｓｔｅｍ装置＃１５６４を使用して行う。Ａｌるつぼ（４０μｌ；穿孔）を使用して試料を調製する。典型的には、予め計量したＡｌるつぼに試料１～８ｍｇを載せ、３０℃で５分間保持し、その後、１０℃／分で３０℃から３５０℃まで加熱し、３５０℃で１分間保持する。試料全体に４０ｍｌ／分の窒素パージを維持する。システム適性チェックとして、インジウムおよび亜鉛を参照として使用する。データ収集および評価に使用したソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ１２.１０ ｂｕｉｌｄ ５９３７である。サーモグラムに補正は適用しない。

【0059】

フーリエ変換赤外分光分析（ＦＴ－ＩＲ）： ＦＴ－ＩＲ試験は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎｉｃｏｌｅｔ ｉＳ５０装置＃２３５７を使用して行う。減衰全反射測定法（ＡＴＲ）技術をＫＢｒビームスプリッターと共に使用する。４００ｃｍ^-1～４０００ｃｍ^-1の解像度４で、走査数は１６である。データ収集および評価のためにソフトウェアＯＭＮＩＣ ｖｅｒｓｉｏｎ ９.２を使用する

【0060】

高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）： 高速液体クロマトグラフィー分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３２２Ａ脱気装置＃１８９４、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１１Ａクォータナリポンプ装置＃１８９５、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１３Ａ ＡＬＳ装置＃１８９６、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１８Ａカラム装置＃１８９７およびＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１４Ａ ＶＷＤ装置＃１８９８を装備しているＬＣ－３１／Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３７９Ｂ脱気装置＃２２５４、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１１Ａクォータナリポンプ装置＃２２５５、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３６７Ａ ＷＰＡＬＳ装置＃１６５６、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１６Ａカラム装置＃２２５７およびＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ Ｇ１３１５Ｂ ＤＡＤ装置＃２２５８を装備しているＬＣ－３４で行う。データをＡｇｉｌｅｎｔ ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ for ＬＣ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｒｅｖ． Ｂ.０４.０２[９６]を使用して収集および評価する。溶液は次のとおり調製する： 移動相Ａ： １ＬメスフラスコにＭｉｌｌｉＱ水８００ｍｌを添加する。ＴＦＡ １ｍｌを添加し、均質化する。印までＭｉｌｌｉＱを充填する。移動相Ｂ： １Ｌメスフラスコにアセトニトリル８００ｍｌを添加する。ＴＦＡ １ｍｌを添加し、均質化する。印までアセトニトリルを充填する；希釈剤： ５０／５０ ＭｅＯＨ／ＡＣＮ。

【0061】

プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）： 試料をＤＭＳＯ－ｄ６溶媒で調製し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｏｖａ４００で、室温、周波数３９９.９ＭＨｚ、掃引幅６３９８Ｈｚ、およびスピン２０Ｈｚにてスペクトルを収集する。

【0062】

実施例１： ＩＴＩ－００７二トシル酸塩
ＩＴＩ－００７遊離塩基 約１ｇおよび１モル当量のトルエンスルホン酸を合わせ、２－ブタノン溶媒（２０ｍＬ）と混合する。該混合物を５００ｒｐｍで室温にて２５時間撹拌する。次いで、該混合物を濾過し、乾燥させて、白色／茶色の固体を得る。該固体をＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡ、ＨＰＬＣ、ＦＴＩＲおよびプロトンＮＭＲによって分析する。該固体は、メタノールおよび酢酸に溶け（＞３０ｍｇ／ｍＬ）、ジクロロメタンにはやや溶けにくい（１０～３０ｍｇ／ｍＬ）ことが分かる。

【0063】

ＸＲＰＤ分析は、得られた固体が結晶性固体であることを示している。該ＸＲＰＤパターンは、以前に製造したＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶から得られたＸＲＰＤパターン（下方の曲線）を参照して図１に示されている（上方の曲線）。参照結晶は、溶媒として酢酸エチルまたはトルエンを使用して、ＩＴＩ－００７とトルエンスルホン酸との１：１モル混合物から得た。結果は、実施例１によって得た固体と参照ＩＴＩ－００７一トシル酸塩との間のＸＰＲＤパターンの明らかな差異を示している。二トシル酸塩の形成を示すと考えられる１つの重要な特徴的なピークは、約１０.４５の角度（２シータ）で現れる。実施例１の化合物のピークは表１において表形式で同定される：

【0064】

【表2】

【0065】

ＤＳＣ／ＴＧＡサーモグラムは図２に示されている。該ＤＳＣ／ＴＧＡ分析は、約１８４℃で１つの吸熱事象を示し、約２５８℃で１つの発熱事象を示している。第１の吸熱事象は約Ｔ_開始＝１７８℃で生じ、Ｔ_ピーク＝１８４℃およびΔＥ＝－８８Ｊ／ｇを有する。第２の発熱事象は約Ｔ_開始＝２４２℃で生じ、Ｔ_ピーク＝２５８℃およびΔＥ＝１２２Ｊ／ｇを有する。吸熱事象は融解であり、一方、発熱事象は再結晶である。ＴＧＡプロファイルは、４０℃から１９０℃までで１.７％の質量損失を示しており、２１０℃から２７０℃までで３.４％の質量損失を示している。再結晶事象は、参照ＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶で以前に観察された温度よりも約２５℃低い温度で生じることに注目する。

【0066】

ＬＣ－ＭＳ分析は、得られた固体について９２面積％の純度を示している。

【0067】

プロトンＮＭＲは図３に示されている。プロトンＮＭＲ分析は、該化合物がＩＴＩ－００７の二トシル酸塩であることを示している。詳しくは、該プロトンＮＭＲスペクトルは、ＩＴＩ－００７塩基部分当たり約２つのトルエンスルホン酸分子の存在を示している。これは、約４：２：４：２の積分比で存在している約７.１１ｐｐｍ、７.３６ｐｐｍ、７.４９ｐｐｍおよび８.０３ｐｐｍでのＮＭＲプロトンによって立証されている。７.１１ｐｐｍピークおよび７.４９ｐｐｍピークはトルエンスルホン酸塩部分の芳香族トシル酸環からのプロトンを表しており、一方、７.３６ピークおよび８.０３ピークはＩＴＩ－００７部分の芳香族４－フルオロフェニル環からのプロトンを表している。６.４～７.０ｐｐｍの残りの芳香族ピークはＩＴＩ－００７のキノキサリン核の芳香族プロトンを表しており、それらの積分はＩＴＩ－００７遊離塩基の１モル単位と一致している。約２.３ｐｐｍでのアルキルピークはトシル酸塩環のメチル基を表しており、その積分もまたトルエンスルホン酸の２モル単位と一致している。

【0068】

ＦＴＩＲスペクトルは図４に示されており、それもまた当該塩の二トシル酸塩構造と一致している。

【0069】

動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）分析は、９５ＲＨ％での総質量取り込みが２％である段階的吸着を示している。したがって、この塩はわずかに吸湿性である。分析結果は以下の表２にまとめられている。

【0070】

【表3】

【0071】

実施例２の一トシル酸塩で得られた分析データと直接比較すると、実施例１の塩は、ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸をモル比１：２で含む異なる結晶性塩形態であることが明らかである。理論に縛られることなく、２－ブタノン溶媒に対するＩＴＩ－００７遊離塩基の溶解度が他の溶媒に比べて低いため、遊離塩基の有効濃度が低くなり、遊離塩基対トルエンスルホン酸の有効比が高くなると考えられる。その結果、二トシル酸塩が形成され、該生成物を濾過した後に未反応の遊離塩基が溶液中に残る。

【0072】

追加の実験は、実質的に上記のように行った２－ブタノン溶媒中のＩＴＩ－００７遊離塩基対トルエンスルホン酸の１：２モル比で、濾過後に回収された固体が、高収率から定量的収率で上記と同じ二トシル酸塩であることを示している。

【0073】

実施例２： ＩＴＩ－００７一トシル酸塩
ＩＴＩ－００７遊離塩基 約１ｇおよび１／２モル当量のトルエンスルホン酸を添加し、２－ブタノン溶媒（１５ｍＬ）と混合する。該混合物を５００ｒｐｍで室温にて２５時間撹拌する。次いで、該混合物を濾過し、乾燥させて、白色固体を得る。該固体をＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡ、ＨＰＬＣ、ＦＴＩＲおよびプロトンＮＭＲによって分析する。該分析は、この塩がＩＴＩ-００７の一トシル酸塩であり、実施例１から得られた二トシル酸塩とは明らかに異なることを示している。

【0074】

ＸＲＰＤ分析は、得られた固体が結晶性固体であることを示している。該ＸＲＰＤパターンは、以前に製造したＩＴＩ－００７一トシル酸塩結晶から得られたＸＲＰＤパターン（下方の曲線）を参照して図５に示されている（上方の曲線）。参照結晶は、溶媒として酢酸エチルまたはトルエンを使用して、ＩＴＩ－００７とトルエンスルホン酸との１：１モル混合物から得た。結果は、実施例２によって得た固体と参照ＩＴＩ－００７一トシル酸塩との間で実質的に同一のＸＰＲＤパターンを示した。実施例２の化合物のピークは表３において表形式で同定される。

【0075】

【表4】

【0076】

ＤＳＣ／ＴＧＡサーモグラムは図６に示されている。該ＤＳＣ／ＴＧＡ分析は、約１７９℃で１つの吸熱事象を示し、約２８５℃で１つの発熱事象を示している。第１の吸熱事象は約Ｔ_開始＝１７５℃で生じ、Ｔ_ピーク＝１７９℃およびΔＥ＝－８１Ｊ／ｇを有する。第２の発熱事象は約Ｔ_開始＝２７８℃で生じ、Ｔ_ピーク＝２８５℃およびΔＥ＝２５５Ｊ／ｇを有する。吸熱事象は融解であり、一方、発熱事象は再結晶である。ＴＧＡプロファイルは、４０℃から２２０℃までで０.４％の質量損失を示しており、２２０℃から２９０℃までで９.４％の質量損失を示している。

【0077】

ＬＣ－ＭＳ分析は、得られた固体について９３面積％の純度を示している。

【0078】

プロトンＮＭＲは図７に示されている。プロトンＮＭＲ分析は、該化合物がＩＴＩ－００７の一トシル酸塩であることを示している。詳しくは、該プロトンＮＭＲスペクトルは、ＩＴＩ－００７塩基部分当たり１つのトルエンスルホン酸の存在を示している。これは、約２：２：２：２の積分比で存在している約７.１１ｐｐｍ、７.３６ｐｐｍ、７.５２ｐｐｍおよび８.０５ｐｐｍでのＮＭＲプロトンによって立証されている。７.１１ｐｐｍピークおよび７.５２ｐｐｍピークは芳香族トシル酸塩環からのプロトンを表しており、一方、７.３６ピークおよび８.０５ピークはＩＴＩ－００７遊離塩基の芳香族４－フルオロフェニル環からのプロトンを表している。６.４～７.０ｐｐｍの残りの芳香族ピークはＩＴＩ－００７のキノキサリン核の芳香族プロトンを表しており、それらの積分はＩＴＩ－００７遊離塩基の１モル単位と一致している（１：１：１比の明確に異なるピークの積分）。約２.３ｐｐｍでのアルキルピークはトシル酸塩環のメチル基を表しており、その積分もまたトルエンスルホン酸の１モル単位と一致している。

【0079】

分析結果は下記の表４にまとめられている。

【0080】

【表5】

本願は下記の態様も包含する。
［態様１］
例えば１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オンの他の形態を含まないかまたは実質的に含まない均質な結晶形態の、１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オンの安定な二トシル酸塩。
［態様２］
ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸を、１：１～１：３のモル比、例えば１：１～１：２.２のモル比、または１：１～１：２、または１：１～１：１.５、または約１：１のモル比、または約１：１.５、または約１：２、または約１：２.２のモル比で、合わせることによって形成される塩である、態様１記載の塩。
［態様３］
ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸の２－ブタノン溶媒中スラリーから形成される、態様１または２記載の塩。
［態様４］
図１の上方の曲線において示されているかまたは実質的に示されているＸ線回折パターンを有する塩結晶である、態様１～３のいずれかに記載の塩。
［態様５］
図２に示されているかまたは実質的に示されているＤＳＣ／ＴＧＡサーモグラムを有する塩結晶である、態様１～４のいずれかに記載の塩。
［態様６］
図３に示されているかまたは実質的に示されているプロトンＮＭＲスペクトルを有する塩結晶である、態様１～５のいずれかに記載の塩。
［態様７］
例えば約４：２：４：２の積分比で約７.１１ｐｐｍ、７.３６ｐｐｍ、７.４９ｐｐｍおよび８.０３ｐｐｍでのＮＭＲプロトンによって示されているように、ＩＴＩ－００７塩基部分当たり約２つのトルエンスルホン酸部分の存在を示しているプロトンＮＭＲスペクトルを有する塩結晶である、態様１～６のいずれかに記載の塩。
［態様８］
含まれる他のＩＴＩ－００７トシル酸塩形態（例えば、一トシル酸塩または三トシル酸塩）が該塩の１０重量％未満、例えば５重量％未満または３％未満または２％未満または１％未満または０.５％未満である、態様１～７のいずれかに記載の塩。
［態様９］
含まれるＩＴＩ－００７遊離塩基形態が該塩の１０重量％、例えば５％未満または３％未満または２％未満または１％未満または０.５％未満である、態様１～８のいずれかに記載の塩。
［態様１０］
態様１～９のいずれかに記載の塩の製造方法であって、
（ａ）１－(４－フルオロフェニル)－４－((６ｂＲ,１０ａＳ)－３－メチル－２,３,６ｂ,９,１０,１０ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ,７Ｈ－ピリド[３',４'：４,５]ピロロ[１,２,３－ｄｅ]キノキサリン－８－イル)－ブタン－１－オン（ＩＴＩ－００７）遊離塩基とトルエンスルホン酸とを、例えば有機溶媒（例えば、２－ブタノンを含む）と一緒に，反応させること（例えば、ここで、該ＩＴＩ－００７遊離塩基およびトルエンスルホン酸はモル比が１：１～１：３、例えば１：１～１：２.２、または１：１～１：２、または１：１～１：１.５、または約１：１、または約１：１.５、または約１：２、または約１：２.２である）；および
（ｂ）このようにして形成された塩を回収すること
を含む、方法。
［態様１１］
反応が有機溶媒、例えば２－ブタノン中にて行われる、態様１０記載の方法。
［態様１２］
薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは併せて態様１～９のいずれかに記載の塩を含む医薬組成物。
［態様１３］
５－ＨＴ _2A 受容体、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）、および／またはドーパミンＤ ₁ ／Ｄ ₂ 受容体シグナル伝達経路が関与しているかまたはそれにより媒介されている疾患または異常状態に罹患しているヒトの予防または治療の方法であって、該ヒトに態様１～９のいずれかに記載の塩の有効量を投与することを含む、方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】