(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-07
(45)【発行日】2024-05-15
(54)【発明の名称】オフターゲット毒性を低下させるプロ抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240508BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240508BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240508BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240508BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240508BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240508BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240508BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240508BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240508BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240508BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240508BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20240508BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28
C07K16/46
C12N15/13 ZNA
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C07K19/00
C12N5/10
A61P35/00
A61P35/02
A61K39/395 T
A61K47/68
A61K39/395 E
C12P21/08
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2022543401
(86)(22)【出願日】2021-01-15
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-14
(86)【国際出願番号】 US2021013688
(87)【国際公開番号】W WO2021146590
(87)【国際公開日】2021-07-22
【審査請求日】2022-09-15
(31)【優先権主張番号】62/962,555
(32)【優先日】2020-01-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】17/150,626
(32)【優先日】2021-01-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】522282771
【氏名又は名称】エショー バイオセラピー， インク．
【氏名又は名称原語表記】ＡＥＴＩＯ ＢＩＯＴＨＥＲＡＰＹ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100107984
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 雅紀
(74)【代理人】
【識別番号】100182305
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 鉄平
(74)【代理人】
【識別番号】100096482
【弁理士】
【氏名又は名称】東海 裕作
(74)【代理人】
【識別番号】100131093
【弁理士】
【氏名又は名称】堀内 真
(74)【代理人】
【識別番号】100150902
【弁理士】
【氏名又は名称】山内 正子
(74)【代理人】
【識別番号】100141391
【弁理士】
【氏名又は名称】園元 修一
(74)【代理人】
【識別番号】100221958
【弁理士】
【氏名又は名称】篠田 真希恵
(74)【代理人】
【識別番号】100192441
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 仁
(72)【発明者】
【氏名】ツェン クオフー
【審査官】松原 寛子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５０９９５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２０－５０００１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／２４２５０５（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／６２
Ｃ１２Ｎ １５／１３
Ｃ１２Ｎ １５／６３
Ｃ０７Ｋ １６／２８
Ｃ０７Ｋ １６／４６
Ｃ０７Ｋ １９／００
Ｃ１２Ｎ ５／１０
Ａ６１Ｐ ３５／００
Ａ６１Ｐ ３５／０２
Ａ６１Ｋ ３９／３９５
Ａ６１Ｋ ４７／６８
Ｃ１２Ｐ ２１／０８
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の構造：第１の可変軽鎖領域及び第１の定常軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、
切断可能リンカーと、
第１の可変重鎖領域及び第１の定常重鎖領域を含む第１の重鎖と
を順に含む、活性化可能な抗体（ａＡｂ）であって、
前記切断可能リンカーが、前記第１の可変軽鎖領域及び前記第１の可変重鎖領域が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ、
前記第１の定常軽鎖領域及び前記第１の定常重鎖領域が、ジスルフィド結合しており、かつ
前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の可変重鎖領域が解放されて、第１の抗原に結合する前記第１の抗原結合部位の形成が可能となる、
前記ａＡｂ。
【請求項2】
切断可能リンカーが切断されると、第１の可変重鎖領域が解放されて、前記第１の可変重鎖領域が、第１の可変軽鎖領域と共に第１の抗原に結合する抗原結合部位を形成する、請求項１に記載のａＡｂ。
【請求項3】
第１の定常重鎖領域のカルボキシル末端側に、Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１又は２に記載のａＡｂ。
【請求項4】
第２の可変軽鎖領域、及び第１の重鎖と接続した第２の定常軽鎖領域により形成された、第２の抗原に結合する第２の抗原結合部位をさらに含み、かつ前記第２の可変軽鎖領域と前記第２の定常軽鎖領域との間に可撓性非切断可能リンカーを含んでもよい、請求項１～３のいずれかに記載のａＡｂ。
【請求項5】
第１の軽鎖、第１の重鎖、又はその両方が、Ｆｃ領域、野生型Ｆｃ領域、変異したＦｃ領域、単量体野生型Ｆｃ領域、単量体ミュータントＦｃ領域、二量体野生型Ｆｃ領域、又は二量体ミュータントＦｃ領域、第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域、又は第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及び第２の可変軽鎖領域及び第２の重鎖可変領域、又は第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及びサイトカインをさらに含む、請求項１～３のいずれかに記載のａＡｂ。
【請求項6】
第１の抗原及び第２の抗原が、同一の抗原である；
前記第１の抗原及び前記第２の抗原が異なる；
前記第１の抗原及び前記第２の抗原が同一の抗原であるが、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位が、前記同一の抗原の異なるエピトープに結合する；又は
前記第１の抗原結合部位若しくは前記第２の抗原結合部位が、腫瘍標的に結合する；
のうちの少なくとも１つに該当し、
前記第１の抗原が、ＩＣＡＭ１；ＶＣＡＭ１；ＥｐＣＡＭ；フィブロネクチンのエキストラドメインＢ；黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ，melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan）；黒色腫関連プロテオグリカン（ＭＡＰＧ，melanoma-associated proteoglycan）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＶ－ＭＡＡ，high molecular weight melanoma associated antigen）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ，prostate specific membrane antigen）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ，epidermal growth factor receptor）；肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ，hepatocyte growth factor receptor）；線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ，fibroblast activation protein）；癌胎児抗原（ＣＥＡ，carcinoembryonic antigen）；細胞接着分子（ＣＡＭ，cell-adhesion molecule）；ヒトＢ細胞成熟標的（ＢＣＭＡ，B-cell maturation target）；胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ，placental growth factor）；葉酸受容体、インスリン様増殖因子受容体（ＩＬＧＦＲ，insulin-like growth factor receptor）；ＣＤ１３３；ＣＤ４０；ＣＤ３７；ＣＤ３３；ＣＤ３０；ＣＤ２８；ＣＤ２４；ＣＤ２３；ＣＤ２２；ＣＤ２１；ＣＤ２０；ＣＤ１９；ＣＤ１３；ＣＤ１０；ＨＥＲ３；ＨＥＲ２；非筋ミオシン重鎖タイプＡ（ｎｍＭＨＣＡ，nonmuscle myosin heavy chain type A）；トランスフェリン；上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ，epithelial cell adhesion molecule）；アネキシンＡ１；ヌクレオチン、テネイシン、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１，vascular endothelial growth factor receptor 1）；血管内皮増殖因子受容体２；（ＶＥＧＦＲ－２）；アミノペプチダーゼＮ；ｔｉｅ－１；ｔｉｅ－２；又はｃ－Ｍｅｔ；から選択される組織特異的表面抗原である；
前記第１の抗原が、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス（exodus）－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ－２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＢ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＣ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＮ３；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＣＧＲＰ；Ｃｌｑ；Ｃｌｒ；ＣＩ；Ｃ４ａ；Ｃ４ｂ；Ｃ２ａ；Ｃ２ｂ；Ｃ３ａ；Ｃ３ｂ；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ－セレクチン；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮ０１；ＥＮ０２；ＥＮ０３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；第VII因子；第IX因子；第Ｖ因子；第VIIａ因子；第Ｘ因子；第XII因子；第XIII因子；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；Ｆｃガンマ受容体；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦｌ３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＩＬ１（エプシロン）；ＦＩＬ１（ゼータ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（ＣＩＯ）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；糖タンパク質（ＧＰ，glycoprotein）IIｂ／IIIａ；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；Ｈｅｒ２；ＨＧＦ；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプIIケラチン）；Ｌ－セレクチン；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－III）（metallothionectin-III）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＫＧ２Ｄ；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦ；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲＩＩ２；ＮＲＩＩ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴＩ；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＥ２；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；プラスミノーゲンアクチベーター；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；プロテインＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＧＥ；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢ０２；ＳＩ００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮性単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２；から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパク質の一部分、又はペプチドから選択される；あるいは
前記腫瘍標的が、腫瘍標的抗原、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII，epidermal growth factor receptor active mutant）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ，Fibroblast Activation Protein）アルファ、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３，Glypican 3）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ，microsomal epoxide hydrolase）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ，prostate stem cell antigen）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１，Wilms tumor-1）、又はクローディンファミリータンパク質から選択される；
請求項５に記載のａＡｂ。
【請求項7】
第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位のうちの少なくとも１つが、Ｔ細胞マーカーに結合し、かつ前記Ｔ細胞マーカーが、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、若しくはＴＩＭ－３から選択されてもよく、又は前記第１の抗原結合部位又は前記第２の抗原結合部位のうちの少なくとも１つが、Ｔ細胞アクチベーターに結合し、及び前記Ｔ細胞アクチベーターが、ＣＤ３、４１ＢＢ、若しくはＯＸ４０から選択されてもよい、
請求項５に記載のａＡｂ。
【請求項8】
切断可能リンカーが、プロテアーゼ切断可能リンカーであり、かつ前記切断可能リンカーが、
腫瘍関連プロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、若しくはカテプシンＢにより切断されてもよく、
アポトーシス若しくは炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼにより切断されてもよく、
カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及びカスパーゼ１２であってもよいカスパーゼにより切断されてもよく、又は
前記切断可能リンカーが、抗原結合部位を遮蔽しない、
請求項１、２、又は３に記載のａＡｂ。
【請求項9】
ａＡｂにコンジュゲートした薬剤、ａＡｂ若しくはＦｃ領域に結合した又はａＡｂ若しくはＦｃ領域を含む融合タンパク質となっているサイトカインをさらに含み、前記サイトカインが、成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ＴＮＦ－ａ；ミュラー管抑制因子；ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ，thrombopoietin）；神経成長因子；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ，transforming growth factor）；インスリン様増殖因子－１及び－１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ，erythropoietin）；骨誘導因子；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ，colony stimulating factor）；リンホトキシン－アルファ；リンホトキシン－ベータ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＦＡＳＬ；４－１ＢＢＬ；ＯＸ４０Ｌ；ＴＲＡＩＬ；ＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－３３；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮ－ｂ；ＩＦＮ－ｇ；ＩＦＮ－ｇ誘発因子（ＩＧＩＦ，IFN-g inducing factor）；骨形成タンパク質（ＢＭＰ，bone morphogenetic protein）；白血病抑制因子（ＬＩＦ，leukemia inhibitory factor）；又はｋｉｔリガンド（ＫＬ，kit ligand）；のうちの少なくとも１つから選択される；あるいは
前記薬剤が、毒素若しくはその毒性断片；微小管阻害剤；核酸ダメージング剤；検出可能部分；診断用薬剤；又は薬学的に許容される担体；のうちの少なくとも１つである；
請求項１～３のいずれかに記載のａＡｂ。
【請求項10】
配列番号１、２、又は３のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のａＡｂ。
【請求項11】
請求項１、２、又は３に記載のａＡｂをコードする核酸。
【請求項12】
請求項１、２、又は３に記載のａＡｂをコードする核酸を含む細胞。
【請求項13】
Ｔ細胞又は間葉系幹細胞である、請求項１２に記載の細胞。
【請求項14】
ａＡｂが、前記ａＡｂをＴ細胞の表面に係留してキメラ抗原受容体を形成する膜貫通配列をさらに含み、細胞が、ＣＡＲ Ｔ細胞である、請求項１２に記載の細胞。
【請求項15】
請求項１～３のいずれかに記載のａＡｂを含む、がんの治療剤であって、正常組織に対する抗体の結合活性を低下させ、かつ、がん細胞を標的とする方法；又は有効量の前記ａＡｂを、それを必要としている対象に投与するステップを含む、がんの症状を治療、緩和し、若しくはその進行を遅延させる方法；において使用される、前記治療剤。
【請求項16】
がんが、切断可能リンカーを切断する酵素を発現するがんである、請求項１５に記載の治療剤。
【請求項17】
がんが、膀胱がん、骨がん、乳がん、癌様体、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、頭頸部がん、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、腎臓がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、又は尿路上皮がん、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱尿路上皮癌、乳房腺管癌、乳房小葉癌、食道の癌、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ，castration-resistant prostate cancer）、子宮頸癌、胆管癌、慢性骨髄性白血病、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん（ＣＲＣ，colorectal cancer）、食道癌、胃腺癌、多形膠芽細胞腫、頭頸部扁平上皮癌、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌（ＨＣＣ，hepatocellular carcinoma）、腎色素嫌性癌、腎明細胞癌、腎乳頭状細胞癌、低悪性度神経膠腫、肺腺癌、肺扁平上皮癌、黒色腫（ＭＥＬ，melanoma）、中皮腫、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、卵巣漿液性腺癌、膵管腺癌、傍神経節腫及びクローム親和細胞腫、前立腺腺癌、腎細胞癌（ＲＣＣ，renal cell carcinoma）、肉腫、皮膚黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、甲状腺乳頭状癌、子宮癌肉腫、子宮体類内膜癌、又はぶどう膜黒色腫から選択される、請求項１５に記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、正常組織の標的化を低下させ、かつ腫瘍の標的化を強化するプロ抗体（プロボディ）の分野と一般的に関連する。
【0002】
連邦政府からの資金提供による研究の記載
該当無し。
該当無し。
【0003】
配列リストの参照
本出願は、３７ＣＦＲ１．８２１～１．８２５の要求に従い、別途ファイル添付された配列リストを含む。
本出願は、３７ＣＦＲ１．８２１～１．８２５の要求に従い、別途ファイル添付された配列リストを含む。
【背景技術】
【0004】
本発明の範囲を制限することなく、その背景技術を、プロボディ又は活性化可能な抗体と関連して記載する。
【0005】
１つのそのようなプロボディは、Stagliano, et al.,出願の"Anti-EGFR activatable antibodies"と題する米国特許第１０，０５９，７６２号明細書において教示されている。この特許の発明者らは、切断可能な部分（ＣＭ，cleavable moiety）とさらにカップリング可能であり、その結果、活性化可能な抗体（ＡＡ，activatable antibody）をもたらすマスキング部分（ＭＭ，masking moiety）により改変された抗体又は抗体断片（ＡＢ，antibody fragment）を含有する改変された抗体について教示する。ＡＡにおいて、ＣＭは、切断、還元、光分解、さもなければ改変される能力を有する。例えば、ＣＭを切断、還元、又は光分解する能力を有する薬剤の存在下で、ＣＭが切断、還元、又は光分解されることにより、ＭＭが除去された後には、ＡＢが標的によりアクセスしやすくなるように、ＡＡは、活性化可能なコンフォメーションを呈することができる。しかしながら、標的結合部分（ＴＢＭ，target binding moiety）に対する結合に関して、ＭＭと標的との間で競合が生ずることがこの技術の重大な制約である。さらに、ＭＭの切断は、重大なオフターゲット作用を引き起こす。
【0006】
別のそのようなプロボディが、Sagert, et al.,出願の"Anti-ITGA3 antibodies, activatable anti-ITGA3 antibodies, and methods of use thereof"と題する米国特許第１０，２３３，２４４号明細書において教示されている。該発明は、様々な治療上、診断上、及び予防上の適用における、ＩＴＧａ３に結合する抗体、ＩＴＧａ３に特異的に結合する活性化可能な抗体、並びにこれらの抗ＩＴＧａ３抗体及び抗ＩＴＧａ３活性化可能な抗体を作製及び使用する方法と一般的に関連するとのことである。
【0007】
別のそのようなプロボディは、Daugherty, et al.,出願の"Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof"と題する米国特許第８，５４１，２０３号明細書において教示されている。この特許の発明者らは、標的結合部分（ＴＢＭ）、マスキング部分（ＭＭ）、及び切断可能な部分（ＣＭ）を含有する活性化可能な結合性ポリペプチド（ＡＢＰ，activatable binding polypeptide）について教示する。マスキング部分は、ＴＢＭの同系結合部位を覆い、またＣＭが切断されるとＴＢＭが露出する。ある特定の活性化可能な抗体組成物は、抗原結合ドメイン（ＡＢＤ，antigen binding domain）、ＭＭ、及びＣＭを含有するＴＢＭを含むとのことである。ＡＢＰは、ＴＢＭの少なくとも１つが、ＣＭを切断する能力を有する切断薬剤の存在下でＣＭが切断された後よりも、切断されないときの方が標的によりアクセスしにくくなるように、「活性化可能な」コンフォメーションを含むとのことである。該出願は、ＡＢＰ候補のライブラリー、そのようなＡＢＰを特定するためのスクリーニング方法、及び使用方法について教示するとのことである。教示では、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ４、又はＶＣＡＭに対して特異的なＡＢＰであって、ＶＥＧＦに結合する第１のＴＢＭとＦＧＦに結合する第２のＴＢＭとを有するＡＢＰ、並びに組成物及び使用方法について教示される。やはり、ＴＢＭに対する結合に関してＭＭと標的との間で競合が生ずることがこの技術の重大な制約である。さらに、ＭＭの切断は、重大なオフターゲット作用を引き起こす。
【0008】
別のそのようなプロボディは、Tipton, et al.,により"Activatable Anti-CTLA-4 Antibodies and Uses Thereof"として出願の米国特許公開第２０１９０３５９７１４号明細書において教示される。この特許の出願者らは、ＶＨドメインを含む重鎖と、マスキング部分（ＭＭ）、切断可能な部分（ＣＭ）、及びＶＬドメインを含む軽鎖とを含む活性化可能な抗ヒトＣＴＬＡ４抗体について教示するとのことである。切断可能な部分が腫瘍特異的プロテアーゼによりタンパク質分解性に切断され、それによってマスキング部分が除去される場合、そのような活性化可能な抗ヒトＣＴＬＡ４抗体は、腫瘍微小環境においてＣＴＬＡ４結合活性を有するが、しかし腫瘍外部のＣＴＬＡ４に対しては大幅に低下した結合性を示す。
【0009】
別のそのようなプロボディは、Wang出願の"Methods and Reagents to Treat Tumor and Cancer"と題する米国特許公開第２０１８０２７１９９７号明細書において教示される。この特許の出願者は、腫瘍及びがんを治療する試薬、及び腫瘍内で活性化され得る抗体であるプロ抗体を使用しながら腫瘍及びがんを治療するために同試薬を使用する方法について教示するとのことである。別の種類の試薬は、シアリダーゼと、免疫細胞表面に結合することができる親和性リガンドとのコンジュゲート、又はシアリダーゼと、別の抗体に結合することができる親和性リガンドとのコンジュゲートであり、従ってシアリダーゼに基づくがん免疫療法を提供するとのことである。
【0010】
活性化可能な抗体に関する３つのアプローチが、今日まで使用されてきた。第１に、プロボディは、抗原－抗体相互作用をブロックするためにタンパク質分解性リンカーを介してリンクしているマスキングペプチドを含む。各プロボディの開発は、マスキングペプチドについてファージディスプレイを使用するスクリーニングプロセスを必要とする。リンカーの切断後、マスキングペプチドは離脱し、そして抗体の抗原結合部位を解放するものと期待される。このアプローチに伴う問題として、（１）マスキングペプチドが異種性であること自体が免疫応答を誘発する；（２）マスキングペプチドの遊離がうまく行かないと有効性が低下する；（３）一部の抗原－抗体相互作用は強すぎて、短鎖（例えば、アミノ酸１０個）ペプチドでは遮蔽されない；及び（４）ペプチドが腫瘍に到達する前に分解し、抗体の毒性が正常組織に曝露されるおそれがある；が挙げられる。
【0011】
第２のアプローチでは、デュアル可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ，Dual Variable Domain Immunoglobulin）が、抗ＣＴＬＡ４抗体の毒性を低下させるとのことである。抗－腫瘍標的抗原（ＴＴＡ，Tumor Targeting Antigen）抗体のＶＬ及びＶＨは、タンパク質分解性リンカーを介して抗ＣＴＬＡ４抗体とリンクしてＣＴＬＡ４結合部位を覆う。残念ながら、このアプローチは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ，tumor associated antigen）とＣＴＬＡ４との対形成を必要とし、正確なセットのＶＬ及びＶＨを付加する必要があり、従って分子はより大型となり、また正確なＶＬ及びＶＨは、常にオフターゲット抗原と相互作用し、また免疫応答を誘発する可能性がある。
【0012】
第３のアプローチは、「偽のＶＬ」及び「偽のＶＨ」の対を、活性で機能的なＶＬ及びＶＨにリンクさせることにより、抗ＣＤ３可変軽（ＶＬ，variable light）鎖及び可変重（ＶＨ，variable heavy）鎖の結合を物理的にブロックする。偽のＶＬがＶＨと相互作用するとき、及び偽のＶＨがＶＬと相互作用するとき、抗体は活性を有さない。プロテアーゼリンカーが、ＶＬ、ＶＨ、偽のＶＬ、及び偽のＶＨを互いにリンクさせて、非常に大型の分子を創出するのに使用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0013】
【文献】米国特許第１０，０５９，７６２号明細書
【文献】米国特許第１０，２３３，２４４号明細書
【文献】米国特許第８，５４１，２０３号明細書
【文献】米国特許公開第２０１９０３５９７１４号明細書
【文献】米国特許公開第２０１８０２７１９９７号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
正常組織を標的としないようにし、腫瘍標的部位の活性を増強することにより、先行技術における問題を克服する新規の融合タンパク質が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0015】
１つの実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ、かつ前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、第１の抗原に結合する前記第１の抗原結合部位の形成を可能にする活性化可能な抗体（ａＡｂ，activatable antibody）を含む。１つの態様では、ａＡｂは、第２の可変軽鎖、及び第１の重鎖と接続した第２の定常軽鎖により形成された、第２の抗原に結合する第２の抗体結合部位を含み、かつ前記第２の可変軽鎖と前記第２の定常軽鎖との間に可撓性の非切断可能リンカーをさらに含んでもよい。別の態様では、ａＡｂは、第１の定常重鎖領域、第１の定常重鎖領域のうちの少なくとも１つ、又はその両方をさらに含む。別の態様では、第１の軽鎖領域、第１の重鎖領域、又はその両方は、Ｆｃ領域、野生型Ｆｃ領域、変異したＦｃ領域、単量体野生型Ｆｃ領域、単量体ミュータントＦｃ領域、二量体野生型Ｆｃ領域、二量体ミュータントＦｃ領域、第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域、又は第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及び第２の可変軽鎖領域及び第２の重鎖可変領域、又は第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及びサイトカインをさらに含む。別の態様では、第１及び第２の抗原は、同一の抗原である；第１の抗原及び第２の抗原が異なる；又は第１及び第２の抗原は同一の抗原であるが、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位が同一の抗原の異なるエピトープに結合する；のうちの少なくとも１つに該当する。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位が、腫瘍標的に結合する。別の態様では、第１の抗原は、ＩＣＡＭ１；ＶＣＡＭ１；ＥｐＣＡＭ；フィブロネクチンのエキストラドメインＢ；黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ，melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan）；黒色腫関連プロテオグリカン（ＭＡＰＧ，melanoma-associated proteoglycan）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＶ－ＭＡＡ，high molecular weight melanoma associated antigen）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ，prostate specific membrane antigen）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ，epidermal growth factor receptor）；肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ，hepatocyte growth factor receptor）；線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ，fibroblast activation protein）；癌胎児抗原（ＣＥＡ，carcinoembryonic antigen）；細胞接着分子（ＣＡＭ，cell-adhesion molecule）；ヒトＢ細胞成熟標的（ＢＣＭＡ，B-cell maturation target）；胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ，placental growth factor）；葉酸受容体、インスリン様増殖因子受容体（ＩＬＧＦＲ，insulin-like growth factor receptor）；ＣＤ１３３；ＣＤ４０；ＣＤ３７；ＣＤ３３；ＣＤ３０；ＣＤ２８；ＣＤ２４；ＣＤ２３；ＣＤ２２；ＣＤ２１；ＣＤ２０；ＣＤ１９；ＣＤ１３；ＣＤ１０；ＨＥＲ３；ＨＥＲ２；非筋ミオシン重鎖タイプＡ（ｎｍＭＨＣＡ，nonmuscle myosin heavy chain type A）；トランスフェリン；上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ，epithelial cell adhesion molecule）；アネキシンＡ１；ヌクレオチン（nucleotin）、テネイシン、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１，vascular endothelial growth factor receptor 1）、血管内皮増殖因子受容体２；（ＶＥＧＦＲ－２）；アミノペプチダーゼＮ、ｔｉｅ－１、ｔｉｅ－２、又はｃ－Ｍｅｔから選択される組織特異的表面抗原である。別の態様では、第１の抗原は、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス（exodus）－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ－２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＢ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＣ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＮ３；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＣＧＲＰ；Ｃｌｑ；Ｃｌｒ；ＣＩ；Ｃ４ａ；Ｃ４ｂ；Ｃ２ａ；Ｃ２ｂ；Ｃ３ａ；Ｃ３ｂ；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ－セレクチン；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮ０１；ＥＮ０２；ＥＮ０３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；第VII因子；第IX因子；第Ｖ因子；第VIIａ因子；第Ｘ因子；第XII因子；第XIII因子；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；Ｆｃガンマ受容体；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦｌ３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＩＬ１（エプシロン）；ＦＩＬ１（ゼータ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（ＣＩＯ）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；糖タンパク質（ＧＰ，glycoprotein）IIｂ／IIIａ；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；Ｈｅｒ２；ＨＧＦ；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプIIケラチン）；Ｌ－セレクチン；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－III）（metallothionectin-III）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＫＧ２Ｄ；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦ；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲＩＩ２；ＮＲＩＩ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴＩ；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＥ２；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；プラスミノーゲンアクチベーター；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；プロテインＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＧＥ；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢ０２；ＳＩ００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮性単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；Ｓ
ＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパク質の一部分、又はペプチドから選択される。別の態様では、腫瘍標的は、腫瘍標的抗原、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII，epidermal growth factor receptor active mutant）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ，Fibroblast Activation Protein）アルファ、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３，Glypican 3）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ，microsomal epoxide hydrolase）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ，prostate stem cell antigen）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１，Wilms tumor-1）、又はクローディンファミリータンパク質から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞マーカーに結合する。別の態様では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、又はＴＩＭ－３から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞アクチベーターに結合する。別の態様では、Ｔ細胞アクチベーターは、ＣＤ３、４１ＢＢ、又はＯＸ４０から選択される。別の態様では、切断可能リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーである。別の態様では、切断可能リンカーは、腫瘍関連のプロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、又はカテプシンＢにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、アポトーシス又は炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、カスパーゼにより切断される。別の態様では、カスパーゼは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及びカスパーゼ１２である。別の態様では、切断可能リンカーは抗原結合部位を遮蔽しない。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂにコンジュゲートした薬剤をさらに含む。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂ若しくはＦｃ領域に結合した又はａＡｂ若しくはＦｃ領域を含む融合タンパク質となっているサイトカインをさらに含む。別の態様では、サイトカインは、成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ＴＮＦ－ａ；ミュラー管抑制因子；ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ，thrombopoietin）；神経成長因子；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ，transforming growth factor）；インスリン様増殖因子－１及び－１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ，erythropoietin）；骨誘導因子；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ，colony stimulating factor）；リンホトキシン－アルファ；リンホトキシン－ベータ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＦＡＳＬ；４－１ＢＢＬ；ＯＸ４０Ｌ；ＴＲＡＩＬ；ＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－３３；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮ－ｂ；ＩＦＮ－ｇ；ＩＦＮ－ｇ誘発因子（ＩＧＩＦ，IFN-g inducing factor）；骨形成タンパク質（ＢＭＰ，bone morphogenetic protein）；白血病抑制因子（ＬＩＦ，leukemia inhibitory factor）；又はｋｉｔリガンド（ＫＬ，kit ligand）のうちの少なくとも１つから選択される。別の態様では、ａＡｂは、配列番号１、２、又は３から選択される。別の態様では、薬剤は、毒素又はその毒性断片；微小管阻害剤；核酸ダメージング剤；検出可能部分；又は診断用薬剤のうちの少なくとも１つである。
ＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパク質の一部分、又はペプチドから選択される。別の態様では、腫瘍標的は、腫瘍標的抗原、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII，epidermal growth factor receptor active mutant）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ，Fibroblast Activation Protein）アルファ、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３，Glypican 3）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ，microsomal epoxide hydrolase）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ，prostate stem cell antigen）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１，Wilms tumor-1）、又はクローディンファミリータンパク質から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞マーカーに結合する。別の態様では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、又はＴＩＭ－３から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞アクチベーターに結合する。別の態様では、Ｔ細胞アクチベーターは、ＣＤ３、４１ＢＢ、又はＯＸ４０から選択される。別の態様では、切断可能リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーである。別の態様では、切断可能リンカーは、腫瘍関連のプロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、又はカテプシンＢにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、アポトーシス又は炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、カスパーゼにより切断される。別の態様では、カスパーゼは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及びカスパーゼ１２である。別の態様では、切断可能リンカーは抗原結合部位を遮蔽しない。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂにコンジュゲートした薬剤をさらに含む。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂ若しくはＦｃ領域に結合した又はａＡｂ若しくはＦｃ領域を含む融合タンパク質となっているサイトカインをさらに含む。別の態様では、サイトカインは、成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ＴＮＦ－ａ；ミュラー管抑制因子；ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ，thrombopoietin）；神経成長因子；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ，transforming growth factor）；インスリン様増殖因子－１及び－１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ，erythropoietin）；骨誘導因子；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ，colony stimulating factor）；リンホトキシン－アルファ；リンホトキシン－ベータ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＦＡＳＬ；４－１ＢＢＬ；ＯＸ４０Ｌ；ＴＲＡＩＬ；ＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－３３；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮ－ｂ；ＩＦＮ－ｇ；ＩＦＮ－ｇ誘発因子（ＩＧＩＦ，IFN-g inducing factor）；骨形成タンパク質（ＢＭＰ，bone morphogenetic protein）；白血病抑制因子（ＬＩＦ，leukemia inhibitory factor）；又はｋｉｔリガンド（ＫＬ，kit ligand）のうちの少なくとも１つから選択される。別の態様では、ａＡｂは、配列番号１、２、又は３から選択される。別の態様では、薬剤は、毒素又はその毒性断片；微小管阻害剤；核酸ダメージング剤；検出可能部分；又は診断用薬剤のうちの少なくとも１つである。
【0016】
別の実施形態では、本発明は、活性化可能なＡｂを含む医薬組成物を含む。別の実施形態では、本発明は、正常組織に対する活性化可能なＡｂの結合活性を低下させ、及びがん細胞を標的とする方法であって、有効量の活性化可能なＡｂを、それを必要としている対象に投与するステップを含む方法を含む。別の実施形態では、本発明は、がんの症状を治療、緩和し、又はその進行を遅延させる方法であって、有効量の活性化可能なＡｂを、それを必要としている対象に投与するステップを含む方法を含む。１つの態様では、がんは、切断可能リンカーを切断する酵素を発現するがんである。別の態様では、がんは、膀胱がん、骨がん、乳がん、癌様体、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、頭頸部がん、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、腎臓がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、又は尿路上皮がんから選択される。別の態様では、がんは、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱尿路上皮癌、乳房腺管癌、乳房小葉癌、食道の癌、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ，castration-resistant prostate cancer）、子宮頸癌、胆管癌、慢性骨髄性白血病、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん（ＣＲＣ，colorectal cancer）、食道癌、胃腺癌、多形膠芽細胞腫、頭頸部扁平上皮癌、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌（ＨＣＣ，hepatocellular carcinoma）、腎色素嫌性癌、腎明細胞癌、腎乳頭状細胞癌、低悪性度神経膠腫、肺腺癌、肺扁平上皮癌、黒色腫（ＭＥＬ，melanoma）、中皮腫、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、卵巣漿液性腺癌、膵管腺癌、傍神経節腫及びクローム親和細胞腫、前立腺腺癌、腎細胞癌（ＲＣＣ，renal cell carcinoma）、肉腫、皮膚黒色腫（skin cutaneous melanoma）、頭頸部の扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、甲状腺乳頭状癌、子宮癌肉腫、子宮体類内膜癌、及びぶどう膜黒色腫からなる群から選択される。
【0017】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、及び前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、前記第１の軽鎖と共に、第１の抗原に結合する抗体結合部位を形成する、活性化可能な抗体（ａＡｂ）を含む。別の態様では、ａＡｂは、第１の定常軽鎖領域又は第１の定常重鎖領域それぞれの少なくとも１つをさらに含む。別の態様では、ａＡｂは、第１の定常重鎖領域に結合したＦｃ領域（野生型ドメイン、又はＦｃ受容体結合性を改変するミュータントドメインである）、第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域、又は第２の可変重鎖領域及び第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及び第２の可変軽鎖領域及び第２の重鎖可変領域、又は第２のＦｃ領域及び切断不能な可撓性リンカー及びサイトカインをさらに含む。別の態様では、ａＡｂは、第２の可変軽鎖と、第１の重鎖に接続した第２の定常軽鎖とにより形成された、第２の抗原に結合する第２の抗体結合部位をさらに含み、及び第２の可変軽鎖と第２の定常軽鎖との間に可撓性非切断可能リンカーを含んでもよい。別の態様では、ａＡｂは、第１の定常重鎖領域、第１の定常重鎖領域のうちの少なくとも１つ、又はその両方をさらに含む。別の態様では、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域、変異したＦｃ領域、単量体野生型Ｆｃ領域、単量体ミュータントＦｃ領域、二量体野生型Ｆｃ領域、又は二量体ミュータントＦｃ領域である。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂ若しくはＦｃ領域に結合した又はａＡｂ若しくはＦｃ領域を含む融合タンパク質となっているサイトカインをさらに含む。別の態様では、サイトカインは、成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ＴＮＦ－アルファ；ミュラー管抑制因子；ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子－１及び－１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）；リンホトキシン－アルファ；リンホトキシン－ベータ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＦＡＳＬ；４－１ＢＢＬ；ＯＸ４０Ｌ；ＴＲＡＩＬ；ＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－３３；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮ－ベータ；ＩＦＮ－ガンマ；ＩＦＮ－ガンマ誘発因子（ＩＧＩＦ）；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；白血病抑制因子（ＬＩＦ）；又はｋｉｔリガンド（ＫＬ）のうちの少なくとも１つから選択される。別の態様では、第１の抗原は、ＩＣＡＭ１；ＶＣＡＭ１；ＥｐＣＡＭ；フィブロネクチンのエキストラドメインＢ；黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）；黒色腫関連プロテオグリカン（ＭＡＰＧ）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＶ－ＭＡＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）；線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）；癌胎児抗原（ＣＥＡ）；細胞接着分子（ＣＡＭ）；ヒトＢ細胞成熟標的（ＢＣＭＡ）；胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）；葉酸受容体、インスリン様増殖因子受容体（ＩＬＧＦＲ）；ＣＤ１３３；ＣＤ４０；ＣＤ３７；ＣＤ３３；ＣＤ３０；ＣＤ２８；ＣＤ２４；ＣＤ２３；ＣＤ２２；ＣＤ２１；ＣＤ２０；ＣＤ１９；ＣＤ１３；ＣＤ１０；ＨＥＲ３；ＨＥＲ２；非筋ミオシン重鎖タイプＡ（ｎｍＭＨＣＡ）；トランスフェリン；上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）；アネキシンＡ１；ヌクレオチン、テネイシン、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、血管内皮増殖因子受容体２；（ＶＥＧＦＲ－２）；アミノペプチダーゼＮ、ｔｉｅ－１、ｔｉｅ－２、又はｃ－Ｍｅｔから選択される組織特異的表面抗原である。別の態様では、第１の抗原は、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ－２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＢ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＣ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＮ３；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＣＧＲＰ；Ｃｌｑ；ＣＩＲタンパク質；ＣＩ；Ｃ４ａ；Ｃ４ｂ；Ｃ２ａ；Ｃ２ｂ；Ｃ３ａ；Ｃ３ｂ；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ－セレクチン；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮ０１；ＥＮ０２；ＥＮ０３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；第VII因子；第IX因子；第Ｖ因子；第VIIａ因子；第Ｘ因子；第XII因子；第XIII因子；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；Ｆｃガンマ受容体；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；Ｆｇｆ１７；Ｆｇｆ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＩＬ１（エプシロン）；ＦＩＬ１（ゼータ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（ＣＩＯ）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；糖タンパク質IIｂ；糖タンパク質IIIａ；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；Ｈｅｒ２；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＩＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ－Ａ；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＧＢ１；ＨＭＯＸ１；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；ＩＤ２；ＩＦＮ－アルファ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；ＩＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮ－ガンマ；ＩＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６；ＩＬ－１；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ－１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１７Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬ１Ｆ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２；ＩＬ１ＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０ＲＡ；ＩＬ２１Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；ＩＬ７；ＩＬ７Ｒ；ＩＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ９；ＩＬ９Ｒ；ＩＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＩＴＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（
ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプIIケラチン）；Ｌ－セレクチン；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－III）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＫＧ２Ｄ；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦ；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲＩＩ２；ＮＲＩＩ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴＩ；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＥ２；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；プラスミノーゲンアクチベーター；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；プロテインＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＧＥ；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢ０２；ＳＩ００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮性単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ－アルファ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパクの一部分、又はペプチドから選択される。別の態様では、第１及び第２の抗原は、同一の抗原である；第１の抗原及び第２の抗原は異なる；又は第１の抗原及び第２の抗原は同一の抗原であるが、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位は同一の抗原の異なるエピトープに結合する；のうちの少なくとも１つに該当する。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、腫瘍標的に結合する。別の態様では、腫瘍標的は、腫瘍標的抗原、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、又はクローディンファミリーメンバーから選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞マーカーに結合する。別の態様では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、ＴＩＭ－３から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞アクチベーターに結合する。別の態様では、Ｔ細胞アクチベーターは、ＣＤ３、４１ＢＢ、又はＯＸ４０から選択される。別の態様では、切断可能リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーである。別の態様では、切断可能リンカーは、腫瘍関連プロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、又はカテプシンＢにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、アポトーシス又は炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、カスパーゼにより切断される。別の態様では、カスパーゼは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及びカスパーゼ１２である。別の態様では、切断可能リンカーは、抗原結合部位を遮蔽しない。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂにコンジュゲートした薬剤をさらに含む。別の態様では、薬剤は、毒素又はその毒性断片；微小管阻害剤；核酸ダメージング剤；検出可能部分；又は診断用薬剤のうちの少なくとも１つである。別の態様では、ａＡｂは、配列番号１、２、又は３から選択される。
ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプIIケラチン）；Ｌ－セレクチン；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－III）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＫＧ２Ｄ；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦ；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲＩＩ２；ＮＲＩＩ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴＩ；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＥ２；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；プラスミノーゲンアクチベーター；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；プロテインＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＧＥ；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢ０２；ＳＩ００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮性単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ－アルファ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパクの一部分、又はペプチドから選択される。別の態様では、第１及び第２の抗原は、同一の抗原である；第１の抗原及び第２の抗原は異なる；又は第１の抗原及び第２の抗原は同一の抗原であるが、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位は同一の抗原の異なるエピトープに結合する；のうちの少なくとも１つに該当する。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、腫瘍標的に結合する。別の態様では、腫瘍標的は、腫瘍標的抗原、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、又はクローディンファミリーメンバーから選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞マーカーに結合する。別の態様では、Ｔ細胞マーカーは、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、ＴＩＭ－３から選択される。別の態様では、第１の抗原結合部位又は第２の抗原結合部位は、Ｔ細胞アクチベーターに結合する。別の態様では、Ｔ細胞アクチベーターは、ＣＤ３、４１ＢＢ、又はＯＸ４０から選択される。別の態様では、切断可能リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーである。別の態様では、切断可能リンカーは、腫瘍関連プロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、又はカテプシンＢにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、アポトーシス又は炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼにより切断される。別の態様では、切断可能リンカーは、カスパーゼにより切断される。別の態様では、カスパーゼは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及びカスパーゼ１２である。別の態様では、切断可能リンカーは、抗原結合部位を遮蔽しない。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂにコンジュゲートした薬剤をさらに含む。別の態様では、薬剤は、毒素又はその毒性断片；微小管阻害剤；核酸ダメージング剤；検出可能部分；又は診断用薬剤のうちの少なくとも１つである。別の態様では、ａＡｂは、配列番号１、２、又は３から選択される。
【0018】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；及び前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、第１の抗原に結合する第１の抗原結合部位の形成を可能にする活性化可能な抗体（ａＡｂ）をコードする核酸を含む。
【0019】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、及び前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、前記第１の軽鎖と共に、第１の抗原に結合する抗体結合部位を形成する活性化可能な抗体（ａＡｂ）をコードする核酸を含む。
【0020】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；及び前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、第１の抗原に結合する第１の抗原結合部位の形成を可能にする活性化可能な抗体（ａＡｂ）をコードする核酸を含む細胞を含む。
【0021】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、及び前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、前記第１の軽鎖と共に、第１の抗原に結合する抗体結合部位を形成する活性化可能な抗体（ａＡｂ）をコードする核酸を含む細胞を含む。
【0022】
別の実施形態では、本発明は、活性化可能なＡｂ及び担体を含む医薬組成物を含む。別の実施形態では、本発明は、正常組織に対する抗体の結合活性を低下させ、及びがん細胞を標的とする方法であって、有効量の活性化可能なＡｂを、それを必要としている対象に投与するステップを含む方法を含む。
【0023】
別の実施形態では、本発明は、がんの症状を治療、緩和し、又はその進行を遅延させる方法であって、有効量の活性化可能なＡｂを、それを必要としている対象に投与するステップを含む方法を含む。１つの態様では、がんは、切断可能リンカーを切断する酵素を発現するがんである。別の態様では、がんは、膀胱がん、骨がん、乳がん、癌様体、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、頭頸部がん、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、腎臓がん、肉腫、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、泌尿生殖器がん、又は尿路上皮がんから選択される。別の態様では、がんは、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱尿路上皮癌、乳房腺管癌、乳房小葉癌、食道の癌、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）、子宮頸癌、胆管癌、慢性骨髄性白血病、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、食道癌、胃腺癌、多形膠芽細胞腫、頭頸部扁平上皮癌、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）、腎色素嫌性癌、腎明細胞癌、腎乳頭状細胞癌、低悪性度神経膠腫、肺腺癌、肺扁平上皮癌、黒色腫（ＭＥＬ）、中皮腫、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、卵巣漿液性腺癌、膵管腺癌、傍神経節腫及びクローム親和細胞腫、前立腺腺癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肉腫、皮膚黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、甲状腺乳頭状癌、子宮癌肉腫、子宮体類内膜癌、及びぶどう膜黒色腫からなる群から選択される。
【0024】
別の実施形態では、本発明は、第１の可変軽鎖領域と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域と、Ｆｃ領域とを順に含み、前記切断可能リンカーが、前記第１の可変軽鎖領域及び前記第１の可変重鎖領域が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し；前記切断可能リンカーが抗原結合部位を遮蔽せず、及び前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の可変重鎖領域が解放されて、第１の抗原に結合する第１の抗原結合部位の形成を可能にする活性化可能な抗体（ａＡｂ）を含む。
【0025】
別の実施形態では、本発明は、下記の構造：第１の可変軽鎖領域を含む第１の軽鎖と、切断可能リンカーと、第１の可変重鎖領域を含む第１の重鎖とを順に含み、前記切断可能リンカーが、前記第１の軽鎖及び前記第１の重鎖が第１の抗原に対して第１の抗原結合部位を形成することを防止し又は低下させ；かつ前記切断可能リンカーが切断されると、前記第１の重鎖が解放されて、第１の抗原に結合する第１の抗原結合部位の形成を可能にする活性化可能な抗体（ａＡｂ）を発現する細胞を含む。１つの態様では、細胞はＴ細胞又は間葉系幹細胞である。別の態様では、ａＡｂは、ａＡｂをＴ細胞の表面に係留してキメラ抗原受容体を形成する膜貫通配列をさらに含み、その場合、細胞はＣＡＲ Ｔ細胞である。
【図面の簡単な説明】
【0026】
本発明の特性及び長所をより完全に理解するために、ここで添付の図面と共に本発明の詳細な説明を参照する。
【図1A】～
【図1C】タンパク質の概略的ダイヤグラム、及びプロ抗体デザインが切断後に抗原結合能力をどのように取り戻すかその方式を示すダイヤグラムを示す図である。図１Ａ．ＡＡＢの概略図。図１Ｂは、第１の種類の抗原結合活性化を示す。ＣＬとＶＨとは、ＭＭＰ１４に対して感受性を有するタンパク質分解性リンカーによりリンクしている。ＶＨは、切断前は、ＶＬと対形成して安定な抗原結合部位を形成することができない。ＭＭＰ１４による切断後、ＶＨは開放され、そしてＶＬと対形成して抗原結合部位を形成することができる。図１Ｃは、第２の種類の抗原結合活性化を示す。第１のＦｃとＶＨとが、ＭＭＰ１４に対して感受性を有するタンパク質分解性リンカーによりリンクしている。ＶＨは、切断前は、ＶＬと対形成して安定な抗原結合部位を形成することができない。ＭＭＰ１４による切断後、ＶＨは開放され、そしてＶＬと対形成して抗原結合部位を形成することができる。
【図2】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃが、抗原結合能力を回復することを示す図である。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４により切断された後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃは、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIII細胞と、陽性コントロールと同程度に強く結合することを示している。未切断タンパク質の結合は、陽性コントロールに対して約１／１００である。
【図3】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３が、抗原結合能力を回復することを示す図である。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４により切断された後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３は、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIII細胞と、未切断タンパク質の結合よりも２０倍超強く結合することを示している。
【図4】ＭＭＰ１４切断後の二重特異性プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３は、未切断タンパク質による活性化よりも１０倍超強く、Ｔ細胞を活性化させることを示す図である。ＭＭＰ１４による切断を伴い、又は伴わないで、レポータージャーカット細胞を、ＫａｔｏIII細胞及びプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３と混合した。２４時間インキュベーションした後、Ｔ細胞活性化レベルをルシフェラーゼ生成量により測定した。
【図5】ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４ ＳｃＦｖ－Ｆｃは、未切断タンパク質よりも１０倍超強く、表面コーティングされたｈＣＴＬＡ４タンパク質と結合することを示す図である。
【図6】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ＣＬＤＮ１８．２クローン２が、抗原結合能力を回復することを示す図である。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２クローン２は、未切断タンパク質の結合よりも約１００×強く、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIIIと結合することを示している。
【図7】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３ ＳｃＦａｂがｈＣＤ３ｅ結合能力を回復することを示す図である。ＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３ ＳｃＦａｂは、未切断タンパク質の結合よりも２０×超強く、表面コーティングされたｈＣＤ３ｅと結合することを示している。
【図8】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）が、ｈＣＤ３ｅ結合能力を回復することを示す図である。ＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）は、未切断タンパク質の結合よりも１０×超強く、コーティングされたｈＣＤ３ｅと結合することを示している。
【図9】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ７）が、抗原結合能力を回復することを示す図である。フローサイトメトリーに基づく結合アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ７）は、ｈＣＴＬＡ４発現細胞に対して陽性コントロールと同程度に強く結合する一方、未切断タンパク質は結合性をほとんど示さないことを示している。
【図10】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）が、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示す図である。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）は、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【図11】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ｈＰＤ－Ｌ１が、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示す図である。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ｈＰＤ－Ｌ１は、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【図12】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ＣＬＤＮ１８．２ ＳｃＦｖが、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示す図である。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ＣＬＤＮ１８．２ ＳｃＦｖは、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【図13】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－プロ抗ｈＰＤ－Ｌ１は、ＰＢＭＣにおいてＴ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示す図である。ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－プロ抗ｈＰＤ－Ｌ１は、ＰＢＭＣにおいて、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激する。Ｔ細胞活性化のレベルは、ＩＦＮ－ガンマ生成量により測定される。
【図14】リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ１）－Ｆｃが、抗原結合能力を回復することを示す図である。フローサイトメトリーに基づく結合アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ１）－Ｆｃは、陽性コントロールと同程度に強くｈＣＴＬＡ４発現細胞と結合する一方、未切断タンパク質は、結合性をほとんど示さないことを示している。
【発明を実施するための形態】
【0027】
本発明の様々な実施形態の作出及び使用について、下記において詳細に議論されるが、本発明は、多種多様な特定の文脈において具体化され得る、数多くの適用可能な発明の概念を提供するものと認識すべきである。本明細書において議論される特定の実施形態は、本発明を作出及び使用するための具体的なやり方について例証するに過ぎず、また本発明の範囲を制限しない。
【0028】
本発明を理解し易くするために、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書で定義される用語は、本発明に関連する当業者により一般的に理解されるような意味を有する。用語、例えば「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」等は単数形の実体のみを指すようには意図されず、例証目的で具体的な例が使用され得る一般的なクラスを含む。本明細書内の専門用語は、本発明の特別な実施形態を記載するのに使用されるが、しかしその利用は、特許請求の範囲で概説される場合を除き、本発明を制限しない。
【0029】
がんを含む様々なヒト疾患を治療するために、治療用モノクロナール抗体が開発されている。がん療法では、例えば抗ＣＴＬＡ４抗体又は抗ＣＤ３抗体が、腫瘍微小環境において免疫抑制シグナルを低下させることによりＴ細胞を活性化させるのに使用されてきた。しかしながら、オフターゲットなＡｇ－Ａｂ相互作用に起因してＴ細胞が全身的に過剰に活性化すると、重大な有害事象を引き起こす。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体は、同一の抗原を発現する非腫瘍組織を多くの場合標的とする。先行技術の抗ＣＴＬＡ４活性化可能抗体の場合、コンストラクトは、抗ＣＴＬＡ４の活性をブロックする切断可能リンカーに加えて、合成ペプチド／外部由来の外来ペプチド（マスキング部分）の両方が付加されている。これらの２つのエキストラペプチドは、リンカーに対する免疫応答を引き起こすおそれがあり、さらに、リンカーが切断されたからといって、抗原結合部位からのマスキング部分の解放の保証にならない。
【0030】
本発明は、マスキング部分の使用をやめることにより、モノクロナール抗体療法におけるオフターゲット毒性を低下させ、これにより患者における治療指数及び薬物忍容性を増加させる。本明細書において教示されるプロ抗体は、薬物が腫瘍に到達するまで、ほとんど～まったく活性を有さず、従って長期半減期、タンパク質の安定性、及び製造可能性を実現することが判明した。新しいプロ抗体は、標的分子に対する結合性を低下させる短いリンカーにより、抗体の重鎖及び軽鎖が短縮するように設計される。この短いリンカーは、腫瘍関連プロテアーゼに対して感受性を有するので、リンカーが切断されると、腫瘍組織において重鎖及び軽鎖の形態的位置、従って標的に対するその結合親和性を回復させる。
【0031】
本明細書で使用される場合、用語「活性化可能な抗体」、「ａＡｂ」、「プロ抗体」、又は「プロボディ」とは、抗体の抗原結合ドメイン（切断可能リンカーにより分離している）を含む融合タンパク質を指す。融合タンパク質の基本構造は、アミノ側からカルボキシ側に向かって：可変軽鎖領域－切断可能リンカー－可変重鎖領域、又は可変重鎖領域－切断可能リンカー－可変軽鎖領域を含む。第１の融合タンパク質（第１の融合タンパク質は第１の抗原に結合する）は、第２の抗原を標的とする第２の融合タンパク質と同時発現可能である。第１及び第２の抗原は、同一の抗原、異なる抗原であり得る、又は同一の抗原であっても、（融合タンパク質は）抗原の異なるエピトープに結合する。融合タンパク質は、定常軽鎖領域、定常重鎖領域、Ｆｃ領域（野生型又はミュータント）、Ｆｃと第２のタンパク質（例えば、サイトカイン）の間の第２のリンカー、のうちの１又は２以上も含み得る。
【0032】
ａＡｂをコードする核酸は、宿主細胞、例えば細菌、真菌、植物、又は哺乳動物の細胞等内でａＡｂを発現するのに使用されるベクターの一部分であり得る。
【0033】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」又は「抗体ペプチド（複数可）」とは、インタクトな抗体、又は特異的結合について該インタクトな抗体と競合するその結合断片を指す。結合断片は、組換えＤＮＡ技術により、又はインタクトな抗体の酵素的若しくは化学的切断により生成される。結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖可変断片（ｓｃＦｖ，single-chain variable fragment）抗体が含まれる。「二重特異性」又は「二官能性」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものと理解される。過剰の抗体が、対抗受容体に結合した受容体の量を少なくとも約２０％、４０％、６０％、又は８０％、及びより一般的には約８５％を上回り低下させるとき（インビトロ競合結合アッセイ法において測定されるように）、抗体は受容体と対抗受容体との接着を実質的に阻害する。
【0034】
本明細書で使用される場合、用語「二重特異性」又は「二官能性」抗体は、２つの異なる抗原結合部位を有するものと理解される。例えば、本発明の二重特異性抗体は、２つの異なる抗原結合ドメイン、例えば第１及び第２の抗原にそれぞれ結合する第１及び第２の抗原結合ドメインを含む。二重特異性抗体は、同一の抗原に、但し２つの異なるエピトープに結合する２つの異なる抗原結合領域を有する場合もある。より一般的には、二重特異性抗体は２つの異なる抗原に結合する。第１又は第２の抗原は、一般的に腫瘍特異抗原である一方、他方の抗原結合領域はＴ細胞上のＴ細胞活性化分子に結合する。
【0035】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味合いで使用され、また所望の生物学的活性を示す限り、モノクロナール抗体（完全長抗体、又はその他の２価の、Ｆｃ領域含有抗体、例えば２価のｓｃＦｖ Ｆｃ融合抗体等を含む）、ポリクロナール抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ）を特にカバーする。抗体（Ａｂ，Antibody）及び免疫グロブリン（Ｉｇ，immunoglobulin）は、同一の構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特異抗原に対して結合特異性を示す一方、免疫グロブリンには、抗体、及び抗原特異性を欠くその他の抗体様分子の両方が含まれる。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系により低レベルで、及びミエローマにより増加したレベルで産生される。本発明は、換言すれば、完全に組換えであるモノクロナール抗体（及びその結合断片）を含み、その場合、相補性決定領域（ＣＤＲ，complementarity determining region）は、ヒト抗体骨格中に遺伝的にスプライシングされており、抗体のベニヤリングと多くの場合呼ばれる。従って、ある特定の態様では、モノクロナール抗体は完全に合成された抗体である。ある特定の実施形態では、モノクロナール抗体（及びその結合断片）は、細菌細胞又は植物細胞を含む真核細胞内で生成され得る。
【0036】
本明細書で使用される場合、用語「抗体断片」とは、完全長抗体の一部分、一般的に抗原結合性領域又は可変領域を指し、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片が含まれる。抗体をパパイン消化すると、Ｆａｂ断片と呼ばれる２つの等しい抗原結合断片（それぞれ単一の抗原結合部位を有する）、及び残りの「Ｆｃ」断片（容易に結晶化するその能力故にそのように呼ばれる）が生成する。ペプシン処理すると、抗原を架橋する能力を有する２つの抗原結合断片を有するＦ（ａｂ’）２断片、及び残りの他の断片（ｐＦｃ’と呼ばれる）が得られる。本明細書で使用される場合、「機能的断片」とは、抗体に関して、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ）、及びＦ（ａｂ’）２断片を指す。
【0037】
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ」断片は、完全な抗原認識及び結合部位を備える最小の抗体断片である。この領域は、非共有結合的に緊密に会合した状態の１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインのダイマーから構成される（ＶＨ－ＶＬダイマー）。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ－ＶＬダイマーの表面上に抗原結合部位を定義するのはこのコンフィギュレーションにおいてである。全体として、６つのＣＤＲが抗体に対して抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含む半分のＦｖ）であっても抗原を認識し、それに結合する能力を有するものの、その親和性は結合部位全体よりも低下している。
【0038】
Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ）とも呼ばれ、また軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１，first constant domain）も含有する。Ｆａｂ’断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１又は２以上のシステインを含むいくつかの残基が付加することによりＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するときのＦａｂ’に対する本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化生成物のヒンジシステインのジスルフィド結合が切断されることにより生成する。抗体断片のさらなる化学的カップリングは当業者にとって公知である。
【0039】
天然の抗体及び免疫グロブリンは、通常、２つ同一の軽鎖（Ｌ，light）及び２つ同一の重鎖（Ｈ，heavy）から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖とリンクしている。但し、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変化する。各重鎖及び軽鎖は、規則的に間隔が設けられた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一方の端部に可変ドメイン（ＶＨ）、その後にいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の端部に可変ドメイン（ＶＬ）、及びその他方の端部に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインとアライメントされており、また軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインとアライメントされている。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間で界面を形成すると考えられている（Clothia et al., J. Mol. Biol. 186, 651-66, 1985）; Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 4592-4596 （1985）、関連する部分は本明細書において参照により組み込まれている。
【0040】
本明細書で使用される場合、「単離された」抗体は、それが生成された環境のコンポーネントから同定、及び分離、及び／又は回収された抗体である。その生成環境の汚染物質コンポーネントは、抗体に対して診断上又は治療上の使用について妨害する物質であり、また酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質性又は非タンパク質性の溶質が該当し得る。ある特定の実施形態では、少なくとも３つの異なる方法により測定可能なように：１）ローリー法により決定される場合、抗体の５０重量％を上回る、例えば７５重量％超、若しくは８５重量％超、若しくは９５重量％超、若しくは９９重量％超等まで；２）スピニングカップシークエンテーターを使用する場合、それにより、Ｎ末端若しくは内部アミノ酸配列について、少なくとも１０残基、例えば配列の少なくとも１５残基等を取得するのに十分な程度まで；又は３）還元若しくは非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥによる場合、クーマシーブルー、若しくは好ましくは銀染色を使用して均質となるまで、抗体は精製される。抗体の天然環境の少なくとも１つのコンポーネントが存在しないことから、単離された抗体には、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕ抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
【0041】
本明細書で使用される場合、用語「抗体ミュータント」とは、アミノ酸残基のうちの１又は２以上が改変された、抗体のアミノ酸配列バリアントを指す。そのようなミュータントは、１００％未満の配列同一性、或いは少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列との類似性、或いは抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメインいずれかのアミノ酸配列と、例えば少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５、９６、９７、９８、若しくは９９％等の類似性を必然的に有する。
【0042】
本明細書で使用される場合、用語「可変」とは、抗体の可変ドメインの文脈において、可変ドメインのある特定の部分が配列において抗体間で広範囲に異なり、そしてそれがその特定の抗原に対する特定の抗体それぞれの結合性及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体にわたり均等に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方において、高頻度可変領域としても公知の、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術：（１）異種間配列変動に基づくアプローチ（すなわち、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest （National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987））；及び（２）抗原－抗体複合体結晶学試験に基づくアプローチ（Chothia, C. et al. （1989）, Nature 342: 877）、又は両方、すなわちChothia法＋Kabat法が存在する。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ，framework）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造を繋ぎ合わせ、場合によってはその一部を形成するループを形成する３つのＣＤＲにより繋ぎ合わされたβシートコンフィギュレーションを主に取り入れた４つのＦＲ領域をそれぞれ含む。各鎖内のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して共に保持され、そして他方の鎖に由来するＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al.を参照）。定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与等の様々なエフェクター機能を示す。
【0043】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプの１つに割り振ることができる。
【0044】
「免疫グロブリン」は、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて異なるクラスに割り振ることができる。免疫グロブリンには少なくとも５つ（５）の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元コンフィギュレーションは周知されている。
【0045】
本明細書で使用される場合、用語「モノクロナール抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、自然に発生する可能性のある変異を除いて同一である。モノクロナール抗体はきわめて特異的であり、単一の抗原性部位に対するものである。さらに、異なる決定基（エピトープ）を標的とする異なる抗体を一般的に含む従来型の（ポリクロナール）抗体調製物とは対照的に、各モノクロナール抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクロナール抗体は、ハイブリドーマの培養によって合成され、その他の免疫グロブリンによって汚染されないという点で有利である。修飾語「モノクロナール」は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を表し、また何らかの特別な方法による抗体産生を必要とするものとは解釈されない。例えば、ここで開示及び主張される発明に基づき使用されるモノクロナール抗体は、Kohler and Milstein, Nature 256, 495 （1975）（関連する部分が本明細書において参照により組み込まれている）により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得る。
【0046】
ここで開示及び主張される発明に基づき利用されるすべてのモノクロナール抗体は、（１）本明細書において下記でより詳細に記載されるような計画的免疫化プロトコールの結果；又は（２）疾患若しくはがんの過程で自然に抗体の生成を引き起こす免疫応答の結果である。
【0047】
ここで開示及び主張される発明のモノクロナール抗体を使用するには、そのような又は類似したモノクロナール抗体を対象、例えばヒト等に投与することを必要とし得る。しかしながら、モノクロナール抗体が、ヒト以外の動物、例えば齧歯類又はニワトリ等において生成されるとき、そのような抗体をヒト患者に投与すると、免疫応答が通常誘発されるが、その場合免疫応答は抗体そのものを向けられる。そのような反応は、そのような療法の持続期間及び有効性を制限する。そのような問題を克服するために、ここで開示及び主張される発明のモノクロナール抗体は、「ヒト化され」得る、すなわち抗体は、特異抗原に対する抗体の親和性を保持しつつ、その抗原性の部分が除去され、従ってヒト抗体の類似部分が置換されるように改変される。この改変は、アミノ酸数個が関係するに過ぎない場合もあれば、また抗体の相補性決定領域のみをそのまま残して、抗体のフレームワーク領域全体を含む場合もある。抗体をヒト化するいくつかの方法が、当技術分野において公知であり、また関連する部分は本明細書において参照により組み込まれている、Queenet et alが２００１年１月３０日に出願した米国特許第６，１８０，３７０号；Brickellが２０００年４月２５日に出願した米国特許第６，０５４，９２７号；Studnickaが１９９９年２月９日に出願した米国特許第５，８６９，６１９号；Linが１９９９年１月１９日に出願した米国特許第５，８６１，１５５号；Rodriquezet et alが１９９８年１月２７日に出願した米国特許第５，７１２，１２０号；及びCabilly et alが１９８９年３月２８日に出願した米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。
【0048】
抗体のヒト化形態は、ヒト免疫グロブリンの配列から原理的に構成され、及びヒト以外の免疫グロブリンに由来する最低限度の配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（例えば、抗体のＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又はその他の抗原結合部分配列等）である。ヒト化は、Winter及び共同研究者（Jones et al., 1986; Riechmann et al., 1988; Verhoeyen et al., 1988）の方法に従って、非ヒト（すなわち、齧歯類、ニワトリ）ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施可能である（米国特許第５，２２５，５３９号も参照）。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、ドナー抗体由来の対応するヒト以外の残基に置き換わっている。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、また移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基も含み得る。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてがヒト以外の免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、そしてフレームワーク領域のすべて又は実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である、少なくとも１つ、一般的には２つの可変ドメインを実質的にすべて含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含む。
【0049】
本発明のａＡｂは、動物モデルを対象にビーズに基づく若しくは細胞に基づくアッセイ、又はインビボ試験により測定されるように、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ，antibody dependent cellular cytotoxicity）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ，antibody-dependent cellular phagocytosis）、抗体依存性好中球食作用（ＡＤＮＰ，antibody-dependent neutrophil phagocytosis）、又は抗体依存性補体沈着（ＡＤＣＤ，antibody-dependent complement deposition）機能において好ましいレベルの活性を付与する、改変された配列又はグリコシル化部位も含み得る。
【0050】
ａＡｂは、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域からなる融合体である単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり得る。このキメラ分子は、定常領域が除去され、そして２つの抗原結合ドメインの間にリンカーペプチドが導入されているにもかかわらず、オリジナルの免疫グロブリンの特異性を保持する。この改変では、リンカーの切断後でも特異性は通常不変のままである。このような分子は、単一ペプチドとして抗原結合ドメインを発現させるのにきわめて好都合であるファージディスプレイを円滑化するのにこれまでに創出された。ｓｃＦｖは、ハイブリドーマ又はＢ細胞に由来するサブクローン化された重鎖及び軽鎖から直接創出され得る。単鎖可変断片は完全な抗体分子に見出される定常Ｆｃ領域を欠き、従って共通する結合部位（例えば、プロテインＡ／Ｇ）が抗体を精製するのに使用される。プロテインＬはκ軽鎖の可変領域と相互作用するので、これらの断片は、多くの場合プロテインＬを使用して精製／固定化可能である。
【0051】
本発明は、特異抗原を標的とする活性化可能な抗体（プロ抗体又はプロボディとも呼ばれる）を含む。抗原の例として第１の抗原が挙げられ、第１の抗原は、ＩＣＡＭ１；ＶＣＡＭ１；ＥｐＣＡＭ；フィブロネクチンのエキストラドメインＢ；黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）；黒色腫関連プロテオグリカン（ＭＡＰＧ）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＶ－ＭＡＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）；線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）；癌胎児抗原（ＣＥＡ）；細胞接着分子（ＣＡＭ）；ヒトＢ細胞成熟標的（ＢＣＭＡ）；胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）；葉酸受容体、インスリン様増殖因子受容体（ＩＬＧＦＲ）；ＣＤ１３３；ＣＤ４０；ＣＤ３７；ＣＤ３３；ＣＤ３０；ＣＤ２８；ＣＤ２４；ＣＤ２３；ＣＤ２２；ＣＤ２１；ＣＤ２０；ＣＤ１９；ＣＤ１３；ＣＤ１０；ＨＥＲ３；ＨＥＲ２；非筋ミオシン重鎖タイプＡ（ｎｍＭＨＣＡ）；トランスフェリン；上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）；アネキシンＡ１；ヌクレオチン、テネイシン、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、血管内皮増殖因子受容体２；（ＶＥＧＦＲ－２）；アミノペプチダーゼＮ、ｔｉｅ－１、ｔｉｅ－２、又はｃ－Ｍｅｔから選択される組織特異的表面抗原である。その他の抗原として、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ－２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＢ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮＩＣ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＮ３；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＣＧＲＰ；Ｃｌｑ；Ｃｌｒ；ＣＩ；Ｃ４ａ；Ｃ４ｂ；Ｃ２ａ；Ｃ２ｂ；Ｃ３ａ；Ｃ３ｂ；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ－セレクチン；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮ０１；ＥＮ０２；ＥＮ０３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；第VII因子；第IX因子；第Ｖ因子；第VIIａ因子；第Ｘ因子；第XII因子；第XIII因子；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；Ｆｃガンマ受容体；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦｌ３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＩＬ１（エプシロン）；ＦＩＬ１（ゼータ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（ＣＩＯ）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；糖タンパク質（ＧＰ）IIｂ／IIIａ；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；Ｈｅｒ２；ＨＧＦ；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプIIケラチン）；Ｌ－セレクチン；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－III）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＫＧ２Ｄ；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦ；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲＩＩ２；ＮＲＩＩ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴＩ；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＥ２；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；プラスミノーゲンアクチベーター；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；プロテインＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＧＥ；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢ０２；ＳＩ００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮性単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；サブスタンスＰ；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１１１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭＬ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼIIａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；トロンボモジュリン；トロンビン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及び／又はＺＦＰＭ２から選択される少なくとも１つの遺伝子によりコードされるタンパク質、タンパク質の一部分、又はペプチドが挙げられる。
【0052】
本発明は、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＧＤ２、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮増殖因子受容体活性ミュータント（ＥＧＦＲVIII）、ＣＤ１３３、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、上皮細胞接着分子（Ｅｐｃａｍ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＥＰＨ受容体Ａ４（ＥｐｈＡ）、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｔ（ｃＭＥＴ）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（ｍＥＨ）、ＭＡＧＥ、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ウィルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、又はクローディンファミリータンパク質から選択される腫瘍標的抗原も含む。
【0053】
本発明は、Ｔ細胞マーカーを標的とする抗原結合ドメインも含む。Ｔ細胞マーカーの例として、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、Ｌａｇ３、Ｓ１５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＣＲ－アルファ、ＴＣＲ－ベータ、及び／又はＴＩＭ－３が挙げられる。抗体は、活性化Ｔ細胞マーカー、ＣＤ３、４１ＢＢ、又はＯＸ４０とも結合し得る。
【0054】
本発明は、切断可能リンカー、例えばプロテアーゼ切断可能リンカー等も含む。切断可能リンカーの例は、腫瘍関連プロテアーゼ：ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ｕＰＡ、ＦＡＰａ、又はカテプシンＢにより切断される配列を含むペプチドである。その他の例として、アポトーシス又は炎症関連応答期間中に上方制御されるプロテアーゼ、例えばカスパーゼにより切断される切断可能リンカーが挙げられる。カスパーゼの例は、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、及び／又はカスパーゼ１２である。先行技術の活性化可能な抗体とは異なり、本発明の切断可能リンカーは、抗原結合部位を直接遮蔽しない。
【0055】
本発明は、ａＡｂと共に、例えばａＡｂ融合タンパク質の一部として、又はａＡｂと個別に結合したサイトカインを含む場合もある。サイトカインは、成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ＴＮＦ－ａ；ミュラー管抑制因子；ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子；血小板増殖因子；胎盤増殖因子、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子－１及び－１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）；リンホトキシン－アルファ；リンホトキシン－ベータ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＦＡＳＬ；４－１ＢＢＬ；ＯＸ４０Ｌ；ＴＲＡＩＬ；ＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１５；ＩＬ－１８；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－３３；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮ－ｂ；ＩＦＮ－ｇ；ＩＦＮ－ｇ誘発因子（ＩＧＩＦ）；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；白血病抑制因子（ＬＩＦ）；又はｋｉｔリガンド（ＫＬ）のうちの少なくとも１つから選択され得る。
【0056】
本発明のプロ抗体デザイン。オフターゲットなＡｇ－Ａｂ相互作用を回避するために、本発明の戦略は、タンパク質分解性リンカーを導入して、抗原結合部位のタンパク質構造を捻じ曲げることにより抗体の抗原結合を低下させ、又はブロックさえもすることである。リンカーが標的部位において切断された後、抗体の２つの部分（抗体の抗原結合領域を共に形成する）が捻じ曲げられた構造から解放され、そして抗体はその抗原結合能力を取り戻す。
【0057】
本明細書で開示される融合タンパク質のデザイン及び方法は、抗体構造中に余分な要素を付加することなくすべての種類の抗体に適用され得る。さらに、短鎖リンカーが免疫原性を低下させ、そして抗体の生産性を高めることが判明した。さらに、本発明は、Ｇ４Ｓ反復リンカーを含まず、これによりリンカー切断前に融合タンパク質が凝集するという問題を低下させる。
【実施例1】
【0058】
材料及び方法。クローニング及びタンパク質の生成。
タンパク質を発現させるためのＤＮＡ断片を、Genewiz社により合成し、又はＰＣＲにより生成し、そしてアイソサーマルアセンブリ（Quantabio社）を経由してｐＥＥ６．４ベクター中にクローン化した。
タンパク質を発現させるためのＤＮＡ断片を、Genewiz社により合成し、又はＰＣＲにより生成し、そしてアイソサーマルアセンブリ（Quantabio社）を経由してｐＥＥ６．４ベクター中にクローン化した。
【0059】
タンパク質の発現では、プラスミドを、２９３フリースタイル培地（Gibco社）内でPEI（Sigma社）と混合し、そして２９３Ｆ細胞中にトランスフェクトした。細胞を１２０ｒｐｍで振盪しながら３７℃でインキュベートした。インキュベーションから５～６日後、上清を採取及び濾過した。タンパク質を、プロテインＡ樹脂（Repligen社）を使用して精製し、そして中性化した溶出バッファー（４０ｍＭのトリス、ｐＨ７．０／１００ｍＭのグリシン／１００ｍＭのＮａＣｌ）中に保管した。
【0060】
ＥＬＩＳＡ及び細胞ベースのＥＬＩＳＡ。抗ＣＴＬＡ４抗体の結合強度をテストする場合、ＣＴＬＡ４タンパク質（Sino Biological社）を２ｕｇ／ｍｌまで稀釈し、そして９６ウェルプレートにコーティングした。テスト抗体を異なる濃度に稀釈し、そしてウェルに添加した。３７℃で１時間インキュベートした後、未結合のタンパク質を洗浄バッファー（PBS／０．０５％のツイーン２０）で洗い流した。検出抗体（Jackson ImmunoResearch社から入手したＡＰ－ヤギ－抗ヒトＩｇＧ）を添加した。３７℃で１時間インキュベートした後、未結合のタンパク質を洗浄バッファーで洗い流した。次に、PNPP基質（Pierce社）溶液を添加した。黄色に発色するまで室温でインキュベートする。Biotek Epoch2を使用してＯＤ４０５を測定し、そしてGen5ソフトウェアを使用して分析した。抗ＣＬＤＮ１８．２タンパク質の結合強度をテストする場合、タンパク質の代わりにＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIII細胞（ＡＴＣＣ）を９６ウェルプレートにコーティングしたことを除き、上記方法と同じである。各ウェルには細胞１０５個が含まれた。
【0061】
Ｔ細胞活性化アッセイ。ＭＭＰ１４による切断前後において、Ｐｒｏ－抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－ＣＤ３について、Ｔ細胞を活性化させる能力をテストする場合、ジャーカットＮＦＡＴ細胞（InvivoGen社）、ＫａｔｏIII細胞（ＡＴＣＣ）、及びＭＭＰ１４切断前後の稀釈したタンパク質を、９６ウェルプレートの各ウェル内で混合した。各ウェルは、ジャーカット細胞１０４個及びＫａｔｏIII細胞１０４個を含有する。３７℃で３０時間インキュベートした後、上清３０ｕｌを各ウェルからブラック９６ウェルプレートに移した。次に、QUANTI-Lucアッセイ溶液（InvivoGen社）を注入して、ルミノメーター（Biotek Synergy社）を使用しながらルシフェラーゼ活性を測定し、そしてGen5ソフトウェアを使用して分析した。
【0062】
タンパク質の配列
Ｐｒｏ－抗ＣＴＬＡ４－Ｆｃ
ＭＩＮＥＦＳＳＬＡＧＡＱＲＱＲＬＬＧＶＶＶＶＱＳＬＶＨＨＧＡＡＫＨＶＡＬＬＰＳＡＬＶＨＣＱＩＡＳＥＳＫＡＡＶＧＩＱＨＧＨＧＧＬＶＶＶＬＧＬＡＶＡＦＰＦＨＧＤＩＡＲＶＥＡＬＨＱＴＡＱＲＨＬＩＬＧＱＬＶＳＡＧＲＬＧＶＨＬＲＬＰＲＬＡＦＧＬＡＤＧＬＬＮＧＧＧＱＳＬＶＧＤＬＡＬＶＬＬＡＶＥＰＶＬＶＱＨＧＱＨＧＨＨＳＩＣＧＶＶＬＬＬＳＧＬＧＦＧＶＶＨＦＤＡＶＨＶＰＶＫＬＨＬＧＶＬＭＡＤＶＨＨＨＡＣＨＬＧＣＳＲＤＨＱＣＩＬＧＦＧＲＥＱＫＨＧＲＳＡＱＱＦＧＳＲＴＡＲＮＲＹＨＲＡＬＴＰＩＶＥＶＡＧＬＴＲＴＶＩＳＲＧＶＬＧＧＹＲＶＮＬＱＫＥＬＶＦＲＧＶＴＧＤＲＤＴＲＦＤＲＲＶＶＩＧＲＴＦＩＩＤＥＴＨＰＦＮＦＬＴＷＥＬＴＤＰＩＰＴＩＴＧＧＤＧＧＡＧＮＲＡＲＱＡＥＲＴＧＲＩＮＱＴＲＴＲＦＦＱＦＹＬＳＡＹＶＬＴＰＰＦＤＦＱＬＧＡＲＴＥＲＶＲＩＶＶＰＬＬＡＶＶＫＲＬＶＦＶＬＮＲＲＮＧＱＲＥＶＧＴＲＡＲＴＴＥＴＶＲＮＡＧＶＴＧＲＲＶＶＤＱＱＦＲＲＬＴＲＬＬＨＶＰＩＱＩＶＧＦＲＶＲＶＥＱＡＬＲＡＦＡＲＤＧＲＦＦＴＲＲＨＡＱＲＲＷＲＬＧＨＨＮＶＳＧＧＴＷＮＰＥＱＱＹＰ（配列番号１）
Ｐｒｏ－抗ＣＴＬＡ４－Ｆｃ
ＭＩＮＥＦＳＳＬＡＧＡＱＲＱＲＬＬＧＶＶＶＶＱＳＬＶＨＨＧＡＡＫＨＶＡＬＬＰＳＡＬＶＨＣＱＩＡＳＥＳＫＡＡＶＧＩＱＨＧＨＧＧＬＶＶＶＬＧＬＡＶＡＦＰＦＨＧＤＩＡＲＶＥＡＬＨＱＴＡＱＲＨＬＩＬＧＱＬＶＳＡＧＲＬＧＶＨＬＲＬＰＲＬＡＦＧＬＡＤＧＬＬＮＧＧＧＱＳＬＶＧＤＬＡＬＶＬＬＡＶＥＰＶＬＶＱＨＧＱＨＧＨＨＳＩＣＧＶＶＬＬＬＳＧＬＧＦＧＶＶＨＦＤＡＶＨＶＰＶＫＬＨＬＧＶＬＭＡＤＶＨＨＨＡＣＨＬＧＣＳＲＤＨＱＣＩＬＧＦＧＲＥＱＫＨＧＲＳＡＱＱＦＧＳＲＴＡＲＮＲＹＨＲＡＬＴＰＩＶＥＶＡＧＬＴＲＴＶＩＳＲＧＶＬＧＧＹＲＶＮＬＱＫＥＬＶＦＲＧＶＴＧＤＲＤＴＲＦＤＲＲＶＶＩＧＲＴＦＩＩＤＥＴＨＰＦＮＦＬＴＷＥＬＴＤＰＩＰＴＩＴＧＧＤＧＧＡＧＮＲＡＲＱＡＥＲＴＧＲＩＮＱＴＲＴＲＦＦＱＦＹＬＳＡＹＶＬＴＰＰＦＤＦＱＬＧＡＲＴＥＲＶＲＩＶＶＰＬＬＡＶＶＫＲＬＶＦＶＬＮＲＲＮＧＱＲＥＶＧＴＲＡＲＴＴＥＴＶＲＮＡＧＶＴＧＲＲＶＶＤＱＱＦＲＲＬＴＲＬＬＨＶＰＩＱＩＶＧＦＲＶＲＶＥＱＡＬＲＡＦＡＲＤＧＲＦＦＴＲＲＨＡＱＲＲＷＲＬＧＨＨＮＶＳＧＧＴＷＮＰＥＱＱＹＰ（配列番号１）
【0063】
Ｐｒｏ－抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＦＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＳＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＮＹＬＩＥＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＬＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＧＮＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２）
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＦＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＳＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＮＹＬＩＥＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＬＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＧＮＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２）
【0064】
Ｐｒｏ－抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－ＣＤ３
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＦＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＳＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＮＹＬＩＥＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＬＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＧＮＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＦＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＳＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＮＹＬＩＥＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＬＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＧＮＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）
【0065】
図１は、タンパク質の概略的ダイヤグラム、及びプロ抗体デザインが切断後に抗原結合能力をどのように取り戻すかその方式を示すダイヤグラムを示す。図１Ａ．ＡＡＢの概略図。図１Ｂは、第１の種類の抗原結合活性化を示す。ＣＬとＶＨとは、ＭＭＰ１４に対して感受性を有するタンパク質分解性リンカーによりリンクしている。ＶＨは、切断前は、ＶＬと対形成して安定な抗原結合部位を形成することができない。ＭＭＰ１４による切断後、ＶＨは開放され、そしてＶＬと対形成して抗原結合部位を形成することができる。図１Ｃは、第２の種類の抗原結合活性化を示す。第１のＦｃとＶＨとが、ＭＭＰ１４に対して感受性を有するタンパク質分解性リンカーによりリンクしている。ＶＨは、切断前は、ＶＬと対形成して安定な抗原結合部位を形成することができない。ＭＭＰ１４による切断後、ＶＨは開放され、そしてＶＬと対形成して抗原結合部位を形成することができる。
【0066】
図２は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃが、抗原結合能力を回復することを示すグラフである。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４により切断された後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃは、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIII細胞と、陽性コントロールと同程度に強く結合することを示している。未切断タンパク質の結合は、陽性コントロールに対して約１／１００である。
【0067】
図３は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３が、抗原結合能力を回復することを示すグラフである。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４により切断された後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３は、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIII細胞と、未切断タンパク質の結合よりも２０倍超強く結合することを示している。
【0068】
図４は、ＭＭＰ１４切断後の二重特異性プロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３は、未切断タンパク質による活性化よりも１０倍超強く、Ｔ細胞を活性化させることを示すグラフである。ＭＭＰ１４による切断を伴い、又は伴わないで、レポータージャーカット細胞を、ＫａｔｏIII細胞及びプロ抗ＣＬＤＮ１８．２－Ｆｃ－抗ｈＣＤ３と混合した。２４時間インキュベーションした後、Ｔ細胞活性化のレベルをルシフェラーゼ生成量により測定した。
【0069】
図５は、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４ ＳｃＦｖ－Ｆｃは、未切断タンパク質よりも１０倍超強く、表面コーティングされたｈＣＴＬＡ４タンパク質と結合することを示すグラフである。
【0070】
図６は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ＣＬＤＮ１８．２クローン２が、抗原結合能力を回復することを示すグラフである。細胞ベースのＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ＣＬＤＮ１８．２クローン２は、未切断タンパク質の結合よりも約１００×強く、ＣＬＤＮ１８．２発現ＫａｔｏIIIと結合することを示す図である。
【0071】
図７は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３ ＳｃＦａｂが、ｈＣＤ３ｅ結合能力を回復することを示すグラフである。ＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３ ＳｃＦａｂは、未切断タンパク質の結合よりも２０×超強く、表面コーティングされたｈＣＤ３ｅと結合することを示している。
【0072】
図８は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）が、ｈＣＤ３ｅ結合能力を回復することを示すグラフである。ＥＬＩＳＡデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）は、未切断タンパク質の結合よりも１０×超強く、コーティングされたｈＣＤ３ｅと結合することを示している。
【0073】
図９は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ７）が、抗原結合能力を回復することを示すグラフである。フローサイトメトリーに基づく結合アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ７）は、ｈＣＴＬＡ４発現細胞に対して陽性コントロールと同程度に強く結合する一方、未切断タンパク質は結合性をほとんど示さないことを示している。
【0074】
図１０は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）が、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示すグラフである。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ７）は、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【0075】
図１１は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ｈＰＤ－Ｌ１が、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示すグラフである。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ｈＰＤ－Ｌ１は、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【0076】
図１２は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ＣＬＤＮ１８．２ ＳｃＦｖが、Ｔ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示すグラフである。レポーターＴ細胞活性化アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－抗ＣＬＤＮ１８．２ ＳｃＦｖは、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激することを示している。Ｔ細胞活性化のレベルは、ルシフェラーゼ生成量により測定される。
【0077】
図１３は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－プロ抗ｈＰＤ－Ｌ１が、ＰＢＭＣにおいてＴ細胞の活性化を刺激する能力を回復することを示すグラフである。ＭＭＰ１４による切断後の二重特異性プロ抗ｈＣＤ３（ＡＡＢ８）－プロ抗ｈＰＤ－Ｌ１は、ＰＢＭＣにおいて、未切断タンパク質による活性化よりも２０×超強く、Ｔ細胞の活性化を刺激する。Ｔ細胞活性化のレベルは、ＩＦＮ－ガンマ生成量により測定される。
【0078】
図１４は、リンカーがＭＭＰ１４により切断された後に、プロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ１）－Ｆｃが、抗原結合能力を回復することを示すグラフである。フローサイトメトリーに基づく結合アッセイデータは、ＭＭＰ１４による切断後のプロ抗ｈＣＴＬＡ４（ＡＡＢ１）－Ｆｃは、陽性コントロールと同程度に強くｈＣＴＬＡ４発現細胞と結合する一方、未切断タンパク質は、結合性をほとんど示さないことを示している。
【0079】
本明細書で議論される任意の実施形態は、本発明の任意の方法、キット、試薬、又は組成物に関して実施され得るものと考えられ、その逆も成り立つ。さらに、本発明の組成物は、本発明の方法を実現するのに使用可能である。
【0080】
本明細書に記載される特定の実施形態は、本発明の制限としてではなく、説明目的で提示されるものと理解される。本発明の主要な特性は、本発明の範囲から逸脱せずに様々な実施形態において採用され得る。当業者は、慣例にすぎない実験を使用して、本明細書に記載される特定の手順と同等の非常に多くの均等物を認識し、又は確かめることができるであろう。そのような均等物は本発明の範囲内と考えられ、また特許請求の範囲によりカバーされる。
【0081】
本明細書に記載されるすべての公開資料及び特許出願は、本発明が関係する当業者の技能レベルを示唆する。すべての公開資料及び特許出願は、あたかも個々の公開資料又は特許出願のそれぞれが、参照により組み込まれることを特別かつ個別に示されたかのように、それと同じ程度で本明細書において参照により組み込まれている。
【0082】
単語「ａ」又は「ａｎ」の使用は、特許請求の範囲及び／又は明細書において用語「～を含む（comprising）」と関連して使用されるとき、「１つの」を意味し得るが、しかし同単語は、「１又は２以上の」、「少なくとも１つの」、及び「１又は１よりも多くの」の意味にも当てはまる。特許請求の範囲内の用語「又は」の使用は、代替物のみを指すことが明示され、又は代替物が相互に排他的である場合を除き、「及び／又は」を意味するのに使用されるが、但し、本開示は代替物のみ及び「及び／又は」を指す定義を支持する。本出願全体を通じて、用語「約」は、数値を決定するのに採用されたデバイス、方法について誤差が認められ、数値はその固有の変動を含み、又は被験者間に存在する変動を含むことを示すのに使用される。
【0083】
本明細書及び特許請求の範囲（複数可）で使用される場合、単語「～を含むこと（comprising）」（及び～を含むこと（comprising）の任意の形態、例えば「～を含む（comprise）」及び「～を含む（comprises）」等）、「～を有すること（having）」（及び～を有すること（having）の任意の形態、例えば「～を有する（have）」及び「～を有する（has）」等）、「～を含むこと（including）」（及び～を含むこと（including）の任意形態、例えば「～を含む（includes）」及び「～を含む（include）」等）、又は「～を含有すること（containing）」（及び～を含有すること（containing）の任意の形態、例えば「～を含有する（contains）」及び「～を含有する（contain）」等）は、包含的又は非制限的であり、かつ追加の列挙されない特性、要素、コンポーネント、群、インテジャー、及び／又はステップを除外しないが、しかしその他の言及されない特性、要素、コンポーネント、群、インテジャー、及び／又はステップの存在も除外しない。本明細書に提示される組成物及び方法のいずれかの複数の実施形態では、「～を含むこと（comprising）」は、「～から実質的になる（consisting essentially of）」又は「～からなる（consisting of）」により置換され得る。本明細書で使用される場合、用語「～を構成すること（consisting）」は、列挙したインテジャー（例えば、特性、要素、特徴、特質、方法／プロセスステップ、又は制限）、又はインテジャーの群（例えば、特性（複数可）、要素（複数可）、特徴（複数可）、特質（複数可）、方法／プロセスステップ（複数可）、又は制限（複数可））のみの存在を表すのに使用される。本明細書で使用される場合、慣用句「～から実質的になる（consisting essentially of）」は、特定された特性、要素、コンポーネント、群、インテジャー、及び／又はステップを必要とするが、しかしその他の言及されない特性、要素、コンポーネント、群、インテジャー、及び／又はステップ、並びに請求項に係る発明の基本的かつ新規の特徴（複数可）及び／又は機能に顕著に影響を及ぼさないものの存在を除外しない。
【0084】
用語「又はその組合せ」とは、本明細書で使用される場合、該用語に先行するリスト化された事項のすべての順列及び組合せを意味する。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、又はその組合せ」は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、又はＡＢＣのうちの少なくとも１つ、及び特定の文脈において順番が重要である場合には、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、又はＣＡＢも含むように意図されている。この例に継続して、明示的に含まれるものとして、１又は２以上の事項又は用語の繰返し、例えばＢＢ、ＡＡＡ、ＡＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢ等を含有する組合せが挙げられる。当業者は、一般的に、文脈から別途明白である場合を除き、任意の組合せには、事項又は用語の数に制限は存在しないものと理解する。
【0085】
本明細書で使用される場合、近似の単語、例えば、非限定的に「約」、「実質的な」、又は「実質的に」等とは、そのように修飾されたとき、必ずしも絶対又は完全ではないと理解される状態であるが、しかし当業者にとって、該状態が存在するものと認定することが十分保証され得ると考えられる状態を指す。記載内容の変化し得る範囲は、どのくらい大きな変化が生じる可能性があるか、そしてそのような変化が生じたとして、修飾された特性が修飾されない特性の必要とされる特徴及び能力をなおも有するものと当業者になおも認識させるような変化の大きさに依存する。一般的に、但しこれまでの考察を前提として、近似の単語、例えば「約」等により修飾される本明細書内の数値は、記載された数値から少なくとも±１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、又は１５％変化し得る。
【0086】
本明細書において開示及び主張される組成物及び／又は方法のいずれも、本開示に照らし、過度の実験を行わなくても作出及び実行され得る。本発明の組成物及び方法は、好ましい実施形態に関して記載されてきたが、本発明の概念、精神、及び範囲から逸脱せずに、変更が、本明細書に記載される組成物及び／又は方法に対して、並びに方法のステップにおいて、又はステップの順番において適用され得ることは当業者にとって明白である。当業者にとって明白なそのような類似した代替物及び改変物のいずれも、添付の特許請求の範囲により定義されるような本発明の精神、範囲、及び概念に含まれるものと考えられる。
【0087】
特許事務所及び任意の読者が、本出願に基づき発行された任意の特許の本明細書について、添付の特許請求の範囲を解釈する際の一助として、本出願者らは、単語「のための手段」又は「のためのステップ」が特定の請求項において明示的に使用されない限り、添付の特許請求の範囲のいずれについても、それが本明細書の出願日において存在するので、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２のパラグラフ６、Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２パラグラフ（ｆ）、又は均等物を惹起することを意図しないことを指摘したい。
【0088】
請求項それぞれにおいて、各従属請求項は、優先的請求項が請求項の用語又は要素に対して適切な先行詞を提供する限り、独立請求項、及び各請求項それぞれに対する優先的従属請求項それぞれの両方に従属し得る。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【配列表】