特許 7481458 光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体、その調製方法及び医学的使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-04-30

(45)【発行日】2024-05-10

(54)【発明の名称】光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体、その調製方法及び医学的使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20240501BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20240501BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240501BHJP

   A61P 29/02 20060101ALI20240501BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240501BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 138

C07D487/04 CSP

A61K31/4439

A61P43/00 111

A61P29/02

A61P25/04

【請求項の数】 27

(21)【出願番号】P 2022543554

(86)(22)【出願日】2021-01-15

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-14

(86)【国際出願番号】 CN2021072018

(87)【国際公開番号】W WO2021143803

(87)【国際公開日】2021-07-22

【審査請求日】2022-09-06

(31)【優先権主張番号】202011432101.8

(32)【優先日】2020-12-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】202010052007.3

(32)【優先日】2020-01-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】520415971

【氏名又は名称】上海海雁医薬科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＡＩＹＡＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(73)【特許権者】

【識別番号】517202157

【氏名又は名称】ヤンツェー リバー ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド

【住所又は居所原語表記】１ Ｓｏｕｔｈ Ｙａｎｇｔｚｅ Ｒｉｖｅｒ Ｒｏａｄ Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２２５３２１ ＣＨＩＮＡ

(74)【代理人】

【識別番号】100112656

【弁理士】

【氏名又は名称】宮田 英毅

(74)【代理人】

【識別番号】100089118

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 宏明

(72)【発明者】

【氏名】胡斌

(72)【発明者】

【氏名】張凱

(72)【発明者】

【氏名】關慧平

【審査官】土橋 敬介

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１９／２０５９８３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１８－５３４２５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１７／０６３５０９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Synlett，1997年，pp. 1013-1014

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、

【化1】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたはＣ_１－６アルキルであり、
Ｒ_ｃは水素またはＣ_１－６アルキルであり、及び
＊はＲまたはＳ構成である、式（Ｉ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

式（Ｉ）化合物は式（Ｉ－ａ）または式（Ｉ－ｂ）で表される構造であり、

【化2】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立してＣ_１－３アルキルであり、
Ｒ_ｃは水素またはＣ_１－３アルキルである、
ことを特徴とする請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、メチルまたはエチルである、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ_ｃは水素、メチルまたはエチルである、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはメチルであり、Ｒ_ｃは水素、メチルまたはエチルである、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

式（ＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、

【化3】

Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素またはＣ_１－６アルキルであり、または、Ｒ _１ 及びＲ _２ と接続された炭素原子と、Ｒ _１ と、Ｒ _２ とは、共に３～６員の飽和単環式環を形成し、前記３～６員の飽和単環式環は非置換であり、
Ｒ_３は水素またはＣ_１－６アルキルであり、及び
＊はＲまたはＳ構成である、式（ＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

式（ＩＩ）化合物は式（ＩＩ－ａ）または式（ＩＩ－ｂ）で表される構造であり、

【化4】

Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立してＣ_１－３アルキルであり、または、Ｒ_１、Ｒ_２は接続された炭素原子とともに３～６員の飽和単環式環を形成し、前記３～６員の飽和単環式環は非置換であり、及び、
Ｒ_３は水素またはＣ_１－３アルキルである、
ことを特徴とする請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、メチルまたはエチルである、ことを特徴とする請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

Ｒ_３は水素、メチル、またはエチルである、ことを特徴とする請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

Ｒ_１、Ｒ_２はメチルであり、Ｒ_３は水素、メチル、またはエチルである、ことを特徴とする請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

前記化合物は、

【化5】

から選ばれる、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

前記化合物は、

【化6】

から選ばれる、ことを特徴とする請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項14】

ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介される関連疾患を予防および／または治療するための薬剤の調製における、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項15】

疼痛及び疼痛関連疾患を予防および／または治療するための薬剤の調製における、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項16】

ＭＯＲ受容体を刺激または拮抗するための薬剤の調製における、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または請求項１３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項17】

式（Ｉ）化合物の調製方法であって、
化合物１ｂと式（Ｉ－１）化合物を還元的アミノ化反応させ、前記式（Ｉ）化合物を取得するステップを含み、

【化7】

式（Ｉ－１）と式（Ｉ）化合物における基は請求項１に定義されるものである、式（Ｉ）化合物の調製方法。

【請求項18】

式（Ｉ－１）化合物は式（Ｉ－１ａ）または（Ｉ－１ｂ）で表される構造である

【化8】

、ことを特徴とする請求項１７に記載の調製方法。

【請求項19】

式（ＩＩ）化合物の調製方法であって、
化合物１ｂと式（ＩＩ－１）化合物を還元的アミノ化反応させ、前記式（ＩＩ）化合物を取得するステップを含み、

【化9】

式（ＩＩ－１）と式（ＩＩ）化合物の基は請求項６に定義されるものである、式（ＩＩ）化合物の調製方法。

【請求項20】

式（ＩＩ－１）化合物は、式（ＩＩ－１ａ）または（ＩＩ－１ｂ）で表される構造である

【化10】

、ことを特徴とする請求項１９に記載の調製方法。

【請求項21】

前記還元的アミノ化反応は不活性溶媒と還元剤の反応系で行われる、ことを特徴とする請求項１７または１９に記載の調製方法。

【請求項22】

前記不活性溶媒はＣ_１－４アルキルアルコール、トルエン、キシレン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、１、２－ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、またはその組み合わせである、ことを特徴とする請求項２１に記載の調製方法。

【請求項23】

前記還元剤は、テトラブチルアミン水素化ホウ素、マロニルオキシボロヒドリドナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム及びボランから選ばれる、ことを特徴とする請求項２１に記載の調製方法。

【請求項24】

式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその塩、またはそのエナンチオマー、またはそのジアステレオマー、またはそのラセミ体、またはそのジアステレオマー混合物であって、

【化11】

Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはそれぞれ独立して水素、またはＣ_１－６アルキルであり、またはＲ_１ａ、Ｒ_１ｂが接続された炭素原子とともに３～６員の飽和単環式環を形成し、前記３～６員の飽和単環式環はそれぞれ非置換であり、
Ｒ_１ｃは水素またはＣ_１－６アルキルである、
式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその塩、またはそのエナンチオマー、またはそのジアステレオマー、またはそのラセミ体、またはそのジアステレオマー混合物。

【請求項25】

オキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体の中間体であって、前記中間体は式（Ｉ－１）または式（ＩＩ－１）で表される構造であり、

【化12】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃは請求項１に定義されるものであり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３は請求項６に定義されるものであり、アスタリスク＊は、キラル炭素原子がＲまたはＳ構成であることを表す、ことを特徴とするオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体の中間体。

【請求項26】

式（Ｉ－１）化合物は式（Ｉ－１ａ）または式（Ｉ－１ｂ）で表される構造、

【化13】

であり、式（ＩＩ－１）化合物は式（ＩＩ－１ａ）または式（ＩＩ－１ｂ）で表される構造、

【化14】

である、ことを特徴とする請求項２５に記載の中間体。

【請求項27】

式（Ｉ－１ａ）化合物は、

【化15】

から選ばれ、
式（Ｉ－１ｂ）化合物は、

【化16】

から選ばれ、
式（ＩＩ－１ａ）化合物は、

【化17】

から選ばれ、
式（ＩＩ－１ｂ）化合物は、

【化18】

から選ばれる、ことを特徴とする請求項２６に記載の中間体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体、その調製方法及び該誘導体を含む医薬組成物、並びに治療薬として、特にＭＯＲ受容体アゴニストとして、疼痛及び疼痛等の関連疾患を治療及び予防するための薬剤の調製における使用に関する。

【背景技術】

【0002】

オピオイド受容体は、重要なＧタンパク質共役受容体（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＣＲ）であり、内因性オピオイドペプチド及びオピオイドのような医薬品の結合の標的であり、内因性オピオイドペプチドは哺乳類動物の体内で天然に生成するオピオイド活性物質であり、現在、知られた内因性オピオイドペプチドはエンケファリン、エンドルフィン、ダイノルフィン及びネオフィンに大別される。中枢神経系には対応するオピオイド受容体、即ちμ（ＭＯＲ）、δ（ＤＯＲ）、κ（ＫＯＲ）受容体等が存在する。研究によると、内因性オピオイドペプチドの鎮痛効果の強さは、主にオピオイド受容体の発現に依存し、オピオイド受容体はオピオイド医薬品と内因性オピオイドペプチドの鎮痛効果の標的である。

【0003】

現在の研究は、ＧＰＣＲは、主に、Ｇタンパク質経路とβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路という２つの経路を介して生理学的機能を媒介及び調節すると考える。従来のＧＰＣＲアゴニストが受容体に結合した後、カルシウムイオンなどのセカンドメッセンジャーシステム、アデニルシクラーゼ（ａｄｅｎｙｌ ｃｙｃｌａｓｅ、ＡＣ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ、ＭＡＰＫ）等を含むＧタンパク質シグナル経路を活性化し、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ優先リガンドは主にβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路を活性化する。β－ａｒｒｅｓｔｉｎによって媒介されたＧＰＣＲ反応には主に３つの側面があり、１）負の調節因子として、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ（ＧＲＫ）と作用し、ＧＰＣＲｓに受容体脱感作を発生させ、Ｇタンパク質シグナル伝達を中止し、２）足場タンパク質（ｓｃａｆｆｏｌｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）、エンドサイトーシスタンパク質を動員し、ＧＰＣＲエンドサイトーシスを誘導し、３）アダプタータンパク質として、ＧＰＣＲの下流のシグナル分子と複合体を形成し、Ｇタンパク質に依存しない方法でシグナル伝達分子、例えばＭＡＰＫ、Ｓｒｃプロテインチロシンキナーゼ及びＡｋｔ等を活性化する。リガンド刺激Ｇタンパク質シグナル及び／又はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎシグナルの違いは、最終的にＧＰＣＲのリガンド特異的細胞生物学的効果を決定する。

【0004】

ＭＯＲは内因性エンケファリン及びモルヒネ等のオピオイド鎮痛医薬品の作用標的である。以前の研究では、内因性エンケファリンとオピオイドエトルフィンがＧタンパク質を刺激し、受容体エンドサイトーシスを誘発できることが示されるが、モルヒネは受容体のエンドサイトーシスをまったく誘発しなく、これは、モルヒネがＭＯＲリン酸化を刺激する能力が弱すぎて、少量のβ－ａｒｒｅｓｔｉｎしか膜に動員できないため（Ｚｈａｎｇ等、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９８，９５（１２）：７１５７－７１６２）である。 このようなリガンドは、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ経路ではなく、Ｇタンパク質シグナル経路を介して完全に生理学的機能を発揮する。研究によると、モルヒネをβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ２ノックアウトマウスに注射した後、Ｇタンパク質シグナルによって媒介される鎮痛効果はより強く、より長く持続（Ｂｏｈｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９年）する。このようなリガンドの負のβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ優先℃がより強く、ひいてはβ－ａｒｒｅｓｔｉｎによって媒介される受容体脱感作を回避することができ、Ｇタンパク質シグナル伝達時間が長くなり、より強力な鎮痛効果をもたらすことができるのを予見できる。

【0005】

現在開示されたＭＯＲアゴニストの特許出願は、ＷＯ２０１７１０６５４７、ＷＯ２０１７０６３５０９、ＷＯ２０１２１２９４９５、ＷＯ２０１７１０６３０６等を含む。

【0006】

オピオイドのような医薬品の長期使用は、呼吸阻害や便秘などの耐性と副作用を引き起こし、これらの副作用はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎの機能と密接に関連していることが証明される。オピオイドのような医薬品の副作用を軽減するために、ＭＯＲの負のβ－ａｒｒｅｓｔｉｎ優先リガンドに基づいて医薬品を設計し、β－ａｒｒｅｓｔｉｎによって媒介される副作用を軽減し、治療効果を高めることができる。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、構造が新規なＭＯＲ受容体アゴニストとして使用することができる化合物を提供することを目的とする。

【0008】

本発明の第１の態様は、式（Ｉ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグを提供し、

【化1】

Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）またはハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）であり、または、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂが接続された炭素原子とともに４～６員の飽和単複素環または３～６員の飽和単環式環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環及び３～６員の飽和単環式環はそれぞれ非置換であるか、または、シアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_ｃは水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、Ｃ_２－６アルケニル（好ましくはＣ_２－４アルケニル）、Ｃ_２－６アルキニル（好ましくはＣ_２－４アルキニル）、Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはＣ_１－３アルコキシ）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）、－ＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキル、－ＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリールまたは５または６員の単環式ヘテロアリールであり、前記４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリール及び５または６員の単環式ヘテロアリールはそれぞれ非置換であるか、またはシアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_ａ１、Ｒ_ｂ１はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、Ｃ_３－６シクロアルキルまたは４～６員の飽和単複素環であり、またはＲ_ａ１、Ｒ_ｂ１が接続された窒素原子とともに４～６員の飽和単複素環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環は非置換であるか、または１、２または３つのＣ_１－３アルキルによって置換され、及び
＊はＲまたはＳ構成である。

【0009】

他の好ましい例では、式（Ｉ）化合物は式（Ｉ－ａ）または式（Ｉ－ｂ）で表される構造である。

【化2】

【0010】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ及び接続された炭素原子によって形成された４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0011】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ及び接続された炭素原子によって形成された３～６員の飽和単環式環は、シクロプロピル環、シクロブチル環、シクロペンチル環及びシクロヘキシル環から選ばれる。

【0012】

他の好ましい例では、Ｒ_ｃの前記５または６員の単環式ヘテロアリールは、チオフェン、フラン、チアゾール、イミダゾール、オキサゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、１，２，３－トリアゾール、１，２，４－トリアゾール、１，２，５－トリアゾール、１，３，４－トリアゾール、テトラゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、１，２，３－オキサジアゾール、１，２，４－オキサジアゾール、１，２，５－オキサジアゾール、１，３，４－オキサジアゾール、チアジアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジンまたはピラジンから選ばれる。

【0013】

他の好ましい例では、Ｒ_ｃの前記４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0014】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ１及びＲ_ｂ１中に記載の４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0015】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ１、Ｒ_ｂ１と接続された窒素原子とによって形成された４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン及びチオモルホリン－１，１－ジオキシドから選ばれる。

【0016】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたはＣ_１－３アルキルであり、またはＲ_ａ、Ｒ_ｂが接続された炭素原子とともに３～６員の飽和単環式環を形成する。

【0017】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0018】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂが接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成する。

【0019】

他の好ましい例では、Ｒ_ｃは水素、ハロゲン、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシまたはハロゲン化Ｃ_１－３アルキルである。

【0020】

他の好ましい例では、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0021】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0022】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはメチルであり、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0023】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはフッ素であり、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0024】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂは水素であり、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチルまたはトリフルオロメチルである。

【0025】

他の好ましい例では、Ｒ_ａは水素であり、Ｒ_ｂはメチルであり、Ｒ_ｃはメチルまたはエチルである。

【0026】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂが接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成し、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0027】

本発明の第２の態様は、式（ＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグを提供し、

【化3】

Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）またはハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）であり、またはＲ_１、Ｒ_２が接続された炭素原子とともに４～６員の飽和単複素環または３～６員の飽和単環式環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環及び３～６員の飽和単環式環はそれぞれ非置換であるか、または、シアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_３は水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、Ｃ_２－６アルケニル（好ましくはＣ_２－４アルケニル）、Ｃ_２－６アルキニル（好ましくはＣ_２－４アルキニル）、Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはＣ_１－３アルコキシ）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）、－ＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＮＨＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキル、－ＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＳＯ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２、４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリールまたは５または６員の単環式ヘテロアリールであり、前記４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリール及び５または６員の単環式ヘテロアリールはそれぞれ非置換であるか、または、シアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_１１、Ｒ_１２はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、Ｃ_３－６シクロアルキルまたは４～６員の飽和単複素環であり、またはＲ_１１、Ｒ_１２が接続された窒素原子とともに４～６員の飽和単複素環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環は非置換であるか、または１、２または３つのＣ１－３アルキルによって置換され、
＊はＲまたはＳ構成である。

【0028】

他の好ましい例では、式（ＩＩ）化合物は式（ＩＩ－ａ）または式（ＩＩ－ｂ）で表される構造である。

【化4】

【0029】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２及び接続された炭素原子によって形成された４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0030】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２及び接続された炭素原子によって形成された３～６員の飽和単環式環は、シクロプロピル環、シクロブチル環、シクロペンチル環及びシクロヘキシル環から選ばれる。

【0031】

他の好ましい例では、Ｒ_３の前記５または６員の単環式ヘテロアリールは、チオフェン、フラン、チアゾール、イミダゾール、オキサゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、１，２，３－トリアゾール、１，２，４－トリアゾール、１，２，５－トリアゾール、１，３，４－トリアゾール、テトラゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、１，２，３－オキサジアゾール、１，２，４－オキサジアゾール、１，２，５－オキサジアゾール、１，３，４－オキサジアゾール、チアジアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン及びピラジンから選ばれる。

【0032】

他の好ましい例では、Ｒ_３の前記４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0033】

他の好ましい例では、Ｒ_１１とＲ_１２の前記４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド及びテトラヒドロピランから選ばれる。

【0034】

他の好ましい例では、Ｒ_１１、Ｒ_１２と接続された窒素原子とによって形成された４～６員の飽和単複素環は、アゼチジン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン及びチオモルホリン－１，１－ジオキシドから選ばれる。

【0035】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたはＣ_１－３アルキルであり、またはＲ _１ 、Ｒ _２ は接続された炭素原子とともに３～６員の飽和単環式環を形成する。

【0036】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0037】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２が接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成する。

【0038】

他の好ましい例では、Ｒ_３は水素、ハロゲン、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシまたはハロゲン化Ｃ_１－３アルキルである。

【0039】

他の好ましい例では、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0040】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0041】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はメチルであり、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0042】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はフッ素であり、Ｒ_３は水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0043】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２は水素であり、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチルまたはトリフルオロメチルである。

【0044】

他の好ましい例では、Ｒ_１は水素であり、Ｒ_２はメチルであり、Ｒ_３はメチルまたはエチルである。

【0045】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２が接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成し、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0046】

他の好ましい例では、前記４～６員の飽和単複素環は、構造

【化5】

から選ばれ、上記４～６員の飽和単複素環での水素原子は任意選択でシアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルからそれぞれ独立して選ばれる１、２または３つの置換基によって置換される。

【0047】

他の好ましい例では、Ｒ_ｃまたはＲ_３の前記５～６員の単環式ヘテロアリールは、

【化6】

構造から選ばれ、上記５～６員の単環式ヘテロアリールは任意選択でシアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルからそれぞれ独立して選ばれる１、２または３つの置換基によって置換される。

【0048】

他の好ましい例では、前記化合物は、

【化7A】

【化7B】

から選ばれる。

【0049】

本発明の第３の態様は、医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、及び薬学的に許容される担体を含む。

【0050】

本発明の第４の態様は、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介される関連疾患を予防および／または治療するための薬剤の調製における本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、または本発明の第３態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。

【0051】

本発明の第５態様は、ＭＯＲ受容体を刺激または拮抗するための薬剤の調製における本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、または本発明の第３態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。

【0052】

本発明の第６態様は、疼痛及び疼痛関連疾患を予防および／または治療するための薬剤の調製における本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、または本発明の第３態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。

【0053】

他の好ましい例では、前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介される関連疾患は、疼痛、免疫機能障害、炎症、食道逆流、神経及び精神障害、泌尿及び生殖疾患、心血管疾患及び呼吸器疾患から選ばれ、好ましくは疼痛である。

【0054】

他の好ましい例では、前記疼痛は術後疼痛、癌による疼痛、神経障害性疼痛、外傷性疼痛及び炎症による疼痛から選ばれる。

【0055】

他の好ましい例では、前記癌症は、乳腺癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、皮膚癌、前立腺癌、卵巣癌、ファロピウス管腫瘍、卵巣瘤、血友病及び白血病から選ばれる。

【0056】

本発明の第７の態様は、ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介される関連疾患を予防及び／又は治療する方法を提供し、治療を必要とする患者に、治療有効量の本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、または本発明の第３態様に記載の医薬組成物を投与するステップを含む。

【0057】

本発明の第８の態様は、疼痛及び疼痛関連疾患を予防及び／又は治療する方法を提供し、治療を必要とする患者に、治療有効量の本発明の第１または第２の態様に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグ、または本発明の第３態様に記載の医薬組成物を投与するステップを含む。

【0058】

他の好ましい例では、前記ＭＯＲ受容体アゴニストによって媒介される関連疾患は、疼痛、免疫機能障害、炎症、食道逆流、神経及び精神障害、泌尿及び生殖疾患、心血管疾患及び呼吸器疾患から選ばれ、好ましくは疼痛である。

【0059】

他の好ましい例では、前記疼痛は術後疼痛、癌による疼痛、神経障害性疼痛、外傷性疼痛及び炎症による疼痛から選ばれる。

【0060】

他の好ましい例では、前記癌症は乳腺癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、皮膚癌、前立腺癌、卵巣癌、ファロピウス管腫瘍、卵巣瘤、血友病及び白血病から選ばれる。

【0061】

本発明の第９の態様は式（Ｉ）化合物の調製方法を提供し、
化合物１ｂと式（Ｉ－１）化合物に対して還元的アミノ化反応を行い、前記式（Ｉ）化合物を取得するステップを含み、

【化8】

各式の基は明細書に定義されるものである。

【0062】

他の好ましい例では、式（Ｉ－１）化合物は式（Ｉ－１ａ）または（Ｉ－１ｂ）で表される構造である。

【化9】

【0063】

他の好ましい例では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂはそれぞれ独立して水素、フッ素またはメチルであり、またはＲ_ａ、Ｒ_ｂが接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成し、Ｒ_ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0064】

他の好ましい例では、前記還元的アミノ化反応は不活性溶媒及び還元剤の反応系で行われる。

【0065】

他の好ましい例では、前記不活性溶媒は、Ｃ_１－４アルキルアルコール、トルエン、キシレン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２－ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド等、またはその組み合わせである。

【0066】

他の好ましい例では、前記還元剤は、テトラブチルアミン水素化ホウ素、マロニルオキシボロヒドリドナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム、ボランから選ばれる。

【0067】

本発明の第１０の態様は式（ＩＩ）化合物の調製方法を提供し、
化合物１ｂと式（ＩＩ－１）化合物に対して還元的アミノ化反応を行い、前記式（ＩＩ）化合物を取得するステップを含み、

【化10】

各式の基は明細書に定義されるものである。

【0068】

他の好ましい例では、式（ＩＩ－１）化合物は式（ＩＩ－１ａ）または（ＩＩ－１ｂ）で表される構造である。

【化11】

【0069】

他の好ましい例では、Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して水素、フッ素またはメチルであり、またはＲ_１、Ｒ_２が接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成し、Ｒ_３は水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0070】

他の好ましい例では、前記還元的アミノ化反応は不活性溶媒と還元剤的反応系で行われる。

【0071】

他の好ましい例では、前記不活性溶媒は、Ｃ_１－４アルキルアルコール、トルエン、キシレン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、１、２－ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド等、またはその組み合わせである。

【0072】

他の好ましい例では、前記還元剤は、テトラブチルアミン水素化ホウ素、マロニルオキシボロヒドリドナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム及びボランから選ばれる。

【0073】

本発明の第１１の態様は、式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその塩、またはそのエナンチオマー、またはそのジアステレオマー、またはそのラセミ体、またはそのジアステレオマー混合物を提供し、

【化12】

Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはそれぞれ独立して水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）またはハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）であり、またはＲ_１ａ、Ｒ_１ｂが接続された炭素原子とともに４～６員の飽和単複素環または３～６員の飽和単環式環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環及び３～６員の飽和単環式環はそれぞれ非置換であるか、またはシアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_１ｃは水素、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、Ｃ_２－６アルケニル（好ましくはＣ_２－４アルケニル）、Ｃ_２－６アルキニル（好ましくはＣ_２－４アルキニル）、Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはＣ_１－３アルコキシ）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）、－ＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－６アルキル（好ましくは－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル）、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキル、－ＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリールまたは５または６員の単環式ヘテロアリールであり、前記４～６員の飽和単複素環、Ｃ_６－１０アリール及び５または６員の単環式ヘテロアリールはそれぞれ非置換であるか、またはシアノ、ヒドロキシル、メチロール、シアノメチル、ハロゲン、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３アルキル、－ＣＯＣ_１－３アルキル、－ＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＣＯＣ_１－３アルキル、－ＮＨＣＯＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１、－ＮＨＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル、－ＮＨＳＯ_２ＮＲ_ａ１Ｒ_ｂ１及び－ＮＨＳＯ_２Ｃ_３－６シクロアルキルから選ばれる１、２または３つの置換基によって置換され、
Ｒ_ａ１、Ｒ_ｂ１はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１－６アルキル（好ましくはＣ_１－３アルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－６アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、Ｃ_３－６シクロアルキルまたは４～６員の飽和単複素環であり、またはＲ_ａ１、Ｒ_ｂ１が接続された窒素原子とともに４～６員の飽和単複素環を形成し、前記４～６員の飽和単複素環は非置換であるか、または１、２または３つのＣ１－３アルキルによって置換される。

【0074】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはそれぞれ独立して水素、ハロゲンまたはＣ_１－３アルキルであり、またはＲ_１ａ、Ｒ_１ｂは接続された炭素原子とともに３～６員の飽和単環式環を形成する。

【0075】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはそれぞれ独立して水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0076】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂが接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成する。

【0077】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ｃは水素、ハロゲン、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシまたはハロゲン化Ｃ_１－３アルキルである。

【0078】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0079】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはそれぞれ独立して水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0080】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはメチルであり、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0081】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂはフッ素であり、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチルまたはエチルである。

【0082】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂは水素であり、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチル、エチルまたはトリフルオロメチルである。

【0083】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａは水素であり、Ｒ_１ｂはメチルであり、Ｒ_１ｃはメチルまたはエチルである。

【0084】

いくつかの実施例では、Ｒ_１ａ、Ｒ_１ｂが接続された炭素原子とともにシクロプロピル環、シクロブチル環またはシクロペンチル環を形成し、Ｒ_１ｃは水素、フッ素、メチル、エチル、メトキシまたはトリフルオロメチルである。

【0085】

いくつかの実施例では、式（ＩＩＩ）化合物は式（Ｉ－１）または式（ＩＩ－１）で表される構造であり、

【化13】

式（Ｉ－１）中のＲ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃは式（Ｉ）化合物に定義されるものであり、式（ＩＩ－１）中のＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３は式（ＩＩ）化合物に定義されるものであり、アスタリスク＊は、キラル炭素原子がＲまたはＳ構成であることを表す。

【0086】

いくつかの実施例では、式（Ｉ－１）化合物は式（Ｉ－１ａ）または式（Ｉ－１ｂ）で表される構造であり、式（ＩＩ－１）化合物は式（ＩＩ－１ａ）または式（ＩＩ－１ｂ）で表される構造である。

【化14】

【0087】

いくつかの実施手段では、式（Ｉ－１ａ）化合物は、構造

【化15】

から選ばれる。

【0088】

いくつかの実施手段では、式（Ｉ－１ｂ）化合物は、構造

【化16】

から選ばれる。

【0089】

いくつかの実施手段では、式（ＩＩ－１ａ）化合物は、構造

【化17】

から選ばれる。

【0090】

いくつかの実施手段では、式（ＩＩ－１ｂ）化合物は、

【化18】

から選ばれる。

【0091】

本発明はまた、式（Ｉ－ａ）、式（Ｉ－ｂ）、式（ＩＩ－ａ）及び式（ＩＩ－ｂ）化合物または塩を調製する方法に関し、これにより、基本的に光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体を合成し、該誘導体は、基本的に他の立体異性体を含まない。調製されたこのような化合物は基本的に純粋な立体異性体形態であり、異性体純度は少なくとも９８％ｅｅであり、最も好ましくは少なくとも９９％ｅｅである。異性体過剰値によって提供されたのは、マイナー異性体のパーセンテージがそれと同時に存在しているメジャー異性体のパーセンテージを超える定量的測定であり、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キラルガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、キラルシフト試薬を使用する核磁気共鳴（ＮＭＲ）など、本分野で確立された方法や、公知の適切な方法によって容易に測定されることができる。

【0092】

理解すべきこととして、本発明の範囲内で、本発明の上記各技術的特徴と以下（例えば実施例）で具体的に説明される各技術的特徴との間に互いに組み合わせることができ、これにより新しいまたは好ましい技術的解決手段を構成する。本文のスペースの制限により、ここで一々に繰り返して説明しない。

【図面の簡単な説明】

【0093】

【図1】化合物Ｖ５の単結晶構造図である。

【図2】化合物Ｖ６の単結晶構造図である。

【発明を実施するための形態】

【0094】

本発明者らは、広範囲にわたる綿密な研究の結果、このような光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体が、優れた鎮痛効果を有するだけでなく、良好なバイアスも有し、なお、本発明の化合物は、優れた薬物動態特性を備えることを予期せず発見した。このため、この一連の化合物は、疼痛及び疼痛関連疾患を治療及び予防するための医薬品として開発されることが期待されている。これに基づいて、本発明者らは本発明を完成させた。

【0095】

用語の定義

【0096】

本明細書で使用されるように、「アルキル」とは、直鎖及び分枝鎖の飽和脂肪族炭化水素基を指し、Ｃ_１－１０アルキルは１～１０個の炭素原子を含むアルキルであり、好ましくはＣ_１－６アルキルであり、より好ましくはＣ_１－３アルキルであり、定義は類似し、アルキルの非限定的な例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチル、ｎ－ヘプチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、４－メチルヘキシル、５－メチルヘキシル、２，３－ジメチルペンチル、２，４－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル、３－エチルペンチル、ｎ－オクチル、２，３－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、４，４－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル、３－エチルヘキシル、４－エチルヘキシル、２－メチル－２－エチルペンチル、２－メチル－３－エチルペンチル、ｎ－ノニル、２－メチル－２－エチルヘキシル、２－メチル－３－エチルヘキシル、２，２－ジエチルペンチル、ｎ－デシル、３，３－ジエチルヘキシル、２，２－ジエチルヘキシルを含むが、より好ましくはその様々な分枝鎖異性体等である。

【0097】

本明細書で使用されるように、「アルケニル」とは、直鎖または分枝鎖の炭素－炭素二重結合（Ｃ＝Ｃ）を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指し、好ましくは２－１０個（Ｃ_２－１０）、より好ましくは２－６個（Ｃ_２－６）、より好ましくは２－４個（Ｃ_２－４）の炭素原子を有する。アルケニルの非限定的な実施例は、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ｎ－ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等を含む。

【0098】

本明細書で使用されるように、「アルキニル」とは、直鎖と分枝鎖の炭素－炭素三重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指し、好ましくは２－１０個（Ｃ_２－１０）、より好ましくは２－６個（Ｃ_２－６）、より好ましくは２－４個（Ｃ_２－４）の炭素原子を有する。アルキニルの非限定的な実施例は、エチニル、プロピニル、ｎ－ブチニル、イソブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等を含む。

【0099】

本明細書で使用されるように、「シクロアルキル」と「シクロアルキル環」は交換可能に使用されることができ、両方とも飽和または部分的に不飽和の単環式または多環式の環状炭化水素基を指し、「Ｃ_３－８シクロアルキル」とは、３～８個の炭素原子を含む環状炭化水素基を指し、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルであり、定義は類似する。シクロアルキルの非限定的な実施例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル等を含み、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキセニルである。

【0100】

本明細書で使用されるように、「スピロ環」とは、単一の環間で１つの炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）が共有される多環式基を指し、これらは、１つまたは複数の二重結合を含むことができるが、完全に共役したπ電子系を持つ環はない。環の数に応じて、スピロ環は二重スピロ環またはポリスピロ環に分類され、好ましくは二重スピロ環である。より好ましくは４員／５員、５員／５員または５員／６員の二重スピロ環である。例えば

【化19】

である。

【0101】

本明細書で使用されるように、「スピロ複素環」とは、単一の環間で１つの原子（スピロ原子と呼ばれる）が共有される多環式炭化水素を指し、ここで、１つまたは２つの環原子は窒素、酸素またはＳ（Ｏ）_ｎ（ｎは０から２までの整数である）のヘテロ原子から選ばれ、残りの環原子は炭素である。これらは、１つまたは複数の二重結合を含むことができるが、完全に共役したπ電子系を持つ環はない。環の数に応じて、スピロ複素環はビススピロ複素環またはポリスピロ複素環に分類され、好ましくはビススピロ複素環である。より好ましくは４員／５員、５員／５員または５員／６員のビススピロ複素環である。例えば

【化20】

である。

【0102】

本明細書で使用されるように、「架橋環」とは、２つまたは２つ以上の炭素原子を共有する多環式基を指し、共有される炭素原子は橋頭炭素と呼ばれ、２つの橋頭炭素の間は炭素鎖であってもよいし、１つの結合であってもよく、橋と呼ばれる。これらは、１つまたは複数の二重結合を含むことができるが、完全に共役したπ電子系を持つ環はない。好ましくは、二環式または三環式架橋環である。例えば

【化21】

である。

【0103】

本明細書で使用されるように、「架橋複素環」は、２つまたは２つ以上の原子を共有する多環式基を指し、１つまたは複数の環原子は窒素、酸素またはＳ（Ｏ）_ｎ（ｎは０から２までの整数である）のヘテロ原子から選ばれ、残りの環原子は炭素である。これらは、１つまたは複数の二重結合を含むことができるが、完全に共役したπ電子系を持つ環はない。好ましくは二環式または三環式架橋複素環である。例えば

【化22】

である。

【0104】

本明細書で使用されるように、「８～１０員の二環式環」とは、８～１０個の環原子を含む２つの環を含む架橋環を指し、二環式環は、飽和全炭素二環式環または部分的に不飽和の全炭素二環式環であってもよく、８～１０員の二環式環の例は、

【化23】

を含む（これらに制限されない）。

【0105】

本明細書で使用されるように、「８～１０員の二重複素環」とは、８～１０個の環原子を含む２つの環を含む架橋複素環を指し、１、２、３、４または５個の環炭素原子は、窒素、酸素または硫黄から選ばれるヘテロ原子によって置換される。８～１０員の二重複素環の例はテトラヒドロキノリン、テトラヒドロイソキノリン、デカヒドロキノリン等を含む（これらに制限されない）。

【0106】

本明細書で使用されるように、「Ｃ_１－８アルコキシ」とは、－Ｏ－（Ｃ_１－８アルキル）を指し、アルキルの定義は以上のとおりである。好ましくはＣ_１－６アルコキシであり、好ましくはＣ_１－４アルコキシであり、より好ましくはＣ_１－３アルコキシである。アルコキシの非限定的な実施例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシ等を含む。

【0107】

本明細書で使用されるように、「Ｃ_３－８シクロアルコキシ」は、－Ｏ－（Ｃ_３－８シクロアルキル）を指し、シクロアルキルの定義は以上のとおりである。好ましくはＣ_３－６シクロアルコキシである。シクロアルコキシの非限定的な実施例は、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ等を含む。

【0108】

本明細書で使用されるように、「Ｃ_６－１０アリール」と「Ｃ_６－１０芳香環」は交換可能に使用されることができ、両方とも共役したπ電子系を有する全炭素単環式または縮合多環式（つまり、隣接する炭素原子のペアを共有する環）基を指し、６～１０個の炭素原子を含むアリールを指し、好ましくはフェニルとナフチルであり、より好ましくはフェニルである。

【0109】

本明細書で使用されるように、「１つの結合」とは、それによって接続された２つの基が１つの共有結合によって接続されることを指す。

【0110】

本明細書で使用されるように、「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。

【0111】

本明細書で使用されるように、「ハロゲン化」とは、基内の１つまたは複数の（例えば１、２、３、４または５個）水素がハロゲンによって置換されることを指す。

【0112】

例えば、「ハロゲン化Ｃ_１－１０アルキル」とは、アルキルが１つまたは複数の（例えば１、２、３、４または５個）ハロゲンによって置換されることを指し、アルキルの定義は以上のとおりである。好ましくはハロゲン化Ｃ_１－８アルキルであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－６アルキルであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－４アルキルであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキルである。ハロゲン化Ｃ_１－６アルキルの例は、モノクロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、モノクロロエチル、１，２－ジクロロエチル、トリクロロエチル、モノブロモエチル、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、モノフルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル等を含む（これらに制限されない）。

【0113】

また例えば、「ハロゲン化Ｃ_１－１０アルコキシ」とは、アルコキシが１つまたは複数の（例えば１、２、３、４または５個）ハロゲンによって置換されることを指し、アルコキシの定義は以上のとおりである。好ましくはハロゲン化Ｃ_１－８アルコキシであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－４アルコキシであり、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシである。ハロゲン化アルコキシは、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、モノフルオロメトキシ、モノフルオロエトキシ、ジフルオロメトキシ、ジフルオロエトキシ等を含む（これらに制限されない）。

【0114】

また例えば、「ハロゲン化Ｃ_３－８シクロアルキル」とは、シクロアルキルが１つまたは複数の（例えば１、２、３、４または５個）ハロゲンによって置換されることを指し、シクロアルキルの定義は以上のとおりである。好ましくはハロゲン化Ｃ_３－６シクロアルキルである。ハロゲン化シクロアルキルは、トリフルオロシクロプロピル、モノフルオロシクロプロピル、モノフルオロシクロヘキシル、ジフルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロヘキシル等を含む（これらに制限されない）。

【0115】

本明細書で使用されるように、「重水素化Ｃ_１－８アルキル」とは、アルキルが１つまたは複数の（例えば１、２、３、４または５個）重水素原子によって置換され、アルキルの定義は以上のとおりである。好ましくは重水素化Ｃ_１－６アルキルであり、より好ましくは重水素化Ｃ_１－３アルキルである。重水素化アルキルの例は、モノ重水素化メチル、モノ重水素化エチル、ジ重水素化メチル、ジ重水素化エチル、三重水素化メチル、三重水素化エチル等を含む（これらに制限されない）。

【0116】

本明細書で使用されるように、「アミノ」とはＮＨ_２、「シアノ」とはＣＮ、「ニトロ」とはＮＯ_２、「ベンジル」とは－ＣＨ_２－フェニル、「オキソ」とは＝Ｏ、「カルボキシル」とは－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、「アセチル」とは－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、「ヒドロキシメチル」とは－ＣＨ_２ＯＨ、「ヒドロキシエチル」とは－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨまたは－ＣＨＯＨＣＨ_３、「ヒドロキシ」とは－ＯＨ、「チオール」とはＳＨ、「シクロプロピリデン」構造は

【化24】

である。

【0117】

本明細書で使用されるように、「ヘテロアリール環」と「ヘテロアリール」は交換可能に使用されることができ、５～１０個の環原子を有し、環配列内で６、１０または１４個のπ電子を共有し、且つ炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子の基を有することを指す。「ヘテロ原子」とは窒素、酸素または硫黄を指す。好ましくは５または６員の単環式ヘテロアリールまたは８～１０員の二環式環ヘテロアリールである。

【0118】

本明細書で使用されるように、「３～７員（４～７員）の飽和単環」とは、３～７個の環原子を含む飽和全炭素単環を指し、好ましくは３～６員の飽和単環式環である。飽和単環の例は、シクロプロピル環、シクロブチル環、シクロペンチル環、シクロヘキシル環、シクロヘプチル環、シクロオクチル環等を含む（これらに制限されない）。

【0119】

本明細書で使用されるように、「３～７員（４～７員）の飽和単複素環」とは、３～７員の飽和単環式環内の１、２または３個の炭素原子は窒素、酸素またはＳ（Ｏ）_ｔ（ｔは０から２までの整数である）から選ばれるヘテロ原子によって置換されるが、－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－または－Ｓ－Ｓ－を含まない環部分を指し、残りの環原子は炭素であり、好ましくは４～６員の飽和単複素環であり、より好ましくは５～６の飽和単複素環である。飽和単複素環の例はプロピレンオキシド、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、ピロリン、オキサゾリジン、ピペラジン、ジオキソラン、ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド、テトラヒドロピラン等を含む（これらに制限されない）。

【0120】

本明細書で使用されるように、「５または６員の単環式ヘテロアリール環」と「５または６員の単環式ヘテロアリール」は交換可能に使用されることができ、両方とも５～６個の環原子を含むモノヘテロアリール環を指し、例えばチオフェン環、フラン環、チアゾール環、イミダゾール環、オキサゾール環、ピロール環、ピラゾール環、トリアゾール環、１，２，３－トリアゾール環、１，２，４－トリアゾール環、１，２，５－トリアゾール環、１，３，４－トリアゾール環、テトラゾール環、イソオキサゾール環、オキサジアゾール環、１，２，３－オキサジアゾール環、１，２，４－オキサジアゾール環、１，２，５－オキサジアゾール環、１，３，４－オキサジアゾール環、チアジアゾール環、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環等を含む（これらに制限されない）。

【0121】

本明細書で使用されるように、「８～１０員の二環式環ヘテロアリール環」と「８～１０員の二環式環ヘテロアリール」は交換可能に使用されることができ、両方とも８～１０個の環原子を含む二環式アリール環を指し、例えば、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、イソインドール、キノリン、イソキノリン、インダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、フタラジン、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン、ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン、ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン、ピリド［４，３－ｄ］ピリミジン、１，８－ナフチリジン、１，７－ナフチリジン、１，６－ナフチリジン、１，５－ナフチリジンを含む（これらに制限されない）。

【0122】

本明細書で使用されるように、「置換された」とは、基中の１つまたは複数の水素原子、好ましくは１～５個の水素原子が互いに独立して対応する数の置換基によって置換され、より好ましくは１～３個の水素原子が互いに独立して対応する数の置換基によって置換される。言うまでもなく、置換基は、それらの可能な化学的位置にのみあり、当業者は、過℃の努力なしに（実験的または理論的に）可能なまたは不可能な置換を決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノまたはヒドロキシは不飽和（例えばオレフィン）結合を有する炭素原子と結合するときに不安定になる可能性がある。

【0123】

別途の定義がない限り、本発明に記載の「それぞれ独立して……から選ばれる置換基」とは、基上の１つ以での水素が置換基によって置換される場合、前記の置換基の種類は同じであっても異なっていてもよいことを指し、選ばれた置換基はそれぞれ独立した種類である。

【0124】

別途の定義がない限り、本発明に記載の「……同じまたは異なり、且つそれぞれ独立して……である」とは、一般式に１つ以上の同一の置換基が複数ある場合、この基は同じであっても異なっていてもよく、それぞれ独立した種類である。例えばＬは（ＣＲ_０１Ｒ_０２）_ｓであり、ｓが２である場合、Ｌは（ＣＲ_０１Ｒ_０２）－（ＣＲ_０１Ｒ_０２）であり、その中の２つのＲ_０１またはＲ_０２は同じであっても異なっていてもよく、それぞれ独立した種類であり、例えばＬはＣ（ＣＨ_３）（ＣＮ）－Ｃ（ＣＨ_２ＣＨ_３）（ＯＨ）、Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＮ）－Ｃ（ＣＨ_３）（ＯＨ）またはＣ（ＣＮ）（ＣＨ_２ＣＨ_３）－Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ_２ＣＨ_３）であってもよい。

【0125】

別途の定義がない限り、本文のいずれかの基は置換または非置換であってもよい。上記基が置換される場合、置換基は好ましくは１～５個以下の基であり、独立してＣＮ、ハロゲン、Ｃ_１－１０アルキル（好ましくはＣ_１－６アルキル、より好ましくはＣ_１－３アルキル）、Ｃ_１－１０アルコキシ（好ましくはＣ_１－６アルコキシ、より好ましくはＣ_１－３アルコキシ）、ハロゲン化Ｃ_１－８アルキル（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－６アルキル、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルキル）、Ｃ_３－８シクロアルキル（好ましくはＣ_３－６シクロアルキル）、ハロゲン化Ｃ_１－８アルコキシ（好ましくはハロゲン化Ｃ_１－６アルコキシ、より好ましくはハロゲン化Ｃ_１－３アルコキシ）、Ｃ_１－８アルキル置換アミン、アミン、ハロゲン化Ｃ_１－８アルキル置換アミン、アセチル、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、カルボキシル、ニトロ、Ｃ_６－１０アリール（好ましくはフェニル）、Ｃ_３－８シクロアルコキシ（好ましくはＣ_３－６シクロアルコキシ）、Ｃ_２－１０アルケニル（好ましくはＣ_２－６アルケニル、より好ましくはＣ_２－４アルケニル）、Ｃ_２－１０アルキニル（好ましくはＣ_２－６アルキニル、より好ましくはＣ_２－４アルキニル）、－ＣＯＮＲ_ａ０Ｒ_ｂ０、－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１－１０アルキル（好ましくは－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１－６アルキル、より好ましくは－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１－３アルキル）、－ＣＨＯ、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－１０アルキル（好ましくは－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－６アルキル、より好ましくは－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－３アルキル）、－ＳＯ_２Ｃ_１－１０アルキル（好ましくは－ＳＯ_２Ｃ_１－６アルキル、より好ましくは－ＳＯ_２Ｃ_１－３アルキル）、－ＳＯ_２Ｃ_６－１０アリール（好ましくは－ＳＯ_２Ｃ_６アリール、例えば－ＳＯ_２－フェニル）、－ＣＯＣ_６－１０アリール（好ましくは－ＣＯＣ_６アリール、例えば－ＣＯ－フェニル）、４～６員の飽和または不飽和単複素環、４～６員の飽和または不飽和単環、５～６の単環式ヘテロアリール環、８～１０員の二環式環ヘテロアリール環、スピロ環、スピロ複素環、架橋環または架橋複素環から選ばれ、Ｒ_ａ０、Ｒ_ｂ０はそれぞれ独立して水素またはＣ_１－３アルキルである。

【0126】

本文の以上で記載の様々な置換基は、それ自体が本文に記載の基によって置換されることができる。

【0127】

本文に記載の４～６員（５～６員）の飽和単複素環が置換される場合、置換基の位置は、それらの可能な化学的位置にあることができ、例示的な単複素環の代表的な置換状況は以下のように示され、

【化25】

【0128】

別途の定義がない限り、本発明に記載の４～６員の飽和単複素環が置換基である場合、それ自体が置換であるか、または、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１－３アルキル、Ｏ＝、ＮＲ_ａ０Ｒ_ｂ０、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、カルボキシル、－Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１－３アルキル、アセチル、ハロゲン化Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_３－６シクロアルキル、アゼチジン、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピロール、ピペリジン、オキサゾリジン、ピペラジン、ジオキソラン、ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１，１－ジオキシド、テトラヒドロピラン、チオフェン環、Ｎ－アルキルピロール環、フラン環、チアゾール環、イミダゾール環、オキサゾール環、ピロール環、ピラゾール環、トリアゾール環、テトラゾール環、イソオキサゾール環、オキサジアゾール環、チアジアゾール環、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環から選ばれる１、２または３個の置換基によって置換されることができ、Ｒ_ａ０、Ｒ_ｂ０はそれぞれ独立して水素またはＣ_１－３アルキルである。

【0129】

前記「薬学的に許容される塩」は薬学的に許容される酸付加塩及び薬学的に許容される塩基付加塩を含む。

【0130】

「薬学的に許容される酸付加塩」とは、他の副作用なしに遊離塩基の生物学的有効性を保持する無機または有機酸と形成された塩を指す。

【0131】

「薬学的に許容される塩基付加塩」は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等の無機塩基の塩を含むが、これらに制限されない。アンモニウム塩、トリエチルアミン塩、リジン塩、アルギニン塩等の有機塩基の塩を含むが、これらに制限されない。

【0132】

本発明で言及された「溶媒和物」とは、本発明の化合物と溶媒とによって形成される複合体を指す。それらは溶媒中で反応するか、または溶媒から沈殿析出または結晶化する。例えば、水と形成された複合体は「水和物」と呼ばれる。式（Ｉ）化合物の溶媒和物は本発明の範囲内に属する。

【0133】

本発明は上記化合物のプロドラッグを含む。プロドラッグは既知のアミノ保護基とカルボキシル保護基を含み、これらは生理学的条件下で水を加えて分解されるか、酵素反応を介して放出されて親化合物を生成する。具体的なプロドラッグ調製方法は（Ｓａｕｌｎｉｅｒ、Ｍ．Ｇ．、Ｆｒｅｎｎｅｓｓｏｎ、Ｄ．Ｂ．、Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ、Ｍ．Ｓ．、Ｈａｎｓｅｌ、Ｓ．Ｂ ａｎｄ Ｖｙｓａ、Ｄ．Ｍ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．ＣｈｅｍＬｅｔｔ．１９９４、４、１９８５－１９９０、及びＧｒｅｅｎｗａｌｄ、Ｒ．Ｂ．、Ｃｈｏｅ、Ｙ．Ｈ．、Ｃｏｎｏｖｅｒ、Ｃ．Ｄ．、Ｓｈｕｍ、Ｋ．、Ｗｕ、Ｄ．、Ｒｏｙｚｅｎ、Ｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００、４３、４７５．）を参照することができる。

【0134】

通常、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはプロドラッグは１つまたは複数の薬学的に許容される担体とともに適切な剤形で投与することができる。これらの剤形は経口、直腸投与、局所投与、口内投与及び他の非経口投与（例えば、皮下、筋肉、静脈等）に適する。例えば、経口投与に適した剤形はカプセル、錠剤、顆粒剤及びシロップなどを含む。これらの製剤に含まれた本発明の化合物は固体粉末または顆粒、水性または非水性液体中の溶液または懸濁液、油中水型または水中油型のエマルジョン等であってもよい。上記剤形は活性化合物及び１つまたは複数の担体または補助材料から従来の薬局の方法によって調製されることができる。上記の担体は活性化合物またはその他補助材料と適合性である必要がある。固体製剤の場合、一般的に使用される非毒性担体は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、グルコース、スクロースなどを含むが、これらに制限されない。液体製剤用の担体は、水、生理食塩水、水性デキストロース、エチレングリコール及びポリエチレングリコール等を含む。活性化合物は上記の担体と溶液または懸濁液を形成することができる。

【0135】

本発明の組成物は、標準的な医療行為と一致する方法で調製、定量及び投与される。投与される化合物の「治療有効量」は、治療対象の具体的な病症、治療の個体、病症の原因、医薬品の標的及び投与方法等の要因によって決定される。

【0136】

本明細書で使用されるように、「治療有効量」とは、個体において生物学的または医学的応答を誘発し、例えば酵素またはタンパク質活性の低下または阻害、または症状の改善、病症の緩和、または疾患の進行の遅延、または疾患等の予防の本発明の化合物の量を指す。

【0137】

通常、治療的使用のための本発明の化合物の有効用量は、本発明の実践において大きく変化することができ、具体的な適用、疾患または関連する疾患病状に応じて、該用量は当業者によって容易に決められるが、本文に記載の各関連組成物について、及び本文に記載の各疾患の治療効果を達成するために、本発明の医薬組成物に含まれる本発明の式（Ｉ）または式（ＩＩ）化合物またはその薬学的に許容される塩、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグの適切な治療有効用量は、典型的に１日あたり患者体重１キログラムあたり０．１μｇから５ｇ、好ましくは１日あたり患者体重１キログラムあたり１ｍｇから１０００ｍｇである。

【0138】

必要な用量は、好ましくは、１日間適切な間隔で２、３、４、５、６またはそれ以上のサブ用量で投与される。これらのサブ用量は、単位用量形態で投与することができ、例えば、各単位用量は１０μｇから１０００ｍｇ、好ましくは５０μｇから５００ｍｇ、より好ましくは５０μｇから２５０ｍｇ、最も好ましくは５０μｇ～１０ｍｇの活性成分である。または、患者の病気が必要な場合、用量は連続注入として投与することができる。

【0139】

本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される担体」とは、非毒性、不活性、固体、半固体の物質または液体充填機、希釈剤、包装材料または補助製剤または任意の種類の補助材料を指し、患者と適合性であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは人であり、薬剤の活性を停止することなく、活性薬剤を目標標的に送達するのに適する。

【0140】

本明細書で使用されるように、「患者」とは、動物を指し、好ましくは哺乳動物であり、より好ましく人である。用語「哺乳動物」とは、例えば、猫、イヌ、ウサギ、クマ、キツネ、オオカミ、サル、シロアシネズミ、ブタ、及びヒトを含む温血脊椎類哺乳動物を指す。

【0141】

本明細書で使用されるように、「治療」とは、既存の疾患または病症（例えば癌）を軽減、進行遅延、減衰、予防、または維持することを指す。治療は、疾患または病症の１つまたは複数の症状の治癒、発症の予防またはある程度までの軽減も含む。

【0142】

調製方法

【0143】

以下の実施例では具体的な条件が付記されない実験方法について、通常、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ等人、分子クローニング：実験室マニュアル（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９）に記載されている条件、または製造元が提案している条件の従来の条件に従う。

【0144】

別途の定義がない限り、本文で使用される用語は当業者が良く知られている用語と同じ意味を有する。なお、記載された内容と類似または同等の任意の方法及び材料はいずれも本発明に適用できる。

【0145】

本発明で使用される化合物の調製方法は以下の通りである。

【0146】

本発明の式（Ｉ）と式（ＩＩ）で表される化合物は既知の方法、例えば、以下の方法、それと同等の方法または実施例に記載の方法によって調製されることができる。以下の調製方法では、原料化合物は塩の形態であってもよく、該塩は本発明の式（Ｉ）と式（ＩＩ）で表される化合物に例示される任意の薬学的に許容される塩であってもよい。

【0147】

反応手段（ａ）

【化26】

（上記手段の各式では、アスタリスク＊は、キラル炭素原子はＲまたはＳ構成であることを表す（以下も同じ）、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0148】

具体的に、式（Ｉ）で表される化合物は以下の方法によって調製されることができ、式Ｉ－１化合物と化合物１ｂを還元的アミノ化反応させて式（Ｉ）化合物を調製する。還元的アミノ化反応は、不活性溶媒中で、一定の温度（例えば－２０℃～８０℃、好ましくは０℃～６０℃、より好ましくは２０℃～６０℃）で、式（Ｉ－１）化合物、化合物１ｂ及び還元剤を一定時間（例えば０．５時間～４８時間、好ましくは０．５時間～５時間）反応させ、これにより、式（Ｉ）の化合物を取得する。不活性溶媒及び還元剤は当該分野で知られている可能性があり、還元剤は、例えばテトラブチルアミン水素化ホウ素、マロニルオキシボロヒドリドナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム、ボラン等から選ばれることができる。不活性溶媒は、例えばＣ_１－４アルキルアルコール、トルエン、キシレン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、１、２－ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド等、またはその組み合わせから選ばれることができる。

【0149】

式Ｉ－１化合物は反応手段（ａ－１）、または反応手段（ａ－２）によって調製されることができる。

【0150】

反応手段（ａ－１）

【化27】

（上記手段の各式では、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0151】

具体的に、式（ｉ－２）で表される化合物は式（ｉ－１）化合物と（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドの縮合反応（チタン酸テトラエチル、チタン酸テトライソプロピルなどの触媒を使用する）によって調製され、式（ｉ－２）で表される化合物は還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムトリセックブチル、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ジイソブチルアルミニウム）で還元され、高速液体クロマトグラフィーにより分離して２つの単一の異性体である式（ｉ－３ａ）と（ｉ－３ｂ）で表される化合物を調製し、式（ｉ－３ａ）と（ｉ－３ｂ）で表される化合物に対して酸（例えば、塩化水素）で脱アミノ保護基を行い、それぞれ式（Ｉ－１ａ）と（Ｉ－１ｂ）で表される化合物を取得する。

【0152】

反応手段（ａ－２）

【化28】

（上記手段の各式では、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0153】

具体的に、式（ｉ－２）で表される化合物は式（ｉ－１）化合物と（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドの縮合反応（チタン酸テトラエチル、チタン酸テトライソプロピルなどの触媒を使用する）によって調製され、式（ｉ－２）で表される化合物は、キラル分割によって２つの単一異性体式（ｉ－２ａ）と式（ｉ－２ｂ）で表される化合物が得られ、式（ｉ－２ａ）と式（ｉ－２ｂ）で表される化合物をそれぞれ還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムトリセックブチル、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ジイソブチルアルミニウム）で還元し、式（ｉ－３ａ）と（ｉ－３ｂ）で表される化合物を取得し、式（ｉ－３ａ）と（ｉ－３ｂ）で表される化合物に対して酸（例えば、塩化水素）で脱アミノ保護基を行い、それぞれ式（Ｉ－１ａ）と（Ｉ－１ｂ）で表される化合物を取得する。

【0154】

反応手段（ａ－１）と（ａ－２）のキラルアジュバントである（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドは同様なキラル誘導作用を持つ他のキラルアジュバントに交換することもでき、例えば（Ｓ）－メチルベンジルアミンである。

【0155】

反応手段（ｂ）

【化29】

（上記手段の各式では、＊はＲまたはＳ構成であり、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0156】

具体的に、式（ＩＩ）で表される化合物は以下の方法によって調製されることもでき、式ＩＩ－１で表される化合物と化合物１ｂを還元的アミノ化反応させて、式（ＩＩ）で表される化合物を調製する。還元的アミノ化反応は不活性溶媒中で、一定の温度（例えば－２０℃～８０℃、好ましくは０℃～６０℃、より好ましくは２０℃～６０℃）で、式（ＩＩ－１）化合物、化合物１ｂを還元剤と一定の時間（例えば０．５時間～４８時間、好ましくは０．５時間～５時間）反応させた後、これにより、式（ＩＩ）化合物を取得する。不活性溶媒と還元剤は当該分野で知られている可能性があり、還元剤は、例えばテトラブチルアミン水素化ホウ素、マロニルオキシボロヒドリドナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素カリウム、ボラン等から選ばれることができる。不活性溶媒は、例えばＣ_１－４アルキルアルコール、トルエン、キシレン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、エーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、１、２－ジクロロエタン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド等、またはその組み合わせから選ばれることができる。

【0157】

式ＩＩ－１化合物は反応手段（ｂ－１）または反応手段（ｂ－２）によって調製されることができる。

【0158】

反応手段（ｂ－１）

【化30】

（上記手段の各式では、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0159】

具体的に、式（ｉｉ－２）で表される化合物は、式（ｉｉ－１）化合物と（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドの縮合反応（チタン酸テトラエチル、チタン酸テトライソプロピルなどの触媒を使用する）によって調製され、式（ｉｉ－２）で表される化合物を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムトリセックブチル、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ジイソブチルアルミニウム）で還元し、高速液体クロマトグラフィーにより分離して式（ｉｉ－３ａ）と（ｉｉ－３ｂ）で表される化合物を調製し、式（ｉｉ－３ａ）と（ｉｉ－３ｂ）で表される化合物に対して酸（例えば、塩化水素）で脱アミノ保護基を行い、それぞれ式（ＩＩ－１ａ）と（ＩＩ－１ｂ）で表される化合物を取得する。

【0160】

反応手段（ｂ－２）

【化31】

（上記手段の各式では、すべての基の定義は、明細書に記載されているとおりである。）

【0161】

具体的に、式（ｉｉ－２）で表される化合物は、式（ｉｉ－１）化合物と（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドの縮合反応（チタン酸テトラエチル、チタン酸テトライソプロピルなどの触媒を使用する）によって調製され、式（ｉｉ－２）で表される化合物は、キラル分割によって２つの単一異性体式（ｉｉ－２ａ）と式（ｉｉ－２ｂ）で表される化合物が得られ、式（ｉｉ－２ａ）で表される化合物と式（ｉｉ－２ｂ）で表される化合物を還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムトリセックブチル、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ジイソブチルアルミニウム）で還元し、式（ｉｉ－３ａ）と（ｉｉ－３ｂ）で表される化合物を取得し、式（ｉｉ－３ａ）と（ｉｉ－３ｂ）で表される化合物に対して酸（例えば、塩化水素）で脱アミノ保護基を行い、それぞれ式（ＩＩ－１ａ）と（ＩＩ－１ｂ）で表される化合物を取得する。

【0162】

反応手段（ｂ－１）と（ｂ－２）のキラルアジュバント（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドは、同様なキラル誘導作用を持つ他のキラルアジュバントに交換することもでき、例えば（Ｒ）－メチルベンジルアミンである。

【0163】

本発明で使用されるアミノ、カルボキシルまたはヒドロキシを有する化合物は、必要に応じて該基に一般的に使用される保護基によって保護された化合物を使用して調製することができ、上記反応手段の反応過程を経た後、既知の脱保護反応を実施することができる。

【0164】

従来の技術と比べて、本発明の主な利点は、以下のとおりであり、
一連の構造が新規な光学的に純粋なオキサスピロ置換ピロロピラゾール誘導体を提供し、ｃＡＭＰに対して高い阻害活性（ＥＣ_５０は１ｎＭ～５０ｎＭ、より好ましくは１ｎＭ～３０ｎＭ、最も好ましくは１ｎＭ～１０ｎＭ）、及び高いＥｍａｘ値（Ｅｍａｘが５０％より大きく、より好ましくはＥｍａｘが８０％より大きい）を有すると同時に、優れた鎮痛効果を有し、なお、本発明の化合物はβ－ａｒｒｅｓｔｉｎに対して低いＥｍａｘ値（Ｅｍａｘが５０％より小さく、より好ましくはＥｍａｘが２０％より小さく、最も好ましくはＥｍａｘが１０％より小さい）、バイアスがよい。このため、疼痛及び疼痛関連疾患を治療及び予防するための医薬品として開発されることができる。

【0165】

以下、具体的な実施例を組み合わせて、本発明を更に説明する。理解すべきこととして、これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を制限するためのものではない。以下の実施例では、具体的な条件が付記されていない実験方法について、通常、従来の条件または製造元が提案している条件の従来の条件に従う。別途に説明されていない限り、パーセントと部数は重量で計算する。別途の定義がない限り、本文で使用される用語は当業者でよく知られている用語と同じ意味を有する。なお、記載された内容と類似または同等の任意の方法及び材料はいずれも本発明に適用できる。

【0166】

薬剤及び機器
^１ＨＮＭＲ：Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ－４００核磁気共鳴計、内部標準がテトラメチルシラン（ＴＭＳ）であり、
ＬＣ－ＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ／６１３０／６１５０ ＭＳＬＣ－ＭＳ質量分析計（メーカー：Ａｇｉｌｅｎｔ）、カラムＷａｔｅｒｓ ＢＥＨ／ＣＨＳ、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ。
単結晶検出は、ＢｒｕｋｅｒのＤ８ ｖｅｎｔｕｒｅ Ｘ線単結晶回折計を使用して測定する。
調製高速液体クロマトグラフィー（ｐｒｅ－ＨＰＬＣ）：ＧＸ－２８１（メーカー：ギルソン）。
ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ－Ｒｆ７５またはＲｆ２００型自動カラムフィルターを使用し、Ａｇｅｌａ ４ｇ、１２ｇ、２０ｇ、４０ｇ、８０ｇ、１２０ｇ使い捨てシリカカラムである。
既知の出発原料は本分野で知らている方法を使用するか、またはそれに従って合成することができ、またはＡＢＣＲｇｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ、Ｓｈａｏｙｕａｎ ＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ａｃｃｅｌａ ＣｈｅｍＢｉｏ Ｉｎｃ）とＤａｒｕｉＣｈｅｍｉｃａｌｓ等の企業から購入されることができる。

【0167】

実施例では、反応の進行は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で監視でき、化合物はカラムクロマトグラフィーで精製できる。カラムクロマトグラフィーまたはＴＬＣで使用される展開溶媒糸は、ジクロロメタンとメタノール系、ｎ－ヘキサンと酢酸エチル系、石油エーテルと酢酸エチル系、及びアセトン系等から選ばれることができ、溶媒の体積比は、化合物の極性に応じて調整される。

【0168】

本明細書で使用されるように、ＤＣＥは１，２－ジクロロエタンであり、ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、ＥＡは酢酸エチルであり、ＰＥは石油エーテルであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ｎ－ＢｕＬｉはｎ－ブチルリチウムであり、ＨＡＴＵは２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェートであり、ＤＭＦはジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡはＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、ＤＢＵは１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク－７－エンであり、ＤＩＢＡＬ－Ｈは水素化ジイソブチルアルミニウムである。

【0169】

本明細書で使用されるように、室温とは、約２０－２５℃を指す。

【0170】

中間体１ｂ

【化32】

（Ｒ）－２－（９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）アセトニトリル（１１ｇ、４３ｍｍｏｌ、上海予成医薬科技有限公司から購入し、ＣＡＳＮｏ．１４０１０３１－３８－６）をＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に溶解し、－７８℃で水素化ジイソブチルアルミニウム溶液（１．０Ｍ、８６ｍｌ）を滴下し、－７８℃で１時間攪拌する。反応液に硫酸ナトリウム十水和物（３０ｇ）を加え、室温で半時間攪拌し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、黄色の油性中間体を取得する。中間体をエタノール（１００ｍｌ）溶液に溶解し、塩酸（６Ｎ、１００ｍｌ）溶液を加え、１００℃で３６時間攪拌する。減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、（Ｒ）－２－（９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）アセトアルデヒド１ｂ（６．５ｇ）を取得し、収率は５９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２６０．２［Ｍ＋１］。

【0171】

中間体Ｖ１

【化33】

ステップ１では、ピバルデヒド（１７．２ｇ、０．２ｍｏｌ）を４００ｍＬのアセトニトリルに溶解し、トリエチルホスホリルアセテート（４８ｇ、０．２１ｍｏｌ）と塩化リチウム（８．８ｇ、０．２１ｍｏｌ）を加え、２－５℃まで冷却し、ＤＢＵ（３０．４ｇ、０．２ｍｏｌ）をゆっくりと加え、室温で１８時間反応させる。反応液を濃縮し、ＥＡ（３００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍｌ×２）で洗浄し、飽和食塩水（８０ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１０／１）で精製し、化合物Ｖ１－１（２５．６ｇ、黄色の油性液体）を取得し、収率は８２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１５７．２［Ｍ＋１］。

【0172】

ステップ２では、化合物Ｖ１－１（７．８ｇ、５０ｍｍｏｌ）とピラゾール（５．１ｇ、７５ｍｍｏｌ）を入れた密閉管にアセトニトリル溶液（８０ｍｌ）とＤＢＵ（１１．４ｇ、７５ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で４８時間撹拌し、室温まで冷却させ、濃縮し、残留物をＥＡ（１５０ｍｌ）で希釈し、水（６０ｍｌ×１）で洗浄し、飽和食塩水（３０ｍＬ×１）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝６／１）で精製し、化合物Ｖ１－２（８．９６ｇ、黄色の油性液体）を取得し、収率は８０％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２２５．１［Ｍ＋１］。

【0173】

ステップ３では、化合物Ｖ１－２（８．９６ｇ、４０ｍｍｏｌ）をメタノール／水（１００ｍｌ／２０ｍｌ）に溶解し、水酸化ナトリウム（３．２ｇ、８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌し、完全に反応させる。濃縮し、残留物を水（７０ｍｌ）で溶解し、２Ｍの塩酸でＰＨ＝３－４まで調整し、ＤＣＭ（９０ｍｌ×３）で抽出し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、化合物Ｖ１－３（７ｇ、黄色の油性液体）を取得し、収率は９０％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１９７．２［Ｍ＋１］。

【0174】

ステップ４では、化合物Ｖ１－３（７ｇ、３５．７ｍｍｏｌ）を乾燥したＴＨＦ（１２０ｍｌ）に溶解し、窒素保護下で、－７０℃まで冷却し、２．５ＭのブチルリチウムのＴＨＦ溶液（３５．７ｍｌ、８９．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下する。滴下が完了し、反応液を徐々に－４０℃に昇温し、４５分間撹拌する。反応液を３ｍｌの水でクエンチし、ろ過し、濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝６／１）で精製し、化合物Ｖ１（４．７６ｇ、黄色の油性液体）を取得し、収率は１５％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７９．２［Ｍ＋１］。

【0175】

中間体Ｖ２

【化34】

ステップ１では、１－メチルシクロプロパンカルボン酸（１０ｍｇ、０．１０ｍｏｌ）とＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１４．６ｇ、０．１５ｍｏｌ）を８０ｍＬのＤＭＦに加え、次に、順次にＨＡＴＵ（４５．６ｇ、０．１２ｍｏｌ）とＤＩＥＡ（５０ｍＬ、０．３０ｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させる。ＥＡ（５００ｍＬ）を加える。有機相を１Ｎの塩酸（１００ｍＬ×２）と飽和塩素化ナトリウム溶液（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離液システム（ＰＥ／ＥＡ＝１／０～１／１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ２－１（１１．３ｇ、淡黄色の油性物）を取得し、収率は７９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１４４．１［Ｍ＋１］。

【0176】

ステップ２では、化合物Ｖ２－１（１４．５ｇ，１０１ｍｍｏｌ）を９０ｍＬのエーテルに溶解し、－７８℃まで冷却し、１Ｍの水素化ジイソブチルアルミニウム（１５２ｍＬ、１５２ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下する。－７８℃で２時間反応した後、１ＭのＨＣｌ（１６ｍＬ）を加えてクエンチして反応し、０℃まで昇温してから１ＭのＨＣｌ（１６ｍＬ）を加える。無水硫酸ナトリウム（７０ｇ）で乾燥、ろ過し、化合物Ｖ２－２を取得する。

【0177】

ステップ３では、塩化リチウム（６．５ｇ、１５３ｍｍｏｌ）を６０ｍＬのアセトニトリルに加え、次に、順次にトリエチルホスホノアセテート（２４．５ｍＬ、１２２ｍｍｏｌ）とＤＢＵ（１８．１ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を加え、０℃まで冷却した後、化合物Ｖ２－２（８．５ｇ）を滴下し、室温で一晩反応させる。１５０ｍＬの水を加え、ＥＡ（１５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ／ＥＡ＝１／０～１０／１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ２－３（１０．５ｇ，無色の油性液体）を取得し、収率は６８％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１５５．０［Ｍ＋１］。

【0178】

ステップ４では、化合物Ｖ２－３（１０．５ｇ，０．０６８ｍｏｌ）、ピラゾール（９．３ｇ、０．１３７ｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１８．８ｇ、０．１３６ｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに加え、６５℃で４５時間反応する。室温まで冷却させ、３００ｍＬのＥＡを加え、水（１００ｍＬ）と飽和塩素化ナトリウム溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ／ＥＡ＝１／０～５／１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ２－４（１２．３ｇ，無色の油性液体）を取得し、収率は８２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２２３．１［Ｍ＋１］。

【0179】

ステップ５では、化合物Ｖ２－４（１２．３ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＴＨＦと２０ｍＬのメタノールに溶解し、水酸化リチウム一水和物（３．６ｇ、８５．７ｍｍｏｌ）と３０ｍＬの水を加え、室温で撹拌して２時間反応させる。６Ｍの塩酸溶液で反応液のｐＨ値を３に調整し、減圧下で有機溶媒をスピンオフし、水相をＤＣＭ（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィーにより化合物Ｖ２－５（９．２ｇ，無色の油性液体）を取得し、収率は８６％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１９５．０［Ｍ＋１］。

【0180】

ステップ６では、化合物Ｖ２－５（３．０５ｇ，１５．７ｍｍｏｌ）を８０ｍＬのＴＨＦに溶解し、－７８℃まで冷却し、２．５Ｍのｎ－ブチルリチウム（１５．７ｍＬ、３９．３ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下し、－７８℃で０．５時間反応させ、－４５℃で１時間反応させる。３０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、ＥＡ（５０ｍＬ×４）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ／ＥＡ＝１／０～３／１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ２（４６０ｍｇ，無色の油性液体）を取得し、収率は１６．７％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７７．０［Ｍ＋１］。

【0181】

中間体Ｖ３

【化35】

ステップ１では、３Ｌの一口フラスコにトリエチルホスホノアセテート（４７６ｍＬ，２．４ｍｏｌ）、ＤＢＵ（３６５ｇ、２．４ｍｏｌ）、塩化リチウム（１２７ｇ、３ｍｏｌ）及びアセトニトリル（１．２Ｌ）を加え、アルゴン保護下で室温で２０分間撹拌する。０℃（内部温度）まで冷却し、イソブチルアルデヒド（１４４ｇ、２ｍｏｌ）をゆっくりと滴下する。室温で１２時間撹拌する。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示し、ろ過し、フィルターケーキをＥＡ（１００ｍＬ×２）で洗浄する。水（１Ｌ）を加え、ＥＡ（１．５Ｌ×２）で抽出し、飽和塩素化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、スピンドライして化合物Ｖ３－１（１７５ｇ、無色の液体）を取得する。

【0182】

ステップ２では、化合物Ｖ３－１（３００ｇ，２．１ｍｏｌ）を入れた３Ｌの一口フラスコにＤＭＦ（１Ｌ）を加え、撹拌下で、炭酸カリウム（５７９ｇ，４．２ｍｏｌ）及びピラゾール（２８７ｇ，４．２ｍｏｌ）を加え、６５℃で、１８時間撹拌し、ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示し、直接スピンドライし、残留固体をアセトニトリル（１５０ｍｌ）でスラリー化し、ろ過して白色の固体を取得する。ろ過し、フィルターケーキをＥＡ（５００ｍＬ×２）で洗浄する。飽和食塩水（３００ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、スピンドライし、カラムクロマトグラフィー（５％ＥＡを含むＰＥは移動相である）で精製し、化合物Ｖ３－２（２５８ｇ，Ｙ：５８％、無色の液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２１１．１［Ｍ＋１］。

【0183】

ステップ３では、水（２００ｍＬ）を水酸化カリウム（１３３ｇ、３．３２ｍｏｌ）に加えて溶解し、（５℃）まで予冷する。３Ｌのフラスコに化合物Ｖ３－２（４６５ｇ、２．２１ｍｏｌ）、メタノール（０．５Ｌ）、ＴＨＦ（０．５Ｌ）を加え、さらに予冷された水酸化カリウム水溶液を加え、２時間撹拌し、濃塩酸のＰＨを約３に調整し、ＤＣＭ（８００ｍｌ×２）で抽出し、すべての有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、化合物Ｖ３－３（４１０．５ｇ，Ｙ：１００％、白色の固体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１８３．１［Ｍ＋１］。

【0184】

ステップ４では、窒素保護下で、三口フラスコ（５００ｍＬ）に化合物Ｖ３－３（１０．２ｇ、０．０５５ｍｏｌ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）を加え、－７５℃まで降温させる。２．５Ｍのｎ－ブチルリチウム（５５ｍＬ，０．１３７ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液をゆっくりと滴下し、滴下が完了し、－１０℃までゆっくりと昇温し、３時間撹拌し続く。飽和塩化アンモニウムでクエンチし、水（１００ｍＬ）を加え、ＥＡ（４００ｍｌ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、茶色の液体を取得する。カラムクロマトグラフィー（３０％のＥＡを含むＰＥは移動相である）で精製し、化合物Ｖ３（４ｇ，Ｙ：２２．２％、白色の固体）を取得し、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６５．１［Ｍ＋１］。

【0185】

中間体Ｖ４

【化36】

ステップ１では、１－（トリフルオロメチル）シクロプロパン－１－カルボン酸（６．８ｇ、４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍｌ）溶液に溶解し、ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（５．１４ｇ、５３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２５ｇ、６６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１３．３ｇ、１３２ｍｍｏｌ）溶液を加え、室温で一晩撹拌する。ＥＡ（４００ｍｌ）を加え、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧下で濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ４－１（８ｇ）を取得し、収率は９２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１９８．１［Ｍ＋１］。

【0186】

ステップ２では、化合物Ｖ４－１（８ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液に溶解し、－７８℃でＤＩＢＡＬ－Ｈ（１．０Ｍ、６０ｍｌ、６．１ｍｍｏｌ）を加え、－７８℃で１時間撹拌する。硫酸ナトリウム十水和物を加え、３０分間撹拌し、ろ過し、濾液を減圧下で濃縮し、化合物Ｖ４－２を取得する。

【0187】

ステップ３では、化合物Ｖ４－２（５．６ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍｌ）溶液に溶解し、ジエトキシホスフィニルカルボン酸エチルエステル（１３．６４ｇ、６０．９ｍｍｏｌ）、ＤＢＵ（１２．３４ｇ、８１．２ｍｍｏｌ）及び塩化リチウム（３．４ｇ、８１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌する。ＥＡ（３００ｍｌ）を加え、飽和食塩水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧下で濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ４－３（４ｇ）を取得し、収率は４７％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２０９．１［Ｍ＋１］。

【0188】

ステップ４では、ピラゾール（２．６１ｇ、３８．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍｌ）溶液に溶解し、化合物Ｖ４－３（４ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（７．９５ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で一晩撹拌する。ＥＡ（３００ｍｌ）を加え、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧下で濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ４－４（３．３ｇ）を取得し、収率は６２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７７．１［Ｍ＋１］。

【0189】

ステップ５では、化合物Ｖ４－４（３．３ｇ，１２ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）と水（５ｍｌ）溶液に溶解し、水酸化リチウム（０．５５ｇ、２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌する。溶液に塩酸（３Ｎ）溶液を加えてｐＨを２に調整し、ＤＣＭ／メタノール（１０／１）溶液で抽出し、有機相を減圧下で蒸留し、調製液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、化合物Ｖ４－５（１．８ｇ）を取得し、収率は６１％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２４９．１［Ｍ＋１］。

【0190】

ステップ６では、化合物Ｖ４－５（１．８ｇ，７．２６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に溶解し、－７８℃でｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ，７．３ｍｌ、１８．１ｍｍｏｌ）溶液を加え、－２０℃で３０分間撹拌する。反応液に塩素化ナトリウム水溶液を加え、ＥＡ溶液で抽出し、有機相を減圧下で濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）で得られた残留物を精製し、化合物Ｖ４（７００ｍｇ）を取得し、収率は４２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２３１．１［Ｍ＋１］。

【0191】

化合物Ｖ５

【化37】

化合物３－３ａ（０．１１ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８ｍｌ）に溶解し、０℃でトリエチルアミン（０．２ｇ、２ｍｍｏｌ）と４－ブロモベンゼンスルホニルクロリド（０．２０４ｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間攪拌し、ジクロロメタン（１０ｍｌ）を加え、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、白色の固体４－ブロモ－Ｎ－（（４Ｓ、６Ｓ）－６－イソプロピル－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロール［１，２－ｂ］ピラゾール－４－イル）ベンゼンスルホンアミドＶ５（０．０６ｇ）を取得し、収率は２３．３％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８４．１［Ｍ＋１］。

【0192】

化合物Ｖ５の単結晶の調製では、少量の化合物Ｖ５を小さなビーカーに入れ、酢酸エチルで溶解し、フィルムで小さなビーカーを密封し、フィルムに小さな穴をいくつか開ける。石油エーテルを大きなビーカーに入れ、次に小さなビーカーを大きなビーカーに入れ、大きなビーカーを密封し、室温で静置して結晶化させ、溶液から結晶が析出する。ＢｒｕｋｅｒのＤ８ ｖｅｎｔｕｒｅ Ｘ線単結晶回折計によって該結晶に対して単結晶Ｘ－ｒａｙ分析を行った結果、絶対配置は（４Ｓ、６Ｓ）構成であることが確認され、構造図を図１に示す。このため、化合物３－３ａは、化合物Ｖ５の単結晶構造から、その絶対配置が（４Ｓ、６Ｓ）構成であると推定することができる。

【0193】

【表1】

【0194】

化合物Ｖ６

【化38】

化合物Ｖ６は化合物Ｖ５の方法を参照して調製することによって取得されることができる。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３８４．１［Ｍ＋１］。

【0195】

化合物Ｖ６の単結晶の調製では、少量の化合物Ｖ６を小さなビーカーに入れ、酢酸エチルで溶解し、フィルムで小さなビーカーを密封し、フィルムに小さな穴をいくつか開ける。石油エーテルを大きなビーカーに入れ、次に小さなビーカーを大きなビーカーに入れ、大きなビーカーを密封し、室温で静置して結晶化させ、溶液から結晶が析出する。ＢｒｕｋｅｒのＤ８ ｖｅｎｔｕｒｅ Ｘ線単結晶回折計によって該結晶に対して単結晶Ｘ－ｒａｙ分析を行った結果、絶対配置は（４Ｒ、６Ｒ）構成であることが確認され、構造図を図２に示す。

【0196】

【表2】

【0197】

実施例１：（４Ｓ，６Ｓ）－６－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－１ａ）及び（４Ｓ，６Ｒ）－６－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－１ｂ）

【化39】

ステップ１では、化合物Ｖ１（１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）と（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を７０ｍｌトルエンに溶解し、３ｍＬのチタン酸テトライソプロピルを加え、１２０℃で攪拌して１時間反応する。室温まで冷却し、反応液に水（１０ｍｌ）を加え、２０分間攪拌し、ろ過し、ろ液に水素化ホウ素ナトリウム（４２５ｍｇ、１１．２ｍｍｏｌ）を加え、０．５時間攪拌し、反応液に５ｍＬの水を加え、０．５分間攪拌し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝４／１）で精製し、化合物１－１（１．２６ｇ、黄色の固体）を取得し、収率は８５％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２８４．１［Ｍ＋１］。

【0198】

ステップ２では、化合物１－１（０．８ｇ）を取って調製クロマトグラフィー（調製条件、調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭのＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍグラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で精製し、２つの単一構成の生成物１－２ａ（３４０ｍｇ、保留時間が９．５ｍｉｎである）と１－２ｂ（３００ｍｇ、保留時間が１０．５ｍｉｎである）を取得する。

【0199】

ステップ３では、化合物１－２ａ（０．３ｇ、１ｍｍｏｌ）を１５ｍｌのＤＣＭに溶解し、４Ｍの塩酸ジオキサン溶液を加え、室温で攪拌して１時間反応させる。濃縮して化合物１－３ａ（１７９ｍｇ、黄色の固体）を取得し、収率は１００％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１８０．１［Ｍ＋１］。

【0200】

ステップ４では、化合物１－３ａ（１７９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）と化合物１ｂ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を３０ｍＬメタノールに溶解し、室温で攪拌して１時間反応させる。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２４８ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を加えて５時間攪拌し、反応液に５ｍＬの水を加え、０．５分間攪拌し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、調製クロマトグラフィー（調製条件、調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍグラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で精製し、単一構成化合物Ｈ－１ａ（１１０ｍｇ、白色の固体）を取得し、収率は３１％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４２３．２ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．５２－８．５０ （ｍ， １Ｈ）， ７．７０－７．６８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４５－７．４２ （ｍ， １Ｈ）， ７．３０ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７－７．１５ （ｍ， １Ｈ）， ５．７１ （ｄ， Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８５－３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７－３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５７－２．５５ （ｍ， １Ｈ）， ２．４６ － ２．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３２－２．３０ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１ － １．８８ （ｍ， １Ｈ）， １．９１ － １．６３ （ｍ， ４Ｈ）， １．６７ － １．２１ （ｍ， ９Ｈ）， ０．９１ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６２－０．５９ （ｍ， １Ｈ）。

【0201】

ステップ５では、ステップ３の調製方法を参照して、化合物１－２ｂを原料として調製し、化合物１－３ｂを取得する。

【0202】

ステップ６では、ステップ４の調製方法を参照して、化合物１－３ｂを原料として調製し、化合物Ｈ－１ｂ（１１０ｍｇ、白色の固体）を取得し、収率は３１％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４２３．２ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．５１－８．４８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７１－７．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．４５－７．４３ （ｍ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８－７．１６ （ｍ， １Ｈ）， ５．６４ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８３－３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５４－２．５１ （ｍ， １Ｈ）， ２．４５ － ２．２６ （ｍ， ３Ｈ）， １．９９－１．９７（ｍ， １Ｈ）， １．８９ － １．６４ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ － １．２３ （ｍ， ９Ｈ）， ０．９１ （ｓ， ９Ｈ）， ０．５８－０．５６ （ｍ， １Ｈ）。

【0203】

実施例２：（４Ｓ，６Ｓ）－６－（１－メチルシクロプロピル）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－２ａ）と（４Ｓ，６Ｒ）－６－（１－メチルシクロプロピル）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－２ｂ）

【化40】

ステップ１では、化合物Ｖ２（４６０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）と（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（４７５ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬトルエンに加え、次に、チタン酸テトラエチル（２ｍＬ、９．５４ｍｍｏｌ）を加え、１２０℃で攪拌して２時間反応させる。５ｍＬの水でクエンチし、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ／ＥＡ＝１／０～１／１）で化合物２－１（６１２ｍｇ，黄色の油性液体）を取得し、収率は８４％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２８０．１［Ｍ＋１］。

【0204】

ステップ２では、化合物２－１（６１２ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのメタノールに加える。０℃まで冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１６６ｍｇ、４．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌して２時間反応させる。減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィー（調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍ、グラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で精製し、２つの単一異性体２－２ａ（２５４ｍｇ，無色の油性液体、保留時間が９ｍｉｎ）を取得し、収率は４１％であり、２－２ｂ（２４２ｍｇ，無色の油性液体、保留時間が１０ｍｉｎである）、収率は３９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２８２．１［Ｍ＋１］。

【0205】

ステップ３では、化合物２－２ａ（２５４ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのメタノールに加える。４Ｍの塩酸の１，４－ジオキサン溶液（４．５ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌して１時間反応させる。減圧下で濃縮し、３０ｍＬの飽和炭化水素ナトリウム溶液を加え、ＤＣＭとメタノール（１５：１）（５０ｍＬ×４）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、単一異性体化合物２－３ａ（１５１ｍｇ，淡黄色の油性液体）を取得し、収率は９４％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７８．１［Ｍ＋１］。

【0206】

ステップ４では、化合物２－３ａ（１５１ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、化合物１ｂ（２４３ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２６８ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのメタノールに加える。４０℃で４時間反応させた後、室温で攪拌して一晩反応させる。減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィー（調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍ、グラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で得られる残留物を精製し、化合物Ｈ－２ａ（１８６．２５ｍｇ，白色の固体）を取得し、収率は５２％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４２１．１ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．５３－８．４８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７９－７．７２ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４－７．２１ （ｍ， １Ｈ）， ５．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ０．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７－３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８１－２．７３ （ｍ， １Ｈ）， ２．７０ － ２．５９ （ｍ， １Ｈ）， ２．５３ （ｄ， Ｊ ＝ １１．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１１－２．００ （ｍ， ３Ｈ）， １．９１ （ｄ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７７－１．３８ （ｍ， ８Ｈ）， １．１３－１．０６ （ｍ， １Ｈ）， ０．８４ （ｓ， ３Ｈ）， ０．７６－０．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．６０－０．５５ （ｍ， １Ｈ）， ０．５１－０．４２ （ｍ， １Ｈ）， ０．３８－０．２９ （ｍ， １Ｈ）。

【0207】

ステップ５では、化合物２－２ｂ（２４２ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのメタノールに加える。４Ｍの塩酸の１，４－ジオキサン溶液（４．３ｍＬ、１７．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌して１時間反応させる。減圧下で濃縮し、３０ｍＬの飽和炭化水素ナトリウム溶液を加え、ＤＣＭとメタノール（１５：１）（５０ｍＬ×４）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液減圧下で濃縮し、単一異性体化合物２－３ｂ（１５１ｍｇ，淡黄色の油性液体）を取得し、収率は９９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７８．１［Ｍ＋１］。

【0208】

ステップ６では、化合物２－３ｂ（１５１ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、化合物１ｂ（２４３ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２６７ｍｇ、４．２５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのメタノールに加える。４０℃で４時間反応させた後、室温で攪拌して一晩反応させる。減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィー（調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍ、グラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で得られる残留物を精製し、化合物Ｈ－２ｂ（２１５．６２ｍｇ，白色の固体）を取得し、収率は６０％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４２１．１ ［Ｍ＋１］、ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．５４ － ８．４９ （ｍ， １Ｈ）， ７．７８－７．７４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ （ｄ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５－７．２２ （ｍ， １Ｈ）， ５．９１ － ５．８０ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８２ － ３．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７９－２．７２ （ｍ， １Ｈ）， ２．６３ － ２．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１６－１．９７ （ｍ， ３Ｈ）， １．９１ （ｄ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７９ － １．３５ （ｍ， ９Ｈ）， １．１２－１．０６ （ｍ， １Ｈ）， ０．８３ （ｓ， ３Ｈ）， ０．７４－０．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．６１ － ０．５３ （ｍ， １Ｈ）， ０．４９－０．４４ （ｍ， １Ｈ）， ０．３８ － ０．２９ （ｍ， １Ｈ）．

【0209】

実施例３：（４Ｓ、６Ｓ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－３ａ）と（４Ｓ、６Ｒ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－３ｂ）

【化41】

ステップ１では、化合物Ｖ３（１７ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）を２５０（ｍＬ）のトルエンに溶解し、（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１８．８ｇ、１５５ｍｍｏｌ）とチタン酸テトライソプロピル（１１７ｇ、４１４ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で攪拌して１６時間反応させる。室温まで冷却し、反応液に８０ｍＬの水、６００ｍＬのＤＣＭを加え、ろ過し、フィルターケーキをＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄し、層分離し、有機相を飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、濃縮物をカラムクロマトグラフィー（３０％のＥＡを含むＰＥは移動相である）で精製し、化合物３－１（２０．３ｇ，Ｙ：７３．５％、茶色の液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２６８．１［Ｍ＋１］。

【0210】

ステップ２では、一口フラスコに化合物３－１（０．３９ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）、メタノール（５ｍＬ）を加え、０℃まで冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（０．１１ｇ，２．９ｍｍｏｌ）をゆっくりと加える。室温で１．５時間攪拌する。０℃まで冷却し、２０ｍＬの氷水を加え、ＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で洗浄して抽出する。飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、スピンドライし、調製クロマトグラフィー（調製条件、調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍグラジエント：２８％－３０％アセトニトリル変化）で調製し、単一ジアステレオマー化合物３－２ａ（１５０ｍｇ，Ｙ：３８．４％、白色の固体、保留時間が９．５ｍｉｎ）、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７０．０ ［Ｍ＋１］、及び化合物３－２ｂ（１００ｍｇ，Ｙ：２５．６％、白色の固体、保留時間が１０．５ｍｉｎ）、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２７０．０ ［Ｍ＋１］を取得する。

【0211】

ステップ３では、一口フラスコに化合物３－２ａ（１２０ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）、メタノール（３ｍＬ）を加え、０℃まで冷却し、メタノール塩酸ガス（１．２ｍＬ，４．５ｍｍｏｌ、４ｍｏｌ／Ｌ）をゆっくりと加える。室温で１．５時間攪拌する。飽和炭化水素ナトリウムでＰＨを約８に調製し、ＤＣＭ（５０ｍｌ×２）で抽出し、すべての有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、化合物３－３ａ（７０ｍｇ，Ｙ：９５．１２％、黄色液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６６．１［Ｍ＋１］。

【0212】

ステップ４では、化合物３－３ａ（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を（５ｍＬ）メタノールに溶解し、化合物１ｂ（７８．３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とシアノ水素化ホウ素ナトリウム（９４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で攪拌して３時間反応させる。反応液に２０ｍＬの水を加え、ＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、濃縮物を調製クロマトグラフィー法（調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ波長：２５４／２１４ ｎｍ、グラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で精製し、白色の固体の単一構成化合物Ｈ－３ａ（１０．１２ｍｇ，Ｙ：８．２６％）を取得する。化合物Ｈ－３ａの絶対配置は化合物Ｖ５の絶対配置によって推定して決定される。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０９．２ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．５１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ４．９， １．８， ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９ － ７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ７．５， ４．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ０．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ２１．０， １１．７，６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８１ － ３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７３ － ２．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １４．０， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４８ － ２．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１２ － １．９７ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ － １．８２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７８ － １．６５ （ｍ， ３Ｈ）， １．６４ － １．３６ （ｍ， ５Ｈ）， １．１４ － １．０４ （ｍ， １Ｈ）， ０．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．７９ － ０．６５ （ｍ， ４Ｈ）．

【0213】

ステップ５では、一口フラスコに化合物３－２ｂ（１００ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）、メタノール（３ｍＬ）を加え、０℃まで冷却し、メタノール塩酸ガス（０．９３ｍＬ，３．７ｍｍｏｌ、４ｍｏｌ／Ｌ）をゆっくりと加える。室温で１．５時間攪拌する。飽和炭化水素ナトリウムでＰＨを約８に調整し、ＤＣＭ（５０ｍｌ×２）で抽出し、すべての有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、化合物３－３ｂ（５０ｍｇ，Ｙ：８１．２％、黄色の液体）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１６６．１［Ｍ＋１］

【0214】

ステップ６では、化合物３－３ｂ（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を５（ｍＬ）メタノールに溶解し、化合物１ｂ（７８．３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とシアノ水素化ホウ素ナトリウム（９４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で攪拌して３時間反応させる。反応液に２０ｍＬの水を加え、ＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、濃縮物を調製クロマトグラフィー法（調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ波長：２５４／２１４ ｎｍ、グラジエント：３０％－６０％アセトニトリル変化）で精製し、白色の固体である単一構成化合物Ｈ－３ｂ（３０．０１ｍｇ，Ｙ：２４．５％）を取得する。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０９．３ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．５９ － ８．５２ （ｍ， １Ｈ）， ７．７９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ７．４， ４．９， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ０．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １５．３， １０．４，６．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８６ － ３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｄｔ， Ｊ ＝ １３．１， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ － ２．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５０ － ２．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１５ （ｔｄ， Ｊ ＝ １１．４， ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０９ － １．９８ （ｍ， １Ｈ）， １．９１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １５．３， １３．５， ８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８３ － １．３８ （ｍ， ８Ｈ）， １．１６ － １．０８ （ｍ， １Ｈ）， １．０２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．８１ － ０．６４ （ｍ， ４Ｈ）．

【0215】

実施例４：（４Ｓ，６Ｓ）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－６－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミンＨ－４ａと（４Ｓ，６Ｒ）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－６－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミンＨ－４ｂ

【化42】

ステップ１では、化合物Ｖ４（７００ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍｌ）溶液に溶解し、（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルホンアミド（４４２ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）とチタン酸テトライソプロピル（０．５ｍｌ）を加え、１２０℃で２時間攪拌する。有機相を減圧下で濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより溶離液（ＰＥ：ＥＡ＝３：７）で得られる残留物を精製し、化合物４－１（６００ｍｇ）を取得し、収率は４９％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３３４．１［Ｍ＋１］。

【0216】

ステップ２では、化合物４－１（６００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）溶液に溶解し、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（２０５ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌する。水を加え、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィー（調製条件、調製カラム：２１．２Ｘ２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、システム：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ Ｈ_２Ｏ、波長：２５４／２１４ ｎｍグラジエント：２８％－３０％アセトニトリル変化）で得られる残留物を精製し、２つの単一構成の化合物４－２ａ（１５０ｍｇ、保留時間が８．５ｍｉｎ）と４－２ｂ（１５０ｍｇ、保留時間が９．５ｍｉｎ）を取得し、収率は２５％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３３６．１［Ｍ＋１］。

【0217】

ステップ３では、化合物４－２ａ（１５０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、塩化水素ＴＨＦ溶液（４Ｍ、２ｍｌ）を加え、室温で４時間攪拌する。ＤＣＭ（５０ｍｌ）を加え、飽和炭化水素ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、有機相を減圧下で濃縮し、化合物４－３ａ（１００ｍｇ）を取得する。

【0218】

ステップ４では、化合物１ｂ（１１２ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）溶液に溶解し、化合物４－３ａ（１００ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）とシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で４時間攪拌する。水を加え、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、調製液体クロマトグラフィーで得られた残留物を精製し、化合物Ｈ－４ａ（７２．７０ｍｇ）を取得し、収率は３６％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４７５．１ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ）： δ８．５１－８．５０（ｍ， １Ｈ）， ７．７０－７．６７（ｍ， １Ｈ）， ７．４５－７．４３（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３５（ｓ， １Ｈ）， ７．１８－７．１５（ｍ， １Ｈ）， ５．７５（ｄ， Ｊ＝１．２Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２－４．３８（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８４－３．８２（ｍ， １Ｈ）， ３．５７－３．５２（ｍ， ２Ｈ）， ２．９３－２．８９（ｍ， １Ｈ）， ２．４２－２．３０（ｍ， ３Ｈ）， １．９７－１．７４（ｍ， ５Ｈ）， １．５７－１．３１（ｍ， １０Ｈ）， １．０２－０．８０（ｍ， ２Ｈ），０．６１－０．５５（ｍ， １Ｈ）．

【0219】

ステップ５では、ステップ３の調製方法を参照して、化合物４－２ｂを原料として調製し、化合物４－３ｂを取得する。

【0220】

ステップ６では、ステップ４の調製方法を参照して、化合物４－３ｂを原料として調製し、化合物Ｈ－４ｂ（９０．５２ｍｇ）を取得し、収率は４４％である。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）： ４７５．１ ［Ｍ＋１］、^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ）： δ８．５１－８．４９（ｍ， １Ｈ）， ７．７２－７．６８（ｍ， １Ｈ）， ７．４４－７．４２（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４（ｓ， １Ｈ）， ７．１８－７．１６（ｍ， １Ｈ）， ５．７０（ｄ， Ｊ＝１．２Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４１－４．３７（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８６－３．８４（ｍ， １Ｈ）， ３．５８－３．５６（ｍ， ２Ｈ）， ２．９０－２．８７（ｍ， １Ｈ）， ２．３２－２．２９（ｍ， ３Ｈ）， ２．００－１．７４（ｍ， ５Ｈ）， １．６４－１．３０（ｍ， ９Ｈ）， ０．９７－０．９０（ｍ， ３Ｈ），０．８１－０．７８（ｍ， １Ｈ）．

【0221】

実施例５：（４Ｒ，６Ｓ）－６－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－５ａ）と（４Ｒ，６Ｒ）－６－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－５ｂ）

【化43】

【0222】

実施例１の調製方法を参照し、相違点は、化合物（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドで化合物（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドを取り替え、それぞれ単一構成化合物Ｈ－５ａとＨ－５ｂ、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２３．２［Ｍ＋１］を取得することである。

【0223】

実施例６：（４Ｒ，６Ｓ）－６－（１－メチルシクロプロピル）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－６ａ）と（４Ｒ，６Ｒ）－６－（１－メチルシクロプロピル）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－６ｂ）

【化44】

【0224】

実施例２の調製方法を参照し、相違点は、化合物（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドで化合物（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドを取り替え、それぞれ単一構成化合物Ｈ－６ａとＨ－６ｂ、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２１．１［Ｍ＋１］を取得することである。

【0225】

実施例７：（４Ｒ、６Ｓ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－７ａ）と（４Ｒ、６Ｒ）－６－イソプロピル－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－７ｂ）

【化45】

【0226】

実施例３の調製方法を参照し、相違点は、化合物（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドで化合物（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドを取り替え、それぞれ単一構成化合物Ｈ－７ａとＨ－７ｂ、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０９．３［Ｍ＋１］を取得することである。

【0227】

実施例８：（４Ｒ，６Ｓ）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－６－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－８ａ）と（４Ｒ，６Ｒ）－Ｎ－（２－（（Ｒ）－９－（ピリジン－２－イル）－６－オキサスピロ［４．５］デカン－９－イル）エチル）－６－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［１，２－ｂ］ピラゾール－４－アミン（Ｈ－８ｂ）

【化46】

【0228】

実施例４の調製方法を参照し、相違点は、化合物（Ｓ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドで化合物（Ｒ）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミドを取り替え、それぞれ単一構成化合物Ｈ－８ａとＨ－８ｂ、ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７５．１［Ｍ＋１］を取得することである。

【0229】

生物学的テスト
以下のテスト例で使用される細胞株はＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ(R) ＣＨＯ－Ｋ１ ＯＰＲＭ１ β－Ａｒｒｅｓｔｉｎ ＣｅｌｌＬｉｎｅであり、ソース：ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、番号：９３－０２１３Ｃ２、バッチ番号：１３Ｋ０４０２。

【0230】

使用される薬剤、そのサプライヤー、カタログ番号及び保管温度は以下のとおりである。
Ａｓｓａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ^ＴＭ ＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅ Ｋｉｔ １０７、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－３１０７Ｇ、－２０℃、
ＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ ＴｈａｗｉｎｇＲｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－４００２ＴＲ、－２０℃、
ＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ ＣｅｌｌＤｅｔａｃｈｍｅｎｔ Ｒｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９２－０００９、－２０℃、
Ａｓｓａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ^ＴＭ ＣｅｌｌＰｌａｔｉｎｇＲｅａｇｅｎｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９３－０５６３Ｒ２、－２０℃、
ＰａｔｈｈｕｎｔｅｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、９３－０００１、－２０℃、
ＰＢＳ（１×）０．００６７Ｍ（ＰＯ４）、Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３０２５６．０１、４℃、
ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ、Ｄ５８７９－１００ＭＬ、常温、
ＮＫＨ４７７、Ｓｉｇｍａ、１６０３、－２０℃、
ＩＢＭＸ、Ｔｏｃｒｉｓ、Ｉ５８７９、－２０℃。

【0231】

使用される機器、その仕様及びサプライヤーは以下のとおりであり、
Ｃｏｕｎｔｓａｔｒ ＢｉｏＭｅｄ、ＩＭ１２００、ＡＬＩＴ、
Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＩＸ５１、ＯＬＹＭＰＵＳ、
Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ、５８０４、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、
Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｉｃ Ｗａｔｅｒ Ｂａｔｈ、ＤＫ－Ｓ４２０、ＳｈａｎｇｈａｉＳｈｅｎｘｉａｎ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｉｃ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｙ、
ＣｅｌｌＩｎｃｕｂａｔｏｒ、３１１１、Ｔｈｅｒｍｏ、
ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳａｆｅｔｙ Ｃａｂｉｎｅｔ、ＢＳＣ－１３００ＩＩＡ２、ＡＩＲＴＥＣＨ、
ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４Ｗｈｉｔｅ Ｏｐａｑｕｅ、６００７２９０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、
Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ５、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｌａｔｅ－３８４ Ｗｈｉｔｅ Ｏｐａｑｕｅ， ＴＣ－ｔｒｅａｔｅｄ、６００７６８０、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ。

【0232】

テスト例１ ＨＴＲＦ-ｃＡＭＰ細胞実験
実験方法及びステップ
一、細胞の蘇生
１、蘇生液を４℃の冷蔵庫から取り出して３７℃のウォーターバスで１５分間予熱する。
２、液体窒素タンクからＰ６継代の細胞を取り出し、凍結した細胞凍結保存管をすばやく３７℃のウォーターバスに入れて、小さな氷の結晶が見えるか、または細胞が完全に溶けるまで、３０秒から１分間穏やかに振とうする。
３、７０％のアルコールで徹底的に消毒して乾かす。
４、遠心分離して凍結保存液を除去し、予め予熱された新鮮な蘇生液で細胞を再懸濁する。
ａ、３ｍｌの予め予熱された細胞蘇生液を吸い取って１５ｍｌの遠心チューブに入れる。
ｂ、１３００ｒｐｍで３分間遠心分離する。
ｃ、上清の凍結保存液を除去し、予熱された４ｍｌの蘇生液で細胞を再懸濁する。
５、細胞懸濁液をＴ２５細胞培養フラスコに移して２４時間培養し、３７℃で、５％のＣＯ_２である。
６、２４時間培養した後、細胞培養フラスコ内の蘇生液を予熱された細胞培養培地と交換する。

【0233】

二、細胞の継代
１、Ｔ２５培養フラスコ内の細胞の成長密度が７０％を超える場合、細胞消化液で細胞を消化して継代培養する。
ａ、培養フラスコ内の培養培地を吸い出して、予め予熱された４ｍｌのＰＢＳを加え、穏やかに振って細胞をすすぎ、ＰＢＳを吸い取って捨てる。
ｂ、１ｍｌの細胞消化液を吸い取ってＴ２５培養フラスコに加える。
ｃ、消化液が徹底的に培養フラスコを覆うように培養フラスコを繰り返し振って、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターに入れて５分間放置する。
ｄ、細胞培養フラスコを取り出し、顕微鏡で細胞を観察し、細胞が分離されるかどうかを確認する。
ｅ、３ｍｌの予熱された細胞培養培地を加え、消化を終止する。
ｆ、細胞培養培地で培養フラスコを繰り返して洗い流し、細胞懸濁液を１５ｍｌの遠心チューブに収集する。
ｈ、３ｍｌの細胞培養培地で再懸濁する。
２、１：３の比で細胞の継代（各フラスコに１ｍｌの細胞再懸濁液＋３ｍｌの細胞培養培地を加え、Ｔ２５フラスコに送られる）を行う。

【0234】

三、細胞種子プレート
１、細胞がＰ８継代に達するまで、ステップ２．２．１（ａ－ｈ）を繰り返す。細胞を数え、次に、２×／１ｍＭのＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液で細胞を再懸濁し、細胞密度を１．２＊１０＾６／ｍｌにする。
２、マルチチャンネルピペットを使用し、１．２＊１０＾６／ｍｌの細胞溶液を、１ウェルあたり１０μｌの体積（即ち１ウェルあたり１２０００個の細胞）で３８４ウェルプレートに播種する。

【0235】

四、ｃ－ＡＭＰ試験
１、関連する薬剤を準備し、医薬品の希釈構成表に従って化合物を準備する。
ａ、１×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ 液、１ｍｌの５×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ 保存液を取って４ｍｌの蒸留水に加え、均一に混合する。
ｂ、２×／１ｍＭＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液 ５ｍｌ、１０μｌの５００ｍＭＩＢＭＸ 保存液を４９９０μｌの細胞培養培地に加え、穏やかに吹いて叩いて均一に混合する。

【表3】

ｄ、化合物を希釈する前に、まず化合物をＤＭＳＯで溶解し、その保管濃度を１０ｍＭにする。

【0236】

【表4】

ｅ、５０ｕＭＮＫ４７７ １ｍｌ、１μｌの５０ｍＭのＮＫＨ４７７保存液を取って９９９ｕｌ１×Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ液に加え、振って均一に混合する。
ｆ、薬剤の検出
Ａ． ｃＡＭＰ－ Ｃｒｙｐｔａｔｅ（ｄｏｎｏｒ，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）反応液、１ｍｌ５×ｃＡＭＰ－ Ｃｒｙｐｔａｔｅ保存液を取って４ｍｌの１×Ｌｙｓｉｓ ＆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ 液に加え、穏やかに均一に混合する。
Ｂ． Ａｎｔｉ－ｃＡＭＰ－ｄ２（ａｃｃｅｐｔｏｒ，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）反応液、１ｍｌ５×Ａｎｔｉ－ｃＡＭＰ－ｄ２保存液を取って４ｍｌの１×Ｌｙｓｉｓ ＆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ 液に加え、穏やかに均一に混合する。

【0237】

２、ｃＡＭＰ試験ステップ
ａ、１ウェルあたり、１２０００個の細胞を１０μｌの２ｘＩＢＭＸ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ バッファ液に播種する。
ｂ、細胞の各ウェルに８μｌの化合物サンプル希釈液に加える。
ｃ、１ウェルあたりに調製された２μｌの１０ｘＮＫＨ４７７液を加える。
ｄ、３７℃で４５ｍｉｎｓインキュベートする。
ｅ、１０μｌのｃＡＭＰ－ｄ２と１０μｌの抗ｃＡＭＰ Ｃｒｙｐｔａｔｅ反応液を加える。
ｆ、室温で暗所で６０ｍｉｎｓインキュベートする。
ｇ、ＨＴＲＦプレート読み取り。

【0238】

３、ＲＦＵ検出プレート読み取り
６０分間インキュベートした後、すべてのサンプルに対して均一な時間分解蛍光の方法によって検出プレート読み取りを行う。

【0239】

データ分析

【0240】

データを多機能プレートリーダーに接続されたコンピューターの対応するソフトウェアからエクスポートし、６６５ｎｍと６２０ｎｍの２つ信号値を含む。比率の計算式は、比率＝６６５ｎｍ信号値／６２０ｎｍ信号値×１００００である。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析する。最適なフィット曲線にはｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅが使用される。コンピューター補助用量－反応曲線の非線形回帰分析方式によって、化合物のＥＣ５０値、ＰＥＣ５０＝－ｌｏｇＥＣ５０（ＥＣ５０値値の単位はモル）が決定され、％モルヒネの最大効果値＝（化合物サンプル比率－ブランクウェル比率）／ＴＯＰ×１００（備考：ＴＯＰ値は、モルヒネサンプル比率－ブランクウェル比率の後にソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ分析によってフィットされた曲線Ｔｏｐ値である）。結果を表１で表される。

【0241】

【表5】

【0242】

テスト例２ β－Ａｒｒｅｓｔｉｎ細胞実験

【0243】

実験方法及びステップ

【0244】

一、細胞の蘇生
１、蘇生液を４℃の冷蔵庫から取り出して３７℃のウォーターバスで１５分間予熱する。
２、液体窒素タンクからＰ６継代の細胞を取り出し、凍結した細胞凍結保存管をすばやく３７℃のウォーターバスに入れて、小さな氷の結晶が見えるか、または細胞が完全に溶けるまで、３０秒から１分間穏やかに振とうする。
３、７０％のアルコールで徹底的に消毒して乾かす。
４、遠心分離して凍結保存液を除去し、予め予熱された新鮮な蘇生液で細胞を再懸濁する。
ａ、３ｍｌの予め予熱された細胞蘇生液を吸い取って１５ｍｌの遠心チューブに入れる。
ｂ、１３００ｒｐｍで３分間遠心分離する。
ｃ、上清の凍結保存液を除去し、予熱された４ｍｌの蘇生液で細胞を再懸濁する。
５、細胞懸濁液をＴ２５細胞培養フラスコに移して２４時間培養し、３７℃で、５％のＣＯ_２である。
６、２４時間培養した後、細胞培養フラスコ内の蘇生液を予熱された細胞培養培地と交換する。

【0245】

二、細胞の継代
１、Ｔ２５培養フラスコ内の細胞の成長密度が７０％を超える場合、細胞消化液で細胞を消化して継代培養する。
ａ、培養フラスコ内の培養培地を吸い出して、予め予熱された４ｍｌのＰＢＳを加え、穏やかに振って細胞をすすぎ、ＰＢＳを吸い取って捨てる。
ｂ、１ｍｌの細胞消化液を吸い取ってＴ２５培養フラスコに加える。
ｃ、消化液が徹底的に培養フラスコを覆うように培養フラスコを繰り返し振って、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターに入れて５分間放置する。
ｄ、細胞培養フラスコを取り出し、顕微鏡で細胞を観察し、細胞が分離されるかどうかを確認する。
ｅ、３ｍｌの予熱された細胞培養培地を加え、消化を終止する。
ｆ、細胞培養培地で培養フラスコを繰り返して洗い流し、最終に細胞懸濁液を１５ｍｌの遠心チューブに移る。
ｇ．１３００ｒｐｍで３分間遠心分離して、上清を除去する。
ｈ、３ｍｌの細胞培養培地で再懸濁する。
２、１：３の比で細胞の継代（各フラスコに１ｍｌの細胞再懸濁液＋３ｍｌの細胞培養培地を加え、Ｔ２５フラスコに送られる）を行う。
３、細胞がＰ８継代に達するまで、ステップ２．２．１（ａ－ｈ）を繰り返す。

【0246】

三、細胞種子プレート
１、ピペットで２０ｕｌの細胞懸濁液を取って細胞カウンターで細胞数を測定する。
２、１３００ｒｐｍで３分間遠心分離して、細胞を沈殿する。
３、上清を除去し、対応する細胞メッキ液を加えて細胞濃度を２×１０＾５／ｍｌにする。
４、マルチチャンネルピペットを使用し、実験設計に従って、２×１０＾５／ｍｌの細胞溶液を、１ウェルあたり２０μｌの体積（即１ウェルあたり４０００個細胞）で３８４ウェルプレート内に播種する。
５、細胞を播種した３８４ウェルプレートを３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターに入れて２４ｈ培養する。

【0247】

四、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ試験
１、以下の希釈表に従って化合物を調製する。

【表6】

ｂ． 化合物を希釈する前に、まず化合物をＤＭＳＯで溶解し、保管濃度を１０ｍＭにする。

【0248】

【表7】

２、上記で調製された５μｌの各化合物サンプル希釈液を取って３８４ウェルプレートに加える。
３、ローディング後、３８４ウェルプレートを３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターに戻させ９０分間培養する。

【0249】

五、ＲＬＵ検出
１、化合物のインキュベートが終了する前に、以下の比でＷｏｒｋｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ溶液（光を避けるように注意する）を調製する。次に、１ウェルあたり１２．５μｌを加え、暗所で、常温で、シェーカーで１ｈインキュベートする。

【表8】

２、化合物のインキュベートが終了し、１ウェルあたり１２．５μｌの上記作動液を加え、暗所で、常温で、８０ｒｐｍでシェーカーに１ｈインキュベートする。
３、インキュベートが終了し、多機能プレートリーダーを使用してプレート読み取りを行う。

【0250】

データ分析

【0251】

データを多機能プレートリーダーに接続されたコンピューターの対応するソフトウェアからエクスポートし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータを分析する。最適なフィット曲線にはｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅが使用される。コンピューター補助用量－反応曲線の非線形回帰分析方式によって、化合物のＥＣ５０値、ＰＥＣ５０＝－ｌｏｇＥＣ５０（ＥＣ５０値の単位はモル）が決定され、％モルヒネの最大効果値＝（化合物サンプルのＲＬＵ値－ブランクウェルのＲＬＵ値）／ＴＯＰ×１００（備考：ＴＯＰ値は、モルヒネサンプルのＲＬＵ値－ブランクウェルのＲＬＵ値の後にソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ分析によってフィットされた曲線Ｔｏｐ値である）。結果を表２で表される。

【0252】

【表9】

【0253】

表１と表２から分かるように、本発明の代表的な化合物は、ｃＡＭＰに対して高い阻害活性、及び高いＥｍａｘ値を有する。なお、本発明の化合物は、β－ａｒｒｅｓｔｉｎに対して低いＥｍａｘ値を有し、バイアスがよい。

【0254】

本発明で言及される文献は、各文献が参照として個別に援用されるように、いずれも参照として本願に援用される。なお、理解すべきなこととして、本発明の上記教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの等価形態は同様に本願の付いた請求項の範囲によって限定される範囲にある。

【図1】

【図2】