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特許7479725化合物、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤、医薬組成物、並びに治療及び／又は予防薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-26
(45)【発行日】2024-05-09
(54)【発明の名称】化合物、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤、医薬組成物、並びに治療及び／又は予防薬
(51)【国際特許分類】
C07D 213/56 20060101AFI20240430BHJP
A61K 31/4418 20060101ALI20240430BHJP
C07D 231/12 20060101ALI20240430BHJP
A61K 31/415 20060101ALI20240430BHJP
C07F 9/58 20060101ALI20240430BHJP
A61K 31/675 20060101ALI20240430BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240430BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20240430BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20240430BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240430BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240430BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240430BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240430BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240430BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240430BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240430BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240430BHJP
【ＦＩ】
C07D213/56 CSP
A61K31/4418
C07D231/12 E
A61K31/415
C07F9/58 Z
A61K31/675
A61P1/16
A61P1/18
A61P7/06
A61P9/00
A61P9/10
A61P19/10
A61P25/04
A61P25/16
A61P25/28
A61P35/00
A61P43/00 123
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2022559448
(86)(22)【出願日】2021-11-01
(86)【国際出願番号】 JP2021040218
(87)【国際公開番号】W WO2022092310
(87)【国際公開日】2022-05-05
【審査請求日】2022-12-23
(31)【優先権主張番号】P 2020183782
(32)【優先日】2020-11-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】519305627
【氏名又は名称】株式会社アークメディスン
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100152331
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 拓
(74)【代理人】
【識別番号】100168893
【弁理士】
【氏名又は名称】岩崎 正路
(72)【発明者】
【氏名】田中 圭悟
(72)【発明者】
【氏名】二宮 智尚
【審査官】伊佐地 公美
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１７－５０７１４７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１６－５１４１５４（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／１５１２４１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／０７６９７４（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｐ
Ａ６１Ｋ
Ｃ０７Ｆ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（１）：【化1】
Ａは、複素環であり、
Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ3は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表される化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項2】
Ａが、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含む、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項3】
Ａが、５又は６員環である、請求項１又は２に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項4】
Ａが、芳香族複素環である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項5】
式（１）で表される化合物が、下記式（２）又は（３）：【化2】
【化3】
で表される化合物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項6】
Ｒ1が、水素又はアルキルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項7】
Ｒ2が、水素又はアルキルである、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項8】
Ｒ3が、ハロゲンで置換されているアルキル又は非置換のアルキルである、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項9】
Ｘ1が、フッ素又は塩素である、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項10】
Ｘ2が、フッ素である、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項11】
式（１）で表される化合物が、下記化合物：【化4】
【請求項12】
下記式（１）：
【化5】
Ａは、複素環であり、
Ｒ1 は、－ＣＨ2－Ｏ－ＰＯ3Ｈ2であり、
Ｒ 2 は、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ 3 は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ 1 及びＸ 2 は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表されるプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項13】
下記式（１）：
【化6】
Ａは、複素環であって、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含み、前記窒素原子の少なくとも１つが、－ＣＨ2－Ｏ－ＰＯ3Ｈ2で置換されており、
Ｒ 1 及びＲ 2 は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ 3 は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ 1 及びＸ 2 は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表されるプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
【請求項14】
下記化合物：【化7】
【請求項15】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物若しくはその医薬上許容可能な塩又は請求項１２～１４のいずれか一項に記載のプロドラッグ若しくはその医薬上許容可能な塩を含む、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤。
【請求項16】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物若しくはその医薬上許容可能な塩又は請求項１２～１４のいずれか一項に記載のプロドラッグ若しくはその医薬上許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項17】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物若しくはその医薬上許容可能な塩又は請求項１２～１４のいずれか一項に記載のプロドラッグ若しくはその医薬上許容可能な塩を含む、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、化合物、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤、医薬組成物、並びに治療及び／又は予防薬に関する。
【背景技術】
【0002】
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２（ＡＬＤＨ２）は、アセトアルデヒド等のアルデヒド類を分解する酵素であり、様々な疾患（例えば、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛）との関係が報告されている。
【0003】
ファンコニ貧血（ＦＡ）は、遺伝性の骨髄不全疾患であり、再生不良性貧血、白血病、癌、奇形等の症状を伴うものである。骨髄において血液を作成する幹細胞では、アルデヒドを適切に分解し、損傷したゲノムを修復することが重要であるところ、ＦＡ患者ではアルデヒドによるゲノム障害を修復できず、貧血が進行すると報告されている（例えば、非特許文献１）。
【0004】
骨粗鬆症との関係において、ＡＬＤＨ２遺伝子変異モデルマウスで骨粗鬆症の症状が呈され、骨密度が低下すること、前記モデルマウスの骨芽細胞の分化形成能が著しく低下すること、及びヒトにおいてもＡＬＤＨ２遺伝子変異を有する骨芽細胞の形成能が低下すること、が報告されている（例えば、非特許文献２）。
【0005】
ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨは、代謝性疾患を背景に、肝臓に中性脂肪が蓄積することによって発症するものであり、ＡＬＤＨ２の低活性遺伝子型のヒトにおいて、ＮＡＦＬＤの発症率が高いことが報告されている（例えば、非特許文献３）。また、アルコール性肝障害及び膵炎は、過剰の飲酒によって引き起こされるものであり、エタノールが生体内で分解されて生じるアセトアルデヒドが主たる原因であると考えられている。さらに、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性肝障害、及び膵炎の病態モデルにおいて、ＡＬＤＨ２活性化化合物又はＡＬＤＨ２遺伝子導入により病態が改善されることが報告されている（例えば、非特許文献４、５及び６）。
【0006】
虚血再灌流障害は、動脈の閉塞により臓器の虚血状態が続いた後、血液供給が再開されることによって生じる組織障害である。虚血再灌流障害に対する保護のために、ＡＬＤＨ２活性化化合物が有効であることが報告されている（例えば、特許文献１）。また、末梢動脈疾患とＡＬＤＨ２との関連も示唆されている（例えば、非特許文献７）。
【0007】
アルツハイマー病やパーキンソン病は原因不明の神経変性疾患であるが、飲酒やＡＬＤＨ２遺伝子変異が病態の発症や進行に寄与することが報告されている（例えば、非特許文献８及び９）。
【0008】
食道がんの危険因子は喫煙、飲酒、及び熱い飲み物や食べ物の過剰摂取と考えられており、国際がん研究機関（ＩＡＲＣ）は２０１０年にアルコール飲料を食道扁平上皮がんの発がん物質として認定している。食道がん及び頭頚部がん患者の解析から禁酒により食道がんの進展を抑制する可能性が示唆されていることや、低活性変異型のヒトＡＬＤＨ２遺伝子をノックインしたマウスでは飲酒により食道におけるＤＮＡ障害をより強く受けることが報告されているなど、食道がんと飲酒及びＡＬＤＨ２との関連性が報告されている（例えば、非特許文献１０及び１１）。同様に頭頸部がんとＡＬＤＨ２との関連性が報告されている（例えば、非特許文献１２）。
【0009】
疼痛としては大きく、炎症性（障害受容性）、神経障害性、及び原因不明の疼痛が知られているが、マウスを用いた炎症性疼痛モデルにおいて、ＡＬＤＨ２変異型導入マウスでは痛み刺激をより感じやすく、ＡＬＤＨ２活性化化合物により解除されることが報告されている（例えば、非特許文献１３）。
【0010】
上述のように、ＡＬＤＨ２と様々な疾患との関係が報告されていることから、ＡＬＤＨ２を活性化することが各種疾患の治療及び／又は予防に有効であると期待されている。ＡＬＤＨ２の活性化作用を有する化合物としては、例えば、特許文献１～４に記載のものが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0011】
【文献】国際公開第２００８／１１２１６４号公報
【文献】国際公開第２０１４／１６０１８５号公報
【文献】国際公開第２０１５／１２７１３７号公報
【文献】国際公開第２０１９／１５１２４１号公報
【非特許文献】
【0012】
【文献】Blood (2013) 122 (18): 3206-3209
【文献】Journal of Bone and Mineral Research (2012) 27 (9): 2015-2023
【文献】Nutrition & Diabetes (2016) 6, e210
【文献】Redox Biology（2019）24: 101205
【文献】Journal of Hepatology（2015）62: 647-656
【文献】Biochemical and Biophysical Research Communications（2020）522: 518-524
【文献】Pharmacological Research (2017) 115: 96-106
【文献】Biochemical and Biophysical Research Communications（2000）273: 192-196
【文献】Neurology（2014）82: 419-426
【文献】Gastroenterology（2016）151: 860-869
【文献】Carcinogenesis（2020）41: 194-202
【文献】International Journal of Oncology (2008) 32: 945-973
【文献】Science Translational Medicine（2014）6: 251ra118
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0013】
本発明は、ＡＬＤＨ２活性化作用を有する化合物、又は前記化合物を含むＡＬＤＨ２活性化剤、医薬組成物、若しくは治療若しくは予防薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0014】
本発明者等が鋭意検討した結果、所定の構造を有する化合物がＡＬＤＨ２活性化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【0015】
本発明は以下の実施形態を含む。
［１］
下記式（１）：
［式中、
Ａは、複素環であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ３は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表される化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［２］
Ａが、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含む、［１］に記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［３］
Ａが、５又は６員環である、［１］又は［２］に記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［４］
Ａが、芳香族複素環である、［１］～［３］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［５］
式（１）で表される化合物が、下記式（２）又は（３）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は、前記のとおりである］
で表される化合物である、［１］～［４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６］
Ｒ１が、水素又はアルキルである、［１］～［５］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６－１］
Ｒ１が、水素又はメチルである、［１］～［６］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６－２］
Ｒ１が、水素である、［１］～［６－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７］
Ｒ２が、水素又はアルキルである、［１］～［６－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７－１］
Ｒ２が、水素又はメチルである、［１］～［７］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７－２］
Ｒ２が、水素である、［１］～［７－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８］
Ｒ３が、ハロゲンで置換されているアルキル又は非置換のアルキルである、［１］～［７－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８－１］
Ｒ３が、フッ素で置換されているメチル又は非置換のメチルである、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８－２］
Ｒ３が、非置換のメチルである、［１］～［８－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［９］
Ｘ１が、フッ素又は塩素である、［１］～［８－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［１０］
Ｘ２が、フッ素である、［１］～［９］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［１１］
式（１）で表される化合物が、下記化合物：
からなる群から選択される、［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［１２］
Ｒ１が、－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２である、［１］～［１１］のいずれかに記載のプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
［１３］
Ａが、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含み、前記窒素原子の少なくとも１つが、－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２で置換されている、［１］～［１１］のいずれかに記載のプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
［１４］
プロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩が、下記化合物：
からなる群から選択される、［１］～［１３］のいずれかに記載のプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
［１５］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤。
［１６］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、医薬組成物。
［１７］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防薬。
［１］
下記式（１）：
【化1】
Ａは、複素環であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ３は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表される化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［２］
Ａが、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含む、［１］に記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［３］
Ａが、５又は６員環である、［１］又は［２］に記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［４］
Ａが、芳香族複素環である、［１］～［３］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［５］
式（１）で表される化合物が、下記式（２）又は（３）：
【化2】
【化3】
で表される化合物である、［１］～［４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６］
Ｒ１が、水素又はアルキルである、［１］～［５］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６－１］
Ｒ１が、水素又はメチルである、［１］～［６］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［６－２］
Ｒ１が、水素である、［１］～［６－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７］
Ｒ２が、水素又はアルキルである、［１］～［６－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７－１］
Ｒ２が、水素又はメチルである、［１］～［７］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［７－２］
Ｒ２が、水素である、［１］～［７－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８］
Ｒ３が、ハロゲンで置換されているアルキル又は非置換のアルキルである、［１］～［７－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８－１］
Ｒ３が、フッ素で置換されているメチル又は非置換のメチルである、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［８－２］
Ｒ３が、非置換のメチルである、［１］～［８－１］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［９］
Ｘ１が、フッ素又は塩素である、［１］～［８－２］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［１０］
Ｘ２が、フッ素である、［１］～［９］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［１１］
式（１）で表される化合物が、下記化合物：
【化4】
［１２］
Ｒ１が、－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２である、［１］～［１１］のいずれかに記載のプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
［１３］
Ａが、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含み、前記窒素原子の少なくとも１つが、－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２で置換されている、［１］～［１１］のいずれかに記載のプロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩。
［１４］
プロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩が、下記化合物：
【化5】
［１５］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤。
［１６］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、医薬組成物。
［１７］
［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防薬。
【0016】
［Ａ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２を活性化する方法であって、その必要のある患者に有効量の［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを投与することを含む方法。
［Ａ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患を治療及び／又は予防する方法であって、その必要のある患者に有効量の［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを投与することを含む方法。
［Ｂ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２の活性化に使用するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［Ｂ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防に使用するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［Ｃ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２を活性化するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｃ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患を治療及び／又は予防するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｄ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤の製造における、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｄ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防薬の製造における、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２を活性化する方法であって、その必要のある患者に有効量の［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを投与することを含む方法。
［Ａ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患を治療及び／又は予防する方法であって、その必要のある患者に有効量の［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを投与することを含む方法。
［Ｂ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２の活性化に使用するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［Ｂ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防に使用するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグ。
［Ｃ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２を活性化するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｃ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患を治療及び／又は予防するための、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｄ１］
アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤の製造における、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
［Ｄ２］
ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛からなる群から選択される疾患の治療及び／又は予防薬の製造における、［１］～［１４］のいずれかに記載の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグの使用。
【発明の効果】
【0017】
本発明によれば、ＡＬＤＨ２活性化作用を有する化合物、又は前記化合物を含むＡＬＤＨ２活性化剤、医薬組成物、若しくは治療若しくは予防薬を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、本発明の実施形態について具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で様々な変形が可能である。
【0019】
＜化合物＞
本発明の一実施形態は、下記式（１）：
［式中、
Ａは、複素環であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ３は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表される化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに関する。
本発明の一実施形態は、下記式（１）：
【化6】
Ａは、複素環であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ３は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、ハロゲンである］
で表される化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに関する。
【0020】
式（１）において、Ａは、環員原子として少なくとも１つの窒素原子を含むことが好ましい。Ａは、５又は６員環であることが好ましい。Ａは、芳香族複素環であることが好ましい。特に限定するものではないが、Ａは、ピリジン環又はピラゾール環であることが好ましい。
【0021】
式（１）において、Ｒ１～Ｒ３のアルキル、アルケニル、及びアルキニルは、直鎖状であってもよいし、分岐状であってもよい。Ｒ１～Ｒ３のアルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換基で置換されていてもよいし、非置換であってもよい。前記置換基としては、例えば、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素）を挙げることができる。置換基を有する場合、置換基の数としては、例えば、１個、２個又は３個を挙げることができる。
【0022】
式（１）において、Ｒ１～Ｒ３のアルキルは、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキルであることが好ましく、炭素数１～３のアルキルであることがより好ましく、メチルであることが更に好ましい。Ｒ１～Ｒ３のアルケニルは、それぞれ独立して、炭素数２～６のアルケニルであることが好ましく、炭素数２～４のアルケニルであることがより好ましい。Ｒ１～Ｒ３のアルキニルは、それぞれ独立して、炭素数２～６のアルキニルであることが好ましく、炭素数２～４のアルキニルであることがより好ましい。
【0023】
式（１）において、Ｒ１は、ＡＬＤＨ２活性及び代謝安定性の観点から、水素又はアルキルであることが好ましく、水素又はメチルであることがより好ましく、水素であることが更に好ましい。
【0024】
式（１）において、Ｒ２は、ＡＬＤＨ２活性及び代謝安定性の観点から、水素又はアルキルであることが好ましく、水素又はメチルであることがより好ましく、水素であることが更に好ましい。
【0025】
式（１）において、Ｒ３は、代謝安定性の観点から、ハロゲンで置換されているアルキル又は非置換のアルキルであることが好ましく、フッ素で置換されているメチル又は非置換のメチルであることがより好ましく、非置換のメチルであることが更に好ましい。
【0026】
式（１）において、Ｘ１は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素であることが好ましく、フッ素又は塩素であることがより好ましく、フッ素であることが更に好ましい。
【0027】
式（１）において、Ｘ２は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素であることが好ましく、フッ素又は塩素であることがより好ましく、フッ素であることが更に好ましい。
【0028】
式（１）で表される化合物は、特に限定するものではないが、下記式（２）又は（３）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は、前記のとおりである］
で表される化合物であることが好ましい。
【化7】
【化8】
で表される化合物であることが好ましい。
【0029】
式（１）で表される化合物は、特に限定するものではないが、下記の化合物であることが好ましい。
【化9】
【0030】
上記の化合物のプロドラッグとしては、例えば、リン酸化プロドラッグ、より具体的には、Ｒ１が－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２であるもの、及びＡの環員原子である窒素原子の少なくとも１つが－ＣＨ２－Ｏ－ＰＯ３Ｈ２で置換されているものを挙げることができる。
【0031】
プロドラッグ又はその医薬上許容可能な塩は、特に限定するものではないが、下記の化合物であることが好ましい。
【化10】
【0032】
上記の化合物又はプロドラッグの医薬上許容可能な塩は、医薬として使用可能なものであれば特に限定されないが、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩等の無機酸塩；フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、パルミチン酸塩等の有機酸塩；アルカリ金属塩；及びアルカリ土類金属塩を挙げることができる。
【0033】
上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグは、水和物等の溶媒和物を形成していてもよい。本明細書において、溶媒和物は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに包含されるものとする。
【0034】
上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに立体異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー）が存在する場合、個々の立体異性体及びこれらの混合物（例えば、ラセミ体）は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに包含されるものとする。
【0035】
＜アルデヒドデヒドロゲナーゼ２活性化剤＞
本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、ＡＬＤＨ２活性化剤に関する。本実施形態のＡＬＤＨ２活性化剤は、ＡＬＤＨ２活性化作用に優れているだけでなく、更に優れた性質（例えば、優れた代謝安定性、反応性代謝物の生成抑制、ｈＥＲＧの阻害回避）を有している。
本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、ＡＬＤＨ２活性化剤に関する。本実施形態のＡＬＤＨ２活性化剤は、ＡＬＤＨ２活性化作用に優れているだけでなく、更に優れた性質（例えば、優れた代謝安定性、反応性代謝物の生成抑制、ｈＥＲＧの阻害回避）を有している。
【0036】
本実施形態のＡＬＤＨ２活性化剤を使用することにより、ＡＬＤＨ２が関連する疾患を治療及び／又は予防することができる。
【0037】
＜医薬組成物並びに治療及び／又は予防薬＞
本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、医薬組成物に関する。また、本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、治療及び／又は予防薬に関する。
本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、医薬組成物に関する。また、本発明の一実施形態は、上記の化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグを含む、治療及び／又は予防薬に関する。
【0038】
本実施形態の医薬組成物並びに治療及び／又は予防薬が対象とする疾患としては、例えば、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛等が挙げられる。
【0039】
本実施形態の医薬組成物並びに治療及び／又は予防薬は、経口的又は非経口的に投与することができる。経口投与用の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、及び懸濁剤が挙げられる。非経口投与用の剤形としては、例えば、注射剤、注入剤、点滴剤、点眼剤及び坐剤が挙げられる。
【0040】
本実施形態の医薬組成物並びに治療及び／又は予防薬は、必要に応じて、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、甘味剤、界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤、着色剤、保存剤、芳香剤、矯味剤、安定剤、粘稠剤等を含んでいてもよい。
【0041】
本実施形態の医薬組成物並びに治療及び／又は予防薬の投与量（有効成分基準）は、患者の状態や体重、化合物の種類、疾患の種類、投与経路等によって異なるが、適切な量を医師が決定することができる。一例として、ファンコニ貧血、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝障害、膵炎、虚血再灌流障害、末梢動脈疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、食道がん、頭頸部がん、及び疼痛等を治療する場合、成人（体重約６０ｋｇ）に対して、経口投与の場合には１～２０００（ｍｇ）、非経口投与の場合には０．０１～２００（ｍｇ）投与してもよい。
【0042】
＜化合物の製造方法＞
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩は、公知の方法を適宜利用して合成することができる。合成方法の一例として、下記のスキームＡを挙げることができる。
［Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は上記のとおりであり、ＸＡ及びＸＢはそれぞれ独立してハロゲンである。］
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩は、公知の方法を適宜利用して合成することができる。合成方法の一例として、下記のスキームＡを挙げることができる。
【化11】
【0043】
工程Ａ１では、化合物（Ａ１）をヨードメタンを用いてエステル化し、化合物（Ａ２）を得る。
工程Ａ２では、化合物（Ａ２）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）と反応させて、化合物（Ａ３）を得る。
工程Ａ３では、化合物（Ａ３）を強塩基（例えば、水素化ナトリウム）と反応させた後、Ｒ３を与えるハロゲン化物（例えば、ヨードメタン）と反応させて、化合物（Ａ４）を得る。
工程Ａ４では、化合物（Ａ４）をシアノ化剤（例えば、シアン化亜鉛）を用いてシアノ化し、化合物（Ａ５）を得る。
工程Ａ５では、化合物（Ａ５）を還元剤（例えば、ボランジメチルスルフィド錯体）と反応させて、化合物（Ａ６）を得る。
工程Ａ２では、化合物（Ａ２）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）と反応させて、化合物（Ａ３）を得る。
工程Ａ３では、化合物（Ａ３）を強塩基（例えば、水素化ナトリウム）と反応させた後、Ｒ３を与えるハロゲン化物（例えば、ヨードメタン）と反応させて、化合物（Ａ４）を得る。
工程Ａ４では、化合物（Ａ４）をシアノ化剤（例えば、シアン化亜鉛）を用いてシアノ化し、化合物（Ａ５）を得る。
工程Ａ５では、化合物（Ａ５）を還元剤（例えば、ボランジメチルスルフィド錯体）と反応させて、化合物（Ａ６）を得る。
【0044】
工程Ａ６では、化合物（Ａ６）を化合物（Ａ７）と反応させて、化合物（Ａ８）を得る。
工程Ａ７では、化合物（Ａ８）をビス（ピナコラート）ジボロンと反応させて、化合物（Ａ９）を得る。
工程Ａ８では、化合物（Ａ９）を２－ハロゲン化ピリジン３－カルバルデヒドと反応させて、化合物（Ａ１０）を得る。
工程Ａ９では、化合物（Ａ１０）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）又はＲ２を与えるグリニャール試薬と反応させて、化合物（Ａ１１）を得る。
工程Ａ７では、化合物（Ａ８）をビス（ピナコラート）ジボロンと反応させて、化合物（Ａ９）を得る。
工程Ａ８では、化合物（Ａ９）を２－ハロゲン化ピリジン３－カルバルデヒドと反応させて、化合物（Ａ１０）を得る。
工程Ａ９では、化合物（Ａ１０）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）又はＲ２を与えるグリニャール試薬と反応させて、化合物（Ａ１１）を得る。
【0045】
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩の別の合成方法として、下記のスキームＢを挙げることもできる。
［Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は上記のとおりであり、ＸＣはハロゲンである。］
【化12】
［Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は上記のとおりであり、ＸＣはハロゲンである。］
【0046】
工程Ｂ１では、化合物（Ｂ１）を化合物（Ｂ２）と反応させて、化合物（Ｂ３）を得る。
工程Ｂ２では、化合物（Ｂ３）を化合物（Ａ６）と反応させて、化合物（Ｂ４）を得る。
工程Ｂ３では、化合物（Ｂ４）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）と反応させて、化合物（Ｂ５）を得る。
工程Ｂ２では、化合物（Ｂ３）を化合物（Ａ６）と反応させて、化合物（Ｂ４）を得る。
工程Ｂ３では、化合物（Ｂ４）を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）と反応させて、化合物（Ｂ５）を得る。
【0047】
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩の別の合成方法として、下記のスキームＣを挙げることもできる。
［Ｒ１～Ｒ３、Ｘ１及びＸ２は上記のとおりであり、ＸＤはハロゲンである。］
【化13】
【0048】
工程Ｃ１では、化合物（Ｃ１）を化合物（Ａ９）と反応させて、化合物（Ｃ２）を得る。
【0049】
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩の合成方法は、上記スキームＡ～Ｃに限定されるものではなく、最終化合物の構造に応じて、適切な合成ルート及び反応条件を当業者が適宜設定することができる。例えば、最終化合物がピリジン環以外の複素環（例えばピラゾール環）を有する場合、スキームＣにおける化合物（Ｃ１）の代わりに、対応する複素環を有する化合物を使用すればよい。
【0050】
上記の化合物又はその医薬上許容可能な塩のプロドラッグは、例えばリン酸基を公知の方法で導入して合成すればよい。
【0051】
式（１）で表される化合物、その医薬上許容可能な塩又はそれらのプロドラッグに立体異性体が存在する場合、各異性体を公知の方法で分割することができる。公知の方法としては、例えば、クロマトグラフィー法、酵素法、及び結晶化法を挙げることができる。
【実施例】
【0052】
以下、実施例及び比較例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれに限定されるものではない。
【0053】
［製造例１－１］
メチル ４－ブロモ－２－フルオロベンゾエート
４－ブロモ－２－フルオロベンゾイック アシド（３０ｇ、０．１４ｍｏｌ)、炭酸カリウム（３８ｇ、０．２７ｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３００ｍＬ）の混合物に、室温でヨードメタン（１６ｍＬ、０．２７ｍｏｌ）を加え、同温で１６時間攪拌した。反応混合物に水（２００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３００ｍL）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去し、標記化合物（３０ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.94 (3H, s), 7.81 (1H, s, J=16Hz), 7.32 (2H, m).
メチル ４－ブロモ－２－フルオロベンゾエート
【化14】
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.94 (3H, s), 7.81 (1H, s, J=16Hz), 7.32 (2H, m).
【0054】
［製造例１－２］
（４－ブロモ－２－フルオロフェニル）メタノール
製造例１－１で得たメチル ４－ブロモ－２－フルオロベンゾエート（３０ｇ、０．１３ｍｏｌ）とメタノール（３００ｍＬ）の混合物に、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（０．３８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加え、６０℃で１６時間攪拌した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を加え、反応混合物中のメタノールを減圧下留去した。反応混合物に水（２５０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（２００ｍL、２回）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去し、標記化合物（２５ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (CDCl3) ?(ppm): 4.72 (2H, s), 7.25 (1H, m), 7.34 (2H, m).
（４－ブロモ－２－フルオロフェニル）メタノール
【化15】
1H-NMR Spectrum (CDCl3) ?(ppm): 4.72 (2H, s), 7.25 (1H, m), 7.34 (2H, m).
【0055】
［製造例１－３］
４－ブロモ－２－フルオロ－１－（メトキシメチル）ベンゼン
６０％水素化ナトリウム（７．３ｇ、０．１８ｍｏｌ）とＤＭＦ（１５０ｍＬ）の混合物に、製造例１－２で得た（４－ブロモ－２－フルオロフェニル）メタノール（２５ｇ、０．１２ｍｏｌ）とＤＭＦ（５０ｍＬ）の混合物を０℃で２０分間かけて加えた。反応混合物に室温でヨードメタン（１５ｍＬ、０．２４ｍｏｌ）を加え、同温で１６時間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、氷冷水（５００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２５０ｍＬ、次いで１５０ｍＬ）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去し、標記化合物（２０ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.40 (3H, s), 4.47 (2H, s), 7.23 (1H, m), 7.28 (2H, m).
４－ブロモ－２－フルオロ－１－（メトキシメチル）ベンゼン
【化16】
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.40 (3H, s), 4.47 (2H, s), 7.23 (1H, m), 7.28 (2H, m).
【0056】
［製造例１－４］
３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンゾニトリル
製造例１－３で得た４－ブロモ－２－フルオロ－１－（メトキシメチル）ベンゼン（２０ｇ、９１ｍｍｏｌ）、ジンク ダスト（０．２９ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（１６ｇ、０．１４ｍｏｌ）、及びＤＭＦ（２５０ｍＬ）の混合物を、アルゴンガスを用いて脱気置換した。反応混合物に、同温でトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（０）（４．２ｇ、４．６ｍｍｏｌ）及び１、１’－ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン（５．１ｇ、９．１ｍｍｏｌ）を加え、再度アルゴンガスを用いて脱気置換した。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した。反応混合物に水（５００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５００ｍＬ、次いで２００ｍＬ）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５～２０％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（１０ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.45 (3H, s), 4.56 (2H, s), 7.35 (1H, d, J=9.2Hz), 7.48 (1H, d, J=8Hz), 7.58 (1H, t, J=14Hz).
３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンゾニトリル
【化17】
1H-NMR Spectrum (CDCl3) δ(ppm): 3.45 (3H, s), 4.56 (2H, s), 7.35 (1H, d, J=9.2Hz), 7.48 (1H, d, J=8Hz), 7.58 (1H, t, J=14Hz).
【0057】
［製造例１－５］
（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン 塩酸塩
製造例１－４で得た３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンゾニトリル（１０ｇ、６１ｍｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）の混合物に、０℃で２０分間かけてボラン－ジメチルスルフィド コンプレックス（１８ｍＬ、０．２４ｍｏｌ）を滴下し、８０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、同温でメタノール（２５～３０ｍＬ）を加え、減圧下溶媒留去した。残渣にジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、塩の形成に十分な量の４Ｍ塩酸－１，４－ジオキサン溶液を加え、室温で３０分間攪拌した。減圧下溶媒留去し、残渣をジエチルエーテルで洗い、標記化合物（５．０ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.37 (3H, s), 4.00 (2H, s), 4.54 (2H, s), 7.31 (1H, d, J=7.6Hz), 7.39 (1H, d, J=11Hz), 7.46 (1H, t, J=7.6Hz), 8.19 (3H, s).
（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン 塩酸塩
【化18】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.37 (3H, s), 4.00 (2H, s), 4.54 (2H, s), 7.31 (1H, d, J=7.6Hz), 7.39 (1H, d, J=11Hz), 7.46 (1H, t, J=7.6Hz), 8.19 (3H, s).
【0058】
［製造例１－６］
５－ブロモ－２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド
５－ブロモ－２－フルオロベンゾイック アシド（５．０ｇ、２３ｍｍｏｌ）、製造例１－５で得た（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン 塩酸塩（５．６ｇ、２７ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（５０ｍＬ）の混合物に、０℃でジイソプロピルエチルアミン（１３ｍＬ、４６ｍｍｏｌ）とプロパンホスホニック アシッド 無水物（１５ｍＬ、４６ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応混合物に水（２００ｍＬ）を加え、３０分間攪拌した。生成した固体をろ取し、水（１００ｍＬ、２回）で洗浄した。固体を減圧下で乾燥させ、標記化合物（５．２ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 4.46 (4H, m), 7.16 (2H, m), 7.40 (2H, m), 7.78 (2H, m), 9.03 (1H, m)
５－ブロモ－２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド
【化19】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 4.46 (4H, m), 7.16 (2H, m), 7.40 (2H, m), 7.78 (2H, m), 9.03 (1H, m)
【0059】
［製造例１－７］
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド
製造例１－６で得た５－ブロモ－２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド（４．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３．５ｇ、９．１ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（５０ｍＬ）の混合物を、アルゴンガスを用いて脱気置換した。反応混合物に、同温でジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（０．１６ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、再度アルゴンガスを用いて脱気置換した。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した。反応混合物に水（１００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ、２回）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５～２０％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（４ｇ）を粗体として得た。これ以上の精製をすることなく次の反応に用いた。
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド
【化20】
【0060】
［製造例１－８］
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－ホルミルピリジン－２－イル）ベンズアミド
製造例１－７で得た２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド（２．０ｇ）、２－ブロモピリジン ３－カルバルデヒド（０．９８ｇ、４．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．３ｇ、９．５ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）、及び水（２ｍＬ）の混合物を、窒素ガスを用いて脱気置換した。反応混合物に、同温でジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（０．３９ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下で１１０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を室温とし、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、セライトを用いてろ過した。セライトを酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧下溶媒留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５～２０％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（１．１ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 4.42 (2H, s), 4.50 (2H, s), 7.18 (2H, m), 7.40 (1H, t, J=15.4Hz), 7.51 (1H, t, J=18Hz), 7.66 (1H, m), 7.83 (1H, m), 7.91 (1H, m), 8.30 (1H, d, J=7.5Hz), 8.92 (1H, m), 9.06 (1H, bs), 9.98 (1H, s).
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－ホルミルピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化21】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 4.42 (2H, s), 4.50 (2H, s), 7.18 (2H, m), 7.40 (1H, t, J=15.4Hz), 7.51 (1H, t, J=18Hz), 7.66 (1H, m), 7.83 (1H, m), 7.91 (1H, m), 8.30 (1H, d, J=7.5Hz), 8.92 (1H, m), 9.06 (1H, bs), 9.98 (1H, s).
【0061】
［実施例１］
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
製造例１－８で得た２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－ホルミルピリジン－２－イル）ベンズアミド（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）とメタノール（１０ｍL）の混合物に０℃で水素化ホウ素ナトリウム（０．３８ｇ、１０ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、室温で１６時間攪拌した。反応混合物に水を加え、ジクロロメタン（２５ｍＬ、次いで１５ｍＬ）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去し、標記化合物（０．９０ｇ）を得た。
ESI-MS: m/z 399.50 [M+1]+
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化22】
ESI-MS: m/z 399.50 [M+1]+
【0062】
［実施例２］
ラセミック ２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
製造例１－８に記載の２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－ホルミルピリジン－２－イル）ベンズアミド（１．３ｇ、３．７ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１５ｍｌ）の混合物に、０℃でメチルマグネシウムブロミド（３Ｍ ｉｎ ｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ、２．７ｍＬ、９．２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１時間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、同温で飽和塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）を加えた。反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ、次いで１５ｍＬ）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（７０％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（０．２３ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 1.23 (3H, d, J=6.4Hz), 3.28 (3H, s), 4.42 (2H, s), 4.48 (2H, d, J=6Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 5.30 (1H, d, J=4Hz), 7.13-7.18 (2H, m), 7.36-7.46 (3H, m), 7.64-7.67 (1H, m), 7.72-7.75 (1H, m), 8.03-8.04 (1H, d, J=6.4Hz), 8.52-8.54 (1H, m), 9.03 (1H, t, J=6Hz).
ラセミック ２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化23】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 1.23 (3H, d, J=6.4Hz), 3.28 (3H, s), 4.42 (2H, s), 4.48 (2H, d, J=6Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 5.30 (1H, d, J=4Hz), 7.13-7.18 (2H, m), 7.36-7.46 (3H, m), 7.64-7.67 (1H, m), 7.72-7.75 (1H, m), 8.03-8.04 (1H, d, J=6.4Hz), 8.52-8.54 (1H, m), 9.03 (1H, t, J=6Hz).
【0063】
［実施例３及び４］
キラル ２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
実施例２で得たラセミック ２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（０．８０ｇ）を超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を用いて鏡像異性体を分離した（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ－ＩＧ、０．２％トリエチルアミン含有の２０％メタノール－二酸化炭素）。早く溶出される鏡像異性体（０．２６ｇ、実施例３）と遅く溶出される鏡像異性体（０．３２ｇ、実施例４）を得た。
キラル ２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化24】
【0064】
［製造例５－１］
４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンゾニトリル
４－（ヒドロキシメチル）－３－フルオロベンゾニトリル（１．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（５ｍＬ）の混合物に、室温で２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５３ｇ、１３ｍｍｏｌ）と（ブロモジフルオロメチル）トリメチルシラン（１．６ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）を順次加え、同温で４８時間攪拌した。反応混合物に水を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ、２回）で抽出した。有機層を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（０．２５ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 5.05 (2H, s), 6.82 (1H, t, J=75Hz), 7.69-7.76 (2H, m), 7.91 (1H, d, J=9.2Hz).
４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンゾニトリル
【化25】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 5.05 (2H, s), 6.82 (1H, t, J=75Hz), 7.69-7.76 (2H, m), 7.91 (1H, d, J=9.2Hz).
【0065】
［製造例５－２］
（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロフェニル）メタンアミン
製造例５－１で得た４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンゾニトリル（０．３０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）とメタノール（５ｍＬ）の混合物に０℃でニッケル（ＩＩ）クロライド ヘキサハイドレート（３９ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）と水素化ホウ素ナトリウム（０．１７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、同温で１時間攪拌した。反応混合物に氷水を加え、ジクロロメタン（２５ｍL、２回）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を飽和食塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８％メタノール－ジクロロメタン溶液）により精製し、標記化合物（２００ｍｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.72 (2H, s), 4.91 (2H, s), 6.77 (1H, t, J= 75Hz), 7.15-7.23 (2H, m), 7.37-7.41 (1H, m).
（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロフェニル）メタンアミン
【化26】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.72 (2H, s), 4.91 (2H, s), 6.77 (1H, t, J= 75Hz), 7.15-7.23 (2H, m), 7.37-7.41 (1H, m).
【0066】
［製造例５－３］
５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－２－フルオロベンゾイック アシド
３－カルボキシ－４－フルオロフェニルボロニック アシド（３．０ｇ、１６ｍｍｏｌ）、３－アセチル－２－ブロモピリジン（３．３ｇ、１６ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）、及び水（１０ｍＬ）の混合物に、炭酸カリウム（４．５ｇ、３３ｍｍｏｌ）を室温で加え、窒素ガスを用いて脱気置換した。反応混合物に、同温でジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム ジクロロメタンコンプレックス（０．６７ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で１６時間攪拌した。反応混合物を室温とし、減圧下溶媒留去した。残渣にジクロロメタン（７５ｍＬ）を加え、ろ過し、残渣をジクロロメタン（７５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧下溶媒留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０％～１２％メタノール－ジクロロメタン溶液）により精製し、標記化合物（２．１ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 2.37 (3H, s), 7.28-7.31 (1H, m),7.37-7.42 (1H, m), 7.70-7.72 (1H, m), 7.98-8.00 (1H, m), 8.10-8.12 (1H, m), 8.76-8.77 (1H, m), 13.34 (1H, bs).
５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－２－フルオロベンゾイック アシド
【化27】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 2.37 (3H, s), 7.28-7.31 (1H, m),7.37-7.42 (1H, m), 7.70-7.72 (1H, m), 7.98-8.00 (1H, m), 8.10-8.12 (1H, m), 8.76-8.77 (1H, m), 13.34 (1H, bs).
【0067】
［製造例５－４］
５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－Ｎ－（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンジル）－２－フルオロベンズアミド
製造例５－３で得た５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－２－フルオロベンゾイック アシド（０．１０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（３ｍＬ）の混合物に、窒素雰囲気下、０℃でジイソプロピルエチルアミン（０．２１ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）とプロパンホスホニック アシッド 無水物（５０％酢酸エチル溶液）（０．２４ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を順次加え、同温で１５分間攪拌した。反応混合物に、同温で製造例５－２で得た（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロフェニル）メタンアミン（７９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ、２回）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を飽和食塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下溶媒留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５５％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（６０ｍｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 2.38 (3H, s), 4.02 (2H, d, J=5.6Hz), 4.93 (2H, s), 6.71 (1H, t, J=74Hz), 7.18-7.21 (1H, m), 7.44-7.79 (4H, m), 7.78-7.79 (1H, m), 8.11 (1H, d, J=7.6Hz), 8.76-8.77 (1H, m), 9.05-9.06 (1H, m).
５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－Ｎ－（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンジル）－２－フルオロベンズアミド
【化28】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 2.38 (3H, s), 4.02 (2H, d, J=5.6Hz), 4.93 (2H, s), 6.71 (1H, t, J=74Hz), 7.18-7.21 (1H, m), 7.44-7.79 (4H, m), 7.78-7.79 (1H, m), 8.11 (1H, d, J=7.6Hz), 8.76-8.77 (1H, m), 9.05-9.06 (1H, m).
【0068】
［実施例５］
Ｎ－（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンジル）－２－フルオロ－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
製造例５－4で得た５－（３－アセチルピリジン－２－イル）－Ｎ－（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンジル）－２－フルオロベンズアミド（０．１５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とメタノール（３ｍＬ）の混合物に０℃で水素化ホウ素ナトリウム（２６ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、室温で６時間攪拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチル（３０ｍL、２回）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を飽和食塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５５％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（３０ｍｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 1.27 (3H, d, J=6.4Hz), 4.49 (2H, d, J=5.6Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 4.93 (2H, s), 5.30 (1H, J=4Hz), 6.78 (1H, t, J=75Hz), 7.18-7.21 (2H, m), 7.39-7.47 (3H, m), 7.64-7.68 (1H, m), 7.73-7.75 (1H, m), 8.03 (1H, d, J=8Hz), 8.53 (1H, d, J=4.8Hz), 9.05 (1H, t, J=5.6Hz).
Ｎ－（４－（（ジフルオロメトキシ）メチル）－３－フルオロベンジル）－２－フルオロ－５－（３－（１－ヒドロキシエチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化29】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 1.27 (3H, d, J=6.4Hz), 4.49 (2H, d, J=5.6Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 4.93 (2H, s), 5.30 (1H, J=4Hz), 6.78 (1H, t, J=75Hz), 7.18-7.21 (2H, m), 7.39-7.47 (3H, m), 7.64-7.68 (1H, m), 7.73-7.75 (1H, m), 8.03 (1H, d, J=8Hz), 8.53 (1H, d, J=4.8Hz), 9.05 (1H, t, J=5.6Hz).
【0069】
［製造例６－１］
２－ブロモ－３－（メトキシメチル）ピリジン
６０％水素化ナトリウム（０．０５７ｇ、２．４ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（３ｍＬ）の混合物に、（２－ブロモピリジン－３－イル）メタノール（０．３０ｇ、１．６ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（３ｍＬ）の混合物を０℃で加えた。反応混合物に室温でヨードメタン（０．１５ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、同温で１６時間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、氷冷水を加え、酢酸エチル（１５ｍＬ、次いで５ｍＬ）で抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去し、標記化合物（０．１５ｇ）を粗体として得た。これ以上の精製をすることなく、次の反応に用いた。
２－ブロモ－３－（メトキシメチル）ピリジン
【化30】
【0070】
［実施例６］
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（メトキシメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
製造例６－１で得た２－ブロモ－３－（メトキシメチル）ピリジン（４９ｍｇ）、製造例１－７で得た２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド（０．１０ｇ）、炭酸ナトリウム（０．０５０ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３ｍＬ）、及び水（０．５ｍＬ）の混合物を、アルゴンガスを用いて脱気置換した。反応混合物に、同温でジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム ジクロロメタンコンプレックス（８．０ｍｇ、０．００９８ｍｍｏｌ）を加え、再度アルゴンガスを用いて脱気置換し、反応混合物を８０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を室温とし、水（５ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ、次いで５ｍＬ）を用いて抽出した。２つの有機層を合わせて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル－ｎ－ヘキサン溶液）により精製し、標記化合物（０．０８０ｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 3.29 (3H, s), 4.36 (2H, s), 4.42 (2H, s), 4.48 (2H, d, J=6Hz), 7.13-7.18 (2H, m), 7.36-7.45 (3H, m), 7.75-7.79 (1H, m), 7.87-7.89 (1H, m), 7.91-7.93 (1H, m), 8.61-8.63 (1H, m), 9.01 (1H, t, J=11Hz).
２－フルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（３－（メトキシメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド
【化31】
1H-NMR Spectrum (DMSO-d6) δ(ppm): 3.28 (3H, s), 3.29 (3H, s), 4.36 (2H, s), 4.42 (2H, s), 4.48 (2H, d, J=6Hz), 7.13-7.18 (2H, m), 7.36-7.45 (3H, m), 7.75-7.79 (1H, m), 7.87-7.89 (1H, m), 7.91-7.93 (1H, m), 8.61-8.63 (1H, m), 9.01 (1H, t, J=11Hz).
【0071】
［製造例７－１］
（５－ヨード－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）メタノール
５－ヨード－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル（４．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（４ｍＬ）の混合物に０℃でボラン－ＴＨＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ溶液、３０ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物に同温でメタノール（２０ｍＬ）を滴下し、３０分間攪拌した。反応混合物を減圧下溶媒留去した。残渣を高速液体クロマトグラフィーにより精製し、標記化合物（１．５ｇ）を得た。
ESI-MS: m/z 224.9 [M+1]+
（５－ヨード－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）メタノール
【化32】
ESI-MS: m/z 224.9 [M+1]+
【0072】
［製造例７－２］
（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン
製造例１－４に記載の３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンゾニトリル（８．０ｇ、４８ｍｍｏｌ）とメタノール（５０ｍＬ）の混合物に、ラネーニッケル（２０ｇ）を加え、水素雰囲気下で室温で終夜攪拌した。反応混合物を窒素により脱気置換し、セライトを用いてろ過した。ろ液を減圧下溶媒留去し、標記化合物（７．５ｇ）を粗体として得た。粗体としてそのまま次の反応に用いた。
（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン
【化33】
【0073】
［製造例７－３］
５－ブロモ－２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド
５－ブロモ－２－クロロベンゾイック アシド（１．９ｇ、８．１ｍｍｏｌ）と塩化チオニル（１５ｍＬ）の混合物を１．５時間加熱還流した。反応混合物を室温とし、減圧下溶媒留去した。残渣とジクロロメタン（３０ｍＬ）の混合物に、製造例７－２で得た粗体の（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）フェニル）メタナミン（１．４ｇ）、トリエチルアミン（１．２ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１５ｍＬ）の混合物を０℃で滴下した。反応混合物を室温で終夜攪拌した。反応混合物に室温で水を加え、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬで３回）。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１）により精製し、標記化合物（１．１ｇ）を得た。
ESI-MS: m/z 386.0 [M+1]+
５－ブロモ－２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド
【化34】
ESI-MS: m/z 386.0 [M+1]+
【0074】
［製造例７－４］
２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド
製造例７－３で得た５－ブロモ－２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）ベンズアミド（１．１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（０．８７ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）の混合物に酢酸カリウム（０．８４ｇ、８．５ｍｍｏｌ）と（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（０．２１ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を９５℃で３時間攪拌した。反応混合物を室温とし、反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬで３回）。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下溶媒留去し、標記化合物（０．８０ｇ）を得た。
ESI-MS: m/z 434.1 [M+1]+
２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド
【化35】
ESI-MS: m/z 434.1 [M+1]+
【0075】
［実施例７］
２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４－（ヒドロキシメチル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ベンズアミド
製造例７－４で得た２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンズアミド（０．４０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、製造例７－１で得た（５－ヨード－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）メタノール（３１０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ｎ－プロパノール（９ｍＬ）、及び水（６ｍＬ）の混合物に、炭酸ナトリウム（７５０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）と［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（７０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を室温で加え、９５℃で終夜攪拌した。反応混合物を室温とし、減圧下溶媒留去した。残渣を高速液体クロマトグラフィーにより精製し、標記化合物（５７ｍｇ）を得た。
1H-NMR Spectrum (CD3OD) δ (ppm): 3.40 (3H, s), 4.53 (2H, s), 4.61 (4H, d, J=9.0 Hz), 7.20 (1H, d, J=10.9 Hz), 7.26 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.43 (1H, t, J=7.6 Hz), 7.58 (1H, s), 7.70-7.99 (3H, m).
２－クロロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－（メトキシメチル）ベンジル）－５－（４－（ヒドロキシメチル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ベンズアミド
【化36】
1H-NMR Spectrum (CD3OD) δ (ppm): 3.40 (3H, s), 4.53 (2H, s), 4.61 (4H, d, J=9.0 Hz), 7.20 (1H, d, J=10.9 Hz), 7.26 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.43 (1H, t, J=7.6 Hz), 7.58 (1H, s), 7.70-7.99 (3H, m).
【0076】
［比較例１］
市販品である下記化合物を比較例１として使用した。なお、下記化合物は、国際公開第２００８／１１２１６４号公報に記載の化合物である。
市販品である下記化合物を比較例１として使用した。なお、下記化合物は、国際公開第２００８／１１２１６４号公報に記載の化合物である。
【化37】
【0077】
［比較例２］
国際公開第２０１５／１２７１３７号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例２として使用した。
国際公開第２０１５／１２７１３７号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例２として使用した。
【化38】
【0078】
［比較例３］
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例３として使用した。
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例３として使用した。
【化39】
【0079】
［比較例４］
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例４として使用した。
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例４として使用した。
【化40】
【0080】
［比較例５］
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例５として使用した。
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例５として使用した。
【化41】
【0081】
［比較例６］
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例６として使用した。
国際公開第２０１９／１５１２４１号公報に記載の方法に従って下記化合物を合成し、比較例６として使用した。
【化42】
【0082】
［試験例１：ＡＬＤＨ２活性化作用］
ＡＬＤＨ２によるアセトアルデヒドの酸化速度に対する試験化合物の活性化作用を、以下の方法により測定した。市販のＰｉｃｏＰｒｏｂｅＴＭ Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ Ｉｎｃ．製）を用い、商品の取扱説明書を参考にして以下の条件にて試験を実施した。３８４－ウェルプレートの各ウェルに、以下（１）から（３）を順次ピペットにより添加した。
ＡＬＤＨ２によるアセトアルデヒドの酸化速度に対する試験化合物の活性化作用を、以下の方法により測定した。市販のＰｉｃｏＰｒｏｂｅＴＭ Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ Ｉｎｃ．製）を用い、商品の取扱説明書を参考にして以下の条件にて試験を実施した。３８４－ウェルプレートの各ウェルに、以下（１）から（３）を順次ピペットにより添加した。
【0083】
（１）ヒトリコンビナントＡＬＤＨ２酵素（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ Ｉｎｃ．製）を３μｇ／ｍＬになるようにＡＬＤＨ ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒにて溶解、希釈した溶液１０μＬ。
（２）ＡＬＤＨ ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒを用いて調製した３０μＭ又は９０μＭの試験化合物溶液１０μＬ（３％ＤＭＳＯを含む）。
（３）ＡＬＤＨ ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ ８．６μＬ、ＰｉｃｏＰｒｏｂｅ ０．６μＬ、Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｍｉｘ ０．３μＬ、及びＡｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ １．５μＬの比率で構成されるＲｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘ１０μＬ。
（２）ＡＬＤＨ ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒを用いて調製した３０μＭ又は９０μＭの試験化合物溶液１０μＬ（３％ＤＭＳＯを含む）。
（３）ＡＬＤＨ ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ ８．６μＬ、ＰｉｃｏＰｒｏｂｅ ０．６μＬ、Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｍｉｘ ０．３μＬ、及びＡｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ １．５μＬの比率で構成されるＲｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘ１０μＬ。
【0084】
上記（３）の添加の前に、５分間室温でインキュベーションした。また、（３）を添加後にＥｎＳｉｇｈｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．製）を用いて、室温で１８０分間、蛍光強度を２．５分毎に測定した。蛍光強度は、ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎが５３５ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎが５８７ｎｍの波長を用いた。
【0085】
試験化合物を添加しない場合のアセトアルデヒドの酸化速度を１００％とした際の、試験化合物を添加した場合の酸化速度を表１に示す。表１の結果から、実施例１～７の化合物がＡＬＤＨ２活性化作用を有することが確認された。
【表1】
【0086】
［試験例２：マウス肝ミクロソームを用いた代謝安定性］
マウス肝ミクロソームにおける代謝安定性を以下の方法により評価した。
１．材料
（１）マウス肝ミクロソーム：２０ｍｇ／ｍＬ
（２）試験化合物：１．１ｍＭ ＤＭＳＯ溶液
（３）リン酸カリウム緩衝液：６６．７ｍＭ（ｐＨ７．４）
（４）ＮＡＤＰＨ溶液：１０ｍＭ ｉｎ リン酸カリウム緩衝液
（５）クエンチング溶液：内部標準物質としてワルファリン入りの０．５％ギ酸－アセトニトリル溶液
マウス肝ミクロソームにおける代謝安定性を以下の方法により評価した。
１．材料
（１）マウス肝ミクロソーム：２０ｍｇ／ｍＬ
（２）試験化合物：１．１ｍＭ ＤＭＳＯ溶液
（３）リン酸カリウム緩衝液：６６．７ｍＭ（ｐＨ７．４）
（４）ＮＡＤＰＨ溶液：１０ｍＭ ｉｎ リン酸カリウム緩衝液
（５）クエンチング溶液：内部標準物質としてワルファリン入りの０．５％ギ酸－アセトニトリル溶液
【0087】
２．方法
プロピレンチューブ中に、９７１．５μＬのリン酸カリウム緩衝液と２７．５μＬのマウス肝ミクロソームを入れ、懸濁させた。ここに、１μＬの試験化合物を加え、この混合物のうち１８０μＬを別のチューブに移した。混合物を３７℃で５分間プレインキュベーションし、その後、２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液（インキュベーション時間３０分の場合）又は２０μＬのリン酸カリウム緩衝液（インキュベーション時間０分の場合）を加えた。インキュベーション後に、２００μＬのクエンチング溶液を加え、反応を停止させた。続いて、３２２０×ｇで２０分間遠心分離し、２００μＬの上清中の試験化合物の未変化体濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳで測定した。得られた未変化体のピーク面積に基づき、インキュベーション時間０分を１００％として未変化体の残存率（％）を算出した。
プロピレンチューブ中に、９７１．５μＬのリン酸カリウム緩衝液と２７．５μＬのマウス肝ミクロソームを入れ、懸濁させた。ここに、１μＬの試験化合物を加え、この混合物のうち１８０μＬを別のチューブに移した。混合物を３７℃で５分間プレインキュベーションし、その後、２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液（インキュベーション時間３０分の場合）又は２０μＬのリン酸カリウム緩衝液（インキュベーション時間０分の場合）を加えた。インキュベーション後に、２００μＬのクエンチング溶液を加え、反応を停止させた。続いて、３２２０×ｇで２０分間遠心分離し、２００μＬの上清中の試験化合物の未変化体濃度をＬＣ－ＭＳ／ＭＳで測定した。得られた未変化体のピーク面積に基づき、インキュベーション時間０分を１００％として未変化体の残存率（％）を算出した。
【0088】
３．結果
３０分後の未変化体の残存率（％）を表２に示す。実施例１～７の化合物が、従来のＡＬＤＨ２活性化剤と比較して、マウス肝ミクロソームにおける代謝安定性に優れることが確認された。
３０分後の未変化体の残存率（％）を表２に示す。実施例１～７の化合物が、従来のＡＬＤＨ２活性化剤と比較して、マウス肝ミクロソームにおける代謝安定性に優れることが確認された。
【表2】
【0089】
[試験例３：ヒト肝ミクロソームを用いた代謝安定性］
マウス肝ミクロソーム試験で安定性が確認された実施例１、２、５及び６の化合物について、ヒト肝ミクロソームを用いた代謝安定性を測定した。具体的な方法は以下のとおりである。
マウス肝ミクロソーム試験で安定性が確認された実施例１、２、５及び６の化合物について、ヒト肝ミクロソームを用いた代謝安定性を測定した。具体的な方法は以下のとおりである。
【0090】
２．方法
（１）β－ＮＡＤＰＨ溶液で希釈した０．２μｍｏｌ/Ｌ試験化合物を５０μＬずつ分取した。
（２）０．２ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬヒト肝ミクロソーム溶液を５０μＬずつ添加した（反応時間０分の試料を除く）。
（３）３７℃で３０分、振とうしながらインキュベーションした。（反応試料中濃度：０．１μｍｏｌ／Ｌ試験化合物、０．１ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬヒト肝ミクロソーム）
（４）インキュベーション後、メタノール４００μＬを添加し反応を停止させた。
（５）反応時間０分の試料に０．２ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬ肝ミクロソーム溶液５０μＬを添加した。
（６）上記（４）及び（５）の試料を－２０℃で３０分以上静置した後、４℃、３，０００ｒｐｍで約１０分間遠心分離した。
（７）上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにて測定し、得られた未変化体のピーク面積に基づき、インキュベーション時間０分を１００％として未変化体の残存率（％）を算出した。
３０分後の未変化体の残存率（％）を表３に示す。
（１）β－ＮＡＤＰＨ溶液で希釈した０．２μｍｏｌ/Ｌ試験化合物を５０μＬずつ分取した。
（２）０．２ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬヒト肝ミクロソーム溶液を５０μＬずつ添加した（反応時間０分の試料を除く）。
（３）３７℃で３０分、振とうしながらインキュベーションした。（反応試料中濃度：０．１μｍｏｌ／Ｌ試験化合物、０．１ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬヒト肝ミクロソーム）
（４）インキュベーション後、メタノール４００μＬを添加し反応を停止させた。
（５）反応時間０分の試料に０．２ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍＬ肝ミクロソーム溶液５０μＬを添加した。
（６）上記（４）及び（５）の試料を－２０℃で３０分以上静置した後、４℃、３，０００ｒｐｍで約１０分間遠心分離した。
（７）上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにて測定し、得られた未変化体のピーク面積に基づき、インキュベーション時間０分を１００％として未変化体の残存率（％）を算出した。
３０分後の未変化体の残存率（％）を表３に示す。
【表3】
【0091】
［試験例４：反応性代謝物］
ヒト肝ミクロソーム存在下でグルタチオン結合体の産生をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定することで、試験化合物の反応性代謝物産生リスクを検討した。具体的な方法は以下のとおりである。
ヒト肝ミクロソーム存在下でグルタチオン結合体の産生をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより測定することで、試験化合物の反応性代謝物産生リスクを検討した。具体的な方法は以下のとおりである。
【0092】
１．方法
（１）ポリプロピレンチューブに、２０ ｍｇ／ｍＬのヒト肝ミクロソームを５５ｕＬ、６６．７ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）を３９５ｕＬ、１０ｍＭのグルタチオン水溶液を５５０ｕＬ添加した。
（２）２０ｍＭの試験化合物又は陽性コントロール（Ｃｌｏｚａｐｉｎｅ、Ｒｅｌｏｘｉｆｅｎ、Ｄｉｃｒｏｆｅｎａｃ）を０．５５ｕＬ添加した。
（３）１８０ｕＬずつ４本のチューブに小分けし、２本にＴ０、２本にＴ６０とラベルし、３７±１℃で５分間プレインキュベートした。
（４）１０ｍＭのＮＡＤＰＨ溶液２０ｕＬをＴ６０チューブに、リン酸カリウム緩衝液２０ｕＬをＴ０チューブに加えた。
（５）６０分後、１０％トリクロロ酢酸アセトニトリル溶液を２００ｕＬずつ加え、反応を停止させた。
（６）遠心分離装置（５８１０－Ｒ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で３２２０×ｇ、２０分間遠心分離し、上清２００ｕＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＬＣ：ＳＩＬ－ＨＴｃ、Ｓｈｉｍａｚｕ、Ｍａｓｓ：ＡＰＩ－４０００ Ｑｔｒａｐ、ＭＤＳ ｓｃｉｅｘ）にてＧＳＨ結合体を測定した。
（７）試験化合物で認められたＧＳＨ結合体のエリア／クロザピンで認められたＧＳＨ結合体のエリアの比（％）を算出した。
（１）ポリプロピレンチューブに、２０ ｍｇ／ｍＬのヒト肝ミクロソームを５５ｕＬ、６６．７ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）を３９５ｕＬ、１０ｍＭのグルタチオン水溶液を５５０ｕＬ添加した。
（２）２０ｍＭの試験化合物又は陽性コントロール（Ｃｌｏｚａｐｉｎｅ、Ｒｅｌｏｘｉｆｅｎ、Ｄｉｃｒｏｆｅｎａｃ）を０．５５ｕＬ添加した。
（３）１８０ｕＬずつ４本のチューブに小分けし、２本にＴ０、２本にＴ６０とラベルし、３７±１℃で５分間プレインキュベートした。
（４）１０ｍＭのＮＡＤＰＨ溶液２０ｕＬをＴ６０チューブに、リン酸カリウム緩衝液２０ｕＬをＴ０チューブに加えた。
（５）６０分後、１０％トリクロロ酢酸アセトニトリル溶液を２００ｕＬずつ加え、反応を停止させた。
（６）遠心分離装置（５８１０－Ｒ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で３２２０×ｇ、２０分間遠心分離し、上清２００ｕＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＬＣ：ＳＩＬ－ＨＴｃ、Ｓｈｉｍａｚｕ、Ｍａｓｓ：ＡＰＩ－４０００ Ｑｔｒａｐ、ＭＤＳ ｓｃｉｅｘ）にてＧＳＨ結合体を測定した。
（７）試験化合物で認められたＧＳＨ結合体のエリア／クロザピンで認められたＧＳＨ結合体のエリアの比（％）を算出した。
【0093】
２．結果
結果を表４に示す。これらの結果から、実施例の化合物はクロザピンと比べて反応性代謝物の生成量が小さいことが確認された。
結果を表４に示す。これらの結果から、実施例の化合物はクロザピンと比べて反応性代謝物の生成量が小さいことが確認された。
【表4】
【0094】
［試験例５：ｈＥＲＧチャネル阻害作用］
試験化合物のｈＥＲＧ（human Ether-a-go-go Related Gene）チャネル阻害作用を以下のパッチクランプ法で検討した。
１．方法
電位固定下で細胞膜全体を通過したｈＥＲＧ電流を、ホールセルパッチクランプ法で記録した。
ｈＥＲＧ電流を確認するため、保持電位を－８０ｍＶに設定し、－５０ｍＶ、１１０ｍｓｅｃ及び２０ｍＶ、４ｓｅｃの脱分極パルスに続く－５０ｍＶ、２ｓｅｃの再分極パルスを１５秒に１回の頻度で与えた。得られたｈＥＲＧ ｔａｉｌ電流の安定が確認された後、適用を開始した。適用中も継続してパルスを与えた。
サンプリング周波数は５ｋＨｚとし、Ｌｏｗｐａｓｓ Ｆｉｌｔｅｒは２ｋＨｚとした。
測定中のチャンバー内における細胞外液の温度は２２～２５℃とした。
試験化合物のｈＥＲＧ（human Ether-a-go-go Related Gene）チャネル阻害作用を以下のパッチクランプ法で検討した。
１．方法
電位固定下で細胞膜全体を通過したｈＥＲＧ電流を、ホールセルパッチクランプ法で記録した。
ｈＥＲＧ電流を確認するため、保持電位を－８０ｍＶに設定し、－５０ｍＶ、１１０ｍｓｅｃ及び２０ｍＶ、４ｓｅｃの脱分極パルスに続く－５０ｍＶ、２ｓｅｃの再分極パルスを１５秒に１回の頻度で与えた。得られたｈＥＲＧ ｔａｉｌ電流の安定が確認された後、適用を開始した。適用中も継続してパルスを与えた。
サンプリング周波数は５ｋＨｚとし、Ｌｏｗｐａｓｓ Ｆｉｌｔｅｒは２ｋＨｚとした。
測定中のチャンバー内における細胞外液の温度は２２～２５℃とした。
【0095】
＜細胞外液の組成＞
NaCl: 137 mmol/L，KCl: 4 mmol/L，CaCl2: 1.8 mmol/L，MgCl2: 1 mmol/L，D(+)-glucose: 10 mmol/L，HEPES: 10 mmol/L (1 mol/L NaOH でpH 7.4に調整)。
NaCl: 137 mmol/L，KCl: 4 mmol/L，CaCl2: 1.8 mmol/L，MgCl2: 1 mmol/L，D(+)-glucose: 10 mmol/L，HEPES: 10 mmol/L (1 mol/L NaOH でpH 7.4に調整)。
【0096】
＜電極内液の組成＞
KCl: 130 mmol/L, MgCl2: 1 mmol/L, EGTA: 5 mmol/L, MgATP: 5 mmol/L, HEPES: 10 mmol/L (1 mol/L KOHでpH 7.2に調整)。
KCl: 130 mmol/L, MgCl2: 1 mmol/L, EGTA: 5 mmol/L, MgATP: 5 mmol/L, HEPES: 10 mmol/L (1 mol/L KOHでpH 7.2に調整)。
【0097】
＜ガラス電極の作製＞
ガラス細管（Ｇ－１．５、株式会社 成茂科学器械研究所）をプラー（Ｐ－９７、Ｓｕｔｔｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ）を用いて加工し、電極内液を満たした時の抵抗値が２～５ＭΩの範囲のものを測定に使用した。
ガラス細管（Ｇ－１．５、株式会社 成茂科学器械研究所）をプラー（Ｐ－９７、Ｓｕｔｔｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ）を用いて加工し、電極内液を満たした時の抵抗値が２～５ＭΩの範囲のものを測定に使用した。
【0098】
＜測定及び解析＞
ｈＥＲＧ電流はパッチクランプ用アンプ（Ａｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、 ＬＬＣ）を用いて測定し、得られた電気信号はパッチクランプ用記録解析ソフト（ｐＣＬＡＭＰ １０、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＬＬＣ) を介してコンピュータ上に記録した。
－５０ｍＶ、１１０ｍｓｅｃの脱分極パルスにおける電流値を基準に最大ｔａｉｌ電流値を求め、試験化合物適用前の最大ｔａｉｌ電流値に対する適用開始５分後の変化率（抑制率）を算出した。
ｈＥＲＧ電流はパッチクランプ用アンプ（Ａｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、 ＬＬＣ）を用いて測定し、得られた電気信号はパッチクランプ用記録解析ソフト（ｐＣＬＡＭＰ １０、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＬＬＣ) を介してコンピュータ上に記録した。
－５０ｍＶ、１１０ｍｓｅｃの脱分極パルスにおける電流値を基準に最大ｔａｉｌ電流値を求め、試験化合物適用前の最大ｔａｉｌ電流値に対する適用開始５分後の変化率（抑制率）を算出した。
【0099】
２．結果
結果を表５に示す。これらの結果から、実施例の化合物はｈＥＲＧチャネル阻害作用を示さないことが確認された。
結果を表５に示す。これらの結果から、実施例の化合物はｈＥＲＧチャネル阻害作用を示さないことが確認された。
【表5】
【0100】
［試験例６：カラゲニンにより誘発される疼痛の抑制効果］
本実験は、Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６， ２ ５１ｒａ１１８ （２０１４）．を参考にして実施した。動物は雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャ一ルス・リバ一）、７週齢を使用した。足底部に機械刺激アロディニアを誘発するため、カラゲニンをマウスの左後肢足底に皮下投与した。誘発１８０分後の機械的刺激に対する逃避反応を、左後肢の足底面への上行曲げ力（０．１６グラム）のｖｏｎ Ｆｒｅｙフィラメントを用いて測定した。フィラメントが曲がるまで垂直に６秒間マウスを刺激し、マウスの逃避反応を３段階スコア化（０：無反応または驚愕反応（足を引きあげずにずらす）、１：足を引き挙げる、２：足を舐めるまたは振る）した。刺激は１０回行い、１０回のスコアの合計値（逃避スコア）を算出した。
本実験は、Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６， ２ ５１ｒａ１１８ （２０１４）．を参考にして実施した。動物は雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャ一ルス・リバ一）、７週齢を使用した。足底部に機械刺激アロディニアを誘発するため、カラゲニンをマウスの左後肢足底に皮下投与した。誘発１８０分後の機械的刺激に対する逃避反応を、左後肢の足底面への上行曲げ力（０．１６グラム）のｖｏｎ Ｆｒｅｙフィラメントを用いて測定した。フィラメントが曲がるまで垂直に６秒間マウスを刺激し、マウスの逃避反応を３段階スコア化（０：無反応または驚愕反応（足を引きあげずにずらす）、１：足を引き挙げる、２：足を舐めるまたは振る）した。刺激は１０回行い、１０回のスコアの合計値（逃避スコア）を算出した。
【0101】
化合物（実施例１）をＤＭＳＯ／ＰＥＧ４００（１：１の体積比）に溶解し、２、６または２０ｍｇ／ｋｇの化合物を（Ｖｅｈｉｃｌｅ群は化合物含まない）５ｍＬ／ｋｇの投与液量でカラゲニンを注入する１５分前、カラゲニンを注入してから３０分および１５０分後の計３回同量を頸背部皮下に投与した。カラゲニンは、生理食塩液を用いて１．５％溶液を調製し、左後肢足底に７μＬ／ｂｏｄｙで皮下投与した。
【0102】
有意差検定は、Ｖｅｈｉｃｌｅ群と実施例１群の比較をSteelの多重比較検定を行い、有意水準は５％として算出した。有意差検定には、市販の統計プログラムＳＡＳ ＳＹＳＴＥＭ（ＳＡＳ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ９．１．３；ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｊａｐａｎ Ｌｔｄ）を使用した。
【0103】
表６に示す通り、実施例の化合物が、カラゲニンにより誘発される 疼痛を抑制することが示された。
【0104】
【表6】