特許 7476467 標的化キメラタンパク質及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-04-22

(45)【発行日】2024-05-01

(54)【発明の名称】標的化キメラタンパク質及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240423BHJP

   A61K 38/21 20060101ALI20240423BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240423BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240423BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

A61K38/21

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P35/02

C07K19/00

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2019563679

(86)(22)【出願日】2018-02-05

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-03-05

(86)【国際出願番号】 EP2018052814

(87)【国際公開番号】W WO2018141964

(87)【国際公開日】2018-08-09

【審査請求日】2021-02-02

【審判番号】

【審判請求日】2022-10-14

(31)【優先権主張番号】62/454,993

(32)【優先日】2017-02-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】519287389

【氏名又は名称】オリオンズ バイオサイエンス ビーブイ

(73)【特許権者】

【識別番号】512027441

【氏名又は名称】ブイアイビー ブイゼットダブリュ

(73)【特許権者】

【識別番号】513190014

【氏名又は名称】ウニベルシテイト ヘント

(74)【代理人】

【識別番号】100084995

【弁理士】

【氏名又は名称】加藤 和詳

(72)【発明者】

【氏名】クレイ、ニコライ

(72)【発明者】

【氏名】タベルニエ、ジャン

【合議体】

【審判長】加々美 一恵

【審判官】上條 肇

【審判官】鶴 剛史

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５００７９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／１３８６００（ＷＯ，Ａ２）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N 15/00 - 15/90

C07K 1/00 - 19/00

ＣＡＰｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０／ＪＭＥＤＰｌｕｓ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）シグナル調節タンパク質α－１（ＳＩＲＰ１α）を認識して結合する認識ドメインを含む標的化部分であって、前記認識ドメインが、全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロプロテイン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２を含む標的化部分、及び
（ｂ）改変型シグナル伝達物質であって、前記改変型シグナル伝達物質は、配列番号４６又は配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒトインターフェロンα２（ＩＦＮα２）を含み、野生型ＩＦＮα２と比べて、ＩＦＮ－α受容体に対する親和性又は活性の低下又は除去をもたらすＲ１４９Ａの変異を有している改変型シグナル伝達物質、
を含み、
前記親和性又は活性の低下は、前記標的化部分への結合によって回復可能であり、
前記標的化部分と改変型ＩＦＮα２シグナル伝達物質が１つ又は複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。

【請求項2】

免疫細胞上の抗原又は受容体を認識して結合する認識ドメインを含む、１つ又は複数の追加標的化部分をさらに含み、前記免疫細胞がマクロファージ、単球、及び樹状細胞から選択される、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項3】

前記１つ又は複数の追加標的化部分が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及びＣｌｅｃ９Ａのうちの１つ又は複数を認識する、請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項4】

前記認識ドメインが目的の抗原又は受容体を機能的に調整する、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項5】

前記認識ドメインが目的の抗原又は受容体を認識して結合するがその機能を調整しない、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項6】

前記改変型シグナル伝達物質が、シグナル伝達物質の受容体における親和性又は活性を野生型シグナル伝達物質と比べて低下させる１つ又は複数の変異を含む、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項7】

（ａ）ＳＩＲＰ１αを認識して結合する認識ドメインを含む第１の標的化部分、
（ｂ）ＰＤ－１を認識して結合する認識ドメインを含む第２の標的化部分、及び
（ｃ）野生型ＩＦＮα２と比べてＩＦＮ－α受容体に対する親和性又は活性の低下又は除去をもたらすＲ１４９Ａの変異を有する改変型ヒトインターフェロンα２（ＩＦＮα２）
を含み、
前記第１の標的化部分及び前記第２の標的化部分からなる群より選択される少なくとも１つの標的化部分と前記改変型ＩＦＮα２が１つ又は複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。

【請求項8】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質を含む、がんの治療において使用するための医薬。

【請求項9】

前記がんが、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳及び中枢神経系のがん、乳がん、腹膜がん、子宮頸部がん、絨毛癌、大腸がん、結合組織がん、消化器がん、子宮内膜がん、食道がん、眼のがん、頭頚部がん、胃腸がん、神経膠芽腫、肝癌、肝細胞癌、上皮内新生物、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸がん、呼吸器がん、唾液腺癌、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮又は子宮内膜のがん、泌尿器がん、外陰がん、リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、並びに他のがん腫及び肉腫、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常血管増殖、及びメグズ症候群のうちの１つ又は複数から選択される、請求項８に記載の医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は２０１７年２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／４５４，９９３号の利益と優先権を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0002】

技術分野
本発明はＳＩＲＰ１αを認識して結合する少なくとも１つの標的化部分を含むキメラタンパク質、並びに診断薬及び治療薬としてのそれらの使用に部分的に関する。本発明はまた、前記キメラタンパク質を含む医薬組成物、及びがんを含む様々な疾患の治療におけるそれらの使用に関する。

【0003】

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出され、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる配列表を含む。２０１８年１月３１日に作成されたそのＡＳＣＩＩコピーはＯＲＮ－０２７ＰＣ－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称であり、サイズが２８２，６２４バイトである。

【背景技術】

【0004】

がんは毎年世界中で７００万人近くの死因となっており、且つ、医療の大きな進歩にもかかわらずほとんど治療不可能であることが今日までに示されている世界的な健康上の問題である。苛立たしいことに、がんは免疫系による検出及び駆除を潜り抜け、それによって疾患に対する身体の防護を回避する方法を発達させているようである。例えば、がん細胞がマクロファージによる貪食を回避する１つのメカニズムは、マクロファージ上の抑制性受容体、すなわち、シグナル調節タンパク質α－１（ＳＩＲＰ１α）に関与するＣＤ４７の上方制御を介したものである。具体的には、がん細胞上のＣＤ４７とＳＩＲＰ１αとの相互作用によって、がん細胞の貪食を阻害する「私を食べないで（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」というシグナルが生じる。Ｍｙｃ癌遺伝子はがん細胞でのＣＤ４７の発現、すなわちＭｙｃの強力なｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍成長促進活性に関係があるとされている免疫抑制機構を誘導する。

【0005】

Ｍｙｃファミリーの細胞性癌遺伝子の活性化はヒトのがんにおけるがんの発生に関わる最も一般的な事象のうちの１つである。Ｍｙｃタンパク質ファミリーは、配列特異的転写因子として機能すると考えられている非常に近縁の３種類の細胞核リンタンパク質（ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、及びＬ－Ｍｙｃ）をコードする。Ｍｙｃタンパク質は、成長、増殖、アポトーシス、代謝、分化、自己新生、及び血管新生を含む生物学的過程にとって重要な様々な遺伝子を活性化する。がん細胞において非常に高活性なＭｙｃタンパク質を阻害しようとする努力にもかかわらず、この癌遺伝子は治療的標的化に対して高い耐性を保ち続ける。さらに、活性のあるＭｙｃタンパク質によって様々な制がん剤に対する腫瘍の耐性が促進されることを示唆する証拠がある。

【0006】

よって、Ｍｙｃ駆動性の癌を含むがんを効果的に標的化することができる新規治療薬の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0007】

様々な態様において、本発明は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分を有するキメラタンパク質に関する。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質に、例えば、マクロファージ細胞を直接的又は間接的に目的の部位へ動員する用途を有する。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、活性を減弱するために改変されていてもよいシグナル伝達物質、例えば、限定されないが、インターフェロン、インターロイキン、及び腫瘍壊死因子をさらに含む。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、目的の他の標的（例えば、抗原、受容体）に結合する追加標的化部分を含む。ある実施形態では、目的の他の標的（例えば、抗原、受容体）は腫瘍細胞上に存在する。別の実施形態では、目的の他の標的（例えば、抗原、受容体）は免疫細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、免疫細胞（例えばマクロファージ）を作用部位（非限定的な例として、腫瘍微小環境など）へ直接的又は間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、マクロファージによる標的細胞（例えば腫瘍細胞）の貪食を促進する。

【0008】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、がん、感染症、免疫障害、及び他の疾患及び障害などの様々な疾患又は障害の治療に使用され、本発明は様々な治療方法を包含する。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1A】抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨを使用する結合アッセイを示す図である。抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨの段階希釈物をＦＡＣＳに基づいたｍＳＩＲＰＡ結合アッセイにおいてマウスＳＩＲＰ１α発現細胞に対して試験した。蛍光強度の幾何平均をプロットした。

【図1B】抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨを使用する結合アッセイを示す図である。抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨの段階希釈物をマウスＣＤ４７－マウスＳＩＲＰα結合アッセイにおいて試験した。三連の測定値の平均値±標準偏差をプロットした。

【図2A】抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラを使用するＢ１６ｉｎ ｖｉｖｏ試験を示す図である。ＰＢＳ対照に対する腫瘍成長が比較されている。抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラは下の曲線であり、ＰＢＳは上の曲線である。

【図2B】抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラを使用するＢ１６ｉｎ ｖｉｖｏ試験を示す図である。図２Ａの腫瘍試験のマウスにおける様々な安全性パラメーター、すなわち、白血球数（「ｗｂｃ」）、リンパ球数（「ｌｙ」）、好中球数（「ｎｅ」）、単球数（「ｍｏ」）、赤血球数（「ｒｂｃ」）、ヘモグロビン（「ｈｂ」）；ヘモクリット（「ｈｃｔ」）、血小板（「ｐｌｔ」）、及び平均血小板容積（「ｍｐｖ」）を評価した。各セットにおいて、左のバーはＰＢＳであり、右のバーは抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒである。

【図3】１００ｎｇ／ｍｌのキメラによる刺激を受け（又は刺激を受けず）、且つ、リン酸化ＳＴＡＴ１について染色されたＢ１６細胞を示す図である。データは平均蛍光強度としてプロットされている。抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／抗マウスＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒ、及び改変型ヒトＩＦＮα Ｑ１２４Ｒに対する単一特異性抗ＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ融合体（非標的化ＩＦＮ Ｑ１２４Ｒ対照）を分析した。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明は、シグナル調節タンパク質α－１（ＳＩＲＰ１α）を特異的に認識して結合する標的化部分を有する標的化キメラタンパク質の発見に部分的に基づく。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は多重特異性であり、１つ又は複数の標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は１種類又は複数種類の受容体に対する親和性が低下している改変型シグナル伝達物質（例えば、インターフェロン）をさらに含む。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、マクロファージなどの免疫細胞に結合し、それらの免疫細胞を治療作用が必要な部位（例えば、腫瘍又は腫瘍微小環境）へ直接的又は間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、マクロファージによる腫瘍細胞の貪食を誘導及び／又は促進する。本開示のキメラタンパク質は有益な治療特性及び副作用の低減を示す。

【0011】

標的化キメラタンパク質
様々な実施形態において、本発明は、シグナル調節タンパク質α－１（ＳＩＲＰ１α）を特異的に認識して結合する標的化部分を含む標的化キメラタンパク質に関する。ＳＩＲＰ１α（ＳＩＲＰαとしても知られる）は、抑制性メンバー（ＳＩＲＰα）、活性化メンバー（ＳＩＲＰβ）、非シグナル伝達メンバー（ＳＩＲＰγ）、及び可溶性メンバー（ＳＩＲＰδ）を包含する細胞免疫受容体ファミリーに属する。ＳＩＲＰ１αは、マクロファージ、顆粒球、骨髄性樹状細胞（ＤＣ）、肥満細胞、及び造血幹細胞を含むそれらの前駆細胞を含む骨髄性細胞上に主に発現する。ＳＩＲＰ１αは、広範に発現する膜貫通糖タンパク質ＣＤ４７と相互作用して貪食を調節する抑制性受容体として作用する。特に、標的細胞上に発現したＣＤ４７のマクロファージ上のＳＩＲＰ１αとの結合によって、標的細胞の貪食を負に調節する抑制性シグナルが生じる。

【0012】

様々な実施形態において、本発明は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分を含む標的化キメラタンパク質に関する。

【0013】

様々な実施形態において、本発明は、単球上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分を含む標的化キメラタンパク質に関する。

【0014】

様々な実施形態において、本発明は、ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージ）上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分を含む標的化キメラタンパク質に関する。

【0015】

様々な実施形態において、本発明は、これらに限定されないがｃＤＣ２及びｐＤＣを含む樹状細胞上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分を含む標的化キメラタンパク質に関する。

【0016】

様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、認識ドメインはＳＩＲＰ１α上に存在する１つ又は複数の直鎖状エピトープを認識する。本明細書において使用される場合、直鎖状エピトープとはＳＩＲＰ１α上に存在するアミノ酸の任意の連続配列のことをいう。別の実施形態では、認識ドメインは、ＳＩＲＰ１α上に存在する１つ又は複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書において使用される場合、立体構造エピトープとは抗原認識ドメインが認識可能である特徴及び／又は形状及び／又は三次構造を有する三次元面を形成する（不連続であってもよい）アミノ酸の１つ又は複数のセクションのことをいう。

【0017】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αの全長及び／又は成熟型及び／又はアイソフォーム及び／又はスプライスバリアント及び／又は断片及び／又は他の任意の天然類似体若しくは合成類似体、バリアント、若しくは変異体に結合してもよい標的化部分を含む。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１αはヒトＳＩＲＰ１αである。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、単量体、二量体、ヘテロ二量体、多量体、及び会合体を含む任意の形態のヒトＳＩＲＰ１αに結合してもよい標的化部分を含む。ある実施形態では、標的化部分は単量体型のＳＩＲＰ１αに結合する。別の実施形態では、標的化部分は二量体型のＳＩＲＰ１αに結合する。

【0018】

ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、ヒトＳＩＲＰ１α上に存在する１つ又は複数のエピトープを認識する認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、標的化部分は、シグナルペプチド配列を含むヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列（下線部）を含む例示的なヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドを以下に示す。

【化1】

【0019】

ある実施形態では、標的化部分は、シグナルペプチド配列を含まないヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列を含まない例示的なヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドを以下に示す。

【化2】

【0020】

ある実施形態では、標的化部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム２をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。

【化3】

【0021】

ある実施形態では、標的化部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム４をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。

【化4】

【0022】

様々な実施形態において、本発明の標的化部分は、抗体又はその誘導体など、特異的結合が可能な任意のタンパク質物質であり得る。ある実施形態では、標的化部分は抗体を含む。様々な実施形態において、抗体は、２本の重鎖と２本の軽鎖を含む全長多量体タンパク質である。それぞれの重鎖は１つの可変領域（例えばＶ_Ｈ）と少なくとも３つの定常領域（例えばＣＨ_１、ＣＨ_２、及びＣＨ_３）を含み、それぞれの軽鎖は１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）と１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、比較的保存された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）によって挟まれた相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる３つの超可変領域を含む。それら３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0023】

いくつかの実施形態では、標的化部分は抗体誘導体又は抗体フォーマットを含む。いくつかの実施形態では本開示のキメラタンパク質の標的化部分は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、及び／又は米国特許第７，１６６，６９７号などの米国特許又は米国特許出願に記載されるような、単一ドメイン抗体、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロプロテイン（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ、テトラネクチン（、アフィボディ、トランスボディ、アンチカリン、アドネクチン、アフィリン、ミクロボディ、ペプチドアプタマー、オルタラーゼ（ａｌｔｅｒａｓｅ）、プラスチック抗体、ファイロマー（ｐｈｙｌｏｍｅｒ）、ストラドボディ、マキシボディ、エビボディ、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、アルマジロリピートタンパク質、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクチボディ（ｖａｃｃｉｂｏｄｙ）、ユニボディ、アフィマー、デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、又は合成分子である。Ｓｔｏｒｚ、ＭＡｂｓ．、２０１１年５月～６月、３（３）：ｐｐ．３１０－３１７も参照されたい。

【0024】

ある実施形態では、標的化部分は、例えばラクダＶＨＨ、サメＶＨＨ、又はデザインＶＨＨなどのＶＨＨ抗体を産生する生物に由来するＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、天然重鎖抗体に特有の構造的及び機能的特性を含む抗体由来治療タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を有しないラクダ抗体に由来する完全機能性抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）と２つの定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）を含む。ＶＨＨはＮＡＮＯＢＯＤＹ又はＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの商標で商業的に入手可能である。

【0025】

ある実施形態では、標的化部分はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨはヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨＨである。

【0026】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社、英国、ケンブリッジ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、又は三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性又は多重特異性、例えば、単一特異性、二特異性、又は三特異性である。例示的な完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹは、例えば国際公開第２０１６／１１３５５５号及び国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されており、それらの文献の開示の全体が参照により取り込まれる。

【0027】

例えば、いくつかの実施形態では本発明のキメラタンパク質は、選択的にＳＩＲＰ１αに結合する１種類又は複数種類の抗体、抗体誘導体若しくは抗体フォーマット、ペプチド若しくはポリペプチド、ＶＨＨ、又は融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、特異的にＳＩＲＰ１αに結合する抗体又はその誘導体である標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、特異的にＳＩＲＰ１αに結合するラクダ科重鎖抗体（ＶＨＨ）である標的化部分を含む。

【0028】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、４つの「フレームワーク領域」（ＦＲ）及び３つの「相補性決定領域」（ＣＤＲ）を有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである標的化部分を含む。本明細書において使用される場合、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン内の領域を指す。本明細書において使用される場合、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合可能なアミノ酸配列を含むＶＨＨ内の可変領域を指す。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及び／又はＣＤＲ３配列の少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。

【0029】

様々な実施形態において、本発明の標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを認識して結合することが知られている重鎖配列、軽鎖配列、重鎖可変領域配列、軽鎖可変領域配列、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、及びフレームワーク領域配列の任意の組合せを含み得る。

【0030】

様々な実施形態において、本技術は本明細書に記載されるＳＩＲＰ１α標的化部分の任意の天然類似体又は合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログ、及びオルソログ（本明細書において、まとめて「類似体」という）を使用することを意図している。様々な実施形態において、ＳＩＲＰ１α標的化部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、又は他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0031】

様々な実施形態において、キメラタンパク質は、本明細書に開示される配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも６０％同一である配列を含む標的化部分を含む。例えば、前記キメラタンパク質は、本明細書に開示される配列のうちのいずれかに対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一である（例えば、本明細書に開示される配列のうちのいずれか１つに対して約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列が同一である）配列を含む標的化部分を含む場合がある。

【0032】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αを認識して結合することが知られている任意の標的化部分配列について１つ又は複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αを認識して結合することが知られている任意の標的化部分配列について１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、３０個、４０個、又は５０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸変異は、独立して置換、挿入、欠失、及び短縮化から選択され得る。

【0033】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、該アミノ酸変異には保存的置換及び／又は非保存的置換が含まれ得る。

【0034】

「保存的置換」は、例えば、含まれるアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性についての類似性に基づいて行われてもよい。２０種類の天然アミノ酸は、（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅの６つの標準的アミノ酸グループにグループ分けできる。

【0035】

本明細書において使用される場合、「保存的置換」は、上記の６つの標準的アミノ酸グループのうちの同じグループに記載される別のアミノ酸によるアミノ酸の交換であると規定される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換によってそのように改変されたポリペプチド内で１個の負の電荷が維持される。さらに、グリシン及びプロリンはそれらのαヘリックスを混乱させる能力に基づいて互いに置換され得る。

【0036】

本明細書において使用される場合、「非保存的置換」は、上記の６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）のうちの異なるグループに記載される別のアミノ酸によるアミノ酸の交換であると規定される。

【0037】

様々な実施形態において、置換には、非典型的アミノ酸も含まれ得る。例示的な非典型的アミノ酸としては、一般的に、セレノシステイン、ピロロリシン、Ｎ－ホルミルメチオニン、β－アラニン、ＧＡＢＡ、及びδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えばβ－メチルアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、及びアミノ酸類似体が挙げられるがこれらに限定されない。

【0038】

様々な実施形態において、アミノ酸変異は、標的化部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、又はＣＤＲ３領域）中に存在し得る。別の実施形態では、アミノ酸の変更は、標的化部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１領域、ＦＲ２領域、ＦＲ３領域、又はＦＲ４領域）中に存在し得る。

【0039】

アミノ酸配列の改変は、当技術分野の任意の既知の方法、例えば、部位特異的変異誘発又はＰＣＲに基づいた変異誘発を用いて行われ得る。そのような方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、プレーンビュー、ニューヨーク州、１９８９、及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州、１９８９に記載されている。

【0040】

様々な実施形態において、変異は、特異的にＳＩＲＰ１αを認識して結合する本開示のキメラタンパク質の能力を実質的に低下させることがない。様々な実施形態において、変異は、特異的にＳＩＲＰ１αに結合し、且つ、ＳＩＲＰ１αの機能を調整（例えば、部分的又は完全に中和）しない本開示のキメラタンパク質の能力を実質的に低下させない。

【0041】

様々な実施形態において、ＳＩＲＰ１αの全長、及び／又は成熟型、及び／又はアイソフォーム、及び／又はスプライスバリアント、及び／又は断片、及び／又は単量体型、及び／又は二量体型、及び／又は他の任意の天然若しくは合成の類似体、バリアント、若しくは変異体に対する本開示のキメラタンパク質の結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって記載され得る。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αの全長、及び／又は成熟型、及び／又はアイソフォーム、及び／又はスプライスバリアント、及び／又は断片、及び／又は他の任意の天然若しくは合成の類似体、バリアント、若しくは変異体（単量体型及び／又は二量体型を含む）に約１ｕＭ未満、約９００ｎＭ未満、約８００ｎＭ未満、約７００ｎＭ未満、約６００ｎＭ未満、約５００ｎＭ未満、約４００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、又は約５ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＫ_Ｄで結合する標的化部分を含む。

【0042】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、目的の抗原、すなわちＳＩＲＰ１αに結合するがその機能を調整しない標的化部分を含む。例えば、様々な実施形態において、キメラタンパク質の標的化部分は単に、抗原を標的化するだけでその抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調整しない（例えば、実質的に抑制、低減、又は中和しない）。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の標的化部分は、生物活性にとって重要である抗原の部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れているエピトープに結合する。

【0043】

他の実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、目的の抗原、すなわちＳＩＲＰ１αに結合してその機能を調整する標的化部分を含む。例えば、様々な実施形態において、キメラタンパク質の標的化部分は、抗原、すなわちＳＩＲＰ１αを標的化し、その抗原が有する生物学的作用を機能的に調整する（例えば、抑制、低減、又は中和する）。そのような結合及びそれに伴う機能の調整は、エフェクター抗原を介して活性免疫細胞を必要部位へ直接的又は間接的に動員するために本開示のキメラタンパク質を使用する方法を含む、本発明の様々な実施形態において活用され得る。

【0044】

例えば、様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍を減少又は除去する方法においてＳＩＲＰ１αを介してマクロファージを腫瘍細胞へ直接的又は間接的に動員するために使用され得る（例えば、本開示のキメラタンパク質は、抗ＳＩＲＰ１α抗原認識ドメイン及び腫瘍抗原又は受容体を指向する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有する標的化部分を有する標的化部分を含んでいてもよい）。腫瘍細胞は、貪食を回避するようにＳＩＲＰ１αと会合（engage）するＣＤ４７をしばしば上方制御するという証拠がある。よって、様々な実施形態において、マクロファージを腫瘍細胞へ直接的又は間接的に動員し、ＳＩＲＰ１αの抑制活性を抑制、低減、又は中和することによってマクロファージによる腫瘍細胞の貪食を引き起こすことが望ましいことがある。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質はマクロファージによる腫瘍細胞又は他の任意の望ましくない細胞の貪食を促進する。

【0045】

本開示のキメラタンパク質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラ及び融合体
様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、１種類又は複数種類のシグナル伝達物質とのキメラ又は融合体の一部である。よって、本発明は、例えば、ＳＩＲＰ１αに対する標的化部分及び１種類又は複数種類のシグナル伝達物質を含むキメラ又は融合タンパク質を提供する。

【0046】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、その受容体のうちの１つ又は複数に対する親和性又は活性を低下させるように改変されており、それによって活性（アゴニズム又はアンタゴニズムを含む）が減弱され、及び／又はキメラ若しくは融合タンパク質の非特異的シグナル伝達若しくは望ましくない隔離を防止する。様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、野生型ではアンタゴニスト的であり、そのアンタゴニスト活性を減弱させる１つ又は複数の変異を有する。様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、１つ又は複数の変異のためにアンタゴニスト的であり、例えばアゴニスト的シグナル伝達物質がアンタゴニスト的シグナル伝達物質に変換され、そのような変換されたシグナル伝達物質は、（例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号に記載されるように）所望によりそのアンタゴニスト活性を減弱させる１つ又は複数の変異も有してもよい。

【0047】

よって、様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、１つ又は複数の変異を有するシグナル伝達物質の改変型（例えば変異体）である。様々な実施形態において、それらの改変（例えば変異）によって、改変型シグナル伝達物質は、未改変型又は未変異型、すなわち野生型のシグナル伝達物質と比べて（例えば、同じシグナル伝達物質を野生型と改変型又は変異体型との間で比較して）、結合親和性の低下、内在性活性の低下、及び特定の生物活性の低下うちの１つ又は複数など、活性のうちの１つ又は複数が減衰される。いくつかの実施形態では、結合又は親和性を減衰又は低下させる変異には、結合又は親和性を実質的に低下させるか又は除去する変異が含まれる。いくつかの実施形態では、結合又は親和性を減衰又は低下させる変異は、結合又は親和性を実質的に低下させるか又は除去する変異とは異なる。結果として、様々な実施形態において、それらの変異によって、シグナル伝達物質は、未変異型、すなわち野生型のシグナル伝達物質と比べて（例えば、同じシグナル伝達物質を野生型と改変型（例えば変異体型）との間で比較して）安全性が改善され、例えば、全身毒性が低減され、副作用が低減され、オフターゲット作用が低減される。

【0048】

本明細書に記載されるように、作用物質は１つ又は複数の改変、例えば変異により、安全性が改善され得る。様々な実施形態において、安全性の改善は、本開示のキメラタンパク質が低い毒性の低下（例えば、全身毒性及び／又は組織／器官関連毒性）、及び／又は副作用の低減若しくは実質的な除去、及び／又は忍容性の上昇、有害事象の低減若しくは実質的な除去、及び／又はオフターゲット作用の低減若しくは実質的な除去、及び／又は治療ウインドウの増大がもたらされることを意味する。

【0049】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、その受容体のうちの１つ又は複数に対する結合親和性又は活性を低下させる１つ又は複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性又は活性を実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質による活性は受容体におけるアゴニズム（例えば、治療部位における細胞作用の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質はその受容体を活性化する場合がある。前記実施形態では、変異によって、改変型シグナル伝達物質は、受容体における活性化活性が低下するか又は除去されることになる。例えば、変異によって、改変型シグナル伝達物質が低減された活性化シグナルを標的細胞に送達することになる場合があるか、又は活性化シグナルが除去される可能性がある。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質による活性は受容体におけるアンタゴニズム（例えば、治療部位における細胞作用の阻害又は減弱）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は受容体を減弱又は阻害する場合がある。これらの実施形態では、変異によって改変型シグナル伝達物質は受容体におけるアンタゴナイズ活性が低下するか又は除去されることになる。例えば、変異によって改変型シグナル伝達物質が低減された抑制シグナルを標的細胞に送達することになる場合があるか、又は抑制シグナルが除去される可能性がある。様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、１つ又は複数の変異のためにアンタゴニスト的であり、例えばアゴニスト的シグナル伝達物質が（例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号に記載されるように）アンタゴニスト的シグナル伝達物質に変換される。所望により、そのような変換されたシグナル伝達物質は、その受容体のうちの１種類又は複数種類に対するその結合親和性又は活性を低下させるか、又はその受容体のうちの１種類又は複数種類対する結合親和性若しくは活性を実質的に低下させるか若しくは除去する、１つ又は複数の変異を有していてもよい。

【0050】

いくつかの実施形態では、受容体における親和性又は活性の低下は、本明細書に記載されるような標的化部分（例えば、ＳＩＲＰ１αに対する標的化部分、又は本明細書に記載される他の任意の標的化部分）のうちの１つ又は複数との結合によって回復可能である。他の実施形態では、受容体における親和性又は活性の低下は、標的化部分のうちの１つ又は複数の活性によって実質的に回復することがない。

【0051】

様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質では、それらのシグナル伝達物質が受容体において結合親和性又は活性を減弱させるか又は除去する変異を有するため、オフターゲット作用が低減される。様々な実施形態において、このような副作用の低減は、例えば、野生型シグナル伝達物質と比較して観察される。様々な実施形態において、標的化部分が実質的な活性化に必要とされる消失した／不十分な結合（及び／又は、限定されないが、結合活性など）を補償するので、シグナル伝達物質は標的細胞上で活性を有する。様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、治療活性部位への途中では実質的に不活性であり、特異的に標的化した細胞種に対して実質的に作用し、望まれない副作用が大いに低減される。

【0052】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、ある受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合又は親和性を減弱又は低下させる１つ又は複数の変異、及び第２の受容体における結合又は親和性を実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異を含み得る。前記実施形態では、これらの変異は同じ位置にあってもよく、異なる位置にあってもよい（すなわち、同じ変異又は複数の変異であってもよい）。いくつかの実施形態では、ある受容体における結合及び／又は活性を低下させる変異は、別の受容体において実質的に低下させるか又は除去する変異と異なる。いくつかの実施形態では、ある受容体における結合及び／又は活性を低下させる変異は、別の受容体において実質的に低下させるか又は除去する変異と同一である。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、治療受容体において結合及び／又は活性を減弱させることで、（例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて）より制御されたオンターゲット治療効果を可能にする変異、及び別の受容体において結合及び／又は活性を実質的に低下させるか又は除去することで、（例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて）副作用を減少させる変異の両方の変異を有する改変型シグナル伝達物質を有する。

【0053】

いくつかの実施形態では、結合又は活性の実質的な低下又は除去は、標的化部分（例えば、ＳＩＲＰ１αに対する標的化部分又は本明細書に記載される他の任意の標的化部分）によって実質的に回復することがない。いくつかの実施形態では、結合又は活性の実質的な低下又は除去は、標的化部分によって回復可能である。様々な実施形態において、第２の受容体における結合又は活性の実質的な低下又は除去によっても他方の受容体が介在する有害作用が防止され得る。あるいは、又はさらに、他方の受容体における結合又は活性の実質的な低下又は除去により、治療キメラタンパク質が治療作用部位から離れて隔離されることが減少するか又は無くなるので、治療効果が改善されることになる。例えば、いくつかの実施形態では、これにより、他方の受容体における消失を補償する高用量の本開示のキメラタンパク質の必要性がなくなる。用量を低下させるそのような能力により、副作用の可能性がさらに低くなる。

【0054】

様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、その受容体のうちの１つ又は複数に対して、シグナル伝達物質の親和性を低下、実質的に低下、又は除去、例えば結合（例えばＫ_Ｄ）及び／又は活性化（例えば、改変型シグナル伝達物質が、例えば、Ｋ_Ａ及び／又はＥＣ_５０として測定可能なその受容体のアゴニストであるとき）及び／又は阻害（例えば、改変型シグナル伝達物質が、例えば、Ｋ_Ｉ及び／又はＩＣ_５０として測定可能な受容体のアンタゴニストであるとき）させる、１つ又は複数の変異を含む。様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体における親和性の低下によって活性（アゴニズム又はアンタゴニズムを含む）が減弱される。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質と比べて、受容体に対する親和性が、約１％、又は約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質と比べて、少なくとも約２倍低く、約３倍低く、約４倍低く、約５倍低く、約６倍低く、約７倍低く、約８倍低く、約９倍低く、少なくとも約１０倍低く、少なくとも約１５倍低く、少なくとも約２０倍低く、少なくとも約２５倍低く、少なくとも約３０倍低く、少なくとも約３５倍低く、少なくとも約４０倍低く、少なくとも約４５倍低く、少なくとも約５０倍低く、少なくとも約１００倍低く、少なくとも約１５０倍低く、又は約１０～５０倍低く、約５０～１００倍低く、約１００～１５０倍低く、約１５０～２００倍低く、又は２００倍超低い。

【0055】

キメラタンパク質がある受容体において結合を低下させる変異、及び第２の受容体において結合を実質的に低下させるか又は除去する変異を有する改変型シグナル伝達物質を含む実施形態において、ある受容体に対する改変型シグナル伝達物質の結合親和性の減弱又は低下は、他方の受容体に対する親和性の実質的な低下又は除去に満たない。いくつかの実施形態では、ある受容体に対する改変型シグナル伝達物質の結合親和性の減弱又は低下は、他方の受容体に対する親和性の実質的な低下又は除去よりも約１％、又は約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、又は約９５％少ない。様々な実施形態において、実質的な低下又は除去は、減弱又は低下よりも高い程度の結合親和性及び／又は活性の低下を意味する。

【0056】

様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて、該シグナル伝達物質の内在性活性を約７５％、又は約７０％、又は約６０％、又は約５０％、又は約４０％、又は約３０％、又は約２５％、又は約２０％、又は約１０％、又は約５％、又は約３％、又は約１％まで低下させる１つ又は複数の変異を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、該シグナル伝達物質の受容体に対する親和性を低下されることになる１つ又は複数の変異を含み、この結合親和性は標的化部分の受容体に対する結合親和性よりも低い。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差は、同じ細胞でのシグナル伝達物質／受容体の結合親和性と標的化部分／受容体の結合親和性との間の差である。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差によって、シグナル伝達物質、例えば変異型シグナル伝達物質は、オンターゲット作用を局在化させることができ、且つ、野生型シグナル伝達物質に見られる副作用の根底にあるオフターゲット作用を最小限にすることができる。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍低く、少なくとも約５倍低く、少なくとも約１０倍低く、少なくとも約１５倍低く、少なくとも約２５倍低く、少なくとも約５０倍低く、少なくとも約１００倍低く、又は少なくとも約１５０倍低い。

【0058】

受容体結合活性は、当技術分野において知られている方法を用いて測定可能である。例えば、親和性及び／又は結合活性は、結合データのスキャッチャードプロット分析及びコンピューターフィッティング（例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）によって、又はＢｒｅｃｈｔら（１９９３）によって記載されたようなフロースルー条件下での反射型干渉分光法によって評価可能であり、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0059】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質は、免疫調節因子、例えばインターロイキン、インターフェロン、及び腫瘍壊死因子のうちの１つ又は複数である。

【0060】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はインターロイキン又は改変型インターロイキンであり、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、ＩＬ－３６、又はその断片、バリアント、類似体、若しくはファミリーメンバーが挙げられる。インターロイキンは、リンパ球、単球、及びマクロファージによって合成される一群の多機能性サイトカインである。公知の機能としては、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、及びリンパ球）の増殖刺激、好中球、及びＴリンパ球の化学遊走、及び／又はインターフェロンの阻害が挙げられる。インターロイキン活性は当技術分野において知られているアッセイ法、すなわち、Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、ワシントンＤ．Ｃ．、１９８７、２２１－２２５、及びＯｒｅｎｃｏｌｅ ａｎｄ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ、（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、１、ｐｐ．１４－２０のアッセイ法を用いて決定可能である。

【0061】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロン、又はインターフェロンＩ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロン－α－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、及び２１、インターフェロン－β及びインターフェロン－γ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、及びインターフェロンωが挙げられる。

【0062】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、又は改変型の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）若しくはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＬＴ－β、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、及びＴＲＡＩＬが挙げられるがこれらに限定されない。

【0063】

本明細書に記載される野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当技術分野においてよく知られている。よって、様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、本明細書に記載されるシグナル伝達物質の公知の野生型アミノ酸配列と、少なくとも約６０％、又は少なくとも約６１％、又は少なくとも約６２％、又は少なくとも約６３％、又は少なくとも約６４％、又は少なくとも約６５％、又は少なくとも約６６％、又は少なくとも約６７％、又は少なくとも約６８％、又は少なくとも約６９％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約７１％、又は少なくとも約７２％、又は少なくとも約７３％、又は少なくとも約７４％、又は少なくとも約７５％、又は少なくとも約７６％、又は少なくとも約７７％、又は少なくとも約７８％、又は少なくとも約７９％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約８１％、又は少なくとも約８２％、又は少なくとも約８３％、又は少なくとも約８４％、又は少なくとも約８５％、又は少なくとも約８６％、又は少なくとも約８７％、又は少なくとも約８８％、又は少なくとも約８９％、又は少なくとも約９０％、又は少なくとも約９１％、又は少なくとも約９２％、又は少なくとも約９３％、又は少なくとも約９４％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９６％、又は少なくとも約９７％、又は少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性（例えば約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0064】

様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、本明細書に記載されるシグナル伝達物質のアミノ酸配列のいずれかと、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性（例えば約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0065】

様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、１つ又は複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸変異は、独立して、置換、挿入、欠失、及び短縮化から選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、該アミノ酸変異には本明細書中に記載されるような保存的置換及び／又は非保存的置換が含まれ得る。

【0066】

様々な実施形態において、置換には、本明細書中のいずれかに記載されるような非典型的アミノ酸も含まれ得る。

【0067】

本明細書に記載されるように、改変型シグナル伝達物質は、１種類又は複数種類の受容体における親和性及び／又は活性に影響する変異を有する。様々な実施形態において、治療受容体、例えば所望の治療効果（例えばアゴニズム又はアンタゴニズム）に介在する受容体において親和性及び／又は活性が低下している。様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、受容体、例えば（無差別的な結合などの結果として）所望の治療効果を介在しない受容体において、親和性及び／又は活性を実質的に低下させるか又は除去する変異を有する。本明細書に記載されるような任意のシグナル伝達物質の受容体が当技術分野において知られている。

【0068】

受容体において親和性及び／又は活性の低下（例えばアゴニスト活性）の原因となる変異の例は、各々の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる、国際公開第２０１３／１０７７９１号及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号（例えばインターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えばインターロイキンに関して）、及び国際公開第２０１５／００７９０３号（例えばＴＮＦに関して）に見出される。治療受容体において親和性及び／又は活性の低下（例えばアンタゴニスト活性）をもたらす変異の例は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号に見出される。

【0069】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、Ｉ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー内の受容体、ＴＧＦ－β受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリー内の受容体、及び／又はチロシンキナーゼスーパーファミリー内の受容体に対する該シグナル伝達物質の親和性及び／又は活性の低下させる１つ又は複数の変異を含む。

【0070】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＩ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において知られており、これらに限定されないが、ＩＬ２（β－サブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、及びＣＮＴＦの受容体が挙げられ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、及び成長ホルモンの受容体も挙げられる。Ｉ型サイトカイン受容体の例としては、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、及びＩ型ＩＬ受容体が挙げられるがこれらに限定されない。

【0071】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は異種構造のサブユニットから構成される多量体受容体であり、主にインターフェロンの受容体である。このファミリーの受容体としては、インターフェロン－α、インターフェロン－β、及びインターフェロン－γ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、及び組織因子の受容体が挙げられるがこれらに限定されない。ＩＩ型サイトカイン受容体の例としては、ＩＦＮ－α受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１及びＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮ－β受容体、ＩＦＮ－γ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１及びＩＦＮＧＲ２）、及びＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられるがこれらに限定されない。

【0072】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は７回膜貫通構造を有するＧタンパク質共役受容体であり、シグナル伝達のためにＧタンパク質に共役している。ケモカイン受容体としては、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、及びＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なケモカイン受容体としては、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、及びＣＸ３ＣＲ１が挙げられるがこれらに限定されない。

【0073】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、伸長分子を形成するＣＸＸＣＸＸＣコアモチーフの周囲にある３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共通して有する。例示的な腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーとしては、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンフォトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、オステオプロテゲリン（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、及びＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）が挙げられる。ある実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）又はＴＮＦ－Ｒ１である。別の実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）又はＴＮＦ－Ｒ２である。

【0074】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＴＧＦ－β受容体である。ＴＧＦ－β受容体は１回貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦ－β受容体としては、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、及びＴＧＦＢＲ３が挙げられるがこれらに限定されない。

【0075】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はＩｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は免疫グロブリンとの構造的相同性を共通して有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えばＰＤＧＦＲＡ及びＰＤＧＦＲＢ）、及びＳＣＦＲが挙げられるがこれらに限定されない。

【0076】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質の受容体はチロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は当技術分野においてよく知られている。約５８種類の公知の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在し、それらは２０種類のサブファミリーにグループ分けされる。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、ＦＧＦ受容体及びそれらの様々なアイソフォーム、例えばＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、及びＦＧＦＲ５が挙げられるがこれらに限定されない。

【0077】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はインターフェロンαである。前記実施形態では、改変型ＩＦＮ－α物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型ＩＦＮ－α物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性実質的に低下しているか又は除去されている。

【0078】

変異型のインターフェロンαが当業者に知られている。例示的な実施形態では、改変型シグナル伝達物質は配列番号４６のアミノ酸配列を有するＩＦＮ－α２ａ対立遺伝子型である。

【0079】

例示的な実施形態では、改変型シグナル伝達物質は（ＩＦＮ－α２ａと２３番目のアミノ酸位置において異なる）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＩＦＮ－α２ｂ対立遺伝子型である。

【0080】

いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体（ＩＦＮ－α２ａ又はＩＦＮ－α２ｂ）では１４４～１５４番目、例えば１４８番目、１４９番目、及び／又は１５３番目のアミノ酸位置において１つ又は複数のアミノ酸に変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、及びＭ１４８Ａから選択される１つ又は複数の変異を含む。そのような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号及びＰｉｅｈｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２７５：４０４２５－３３に記載されており、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0081】

いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載されるようなＦ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、及びＹ８９Ａから選択される１つ又は複数の変異を含み、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0082】

いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は国際公開第２００８／１２４０８６号に記載されるようなＫ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、及びＬ１５３Ａから選択される１つ又は複数の変異を含み、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0083】

いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１５／００７５２０号及び国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載されるようなＲ１２０Ｅ及びＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つ又は複数の変異を含み、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。前記実施形態では、ＩＦＮ－α２変異体は野生型ＩＦＮ－α２活性をアンタゴナイズする。前記実施形態では、変異ＩＦＮ－α２は、ＩＦＮＡＲ１に対する親和性及び／又は活性が低下している一方でＩＦＮＲ２の親和性及び／又は活性は維持されている。

【0084】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、（１）理論に捉われることを望むものではないが、アンタゴニスト作用を引き起こすＲ１２０Ｅ及びＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つ又は複数の変異、及び（２）理論に捉われることを望むものではないが、例えば、ＩＦＮＡＲ２における作用を減弱させるＫ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、及びＬ１５３Ａから選択される１つ又は複数の変異を含む。ある実施形態では、トＩＦＮ－α２変異体はＲ１２０Ｅ及びＬ１５３Ａを含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、及びＮ１５６Ａから選択される１つ又は複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、及び／又はＬ３０Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、及び／又はＲ３３の変異Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、及び／又はＭ１４８Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、及び／又はＬ１５３Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、及び／又はＹ８９Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示されるような、Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａ、及び／又はＤ１１４Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－α２変異体は、Ｒ１４４Ｘ_１、Ａ１４５Ｘ_２、及びＲ３３Ａから選択される１つ又は複数の変異を含む（式中、Ｘ_１はＡ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、及びＩから選択され、Ｘ_２はＧ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、及びＤから選択される）。

【0086】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はインターフェロンβである。前記実施形態では、改変型インターフェロンβ物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型インターフェロンβ物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0087】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はインターフェロンβである。前記実施形態では、改変型インターフェロンβ物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型インターフェロンβ物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１鎖及び／又はＩＦＮＡＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0088】

例示的な実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＦＮ－βである。様々な実施形態において、ＩＦＮ－βには、ＩＦＮ－βの機能的な派生体、類似体、前駆体、アイソフォーム、スプライスバリアント、又は断片を包含する。様々な実施形態において、ＩＦＮ－βは任意の種に由来するＩＦＮ－βが包含される。ある実施形態では、キメラタンパク質は改変型のマウスＩＦＮ－βを含む。別の実施形態では、キメラタンパク質は改変型のヒトＩＦＮ－βを含む。ヒトＩＦＮ－βは１６６アミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量のポリペプチドである。ヒトＩＦＮ－βのアミノ酸配列は配列番号４８である。

【0089】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－βは、グリコシル化型のヒトＩＦＮ－βであるＩＦＮ－β－１ａである。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－βは、Ｍｅｔ－１の欠失及びＣｙｓ－１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトＩＦＮ－βであるＩＦＮ－β－１ｂである。

【0090】

様々な実施形態において、改変型ＩＦＮ－βは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットへの結合又は親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＩＦＮＡＲ１における親和性及び／又は活性が低下している。様々な実施形態において、改変型ＩＦＮ－βはヒトＩＦＮ－βであり、Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、Ｉ９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、及びＲ１２４の位置に１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、Ｉ９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、及びＲ１２４Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｆ６７Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＫ１２３Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｆ６７Ｇ及びＲ７１Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｌ８８Ｇ及びＹ９２Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｙ９２Ｇ、Ｉ９５Ａ、及びＮ９６Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｋ１２３Ｇ及びＲ１２４Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、及びＹ９２Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、及びＹ９２Ｓの変異を含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットへの結合又は親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＩＦＮＡＲ２における親和性及び／又が低下している。様々な実施形態において、改変型ＩＦＮ－βはヒトＩＦＮ－βであり、Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、及びＹ１５５の位置に１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、及びＹ１５５Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＷ２２Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＬ３２Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＬ３２Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＲ３５Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＲ３５Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＶ１４８Ｇの変異を含む。ある実施形の態では、改変型ＩＦＮ－βはＲ１５２Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＲ１５２Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＹ１５５Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＷ２２Ｇ及びＲ２７Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＬ３２Ａ及びＲ３５Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＬ１５１Ｇ及びＲ１５２Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ＩＦＮ－βはＶ１４８Ｇ及びＲ１５２Ａの変異を含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、及びＲ１５２Ｈの変異のうちの１つ又は複数を有する。いくつかの実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、及びＲ１５２Ｈの変異のうちの１つ又は複数をＣ１７Ｓ又はＣ１７Ａと組み合わせて有する。

【0093】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、及びＲ１５２Ｈの変異のうちの１つ又は複数を本明細書に記載される他のＩＦＮ－β変異のうちのいずれかと組み合わせて有する。

【0094】

ヒトＩＦＮ－βの結晶構造が知られており、Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．、（１９９８）ＰＮＡＳ、９４（２２）：１１８１３－１１８１８に記載されている。具体的には、ヒトＩＦＮ－βの構造は、５つのα－ヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥ）及びこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢループ、ＢＣループ、ＣＤループ、及びＤＥループ）を含むことが示されている。様々な実施形態において、改変型ＩＦＮ－βは、Ａヘリックス内、Ｂヘリックス内、Ｃヘリックス内、Ｄヘリックス内、Ｅヘリックス内、及び／又はＡＢループ内、ＢＣループ内、ＣＤループ内、及びＤＥループ内に、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体において結合親和性又は活性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。例示的な変異は、国際公開第２０００／０２３１１４号及び米国特許出願公開第２０１５／００１１７３２号に記載されており、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは１５番目、１６番目、１８番目、１９番目、２２番目、及び／又は２３番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは２８～３０番目、３２番目、及び３３番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、３６番目、３７番目、３９番目、及び４２番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは６４番目及び６７番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含み、６８番目の位置においてセリン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、７１～７３番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、９２番目、９６番目、９９番目、及び１００番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、１２８、１３０番目、１３１番目、及び１３４番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。例示的な実施形態では、改変型ＩＦＮ－βは、１４９番目、１５３番目、１５６番目、及び１５９番目のアミノ酸位置においてアラニン置換を含むヒトＩＦＮ－βである。いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｗ２２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0095】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｒ２７に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0096】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｗ２２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ２７に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0097】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｌ３２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0098】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｒ３５に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0099】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｌ３２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ３５に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0100】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｆ６７に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0101】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｒ７１に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0102】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｆ６７に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ７１に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0103】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｌ８８に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0104】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0105】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｆ６７に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、Ｌ８８に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0106】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｌ８８に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0107】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｉ９５に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0108】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｎ９６に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0109】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｙ９２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、Ｉ９５に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｎ９６に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0110】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｋ１２３に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0111】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｒ１２４に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0112】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｋ１２３に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ１２４に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0113】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｌ１５１に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0114】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｒ１５２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0115】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｌ１５１に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ１５２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0116】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｖ１４８に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、及びメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0117】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、Ｖ１４８に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、且つ、Ｒ１５２に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0118】

いくつかの実施形態では、変異ＩＦＮβは、配列番号４８を含み、且つ、Ｙ１５５に変異を含み、前記変異はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0119】

いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列及びＷ２２の位置に変異を有し、前記変異が脂肪族疎水性残基である改変型ＩＦＮ－β、及び（ｂ）特異的に目的の抗原又は受容体（例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ）に結合する認識ドメインを含む１つ又は複数の標的化部分を含むキメラタンパク質であって、前記改変型ＩＦＮ－β及び１つ又は複数の標的化部分が１つ又は複数のリンカーにより連結されていてもよいキメラタンパク質に関する。様々な実施形態において、Ｗ２２の位置における変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、及びＶから選択される脂肪族疎水性残基である。様々な実施形態において、Ｗ２２の位置における変異は、Ｇである。

【0120】

追加の例示的なＩＦＮβ変異体は国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号に示され、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0121】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はインターフェロンγである。前記実施形態では、改変型インターフェロンγ物質は、インターフェロン－γ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１鎖及びＩＦＮＧＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型インターフェロンγ物質は、インターフェロン－γ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１鎖及びＩＦＮＧＲ２鎖に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0122】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はコンセンサスインターフェロンである。コンセンサスインターフェロンは、数種類のヒト非対立遺伝子性ＩＦＮ－αサブタイプの配列を詳しく調べ、それぞれ対応する位置において最も頻繁に観察されるアミノ酸を選定することにより作成される。コンセンサスインターフェロンは、ＩＦＮ－α２ｂと１６６アミノ酸のうちの２０アミノ酸において異なっており（８８％の相同性）、ＩＦＮ－βとの比較によってアミノ酸位置の３０％超で同一性が示される。様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンは、以下の配列番号４９のアミノ酸配列を含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは配列番号５０のアミノ酸配列を含み、それは１つのアミノ酸によって配列番号４９のアミノ酸配列と異なり、すなわち、配列番号５０は配列番号４９の開始メチオニン残基を含まない。

【0124】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンは、改変型のコンセンサスインターフェロン、すなわちコンセンサスインターフェロンバリアントをシグナル伝達物質として含む。様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンバリアントには、コンセンサスインターフェロンの機能的な派生体、類似体、前駆体、アイソフォーム、スプライスバリアント、又は断片が包含される。

【0125】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、同第５，５４１，２９３号、及び同第８，４９６，９２１号に開示されるようなコンセンサスインターフェロンバリアントから選択される。例えば、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、第４，８９７，４７１号、及び第５，５４１，２９３号に開示されるようなＩＦＮ－ＣＯＮ_２又はＩＦＮ－ＣＯＮ_３のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントはＩＦＮ－ＣＯＮ_２（配列番号５１）のアミノ酸配列を含む。

【0126】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントはＩＦＮ－ＣＯＮ_３（配列番号５２）のアミノ酸配列を含む。

【0127】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第８，４９６，９２１号に開示されるバリアントのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例えば、コンセンサスバリアントは配列番号５３のアミノ酸配列を含む場合がある。

【0128】

別の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号５４のアミノ酸配列を含み得る。

【0129】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントはＰＥＧ化されていてもよく、すなわちＰＥＧ部分を含む。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは配列番号５４のＳ１５６Ｃの位置に結合したＰＥＧ部分を含み得る。

【0130】

いくつかの実施形態では、改変型インターフェロンは、配列Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｎ（配列番号２７６）を得るために配列Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｎ（配列番号２７５）内の４１番目の位置にＡｓｐの挿入を有し（したがって、ＩＦＮ－α２ａ配列に対して配列の番号を付け直すことになる）、且つ、以下のＡｒｇ２３Ｌｙｓ、Ｌｅｕ２６Ｐｒｏ、Ｇｌｕ５３Ｇｌｎ、Ｔｈｒ５４Ａｌａ、Ｐｒｏ５６Ｓｅｒ、Ａｓｐ８６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１０４Ｔｈｒ、Ｇｌｙ１０６Ｇｌｕ、Ｔｈｒ１１０Ｇｌｕ、Ｌｙｓ１１７Ａｓｎ、Ａｒｇ１２５Ｌｙｓ、及びＬｙｓ１３６Ｔｈｒの変異を有するヒトＩＦＮ－α２ａのバリアントである。コンセンサスインターフェロンについて記載する本明細書中の全ての実施形態は同様にこの改変型インターフェロンに適用される。

【0131】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンバリアントは、１つ又は複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記１つ又は複数のアミノ酸変異は、独立して置換、挿入、欠失、及び短縮化から選択され得る。

【0132】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的置換及び／又は非保存的置換が含まれ得る。

【0133】

様々な実施形態において、置換には、非典型的アミノ酸（例えば、一般的には、セレノシステイン、ピロロリシン、Ｎ－ホルミルメチオニン、β－アラニン、ＧＡＢＡ、及びδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えばβ－メチルアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、及びアミノ酸類似体）も含まれ得る。

【0134】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンは、１つ又は複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、変異によって、コンセンサスインターフェロンバリアントは、未変異型、例えば野生型のコンセンサスインターフェロン（例えば、配列番号４９又は５０のアミノ酸配列を有するコンセンサスインターフェロン）と比べて結合親和性の低下、内在性活性の低下、及び特定の生物活性の低下うちの１つ又は複数など、１つ又は複数の活性が低下する。例えば、未変異型、例えば野生型のコンセンサスインターフェロンに対する、結合親和性の低下、内在性活性の低下、及び特定の生物活性の低下などの前記１つ又は複数の活性の低下は、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体において起こり得る。結果として、様々な実施形態において、それらの変異によって、前記コンセンサスインターフェロンバリアントは、未変異型、例えば野生型のコンセンサスインターフェロンと比べて、全身毒性が低減され、副作用が低減され、オフターゲット作用が低減される。

【0135】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンはＩＦＮＡＲなどの治療受容体での結合親和性又は活性を低下させる変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンが提供する活性は治療受容体におけるアゴニズム（例えば、治療部位における細胞効果の活性化）である。例えば、前記コンセンサスインターフェロンは治療受容体を活性化する場合がある。前記実施形態では前記変異によってコンセンサスインターフェロンバリアントは前記治療受容体における活性化活性が低下することになる。

【0136】

いくつかの実施形態では、治療受容体における親和性又は活性の低下は、標的化部分（例えばＳＩＲＰα）との結合によって回復可能である。他の実施形態では、治療受容体における親和性又は活性の低下は、標的化部分との結合によって実質的に回復することがない。様々な実施形態において、本発明の治療キメラタンパク質は、コンセンサスインターフェロンバリアントが治療受容体における結合親和性又は活性を弱める変異を有るため、オフターゲット作用を減少させる。様々な実施形態において、これにより、例えば、野生型コンセンサスインターフェロンに見られる副作用が減少する。様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンバリアントは、治療活性部位への途中では実質的に不活性であり、特異的に標的化された細胞種に対して実質的に作用し、望まれない副作用が大いに低減される。

【0137】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンバリアントは、１種類又は複数種類の治療受容体に対するコンセンサスインターフェロンバリアントの親和性、例えば結合（例えばＫ_Ｄ）及び／又は活性化（例えば、Ｋ_Ａ及び／又はＥＣ_５０として測定可能なもの）を減弱又は低下させる１つ又は複数の変異を有する。様々な実施形態において、治療受容体における親和性の低下によって治療受容体からの活性及び／又はシグナル伝達が減弱している。

【0138】

様々な実施形態において、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットへの結合又は親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１における親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットへの結合又は親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１サブユニットとＩＦＮＡＲ２サブユニットの両方への結合又は親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。

【0139】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１への結合又はＩＦＮＡＲ１に対する親和性を低下させる１つ又は複数の変異、及びＩＦＮＡＲ２への結合又はＩＦＮＡＲ２に対する親和性を実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、そのようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するキメラタンパク質により、標的選択的なＩＦＮＡＲ１活性（例えば、ＩＦＮＡＲ１活性は、標的化部分、例えばＳＩＲＰαを介した標的化により回復可能である）がもたらされ得る。

【0140】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ２への結合又はＩＦＮＡＲ２に対する親和性を低下させる１つ又は複数の変異、及びＩＦＮＡＲ１への結合又はＩＦＮＡＲ１に対する親和性を実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、そのようなコンセンサスインターフェロンバリアントを含むキメラタンパク質により、標的選択的なＩＦＮＡＲ２活性（例えば、ＩＦＮＡＲ２活性は、標的化部分、例えばＳＩＲＰαを介した標的化により回復可能である）がもたらされ得る。

【0141】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１への結合又はＩＦＮＡＲ１に対する親和性を低下させる１つ又は複数の変異、及びＩＦＮＡＲ２への結合又はＩＦＮＡＲ２に対する親和性を低下させる１つ又は複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、そのようなコンセンサスインターフェロンバリアントを含むキメラタンパク質により、標的選択的なＩＦＮＡＲ１及び／又はＩＦＮＡＲ２活性（例えば、ＩＦＮＡＲ１及び／ＩＦＮＡＲ２活性は、標的化部分、例えばＳＩＲＰαを介した標的化により回復可能である）がもたらされ得る。

【0142】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５０における１４５～１５５番目のうちの１つ又は複数のアミノ酸、例えば１４９番目、１５０番目、及び／又は１５４番目のアミノ酸位置に変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５０における１４５～１５５番目位置のうちの１つ又は複数のアミノ酸、例えば１４９番目、１５０番目、及び／又は１５４番目のアミノ酸位置に変異を有するように改変されており、それらの置換は所望により疎水性であってもよく、且つ、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンから選択される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロン変異体は、配列番号５０におけるＭ１４９Ａ、Ｒ１５０Ａ、及びＬ１５４Ａから選択される１つ又は複数の変異を含む。

【0143】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５０におけるアミノ酸１２１番目の位置（すなわち、Ｋ１２１）に変異を有するように改変されている。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号５０におけるＫ１２１Ｅ変異を含む。

【0144】

様々な実施形態において、改変型シグナル伝達物質は、改変型のサイトカイン、増殖因子、及びホルモンから選択される。そのようなサイトカイン、増殖因子、及びホルモンの例示的な例としては、リンホカイン、モノカイン；ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモンなどの従来のポリペプチドホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン、インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子－α及び腫瘍壊死因子－β；ミュラー管抑制物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ－αなどの神経成長因子；血小板由来増殖因子；ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－βなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子－Ｉ及びインスリン様成長因子－ＩＩ；骨誘導因子；例えば、インターフェロン－α、インターフェロン－β、及びインターフェロン－γ（並びにインターフェロンＩ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型）などのインターフェロン；マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）、及び顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、及びＩＬ－１８などのインターロイキン（ＩＬ）；例えば、ＴＮＦ－α又はＴＮＦ－βなどの腫瘍壊死因子、及び例えば、ＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書において使用される場合、サイトカイン、増殖因子、及びホルモンとしては、天然起源のタンパク質、又は組換え体細菌細胞培養系、組換え真核生物細胞培養系、若しくは組換え哺乳類細胞培養系から産生されるタンパク質、及び天然配列のサイトカインの生物学的活性同等物が挙げられる。

【0145】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、限定されないが、ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－βなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（並びにＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３を含むＴＧＦ－βの様々なサブタイプを含むそれらのサブタイプ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子－Ｉ及びインスリン様成長因子－ＩＩなどのインスリン様成長因子、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ヘレグリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）から選択される増殖因子の改変型である。

【0146】

ある実施形態では、増殖因子は改変型の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）である。ＦＧＦの例としては、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、マウスＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、及びＦＧＦ２３が挙げられるがこれらに限定されない。

【0147】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理的血管新生だけでなく病理的血管新生においても主要な役割を果たし、血管透過性を制御し、且つ、ＶＥＧＦ受容体発現細胞に対して増殖因子として作用可能な強力な増殖因子である。特に、その他の機能としては、マクロファージ系統細胞及び内皮細胞における細胞遊走の刺激が挙げられる。数種類のＶＥＧＦファミリー増殖因子のメンバー及び少なくとも３種類の受容体（ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、及びＶＥＧＦＲ－３）が存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは２種類以上のＶＥＧＦＲに結合し、活性化することができる。例えば、ＶＥＧＦ－ＡはＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２に結合し、ある方でＶＥＧＦ－ＣはＶＥＧＦＲ－２及びＶＥＧＦＲ－３に結合可能である。ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２の活性化は血管新生を制御し、ある方でＶＥＧＦＲ－３の活性化はリンパ脈管新生に関連する。主な血管新生促進シグナルはＶＥＧＦＲ－２の活性化から生じる。ＶＥＧＦＲ－１の活性化は血管新生における負の役割と関連する可能性があると報告されている。ＶＥＧＦＲ－１シグナルの伝達は（骨における前転移ニッチの形成に寄与する）骨髄由来ＶＥＧＦＲ－１陽性細胞を介したｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍成長にとって重要である。主に血管新生に依存する様々なヒト腫瘍の治療に使用するためのＶＥＧＦ－Ａ指向性／中和治療抗体に基づくいくつかの治療法が開発されている。しかしながらこれらの治療法には副作用が無いわけではない。これらの抗体が一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると、このことは驚くべきことではないかもしれない。したがって、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管内皮細胞）にＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ－Ａ）／ＶＥＧＦＲ－２阻害を限定することが好ましいことになる。

【0148】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＦＧ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、又はＶＥＧＦ－Ｅ、並びにＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１２１ｂ、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１６５ｂ、ＶＥＧＦ_１８９、及びＶＥＧＦ_２０６など、ＶＥＧＦ－Ａの様々なアイソフォームを含むそれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）及び／又はＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）及び／又はＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。前記実施形態は、例えば、（理論に捉われることを望むものではないが、内皮細胞機能及び血管新生に対するＶＥＧＦＲ－２の効果を介する）創傷治癒方法又は虚血関連疾患の治療に使用される。様々な実施形態において、がん及び炎症促進活性につながるＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合が回避される。様々な実施形態において、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）はデコイ受容体として作用し、したがってこの受容体における親和性が実質的に低下するか又は除去され、治療薬の隔離が回避される。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されており、及び／又はＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦはＶＥＧＦ－Ｃ又はＶＥＧＦ－Ｄである。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－３に対する親和性及び／又は活性が低下している。あるいは、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－３に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0149】

血管新生誘導性治療法は様々な疾患（例えば虚血性心臓疾患、出血など）においても重要であり、それらの治療法にはＶＥＧＦに基づく治療術が含まれる。ＶＥＧＦＲ－２の活性化は血管新生誘導性である（内皮細胞に対して作用する）。ＶＥＦＧＲ－１の活性化は炎症細胞（例えばマクロファージを含む）の遊走の刺激を引き起こし、炎症関連性高血管透過性につながる可能性がある。ＶＥＦＧＲ－１の活性化は骨髄関連腫瘍ニッチ形成も促進し得る。したがって、この場合ではＶＥＧＦＲ－２活性化について選択的なＶＥＧＦに基づく治療法が望ましいことになる。さらに、細胞特異的標的化、例えば内皮細胞に対する細胞特異的標的化が望ましいことになる。

【0150】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する親和性及び／又は活性が低下しており（例えばアンタゴニスト活性）、及び／又はＶＥＧＦＲ－１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。腫瘍内皮細胞マーカー（例えばＰＳＭＡ及びその他）に結合する標的化部分を介して腫瘍血管内皮細胞に標的化される場合、そのようなコンストラクトは、特にこのようなマーカーについて陽性の細胞上で、ＶＥＧＦＲ－２活性化を阻害するが、一方で標的細胞への途中及び（活性が無い場合に）標的細胞上ではＶＥＧＦＲ－１を活性化しないので、炎症応答の誘導などが排除される。これにより、ＶＥＧＦ－Ａ中和治療法と比較して、より選択的で安全な多くの種類の腫瘍に対する血管新生抑制治療法が得られることになる。

【0151】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する親和性及び／又は活性が低下しており（例えばアゴニスト活性）、及び／又はＶＥＧＦＲ－１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。血管内皮への標的化を介して、いくつかの実施形態では、そのようなコンストラクトはＶＥＧＦＲ－１関連炎症応答誘導を引き起こさずに血管新生を促進する。したがって、そのようなコンストラクトは、ＶＥＧＦＲ－２並びにＶＥＧＲ－１の全身性活性化が引き起こす副作用のリスクが実質的に低下した標的化された血管新生誘導効果を有することになる。

【0152】

例示的な実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＶＥＧＦ_１６５であり、配列番号５５のアミノ酸配列を有する。

【0153】

別の例示的な実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＶＥＧＦ_１６５ｂであり、配列番号５６のアミノ酸配列を有する。

【0154】

これらの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はアミノ酸Ｉ８３に変異（例えば、Ｉ８３番目の置換変異、例えばＩ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、により受容体結合親和性の低下が引き起こされる場合があると考えられている。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。

【0155】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、限定されないが、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、アンドロゲン、エストロゲン、甲状腺刺激ホルモン、濾胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、ドーパミン、メラトニン、サイロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アドレナリン、ノルアドレナリン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、アミリン、カルシトリオール、カルシフェロール、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、ニューロペプチドＹ、グレリン、ＰＹＹ３－３６、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、レプチン、トロンボポエチン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、及びアンギオテンシノーゲンから選択されるホルモンの改変型である。

【0156】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦ－αである。ＴＮＦは、細胞増殖制御、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞の機能及び輸送、炎症、並びに敗血症ショックを含む、多種多様な機能を有する多面的サイトカインであり、標的細胞上の２種類の別個の膜受容体、すなわちＴＮＦＲ１（ｐ５５）及びＴＮＦＲ２（ｐ７５）に結合する。ＴＮＦＲ１が非常に広範な発現パターンを示すある方でＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、ある種の神経細胞、ミクログリア、心筋細胞、及び間葉系幹細胞のある特定の集団において優先的に発現する。いくらかの重複もあるものの、受容体活性化に応答して、非常に異なる生物学的経路が活性化される。原則として、理論に捉われることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化（例えばＮＦｋＢ経路の活性化）に関連する。ＴＮＦの投与は全身的には有毒であり、これは主としてＴＮＦＲ１の関与に起因する。しかしながら、ＴＮＦＲ２の活性化も広範囲の活性に関連しており、ＴＮＦＲ１の場合のように、ＴＮＦに基づく治療法を開発の観点から、ＴＮＦ標的化及びＴＮＦ活性の制御が重要であることに留意されたい。

【0157】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦＲ１及び／又はＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦＲ１及び／又はＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。ＴＮＦＲ１が大半の組織において発現し、細胞死のシグナル伝達に関与するある方で対照的にＴＮＦＲ２は細胞生存シグナル伝達に関与する。よって、がんの治療方法に関する実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。これらの実施形態では、キメラタンパク質はアポトーシスが望まれる細胞、例えば腫瘍細胞又は腫瘍血管内皮細胞に標的化され得る。例えば神経変性障害の治療のための神経変性における細胞生存の促進方法に関する実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。換言すると、本開示のキメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、細胞死シグナル又は生存シグナルのどちらかを好むことを可能にする改変型ＴＮＦ－α物質を含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている改変型ＴＮＦを有する。そのようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦ及び／又はＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性の低下の原因となる変異のみを有するキメラと比較して、より強力なアポトーシス誘導因子である。そのようなキメラは、いくつかの実施形態では、（例えばがんの治療における）腫瘍細胞死又は腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えばＴＮＦＲ２などを介したＴ_ｒｅｇ細胞の活性化を回避又は抑制することで、ｉｎ ｖｉｖｏでのＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに補助する。

【0159】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている改変型ＴＮＦを有する。いくつかの実施形態では、そのようなキメラはある種類の細胞の細胞生存のより強力な活性化因子であり、それは、限定されないが、神経新生の刺激を含む様々な疾患背景における特定の治療対象であり得る。さらに、そのようなＴＮＦＲ２をより好むキメラは、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、及び本明細書に記載される他の多くの疾患）の治療にも有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、キメラはＴ_ｒｅｇ細胞の活性化と細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。

【0160】

いくつかの実施形態では、キメラ（例えば、ＴＮＦＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＴＮＦＲ１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去された改変型ＴＮＦ）は、例えばＴＮＦＲ２の活性化及び／又はＴＮＦＲ１の回避によって、自己反応性Ｔ細胞の細胞死を引き起こす。理論に捉われることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えばＮＦｋＢ経路の活性／シグナル伝達の変化によってそれらの細胞のアポトーシス／細胞生存シグナルを変化させる。いくつかの実施形態では、キメラはＮＦκＢ経路における損傷又は改変を有する自己反応性Ｔ細胞の細胞死を引き起こし、これは、ある細胞死誘導シグナル（例えば、ＴＮＦＲ２の活性化）に対する自己反応性Ｔ細胞の細胞死（アポトーシス）／生存シグナル伝達特性の不均衡、及び所望により感受性の変化の基礎となる。

【0161】

いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ－２に基づいたキメラは、特に、自己免疫疾患、様々な心疾患、脱髄性神経変性障害、及び感染症を含む疾患において、その他の治療用途を有する。

【0162】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦ－αは配列番号５７のアミノ酸配列を有する。

【0163】

前記実施形態では、改変型ＴＮＦ－α物質は、２９番目、３１番目、３２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、１４５番目、１４６番目、及び１４７番目のうちの１つ又は複数のアミノ酸位置に受容体結合親和性が低下した改変型ＴＮＦ－αを産生する変異を有する。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。

【0164】

いくつかの実施形態では、改変型ヒトＴＮＦ－α部分は、例えば内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７９０３号に記載されるように、Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、Ａ１４５、及びＥ１４６のうちの１つ又は複数のアミノ酸位置に変異を有する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＢＡＧ７０３０６、更新番号ＢＡＧ７０３０６．１、ＧＩ：１９７６９２６８５のヒトＴＮＦ配列に基づく付番）。いくつかの実施形態では、改変型ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｌ２９Ｓ、Ｒ３２Ｇ、Ｒ３２Ｗ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｓ８６Ｔ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｙ８７Ｈ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、Ｅ１４６Ｋ、及びＳ１４７Ｄから選択される置換変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、及びＹ８７Ｈから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、及びＩ９７Ｓから選択される変異を有する。その他の実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＹ１１５Ａ及びＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＥ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＹ８７Ｈ変異及びＥ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＹ８７Ｈ変異及びＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＲ３２Ｗ変異及びＳ８６Ｔ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＲ３２Ｗ変異及びＥ１４６Ｋ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＬ２９Ｓ変異及びＲ３２Ｗ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＤ１４３Ｎ変異及びＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＤ１４３Ｎ変異及びＡ１４５Ｒ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＡ１４５Ｔ変異、Ｅ１４６Ｄ変異、及びＳ１４７Ｄ変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分はＡ１４５Ｔ変異及びＳ１４７Ｄ変異を有する。

【0165】

いくつかの実施形態では、改変型ＴＮＦ－α物質は、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２００８／１２４０８６号に記載されるような、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、及びＹ８７Ｈから選択される１つ又は複数の変異を有する。

【0166】

いくつかの実施形態では、改変型ヒトＴＮＦ－α部分は、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載されるような受容体選択性をもたらす変異を有する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異はＴＮＦ－Ｒ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２、Ｓ８６、及びＥ１４６の位置のうちの１つ又は複数に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、及びＥ１４６Ｋの位置のうちの１つ又は複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｒ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６Ｋ、及びＥ１４６Ｋのうちの１つ又は複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異はＴＮＦ－Ｒ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５、Ｅ１４６、及びＳ１４７の位置のうちの１つ又は複数に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、及びＳ１４７Ｄのうちの１つ又は複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、及びＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄのうちの１つ又は複数である。

【0167】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦ－βである。ＴＮＦ－βはホモ二量体、又はＬＴ－β（ＬＴ－α１β２）とヘテロ二量体を形成することができる。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＮＦＲ１及び／又はＴＮＦＲ２及び／又はヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）及び／又はＬＴ－βＲに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0168】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦ－βは配列番号５８のアミノ酸配列を有する。

【0169】

前記実施形態では、改変型ＴＮＦ－β物質は、ＴＮＦＲ２に対する受容体結合親和性が低下した改変型ＴＮＦ－βを産生する変異を１０６～１１３番目の位置の１つ又は複数のアミノ酸に含み得る。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、１０６～１１３番目のアミノ酸位置に１つ又は複数の置換変異を有する。例示的な実施形態では、それらの置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、及びＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、１０６～１１３番目の位置に約１個～約３個のアミノ酸の挿入を有する。

【0170】

いくつかの実施形態では、改変型作用物質は、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７９０３号及び国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載されるような一本鎖三量体型であり得るＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。

【0171】

いくつかの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＮＦＲ１において親和性及び／又は活性が低下している、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。これらの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＮＦＲ２に対して親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されていてもよいＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。いくつかの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＮＦＲ２において親和性及び／又は活性が低下した、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。これらの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＮＦＲ１に対して親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されていてもよいＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。前記実施形態のコンストラクトは、例えば、細胞特異的にＴＮＦ応答を減弱させる方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト的ＴＮＦファミリーメンバー（例えばＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）は国際公開第２０１５／００７９０３号に記載されるような一本鎖三量体型である。

【0172】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）、及び／又はＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）、及び／又はＤｃＲ１、及び／又はＤｃＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）、及び／又はＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）、及び／又はＤｃＲ１、及び／又はＤｃＲ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0173】

ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは配列番号５９のアミノ酸配列を有する。

【0174】

前記実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０、Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４、及びＨ２７０～Ｅ２７１のアミノ酸位置に変異を有し得る（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００３８０１、更新番号１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３のヒト配列に基づく付番。上記参照）。

【0175】

いくつかの実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１に対するその親和性及び／又は活性を実質的に低下させる１つ又は複数の変異を含み得る。そのような実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、特異的にＴＲＩＬ－Ｒ２に結合し得る。例示的な変異としては、Ｙ１８９、Ｒ１９１、Ｑ１９３、Ｈ２６４、Ｉ２６６、及びＤ２６７のうちの１つ又は複数のアミノ酸位置における変異が挙げられる。例えば、前記変異は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６Ｌ、及びＤ２６７Ｑのうちの１つ又は複数であってもよい。ある実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６Ｌ、及びＤ２６７Ｑの変異を含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２に対するその親和性及び／又は活性を実質的に低下させる１つ又は複数の変異を含み得る。そのような実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、特異的にＴＲＩＬ－Ｒ１に結合し得る。例示的な変異としては、Ｇ１３１、Ｒ１４９、Ｓ１５９、Ｎ１９９、Ｋ２０１、及びＳ２１５のうちの１つ又は複数のアミノ酸位置における変異が挙げられる。例えば、前記突異は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、及びＳ２１５Ｄのうちの１つ又は複数であってもよい。ある実施形態では、改変型ＴＲＡＩＬ物質は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、及びＳ２１５Ｄの変異を含む。他のＴＲＡＩＬ変異は、例えば、開示の全体が参照により本明細書に取り込まれるＴｒｅｂｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ、５：ｅ１０３５に記載されている。

【0177】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＧＦαである。前記実施形態では、改変型ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対するに親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0178】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＧＦβである。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１及び／又はＴＧＦＢＲ２に対する親和性及び／又が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＴＧＦＢＲ１及び／又はＴＧＦＢＲ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ３に対する親和性及び／又は活性が低下しているか、実質的に低下しているか、又は除去されていてもよく、ＴＧＦＢＲ３は、理論に捉われることを望むものではないが、ＴＧＦ－β受容体のリガンドの貯蔵する作用を有する場合がある。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβはＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１を好んでもよく、ＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を好んでもよい。同様に、理論に捉われることを望むものではないが、ＬＡＰはＴＧＦ－β受容体のリガンドの貯蔵する作用を有する場合がある。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１及び／又はＴＧＦＢＲ２に対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又は潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、そのようなキメラは、カムラティ・エンゲルマン病、又は不適切なＴＧＦβシグナル伝達と関連する他の疾患に使用される。

【0179】

いくつかの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３のうちのうちの１つ又は複数において親和性及び／又は活性が低下している、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、これについては、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）を有するＴＧＦファミリーメンバー（例えばＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。これらの実施形態では、改変型作用物質はＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３うちの１つ又は複数において所望により親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されているＴＧＦファミリーメンバー（例えばＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。

【0180】

いくつかの実施形態では、改変型作用物質は、ＴＧＦＢＲ１及び／又はＴＧＦＢＲ２において親和性及び／又は活性が低下している、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、これについては、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）を有するＴＧＦファミリーメンバー（例えばＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。これらの実施形態では、改変型作用物質はＴＧＦＢＲ３において所望により親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されているＴＧＦファミリーメンバー（例えばＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。

【0181】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１である。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１α又はＩＬ－１βである。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１Ｒ１及び／又はＩＬ－１ＲＡｃＰに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１Ｒ１及び／又はＩＬ－１ＲＡｃＰに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１Ｒ２に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１Ｒ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の改変型ＩＬ－１物質はＩＬ－１Ｒ２における相互作用を回避するので、治療薬に対するデコイ（decoy）及び／又はシンク（sink）としてのその機能を実質的に低下させる。

【0182】

ある実施形態では野生型ＩＬ－１βは配列番号６０のアミノ酸配列を有する。

【0183】

ＩＬ１は炎症促進性サイトカインであって、重要な免疫系調節因子である。ＩＬ１はＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の割合を増やし、且つ、ＩＦＮγ産生細胞及びＩＬ－４産生細胞の増殖を増強する。ＩＬ－１はＣＤ８^＋Ｔ細胞の強力な調節因子でもあり、抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖、分化、末梢への遊走、及び記憶を増強する。ＩＬ－１受容体はＩＬ－１Ｒ１及びＩＬ－１Ｒ２を含む。ＩＬ－１Ｒ１への結合及びＩＬ－１Ｒ１からのシグナル伝達は、ＩＬ－１がその生物学的（及び病理学的）活性の多くを媒介する機構を構成する。ＩＬ１－Ｒ２はデコイ受容体として機能することが可能であり、それによってＩＬ－１Ｒ１との相互作用及びＩＬ－１Ｒ１からのシグナル伝達に対するＩＬ－１の利用度を低下させる。

【0184】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－１はＩＬ－１Ｒ１に対する親和性及び／又は活性が低下している（例えばアゴニスト活性）。いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。前記実施形態では、回復可能なＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達、及びＩＬ－Ｒ２における治療用キメラの消失の阻止、及びその結果としての（例えば、野生型、又はＩＬ－Ｒ１に対する減弱変異のみを有するキメラと比べて）必要とされるＩＬ－１用量の減少が見られる。そのようなコンストラクトは、例えば、抗がん反応を開始するために免疫系を刺激することを含むがんの治療方法において使用される。

【0185】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ１に対する親和性及び／又は活性が低下している（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。前記実施形態では、回復可能ではないＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達、及びＩＬ－Ｒ２における治療用キメラの消失の阻止、及びその結果としての（例えば、野生型、又はＩＬ－Ｒ１に対する減弱変異のみを有するキメラと比べて）必要なＩＬ－１用量の減少が見られる。そのようなコンストラクトは、例えば、免疫系を抑制することを含む自己免疫疾患の治療方法において使用される。

【0186】

前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、Ｉ型ＩＬ－１Ｒに対する結合親和性が低下し、且つ生物活性が低下した改変型ヒトＩＬ－１βを産生する、５２～５４番目のアミノ酸の欠失を有する。例えば、文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５４２号及び国際公開第２０１５／００７５３６号に記載されるようなＩＬ－１Ｒへの結合の低下を示す、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑ（Ｘは任意のアミノ酸の変更、例えば非保存的変更であり得る）から選択される１つ又は複数の置換変異を有する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００５６７、更新番号ＮＰ－０００５６７．１、ＧＩ：１０８３５１４５のヒトＩＬ－１β配列に基づく付番）。いくつかの実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１Ｓ、及びＥ２２１Ｋから選択される１つ又は複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｑ１３１Ｇ及びＱ１４８Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｑ１４８Ｇ及びＫ２０８Ｅの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＱ１３１Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＨ１４６Ａの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＨ１４６Ｎの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＨ１４６Ｒの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＨ１４６Ｅの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＨ１４６Ｇの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ及びＫ２０８Ｅの変異を含む。ある実施形態では、改変型ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、及びＱ１６４Ｅの変異を含む。

【0187】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－２である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒα及び／又はＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒαに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。前記実施形態は、例えば、改変型ＩＬ－２がＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγにおいてアゴニスト的である場合に、がんの治療に適切であり得る。例えば、本開示のコンストラクトは、ＩＬ２受容体β及びγを有する（抗腫瘍作用を提供し得る）ＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性の減弱に有利であり、且つ、ＩＬ２受容体α、β、及びγを有する（免疫抑制性腫瘍促進作用を提供し得る）Ｔ_ｒｅｇに不利である。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ＲαよりもＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγを優先することで肺水腫などのＩＬ－２の副作用が回避される。また、ＩＬ－２に基づいたキメラは、例えば、改変型ＩＬ－２がＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγにおいてアンタゴニスト的である（例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、これについては、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）場合に疾患（例えば、自己免疫疾患）の治療に有用である。例えば、本開示のコンストラクトは、ＩＬ２受容体β及びγを有するＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性の減弱に有利であり（したがって、免疫応答を減弱し）、且つ、ＩＬ２受容体α、β、及びγを有するＴ_ｒｅｇに不利である。あるいは、いくつかの実施形態ではＩＬ－２を有する、キメラはＴ_ｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制に有利であり、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化に不利である。例えば、これらのコンストラクトは疾患、又は免疫抑制から利益を受け得る疾患、例えば自己免疫疾患の治療に使用される。

【0188】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質はＣＤ８^＋Ｔ細胞を指向する本明細書に記載されるような標的化部分、並びにＩＬ－２Ｒβ及び／又はＩＬ－２Ｒγに対する親和性及び／又は活性が低下しており、及び／又はＩＬ－２Ｒαに対する親和性及び／又は活性を有する改変型ＩＬ－２物質が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトは標的化ＣＤ８^＋Ｔ細胞活性を提供し、且つ、Ｔ_ｒｅｇ細胞に対しては一般的に不活性である（又は活性が実質的に低下している）。いくつかの実施形態ではそのようなコンストラクトは（例えば、理論に捉われることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）野生型ＩＬ－２と比較して免疫刺激作用が増強されており、その一方でＩＬ－２に関連する全身毒性を除去又は低減する。

【0189】

ある実施形態では野生型ＩＬ－２は配列番号６１のアミノ酸配列を有する。

【0190】

前記実施形態では、改変型ＩＬ－２物質は、アミノ酸Ｌ７２（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、又はＬ７２Ｋ）、アミノ酸Ｆ４２（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、又はＦ４２Ｋ）を、及びアミノ酸Ｙ４５（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５Ｒ又はＹ４５Ｋ）に１つ又は複数の変異有する。理論に捉われることを望むものではないが、野生型ＩＬ－２と比較すると、これらの改変型ＩＬ－２物質は高親和性ＩＬ－２受容体に対して親和性が低下しており、且つ、中親和性ＩＬ－２受容体に対する親和性が維持されていると考えられている。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。

【0191】

いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－２物質は、アミノ酸Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＥ６２に１つ又は複数の変異を有する。例えば、前記改変型ＩＬ－２物質は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、及びＥ６２Ａのうちの１つ又は複数を含む場合がある。いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－２物質はＣ１２５に変異を含み得る。例えば、前記変異はＣ１２５Ｓであってもよい。前記実施形態では、改変型ＩＬ－２物質は、例えば、開示の全体が参照により本明細書に取り込まれるＣａｒｍｅｎａｔｅ，ｅｔ ａｌ．、（２０１３）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９０：６２３０－６２３８に記載されるように、ＩＬ－２Ｒαに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下していてもよい。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、及び／又はＥ６２に変異を有する改変型ＩＬ－２物質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を含むエフェクター細胞の増殖を誘導することが可能であるが、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導することはできない。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、及び／又はＥ６２に変異を有する改変型ＩＬ－２物質は、野生型ＩＬ－２物質よりも毒性が低い。ＩＬ－２Ｒαに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下した改変型ＩＬ－２物質を含むキメラタンパク質は、腫瘍学などに適用され得る。

【0192】

他の実施形態では、改変型ＩＬ－２物質は、例えば、開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１６／０２５３８５号に記載されるようにＩＬ－２Ｒβに対する実質的に低下した親和性及び／又は活性を有し得る。前記実施形態では、改変型ＩＬ－２物質Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導することが可能であるが、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞などのエフェクター細胞の増殖を誘導することはできない。ＩＬ－２Ｒβに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下している、改変型ＩＬ－２物質を含むキメラタンパク質は自己免疫疾患等の治療に適用され得る。いくつかの実施形態では、改変型ＩＬ－２物質はアミノ酸Ｎ８８、Ｄ２０、及び／又はＡ１２６に１つ又は複数の変異を含み得る。例えば、前記改変型ＩＬ－２物質はＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、及びＱ１２６Ｆのうちの１つ又は複数を含む場合がある。

【0193】

様々な実施形態において、改変型ＩＬ－２物質は、Ｄ１０９又はＣ１２５に変異を含み得る。例えば、前記変異はＤ１０９Ｃ又はＣ１２５Ｓであってもよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１０９又はＣ１２５に変異を有する改変型ＩＬ－２は、ＰＥＧ部分への結合のために利用され得る。

【0194】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－３である。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、共通β（βｃ又はＣＤ１３１）サブユニットと対合した特有のα鎖を含むヘテロ二量体であるＩＬ－３受容体に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、共通β（βｃ又はＣＤ１３１）サブユニットと対合した特有のα鎖を含むヘテロ二量体であるＩＬ－３受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0195】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－４である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は１型及び／又は２型ＩＬ－４受容体に対する親和性及び／又は活性が低下している。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は１型及び／又は２型ＩＬ－４受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。１型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－４Ｒαサブユニットと共通γ鎖から構成され、特異的にＩＬ－４に結合する。２型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ－４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、２型ＩＬ－４受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0196】

ある実施形態では野生型ＩＬ－４は配列番号６２のアミノ酸配列を有する。

【0197】

前記実施形態では、改変型ＩＬ－４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、アミノ酸Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）、及びアミノ酸Ｓ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１つ又は複数の変異を有する。理論に捉われることを望むものではないが、これらの改変型ＩＬ－４物質は、Ｉ型受容体が介在する活性を維持するが、他の受容体が介在する生物活性を著しく低下させると考えられている。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。

【0198】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－６である。ＩＬ－６は、リガンド結合性ＩＬ－６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）とシグナル伝達要素ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介してシグナルを伝達する。ＩＬ－６はＩＬ－６Ｒの細胞外部分である可溶型ＩＬ－６Ｒ（ｓＩＬ－６Ｒ）に結合する場合もある。ＳＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－６複合体は神経突起伸長と神経細胞生存に関与することがあり、したがって再ミエリン化を介した神経再生に重要であり得る。よって、いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－６Ｒ／ｇｐ１３０及び／又はｓＩＬ－６Ｒに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－６Ｒ／ｇｐ１３０及び／又はｓＩＬ－６Ｒに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0199】

ある実施形態では、野生型ＩＬ－６は配列番号６３のアミノ酸配列を有する。

【0200】

前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、５８番目、１６０番目、１６３番目、１７１番目、又は１７７番目のアミノ酸に１つ又は複数の変異を有する。理論に捉われることを望むものではないが、これらの改変型ＩＬ－６物質は、ＩＬ－６Ｒαに対する結合親和性の低下及び生物活性の低下を示すと考えられている。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。

【0201】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１０である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体－１及びＩＬ－１０受容体－２に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体－１及びＩＬ－１０受容体－２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0202】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１１である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１Ｒα及び／又はＩＬ－１１Ｒβ及び／又はｇｐ１３０に対する親和性及び／又は活性が低下している。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１１Ｒα及び／又はＩＬ－１１Ｒβ及び／又はｇｐ１３０に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0203】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１２である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１及び／又はＩＬ－１２Ｒβ２に対する親和性及び／又は活性が低下している。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１及び／又はＩＬ－１２Ｒβ２に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0204】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１３である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒα）及びＩＬ－１３Ｒα１に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒα）又はＩＬ－１３Ｒα１に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0205】

ある実施形態では、野生型ＩＬ－１３は配列番号６４のアミノ酸配列を有する。

【0206】

前記実施形態では、改変型ＩＬ－１３物質は、１３番目、１６番目、１７番目、６６番目、６９番目、９９番目、１０２番目、１０４番目、１０５番目、１０６番目、１０７番目、１０８番目、１０９番目、１１２番目、１１３番目、及び１１４番目のアミノ酸に１つ又は複数の変異を有する。理論に捉われることを望むものではないが、これらの改変型ＩＬ－１３物質は生物活性が低下していると考えられている。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。

【0207】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－１８である。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒα及び／又はＩＬ－１８Ｒβに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒα及び／又はＩＬ－１８Ｒβに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠いているＩＬ－１８ＲαのアイソフォームであるＩＩ型ＩＬ－１８Ｒαに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0208】

ある実施形態では、野生型ＩＬ－１８は配列番号６５のアミノ酸配列を有する。

【0209】

前記実施形態では、改変型ＩＬ－１８物質は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５４２号に記載されるように、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ１２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３、及びＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸又はアミノ酸領域に１つ又は複数の変異を含み得る（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＶ３８６９７、更新番号ＡＡＶ３８６９７．１、ＧＩ：５４６９６６５０のヒトＩＬ－１８配列に基づく付番）。

【0210】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＬ－３３である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＳＴ－２受容体及びＩＬ－１ＲＡｃＰに対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＳＴ－２受容体及びＩＬ－１ＲＡｃＰに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。

【0211】

ある実施形態では、野生型ＩＬ－３３は配列番号６６のアミノ酸配列を有する。

【0212】

前記実施形態では、改変型ＩＬ－３３物質は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５４２号に記載されるように、Ｉ１１３～Ｙ１２２、Ｓ１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７、及びＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸又はアミノ酸領域に１つ又は複数の変異を含み得る（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿２５４２７４、更新番号ＮＰ＿２５４２７４．１、ＧＩ：１５５５９２０９のヒト配列に基づく付番）。

【0213】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は上皮成長因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは強力な増殖因子のファミリーのメンバーである。メンバーには、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、及び他のもの、例えばＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレギュリン、エピレギュリン、ベータセルリンが含まれる。ＥＧＦファミリー受容体には、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及びＥｒｂＢ４が含まれる。これらの受容体は、ホモ二量体受容体サブタイプ及び／又はヘテロ二量体受容体サブタイプとして機能する場合がある。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、様々な受容体サブタイプに対して異なった選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２、及び他のいくつかのヘテロ二量体サブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４とも結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の調整には正の調整でも負の調整でも高い治療上の興味を引く。例えば、ＥＧＦＲシグナルの伝達が主要な増殖促進シグナルを構成している様々ながんの治療において、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は興味を引く。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激には、例えば、創傷治癒（急性及び慢性）の促進、口腔粘膜炎（放射線療法を含むがこれに限定されない様々ながん療法の主要な副作用）における治療上の興味を引く。

【0214】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及び／又はＥｒｂＢ４に対する親和性及び／又は活性が低下している。前記実施形態は、例えば、創傷を治療する方法において使用される。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は１つ又は複数のＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及びＥｒｂＢ４に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及び／又はＥｒｂＢ４に対する親和性及び／又は活性が低下しており、それによってその受容体の活性が減弱されるようにアンタゴナイズされる。前記実施形態は、例えば、がんの治療において使用される。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する親和性及び／又は活性が低下している。ＥｒｂＢ１は、選択性があまり無いために大半が副作用を有するキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブ、及びイコチニブ）の治療上の標的である。いくつかの実施形態では、アンタゴニストによるＥｒｂＢ１シグナル伝達の減弱はＥＧＦの受容体を標的とする他の作用物質よりも標的に的中し、副作用が少ない。

【0215】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する親和性及び／又は活性が低下しており（例えばアンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）、及び／又はＥｒｂＢ４若しくは相互作用し得る他のサブタイプに対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。標的化部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性、又は１つ若しくは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性であり、これについては、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）が達成されることになるが、阻害関連副作用に関連する可能性がある他の受容体サブタイプには関係しない。したがって、身体のすべての種類の細胞においてＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤とは対照的に、そのようなコンストラクトは副作用が低減された細胞（例えば、受容体の増幅、過剰発現などのためにＥＧＦＲシグナル伝達が活性化されている腫瘍細胞）選択的抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬作用を提供することになる。

【0216】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４及び／又は相互作用し得る他のサブタイプに対する親和性及び／又は活性が低下している（例えばアゴニスト活性）。標的化部分を介した特定の標的細胞への標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の（例えば、上皮細胞）選択的活性化が達成される。いくつかの実施形態では、そのようなコンストラクトは、副作用が減少した（創傷治癒を促進する）創傷の治療、特に慢性状態の治療、及び治療薬の局所適用以外の適用（例えば、全身創傷治癒）に使用される。

【0217】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン又はインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変型インスリン又はインスリン類似体は、インスリン受容体及び／又はＩＧＦ１受容体若しくはＩＧＦ２受容体に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型インスリン又はインスリン類似体は、インスリン受容体及び／又はＩＧＦ１受容体若しくはＩＧＦ２受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。インスリン受容体における応答の減弱によって、糖尿病、肥満、代謝障害などの管理が可能になり、一方でＩＧＦ１受容体又はＩＧＦ２受容体から離すことによってがん促進作用が回避される。

【0218】

ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン様成長因子－Ｉ又はインスリン様成長因子－ＩＩ（ＩＧＦ－１又はＩＧＦ－２）である。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質はＩＧＦ－１である。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン受容体及び／又はＩＧＦ１受容体に対する親和性及び／又は活性が低下している。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質ＩＧＦ１受容体に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズし得る。前記実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する親和性及び／又は活性が低下しており、それによってその受容体の活性が減弱されるようにアンタゴナイズされる。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン受容体及び／又はＩＧＦ１受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質のＩＧＦ２受容体に対する親和性及び／又は活性が低下していることでその受容体の活性が減弱されるようにアンタゴナイズされる。ある実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されており、したがってインスリンシグナル伝達に干渉しない。様々な実施形態においてこれはがんの治療に適用される。様々な実施形態において、本開示の作用物質は、ＩＲアイソフォームＡががん治療に対して耐性となることを防止する。

【0219】

いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＥＰＯである。様々な実施形態において、改変型ＥＰＯ作用物質は、野生型ＥＰＯ又は本明細書に記載される他のＥＰＯに基づいた作用物質と比べて、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体及び／又はエフリン受容体（ＥｐｈＲ）に対する親和性及び／又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯ作用物質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体及び／又はＥｐｈ受容体（ＥｐｈＲ）に対する親和性及び／又は活性が実質的に低下しているか又は除去されている。ＥＰＯ受容体の例としては、ＥＰＯＲホモ二量体又はＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロ二量体が挙げられるがこれらに限定されない。ベータ共通受容体（βｃＲ）もＥＰＯ受容体として挙げられる。Ｅｐｈ受容体の例としては、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、及びＥＰＨＢ６が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯタンパク質が１種類又は複数種類のＥＰＯ受容体又はＥｐｈ受容体を含む受容体（例えば、ＥＰＯＲ－ＥＰＨＢ４、ＥＰＯＲ－βｃＲ－ＥＰＯＲを非限定的な例として含むヘテロ二量体、ヘテロ三量体）に対する親和性が低下している原因となる、１つ又は複数の変異を含む。内容全体が参照により本明細書に取り込まれる欧州特許出願公開第２４９２３５５号の受容体も提示され、ＮＥＰＯＲが非限定的な例として挙げられる。

【0220】

いくつかの実施形態では、ヒトＥＰＯは配列番号６７のアミノ酸配列を有する（最初の２７アミノ酸はシグナルペプチドである）。

【0221】

いくつかの実施形態では、ヒトＥＰＯタンパク質は、配列番号６８の配列を有する１６６アミノ酸残基からなる糖タンパク質である成熟型の（シグナルペプチドが切除されている）ＥＰＯである。

【0222】

ヒトＥＰＯタンパク質の構造は、ヘリックスＡ、ヘリックスＢ、ヘリックスＣ、及びヘリックスＤを含む４ヘリックスバンドルを含むと予想される。様々な実施形態において、改変型ＥＰＯタンパク質は、生物活性にとって重要であるＥＰＯタンパク質の４つの領域、すなわち１０～２０番目、４４～５１番目、９６～１０８番目、及び１４２～１５６番目のアミノ酸残基内に位置する１つ又は複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の変異は、１１～１５番目、４４～５１番目、１００～１０８番目、及び１４７～１５１番目の残基に位置する。これらの残基は、ヘリックスＡ（Ｖａｌ１１、Ａｒｇ１４、及びＴｙｒ１５）、ヘリックスＣ（Ｓｅｒ１００、Ａｒｇ１０３、Ｓｅｒ１０４、及びＬｅｕ１０８）、ヘリックスＤ（Ａｓｎ１４７、Ａｒｇ１５０、Ｇｌｙ１５１、及びＬｅｕ１５５）、及びＡ／Ｂ接続ループ（４２～５１番目ｍｐ残基）に局在する。いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、４１～５２番目のアミノ酸の間の残基、並びに１４７番目、１５０番目、１５１番目、及び１５５番目のアミノ酸に変異を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合及びｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性の両方に対してかなりの効果を有すると考えられている。いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、１１番目、１４番目、１５番目、１００番目、１０３番目、１０４番目、及び１０８番目の残基に変異を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合活性に対して適度な効果を有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性に対してより大きな効果を有すると考えられている。置換の例としては、Ｖａｌ１１Ｓｅｒ、Ａｒｇ１４Ａｌａ、Ａｒｇ１４Ｇｌｎ、Ｔｙｒ１５Ｉｌｅ、Ｐｒｏ４２Ａｓｎ、Ｔｈｒ４４Ｉｌｅ、Ｌｙｓ４５Ａｓｐ、Ｖａｌ４６Ａｌａ、Ｔｙｒ５１Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１００Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１００Ｔｈｒ、Ａｒｇ１０３Ａｌａ、Ｓｅｒ１０４Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１０４Ａｌａ、Ｌｅｕ１０８Ｌｙｓ、Ａｓｎ１４７Ｌｙｓ、Ａｒｇ１５０Ａｌａ、Ｇｌｙ１５１Ａｌａ、及びＬｅｕ１５５Ａｌａのうちの１つ又は複数が挙げられるがこれらに限定されない。

【0223】

いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、生物活性をもたらすが結合はもたらさない変異、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＥｌｉｏｔ，ｅｔ ａｌ．、Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ、１９９７年１月１５日、Ｂｌｏｏｄ、８９（２）に記載される変異を含む。

【0224】

いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、受容体との接触に関与するＥＰＯタンパク質の表面残基に関係する１つ又は複数の変異を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これらの表面残基の変異はタンパク質フォールディングに影響する可能性が低く、したがって生物活性がいくらか保持されると考えられている。変異導入可能な表面残基の例としては、１４７番目及び１５０番目の残基が挙げられるがこれらに限定されない。例示的な実施形態では、変異は置換であり、Ｎ１４７Ａ、Ｎ１４７Ｋ、Ｒ１５０Ａ、及びＲ１５０Ｅのうちの１つ又は複数が含まれる。

【0225】

いくつかの実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は、残基Ｎ５９、Ｅ６２、Ｌ６７、及びＬ７０における１つ又は複数の変異、及びジスルフィド結合形成に影響する１つ又は複数の変異を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これらの変異はフォールディングに影響し、及び／又は埋没した位置に存在すると予測され、したがって間接的に生物活性に影響すると考えられている。

【0226】

ある実施形態では、改変型ＥＰＯタンパク質は受容体への結合を著しく低下させるＫ２０Ｅ置換を含む。内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＥｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．、（１９９７）Ｂｌｏｏｄ、８９：４９３－５０２を参照されたい。

【0227】

本発明のキメラＥＰＯタンパク質に組み込まれ得るその他のＥＰＯ変異は、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＥｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．、（１９９７）Ｂｌｏｏｄ、８９：４９３－５０２及び内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＴａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．、（２０１０）ＰＥＤＳ、２３（４）：２５１－２６０に開示されている。

【0228】

ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、（ｉ）ＳＩＲＰ１αに対する標的化部分を有し、且つ（ｉｉ）本明細書に記載される改変型又は変異体型シグナル伝達物質のうちのいずれかと共に腫瘍細胞を指向する標的化部分を有する。ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１αを指向する標的化部分、及び腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２を指向する第２標的化部分を有する。

【0229】

様々な実施形態において、シグナル伝達物質は毒素又は毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素又は毒性酵素は植物及び細菌に由来する。毒素又は毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、緑膿菌毒素、炭疽毒素、リシン及びサポニンなどのリボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、及びヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。その他の毒素としては、開示の全体が参照により本明細書に取り込まれるＭａｔｈｅｗ，ｅｔ ａｌ．、（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ、１００（８）：１３５９－６５に開示される毒素が挙げられる。前記実施形態では、本発明のキメラタンパク質は細胞種特異的に細胞死を誘導するために利用され得る。前記実施形態では、毒素は、本明細書中の他のシグナル伝達物質について記載されるように、効果を減弱させるためにその毒素の親和性及び／又は活性を低下させるために改変、例えば変異導入され得る。

【0230】

シグナル伝達物質との多重特異性キメラ及び融合体
様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、本明細書に記載される１種類又は複数種類のシグナル伝達物質及び／又は（すなわち、ＳＩＲＰ１αに対する、標的化部分に加えて）１つ又は複数の追加標的化部分を含む。よって、本発明は、１種類又は複数種類のシグナル伝達物質、ＳＩＲＰ１αに対する標的化部分、及び／又は１つ又は複数の追加標的化部分を含むキメラ又は融合タンパク質を提供する。

【0231】

様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、（例えば、シナプスを作成するために）２つの異なる細胞を標的とする標的化部分、又は（例えば、より集中したシグナル伝達物質作用を得るために）同一の細胞を標的とする標的化部分を有する。

【0232】

様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は多重特異性であり、すなわち、前記キメラタンパク質は２種類以上の標的（例えば、抗原、又は受容体、又はエピトープ）を認識して結合する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有する２つ以上の標的化部分を含む。前記実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、同一の抗原上、異なる抗原上、又は異なる受容体上の２種類以上のエピトープを認識して結合する認識ドメインを有する２つ以上の標的化部分を含み得る。様々な実施形態において、そのような多重特異性キメラタンパク質は、結合力の増大及び／又は選択性の改善などの有利な特性を示す。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、２つの標的化部分を含み、二特異性であり、すなわち、同一の抗原上、異なる抗原上、又は異なる受容体上の２種類のエピトープに認識して結合する。

【0233】

様々な実施形態において、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、それぞれが本明細書に記載されるような抗体又は抗体誘導体である２つ以上の標的化部分を含む。例示的な実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１αに対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種類の抗体又は抗体誘導体（例えば、ＶＨＨ）、及び腫瘍抗原に対する認識ドメインを含む１種類の抗体又は抗体誘導体を含む。

【0234】

様々な実施形態において、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、異なる抗原又は受容体を標的とする２つ以上の標的化部分を有し、１つの標的化部分はその抗原又は受容体に対して減弱されていてもよく、例えば、標的化部分はその抗原又は受容体に低い親和性又は結合力で結合する（例えば、その他の標的化部分がその抗原又は受容体について有している親和性又は結合力よりも低い親和性又は結合力を含み、例えば結合親和性の間の差が、約１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍、又は５０００倍であり得る。例えば、親和性又は結合力が低い標的化部分は、中～高ｎＭ範囲又は低～中μＭ範囲のＫ_Ｄでその抗原又は受容体に結合し得るが、一方で親和性又は結合力が高い標的化部分は、中～高ｐＭ範囲又は低～中ｎＭ範囲のＫ_Ｄでその抗原又は受容体に結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、無差別な（promiscuous）抗原又は受容体を指向する減弱された標的化部分を含み、これにより（例えば、その他の標的化部分を介した）目的の細胞への標的化が改善され、且つ、（例えば、これらの実施形態においてもたらされる親和性よりも高い親和性で無差別な抗原又は受容体に結合することによって）治療の標的とされない細胞を含む複数の種類の細胞にわたる作用が防止され得る。

【0235】

本発明の多重特異性キメラタンパク質は、当技術分野において知られている方法を用いて構築可能である。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１／０２６２３４８号、及び国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。例示的な実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む本発明の多重特異性キメラタンパク質は、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＢｌａｔｔｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２４、１５１７－１５２４及び欧州特許第２９４７０３号に記載されるように、アミノ酸残基を有機誘導体化剤と反応させることによる化学架橋によって構築可能である。別の例示的な実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む、多重特異性キメラタンパク質は遺伝子融合により、すなわちそれらの個々の標的化部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより構築される。例えば、ＳＩＲＰ１αに対する抗原認識ドメインを有する第一の抗体又は抗体誘導体（例えば、ＶＨＨ）及び腫瘍抗原に対する認識ドメインを有する第二の抗体又は抗体誘導体をコードする単一ポリペプチドコンストラクトを形成可能である。二価又は多価のＶＨＨポリペプチドコンストラクトを作製するための方法は、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＰＣＴ特許出願国際公開第９６／３４１０３号に開示されている。その他の例示的な実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、リンカーの使用により構築可能である。例えば、ＳＩＲＰ１αに対する抗原認識ドメインを有する第一の抗体又は抗体誘導体（例えば、ＶＨＨ）のカルボキシ末端を腫瘍抗原に対する認識ドメインを有する第二の抗体又は抗体誘導体のアミノ末端に連結（又はその逆）してもよい。使用可能なリンカーの例は本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質の構成要素は、リンカーを使用せずに直接的に相互に連結される。

【0236】

様々な実施形態において、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１α及び１種類又は複数種類の免疫細胞上に見られる１種類又は複数種類の抗原を認識して結合する。免疫細胞としては、これらに限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、肥満細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞）、Ｂリンパ球、形質細胞、樹状細胞、又はそれらのサブセットが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、目的の抗原に特異的に結合し、効果的に１種類又は複数種類の免疫細胞を直接的又は間接的に動員する。

【0237】

様々な実施形態において、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、ＳＩＲＰ１α及び腫瘍細胞上に見られる１種類又は複数種類の抗原を認識して結合する。これらの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、免疫細胞（例えば、マクロファージ）を腫瘍細胞又は腫瘍微小環境へ直接的又は間接的に動員し得る。前記実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、マクロファージによる腫瘍細胞の貪食を促進する。

【0238】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍の免疫攻撃に有利である免疫細胞のバランスを変化させることができ、又はそのような変化を伴う方法において使用することができる。例えば、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍を死滅させ得る及び／又は抑制し得る細胞（例えば、抗腫瘍性マクロファージ（例えばＭ１マクロファージ）、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、及び樹状細胞）に有利であり、且つ、腫瘍を防護する細胞（例えば、骨髄性抑制細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、又はそれらのサブセット）に抵抗するように、免疫細胞の比率を臨床的に重要な部位において変化させることができる。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、制御性Ｔ細胞に対するエフェクターＴ細胞の比率を増加させることができる。

【0239】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、腫瘍細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、腫瘍細胞を直接的又は間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の動員は、腫瘍細胞を貪食する、死滅させる、及び／又は抑制することができる１種類又は複数種類のエフェクター細胞（例えば、マクロファージ）への動員である。

【0240】

腫瘍細胞又はがん細胞は、身体の器官及び系の正常な機能に干渉する細胞又は組織の無制御増殖、及び／又は細胞生存の異常増加、及び／又はアポトーシスの抑制に関連する。例えば、腫瘍細胞には良性及び悪性のがん、ポリープ、過形成、並びに休眠腫瘍又は微小転移巣が含まれる。腫瘍細胞の例としては、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳及び中枢神経系のがん、乳がん、腹膜がん、子宮頸部がん、絨毛癌、大腸がん、結合組織がん、消化器がん、子宮内膜がん、食道がん、眼のがん、頭頚部がん、胃がん（胃腸がんを含む）、神経膠芽腫、肝細胞癌、肝癌、上皮内新生物、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔がん（口唇、舌、口、及び咽頭）、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸がん、呼吸器がん、唾腺癌、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮又は子宮内膜のがん、泌尿器がん、外陰がん、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫並びにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、並びに他の癌及び肉腫、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連する浮腫）、及びメグズ症候群の細胞が挙げられるがこれらに限定されない。

【0241】

腫瘍細胞又はがん細胞としては、これらに限定されないが、癌、（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、及び移行上皮癌を含む様々なサブタイプ）、肉腫（例えば、骨肉腫及び軟組織肉腫を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、及び有毛細胞白血病を含む）、リンパ腫及び骨髄腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫、ＭＧＵＳ、及び形質細胞腫を含む）、及び中枢神経系がん（例えば、脳がん（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、希突起神経膠腫、及び上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び神経腫）、及び脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫及び神経繊維腫））が挙げられる。

【0242】

腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／メランＡ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、大腸がん関連抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）及びその免疫原性エピトープであるＣＡＰ－１及びＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）及びその免疫原性エピトープであるＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、及びＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３ζ鎖、ＭＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニン及びγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリー腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶコード核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、及びＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの腫瘍抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0243】

いくつかの実施形態では、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、腫瘍細胞上の抗原だけではなくＳＩＲＰ１αも認識して結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性キメラタンパク質は、マクロファージを腫瘍細胞又は腫瘍微小環境へ直接的又は間接的に動員する。

【0244】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、Ｔ細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、Ｔ細胞を直接的又は間接的に動員する。ある実施形態では、抗原認識ドメインはエフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を直接的又は間接的に動員し、例えばいくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＯ^＋）、ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞（例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞（例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えばＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えばＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋、又はＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋）；ＣＤ６２Ｌ^＋エフェクターＴ細胞；初期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ＣＤ６２Ｌ^－）及び後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^－ＣＤ６２Ｌ^－）（それぞれＴｅｍＥ及びＴｅｍＬ）を含むＣＤ８^＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、ＣＤ１２７（^＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（^－）ＣＤ２５（^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えばＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えばＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋及びＣＣＲ５^＋、又はαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－１２Ｒ^＋、ＩＦＮγＲ^＋、ＣＸＣＲ３^＋）；ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えばＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋及びＣＣＲ８^＋、又はαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－４Ｒ^＋、ＩＬ－３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ－１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えばαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ－１Ｒ^＋）；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ^＋エフェクターＴ細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（^－）エフェクターＴ細胞；並びにＩＬ－２、ＩＬ－４及び／又はＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。

【0245】

目的のＴ細胞抗原（及び、適用可能な場合は細胞外ドメインも含まれる）の例としては、例えば、ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ－２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ－４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ－６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ－７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－ＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ－１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ－１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ－１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ－１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ－２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬ Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬ Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１Ｒ１、及びＴＳＬＰ Ｒが挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらのＴ細胞抗原の例うちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0246】

非限定的な例として、様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、Ｔ細胞上に発現するチェックポイントマーカー、例えばＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、及びＡ２ａＲのうちの１つ又は複数を指向する標的化部分を有する。

【0247】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、Ｂ細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、Ｂ細胞を直接的又は間接的に動員し、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、及びＣＤｗ１５０が含まれる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらのＢ細胞抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0248】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、ナチュラルキラー細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ナチュラルキラー細胞を直接的又は間接的に動員し、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｒ１α、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－εＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ネクチン－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ受容体様分子３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄ、及びＵＬＢＰ－３が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらのＮＫ細胞抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0249】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、マクロファージ／単球に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、マクロファージ／単球を直接的又は間接的に動員し、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ラテキシン（Ｌａｔｅｘｉｎ）、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、シグレック－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－１ＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ－１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、Ｃ１ｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３、及びＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらのマクロファージ／単球抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0250】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、樹状細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、樹状細胞を直接的又は間接的に動員し、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０、４－アミノ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－オキソ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、ランゲリン、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、Ｃ１ｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ ＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／シグレック－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬ１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、オステオアクチビンＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＣＥ２０５、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、デクチン－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、及びバニロイドＲ１が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの例ＤＣ抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0251】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、肥満細胞、好塩基球、好中球、好酸球、又はそれらのサブセットから選択される免疫細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、肥満細胞、好塩基球、好中球、好酸球、又はそれらのサブセットを直接的又は間接的に動員し、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１種類又は複数種類の疾患細胞又は治療効果が調整される細胞を含む場所）へ動員する。

【0252】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、巨核球及び／又は血小板に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の巨核球抗原及び／又は血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、及びＴＳＰが挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質はこれらの巨核球及び／又は血小板抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0253】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、赤血球に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコプロテインＡ、グリコプロテインＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、及びＲｈ抗原が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの赤血球抗原の例のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0254】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、肥満細胞に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の肥満細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢ１が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの肥満細胞抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0255】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、好塩基球に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、及びＣＤ１６４が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの好塩基球抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0256】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、好中球に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、及びｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、及びＣＤ１７７が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの好中球抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0257】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、好酸球に関連する標的（例えば、抗原又は受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４、及びＣＤ６９が挙げられる。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの好酸球抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。

【0258】

様々な実施形態において、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、当業者に知られている適切な抗原又は細胞表面マーカーに特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原又は細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭ１、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭ１、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨ１０、ＭＹＨ１１、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤ１Ｄ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣ１、ＴＡＣＳＴＤ１などの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖベータ－３（αＶβ３）、Ｅ－セレクチンなどの血管新生マーカー；及びＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、及びＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、これらの抗原のうちの１つ又は複数に結合する標的化部分を含む。様々な実施形態において、キメラタンパク質の標的化部分は、これらの抗原を有する細胞のうちの１つ又は複数に結合する。

【0259】

様々な実施形態において、本発明の多重特異性キメラタンパク質は、チェックポイントマーカー、例えばＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０又はＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０又はＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ又はＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、及びＡ２ａＲのうちの１つ又は複数を指向する１つ又は複数の標的化部分を有する。

【0260】

非限定的な例として、様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞上に発現するチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、及びＡ２ａＲのうちの１つ又は複数を指向する標的化部分を有し、且つ（ｉｉ）本明細書に記載される改変型（例えば、変異体型）シグナル伝達物質のうちのいずれかと共に腫瘍細胞を指向する標的化部分を有する。

【0261】

様々な実施形態において、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、ＰＤ－１を指向する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、選択的にＰＤ－１ポリペプチドに結合する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－１ポリペプチドに選択的に結合する１つ又は複数の抗体、抗体誘導体若しくは抗体フォーマット、ペプチド若しくはポリペプチド、又は融合タンパク質を含む。

【0262】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体であるペムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５、キイトルーダとしても知られる）又はその断片を含む。ペムブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．、（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３６９（２）：ｐｐ．１３４－４４、米国特許第８，３５４，５０９号、及び国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されており、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、ペムブロリズマブ、又は本明細書に記載される方法に使用するための抗原結合断片は、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0263】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体であるニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＯＰＤＩＶＯとしても知られる）又はその断片を含む。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）、及びＰＤ－１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号及び国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されており、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、ニボルマブ又はその抗原結合断片は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0264】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体であるピディリズマブ（ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ－１としても知られる）又はその断片を含む。ピディリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号及び国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されており、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態ではこの抗ＰＤ－１抗体、又は本明細書に記載される方法に使用するためのその抗原結合断片は米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５～１８（米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５（配列番号７３）、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号７４）、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号７５）、及び米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号７６））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０～２４（米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号７７）、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号７８）、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２（配列番号７９）、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号８０）、及び米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号８１））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0265】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８を含む軽鎖（配列番号７６）及び米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２を含む重鎖（配列番号７９）を含む。

【0266】

ある実施形態では、標的化部分はＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ－０６８０としても知られる）を含む。

【0267】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号及び国際公開第２０１１／０６６３４２号に開示されている、ＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質であるＡＭＰ－２２４を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。前記実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４を含む標的化ドメイン（配列番号８２）、及び／又は国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質（配列番号８３）を含んでいてもよい。

【0268】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号又は米国特許第８，９０７，０５３号に開示されるＡＵＮＰ１２ペプチド又は他のペプチドのいずれかを含む。例えば、標的化部分は、以下の配列（配列番号８４）を有するＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８又は配列番号４９）を含む場合がある。

【化5】

【0269】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－１抗体である１Ｅ３又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｅ３又はその抗原結合断片は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0270】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号におい開示されるような抗ＰＤ－１抗体である１Ｅ８又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｅ８又はその抗原結合断片は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0271】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－１抗体である１Ｈ３又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｈ３又はその抗原結合断片は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0272】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば米国特許第８，９０７，０６５号及び国際公開第２００８／０７１４４７号に開示されるようなＰＤ－１を指向するＶＨＨを含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７～３５１（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号９１）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号９２）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号９３）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号９４）、及び米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号９５））を含む。

【0273】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号及び国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示されるような抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれか１つ又はその断片を含み、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５～２９（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号９６）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号９７）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号９８）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号９９）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号１００））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０～３３（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号１０１）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号１０２）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号１０３）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号１０４））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0274】

様々な実施形態において、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ社）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、及びＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ社）から選択される１つ又は複数の抗ＰＤ－１抗体又はその抗体断片を含む。

【0275】

様々な実施形態において、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１を指向する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は選択的にＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに結合する１種類又は複数種類の抗体、抗体誘導体若しくは抗体フォーマット、ペプチド若しくはポリペプチド、又は融合タンパク質を含む。

【0276】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブとしても知られる）又はその断片を含む。ＭＥＤＩ４７３６はＰＤ－Ｌ１に対して選択的であり、ＰＤ－１受容体及びＣＤ８０受容体へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する。本明細書に記載される方法に使用するためのＭＥＤＩ４７３６及びその抗原結合断片は、重鎖と軽鎖、又は重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は国際公開第２０１６／０６２７２号に開示されており、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するためのＭＥＤＩ４７３６又はその抗原結合断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0277】

例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するためのＭＥＤＩ４７３６又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１０７）、及び／又は国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１０８）を含む。

【0278】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６としても知られる）又はその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するためのアテゾリズマブ又はその抗原結合断片は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0279】

ある実施形態では、標的化部分は抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる）又はその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するためのアベルマブ又はその抗原結合断片は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0280】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるＢＭＳ－９３６５５９（１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５としても知られる）又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するためのＢＭＳ－９３６５５９又はその抗原結合断片は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0281】

ある実施形態では、標的化部分は米、国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である３Ｇ１０又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための３Ｇ１０又はその抗原結合断片は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0282】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１０Ａ５又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１０Ａ５又はその抗原結合断片は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0283】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である５Ｆ８又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための５Ｆ８又はその抗原結合断片は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0284】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１０Ｈ１０又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１０Ｈ１０又はその抗原結合断片は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0285】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１Ｂ１２又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｂ１２又はその抗原結合断片は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0286】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である７Ｈ１又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための７Ｈ１又はその抗原結合断片は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0287】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１１Ｅ６又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１１Ｅ６又はその抗原結合断片は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0288】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１２Ｂ７又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１２Ｂ７又はその抗原結合断片は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0289】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号及び国際公開第２００７／００５８７４号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１３Ｇ４又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１３Ｇ４又はその抗原結合断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0290】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１Ｅ１２又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｅ１２又はその抗原結合断片は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0291】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である１Ｆ４又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための１Ｆ４又はその抗原結合断片は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0292】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２Ｇ１１又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２Ｇ１１又はその抗原結合断片は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0293】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である３Ｂ６又はその断片を含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための３Ｂ６又はその抗原結合断片は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0294】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号及び国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である３Ｄ１０又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための３Ｄ１０又はその抗原結合断片は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0295】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号及び国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４～３８（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号１４３）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号１４４）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号１４５）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号１４６）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号１４７））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９～４２（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号１４８）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号１４９）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号１５０）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号１５１））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0296】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．７Ａ４又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．７Ａ４又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１５２）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１５３）を含む。

【0297】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．９Ｄ１０又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．９Ｄ１０又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１５４）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１５５）を含む。

【0298】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．１４Ｈ９又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．１４Ｈ９又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１５６）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１５７）を含む。

【0299】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．２０Ａ８又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．２０Ａ８又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１５８）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１５９）を含む。

【0300】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である３．１５Ｇ８又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための３．１５Ｇ８又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１６０）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１６１）を含む。

【0301】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である３．１８Ｇ１又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための３．１８Ｇ１又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１６２）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１６３）を含む。

【0302】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．７Ａ４ＯＰＴ又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．７Ａ４ＯＰＴ又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１６４）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１６５）を含む。

【0303】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、及び米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である２．１４Ｈ９ＯＰＴ又はその断片を含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴ又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（配列番号１６６）、及び／又は国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号１６７）を含む。

【0304】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、及び７８（国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号１６８）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号１６９）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号１７０）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号１７１）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号１７２）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号１７３）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号１７４）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号１７５）、及び国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号１７６））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、及び８６（国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号１７７）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号１７８）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号１７９）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号１８０）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号１８１）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号１８２）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号１８３）、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号１８４）、及び国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号１８５））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0305】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、及び４６（国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号１８６）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号１８７）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号１８８）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号１８９）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号１９０）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号１９１）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号１９２）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号１９３）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号１９４）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号１９５）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号１９６）、及び国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号１９７））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、及び４８（国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号１９８）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号１９９）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号２００）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号２０１）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号２０２）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号２０３）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号２０４）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号２０５）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号２０６）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号２０７）、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号２０８）、及び国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号２０９））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0306】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、その文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８、５０、８２、及び８６（国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号２１０）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号２１１）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号２１２）、及び国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号２１３））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、及び７８（国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号２１４）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４６（配列番号２１５）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号２１６）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号２１７）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号２１８）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号２１９）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号２２０）、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号２２１）、及び国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号２２２））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0307】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号及び米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるような抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖領域（配列番号２２３）、及び／又は国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（配列番号２２４）を含む。

【0308】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号に開示されるようなＣＮＣＭ Ｉ－４１２２、ＣＮＣＭ Ｉ－４０８０、及びＣＮＣＭ Ｉ－４０８１のＣＮＣＭ受託番号で入手可能なハイブリドーマから得ることが可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか１つを含み、その文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0309】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば米国特許第８，９０７，０６５号及び国際公開第２００８／０７１４４７号に記載されるようなＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨを含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨには、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４～３９９（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号２２５）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号２２６）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号２２７）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号２２８）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号２２９）、及び米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号２３０））が含まれる。

【0310】

様々な実施形態において、本開示の多重特異性キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２を指向する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドに選択的に結合する１つ又は複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドに選択的に結合する１つ又は複数の抗体、抗体誘導体若しくは抗体フォーマット、ペプチド若しくはポリペプチド、又は融合タンパク質を含む。

【0311】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば米国特許第８，９０７，０６５号及び国際公開第２００８／０７１４４７号に記載されるようなＰＤ－Ｌ２を指向するＶＨＨを含み、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９～４５５（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号２３１）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号２３２）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号２３３）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号２３４）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号２３５）、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号２３６）、及び米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号２３７））を含む。

【0312】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号及び国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示される抗ＰＤ－Ｌ２抗体のうちのいずれか１つを含み、それらの文献の内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法に使用するための前記抗体又はその抗原結合断片は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３～４７（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号２３８）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号２３９）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号２４０）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号２４１）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号２４２））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８～５１（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号２４３）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号２４４）、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号２４５）、及び米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号２４６））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0313】

様々な実施形態において、本発明の標的化部分は、本明細書に開示される配列のうちのいずれかに対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一である（例えば、本明細書に開示される配列のうちのいずれかと約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列が同一である）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及び／又はＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。

【0314】

様々な実施形態において、本発明の標的化部分は、本明細書に開示されるようなＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及び／又はＰＤ－Ｌ２を標的とする、重鎖配列、軽鎖配列、重鎖可変領域配列、軽鎖可変領域配列、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、及びフレームワーク領域配列の任意の組合せを含み得る。

【0315】

ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及び／又はＰＤ－Ｌ２に選択的に結合する又はこれらを標的とするその他の抗体、抗体誘導体若しくは抗体フォーマット、ペプチド若しくはポリペプチド、又は融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８２１７１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８７７９１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、及び国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されており、それらの文献の開示の全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0316】

いくつかの実施形態では、標的化部分はケモカインなどの天然リガンドである。本発明のキメラタンパク質に含まれ得る例示的なケモカインとしては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＬＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１、ＨＣＣ－４、及びＬＤＧＦ－ＰＢＰが挙げられるがこれらに限定されない。例示的な実施形態では、標的化部分は、樹状細胞受容体ＸＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＸＣＬ１であってもよい。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ８を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ２又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ３である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ４である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ、４又はＣＣＲ５を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ５である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ６である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ２又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ７である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ８である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ９である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１０である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１１である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１３である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１又はＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１４である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１又はＣＣＲ３を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１５である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、又はＣＣＲ８を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１６である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ４を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１７である。別の例示的な実施形態では、記標的化部分は、ＣＣＲ７を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ１９である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ６を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２０である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ７を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２１である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ４を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２２である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２３である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ３を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２４である。別の例示的な実施形態では、標的化部分はＣ、ＣＣＲ９を認識して結合するケモカインであるＣＬ２５である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ３を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２６である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ１０を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２７である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＣＲ３又はＣＣＲ１０を認識して結合するケモカインであるＣＣＬ２８である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ１又はＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ１である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ２である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ３である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ３Ｂを認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ４である。別の例示的な実施形態では、標的化部分はＣＸＣＬ５であり、ＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ１又はＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ６である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ１又はＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ８である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ３を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ９である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ３を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ１０である。別の例示的な実施形態では、標的化部分はＣＸＣＬ１１であり、ＣＸＣＲ３又はＣＸＣＲ７を認識して結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ４又はＣＸＣＲ７を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ５を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ１３である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ６を認識して結合するケモカインであるＣＸＣＬ１６である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸＣＲ２を認識して結合するケモカインであるＬＤＧＦ－ＰＢＰである。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＸＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＸＣＬ２である。別の例示的な実施形態では、標的化部分は、ＣＸ３ＣＲ１を認識して結合するケモカインであるＣＸ３ＣＬ１である。

【0317】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、標的化部分の様々な組み合わせを含む。例示的な実施形態では、本開示のキメラタンパク質は２つの標的化部分を含む場合があり、両方の標的化部分が抗体又は抗体誘導体である。別の例示的な実施形態では、本開示のキメラタンパク質は２つの標的化部分を含む場合があり、両方の標的化部分が細胞受容体の天然リガンドである。その他の例示的な実施形態では、本開示のキメラタンパク質は２つの標的化部分を含む場合があり、それらの標的化部分のうちの一方が抗体又は抗体誘導体であり、他方の標的化部分が細胞受容体の天然リガンドである。

【0318】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）の機能を調整し（非限定的な例として、部分的又は完全に中和し）、例えば、抗原が有する生物学的作用を実質的に抑制、低減、又は中和する。例えば、様々な認識ドメインが、腫瘍を有する患者などの免疫系を能動的に抑制している、又は抑制する能力を有する、１種類又は複数種類の腫瘍抗原を対象とする場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、免疫抑制シグナル（例えば、チェックポイント抑制因子）、例えば、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ４、ＧＩＴＲ、ガレクチン－９、ＨＶＥＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＳＩＲＰα、ＩＣＯＳ、ＣＤ１７２ａ、及びＴＭＩＧＤ２のうちの１つ又は複数の機能を調整する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、非限定的な例として、ＰＤ－Ｌ１若しくはＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１の結合、及び／又はＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、及びＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つ又は複数とのＣＴＬＡ－４の結合による免疫抑制シグナルの伝達を妨害、阻止、抑制、及び／又は阻害するように改変されている。

【0319】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に結合するがその機能を調整せず、例えば、認識ドメインは、結合抗体であるか、又は結合抗体に類似している。例えば、様々な実施形態において、認識ドメインは単に抗原又は受容体を標的化するが、該抗原又は受容体が有する生物学的作用を実質的に阻害、抑制、又は機能調整しない。例えば、上述の（例えば、全長抗体などと比較して）小さい抗体フォーマットの中には、接近し難いエピトープを標的とする能力を有し、且つ、より広範な位置での特異的な結合をもたらすものもある。様々な実施形態において、認識ドメインは、生物活性にとって重要である抗原又は受容体の部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れているエピトープに結合する。

【0320】

そのような非中和性結合は、エフェクター抗原、例えば本明細書に記載される任意のエフェクター抗原を介して、活性免疫細胞を必要部位へ直接的又は間接的に動員するために本開示のキメラタンパク質を使用する方法を含む、本発明の様々な実施形態において使用される。例えば、様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍を減少させる、又は除去する方法において、ＣＤ８を介して細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞へ直接的又は間接的に動員するために使用され得る（例えば、本開示のキメラタンパク質は、抗ＣＤ８認識ドメイン及び抗腫瘍抗原認識ドメインを含んでいてもよい）。前記実施形態では、ＣＤ８発現性細胞傷害性Ｔ細胞を直接的又は間接的に動員するが、ＣＤ８活性を機能的に調整しないことが望ましい。反対に、これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍減少作用又は腫瘍除去作用に重要である。他の例として、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍を減少させるか又は除去する様々な方法において、ＣＬＥＣ９Ａを介して樹状細胞（ＤＣ）を直接的又は間接的に動員するために使用される（例えば、本開示のキメラタンパク質は、抗ＣＬＥＣ９Ａ認識ドメイン及び抗腫瘍抗原認識ドメインを含んでいてもよい）。前記実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ発現性ＤＣを直接的又は間接的に動員するが、ＣＬＥＣ９Ａ活性を機能的に調整しないことが望ましい。反対に、これらの実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａシグナル伝達は、腫瘍減少作用又は腫瘍除去作用に重要である。

【0321】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、例えば、樹状細胞上のＸＣＲ１に結合する。例えば、前記認識ドメインは、いくつかの実施形態では、ＸＣＬ１の全体若しくは一部、又は非中和性抗ＸＣＲ１因子を含む。

【0322】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、免疫調節性（例えば、免疫刺激性又は免疫抑制性）抗原に結合する。様々な実施形態において、免疫調節性抗原は、４－１ＢＢ、ＯＸ－４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド、ＯＸ－４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンド、及びＴＬ１Ａのうちの１つ又は複数である。様々な実施形態において、このような免疫刺激性抗原は腫瘍細胞上に発現する。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、このような免疫刺激性抗原に結合するがその機能を調節せず、したがって該抗原を発現する細胞の潜在的な腫瘍減少能力又は腫瘍除去能力を減少又は消失させることなくこれらの細胞を動員することが可能になる。

【0323】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質の認識ドメインは、中和活性を有する２つの認識ドメインを含むか、非中和（例えば、結合）活性を有する２つの認識ドメイン含むか、又は中和活性を有する１つの認識ドメイン及び非中和（例えば、結合）活性を有する１つの認識ドメインを含むキメラタンパク質という状態であってもよい。

【0324】

様々な実施形態において、多重特異性キメラタンパク質は、非細胞構造体部分である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原又は受容体は、完全な細胞又は細胞構造体の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原又は受容体は細胞外抗原又は受容体である。いくつかの実施形態では、標的は非タンパク質性の非細胞性マーカーであり、それには、限定されないが、ＤＮＡ又はＲＮＡを含む核酸、例えば、ネクローシス腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、又はコレステロールなどの細胞外沈着物が含まれる。

【0325】

いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、間質若しくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）又はそれらの関連マーカーの非細胞成分の一部である。本明細書において使用される場合、間質は組織又は器官の結合支持骨格を指す。間質には、線維芽細胞／筋線維芽細胞、膠細胞、上皮細胞、脂肪細胞、免疫細胞、血管細胞、平滑筋細胞、及び免疫細胞などの細胞と細胞外マトリックス（ＥＣＭ）及び細胞外分子との集合物が含まれることがある。様々な実施形態において、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックス及び細胞外分子など、間質の非細胞成分の一部である。本明細書において使用される場合、ＥＣＭは全ての組織及び器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、及び多糖類を含む、多くの生化学的に別個の構成成分から構成される。ＥＣＭのこれらの構成成分は、通常は、隣接する細胞によって産生され、エクソサイトーシスによってＥＣＭに分泌される。分泌されるとＥＣＭ構成成分は凝集して巨大分子の複雑なネットワーク構造を形成することが多い。様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の構成成分上に局在する標的（例えば、抗原若しくは受容体又は非タンパク質性分子）を認識する標的化部分を含む。ＥＣＭの構成成分の例としては、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、線維、及び他のＥＣＭタンパク質又はＥＣＭ非タンパク質、例えば多糖類及び／又は脂質、又はＥＣＭ結合分子（例えばタンパク質又は非タンパク質、例えば多糖類、核酸、及び／又は脂質）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0326】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化されたタンパク質である。基本的なプロテオグリカン単位は、１つ又は複数の共有結合したグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖をコアタンパク質と共に含む。プロテオグリカンは正に荷電したナトリウムイオン（Ｎａ＋）を誘引する正味の負の電荷を有し、それにより浸透作用を介して水分子を誘引し、ＥＣＭ及び常在性細胞を水和状態に保つ。プロテオグリカンはＥＣＭ内に増殖因子を捕捉及び貯蔵することにも役立つ場合がある。本発明のキメラタンパク質が標的とし得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、及びケラタン硫酸が挙げられるがこれらに限定されない。ある実施形態では、標的化部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。

【0327】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭ線維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ線維としては、コラーゲン線維及びエラスチン線維が挙げられる。いくつかの実施形態では、標的化部分は、コラーゲン又はコラーゲン線維上の１つ又は複数のエピトープを認識する。コラーゲンはＥＣＭ中に最も大量に存在するタンパク質である。コラーゲンは線維性タンパク質としてＥＣＭ中に存在し、常在性細胞に構造的支持を提供する。１つ又は複数の実施形態において、標的化部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、Ｖ型、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ型、ＸＩＩ型、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ型、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、及び／又はＶＩ型、ＶＩＩ型、若しくはＸＩＩＩ型のコラーゲンを含むＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識して結合する。エラスチン線維は組織に弾性を与え、それにより必要時に組織が伸長した後に元の状態まで戻ることが可能になる。いくつかの実施形態では、標的部分は、エラスチン又はエラスチン線維上の１つ又は複数のエピトープを認識する。

【0328】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、又はナイドジェン／エンタクチンを含む１種類又は複数種類のＥＣＭタンパク質を認識する。

【0329】

ある実施形態では、標的化部分はテネイシンを認識して結合する。糖タンパク質であるテネイシン（ＴＮ）ファミリーには、テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、及びテネイシンＷの少なくとも４つのメンバーが含まれる。テネイシンタンパク質の一次構造は同じ連続配列、すなわち、アミノ末端７アミノ酸リピート、上皮成長因子（ＥＧＦ）様リピート、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインリピート、及びカルボキシル末端フィブリノーゲン球状ドメインの順で並んだ数個の共通モチーフを含む。各タンパク質メンバーは、ＥＧＦ様リピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型リピートの数と性質についての典型的な多様性と関連している。特にテネイシン－Ｃに関してはアイソフォームバリアントも存在する。２７種類を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアント及び／又はアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、標的化部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識して結合する。同様に、テネイシン－Ｒも様々なスプライスバリアント及びアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは、通常、二量体又は三量体として存在する。テネイシン－Ｘはテネイシンファミリーの中で最大のメンバーであり、三量体として存在することが知られている。テネイシン－Ｗは三量体として存在する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、テネイシンタンパク質上の１つ又は複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、単量体型、及び／又は二量体型、及び／又は三量体型、及び／又は六量体型のテネイシンタンパク質を認識する。

【0330】

ある実施形態では、標的化部分はフィブロネクチンを認識して結合する。フィブロネクチンはＥＣＭ中のコラーゲン線維と細胞を連結する糖タンパク質であり、細胞がＥＣＭを介して移動することを可能にする。インテグリンに結合すると、フィブロネクチンは折り畳み構造がほどけて機能的二量体を形成する。いくつかの実施形態では、標的化部分は単量体型及び／又は二量体型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン上の１つ又は複数のエピトープを認識する。例示的な実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）又はフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、リウマチ性関節炎、糖尿病、及びがんを含む様々な疾患及び障害に関連している。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＤＡアイソフォームを含有するフィブロネクチンを認識し、癌細胞を含む疾患細胞にキメラタンパク質を標的化するために利用され得る。いくつかの実施形態では、標的化部分はＥＤＢアイソフォームを含有するフィブロネクチンを認識する。様々な実施形態において、そのような標的化部分は、腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞にキメラタンパク質を標的化するために利用され得る。

【0331】

ある実施形態では、標的化部分はフィブリンを認識して結合する。フィブリンはＥＣＭのマトリックスネットワーク構造中に見出されることが多い別のタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリンの重合を引き起こすフィブリノーゲンに対するトロンビンプロテアーゼの作用によって形成される。いくつかの実施形態では、標的化部分はフィブリン上の１つ又は複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は単量体型及び多量体型のフィブリンを認識する。

【0332】

ある実施形態では、標的化部分はラミニンを認識して結合する。ラミニンは、細胞及び器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である基底膜の主要構成成分である。ラミニンはα鎖、β鎖、及びγ鎖を含むヘテロ三量体タンパク質である。いくつかの実施形態では、標的化部分はラミニン上の１つ又は複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は単量体型、二量体型、並びに三量体型のラミニンを認識する。

【0333】

ある実施形態では、標的化部分はナイドジェン又はエンタクチンを認識して結合する。ナイドジェン／エンタクチンは非常によく保存された硫酸化糖タンパク質のファミリーである。それらの糖タンパク質は基底膜の主要構造形成成分を構成し、基底膜においてラミニン及びコラーゲンＩＶネットワーク構造を連結するように機能する。このファミリーのメンバーには、ナイドジェン－１及びナイドジェン－２が含まれる。様々な実施形態において、標的化部分は、ナイドジェン－１及び／又はナイドジェン－２上のエピトープを認識する。

【0334】

様々な実施形態において、標的化部分は、本明細書に記載される標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）のうちのいずれかの上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つ又は複数の直鎖状エピトープを認識する。本明細書において使用される場合、直鎖状エピトープとは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列のことをいう。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つ又は複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書において使用される場合、立体構造エピトープとは抗原認識ドメインが認識可能である特徴及び／又は形状及び／又は三次構造を有する三次元表面を形成する（不連続であってもよい）アミノ酸の１つ又は複数のセクションのことをいう。

【0335】

様々な実施形態において、標的化部分は、本明細書に記載される標的（例えばＥＣＭタンパク質）のうちのいずれかの全長、及び／又は成熟型、及び／又はアイソフォー、ム及び／又はスプライスバリアント、及び／又は断片、及び／又は他の任意の天然若しくは合成の類似体、バリアント、若しくは変異体に結合してもよい。様々な実施形態において、標的化部分は、単量体、二量体、三量体、四量体、ヘテロ二量体、多量体、及び会合体を含む、本明細書に記載される任意の形態のタンパク質に結合してもよい。様々な実施形態において、標的化部分は、グリコシル化型及び／又はリン酸化型など、本明細書に記載される翻訳後修飾型のタンパク質に結合してもよい。

【0336】

様々な実施形態において、標的化部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメイン含む。ある実施形態では、前記ＤＮＡは、ネクローシス腫瘍細胞又はアポトーシス腫瘍細胞又は他の疾患細胞から細胞外空間に放出される。

【0337】

様々な実施形態において、標的化部分は、アテローム性動脈硬化プラークに関連する１種類又は複数種類の非細胞構造体を認識する抗原認識ドメイン含む。２種類のアテローム性動脈硬化プラークが知られている。線維－脂質（線維－脂肪）性プラークは、動脈の内膜下の脂肪含有細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下にプラークのアテローム性コアを覆う線維性被膜が存在する。コアには、組織コレステロール及びコレステロールエステル含量が高い担脂肪細胞（マクロファージ及び平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、及び細胞破片が含まれる。進行したプラークでは、プラークの中央コアは通常では（死んだ細胞から放出された）細胞外コレステロール沈着物を含有し、それにより空の針状の割れ目を有するコレステロール結晶を含む領域を形成する。プラークの辺縁には比較的に若い泡沫細胞及び毛細血管が存在する。線維性プラークは、動脈壁内で、内膜の下にも局在することで壁を肥厚及び増大させることになり、時には局在する斑状のプラークが管腔を狭めるとともに筋肉層をいくらか萎縮させる。線維性プラークは、コラーゲン線維（好酸性）、カルシウム沈殿物（好ヘマトキシリン性）、及び脂肪含有細胞を含有する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、細胞破片、及びカルシウム又は他の鉱物沈着物若しくは沈殿物など、これらのプラークの非細胞成分うちの１つ又は複数を認識して結合する。いくつかの実施形態では、細胞破片は、死んだ細胞から放出された核酸、例えばＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0338】

様々な実施形態において、標的化部分は、神経変性疾患に関連する脳プラークに見られる１種類又は複数種類の非細胞構造体を認識する抗原認識ドメイン含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、アルツハイマー病の患者の脳に見られるアミロイドプラーク中に局在する１種類又は複数種類の非細胞構造体を認識して結合する。例えば、標的化部分は、アミロイドプラークの主要成分であるアミロイドβペプチドを認識して結合することがある。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ハンチントン病の患者に見られる脳プラーク中に局在する１種類又は複数種類の非細胞構造体を認識して結合する。様々な実施形態において、標的化部分は、レビー小体型認知症及び封入体筋炎などの他の神経変性疾患又は筋骨格疾患に関連するプラークに見られる１種類又は複数種類の非細胞構造体を認識して結合する。

【0339】

リンカー及び官能基
様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、１つ又は複数の官能基、残基、又は部分を含んでよい。様々な実施形態において、１つ又は複数の官能基、残基、又は部分は、本明細書に記載されるシグナル伝達物質又は標的化部分（例えば、ＳＩＲＰ１α）うちのいずれかに結合されるか、又は遺伝的に融合される。いくつかの実施形態ではそのような官能基、残基、又は部分によって、本発明のキメラタンパク質に１種類又は複数種類の所望の特性又は機能が付与される。そのような官能基の例、及びそれらの官能基を本開示のキメラタンパク質に導入するための方法の例は当技術分野において知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社、ペンシルバニア州、イーストン（１９８０）を参照されたい。

【0340】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、半減期を延長するか、又は薬力学的特性及び薬物動態学的特性を改善するために、別の作用物質と結合（conjugate）及び／又は融合されてもよい。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧなど）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン又はＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどのうちの１つ又は複数と融合又は結合されてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、抗体又はＦｃ断片などの抗体断片と融合又は結合されてもよい。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ末端又はＣ末端のいずれかに融合されてもよい。様々な実施形態において、個々のキメラタンパク質のそれぞれが、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＢｉｏＤｒｕｇｓ、（２０１５）２９：２１５－２３９に記載される作用物質のうちの１つ又は複数に融合されている。

【0341】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、適切な薬学的に許容可能な重合体、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）又はその誘導体（メトキシポリ（エチレングリコール）、すなわちｍＰＥＧなど）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合によりＳＩＲＰ１α結合タンパク質の半減期が増加し、及び／又は免疫原性が低下する。一般に任意の適切な形態のＰＥＧ化、例えば抗体及び抗体断片（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）の技術分野において使用されるＰＥＧ化などを用いることができる。例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＣｈａｐｍａｎ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、５４、ｐｐ．５３１－５４５（２００２）、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ及びＨａｒｒｉｓ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、５４、ｐｐ．４５３－４５６（２００３）、Ｈａｒｒｉｓ ａｎｄ Ｃｈｅｓｓ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．、２（２００３）、及び国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。タンパク質のＰＥＧ化のための様々な試薬は市販もされており、例えば米国のＮｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社より入手可能である。いくつかの実施形態では、部位特異的ＰＥＧ化、特にシステイン残基を介した部位特異的ＰＥＧ化が用いられる（例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＹａｎｇ，ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１６、１０、ｐｐ．７６１－７７０（２００３）を参照されたい）。例えば、この目的のために、本発明のキメラタンパク質において元から存在するシステイン残基にＰＥＧを結合してもよい。いくつかの実施形態では、当技術分野において知られている方法を用いて、ＰＥＧ結合のための１つ又は複数のシステイン残基を適切に導入するように本発明のキメラタンパク質が改変されているか、又はＰＥＧ結合のための１つ又は複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が本開示のキメラタンパク質のアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に融合されていてもよい。

【0342】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、Ｎ結合グリコシル化又はＯ結合グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合グリコシル化又はＯ結合グリコシル化は、同時翻訳修飾及び／又は翻訳後修飾の一部として導入される。

【0343】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、１つ又は複数の検出可能標識又は他のシグナル生成基若しくは部分を含む。適切な標識、並びにそれらの標識を結合するための方法、使用するための方法、及び検出するための方法が当技術分野において知られており、蛍光標識（フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、及びフルオレスカミン、並びにＥｕ又はランタニド系列の他の金属などの蛍光性金属など）、燐光発光標識、化学発光標識又は生物発光標識（ルミナール、イソルミノール、セロマチック・アクリジニウムエステル（theromatic acridinium ester）、イミダゾール、アクリジニウム塩、シュウ酸エステル、ジオキセタン、又はＧＦＰ及びその類似体など）、放射性同位体、金属、金属キレート又は金属カチオン、又はｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、若しくはｉｎ ｓｉｔｕの診断及び画像撮影での使用に特に適している他の金属若しくは金属カチオン、並びに発色団及び酵素（リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、δ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α－グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼなど）が挙げられるがこれらに限定されない。他の適切な標識としては、核磁気共鳴分光法又は電子スピン共鳴分光法を使用して検出可能な部分が挙げられる。本発明のそのような標識されたＶＨＨ及びポリペプチドは、例えば、（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＩＡ、及び他の「サンドイッチアッセイ」などのそれ自体が公知の免疫アッセイを含む）ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ、又はｉｎ ｓｉｔｕアッセイ、並びに特定の標識の選択に依存したｉｎ ｖｉｖｏの診断及び画像撮影目的のために使用され得る。

【0344】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、本開示のキメラタンパク質に結合されているか（attached）、又は遺伝的に融合されているタグを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、単一のタグを含んでもよく、複数のタグを含んでいてもよい。タグは、例えば、本開示のキメラタンパク質のＳＩＲＰ１α、又は例えば腫瘍抗原などの他の任意の目的の抗原への結合を阻害又は妨害しないペプチド、糖、又はＤＮＡ分子である。様々な実施形態において、タグは、少なくとも約３～５アミノ酸長、５～８アミノ酸長、８～１２アミノ酸長、１２～１５アミノ酸長、又は１５～２０アミノ酸長である。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ及びヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどのアフィニティータグである。ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質はＨｉｓタグを含む。

【0345】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、例えば、金属又は金属カチオンのうちの１つをキレートするためのキレート基を含む。例えば、適切なキレート基としては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0346】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、又は部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの特定の結合対の一部である官能基を含む。そのような官能基は、その結合対の他方に結合されている別のタンパク質、ポリペプチド、化学化合物に、すなわち結合対の形成を介して、本発明のキメラタンパク質を連結するために使用され得る。例えば、本発明のキメラタンパク質はビオチンと結合され、アビジン又はストレプトアビジンに結合した別のタンパク質、ポリペプチド、化合物、又は担体に連結されてもよい。例えば、そのような複合体化された本開示のキメラタンパク質は、検出可能なシグナル生成物質がアビジン又はストレプトアビジンに結合されている診断系などにおいてレポーターとして使用され得る。そのような結合対は、製薬目的に適切な担体を含む担体への本開示のキメラタンパク質の結合のためにも使用され得る。ある非限定的な例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、８、４、ｐｐ．２５７（２０００）に記載されるリポソーム製剤である。そのような結合対は、治療活性物質を本発明のキメラタンパク質に連結するためにも使用され得る。

【0347】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、所望により１つ又は複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、標的化部分とシグナル伝達物質を接続するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、（例えば、三量体を得るための２つのリンカーを含む一本鎖ＴＮＦの場合）シグナル伝達物質内にリンカーを含む。

【0348】

いくつかの実施形態では、単一のヌクレオチド配列として本明細書に記載されるリンカーのいずれかにより連結された本開示のキメラタンパク質をコードするベクターが提供され、そのようなキメラタンパク質を調製するために使用可能である。

【0349】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さによって、標的化部分とシグナル伝達物質のそれらの受容体への効率的な結合が可能になる。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーの長さによって、同じ細胞上の受容体への標的化部分のうちの１つとシグナル伝達物質の効率的な結合、及び別の細胞への他方の結合化部分の効率的な結合が可能になる。細胞の組み合わせの例は本明細書中のいずれかに記載されている。

【0350】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の受容体への標的化部分のうちの１つの結合部位とシグナル伝達物質の結合部位との間の最小の距離に少なくとも等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の受容体への標的化部分のうちの１つの結合部位とシグナル伝達物質の結合部位との間の最小の距離に少なくとも２倍、又は３倍、又は４倍、又は５倍、又は１０倍、又は２０倍、又は２５倍、又は５０倍、又は１００倍、又はそれより高い倍率の距離である。

【0351】

本明細書に記載されるように、リンカーの長さによって標的化部分のうちの１つとシグナル伝達物質の同じ細胞上の受容体への効率的な結合が可能になり、その結合は連続的に起こり、例えば標的化部分と受容体の結合がシグナル伝達物質と受容体の結合に先行する。

【0352】

いくつかの実施形態では、２つのリンカーが単一のキメラに存在し、それぞれのリンカーがシグナル伝達物質を標的化部分に接続している。様々な実施形態において、リンカーは、疾患細胞又はエフェクター細胞のどちらかの細胞の調整を妨害することになる立体障害を有しない、それらの細胞が有する部位の形成を可能にする長さを有する。

【0353】

本発明は様々なリンカー配列の使用を意図している。様々な実施形態において、リンカーは天然マルチドメインタンパク質に由来するか、又は内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＣｈｉｃｈｉｌｉ，ｅｔ ａｌ．、（２０１３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．、２２（２）：１５３～１６７；Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．、（２０１３）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．、６５（１０）：ｐｐ．１３５７－１３６９などに記載されるような実験に基づいたリンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＣｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．、（２０１３）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．、６５（１０）：ｐｐ．１３５７－１３６９及びＣｒａｓｔｏ，ｅｔ ａｌ．、（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、１３（５）：ｐｐ．３０９－３１２に記載されるようなリンカー設計データベース及びコンピュータープログラムを使用して設計され得る。様々な実施形態において、リンカーは機能的であってもよい。例えば、限定されないが、リンカーは、本開示のキメラタンパク質のフォールディング及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／又は生物活性を改善するように機能する場合がある。

【0354】

いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは約１００アミノ酸未満である。例えば、リンカーの長さは、約１００アミノ酸未満、約９５アミノ酸未満、約９０アミノ酸未満、約８５アミノ酸未満、約８０アミノ酸未満、約７５アミノ酸未満、約７０アミノ酸未満、約６５アミノ酸未満、約６０アミノ酸未満、約５５アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、約４５アミノ酸未満、約４０アミノ酸未満、約３５アミノ酸未満、約３０アミノ酸未満、約２５アミノ酸未満、約２０アミノ酸未満、約１９アミノ酸未満、約１８アミノ酸未満、約１７アミノ酸未満、約１６アミノ酸未満、約１５アミノ酸未満、約１４アミノ酸未満、約１３アミノ酸未満、約１２アミノ酸未満、約１１アミノ酸未満、約１０アミノ酸未満、約９アミノ酸未満、約８アミノ酸未満、約７アミノ酸未満、約６アミノ酸未満、約５アミノ酸未満、約４アミノ酸未満、約３アミノ酸未満、又は約２アミノ酸未満であってもよい。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは約１００アミノ酸を超える。例えば、リンカーの長さは約１００アミノ酸超、約９５アミノ酸超、約９０アミノ酸超、約８５アミノ酸超、約８０アミノ酸超、約７５アミノ酸超、約７０アミノ酸超、約６５アミノ酸超、約６０アミノ酸超、約５５アミノ酸超、約５０アミノ酸超、約４５アミノ酸超、約４０アミノ酸超、約３５アミノ酸超、約３０アミノ酸超、約２５アミノ酸超、約２０アミノ酸超、約１９アミノ酸超、約１８アミノ酸超、約１７アミノ酸超、約１６アミノ酸超、約１５アミノ酸超、約１４アミノ酸超、約１３アミノ酸超、約１２アミノ酸超、約１１アミノ酸超、約１０アミノ酸超、約９アミノ酸超、約８アミノ酸超、約７アミノ酸超、約６アミノ酸超、約５アミノ酸超、約４アミノ酸超、約３アミノ酸超、又は約２アミノ酸超であってもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは可動性がある。別の実施形態では、リンカーは可動性に欠ける。

【0355】

いくつかの実施形態では、あるリンカーが２つの標的化部分を相互接続し、このリンカーの長さは短く、あるリンカーが標的化部分とシグナル伝達物質を接続し、このリンカーは２つの標的化部分を接続するリンカーよりも長い。例えば、２つの標的化部分を接続するリンカーと標的化部分とシグナル伝達物質を接続するリンカーとの間のアミノ酸長の差は、約１００アミノ酸、約９５アミノ酸、約９０アミノ酸、約８５アミノ酸、約８０アミノ酸、約７５アミノ酸、約７０アミノ酸、約６５アミノ酸、約６０アミノ酸、約５５アミノ酸、約５０アミノ酸、約４５アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１９アミノ酸、約１８アミノ酸、約１７アミノ酸、約１６アミノ酸、約１５アミノ酸、約１４アミノ酸、約１３アミノ酸、約１２アミノ酸、約１１アミノ酸、約１０アミノ酸、約９アミノ酸、約８アミノ酸、約７アミノ酸、約６アミノ酸、約５アミノ酸、約４アミノ酸、約３アミノ酸、又は約２アミノ酸であり得る。

【0356】

様々な実施形態において、リンカーはグリシン残基とセリン残基から実質的に（例えば、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約９７％のグリシン及びセリン）構成される。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎであり、式中、ｎは約１～約８、例えば１、２、３、４、５、６、７、又は８である（配列番号２４７～配列番号２５４）。ある実施形態では、リンカー配列はＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５５）である。その他のリンカーの例としては、ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４７）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号２４７～配列番号２５０）、（Ｇｌｙ）_８（配列番号２５６）、（Ｇｌｙ）_６（配列番号２５７）、（ＥＡＡＡＫ）_ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号２５８～配列番号２６０）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号２６１～配列番号２６４）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号２６１）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４Ａ（配列番号２６５）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２６６）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２６７）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２６８）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２６９）、及びＸがいずれかのアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、又はＧｌｕを示す（ＸＰ）_ｎの配列を有するリンカーが挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態において、リンカーはＧＧＳである。

【0357】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号２７０）、ＧＳＥＳＧ（配列番号２７１）、ＧＳＥＧＳ（配列番号２７２）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号２７３）、及び４アミノ酸間隔ごとに無作為に配置されたＧ、Ｓ、及びＥからなるリンカーうちの１つ又は複数である。

【0358】

いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体の（例えば、サブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥの）ヒンジ領域である。様々な実施形態において、リンカーは抗体の（例えば、サブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）のヒンジ領域である。ＩｇＧクラス、ＩｇＡクラス、ＩｇＤクラス、及びＩｇＥクラスの抗体に見られるヒンジ領域は可動性スペーサーとして作用し、Ｆａｂ部分が空間中を自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは構造的に多様であり、免疫グロブリンのクラス及びサブクラスの中で配列と長さの両方について異なっている。例えば、ヒンジ領域の長さと可動性はＩｇＧサブクラスの中で異なっている。ＩｇＧ１のヒンジ領域は２１６～２３１番目のアミノ酸を包含し、そのヒンジ領域は自由に曲がりやすいため、Ｆａｂ断片はその対称軸を中心に回転可能であり、且つ、２つの重鎖間ジスルフィド架橋のうちの最初の架橋を中心とした球内で移動可能である。ＩｇＧ２はＩｇＧ１よりも短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を含む。ＩｇＧ２のヒンジ領域はグリシン残基を欠いており、比較的に短く、且つ、追加の重鎖間ジスルフィド結合によって安定化された堅固なポリプロリンダブルヘリックスを含む。これらの特性によりＩｇＧ２分子の可動性が制限される。ＩｇＧ３は、（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）６２個のアミノ酸を含み、可動ではないポリプロリンダブルヘリックスを形成する、特有の長いヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）によって他のサブクラスと異なる。ＩｇＧ３ではＦａｂ断片はＦｃ断片から比較的に離れており、それにより分子の可動性がより高くなる。ＩｇＧ３の長いヒンジはまた、他のサブクラスと比較して大きい分子量の原因となる。ＩｇＧ４のヒンジ領域はＩｇＧ１のヒンジ領域よりも短く、その可動性はＩｇＧ１のヒンジ領域の可動性とＩｇＧ２のヒンジ領域の可動性との中間である。ヒンジ領域の可動性は、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順に低下すると報告されている。

【0359】

結晶学的研究によれば、免疫グロブリンのヒンジ領域は、機能的に３つの領域、すなわち上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域にさらに細分化可能である。Ｓｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１３０：ｐｐ．８７を参照されたい。上部ヒンジ領域は、Ｃ_Ｈ１のカルボキシ末端から動きを制限するヒンジ内の最初の残基、一般的には２本の重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成する１番目のシステイン残基までのアミノ酸を含む。上部ヒンジ領域の長さは抗体のセグメント可動性と相関している。コアヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド架橋を有し、下部ヒンジ領域はＣ_Ｈ２ドメインのアミノ末端に連結し、且つ、Ｃ_Ｈ２内の残基を含む。野生型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域は配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号２７４）を含み、ジスルフィド結合の形成によって二量体化されると旋回軸として作用すると考えられる環状オクタペプチドが生じ、これにより可動性が与えられると考えられる。様々な実施形態において、本開示のリンカーは、任意の抗体の（例えば、サブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥの）上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域のうちの１つ、２つ、又は３つを含む。ヒンジ領域は１つ又は複数のグリコシル化部位を含む場合もあり、それらの部位には炭水化物結合のための多数の構造的に異なる種類の部位が含まれる。例えば、ＩｇＡ１はヒンジ領域の１７個のアミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、それらの部位は分泌性免疫グロブリンにとって有利な特性であると考えられる腸管プロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの耐性を付与する。様々な実施形態において、本発明のリンカーは１つ又は複数のグリコシル化部位を含む。様々な実施形態において、リンカーはヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。

【0360】

所望により本開示のキメラタンパク質はＣ_Ｈ２ドメイン及びＣ_Ｈ３ドメインのうちの一方又は両方を含む抗体Ｆｃ領域に連結可能であり、及び所望によりヒンジ領域に連結可能である。例えば、単一のヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本開示のキメラタンパク質をコードするベクターを使用してそのようなポリペプチドを調製することが可能である。

【0361】

いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。

【0362】

様々な実施形態において、リンカーには機能的であってもよい。例えば、限定されないが、リンカーは本開示のキメラタンパク質のフォールディング及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／又は生物活性を改善するように機能してもよい。別の例では、リンカーは、キメラタンパク質を特定の細胞種又は特定の場所へ標的化するように機能してもよい。

【0363】

キメラタンパク質の改変と作製
様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＶＨＨである標的化部分（例えば、ＳＩＲＰ１α）を含む。様々な実施形態において、ＶＨＨは特定の生物起源に限定されず、又は特定の調製方法に限定されない。例えば、ＶＨＨは、通常、（１）天然の重鎖抗体のＶ_ＨＨドメインを単離することによって、（２）天然のＶ_ＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列を発現させることによって、（３）天然のＶ_ＨＨドメインを「ヒト化」すること、又はそのようなヒト化Ｖ_ＨＨドメインをコードする核酸を発現させることによって、（４）例えばヒト由来など、哺乳類種などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインを「ラクダ化」すること、又はそのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸を発現させることによって、（５）当技術分野において記載されるような「ドメイン抗体」若しくは「Ｄａｂ」を「ラクダ化」すること、又はそのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸を発現させることによって、（６）タンパク質、ポリペプチド、又は当技術分野において知られている他のアミノ酸配列を調製するための合成方法又は半合成方法を使用することによって、（７）当技術分野において知られている核酸合成方法を使用してＶＨＨコード核酸を調製した後に、得られた核酸を発現させることによって、及び／又は（８）前述したもののうちの１つ又は複数からなる任意の組合せによって得ることができる。

【0364】

ある実施形態では、キメラタンパク質は、ヒトＳＩＲＰ１αを指向する天然の重鎖抗体のＶ_ＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、そのようなＶ_ＨＨ配列は、通常、ＳＩＲＰ１α分子でラクダ科の種の動物を適切に免疫すること（すなわち、ＳＩＲＰ１αを指向する免疫応答及び／又は重鎖抗体を生じさせるように免疫すること）、該ラクダ科動物由来の適切な生体試料（例えば、血液試料又は任意のＢ細胞試料）を得ること、及び任意の適切な公知の方法を用いて該試料からＳＩＲＰ１αに対するＶ_ＨＨ配列を生成することによって生成又は取得可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αに対する天然のＶ_ＨＨドメインは、ラクダ科Ｖ_ＨＨ配列のナイーブライブラリーから、例えば、当技術分野において知られている１つ又は複数のスクリーニング方法を用いて、ＳＩＲＰ１α、又は少なくともその一部、断片、抗原決定基、若しくはエピトープを使用してそのようなライブラリーをスクリーニングすることにより得ることができる。そのようなライブラリー及び方法は、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、及び国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。いくつかの実施形態では、ナイーブＶ_ＨＨライブラリーに由来する改良された合成又は半合成ライブラリーが使用可能であり、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第００／４３５０７号等に記載されるようなランダム変異導入及び／又はＣＤＲシャッフリングなどの方法によってナイーブＶ_ＨＨライブラリーから得られるＶ_ＨＨライブラリーが使用可能である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１αを指向するＶ_ＨＨ配列を得るための別の方法には、重鎖抗体を発現可能である遺伝子導入哺乳類動物を適切に免疫すること（すなわち、ＳＩＲＰ１αを指向する免疫応答及び／又は重鎖抗体を生じさせるように免疫すること）、該遺伝子導入哺乳類動物由来の適切な生体試料（例えば、血液試料又は任意のＢ細胞試料）を得ること、及び任意の適切な公知の方法を用いて該試料からＳＩＲＰ１αに対するＶ_ＨＨ配列を生成することが含まれる。例えば、この目的のために、国際公開第０２／０８５９４５号及び国際公開第０４／０４９７９４号（内容全体が参照により本明細書に取り込まれる）に記載される重鎖抗体発現マウス並びにその他の方法及び技術が利用可能である。

【0365】

ある実施形態では、キメラタンパク質は「ヒト化」されているＶＨＨ、すなわち天然のＶ_ＨＨ配列のアミノ酸配列中（特にフレームワーク配列中）の１つ又は複数のアミノ酸残基を、ヒト由来の従来の４本鎖抗体から、ＶＨドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基のうちの１つ又は複数で置き換えることによりヒト化されているＶＨＨを含む。これは、当技術分野において知られているヒト化方法を用いて行うことができる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換又はヒト化置換の組合せは、当技術分野において知られている方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較によって決定され得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、結果として得られるヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、本発明のＶＨＨは、ヒト化の結果として、対応する天然のＶ_ＨＨドメインと比較して、免疫原性の低下などの好ましい特性を保持しつつ、より「ヒトに近い」ものになり得る。様々な実施形態において、本発明のヒト化ＶＨＨは、当技術分野において知られている任意の適切な方法で得ることができ、したがって出発物質としての天然のＶ_ＨＨドメインを含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密に限定されることはない。

【0366】

ある実施形態では、キメラタンパク質は「ラクダ化」されているＶＨＨ、すなわち従来の４本鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ又は複数のアミノ酸残基を、ラクダの重鎖抗体のＶ_ＨＨドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基のうちの１つ又は複数で置き換えることによりラクダ化されているＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、そのような「ラクダ化」置換は、ＶＨ／ＶＬ境界面を形成する及び／又はその境界面に存在するアミノ酸の位置、及び／又はいわゆるラクダ科の特徴的な残基（例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい）に挿入される。いくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成又は設計するための出発物質又は出発点として使用されるＶＨ配列は、動物由来のＶＨ配列、例えばＶＨ３配列などのヒトのＶＨ配列である。様々な実施形態において、ラクダ化ＶＨＨは当技術分野において知られている任意の適切な方法（すなわち、上述の（１）～（８）で示されたような方法）で取得可能であり、出発物質としての天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密に限定されることはない。

【0367】

様々な実施形態において「ヒト化」及び「ラクダ化」は、それぞれ天然のＶ_ＨＨドメイン又はＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を供給し、次に、新しいヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」ＶＨＨ又は「ラクダ化」ＶＨＨをコードするように該ヌクレオチド配列中の１つ又は複数のコドンを当技術分野において知られている方法で交換することにより実行可能である。次に、本発明の所望のＶＨＨが供給されるように当技術分野において知られている方法でこの核酸を発現させることができる。あるいは、天然Ｖ_ＨＨドメイン又は天然ＶＨドメインのそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、本発明の所望のヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨＨのアミノ酸配列を設計し、次に当技術分野において知られているペプチド合成方法を用いて新規合成することができる。また、天然Ｖ_ＨＨドメイン又は天然ＶＨドメインのそれぞれのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列に基づいて、所望のヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨＨをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ設計し、次に当技術分野において知られている核酸合成方法を用いて新規合成することができ、その後、得られた核酸を本発明の所望のＶＨＨが供給されるように当技術分野において知られている方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列又はＶ_ＨＨ配列から出発して本発明のＶＨＨ及び／又はそれらをコードする核酸を得るための他の適切な方法及び技術は当技術分野において知られており、例えば、１種類又は複数種類の天然ＶＨ配列の１つ又は複数の部分（１種類又は複数種類のＦＲ配列及び／又はＣＤＲ配列など）、１種類又は複数種類の天然Ｖ_ＨＨ配列の１つ又は複数の部分（１種類又は複数種類のＦＲ配列又はＣＤＲ配列など）、及び／又は１種類又は複数種類の合成配列又は半合成配列を、本発明のＶＨＨ又はそれをコードするヌクレオチド配列若しくは核酸をもたらすように、適切に組み合わせることを含んでいてもよい。

【0368】

本発明のキメラタンパク質を作製するための方法は本明細書に記載される。例えば、本発明のキメラタンパク質をコードするＤＮＡ配列（例えば、改変型シグナル伝達物質、標的化部分、及びリンカーをコードするＤＮＡ配列）は、当技術分野において知られている方法を用いて化学的に合成可能である。発現制御配列などを含む他の適切なヌクレオチド配列に、合成ＤＮＡ配列をライゲーションして所望のキメラタンパク質をコードする遺伝子発現コンストラクトを作製することができる。よって、様々な実施形態において、本発明は、本発明のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

【0369】

本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を発現ベクターに組み込む（ライゲーションする）ことができ、該ベクターは、トランスフェクション法、形質転換法、又は形質導入法によって発現宿主細胞に導入され得る。例えば、本発明のキメラタンパク質をコードする核酸は、レトロウイルス形質導入によって宿主細胞に導入され得る。宿主細胞の例には、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児由来腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞がん細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、及び骨髄腫細胞がある。形質転換宿主細胞は、それらの宿主細胞が本発明のキメラタンパク質をコードする遺伝子を発現することを可能にする条件下で培養され得る。よって、様々な実施形態において、本発明は、本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。様々な実施形態において、本発明は、そのような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。

【0370】

具体的な発現及び精製の条件は使用する発現系に応じて異なることになる。例えば、遺伝子を大腸菌内で発現させる場合、最初に、Ｔｒｐ又はＴａｃなどの適切な細菌プロモーター及び原核生物シグナル配列の下流に改変遺伝子を配置することにより遺伝子を発現ベクターにクローニングする。別の例では、改変遺伝子をＣＨＯ細胞などの真核生物宿主細胞内で発現させる場合、最初に、例えば、適切な真核生物プロモーター、分泌シグナル、エンハンサー、及び様々なイントロンを含む発現ベクターに改変遺伝子を挿入する。トランスフェクション法、形質転換法、又は形質導入法を用いて遺伝子コンストラクトを宿主細胞に導入することができる。

【0371】

本発明のキメラタンパク質は、該タンパク質をコードする発現ベクターをトランスフェクションした宿主細胞を、該キメラタンパク質を発現させる条件下で培養することにより作製可能である。発現後、当技術分野においてよく知られている方法、例えばグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ及びヒスチジンタグなどのアフィニティータグを用いて、又はクロマトグラフィーによって、タンパク質を回収及び精製することができる。

【0372】

よって、様々な実施形態において、本発明は、本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を提供する。様々な実施形態において、本発明は、本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。

【0373】

様々な実施形態において、本開示のＳＩＲＰ１α標的化部分又はＳＩＲＰ１α標的化部分を含むキメラタンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば患者内で発現されてもよい。例えば、様々な実施形態において、本開示のＳＩＲＰ１α標的化部分又はＳＩＲＰ１α標的化部分を含むキメラタンパク質は、本開示のＳＩＲＰ１α標的化部分又はＳＩＲＰ１α標的化部分を含むキメラタンパク質をコードする核酸の形態で投与されてもよい。様々な実施形態において、核酸はＤＮＡ又はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本開示のＳＩＲＰ１α標的化部分又はＳＩＲＰ１α標的化部分を含むキメラタンパク質は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによってコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第８，２７８，０３６号に見られる１種類又は複数種類の修飾を含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、及び２’－Ｏ－メチル－Ｕのうちの１つ又は複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本開示のキメラタンパク質のうちの１つ又は複数をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡの投与を含む遺伝子治療方法に関する。様々な実施形態において、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えばアデノウイルス、レオウイルス、麻疹ウイルス、ヘルペス単純ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、又はワクシニアウイルスの形態である。

【0374】

薬学的に許容可能な塩及び賦形剤
本明細書に記載されるキメラタンパク質は、無機酸又は有機酸と反応可能な十分に塩基性である官能基、又は無機塩基若しくは有機塩基と反応可能なカルボキシル基を有することで薬学的に許容可能な塩を形成することができる。当技術分野においてよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から薬学的に許容可能な酸付加塩が形成される。そのような塩としては、例えば、全体が参照により本明細書に取り込まれるＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、ｐｐ．２－１９（１９７７）及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．、Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ及びＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）、Ｖｅｒｌａｇ、チューリッヒ（スイス）２００２に記載される薬学的に許容可能な塩が挙げられる。

【0375】

薬学的に許容可能な塩としては、非限定的な例として、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（gentisinate）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボン酸塩、ヘキシン－１，４－ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、及び酒石酸塩（が挙げられる。

【0376】

「薬学的に許容可能な塩」という用語は、カルボン酸官能基などの酸性官能基を有する本発明の組成物と塩基の塩も指す。適切な塩基としては、ナトリウム、カリウム、及びリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウム及びマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウム及び亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア、及び有機アミン、例えば非置換又はヒドロキシ置換されたモノ－、ジ－、又はトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル，Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、又はトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、例えばモノ－、ビス－、又はトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、又はトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミン；Ｎ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン、例えばＮ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミン又はトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；並びにアルギニン、リジンなどのアミノ酸などが挙げられるがこれらに限定されない。

【0377】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。

【0378】

医薬組成物及び製剤
様々な実施形態において、本発明は、本明細書に記載されるキメラタンパク質及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。本明細書に記載される任意の医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体又は溶媒を含む組成物の一成分として対象に投与可能である。そのような組成物は、適正な投与のための形態にするために適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでいてもよい。

【0379】

様々な実施形態において、製薬用賦形剤は、水及び油などの液体であってもよく、石油起源、動物起源、植物起源、又は合成起源の油、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などが含まれる。それらの製薬用賦形剤は、例えば、生理食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプン糊、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってもよい。さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤、及び着色剤を使用してもよい。ある実施形態では、対象に投与される場合、薬学的に許容可能な賦形剤は無菌である。水は本明細書に記載されるいずれかの作用物質が静脈内投与される場合に有用な賦形剤である。生理食塩水溶液並びにブドウ糖水溶液及びグリセロール溶液は、液体賦形剤、具体的には注射剤用の液体賦形剤としても使用可能である。適切な製薬用賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。本明細書に記載されるいずれの作用物質も、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含んでいてもよい。適切な製薬用賦形剤の他の例は、参照により本明細書に取り込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｐｐ．１４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、第１９版、１９９５）に記載されている。

【0380】

本発明は、本記載の医薬組成物（及び／又は追加治療薬）を様々な剤型で含む。本明細書に記載される本発明の医薬組成物（及び／又は追加治療薬）はいずれも、液剤、懸濁剤、乳剤、滴剤、錠剤、丸剤、ペレット剤、カプセル剤、液剤含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、粉剤、徐放性製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル剤、スプレー剤、懸濁剤、凍結乾燥粉剤、凍結懸濁剤、乾燥粉剤、又は使用に適した他の任意の形態であってもよい。ある実施形態では、組成物はカプセル剤の剤形である。別の実施形態では、組成物は錠剤の剤形である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は軟質ゲルカプセル剤の剤形で製剤される。その他の実施形態では、医薬組成物はゼラチンカプセル剤の剤形で製剤される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は液剤として製剤される。

【0381】

本発明の医薬組成物（及び／又はその他の作用物質）は必要な場合に可溶化剤を含むこともできる。また、作用物質は当技術分野において知られている適切な溶媒又は送達装置によって送達可能である。本明細書において概説される併用療法は単一の送達溶媒又は送達装置で共送達可能である。

【0382】

本発明の医薬組成物（及び／又はその他の作用物質）を含む本発明の製剤は、便宜上、単位剤形として提供されてよく、調剤学の分野においてよく知られている方法のうちのいずれかによって調製されてもよい。そのような方法は、１種類又は複数種類の付属成分を構成する担体と治療薬を会合させる工程を含むことが一般的である。通常、製剤は、治療薬を液状担体、細粒化固形担体、又はそれらの両方と均一、且つ、密接に会合させた後、必要に応じてその産物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式又は乾式造粒、粉末ブレンドなどの後に当技術分野において知られている従来法を用いた打錠）により調製される。

【0383】

様々な実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物（及び／又はその他の作用物質）はいずれも、本明細書に記載される投与方法に適合した組成物として、常法に準拠して製剤される。

【0384】

投与経路としては、例えば、口腔経路、皮内経路、筋肉内経路、腹膜内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路、舌下経路、鼻腔内経路、脳内経路、膣内経路、経皮経路、直腸経路、吸入による経路、又は局所経路が挙げられる。投与は局所性投与又は全身性投与であってもよい。いくつかの実施形態では、投与は経口的に達成される。別の実施形態では、投与は非経口注射による。投与方法は医師の裁量に任せてよく、部分的にはその病気の部位に依存する。ほとんどの場合、本明細書に記載される作用物質はいずれも、投与されると血流に放出される。

【0385】

ある実施形態では、本明細書に記載されるキメラタンパク質は、経口投与に適合した組成物として常法に従って製剤される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性若しくは油性懸濁剤、顆粒剤、粉剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、又はエリキシル剤などの剤形であってもよい。経口投与される組成物は、薬学的に口に合う調剤を提供するために、１種類又は複数種類の薬剤、例えば、果糖、アスパルテーム、又はサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、冬緑油、又はチェリーなどの香味剤；着色剤、及び保存料を含むことができる。さらに錠剤又は丸剤の剤形の場合、組成物を被覆すれることで胃腸管での崩壊及び吸収を遅らせ、それによって長期間にわたって持続的作用をもたらすことができる。本明細書に記載される任意のキメラタンパク質の浸透圧活性の周囲を覆う選択的透過膜も経口投与組成物に適切である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセル周囲の環境の液体が駆動化合物により吸収され、該駆動化合物は膨潤して穴を通してその作用物質又は作用物質組成物を押し出す。これらの送達プラットフォームは即放性製剤のスパイク状プロファイルとは対照的に、基本的にゼロ次の送達プロファイルを生成することができる。モノステアリン酸グリセロール又はステアリン酸グリセロールなどの時間遅延物質も有用であり得る。経口組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、及び炭酸マグネシウムなどの標準的賦形剤を含むことができる。ある実施形態では、賦形剤は製薬グレードのものである。懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、トラガカントなど、及びそれらの混合物などの懸濁剤を含有してもよい。

【0386】

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹膜内、皮下、及び関節内の注射及び点滴）に適切な剤形としては、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤などが挙げられる。それらの剤形は、使用直前に無菌注射媒体中に溶解又は懸濁可能な無菌固形組成物（例えば凍結乾燥組成物）の形態で製造されてもよい。無菌固形組成物は、例えば、当技術分野において知られている懸濁剤又は分散剤を含んでよい。非経口投与に適切な製剤成分としては、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩などの緩衝剤；及び塩化ナトリウム又はブドウ糖などの浸透圧調節剤が挙げられる。

【0387】

静脈内投与について適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ社、パーシッパニー、ニュージャージー州）、又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造条件下及び貯蔵条件下で安定でなくてはならず、且つ、微生物に抗して保存される必要がある。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒であってもよい。

【0388】

本明細書において提供される組成物は、単独で、又は他の適切な構成成分と組み合わせて、吸入によって投与されるエアロゾル製剤に製剤され得る（すなわち、「噴霧化」され得る）。エアロゾル製剤は、加圧可能な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、及び窒素などに混入可能である。

【0389】

本明細書に記載される本発明の医薬組成物（及び／又はその他の作用物質）はいずれも、当業者によく知られている制御放出手段又は持続放出手段によって、又は送達装置によって投与可能である。例としては、各々の全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第３，８４５，７７０号、同第３，９１６，８９９号、同第３，５３６，８０９号、同第３，５９８，１２３号、同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６、及び同第５，７３３，５５６号に記載されるものが挙げられるがこれらに限定されない。そのような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、浸透圧系、多層被覆、微小粒子、リポソーム、ミクロスフィア、又は所望の放出プロファイルを実現するための色々な割合でのそれらの組合せを使用する１種類又は複数種類の有効成分の制御放出又は持続放出の実現に有用であり得る。本明細書に記載される製剤を含む、当業者に知られている適切な制御放出製剤又は持続放出製剤は、本明細書に記載される作用物質の有効成分との使用について容易に選択可能である。したがって、本発明は、経口投与に適切な単回単位剤形、例えば、これら限定されないが、制御放出又は持続放出に適合した、錠剤、カプセル剤、ゲルキャップ剤、及びカプレット剤を提供する。

【0390】

有効成分の制御放出又は持続放出は、これら限定されないが、ｐＨの変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度若しくは利用可能性、水の濃度若しくは利用可能性、又は他の生理学的な条件若しくは化合物を含む様々な条件によって刺激可能である。

【0391】

別の実施形態では、治療される標的領域の近くに制御放出系を配置することができ、したがって全身用量のうちの一部のみが必要とされる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上掲、第２巻、ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）内のＧｏｏｄｓｏｎの著作を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７～１５３３）による総説内で考察されている他の制御放出系を使用してもよい。

【0392】

医薬製剤は無菌であることが好ましい。滅菌は、例えば、無菌濾過膜を介した濾過により達成され得る。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥及び再構成の前か、またはその後にフィルター滅菌を実施することができる。

【0393】

投与及び投与量
本発明に従って投与される本開示のキメラタンパク質の実際の用量は、特定の剤形及び投与方法に応じて異なることが理解される。当業者は本開示のキメラタンパク質の作用を改変し得る多数の要因（例えば、体重、性別、食事、投与時間、投与経路、排出率、対象の状態、薬品の組合せ、遺伝的性質、及び反応感度）を考慮に入れることができる。投与は最大耐量内で連続投与又は１回若しくは複数回の分割投与によって実施可能である。当業者は従来の用量投与試験を用いて所与の条件について最適な投与速度を確認することができる。

【0394】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質の適切な投薬量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、対象の体重に対して約０．０１ｍｇ～約１ｇ、対象の体重に対して約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲内であり、例えば、体重の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約１．１ｍｇ、約１．２ｍｇ、約１．３ｍｇ、約１．４ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．６ｍｇ、約１．７ｍｇ、約１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１ｇ、約１０ｇであり、それらの上限と下限の値の間の全ての値と範囲を含む。

【0395】

キメラタンパク質の個々の用量は、例えば、約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの有効成分、単位剤形当たり約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、又は単位剤形当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含有する単位剤形（例えば錠剤又はカプセル剤）として投与可能である。例えば、単位剤形は約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇであってもよく、それらの上限と下限の値の間の全ての値と範囲を含む。

【0396】

ある実施形態では、キメラタンパク質は、約０．０１ｍｇ～約１００ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約７５ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約５０ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約２５ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約１０ｇまでの量、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約５ｇまでの量、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約１ｇの１日量、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約９５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約８５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約７５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約６５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約５５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約４５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約３５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約２５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約１５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約５ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約３ｍｇの１日量、約０．１ｍｇ～約１ｍｇの１日量、又は約５ｍｇ～約８０ｍｇの１日量で投与される。様々な実施形態において、キメラタンパク質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇの１日用量、それらの上限と下限の値の間の全ての値と範囲を含む１日用量で投与される。

【0397】

本発明のある特定の実施形態によれば、本開示のキメラタンパク質を含む医薬組成物は、例えば、１日に１回より多い回数（例えば、１日に約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、又は約１０回）、１日に約１回、２日毎に約１回、３日毎に約１回、１週間に約１回、２週間毎に約１回、毎月に約１回、２か月毎に約１回、３か月毎に約１回、６か月毎に約１回、又は毎年に約１回投与されてもよい。

【0398】

併用療法及び追加治療薬
様々な実施形態において、本発明の医薬組成物は追加治療薬と併せて共投与される。共投与は同時投与であってもよく、又は連続投与であってもよい。

【0399】

ある実施形態では、追加治療薬と本発明のキメラタンパク質は同時に対象に投与される。「同時」という用語は、本明細書において使用される場合、追加治療薬と本開示のキメラタンパク質が約６０分間以内に、例えば約３０分間以内、約２０分間以内、約１０分間以内、約５分間以内、又は約１分間以内に投与されることを意味する。追加治療薬及び本開示のキメラタンパク質の投与は、単一の製剤（例えば、追加治療薬及び本開示のキメラタンパク質を含有する製剤）の同時投与、又は別々の製剤（例えば、追加治療薬を含有する第一の製剤及び本開示のキメラタンパク質を含有する第二の製剤）の同時投与によるものであってもよい。

【0400】

治療薬の投与タイミングが追加治療薬と本開示のキメラタンパク質の薬理学的活性が時間的に重なるようなものであり、それによって複合治療効果が発揮される場合、共投与はそれらの治療薬が同時に投与されることを必要としない。例えば、追加治療薬と本開示のキメラタンパク質は、連続的に投与可能である。「連続的」という用語は、本明細書において使用される場合、追加治療薬と本開示のキメラタンパク質が約６０分以上の時間を空けて投与されることを意味する。例えば、追加治療薬と本開示のキメラタンパク質の順次投与の間の時間は、約６０分間、約２時間、約５時間、約１０時間、約１日、約２日、約３日、約１週間、約２週間、又は約１か月間以上であってもよい。最適な投与時間は、投与される追加治療薬及び本開示のキメラタンパク質の代謝速度、排出率、及び／又は薬力学的活性に依存する。追加治療薬又は本開示のキメラタンパク質細胞のどちらが最初に投与されてもよい。

【0401】

共投与は同じ投与経路によって対象に治療薬を投与することも必要としない。むしろ、各々の治療薬は任意の適切な経路によって、例えば非経口的又は非－非経口的に投与可能である。

【0402】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるキメラタンパク質は、別の治療薬と共投与された場合に相乗的に作用する。前記実施形態では、本開示のキメラタンパク質及び追加治療薬は、それらの薬剤が単剤療法に関連して使用される場合に用いられる用量よりも少ない用量で投与され得る。

【0403】

いくつかの実施形態では、本発明は追加治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本開示のキメラタンパク質と化学療法剤のそのような組合せは、本明細書中のいずれかに記載されるようにがんの治療に使用される。化学療法剤の例としては、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、及びウレドパ（uredopa）などのアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチローロメラミン（trimethylolomelamine）を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン類（例えば、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン合成類似体、カルゼレシン合成類似体、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン類（例えば、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチインＡ；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノボエンビキン（novembichin）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソウレア類；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγＩＩ及びカリケアミシンωＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：ｐｐ．１８３－１８６（１９９４）を参照されたい）などの抗生物質；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、アンラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（ドキソルビシン）（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン；マイトマイシンＣなどのマイトマイシン類；ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシン及びアンサマイトシン類などのメイタンシノイド類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、ユージーン、オレゴン州）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（例えば、Ｔ－２トキシン、ベラキュリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド類、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ ｏｎｃｏｌｏｇｙ社、プリンストン、ニュージャージー州）、クレモフォール非含有ＡＢＲＡＸＡＮＥ（パクリタキセルのアルブミン添加ナノ粒子製剤）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ社、シャンバーグ、イリノイ州）、及びタキソテレドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ社、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（ゲムシタビン）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンなどのプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵ及びロイコボリンからなる治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド類；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；Ｔｙｋｅｒｂ（ラパチニブ）；細胞増殖を減少させるＰＫＣ－α阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ｈ－Ｒａｓ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、Ｔｅｒｃｅｖａ（エルロチニブ））、及びＶＥＧＦ－Ａ阻害剤、並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、又は誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。加えて、治療方法は放射線の使用をさらに含み得る。加えて、前記治療方法は光線力学療法の使用をさらに含み得る。

【0404】

ある実施形態では、本発明は、がん治療における追加治療薬としてのスプライセオソームの任意の構成要素を含む、スプライセオソームを標的とする任意の薬剤に関する。

【0405】

ある実施形態では、本発明は、がん治療における追加治療薬としてのＭｙｃを標的とする任意の薬剤（すなわち、抗Ｍｙｃ治療薬）に関する。

【0406】

限定されないが、感染症用途を含むいくつかの実施形態では、本発明は追加治療薬としての抗感染症薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染症薬はアバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、及びホスカルネットを含むがこれらに限定されない抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、抗感染症薬は、セファロスポリン抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロシン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、及びセフトビプロール）；フルオロキノロン抗生物質（シプロ、レバクイン、フロキシン、テクイン、アベロックス、及びノルフロックス）；テトラサイクリン抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、及びドキシサイクリン）；ペニシリン抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、及びメチシリン）；モノバクタム抗生物質（アズトレオナム）、及びカルバペネム抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、及びメロペネム）を含むがこれらに限定されない抗細菌剤である。いくつかの実施形態では、抗感染症薬は、抗マラリア剤（例えば、クロロキン、キニン、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アルテメテル／ルメファントリン、アトバコン／プログアニル、及びスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、ピランテルパモ酸塩、及びアルベンタゾールを含む。

【0407】

限定されないが、自己免疫用途を含むいくつかの実施形態では、追加治療薬は免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド系抗炎症剤又は非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎の副腎皮質ステロイド及びそれらの合成類似体は当技術分野においてよく知られている。本発明において有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルベタメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン（fluadrenolone）、フルクロロンアセトニド、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチン（flucortine）ブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルランドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド（flucetonide）、フルドロコルチゾン、酢酸ジフルオロゾン、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル（amcinafel）、アムシナフィド、ベタメタゾン及びそのエステルの平衡物（balance）、クロロプレドニゾン、クロコルテロン、クレスシノロン（clescinolone）、ジクロリゾン、ジフルルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロピオン酸ベクロメタゾンが挙げられるがこれらに限定されない。本明細書において使用され得る（ＮＳＡＩＤＳ）としては、サリチル酸、アセチルサリチル酸、メチルサリチル酸、グリコールサリチル酸、サリチルアミド、ベンジル－２、５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、フリンダク、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、及びインドメタシンが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤（例えば、アザチオプリン、メトトレキサート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ、及びムロモナブ）、抗イムノフィリン薬（例えば、サイクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、及び低分子生物剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害剤であってもよい。その他の抗炎症剤は、例えば、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる米国特許第４，５３７，７７６号に記載されている。

【0408】

いくつかの実施形態では、本発明は、追加治療薬として肥満治療に使用される様々な薬剤に関する。肥満治療に使用される薬の例としては、オルリスタット（例えば、ＡＬＬ１、ＸＥＮＩＣＡＬ）、ロルカセリン（例えば、ＢＥＬＶＩＱ）、フェンテルミン－トピラマート（例えばＱＳＹＭＩＡ）、シブトラミン（例えば、ＲＥＤＵＣＴＩＬ又はＭＥＲＪＤＩＡ）、リモナバン（ＡＣＯＭＰＬＩＡ）、エキセナチド（例えば、ＢＹＥＴＴＡ）、プラムリンチド（例えば、ＳＹＭＬＩＮ）フェンテルミン、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、ブプロピオン、及びメトホルミンが挙げられるがこれらに限定されない。食物中の特定の栄養素を吸収する身体の能力に干渉する薬剤、例えばオルリスタット（例えば、ＡＬＵ、ＸＥＮＩＣＡＬ）、グルコマンナン、及びグアーガムも追加薬剤に含まれる。食欲を抑制する薬剤、例えばカテコールアミン類及びそれらの誘導体（フェンテルミン及び他のアンフェタミン系薬剤など）、様々な抗うつ剤及び気分安定剤（例えば、ブプロピオン及びトピラマート）、食欲低下薬（例えばデクセドリン、ジゴキシン）も追加薬剤に含まれる。身体の代謝を上げる薬剤も追加薬剤に含まれる。

【0409】

いくつかの実施形態では、追加治療薬は、食欲抑制剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、ドーパミン作動薬、セロトニン作動薬、ＧＡＢＡ作動性シグナル伝達の調節薬、抗けいれん薬、抗うつ薬、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、Ｐ物質（ＮＫ１）受容体アンタゴニスト、メラノコルチン受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤、エネルギー摂取又は代謝の調節薬、カンナビノイド受容体調節薬、嗜癖治療薬、メタボリックシンドローム治療薬、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）調節薬；ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ－４）アンタゴニスト、心血管疾患治療薬、高トリグリセリド治療薬、低ＨＤＬ治療薬、高コレステロール血症治療薬、及び高血圧治療薬の中から選択され得る。心血管疾患用の薬剤としては、スタチン（例えば、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、及びプラバスタチン）及びオメガ－３薬（例えば、ＬＯＶＡＺＡ、ＥＰＡＮＱＶＡ、ＶＡＳＣＥＰＡ、エステル化オメガ－３類、一般には魚油、オキアミ油、藻類油）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加薬剤は、アンフェタミン、ベンゾジアゼピン、スルホニルウレア、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ビグアニド、β－ブロッカー、ＸＣＥ阻害剤、利尿薬、硝酸塩、カルシウムチャネル遮断薬、フェンテルミン、シブトラミン、ロルカセリン、セチリスタット、リモナバン、タラナバン、トピラマート、ガバペンチン、バルプロ酸、ビガバトリン、ブプロピオン、チアガビン、セルトラリン、フルオキセチン、トラゾドン、ゾニサミド、メチルフェニデート、バレニクリン、ナルトレキソン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、レパグリニド、ナテグリニド、グリメピリド、メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、及びシタグリプチンの中から選択され得る。

【0410】

いくつかの実施形態では、本発明は、追加治療薬として糖尿病治療に使用される薬剤に関する。抗糖尿病薬の例としては、スルホニルウレア（例えば、ＤＹＭＥＬＯＲ（アセトヘキサミド）、ＤＩＡＢＩＮＥＳＥ（クロルプロパミド）、ＯＲＩＮＡＳＥ（トルブタミド）、及びＴＯＬＩＮＡＳＥ（トラザミド）、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ（グリピジド）、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ ＸＬ（徐放性）、ＤＩＡＢＥＴＡ（グリブリド）、ＭＩＣＲＯＮＡＳＥ（グリブリド）、ＧＬＹＮＡＳＥ ＰＲＥＳＴＡＢ（グリブリド）、及びＡＭＡＲＹＬ（グリメピリド））；ビグアナイド（例えば、メトホルミン（ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ ＸＲ、ＲＩＯＭＥＴ、ＦＯＲＴＡＭＥＴ、及びＧＬＵＭＥＴＺＡ））；チアゾリジンジオン（例えば、ＡＣＴＯＳ（ピオグリタゾン）及びＡＶＡＮＤＩＡ（ロシグリタゾン）；α－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、ＰＲＥＣＯＳＥ（アカルボース）及びＧＬＹＳＥＴ（ミグリトール）；メグリチニド（例えば、ＰＲＡＮＤＩＮ（レパグリニド）及びＳＴＡＲＬＩＸ（ナテグリニド））；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）阻害剤（例えば、ＪＡＮＵＶＩＡ（シタグリプチン）、ＮＥＳＩＮＡ（アログリプチン）、ＯＮＧＬＹＺＡ（サキサグリプチン）、及びＴＲＡＤＪＥＮＴＡ（リナグリプチン））；ナトリウム－グルコース共役輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（カナグリフロジン））、及び混合丸剤（例えば、グリブリド（スルホニルウレア）とメトホルミンの合剤であるＧＬＵＣＯＶＡＮＣＥ、グリピジド（スルホニルウレア）とメトホルミンの合剤であるＭＥＴＡＧＬＩＰ、及び１錠の丸剤の中にメトホルミンとロシグリタゾン（ＡＶＡＮＤＩＡ）の両方を使用しているＡＶＡＮＤＡＭＥＴ、ＫＡＺＡＮＯ（アログリプチン及びメトホルミン）、ＯＳＥＮＩ（アログリプチンとピオグリタゾン）、経口ＭＥＴＦＯＲＭＩＮ、経口ＡＣＴＯＳ、ＢＹＥＴＴＡ皮下注、経口ＪＡＮＵＶＩＡ、経口ＷＥＬＣＨＯＬ、経口ＪＡＮＵＭＥＴ、経口グリピジド、経口グリメピリド、経口ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ、ＬＡＮＴＵＳ皮下注、経口グリブリド、経口ＯＮＧＬＹＺＡ、経口ＡＭＡＲＹＩ、ＬＡＮＴＵＳ ＳＯＬＯＳＴＡＲ皮下注、ＢＹＤＵＲＥＯＮ皮下注、ＬＥＶＥＭＩＲ ＦＬＥＸＰＥＮ皮下注、経口ＡＣＴＯＰＬＵＳ ＭＥＴ、経口ＧＬＵＭＥＴＺＡ、経口ＴＲＡＤＪＥＮＴＡ、経口ブロモクリプチン、経口ＫＯＭＢＩＧＬＹＺＥ ＸＲ、経口ＩＮＶＯＫＡＮＡ、経口ＰＲＡＮＤＩＮ、ＬＥＶＥＭＩＲ皮下注、経口ＰＡＲＬＯＤＥＬ、経口ピオグリタゾン、ＮＯＶＯＬＯＧグ皮下注、ＮＯＶＯＬＯＧ ＦＬＥＸＰＥＮ皮下注、ＶＩＣＴＯＺＡ ２－ＰＡＫ皮下注、ＨＵＭＡＬＯＧ皮下注、経口ＳＴＡＲＬＩＸ、経口ＦＯＲＴＡＭＥＴ、経口ＧＬＵＣＯＶＡＮＣＥ、経口ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ ＸＲ、ＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ ７０－３０ ＦＬＥＸＰＥＮ皮下注、経口ＧＬＹＢＵＲＩＤＥ－ＭＥＴＦＯＲＭＩＮ、経口アカルボース、ＳＹＭＬＩＮＰＥＮ ６０皮下注、経口ＧＬＵＣＯＴＲＯＩ ＸＬ、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｒ注、経口ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ、経口ＤＵＥＴＡＣＴ、経口シタグリプチン、ＳＹＭＬＩＮＰＥＮ １２０皮下注、ＨＵＭＡＬＯＧ ＫＷＩＫＰＥＮ皮下注、経口ＪＡＮＵＭＥＴ ＸＲ、経口ＧＬＩＰＩＺＩＤＥ－ＭＥＴＦＯＲＭＩＮ、経口ＣＹＣＬＯＳＥＴ、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５－２５皮下注、経口ナテグリニド、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５－２５ ＫＷＩＫＰＥＮ皮下注、皮下ＨＵＭＵＬＩＮ ７０／３０、経口ＰＲＥＣＯＳＥ、皮下ＡＰＩＤＲＡ、ヒューマリンＲ注、経口ジェンタデュエット、ビクトーザ ３－パック皮下注、ノボリン７０／３０皮下注、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｎ皮下注、インスリンデテミル皮下注、経口微粒子化グリブリド、経口ＧＬＹＮＡＳＥ、ＨＵＭＵＬＩＮ Ｎ皮下注、インスリングラルギン皮下注、経口ＲＩＯＭＥＴ、経口ピオグリタゾン－メトホルミン、ＡＰＩＤＲＡ ＳＯＬＯＳＴＡＲ皮下注、インスリンリスプロ皮下注、経口ＧＬＹＳＥＴ、ＨＵＭＵＬＩＮ ７０／３０ Ｐｅｎ 皮下注、経口コレセベラム、経口シタグリプチン－メトホルミン、経口ＤＩＡＢＥＴＡ、ヒトインスリンレギュラー注、ＨＵＭＵＬＩＮ Ｎ Ｐｅｎ皮下注、エキセナチド皮下注、ＨＵＭＡＬＯＧ Ｍｉｘ ５０－５０ ＫＷＩＫＰＥＮ皮下注、リラグルチド皮下注、経口ＫＡＺＡＮＯ、経口レパグリニド、経口クロルプロパミド、インスリンアスパルト皮下注、ＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ ７０－３０皮下注、ＨＵＭＡＬＯＧ Ｍｉｘ ５０－５０皮下注、経口サキサグリプチン、経口ＡＣＴＯＰＬＵＳ Ｍｅｔ ＸＲ、経口ミグリトール、組換えＮＰＨヒトインスリン皮下注、ＮＰＨインスリン及びヒトインスリンレギュラー皮下注、経口トラザミド、経口ミフェプリストン、インスリンアスパルトプロタム－インスリンアスパルト皮下注、経口レパグリニド－メトホルミン、経口サキサグリプチン－メトホルミン、経口リナグリプチン－メトホルミン、経口ＮＥＳＩＮＡ、経口ＯＳＥＮＩ、経口トルブタミド、インスリンリスプロ・プロタミン及びインスリンリスプロ皮下注、プラムリンチド皮下注、インスリングルリジン皮下注、経口ピオグリタゾン－グリメピリド、経口ＰＲＡＮＤＩＭＥＴ、ＮＯＶＯＬＯＧ ＰｅｎＦｉｌｌ皮下注、経口リナグリプチン、皮下注用エキセナチド細粒、経口ＫＯＲＬＹＭ、経口アログリプチン、経口アログリプチン－ピオグリタゾン、経口アログリプチン－メトホルミン、経口カナグリフロジン、リスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ）；アスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ）；グルリジン（ＡＰＩＤＲＡ）；レギュラー（ＮＯＶＯＬＩＮ Ｒ又はＨＵＭＵＬＩＮ Ｒ）；ＮＰＨ（ＮＯＶＯＬＩＮ Ｎ又はＨＵＭＵＬＩＮ Ｎ）；グラルギン（ＬＡＮＴＵＳ）；デテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ）；ＨＵＭＵＬＩＮ又はＮＯＶＯＬＩＮ ７０／３０、及びＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ ７０／３０ ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５又は５０／５０が挙げられるがこれらに限定されない。

【0411】

いくつかの実施形態では、本発明は輸血との併用療法に関する。例えば、本開示の組成物は輸血を補う。いくつかの実施形態では、本発明は鉄補給剤との併用療法に関する。

【0412】

いくつかの実施形態では、本発明は、１種類又は複数種類のＥＰＯ系薬剤との併用療法に関する。例えば、本開示の組成物は他のＥＰＯ系薬剤に対するアジュバントとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、他のＥＰＯ系薬剤に対する維持療法として使用される。他のＥＰＯ系薬剤は以下のもの、すなわち、ＤＡＲＢＥＰＯＥＴＩＮ（Ａｒａｎｅｓｐ社）、ＥＰＯＣＥＰＴ（Ｌｕｐｉｎ Ｐｈａｒｍａ社）、ＮＡＮＯＫＩＮＥ（Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ社）、ＥＰＯＦＩＴ（Ｉｎｔａｓ Ｐｈａｒｍａ社）、ＥＰＯＧＥＮ（Ａｍｇｅｎ社）、ＥＰＯＧＩＮ、ＥＰＲＥＸ、（Ｊａｎｓｓｅｎ－Ｃｉｌａｇ社）、ＢＩＮＯＣＲＩＴ（Ｓａｎｄｏｚ社）、ＰＲＯＣＲＩＴを含むがこれらに限定されないエポエチンα；ＮＥＯＲＥＣＯＲＭＯＮ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ社）、ＲＥＣＯＲＭＯＮ、メトキシポリエチレングリコール－エポエチンβ（ＭＩＲＣＥＲＡ；Ｒｏｃｈｅ社）を含むがこれらに限定されないエポエチンβ；ＤＹＮＥＰＯ（赤血球生成刺激タンパク質；Ｓｈｉｒｅ ＰＬＣ社）を含むがこれに限定されないエポエチンδ；ＥＰＯＭＡＸを含むがこれに限定されないエポエチンω；ＳＩＬＡＰＯ（ＳＴＡＤＡ社）及びＲＥＴＡＣＲＩＴ（Ｈｏｓｐｉｒａ社）を含むがこれらに限定されないエポエチンζ、及び他のＥＰＯを含み、それらの他のＥＰＯにはＥＰＯＣＥＰＴ（Ｌｕｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ＥＰＯＴＲＵＳＴ（Ｐａｎａｃｅａ Ｂｉｏｔｅｃ社）、ＥＲＹＰＲＯ ＳＡＦＥ（Ｂｉｏｃｏｎ社）、ＲＥＰＯＩＴＩＮ（Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｏｆ Ｉｎｄｉａ）、ＶＩＮＴＯＲ（Ｅｍｃｕｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ＥＰＯＦＩＴ（Ｉｎｔａｓ Ｐｈａｒｍａ社）、ＥＲＹＫＩＮＥ（Ｉｎｔａｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社）、ＷＥＰＯＸ（Ｗｏｃｋｈａｒｄｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、ＥＳＰＯＧＥＮ（ＬＧ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＲＥＬＩＰＯＩＥＴＩＮ（Ｒｅｌｉａｎｃｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＳＨＡＮＰＯＩＥＴＩＮ（Ｓｈａｎｔｈａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃｓ社）、ＺＹＲＯＰ（Ｃａｄｉｌａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒ社）、ＥＰＩＡＯ（ＲＨＵＥＰＯ社）（Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｓｕｎｓｈｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社）、ＣＩＮＮＡＰＯＩＥＴＩＮ（ＣＩＮＮＡＧＥＮ社）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0413】

いくつかの実施形態では、本発明は１種類又は複数種類の免疫調節因子、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調整する薬剤との併用療法に関する。様々な実施形態において、免疫調節因子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２のうちの１つ又は複数を標的とする。様々な実施形態において、免疫調節因子はＰＤ－１阻害剤である。様々な実施形態において、免疫調節因子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２のうちの１つ又は複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節因子は、限定されないが、ニボルマブ、（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ；Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ；メルク社）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１；キュア・テック社）、ＭＫ－３４７５（メルク社）、ＢＭＳ９３６５５９（ブＢｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（Ｒｏｃｈｅ社）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節因子はＣＤ１３７又はＣＤ１３７Ｌのうちの１つ又は複数を標的とする。様々な実施形態において、免疫調節因子はＣＤ１３７又はＣＤ１３７Ｌのうちの１つ又は複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節因子は、限定されないが、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３及び抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では本開示のキメラタンパク質は固形腫瘍及び／又はＢ細胞非ホジキンリンパ腫及び／又は頭頚部がん及び／又は多発性骨髄腫の治療のためにウレルマブと（所望によりニボルマブ、リリルマブ、及びウレルマブのうちの１つ又は複数と）組み合わせられる。いくつかの実施形態では、免疫調節因子は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、及びＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つ又は複数を標的とする薬剤である。様々な実施形態において、免疫調節因子は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、及びＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つ又は複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節因子は、限定されないが、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、Ｙｅｒｖｏｙ；ＢＭＳ社）及び／又はトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ社）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、黒色腫、前立腺がん、及び肺がんうちの１つ又は複数の治療のためにイピリムマブと（所望によりバビツキシマブと）組み合わせられる。様々な実施形態において、免疫調節因子はＣＤ２０を標的とする。様々な実施形態において、免疫調節因子はＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節因子は、限定されないが、オファツムマブ（Ｇｅｎｍａｂ社）、オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ社）、ＡＭＥ－１３３ｖ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ社）、オクレリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、ＴＲＵ－０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ社／Ｅｍｅｒｇｅｎｔ社）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。

【0414】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と併用された場合に相乗的に作用する。例示的な実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、腫瘍又はがんの治療においてＣＡＲ－Ｔ細胞療法と併用された場合に相乗的に作用する。ある実施形態では、キメラタンパク質は、血液系腫瘍の治療においてＣＡＲ－Ｔ細胞療法と併用された場合に相乗的に作用する。ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、固形腫瘍の治療においてＣＡＲ－Ｔ細胞療法と併用された場合に相乗的に作用する。例えば、本開示のキメラタンパク質とＣＡＲ－Ｔ細胞の使用は、相乗的に作用して腫瘍又はがんを減少させるか又は除去するか、あるいは腫瘍若しくはがんの成長及び／又は進行及び／又は転移を遅らせることがある。様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質はＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞分裂を誘導する。様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質はＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を誘導する。様々な実施形態において、本発明のキメラタンパク質はＣＡＲ－Ｔ細胞のアネルギーを防止する。

【0415】

様々な実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法には、限定されないが、炭酸脱水素酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ルイスＹ抗原、Ｌ１－ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ－１、ＩＬ１３Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマウイルス１６Ｅ６型（ＨＰＶ－１６Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体α（ＦＲ－α）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、及び血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、並びに当技術分野においてよく知られている他の腫瘍抗原などの抗原（例えば、腫瘍抗原）を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞が含まれる。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／メランＡ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、大腸癌関連抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）及びその免疫原性のエピトープであるＣＡＰ－１及びＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）及びその免疫原性のエピトープであるＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、及びＰＳＡ－３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３ζ鎖、ＭＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニン及びγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２及びＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリー腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶコード核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２が挙げられるがこれらに限定されない。

【0416】

例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞療法としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓス社）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ社）、ＢＰＸ－４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ＢＰＸ－５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ＢＰＸ－６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ社）、ＣＤ－１９スリーピングビューティー細胞（Ｚｉｏｐｈａｒｍ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ社）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ社）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ社）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ社）、ＯＸＢ－３０２（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ社）、ＭＢ－１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ Ｂｉｏ社）及びＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社によって開発されたＣＡＲ－Ｔ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。

【0417】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、多発性硬化症（ＭＳ）を併用治療する方法において、３－インターフェロン、グラチラマー酢酸塩、Ｔ－インターフェロン、ＩＦＮ－β－２（米国特許出願公開第２００２／００２５３０４号）、スピロゲルマニウム（例えば、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－２－アザ－８，８－ジメチル－８－ゲルマンスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－２－アザ－８，８－ジエチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－２－アザ－８，８－ジプロピル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、及びＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－２－アザ－８，８－ジブチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン）、ビタミンＤ類似体（例えば、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３（例えば、米国特許第５，７１６，９４６号を参照されたい））、プロスタグランジン（例えば、ラタノプロスト、ブリモニジン、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２及びＰＧＥ３；例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５２５号を参照されたい）、テトラサイクリン及び誘導体（例えば、ミノサイクリン及びドキシサイクリン；例えば、米国特許出願公開第２００２／００２２６０８号を参照されたい）、ＶＬＡ－４結合抗体（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０２５２７号を参照されたい）、副腎皮質刺激性ホルモン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、２－クロロデオキシアデノシン、ミトキサントロン、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、シクロホスファミド、サイクロスポリン、フマル酸塩、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、及びチザニジン塩酸塩を含むがこれらに限定されない１種類又は複数種類のＭＳ治療薬と共に使用される。

【0418】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＭＳの１種類又は複数種類の症状を治療する１種類又は複数種類の治療薬と併用される。そのような作用物質としては、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフルオキサシン、ドクサート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、サイリウム親水性ムシロイド、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、臭化プロパンテリン、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、及びセルトラリンが挙げられるがこれらに限定されない。

【0419】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラタンパク質は、本明細書に記載される疾患修飾療法（ＤＭＴ）（例えば、表Ａに記載の薬剤）のうちの１種類又は複数種類の療法と共に多発性硬化症を併用治療する方法において使用される。いくつかの実施形態では、本発明は、１種類又は複数種類の本開示の結合薬剤を使用しない本明細書に記載されるＤＭＴ（例えば、下記の表に記載される薬剤）のうちの１種類又は複数種類を使用する場合と比較して改善された治療効果を実現する。ある実施形態では、本開示のキメラタンパク質と１種類又は複数種類のＤＭＴを組み合わせることによって相乗的な治療効果が生じる。

【0420】

【表1】

【0421】

ＭＳ疾患の進行は、疾患進行の初期において最も強く、且つ、最も有害であり得る。よって、例えば費用及び副作用の軽減を考慮した、多くの費用費還付政策及び医師の診療とは反対に、長期疾患状態の患者には最も強力なＤＭＴ、例えばいわゆる第二選択療法で治療を開始することが最も有益であり得る。いくつかの実施形態では、第二選択療法と組わせたキメラタンパク質での治療法によって患者が治療される。そのような組合せは１種類又は複数種類の第二選択療法の副作用プロファイルを低減するために使用される。いくつかの実施形態では、前記組合せは、１種類又は複数種類の第二選択療法の投与回数を低減するために使用される。例えば、組み合わせることで上に提示した表に記載された薬剤の用量が、約５０％、又は約４０％、又は約３０％、又は約２５％減少する場合があり、及び／又は投与回数が半分又は３分の１に減る場合があり、又は例えば、毎日から１日おき又は１週間に１回、１日おきから１週間に１回又は２週間に１回、１週間に１回から２週間に１回又は月に１回などに減る場合がある。よって、いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、より便利な治療法を可能にすることで患者アドヒアランスを向上させる。さらに、いくつかのＤＭＴには生涯投与量制限の目安があり、例えば、ミトキサントロンについては、１４０ｍｇ／ｍ^２の生涯累積投与量又は２～３年間の治療期間に厳密に制限されているはずである。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質を追加することでこのＤＭＴによる低用量又は低頻度の投与が可能になり、それにより患者は継続してミトキサントロンを利用することができる。

【0422】

いくつかの実施形態では、患者は１種類又は複数種類のＤＭＴを使用する治療を受けたことがない未処置の患者であり、キメラタンパク質は第二選択療法の副作用を緩和するために使用される。よって、未処置の患者は疾患の発端時に第二選択療法の長期利益の恩恵を受けることができる。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は第二選択療法の使用に先立つ入口療法として使用される。例えば、キメラタンパク質は疾患を安定化させるために約３か月の初期治療期間にわたって投与される場合があり、その後に患者は第二選択薬剤の維持療法に移行する場合がある。

【0423】

未処置の患者は、１種類又は複数種類のＤＭＴを受けたことがあり、おそらくは不首尾に終わった患者と比較して治療に応答する可能性が高いと一般に考えられている。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、１種類又は複数種類のＤＭＴを受けたことがあり、おそらくは不首尾に終わった患者において使用される。例えば、いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、１種類又は複数種類のＤＭＴを受けたことがあり、おそらくは不首尾に終わった患者において治療効果を高め、これらの患者が未処置の患者のように応答することを可能にし得る。

【0424】

いくつかの実施形態では、患者は１種類又は複数種類のＤＭＴを使用する治療を受けたことがあるか、又は受けているところであり、且つ、よく応答していない。例えば、患者は治療抵抗性であるか、又は１種類又は複数種類のＤＭＴに対する応答性が乏しい場合がある。いくつかの実施形態では、患者は治療抵抗性であるか、又はテリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（Ｇｅｎｚｙｍｅ社））、インターフェロンβ－１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ社）、インターフェロンβ－１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（Ｂａｙｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、グラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（ＴＥＶＡ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ社）、インターフェロンβ－１ｂ（ＥＸＴＡＶＩＡ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（Ｇｅｎｚｙｍｅ社）、ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ社）、ＰＥＧ化インターフェロンβ－１ａ（ＰＬＥＧＲＩＤＹ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ社）、インターフェロンβ－１ａ（ＲＥＢＩＦ（ＥＭＤセローノ社）、フマル酸ジメチル（ＢＧ－１２）（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ社）、及びナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ社）のうちの１つ又は複数に対する応答性が乏しい。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、患者における１種類又は複数種類のＤＭＴの治療上の利益を達成し、したがってそのＤＭＴに対する非応答性を抑制又は除去する。例えば、これにより、より高い用量又は頻度で１種類又は複数種類のＤＭＴを使用する患者の治療を免れる場合がある。

【0425】

より侵攻性の疾患を有する患者では、アプローチの一つとして、強力な効力を有するが安全性への懸念が高い治療法が最初に行なわれて続いて維持療法が行われる誘導性治療モデルある。そのようなモデルの一例としては、アレムツズマブを使用する初期治療及びそれに続くＩＦＮ－β、ＧＡ、又はＢＧ－１２による治療が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、維持のために治療法を切り換える必要性を未然に防ぐために使用される。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、第二選択療法を含む１種類又は複数種類のＤＭＴに対する維持療法として使用される。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤が誘導性治療において第一療法として使用され、続いて、例えば、第一選択療法などの維持療法として、別のＤＭＴが使用される。

【0426】

いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、疾患を安定化させるために約３か月の初期治療期間にわたって投与されてよく、その後、患者は第一選択薬剤の維持療法に移行されてもよい。

【0427】

様々な実施形態において、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、限定されないが、本明細書に開示されるいずれかの薬剤を含むＤＭＴの１種類又は複数種類の副作用を抑制するために使用される。例えば、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、１種類又は複数種類のＤＭＴの投与量の節約を可能にし、したがって副作用を少なくする投与法において使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＡＵＢＡＧＩＯ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、薄毛、下痢、インフルエンザ、吐き気、異常な肝臓試験値及び異常な手足の痺れ又は刺痛（感覚異常）、感染症のリスクを高め得る白血球レベル、血圧上昇、及び重篤な肝臓障害が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＡＶＯＮＥＸ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射後のインフルエンザ様症状、鬱、中程度の貧血、肝臓異常、アレルギー性反応、及び心臓の問題が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー性反応、鬱、肝臓異常、及び低白血球数が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＣＯＰＡＸＯＮＥ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射部位反応、血管拡張（血管の拡大）、胸痛、並びに不安感、胸痛、動悸、息切れ、及び紅潮を含む注射直後の反応が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＥＸＴＡＶＩＡ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー性反応、鬱、肝臓異常、及び低白血球数が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＧＩＬＥＮＹＡ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、頭痛、インフルエンザ、下痢、背部痛、肝臓酵素値上昇、咳、初回投与後の心拍数低下、感染症、及び眼球膨張が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＬＥＭＴＲＡＤＡ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、発疹、頭痛、発熱、鼻づまり、吐き気、尿路感染症、疲労感、不眠症、上気道感染症、じんましん、痒み、甲状腺障害、真菌感染症、関節、四肢、及び背中の痛み、下痢、嘔吐、紅潮、及び輸注反応（吐き気、じんましん、痒み、不眠症、悪寒、紅潮、疲労感、息切れ、味覚変化、消化不良、めまい、疼痛を含む）が含まれる。いくつかの実施形態では本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、投与から２４時間後の青緑色の尿、感染症、骨髄抑制（疲労感、皮下出血、低血液細胞数）、吐き気、薄毛、膀胱感染症、口の痛み、並びに重篤な肝臓及び心臓の障害が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＰＬＥＧＲＩＤＹ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、鬱、中程度の貧血、肝臓異常、アレルギー性反応、及び心臓の問題が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＲＥＢＩＦ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、肝臓異常、鬱、アレルギー性反応、及び低赤血球数又は白血球数が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、紅潮（熱感又は痒み及び皮膚の発赤）、胃腸の問題（吐き気、下痢、腹痛）、発疹、タンパク尿、肝臓酵素値上昇、及び血中リンパ球（白血球）数の減少が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の１種類又は複数種類の結合薬剤は、ＴＹＳＡＢＲＩ又は関連する薬剤の１種類又は複数種類の副作用の抑制が可能であり、それらの副作用には、頭痛、疲労感、尿路感染症、鬱、気道感染症、関節痛、胸やけ、腹部不快感、下痢、膣炎、腕又は脚の痛み、発疹、点滴から２時間以内のアレルギー性反応又は過敏症反応（めまい、発熱、発疹、痒み、吐き気、紅潮、低血圧、息苦しさ、胸痛）が含まれる。

【0428】

いくつかの実施形態では、本発明は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、及び国際公開第２０１５／００７９０３号に記載される１種類又は複数種類のキメラ作用物質との併用療法に関する。

【0429】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるキメラタンパク質は、修飾されている誘導体、すなわち、任意の種類の分子のその組成物への共有結合により、その共有結合がその組成物の活性を妨害しないように修飾されている誘導体を含む。例えば、限定されないが、誘導体としては、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞性リガンド又は他のタンパク質への結合などによって修飾されている組成物が挙げられる。特異的な化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれらに限定されない公知の方法によって多数の化学的修飾のうちのいずれかを実施することができる。

【0430】

さらに他の実施形態では、本明細書に記載されるキメラタンパク質は細胞傷害性薬剤をさらに含み、例示的な実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位体、及びアポトーシス又は細胞死を引き起こす薬剤を含む。本明細書に記載される組成物にはそのような薬剤が複合体化され得る。

【0431】

したがって、本明細書に記載されるキメラタンパク質は、化学リンカー、例えば蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、及び化学発光部分などの検出可能部分、又は例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞傷害剤、及び放射性物質などの機能性部分など、エフェクター部分を翻訳後に付加するために改変される場合がある。

【0432】

細胞傷害剤の例としては、メトトレキサート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ダカルバジン；メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ－ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、及びカルボプラチン（パラプラチン）などのアルキル化剤；ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、及びビサントレンを含むアントラサイクリン類；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；及びビンカアルカロイド、ビンクリスチン、及びビンブラスチンなどの抗有糸分裂剤が挙げられるがこれらに限定されない。他の細胞傷害剤としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テニポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン（dihydroxy anthracin dione）、１－デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、及びこれらの細胞傷害剤の混合物が挙げられる。

【0433】

その他の細胞傷害剤にはカルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン類、タキソール類、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド類（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモンアンタゴニスト、選択性アンドロゲン受容体調節薬、選択性エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ－１アンタゴニスト、インターロイキン（例えばＩＬ－１２又はＩＬ－２）、ＩＬ－１２Ｒアンタゴニスト、毒素結合モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、又はそれらの任意の組合せなどの化学療法剤が含まれるがこれらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素、及び緑膿菌毒素などの植物及び細菌に由来する毒性酵素を、治療薬（例えば抗体）に複合体化して細胞種特異的死滅試薬をしてもよい（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：ｐｐ．５４８３（１９８０）、Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：ｐｐ．４５３９（１９８０）、Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：ｐｐ．５４１９（１９８０））。

【0434】

他の細胞傷害剤としては、米国特許第６，６５３，１０４号内でＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇによって説明されているような細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態は、α粒子又はβ粒子を放射する放射性核種が複合体形成剤を使用して、又は使用せずに、安定的に本開示のキメラタンパク質に結合している放射性免疫複合体にも関する。そのような放射性核種には、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６、又はレニウム－１８８などのβ放射体、及びアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３、又はアクチニウム－２２５などのα放射体が含まれる。

【0435】

検出可能部分の例としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、及びルシフェラーゼがさらに挙げられるがこれらに限定されない。その他の蛍光物質の例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリン、及び塩化ダンシルが挙げられるがこれらに限定されない。その他の化学発光部分の例としてはルミノールが含まれるがこれらに限定されない。その他の生物発光物質の例としては、ルシフェリン及びエクオリンが挙げられるがこれらに限定されない。その他の放射性物質の例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウム、及びリン－３２が挙げられるがこれらに限定されない。

【0436】

治療方法
本明細書に記載される方法と組成物は、がん、感染症、免疫障害、貧血、自己免疫疾患、心血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝性疾患、並びに他の多くの疾患及び障害を含むがこれらに限定されない様々な疾患及び障害の治療に適用される。

【0437】

さらに、本開示の作用物質のうちのいずれも、がん、感染症、免疫障害、炎症性疾患又は症状、及び自己免疫疾患を含むがこれらに限定されない様々な疾患及び障害の治療に、又はそれらの様々な疾患及び障害を治療するための医薬の製造に使用され得る。

【0438】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫症、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、がん、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球症、サラセミア、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏症、コラーゲン血管疾患、シュワックマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、甲状腺機能低下症又はアジソン病などの内分泌不全状態、クローン病などの自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎又は若年性リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、好酸球性筋膜炎などの免疫障害、低免疫グロブリン血症、又は胸腺腫／胸腺がん、移植片対宿主病、前白血病、非造血系症候群（例えばダウン症候群、デュボヴィッツ症候群、ゼッケル症候群）、フェルティー症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球癆、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、マラリア、タンパク質欠乏症、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、代謝低下状態、及びうっ血性心不全のうちの１つ又は複数の治療に関し、又はそれらのうちの１つ又は複数を有する患者に関する。

【0439】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫症、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、マイコバクテリウム感染症、癌、強皮病、肝炎、Ｃ型肝炎、敗血症ショック、及びリウマチ性関節炎のうちの１つ又は複数の治療に関し、又はそれらのうちの１つ又は複数を有する患者に関する。

【0440】

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療、又はがんを有する患者に関する。本明細書において使用される場合、がんとは身体の器官及び系の正常な機能実行に干渉し得る任意の無制御細胞増殖であり、がんには原発腫瘍と転移腫瘍の両方が含まれる。元の場所から移動し、且つ、生命維持に必要な器官に広まった原発腫瘍又は原発がんはそれらの冒された器官の機能悪化を介して最終的に対象の死を引き起こし得る。転移がんは原発腫瘍由来がん細胞の身体の他の部分への転移の結果として生じる癌細胞又はがん細胞群であり、原発腫瘍の場所とは異なる。転移がんは最終的に対象の死を引き起こす場合がある。例えば、がんには良性及び悪性のがん、ポリープ、過形成、並びに休眠腫瘍又は微小転移巣が含まれ得る。

【0441】

治療され得るがんの例としては、細胞腫、例えば、腺がん、基底細胞がん、扁平上皮がん、及び移行上皮がん）、肉腫（例えば、骨肉腫及び軟組織肉腫を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、及び有毛細胞白血病を含む）、リンパ腫及び骨髄腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫、ＭＧＵＳ、及び形質細胞腫を含む）、及び中枢神経系がん（例えば、脳がん（例えば、神経膠腫（例えば星状細胞腫、希突起神経膠腫、及び上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び神経腫）、及び脊髄腫瘍（例えば髄膜腫及び神経繊維腫））含む様々なサブタイプのものなどの細胞腫が挙げられるがこれらに限定されない。

【0442】

治療され得るがんの例としては、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳及び中枢神経系のがん、乳癌、腹膜がん、子宮頸部がん、絨毛癌、大腸がん、結合組織がん、消化器がん、子宮内膜がん、食道がん、眼のがん、頭頚部がん、胃がん（胃腸がんを含む）、神経膠芽腫、肝細胞癌、肝癌、上皮内新生物、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔がん（口唇、舌、口、及び咽頭）、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸がん、呼吸器がん、唾腺癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺癌がん、子宮又は子宮内膜のがん、泌尿器がん、外陰がん、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫並びにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレーム型マクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、並びに他のがん及び肉腫、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連する浮腫）、及びメグズ症候群が挙げられるがこれらに限定されない。

【0443】

様々な実施形態において、本発明は、Ｍｙｃ誘発性のがん、すなわちＭｙｃを過剰発現するがん細胞の治療に関する。いくつかの実施形態では、それらの癌細胞は、ｃ－Ｍｙｃ、Ｎ－Ｍｙｃ、及び／又はＬ－Ｍｙｃのうちのいずれか１つを過剰発現する。いくつかの実施形態では、本発明の方法によって、がん細胞は本明細書に記載される抗癌治療薬のうちのいずれか１つを使用する治療に対して感受性になる。いくつかの実施形態では、本発明の方法によって、がん細胞の転写活性が低下する。

【0444】

いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症及び／又は慢性感染症の治療、あるいは微生物感染症及び／又は慢性感染症を有する患者に関する。感染症の例としては、シャーガス病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バーウイルス又はパルボウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルス、細菌過剰症候群、真菌又は寄生生物の感染症が挙げられるがこれらに限定されない。

【0445】

様々な実施形態において、本開示の組成物は、１種類又は複数種類の炎症性疾患又は症状、例えば、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血症ショック、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、疼痛、眼炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性痙攣性運動失調症、炎症性喉頭疾患；結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症、及び他の塵肺症を治療又は予防するために使用される。

【0446】

様々な実施形態において、本開示の組成物は、１種類又は複数種類の自己免疫性疾患又は症状、例えば、多発性硬化症、真性糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、硬皮、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆管硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群；移植拒絶（例えば、同種移植片拒絶反応の防止）悪性貧血、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、及び他の自己免疫疾患を治療又は予防するために使用される。

【0447】

様々な実施形態において、本開示の組成物は、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、脳血管性疾患（ＣＶＤ）、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、アテローム性硬化症、動脈硬化症、心筋梗塞（心臓発作）、脳血管性疾患（脳卒中）、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）、狭心症（安定型及び不安定型）、心房細動、不整脈、弁膜症、及び／又はうっ血性心不全を含むがこれらに限定されない心臓及び血管を冒す疾患又は症状など、心血管疾患を治療、管理、又は予防するために使用される。

【0448】

様々な実施形態において、本開示の組成物は、１種類又は複数種類の代謝関連障害を治療又は予防するために使用される。様々な実施形態において、本発明は、１型糖尿病、２型糖尿病、及び肥満関連糖尿病を含む糖尿病の治療、管理、又は予防に有用である。本発明の組成物と方法は糖尿病関連障害の治療又は予防に有用であり、糖尿病関連障害には糖尿病性腎症、高血糖症、耐糖能異常、インスリン抵抗性、肥満、脂質異常症、脂質異常血症、高脂質血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、アテローム性硬化症及びその続発症、血管再狭窄、過敏性腸症候群、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、他の炎症症状、膵臓炎、腹部肥満、神経変性疾患、網膜症、腫瘍性疾患、脂肪肉腫などの脂肪細胞腫瘍及び脂肪細胞がん、前立腺がん、並びに胃がん、乳がん、膀胱がん、及び結腸がんを含む他のがん、血管新生、アルツハイマー病、乾癬、高血圧、メタボリックシンドローム（例えば、以下の障害、すなわち腹部肥満、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール、高血圧、及び高空腹時血漿グルコースのうちの３つ以上を有する人物）、卵巣高アンドロゲン症（多嚢胞性卵巣症候群）、及びインスリン抵抗性が一要素である睡眠時無呼吸症などの他の障害が含まれるがこれらに限定されない。本発明の組成物及び方法は、遺伝的肥満又は環境的肥満を含む肥満、及び肥満関連障害の治療、管理、又は予防に有用である。本明細書において肥満関連障害は肥満に付随し、肥満が原因となり、又は肥満により生じる。肥満関連障害の例としては、肥満、糖尿病、多食症、過食症、及び大食症、高血圧、血漿中インスリン濃度上昇及びインスリン抵抗性、脂質異常血症、高脂血症、子宮内膜がん、乳がん、前立腺がん、腎臓がん、及び結腸がん、骨関節炎、閉塞型睡眠時無呼吸症、胆石、心疾患、異常心拍リズム及び不整脈、心筋梗塞、うっ血性心不全、冠動脈心疾患、突然死、脳卒中、多嚢胞性卵巣症、頭蓋咽頭腫、プラダー・ウィリー症候群、フレーリヒ症候群、ＧＨ欠損性対象、正常範囲内変異型小人症、ターナー症候群、及び代謝活性の低下又は総除脂肪体重の割合としての休息時エネルギー消費の低下を示す他の病態、例えば急性リンパ芽球性白血病の子供が挙げられる。肥満関連障害のその他の例は、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、生殖ホルモン異常症、性及び生殖機能不全、例えば男性における生殖障害、不稔、性腺機能不全症と女性における男性型多毛症、母体肥満に関連する胎児欠損、肥満関連胃食道逆流症などの胃腸運動障害、肥満低換気症候群（ピックウィック症候群）などの呼吸器障害、息切れ、心血管障害、血管の全身性炎症などの炎症、動脈硬化症、高コレステロール血症、腰痛、胆嚢疾患、高尿酸血症、痛風、及び腎臓がん、及び麻酔危険度の上昇である。本発明の組成物と方法はアルツハイマー病の治療にも有用である。

【0449】

様々な実施形態において、本開示の組成物は、１種類又は複数種類の呼吸器疾患、例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管収縮、炎症、アレルギー、呼吸障害、呼吸困難症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧、肺血管収縮、肺気腫、ハンタウイルス肺性症候群（ＨＰＳ）、レフラー症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、肺臓炎、肺水腫、肺線維症、サルコイドーシス、呼吸器合胞体ウイルス感染症の合併症、及び他の呼吸器疾患を治療又は予防するために使用される。

【0450】

いくつかの実施形態では、本発明は、１種類又は複数種類の神経変性疾患を治療又は予防するために使用される。神経変性疾患の例としては、フリードライヒ運動失調症、多発性硬化症（限定されないが、良性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）、及び一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）を含む）、アルツハイマー病（限定されないが、若年性アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病とパーキンソン症候群（限定されないが、特発性パーキンソン病、血管性パーキンソン症、薬剤性パーキンソン症候群、レビー小体型認知症、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ；限定されないが、孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋地域ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病を含む）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0451】

様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、創傷、例えば、非治癒性創傷、潰瘍、火傷、又は凍傷、慢性又は急性創傷、開いているか又は閉じた創傷、内部又は外部の創傷（外部創傷の例は、貫通創傷及び非貫通創傷である）の治療に使用される。様々な実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、虚血、非限定的な例では急性冠動脈虚血症候群、急性肺障害（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞性疾患、動脈硬化症、関節軟骨欠損、無菌性全身炎症、アテローム性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳灌流圧低下、バージャー病、火傷、がん、心血管疾患、軟骨損傷、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管性疾患、化学療法誘発性末梢神経障害、慢性感染症、慢性腸管虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、打撲傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深部創傷、潰瘍治癒遅延、創傷治癒遅延、糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型）、糖尿病性神経障害、糖尿病誘発性虚血、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、凍傷、移植片対宿主病、遺伝性出血性末梢血管拡張症、虚血性血管疾患、高酸素症、低酸素症、炎症、炎症性腸疾患、炎症性疾患、腱損傷、間欠性跛行症、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心臓疾患、虚血性末梢血管疾患、胎盤虚血、虚血性腎臓疾患、虚血性血管疾患、虚血性再灌流障害、裂傷、左主幹冠動脈疾患、虚血肢、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、器官虚血、骨関節炎、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢神経障害、末梢血管疾患、前がん、肺水腫、肺性塞栓、リモデリング疾患、腎虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、臓器移植、脊髄損傷、脳卒中、軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）、外傷性脳損傷、潰瘍性大腸炎、腎臓の血管疾患、血管炎症、フォン・ヒッペル・リンダウ症候群、又は組織若しくは器官に対する創傷の治療に使用される。

【0452】

様々な実施形態において、本発明は、慢性腎臓疾患（例えば、透析）により生じる貧血、及び／又は抗がん剤（例えば、化学療法）により生じる貧血、及び／又はＨＩＶ治療（例えばジドブシン（ＩＮＮ）又はアジドチミジン（ＡＺＴ））により生じる貧血を含む貧血、炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、炎症症状（例えば、関節炎、狼瘡、ＩＢＤ）に関連する貧血、糖尿病に関連する貧血、精神分裂病、大脳マラリア、再生不良性貧血、及び癌の治療（例えば、化学療法及び／又は放射線）による脊髄形成異常、及び様々な骨髄異型性症候群（例えば、鎌状赤血球貧血、ヘモグロビンＳＣ病、ヘモグロビンＣ病、アルファ及びベータサラセミア、早産後の新生児貧血、及び同等の症状）のうちの１つ又は複数の治療に関する。

【0453】

いくつかの実施形態では、本発明は、貧血、すなわち赤血球の数及び／又は赤血球に見られるヘモグロビンの量が正常に満たない状態の治療、又は貧血を有する患者に関する。様々な実施形態において、貧血は急性貧血でも慢性貧血でもよい。例えば、本開示の貧血としては、鉄欠乏性貧血、腎性貧血、慢性疾患／炎症の貧血、大球性胃酸欠乏性貧血、若年性悪性貧血、及び先天性悪性貧血などの悪性貧血、がん関連貧血、抗がん関連貧血（例えば化学療法関連貧血、放射線療法関連貧血）、赤芽球癆、過剰量の芽細胞を伴う難治性貧血、再生不良性貧血、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球貧血、ＥＳＡの産生不全に起因する貧血、脊髄形成異常症候群、低色素性貧血、小赤血球性貧血、鉄芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、クーリー貧血、地中海性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコーニ貧血、及び薬剤誘発性溶血性貧血が挙げられるがこれらに限定されない。貧血は、低酸素症、慢性疲労症、集中力欠如、青白い肌、低血圧、めまい、及び心不全を含む重篤な症状の原因となることがある。

【0454】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性腎不全の結果生じる貧血の治療に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、透析、血液透析、腹膜透析、血液濾過、血液透析濾過、及び腎臓移植を含む１種類又は複数種類の腎代替療法を使用した結果生じる貧血の治療に関する。

【0455】

いくつかの実施形態では、本発明は、透析を受けていない慢性腎臓疾患の患者の治療に関する。例えば、本発明は、ステージ１のＣＫＤ、又はステージ２のＣＫＤ、又はステージ３のＣＫＤ、又はステージ４のＣＫＤ、又はステージ５のＣＫＤの患者に関する。いくつかの実施形態では、本開示の患者は、ステージ４のＣＫＤ又はステージ５のＣＫＤの患者である。いくつかの実施形態では、本患者は、腎臓移植を受けたことがある。いくつかの実施形態では、本発明は、急性腎障害（ＡＫＩ）の患者の貧血の治療に関する。

【0456】

いくつかの実施形態では、貧血は化学療法によって誘発される。例えば、化学療法は任意の骨髄抑制性化学療法であってもよい。ある実施形態では、化学療法は、レブリミド、サロミド、デキサメタゾン、アドリアマイシン、及びドキシルのうちの１つ又は複数である。いくつかの実施形態では、化学療法は、シスプラチン（例えば、ＰＬＡＴＩＮＯＬ）及びカルボプラチン（例えば、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ）を含む１種類又は複数種類のプラチナ系薬品である。いくつかの実施形態では、化学療法は、本明細書に記載される化学療法剤のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、化学療法は、内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＧｒｏｏｐｍａｎ，ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ、（１９９９）９１（１９）：ｐｐ．１６１６－１６３４に記載されるいずれかの薬剤である。いくつかの実施形態では、本開示の組成物及び方法は、後期ステージがん（例えば、ステージＩＶ、又はステージＩＩＩ、又はステージＩＩのがん）の患者の化学療法関連貧血の治療に使用される。いくつかの実施形態では、本開示の組成物及び方法は、投与集中（ｄｏｓｅ－ｄｅｎｓｅ）化学療法又は他の積極的な化学療法レジメンを受けているがん患者の化学療法関連貧血の治療に使用される。

【0457】

いくつかの実施形態では、本発明は、１種類又は複数種類の血液系のがん、例えば、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫の患者の貧血の治療に関する。そのようながんは骨髄を直接的に冒す。さらに、本発明は、骨又は骨髄に転移した転移がんに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、放射線療法を受けている患者の貧血の治療に関する。そのような放射線療法は、骨髄に損傷を与え、その赤血球産生能を低下させる場合がある。その他の実施形態では本発明は鉄、ビタミンＢ１２、及び葉酸のうちの１つ又は複数の低下又は欠乏がある患者の貧血の治療に関する。その他の実施形態では、本発明は、限定されないが、手術後の出血、又は内部出血を引き起こしている腫瘍からの出血を含む多量の出血がある患者の貧血の治療に関する。その他の実施形態では、本発明は、慢性疾患の貧血がある患者の貧血の治療に関する。

【0458】

いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物は赤血球生産を刺激する。いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物は、骨髄中の発生運命の決まった始原細胞の分裂及び分化を刺激する。

【0459】

本発明のある特定の実施形態は、がん患者における化学療法誘発性貧血の治療に特に有用である。いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物により、がん患者の化学療法が終わった後に本開示のキメラタンパク質の投与を続けることが可能になる。いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物により、非がん患者と比べて用量を減少させることなくがん患者の治療が可能になる。いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物により、化学療法を受けており、且つ、治癒可能と考えられているがん患者の治療が可能になる。様々な実施形態において、がん患者には血栓の履歴、最近の手術、長期のベッドでの静養又は活動の制限、及び化学療法剤での治療のうちの１つ又は複数がある。

【0460】

キット
本発明は本明細書に記載される任意の作用物質（例えば、様々な追加治療薬を含む、又は含まないキメラタンパク質）を投与するためのキットも提供する。キットは材料又は構成要素の集合体であり、本明細書に記載される本発明の医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む。したがって、いくつかの実施形態では、キットは本明細書に記載される医薬組成物のうちの少なくとも１つを含む。

【0461】

キットを構成する構成要素の正確な種類は意図する目的に依存する。ある実施形態では、キットはヒト対象の治療を目的として構成されている。

【0462】

キットには取扱説明書が含まれていてもよい。取扱説明書は、通常、所望の結果を達成するために、例えばがんを治療するために、キットの構成要素の使用時に用いる方法を説明する明確な表現を含んでいる。所望により、キットは、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、注射器、カテーテル、塗布器、ピペット若しくは計測具、包帯、又は当業者には理解することが容易であるような他の有用な道具類一式のような他の有用な構成要素を含んでいてもよい。

【0463】

キットに組み合わせられた材料及び構成要素は、それらの操作性と有用性を維持する任意の簡便、且つ、適切な方法で保管され、実施者に提供され得る。例えば、構成要素は、室温、冷蔵温度、又は冷凍温度で提供され得る。構成要素は適切な包装材の中に入っていることが典型的である。様々な実施形態において、包装材は、好ましくは無菌で汚染混入物質を含まない環境を提供するためによく知られている方法で作製される。包装材は、キットの内容物及び／又は目的、及び／又はそのキットの構成要素を表示する外部ラベルを有してもよい。

【0464】

定義
本明細書において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は１又は１より多くを意味し得る。

【0465】

具体的に説明されない限り、又は文脈から明らかではない限り、本明細書において使用される場合、「又は（ｏｒ）」という用語は包括的であり、且つ、「又は（ｏｒ）」と「及び（ａｎｄ）」の両方を含むと理解される。

【0466】

さらに、「約」という用語は、参照する数字と接続して使用されるとき、その参照する数字±その参照する数字の最大で１０％、例えば、表示値の（±）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％を意味する。例えば、「約５０」という言葉は４５～５５の範囲を包含する。

【0467】

「有効量」は、医学的利用に関連して使用されるとき、目的の疾患の測定可能な治療、予防、又は発病率の低下をもたらすために有効な量である。

【0468】

本明細書において使用される場合、薬剤又は刺激が存在する場合にそのような調整が存在しない場合と比較して活性及び／又は効果の読みしが量が著しい量低減している場合、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又はそれ以上、少なくとも約１００％を含むそれ以下低減している場合、何かが「減少」している。当業者が理解するように、いくつかの実施形態では、活性が減少し、且つ、何らかの下流読み出し値が減少することになるが、他のものは増加する場合がある。

【0469】

反対に、薬剤又は刺激が存在する場合にそのような薬剤又は刺激が存在しない場合と比較して活性及び／又は効果の読み出しが著しい量増大している場合、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又はそれ以上、少なくとも約１００％を含むそれ以上、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増大している場合、活性が「増加」している。

【0470】

本明細書において参照される場合、全ての組成比率は、別段の定めが無い限り組成物の総重量に対する比率である。本明細書において使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形には、リスト中の事物の列挙が本技術の組成物及び方法に有用であり得る他の同様の事物を除外することにならないように非限定的であることが意図されている。同様に、「できる（ｃａｎ）」及び「してもよい（ｍａｙ）」という単語及びそれらの変形には、ある実施形態がある特定の要素又は特徴を含み得る、又は含むことがあるという記述がそれらの要素又は特徴を含まない本技術の他の実施形態を除外しないように非限定的であることが意図されている。

【0471】

「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などの用語の同義語としての「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という開放型の用語が本発明を説明し、且つ、本発明を主張するために本明細書において使用されているが、本発明又は本発明の実施形態は「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」又は「から基本的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替的な用語を使用して代わりに説明されることがある。

【0472】

本明細書において使用される場合、「好ましい」及び「好ましくは」という単語はある特定の状況下である特定の利益を生じる本技術の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態が同一又は他の状況下で好まれることもある。さらに、１つ又は複数の好ましい実施形態の列挙は他の実施形態が有用ではないことを意味しているのではなく、本技術の範囲から他の実施形態を除外することを意図するものではない。

【0473】

治療効果を達成するために必要とされる本明細書に記載される組成物の量は、その特定の目的のために従来法に従って実験に基づいて決定され得る。治療目的での治療薬の投与のためには、それらの治療薬を薬理学的に有効な用量で投与することが一般的である。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、又は「有効量」は、所望の生理学的効果を生み出すために十分な量、又は所望の結果を達成することが可能な量、特に障害又は疾患を治療することが可能な量のことである。本明細書において使用される場合の有効量には、例えば、障害又は疾患の症状の発生を遅らせ、障害又は疾患の症状の経過を変え（例えば、その疾患の症状の進行を遅らせ）、障害又は疾患の１種類又は複数種類の症状又は兆候を抑制又は除去し、且つ、障害又は疾患の症状を反転させるのに十分な量が含まれる。治療上の利益には、改善が実現するかしないか関係なく、根底にある疾患又は障害の進行を停止させること、又は遅らせることも含まれる。

【0474】

有効量、毒性、及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の約５０％にとって致死的である用量）及びＥＤ５０（集団の約５０％において治療的に有効である用量）を決定するための細胞培養物又は実験動物における標準的な薬学的方法によって決定可能である。投与量は使用する剤形及び利用する投与経路に応じて異なっていてもよい。毒性効果と治療効果との間の用量の比率が治療指数であり、それはＬＤ５０／ＥＤ５０という比率で表現可能である。いくつかの実施形態では、高い治療指数を示す組成物及び方法が好ましい。治療有効用量は、最初に、例えば細胞培養アッセイを含むｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイから推定可能である。また、細胞培養又は適切な動物モデルにおいて決定されるようなＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて用量を明確化することができる。血漿中の本開示の組成物のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定可能である。どの特定の投薬の効果も適切なバイオアッセイによってモニター可能である。医師によって投薬量が決定され、観察される治療の効果に適合するように必要に応じて調節され得る。

【0475】

ある特定の実施形態では、効果によって少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、又は少なくとも約９０％の定量可能な変化が生じる。いくつかの実施形態では、効果によって約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、又は約９０％以上もの定量可能な変化が生じる。治療上の利益には、改善が実現するかしないか関係なく、根底にある疾患又は障害の進行を停止させること、又は遅らせることも含まれる。

【0476】

本明細書において使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載される疾患又は障害を治療するための組成物の使用、及び／又は本明細書に記載される疾患又は障害を治療するための医薬の製造における使用に対して同等に適用可能である。

【実施例】

【0477】

「Ａｃタフェロン（Ａｃ Ｔａｆｅｒｏｎ）」という用語は、本明細書において、インターフェロンに基づいたキメラに言及するために使用されることがある。

【0478】

記述がない限り、以下の実施例ではＩＦＮに対する変異はヒトＩＦＮ－α２に対するものである。

【0479】

Ｑ１２４Ｒ変異はマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏでアッセイ可能な減弱されたヒトＩＦＮα２変異を表す。具体的には、Ｑ１２４Ｒは、マウスで使用するのに適切なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、Ｑ１２４Ｒはマウスで機能するヒト変異ＩＦＮである）。内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＮａｔ．Ｃｏｍｍ．、２０１４、５：３０１６、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ４０１６を参照されたい。

【0480】

実施例１．マウスＳＩＲＰ１αを指向するＶＨＨはＳＩＲＰ１αに結合し、ＳＩＲＰ１α／ＣＤ４７相互作用を中和する
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にマウスＳＩＲＰ１α発現プラスミドを一過的にトランスフェクションし、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地中でそれらの細胞を３７℃で４８時間維持した。細胞を解離し、ＰＢＳで洗浄して、１％ＦＢＳを添加したＰＢＳ中の表示濃度の精製Ｈｉｓタグ付きＶＨＨで１時間処理した。試料をＰＢＳで洗浄し、１％ＦＢＳを添加したＰＢＳ中のＡｌｅｘａ４８８結合抗Ｈｉｓ抗体（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）と共に１時間インキュベートした。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ分析機（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上で試料を測定した。

【0481】

図１Ａに示されるように、ＦＡＣＳに基づいたｍＳＩＲＰＡ結合アッセイにおいて、抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨの段階希釈物をマウスＳＩＲＰ１α発現細胞上で試験した。蛍光強度の幾何平均をプロットした。抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨはマウスＳＩＲＰ１αに特異的に結合する（図１Ｂ）。

【0482】

抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨがＣＤ４７との相互作用を中和するかどうかも試験した（図１Ｂ）。

【0483】

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にマウスＳＩＲＰ１α発現プラスミドを一過的にトランスフェクションし、１種類の抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨを表示濃度で添加した９６ウェルプレート中のＤＭＥＭ培地中にそれらの細胞を播種して３７℃で１時間に維持した。次に、ＳＥＡＰ（分泌型アルカリホスファターゼ）に結合させたマウスＣＤ４７（Ｎ末端の１５８アミノ酸）からなる融合タンパク質を含有する条件培地でそれらの細胞を３７℃で２時間処理した。保温後、それらの細胞をＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０で４回洗浄し、製造業者（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）の指示に従ってＰｈｏｓｐｈａＬｉｇｈｔアッセイを用いてホスファターゼ活性を測定した。

【0484】

図１Ｂに示されるように、抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨの段階希釈物をマウスＣＤ４７－マウスＳＩＲＰα結合アッセイにおいて試験した。三連測定の平均値±標準偏差を図１Ｂにプロットした。抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨは、用量依存的にＣＤ４７結合を阻害する。抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨはＳＩＲＰ１α－ＣＤ４７相互作用を中和することがデータより示された。

【0485】

実施例２．ＳＩＲＰ１α二特異性キメラのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍作用
抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラを使用してＢ１６モデルにおいてマウスｉｎ ｖｉｖｏ試験を行った。

【0486】

ＳＩＲＰ１α標的化キメラ（マウスＳＩＲＰ１αに特異的なＮ末端側中和ＶＨＨに２０×ＧＧＳリンカーを介して結合したｈＩＦＮα２ Ｑ１２４Ｒ）をｐＨｅｎ６ベクター中に構築し、大腸菌内でＨｉｓタグ付きＳＩＲＰ１ａキメラの大量生産を実施した。それらの大腸菌を定常期（０．７～０．８のＯＤ６００）になるまで培養し、ＩＰＴＧ（ＢｉｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加してＬａｃＺプロモーターを活性化した。一晩培養した後に細胞上清を回収した。ショ糖溶液を使用した浸透圧ショックにより周辺質画分中のタンパク質を分離し、コバルトイオンがロードされたＨｉＴｒａｐ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）上での固定化金属イオンクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により精製した。タンパク質の結合後、０．５％ＥＭＰＩＧＥＮ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）、０．５％ＣＨＡＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）、及びＰＢＳでカラムを洗浄した。イミダゾール（Ｍｅｒｃｋ社）を溶出のために使用し、ＰＤ－１０ゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用してそのイミダゾールを除去した。２８０ｎｍでの吸光度を用いてタンパク質濃度を決定し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより純度を評価した。Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ） ＱＣＬ－１０００（Ｌｏｎｚａ社）を使用してＬＰＳレベルを定量した。それでも存在する場合はＥｎｄｏｔｏｘｉｎ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用してＬＰＳを除去した。以前に説明された（Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．、２０１４、５：ｐｐ．３０１６、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ４０１６）ように、ＷＨＯ国際マウスＩＦＮα標準物質Ｇａ０２－９０１－５１１に対してマウスルシフェラーゼレポーター細胞株ＬＬ１７１を使用する機能性アッセイにより全ての産物の生物活性を評価した。

【0487】

１２時間明期／１２時間暗期の周期で温度制御環境中の無病原体条件下にマウスを維持し、マウスが餌及び水を自由に摂取できるようにした。雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、サンジェルマン シュル ラルブレル、フランス）に対し、（４％イソフルランを使用して）軽く麻酔をかけたマウスの毛刈りした脇腹に３０Ｇインスリン用注射器を使用して５０μＬの懸濁液中のＢ１６－ｍＣＤ２０クローン（ｍＣＤ２０の発現カセットを含むプラスミドが安定的にトランスフェクションされたＢ１６Ｂｌ６細胞）の５×１０^６細胞を８週齢の時点で接種した。

【0488】

腫瘍の接種から７日後から腫瘍境界の皮下である病変周囲（ｐ．ｌ．）に腫瘍の処置を実施した。マウス（ｎ＝５）は、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１４日目、１５日目、及び１６日目にＳＩＲＰ１α－キメラ処置を受けた。対照として、マウス（ｎ＝４）を１００μＬのＰＢＳで処置した。キメラは３５μｇのタンパク質（１．６ｍｇ／ｋｇ）に相当する５，５００ＩＵを処置毎に投与された。最後の腫瘍処置から１日後に尾静脈から血液をＥＤＴＡコートｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ社）に採取し、Ｈｅｍａｖｅｔ９５０ＦＳ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ウォーターバリー、米国）全血計測機において分析した。白血球、リンパ球、好中球、及び単球をＫ／μＬ単位で表し、赤血球をＭ／μＬ単位で表し、ヘモグロビンをｇ／ｄＬ単位で表し、ヘマトクリットを％単位で表し、血小板をＫ／μＬ単位で表し、平均血小板容積をｆＬ単位で表す。

【0489】

図２Ａ～Ｂに示されるように、ＰＢＳ対照（上の曲線）と比較して、抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラ（下の曲線）によって腫瘍成長が大幅に阻害された。さらに、様々な血液細胞に基づいたパラメーター（白血球数（「ｗｂｃ」）、リンパ球数（「ｌｙ」）、好中球数（「ｎｅ」）、単球数（「ｍｏ」）、赤血球数（「ｒｂｃ」）、ヘモグロビン（「ｈｂ」）、ヘモクリット（「ｈｃｔ」）、血小板（「ｐｌｔ」）、及び平均血小板容積（「ｍｐｖ」））によって評価されるように、Ｓｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒキメラは安全であることが示された。重要なことに、これらのパラメーターについて抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４ＲキメラとＰＢＳはほとんど差を示さない。野生型インターフェロンはｉｎ ｖｉｖｏでは良好な耐容性を示さないことが知られている。

【0490】

実施例３．ＳＩＲＰ１α二特異性キメラ
抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／抗マウスＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒ二特異性キメラを検討した。具体的には、ＦＡＣＳ分析を実施してマウスＰＤ－Ｌ１陽性Ｂ１６細胞株におけるＳＴＡＴ１リン酸化を定量した。

【0491】

１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地中において、Ｓｉｒｐ１α二特異性キメラでＢ１６細胞を３７℃で１５分間刺激した。刺激後に１倍容量のＦｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ（ＢＤバイオサイエンス社）を添加することにより細胞を３７℃で１０分間に固定し、２倍容量のＰｅｒｍ ＩＩＩ Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）中に再懸濁することにより氷上で３０分間透過処理した。抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で試料を４℃で２０分間染色し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）及びＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で分析した。

【0492】

図３に示されるように、１００ｎｇ／ｍＬの抗マウスＳｉｒｐ１α ＶＨＨ／抗マウスＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｑ１２４Ｒ二特異性キメラ及びＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ－ヒトＱ１２４Ｒ ＩＦＮキメラでＢ１６細胞を３７℃で１５分間刺激するか又は刺激をしないままにした。固定及び透過処理の後にリン酸化ＳＴＡＴ１について細胞を染色して、ＦＡＣＳで分析した。非標的化（ＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ）キメラと比較すると、二特異性キメラによってＰＤ－Ｌ１標的化がＳＴＡＴ１のリン酸化を著しく増加させたことがデータより明確に示されている。

【0493】

実施例４：ＳＩＲＰ１α二特異性キメラ
本実施例では、変異型ヒトＩＦＮアルファ２（ＩＦＮα２）、及びヒトＳＩＲＰ１αを標的とする組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）を含むキメラタンパク質を構築し、それらのキメラタンパク質の特性を解析する。

【0494】

ＣＤ２０陽性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＣＤ２０陰性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＳＴＡＴ１リン酸化をＦＡＣＳで定量化することにより、上記キメラタンパク質を調べる。

【0495】

キメラタンパク質の作成、作出、及び精製
変異型ＩＦＮα２に基づくキメラタンパク質を作成するために、ヒトＳＩＲＰ１αを標的とするＶＨＨの配列に可動性の２０×Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ可動性リンカーを介して野生型ヒトＩＦＮα２をコードする核酸配列を融合する。得られた核酸コンストラクト中の野生型ヒトＩＦＮα２に、Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｉ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｙ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｄ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、及びＬ１５３Ａの変異のうちの１つを導入する。野生型ＩＦＮα２のみを有する核酸コンストラクト又はヒトＳＩＲＰ１αを標的とするＶＨＨに融合した野生型ＩＦＮα２を有する核酸コンストラクトを対照として使用する。

【0496】

上述の核酸コンストラクトを細菌発現用のｐＨＥＮ６Ｃベクターに挿入する。１ｍＭのＩＰＴＧを使用してタンパク質発現を一晩誘導し、細胞を沈殿させ、ＴＥＳ緩衝液（０．２Ｍ トリス、ｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍ ショ糖）及びＴＥＳ／４緩衝液を使用して周辺質抽出物を調製する。製造業者のガイドラインに従ってＴＡＬＯＮ金属アフィニティー樹脂を使用してタンパク質を抽出物から精製し、ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用してそれらの試料からイミダゾールを除去する。

【0497】

ＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ１リン酸化
Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を使用す密度勾配遠心分離を用いて健康なドナーのバフィーコートに由来するＰＢＭＣを単離する。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の２％ＦＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、抗ヒトＣＤ２０－ＦＩＴＣ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社）を用いて４℃で２０分間染色する。２回の洗浄後、野生型ＩＦＮα２、野生型ＩＦＮα２／ＳＩＲＰ１αキメラタンパク質、又は上述の変異型ＩＦＮα２／ＳＩＲＰ１αキメラタンパク質のうちの１つの段階希釈物で細胞を３７℃で１５分間刺激する。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、透過処理（３０分間、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）及び洗浄の後、抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で細胞を染色する。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤバイオサイエンス社）を使用して試料を捕捉し、ＦｌｏｗＪｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ １０．２ソフトウェア（ＬＬＣ社）で分析する。

【0498】

結果
ＣＤ２０陽性細胞及びＣＤ２０陰性細胞は、野生型ヒトＩＦＮα２単独に対して同等の感受性を有すると考えられる。ＳＩＲＰ１α標的化ＶＨＨへの野生型ヒトＩＦＮα２の融合によって、ＣＤ２０陰性細胞と比較してＣＤ２０陽性細胞においてＳＴＡＴ１リン酸化の著しい増加がもたらされる、すなわちイムノカイン（ＩｍｍｕｎｏＫｉｎｅ）作用が生じることになるとも考えられる。

【0499】

変異型ＩＦＮα２を有するキメラタンパク質は、ＣＤ２０陰性細胞における活性がほとんどないに等しいと考えられる。変異型ＩＦＮα２を有するキメラタンパク質の活性喪失は、ＣＤ２０抗原がＰＢＭＣ上で発現すると大いに回復することになるとさらに考えられる。

【0500】

実施例５．ＳＩＲＰ１α二特異性キメラのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍作用
Ｂ１６モデルにおいて、これらの実施例の抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮα２キメラタンパク質を使用してマウスｉｎ ｖｉｖｏ試験を実施する。

【0501】

マウスＳＩＲＰ１αに特異的なＮ末端側中和ＶＨＨに２０×ＧＧＳリンカーを介して結合した変異型ヒトＩＦＮα２を含むＳＩＲＰ１α ＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮα２キメラタンパク質をコードする核酸コンストラクトをｐＨｅｎ６ベクター内に構築する。前記ヒトＩＦＮα２内の変異は、Ｒ３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｙ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｉ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｙ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｄ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、及びＬ１５３Ａから選択される。大腸菌内でＨｉｓタグ付きＳＩＲＰ１α ＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮα２キメラタンパク質の大量生産を実施する。それらの大腸菌を定常期（０．７～０．８のＯＤ６００）になるまで培養し、ＩＰＴＧ（ＢｉｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加してＬａｃＺプロモーターを活性化する。一晩培養の後に細胞上清を回収する。ショ糖溶液を使用する浸透圧ショックにより周辺質画分中のタンパク質を分離し、コバルトイオンがロードされたＨｉＴｒａｐ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）上での固定化金属イオンクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により精製する。タンパク質の結合後、０．５％ＥＭＰＩＧＥＮ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）、０．５％ＣＨＡＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）及びＰＢＳでカラムを洗浄する。イミダゾール（Ｍｅｒｃｋ社）を溶出のために使用し、ＰＤ－１０ゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用してそのイミダゾールを除去する。２８０ｎｍでの吸光度を用いてタンパク質濃度を決定し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより純度を評価する。Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）ＱＣＬ－１０００（Ｌｏｎｚａ社）を使用してＬＰＳレベルを定量する。それでも存在する場合はＥｎｄｏｔｏｘｉｎ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用してＬＰＳを除去する。以前に説明された（Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．、２０１４、５：ｐｐ．３０１６、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ４０１６）ように、ＷＨＯ国際マウスＩＦＮα標準物質Ｇａ０２－９０１－５１１に対してマウスルシフェラーゼレポーター細胞株ＬＬ１７１を使用する機能性アッセイにより全ての産物の生物活性を評価する。

【0502】

１２時間明期／１２時間暗期の周期を有する温度制御環境中の無病原体条件下にマウスを維持し、マウスが餌及び水を自由に摂取できるようにする。雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、サンジェルマン シュル ラルブレル、フランス）に対し、（４％イソフルランを使用して）軽く麻酔をかけたマウスの毛刈りした脇腹に３０Ｇインスリン用注射器を使用して５０μＬの懸濁液中のＢ１６－ｍＣＤ２０クローン（ｍＣＤ２０の発現カセットを含むプラスミドを安定的にトランスフェクションされたＢ１６Ｂｌ６細胞）の５×１０^６細胞を８週齢の時点で接種する。

【0503】

腫瘍の接種から７日後より腫瘍境界の皮下である病変周囲（ｐ．ｌ．）に腫瘍の処置を実施する。マウス（ｎ＝５）は、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１４日目、１５日目、及び１６日目にＳＩＲＰ１α－キメラタンパク質処置を受ける。対照として、マウス（ｎ＝４）を１００μＬのＰＢＳで処置する。キメラタンパク質を処置されるマウスは、３５μｇのタンパク質（１．６ｍｇ／ｋｇ）に相当する５，５００ＩＵを処置毎に投与される。最後の腫瘍処置から１日後に尾静脈から血液をＥＤＴＡコートｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ社）に採取し、Ｈｅｍａｖｅｔ９５０ＦＳ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ウォーターバリー、米国）全血計測機において分析する。白血球、リンパ球、好中球、及び単球をＫ／μＬ単位で表し、赤血球をＭ／μＬ単位で表し、ヘモグロビンをｇ／ｄＬ単位で表し、ヘマトクリットを％単位で表し、血小板をＫ／μＬ単位で表し、平均血小板容積をｆＬ単位で表す。

【0504】

ＰＢＳ対照と比較して、抗マウスＳＩＲＰ１α ＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮα２キメラタンパク質で処理されたマウスにおいて腫瘍成長の大幅な阻害が観察されることになると考えられる。様々な血液細胞に基づいたパラメーター（白血球数（「ｗｂｃ」）、リンパ球数（「ｌｙ」）、好中球数（「ｎｅ」）、単球数（「ｍｏ」）、赤血球数（「ｒｂｃ」）、ヘモグロビン（「ｈｂ」）；ヘモクリット（「ｈｃｔ」）、血小板（「ｐｌｔ」）、及び平均血小板容積（「ｍｐｖ」））によって評価されるように、ＳＩＲＰ１αＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮαキメラタンパク質は安全であることが示されることになるとも考えられる。さらに、これらのパラメーターについて、抗マウスＳＩＲＰ１αＶＨＨ／変異型ヒトＩＦＮα２キメラタンパク質とＰＢＳはほとんど差を示さないと考えられる。野生型インターフェロンはｉｎ ｖｉｖｏでは良好な耐容性を示さないことが知られている。

【0505】

均等論
本発明を本発明の特定の実施形態との関係で説明してきたが、本発明はさらに改変することが可能であり、本出願は、一般的には本発明の原理に従い、且つ、本発明が関係する技術分野内の公知の慣例又は慣行の範囲内に入り、且つ、本明細書においてこれまでに示されており、添付されている特許請求の範囲の通りの基本的な特徴に適用可能であるような本開示からの逸脱を含む本発明の任意の変形形態、使用、又は改変を包含するものとされていることが理解される。

【0506】

当業者は本明細書に具体的に記載される具体的な実施形態と同等の多数の実施形態を理解するか、又はわずかに日常的な実験法を使うだけで確認することができる。そのような同等の実施形態は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。

【0507】

参照による援用
本明細書において参照された全ての特許及び文献はそれらの全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0508】

本明細書において記載された文献は、単に本出願の出願日の前のそれらの開示を示すものである。本明細書は、本発明が先行発明によるそのような公開に先行するという権利が無いことを認めたものと解釈されるべきではない。

【0509】

本明細書において使用される場合、全ての見出しは単に編成のためであり、本発明を限定することを一切意図してはいない。いずれの段落の内容も全ての段落に同等に適用可能であり得る。
本発明の態様は以下を含む。
［付記１］
（ａ）ＳＩＲＰ１αを認識して結合する認識ドメインを含む標的化部分、及び
（ｂ）野生型シグナル伝達物質と比べて改善された安全性をもたらす１つ又は複数の変異を野生型シグナル伝達物質と比較すると有している改変型シグナル伝達物質、
を含み、前記標的化部分及び、改変型シグナル伝達物質が１つ又は複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記２］
１つ又は複数の追加標的化部分をさらに含む、付記１に記載のキメラタンパク質。
［付記３］
前記１つ又は複数の追加標的化部分が腫瘍細胞上の抗原又は受容体を認識して結合する認識ドメインを含む、付記２に記載のキメラタンパク質。
［付記４］
前記１つ又は複数の追加標的化部分が免疫細胞上の抗原又は受容体を認識して結合する認識ドメインを含む、付記２に記載のキメラタンパク質。
［付記５］
前記免疫細胞がマクロファージ、単球、及び樹状細胞から選択される、付記４に記載のキメラタンパク質。
［付記６］
前記１つ又は複数の追加標的化部分が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、及びＣｌｅｃ９Ａのうちの１つ又は複数を認識する、付記２～付記５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記７］
前記認識ドメインが、全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロプロテイン（例えばシステインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体の天然リガンド、又は合成分子を含む、付記１～付記６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記８］
前記認識ドメインが目的の抗原又は受容体を機能的に調整する、付記１～付記７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記９］
前記認識ドメインが目的の抗原又は受容体を認識して結合するがその機能を調整しない、付記１～付記８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記１０］
前記改変型シグナル伝達物質が、受容体における、シグナル伝達物質の親和性又は活性を野生型シグナル伝達物質と比べて低下させる１つ又は複数の変異を含む、付記１～付記９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記１１］
前記改変型シグナル伝達物質が、受容体に対する親和性又は活性を野生型シグナル伝達物質と比べて実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異を含む、付記１～付記１０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記１２］
前記改変型シグナル伝達物質が、
（ａ）受容体に対する親和性を野生型シグナル伝達物質と比べて実質的に低下させるか又は除去する１つ又は複数の変異、及び
（ｂ）受容体に対する親和性又は活性を野生型シグナル伝達物質と比べて低下させる１つ又は複数の変異
の両方を含み、
前記受容体が互いに異なっている、付記１～付記１１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記１３］
前記１つ又は複数の変異によって活性が減弱している、付記１０に記載のキメラタンパク質。
［付記１４］
アゴニスト活性又はアンタゴニスト活性が減弱している、付記１３に記載のキメラタンパク質。
［付記１５］
前記改変型シグナル伝達物質が自身の活性をアゴニスト活性からアンタゴニスト活性へ変換する１つ又は複数の変異を含む、付記１３又は付記１４に記載のキメラタンパク質。
［付記１６］
前記変異が、１つ又は複数の標的化部分への結合によって回復可能である親和性又は活性の低下をもたらすものである、付記１０に記載のキメラタンパク質。
［付記１７］
前記変異が、１つ又は複数の標的化部分への結合によって実質的に回復することがない親和性又は活性の実質的な低下又は除去をもたらすものである、付記１１に記載のキメラタンパク質。
［付記１８］
前記改変型シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、及び腫瘍壊死因子のうちの１つ又は複数から選択される、付記１～付記１７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記１９］
前記シグナル伝達物質がインターフェロンである、付記１～付記１８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記２０］
前記キメラタンパク質が、がん、感染症、免疫障害、自己免疫疾患、心血管疾患、創傷、虚血関連疾患、神経変性疾患、及び／又は代謝性疾患のうちの１つ又は複数を有する患者における使用に適している、付記１～付記１９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記２１］
（ａ）ＳＩＲＰ１αを認識して結合する認識ドメインを含む第１の標的化部分、
（ｂ）ＰＤ－１を認識して結合する認識ドメインを含む第２の標的化部分、及び
（ｂ）シグナル伝達物質の受容体における親和性又は活性を野生型シグナル伝達物質と比較して低下させる１つ又は複数の変異を有し、該変異は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｒ３３Ａから選択されてもよい、ヒトインターフェロンα２
を含み、
Ｘ１がＡ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、及びＩから選択され、
Ｘ２がＧ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、及びＤから選択され、且つ
前記標的化部分及び前記改変型シグナル伝達物質が１つ又は複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記２２］
付記１～付記２１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質のうちの１つをコードする組換え核酸組成物。
［付記２３］
付記２２に記載の核酸を含む宿主細胞。
［付記２４］
付記１～付記２３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質の有効量を、該キメラタンパク質の投与を必要とする患者に投与することを含むがんの治療方法。
［付記２５］
前記がんが、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳及び中枢神経系のがん、乳がん、腹膜がん、子宮頸部がん、絨毛癌、大腸がん、結合組織がん、消化器がん、子宮内膜がん、食道がん、眼のがん、頭頚部がん、胃がん（胃腸がんを含む）、神経膠芽腫、肝細胞癌、肝癌、上皮内新生物、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔がん（口唇、舌、口、及び咽頭）、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸がん、呼吸器がん、唾腺癌、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮又は子宮内膜のがん、泌尿器がん、外陰がん、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫並びにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレーム型マクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、並びに他のがん腫及び肉腫、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連する浮腫）、及びメグズ症候群のうちの１つ又は複数から選択される、付記２４に記載の方法。
［付記２６］
前記がんがＭｙｃタンパク質を過剰発現する、付記２４又は付記２５に記載の方法。
［付記２７］
前記方法がマクロファージによるがん細胞の貪食を誘導及び／又は促進する、付記２４～付記２６のいずれか一項に記載の方法。
［付記２８］
医薬として使用される付記１～付記２７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記２９］
がんの治療において使用される付記１～付記２８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記３０］
肝炎の治療において使用される付記１～付記２９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
［付記３１］
医薬の製造における付記１～付記３０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質の使用。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【配列表】

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