(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-17
(45)【発行日】2024-05-27
(54)【発明の名称】ＨＦｐＥＦのためのＩＧＦＢＰ７の比
(51)【国際特許分類】
G01N 33/68 20060101AFI20240520BHJP
【ＦＩ】
G01N33/68
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2021569358
(86)(22)【出願日】2020-05-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-27
(86)【国際出願番号】 EP2020064276
(87)【国際公開番号】W WO2020234451
(87)【国際公開日】2020-11-26
【審査請求日】2023-04-21
(31)【優先権主張番号】19176160.0
(32)【優先日】2019-05-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】591003013
【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(72)【発明者】
【氏名】ハッベン，カイ
(72)【発明者】
【氏名】ロルニー，ビンツェント
(72)【発明者】
【氏名】マンク，アニカ
(72)【発明者】
【氏名】ビーンヒューズ－テレン，ウルスラ－ヘンリケ
(72)【発明者】
【氏名】マッソン，セルジェ
【審査官】小澤 理
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１７－５１２９８８（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１５／１１３８８９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】CYPEN, J. et al.，Novel Biomarkers for the Risk Stratification of Heart Failure with Preserved Ejection Fraction，Curr Heart Fail Rep，2017年，Vol.14, No.5，p.434-443，DOI: 10.1007/s11897-017-0358-4
【文献】CHOW, S. L. et al.，Role of Biomarkers for the Prevention, Assessment, and Management of Heart Failure，Circulation，2017年，Vol.135, No.22，e1054-e1091，DOI: 10.1161/CIR.0000000000000490
【文献】BARROSO, M. C. et al.，Serum insulin-like growth factor-1 and its binding protein-7: potential novel biomarkers for heart failure with preserved ejection fraction，BMC Cardiovascular Disorders，2016年，Vol.16, No.199，p.1-9，DOI: 10.1186/s12872-016-0376-2
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／６８
Ｇ０１Ｎ ３３／５３
ＣＡｐｌｕｓ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
Ｓｃｏｐｕｓ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための指標を提供する方法であって、（ａ）前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された前記比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための指標を提供する工程を含む、方法。
【請求項2】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＢＮＰ型ペプチドがＢＮＰまたはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和の比が計算される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記基準比を上回る比が、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を示し、かつ／または前記基準比を下回る比が、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）を示す、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための指標を提供する方法であって、（ａ）前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された前記比を基準比と比較する工程、ならびに、
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断するための指標を提供する工程を含む、方法。
【請求項7】
心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するためのコンピュータ実装方法であって、（ａ）処理ユニットにおいて、前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された前記比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）前記処理ユニットによって、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法。
【請求項8】
ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するためのコンピュータ実装方法であって、（ａ）処理ユニットにおいて、前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された前記比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）前記処理ユニットによって、駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法。
【請求項9】
前記基準比がメモリから確立される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための方法であって、（ａ）前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料を受け取る工程、
（ｂ）前記血液試料、血清試料、または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比の値を主治医に提供する工程を含み、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを支援するための方法。
【請求項11】
ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための方法であって、（ａ）前記対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料を受け取る工程、
（ｂ）前記血液試料、血清試料、または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの前記量の和とＢＮＰ型ペプチドの前記量との比の値を主治医に提供する工程を含み、それにより、ＨＦｐＥＦの診断を支援するための方法。
【請求項12】
駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別のための指標を提供するため、またはＨＦｐＥＦを診断するための指標を提供するための、対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のバイオマーカーとしてのＩＧＦＢＰ７、ＢＮＰ型ペプチドおよびＣＲＰの使用であって、ＩＧＦＢＰ７およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比が計算される、使用。
【請求項13】
駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）を鑑別のための指標を提供するため、またはＨＦｐＥＦを診断するための指標を提供するための、対象由来の血液試料、血清試料または血漿試料中のＩＧＦＢＰ７に結合する少なくとも１種の検出剤、ＢＮＰ型ペプチドに結合する少なくとも１種の検出剤、およびＣＲＰに結合する少なくとも１種の検出剤の使用であって、ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比が計算される、使用。
【請求項14】
前記検出剤が、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１３に記載の使用。
【請求項15】
前記対象がヒトである、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法または請求項１２から１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項16】
前記ＢＮＰ型ペプチドがＢＮＰまたはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法または請求項１２から１４のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、心不全に罹患している対象において駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを識別するための方法に関し、前記方法は、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程と、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量の比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７とＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量の比を計算する工程と、計算された比を基準比と比較する工程と、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを識別する工程とを含む。本発明はさらに、ＨＦｐＥＦの診断のための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
心不全（ＨＦ）患者のケアのためのバイオマーカーの使用は、著しく拡大している。Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）およびそのアミノ末端切断均等物（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）を含むナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）は、現在、罹患患者の診断、予後および管理に広く使用されている。ＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに続いて、広範囲の新規バイオマーカーが試験されており、それぞれがＨＦの複雑な病態生理に罹患している患者の付加的な評価に対して潜在的な見込みがある。これに関して、心臓バイオマーカーの濃度とそれらが放出される基礎となる心血管病態生理学的プロセスとの間の機構的関連をよりよく理解するために、相当な努力がなされてきた。
【0003】
多くの先行技術参考文献は、例えば駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）および駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）に関連して、心不全の評価におけるマーカーの組合せの使用を記述している。例えば、Ｓａｎｄｅｒｓは、病態生理学的経路を反映するバイオマーカーがＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとの間で異なるかどうか、およびバイオマーカーの予後値がＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦで異なるかどうかを評価している（Ｅｕｒ Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ．２０１５年１０月；１７（１０）：１００６～１４．ｄｏｉ：１０．１００２／ｅｊｈｆ．４１４．Ｅｐｕｂ ２０１５年１０月１６日）。この研究は、ＨＦｐＥＦ患者が、より高い可溶性インターロイキン１受容体様１、高感度Ｃ反応性タンパク質、およびシスタチン－Ｃを示したことを記述している。対照的に、ＨＦｒＥＦ患者は、より高いＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、高感度トロポニンＴおよびヘモグロビンを示した。
【0004】
Ｓｉｎｎｉｎｇは、ＨＦｒＥＦおよびＨＦｐＥＦを有する患者におけるＣＲＰ、ＧＤＦ－１５、ｓＳＴ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの測定を記述している（Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１７年１月１５日；２２７：２７２～２７７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｊｃａｒｄ．２０１６．１１．１１０．Ｅｐｕｂ ２０１６年１１月９日）。Ｓｉｎｎｉｎｇによれば、（（ＣＲＰ＋ＧＤＦ－１５ｓ＋ｓＳＴ２）／ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）の指標は、ＨＦｐＥＦをＨＦｒＥＦから判別することができた。
【0005】
インスリン様成長因子軸は、ＨＦにおける転帰の予測因子であることが以前に見出されている（Ｗａｔａｎａｂｅら、Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｘｉｓ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｉ／ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－３）ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ，Ｅｕｒ Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ．２０１０；１２：１２１４～１２２２）。ＩＧＦＢＰ－７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）は、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞および上皮細胞によって分泌されることが公知の３０ｋＤａのモジュラー糖タンパク質である（Ｏｎｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ ２０２（１９９４）１４９０）。ＩＧＦＢＰ－７は、細胞老化、組織の加齢および肥満に関連すると記述されている。ＩＧＦＢＰ－７は、拡張機能不全およびＨＦｐＥＦ（高齢者および肥満の疾患）のマーカーとして提案されている。ＩＧＦＢＰ－７と拡張機能障害との間の機構的関連がマウスモデルにおいて実証された（米国特許出願公開第２０１８／０１２７７５２号明細書）。ＩＧＦＢＰ－７の循環レベルの上昇は、ＰＡＲＡＭＯＵＮＴ研究において拡張期の異常に関連して記述されている（Ｊａｎｕｚｚｉら、Ｃｉｒｃ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ．（２０１８）１１）。
【0006】
国際公開第２００８／０８９９９４号パンフレットは、心不全の評価におけるＩＧＦＢＰ７を開示している。ＩＧＦＢＰ７に加えて、ＮＴｐｒｏＢＮＰおよびＣＲＰを決定することができる。
【0007】
国際公開第２０１５／１４４７６７号パンフレットは、拡張機能不全におけるマーカーとしてＩＧＦＢＰ７を記述している。実施例２．２では、ＨＦｐＥＦ患者が解析された。この実施例では、ＩＧＦＢＰ７を、例えば、オステオポンチン、トロポニンＴおよびＮＴｐｒｏＢＮＰと組み合わせた。
【0008】
国際公開第２０１４／０８６８３３号パンフレットは、心不全の療法の選択におけるマーカーとしてＩＧＦＢＰ７を記述している。
【0009】
ＩＧＦＢＰ７はまた、ＨＦｐＥＦおよびＨＦｒＥＦに関連して解析されている。例えば、Ｈａｇｅは、ＩＧＦＢＰ－７がＨＦｒＥＦよりもＨＦｐＥＦにおいて低かったことを記述している（Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１８年６月１５日；１２１（１２）：１５５８～１５６６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｍｊｃａｒｄ．２０１８．０２．０４１．Ｅｐｕｂ ２０１８年３月１４日）。
【0010】
ＨＦｐＥＦの診断は、正常な駆出率のために困難である。それは主に、曖昧であり得る症候、および肺疾患などの他の原因の除外に基づいている。さらに、ＨＦｐＥＦのバイオマーカーベースの診断は面倒である。これまでのところ、ＨＦｐＥＦの診断を補助するための臨床ルーチンにおいて、バイオマーカーは確立されていない。ＮＴｐｒｏＢＮＰは、収縮機能不全対拡張期の異常により強い関連を示す。ＮＴｐｒｏＢＮＰは、ＨＦｐＥＦでは中程度にしか増加しない。ＩＧＦＢＰ－７は拡張機能学との機構的な関連を示しているが、ＩＧＦＢＰ－７が駆出率が保持された患者の同定を助けるという記述はない。
【0011】
Ｔｓｃｈｏｅｐｅによって概説されるように、ＨＦｐＥＦの現れ方および病態生理学は不均一であり、その管理は依然として困難である（Ｃｌｉｎ Ｒｅｓ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１８年１月；１０７（１）：１～１９．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００３９２－０１７－１１７０－６．Ｅｐｕｂ ２０１７年１０月１０日）。現在まで、ＨＦｐＥＦ患者の生存率を改善する治療法はない。したがって、処置は、体液貯留を制御し、危険因子および併存症を管理することによって、症候の軽減、生活の質、および心臓代償不全の減少を目的とする。例えば、現在、アンジオテンシン－アルドステロン阻害薬、利尿薬、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＢＢ）およびβ遮断薬がＨＦｐＥＦの処置に使用されている。しかしながら、これらの医薬が死亡率を低下させることは、大規模な無作為化対照試験ではまだ証明されていない。最近、ＨＦｐＥＦの処置のための新しい標的、例えば可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激薬、無機硝酸塩、アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害薬ＬＣＺ６９６、およびＳＧＬＴ２阻害薬が同定された。ＨＦｐＥＦに罹患している患者は、これらの新しい処置から特に利益を得る可能性がある。
【発明の概要】
【0012】
ＨＦｐＥＦを確実に評価し、ＨＦｒＥＦとＨＦｐＥＦとを鑑別するために使用することができるバイオマーカーベースの方法が非常に必要とされている。本発明の根底にある技術的な課題は、前述のニーズに対応するための手段および方法の提供としてとらえることができる。
【0013】
この技術的な課題は、以下の特許請求の範囲および本明細書において特徴付けられる実施形態によって、解決される。
【0014】
有利なことには、本発明の基礎となる研究では、ＢＮＰ型ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰなど）に対するＩＧＦＢＰ－７の比、およびＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ－７＋ＣＲＰの量の和の比が、各マーカー単独に対する心不全患者のＨＦｐＥＦの明確な同定を改善することが見出された。よって、前述の比は、心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）との間の信頼できる鑑別を可能にする。
【0015】
したがって、本発明は、心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための方法であって、
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法に関する。
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法に関する。
【0016】
本発明はさらに、ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための方法であって、
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法に関する。
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法に関する。
【0017】
本発明の方法のある実施形態では、ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰの量が工程（ａ）で決定され、ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比が工程（ｂ）で計算される。したがって、工程（ａ）および（ｂ）は、以下の通りである：
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰの量を決定する工程、
（ｂ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程。
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量およびＣＲＰの量を決定する工程、
（ｂ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程。
【0018】
本発明の方法は、好ましくは、ｅｘ ｖｉｖｏ、または、特にｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法である。さらに、方法は、上記で明示的に述べられたものに加えて、工程を含んでもよい。例えば、さらなる工程は、処置前のサンプリング、または方法により得られた結果の評価に関し得る。方法は、手動で実行されてもよく、自動化によって支援されてもよい。好ましくは、工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および／または（ｄ）は、全体的にまたは部分的に、例えば、工程（ａ）における測定のための好適なロボットおよび感覚機器、または工程（ｂ）におけるコンピュータ実装計算、または工程（ｃ）におけるコンピュータ実装比較、ならびに／または工程（ｃ）における比較に基づくコンピュータ実装鑑別／診断による自動化によって支援されてもよい。
【0019】
本明細書で使用される「診断する」という用語は、本明細書で言及される対象がＨＦｐＥＦに罹患しているかどうかを評価することを意味する。ある実施形態では、対象はＨＦｐＥＦに罹患していると診断される。代替の実施形態では、対象はＨＦｐＥＦに罹患していないと診断される。
【0020】
工程（ｄ）における診断または工程（ｄ）における鑑別は、比較工程（ｃ）の結果に基づく。好ましくは、工程（ｄ）における診断は、比較工程（ｃ）の結果に基づく。しかしながら、対象がＡＦに罹患しているかどうかの実際の診断は、診断の確認などのさらなる工程を含み得ることを理解されたい。したがって、本明細書で言及される診断は、対象がＨＦｐＥＦに罹患している可能性を評価することを可能にするものとする。上記から、ＨＦｐＥＦの診断は、ＨＦｐＥＦの診断の補助として理解されることになる。したがって、本発明の文脈における「診断する」という用語は、対象がＨＦｐＥＦに罹患しているかどうかを評価するために医師を支援することも包含する。
【0021】
本明細書で使用される「鑑別する」という用語は、罹患している対象のＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを区別することを意味する。本明細書で使用される用語は、好ましくは、心不全に罹患している対象において、ＨＦｐＥＦおよびＨＦｒＥＦを鑑別的に診断することを含む。好ましくは、工程（ｄ）における鑑別は、比較工程（ｃ）の結果に基づく。さらに、本発明の方法は、心房細動を有する対象が発作性心房細動または持続性心房細動に罹患しているかどうかを評価することを可能にする。実際の鑑別は、鑑別の確認などのさらなる工程を含み得る。したがって、本発明の文脈における「鑑別する」という用語は、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別するために医師を支援することも包含する。
【0022】
当業者によって理解されるように、本明細書に記載の評価、すなわち鑑別または診断は、通常、診断／等級付けされる患者の全て（すなわち１００％）に対して正しいことを意図するものではない。本発明のある実施形態では、患者の統計的に有意な一部分を同定することができる（例えばコホート研究におけるコホート）。一部分が統計的に有意であるかどうかは、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントのｔ検定、マン－ホイットニー検定などのさまざまな周知の統計評価ツールを使用して、当業者がさらに労することなく決定することができる。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８３に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５または０．０００１である。より好ましくは、集団の患者の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％が、本発明の方法によって適切に診断／鑑別され得る。
【0023】
本明細書で言及される「対象」は、好ましくは哺乳動物である。哺乳動物には、飼い馴らされた動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギおよびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、対象はヒト対象である。「対象」、「患者」および「個体」という用語は、本明細書で互換的に使用され得る。
【0024】
ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別するための方法のとおり、試験される患者は心不全に罹患しているものとする。「心不全」という用語は、当技術分野で周知である。本明細書で使用される場合、この用語は、好ましくは、当業者に公知の心不全の症候を伴う、心臓の悪化した機能に関する。したがって、患者は、好ましくは症候性心不全に罹患している。
【0025】
ＡＣＣ／ＡＨＡの分類は、米国心臓病学会および米国心臓協会によって策定された心不全の分類である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２００１；３８；２１０１～２１１３、２００５年に更新、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２００５；４６；ｅ１～ｅ８２を参照されたい）。４つのステージＡ、Ｂ、ＣおよびＤが定義されている。ステージＡおよびＢはＨＦ（心不全）ではないが、ＨＦを「真に」発症する前に患者を早期に同定するのに役立つと考えられている。ステージＡおよびＢの患者は、ＨＦの発症についての危険因子を持つ患者として最もよく定義される。例えば、左室（ＬＶ）機能障害、肥大、または幾何学的心腔歪みをまだ示さない冠動脈疾患、高血圧、または糖尿病を有する患者はステージＡと見なされ、無症候性であるがＬＶ肥大（ＬＶＨ、心室の壁が厚くなる現象）および／またはＬＶ機能障害を示す患者はステージＢとして指定される。次いで、ステージＣは、根底にある構造的心疾患に関連するＨＦの現在または過去の症候を有する患者（ＨＦを有する患者の大部分）を示し、ステージＤは真に難治性のＨＦを有する患者を指す。
【0026】
本発明の方法のある実施形態では、試験される患者は、好ましくは、ＡＣＣ／ＡＨＡの分類（上記の引用を参照）に従って、心不全ステージＣまたはＤに罹患しているものとする。これらのステージでは、患者は心不全の症候を示す。心不全の症候は当技術分野で周知であり、呼吸困難、疲労および体液貯留を含む。体液貯留は肺うっ血および末梢浮腫をもたらし得、身体検査上の典型的な兆候は浮腫およびラ音である。したがって、試験される患者は、好ましくは心不全の症候を示す。
【0027】
本発明に従って、心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するものとする。
【0028】
ＨＦｒＥＦに罹患している対象は、左室駆出率（ＬＶＥＦ）が低下した心不全を有する。「左室駆出率」という用語は、当技術分野で周知である。低下したＬＶＥＦを有する患者は、好ましくは５０％未満、より好ましくは４５％未満、最も好ましくは４０％未満のＬＶＥＦを有する。さらに、患者は３０％未満のＬＶＥＦを有することが想定される。
【0029】
ＨＦｐＥＦに罹患している対象は、ＬＶＥＦが保存された心不全を有する。したがって、ＨＦｐＥＦという用語は、好ましくはＬＶＥＦが５０％以上の心不全を指す。保存されたＬＶＥＦを有する患者はまた、５５％より大きいまたは６０％より大きいＬＶＥＦを有し得る。
【0030】
ＬＶＥＦをどのように評価するかは、当技術分野で周知である。ある実施形態では、ＬＶＥＦは、例えばＭｃＭｕｒｒａｙら（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１２）３３、１７８７～１８４７、例えば１８００頁以降を参照）によって記載されているように決定することができる。
【0031】
ＨＦｐＥＦを診断するための方法のある実施形態では、試験される患者は、心不全、特にＨＦｐＥＦに罹患している疑いがあるものとする。心不全に罹患していると疑われる対象は、好ましくは心不全の症候を示す。ＨＦｐＥＦを診断するための方法の代替実施形態では、試験される患者は心不全を罹患しているものとする。したがって、患者は心不全に罹患していることが知られているものとする。
【0032】
ＨＦｐＥＦを診断するための方法に従って試験される患者は、正常な駆出率、すなわち保存されたＬＶＥＦを有し得る。
【0033】
本発明に従って、試験される対象は、高齢および／または過体重であり得る。
【0034】
好ましくは、対象は５０歳を超えており、より好ましくは６０歳を超えており、または最も好ましくは７５歳を超えている。代替的または追加的に、対象は、２５ｋｇ／ｍ２を超える、特に２７．５ｋｇ／ｍ２を超えるボディーマス指数（ＢＭＩ）を有する。さらに、対象は、３０．０ｋｇ／ｍ２を超えるＢＭＩを有し得る。
【0035】
「試料」という用語は、体液の試料、分離された細胞の試料、または組織もしくは器官からの試料を指す。体液の試料は、周知の技法によって得ることができ、血液、血漿、血清、尿、リンパ液、痰、腹水、またはその他の体分泌物もしくはその誘導体の試料が含まれる。好ましい体液の試料は、尿、血液、血清または血漿である。組織または器官の試料を、例えば生検によって、任意の組織または器官から得てもよい。分離された細胞は、体液または組織もしくは器官から、遠心分離または細胞選別などの分離技法によって得てもよい。例えば、細胞、組織、または器官の試料を、バイオマーカーを発現または生成する細胞、組織、または器官から得てもよい。試料は、凍結されたもの、新鮮なもの、固定（例えば、ホルマリン固定）されたもの、遠心分離されたもの、および／または包埋（例えば、パラフィン包埋）されたものなどでよい。細胞試料は、試料中のマーカーの量を評価する前に、当然のことながら、種々の周知の収集後調製および保管技法（例えば、核酸および／またはタンパク質抽出、固定、保管、冷凍、限外濾過、濃縮、蒸発、遠心分離など）に供され得る。
【0036】
さらに、血液試料は乾燥した血液スポット試料であることが想定される。乾燥した血液スポット試料は、血液の液滴を吸収性濾紙に塗布することによって得ることができる。血液を紙に完全に飽和させ、数時間風乾させる。血液は、試験される対象から、例えば指からランセットによって採取されていてもよい。
【0037】
好ましい実施形態では、試料は、血液（すなわち、全血）、血清または血漿試料である。血清は、血液が血餅になった後に得られる全血の液体分画のことである。血清を得るために、遠心分離によって血餅を除去し、上清が収集される。血漿は、血液の無細胞流動部分である。血漿試料を得るために、全血は、抗凝固剤処理されたチューブ（例えば、クエン酸塩処理またはＥＤＴＡ処理されたチューブ）に収集される。遠心分離により細胞を試料から除去し、上清（すなわち、血漿試料）を得る。
【0038】
本発明に従って、インスリン様成長因子結合タンパク質７（＝ＩＧＦＢＰ－７）の量を決定するものとする。好ましくは、ＩＧＦＢＰ－７ポリペプチドの量が決定される。ＩＧＦＢＰ－７は、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、および上皮細胞により分泌されることが公知の３０ｋＤａのモジュラー糖タンパク質である（Ｏｎｏ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ ２０２（１９９４）１４９０～１４９６）。好ましくは、「ＩＧＦＢＰ－７」という用語は、ヒトＩＧＦＢＰ－７を指す。タンパク質の配列は、当技術分野で周知であり、例えば、Ｕｎｉ－Ｐｒｏｔ（Ｑ１６２７０、ＩＢＰ７＿ＨＵＭＡＮ）、またはＧｅｎＢａｎｋ（ＮＰ＿００１２４０７６４．１）を介してアクセス可能である。バイオマーカーＩＧＦＢＰ－７の詳細な定義は、例えば、国際公開第２００８／０８９９９４号パンフレットに提供されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＩＧＦＢＰ－７には２つのアイソフォーム、アイソフォーム１および２があり、これらは選択的スプライシングによって生成される。本発明のある実施形態では、両方のアイソフォーム（配列については、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリ（Ｑ１６２７０－１およびＱ１６２７０－２）を参照）の総量が決定される。
【0039】
ＩＧＦ結合タンパク質７（＝ＩＧＦＢＰ７）は、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、および上皮細胞により分泌されることが公知の３０ｋＤａのモジュラー糖タンパク質である（Ｏｎｏ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ ２０２（１９９４）１４９０～１４９６）。文献では、この分子はまた、ＦＳＴＬ２；ＩＢＰ ７；ＩＧＦ結合タンパク質関連タンパク質Ｉ；ＩＧＦＢＰ ７；ＩＧＦＢＰ ７ｖ；ＩＧＦＢＰ ｒＰｌ；ＩＧＦＢＰ７；ＩＧＦＢＰＲＰ１；インスリン様成長因子結合タンパク質７；インスリン様成長因子結合タンパク質７前駆体；ＭＡＣ２５；ＭＡＣ２５タンパク質；ＰＧＩ２刺激因子；およびＰＳＦまたはプロスタサイクリン刺激因子と命名されている。ノーザンブロット研究は、心臓、脳、胎盤、肝臓、骨格筋、および膵臓を含むヒト組織におけるこの遺伝子の広範な発現を明らかにした（Ｏｈ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（１９９６）３０３２２～３０３２５）。
【0040】
ＩＧＦＢＰ７は、最初に、それらの対応する腫瘍細胞と比較して、正常な軟髄膜および乳腺上皮細胞において示差的に発現される遺伝子として同定され、髄膜腫関連ｃＤＮＡ（ＭＡＣ２５）と名付けられた（Ｂｕｒｇｅｒ，Ａ．Ｍ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １６（１９９８）２４５９～２４６７）。発現したタンパク質は、腫瘍由来接着因子（後にアンジオモジュリンと改名された）（Ｓｐｒｅｎｇｅｒ，Ｃ．Ｃ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５９（１９９９）２３７０～２３７５）およびプロスタサイクリン刺激因子（Ａｋａｏｇｉ，Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９３（１９９６）８３８４～８３８９）として独立して精製された。これは、乳癌腫において下方制御される遺伝子、Ｔ１Ａｌ２としてさらに報告されている（ＳｔＣｒｏｉｘ，Ｂ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８９（２０００）１１９７～１２０２）。
【0041】
好ましくは、「ＩＧＦＢＰ７」という用語は、ヒトＩＧＦＢＰ７を指す。タンパク質の配列は、当技術分野で周知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＰ＿００１２４０７６４．１）を介してアクセス可能である。本明細書で使用されるＩＧＦＢＰ７は、好ましくは、特異的ＩＧＦＢＰ７ポリペプチドのバリアントも包含する。
【0042】
本明細書で使用される場合、「ＢＮＰ型ペプチド」という用語には、ｐｒｅ－ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＢＮＰが含まれる。ｐｒｅ－ｐｒｏペプチド（ｐｒｅ－ｐｒｏＢＮＰの場合には１３４アミノ酸）は、酵素的に切断されてｐｒｏペプチド（ｐｒｏＢＮＰの場合には１０８アミノ酸）を放出するための短いシグナルペプチドを含む。ｐｒｏペプチドはさらにＮ末端ｐｒｏペプチド（ＮＴ－ｐｒｏペプチド、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの場合には７６アミノ酸）および活性ホルモン（ＢＮＰの場合には３２アミノ酸）に切断される。好ましくは、本発明によるＢＮＰ型ペプチドは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＢＮＰおよびそれらのバリアントである。ＢＮＰは活性ホルモンであり、それぞれの不活性対応物ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰよりも短い半減期を有する。ＢＮＰは血中で代謝されるが、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは無傷の分子として血中を循環するため、腎臓から排出される。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのｉｎ－ｖｉｖｏ半減期は、２０分であるＢＮＰの半減期よりも１２０分長い（Ｓｍｉｔｈ ２０００，Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１６７：２３９～４６）。事前分析は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰでよりロバストであり、中央検査室への試料の容易な輸送を可能にする（Ｍｕｅｌｌｅｒ ２００４、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ ４２：９４２～４）。血液試料は、室温で数日間保存することができるか、または回収損失なく発送もしくは搬送することができる。対照的に、室温または４℃で４８時間のＢＮＰの保存は、少なくとも２０％の濃度損失をもたらす（Ｍｕｅｌｌｅｒ ｌｏｃ．ｃｉｔ．；Ｗｕ ２００４，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ５０：８６７～７３）。したがって、目的の経時変化または特性に応じて、ナトリウム利尿ペプチドの活性型または不活性型のいずれかの測定が有利である可能性がある。本発明による最も好ましいナトリウム利尿ペプチドは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたはそのバリアントである。上で簡単に論じたように、本発明により言及されるヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、好ましくは、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ分子のＮ末端部分に対応する長さ７６アミノ酸を含むポリペプチドである。ヒトＢＮＰとＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの構造は、先行技術、例えば、国際公開第０２／０８９６５７号パンフレット、国際公開第０２／０８３９１３号パンフレットまたはＢｏｎｏｗ ｌｏｃ．ｃｉｔ．において、既に詳細に記述されている。好ましくは、本明細書で使用されるヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、欧州特許第０６４８２２８号明細書Ｂ１に開示されているヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである。これらの先行技術文献は、本明細書に開示されているＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびそのバリアントの特定の配列に関して、参照により本明細書に組み込まれる。
【0043】
ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）は、肺炎球菌のＣ多糖に結合する血液タンパク質であることが７５年より前に発見された急性期タンパク質である。ＣＲＰは反応性炎症マーカーとして公知であり、原発病変部位に由来するケモカインまたはインターロイキンに応答してまたは反応して遠位器官（すなわち、肝臓）によって産生される。ＣＲＰは、非共有結合で連結され、約１１０～１４０ｋＤａの分子量を有する環状五量体として組み立てられる５つの単一サブユニットからなることが公知である。好ましくは、本明細書で使用されるＣＲＰは、ヒトＣＲＰに関する。ヒトＣＲＰの配列は周知であり、例えば、Ｗｏｏら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８５．２６０（２４）、１３３８４～１３３８８）によって開示されている。ＣＲＰのレベルは通常、正常個体では低いが、炎症、感染または損傷のために１００～２００倍以上に上昇し得る（Ｙｅｈ（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００４；１０９：１１－１１－１１－１４）。ＣＲＰは心血管リスクの予測の独立因子であることが公知である。特に、ＣＲＰは、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患および心臓突然死の予測因子として好適であることが示されている。さらに、ＣＲＰ量の上昇はまた、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する対象および冠動脈インターベンションを受けている対象において、再発性虚血および死亡を予測し得る。
【0044】
本明細書で使用される「量」という用語は、本明細書で言及されるバイオマーカーの絶対量、前記バイオマーカーの相対量または濃度、およびそれらに相関するまたはそれらから導き出され得る任意の値またはパラメータを包含する。このような値またはパラメータは、直接測定により前記ペプチドから得られる、特定の物理的または化学的特性全てに由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはＮＭＲスペクトルでの強度値を含む。さらに、本明細書の別の箇所で示される間接測定により得られる値またはパラメータ全て、例えば、特異的に結合したリガンドから得られるペプチドまたは強度シグナルに応答して生物学的読み出しシステムにより決定される応答量、が包含される。前述の量またはパラメータに相関する値は、全ての標準的な数学的演算によっても得ることができるということを理解されたい。
【0045】
本発明のいくつかの実施形態では、「量」という用語は、バイオマーカーの質量を試料体積で割ったものとして定義される「質量濃度」を指す。質量濃度のＳＩ単位はｋｇ／ｍ３（キログラム／立方メートル）であり、ｍｇ／ｍＬおよびｇ／Ｌと同じである。バイオマーカーの濃度については、「ｍｇ／ｍｌ」または「ｐｇ／ｍｌ」などの他の単位が一般的に使用される。したがって、バイオマーカーの量は、１ｍｌの試験試料中のバイオマーカーの質量であり得る。
【0046】
本明細書で言及されるバイオマーカーの量を「決定する」という用語は、バイオマーカーの定量化を指し、例えば、本明細書の他の箇所に記載されている適切な検出方法を用いて、試料中のバイオマーカーのレベルを決定することを指す。
【0047】
ある実施形態では、バイオマーカーの量は、試料をバイオマーカーに特異的に結合する薬剤と接触させ、それにより薬剤と前記バイオマーカーとの間に複合体を形成させ、形成された複合体の量を検出し、それにより前記バイオマーカーの量を決定することにより、決定される。
【0048】
本明細書で言及されているバイオマーカーは、当技術分野で一般的に公知な方法を使用して検出することができる。検出方法は、一般に、試料中のバイオマーカーの量を定量化する方法（定量的方法）を包含する。以下の方法のどれがバイオマーカーの定性的および／または定量的検出に好適であるかは、一般的に当業者に公知である。試料は、例えば、ウエスタン法、ならびに市販されているＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、蛍光および発光ベースのイムノアッセイのようなイムノアッセイを使用して、タンパク質について簡便にアッセイすることができる。バイオマーカーを検出するためのさらに好適な方法は、ペプチドまたはポリペプチドに特異的な物理的または化学的特性、例えば、その正確な分子量またはＮＭＲスペクトルなどを決定することを含む。前記方法は、例えば、バイオセンサー、イムノアッセイと連結した光学デバイス、バイオチップ、分析デバイス、例えば質量分析計、ＮＭＲ分析器、またはクロマトグラフィーデバイスを含む。さらに、方法には、マイクロプレートＥＬＩＳＡベースの方法、完全自動化またはロボットイムノアッセイ（例えば、Ｅｌｅｃｓｙｓ商標アナライザーで利用可能）、ＣＢＡ（酵素的コバルト結合アッセイ、例えばＲｏｃｈｅ－Ｈｉｔａｃｈｉ商標アナライザーで利用可能）、およびラテックス凝集アッセイ（例えば、Ｒｏｃｈｅ－Ｈｉｔａｃｈｉ商標アナライザーで利用可能）が含まれる。
【0049】
本明細書で言及されるバイオマーカータンパク質の検出については、そのようなアッセイ形式を使用する幅広いイムノアッセイ技法が利用可能であり、例えば、米国特許第４，０１６，０４３号明細書、同第４，４２４，２７９号明細書、および同第４，０１８，６５３号明細書を参照されたい。これらは、従来の競合結合アッセイだけでなく、非競合タイプの１部位および２部位または「サンドイッチ」アッセイの両方を含む。これらのアッセイはまた、標識された抗体の標的バイオマーカーへの直接結合も含む。サンドイッチアッセイは、最も有用なイムノアッセイに含まれる。
【0050】
電気化学発光標識を用いる方法は、周知である。そのような方法は、特殊な金属錯体の能力を使用して、酸化によって、励起状態となり、そこから基底状態へ減衰して、電気化学発光の放出を得る。総説については、Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｍ．Ｍ．、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０４（２００４）３００３～３０３６を参照されたい。
【0051】
ある実施形態では、バイオマーカーの量を決定するために使用される検出抗体（またはその抗原結合断片）は、ルテニル化（ｒｕｔｈｅｎｙｌａｔｅｄ）またはイリジニル化（ｉｒｉｄｉｎｙｌａｔｅｄ）されている。したがって、抗体（またはその抗原結合断片）は、ルテニウム標識を含むものとする。ある実施形態では、前記ルテニウム標識は、ビピリジン－ルテニウム（ＩＩ）錯体である。あるいは、抗体（またはその抗原結合断片）は、イリジウム標識を含むものとする。ある実施形態では、前記イリジウム標識は、国際公開第２０１２／１０７４１９号パンフレットに開示されている錯体である。
【0052】
ポリペプチド（例えば、ＩＧＦＢＰ－７）の量を決定することは、好ましくは、（ａ）ポリペプチドを前記ポリペプチドに特異的に結合する薬剤と接触させる工程と、（ｂ）（任意に）結合していない薬剤を除去する工程と、（ｃ）結合した結合剤、すなわち工程（ａ）で形成された薬剤の複合体の量を測定する工程とを含み得る。好ましい実施形態によれば、前記接触させる工程、任意に除去する工程および決定する工程は、分析器ユニットにより実施され得る。一部の実施形態によれば、前記工程は、前記システムの単一の分析器ユニット、または互いに作動可能に連絡した２つ以上の分析器ユニットにより実施され得る。例えば、特定の実施形態によれば、本明細書で開示されている前記システムは、前記接触させる工程、および任意に除去する工程を実施するための第１の分析器ユニット、ならびに輸送ユニット（例えば、ロボットアーム）により上記第１の分析器ユニットに作動可能に接続された、前記決定する工程を実施する第２の分析器ユニットを含み得る。
【0053】
バイオマーカーに特異的に結合する薬剤（本明細書では「結合剤」とも称される）は、結合した薬剤の検出および測定を可能にする標識に、共有結合的または非共有結合的に連結されていてもよい。標識化は、直接または間接の方法により行われてもよい。直接標識化は、標識を結合剤に直接的に（共有結合的または非共有結合的に）連結させることを含む。間接標識化は、第２の結合剤を第１の結合剤に（共有結合的または非共有結合的に）結合させることを含む。第２の結合剤は、第１の結合剤に特異的に結合するものとする。前記第２の結合剤は、好適な標識と連結し得る、および／または第２の結合剤に結合する第３の結合剤の標的（レセプター）であり得る。好適な第２の、およびより高次の結合剤には、抗体、二次抗体、およびストレプトアビジン－ビオチン系（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）などの周知の結合系が含まれ得る。結合剤または基質は、当技術分野で公知の１種以上のタグで「タグ付け」されていてもよい。そうすることで、このようなタグは、より高次の結合剤の標的となり得る。好適なタグには、ビオチン、ジゴキシゲニン（ｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ）、Ｈｉｓ－タグ、グルタチオン（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎ）－Ｓ－トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃ－タグ、インフルエンザＡウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質などが含まれる。ペプチドまたはポリペプチドの場合、タグは、好ましくはＮ末端および／またはＣ末端にある。好適な標識は、適切な検出方法により検出可能な任意の標識である。典型的な標識には、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム錯体、イリジウム錯体、酵素的に活性な標識、放射性標識、磁気標識（「例えば磁気ビーズ」、常磁性および超常磁性標識を含む）、および蛍光標識が含まれる。酵素的に活性な標識には、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびそれらの誘導体が含まれる。検出のための好適な基質には、ジ－アミノ－ベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’－５，５’－テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ－ＢＣＩＰ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから既製のストック溶液として入手可能な４－ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリル－ホスフェート）、ＣＤＰ－Ｓｔａｒ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏ－ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＥＣＦ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれる。好適な酵素－基質の組合せにより、着色された反応生成物、蛍光または化学発光が生じてもよく、これは、当技術分野で公知の方法に従って（例えば感光膜または好適なカメラシステムを使用して）判定することができる。酵素反応を測定することについては、上記の基準が同様に適用される。典型的な蛍光標識には、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰおよびその誘導体）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、テキサスレッド、フルオレセイン、およびＡｌｅｘａ色素（例えばＡｌｅｘａ５６８）が含まれる。さらなる蛍光標識は、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ｏｒｅｇｏｎ）から入手可能である。また、蛍光標識としての量子ドットの使用が、企図される。放射性標識は、例えば感光膜またはホスホイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｒ ｉｍａｇｅｒ）の公知かつ適切な任意の方法により検出され得る。
【0054】
ポリペプチドの量はまた、好ましくは、以下の通り決定することができる：（ａ）本明細書の他の箇所に記載のポリペプチド用結合剤を含む固体支持体を、ペプチドまたはポリペプチドを含む試料と接触させること、および（ｂ）支持体に結合したペプチドまたはポリペプチドの量を決定すること。支持体を製造するための物質は、当技術分野で周知であり、とりわけ、市販のカラム物質、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、膜、シート、デュラサイト（ｄｕｒａｃｙｔｅ）、反応トレイのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどが含まれる。
【0055】
さらなる別の態様では、試料は、形成された複合体の量の測定前に、結合剤と１種のマーカーとの間で形成された複合体から除去される。したがって、ある態様では、結合剤は固体支持体に固定されてもよい。さらなる別の態様では、試料は、洗浄溶液を適用することによって、固体支持体上で形成した複合体から除去され得る。
【0056】
「サンドイッチアッセイ」は、最も有用かつ一般的に使用されるアッセイに含まれ、サンドイッチアッセイ技法のいくつかのバリエーションを包含する。簡潔に言うと、典型的なアッセイでは、非標識の（捕捉）結合剤が固定化されているか、または固体基板上に固定化され得、試験される試料を、捕捉結合剤と接触させる。結合剤－バイオマーカー複合体を形成させるのに十分な期間である、好適なインキュベート期間の後、次いで検出可能なシグナルを生成できるレポーター分子で標識された第２の（検出）結合剤が添加され、結合剤－バイオマーカー－標識された結合剤という別の複合体の形成に十分な時間インキュベートする。任意に、未反応材料を洗い流してもよい。バイオマーカーの存在は、検出結合剤に結合したレポーター分子により生成されるシグナルの観察により判定される。結果は、可視シグナルの単純な観察による定性的なものでもよく、または既知量のバイオマーカーを含む対照試料との比較による定量的なものであってもよい。
【0057】
典型的なサンドイッチアッセイのインキュベーション工程は、必要に応じて適切であるように変更することができる。このような変更には、例えば、２種以上の結合剤およびバイオマーカーが一緒にインキュベートされる同時インキュベーションが含まれる。例えば、分析される試料および標識された結合剤の両方が同時に、固定化された捕捉結合剤に添加される。また、分析される試料および標識された結合剤を最初にインキュベートし、その後、固相に結合した抗体、または固相に結合することができる抗体を添加することもできる。
【0058】
特異的な結合剤とバイオマーカーとの間で形成される複合体は、試料中に存在するバイオマーカーの量に比例するものとする。適用される結合剤の特異度および／または感度は、特異的に結合され得る、試料中に含まれる少なくとも１種のマーカーの割合の程度を規定することと理解されるであろう。測定を実行する方法のさらなる詳細については、本明細書の別の箇所にも見出される。形成された複合体の量は、試料中に実際に存在する量を反映するバイオマーカーの量に変換されるものとする。
【0059】
「結合剤」、「特異的な結合剤」、「検体に特異的な結合剤」、「検出剤」および「バイオマーカーに特異的に結合する薬剤」という用語は、本明細書中で互換的に使用される。好ましくは、それは、対応するバイオマーカーに特異的に結合する結合部分を含む薬剤に関する。「結合剤」または「薬剤」の例は、核酸プローブ、核酸プライマー、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、アプタマー、抗体、抗体断片、ペプチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）または化合物である。好ましい薬剤は、決定されるバイオマーカーに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片である。本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、および所望の抗原結合活性を示す限り抗体断片（すなわち、それらの抗原結合断片）を含むが、これらに限定されず、さまざまな抗体構造を包含する。好ましくは、抗体はポリクローナル抗体である。より好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。
【0060】
「特異的結合」または「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄ）」という用語は、結合する対の分子が、他の分子に有意に結合しない条件下で、互いに結合することを示す結合反応を指す。「特異的結合」または「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」という用語は、バイオマーカーとしてのタンパク質またはペプチドを指す場合、結合剤が少なくとも１０－７Ｍの親和性で対応するバイオマーカーに結合する結合反応を指す。「特異的結合」または「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」という用語は、好ましくは、その標的分子に対して少なくとも１０－８Ｍ、またはさらにより好ましくは少なくとも１０－９Ｍの親和性を指す。「特異的な」または「特異的に」という用語は、試料中に存在する他の分子が、標的分子に特異的な結合剤に、有意に結合しないことを示すために使用される。
【0061】
本発明の工程（ｂ）では、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比。あるいは、（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比。
【0062】
本明細書で言及される「比を計算する」という用語は、ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量またはｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和と、前記量を割ることによるＢＮＰ型ペプチドの量との比を、またはＢＮＰ型ペプチドの量に対してｉ）またはｉｉ）の量を関係させる任意の他の同等の数学的計算を行うことによって計算することに関する。好ましくは、比を計算（したがって、ＢＮＰ型ペプチドの量に対するｉ）またはｉｉ）の量の比を計算）するために、ｉ）またはｉｉ）の量をＢＮＰ型ペプチドの量で割る。
【0063】
いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和は、ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量を合計することによって、例えば、ＩＧＦＢＰ７の質量濃度およびＣＲＰの質量濃度を合計することによって決定される。典型的には、ＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ７の量に同じ単位、例えば「ｎｇ／ｍＬ」が使用される。次いで、ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の決定された和を、ＢＮＰ型ペプチドの量で割る。ＢＮＰ型ペプチドについては、ＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ７の量に対するものと同じ単位を使用してもよい。しかしながら、ｐｇ／ｍｌの量が計算に使用されることも想定される。いくつかの実施形態では、ｎｇ／ｍｌの量がＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ７に対して使用され、一方でｐｇ／ｍｌの量がＢＮＰ型ペプチドに対して使用される。
【0064】
比を計算するために、ｉ）またはｉｉ）の量をＢＮＰ型ペプチドの量で割る場合、以下の比が計算される：
１．ＩＧＦＢＰ７／ＢＮＰ型ペプチド（すなわち、ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量の比）、または
２．（ＩＧＦＢＰ７＋ＣＲＰ）／ＢＮＰ型ペプチド（すなわち、ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和の比）
１．ＩＧＦＢＰ７／ＢＮＰ型ペプチド（すなわち、ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量の比）、または
２．（ＩＧＦＢＰ７＋ＣＲＰ）／ＢＮＰ型ペプチド（すなわち、ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和の比）
【0065】
上記の比（１．または２．）が決定される場合、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別する方法における診断アルゴリズムとして以下を適用する。
【0066】
好ましくは、基準比を上回る比は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を示し、一方で基準比を下回る比は、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）を示す。
【0067】
上記の比（１．または２．）が決定される場合、ＨＦｐＥＦを診断するための方法における診断アルゴリズムとして以下を適用する。
【0068】
好ましくは、基準比を上回る比は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）に罹患している対象を示し、一方で基準比を下回る比は、ＨＦｐＥＦに罹患していない対象、すなわちＨＦを有するか、またはＨＦを有する疑いがあり、かつＨＦｐＥＦに罹患していない対象を示す。
【0069】
また好ましくは、ＢＮＰ型ペプチドの量は、比を計算（したがって、ｉ）またはｉｉ）の量に対するＢＮＰ型ペプチドの量の比を計算）するために、ｉ）またはｉｉ）の量で割られる。
【0070】
したがって、以下の比が計算される：
３．ＢＮＰ型ペプチド／ＩＧＦＢＰ７、または
４．ＢＮＰ型ペプチド／（ＩＧＦＢＰ７＋ＣＲＰ）
３．ＢＮＰ型ペプチド／ＩＧＦＢＰ７、または
４．ＢＮＰ型ペプチド／（ＩＧＦＢＰ７＋ＣＲＰ）
【0071】
上記の比（３．または４．）が決定される場合、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別する方法における診断アルゴリズムとして以下を適用する。
【0072】
好ましくは、基準比を下回る比は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を示し、一方で基準比を上回る比は、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）を示す。
【0073】
上記の比（３．または４．）が決定される場合、ＨＦｐＥＦを診断するための方法における診断アルゴリズムとして以下を適用する。
【0074】
好ましくは、基準比を下回る比は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）に罹患している対象を示し、一方で基準比を上回る比は、ＨＦｐＥＦに罹患していない対象、すなわちＨＦを有するか、またはＨＦを有する疑いがあり、かつＨＦｐＥＦに罹患していない対象を示す。
【0075】
本発明の方法の工程（ｃ）では、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較するものとする。
【0076】
本明細書で使用される「比較する」という用語は、好ましくは、本発明の方法に従って計算された比を基準比、すなわち好適な基準比と比較することを指す。本明細書で使用される場合、比較することとは、通常、値の比較を指すことを理解されたい。比較は、手作業またはコンピュータの支援で実施され得る。したがって、比較を計算デバイスにより実施してもよい。計算された比の値と基準比は、例えば、互いに比較され得、前記比較は、比較のためのアルゴリズムを実行するコンピュータプログラムにより自動的に実施され得る。前記評価を実施するコンピュータプログラムは、好適なアウトプット様式で、所望の評価を提供する。コンピュータに支援された比較において、計算された比の値が、コンピュータプログラムにより、データベースに保存されている好適な基準比に対応する値に対して比較されてもよい。コンピュータプログラムは、比較の結果をさらに評価してもよく、すなわち、好適なアウトプット様式で所望の評価を自動的に提供してもよい。比較の結果は、好ましくは、ＨＦｐＥＦの診断またはＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとの鑑別の補助として役立ち得る。
【0077】
ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別するための方法では、計算した比と基準比との比較に基づいて、心不全を有する対象において、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することができる。したがって、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを識別するための方法における基準比は、比較された値の差または類似性のいずれかがＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にするように選択されるべきである。ＨＦｐＥＦとＨｆｒＥＦとの間の鑑別に従って、「基準比」という用語は、したがってＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとの間の鑑別を可能にする値／比を指す。したがって、基準比は、これらのグループを互いに分離する閾値とすることができる。
【0078】
ＨＦｐＥＦを診断するための方法では、計算された比と基準比との比較に基づいて、ＨＦｐＥＦに罹患している対象と、ＨＦｐＥＦに罹患していない対象とを鑑別することができる。したがって、これにおける基準比は、比較された値の差または類似性のいずれかがＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にするように選択されるべきである。ＨＦｐＥＦの診断に従って、「基準比」という用語は、したがってＨＦｐＥＦに罹患している対象とＨＦｐＥＦに罹患していない対象とを鑑別することを可能にする値／比を指す。
【0079】
個々の対象に適用可能な基準比は、年齢、性別、または亜集団などの様々な生理学的パラメータ、ならびに本明細書で言及されるポリペプチドまたはペプチドの決定に使用される手段に応じて変化し得る。好適な基準比は、試験試料と一緒に、すなわち同時に、または続いて分析される基準試料から決定されてもよい。
【0080】
基準比は、原則として、統計学の標準的方法を適用することにより、平均（ａｖｅｒａｇｅ）または平均（ｍｅａｎ）比に基づいて、対象のコホートに対し計算され得る。特に、イベントかどうかの診断を目的とする方法などの試験の正確性は、受信者動作特性（ＲＯＣ）により最もよく記述される（特に、Ｚｗｅｉｇ １９９３、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３９：５６１～５７７を参照されたい）。ＲＯＣグラフは、観察されたデータの全範囲にわたって決定閾値を継続的に変動させることにより生じる、全ての感度対特異度のペアのプロットである。診断方法の臨床成績は、その正確性、すなわち対象をある特定の鑑別または診断に正確に割り当てる能力に依存する。ＲＯＣプロットは、識別を行うのに好適な閾値の全範囲について、感度対１－特異度をプロットすることにより、２つの分布間の重複を示す。ｙ軸は、感度または真陽性率であり、真陽性試験結果の数と偽陰性試験結果の数の積に対する、真陽性試験結果の数の比として定義される。これは、疾患または症状の存在下での陽性とも称されている。それは罹患しているサブグループからのみ計算される。ｘ軸は、偽陽性率または１－特異度であり、真陰性結果の数および偽陽性結果の数の積に対する、偽陽性結果の数の比として定義される。これは特異度の指標であり、罹患していないサブグループからのみ計算される。真陽性率および偽陽性率は、２つの異なるサブグループからの試験結果を使用することによって完全に別々に計算されるため、ＲＯＣプロットはコホートにおけるイベントの有病率から独立している。ＲＯＣプロット上の各点は、特定の決定閾値に対応する感度／－特異度のペアを表す。完全な判別の（結果の２つの分布に重複がない）試験は、左上隅を通るＲＯＣプロットを有し、真陽性率は１．０、または１００％（完全な感度）、および偽陽性率は０（完全な特異度）となる。判別のない（２つのグループに対する結果の分布が同一である）試験における理論上のプロットは、左下隅から右上隅への４５の対角線となる。ほとんどのプロットは、これらの２つの極値の間にある。ＲＯＣプロットが４５対角を完全に下回る場合、これは、「陽性」の基準を「より高い」から「より低い」に入れ替え、またはその逆にすることで、容易に是正される。定性的には、プロットが左上隅に近いほど、試験全体の正確性が高くなる。所望の信頼区間に応じて、ＲＯＣ曲線から閾値を導き出すことができ、感度および特異度の適切なバランスで、本明細書で言及された鑑別または診断が可能になる。したがって、本発明の方法に使用される基準、すなわち、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを判別することを可能にする、またはＨＦｐＥＦを診断することを可能にする閾値は、好ましくは、上記のように前記コホートに対するＲＯＣを確立し、そこから閾値の比を導出することによって作成され得る。診断方法における所望の感度および特異度に応じて、ＲＯＣプロットは、好適な閾値の導出を可能にする。
【0081】
本明細書で提供される上記の定義および説明を、本発明の以下の方法に準用する。
【0082】
本発明はさらに、心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法に関する。
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法に関する。
【0083】
本発明はさらに、ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法に関する。
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法に関する。
【0084】
上述の方法は、コンピュータ実装方法である。好ましくは、コンピュータ実装方法の全ての工程は、コンピュータ（またはコンピュータネットワーク）の１つ以上の処理ユニットによって実行される。したがって、工程（ｄ）における評価（すなわち、診断または鑑別）は、処理ユニットによって実行される。好ましくは、前記評価は、工程（ｃ）の結果に基づく。
【0085】
工程（ａ）で受信した値は、本明細書の他の箇所に記載のように、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ－７、ＢＮＰ型ペプチド（および任意にＣＲＰ）の量の決定から導出されるものとする。好ましくは、値は、マーカーの量の値である。値は通常、値を処理ユニットにアップロードまたは送信することによって、処理ユニットにより受信される。あるいは、ユーザーインターフェースを介して値を入力することにより、処理ユニットにより値が受信される。
【0086】
前述の方法のある実施形態では、工程（ｃ）に示す基準比、すなわち基準比の値は、メモリから確立される。
【0087】
本発明の前述のコンピュータ実装方法のある実施形態では、工程（ｄ）で行われる評価の結果は、結果を提示するように構成されたディスプレイを介して提供される。
【0088】
本発明の前述のコンピュータ実装方法のある実施形態では、方法は、工程（ｄ）で行われた評価に関する情報を個体の電子医療記録に転送するさらなる工程を含み得る。
【0089】
本発明はさらに、プログラムがコンピュータまたはコンピュータネットワーク上で実行される場合、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別するための、またはＨＦｐＥＦを診断するための、本発明によるコンピュータ実装方法の工程を実行するためのコンピュータで実行可能な命令を含むコンピュータプログラムに関する。典型的には、コンピュータプログラムは、具体的には、本明細書に開示の方法の工程を実行するためのコンピュータで実行可能な命令を含み得る。具体的には、コンピュータプログラムは、コンピュータで可読なデータ媒体に保存され得る。
【0090】
本発明はさらに、心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための方法であって、
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にする工程を含む、方法に関する。
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にする工程を含む、方法に関する。
【0091】
本発明はさらに、ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための方法であって、
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦの診断を可能にする工程を含む、方法に関する。
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦの診断を可能にする工程を含む、方法に関する。
【0092】
前述の方法に従う医師は、診断または鑑別のためのバイオマーカーＩＧＦＢＰ－７、ＢＮＰ型ペプチド、および任意にＣＲＰの決定を要求した医師であるものとする、すなわち、医師は主治医である。前記医師は、試験される対象を処置するものとする。前述の方法は、鑑別および診断のそれぞれにおいて主治医を支援するものとする。
【0093】
試料を受け取る工程ａ）は、対象からの試料の抽出を包含しない。むしろ、対象から（例えば、主治医の監督下で）得られた試料が提供される。例えば、試料は、前記試料中のバイオマーカーの量の決定を実施する検査室に試料を送達することによって提供され得る。
【0094】
量が決定された後、決定された量の値に関する情報または計算された比の情報が医師に提供される。さらに、基準比の値に関する情報が提供され得る。提供された情報は、対象がＨＦｒＥＦまたはＨＦｐＥＦに罹患しているかどうかの指示をさらに含み得る。
【0095】
ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を、前述の方法の（工程（ｃ）に示すように）主治医に提供する代わりに、本明細書に示す比の値を主治医に提供することができ、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別（またはＨＦｐＥＦの診断）が可能になる。
【0096】
ＨＦｐＥＦの診断のための本発明の方法は、診断の結果に基づいて、対象を処置する工程をさらに含み得る。好ましくは、本発明の方法によってＨＦｐＥＦに罹患していると診断された対象が処置される。したがって、方法は、ＨＦｐＥＦに罹患している対象を選択する工程を含み得る。前記選択は、比較工程の結果に基づくものとする。
【0097】
処置は、ＨＦｐＥＦを処置することを可能にする任意の処置を包含し得る。この用語は、生活様式の変化、食事療法、身体への介入、ならびに適切な医薬の投与を包含する。
【0098】
いくつかの実施形態では、処置は、ＨＦｐＥＦを処置することを可能にする少なくとも１つの医薬の投与を包含する。いくつかの実施形態では、処置は、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥ阻害薬）、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（しばしばアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬とも称される）、βアドレナリン遮断薬（本明細書ではβ遮断薬とも称される）、アルドステロン拮抗薬および利尿薬からなる群から選択される少なくとも１種の医薬の投与を含む。
【0099】
ある実施形態では、ＡＣＥ阻害薬、例えばベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリルまたはトランドラプリルが投与される。
【0100】
ある実施形態では、β遮断薬、例えばセブトロール（ｃｅｂｕｔｏｌｏｌ）、アルプレノロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、ブプラノロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロパノロール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）、ソタロール、タニロロール（ｔａｎｉｌｏｌｏｌ）またはチモロールが投与される。
【0101】
ある実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、例えばロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、カンデサルタン、テルミサルタンまたはエプロサルタンが投与される。
【0102】
ある実施形態では、利尿薬、例えばチアジドおよびチアジド様利尿薬またはＫ－保持性利尿薬が投与される。
【0103】
ある実施形態では、アルドステロン拮抗薬、例えばエプレロン、スピロノラクトン、カンレノン、メキシレノンまたはプロレノンが投与される。
【0104】
ＨＦｐＥＦの処置のためのさらなる療法は、Ｔｓｃｈｏｅｐｅら（Ｃｌｉｎ Ｒｅｓ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１８年１月；１０７（１）：１～１９．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００３９２－０１７－１１７０－６．Ｅｐｕｂ ２０１７年１０月１０日）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。好ましくは、処置は、ＳＧＬＴ２（ナトリウム－グルコース共輸送体－２）阻害薬、可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激薬、無機硝酸塩およびアンジオテンシン受容体－ネプリライシン阻害薬（ＡＲＮｉ）からなる群から選択される少なくとも１種の医薬の投与を含む。
【0105】
ある実施形態では、医薬はＳＧＬＴ２（ナトリウム－グルコース共輸送体－２）阻害薬である。別の実施形態では、医薬は可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激薬である。別の実施形態では、医薬は無機硝酸塩である。別の実施形態では、医薬は、アンジオテンシン受容体－ネプリライシン阻害薬（ＡＲＮｉ）、すなわち、ネプリライシン阻害薬（例えばサクビトリル）およびアンジオテンシン受容体遮断薬（例えばバルサルタン）を含む併用薬である。
【0106】
さらに、本発明は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するため、またはＨＦｐＥＦを診断するために、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７、ＢＮＰ型ペプチドおよび任意にＣＲＰの使用に関する。
【0107】
ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別するための本発明の方法は、鑑別の結果に基づいて対象を処置する工程をさらに含み得る。典型的には、ＨＦｐＥＦに罹患していると診断された対象およびＨＦｒＥＦに罹患していると診断された対象の両方が処置される。ＨＦｐＥＦに罹患していると診断された対象は、典型的には、ＨＦｐＥＦを診断する方法に関連して上記のように処置される。いくつかの実施形態では、この対象の処置は、ＳＧＬＴ２（ナトリウム－グルコース共輸送体－２）阻害薬、可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激薬、無機硝酸塩およびアンジオテンシン受容体－ネプリライシン阻害薬（ＡＲＮｉ）からなる群から選択される少なくとも１種の医薬の投与を含む。
【0108】
ＨＦｒＥＦに罹患していると同定された対象は、好ましくはガイドラインに従って処置される。いくつかの実施形態では、ＨＦｒＥＦの処置は、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥ阻害薬）、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（しばしばアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬とも称される）、βアドレナリン遮断薬（本明細書ではβ遮断薬とも称される）、アルドステロン拮抗薬および利尿薬からなる群から選択される少なくとも１種の医薬の投与を含む。
【0109】
最後に、本発明は、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するため、またはＨＦｐＥＦを診断するための、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７に結合する少なくとも１種の検出剤、ＢＮＰ型ペプチドに結合する少なくとも１種の検出剤、および任意にＣＲＰに結合する少なくとも１種の検出剤の使用に関する。
【0110】
ある実施形態では、検出剤は、抗体またはその抗原結合断片である。
【発明を実施するための形態】
【0111】
本発明の実施形態
本発明の以下の実施形態は、本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせて使用され得る。本明細書での上記の定義および説明を、以下に準用する。
本発明の以下の実施形態は、本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせて使用され得る。本明細書での上記の定義および説明を、以下に準用する。
【0112】
１．心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための方法であって、
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法。
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法。
【0113】
２．対象がヒトである、実施形態１に記載の方法。
【0114】
３．試料が、血液試料、血清試料または血漿試料である、実施形態１または２に記載の方法。
【0115】
４．ＢＮＰ型ペプチドが、ＢＮＰまたはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
【0116】
５．ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量の比が計算される、実施形態１から４のいずれか１つに記載の方法。
【0117】
６．ＢＮＰ型ペプチドの量に対するＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和の比が計算される、実施形態１から４のいずれか１つに記載の方法。
【0118】
７．基準比を上回る比が、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を示し、かつ／または基準比を下回る比が、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）を示す、実施形態５または６に記載の方法。
【0119】
８．ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための方法であって、
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法。
（ａ）対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、
（ｂ）（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法。
【0120】
９．心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法。
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別する工程を含む、方法。
【0121】
１０．ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法。
（ａ）処理ユニットにおいて、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量の値、ＢＮＰ型ペプチドの量の値、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記処理ユニットによって、（ｉ）ＩＧＦＢＰ７の量とＢＮＰペプチドの量との比、または（ｉｉ）ＩＧＦＢＰ７の量およびＣＲＰの量の和とＢＮＰ型ペプチドの量との比を計算する工程、
（ｃ）前記処理ユニットによって、工程（ｂ）で計算された比を基準比と比較する工程、ならびに
（ｄ）駆出率が保持された心不全を診断する工程を含む、方法。
【0122】
１１．基準比がメモリから確立される、実施形態９および１０に記載の方法。
【0123】
１２．心不全に罹患している対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するための方法であって、
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にする工程を含む、方法。
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとを鑑別することを可能にする工程を含む、方法。
【0124】
１３．ＨＦｐＥＦに罹患している疑いのある対象において、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を診断するための方法であって、
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦの診断を可能にする工程を含む、方法。
（ａ）対象から試料を受け取る工程、
（ｂ）試料中のＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）の量、ＢＮＰ型ペプチドの量、および任意にＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の量を決定する工程、ならびに
（ｃ）ＩＧＦＢＰ７の量、ＢＮＰ型ペプチドの量および任意にＣＲＰの量の値を主治医に提供し、それにより、ＨＦｐＥＦの診断を可能にする工程を含む、方法。
【0125】
１４．駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するため、またはＨＦｐＥＦを診断するため、対象由来の試料中のバイオマーカーとしてのＩＧＦＢＰ７、ＢＮＰ型ペプチドおよび任意にＣＲＰの使用。
【0126】
１５．駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）とを鑑別するため、またはＨＦｐＥＦを診断するため、対象由来の試料中のＩＧＦＢＰ７に結合する少なくとも１種の検出剤、ＢＮＰ型ペプチドに結合する少なくとも１種の検出剤、および任意にＣＲＰに結合する少なくとも１種の検出剤の使用。
【図面の簡単な説明】
【0127】
図面は以下を示す：図１は、ＨＦｐＥＦの診断のためのバイオマーカー測定を示す。図２は、ＨＦｐＥＦの診断のためのＧＤＦ１５を用いたバイオマーカー比。図３は、ＨＦｐＥＦの診断のためのＩＧＦＢＰ－７を用いたバイオマーカー比。
【図1a】ＨＦｐＥＦの診断のため、ＨＦｒＥＦ患者の４９９個の試料およびＨＦｐＥＦ患者の１２３個の試料におけるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの測定
【図1b】ＨＦｐＥＦの診断のため、ＨＦｒＥＦ患者の４１１個の試料およびＨＦｐＥＦ患者の１０７個の試料におけるＣＲＰの測定
【図1c】ＨＦｐＥＦの診断のため、ＨＦｒＥＦ患者の４５１個の試料およびＨＦｐＥＦ患者の１１０個の試料におけるＧＤＦ１５の測定
【図1d】ＨＦｐＥＦの診断のため、ＨＦｒＥＦを有する心不全患者の３６６個の試料およびＨＦｐＥＦ患者の９６個の試料におけるＩＧＦＢＰ－７の測定
【図2a】ＨＦｒＥＦに罹患している患者の４１０個の試料対ＨＦｐＥＦに罹患している１０７人の患者において、ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を用いた心不全患者におけるＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの診断
【図2b】ＨＦｒＥＦに罹患している患者の４１１個の試料対ＨＦｐＥＦに罹患している１０７人の患者において、ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５＋ＳＴ２（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を用いた心不全患者におけるＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの診断
【図3a】ＨＦｒＥＦに罹患している患者の３５９個の試料対ＨＦｐＥＦに罹患している９６人の患者において、ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を用いた心不全患者におけるＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの診断
【図3b】ＨＦｒＥＦに罹患している患者の３５９個の試料対ＨＦｐＥＦに罹患している９６人の患者において、ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７＋ＳＴ２（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を用いた心不全患者におけるＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの診断
【図3c】ＧＤＦ－１５＋ＩＧＦＢＰ－７（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を用いた心不全患者におけるＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの診断
【0128】
本明細書で引用される全ての参考文献は、一般的なそれらの開示内容に関して、または上に示された特定の開示内容に関して、参照により本明細書に組み込まれる。
【0129】
本発明は、本発明の範囲を制限または限定することを意図しない以下の実施例によって説明される。
【実施例】
【0130】
実施例１：循環バイオマーカーを用いたＨＦｐＥＦの評価
ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＧＤＦ－１５、ＳＴ２、ＣＲＰ（ｈｓ ＣＲＰ）およびＩＧＦＢＰ－７のレベルを、駆出率の低下あり、およびなしのＨＦ患者において決定した。
ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＧＤＦ－１５、ＳＴ２、ＣＲＰ（ｈｓ ＣＲＰ）およびＩＧＦＢＰ－７のレベルを、駆出率の低下あり、およびなしのＨＦ患者において決定した。
【0131】
結果を図１に示す。ＮＴｐｒｏＢＮＰは、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の患者と比較して、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の患者において有意に上昇した（ＡＵＣ ０．６５９）（図１ａを参照されたい）。図１ｂは、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の患者と比較して、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の患者においてＣＲＰが有意に上昇しなかったことを示す（ＡＵＣ ０．５７５）。図１ｃは、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の患者と比較して、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の患者においてＧＤＦ１５が有意に上昇していないことを示す（ＡＵＣ ０．５５４）。図１ｄは、駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の患者と比較して、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の患者においてＩＧＦＢＰ－７が有意に上昇していないことを示す（ＡＵＣ ０．４９４）。
【0132】
表１は、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）患者のサブグループおよび駆出率が保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）患者のサブグループにおける循環バイオマーカーの力価を示す。バイオマーカーの完全なセット（ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＧＤＦ１５、ＳＴ２、ＣＲＰｈｓおよびＩＧＦＢＰ７）のバイオマーカーデータは、ＨＦｒＥＦ患者の３６６個の試料およびＨＦｐＥＦ患者の９６個の試料について利用可能であった。
表１：ＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦ患者における循環バイオマーカーの力価
表１：ＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦ患者における循環バイオマーカーの力価
【表1】
【0133】
表１は、単変量解析において、ＮＴｐｒｏＢＮＰが両サブグループ（ＨＦｒＥＦ集団と比較したＨＦｒＥＦ集団）において有意に異なるマーカー濃度で検出されたことを明確に示している。
【0134】
ＨＦｒＥＦ患者は、ＨＦｐＥＦ患者と比較してより高いＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ力価を示した［４４１０対２１８９ｐｇ／ｍＬ中央値、ｐ＜０．００１］。対照的に、ＧＤＦ１５、ＳＴ２、ＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ７については、ＨＦｒＥＦ患者のサブグループと比較して、ＨＦｐＥＦ患者のサブグループにおいてわずかに上昇したマーカー濃度しか検出されなかった。しかしながら、ＨＦｐＥＦとＨＦｒＥＦとの間のマーカー濃度で観察された差は、単変量解析においてＧＤＦ１５、ＳＴ２、ＣＲＰｈｓ、ＩＧＦＢＰ－７に対して有意ではなかった。ＨＦｐＥＦ患者は、ＨＦｒＥＦ患者と比較して、わずかに高いＧＤＦ１５、ＳＴ２、ＣＲＰｈｓ、ＩＧＦＢＰ－７力価を示した［４３０４対３９３９ｐｇ／ｍＬ中央値、３７，６対３５，７ｐｇ／ｍＬ；８，５４対６，６６ｎｇ／ｍＬ；２３７，１対２４２，１ｎｇ／ｍＬ；ｐ＞０．００１］。
【0135】
上記から、ＨＦｐＥＦ患者の鑑別診断および同定は困難であることになる。ＨＦｐＥＦ患者を有するＨＦｒＥＦ患者では、ＮＴｐｒｏＢＮＰのみが有意な循環力価の上昇が観察された。対照的に、ＨＦｐＥＦ患者およびＨＦｒＥＦ患者におけるマーカーレベル間の有意差は、ＣＲＰ、ＧＤＦ１５、ＳＴ２およびＩＧＦＢＰ－７対しては検出されなかった。したがって、ＮＴｐｒｏＢＮＰの測定と比較して、マーカーの組合せを用いたＨＦｐＥＦの診断改善のための明白なヒントはなかった。
【0136】
実施例２：ＨＦｐＥＦの診断のためのＧＤＦ１５を用いた比
表１に示すように、ＨＦｐＥＦ患者と比較して、ＨＦｒＥＦ患者から循環ＮＴｐｒｏＢＮＰレベルの上昇を検出することができた。対照的に、駆出率の低下を伴うまたは伴わないＨＦ患者間の循環レベルの有意差を、ＣＲＰおよびＧＤＦ１５について検出することはできなかった。
表１に示すように、ＨＦｐＥＦ患者と比較して、ＨＦｒＥＦ患者から循環ＮＴｐｒｏＢＮＰレベルの上昇を検出することができた。対照的に、駆出率の低下を伴うまたは伴わないＨＦ患者間の循環レベルの有意差を、ＣＲＰおよびＧＤＦ１５について検出することはできなかった。
【0137】
ＨＦｐＥＦの改善された診断について、ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を評価した。
【0138】
図２ａに示すように、ＨＦｐＥＦの検出について、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比で観察されたＡＵＣは０．６７１であった。図２ｂに示すように、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比と比較して、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５＋ＳＴ２）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比ではさらなる改善を達成することができなかった。ＨＦｐＥＦの検出について、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５＋ＳＴ２）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比で観察されたＡＵＣは０．６７１であった。
【0139】
結果に基づくと、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比は、ＮＴｐｒｏＢＮＰまたはＧＤＦ１５またはＣＲＰの単一バイオマーカーの判定と比較して、ＨＦｐＥＦの診断を改善すると結論付けられた。
【0140】
実施例３：ＨＦｐＥＦの診断のためのＩＧＦＢＰ－７を用いたバイオマーカー比
表１に示すように、ＨＦｐＥＦ患者と比較して、ＨＦｒＥＦ患者から循環ＮＴｐｒｏＢＮＰレベルの上昇を検出することができた。対照的に、駆出率の低下を伴うまたは伴わないＨＦ患者間の循環レベルの有意差を、ＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ－７について検出することができなかった。ＨＦｐＥＦの改善された診断について、ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を評価した。
表１に示すように、ＨＦｐＥＦ患者と比較して、ＨＦｒＥＦ患者から循環ＮＴｐｒｏＢＮＰレベルの上昇を検出することができた。対照的に、駆出率の低下を伴うまたは伴わないＨＦ患者間の循環レベルの有意差を、ＣＲＰおよびＩＧＦＢＰ－７について検出することができなかった。ＨＦｐＥＦの改善された診断について、ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇していない）／ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＨＦｒＥＦ対ＨＦｐＥＦで上昇している）の比を評価した。
【0141】
図３ａに示すように、ＨＦｐＥＦの検出についてバイオマーカー（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの和の計算された指標で観察されたＡＵＣは０．６９９であった。これに対して、ＨＦｐＥＦの検出についてＩＧＦＢＰ－７／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比で観察されたＡＵＣは０．６８０であった。図３ｃに示すように、ＨＦの検出についてバイオマーカー（ＧＤＦ－１５＋ＩＧＦＢＰ－７）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの和の計算された指標で観察されたＡＵＣは０．６９３であった。図３ｂに示すように、（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比と比較して、（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７＋ＳＴ２）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比で同等の性能が観察された。ＨＦｐＥＦの検出について（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７＋ＳＴ２）：ＮＴｐｒｏＢＮＰの比で観察されたＡＵＣは０．７０３であった。驚くべきことに、バイオマーカー（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）：ＮＴｐｒｏＢＮＰの和の計算された指標は、ＨＦｐＥＦの診断について、（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比に対して優れた性能さえ示した。（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比は、Ｓｉｎｎｉｎｇらによって記述されている（ＣＲＰ＋ＧＤＦ１５＋ＳＴ２）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比に対して優れた性能さえ示す（ＡＵＣ ０．６９９対ＡＵＣ ０．６７１）。
【0142】
表２は、ＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦ患者における計算された指標の倍率変化を示す。
【表2】
【0143】
倍率変化を計算した（（ＨＦｐＥＦの中央値）／（ＨＦｒＥＦの中央値））－１×１００。
【0144】
表２は、（ＩＧＦＢＰ－７＋ＣＲＰ）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの和の計算された指標は、（ＧＤＦ１５＋ＣＲＰ＋ＳＴ２）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの和の計算された指標と比較して、ＨＦｐＥＦ対ＨＦｒＥＦの鑑別診断において改善された性能を明確に示している（倍率変化８７，８１％対６５，３４％）。ＩＧＦＢＰ－７／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比を比較すると、７４，９７％の倍率変化が観察された。
【0145】
結論として、ＩＧＦＢＰ－７は、ＩＧＦＢＰ－７を含まないＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＧＤＦ１５、ＣＲＰベースのスコアと比較して、ＨＦｐＥＦの同定を改善する。
【0146】
ＩＧＦＢＰ－７を用いた本スコアは、Ｓｉｎｎｉｎｇらから公表されたスコアと比較して、より良好な効果量を示す。
【0147】
（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）／ＮＴｐｒｏＢＮＰの比を含むアルゴリズムは、ＨＦｐＥＦ患者の診断を補助するのに有用であると結論付けられた。このアルゴリズムは、心不全を有する患者におけるＨＦｐＥＦの診断において、および心不全を有すると疑われる個体におけるＨＦｐＥＦの同定のために使用され得る。
【0148】
実施例４：症例研究
高血圧を有する７６歳の女性肥満患者は、息切れを呈する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＩＧＦＢＰ－７およびＣＲＰを、患者から得られた血清試料で（Ｅｌｅｃｓｙｓ ＮＴｐｒｏＢＮＰ、Ｅｌｅｃｓｙｓ ＩＧＦＢＰ－７およびＣｏｂａｓ ＣＲＰを用いて）決定する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は、肥満の存在のためグレーゾーンにある可能性があるので、心不全の鑑別診断が行われる。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は４７６ｐｇ／ｍＬ、ＩＧＦＢＰ－７値は１９０，８ｎｇ／ｍＬ、およびＣＲＰ値は５，８ｎｇ／ｍＬである。計算された指標（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）：ＮＴｐｒｏＢＮＰは０．４１であり、計算された基準比（０．０９）に対して上昇している。基準比は、基準コホートにおける中央値の比として計算した。得られた比（０．４１）は、駆出率が保持された心不全を示し、患者は、ＨＦｐＥＦ改善戦略を伴う処置、例えばＳＧＬＴ２阻害薬による処置からより利益を受けると同定されている。患者の治療はそれに応じて適合される。
高血圧を有する７６歳の女性肥満患者は、息切れを呈する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＩＧＦＢＰ－７およびＣＲＰを、患者から得られた血清試料で（Ｅｌｅｃｓｙｓ ＮＴｐｒｏＢＮＰ、Ｅｌｅｃｓｙｓ ＩＧＦＢＰ－７およびＣｏｂａｓ ＣＲＰを用いて）決定する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は、肥満の存在のためグレーゾーンにある可能性があるので、心不全の鑑別診断が行われる。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は４７６ｐｇ／ｍＬ、ＩＧＦＢＰ－７値は１９０，８ｎｇ／ｍＬ、およびＣＲＰ値は５，８ｎｇ／ｍＬである。計算された指標（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）：ＮＴｐｒｏＢＮＰは０．４１であり、計算された基準比（０．０９）に対して上昇している。基準比は、基準コホートにおける中央値の比として計算した。得られた比（０．４１）は、駆出率が保持された心不全を示し、患者は、ＨＦｐＥＦ改善戦略を伴う処置、例えばＳＧＬＴ２阻害薬による処置からより利益を受けると同定されている。患者の治療はそれに応じて適合される。
【0149】
高血圧を有する８１歳の男性患者は、心房細動および息切れの病歴を有する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＩＧＦＢＰ－７およびＣＲＰを、患者から得られた血清試料で（上記のキットを用いて）決定する。観察された駆出率は、グレーゾーン（５０％）にある。心房細動の存在のため、ＮＴｐｒｏＢＮＰ値も上昇し得るので、心不全の鑑別診断が行われる。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は３２８９ｐｇ／ｍＬ、ＩＧＦＢＰ－７値は２５０，７ｎｇ／ｍＬ、およびＣＲＰ値は１０，８ｎｇ／ｍＬである。計算された指標（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）：ＮＴｐｒｏＢＮＰは０．７９であり、計算された基準比（０．０９）に対して上昇している。基準比は、基準コホートにおける中央値の比として計算した。得られた比（０．７９）は、駆出率が保持された心不全を示し、患者は、ＨＦｐＥＦ改善戦略を伴う処置、例えばＳＧＬＴ２阻害薬による処置からより利益を受けると同定されている。患者の治療はそれに応じて適合される。
【0150】
糖尿病および高血圧を有する６８歳の肥満女性患者は、運動不耐性の症候を呈する。肥満の症候および駆出率が保持された心不全の症候は類似しているので、例えば、心不全の運動不耐性鑑別診断が行われる。ＮＴｐｒｏＢＮＰ、ＩＧＦＢＰ－７およびＣＲＰを、患者から得られた血清試料で（上記のキットを用いて）測定する。ＮＴｐｒｏＢＮＰ値は４６４３ｐｇ／ｍＬ、ＩＧＦＢＰ－７値は２４５，５ｎｇ／ｍＬ、およびＣＲＰ値は５．６ｎｇ／ｍＬである。計算された指標（ＣＲＰ＋ＩＧＦＢＰ－７）：ＮＴｐｒｏＢＮＰは０．０５であり、これは基準比（０．０９）に対して減少している。この結果は、駆出率が低下した心不全を示し、患者は、ＨＦｐＥＦ改善戦略を伴う処置、例えばＳＧＬＴ２阻害薬による処置からあまり利益を受けないと同定されている。したがって、患者の治療はそれに応じて適合されない。
【図1a】
【図1b】
【図1c】
【図1d】
【図2a】
【図2b】
【図3a】
【図3b】
【図3c】
