▶ ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-08
(45)【発行日】2024-05-16
(54)【発明の名称】ＦｉｍＨ変異体、その組成物、及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/245 20060101AFI20240509BHJP
A61K 39/108 20060101ALI20240509BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20240509BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240509BHJP
A61K 47/55 20170101ALI20240509BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240509BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240509BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240509BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20240509BHJP
C12N 15/31 20060101ALI20240509BHJP
【ＦＩ】
C07K14/245 ZNA
A61K39/108
A61K39/39
A61P31/04
A61K47/55
A61K48/00
A61P37/04
C12N15/63 Z
C12P21/02 C
C12N15/31
【請求項の数】
15
(21)【出願番号】P 2022542383
(86)(22)【出願日】2021-01-14
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-10
(86)【国際出願番号】 EP2021050707
(87)【国際公開番号】W WO2021144369
(87)【国際公開日】2021-07-22
【審査請求日】2022-07-12
(31)【優先権主張番号】20152217.4
(32)【優先日】2020-01-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
【早期審査対象出願】
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】514010601
【氏名又は名称】ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】グリジュプトラ，ジャン
(72)【発明者】
【氏名】ウェーデンバーグ，エヴェリン，マーリーン
(72)【発明者】
【氏名】ゲェーツェン，イェローン
(72)【発明者】
【氏名】ファエ，ケレン，クリスティーナ
(72)【発明者】
【氏名】フェイスマ，ルイス，ジェイコブ
【審査官】井関 めぐみ
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２００３／０１９９０７１（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／３１
Ａ６１Ｋ ３９／１０８
Ａ６１Ｋ ３９／３９
Ａ６１Ｐ ３１／０４
Ａ６１Ｋ ４７／５５
Ａ６１Ｋ ４８／００
Ａ６１Ｐ ３７／０４
Ｃ０７Ｋ １４／２４５
Ｃ１２Ｎ １５／６３
Ｃ１２Ｐ ２１／０２
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドであって、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１の１４４位に対応する位置でバリン（Ｖ）を含み、かつ、配列番号１との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、前記ポリペプチド。
【請求項2】
前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１との少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項3】
前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１との少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１又は２に記載のポリペプチド。
【請求項4】
前記ポリペプチドは、ＦｉｍＨピリンドメインを更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項5】
前記ポリペプチドは、配列番号２との少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長ＦｉｍＨである、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項6】
請求項４又は５に記載のポリペプチドと、ＦｉｍＣ（ＦｉｍＣＨ）とを含む複合体。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項8】
請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項６に記載の複合体、又は請求項７に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
【請求項9】
前記組成物は、アジュバントを更に含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
医薬品としての使用のための請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項６に記載の複合体、請求項７に記載のポリヌクレオチド、又は請求項８若しくは９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌に対する免疫反応の誘発での使用のための請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項６に記載の複合体、請求項７に記載のポリヌクレオチド、又は請求項８若しくは９に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記細菌は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）であり、好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項１１に記載の使用のためのポリペプチド、ポリヌクレオチド、複合体、又は医薬組成物。
【請求項13】
対象中において大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる尿路感染の予防又は処置における使用のための請求項１～５のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項６に記載の複合体、請求項７に記載のポリヌクレオチド、又は請求項８若しくは９に記載の医薬組成物。
【請求項14】
請求項７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項15】
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドを製造する方法であって、請求項７に記載のポリヌクレオチド及び／又は請求項１４に記載のベクターを含む組換え細胞から前記ポリペプチドを発現させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記ポリペプチドを回収して精製することを更に含み、任意選択的に、前記精製の後に、前記ポリペプチドの医薬組成物への製剤化が続く、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医微生物、免疫学、及びワクチンの分野に関する。具体的には、本発明は、ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドであって、このＦｉｍＨレクチンドメインは、このＦｉｍＨレクチンドメインがマンノースに対する親和性が低い高次構造となるアミノ酸変異を含み、且つ対象への投与時に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の膀胱上皮細胞への付着の抗体を介した阻害を高レベルで誘発する、ポリペプチドに関する。更に、本発明は、そのようなポリペプチドを含む組成物、及び免疫原性ポリペプチドの投与により必要な対象中において免疫反応を刺激する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
腸管外感染の原因となる大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の株は、腸疾患を引き起こすものとは遺伝子が異なり、腸管外病原性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＥｘＰＥＣ）と呼ばれている。ＥｘＰＥＣは、外来、長期介護、及び病院の環境において腸管外感染を引き起こす最も一般的な腸内グラム陰性生物である。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因する典型的な腸管外感染として、尿路感染（ＵＴＩ）、種々の腹腔内感染（ＩＡＩ）、肺炎、手術部位感染、髄膜炎、血管内デバイス感染、骨髄炎、及び軟部組織感染が挙げられ、これらはいずれも、菌血症を伴う可能性がある。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、重度の敗血症の主要な原因であり、高い罹患率及び死亡率の原因となっている。
【0003】
ＥｘＰＥＣは、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の他のメンバーのように、粘膜上皮表面への付着を助けるＩ型線毛を産生する。このＩ型線毛は、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科のメンバーの表面から発する毛様構造である。Ｉ型線毛の主要成分は、右巻きのらせん状に配置されたＦｉｍＡのサブユニットを繰り返して、中央軸に孔が開いている約１μｍの長さ及び７ｎｍの直径のフィラメントを形成している（Ｂｒｉｎｔｏｎ，１９６５）。主要なサブユニットとしてのＦｉｍＡに加えて、線毛フィラメントはまた、マイナーなタンパク質サブユニットとしてＦｉｍＦ、ＦｉｍＧ、及びＦｉｍＨも含む。マイナーなタンパク質サブユニットＦｉｍＨは、真核細胞表面上のマンノース含有糖タンパク質へのＩ型線毛細菌の付着を促進するマンナン結合付着であり、マンナン及びフィブロネクチン等の様々な標的に結合するタンパク質のファミリを表す。免疫電子顕微鏡研究により、ＦｉｍＨは、Ｉ型線毛の遠位端に戦略的に配置されており、ＦｉｍＧと複合体を形成して柔軟な線毛構造を形成すると思われ、且つフィラメントに沿って様々な間隔で長手方向にも配置されていることが明らかになった。
【0004】
ＦｉｍＨ付着タンパク質は、ＵＴＩに対する様々な前臨床モデルにおいてワクチンとして使用され場合に防御を誘発することが分かっている（Ｌａｎｇｅｒｍａｎｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７６：６０７－６１１；Ｌａｎｇｅｒｍａｎｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １８１：７７４－７７８；Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ＶＰ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２：１６１９６）。１９９９年に、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅは、ＦｉｍＨ含有サブユニットワクチンを第２相試験へと進めたが、ＵＴＩの予防では効果がないために、このワクチンの開発は２００３年に中止された（例えば、Ｂｒｕｍｂａｕｇｈ ＡＲ ａｎｄ Ｍｏｂｌｅｙ ＨＬＴ，２０１２，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，１１：６６３－６７６を参照されたい）。それにもかかわらず、Ｓｅｑｕｏｉａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社は、ＦｉｍＣタンパク質と複合体化し且つ新規のアジュバント製剤と組み合わされたＦｉｍＨタンパク質からなるワクチンである、再発性ＵＴＩのワクチンを現在臨床開発していると思われる。この会社は、このワクチンは免疫原性が高く、良好な耐容性を示し、ＵＴＩの頻度を減少させ得ると報告しているが、安全性及び有効性を確立する必要が依然としてある（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｅｑｕｏｉａｓｃｉｅｎｃｅｓ．ｃｏｍ／ｕｔｉ－ｖａｃｃｉｎｅ－ｐｒｏｇｒａｍ）。
【0005】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染の最中に、マンノシル化受容体に結合する付着ＦｉｍＨのレクチンドメインは、下記の２種の異なる高次構造を取り得ることが分かっている：マンノースに対する低い親和性（緊張）及びマンノースに対する高い親和性（伸長／弛緩）（Ｋａｌａｓ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｓｃｉ Ａｄｖ １０；３（２））。低親和性高次構造は、細菌の運動性及び新規組織のコロニー形成を促進する。高親和性高次構造により、尿排泄の機械的力下での細菌の強固な付着が確実となる（Ｋａｌａｓ ｅｔ ａｌ， ２０１７ 上記参照）。更に、低親和性バリアントに対する抗体は、尿路上皮細胞への細菌の結合をブロックし、且つ膀胱中のＣＦＵ数を減少させることが分かった（Ｔｃｈｅｓｎｏｋｏｃａ，２０１１ Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ． ７９（１０）：３８９５－９０４；Ｋｉｓｉｅｌａ，２０１３ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１９；１１０（４７）：１９０８９－９４）。
【0006】
国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、多くのＦｉｍＨ変異体であって、全てが、この分子の峡谷領域中にアミノ酸改変を含む、ＦｉｍＨ変異体が説明されている。具体的には、国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、結合ポケット中のマンノース相互作用残基が変異しているバリアントが説明されている。この変異位置は、ＦｉｍＨ変異体がより開いた高次構造に保たれており、それにより、野生型タンパク質ではアクセスしにくいエピトープが露出することから選択されている。しかしながら、現在まで、本発明者らが知る限りでは、これらの変異体はいずれも、ワクチン候補として更に追求されていない。臨床試験では、野生型ＦｉｍＨのみが使用されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
そのため、当該技術分野では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる細菌感染に対して高度に阻害性の抗体を誘発し得るワクチンが依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0008】
第１の態様では、本発明は、ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドであって、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、ポリペプチドを提供する。
【0009】
第２の態様では、本発明は、本発明に係る完全長のＦｉｍＨポリペプチドと、ＦｉｍＣ（ＦｉｍＣＨ）とを含む複合体を提供する。
【0010】
第３の態様では、本発明は、本発明に係るポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
【0011】
第４の態様では、本発明は、本発明に係るポリペプチド、本発明に係る複合体、又は本発明に係るポリヌクレオチドを含む医薬組成物を提供する。
【0012】
第５の態様では、本発明は、医薬品としての使用のための本発明に係るポリペプチド、本発明に係る複合体、本発明に係るポリヌクレオチド、又は本発明に係る医薬組成物を提供する。
【0013】
第６の態様では、本発明は、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌に対する免疫反応の誘発での使用ための本発明に係るポリペプチド、本発明に係る複合体、本発明に係るポリヌクレオチド、又は本発明に係る医薬組成物を提供する。本発明は、更に、必要な対象中における腸内細菌関連状態を処置するか又は予防する方法であって、本発明に係るポリペプチド、本発明に係るポリヌクレオチド、又は本発明に係る医薬組成物の有効な量を投与することを含む方法に関する。
【0014】
第６の態様では、本発明は、本発明に係るポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【0015】
第７の態様では、本発明は、更に、ポリペプチドを製造する方法であって、本発明のポリヌクレオチド及び／又は本発明のベクターを含む組換え細胞からこのポリペプチドを発現させることを含み、任意選択的に、この方法は、このポリペプチドを回収することを更に含み、任意選択的に、この回収の後に、このポリペプチドの医薬組成物への製剤化が続く、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】様々なＦｉｍＨバリアントにより誘発されたＦｉｍＨ血清抗体（総ＩｇＧ）のレベル。非フロイントアジュバント（Ｓｐｅｅｄｙ－ｒａｔ ｍｏｄｅｌ，Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ）と組み合わせた６０ｕｇ／用量の様々なＦｉｍＨバリアントにより０、７、１０、及び１８日目に４回の筋肉内免疫付与を行なったＷｉｓｔａｒラット（ｎ＝２）。抗ＦｉｍＨ抗体のレベルを、免疫付与前（０日目、白丸）及び免疫付与後（２８日目、黒丸）に、ＥＬＩＳＡにより測定した。データは、２匹の動物／群からの２重の血清サンプルの平均を表す。抗体価（ＥＣ５０）を、１２段階希釈曲線にフィットさせた４パラメータロジスティック回帰モデルに基づいて算出した。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本発明は、ＦｉｍＨレクチンドメインを含む新規のポリペプチドであって、このＦｉｍＨレクチンドメインは、マンノースに対する親和性が低い高次構（本明細書では「低親和性高次構造」とも称される）に「ロック」されている、ポリペプチドを提供する。本発明は、マンノースに対する親和性が低い高次構造のＦｉｍＨ抗原がマンノースを介した付着を阻害し得る抗体を誘発することが可能であるという観察に部分的に基づく。この抗体は、阻害性が高く、且つ細菌感染の予防又は処置での効果が高い。本明細書では、Ｆ１４４Ｖ変異を有するＦｉｍＨレクチンドメインは、このＦｉｍＨレクチンドメインがＵＴＩに対するワクチン（例えば再発性ＵＴＩを予防するか又は低減するためのワクチン）での使用に非常に適したものになる、望ましい特性の驚くべき良好な組み合わせを有することが発見された。
【0018】
したがって、第１の態様では、本発明は、ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド（好ましくは免疫原性ポリペプチド）であって、このＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、ポリペプチドを提供する。
【0019】
アミノ酸１４４位は、配列番号１のＦｉｍＨレクチンドメインの参照アミノ酸配列における１４４位を指す。配列番号１以外の本発明のアミノ酸配列では、好ましくは、アミノ酸１４４位は、好ましくはデフォルト設定を使用するＣｌｕｓｔａｌＷ（１．８３）配列アラインメントにおける、配列番号１中の１４４位に対応するアミノ酸位置に存在する。本明細書の上記で定義されているアミノ酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して、配列番号１以外のＦｉｍＨレクチンドメインアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置を同定する方法は、当業者に既知であるだろう。
【0020】
一実施形態では、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、このＦｉｍＨレクチンドメインがマンノースに対する親和性が低い高次構造となる変異を含む。一実施形態では、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、配列番号１の１４４位に対応する位置で変異されている。この変異は、単一アミノ酸残基の欠失、付加、又は置換の内のいずれか１つであり得る。好ましくは、この変異は、単一アミノ酸残基の置換である。この変異は、好ましくは、配列番号１の１４４位に対応するアミノ酸残基の置換である。好ましくは、この変異は、配列番号１の１４４位に対応する位置でのフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸残基の置換である。本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドでは、配列番号１の１４４位に対応する位置は、好ましくは、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸に置換されている。本文脈での「変異」、「変異された」、又は「置換」、「置換された」という用語は、別のアミノ酸が、対応する親分子（本明細書では、１４４位がＦであるＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドである）での示された位置に存在することを意味している。そのような親分子は、物理的には、ポリペプチドとして存在し得るか又はそのようなポリペプチドをコードする核酸の形で存在し得るが、アミノ酸配列又はこのアミノ酸配列をコードする対応する核酸配列として単にインシリコか又は紙上でも存在し得る。したがって、本文脈での変異又は置換はまた、例えば、対応する親分子をコードする核酸がプロセスの最中に最初は実際に調製されなかったにもかかわらず、この変異又は置換をコードするように合成されている核酸からタンパク質が発現される場合にも存在すると見なされ、例えば、核酸分子が完全に化学合成により調製されている場合にも存在すると見なされる。
【0021】
好ましい一実施形態では、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、１４４位でのフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換を含む。ある特定の実施形態では、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、１４４位でバリンを含む天然には存在しないポリペプチドである。ある特定の実施形態では、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、１４４位で、天然に存在するフェニルアラニンの代わりにバリンを有する。
【0022】
一実施形態では、ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１との少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。好ましくは、ＦｉｍＨドメインは、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインの場合にバリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、又はアラニン（Ａ）に置換されている１４４位を除いて、配列番号１を有する配列を含み得る。
【0023】
完全長のＦｉｍＨ（ＦｉｍＨＦＬ）は、下記の２つのドメインで構成されている：短いテトラ－ペプチドループリンカーによりＣ末端ピリンドメイン（ＦｉｍＨＰＤ）に接続されたＮ末端レクチンドメイン（ＦｉｍＨＬＤ）。本発明の一実施形態では、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、ＦｉｍＨピリンドメインを更に含む。好ましい一実施形態では、本発明のポリペプチドは、完全長のＦｉｍＨポリペプチドであって、ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１中の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、ＦｉｍＨポリペプチドである。
【0024】
一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する完全長のＦｉｍＨである。好ましくは、この完全長のＦｉｍＨポリペプチドは、本明細書で説明されているＦ１４４Ｖ置換を除いて配列番号２を有する配列を含み得る。別の実施形態では、このポリペプチドは、配列番号４又は好ましくはその少なくともアミノ酸２２～３００との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する完全長のＦｉｍＨである。好ましくは、この完全長のＦｉｍＨポリペプチドは、本明細書で説明されているＦ１４４Ｖ置換を除いて配列番号４又はより好ましくはその少なくともアミノ酸２２～３００を有する配列を含み得る。
【0025】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，７３７，０６３号明細書で説明されている配列番号２３～４５及び５５との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する完全長のＦｉｍＨである。
【0026】
ＦｉｍＨポリペプチドは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の様々な株の間で高度に保存されているだけでなく、多種多様なグラム陰性菌の間でも高度に保存されている。更に、株間で起こるアミノ酸変化は、一般的に、同様のアミノ酸位置で起こる。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株間でのＦｉｍＨの高度な保存の結果として、ある株からのＦｉｍＨポリペプチドは、他の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株がＦｉｍＨレクチンにより細胞に結合することを阻害するか又は防止する抗体反応を誘発し得、並びに／又は他の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株により引き起こされる感染に対する保護及び／若しくは処置を提供する。したがって、一実施形態では、完全長のＦｉｍＨは、配列番号５又は好ましくはその少なくともアミノ酸２２～３００との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。好ましくは、完全長のＦｉｍＨポリペプチドは、本明細書で説明されているＦ１４４Ｖ置換を除いて配列番号５又はより好ましくは少なくともそのアミノ酸２２～３００を有する配列を含み得る。別の実施形態では、完全長のＦｉｍＨは、配列番号６との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。好ましくは、完全長のＦｉｍＨポリペプチドは、本明細書で説明されているＦ１４４Ｖ置換を除いて配列番号６を有する配列を含み得る。
【0027】
本明細書で使用される場合、「ペリプラズムシャペロン」という用語は、共通の結合エピトープの認識を介して様々なシャペロン結合タンパク質と複合体を形成し得る、細菌のペリプラズム中に局在化しているタンパク質と定義される。シャペロンは、細菌細胞からペリプラズムへと輸送されたタンパク質がその本来の立体構造に折り畳む際に、テンプレートとして機能する。シャペロン結合タンパク質とシャペロンとの会合はまた、ペリプラズム内の局在化されているプロテアーゼによる分解から、この結合タンパク質を保護するようにも機能し、水溶液でのこの結合タンパク質の溶解度も増加させ、集合綿毛（ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ ｐｉｌｕｓ）へと順次正しく組み込まれる。シャペロンタンパク質は、そのような集合を媒介することにより綿毛の集合に関与するが構造へは組み込まれない、グラム陰性菌中のタンパク質のクラスである。ＦｉｍＣは、ＦｉｍＨのペリプラズムシャペロンタンパク質である。ＦｉｍＣは、配列番号３との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＦｉｍＣは、全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，７３７，０６３号明細書で説明されている配列番号２９との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。ＦｉｍＣとＦｉｍＨとの非共有結合性複合体を、ＦｉｍＣＨと命名する。
【0028】
したがって、さらなる態様では、本発明は、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドを含み、ＦｉｍＨピリンドメイン、又は本明細書で説明されている完全長のＦｉｍＨ、及びＦｉｍＣを更に含む複合体を提供する。
【0029】
本発明の一実施形態では、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、ＦｉｍＨピリンドメインを更に含み、且つＦｉｍＣと複合体化してＦｉｍＣＨ複合体を形成している。
【0030】
本出願の発明者らは、アミノ酸変化が異なるいくつかのＦｉｍＨレクチンドメインバリアントを生成し、これらを、様々なアッセイで効率に関して試験している（実施例を参照されたい）。驚くべきことに、レクチンドメインが変異している、試験した全てのＦｉｍＨタンパク質が、所望の特性（即ち、十分な純度（タンパク質濃度及び純度）、完全性、並びに機能性）を有するＦｉｍＣＨ複合体へと組み込まれ得たわけではなかった。
【0031】
配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインは、所望の特性を有するＦｉｍＣＨ複合体を形成し得た。
【0032】
一実施形態では、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドは、配列番号２との少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する完全長のＦｉｍＨであり、且つＦｉｍＣと複合体化してＦｉｍＣＨ複合体を形成する。最終形態の完全長のＦｉｍＨは、典型的には、例えば配列番号４及び５のアミノ酸１～２１と示されているシグナルペプチドを含まず、即ち、配列番号４又は配列番号５の完全長のＦｉｍＨは、これらの配列のアミノ酸２２～３００を含むが典型的にはそのアミノ酸１～２１を欠いていると理解される。完全長のＦｉｍＨの組換え産生の場合には、組換え宿主細胞中においてシグナルペプチドを含むＦｉｍＨをコードし、ポリペプチドのペリプラズム位置へと至る一般的な分泌経路を経て内（細胞質）膜を超えて輸送される（「ペリプラズム発現」と称されることもある）ことが有用であるが、単離されて例えば医薬組成物で使用される最終的なＦｉｍＨポリペプチドでは、シグナルペプチドは、典型的には、このポリペプチドを発現している組換え細胞によるプロセシングの結果としてもはや存在しない。
【0033】
より好ましい実施形態では、ＦｉｍＣＨ複合体は、配列番号３との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は少なくとも約１００％の配列同一性を有するＦｉｍＣタンパク質と、配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を有するレクチンドメインを含むＦｉｍＨタンパク質とを含むか、又はからなる。更により好ましい実施形態では、ＦｉｍＣＨ複合体は、配列番号３との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は少なくとも約１００％の配列同一性を有するＦｉｍＣタンパク質と、レクチンドメイン中にＦ１４４Ｖ置換を含むＦｉｍＨタンパク質、又は（例えば、シグナルペプチドを依然として含む配列番号４若しくは５中に）Ｆ１６５Ｖ置換を含む完全長のＦｉｍＨタンパク質とを含むか、又はからなる。シグナルペプチドを依然として含むであろう完全長のＦｉｍＨでは、アミノ酸１６５位は、ＦｉｍＨレクチンドメイン中のアミノ酸１４４位に対応する。本明細書の上記で定義されているアミノ酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して、完全長のＦｉｍＨアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置と、ＦｉｍＨレクチンドメインアミノ酸配列中の対応するアミノ酸位置とを同定する方法は、当業者に既知であるだろう。
【0034】
一実施形態では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）シャペロンＦｉｍＣと、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインバリアントを含む複合体を、組換え細胞から、ＦｉｍＣと一緒に、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインバリアントポリペプチドを共発現させることにより形成し得る。
【0035】
一実施形態では、ＦｉｍＣＨ複合体は、ある細菌株に由来するＦｉｍＣを含むが、ＦｉｍＨは、異なる細菌株に由来する。別の実施形態では、ＦｉｍＣＨ複合体は、ＦｉｍＣ及びＦｉｍＨであって、両方とも同一の細菌株に由来するＦｉｍＣ及びＦｉｍＨを含む。ある特定の実施形態では、ＦｉｍＨ、又はＦｉｍＣ、又はＦｉｍＨ及びＦｉｍＣの両方は、天然に存在する実際の細菌単離株由来ではない人工配列であり得、例えば、これらはまた、天然単離株のコンセンサス配列又は組み合わせにも基づき得る。
【0036】
一実施形態では、ＦｉｍＣＨ複合体は、Ｈｉｓ－タグを含む少なくとも１つのポリペプチドを含む。一実施形態では、本発明に係る完全長のＦｉｍＨがＨｉｓ－タグを含むか、又は本明細書で説明されているＦｉｍＣがＨｉｓ－タグを含む。好ましくは、ＦｉｍＣＨ複合体において、ＦｉｍＣは、Ｈｉｓ－タグを含む。Ｈｉｓ－タグは、本明細書で使用される場合、ヒスチジン（Ｈｉｓ）残基（例えば、６個のＨｉｓ残基）のストレッチであり、内部に付加され得るか、又は好ましくはタンパク質のＮ末端若しくはＣ末端で付加され得る。そのようなタグは、精製を容易にするためによく使用されている。
【0037】
さらなる態様では、本発明は、本明細書の上記で定義されているＦｉｍＨポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関連する。このポリヌクレオチドには、このポリヌクレオチドに作動可能に連結されているプロモーターが先行し得る。ある特定の実施形態では、このプロモーターは、ＦｉｍＨコード配列に対して内因性である。ある特定の実施形態では、このプロモーターは、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌中においてＦｉｍＨの発現を駆動する内因性プロモーターである。他の実施形態では、このプロモーターは、ＦｉｍＨコード配列に対して異種であり、例えば、組換え発現系での使用のために当業者に既知の強力なプロモーターが使用される。例えば、ＦｉｍＨ及び／又はＦｉｍＣ発現に、誘発性Ｌａｃプロモーターを含むｐＥＴ－ＤＵＥＴベクターを使用し得る。誘発性プロモーターの場合には、ＩＰＴＧを使用して発現を誘発し得る。好ましくは、ポリヌクレオチドは、その天然環境から単離されている。ある特定の実施形態では、本発明は、本発明に係る単離ポリヌクレオチドを提供する。このポリヌクレオチドは、組換えポリヌクレオチド、合成ポリヌクレオチド、又は人工ポリヌクレオチドであり得る。このポリヌクレオチドは、核酸の任意の形態であり得、例えばＤＮＡ又はＲＮＡであり得、好ましくはＤＮＡであり得る。このポリヌクレオチドは、天然に存在するＦｉｍＨコードポリヌクレオチド中には存在しない１つ又は複数のヌクレオチドを含み得る。好ましくは、このポリヌクレオチドは、その５’末端及び／３’末端で、天然に存在するＦｉｍＨコードポリヌクレオチド中には存在しない１つ又は複数のヌクレオチドを有する。コードされた成熟ＦｉｍＣ及び／又はＦｉｍＨの配列には、好ましくは、それぞれのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド中においてシグナルペプチドが先行し得、このシグナルペプチドは、ＦｉｍＣポリペプチド及び／又はＦｉｍＨポリペプチドそれぞれに対して内因性シグナルペプチド（即ち、これらのタンパク質に関して天然に存在するようなシグナルペプチド）であってもよいし、異種シグナルペプチド（即ち、他のタンパク質由来のシグナルペプチド、又は合成シグナルペプチド）であってもよい。このシグナルペプチドは、ペリプラズム発現に有用であるが、典型的には切断され、最終的に産生されて精製されたＦｉｍＣ及び／ＦｉｍＨそれぞれ中には存在しない。
【0038】
必要な場合には、及び／又は望ましい場合には、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、又は本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、薬学的に許容される担体を添加することにより、薬学的に活性な混合物に組み込み得る。
【0039】
したがって、さらなる態様では、本発明はまた、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメイン、又は本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組成物（好ましくは医薬組成物）も提供する。
【0040】
本発明の（医薬）組成物は、任意の薬学的に許容される賦形剤（例えば、担体、充填剤、保存料、可溶化剤、及び／又は希釈剤）を含み得る。生理食塩水、並びに水性デキストロース溶液及びグリセロール溶液も液体担体として利用し得、特に注射液用の液体担体として利用し得る。好適な賦形剤として、下記が挙げられる：デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、及び同類のもの。好適な医薬担体の例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”ＸＩＩＩ ｅｄ．Ｅｄｉｔｏｒ－ｉｎ－Ｃｈｉｅｆ Ｅｒｉｃ Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ． Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，２０１３で説明されている。
【0041】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、１種又は複数種の緩衝剤（例えば、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、リン酸緩衝剤、スクロースリン酸グルタミン酸緩衝剤）を更に含む。
【0042】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、１種又は複数種の塩（例えば、Ｔｒｉｓ－塩酸塩、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、及びアルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、又はそのようなアルミニウム塩の混合物））を更に含む。
【0043】
本発明の組成物を、この組成物が投与される宿主中において免疫反応を誘発するために使用し得、即ち、この組成物は、免疫原性である。そのため、本発明の組成物を、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌により引き起こされる感染に対するワクチンとして使用し得、好ましくは、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）により引き起こされる感染に対するワクチンとして使用し得、より好ましくは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる感染に対するワクチンとして使用し得、そのため、この組成物は、ワクチンでの使用に適した任意の追加の成分を含み得る。例えば、ワクチン組成物の追加の成分は、本明細書で説明されているアジュバントである。
【0044】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、保存料（例えば、フェノール、塩化ベンゼトニウム、２－フェノキシエタノール、又はチメロサール）を更に含む。具体的な実施形態では、本発明の（医薬）組成物は、０．００１％～０．０１％の保存料を含む。他の実施形態では、本発明の（医薬）組成物は、保存料を含まない。
【0045】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物を、対象への意図した投与経路に好適であるように製剤化する。例えば、本発明の組成物を、皮下投与、非経口投与、経口投与、皮内投与、経皮投与、結腸直腸投与、腹腔内投与、膣内投与、又は直腸投与に好適であるように製剤化し得る。具体的な実施形態では、本医薬組成物を、静脈内投与、経口投与、口腔内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、気管内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、皮内投与、経皮投与、又は肺投与のために製剤化し得、好ましくは筋肉内投与のために製剤化し得る。
【0046】
本発明の組成物を、投与のための指示書と一緒に、容器、パック、又はディスペンサに入れ得る。
【0047】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物を、使用前に保存し得、例えば、この組成物を、（例えば、約－２０℃又は約－７０℃で）凍結保存し得るか、冷蔵条件下（例えば、約２～８℃、例えば約４℃で）保存し得るか、又は室温で保存し得る。或いは、成分（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の内の１つ又は複数を含む別個の組成物を保存して、使用前に、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の３つ全てを含むワクチン組み合わせ組成物に混合し得る。更に別の代替では、これら別個の組成物は、組み合わせ投与スケジュールで提供される。
【0048】
本発明の一実施形態では、本発明の医薬組成物を、担体タンパク質に共有結合的に連結された１種又は複数種の多糖を含む組成物と一緒に投与し得る。好ましくは、そのような組成物は、例えば、全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９／１７５１４５号パンフレットで説明されている、担体タンパク質に共有結合的に連結された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｏ－抗原多糖の１種又は複数種のバイオコンジュゲート（ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を含む。
【0049】
ある実施形態では、本明細書の本発明の医薬組成物は、アジュバントを更に含む。本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、本発明の組成物と同時に投与されるか又はその一部として投与される場合に、ＦｉｍＨに対する免疫反応を増加させ、増強し、及び／又は増大させるが、アジュバント化合物が単独で投与される場合には、コンジュゲート及び／又はＦｉｍＨに対する免疫反応を生じない化合物を指す。アジュバントは、例えば、リンパ球動員、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞の刺激、並びに抗原提示細胞の刺激等のいくつかの機構により、免疫応答を増強し得る。
【0050】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、アジュバントを含むか、又はアジュバントと組み合わせて投与される。本発明の組成物と組み合わせて投与されるアジュバントを、免疫原性組成物の投与の前に投与し得るか、この投与と同時に投与し得るか、又はこの投与の後に投与し得る。好ましい実施形態では、本発明のＦｉｍＨ及びアジュバントを、単一組成物の形態で投与する。
【0051】
アジュバントの具体例として下記が挙げられるが、これらに限定されず：アルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、及び酸化アルミニウム、例えば、ミョウバン又はナノミョウバン製剤を含むナノ粒子）、リン酸カルシウム（例えば、Ｍａｓｓｏｎ ＪＤ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １６：２８９－２９９）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）又は３－デ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ－ＭＰＬ）（例えば、英国特許第ＧＢ２２２０２１１号明細書、欧州特許第０９７１７３９号明細書、同第１１９４１６６号明細書、米国特許第６４９１９１９号明細書を参照されたい）、ＡＳ０１、ＡＳ０２、ＡＳ０３、及びＡＳ０４（全てＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えば、ＡＳ０４に関しては、欧州特許第１１２６８７６号明細書、米国特許第７３５７９３６号明細書、ＡＳ０２に関しては、欧州特許第０６７１９４８号明細書、同第０７６１２３１号明細書、米国特許第５７５０１１０号明細書を参照されたい）、イミダゾピリジン化合物（国際公開第２００７／１０９８１２号パンフレットを参照されたい）、イミダゾキノキサリン化合物（国際公開第２００７／１０９８１３号パンフレットを参照されたい）、デルタ－インスリン（例えば、Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ Ｎ ａｎｄ ＰＤ Ｃｏｏｐｅｒ，２０１５，Ｖａｃｃｉｎｅ３３：５９２０－５９２６）、ＳＴＩＮＧ－活性化合成環状ジヌクレオチド（例えば米国特許出願公開第２０１５００５６２２４号明細書）、レシチン及びカルボマーホモポリマーの組み合わせ（例えば米国特許第６６７６９５８号明細書）、並びにサポニン、例えば、Ｑｕｉｌ Ａ及びＱＳ２１（例えば、Ｚｈｕ Ｄ ａｎｄ Ｗ Ｔｕｏ，２０１６，Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ ３：ｅ１１３（ｄｏｉ：１０．４１７２／２３２９－６８３６．１０００ｅ１１３を参照されたい）、これらは、任意選択的に、ＱＳ７と組み合わされる（Ｋｅｎｓｉｌ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、１９９５を参照されたい）。一部の実施形態では、アジュバントは、非フロイントアジュバント（完全又は非完全）である。ある特定の実施形態では、アジュバントは、Ｑｕｉｌ－Ａを含み、例えば、Ｂｒｅｎｎｔａｇ（現在はＣｒｏｄａ）又はＩｎｖｉｖｏｇｅｎから市販されているＱｕｉｌ－Ａを含む。ＱｕｉｌＡは、キラヤ・サポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木からのサポニンの水抽出画分を含む。このサポニンは、共通のトリテルペノイド骨格構造を有するトリテルペノイドサポニンの群に属する。サポニンは、Ｔ依存性抗原及びＴ非依存性抗原に対する強力なアジュバント反応を誘発し、並びに強力な細胞傷害性ＣＤ８＋リンパ球反応及び粘膜抗原に対する反応の増強が知られている。これをまた、コレステロール及びリン脂質と組み合わせて、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）であって、ＱｕｉｌＡアジュバントは、様々な起源からの多種多様な抗原に対する抗体媒介性の免疫反応及び細胞媒介性の免疫反応の両方を活性化し得る、免疫賦活複合体も形成し得る。ある特定の実施形態では、アジュバントは、ＡＳ０１であり、好ましくはＡＳ０１Ｂである。Ｓ０１は、ＭＰＬ（３－Ｏ－デサシル－４’－モノホスホリルリピドＡ）、ＱＳ２１（キラヤ・サポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）、画分２１）、及びリポソームを含むＡｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍである。ある特定の実施形態では、ＡＳ０１は、市販されているか（ＧＳＫ）、又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９６／３３７３９号パンフレットで説明されているように製造し得る。ある特定のアジュバントは、エマルションを構成し、このエマルションは、２種の不混和液体（例えば、油及び水）の混合物であり、これらの不混和液体の一方は、他方内で小適として懸濁されており、表面活性剤により安定化される。水中油型エマルションは、水が連続を形成して油の小滴を取り囲んでおり、油中水型エマルションは、油が連続相を形成している。ある特定のエマルションは、スクアレン（代謝性油）を含む。ある特定のアジュバントは、ブロックポリマーを含み、このブロックポリマーは、２種のモノマーが互いにクラスター化して繰り返し単位のブロックを形成する場合に形成されたコポリマーである。ブロックコポリマー、スクアレン、及び微粒子安定剤を含む油中水型エマルションの一例は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから市販され得るＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）である。任意選択的に、エマルションを、ＴＬＲ４アゴニスト等の免疫賦活化合物と組み合わせ得るか、又はこのエマルションは、この免疫賦活化合物を更に含み得る。ある特定のアジュバントは、ＭＦ５９（例えば、欧州特許第０３９９８４３号明細書、米国特許第６２９９８８４号明細書、同第６４５１３２５号明細書）及びＡＳ０３でも使用される水中油型エマルション（例えば、スクアレン又はラッカセイ油）であり、任意選択的に、免疫刺激剤（例えば、例えばＡＳ０２中のモノホスホリルリピドＡ及び／又はＱＳ２１）と組み合わされる（Ｓｔｏｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ． ３３６，８６９１を参照されたい）。アジュバントのさらなる例は、免疫賦活剤を含むリポソーム（例えば、例えばＳ０１Ｅ及びＡＳ０１Ｂ中のＭＰＬ及びＱＳ２１（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２０６７５８号明細書）である。アジュバントの他の例は、ＣｐＧ（Ｂｉｏｗｏｒｌｄ Ｔｏｄａｙ，Ｎｏｖ．１５，１９９８）、並びにイミダゾキノリン（例えば、イミキモド及びＲ８４８）である。例えば、Ｒｅｅｄ Ｇ， ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ，１９：１５９７－１６０８を参照されたい。
【0052】
ある特定の好ましい実施形態では、アジュバントは、サポニンを含み、好ましくは、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）から得られるサポニンの水抽出画分を含む。ある特定の実施形態では、アジュバントは、ＱＳ－２１を含む。
【0053】
ある特定の好ましい実施形態では、アジュバントは、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストを含む。ＴＬＲ４アゴニストは、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｉｒｅｔｏｎ ＧＣ ａｎｄ ＳＧ Ｒｅｅｄ，２０１３，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １２：７９３－８０７を参照されたい。ある特定の好ましい実施形態では、アジュバントは、リピドＡを含むＴＬＲ４アゴニスト、又はその類似体若しくは誘導体である。
【0054】
アジュバント（好ましくは、ＴＬＲ４アゴニストを含むアジュバント）を、アジュバント中の免疫調節分子及び／又は免疫原に対する様々な送達系を表す様々な方法で製剤化し得、例えば、エマルション、例えば、油中水型（ｗ／ｏ）エマルション又は水中油型（ｏ／ｗ）エマルション（例は、ＭＦ５９、ＡＳ０３である）、安定（ナノ）エマルション（ＳＥ）、脂質懸濁液、リポソーム、（ポリマー）ナノ粒子、ビロソーム、吸着ミョウバン（ａｌｕｍ ａｄｓｏｒｂｅｄ）、水性製剤（ＡＦ）、及び同類のもので製剤化し得る（例えば、Ｒｅｅｄ ｅｔ ａｌ，２０１３，上記参照；Ａｌｖｉｎｇ ＣＲ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：３１０－３１５を参照されたい）。
【0055】
免疫賦活性ＴＬＲ４アゴニストは、他の免疫調節成分、例えば、サポニン（例えば、ＱｕｉｌＡ、ＱＳ７、ＱＳ２１、Ｍａｔｒｉｘ Ｍ、Ｉｓｃｏｍｓ、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘ等）、アルミニウム塩、他のＴＬＲの活性剤（例えば、イミダゾキノリン、フラゲリン、ＣｐＧ、ｄｓＲＮＡ類似体等）、及び同類のもの（例えば、Ｒｅｅｄ ｅｔ ａｌ，２０１３，上記参照を参照されたい）と任意選択的に組み合わされ得る。
【0056】
本明細書で使用される場合、「リピドＡ」という用語は、ＬＰＳ分子の疎水性脂質部分を指し、この部分は、グルコサミンを含み、且つケトシド結合により、このＬＰＳ分子の内核中のケト－デオキシオクツロソネートに連結されており、ＬＰＳ分子がグラム陰性菌の外膜の外葉中に固定される。ＬＰＳの合成及びリピドＡ構造の概説に関しては、例えば、Ｒａｅｔｚ，１９９３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １７５：５７４５－５７５３，Ｒａｅｔｚ ＣＲ ａｎｄ Ｃ Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ，２００２，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ７１：６３５－７００；米国特許第５，５９３，９６９号明細書、及び同第５，１９１，０７２号明細書を参照されたい。リピドＡは、本明細書で使用される場合、天然に存在するリピドＡ、その混合物、類似体、誘導体、及び前駆体を含む。この用語は、下記を含む：単糖、例えば、リピドＸと称されるリピドＡの前駆体；二糖リピドＡ；ヘプタ－アシルリピドＡ；ヘキサ－アシルリピドＡ；ペンタ－アシルリピドＡ；テトラ－アシルリピドＡ、例えば、リピドＩＶＡと称されるリピドＡのテトラ－アシル前駆体；脱リン酸化リピドＡ；モノホスホリルリピドＡ；ジホスホリルリピドＡ、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びロドバクター・スフェロイデス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）由来のリピドＡ。いくつかの免疫活性化リピドＡ構造は、６本のアシル鎖を含む。グルコサミン糖に直接付着している４本の主要なアシル鎖は、通常は１０～１６個の炭素の長さの３－ヒドロキシアシル鎖である。これら主要なアシル鎖の３－ヒドロキシ基には、２本の追加のアシル鎖が付着していることが多い。一例として、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）リピドＡは、典型的には、糖に付着した４本のＣ１４ ３－ヒドロキシアシル鎖と、２’位及び３’位それぞれで主要なアシル鎖の３－ヒドロキシ基に付着した１本のＣ１２及び１本の１４とを有する。
【0057】
本明細書で使用される場合、「リピドＡの類似体又は誘導体」という用語は、リピドＡの構造及び免疫学的活性が類似しているが、必ずしも自然界には天然に存在しない分子を指す。リピドＡの類似体又は誘導体は、グルコサミン残基が別のアミン糖残基（例えばガラクトサミン残基）に置換されるように、還元末端でグルコサミン－１－ホスフェートの代わりに２－デオキシ２－アミノグルコネートを含むように、４’位でリン酸塩の代わりにガラクツロン酸部分を持つように、改変され得、例えば、短縮され得るか、又は縮合し得る。リピドＡの類似体又は誘導体を、例えば化学的誘導により、細菌から単離されたリピドＡから調製してもよいし、例えば、好ましいリピドＡの構造を最初に決定し、その類似体又は誘導体を合成することにより、化学的に合成してもよい。リピドＡの類似体又は誘導体はまた、ＴＬＲ４アゴニストアジュバントとしても有用である（例えば、Ｇｒｅｇｇ ＫＡ ｅｔ ａｌ，２０１７，ＭＢｉｏ ８，ｅＤＤ４９２－１７，ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００４９２－１７を参照されたい）。例えば、リピドＡの類似体又は誘導体を、例えばアルカリ処理による、野生型リピドＡ分子の脱アシル化により得ることができる。リピドＡの類似体又は誘導体を、例えば、細菌から単離されたリピドＡから調製し得る。そのような分子を化学的に合成することも可能である。リピドＡの類似体又は誘導体の別の例は、リピドＡの生合成及び／又はリピドＡの改変に関与する酵素が変異しているか、又は欠失しているか、又は挿入されている細菌細胞から単離されたリピドＡ分子である。ＭＰＬ及び３Ｄ－ＭＰＬは、リピドＡの毒性を弱毒化するように改変されているリピドＡの類似体又は誘導体である。リピドＡ、ＭＰＬ、及び３Ｄ－ＭＰＬは、長い脂肪酸鎖が付着している糖骨格を有しており、この骨格は、グリコシド連結中での２つの６炭素糖と、４位でのホスホリル部分とを含む。典型的には、この糖骨格には、５～８個の長鎖脂肪酸（通常は１２～１４個の炭素原子）が付着している。天然起源に起因して、ＭＰＬ又は３Ｄ－ＭＰＬは、多数の脂肪酸置換パターン（例えば、ヘプタ－アシル、ヘキサ－アシル、ペンタ－アシル等）の複合又は混合として存在し得、脂肪酸の長さが様々である。このことはまた、本明細書で説明されている他のリピドＡの類似体又は誘導体の一部にも当てはまるが、合成リピドＡバリアントも定義されて同種であり得る。ＭＰＬ及びその製造は、例えば米国特許第４，４３６，７２７号明細書で説明されている。３Ｄ－ＭＰＬは、例えば米国特許第４，９１２，０９４Ｂ１号明細書で説明されており、且つ３位で還元末端グルコサミンにエステル連結している３－ヒドロキシミリスチンアシル残基の選択的除去により、ＭＰＬとは異なる（例えば、米国特許第４，９１２，０９４Ｂ１号明細書の第１欄中のＭＰＬの構造と第６欄中の３Ｄ－ＭＰＬの構造とを比較されたい）。当該技術分野では、３Ｄ－ＭＰＬが使用されることが多いが、ＭＰＬと称される場合がある（例えば、Ｉｒｅｔｏｎ ＧＣ ａｎｄ ＳＧ Ｒｅｅｄ，２０１３，上記参照の表１中の第１の構造は、この構造をＭＰＬ（登録商標）と呼ぶが、実際には３Ｄ－ＭＰＬの構造を描写している）。本発明に係るリピドＡ（類似体、誘導体の）例として、下記が挙げられる：ＭＰＬ、３Ｄ－ＭＰＬ、ＲＣ５２９（例えば欧州特許第ＥＰ１３８５５４１号明細書）、ＰＥＴ－リピドＡ、ＧＬＡ（グリコピラノシルリピドアジュバント、合成二糖糖脂質；例えば、米国特許出願公開第２０１００３１０６０２号明細書、米国特許第８７２２０６４号明細書）、ＳＬＡ（例えば、Ｃａｒｔｅｒ Ｄ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：ｅ１０８（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１６．６３）、これは、ヒトワクチン用のＴＬＲ４リガンドを最適化するための構造－機能アプローチを説明している）ＰＨＡＤ（リン酸化ヘキサアシル二糖；この構造は、ＧＬＡの構造と同一である）、３Ｄ－ＰＨＡＤ、３Ｄ－（６－アシル）－ＰＨＡＤ （３Ｄ（６Ａ）－ＰＨＡＤ） （ＰＨＡＤ、３Ｄ－ＰＨＡＤ、及び３Ｄ（６Ａ）ＰＨＡＤは、合成リピドＡバリアントである、例えば、これらの分子の構造も提供するａｖａｎｔｉｌｉｐｉｄｓ．ｃｏｍ／ｄｉｖｉｓｉｏｎｓ／ａｄｊｕｖａｎｔｓを参照されたい）、Ｅ６０２０（ＣＡＳ Ｎｕｍｂｅｒ ２８７１８０－６３－６）、ＯＮＯ４００７、ＯＭ－１７４、及び同類のもの。３Ｄ－ＭＰＬ、ＲＣ５２９、ＰＥＴ－リピドＡ、ＧＬＡ／ＰＨＡＤ、Ｅ６０２０、ＯＮＯ４００７、及びＯＭ－１７４の例示的な化学構造に関して、例えば、Ｉｒｅｔｏｎ ＧＣ ａｎｄ ＳＧ Ｒｅｅｄ，２０１３，上記参照の表１を参照されたい。ＳＬＡの構造に関しては、例えば、Ｒｅｅｄ ＳＧ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４１：８５－９０の表１を参照されたい。ある特定の好ましい実施形態では，ＴＬＲ４アゴニストアジュバントは、３Ｄ－ＭＰＬ、ＧＬＡ、又はＳＬＡから選択されるリピドＡの類似体又は誘導体を含む。
【0058】
リピドＡの類似体又は誘導体を含む例示的なアジュバントとして、下記が挙げられる：ＧＬＡ－ＬＳＱ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、ＱＳ２１、リポソームとして製剤化された脂質）、ＳＬＡ－ＬＳＱ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、ＱＳ２１、脂質、リポソームとして製剤化されている）、ＧＬＡ－ＳＥ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、スクアレン油／水エマルション）、ＳＬＡ－ＳＥ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、スクアレン油／水エマルション）、ＳＬＡ－ナノミョウバン（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、アルミニウム塩）、ＧＬＡ－ナノミョウバン（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、アルミニウム塩）、ＳＬＡ－ＡＦ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、水性懸濁液）、ＧＬＡ－ＡＦ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、水性懸濁液）、ＳＬＡ－ミョウバン（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、アルミニウム塩）、ＧＬＡ－ミョウバン（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、アルミニウム塩）、ＧＳＫ ＡＳｘｘシリーズのアジャウバント内のいくつか、例えば、ＡＳ０１（ＭＰＬ、ＱＳ２１、リポソーム）、ＡＳ０２（ＭＰＬ、ＱＳ２１、油／水エマルション）、ＡＳ２５（ＭＰＬ、油／水エマルション）、ＡＳ０４（ＭＰＬ、アルミニウム塩）、及びＡＳ１５（ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ、リポソーム）。例えば、下記を参照されたい：国際公開第２０１３／１１９８５６号パンフレット、同第２００６／１１６４２３号パンフレット、米国特許第４，９８７，２３７号明細書、同第４，４３６，７２７号明細書、同第４，８７７，６１１号明細書、同第４，８６６，０３４号明細書、同第４，９１２，０９４号明細書、同第４，９８７，２３７号明細書、同第５１９１０７２号明細書、同第５５９３９６９号明細書、同第６，７５９，２４１号明細書、同第９，０１７，６９８号明細書、同第９，１４９，５２１号明細書、同第９，１４９，５２２号明細書、同第９，４１５，０９７号明細書、同第９，４１５，１０１号明細書、同第９，５０４，７４３号明細書、Ｒｅｅｄ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，２０１３，上記参照、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，４２：４６４０－４６４９、及びＵｌｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍｙｅｒｓ，１９９５，Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｅｄｓ．；Ｐｌｅｎｕｍ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４９５－５２４。
【0059】
ＴＬＲ４アゴニストアジュバントとして、非糖脂質分子も使用し得、例えば、Ｎｅｏｓｅｐｔｉｎ－３等の合成分子、又はＬｅＩＦ等の天然分子も使用し得、例えば、Ｒｅｅｄ ＳＧ ｅｔ ａｌ，２０１６，上記参照を参照されたい。
【0060】
別の態様では、本発明は、医薬品としての使用のための、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、本発明のポリヌクレオチド、又は本発明の医薬組成物に関する。
【0061】
さらなる態様では、本発明は、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科のグラム陰性菌に対する免疫反応を誘発するための医薬品としての、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物の使用に関する。
【0062】
本明細書で使用される場合、「免疫原」、又は「免疫原性」、又は「抗原」という用語は、単独、アジュバントとの併用、又は提示ビヒクル上での提示のいずれかでのレシピエントへの投与により、それ自体に対する免疫反応を誘発し得る分子を説明するために互換的に使用される。
【0063】
本明細書で使用される場合、抗原又は組成物に対する「免疫学的反応」又は「免疫反応」は、対象中における、この抗原又はこの組成物中に存在する抗原に対する体液性の及び／又は細胞性の免疫反応の発生を指す。
【0064】
さらなる態様では、本発明は、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科のグラム陰性菌により引き起こされる細菌感染に対する免疫反応の誘発での使用のための、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物に関する。
ある特定の実施形態では、この細菌感染は、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）又はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、プロテウス種（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐｐ．）、セラチア種（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｓｐｐ．）、又はシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）により引き起こされる。好ましい実施形態では、この細菌感染は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．）又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる。最も好ましい実施形態では、この細菌感染は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる。そのため、一実施形態では、本発明は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）（好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））に対する免疫反応を誘発するための医薬品としての、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物の使用に関する。
ある特定の実施形態では、この細菌感染は、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）又はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、プロテウス種（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐｐ．）、セラチア種（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｓｐｐ．）、又はシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）により引き起こされる。好ましい実施形態では、この細菌感染は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．）又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる。最も好ましい実施形態では、この細菌感染は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる。そのため、一実施形態では、本発明は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）（好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））に対する免疫反応を誘発するための医薬品としての、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物の使用に関する。
【0065】
好ましい実施形態では、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科のグラム陰性菌により引き起こされる細菌感染は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による感染であり、例えば、ＥｘＰＥＣによる感染であり、より具体的には、尿路感染（ＵＴＩ）である。一実施形態では、本発明は、対象中においてＵＴＩと関連する症状及び／又は後遺症の処置、予防、又は抑制での使用のための、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物に関する。ある特定の実施形態では、前記ＵＴＩは、ｒＵＴＩである。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、若い女性及び高齢者における重要な健康管理問題であるＵＴＩ及びｒＵＴＩの主要な病原体の一つである。そのため、好ましい実施形態では、細菌感染は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされるＵＴＩ又はｒＵＴＩである。
【0066】
一実施形態では、本発明は、必要な対象中における腸内細菌関連状態と関連する症状及び／又は後遺症を処置するか、予防するか、又は抑制する方法に関する。この方法は、この対象に、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物の有効な量を投与することを含む。好ましくは、この投与により、腸内細菌関連状態の処置又は予防で有効な免疫反応が誘発される。好ましくは、腸内細菌関連状態は、泌尿生殖道感染であり、より具体的にはＵＴＩ又はｒＵＴＩである。
【0067】
本発明はまた、エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科のグラム陰性菌に引き起こされる細菌感染（好ましくは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる細菌感染）の処置、予防、又は抑制のための医薬品の製造のための、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、説明されているポリヌクレオチド、又は本明細書で説明されている医薬組成物の使用にも関する。より好ましくは、この細菌感染は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされるＵＴＩ又はｒＵＴＩである。
【0068】
さらなる態様では、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターに関する。ある特定の実施形態では、このベクターは、プラスミド又はウイルスベクターであり、好ましくはプラスミドである。このベクターは、好ましくはＤＮＡの形態であり、例えばＤＮＡプラスミドの形態である。ある特定の実施形態では、このベクターは、プロモーターに作動可能に連結された本発明のポリヌクレオチドを含み、このことは、このポリヌクレオチドがプロモーターの制御下にあることを意味する。このプロモーターは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの上流（例えば、プラスミド中の発現カセット中）に位置し得る。
【0069】
本発明は、更に、本発明のポリペプチドの製造方法であって、本明細書で説明されているＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び／又は本明細書で説明されているベクターを含む組換え細胞を培養することであり、この培養を、このポリペプチドの製造に資する条件下で行なう、培養することを含む方法に関する。
【0070】
ある特定の実施形態では、この方法は、ポリペプチドを回収することを更に含み、任意選択的に、この回収の後に、医薬組成物への製剤化が続く。
【0071】
好ましくは、本発明に係るＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドを製造する方法で、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｂ２１誘導体細胞）を使用する。
【0072】
ポリペプチドの回収は、好ましくは、当該技術分野で公知の従来のタンパク質精製方法を使用して実施し得る精製及び／又は単離工程を含む。そのような方法は、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及びレクチンクロマトグラフィーを含み得る。
【0073】
そのような精製及び／又は単離の典型例は、タンパク質に対する抗体、又はタンパク質構造の一部として発現しているＨｉｓ－タグ又は開裂可能なリーダー若しくはテイルを利用し得る。ある特定の実施形態では、本明細書で説明されているポリペプチドは、Ｈｉｓ－タグを含み、ＩＭＡＣ親和性精製等の方法により精製される。ある特定の実施形態では、本明細書で説明されているポリペプチドは、Ｈｉｓ－タグを含まず、そのような場合には、精製を、カチオン交換クロマトグラフィー（ｃＩＥＸ）及び疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により実施する。
【0074】
定義
背景技術及び本明細書全体を通して、様々な刊行物、論文、及び特許が引用されているか又は説明されているが、これらの参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文献、行為、材料、デバイス、物品、又は同類のものの説明は、本発明に関する状況を提供することを目的とするものである。そのような説明は、これらの内容のいずれか又は全てが、開示されたか又は特許請求されたあらゆる発明に関する先行技術の一部を形成することを認めるものではない。
背景技術及び本明細書全体を通して、様々な刊行物、論文、及び特許が引用されているか又は説明されているが、これらの参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文献、行為、材料、デバイス、物品、又は同類のものの説明は、本発明に関する状況を提供することを目的とするものである。そのような説明は、これらの内容のいずれか又は全てが、開示されたか又は特許請求されたあらゆる発明に関する先行技術の一部を形成することを認めるものではない。
【0075】
別途定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で引用されるある特定の用語は、本明細書で規定されている意味を有する。本明細書で引用されている全ての特許、公開済みの特許出願、及び刊行物は、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により組み込まれる。本明細書で使用される場合、及び添付した特許請求の範囲において、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、別途文脈が明確に指示しない限り複数の言及を含むことに留意しなければならない。
【0076】
本明細書及びそれに続く特許請求の範囲の全体を通して、別途文脈が必要としない限り、「含む」という語句、並びに「含む」及び「含んでいる」等の変形形態は、規定の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を包含するが、任意の他の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を除外するものではないことを意味することが理解されるだろう。本明細書で使用される場合、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含んでいる（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」若しくは「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語に置き換えられ得るか、又本明細書で使用される場合に「有する」という用語に置き換えられ得ることもある。
【0077】
本明細書で使用される場合、「からなる」は、特許請求の範囲の要素において規定されていない任意の要素、工程、又は成分を除外する。本明細書で使用される場合、「本質的に～からなる」は、特許請求の範囲の基本的な特徴及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程を除外するものではない。上記の「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含んでいる（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する」という用語のいずれもが、本発明の態様又は実施形態の文脈において本明細書で使用される場合はいつでも、「～からなる」又は「本質的に～からなる」という用語に置き換えられて、本開示の範囲を変更し得る。
【0078】
本明細書で使用される場合、多数の列挙された要素の間を接続する「及び／又は」という用語は、個々の選択肢及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものと理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」により接続されている場合には、第１の選択肢は、第２の要素を含まない第１の要素を適用することを指す。第２の選択肢は、第１の要素を含まない第２の要素を適用することを指す。第３の選択肢は、第１の要素及び第２の要素を共に適用することを指す。これらの選択肢のいずれか１つは、本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語の意味の範囲内に含まれ、したがって「及び／又は」という用語の要件を満たすものと理解される。複数の選択肢を同時に適用することはまた、「及び／又は」という用語の意味の範囲内に含まれ、したがって「及び／又は」という用語の要件を満たすものとも理解される。
【0079】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、本発明に係る組成物の有効性又は本発明に係る組成物の生物学的活性に干渉しない非毒性物質を指す。「薬学的に許容される担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入、又は医薬製剤での使用のための当該技術分野で公知の他の物質を含み得る。薬学的に許容される担体の特性は特定の用途のための投与経路に依存することが理解されるだろう。特定の実施形態によれば、本開示に照らして、本発明では、ワクチンでの使用に適した任意の薬学的に許容される担体を使用し得る。好適な賦形剤として下記が挙げられるが、これらに限定されない：滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノール、又は同類のもの、及びこれらの組み合わせ、並びに安定剤、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、又は他の好適なタンパク質及び還元糖。
【0080】
本明細書で使用される場合、「有効な量」という用語は、対象中において所望の生物学的反応又は医学的反応を誘導する、有効成分又は有効構成成分の量を指す。有効な量を、記述されている目的に関して、実験的に且つ通例の様式で決定し得る。例えば、インビトロアッセイを、任意選択的に、最適な投与量範囲の特定を助けるために利用し得る。
【0081】
本明細書で使用される場合、「対象」又は「患者」は、本発明の実施形態に係る方法又は組成物によりワクチン接種されることになるか又はワクチン接種されているあらゆる動物を意味しており、好ましくは哺乳動物を意味しており、最も好ましくはヒトを意味している。「哺乳動物」という用語は、本明細書で使用される場合、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例として、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒト等が挙げられるが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトが挙げられる。ある特定の実施形態では、対象は、成人である。本明細書で使用される場合、「成人」という用語は、１８歳以上のヒトを指す。ある特定の実施形態では、対象は、１８歳未満であり、例えば０～１８歳であり、例えば、９～１８歳であるか、又は１２～１８歳である。ある特定の実施形態では、対象は、約１８～約５０歳のヒト対象である。ある特定の実施形態では、対象は、約５０～約１００歳のヒトであり、例えば、５０～８５歳、６０～８０歳、５０歳以上、５５歳以上、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、８０歳以上、８５歳以上のヒトである。一部の実施形態では、対象は、８５歳以下であり、８０歳以下であり、７５歳以下である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、男性である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、女性である。
【0082】
本明細書で使用される場合、「ＵＴＩ」は、腎臓、膀胱、尿管、又は尿道の感染を意味する。ＵＴＩの症状として、下記の内の１又は複数が挙げられ得る：排尿時の灼熱感、頻尿又は強い尿意、排尿の不完全さ、外見及び／又は匂いが異常な尿、尿中の白血球の増加、疲労感又は震え、意識の混乱、発熱又は悪寒、倦怠感、背中、下腹部、骨盤、又は膀胱の疼痛又は圧迫。しかしながら、一部の患者では、無症状であり得るか、又は症状が非特異的であり得る。ＵＴＩの後遺症として、侵襲性疾患及び敗血症等の全身性の合併症が挙げられ得る。ある特定の実施形態では、ＵＴＩは、臨床的に及び／又は微生物学的に実証されており、例えば、尿の細菌培養及び／又は分子法若しくは他の方法で確認される。ある特定の実施形態では、対象は、ＵＴＩを過去に有したことがあるか又は現在有しているヒト対象である。ある特定の実施形態では、対象は、過去２年以内に、過去１年以内に、又は過去６ヶ月以内に、ＵＴＩを有したことがある。ある特定の実施形態では、対象は、再発性ＵＴＩ（ｒＵＴＩ）を有したことがあるか、又は現在有している。「ｒＵＴＩ」は、本明細書で使用される場合、６ヶ月での少なくとも２回の感染を意味しているか、又は１年での少なくとも３回のＵＴＩを意味している。ある特定の実施形態では、本発明のＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチド、本発明のＦｉｍＣＨ複合体、又は本発明の組成物が投与される対象は、過去２年以内に、過去１年以内に、又は過去６ヶ月以内に、少なくとも２回ＵＴＩに罹患したことがある。ある特定の実施形態では、この対象は、複雑なＵＴＩに罹患したことがある。「複雑なＵＴＩ」は、本明細書で使用される場合、尿生殖路の構造的若しくは機能的な異常、又は基礎疾患の存在等の状態を伴うＵＴＩを意味する。ある特定の実施形態では、ＵＴＩにより、尿中の白血球の数の増加、又は他の尿の異常が引き起こされる。ある特定の実施形態では、ＵＴＩを有する対象は、尿中に多数の細菌が存在しており（即ち、この尿は無菌ではない）、例えば、細菌細胞数が、少なくとも約１０個の細胞／ｍＬであり、少なくとも約１００個の細胞／ｍＬであり、少なくとも約１０３個の細胞／ｍＬであり、例えば、少なくとも約１０４個の細胞／ｍＬであり、例えば、少なくとも約１０５個の細胞／ｍＬである。
【0083】
本明細書で使用される場合、抗原又は組成物に対する「免疫学的反応」又は「免疫反応」は、対象における、抗原、又は組成物中に存在する抗原に対する体液性及び／又は細胞性の免疫反応の発生を指す。
【0084】
別途指示されない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、一連の各要素に関すると理解すべきである。
【0085】
「約（ａｂｏｕｔ）」又は「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、数値（例えば約１０）と関連して称される場合、好ましくは、この値が、所与の値（１０）１０％程度、好ましくはこの値の５％程度であり得ることを意味する。
【0086】
「相同性」、「配列同一性」という用語、及び同類のものは、本明細書では互換的に使用される。配列同一性は、本明細書では、２つ以上のアミノ酸（ポリペプチド若しくはタンパク質）配列、又は２つ以上の核酸（ポリヌクレオチド）配列の、これらの配列を比較することにより決定した場合での関係と定義される。当該技術分野では、「同一性」はまた、アミノ酸配列間又は核酸配列間の、場合によってはそのような配列のストリング間の一致により決定した場合での、配列関連性の程度も意味する。２つのアミノ酸配列間の「類似性」は、あるポリペプチドのアミノ酸配列及びその保存アミノ酸置換と、別のポリペプチドの配列とを比較することにより決定される。「同一性」及び「類似性」を、既知の方法により容易に算出し得る。
【0087】
「配列同一性」及び「配列類似性」を、２つの配列の長さに応じてグローバルな又はローカルなアラインメントアルゴリズムを使用する、２つのペプチド配列又は２つのヌクレオチド配列のアラインメントにより決定し得る。長さが類似している配列を、好ましくは、全長にわたり配列を最適にアラインさせるグローバルアラインメントアルゴリズム（例えばＮｅｅｄｌｅｍａｎ Ｗｕｎｓｃｈ）を使用してアラインさせ、長さが実質的に異なる配列を、好ましくは、ローカルアラインメントアルゴリズム（例えばＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎ）を使用してアラインさせる。次いで、これらの配列を、これらの配列が（例えばデフォルトパラメータを使用するプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴにより最適にアラインさせた場合に）配列同一性の少なくともある程度最低限の割合（下記で定義される）を共有する場合に、「実質的に同一」又は「本質的に類似」と称し得る。ＧＡＰは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈグローバルアラインメントアルゴリズムを使用して、２つの配をその全長（完全長）にわたりアラインさせ、一致の数を最大化させ、且つギャップの数を最小化させる。グローバルアラインメントは、２つの配列は長さが類似している場合に配列同一性を決定するために好適に使用される。一般的に、下記のＧＡＰデフォルトパラメータが使用される：ギャップ作成ペナルティ＝５０（ヌクレオチド）／８（タンパク質）、及びギャップ伸長ペナルティ＝３（ヌクレオチド）／２（タンパク質）。ヌクレオチドの場合、使用されるデフォルトスコアリングマトリックスは、ｎｗｓｇａｐｄｎａであり、タンパク質の場合、デフォルトスコアリングマトリックスは、Ｂｌｏｓｕｍ６２である（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ ８９，９１５－９１９）。配列アラインメント及び配列同一性割合のスコアを、コンピュータプログラム（例えば、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ １０．３、Ａｃｃｅｌｒｙｓ Ｉｎｃ．，９６８５ Ｓｃｒａｎｔｏｎ Ｒｏａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ ９２１２１－３７５２ ＵＳＡから入手可能）を使用して決定し得るか、又は上記ＧＡＰの場合と同一のパラメータを使用するか、若しくはデフォルト設定（「ｎｅｅｄｌｅ」及び「ｗａｔｅｒ」の両方、並びにタンパク質アラインメント及びＤＮＡアラインメントの両方に関して、デフォルトＧａｐオープニングペナルティは１０．０であり、デフォルトギャップ伸長ペナルティは０．５であり；デフォルトスコアリングマトリックスは、タンパク質の場合はＢｌｏｓｕｍ６２であり、ＤＮＡの場合はＤＮＡＦｕｌｌである）を使用して、ＥｍｂｏｓｓＷＩＮ バージョン２．１０．０のオープンソースソフトウェア、例えば、プログラム「ｎｅｅｄｌｅ」（グローバルＮｅｅｄｌｅｍａｎ Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを使用する）若しくは「ｗａｔｅｒ」（ローカルＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用する）を使用して決定し得る。配列が全長にわたり実質的に異なる場合には、ローカルアルゴリズム（例えば、Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用するもの）が好ましい。
【0088】
或いは、類似性又は同一性の割合を、例えば、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ等のアルゴリズムを使用して公的データベースに対して検索することにより決定し得る。そのため、本発明の核酸配列及びタンパク質配列を、更に、例えば他のファミリメンバー又は関連配列を同定すべく公的データベースに対する検索を実施するための「クエリー配列」として使用し得る。そのような検索を、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ． （１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＢＬＡＳＴｎプログラム及びＢＬＡＳＴｘプログラム（バージョン２．０）を使用して実施し得る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で実施して、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＢＬＡＳＴｘプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実施して、本発明のタンパク質配列に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためにギャップ付アリンメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５（１７）：３３８９－３４０２で説明されているように利用し得る。ＢＬＡＳＴプログラム及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合には、それぞれのプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴｘ及びＢＬＡＳＴｎ）のデフォルトパラメータを使用し得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／でのｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのホームページを参照されたい。
【0089】
配列の説明
【0090】
【表1】
【0091】
ＦｉｍＨポリペプチドの配列の他の例は、米国特許第６，７３７，０６３号明細書（例えば、この明細書中の配列番号２３～４５又は５５の内のいずれか１つ）で説明されており、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【0092】
本発明の下記の実施例により、本発明の性質を更に説明する。下記の実施例は本発明を限定せず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲により決定されるものであることを理解すべきである。
【0093】
実施例１：新規のバリアントの設計－ＳＰＲデータ
ワクチンの有効性でのＦｉｍＨ立体構造変化の影響を理解するために、タンパク質を低親和性状態に潜在的に固定し得る様々な変異を含むＦｉｍＨのいくつかのバリアントを設計し、膀胱での細菌の付着及びコロニー形成を減少させ得る機能的抗体を誘発する最良のＦｉｍＨバリアントを特定することを目指した。
ワクチンの有効性でのＦｉｍＨ立体構造変化の影響を理解するために、タンパク質を低親和性状態に潜在的に固定し得る様々な変異を含むＦｉｍＨのいくつかのバリアントを設計し、膀胱での細菌の付着及びコロニー形成を減少させ得る機能的抗体を誘発する最良のＦｉｍＨバリアントを特定することを目指した。
【0094】
材料及び方法
ＦｉｍＨの設計及び発現
ＦｉｍＣ及びＦｉｍＨを、ペリプラズム中での発現のために異種シグナル配列を使用し、且つ固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）を使用する親和性精製のためにＦｉｍＣでＣ末端Ｈｉｓ－タグを使用して、ｐＥＴ－ＤＵＥＴベクター中で発現させた。ＩＰＴＧを使用して発現を誘発させ、ＩＭＡＣ精製（Ｔａｌｏｎ）を使用してタンパク質を抽出して精製した。
ＦｉｍＨの設計及び発現
ＦｉｍＣ及びＦｉｍＨを、ペリプラズム中での発現のために異種シグナル配列を使用し、且つ固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）を使用する親和性精製のためにＦｉｍＣでＣ末端Ｈｉｓ－タグを使用して、ｐＥＴ－ＤＵＥＴベクター中で発現させた。ＩＰＴＧを使用して発現を誘発させ、ＩＭＡＣ精製（Ｔａｌｏｎ）を使用してタンパク質を抽出して精製した。
【0095】
ＳＰＲ
ＦｉｍＨレクチンドメインバリアントと、ｎヘプチル－α－Ｄ－マンノピラノシドリガンドとの相互作用の結合親和性及び速度論の詳細な洞察を得るために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を実施した。簡潔に説明すると、全てのＦｉｍＨバリアントを、ＨＢＳ－Ｎ（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中の３又は１０μＭのいずれかの最高濃度で、マンノシドリガンド５表面に滴定した（Ｒａｂｂａｎｉ Ｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１８，２９３（５）：１８３５－１８４９）。タンパク質を、シングルサイクルキネティクス注入（ｓｉｎｇｌｅ ｃｙｃｌｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を使用して、０．１２～１０μＭ又は０．０３６～３．０μＭで注入した。
ＦｉｍＨレクチンドメインバリアントと、ｎヘプチル－α－Ｄ－マンノピラノシドリガンドとの相互作用の結合親和性及び速度論の詳細な洞察を得るために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を実施した。簡潔に説明すると、全てのＦｉｍＨバリアントを、ＨＢＳ－Ｎ（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中の３又は１０μＭのいずれかの最高濃度で、マンノシドリガンド５表面に滴定した（Ｒａｂｂａｎｉ Ｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１８，２９３（５）：１８３５－１８４９）。タンパク質を、シングルサイクルキネティクス注入（ｓｉｎｇｌｅ ｃｙｃｌｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を使用して、０．１２～１０μＭ又は０．０３６～３．０μＭで注入した。
【0096】
結果
いくつかのＦｉｍＨバリアントを設計し、機能的阻害活性を誘発し得、それにより、幅広い適用範囲を提供しつつ細菌が膀胱細胞に結合することを防ぐＦｉｍＨレクチンドメインの発見を目標とした。好適なＦｉｍＨレクチンドメインバリアントの発見の可能性を最適化するために、予測される作用機序が異なるバリアントを選択した。
いくつかのＦｉｍＨバリアントを設計し、機能的阻害活性を誘発し得、それにより、幅広い適用範囲を提供しつつ細菌が膀胱細胞に結合することを防ぐＦｉｍＨレクチンドメインの発見を目標とした。好適なＦｉｍＨレクチンドメインバリアントの発見の可能性を最適化するために、予測される作用機序が異なるバリアントを選択した。
【0097】
既に説明されている変異体ＦｉｍＨ＿Ｑ１３３Ｋ及びＦｉｍＨ＿Ｒ６０Ｐは、結合ポケット中のマンノース相互作用残基中に変異を有する。この変異は、マンノースとの結合相互作用に直接影響を及ぼすと予想される。これらの変異体を、陽性コントロールとして採用した。二重変異体Ｒ６０Ｐ＿Ｑ１３３Ｋを、潜在的に増強された効果を調べるために一緒に採用した。加えて、野生型（ＷＴ）ＦｉｍＨレクチンドメインを、陰性コントロールとして一緒に採用した。いくつかのさらなるＦｉｍＨ変異体（本明細書で「変異体１」及び「変異体２」と称されるものを含む）を作製し、機能的阻害抗体を得ることを目的とするパネルの候補として試験した。
【0098】
最初に、マンノースへの結合に関するバリアント親和性を、ＳＰＲを使用して評価した。結果を表２に示す。予想されるように、ＦｉｍＨのマンノース結合ポケット中に変異を有するレクチンドメインバリアント（Ｑ１３３Ｋ及びＲ６０Ｐ＿Ｑ１３３Ｋ）は、マンノシドに全く結合しなかった。Ｒ６０Ｐ変異体は、予想されるように、マンノシドに対して低い親和性を示した。
【0099】
Ｆ１４２Ｖは、マンノシドに対してある程度の親和性を依然として示しており、このことは、この変異がマンノシドへの結合を完全に消失させなかったことを示す。Ｆ１４４Ｖ置換を含むＦｉｍＨレクチンドメインバリアントでは、マンノシドへの結合が完全に消失した。Ｆ１４４Ｖ変異と比較した場合にアミノ酸配列中の位置が非常に近いことを考慮すると、マンノシドへの結合にＦ１４２ＶとＦ１４４Ｖとの間で差違が見られることは驚きであった。
【0100】
【表2】
【0101】
実施例２：阻害抗体を誘発する能力
親和性が低い高次構造のＦｉｍＨに対して生成された抗体は、細菌細胞をブロックし得、且つ膀胱中でのコロニー形成を減少させ得ることが分かっている。親和性が低い高次構造に固定されたＦｉｍＨの様々なバリアントにより誘発される抗体の機能性を評価するために、付着阻害アッセイ（ＡＩＡ）を使用した。
親和性が低い高次構造のＦｉｍＨに対して生成された抗体は、細菌細胞をブロックし得、且つ膀胱中でのコロニー形成を減少させ得ることが分かっている。親和性が低い高次構造に固定されたＦｉｍＨの様々なバリアントにより誘発される抗体の機能性を評価するために、付着阻害アッセイ（ＡＩＡ）を使用した。
【0102】
材料及び方法：
免疫付与
Ｗｉｓｔａｒラットに、非フロイントアジュバントと組み合わせた上記のＦｉｍＨバリアント（６０μｇ 各バリアント／用量）により０、７、１０、及び１８日目に４回の筋肉内（ｉ．ｍ．）免疫付与を行なった（Ｓｐｅｅｄｙラット２８日モデル、Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ）。血清抗体の機能性を、下記で説明する付着阻害アッセイ（ＡＩＡ）により、０日目（免疫付与前）及び２８日目（免疫付与後）に調べた。
免疫付与
Ｗｉｓｔａｒラットに、非フロイントアジュバントと組み合わせた上記のＦｉｍＨバリアント（６０μｇ 各バリアント／用量）により０、７、１０、及び１８日目に４回の筋肉内（ｉ．ｍ．）免疫付与を行なった（Ｓｐｅｅｄｙラット２８日モデル、Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ）。血清抗体の機能性を、下記で説明する付着阻害アッセイ（ＡＩＡ）により、０日目（免疫付与前）及び２８日目（免疫付与後）に調べた。
【0103】
付着阻害アッセイ（ＡＩＡ）
細菌（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｊ９６）を、フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）で標識した。標識した細菌を、３７℃で１時間にわたり膀胱尿路上皮細胞（５６３７細胞株）に接種した。付着菌の％を、フローサイトメトリーにより測定した。血清阻害の評価のために、細菌を、３７℃で３０分にわたり血清サンプルと共に予めインキュベートし、次いで５６３７細胞と混合した。
細菌（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｊ９６）を、フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）で標識した。標識した細菌を、３７℃で１時間にわたり膀胱尿路上皮細胞（５６３７細胞株）に接種した。付着菌の％を、フローサイトメトリーにより測定した。血清阻害の評価のために、細菌を、３７℃で３０分にわたり血清サンプルと共に予めインキュベートし、次いで５６３７細胞と混合した。
【0104】
ＥＬＩＳＡ
９６ウェルプレートを、１ｕｇ／ｍＬのＦｉｍＨで一晩コーティングした。洗浄後、コーティングされたプレートを、室温で１時間にわたり、ブロッキング緩衝剤［リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）＋２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］と共にインキュベートする。ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０による洗浄後、このプレートに血清を添加し、次いで室温で１時間にわたりインキュベートする。洗浄後、各ウェルに、室温で１時間にわたり、２％のＢＳＡを含むＰＢＳで希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートしたヤギ抗ラット抗体を添加する。最終洗浄後、この反応を、テトラメチルベンジジン基質で現像する。この反応を１Ｍのリン酸で停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定する。
９６ウェルプレートを、１ｕｇ／ｍＬのＦｉｍＨで一晩コーティングした。洗浄後、コーティングされたプレートを、室温で１時間にわたり、ブロッキング緩衝剤［リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）＋２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］と共にインキュベートする。ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０による洗浄後、このプレートに血清を添加し、次いで室温で１時間にわたりインキュベートする。洗浄後、各ウェルに、室温で１時間にわたり、２％のＢＳＡを含むＰＢＳで希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートしたヤギ抗ラット抗体を添加する。最終洗浄後、この反応を、テトラメチルベンジジン基質で現像する。この反応を１Ｍのリン酸で停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定する。
【0105】
結果
血清抗体阻害力価を、４パラメータロジスティック回帰モデルに基づいて半最大阻害濃度（ＩＣ５０）として算出した。加えて、様々なＦｉｍＨバリアント（総ＩｇＧ）により誘発された血清抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡにより評価した。半最大有効濃度として定義されるＥＣ５０力価を、４ＰＬ非線形回帰モデルで解析した二重の１２段階滴定曲線に基づいて算出した。
血清抗体阻害力価を、４パラメータロジスティック回帰モデルに基づいて半最大阻害濃度（ＩＣ５０）として算出した。加えて、様々なＦｉｍＨバリアント（総ＩｇＧ）により誘発された血清抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡにより評価した。半最大有効濃度として定義されるＥＣ５０力価を、４ＰＬ非線形回帰モデルで解析した二重の１２段階滴定曲線に基づいて算出した。
【0106】
ＦｉｍＨバリアントのそれぞれにより誘発された阻害抗体の大きさの評価により、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｆ１４４Ｖが最高レベルの機能性抗体を誘発し得ることが分かり（図１）、このことは、本発明以前では驚くべきことであり且つ完全に予測不可能なことであった。この結果に基づいて、Ｆ１４４Ｖ置換を含むＦｉｍＨレクチンドメインを、主要な候補として選択した。
【0107】
実施例３：抗体の機能性
抗体の機能性を、阻害抗体が存在するかどうかを評価するために精製済ＩｇＧ調製物を使用する生物層インターフェロメトリー解析（Ｏｃｔｅｔ，Ｐａｌｌ Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）で評価した。簡単に言うと、４種の異なる濃度の精製済ＩｇＧ（０～１２５マイクログラム／ｍｌ）を、本明細書で説明されているＦｉｍＨバリアントと混合した。混合後、ＦｉｍＨレクチンドメインタンパク質を、（ビオチンストレプトアビジン化学を使用して）ビオチン標識モノマンノシドで予め固定化されたバイオセンサーに結合する能力に関して評価した。会合及び解離を、６００秒にわたり測定し、会合中の反応（単位ナノメートル（ｎｍ））を、算出して比較した。このことを、マンノースへのＦｉｍＨの結合を阻害するＦｉｍＨバリアントの能力を評価するために、ブランクコントロールと比較してマンノシドにより行なった。
抗体の機能性を、阻害抗体が存在するかどうかを評価するために精製済ＩｇＧ調製物を使用する生物層インターフェロメトリー解析（Ｏｃｔｅｔ，Ｐａｌｌ Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）で評価した。簡単に言うと、４種の異なる濃度の精製済ＩｇＧ（０～１２５マイクログラム／ｍｌ）を、本明細書で説明されているＦｉｍＨバリアントと混合した。混合後、ＦｉｍＨレクチンドメインタンパク質を、（ビオチンストレプトアビジン化学を使用して）ビオチン標識モノマンノシドで予め固定化されたバイオセンサーに結合する能力に関して評価した。会合及び解離を、６００秒にわたり測定し、会合中の反応（単位ナノメートル（ｎｍ））を、算出して比較した。このことを、マンノースへのＦｉｍＨの結合を阻害するＦｉｍＨバリアントの能力を評価するために、ブランクコントロールと比較してマンノシドにより行なった。
【0108】
結果
ＦｉｍＨ結合ポケット高次構造の変化（この変化により、マンノシドへのＦｉｍＨの低い、中程度の、又は高い親和性の結合がもたらされる）は、尿路上皮細胞への細菌の結合に重要な役割を果たす。マンノースに対する親和性が低い高次構造に対する抗体は、細菌付着に対する阻害効果を有するであろうことが示唆されている。この示唆を分析し、且つワクチン有効性へのＦｉｍＨ高次構造の変化の影響を更に理解するために、ＦｉｍＨレクチンドメインバリアントで免疫付与したラットの血清からの精製済ＩｇＧを、生物層インターフェロメトリー（ＢＬＩ）による単純なマンノシド（モノマンノース－ビオチン）へのＦｉｍＨの結合を減少させる能力に関してスクリーニングした。
ＦｉｍＨ結合ポケット高次構造の変化（この変化により、マンノシドへのＦｉｍＨの低い、中程度の、又は高い親和性の結合がもたらされる）は、尿路上皮細胞への細菌の結合に重要な役割を果たす。マンノースに対する親和性が低い高次構造に対する抗体は、細菌付着に対する阻害効果を有するであろうことが示唆されている。この示唆を分析し、且つワクチン有効性へのＦｉｍＨ高次構造の変化の影響を更に理解するために、ＦｉｍＨレクチンドメインバリアントで免疫付与したラットの血清からの精製済ＩｇＧを、生物層インターフェロメトリー（ＢＬＩ）による単純なマンノシド（モノマンノース－ビオチン）へのＦｉｍＨの結合を減少させる能力に関してスクリーニングした。
【0109】
ＦｉｍＨレクチンドメインで免疫付与したラットからの血清中の阻害抗体の存在に関するＢＬＩスクリーニングにより、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｆ１４４Ｖが、固定化されたモノマンノシドへの低親和性及び高親和性両方のＦｉｍＨレクチンドメインタンパク質の結合を阻害し得ることが示された（データは示さない）。
【0110】
実施例４：特徴付けられた阻害ｍＡｂ ４７５及び９２６に結合する能力
ＦｉｍＨのレクチンドメイン中での変異により、ＦｉｍＨの結合ポケット中に存在するエピトープ等の強力で機能的な免疫反応の誘発で重要なエピトープの喪失が引き起こされ得る。本明細書で説明されている変異において結合ポケットの完全性が損なわれていないことを確実にするために、変異体ＦｉｍＨレクチンドメインへのモノクローナル抗体（ｍＡｂ） ｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６の結合を評価した。ｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６は、ＦｉｍＨのマンノース結合ポケット内のＦｉｍＨレクチンドメイン上の重複しているが異なるエピトープを認識する（Ｋｉｓｉｅｌａ ｅｔ ａｌ． ２０１３－２０１５）。
ＦｉｍＨのレクチンドメイン中での変異により、ＦｉｍＨの結合ポケット中に存在するエピトープ等の強力で機能的な免疫反応の誘発で重要なエピトープの喪失が引き起こされ得る。本明細書で説明されている変異において結合ポケットの完全性が損なわれていないことを確実にするために、変異体ＦｉｍＨレクチンドメインへのモノクローナル抗体（ｍＡｂ） ｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６の結合を評価した。ｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６は、ＦｉｍＨのマンノース結合ポケット内のＦｉｍＨレクチンドメイン上の重複しているが異なるエピトープを認識する（Ｋｉｓｉｅｌａ ｅｔ ａｌ． ２０１３－２０１５）。
【0111】
結果
変異したＦｉｍＨレクチンドメインは、国際公開第０２１０２９７４号パンフレットで既に説明されている。国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、ほとんど特定されていない変異の可能な変異の広範なリスト（約１５９個のアミノ酸の長さであるＦｉｍＨのレクチンドメインで示唆されている６５個の可能な変異部位）が説明されている。しかしながら、国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、５４位、１３３位、又は１３５位でアミノ酸置換を有するＦｉｍＨレクチンドメインが最も有望な候補であり、ＦｉｍＨ＿Ｑ１３３Ｋが非常に好ましい選択肢と明確に述べられている。したがって、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｑ１３３Ｋが機能的ｍＡｂ４７５により認識されなかったことは非常に驚くべきことであり、このことは、結合ポケットの完全性の問題を示す（表３）。対照的に、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｆ１４４ＶはｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６の両方により認識されており、このことは、結合ポケットが完全に無傷のままであることを示す（表３）。
変異したＦｉｍＨレクチンドメインは、国際公開第０２１０２９７４号パンフレットで既に説明されている。国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、ほとんど特定されていない変異の可能な変異の広範なリスト（約１５９個のアミノ酸の長さであるＦｉｍＨのレクチンドメインで示唆されている６５個の可能な変異部位）が説明されている。しかしながら、国際公開第０２１０２９７４号パンフレットでは、５４位、１３３位、又は１３５位でアミノ酸置換を有するＦｉｍＨレクチンドメインが最も有望な候補であり、ＦｉｍＨ＿Ｑ１３３Ｋが非常に好ましい選択肢と明確に述べられている。したがって、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｑ１３３Ｋが機能的ｍＡｂ４７５により認識されなかったことは非常に驚くべきことであり、このことは、結合ポケットの完全性の問題を示す（表３）。対照的に、ＦｉｍＨ－２３－１０＿Ｆ１４４ＶはｍＡｂ４７５及びｍＡｂ９２６の両方により認識されており、このことは、結合ポケットが完全に無傷のままであることを示す（表３）。
【0112】
【表3】
【0113】
そのため、結論として、全てのＦｉｍＨバリアントの内、ＦｉｍＨ＿Ｆ１４４Ｖは、マンノースに対する親和性の大幅な減少を示しており（このことは、このバリアントが、マンノース高次構造に対する親和性が低かったことを示す）、且つ固定化されたモノマンノシドへの低親和性及び高親和性の両方のＦｉｍＨレクチンドメインタンパク質の結合を阻害し得た。更に、ＦｉｍＨ＿Ｆ１４４Ｖは、試験された全ての変異の中で最高レベルの機能的抗体を誘発し、且つ無傷の結合ポケットを有することが示された。この変異体はまた、ＦｉｍＣＨ複合体でも製造可能であった。結論として、１４４位でバリンを有するＦｉｍＨレクチンドメインは、このドメインがワクチン成分として非常に好適となる特徴の驚くべき組み合わせを有しており、即ち、これまで焦点が当てられていると見られるＦｉｍＨベースのワクチンを開発するための努力が行なわれている野生型と比べて優れており、且つ本明細書で試験された他のバリアントと比べて優れている。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を列挙する。
［発明１］
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドであって、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、ポリペプチド。
［発明２］
前記ポリペプチドは、変異を含み、前記変異は、Ｆ１４４Ｖ置換である、発明１に記載のポリペプチド。
［発明３］
前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくは、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、１４４位のフェニルアラニン残基がバリンに置換されている配列番号１を含む、発明１又は２に記載のポリペプチド。
［発明４］
前記ポリペプチドは、ＦｉｍＨピリンドメインを更に含む、発明１～３のいずれか一つに記載のポリペプチド。
［発明５］
前記ポリペプチドは、配列番号２との少なくとも９０％の配列同一性を有する完全長ＦｉｍＨであり、好ましくは、前記ＦｉｍＨは、１４４位のフェニルアラニン残基がバリンに置換されている配列番号２を含む、発明１～４のいずれか一つに記載のポリペプチド。
［発明６］
発明４又は５に記載のポリペプチドと、ＦｉｍＣ（ＦｉｍＣＨ）とを含む複合体。
［発明７］
発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
［発明８］
発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、又は発明７に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
［発明９］
前記組成物は、アジュバントを更に含む、発明８に記載の医薬組成物。
［発明１０］
医薬品としての使用のための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１１］
エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌に対する免疫反応の誘発での使用ための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１２］
前記細菌は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）であり、好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、発明１１に記載の使用のためのポリペプチド、ポリヌクレオチド、複合体、又は医薬組成物。
［発明１３］
対象中において大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる尿路感染の予防又は処置における使用のための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１４］
必要な対象中における腸内細菌関連状態を処置するか又は予防する方法であって、前記対象に、発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物の有効な量を投与することを含む方法。
［発明１５］
発明７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［発明１６］
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドを製造する方法であって、発明７に記載のポリヌクレオチド及び／又は発明１５に記載のベクターを含む組換え細胞から前記ポリペプチドを発現させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記ポリペプチドを回収して精製することを更に含み、任意選択的に、前記精製の後に、前記ポリペプチドの医薬組成物への製剤化が続く、方法。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を列挙する。
［発明１］
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドであって、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１の１４４位に対応する位置で、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、及びアラニン（Ａ）からなる群から選択されるアミノ酸を含む、ポリペプチド。
［発明２］
前記ポリペプチドは、変異を含み、前記変異は、Ｆ１４４Ｖ置換である、発明１に記載のポリペプチド。
［発明３］
前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、配列番号１との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくは、前記ＦｉｍＨレクチンドメインは、１４４位のフェニルアラニン残基がバリンに置換されている配列番号１を含む、発明１又は２に記載のポリペプチド。
［発明４］
前記ポリペプチドは、ＦｉｍＨピリンドメインを更に含む、発明１～３のいずれか一つに記載のポリペプチド。
［発明５］
前記ポリペプチドは、配列番号２との少なくとも９０％の配列同一性を有する完全長ＦｉｍＨであり、好ましくは、前記ＦｉｍＨは、１４４位のフェニルアラニン残基がバリンに置換されている配列番号２を含む、発明１～４のいずれか一つに記載のポリペプチド。
［発明６］
発明４又は５に記載のポリペプチドと、ＦｉｍＣ（ＦｉｍＣＨ）とを含む複合体。
［発明７］
発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
［発明８］
発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、又は発明７に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
［発明９］
前記組成物は、アジュバントを更に含む、発明８に記載の医薬組成物。
［発明１０］
医薬品としての使用のための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１１］
エンテロバクテリアセエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科の細菌に対する免疫反応の誘発での使用ための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１２］
前記細菌は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）であり、好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、発明１１に記載の使用のためのポリペプチド、ポリヌクレオチド、複合体、又は医薬組成物。
［発明１３］
対象中において大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により引き起こされる尿路感染の予防又は処置における使用のための発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物。
［発明１４］
必要な対象中における腸内細菌関連状態を処置するか又は予防する方法であって、前記対象に、発明１～５のいずれか一つに記載のポリペプチド、発明６に記載の複合体、発明７に記載のポリヌクレオチド、又は発明８若しくは９に記載の医薬組成物の有効な量を投与することを含む方法。
［発明１５］
発明７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［発明１６］
ＦｉｍＨレクチンドメインを含むポリペプチドを製造する方法であって、発明７に記載のポリヌクレオチド及び／又は発明１５に記載のベクターを含む組換え細胞から前記ポリペプチドを発現させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記ポリペプチドを回収して精製することを更に含み、任意選択的に、前記精製の後に、前記ポリペプチドの医薬組成物への製剤化が続く、方法。
【図1】
