知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-19
(45)【発行日】2024-04-30
(54)【発明の名称】置換ナフタレンジイミド及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 471/06 20060101AFI20240422BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20240422BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240422BHJP
【ＦＩ】
C07D471/06 CSP
A61K31/5377
A61P35/00
【請求項の数】
11
(21)【出願番号】P 2021568642
(86)(22)【出願日】2020-05-15
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-21
(86)【国際出願番号】 GB2020051195
(87)【国際公開番号】W WO2020229840
(87)【国際公開日】2020-11-19
【審査請求日】2023-05-15
(31)【優先権主張番号】1906914.5
(32)【優先日】2019-05-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】505367442
【氏名又は名称】ユーシーエル ビジネス エルティーディー
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ネイドル ステファン
(72)【発明者】
【氏名】アンジェル リチャード
(72)【発明者】
【氏名】オクセンフォード サリー
【審査官】宮田 透
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／１０３５８７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Stephan A Ohnmacht et al.，A G-quadruplex-binding compound showing anti-tumour activity in an in vivo model for pancreatic cancer，Scientific Reports，2015年06月16日，Vol. 5, No. 1，pp.1-11，DOI: 10.1038/srep11385
【文献】MATTEO NADAI et al.，Assessment of gene promoter G-quadruplex binding and modulation by a naphthalene diimide derivative in tumor cells，International Journal of Oncology，2015年01月01日，Vol. 46, No. 1，pp.369-380，DOI: 10.3892/ijo.2014.2723
【文献】Filippo Doria et al.，Hybrid ligand-alkylating agents targeting telomeric G-quadruplex structures，Organic & Biomolecular Chemistry，2012年01月18日，Vol. 10, No. 14，pp.2798-2806，DOI: 10.1039/c2ob06816h
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ、Ａ６１Ｋ、Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉの化合物：【化1】
Ｌは、（ＣＨ２）１～２であり、Ｒ１は、含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキルが任意にＣ１～６アルキル基で置換されているＣ５～７シクロアルキル、及びＮＲ９Ｒ１０からなる群より選択され、又は
Ｌは、（ＣＨ２）１～５ＮＨであり、－ＮＨはＲ１に結合し、－ＣＨ２はフェニル基に結合し、Ｒ１は、５員～７員シクロアルキルであり、
Ｒ２は、直鎖のＣ２～４－アルカンジイルであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４は、直鎖のＣ２～４－アルカンジイルであり、
Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｃ１～６アルキルであり、
Ｘは、ＮＲ６ ２であり、
基Ｒ６は、それらが結合しているＮ原子と共にピロリジン－１－イルを形成する
）、並びに、
その塩、水和物及び溶媒和物。
【請求項2】
Ｌが（ＣＨ２）１～２であり、Ｒ１が、含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
前記含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキルが、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、アゼパニル、ジアゼパニルからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｌが（ＣＨ２）１～５ＮＨであり、Ｒ１がＣ５～７シクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
Ｌがパラ位にある、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
前記化合物が以下からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物：２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（４－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（モルホリノメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（３－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（４－（ピペリジン－１－イルメチル）フェニル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（ジエチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（シクロペンチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（アゼパン－１－イルメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（４－メチルピラジン－１－イル）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；並びに、
それらの塩、水和物及び溶媒和物。
【請求項7】
前記化合物が２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（４－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
式Ｉが以下の式ＩＩの構造を有する、請求項１～５のいずれかに記載の化合物。【化2】
【請求項9】
希釈剤と組み合わせた、請求項１～８のいずれかに記載の化合物を含む組成物であって、前記組成物が医薬組成物であり、前記希釈剤が薬学的に許容可能な希釈剤である、組成物。
【請求項10】
癌治療用の、又は固形腫瘍の成長阻害用の、又は固形腫瘍のサイズを縮小するための被験体の治療方法用の、請求項１～８のいずれかに記載の化合物又は請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
請求項１～８のいずれかに記載の置換ナフタレンジイミド化合物を合成する方法であって、ｉ）求核置換反応において式ＩＩＩの化合物を式ＩＶの化合物と反応させて式Ｖの化合物を得る工程であって、
【化3】
式ＩＶ
式ＩＩＩの化合物中の少なくとも１つのＢｒが、式ＩＶの化合物中の求核性アミン窒素によって置換される、工程と、
ｉｉ）式ＩＩＩ及び式ＩＶの前記求核置換反応から生じる生成物から得られる式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物と反応させる工程であって、
【化4】
【化5】
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ナフタレンジイミド（ＮＤＩ）及びそれらを合成する方法に関する。ＮＤＩは、ＤＮＡ－四重鎖結合（DNA-quadruplex binding）及び安定化活性を有し、膵臓癌、前立腺癌、及びその他のヒトの癌の治療に使用できる可能性がある。
【背景技術】
【0002】
特許文献１において、本発明者らは、三置換及び四置換ナフタレンジイミド、並びにそれらの製造方法について記載した。三置換された例示される生成物はいずれも、コアリガンド上の均等（equational）位置及び極性位置に異なるアミノ官能性リガンドを有していなかった。三置換化合物の製造に適していると言われている方法は、以下の概略図に基づいている。
概略図１中、Ｒ１は任意に置換されたアルキル又はアリールであり、ｎは０又は１である。実際には、四置換（ｎ＝１）及び三置換（ｎ＝０）の化合物の混合物が生成された。全ての置換基、すなわちＲ１基は同じである。
【化1】
【0003】
本明細書は、上記で使用されるジブロモ化合物のジクロロ置換類縁体から出発して四置換化合物を製造する方法を記載する。プロセスは、同じＨ２ＮＲ１試薬が両方の無水物基及び両方の塩素置換炭素で反応して生成物に４つの同一のＲ１置換基を与える、１工程で進行するか、又は第１の工程で第１の試薬Ｈ２ＮＲ２が両方の無水物基で反応し、第２の工程で、第２の試薬Ｈ２ＮＲ３が両方の塩素置換炭素原子で反応する、２工程で進行した。イミド置換基及び／又は芳香環に塩基性置換基を持つ化合物は、強力なＤＮＡ四重鎖結合特性を有する。
【0004】
特許文献２において、本発明者らは、三置換ナフタレンジイミド及びそれらの製造プロセスを記載した。三置換化合物の製造に適していると言われている方法は、以下の概略図に基づいている。
概略図２中、ＹはＨ又はＢｒであり、基Ｒ１２は同一であり、直鎖及び分岐鎖Ｃ１～６アルケンジイルからなる群より選択され、Ｒ１３はＨ及びＣ１～６アルキルからなる群より選択され、Ｒ１４は直鎖及び分岐鎖Ｃ１～６アルカンジイル及びＣ７～１２アラルカンジイルからなる群より選択され、Ｘ２はハロ、Ｒ１１、ＮＲ１５
２、ＣＯＮＲ１６
２、ＣＯＯＲ１７、ＳＨ及びＣＯＲ１８からなる群より選択され、Ｒ１１は、Ｈ、任意に置換されたＣ１～６アルキル、任意に置換されたＣ５～７シクロアルキル、Ｃ５～７ヘテロシクロアルキル及びアリールからなる群より選択され、各Ｒ１５は、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、アリール及びＣ７～１２アラルキルからなる群より選択され、Ｎ基Ｒ１５は、それらが結合しているＮ原子と共に５～７原子の飽和複素環を形成し、各Ｒ１６は、Ｈ及びＣ１～６アルキル基からなる群より選択されるか、又は基Ｒ１６--は、それらが結合しているＮ原子と共に５員～７員の複素環を形成し、Ｒ１７は、任意に置換されたＣ１～６アルキル、Ｃ７～１２アラルキル及びアリールからなる群より選択され、Ｒ１８は、任意に置換されたＣ１～６アルキル、Ｃ７～１２アラルキル及びアリールからなる群より選択され、それにより、Ｂｒ原子、又は１つのＢｒ原子若しくは各Ｂｒ原子がアミン試薬の求核性アミン窒素によって置換されて、置換ＮＤＩ化合物を形成する。
【化2】
【0005】
基Ｒ３とは異なる基Ｒ２を有する生成物を含む、四置換生成物は、特許文献３、特許文献４、並びに非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５及び非特許文献６において、テロメアの四重鎖、また幾つかの遺伝子のプロモーター領域に見られるものへのそれらの結合特性について試験されている。データは、幾つかのタンパク質の効果的なダウンレギュレーションを示し、その遺伝子のプロモーターはジイミドによって標的とされるため、癌細胞株のパネルからの幾つかの細胞株の成長阻害をもたらす。本発明者らは、これらの出版物において、置換基の性質及びカチオン性置換基の第三級アミン基の塩基性を変化させることが結合の特異性及び強度に及ぼす影響を更に調査し、膵臓癌を含む癌のモデルを試験することによって、癌治療における化合物の可能性を調査することを提案した。
【0006】
非特許文献７において、Ohnmacht S.A., et al.は、ヒト膵臓癌のマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで４，９－ビス（（３－（４－メチルピペラジン－１－イル）－プロピル）アミノ）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（ＭＭ４１としても知られる）の活性を開示する。
【0007】
非特許文献８は、各イミド窒素原子で置換された２－ジメチルアミノエチル基を有し、第３の置換基としてＮＤＩコアの４位で置換された２－（４－ヒドロキシ－３－ジメチルアミノメチルフェニル）エチルアミノ基を有する三置換ナフタレンジイミド化合物を開示する。該化合物は、テロメアＧ－四重鎖（ＧＱ）を安定化させる活性を有し、テロメア機能障害及びテロメラーゼダウンレギュレーションを引き起こす。細胞株のパネルでの全体的な遺伝子発現は、テロメア機能及び癌のメカニズムに関係する遺伝子の調節を示した。しかしながら、著者らは、細胞の状況におけるＧ－４の生物学的関連性の直接的な証拠はまだ不足していると結論付けている（非特許文献９）。
【0008】
Nadai et al.によって報告された三置換化合物の合成は、非特許文献１０に開示される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0009】
【文献】国際公開第２００９／０６８９１６号
【文献】国際公開第２０１７／１０３５８７号
【文献】国際公開第２００９／０６８９１６号
【文献】米国特許出願公開第２０１４－０２７５０６５号
【非特許文献】
【0010】
【文献】Hampel S. M. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. (2010) 20, 6459-6463
【文献】Micco. M., et al., J. Med. Chem. (2013) 56, 2959-2974
【文献】Collie, G. W., et al., J.A.C.S. (2012) 134, 2723-2731
【文献】Gunaratnam, M. et al., J. Med. Chem. (2009) 52, 3774-3783
【文献】Gunaratnam, M. et al., Bioorg. Med. Chem. (2011) 19, 7151-7157
【文献】Mitchell, T. et al., Biochemistry (2013) 52, 1429-1436
【文献】Scientific Reports (2015) 5:11385
【文献】Nadai, M., et al., in Int. J. Oncol. (2015) 46, 369-380
【文献】Marchetti et al, J Med Chem, 2018, 61(6), pp. 2500-2517
【文献】Doria et al, Org Biomol. Chem, (2012) 10, 2798-2806
【発明の概要】
【0011】
驚くべきことに、本発明者らは、四置換ナフタレンジイミド化合物の特定の側鎖群が、ジイミド化合物のＧＱへの結合の改善をもたらし、抗癌活性の改善をもたらすことを見出した。
【0012】
したがって、本発明の第１の態様において、式Ｉの化合物：
（Ｌはフェニル環のメタ位又はパラ位にあり、（ＣＨ２）１～６及び（ＣＨ２）１～５ＮＨからなる群より選択され、
Ｒ１は、任意に置換されたＣ５～７シクロアルキル、任意に置換された含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキル、及びＮＲ９Ｒ１０からなる群より選択され、
Ｒ２及びＲ４は、直鎖及び分岐鎖のＣ１～６－アルカンジイルからなる群より独立して選択され、
Ｒ３、Ｒ９及びＲ１０は、Ｈ又はＣ１～６アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、ハロ、ＯＲ５、ＮＲ６ ２、ＣＯＮＲ７ ２、ＣＯＯＲ８、Ｈ、及びＣＯＲ８からなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～７シクロアルキル、４員～７員ヘテロシクロアルキル及びアリールからなる群より選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、アリール、及びＣ７～１２－アラルキルからなる群より選択されるか、又は基Ｒ６は、それらが結合しているＮ原子と共にＮ含有飽和４員～７員複素環基を形成し、
基Ｒ７は、それぞれ、Ｈ及びＣ１～６アルキル基から選択されるか、又は基Ｒ７は、それらが結合しているＮ原子と共に４員～７員の複素環基を形成し、
Ｒ８は、Ｃ１～６アルキル、Ｃ７～１２アラルキル、及びアリールからなる基から選択される）、並びに、
その塩、水和物及び溶媒和物が提供される。
【化3】
Ｒ１は、任意に置換されたＣ５～７シクロアルキル、任意に置換された含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキル、及びＮＲ９Ｒ１０からなる群より選択され、
Ｒ２及びＲ４は、直鎖及び分岐鎖のＣ１～６－アルカンジイルからなる群より独立して選択され、
Ｒ３、Ｒ９及びＲ１０は、Ｈ又はＣ１～６アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｘは、ハロ、ＯＲ５、ＮＲ６ ２、ＣＯＮＲ７ ２、ＣＯＯＲ８、Ｈ、及びＣＯＲ８からなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～７シクロアルキル、４員～７員ヘテロシクロアルキル及びアリールからなる群より選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、アリール、及びＣ７～１２－アラルキルからなる群より選択されるか、又は基Ｒ６は、それらが結合しているＮ原子と共にＮ含有飽和４員～７員複素環基を形成し、
基Ｒ７は、それぞれ、Ｈ及びＣ１～６アルキル基から選択されるか、又は基Ｒ７は、それらが結合しているＮ原子と共に４員～７員の複素環基を形成し、
Ｒ８は、Ｃ１～６アルキル、Ｃ７～１２アラルキル、及びアリールからなる基から選択される）、並びに、
その塩、水和物及び溶媒和物が提供される。
【0013】
本発明は更に、癌を治療するため、又は固形腫瘍の成長を阻害するため、又は固形腫瘍、例えば膵臓腫瘍及び前立腺腫瘍のサイズを縮小するための動物の治療方法で使用される新たな化合物を提供する。
【0014】
本発明はまた、新たな化合物と、希釈剤又は担体とを含む組成物を提供する。組成物は好ましくは医薬組成物であり、その場合、担体は薬学的に許容可能である。
【0015】
本発明の第２の態様において、本発明の第１の態様による置換ナフタレンジイミド化合物を合成する方法であって、
ｉ）求核置換反応において式ＩＩＩの化合物を式ＩＶの化合物と反応させて式Ｖの化合物を得る工程であって、
ＨＮ（Ｒ３）（Ｒ４Ｘ）
式ＩＶ
式ＩＩＩの化合物中の少なくとも１つのＢｒが、式ＩＶの化合物中の求核性アミン窒素によって置換される、工程と、
ｉｉ）式ＩＩＩ及び式ＩＶの求核置換反応から生じる生成物から得られる式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物と反応させる工程であって、
式ＶＩのフェニルと、式Ｖの化合物において結合したＢｒを有するフェニルとの間にアリール－アリール結合が形成され（式中、ＬＧ及びＢｒは脱離基である）、式Ｉの化合物を作る、工程と、好ましくは、
ｉｉｉ）式Ｖ及び式ＶＩの反応から生じる生成物から式Ｉの化合物を単離する工程（式中、Ｌ、Ｘ及びＲ１～Ｒ４は、本発明の第１の態様の式Ｉについて定義された通りである）と、
を含む、方法が提供される。
ｉ）求核置換反応において式ＩＩＩの化合物を式ＩＶの化合物と反応させて式Ｖの化合物を得る工程であって、
【化4】
式ＩＶ
式ＩＩＩの化合物中の少なくとも１つのＢｒが、式ＩＶの化合物中の求核性アミン窒素によって置換される、工程と、
ｉｉ）式ＩＩＩ及び式ＩＶの求核置換反応から生じる生成物から得られる式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物と反応させる工程であって、
【化5】
【化6】
ｉｉｉ）式Ｖ及び式ＶＩの反応から生じる生成物から式Ｉの化合物を単離する工程（式中、Ｌ、Ｘ及びＲ１～Ｒ４は、本発明の第１の態様の式Ｉについて定義された通りである）と、
を含む、方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】本発明の化合物及び比較化合物で治療したマウスの膵臓癌腫瘍における腫瘍退縮を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0017】
定義
本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、「アルキル」基、「シクロアルキル」基、「ヘテロシクロアルキル」基、「複素環」基、「アリール」基、及び「アラルキル」基は、一価又は二価であり得る。
本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、「アルキル」基、「シクロアルキル」基、「ヘテロシクロアルキル」基、「複素環」基、「アリール」基、及び「アラルキル」基は、一価又は二価であり得る。
【0018】
本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、「アリール」は、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル等の単環式、二環式、又は三環式の一価又は二価（必要に応じて）芳香族ラジカルを意味し、これらは任意に最大３つの置換基で置換され得る。
【0019】
本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、「任意に置換された」は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１～Ｃ３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ３ハロアルコキシ、アミノ、Ｃ１～Ｃ３モノアルキルアミノ、Ｃ１～Ｃ３ビスアルキルアミノ、Ｃ１～Ｃ３アシルアミノ、Ｃ１～Ｃ３アミノアルキル、モノ（Ｃ１～Ｃ３アルキル）アミノＣ１～Ｃ３アルキル、ビス（Ｃ１～Ｃ３アルキル）アミノＣ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アシルアミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキルスルホニルアミノ、ハロ、ニトロ、シアノ、トリフルオロメチル、カルボキシ、Ｃ１～Ｃ３アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノＣ１～Ｃ３アルキルアミノカルボニル、ビスＣ１～Ｃ３アルキルアミノカルボニル、－ＳＯ３Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキルスルホニル、アミノスルホニル、モノＣ１～Ｃ３アルキルアミノスルホニル及びビスＣ１～Ｃ３－アルキルアミノスルホニルの群から選択される置換基の１つによるものである。
【0020】
本明細書において使用される場合、特に明記しない限り、「ヘテロシクロアルキル」基及び「複素環」基は、酸素、窒素及び硫黄から選択される最大４つのヘテロ原子を含む炭素環式ラジカルである。それらは二環式又は単環式であり得る。それらは好ましくは飽和している。複素環が二価リンカーである場合、複素環は、炭素原子により、又はヘテロ原子の１つ、例えばＮにより隣接する基に結合し得る。複素環の例は、ピロリジン、ピペラジン、及びモルホリンである。
【0021】
本発明の好ましい基
本発明の第１の態様において、Ｌは、好ましくは（ＣＨ２）１～６、好ましくは（ＣＨ２）１～４、より好ましくは（ＣＨ２）１～３、更により好ましくは（ＣＨ２）１～２、更により好ましくは（ＣＨ２）である。好ましくは、Ｌはフェニルのパラ位にある。Ｒ１が任意に置換された含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキル又はＮＲ９Ｒ１０である場合、Ｒ１はＲ１の窒素原子を介してＬに連結されていることが好ましい。
本発明の第１の態様において、Ｌは、好ましくは（ＣＨ２）１～６、好ましくは（ＣＨ２）１～４、より好ましくは（ＣＨ２）１～３、更により好ましくは（ＣＨ２）１～２、更により好ましくは（ＣＨ２）である。好ましくは、Ｌはフェニルのパラ位にある。Ｒ１が任意に置換された含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキル又はＮＲ９Ｒ１０である場合、Ｒ１はＲ１の窒素原子を介してＬに連結されていることが好ましい。
【0022】
Ｌ又はＲ１が塩基性窒素原子を含むことが想定される。そのため、Ｒ１は、塩基性窒素原子を含む任意の基であり得る。Ｒ１は、好ましくは、含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキル、好ましくは含窒素５員又は６員ヘテロシクロアルキル、より好ましくは含窒素５員ヘテロシクロアルキルである。好ましくは、含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキルの窒素は、ヘテロシクロアルキル中の唯一のヘテロ原子である。別の態様において、含窒素５員～７員のヘテロシクロアルキルは、酸素原子等の第２のヘテロ原子を含む。
【0023】
好適には、含窒素５員～７員ヘテロシクロアルキルは、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、アゼパニル、ジアゼパニルからなる群より選択され、好ましくはピロリジニルである。好適には、Ｌは（ＣＨ２）であり、Ｒ１はピロリジニルである。
【0024】
好適には、Ｒ１はＮＲ９Ｒ１０である。Ｒ９及びＲ１０は、Ｈ又はＣ１～６アルキルからなる群より独立して選択され、好ましくはＣ１～６アルキル、より好ましくはＣ２～４アルキル、更により好ましくはＣ２～３アルキルである。好適には、ＮＲ９Ｒ１０は、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ又はエチルプロピルアミノである。
【0025】
別の実施形態において、Ｌは塩基性窒素原子を含む。好適には、Ｌは（ＣＨ２）１～５ＮＨ、好ましくは（ＣＨ２）１～３ＮＨ、より好ましくは（ＣＨ２）１～２ＮＨ、更により好ましくは（ＣＨ２）ＮＨであり、Ｒ１はＣ５～７シクロアルキル、好ましくはＣ５シクロアルキルである。好ましくは、Ｌはフェニルのパラ位にある。
【0026】
式Ｉの両方のＲ２基は互いに同一である。Ｒ２は、好ましくは直鎖Ｃ２～４－アルカンジイル、最も好ましくは直鎖Ｃ３－アルカンジイルである。Ｒ４はＲ２と同一であっても又は同一でなくてもよく、好ましくは直鎖又は分岐鎖Ｃ２～４－アルカンジイル、最も好ましくはＣ２－アルカンジイルである。
【0027】
Ｘは、好ましくはアミン基を含み、すなわち、Ｘは、好ましくはＮＲ６
２又はＣＯＮＲ７
２、更に好ましくはＮＲ６
２である。基Ｒ６及びＲ７は、それらが結合しているＮ原子と共に、好ましくはＮ含有飽和４員～７員複素環基、更に好ましくはＮ含有飽和５員複素環基を形成する。かかる化合物のうち、２つの基Ｒ６が結合して複素環を形成するものは、癌細胞株試験において有用な細胞毒性活性を有するようであることから好ましい。Ｘは最も好ましくは飽和ピロリジニル基である。
【0028】
好ましくは、式Ｉは、以下の式ＩＩの構造を有する：
（式中、Ｌ及びＲ１は、式Ｉについて定義された通りであり、好ましい基のいずれかは上記で概説されている）。
【化7】
【0029】
好適には、化合物は、以下からなる群より選択される：
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（４－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（モルホリノメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（３－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（４－（ピペリジン－１－イルメチル）フェニル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（ジエチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（シクロペンチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（アゼパン－１－イルメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（４－メチルピラジン－１－イル）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；並びに、
それらの塩、水和物及び溶媒和物。
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（４－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（モルホリノメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（３－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（４－（ピペリジン－１－イルメチル）フェニル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（ジエチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（シクロペンチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（アゼパン－１－イルメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；
４－（４－（（４－メチルピラジン－１－イル）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン；並びに、
それらの塩、水和物及び溶媒和物。
【0030】
本発明の第２の態様において、式ＩＶ～式ＶＩＩＩのＬ、Ｘ及びＲ１～Ｒ４は、好ましくは、本発明の第１の態様の式ＩのＬ、Ｘ及びＲ１～Ｒ４についての上記の好ましい特徴として定義される。
【0031】
本発明の方法は、芳香族求核置換反応において、式ＩＩＩの臭素化ナフタレンジイミドを式ＩＶのアミン試薬と反応させる第１の工程を含み、それにより、臭素原子がアミノ基Ｎ（Ｒ３）（Ｒ４Ｘ）によって置き換えられる。出発ジイミドはジブロモ化合物であり、芳香族求核置換反応により、両方の臭素原子がアミン基で置き換えられても又は臭素原子の一方のみがアミン基で置き換えられてもよい（すなわち、式Ｖの化合物）が、臭素の一方のみが置き換えられることが好ましく、少なくとも１種の式Ｖの化合物が生成されている必要がある。例えばカラムクロマトグラフィーを使用することにより、一置換ナフタレンジイミド及び二置換ナフタレンジイミド両方の混合物を分離することが好ましい。
【0032】
第２の工程では、第１の工程で生成された式Ｖの化合物は、置換反応において式ＶＩの試薬と反応し、それにより、ＬＧ（脱離基）が最初に結合されている炭素原子を介して臭素原子が式ＶＩのフェニルに置き換えられる。一態様において、ＬＧはボロン酸基であり得るが、当業者は、置換反応を受けて式Ｖ及び式ＶＩの間にアリール－アリール結合を形成するための複数の方法があることを理解するであろう。その結果、少なくとも１種の式Ｉの化合物が生成される。
【0033】
好ましくは、別の工程では、式Ｉの化合物は、カラムクロマトグラフィーを使用することによって単離される。
【0034】
好ましくは、使用されるカラムクロマトグラフィーの特定の形態は、ゲル及びフラッシュカラムクロマトグラフィーから選択される。
【0035】
本発明の化合物は、薬学的に許容可能な組成物の形態で提供され得る。本発明の化合物は、特に酸付加塩の形態で与えられる場合、例えば、塩基性アミン基の一部又は全てが塩形態に変換される場合、水溶性であり、ほぼ中性のｐＨを有する。そのため、これらの塩は、静脈内投与に適しているであろう水溶液の形態での投与に好適である。薬学的水溶液は、好ましくは１ｍｇ／ｌ～５００ｍｇ／ｌの化合物を含む。
【0036】
本発明の化合物は、例えば、担体又は希釈剤を用いて、例えば、乾燥した、再水和可能な形態で、医薬組成物に構成するのに適した形態で提供され得る。そのような乾燥形態は、結晶化及び／又は蒸発によって生成され得る。或いは、化合物は、投与前に希釈するために、例えば水又は有機の薬学的に許容可能な溶媒中の濃縮物として与えられ得る。
【0037】
本明細書において使用される場合、薬学的に許容可能な塩は、薬学的に許容可能な酸又は塩基を有する塩である。薬学的に許容可能な酸としては、塩酸、硫酸、リン酸、二リン酸、臭化水素酸又は硝酸等の無機酸、及びクエン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、ベンゼンスルホン酸又はｐ－トルエンスルホン酸等の有機酸の両方が挙げられる。薬学的に許容可能な塩基としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム又はカリウム）及びアルカリ土類金属（例えば、カルシウム又はマグネシウム）の水酸化物、並びにアルキルアミン、アリールアミン又は複素環式アミン等の有機塩基が挙げられる。
【0038】
誤解を避けるために、本発明はまた、ｉｎ ｖｉｖｏで反応して本発明の化合物が得られるプロドラッグを包含する。
【0039】
本発明による組合せはまた、望ましくない制御されていない細胞増殖を阻害するために他の作用物質、例えば抗体と併せて使用され得る。化合物を、抗体と複合体形成させるか、又は２つの別々の成分として投与することができる。
【0040】
本発明の化合物及び該化合物を含む組成物は、任意の経路で投与され得る。一実施形態において、本発明の化合物を含む医薬組成物を、経口、直腸、非経口、鼻腔内若しくは経皮の投与、又は吸入若しくは坐剤による投与に適したフォーマットで製剤化することができる。典型的な投与経路は、非経口、鼻腔内若しくは経皮の投与、又は吸入による投与である。腫瘍の化学療法の場合、組成物は最も簡便には静脈内投与される。
【0041】
既存の腫瘍に対する治療として使用される場合、本発明の化合物は、化学療法剤のために開発されたレジメンを使用して投与され得る。
【0042】
本発明の化合物及び組成物は、癌を有する被験体を治療するのに有用である。或る特定のクラスの癌は固形腫瘍として知られており、癌性物質の固形塊を識別することができる。別のクラスは、血液系を冒す癌として知られる血液癌を含む。
【0043】
本発明の化合物及び組成物を使用して治療することができる特定の種類の癌としては、限定されるものではないが、前立腺癌、膵臓癌、小細胞肺癌、又は消化器癌が挙げられる。好ましい実施形態において、癌は前立腺癌又は膵臓癌である。
【0044】
本発明の化合物及び組成物は、固形腫瘍の成長を阻害するため、又は固形腫瘍のサイズを縮小するための治療において有用であり、例えば、腫瘍は膵臓腫瘍又は前立腺腫瘍である。
【0045】
治療される被験体は、好適には動物、好ましくはヒトである。
【0046】
そのため、癌を治療するための本発明の化合物又は医薬組成物、特に既に上に記載されているものを被験体に投与することを含む治療方法が提供される。
【0047】
癌の治療のための薬剤、特に既に上に記載されているものの製造における本発明の化合物又は医薬組成物の使用も提供される。
【0048】
本発明を、添付の実施例に更に示す。
【実施例】
【0049】
一連の四置換ナフタレンジイミドを合成し、Ｇ－四重鎖リガンドとして、及び可能性のある抗癌剤として評価した。
【0050】
化学
全ての化学薬品、試薬、及び溶媒は、商業的供給元から購入し、特に明記しない限り、受け取ったままの状態で使用した。乾燥溶媒が指定されていない限り、溶媒は市販のＨＰＬＣグレードであり、指定されている場合はAldrichの「Ｓｕｒｅ Ｓｅａｌ」乾燥溶媒を使用した。カラムクロマトグラフィーを、指定の溶離液を使用して、事前に充填されたシリカ（２３０メッシュ～４００メッシュ、４０μｍ～６３μｍ）カートリッジで実施した。
全ての化学薬品、試薬、及び溶媒は、商業的供給元から購入し、特に明記しない限り、受け取ったままの状態で使用した。乾燥溶媒が指定されていない限り、溶媒は市販のＨＰＬＣグレードであり、指定されている場合はAldrichの「Ｓｕｒｅ Ｓｅａｌ」乾燥溶媒を使用した。カラムクロマトグラフィーを、指定の溶離液を使用して、事前に充填されたシリカ（２３０メッシュ～４００メッシュ、４０μｍ～６３μｍ）カートリッジで実施した。
【0051】
１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ分光計で残留非重水素化溶媒を参照として使用して、４００ＭＨｚで取得した。
【0052】
分析ＬＣＭＳを、次のように酸性又は塩基性のいずれかの方法を使用して実施した。
【0053】
酸性、ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ｘ－Ｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８、２．５μｍ、４．６ｍｍ×３０ｍｍカラム、０．１％ギ酸水溶液中のＭｅＣＮ中０．１％ギ酸のグラジエントで溶出。ＭｅＣＮ中の０．１％ギ酸の５％→９５％のグラジエントは、２．５ｍｌ／分で０．００分～３．００分の間に発生し、４．５ｍｌ／分で３．０１分～３．５分のフラッシュを伴う。５％ＭｅＣＮへのカラムの再平衡化は、２．５ｍｌ／分で３．６０分～４．００分である。溶出されたピークのＵＶスペクトルを、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ又はＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＶＷＤを使用して２５４ｎｍで測定した。質量スペクトルを、ポジティブ／ネガティブスイッチングで動作するＡｇｉｌｅｎｔ ６１２０若しくはＡｇｉｌｅｎｔ １９５６ ＭＳＤ、又はポジティブモード若しくはネガティブモードのいずれかで動作するＡｇｉｌｅｎｔ ６１００ ＭＳＤを使用して測定した。
【0054】
塩基性、ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ｘ－Ｓｅｌｅｃｔ ＢＥＨ Ｃ１８、２．５μｍ、４．６ｍｍ×３０ｍｍカラム、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中のＭｅＣＮのグラジエントで溶出。５％→９５％ＭｅＣＮ中のグラジエントは、２．５ｍｌ／分で０．００分～３．００分の間に発生し、４．５ｍｌ／分で３．０１分～３．５分のフラッシュを伴う。５％ＭｅＣＮへのカラムの再平衡化は、２．５ｍｌ／分で３．６０分～４．００分である。溶出されたピークのＵＶスペクトルを、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ又はＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＶＷＤを使用して２５４ｎｍで測定した。質量スペクトルを、ポジティブ／ネガティブスイッチングで動作するＡｇｉｌｅｎｔ ６１２０若しくはＡｇｉｌｅｎｔ １９５６ ＭＳＤ、又はポジティブモード若しくはネガティブモードのいずれかで動作するＡｇｉｌｅｎｔ ６１００ ＭＳＤを使用して測定した。
【0055】
或いは、分析ＵＰＬＣ／ＭＳを、次のように酸性又は塩基性のいずれかの方法を使用して実施した。
【0056】
酸性、ＵＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＣＳＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１ｍｍ×３０ｍｍカラム、０．１％ギ酸水溶液中のＭｅＣＮ中０．１％ギ酸のグラジエントで溶出。グラジエントは、０．０分～０．１１分間保持された５％ＭｅＣＮの開始点で構成される。５％→９５％のグラジエントは、０．１１分～２．１５分の間に発生し、２．１５分～２．５６分にフラッシュを伴う。５％ＭｅＣＮへのカラムの再平衡化は２．５６分～２．８３分である。溶出されたピークのＵＶスペクトルを、Ａｃｑｕｉｔｙ ＰＤＡを使用して測定し、質量スペクトルを、ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇスイッチングを伴うＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤａ検出器を使用して記録した。
【0057】
塩基性ＵＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１ｍｍ×３０ｍｍカラム、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中のＭｅＣＮのグラジエントで溶出。グラジエントは、０．０分～０．１１分間保持された５％ＭｅＣＮの開始点で構成される。５％→９５％のグラジエントは、０．１１分～２．１５分の間に発生し、２．１５分～２．５６分のフラッシュを伴う。５％ＭｅＣＮへのカラムの再平衡化は２．５６分～２．８３分である。溶出されたピークのＵＶスペクトルを、Ａｃｑｕｉｔｙ ＰＤＡを使用して測定し、質量スペクトルを、ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇスイッチングを伴うＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤａ検出器を使用して記録した。
【0058】
分取ＨＰＬＣを、０．１％ギ酸水溶液中のＭｅＣＮ中の０．１％ギ酸のグラジエント若しくは１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中のＭｅＣＮのグラジエントのいずれかを使用するＷａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８、５μｍ、１９ｍｍ×５０ｍｍカラム、又は１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中のグラジエントＭｅＣＮを使用するＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８、５μｍ、１９ｍｍ×５０ｍｍカラムを用いて行った。画分を、Ｇｉｌｓｏｎ ２１５分取ＨＰＬＣ又はＶａｒｉａｎ ＰｒｅｐＳｔａｒ分取ＨＰＬＣの可変波長検出器で測定された単一波長でのＵＶによる；ＺＱシングル四重極質量分析計、陽及び陰イオンエレクトロスプレー、並びにＷａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ ＬＣＭＳのデュアル波長検出器によって測定された単一波長での質量及びＵＶによる検出後に収集した。
【0059】
実施例１：２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（４－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（１００ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）、（３，５－ジメトキシフェニル）ボロン酸（７７ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ）又は１－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）ピロリジン（１２１ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ）及びＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（８．１２ｍｇ、７．０３μｍｏｌ）をＴＨＦ／２Ｍ Ｋ２ＣＯ３（３：１、２ｍＬ）に溶解し、脱気して、窒素を３回充填し直した（backfilling）。混合物を３時間撹拌しながら加熱した（７０℃のブロック温度）。反応物を冷却し、ＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、水（１５ｍＬ）で洗浄し、疎水性フリットを通過させ、真空で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（塩基性、水中の２０～５０ＭｅＣＮ）によって精製して、標題化合物（７．１ｍｇ、８．３４μｍｏｌ、収率６％）を暗赤色の固体として得た。
【化8】
【0060】
1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 10.24 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.52 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 4.34 - 4.25 (m, 2H), 4.21 - 4.07 (m, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.75 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.62 (dt, J = 16.8, 4.7 Hz, 8H), 2.95 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.78 (s, 4H), 2.71 - 2.64 (m, 4H), 2.53 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.50 - 2.35 (m, 10H), 2.02 - 1.78 (m, 12H)。ＣＤＣｌ３ １８６３－７０－ｐｒｅｐ２の１Ｈ ＮＭＲは、９３％の純度で生成物の構造と一致していた。ＬＣＭＳ、塩基性、１８６３－７０Ｂ－ｐｒｅｐ、４分でｍ／ｚ ７９２．４［Ｍ＋Ｈ］＋、２５４ｎｍで純度９６％。２５４ｎｍでのＬＣにより、４％ＣＭＯ３を含有。
【0061】
実施例２：４－（４－（モルホリノメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（２０２ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）及び（４－（モルホリノメチル）フェニル）ボロン酸（１８８ｍｇ、０．８５２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（５６８μＬの２Ｍ水溶液、１．１３５ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（６．６４ｍｇ、８．５２μｍｏｌ）を加え、混合物を再び脱気した後、全体を８０℃に加熱した（ブロック温度、予熱）。１８時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｂｕｃｈｉ ＦｌａｓｈＰｕｒｅ、事前吸着、（１：１ ＴＨＦ：ＤＣＭ）中の１０％→７０％［９：１（１：１ ＴＨＦ：ＤＣＭ）：ＭｅＯＨ中７Ｍ ＮＨ３］によって、中程度の純度の生成物の２つのカットを得た。生成物バンドの中心を蒸発させ、ＭｅＣＮ（２ｍＬ）に取った。約４８時間後、これを濾過し、固形物を廃棄した。その間、生成物バンドの端からの物質を蒸発させ、イソヘキサンから再スラリー化した。この物質を上記のバッチからのＭｅＣＮ液と組み合わせ、得られたものをカラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ、ＤＣＭ中３０％→７０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中の０．７Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中でローディング）により精製した。このバンドの中央のカットを蒸発させて、生成物を明赤色のガラス状固体（５０ｍｇ、２２％）として得た。
【化9】
【0062】
ＬＣＭＳ：６．６８分で実測値ｍ／ｚ８０８．３（Ｃ４５Ｈ５８Ｎ７Ｏ７（ＭＨ＋）は８０８．４を必要とする）。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 10.24 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.30 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.83 - 3.71 (m, 6H), 3.65 - 3.59 (m, 10H), 2.95 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.70 - 2.67 (m, 4H), 2.58 - 2.50 (m, 6H), 2.47 - 2.40 (m, 10H), 1.96 (app p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.90 - 1.84 (m, 6H)。
【0063】
実施例３：２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）－９－（３－（ピロリジン－１－イルメチル）フェニル）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（１４９ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）及び１－（３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）ピロリジン（１８０ｍｇ、０．６２８ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（４１９μＬの２Ｍ水溶液、０．８３７ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（４．９０ｍｇ、６．２８μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中０．７Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３））、ＤＭＳＯ中でローディング）によって精製して、より良好であるが依然として不十分な純度の生成物を得た。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により再精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（１６ｍｇ、１０％）を得た。
【化10】
【0064】
ＬＣＭＳ：６．４２分で実測値ｍ／ｚ ７９２．４：（Ｃ４５Ｈ５８Ｎ７Ｏ６（ＭＨ＋）は７９２．４を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.26 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.47 - 7.37 (m, 2H), 7.35 (br s, 1H), 7.26 (dt, J = 7.2, 1.7 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 7.4, 2H), 4.13 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.82 - 3.65 (m, 4H), 3.52 - 3.58 (m, 8H), 2.95 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.69 - 2.66 (m, 4H), 2.61 - 2.30 (m, 16H), 1.93 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 1.89 - 1.75 (m, 10H)。
【0065】
実施例４：２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－４－（４－（ピペリジン－１－イルメチル）フェニル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（１５５ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）及び１－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）ピペリジン（１９７ｍｇ、０．６５３ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（４３６μＬの２Ｍ水溶液、０．８７１ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（５．１０ｍｇ、６．５３μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中０．７Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（６１ｍｇ、３５％）を得た。
【化11】
【0066】
ＬＣＭＳ：７．３８分で実測値ｍ／ｚ８０６．３：（Ｃ４６Ｈ６０Ｎ７Ｏ６（ＭＨ＋）は８０５．５を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.25 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.14 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.75 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 3.64 - 3.50 (m, 10H), 2.95 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.69 - 2.66 (m, 4H), 2.56 - 2.29 (m, 16H), 1.93 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.89 - 1.82 (m, 6H), 1.68 - 1.62 (m, 4H), 1.53 - 1.49 (m, 2H)。
【0067】
実施例５：４－（４－（（ジエチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（１５５ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）及びＮ－エチル－Ｎ－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）エタンアミン（１８９ｍｇ、０．６５３ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（４３６μＬの２Ｍ水溶液、０．８７１ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（５．１０ｍｇ、６．５３μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＢｕｃｈｉＦｌａｓｈＰｕｒｅ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中１．４Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（８１ｍｇ、４７％）を得た。
【化12】
【0068】
ＬＣＭＳ：６．９３分で実測値ｍ／ｚ７９４．２：（Ｃ４５Ｈ６０Ｎ７Ｏ６（ＭＨ＋）は７９４．５を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.24 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.28 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.79 - 3.71 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.58 - 3.53 (m, 8H), 2.94 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.69 - 2.66 (m, 4H), 2.61 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 2.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.47 - 2.30 (m, 10H), 1.93 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 1.88 - 1.82 (m, 6H), 1.12 (t, J = 7.1 Hz, 6H)。
【0069】
実施例６：４－（４－（（シクロペンチルアミノ）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（１５３ｍｇ、０．２１５ｍｍｏｌ）及びＮ－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）シクロペンタンアミン（１９４ｍｇ、０．６４５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（４３０μＬの２Ｍ水溶液、０．８６０ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（５．０３ｍｇ、６．４５μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＢｕｃｈｉＦｌａｓｈＰｕｒｅ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中１．４Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（２９ｍｇ、１７％）を得た。
【化13】
【0070】
ＬＣＭＳ：６．５７分で実測値ｍ／ｚ８０６．４：（Ｃ４６Ｈ６０Ｎ７Ｏ６（ＭＨ＋）は８０５．５を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.25 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.45 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 7.4, Hz, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.75 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 3.58 - 3.53 (m, 8H), 3.23 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 2.95 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.69 - 2.66 (m, 4H), 2.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.47 - 2.30 (m, 10H), 1.96 -1.89 (m, 4H), 1.88 - 1.80 (m, 6H), 1.79 - 1.72 (m, 2H), 1.65 - 1.58 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 2H)。CH2NHCHは測定されなかった。
【0071】
実施例７：４－（４－（アゼパン－１－イルメチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（２２３ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）及び１－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）アゼパン（２９６ｍｇ、０．９４０ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（６２７μＬの２Ｍ水溶液、１．２５３ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（７．３３ｍｇ、９．４０μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＢｕｃｈｉＦｌａｓｈＰｕｒｅ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中１．４Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（１３０ｍｇ、５１％）を得た。
【化14】
【0072】
ＬＣＭＳ：７．６９分で実測値ｍ／ｚ８２０．３：（Ｃ４７Ｈ６２Ｎ７Ｏ６（ＭＨ＋）は８２０．５を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.25 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.14 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 4H), 3.57 - 3.53 (m, 8H), 2.95 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.78 - 2.61 (m, 8H), 2.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.47 - 2.30 (m, 10H), 1.93 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.88 - 1.82 (m, 6H), 1.73 - 1.68 (m, 8H)。
【0073】
実施例８：４－（４－（（４－メチルピラジン－１－イル）メチル）フェニル）－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン
ジオキサン（４ｍＬ）中の４－ブロモ－２，７－ビス（３－モルホリノプロピル）－９－（（２－（ピロリジン－１－イル）エチル）アミノ）ベンゾ［ｌｍｎ］［３，８］フェナントロリン－１，３，６，８（２Ｈ，７Ｈ）－テトラオン（２１３ｍｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）及び１－メチル－４－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンジル）ピペラジン（２８４ｍｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）の撹拌混合物を炭酸カリウム（５９９μＬの２Ｍ水溶液、１．１９７ｍｍｏｌ）で処理し、脱気した。Ｓ－Ｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（７．０１ｍｇ、８．９８μｍｏｌ）を充填し、混合物を再び脱気し、全体を８０℃に加熱した。１６時間後、混合物を冷却し、次いで水（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１２ｇ ＢｕｃｈｉＦｌａｓｈＰｕｒｅ、ＤＣＭ中３０％→６０％（９：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ中３．５Ｍ ＮＨ３）、ＤＣＭ中のローディング）により、中程度の純度の生成物が得られた。残留物を逆相カラムクロマトグラフィー（１２ｇ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｃ－１８、水中７５％→１００％（ＭｅＯＨ中７０ｍＭ ＮＨ３）、ＤＭＳＯ中でローディング）により精製し、明赤色のガラス状固体として生成物（１１１ｍｇ、４５％）を得た。
【化15】
【0074】
ＬＣＭＳ：６．０６分で実測値ｍ／ｚ８２１．２：（Ｃ４６Ｈ６１Ｎ８Ｏ６（ＭＨ＋）は８２１．５を必要とする）。1H NMR (500 MHz, 塩化メチレン-d2) δ 10.25 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.75 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.57 - 3.53 (m, 8H), 2.95 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.77 - 2.20 (m, 27H), 1.94 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.89 - 1.80 (m, 6H)。
【0075】
生物物理学及び細胞生物学のデータ
細胞増殖アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Invitrogen）は、増殖又は細胞毒性アッセイで生細胞数を測定するための比色法である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔは、新規テトラゾリウム化合物［３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム、内部塩；ＭＴＳ］、及び電子カップリング試薬（フェナジンエトサルフェート；ＰＥＳ）を含む。ＰＥＳは化学的安定性が強化されているため、ＭＴＳと組み合わせて安定した溶液を形成することができる。ＭＴＳテトラゾリウム化合物（オーウェン試薬）は、細胞によって生体還元されて、組織培養培地に可溶性の着色ホルマザン生成物になる。アッセイを、少量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔを培養ウェルに直接添加し、１時間～４時間インキュベートしてから、９６ウェルプレートリーダーで４９０ｎｍの吸光度を記録することによって実施する。４９０ｎｍでの吸光度で測定されるホルマザン生成物の量は、培養中の生細胞の数に正比例する。キットを製造業者の指示に従って使用した。ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２細胞で各実施例化合物と９６時間インキュベートした後、ＭＴＳ Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｒｅ ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Promega Ltd）を使用して各試料の細胞増殖を測定した。阻害のパーセンテージを、ＤＭＳＯで処理した対照試料の平均に対して計算した。
細胞増殖アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Invitrogen）は、増殖又は細胞毒性アッセイで生細胞数を測定するための比色法である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔは、新規テトラゾリウム化合物［３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム、内部塩；ＭＴＳ］、及び電子カップリング試薬（フェナジンエトサルフェート；ＰＥＳ）を含む。ＰＥＳは化学的安定性が強化されているため、ＭＴＳと組み合わせて安定した溶液を形成することができる。ＭＴＳテトラゾリウム化合物（オーウェン試薬）は、細胞によって生体還元されて、組織培養培地に可溶性の着色ホルマザン生成物になる。アッセイを、少量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔを培養ウェルに直接添加し、１時間～４時間インキュベートしてから、９６ウェルプレートリーダーで４９０ｎｍの吸光度を記録することによって実施する。４９０ｎｍでの吸光度で測定されるホルマザン生成物の量は、培養中の生細胞の数に正比例する。キットを製造業者の指示に従って使用した。ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２細胞で各実施例化合物と９６時間インキュベートした後、ＭＴＳ Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｒｅ ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Promega Ltd）を使用して各試料の細胞増殖を測定した。阻害のパーセンテージを、ＤＭＳＯで処理した対照試料の平均に対して計算した。
【0076】
【表1】
【0077】
ｉｎ ｖｉｖｏ異種移植片有効性研究
体重およそ２５ｇ～３２ｇの５週齢～７週齢のマウスに研究のため移植し、Charles Riverから購入した。膵臓腫瘍細胞の移植手順では、ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２細胞（マトリゲル中１×１０７）を２２ゲージの針を使用してマウスの後部側面に皮下移植した。評価されるパラメータは、腫瘍のサイズ及び動物の体重を含む。腫瘍体積を週に３回測定し、体重を少なくとも週に３回測定した。有効性試験において、動物の腫瘍がおよそ５０ｍｍ３に達したときに、治療群への割り当てを無作為に行った。動物（ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２腫瘍を有する雌性無胸腺ヌードマウス）に、２８日間、週２回、Ｃ１では１０ｍｇ／ｋｇ及び１５ｍｇ／ｋｇの用量で、実施例１ではその１０倍大きい細胞効力のため０．５ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与した。各群は８匹の動物を含んだ。この研究で使用された全てのプロトコルは、適切な動物福祉及び倫理審査委員会によって承認され、全ての手順は、１９８６年の英国動物（科学的手順）法のガイドラインの下で行われた。結果を以下の表及び図１に示す。
実施例１
体重およそ２５ｇ～３２ｇの５週齢～７週齢のマウスに研究のため移植し、Charles Riverから購入した。膵臓腫瘍細胞の移植手順では、ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２細胞（マトリゲル中１×１０７）を２２ゲージの針を使用してマウスの後部側面に皮下移植した。評価されるパラメータは、腫瘍のサイズ及び動物の体重を含む。腫瘍体積を週に３回測定し、体重を少なくとも週に３回測定した。有効性試験において、動物の腫瘍がおよそ５０ｍｍ３に達したときに、治療群への割り当てを無作為に行った。動物（ＭＩＡ－ＰＡＣＡ２腫瘍を有する雌性無胸腺ヌードマウス）に、２８日間、週２回、Ｃ１では１０ｍｇ／ｋｇ及び１５ｍｇ／ｋｇの用量で、実施例１ではその１０倍大きい細胞効力のため０．５ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与した。各群は８匹の動物を含んだ。この研究で使用された全てのプロトコルは、適切な動物福祉及び倫理審査委員会によって承認され、全ての手順は、１９８６年の英国動物（科学的手順）法のガイドラインの下で行われた。結果を以下の表及び図１に示す。
【化16】
【0078】
【表2】
【0079】
【表3】
【0080】
図１のグラフは、２８日間の静脈内投与後、続いて２８日間測定（AXIS BioServicesによって実施）した後のＭＩＡ－ＰＡＣＡ２モデルの異種移植データを示す。示されるデータは、２３日目まではｎ＝８、そして研究終了まではｎ＝４の平均±ＳＤである。データは、実施例１の化合物が、週１回の投与計画においてさえ、膵臓腫瘍の成長を阻害し、比較化合物Ｃ１又は既知の抗癌剤であるゲムシタビンよりもかなり大きく腫瘍のサイズを縮小したことを示す。さらに、実施例１及び投与スケジュールは忍容性が高く、副作用の兆候は見られなかった。開始時の腫瘍体積は０．４ｍｍ３であった。実施例１は、調査した両方の投与計画において、週に１回及び週に２回、両方とも１ｍｇ／ｋｇの用量で活性であった。両方とも、投与期間の終わりに５／８の腫瘍体積の完全な退縮を示した。完全退縮コホートでは、腫瘍は完全に消失し、投与から２８日後に再成長は見られなかった。Ｃ１群及び実施例１群の少数の腫瘍は完全な退縮を示さないが、腫瘍成長の低減を示し、ビヒクル対照群よりも一貫して小さい体積をもたらす。
【0081】
ＸＴＴアッセイ
ＣｙＱＵＡＮＴ ＸＴＴ細胞生存アッセイ（Invitrogen）は、生存可能な哺乳動物細胞の一貫した比色検出を生成する、完全で最適化されたアッセイである。アッセイキットは、ＸＴＴ試薬（２，３－ビス－（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキサニリド）及び電子カップリング試薬の２つの試薬からなる。ＸＴＴ試薬を、細胞の酸化還元電位の関数として細胞の生存率を評定するために使用し、電子カップリング試薬はアッセイのダイナミックレンジを改善する。キットを製造業者の指示に従って使用した。
ＣｙＱＵＡＮＴ ＸＴＴ細胞生存アッセイ（Invitrogen）は、生存可能な哺乳動物細胞の一貫した比色検出を生成する、完全で最適化されたアッセイである。アッセイキットは、ＸＴＴ試薬（２，３－ビス－（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキサニリド）及び電子カップリング試薬の２つの試薬からなる。ＸＴＴ試薬を、細胞の酸化還元電位の関数として細胞の生存率を評定するために使用し、電子カップリング試薬はアッセイのダイナミックレンジを改善する。キットを製造業者の指示に従って使用した。
【0082】
【表4】
【0083】
要約すると、本発明の化合物は、多くの癌細胞株において抗腫瘍活性を示す。
【図1】