特許 7491666 新規な抗ＳＩＲＰａ抗体およびそれらの治療適用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-05-20

(45)【発行日】2024-05-28

(54)【発明の名称】新規な抗ＳＩＲＰａ抗体およびそれらの治療適用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240521BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240521BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240521BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240521BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20240521BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240521BHJP

   G01N 33/566 20060101ALI20240521BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20240521BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240521BHJP

   C12Q 1/04 20060101ALN20240521BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

A61K35/17 A

A61K39/00 H

A61K39/395 N

A61K45/00

A61K47/68

A61P3/04

A61P3/10

A61P7/00

A61P9/10 101

A61P17/02

A61P25/00

A61P29/00

A61P31/00

A61P31/04

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/06

A61P43/00 121

C07K7/06

C07K16/28

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N15/63 Z

G01N33/566

G01N33/574 A

C12P21/08

C12Q1/04

【請求項の数】 29

(21)【出願番号】P 2018550322

(86)(22)【出願日】2017-04-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-07-18

(86)【国際出願番号】 EP2017059071

(87)【国際公開番号】W WO2017178653

(87)【国際公開日】2017-10-19

【審査請求日】2020-04-14

【審判番号】

【審判請求日】2022-07-14

(31)【優先権主張番号】62/322,707

(32)【優先日】2016-04-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】17305182.2

(32)【優先日】2017-02-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】518135870

【氏名又は名称】オーエスイー イムノセラピューティクス

(74)【代理人】

【識別番号】100091683

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼川 俊雄

(72)【発明者】

【氏名】ポワリエ，ニコラ

(72)【発明者】

【氏名】マリー，カロライン

(72)【発明者】

【氏名】ヴァンノーヴ，ベルナール

(72)【発明者】

【氏名】ゴティエ，ヴァネッサ

(72)【発明者】

【氏名】セペニール，ヴィルジニー

(72)【発明者】

【氏名】ペンガム，サブリナ

【合議体】

【審判長】福井 悟

【審判官】飯室 里美

【審判官】中根 知大

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１４－５２５９４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００４－３５７５３０（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／１３８６００（ＷＯ，Ａ２）

【文献】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００７，Ｖｏｌ．２８２，Ｎｏ．１９，ｐ．１４５６７－１４５７５

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N15/09

ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＣＡｐｌｕｓ／ＥＭＢＡＳＥ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、および
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、

ａ）－ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ３が、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、かつ
－ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、または
ｂ）－ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ３が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、かつ
－ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、または
ｃ）－ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ３が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、かつ
－ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
ｄ）－ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＨＣＤＲ３が、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、かつ
－ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、
抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項2】

ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、請求項１に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項3】

－配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、ならびに
－配列番号３３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１または２に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項4】

－配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１～３のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項5】

－配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１～４のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項6】

ヒト化モノクローナル抗体あるいはその抗原結合性フラグメントである、請求項１～５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項7】

抗体軽鎖定常ドメインが、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来する、請求項１～６のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項8】

軽鎖定常ドメインが、配列番号３５の配列からなる、請求項７に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項9】

抗体重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖定常ドメインである、請求項１～８のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項10】

前記抗体重鎖定常ドメインが、配列番号３４の配列からなる、請求項９に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項11】

－配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－配列番号４５に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、請求項１～５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項12】

前記抗体あるいはその抗原結合性フラグメントがＳＩＲＰａアンタゴニストであり、ヒトＳＩＲＰａのヒトＣＤ４７への結合を阻害する、請求項１～１１のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項13】

ヒトＴ細胞、および／またはヒトＣＤ３＋Ｔ細胞に特異的に結合しない、請求項１～１２のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項14】

ヒトＴ細胞の増殖を阻害しない、請求項１～１３のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項15】

ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、請求項１～１４のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項16】

医薬品として使用するための、
請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメント。

【請求項17】

がん（特に、炎症性がん、ならびに浸潤骨髄系細胞、特に、浸潤ＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック（ｓｃｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ）、慢性感染性疾患（特に、シュードモナスおよびＣＭＶ）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植片機能不全からなる群から選択される疾患の予防または治療において使用するため、またはワクチン接種において使用するための、
請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメント。

【請求項18】

前記抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ＳＩＲＰａ陽性腫瘍を呈する患者に投与される、請求項１６または１７に記載の使用のための、請求項１～１５のいずれか一項記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項19】

請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項20】

医薬品として、同時、別個、または逐次的に使用するための、
－請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメント、ならびに
－少なくとも１つの第２の治療剤であって、化学療法剤、放射線療法剤、免疫療法剤、細胞療法剤、抗生物質およびプロバイオティクスからなる群から選択される、第２の治療剤
を含む、組合せ製品。

【請求項21】

前記第２の治療剤が、獲得免疫細胞のチェックポイント遮断剤もしくは活性化剤、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ２、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ４０、抗ＨＶＥＭ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ１６０、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＴＩＭ－１／３、抗ＬＡＧ－３、抗２Ｂ４、および抗ＯＸ４０、抗ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０－Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、およびＢ細胞受容体アゴニストからなる群から選択される、請求項２０に記載の組合せ製品。

【請求項22】

請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする、単離された核酸分子。

【請求項23】

請求項２２に記載の核酸分子を含む、ベクター。

【請求項24】

請求項２２に記載の核酸分子および／または請求項２３記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。

【請求項25】

対象におけるＳＩＲＰａ陽性細胞を、前記対象から事前に取得した生物学的サンプルから判定するためのインビトロでの方法であって、
ｉ）請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用して、前記対象から事前に取得した生物学的サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現および／または発現レベルをインビトロで判定すること
を含む、方法。

【請求項26】

インビトロまたはエキソビボにおけるサンプル中のＳＩＲＰａの検出の方法であって、請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントが、対象から事前に取得されたサンプルにおけるＳＩＲＰａ＋細胞の検出のために使用される、方法。

【請求項27】

ＳＩＲＰａの発現の定量化が行われる、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

診断試験または個別化された医薬またはコンパニオン診断試験における使用に好適な医薬品の製造における、請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用。

【請求項29】

請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントでの治療に対するがん対象の応答を予測する、インビトロまたはエキソビボでの方法であって、
－ 請求項１～１５のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントを用いて、対象から事前に取得された腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現レベルを判定すること、および
－ ＳＩＲＰａの発現レベルを、非応答対象集団におけるＳＩＲＰａの発現レベルを表す値と比較すること
を含み、
前記対象の前記腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａのより高い発現レベルが、前記治療に応答すると予想される患者を示す、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫療法の分野に関する。本発明は、ＳＩＲＰｇとＣＤ４７との間の相互作用に影響を及ぼすことなく、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用を特異的に減少させることができる、新規な抗ＳＩＲＰａ抗体を提供する。

【背景技術】

【0002】

獲得免疫の免疫チェックポイントを標的とすることは、多数のがんと闘うのに多大な治療効果を有することが示されているが、これは、限られた患者集団におけるものである。骨髄系細胞（マクロファージ、樹状細胞、ＭＤＳＣ、ＰＭＮ）の免疫チェックポイントは、これらの細胞が、多くの固形腫瘍において最も豊富な免疫細胞型を代表し、芳しくない予後と関連することが多いにもかかわらず、研究が進んでいないままである。

【0003】

シグナル調節タンパク質アルファすなわちＳＩＲＰａ（ＳＩＲＰα、ＣＤ１７２ａ、またはＳＨＰＳ－１とも表記される）は、単球、組織マクロファージのほとんどの下位集団、顆粒球、リンパ系組織における樹状細胞のサブセット、一部の骨髄前駆細胞、およびニューロンでは多様なレベルで発現され、脳のシナプスが豊富な領域、例えば、小脳および海馬の顆粒層においては顕著に高く発現する。ＳＩＲＰａは、緊密に関連するＳＩＲＰタンパク質のＳＩＲＰ対合受容体ファミリーのプロトタイプメンバーである。ヒトＳＩＲＰａをコードする遺伝子は、多形性遺伝子であり、いくつかのバリアントが、ヒト集団において説明されている。最も一般的なタンパク質バリアントは、ＳＩＲＰａ ｖ１およびｖ２（受託番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）およびＣＡＡ７１４０３）である。ヒトＳＩＲＰにおける多形性は、表面に露出されるアミノ酸の変化をもたらすが、これは、ＣＤ４７への結合には影響を及ぼさない。

【0004】

骨髄系細胞によって発現されるＳＩＲＰａと、偏在的受容体ＣＤ４７との相互作用は、骨髄機能の調節に関与する、先天的な応答の重要な免疫チェックポイントである。ＳＩＲＰａとＣＤ４７との相互作用は、大部分が説明されており、宿主細胞のファゴサイトーシスを阻害する下方調節シグナルを提供する。ＣＤ４７は、ほとんどの健常細胞によって低いレベルで広く発現されるが、ＣＤ４７はまた、一部のがん細胞において過剰発現される。したがって、ＣＤ４７は、「食べてはいけない（ｄｏｎ’ｔ－ｅａｔ－ｍｅ）」シグナルとしての機能を果たす。ＣＤ４７およびＳＩＲＰａはいずれも、多数の他の相互作用にも関与する。ＣＤ４７－ＳＩＲＰａ相互作用の最も特徴的な生理学的機能のうちの１つは、造血細胞、特に、赤血球および血小板の恒常性におけるその役割である。ＣＤ４７は、「食べてはいけない」シグナルの機能を果たし、そのため、マクロファージによる宿主細胞のファゴサイトーシスの重要な決定因子であり、がん細胞クリアランスにおけるＣＤ４７－ＳＩＲＰａ相互作用の寄与の可能性が、近年、熱心に調査されている。腫瘍におけるＣＤ４７受容体の豊富度が、患者の全生存期間と逆相関し、いくつかのがん種については良くない予後の要因となることが、示された。

【0005】

ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路は、現在では、マクロファージのファゴサイトーシスを増強するために、様々な医薬開発に供されている。実際には、感染細胞と同様に、がん細胞は、不明なタンパク質または異常なレベルの正常なタンパク質など、異常なカーゴ保有し、さらに、これらの細胞は、同時に免疫調節分子を過剰発現するによって、先天免疫制御機序を破壊することが多い。１つのそのような機序は、正常な細胞によって「自己」発現されるタンパク質であるＣＤ４７が関与することが明らかとなってきている。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰａと相互作用し、「食べてはいけない」シグナルのファゴサイトーシス性マクロファージへの伝達をもたらし、これにより、標的細胞が影響を受けなくなる。がん細胞によるＣＤ４７の過剰発現により、がん細胞が治療用抗体でコーティングされた場合ですら、がん細胞はマクロファージに対して耐性となり、この過剰発現が、多数の固形がんおよび造血がんにおける芳しくない臨床予後と相関している。実験モデル、特に、免疫欠損マウスにおけるヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて、ＣＤ４７を標的とする薬剤によるＣＤ４７／ＳＩＲＰａ経路の遮断は、マクロファージよる腫瘍排除の促進ならびにがん細胞の播種および転移形成の減少に非常に有効であった。ＣＤ４７を標的とする薬剤によるＣＤ４７／ＳＩＲＰａ経路の遮断は、マクロファージによる抗体依存性ファゴサイトーシスを増強させることによって、枯渇を行う治療用抗がん抗体、例えば、トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、およびアレムツズマブ（抗ＣＤ５２）と協調することが説明されている。

【0006】

しかしながら、最近では、ＣＤ４７を標的とする薬剤（抗ＣＤ４７またはＳＩＲＰａ－Ｆｃ）が、ＣＤ４７の生理学的役割と関連する血液毒性（貧血または血小板減少症）を呈することが、示されている。

【0007】

さらに、ＣＤ４７はまた、ヒトＴ細胞の表面に存在し、ヒト骨髄系細胞には存在しない、ＳＩＲＰファミリーの別のメンバーであるＳＩＲＰ－ガンマ（ＳＩＲＰｇ、ＳＩＲＰγ、ＣＤ１７２ｇ、またはＳＩＲＰベータ２とも表記される）とも結合する。ＳＩＲＰｇは、およそ３５００万年前の旧世界霊長類におけるＳＩＲＰｂ遺伝子の複製の結果生じたものであり、骨髄系細胞におけるＳＩＲＰａの発現とは対照的に、Ｔリンパ球に制限された様式で発現される。ＳＩＲＰｇは、マウスには存在しない。ＳＩＲＰｇ－ＣＤ４７の相互作用が、細胞と細胞との接着を媒介し、スーパー抗原依存性Ｔ細胞媒介性増殖を増強し、Ｔ細胞活性化を共刺激することが、示されている（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，１０５：６，２００５年）。

【0008】

ＳＩＲＰａとＳＩＲＰｇとの間の配列の高い類似性、特に、ＣＤ４７と相互作用する領域における類似性に起因して、先行技術において開示されている抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰｇにも結合し、ヒトにおいて望ましくない作用、例えば、Ｔ細胞の増殖の阻害および免疫応答の減少を有する。抗ＣＤ４７または非選択的な抗ＳＩＲＰａ抗体のそのような副作用は、公知の抗体の試験が、ＳＩＲＰｇ遺伝子を保有しないマウスモデルにおいて行われており、したがって、そのような副作用が存在しなかったため、予測することができなかった。

【0009】

したがって、Ｔ細胞免疫応答に対して有害な影響を有することなく先天免疫細胞を標的とする安全な免疫療法、とりわけ、がんに対するもののための、新規かつ改善された薬剤、特に、抗体に対して、当該技術分野において著しい必要性が存在している。特に、ＳＩＲＰｇ－ＣＤ４７相互作用に影響を及ぼすことなく、ＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用を阻害することに対する必要性が、存在する。本発明者らは、本明細書において開示される本発明により、大きな前進を遂げた。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【文献】国際公開第２００８／０６８６３７号２

【文献】欧州特許第１２７０７２５号明細書

【文献】米国特許第８５３６３０７号明細書

【文献】国際公開第２０１３／０５６３５２号２

【非特許文献】

【0011】

【文献】Piccio et al, Blood, 2005, Vol.105:6

【文献】Krehenbrink et al, J.mol.Biol., 2008, Vol.383:5

【文献】Skerra, Febs J., 2008, Vol.275:11

【文献】Schelhuber and Skerra, Biophys. Chem.,2002, Vol.96:2-3

【文献】Timmerman et al., J Mol Recognit., 2007, Vol.20, p.283-299

【文献】Gaseitsiwe et al., Clin. Vaccine Immunol., 2010年1月, Vol.17, p.168-175

【文献】Van de Water et al., Clinical Immunology and Immunopathology, 1997, Vol.85

【文献】Kishore et al., Surfactant poteins SP-A and SP-D: structure, function and receptors, Mol Immunol., 2006, Vol.43, p.1293-1315

【文献】Salfeld, nature biotechnology, 2007, Vol.25, No.12

【文献】Irani et al., Molecular Immunology, 2015, Vol.67, issue 2, part A

【文献】Antonia et al., Immuno－oncology combinations: a review of clinical experience and future prospects.Clin.Cancer Res.Off.J.Am.Assoc.Cancer Res.20,6258-6268,2014年

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

本発明の目的は、上述の問題のすべてまたは一部を解決することを可能にする新規な薬剤、特に、抗体を提供することによって、この必要性を満たすことである。

【課題を解決するための手段】

【0013】

本明細書において、本発明者らは、ＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用をアンタゴナイズするが、ＳＩＲＰｇには特異的に結合せず、したがって、ＳＩＲＰｇ－ＣＤ４７相互作用には影響を及ぼさない、新規な抗ＳＩＲＰａ抗体、特に、ヒト化抗体を提供する。

【発明の効果】

【0014】

本発明の抗体は、特に、以下の利点を有する：
－ 本抗体は、ＳＩＲＰａの限定的な発現に起因して血液毒性を回避する（ヒト赤血球（ＲＢＣ）および血小板には結合しない）、
－ 本抗体は、単剤療法において、腫瘍成長を低減させ、腫瘍微小環境を修飾する、
－ 本抗体は、チェックポイント阻害剤および共刺激剤との相乗作用を呈する、
－ 本抗体は、持続的かつ強力な抗腫瘍メモリーＴリンパ球応答を誘導する、
－ 本抗体は、ＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用の選択的アンタゴニストであり、ＣＤ４７／ＳＩＲＰｇ相互作用を妨害しない、ヒトＴ細胞免疫応答を可能にする。予想外にも、本発明者らは、ＳＩＲＰａ配列とＳＩＲＰｇ配列との間の高い配列同一性にもかかわらず、そのような選択的抗体を提供する。

【0015】

これらの特徴に基づいて選択されるこれらの新規な抗体は、多数の治療適用、特に、炎症性がんおよび浸潤骨髄系細胞（特に、浸潤ＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞）を有するがんを含むがんの治療に、特に有望である。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1A】ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析（ヒトＳＩＲＰａ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）を示す図である。キメラ（◆）、ＨＡＬＡ（□）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）の固定化したＳＩＲＰａ－ＨｉｓのＥＬＩＳＡによる評価。ロバ抗ヒト抗体を用いて顕色させ、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。ＥＤ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を達成する、示される抗体の濃度である。

【図1B】ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析（ヒトＳＩＲＰａ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）を示す図である。ＨＣＬＡ（●）、ＨＣＬＢ（×）、ＨＥＬＡ（◇）、ＨＥＬＢ（－）の固定化したＳＩＲＰａ－ＨｉｓのＥＬＩＳＡによる評価。ロバ抗ヒト抗体を用いて顕色させ、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。ＥＤ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を達成する、示される抗体の濃度である。

【図1C】ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析（ヒトＳＩＲＰａ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）を示す図である。ＨＡＬＢ（－）、ＨＢＬＡ（＿）、ＨＢＬＢ（■）の固定化したＳＩＲＰａ－ＨｉｓのＥＬＩＳＡによる評価。ロバ抗ヒト抗体を用いて顕色させ、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。ＥＤ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を達成する、示される抗体の濃度である。

【図1D】ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析（ヒトＳＩＲＰａ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）を示す図である。ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝４）、ＳＥ５Ａ５市販クローン（▲）（ｎ＝７）、６Ｇ１０クローン（▽）（ｎ＝３）、および１２Ｄ７クローン（□）（ｎ＝４）の結合を示す。

【図2】ヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質における抗ＳＩＲＰ抗体のＢｉａｃｏｒｅによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、５μｇ／ｍｌ（５００ＲＵ）でＣＭ５チップに固定化し、示される抗体を、異なる濃度で添加した。値を、３分間の結合期間（ｋａ）、続いて１０分間の解離期間（ｋｄ）後に測定し、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図3A】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。キメラ（◆）、ＨＡＬＡ（□）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）のヒト単球ｖ１／ｖ１（ヒトＦｃ受容体結合阻害性抗体で事前染色した）に対する細胞蛍光測定法による評価。ＰＥ標識したマウス抗ヒトＦｃモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いて、ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターで顕色させた。値は、染色された単球の割合に対応する。ＥＤ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を達成する、示される抗体の濃度である。染色された単球ｖ１／ｖ１の割合に対応する。

【図3B】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。キメラ（◆）、ＨＡＬＡ（□）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）のヒト単球ｖ１／ｖ１（ヒトＦｃ受容体結合阻害性抗体で事前染色した）に対する細胞蛍光測定法による評価。ＰＥ標識したマウス抗ヒトＦｃモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いて、ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターで顕色させた。値は、染色された単球の割合に対応する。ＥＤ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を達成する、示される抗体の濃度である。単球ｖ１／ｖ１の蛍光強度の平均（ＭＦＩ）に対応する。

【図3C】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によるヒト単球におけるＳＩＲＰａ抗体の結合研究を示す図である：様々な抗ＳＩＲＰａ抗体を、試験した：ｍ１８Ｄ５（■）（ｎ＝１）、ＳＥ７Ｃ２（▲）（ｎ＝２）、１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）、６Ｇ１０（◆）（ｎ＝４）。用量応答に対する様々な抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を表す。可能であった場合には、統計学的分析を行った。

【図3D】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によるヒト単球におけるＳＩＲＰａ抗体の結合研究を示す図である：様々な抗ＳＩＲＰａ抗体を、試験した：ｍ１８Ｄ５（■）（ｎ＝１）、ＳＥ７Ｃ２（▲）（ｎ＝２）、１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）、６Ｇ１０（◆）（ｎ＝４）。抗体用量応答に対する染色された単球の割合を表す。可能であった場合には、統計学的分析を行った。

【図3E】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。抗ｈＳＩＲＰａ抗体による集団におけるＳＩＲＰａバリアントの結合を示す図である：３２人の志願者において、様々な抗ｈＳＩＲＰａ抗体がＳＩＲＰａバリアントに結合する能力を、ＰＥ抗マウスＩｇＧを用いてＦＡＣＳによって測定した。すべてのクローンを、１０μｇ／ｍｌで試験した：ｍ１８Ｄ５（■）、１２Ｄ７（▼）、６Ｇ１０（◆）および市販の抗体ＳＥ５Ａ５（□）、ＳＥ７Ｃ２（△）。ホモ接合体バリアント１志願者を表す（ｎ＝１６）。

【図3F】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。抗ｈＳＩＲＰａ抗体による集団におけるＳＩＲＰａバリアントの結合を示す図である：３２人の志願者において、様々な抗ｈＳＩＲＰａ抗体がＳＩＲＰａバリアントに結合する能力を、ＰＥ抗マウスＩｇＧを用いてＦＡＣＳによって測定した。すべてのクローンを、１０μｇ／ｍｌで試験した：ｍ１８Ｄ５（■）、１２Ｄ７（▼）、６Ｇ１０（◆）および市販の抗体ＳＥ５Ａ５（□）、ＳＥ７Ｃ２（△）。ホモ接合体バリアント２志願者を表す（ｎ＝８）。

【図3G】ヒト単球（ＳＩＲＰａホモ接合体バリアント１（ｖ１／ｖ１））における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析を示す図である。抗ｈＳＩＲＰａ抗体による集団におけるＳＩＲＰａバリアントの結合を示す図である：３２人の志願者において、様々な抗ｈＳＩＲＰａ抗体がＳＩＲＰａバリアントに結合する能力を、ＰＥ抗マウスＩｇＧを用いてＦＡＣＳによって測定した。すべてのクローンを、１０μｇ／ｍｌで試験した：ｍ１８Ｄ５（■）、１２Ｄ７（▼）、６Ｇ１０（◆）および市販の抗体ＳＥ５Ａ５（□）、ＳＥ７Ｃ２（△）。ヘテロ接合体Ｖ１／Ｖ２志願者を表す（ｎ＝８）。

【図4A】ＳＩＲＰａに対する抗ＳＩＲＰａ抗体とＣＤ４７との競合を示す図である。一定濃度のビオチン化ＣＤ４７－Ｆｃ（６μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートした異なる濃度のキメラ（◆）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）の固定化したＳＩＲＰａ－ＨｉｓのＥＬＩＳＡによる評価。ストレプトアビジンペルオキシダーゼを用いて顕色させ、ＣＤ４７分子を検出し、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。第２の実験の結果は、ＩＣ５０値とともに示す。ＩＣ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を阻害する、示される抗体の濃度である。

【図4B】ＳＩＲＰａに対する抗ＳＩＲＰａ抗体とＣＤ４７との競合を示す図である。ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用に対する抗ＳＩＲＰａ抗体のアンタゴニスト活性研究：様々な抗ＳＩＲＰａ抗体を、用量応答に対して試験した：ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝１）、市販の抗体ＳＥ５Ａ５（▲）（ｎ＝２）、およびｍ１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）。この図は、抗ｈＳＩＲＰａ抗体の用量応答の間にＥＬＩＳＡによって測定されたＣＤ４７陽性ＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用の割合を表す。

【図5A】ヒト単球における抗ＳＩＲＰａ抗体とＣＤ４７との競合を示す図である。一定濃度のビオチン化ＣＤ４７－Ｆｃ（１０μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートした異なる濃度のキメラ（◆）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）のヒト単球（ｖ１／ｖ１）のサイトメトリーによる評価。フィコエリトリン－ストレプトアビジンを用いて顕色させ、ＣＤ４７分子を検出し、ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターによって明示した。ＩＣ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を阻害する、示される抗体の濃度である。陽性細胞の割合に対応する。

【図5B】ヒト単球における抗ＳＩＲＰａ抗体とＣＤ４７との競合を示す図である。一定濃度のビオチン化ＣＤ４７－Ｆｃ（１０μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートした異なる濃度のキメラ（◆）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）のヒト単球（ｖ１／ｖ１）のサイトメトリーによる評価。フィコエリトリン－ストレプトアビジンを用いて顕色させ、ＣＤ４７分子を検出し、ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターによって明示した。ＩＣ５０は、このアッセイにおいて、シグナルの５０％を阻害する、示される抗体の濃度である。蛍光強度の平均に対応する。

【図5C】ヒト単球における抗ＳＩＲＰａ抗体とＣＤ４７との競合を示す図である。ＦＡＣＳによるＳｉｒｐａ－ＣＤ４７相互作用に対する抗ＳＩＲＰａ抗体のアンタゴニスト活性研究：様々な抗ＳＩＲＰａ抗体を、用量応答に対して試験した：ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝１）、市販の抗体ＳＥ７Ｃ２（▲）（ｎ＝２）、およびｍ１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）。抗ｈＳＩＲＰａ抗体との競合後にＦＡＣＳによって測定されたＣＤ４７陽性細胞の割合を表す。

【図6A】ＳＰ－Ｄリガンドとともに予備インキュベートしたかまたはそれなしでインキュベートした、ヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質における抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、１０μｇ／ｍｌでＮＩＮＴＡバイオセンサーに固定化し、ＳＰ－Ｄリガンドを、１００μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加した。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍｌで添加し、親和性値を、１２０秒間の結合期間（ｋａ）、続いて１２０秒間の解離期間（ｋｄ）の後に推測して、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図6B】マウス１８Ｄ５抗体とともに予備インキュベートしたヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質における抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、１０μｇ／ｍｌでＮＩＮＴＡバイオセンサーに固定化し、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加した。次いで、ＳＰ－Ｄリガンドを、１００μｇ／ｍｌで添加し、親和性値を、１２０秒間の結合期間（ｋａ）、続いて１２０秒間の解離期間（ｋｄ）の後に推測して、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図7A】ヒトＳＩＲＰｂ組換えタンパク質における抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｂ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、ＮＩＮＴＡバイオセンサーに固定化し、示される抗体を、２０μｇ／ｍｌで添加した。値を、１２０秒間の結合期間（ｋａ）、続いて１２０秒間の解離期間（ｋｄ）の後に推測して、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図7B】抗ＳＩＲＰ抗体の結合分析を示す図である（ヒトＳＩＲＰｂ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）。ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）、Ｂ４Ｂ６（◆）、およびＩｇＧ４抗体対照（■）の固定化したＳＩＲＰｂ－ＨｉｓにおけるＥＬＩＳＡによる評価。マウス抗体を用いて顕色させたＢ４Ｂ６を除き、ロバ抗ヒト抗体を用いて顕色させ、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。

【図8A】ヒトＳＩＲＰｇ組換えタンパク質における抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、ＮＩＮＴＡバイオセンサーに固定化し、示される抗体を、１０μｇ／ｍｌで添加した。値を、１２０秒間の結合期間（ｋａ）、続いて１２０秒間の解離期間（ｋｄ）の後に推測して、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図8B】ＳＩＲＰｇにおける抗ＳＩＲＰ抗体のＥＬＩＳＡアッセイによる結合分析を示す図である（ヒトＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓコーティングおよび抗ヒトカッパ検出）。ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（○）、ＬＳＢ２－２０（●）、およびＩｇＧ４抗体対照（■）の固定化したＳＩＲＰｇ－ＨｉｓにおけるＥＬＩＳＡによる評価。ロバ抗ヒト抗体を用いて顕色させ、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析によって明示した。

【図9】抗ＳＩＲＰ抗体とともに予備インキュベートしたヒトＳＩＲＰｇ組換えタンパク質におけるＣＤ４７のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓ組換えタンパク質を、１０μｇ／ｍｌでＮＩＮＴＡバイオセンサーに固定化し、示される抗体を、２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加した。次いで、ＣＤ４７Ｆｃを、１００μｇ／ｍｌで添加し、親和性値を、１２０秒間の結合期間（ｋａ）、続いて１２０秒間の解離期間（ｋｄ）の後に推測して、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【図10A】異なるモノクローナル抗体で染色し、二次抗ＩｇＧ蛍光抗体で顕色させた後の、末梢ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞におけるフローサイトメトリーによって測定した幾何平均蛍光強度を示す図である。

【図10B】異なるモノクローナル抗体で染色し、二次抗ＩｇＧ蛍光抗体で顕色させた後の、赤血球におけるフローサイトメトリーによって測定した幾何平均蛍光強度を示す図である。

【図10C】異なるモノクローナル抗体で染色し、二次抗ＩｇＧ蛍光抗体で顕色させた後の、血小板におけるフローサイトメトリーによって測定した幾何平均蛍光強度を示す図である。

【図11】異なるモノクローナル抗体で染色した後の陽性末梢ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞の割合を示す図である。表は、二連の実験における陽性細胞の％の値を示す。

【図12A】健常志願者に由来する末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズで１：１の比で３日間刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図12B】健常志願者に由来する末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、同種樹状細胞（ＤＣ）でＴ細胞５個：ＤＣ１個の比で５日間刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図12C】健常志願者に由来する末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズで１：１の比で３日間刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図12D】健常志願者に由来する末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、同種樹状細胞（ＤＣ）でＴ細胞５個：ＤＣ１個の比で５日間刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図12E】健常志願者に由来する末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、異なる濃度のツベルクリン未精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）で５日間、刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図13】マウスＣＤ８＋Ｔ細胞を、ナイーブマウスの脾細胞から単離した図である。ＣＤ８ Ｔ細胞を、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズで１：１の比で３日間刺激した。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図14】健常志願者の末梢血単核細胞から単離したヒトＴ細胞を、同種樹状細胞（ＤＣ）でＴ細胞５：ＤＣ１の比で５日間刺激した図である。抗体を、０日目に培養物に添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【図15A】マウス肝臓がんの直交異方性モデル（０日目に２．５．１０＾６個のＨｅｐａ １．６細胞を門脈を通じて注射）における、抗４－１－ＢＢモノクローナル抗体（３Ｈ３クローン、１００μｇ／注射）の２回の注射（４日目および８日目）または抗ＰＤＬ－１（１０Ｆ．９Ｇ２クローン、２００μｇ／注射、４週間の間の処置）の注射（週２回）と組み合わせた、あるいはそれらと組み合わせていない抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）の４週間にわたる週３回（３００μｇ／注射）の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与の抗腫瘍作用を示す図である。マウスは、すべての対照マウスの死亡に必要な時間の３倍生存した場合に、治癒したとみなした。

【図15B】腫瘍浸潤細胞を、腫瘍接種の１３日後に分析した図である。

【図15C】腫瘍浸潤細胞および脾臓細胞を、腫瘍接種の１３日後に分析した図である。

【図15D】肝臓がんモデルにおいて抗ＳＩＲＰａ＋抗４－１ＢＢ注射によって事前に治癒したマウスまたは抗４－１ＢＢで処置したＳＩＲＰａ変異体マウスを、脾臓におけるＨｅｐａ １．６細胞の注射（細胞２．５．１０＾６個／マウス）によって再攻撃した図である。腫瘍の発達を再攻撃マウスと比較するために、ナイーブマウスに、同じ経路で並行して注射した。その後、マウスを未処置のまま放置した。

【図15E】肝臓がんモデルにおいて抗ＳＩＲＰａ＋抗４－１ＢＢによって事前に治癒したマウスを、脾臓におけるＨｅｐａ １．６細胞の注射（細胞２．５．１０＾６個／マウス）によって再攻撃し、脾臓を、再攻撃の３０日後に摘出した図である。脾細胞およびＴ細胞性脾細胞を、単離した。ナイーブマウスに、ビヒクル、全脾細胞（１０．１０＾６個／マウス）、または脾細胞から精製したＴ細胞（２．５．１０＾６個／マウス）を静脈内注射し、すべてに、脾臓におけるＨｅｐａ１．６細胞の注射（細胞２．５．１０＾６個／マウス）の注射を受容させた。その後、マウスを未処置のまま放置し、すべての対照マウスの死亡に必要な時間の３倍生存した場合に、治癒したとみなした。

【図16】肝臓がんモデルにおいて抗ＳＩＲＰａ＋抗ＰＤＬ１注射によって事前に治癒したマウスを、脾臓におけるＨｅｐａ １．６細胞の注射（細胞２．５．１０＾６個／マウス）によって再攻撃した図である。腫瘍の発達を再攻撃マウスと比較するために、ナイーブマウスに、同じ経路で並行して注射した。その後、マウスを未処置のまま放置した。

【図17】マウス乳房癌腫の同所性モデル（０．２５．１０＾６個の４Ｔ１細胞を乳腺に注射）における、抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）の４週間にわたる週３回（２００μｇ／注射）の腹腔内投与の抗腫瘍作用を示す図である。腫瘍の発達を、腫瘍の直径を測定することによって評価し、次の式に従って計算した：＝（０．５２＊（ｄ^２））＾１．５。マウスは、倫理的ガイドラインに従って、腫瘍の発達がおよそ１０００ｍｍ^３となった場合に、安楽死させた。

【図18】マウス乳房癌腫の直交異方性モデル（０．２５．１０＾６個の４Ｔ１細胞を乳腺に注射）における、抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）または対照モノクローナル抗体で、２週間にわたり週３回（２００μｇ／注射）腹腔内処置したマウスの脾臓、腫瘍、およびリンパ節における免疫細胞の表現型分析を示す図である。免疫細胞分析を、腫瘍接種の２週間後に行った。

【図19】抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）、抗ＣＤ４７（ＭＩＡＰ４１０クローン）、および無関係なアイソタイプ対照を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、１２ｍｇ／ｋｇで、０日目および２日目に腹腔内投与した図である。血液サンプルを、０日目および３日目に、ＥＤＴＡを含有するチューブに採取し、血球数測定を、ＸＳ－８００ｉ血液分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ）を用いて行った。ヘモグロビンのレベル（左）およびヘマトクリットの割合（右）を、３日目に評価した。破線は、各パラメーターについて、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける正常範囲の値を表す。

【図20】健常ドナーの血液から新しく単離したヒト血小板における、対照モノクローナル抗体（破線）と比較した、抗ＳＩＲＰａ（ＨＥＦＬＢ、灰色）および抗ＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１２、黒色）モノクローナル抗体のフローサイトメトリー分析を示す図（上）である。５０μｇ／ｍｌの対照モノクローナル抗体、抗ＳＩＲＰａ（ＨＥＦＬＢ）、抗ＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１２）、または凝集の阻害剤の陽性対照として抗インテグリンαＩＩｂの存在下における、光学血小板凝集測定装置を使用したヒト血小板凝集測定を示す図（下）である。抗体は、非活性化およびＡＤＰ活性化血小板において評価した。

【図21A】同種ＣＤ４＋Ｔ細胞を、１：１の比で、新しい卵巣がん腹水から抽出したＣＤ１４＋骨髄系細胞とともに、１０μｇ／ｍｌの対照抗体（白色）、抗ＳＩＲＰａ ＨＥＦＬＢ（黒色）、または抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（灰色）の存在下で培養した図である。増殖を、^３Ｈ－チミジン組込みによって５日目に測定した。

【図21B】同種ＣＤ４＋Ｔ細胞を、１：１の比で凍結した卵巣がん腹水から抽出したＣＤ１４＋骨髄系細胞とともに、１０μｇ／ｍｌの対照抗体（白色）、抗ＳＩＲＰａ ＨＥＦＬＢ（黒色）、または抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（灰色）の存在下で培養した図である。増殖を、^３Ｈ－チミジン組込みによって５日目に測定した。

【図21C】同種Ｔ細胞を、５：１の比で同種樹状細胞および異なる比の卵巣がん腹水から単離したＣＤ１４＋骨髄系細胞とともに、図２１Ａのように１０μｇ／ｍｌの抗体の存在下において、培養した図である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

ＳＩＲＰａ抗体（エピトープを有する）
一態様において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0018】

別途定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、関連する技術分野の当業者に広く理解されているものと同じ意味を有する。

【0019】

本明細書、実施例、および特許請求の範囲において用いられるある特定の用語および語句の意味を、適宜提供する。

【0020】

本明細書において使用されるとき、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、または組換え抗体を含む。

【0021】

本明細書において使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、共通の重鎖および共通の軽鎖アミノ酸配列を共有する抗体の抗体分子の調製物を指し、対照的に、「ポリクローナル」抗体は、異なるアミノ酸配列の抗体の混合物を含む調製物を指すことが意図される。モノクローナル抗体は、ファージ、細菌、酵母、またはリボソームディスプレイなどのいくつかの公知の技術によって、ならびにハイブリドーマ由来抗体によって例証される古典的な方法によって、生成することができる。したがって、「モノクローナル」という用語は、１つの核酸クローンに由来するすべての抗体を指して使用される。

【0022】

本発明の抗体は、組換え抗体を含む。本明細書において使用されるとき、「組換え抗体」という用語は、組換え手段によって産生、発現、生成、または単離された抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現された抗体；組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体；ヒト免疫グロブリン遺伝子に起因してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体；または特定の免疫グロブリン遺伝子配列（例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列）を他のＤＮＡ配列とアセンブルする任意の他の手段で産生、発現、生成、もしくは単離された抗体を指す。組換え抗体には、例えば、キメラ抗体およびヒト化抗体が含まれる。

【0023】

本明細書において使用されるとき、「キメラ抗体」は、哺乳動物種、例えば、マウスの生殖系列に由来する可変ドメインの配列が、別の哺乳動物種、例えば、ヒトの生殖系列に由来する定常ドメインの配列にグラフトされている、抗体を指す。

【0024】

本明細書において使用されるとき、「ヒト化抗体」は、ヒトフレームワーク配列に、別の哺乳動物種、例えば、マウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がグラフトされている、抗体を指す。

【0025】

本明細書において使用されるとき、「抗体の抗原結合性フラグメント」は、可能であればその天然の形態で、ＳＩＲＰａに対する抗原結合能力を呈する、抗体の一部、すなわち、本発明の抗体の構造の一部分に対応する分子を意味し、そのようなフラグメントは、特に、対応する４本鎖抗体の抗原結合特異性と比較すると、前記抗原に対して同じかまたは実質的に同じ抗原結合特異性を呈する。有利なことには、抗原結合性フラグメントは、対応する４本鎖抗体と類似の結合親和性を有する。しかしながら、対応する４本鎖抗体と比べて低減された抗原結合親和性を有する抗原結合性フラグメントもまた、本発明の範囲内に包含される。抗原結合能力は、抗体と標的フラグメントとの間の親和性を測定することによって、判定することができる。これらの抗原結合性フラグメントはまた、抗体の「機能性フラグメント」とも表記され得る。

【0026】

抗体の抗原結合性フラグメントは、抗原、すなわち、ＳＩＲＰａの細胞外ドメインに対する認識部位を包含し、それによって抗原認識特異性を定める、ＣＤＲ（相補性決定領域）と表記される超可変ドメインまたはその部分を含むフラグメントである。

【0027】

４本鎖免疫グロブリンのそれぞれの軽鎖および重鎖可変ドメイン（それぞれ、ＶＬおよびＶＨ）は、それぞれ、ＶＬ－ＣＤＲ１（またはＬＣＤＲ１）、ＶＬ－ＣＤＲ２（またはＬＣＤＲ２）、ＶＬ－ＣＤＲ３（またはＬＣＤＲ３）、およびＶＨ－ＣＤＲ１（またはＨＣＤＲ１）、ＶＨ－ＣＤＲ２（またはＨＣＤＲ２）、ＶＨ－ＣＤＲ３（またはＨＣＤＲ３）と表記される、３つのＣＤＲを有する。

【0028】

当業者であれば、記載されるこの点に関して、参照番号付けシステム、ＫＡＢＡＴの番号付けシステムへの参照、またはＩＭＧＴ「真珠の首飾り（ｃｏｌｌｉｅｒ ｄｅ ｐｅｒｌｅ）」アルゴリズムの適用によるものを含む、標準的な定義を参照して、抗体の様々な領域／ドメインの位置を決定することができる。この点で、本発明の配列の定義に関して、領域／ドメインの境界設定が、１つの参照システムと別のものとでは変動し得ることに留意されたい。したがって、本発明において定義される領域／ドメインは、抗体の可変ドメインの全長配列内の関係する配列の長さまたは位置付けに、およそ±１０％の変動性を示す配列を包含する。

【0029】

４本鎖免疫グロブリンの構造に基づくと、抗原結合性フラグメントは、したがって、利用可能なデータベースおよび先行技術における抗体の配列との比較によって、特に、これらの配列における機能性ドメインの位置の比較によって、定義することができるが、フレームワークの位置および定常ドメインは、様々な抗体クラス、特に、ＩｇＧ、特に、哺乳動物ＩｇＧに関して、十分に定義されていることに留意されたい。そのような比較はまた、抗体の３次元構造のデータ関連付けを伴う。

【0030】

本発明の特定の実施形態を例示する目的で、抗体のＣＤＲを含む可変ドメインを含む抗体の抗原結合性フラグメントは、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２を包含する。Ｆｖフラグメントは、抗体のＶＬおよびＶＨドメインが疎水性相互作用によって一緒に結合されたものからなり、ｄｓＦｖフラグメントでは、ＶＨ：ＶＬヘテロ二量体が、ジスルフィド結合によって安定化されており、ｓｃＦｖフラグメントでは、ＶＬおよびＶＨドメインが、可動性ペプチドリンカーによって互いに接続されて、それによって一本鎖タンパク質を形成している。Ｆａｂフラグメントは、抗体のパパイン消化によって得ることができる単量体フラグメントであり、これらは、Ｌ鎖全体、およびＨ鎖のＶＨ－ＣＨ１フラグメントが、ジスルフィド結合によって一緒に結合されたものを含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジジスルフィドよりも下の部分における抗体のペプシン消化によって産生され得、これは、２つのＦａｂ’フラグメント、および免疫グロブリン分子のヒンジ領域の一部分を追加として含む。Ｆａｂ’フラグメントは、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合を切断することによって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントから得ることができる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、二価である、すなわち、このフラグメントは、天然の免疫グロブリン分子と同様に、２つの抗原結合性部位を含むが、一方で、Ｆｖ（Ｆａｂの可変部分を構成するＶＨＶＬ二量体）、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦａｂ’フラグメントは、一価である、すなわち、これらのフラグメントは、単一の抗原結合性部位を含む。本発明のこれらの基本的な抗原結合性フラグメントを一緒に組み合わせて、多価抗原結合性フラグメント、例えば、ダイアボディ、トリボディ、またはテトラボディを得ることができる。これらの多価抗原結合性フラグメントもまた、本発明の一部である。

【0031】

本明細書において使用されるとき、「二重特異性」抗体という用語は、第１の抗原に特異的な少なくとも１つの領域（例えば、第１の抗体の可変領域に由来する）および第２の抗原に特異的な少なくとも１つの第２の領域（例えば、第２の抗体の可変領域に由来する）を有することにより、２つの異なる抗原を認識する抗体を指す。二重特異性抗体は、２つの標的抗原に結合し、したがって、多重特異性抗体の一種である。２つ以上の異なる抗原を認識する多重特異性抗体は、組換えＤＮＡ方法によって産生され得るか、または任意の便宜的な方法によって化学的に産生された抗体を含むがこれらに限定されない。二重特異性抗体は、２つの異なる抗原を認識することができる、すべての抗体もしくは抗体のコンジュゲート、または抗体の多量体形態を含む。二重特異性抗体は、その二価特徴を保持することができるように還元および改良されている抗体、ならびにそれぞれの抗原に対して複数の抗原認識部位を有することができるように、化学的に結合されている抗体、例えば、ＢｉＭＥ（二重特異性マクロファージ増強抗体）、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、ＤＡＲＴ（二重親和性リターゲティング）、ＤＮＬ（ドック－アンド－ロック）、ＤＶＤ－Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）、ＨＡＳ（ヒト血清アルブミン）、ｋｉｈ（ノブ・イントゥ－・ホール）を含む。

【0032】

したがって、本発明の二重特異性抗体は、ＳＩＲＰａおよび第２の抗原を対象とする。

【0033】

一実施形態において、本発明は、二重特異性である、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0034】

治療用抗体を開発するためのいくつかの研究により、抗体の特性を最適化するようにＦｃ領域を操作することがもたらされ、それらを必要とする薬理学的活性により適した分子の生成が可能となった。抗体のＦｃ領域は、血清半減期およびエフェクター機能、例えば、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する。ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの間の境界部に位置するいくつかの変異、例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８ＬおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆは、ＦｃＲｎに対する結合親和性およびＩｇＧ１のインビボ半減期を増加させることが示されている。しかしながら、ＦｃＲｎ結合の増加と半減期の改善との間には直接的な関係が存在するとは限らない。治療用抗体の有効性を改善するための１つのアプローチは、その血清持続性を増加させることであり、それによって、より高い循環レベル、より低い投与頻度、および用量の低減が可能となる。Ｆｃ領域の操作は、抗体のエフェクター機能の低減または増加のいずれかのために所望され得る。細胞表面分子、特に、免疫細胞上のものを標的とする抗体については、エフェクター機能を抑止することが必要とされる。対照的に、腫瘍学上の使用が意図される抗体については、エフェクター機能を増加させることにより、治療活性を改善することができる。４つのヒトＩｇＧアイソタイプは、活性型Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ）、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体、および補体第１成分（Ｃ１ｑ）に、異なる親和性で結合し、極めて異なるエフェクター機能をもたらす。ＩｇＧのＦｃγＲまたはＣ１ｑへの結合は、ヒンジ領域およびＣＨ２ドメインに位置する残基に依存する。ＣＨ２ドメインの２つの領域は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑの結合にとって極めて重要であり、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４において固有の配列を有する。

【0035】

本明細書において使用されるとき、「修飾抗体」は、抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む分子に対応し、前記モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントは、機能性が異なる分子と結合する。本発明の修飾抗体は、化学的もしくは生物学的な基または分子、例えば、インビボでのプロテアーゼ切断に対する保護、抗体または機能性フラグメントの安定性および／または半減期の改善に好適な、ＰＥＧポリマーまたは別の保護基もしくは分子との、共有結合、グラフト、化学的結合を含む任意の好適な形態の結合の結果として得られる、融合キメラタンパク質またはコンジュゲートのいずれかであり得る。類似の技法、特に、化学的結合またはグラフトによるものを用いて、修飾抗体は、生物学的に活性な分子を用いて調製することができ、前記活性な分子は、例えば、毒素、特に、シュードモナス外毒素Ａ、植物毒素リシンＡ鎖、またはサポリン毒素、特に、抗体または機能性フラグメントの標的をヒトの身体の特定の細胞または組織に定めるのに好適な治療上活性な成分、ベクター（特に、タンパク質ベクターを含む）から選択されるか、または修飾抗体は、特に、抗体のフラグメントが使用される場合に、標識またはリンカーと結合され得る。抗体またはその機能性フラグメントのＰＥＧ化は、特に、治療適用に関して、宿主への活性成分の送達条件を改善するため、特に関心の高い実施形態である。ＰＥＧ化は、抗体または機能性フラグメントの認識部位の妨害を防止するように部位特異的であり得、これは、高分子量ＰＥＧを用いて行うことができる。ＰＥＧ化は、抗体もしくは機能性フラグメントの配列に存在する遊離システイン残基を通じて、または抗体もしくは機能性フラグメントのアミノ酸配列における遊離システイン残基の付加を通じて、達成することができる。

【0036】

一実施形態において、本発明は、修飾されている、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0037】

本発明の巨大分子は、抗体およびそのフラグメントだけでなく、本明細書において抗原結合性抗体模倣体とも称される、抗体のものを模倣する抗原に結合する能力を有する、人工タンパク質、ペプチド、および任意の化合物も含む。そのようなタンパク質は、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）およびアンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）を含む。アフィチンは、抗原に選択的に結合する能力を有する人工タンパク質である。アフィチンは、ＤＮＡ結合タンパク質Ｓａｃ７ｄに構造的に由来し、古細菌ドメインに属する微生物であるスルホロブス・アシドカルダリウスにおいて見出される。Ｓａｃ７ｄの結合表面のアミノ酸をランダム化することによって、例えば、Ｓａｃ７ｄの結合面の１１個の残基のランダムな置換に対応するバリアントを生成することによって、アフィチンライブラリーが生成され、得られたタンパク質ライブラリーを数回のリボソームディスプレイに供してもよい。親和性は、様々な標的、例えば、ペプチド、タンパク質、ウイルス、および細菌を対象とし得る。アフィチンは、抗体模倣体であり、バイオテクノロジーにおけるツールとして開発されている。アフィチンはまた、様々な酵素の特異的な阻害剤としても使用されている（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋら、Ｊ．ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３８３：５、２００８年）。当業者であれば、当該技術分野において公知の方法、特に、国際公開第２００８／０６８６３７号^２および上記に引用される刊行物に開示されるもの、特に、ファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリーの生成、ならびに本明細書に開示される抗原を使用したそれらのスクリーニングを使用して、必要とされる結合特性を有するアンチカリンを容易に開発することができる。アンチカリンは、抗原、タンパク質または小分子のいずれかに結合することができる、人工タンパク質である。アンチカリンは、天然結合性タンパク質のファミリーであるヒトリポカリンに由来する抗体模倣体である。アンチカリンは、約８倍小さく、約１８０個のアミノ酸のサイズおよび約２０ｋＤａの質量を有する（Ｓｋｅｒｒａ、Ｆｅｂｓ Ｊ．、２７５：１１、２００８年）。特に、特定の結合特性を有するアンチカリンのスクリーニングおよび選択を可能にするアンチカリンファージディスプレイライブラリーが、生成されている。当業者であれば、当該技術分野において公知の方法、特に、欧州特許第１２７０７２５号明細書、米国特許第８５３６３０７号明細書（Ｓｃｈｌｅｈｕｂｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．、９６：２～３、２００２年）、および上記に引用された刊行物に開示されるもの、特に、ファージディスプレイおよび／またはリボソームディスプレイライブラリーの生成ならびに本明細書に開示される抗原を使用したそれらのスクリーニングを使用して、必要とされる結合特性を有するアフィチンを容易に開発することができる。アンチカリンおよびアフィチンは、いずれも、細菌発現系を含む多数の発現系において産生され得る。したがって、本発明は、アフィチン、アンチカリン、および本明細書に記載される抗体の特性、特に、ＳＩＲＰａへの結合、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用の阻害、ＳＩＲＰｇに結合しないこと、Ｔ細胞に結合しないこと、Ｔ細胞の増殖を阻害しないこと、ＳＩＲＰｇとＣＤ４７との相互作用を阻害しないことに関する特性を有する他の同様の抗体模倣体を提供し、これらのすべてが、本発明の巨大分子として企図される。

【0038】

抗体またはそのフラグメントに関する本明細書に開示されるすべての実施形態は、しかるべき修正を加え、本発明の巨大分子、特に、抗原結合性抗体模倣体に変換される。

【0039】

本明細書において使用されるとき、「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原の一部を意味する。タンパク質抗原のエピトープは、立体構造エピトープおよび線形エピトープの２つのカテゴリーに分類され得る。立体構造エピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続な部分に対応する。線形エピトープは、抗原からのアミノ酸の連続的な配列に対応する。

【0040】

本発明において、ＳＩＲＰａ内に存在するペプチドおよび抗ＳＩＲＰａ抗体によって結合されるペプチドは、これらの抗体によって特異的に認識されるエピトープを構成する。

【0041】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも２つ、３つ、４つ、または５つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0042】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合し、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0043】

一実施形態において、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0044】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号７（ＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号８（ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0045】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号７（ＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号８（ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0046】

一実施形態において、本発明は、配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号９（ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号１０（ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0047】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号９（ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号１０（ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0048】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１１（ＧＲＥＬＩＹＮ）、ＤＶＥ、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0049】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１１（ＧＲＥＬＩＹＮ）、ＤＶＥ、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0050】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１３（ＡＲＥＬＩＹＮ）、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0051】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１３（ＡＲＥＬＩＹＮ）、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0052】

配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３のペプチドは、線形エピトープに対応する。

【0053】

これらの線形エピトープは、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニング（オーバーラップペプチドスキャンまたはペプスキャン分析と称されることも多い）によって、本発明者らによって特定されている。この技法は、標的タンパク質のオーバーラップセグメントおよび非オーバーラップセグメント由来のオリゴペプチド配列のライブラリーを使用し、それらが目的の抗体に結合する能力を試験する。標的タンパク質の異なる部分に由来する非隣接ペプチド配列を組み合わせ、この組み合わせたペプチドに対して立体構造の剛性を強めることによって（例えば、ＣＬＩＰＳ足場を使用することによって）（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎら、２００７、Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、Ｓｅｐ－Ｏｃｔ；２０（５）：２８３～９９）、不連続エピトープを、非常に高い信頼性および精度でマッピングすることができる（Ｇａｓｅｉｔｓｉｗｅら、２０１０－Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊａｎ；１７（１）：１６８～１７５）。ＨＥＦＬＢを含め、本発明の試験した抗体のすべてが、前記エピトープに特異的に結合する。

【0054】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、および配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0055】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、および配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）のペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0056】

一実施形態において、本発明は、配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）および配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0057】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）および配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）のペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0058】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）および「ＳＩＲ」からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0059】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）に記載されるアミノ酸配列のペプチドおよびＳＩＲアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0060】

配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、およびＳＩＲＰのペプチドは、立体構造エピトープに対応する。これらの立体構造エピトープは、本発明者らにより、当業者に周知のように、タンパク質分解保護手順（酵素消化：親和性クロマトグラフィーで固定化した抗体－抗原複合体のキモトリプシン、トリプシン）を使用し、続いて、質量分析法（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ）を行って、そのような目的のペプチドを検出し、シーケンシングすることによって、決定されている（Ｖａｎ ｄｅ Ｗａｔｅｒら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１９９７、８５巻）。使用した抗原は、ヒトＳＩＲＰａ（受託番号ＮＰ＿５４２９７０）であり、使用した本発明の抗体のうちの１つは、ＨＥＦＬＢバリアントであった。

【0061】

本発明による抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体は、天然のＳＩＲＰａ内の立体構造配置の前記ペプチドを含むかまたはそれからなる前記立体構造エピトープに特異的に結合する。

【0062】

配列番号７３（ＹＮＱＫ）に記載されるアミノ酸配列のペプチドは、受託番号ＮＰ＿５４２９７０によって参照されるヒトＳＩＲＰａアミノ酸配列の８０位～８３位のアミノ酸からなるペプチドに対応する。

【0063】

ＳＩＲアミノ酸配列のペプチドであるＳＩＲペプチドは、受託番号ＮＰ＿５４２９７０によって参照されるヒトＳＩＲＰａアミノ酸配列の１０５位～１０７位のアミノ酸からなるペプチドに対応する。

【0064】

本明細書において使用されるとき、「ＳＩＲＰａ」という用語は、哺乳動物種に由来するＳＩＲＰａタンパク質、好ましくは、ヒトＳＩＲＰａを指す（例えば、受託番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）およびＣＡＡ７１４０３）。

【0065】

本明細書において使用されるとき、「抗ＳＩＲＰａ抗体」という用語は、ＳＩＲＰａ、特に、ヒトＳＩＲＰａに特異的に結合する抗体を指す。

【0066】

本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントとエピトープ（またはエピトープを含む領域）との間の特異的な結合は、抗体が、特定のタンパク質または抗原（本明細書では、ＳＩＲＰａ）上のエピトープ（エピトープを含む領域）に対して認識できる親和性を呈すること示す。「認識できる親和性」は、約１０^－９Ｍ（ＫＤ）以上の親和性での結合を含む。好ましくは、結合は、結合親和性が、１０^－９Ｍ～１０^－１２Ｍ、任意選択で、１０^－９Ｍ～１０^－１０Ｍ、特に、１０^－１０Ｍである場合に、特異的と考えられる。結合ドメインが、標的と特異的に反応するかまたは標的に特異的に結合するかは、とりわけ、前記結合ドメインと標的タンパク質または抗原との反応を、前記結合ドメインと標的タンパク質以外のタンパク質または抗原との反応と比較することによって、容易に試験することができる。

【0067】

親和性は、当業者に周知の様々な方法によって、判定することができる。これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、およびスキャッチャードプロットが含まれるが、これらに限定されない。

【0068】

一実施形態において、本発明は、特に、Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって、ＳＩＲＰａに対して、１０^－９Ｍよりも低い、好ましくは１０^－１０Ｍよりも低い、より好ましくは１．１０^－１１Ｍよりも低いＫＤ値を有する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0069】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用を減少させる、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0070】

一実施形態において、本発明は、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合、特に、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａへの結合を、部分的または完全に、特に、完全に阻害する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0071】

本発明のそのような抗体は、ＳＩＲＰａに特異的に結合し、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用をアンタゴナイズする。

【0072】

特に、本発明の抗ＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体は、結合アッセイにおいて、陰性対照分子と比較した場合に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を、少なくとも５０％、６０％、７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％、または最も好ましくは１００％低減または阻害することができる。

【0073】

特に、本発明の抗ＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体は、結合アッセイにおいて、陰性対照分子と比較した場合に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を、５０％～１００％、好ましくは６０％～９０％、より好ましくは７０％～８０％低減または阻害することができる。

【0074】

競合的阻害によって抗体の特異性および親和性を判定するための方法は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９８年）、Ｃｏｌｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．、ＮＹ（１９９２；１９９３年）、Ｍｕｌｌｅｒ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．、９２：５８９～６０１（１９８３年）を参照されたい）、以下の実施例に記載されている。

【0075】

これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、フローサイトメトリー、およびＥＬＩＳＡアッセイが含まれるが、これらに限定されない。

【0076】

一実施形態において、本発明は、ＥＬＩＳＡによってＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間における競合的ＳＩＲＰａ結合アッセイで判定した場合に、５００ｎｇ／ｍｌ未満、特に、４００ｎｇ／ｍｌ未満、３００ｎｇ／ｍｌ未満、より特定には２００ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を有する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。

【0077】

一実施形態において、本発明は、ヒト単球におけるＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合サイトメトリーアッセイによって判定した場合に、５００ｎｇ／ｍｌ未満、特に、４００ｎｇ／ｍｌ未満、３００ｎｇ／ｍｌ未満、より特定には、２００ｎｇ／ｍｌ未満、１５０ｎｇ／ｍｌ未満、さらにより特定には、１００ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を有する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。

【0078】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰｇ、好ましくはヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0079】

本発明のそのような抗体は、ＳＩＲＰｇとＣＤ４７との間の相互作用に影響を及ぼさないか、またはそれを防止しない。

【0080】

本明細書において使用されるとき、「ＳＩＲＰｇ」という用語は、哺乳動物種に由来するシグナル調節タンパク質ガンマ（ＳＩＲＰガンマ、ＣＤ１７２ｇ、またはＳＩＲＰベータ２とも表記される）、好ましくはヒトＳＩＲＰｇに関する。

【0081】

本出願の実施例において使用されるヒトＳＩＲＰｇタンパク質の参照配列は、受託番号Ｑ９Ｐ１Ｗ８に関連する配列に対応する。

【0082】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰｇに対して、特に、Ｂｌｉｔｚ分析によって、１０^－９Ｍよりも高い、好ましくは１０^－８Ｍよりも高い、より好ましくは１０^－７Ｍよりも高いＫＤ値を有する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0083】

一実施形態において、ＣＤ４７のＳＩＲＰ－ｇへの結合を有意に阻害せず、アンタゴナイズせず、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合と有意に競合しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0084】

このアンタゴニスト作用は、本出願の実施例に定義される方法を使用して、判定することができる。

【0085】

本発明において、抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）が、ＢｌｉｔｚによるＳＩＲＰｇ結合競合アッセイにおいて、増加を誘導しないか、またはＣＤ４７のＫＤ値の１対数未満の増加を誘導する場合に、前記抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）は、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合をアンタゴナイズしないと考えることができる。

【0086】

一実施形態において、本発明は、Ｔ細胞、特に、ＣＤ３＋Ｔ細胞に特異的に結合しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0087】

特に、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体は、哺乳動物種に由来するＴ細胞、特に、ヒトＴ細胞に結合しない。

【0088】

特に、抗ＳＩＲＰａ抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）は、健常ドナーに由来するＰＢＭＣから単離されたヒトＴ細胞の集団において、ヒトＴ細胞集団のうちの１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％未満、最も好ましくは１％未満が、前記ＳＩＲＰａ抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）によって認識される場合、ヒトＴ細胞に特異的に結合しないと考えられる。

【0089】

この作用は、本出願の実施例に記載される方法によって測定することができる。

【0090】

一実施形態において、本発明は、好ましくは哺乳動物種に由来する、Ｔ細胞、特に、ＣＤ３＋Ｔ細胞、より好ましくはヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0091】

特に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、Ｔ細胞の増殖が、陰性対照と比較した場合に、３０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満低減される場合、Ｔ細胞の増殖を有意に阻害しないと考えられる。

【0092】

Ｔ細胞の増殖は、様々な方法によって判定することができる。例えば、Ｔ細胞の増殖は、本出願の実施例に記載されるように、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定することができる。

【0093】

一実施形態において、本発明は、界面活性タンパク質のＳＩＲＰ－ａへの結合を有意に阻害せず、アンタゴナイズせず、界面活性タンパク質のＳＩＲＰａへの結合と有意に競合しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0094】

本明細書において使用されるとき、「界面活性タンパク質」は、界面活性恒常性および肺の免疫性に有意に寄与する、コラーゲン含有Ｃ型（カルシウム依存性）レクチンである（考察については、Ｋｉｓｈｏｒｅら、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＳＰ－Ａ ａｎｄ ＳＰ－Ｄ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４３（９）、１２９３～３１５、２００６年を参照されたい）。

【0095】

本明細書において使用されるとき、「界面活性タンパク質」は、哺乳動物種に由来する界面活性タンパク質、好ましくは、ヒト界面活性タンパク質を指す。

【0096】

一実施形態において、本発明は、ヒト界面活性タンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）のＳＩＲＰａへの結合を阻害しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0097】

一実施形態において、本発明は、ヒト界面活性タンパク質Ａ（ＳＰ－Ａ）のＳＩＲＰａへの結合を阻害しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0098】

一実施形態において、本発明は、界面活性タンパク質とＳＩＲＰａとの間の相互作用をアンタゴナイズしない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0099】

ＳＩＲＰａと界面活性タンパク質との間の競合は、当業者に周知の方法を使用して、競合アッセイによって判定することができる。これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、およびＥＬＩＳＡアッセイが含まれるが、これらに限定されない。

【0100】

本発明において、抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）が、ＢｌｉｔｚによるＳＩＲＰｇ結合競合アッセイにおいて、増加を誘導しないか、または界面活性タンパク質のＫＤ値の１対数未満の増加を誘導する場合に、前記抗体（またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体）は、界面活性タンパク質のＳＩＲＰｇへの結合をアンタゴナイズしないと考えることができる。

【0101】

一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰｂに弱く結合するか、またはＳＩＲＰｂに特異的に結合しない、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0102】

本明細書において使用されるとき、「ＳＩＲＰｂ」という用語は、哺乳動物種に由来するＳＩＲＰｂタンパク質（ＳＩＲＰβ、シグナル調節タンパク質ベータ－１、ＳＩＲＰ－ベータ－１、ＣＤ１７２抗原様ファミリーメンバーＢ、またはＣＤ１７２ｂとも表記される）、好ましくは、ヒトＳＩＲＰｂを指す。

【0103】

本出願の実施例において使用されるヒトＳＩＲＰｂタンパク質の参照配列は、受託番号Ｑ５ＴＦＱ８－１に関連する配列に対応する。

【0104】

一実施形態において、本発明は、特に、Ｂｌｉｔｚ分析によって、ＳＩＲＰｂに対して、１０^－９Ｍよりも高い、好ましくは１０^－８Ｍよりも高いＫＤを有する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0105】

一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）、配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）、または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0106】

１８Ｄ５／バリアントＡ／バリアントＢ
一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0107】

バリアントＣ
一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0108】

バリアントＥ
一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0109】

バリアントＦ
一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0110】

バリアントＥＦ
一実施形態において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３が、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0111】

本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、本明細書に提供されるヒト抗体のＨＣＤＲ１および／もしくはＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または本明細書に提供されるヒト抗体のＬＣＤＲ１および／もしくはＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し得る。

【0112】

一実施形態において、本抗体は、提供されるヒト抗体のＣＤＲのうちの１つまたは複数のアミノ酸配列バリアントを含み、このバリアントは、１つまたは複数の、ＣＤＲ残基内もしくはそれに隣接するアミノ酸の挿入、および／またはＣＤＲ残基内もしくはそれに隣接する欠失、および／またはＣＤＲ残基の置換を含む（置換が、そのようなバリアントを生成するためのアミノ酸改変の好ましい種類である）。

【0113】

一実施形態において、本発明は、
－ 配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、ならびに／または
－ 配列番号３１、配列番号３２、および配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0114】

一実施形態において、本発明は、
－ 配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、重鎖可変ドメイン、ならびに
－ 配列番号３１、配列番号３２、および配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0115】

特定の可変ドメインの配列が、以下の表１に提供される。

【0116】

【表1】

【0117】

本発明において例証される抗体の可変ドメインの配列は、表２に示される配列の組合せから推測することができる。

【0118】

【表2】

【0119】

一実施形態において、配列番号３３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメインを含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0120】

一実施形態において、本発明は、
－ 配列番号３３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、ならびに
－ 配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、重鎖可変ドメイン、
好ましくは、
－ 配列番号２９および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、重鎖可変ドメイン、
より好ましくは、
－ 配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、重鎖可変ドメインを含む、
上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0121】

一実施形態において、本発明は、
－ 配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン、
または
－ 配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、重鎖可変ドメイン、および
－ 配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、軽鎖可変ドメイン
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0122】

一実施形態において、本抗体または抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体は、重鎖可変ドメインの３３位のアミノ酸Ｗ（Ｗ３３）の置換を有さず、この位置は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、または配列番号３０に関して特定され、かつ／または軽鎖可変ドメインの３９位のアミノ酸Ｙ（Ｙ３９）、５５位のＲ（Ｒ５５）、および／もしくは６０位のＦ（Ｆ６０）の置換を有さず、この位置は、配列番号３１、配列番号３２、または配列番号３３に関して特定され、特に、重鎖可変ドメインのＷ３３位、ならびに軽鎖可変ドメインのＹ３９位、Ｒ５５位、Ｆ６０位の置換を有さない。

【0123】

本発明において、本抗体は、任意の重鎖および軽鎖定常ドメインを用いて産生することができる。

【0124】

一実施形態において、本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であって、特に、抗体の軽鎖定常ドメインが、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来し、より特定には、軽鎖定常ドメインが、配列番号３５の配列からなり、抗体の重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（野生型または変異型）重鎖定常ドメイン、特に、ヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインに由来し、より特定には、抗体の重鎖定常ドメインが、配列番号３４の配列からなる、ヒト化モノクローナル抗体である。

【0125】

当業者には周知のように、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプの選択は、特定の機能が必要とされるかどうか、および好適なインビボ半減期の必要性を中心に行われる。例えば、がん細胞の選択的な根絶のために設計される抗体は、補体活性化を許容し、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性によるエフェクター媒介性細胞殺滅を許容する、活性型アイソタイプを必要とすることが典型的である。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３（半減期が短い）の両方のアイソタイプ、特に、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ（野生型およびバリアント）が、これらの基準を満たす。特に、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプ（特に、ヒト野生型およびバリアントＩｇＧ１アイソタイプ）に応じて、本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、および／またはＡＤＣＰ機序によって、ＳＩＲＰａを発現する細胞に対して細胞毒性となり得る（Ｓａｌｆｅｌｄ、ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、（英）２５巻、１２号、２００７年、Ｉｒａｎｉら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６７巻、ｉｓｓｕｅ ２、ｐａｒｔ Ａ、２０１５年）。実際に、結晶性フラグメント（Ｆｃ）領域は、間接的なエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）、および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を媒介する様々な補助分子と相互作用する。

【0126】

【表3】

【0127】

一実施形態において、本発明は、
－ 配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
－ 配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、および
－ 配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。

【0128】

【表4】

【0129】

一実施形態において、本発明は、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）の非抑制性細胞への分化を誘導することができる、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0130】

一実施形態において、本発明は、前記非抑制性細胞が、ＩＬ６、ＩＬ１２、およびＴＮＦなどの炎症促進性サイトカインを分泌し、ＩＬ１０およびＴＧＦβなどの抗炎症性サイトカインを分泌しないかまたは低いレベルで分泌する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0131】

一実施形態において、本発明は、前記非抑制性細胞が、ｉＮＯＳを発現する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する

【0132】

一実施形態において、本発明は、前記非抑制性細胞が、ＭＨＣクラスＩＩマーカーを発現せず、マーカーＣＤ８０－ＣＤ８６を発現する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する

【0133】

一実施形態において、本発明は、前記非抑制性細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の少なくとも１つのマーカーを発現する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0134】

一実施形態において、本発明は、前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、マクロファージのＭ２分極化を阻害することができ、かつ／または炎症促進性のＭ１型マクロファージを優先する、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0135】

本発明の抗体は、炎症促進性環境を誘導するために、マクロファージ分極化を修飾することができる、すなわち、本抗体は、Ｍ２型マクロファージによって提供される抗炎症性シグナルを阻害し、かつ／またはＭ１型マクロファージによって提供される炎症促進性シグナルを優先することができる。このアプローチにより、エフェクターＴ細胞の作用、特に、がん細胞の排除に好適な抗炎症性環境を再構築することが可能となる。

【0136】

ＳＩＲＰａ抗体
上記に定義される抗体について列挙された実施形態は、しかるべき修正を加え、本発明の他の態様で列挙された抗体に対して繰り返される。

【0137】

別の態様において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、および配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0138】

別の態様において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、および配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）のペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0139】

別の態様において、本発明は、配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）および配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0140】

別の態様において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）および配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）のペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0141】

別の態様において、本発明は、配列番号７３（ＹＮＱＫ）およびＳＩＲからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含む立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0142】

別の態様において、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）およびＳＩＲのペプチドを含むかまたはそれからなる立体構造エピトープに特異的に結合する、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0143】

別の態様において、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む、重鎖、ならびに／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む、軽鎖
を含む、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、
前記ＣＤＲは、
－ ＨＣＤＲ１が、配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ２が、配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、
－ ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）、配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）、または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ１が、配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ２が、配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、
－ ＬＣＤＲ３、配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなる
として定義される、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0144】

本発明はまた、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／またはＴ細胞に特異的に結合しない、および／またはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／またはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0145】

適用
別の態様において、本発明は、医薬品として使用するための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
に関する。

【0146】

本発明はまた、治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
を投与することを含む、方法に関する。

【0147】

本発明はまた、医薬品の製造における、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0148】

別の態様において、本発明は、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療において使用するための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
に関する。

【0149】

本明細書において定義されるように、「単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある状態」は、炎症性がんおよび浸潤骨髄系細胞（特に、浸潤ＭＤＳＣおよび／もしくはＴＡＭ細胞）を有するがんを含むがん、感染性疾患、外傷、自己免疫疾患（リウマチ性関節炎、１型糖尿病、ループス、乾癬など）、ワクチン接種、慢性炎症性疾患（クローン秒および潰瘍性大腸炎を含む、炎症性腸疾患など）、敗血症性ショック（ｓｃｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ）、慢性感染性疾患（シュードモナスおよびＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、または移植片機能不全に対応する。

【0150】

本発明はまた、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
を投与することを含む、方法に関する。

【0151】

本発明はまた、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療のための医薬品の製造における、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0152】

一実施形態において、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療において使用するための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0153】

実際に、ＳＩＲＰａは、チェックポイント阻害剤として作用し、マクロファージ分極化に関与する。特に、ＳＩＲＰａの遮断は、１型マクロファージ（Ｍ１炎症促進性マクロファージ＝Ｍ（ＩＦＮｇ））と関連するマクロファージの炎症促進性機能を誘導し、腫瘍におけるマクロファージの抑制活性を阻害するが、これは、マクロファージの炎症促進性プロファイルは、２型マクロファージ（Ｍ２型高ファゴサイトーシス活性＝Ｍ（ＩＬ４））により得られるためである。したがって、ＳＩＲＰａのアンタゴニストは、Ｍ２表現型のマクロファージ分極化を阻害することができ、かつ／または炎症促進性Ｍ１型マクロファージを優先し、治療において使用することができる。

【0154】

本明細書において定義されるように、「炎症促進性マクロファージを優先するようにマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある状態」は、例えば、固形がん、液体がん、感染性疾患、外傷、自己免疫疾患、ワクチン接種、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、または慢性炎症性疾患に対応する。

【0155】

本発明はまた、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体を投与することを含む、方法に関する。

【0156】

一実施形態において、本発明はまた、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療のための医薬品の製造における、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0157】

炎症促進性細胞を優先するようにマクロファージの分極化を修飾することは、多数の病理または状況において有用であり得る。上述のように、この修飾は、がんの文脈において、マクロファージの抗腫瘍活性を回復させ、かつ／またはＭ２型マクロファージの炎症促進活性を防止するために、特に有用である。過剰なＭ２型マクロファージ分極化に起因する不適切な免疫応答もまた、感染性疾患、線維症、ワクチン接種、外傷、および慢性炎症性疾患において生じる。

【0158】

したがって、特定の実施形態によると、抗ＳＩＲＰａ抗体は、肺がん、中皮腫がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、脳のがん、乳がん、結腸がん、肉腫、膵臓がん、頭頸部がん、腎臓がん、胸腺腫、神経膠腫、黒色腫、および血液がん、例えば、リンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、白血病、例えば、Ｔ細胞性およびＢ細胞性急性もしくは慢性リンパ球性白血病（ＡＬＬもしくはＣＬＬ）、または急性もしくは慢性骨髄性白血病（ＡＭＬもしくはＣＭＬ）、ならびに骨髄腫からなる群から選択されるがんを有する個体を治療するために使用することができる。

【0159】

一実施形態において、本発明は、がん（特に、炎症性がん、ならびに浸潤骨髄系細胞、特に浸潤ＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスまたはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療において使用するための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体
に関する。

【0160】

一実施形態において、本発明は、がん（特に、炎症性がん、ならびに浸潤骨髄系細胞、特に、浸潤ＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスまたはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体
を投与することを含む、方法に関する。

【0161】

一実施形態において、本発明は、がん（特に、炎症性がん、ならびに浸潤骨髄系細胞、特に、浸潤ＭＤＳＣおよび／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスまたはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療のための医薬品の製造における、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0162】

一実施形態において、本発明は、上記に定義される使用のための、上記に定義される抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体であって、本発明の前記抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体が、ＳＩＲＰａ陽性腫瘍を呈する患者に投与される、抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0163】

一実施形態において、本発明は、ワクチン接種において使用するための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
に関する。

【0164】

一実施形態において、本発明は、対象のワクチン接種の方法であって、前記対象に、有効量の、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
を投与することを含む、方法に関する。

【0165】

一実施形態において、本発明は、ワクチンの製造のための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0166】

抑制性骨髄系細胞は、特に、幼児において、ワクチン接種の有効性を制限する。したがって、抗ＳＩＲＰａ／ｇは、抗ＳＩＲＰａによって提供されるワクチン応答に対する利益を制限し、Ｔリンパ球がワクチン接種に応答することを防止するであろう。

【0167】

本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、好適な経路、例えば、静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、または筋肉内（ＩＭ）で、対象に投与することができる。

【0168】

本抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独で、または別の治療剤、例えば、第２のヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性フラグメントと組み合わせて、投与することができる。別の実施例において、本抗体は、治療用細胞組成物などと組み合わせて、別の薬剤、例えば、免疫抑制剤、赤血球新生刺激剤（ＥＳＡ）と一緒に投与される。

【0169】

一実施形態において、本発明は、抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性フラグメントが、第２の治療剤と組み合わされる、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体に関する。

【0170】

特に、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、臨床開発中またはすでに販売されている薬剤を用いて腫瘍免疫回避機序を克服するためのいくつかの他の可能性のある戦略と組み合わせることができる（Ａｎｔｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０、６２５８－６２６８、２０１４年の表１を参照されたい）：
１－例えば、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１、または抗ＰＤ－Ｌ１分子を使用することによって、獲得免疫の阻害を逆転させること（Ｔ細胞チェックポイント経路を遮断すること）、
２－例えば、アゴニスト抗ＣＤ１３７（抗４－１ＢＢ）抗体またはＣＤ１３７（４－１ＢＢ）リガンドを含むアゴニスト分子を使用して、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）を標的とすることによって、獲得免疫を切り替えること（アゴニスト分子、特に、抗体を使用して、Ｔ細胞共刺激受容体シグナル伝達を促進すること）、
３－先天免疫細胞の機能を改善すること、
４－例えば、ワクチンに基づく戦略によって、免疫系を活性化すること（免疫細胞のエフェクター機能を強化すること）。

【0171】

第２の治療剤の投与は、抗ＳＩＲＰａ抗体の投与と同時であってもよいし、そうでなくてもよい。第２の薬剤の性質に応じて、共投与は、「コンボ（ｃｏｍｂｏ）」としても知られる組合せ薬（製品）の形態で調製されてもよい。コンボは、２つ以上の活性な医薬成分を、固定用量で製造され、分配される単一の剤形で組み合わせたものを含む、固定用量の組合せである。しかしながら、用量レジメンおよび／または投与経路は、異なってもよい。

【0172】

好ましい実施形態において、この第２の治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、免疫療法剤、細胞療法剤（ＣＡＲ－Ｔ細胞など）、抗生物質およびプロバイオティクスからなる群から選択される。

【0173】

特に、本発明の文脈において有用な免疫療法剤は、治療用ワクチン（ＤＮＡ、ＲＮＡ、もしくはペプチドワクチン）、免疫チェックポイント遮断剤もしくは活性化剤、特に、獲得免疫細胞（ＴもしくはＢリンパ球）のもの、またはイムノコンジュゲート、例えば、抗体－薬物コンジュゲートからなる群から選択される。

【0174】

本明細書において使用されるとき、「免疫療法剤」という用語は、特に、がんワクチンを、関心の高い生物学的現象から、ナイーブＴ細胞の数およびレパートリーを増加させるＴ細胞成長因子、樹状細胞（ＤＣ）の数を増加させる成長因子、ＤＣおよび他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するアゴニスト、がんワクチンを許容および増加させるアジュバント、Ｔ細胞を活性化および刺激するアゴニスト、Ｔ細胞チェックポイント遮断の阻害剤、免疫Ｔ細胞の成長および生存を増加させるＴ細胞成長因子、がん細胞を阻害、遮断、もしくは中和する薬剤、ならびに免疫細胞由来の免疫抑制性サイトカインを含む、有効な治療剤にすることができる薬剤を指す。

【0175】

多数の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤が、当該技術分野において公知である。本発明の文脈において、有用であり得る獲得免疫細胞（ＢまたはＴリンパ球）の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤の例は、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ２、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ４０、抗ＨＶＥＭ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ１６０、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＴＩＭ－１／３、抗ＬＡＧ－３、抗２Ｂ４、および抗ＯＸ４０、抗ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０－Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、およびＢ細胞受容体アゴニスト、特に、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、抗ＣＤ１３７である。

【0176】

前記免疫療法剤はまた、特に、抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ５２からなる群から選択される、腫瘍抗原を標的とする抗体であり得る。

【0177】

本抗体は、約１ｎｇ／体重ｋｇ～約３０ｍｇ／体重ｋｇ、またはそれ以上の有効用量で提供され得る。特定の実施形態において、投薬量は、１μｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１０μｇ／ｋｇ～最大１０ｍｇ／ｋｇ、または１００μｇ／ｋｇ～最大５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。

【0178】

「有効用量」または「有効投薬量」または「有効量」という用語は、所望される作用を達成するかまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「有効用量」という用語は、すでに疾患を患っている患者において、疾患およびその併発症を治癒するかまたは少なくとも部分的に停止させるのに十分な量を包含することを意味する。この使用に有効な量または用量は、治療しようとする状態、送達される抗体コンストラクト、治療の状況および目的、疾患の重症度、これまでの治療法、患者の臨床病歴および治療剤に対する応答、投与の経路、患者のサイズ（体重、体表面、または器官サイズ）および／または患者の状態（年齢および全般的な健康状態）、ならびに患者自身の免疫系の全般的な状況に依存するであろう。適正な用量は、患者に１回または一連の投与で投与することができるように、さらには最適な治療作用を得るために、調節することができる。

【0179】

そのような目的での投薬は、必要に応じて、例えば、毎日、１週間に２回、１週間に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、または再発中に必要に応じて、繰り返され得る。

【0180】

一態様において、本発明はまた、診断試験、特に、個別化された医薬、より特定には、コンパニオン診断試験における使用のための、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
に関する。

【0181】

一実施形態において、本発明は、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞に特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
を使用する診断方法、特に、個別化された医薬、より特定には、コンパニオン診断試験における、診断の方法に関する。

【0182】

一実施形態において、本発明は、診断試験、特に、個別化された医薬、より特定には、コンパニオン診断試験における、診断試験のための医薬品の製造における、
－ 上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントもしくは抗原結合性抗体模倣体、または
－ ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞に特異的に結合しない、および／もしくはＴ細胞の増殖を阻害しない、および／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、
特に、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、Ｔ細胞に特異的に結合しない、Ｔ細胞の増殖を阻害しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合を阻害しない、抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体
の使用に関する。

【0183】

一態様において、本発明はまた、インビトロまたはエキソビボにおける診断の方法、特に、個別化された医薬において、より特定には、コンパニオン診断において使用するのに好適な診断の方法であって、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性模倣体は、対象から事前に取得されたサンプルにおけるＳＩＲＰａ＋細胞の検出、および任意選択でＳＩＲＰａの発現の定量化のために使用される、方法に関する。

【0184】

一態様において、本発明はまた、診断試験における使用、特に、個別化された医薬またはコンパニオン診断試験における使用に好適な医薬品の製造における、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性模倣体の使用に関する。

【0185】

一態様において、本発明はまた、個体から事前に取得された生物学的サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現および／または発現レベルの判定のための手段としての、少なくとも１つの本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体の使用に関する。

【0186】

一態様において、本発明はまた、対象におけるＳＩＲＰａ陽性細胞を、前記対象から事前に取得した生物学的サンプルから判定するためのインビトロまたはエキソビボでの方法であって、
ｉ）本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体を使用して、前記対象から事前に取得した生物学的サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現および／または発現レベルをインビトロで判定すること
を含む、方法に関する。

【0187】

一態様において、本発明はまた、ＳＩＲＰａが、対象、特に、がん対象における治療に対する応答を予測するバイオマーカーとして使用される方法における、本発明の少なくとも１つの抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体の使用、特に、インビトロまたはエキソビボでの使用に関する。

【0188】

一態様において、本発明はまた、治療、特に、本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体での治療に対するがん対象の応答を予測する、インビトロまたはエキソビボでの方法であって、
－ 特に、本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体を用いて、対象から事前に取得された腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現レベルを判定すること、および
－ ＳＩＲＰａの発現レベルを、非応答対象集団におけるＳＩＲＰａの発現レベルを表す値と比較すること
を含み、
対象の腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａのより高い発現レベルが、治療に応答すると予想される対象を示す、方法に関する。

【0189】

一態様において、本発明はまた、治療に対する対象の応答、特に、がんと診断された対象の応答を予測するバイオマーカーとして、ＳＩＲＰａの存在を判定することを含む、対象から事前に取得されたサンプルにおけるＳＩＲＰａ＋細胞の存在をインビトロまたはエキソビボで判定する方法であって、
－ 特に、請求項１～１３のうちいずれか一項に記載の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体を用いて、対象から事前に取得された腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａの発現レベルを判定すること、および
－ ＳＩＲＰａの発現レベルを、非応答対象集団におけるＳＩＲＰａの発現レベルを表す値と比較すること
を含み、
対象の腫瘍サンプルにおけるＳＩＲＰａのより高い発現レベルが、治療に応答すると予想される患者を示す、方法に関する。

【0190】

組成物
別の態様において、本発明は、上記に定義される抗体またはその抗原結合性フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。

【0191】

本明細書において使用されるとき、「医薬組成物」は、対象または患者、例えば、哺乳動物、特に、ヒトに投与するのに好適な組成物を包含することを意味する。一般に、「医薬組成物」は、滅菌であり、通常、対象内で望ましくない応答を誘起し得る混入物質を含まない（例えば、医薬組成物中の化合物は、医薬品グレードである）。医薬組成物は、それを必要とする対象または患者に、経口、頬内、直腸内、非経口、腹腔内、皮内、気管内などを含む、多数の異なる投与経路を介して投与するように設計され得る。

【0192】

本明細書において使用されるとき、「薬学的に許容される担体」は、概して、安全で非毒性かつ生物学的にもそれ以外にも望ましくないことのない、医薬組成物を調製するのに有用である賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントを包含し、獣医学上の使用ならびにヒト医薬上の使用に許容される賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントを含むことを意味する。「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用されるとき、１つおよび１つを上回るそのような賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントをいずれも含む。

【0193】

特に、本発明は、活性成分として上記に定義される抗体またはその抗原結合性フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。

【0194】

組み合せ製品
別の態様において、本発明は、活性成分として、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体、および第２の治療剤を含み、前記活性成分が、別個、逐次、または組合せ療法のため、特に、組合せまたは逐次使用のために製剤化される、治療手段、特に、組合せ製品手段に関する。

【0195】

特に、本発明は、医薬品として、同時、別個、または逐次的に使用するための、上記に定義される抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合性抗体模倣体および第２の治療剤を含む、組合せ製品に関する。

【0196】

一実施形態において、本発明は、第２の治療剤が、化学療法剤、放射線療法剤、細胞療法剤、免疫療法剤、抗生物質およびプロバイオティクスからなる群から選択される、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0197】

一実施形態において、本発明は、前記免疫療法剤が、治療用ワクチン、免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤、特に、獲得免疫細胞（ＴおよびＢリンパ球）のもの、ならびに抗体－薬物コンジュゲートからなる群から選択される、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0198】

一実施形態において、本発明は、獲得免疫細胞（ＴおよびＢリンパ球）の前記免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤が、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ２、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ４０、抗ＨＶＥＭ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ１６０、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＴＩＭ－１／３、抗ＬＡＧ－３、抗２Ｂ４、および抗ＯＸ４０、抗ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０－Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、およびＢ細胞受容体アゴニストからなる群から選択される、特に、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、および抗ＣＤ１３７からなる群から選択される、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0199】

一実施形態において、前記免疫療法剤は、特に、抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ５２からなる群から選択される、腫瘍抗原を標的とする抗体である。

【0200】

一態様において、本発明は、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療において、同時、別個、または逐次的に使用するための、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0201】

一実施形態において、本発明は、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療を、それを必要とする対象におい行う方法であって、前記対象に、有効量の上記に定義される組合せ製品を同時、別個、または逐次的に投与することを含む、方法に関する。

【0202】

一実施形態において、本発明は、単球系骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療のための医薬品の製造における、上記に定義される組合せ製品の使用に関する。

【0203】

一態様において、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療において、同時、別個、または逐次的に使用するための、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0204】

一実施形態において、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の上記に定義される組合せ製品を同時、別個、または逐次的に投与することを含む、方法に関する。

【0205】

一実施形態において、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージ分極化を修飾することによって改善または予防される傾向にある任意の状態の治療のための医薬品の製造における、上記に定義される組合せ製品の使用に関する。

【0206】

一態様において、本発明は、がん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスもしくはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、および移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療において、同時、別個、もしくは逐次的に使用するため、またはワクチン接種において使用するための、上記に定義される組合せ製品に関する。

【0207】

一実施形態において、本発明は、がん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスまたはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の上記に定義される組合せ製品を同時、別個、または逐次的に投与することを含む、方法に関する。

【0208】

一実施形態において、本発明は、がん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、慢性感染性疾患（シュードモナスもしくはＣＭＶによるものなど）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、および移植片機能不全からなる群から選択される病理の治療のため、またはワクチン接種において使用するための医薬品の製造における、上記に定義される組合せ製品の使用に関する。

【0209】

核酸
別の態様において、本発明は、上記に定義される抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする、単離された核酸分子に関する。

【0210】

本明細書において使用されるとき、核酸分子は、二本鎖および一本鎖、直鎖および環状であり得る。核酸分子は、ベクターに含まれることが好ましく、ベクターは、宿主細胞に含まれることが好ましい。

【0211】

一実施形態において、本発明は、上記に定義される抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする単離された核酸分子であって、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９から選択される少なくとも１つの配列を含むかまたはそれからなる、核酸分子に関する。

【0212】

一実施形態において、本発明は、上記に定義される抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする、単離された核酸分子であって、
－ 好ましくは、
－ 配列番号５８、配列番号５９、もしくは配列番号６０、
－ 配列番号６１もしくは配列番号６２、および
－ 配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、もしくは配列番号６６
を含む、前記抗体の重鎖可変ドメインをコードする配列、
ならびに／または
－ 好ましくは、
－ 配列番号６７、
－ 配列番号６８、および
－ 配列番号６９
を含む、前記抗体の軽鎖可変ドメインをコードする配列
を含む、核酸分子に関する。

【0213】

【表5】

【0214】

特に、本発明は、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、および配列番号５５から選択される配列を含むかまたはそれからなる核酸分子に関する。

【0215】

【表6】

【0216】

ベクター
別の態様において、本発明は、上記に定義される核酸分子を含む、ベクターに関する。

【0217】

本明細書において使用されるとき、「ベクター」は、遺伝子材料を細胞に移入させるための輸送手段として使用される核酸分子である。「ベクター」という用語は、プラスミド、ウイルス、コスミド、および人工染色体を包含する。一般に、操作されたベクターは、複製起点、多重クローニング部位、および選択可能なマーカーを含む。ベクター自体は、一般には、インサート（導入遺伝子）およびベクターの「骨格」としての機能を果たすより大きな配列を含む、ヌクレオチド配列、広くはＤＮＡ配列である。近代的ベクターは、導入遺伝子インサートおよび骨格以外に、追加の特性：プロモーター、遺伝子マーカー、抗生物質耐性、レポーター遺伝子、標的化配列、タンパク質精製タグを包含し得る。特に、発現ベクター（発現コンストラクト）と称されるベクターは、標的細胞における導入遺伝子の発現のためのものであり、制御配列を有することが一般的である。

【0218】

宿主細胞
別の態様において、本発明は、上記に定義されるベクターを含む単離された宿主細胞に関する。

【0219】

本明細書において使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、本発明の抗体コンストラクトをコードするベクター、外因性核酸分子、およびポリヌクレオチドのレシピエント；ならびに／または抗体コンストラクト自体のレシピエントであり得るかまたはそうである、任意の個々の細胞または細胞培養物を含むことが意図される。細胞へのそれぞれの材料の導入は、形質転換、トランスフェクションなどの手段を用いて行うことができる。「宿主細胞」という用語はまた、単一の細胞の子孫または潜在的な子孫を含むことが意図される。好適な宿主細胞には、原核生物細胞または真核生物細胞が含まれ、さらに、細菌、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、および動物細胞、例えば、昆虫細胞および哺乳動物細胞、例えば、マウス、ラット、ウサギ、マカク、またはヒトが含まれるが、これらに限定されない。

【0220】

キット
別の態様において、本発明は、
－ 上記に定義される抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、
－ 前記抗体もしくは抗原結合部をコードする核酸分子、
－ 前記核酸分子を含むベクター、および／または
－ 前記ベクターを含む細胞
を含むキットに関する。

【0221】

便宜上、本発明の抗体は、キット、すなわち、試薬を組み合わせてパッケージングしたものにおいて、提供され得る。

【0222】

本発明の文脈において、「キット」という用語は、２つ以上の構成要素（そのうちの１つは、本発明の抗体もしくはその抗原結合部、核酸分子、ベクター、または細胞に対応する）が、容器、受容器、またはその他に一緒にパッケージングされていることを意味する。キットは、したがって、ある特定の目的を達成するのに十分な製品および／または用具のセットとして記載され得、これは、単一のユニットとして販売され得る。

【0223】

キットは、投与に適切な投薬量の本発明の抗体コンストラクトを含む、任意の適切な形状、サイズ、および材料の１つ以上の受容器（バイアル、アンプル、容器、シリンジ、ボトル、バッグなど）を含み得る。キットは、さらに、使用法（例えば、リーフレットまたは使用説明書の形態）、本発明の抗体コンストラクトを投与するための手段、例えば、シリンジ、ポンプ、注入器など、本発明の抗体コンストラクトを再構築するための手段、および／または本発明の抗体コンストラクトを希釈するための手段を含んでいてもよい。

【0224】

一実施形態において、本発明は、単回投与単位のための上記定義されるキットに関する。本発明のキットはまた、乾燥／凍結乾燥抗体コンストラクトを含む第１の受容器および水溶性製剤を含む第２の受容器を含んでもよい。本発明のある特定の実施形態において、単一チャンバおよび複数チャンバの事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよび凍結乾燥シリンジ）を含むキットが、提供される。

【0225】

抗原
一態様において、本発明は、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなるポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0226】

一実施形態において、本発明は、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなり、最大３００個のアミノ酸のサイズを有する、ポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0227】

一実施形態において、本発明のポリペプチドは、５０～３００個、好ましくは、１００～２５０個のアミノ酸のサイズを有する。

【0228】

一実施形態において、本発明のポリペプチドは、最大５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、または３００個のアミノ酸のサイズを有する。

【0229】

一実施形態において、本発明は、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列、および配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、または配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなるヒトＳＩＲＰａの少なくとも１つのエピトープ配列を含むかまたはそれからなるポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0230】

一実施形態において、本発明は、配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる、ポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0231】

一実施形態において、本発明は、配列番号７０、配列番号７１、および配列番号７２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むかまたはそれからなり、最大３００個のアミノ酸の配列からなる、ポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0232】

一実施形態において、本発明は、配列番号７３（ＹＮＱＫ）に記載されるアミノ酸配列のペプチドおよび／またはＳＩＲＰａ内のＳＩＲアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなり、最大３００個のアミノ酸の配列からなる、ポリペプチド、特に、抗原に関する。

【0233】

抗体を製造する方法
一態様において、本発明はまた、抗体、特に、本発明の抗体を製造する方法であって、非ヒト動物、特に、非ヒト哺乳動物を、上記に定義される少なくとも１つの抗原に対して免疫化するステップ、および特に、得られた血清を前記免疫化した非ヒト動物から採取して、前記抗原を対象とする抗体を得るステップを含む、方法に関する。

【0234】

特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、非ヒト動物を、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して、免疫化すること、および特に、結果として得られる血清を前記免疫化した非ヒト動物から採取して、前記抗原を対象とする抗体を得ることを含む、方法に関する。

【0235】

特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、非ヒト動物を、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列、および配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、または配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるヒトＳＩＲＰａの少なくとも１つのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して、免疫化すること、ならびに特に、結果として得られる血清を前記免疫化した非ヒト動物から採取して、前記抗原を対象とする抗体を得ることを含む、方法に関する。

【0236】

特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、非ヒト動物を、配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、および配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して、免疫化すること、ならびに特に、結果として得られる血清を前記免疫化した非ヒト動物から採取して、前記抗原を対象とする抗体を得ることを含む、方法に関する。

【0237】

抗体を選択する方法
一態様において、本発明は、本発明の抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体を選択する方法であって、以下の：
ａ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、ＳＩＲＰａ、特に、上記に定義される抗原に結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例１、２、および３に記載される方法によって）、
ｂ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、ＳＩＲＰｂに結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例７および８に記載される方法によって）、
ｃ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、ＳＩＲＰｇに結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例９および１０に記載される方法によって）、
ｄ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａへの結合を阻害する能力を試験するステップ（例えば、実施例４および５に記載される方法によって）、
ｅ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、Ｔ細胞に結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例１２に記載される方法によって）、
ｆ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、Ｔ細胞増殖を阻害する能力を試験するステップ（例えば、実施例１３に記載される方法によって）、
ｇ．抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体が、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を阻害する能力を試験するステップ（例えば、実施例１１に記載される方法によって）
を含み、
任意選択で、以下の：
－ ＳＩＲＰａ、特に、上記に定義される抗原に特異的に結合し、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を有意に阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、および／またはヒトＴ細胞に特異的に結合しない、および／またはヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害しない、および／またはヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を有意に阻害しない、より特定には、ＳＩＲＰａ、特に、上記に定義される抗原に特異的に結合し、ＣＤ４７のＳＩＲＰａへの結合を有意に阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、ヒトＴ細胞に特異的に結合しない、ヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害しない、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇへの結合を有意に阻害しない、抗体、そのような抗体の抗原結合性フラグメント、または模倣体を選択するステップ
を含む、方法に関する。

【0238】

本発明の抗体を選択する方法は、有利なことに、本発明による抗体を製造する方法に対して、さらに行うことができる。

【0239】

以下の図面および実施例は、当業者に、本発明を作製および使用する方法の詳細な開示および説明を提供するために示され、本発明者らが本発明と考えるものの範囲を制限するように意図されるものではなく、以下の実験が行われたすべての実験であるまたはこれらの実験しか行われていないことを示すことを意図するものでもない。本発明は、その具体的な実施形態を参照して説明されているが、様々な変更がなされ得ること、ならびに同等物が本発明の本来の趣旨および範囲を逸脱することなく代用され得ることが、当業者であれば理解される。加えて、多数の修正形が、本発明の目的、趣旨、および範囲に対して、特定の状況、材料、問題の組成物、プロセス、１または複数のプロセスステップに適合するように作製され得る。すべてのそのような修正形は、本明細書に添付される特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

【実施例】

【0240】

以下の実施例において、抗体「１８Ｄ５」（または「ｍ１８Ｄ５」）は、マウス抗体１８Ｄ５に対応し、「キメラ」抗体は、キメラマウス／ヒト１８Ｄ５抗体に対応し、抗体「ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、ＨＥＬＡ、ＨＥＬＢ、ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ、およびＨＥＦＬＢ」は、特定のヒト化１８Ｄ５バリアントに対応する。抗体６Ｇ１０および１２Ｄ７は、本出願者に属し、これらの抗体は、ｍ１８Ｄ５と同じ方法によって得られたものであり、対照として使用される。これらの対照抗体は、ＩｇＧ２ａマウスモノクローナル抗ヒトＳＩＲＰａ抗体である。

【0241】

加えて、市販の抗体を、比較に使用した。第１の抗体は、ＳＥ７Ｃ２という名称の抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ ｓｃ－２３８６３）であり、第２の抗体は、ＳＩＲＰα／βの両方を認識することができる、ＳＥ５Ａ５という名称の抗体であり（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＢＬＥ３２３８０２）、第３の抗体は、Ｋｗａｒ２３という名称の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体である（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）。ＰＣＴ出願の国際公開第２０１３／０５６３５２号^２に記載されているＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｒｏｎｔｏから入手したＳＩＲＰ２９という名称の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体もまた、比較に使用した。

【実施例1】

【0242】

ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａに対する抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析
方法：抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性を、ＥＬＩＳＡによって評価した。キメラ抗体、ヒト化抗体、ＳＩＲＰ２９、およびＫｗａｒ２３を用いたＥＬＩＳＡアッセイについては、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１６１２－Ｈ０８Ｈ）を、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）において０．５μｇ／ｍｌでプラスチックに固定化し、精製した抗体を添加して、結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ；参照番号７０９－０３５－１４９）を添加し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0243】

マウス抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイについては、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１０９７５－Ｈ０８Ｈ）を、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）において０．５μｇ／ｍｌでプラスチックに固定化し、精製した抗体を添加して、結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したヤギ抗マウスＦｃ鎖（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ；参照番号１１５－０３６－０７１）を添加し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0244】

結果：図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるように、ＥＬＩＳＡによって測定した場合に、ＳＩＲＰａに対する様々な抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性は、第１の実験において、キメラ抗体については２．９ｎｇ／ｍｌ、ＨＡＬＡについては３．９ｎｇ／ｍｌ、ＨＦＬＡについては５．１ｎｇ／ｍｌ、ＨＦＬＢについては４．０ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＦＬＡについては７．１ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＦＬＢについては４．４ｎｇ／ｍｌ、第２の実験において、キメラ抗体については４．０６ｎｇ／ｍｌ、ＨＣＬＡについては５．６０ｎｇ／ｍｌ、ＨＣＬＢについては５．５９ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＬＡについては４．６１ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＬＢについては４．１３ｎｇ／ｍｌ、第３の実験において、キメラ抗体については２．７４ｎｇ／ｍｌ、ＨＡＬＢについては２．５３ｎｇ／ｍｌ、ＨＢＬＡについては２．６８ｎｇ／ｍｌ、ＨＢＬＢについては２．９５ｎｇ／ｍｌの有効濃度（ＥＣ５０）を示した。これらの結果は、試験した本発明の抗体が、ＥＬＩＳＡによって、他の公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９（３．７ｎｇ／ｍｌ）およびＫｗａｒ２３（３．３ｎｇ／ｍｌ）と比較して、良好なＳＩＲＰａ結合剤であることを示す。これらの結果は、ＳＩＲＰａがプラスチックウェルにコーティングされている場合に、本発明のすべての抗体によって認識されるエピトープが、アクセス可能であることを示す。

【0245】

図１Ｄに示されるように、ＥＬＩＳＡによって測定した場合に、ＳＩＲＰａに対する様々な抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性は、ＳＥ５Ａ５については０．１６ｎＭ（２４ｎｇ／ｍｌ）、およびクローンｍ１８Ｄ５については０．０６ｎＭ（９ｎｇ／ｍｌ）の有効用量（ＥＤ５０）を示した。クローン６Ｇ１０および１２Ｄ７は、ＥＬＩＳＡアッセイによって、ＳＩＲＰａへの結合が確認されなかった。これらの結果は、クローンｍ１８Ｄ５が、ＥＬＩＳＡによって、市販の抗体と比較して、良好なＳＩＲＰａ結合剤であることを示し、このクローンによって認識されるエピトープが、ＳＩＲＰａがプラスチックウェルにコーティングされている場合に、クローン６Ｇ１０および１２Ｄ７と比較して、アクセス可能であることを示す。

【実施例2】

【0246】

ＳＩＲＰａに対する抗ＳＩＲＰａ抗体のＢｉｏｓｅｎｓｏｒによる親和性測定
方法：組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１６１２－Ｈ０８Ｈ）を、５μｇ／ｍｌ（５００ＲＵ）でＣＭ５センサーチップ（ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒａｎｃｅ）に固定化し、異なる濃度の抗体を、４０μｌ／分の流速で、適用した。分析は、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。値を、３分間の結合期間（ｋａ）、続いて１０分間の解離期間（ｋｄ）後に測定し、親和性定数（ＫＤ）を判定した。

【0247】

結果：図２に示されるように、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａに対する強力な親和性（ＫＤ）（１．９３ｅ－１０Ｍ～３．６７ｅ－１０Ｍ）を有し、これは、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３の親和性と同等であり、市販の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＥ７Ｃ２およびＳＥ５Ａ５の親和性よりも優れている。

【実施例3】

【0248】

細胞蛍光測定法によるヒト単球におけるＳＩＲＰａ結合アッセイ
方法：ヒト単球における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合を測定するために、ヒトＦｃ受容体結合阻害剤（ＢＤ ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ＵＳＡ；参照番号５６４２２０）を、まず、室温で３０分間添加して、ヒト単球上のヒトＦｃ受容体をブロッキングして、バックグラウンドを低減させた。次いで、抗体を、４℃で３０分間インキュベートし、洗浄した後、４℃で３０分間、ＰＥ標識した抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＵＳＡ；参照番号４０９３０３）で染色した。マウス抗体については、ＰＥ標識した抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；参照番号７１５－１１６－１５１）を使用した。サンプルを、ＢＤ ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ ＩＩ細胞蛍光測定装置で分析した。

【0249】

結果：図３に示されるように、結果は、ヒト単球における本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体の強力な結合、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体Ｋｗａｒ２３、ＳＥ７Ｃ２、およびＳＥ５Ａ５を上回る結合剤結合（ＭＦＩ（中央値蛍光強度）で測定される）を示す。

【実施例4】

【0250】

アンタゴニストＥＬＩＳＡアッセイによるＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合分析
方法：競合ＥＬＩＳＡアッセイについて、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１６１２－Ｈ０８Ｈ）を、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）において０．５μｇ／ｍｌでプラスチックに固定化した。キメラ抗体については、ヒト化抗体、ＳＩＲＰ２９、およびＫｗａｒ２３、精製された抗体（異なる濃度）を、６μｇ／ｍｌの最終濃度（固定濃度）のビオチン化ヒトＣＤ４７Ｆｃ（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、Ｆｒａｎｃｅ；参照番号ＣＤ７－Ｈ８２Ｆ６）と混合して、３７℃で２時間、競合的結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したストレプトアビジン（Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｎｇ； ＵＳＡ；参照番号ＳＡ－５００４）を添加して、ビオチン－ＣＤ４７Ｆｃの結合を検出し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0251】

マウス抗体については、精製した抗体（異なる濃度）を、０．０４μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１２２８３－Ｈ０２Ｈ）と混合して、３７℃で２時間、競合的結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したロバ抗ヒトＦｃ鎖（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ；参照番号７０９－０３５－１４９）を添加し、ＣＤ４７Ｆｃの結合を検出し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0252】

結果：図４に示されるように、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａ－ＣＤ４７の相互作用に対するアンタゴニスト活性を有する。特に、キメラ抗体ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ、およびＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰ２９および市販の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＥ５Ａ５のアンタゴニスト活性と比較して、優れたアンタゴニスト活性を有することが、観察される。

【実施例5】

【0253】

アンタゴニスト細胞蛍光測定法アッセイによるヒト単球におけるＣＤ４７とヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合分析
方法：ヒト単球におけるＣＤ４７とヒト抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合を測定するために、精製された抗体を、４℃で１５分間、単球に添加した後、５μｇ／ｍｌの最終濃度のビオチン化ヒトＣＤ４７Ｆｃ（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、Ｆｒａｎｃｅ；参照番号ＣＤ７－Ｈ８２Ｆ６）と混合し、４℃で３０分間インキュベートして、競合的な結合抗体を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ＰＥ標識したストレプトアビジン（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ；参照番号５５４０６１）を、４℃で１５分間添加して、ビオチン－ＣＤ４７Ｆｃの結合を検出し、ＢＤ ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ ＩＩ細胞蛍光測定装置で分析した。

【0254】

ヒト単球におけるＣＤ４７とマウス抗ｈＳＩＲＰａ抗体との間の競合を測定するために、精製された抗体を、４℃で１５分間、単球に添加した後、５μｇ／ｍｌの最終濃度のＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１２２８３－Ｈ０２Ｈ）と混合し、４℃で１５分間インキュベートして、競合する結合抗体を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ＦＩＴＣ標識した抗ヒトＦｃ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ；参照番号ＩＭ１６２７）を、４℃で１５分間添加して、ＣＤ４７Ｆｃの結合を検出し、ＢＤ ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ ＩＩ細胞蛍光測定装置で分析した。

【0255】

結果：図５に示されるように、本発明の抗体は、ヒト単球においてＳＩＲＰａ－ＣＤ４７相互作用に対するアンタゴニスト活性を有する。

【実施例6】

【0256】

Ｂｌｉｔｚ方法によるＳＰ－Ｄとの競合
方法：本方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号Ｃ２２－２ Ｎｏ ６１０１０－１）を用いて行った。
条件Ａ：ＳＩＲＰａ＋抗ＳＩＲＰａ抗体＋界面活性タンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）。第１のステップにおいて、ＳＩＲＰａ（Ｈｉｓ）組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１６１２－Ｈ０８Ｈ）を、ヒスチジンテールによって、１０μｇ／ｍｌで３０秒間、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号１８－００２９）に固定化した。第２のステップにおいて、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍＬ（飽和濃度）で１２０秒間添加した。次いで、ヒトＳＰ－Ｄ（Ｒ ｅｔ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ；参照番号１９２０－ＳＰ－０５０）を、抗ＳＩＲＰａ抗体との競合下において、１００μｇ／ｍＬで１２０秒間結合させた。ＳＰ－Ｄの解離を、動態緩衝液中で、１２０秒間行った。データの分析を、Ｂｌｉｔｚ ｐｒｏ １．２ソフトウェアを用いて行い、それによって、結合定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を判定した。

【0257】

条件Ｂ：ＳＩＲＰａ＋界面活性タンパク質Ｄ（ＳＰ－Ｄ）＋抗ＳＩＲＰａ抗体。第１のステップにおいて、Ｓｉｒｐ－ａ（Ｈｉｓ）組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１６１２－Ｈ０８Ｈ）を、ヒスチジンテールによって、１０μｇ／ｍｌで３０秒間、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号１８－００２９）に固定化した。第２のステップにおいて、ヒトＳＰ－Ｄ（Ｒ ｅｔ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ；参照番号１９２０－ＳＰ－０５０）を、１００μｇ／ｍＬで１２０秒間添加した。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍＬ（飽和濃度）で１２０秒間結合させた。抗ＳＩＲＰａ抗体の解離を、動態緩衝液中で、１２０秒間行った。分析データを、Ｂｌｉｔｚ ｐｒｏ １．２ソフトウェアを用いて作製し、それによって、結合定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を判定した。

【0258】

結果：図６に示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体１８Ｄ５の結合は、ＳＰ－ＤのＳＩＲＰａへの結合を遮断せず、ＳＰ－Ｄの結合は、１８Ｄ５のＳＩＲＰａへの結合を遮断しない。したがって、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａとＳＰ－Ｄとの間の相互作用を阻害しない。

【実施例7】

【0259】

Ｂｌｉｔｚ法によるＳＩＲＰｂに対する抗ＳＩＲＰａ抗体の親和性
方法：本方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号Ｃ２２－２ Ｎｏ ６１０１０－１）を用いて行った。組換えｈＳＩＲＰｂ－Ｈｉｓ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ、ＵＳＡ；参照番号ＡＢＩＮ３０７７２３１）を、ヒスチジンテールによって、１０μｇ／ｍｌで３０秒間、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号１８－００２９）に固定化した。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍＬで１２０秒間結合させた。抗ＳＩＲＰａ抗体の解離を、動態緩衝液中で、１２０秒間行った。データの分析を、Ｂｌｉｔｚ ｐｒｏ １．２ソフトウェアを用いて行い、それによって、結合定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を判定した。

【0260】

結果：図７Ａに示されるように、本発明の抗体は、ＳＩＲＰｂに対して、ＳＩＲＰａと比較して低い親和性を有する。特に、キメラ抗体、ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ、ＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰｂに対して、ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３と比較して、低減された親和性を有することに留意されたい。

【実施例8】

【0261】

ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰｂに対する抗ＳＩＲＰ抗体の結合
方法：活性ＥＬＩＳＡアッセイについては、組換えｈＳＩＲＰｂ－Ｈｉｓ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ、ＵＳＡ；参照番号ＡＢＩＮ１４６６５５７）を、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）において１μｇ／ｍｌでプラスチックに固定化し、精製した抗体を添加して、結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ；参照番号７０９－０３５－１４９）を添加し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0262】

結果：図７Ｂに示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰｂに対して低い親和性を有する。顕色は、Ｂ４Ｂ６（マウス抗体を用いて顕色を行った）を除くすべての抗体について、ロバ抗ヒト抗体を用いて行ったことを示す必要があり、これにより、抗ＳＩＲＰｂ抗体Ｂ４Ｂ６について得られたシグナルが、抗ＳＩＲＰａ抗体について得られたシグナルよりも低いことを示すことが説明され得る。

【実施例9】

【0263】

Ｂｌｉｔｚ法によるＳＩＲＰｇに対する抗ＳＩＲＰａ抗体の親和性分析
方法：本方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号Ｃ２２－２ Ｎｏ ６１０１０－１）を用いて行った。組換えｈＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１８２８－Ｈ０８Ｈ）を、ヒスチジンテールによって、１０μｇ／ｍｌで３０秒間、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号１８－００２９）に固定化した。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍＬで１２０秒間結合させた。抗ＳＩＲＰａ抗体の解離を、動態緩衝液中で、１２０秒間行った。データの分析を、Ｂｌｉｔｚ ｐｒｏ １．２ソフトウェアを用いて行い、それによって、結合定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を判定した。

【0264】

結果：図８Ａに示されるように、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰｇに対して、低い親和性を有する。この親和性は、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３の親和性よりもわずかに弱い。しかしながら、動態特性は、抗ＳＩＲＰａ抗体、ＳＩＲＰ２９、およびＫｗａｒ２３の間で異なり、抗ＳＩＲＰａ抗体については、ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３と比較して、解離速度定数（Ｋｄ）が高い。特に、ＨＦＬＢは、ＳＩＲＰｇに対して最も低い親和性を有し、ＫＤ値は１．０３６ｅ－７Ｍであり、これは、ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３のＫＤ値と比較して、２対数分の差に等しい。

【実施例10】

【0265】

ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰｇに対する抗ＳＩＲＰ抗体の結合
方法：活性ＥＬＩＳＡアッセイについて、ｈＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１８２８－Ｈ０８Ｈ）を、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）において１μｇ／ｍｌでプラスチックに固定化し、精製された抗体を添加して、結合を測定した。インキュベーションおよび洗浄の後に、ペルオキシダーゼ標識したロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ；参照番号７０９－０３５－１４９）を添加し、従来的な方法によって顕色を行った。

【0266】

結果：図８Ｂに示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体ＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰｇに結合しないが、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３は、ＳＩＲＰｇへの有意な結合を示す。

【実施例11】

【0267】

Ｂｌｉｔｚ法によるＳＩＲＰｇについてのＣＤ４７との競合：ＳＩＲＰｇ＋抗ＳＩＲＰａ抗体＋ＣＤ４７
方法：本方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号Ｃ２２－２ Ｎｏ ６１０１０－１）を用いて行った。第１のステップにおいて、ｈＳＩＲＰｇ－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１１８２８－Ｈ０８Ｈ）を、ヒスチジンテールによって、１０μｇ／ｍｌで３０秒間、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ、ＵＳＡ；参照番号１８－００２９）に固定化した。第２のステップにおいて、抗ＳＩＲＰａ抗体を、２０μｇ／ｍＬ（飽和濃度）で１２０秒間添加した。次いで、ヒトＣＤ４７Ｆｃ（（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；参照番号１２２８３－Ｈ０２Ｈ）を、抗ＳＩＲＰａ抗体との競合下において、１００μｇ／ｍＬで１２０秒間結合させた。ＣＤ４７Ｆｃの解離を、動態緩衝液中で、１２０秒間行った。分析データを、Ｂｌｉｔｚ ｐｒｏ １．２ソフトウェアを用いて作製し、それによって、結合定数（ｋａ）および解離定数（ｋｄ）を計算し、親和性定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を判定した。

【0268】

結果：図９に示されるように、本発明の抗ＳＩＲＰａ ＨＥＦＬＢは、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合と競合しない。対照的に、他の公知の抗体ＳＩＲＰ２９、特に、ｋｗａｒ２３は、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合と競合する。

【実施例12】

【0269】

フローサイトメトリーによる血液細胞への結合
方法：ヒト血液細胞における抗ＳＩＲＰａ抗体の結合を分析するための実験を、実施した。ＣＤ３陽性Ｔリンパ球、赤血球、および血小板を、健常志願者から得られた精製血液から抽出した。細胞を、次いで、４℃で３０分間、１０マイクログラム／ｍｌのそれぞれの試験抗体で染色し、洗浄した後、４℃でさらに３０分間、二次蛍光抗ＩｇＧ抗体で染色した。洗浄した後、細胞を、ＣＡＮＴＯ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）フローサイトメーターで分析した。

【0270】

結果：図１０に示されるように、Ｔ細胞、赤血球、および血小板は、ＣＤ４７に関して陽性であり、ＣＤ４７は、偏在的に発現されており、これらを、Ｂ６Ｈ１２抗体で染色した。ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３抗体は、ＬＳＢ２．２０（特異的抗ＳＩＲＰγ抗体）と同様に、ＳＩＲＰγを発現することが知られているＴ細胞に結合する。しかしながら、抗ＳＩＲＰａヒト化１８Ｄ５抗体は、Ｔ細胞に結合しない（同じ結果が、試験した４つの異なる１８Ｄ５ヒト化バリアントで得られた）。赤血球および血小板は、ＳＩＲＰａを発現せず、したがって、ヒト化１８Ｄ５抗体および他の抗ＳＩＲＰａ抗体による顕色が行われなかった。この結果は、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体と比較して、生細胞におけるＳＩＲＰａに対するヒト化１８Ｄ５抗体の特異性を示す。

【0271】

図１１に示されるように、Ｔ細胞は、ヒト化１８Ｄ５抗体によって染色されず（同じ結果が、試験した５つの異なる１８Ｄ５ヒト化バリアントで観察された）、キメラ１８Ｄ５でも染色されないが（データは示されない）、７０％を上回るＴ細胞が、ＳＩＲＰ２９およびＫｗａｒ２３によって染色される。

【実施例13】

【0272】

ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖
方法：ｈＰＢＭＣ細胞を、健常志願者のバフィーコートから単離した。ＣＤ４またはＣＤ８ Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して陽性選択によって選択し、丸底９６ウェルプレートに播種した（細胞５００００個／ウェル）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたマイクロビーズ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３日間（Ｔ細胞１個に対してビーズ１個の比）、またはインビトロで生成した同種成熟樹状細胞で５日間（ｍＤＣ１個に対してＴ細胞５個）、または異なる濃度のツベルクリン未精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）で５日間のいずれかによって、増殖シグナルを得た。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的とする抗体を、飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）で、増殖試験の開始から添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【0273】

結果：図１２に示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体ＨＡＬＡおよびＨＥＦＬＢバリアントは、Ｔ細胞を抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズ（Ａ）（Ｃ）または同種樹状細胞（Ｂ）（Ｄ）またはＰＰＤ（Ｅ）で刺激した場合に、Ｔ細胞増殖を阻害しないが、一方で、抗ＳＩＲＰａ Ｋｗａｒ２３は、Ｔ細胞を同種樹状細胞で刺激した場合に、Ｔ増殖を阻害する。予測したとおり、抗ＣＤ４７抗体および抗ＳＩＲＰｇ抗体は、Ｔ細胞増殖の阻害剤である。

【実施例14】

【0274】

マウスＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖
方法：脾細胞を、ナイーブマウスから単離した。ＣＤ８ Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して陽性選択によって選択し、丸底９６ウェルプレートに播種した（細胞５００００個／ウェル）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたマイクロビーズ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３日間（Ｔ細胞１個に対してビーズ１個の比）によって、増殖シグナルを得た。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的とするマウス抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）および抗ＣＤ４７抗体（ＭＩＡＰ３１０）を、飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）で、増殖試験の開始から添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【0275】

結果：図１３に示されるように、マウスＴ細胞の増殖に対して抗ＳＩＲＰａまたは抗ＣＤ４７抗体の阻害は存在しない。この結果は、マウスが、ＳＩＲＰｇ遺伝子を発現しないという事実によって説明される。したがって、マウスは、ＳＩＲＰｇに結合しない特異的抗ＳＩＲＰａ抗体のインビボでの作用を予測するためのモデルとして使用することができる。対照的に、抗ＣＤ４７抗体または非選択的抗ＳＩＲＰａ抗体のインビボ前臨床効果、特に、獲得免疫およびメモリーＴリンパ球の生成に関するものは、ヒト状況を予測するものではない。

【実施例15】

【0276】

ヒトＴ細胞の増殖
方法：ｈＰＢＭＣ細胞を、健常志願者のバフィーコートから単離した。ＣＤ４またはＣＤ８ Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して陽性選択によって選択し、丸底９６ウェルプレートに播種した（細胞５００００個／ウェル）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたマイクロビーズ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３日間（Ｔ細胞１個に対してビーズ１個の比）、またはインビトロで生成した同種成熟樹状細胞で５日間（ｍＤＣ１個に対してＴ細胞５個）のいずれかによって、増殖シグナルを得た。抗体を、飽和濃度（抗ＣＤ４７抗体および抗ＳＩＲＰａ抗体については５μｇ／ｍＬ、ならびに抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体および組換え４－１ＢＢＬについては２．５μｇ／ｍＬ）で、増殖試験の開始から添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【0277】

結果：図１４に示されるように、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体および組換え４－１ＢＢＬは、ヒトＴ細胞の増殖に対してブースト作用を有するが、一方で、抗ＣＤ４７は、ヒトＴ細胞の増殖に対して負の作用を有する。特に、抗ＣＤ４７抗体は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１または４－１ＢＢアゴニスト剤のヒトＴ細胞免疫刺激効果を防止する。抗ＳＩＲＰａ ＨＥＦＬＢは、Ｔ細胞の増殖に対して有意な影響を有さない。

【実施例16】

【0278】

マウスにおける抗腫瘍作用
方法：マウスに、キシラジン／ケタミンのカクテルで麻酔を行った。開腹後に、腫瘍Ｈｅｐａ １．６細胞を、ＰＢＳにおいて、門脈を通じて注射した（細胞２．５．１０^６個／１００μＬ）。処置を、腫瘍注射の４日後に開始した。アゴニスト抗４－１ＢＢモノクローナル抗体（３Ｈ３）を、ＰＢＳ中のＨｅｐａ １．６細胞（肝細胞癌腫細胞、ＨＣＣ）の腹腔内注射（１００μｇ／注射）後に、４日目および８日目において２回注射した。抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体を、４週間にわたり週２回、ＰＢＳ中において腹腔内注射した（２００μｇ／注射）。アンタゴニスト抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）を、４週間にわたり週３回、ＰＢＳ中において腹腔内注射した（３００μｇ／注射）。

【0279】

抗腫瘍応答を、腫瘍接種の１３日後に、ＨＣＣの同所性モデルにおいて評価した。この時点で、腫瘍に浸潤したかまたは全身に浸潤した免疫細胞の表現型決定を行うために、腫瘍および脾臓を、採取した。浸潤免疫細胞である脾細胞および肝臓の非実質細胞（ＮＰＣ）を、フローサイトメトリー取得のために４つの異なる混合物で染色した。

【0280】

結果：図１５Ａに示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体単独は、ある割合のマウス（２８％）において生存を有意に延長させた。抗４－１ＢＢ抗体または抗ＰＤＬ１抗体との組合せで、抗ＳＩＲＰａ抗体は、処置の中止後でさえも、非常に高い応答率のマウス生存を可能にする。

【0281】

図１５Ｂに示されるように、抗ＳＩＲＰａと共刺激剤（例えば、抗４－１ＢＢ）またはＴ細胞チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１）との組合せは、制御性および免疫抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ、Ｍｏ－ＭＤＳＣ）を減少させ、抗４－１ＢＢとの組合せでは、同時に、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積を増加させることによって、腫瘍微小環境を修飾する。Ｍｏ－ＭＤＳＣは、Ｌｙ６Ｃの高い発現を特徴とし、ＣＤ１１ｂ陽性およびＭＨＣクラスＩＩ陰性の集団においてＬｙ６Ｇは発現されない。

【0282】

図１５Ｃに示されるように、抗ＳＩＲＰａと、共刺激剤（例えば、抗４－１ＢＢ）またはＴ細胞チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１）との組合せは、未成熟およびナイーブＢ細胞の頻度を減少させ、同時にメモリー細胞および形質芽細胞の蓄積を増加させることによって、腫瘍微小環境および末梢、脾臓における細胞組成を修飾する。同様に、細胞溶解性（ＣＤ２７陰性）ＮＫ細胞の蓄積が、抗ＳＩＲＰａと抗４１ＢＢまたは抗ＰＤＬ１との組合せによって、腫瘍および末梢に誘導される。

【0283】

合わせると、抗ＳＩＲＰａは、腫瘍および末梢免疫性、特に、腫瘍の排除および長期保護に寄与する獲得免疫細胞（Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、Ｂ細胞）および先天免疫細胞（ＭＤＳＣ、マクロファージ、ＮＫ細胞）を修飾する。

【実施例17】

【0284】

事前に治癒したマウスにおける抗腫瘍効果
方法：肝臓がんモデルにおいて抗ＳＩＲＰａ＋抗４－１ＢＢ注射によって事前に治癒したマウスまたは抗４－１ＢＢで処置したＳＩＲＰａ変異体マウスを、脾臓におけるＨｅｐａ １．６細胞の注射（細胞２．５．１０＾６個／マウス）によって再攻撃した。マウスに、空気中３％のイソフルランで麻酔を行った。マウスの側腹部を切開し、脾臓を単離した後、腫瘍性Ｈｅｐａ １．６細胞を、ＰＢＳ中において脾臓に注射した（細胞２．５．１０^６個／５０μＬ）。腫瘍の発達を再攻撃マウスと比較するために、ナイーブマウスに、同じ経路で並行して注射した。

【0285】

結果：図１５Ｄに示されるように、すべての治癒マウスが、再攻撃された場合に生存し、対照的に、すべてのナイーブマウスは死亡した。この結果は、メモリーＴ細胞が、抗ＳＩＲＰａ療法下またはＳＩＲＰａシグナルの不在下（ＳＩＲＰａ変異体マウス）において誘導され、依然として、治癒マウスにおいて長期間持続することを示す。

【実施例18】

【0286】

事前に治癒したマウスから採取したＴ細胞脾細胞または全脾細胞の抗腫瘍作用
方法：抗ＳＩＲＰａ＋抗４－１ＢＢにより再攻撃された治癒マウスを、安楽死させ、脾臓を採取した。赤血球溶解後に、脾細胞を抽出し、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳによって脾細胞の一部から単離した。麻酔の後に、マウスに、Ｔ細胞性脾細胞（細胞２．５．１０^６個／１００μＬ）または全脾細胞（細胞１０．１０^６個／１００μＬ）または賦形剤単独（ＰＢＳ）のいずれかを、静脈内注射した。すべてのマウスに、前述のように門脈を通じてＨｅｐａ １．６細胞を受容させた（細胞２．５．１０^６個／１００μＬ）。

【0287】

結果：図１５Ｅに示されるように、治癒マウスから採取した脾細胞および単離Ｔリンパ球は、マウスの生存に高い肯定的な効果を有する。この結果は、メモリーＴ細胞が、肝臓がんの治療後に、治癒マウスの脾細胞に存在しており、長期間の獲得免疫記憶を担うことを示す。

【実施例19】

【0288】

事前に治癒したマウスにおける抗腫瘍作用
方法：肝臓がんモデルにおいて抗ＳＩＲＰａ＋抗ＰＤＬ－１注射によって事前に治癒したマウスを、脾臓におけるＨｅｐａ １．６細胞の注射によって再攻撃した（細胞２．５．１０＾６個／マウス）。マウスに、空気中３％のイソフルランで麻酔を行った。マウスの側腹部を切開し、脾臓を単離した後、腫瘍性Ｈｅｐａ １．６細胞を、ＰＢＳ中において脾臓に注射した（細胞２．５．１０^６個／５０μＬ）。腫瘍の発達を再攻撃マウスと比較するために、ナイーブマウスに、同じ経路で並行して注射した。

【0289】

結果：図１６に示されるように、すべての治癒マウスが、再攻撃された場合に生存し、対照的に、すべてのナイーブマウスは死亡した。この結果は、メモリーＴ細胞が、治癒マウスにおいて依然として存在することを示唆する。この結果は、メモリーＴ細胞が、抗ＳＩＲＰａ療法下において誘導され、依然として、治癒マウスにおいて長期間持続することを示す。

【実施例20】

【0290】

乳房癌腫モデルにおける腫瘍の成長の作用
方法：マウスに、空気中３％のイソフルランで麻酔を行った。マウスの腹部を剃毛し、４Ｔ１細胞を、５０μＬのＰＢＳ中において、インスリンシリンジ（３０ゲージ）を用いて乳腺に注射した。アンタゴニスト抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）または対照抗体を、４週間にわたり週３回、ＰＢＳ中において腹腔内注射した（２００μｇ／注射）。

【0291】

結果：図１７に示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体は、乳房癌腫モデルの腫瘍成長を、対照抗体と比較して、有意に低減する（ｐ＜０．０１）。

【0292】

図１８は、接種２週間後における免疫細胞分析を示す。抗ＳＩＲＰａは、腫瘍および末梢（脾臓）の両方において、骨髄系細胞および非骨髄系細胞（Ｔ細胞およびＮＫ細胞）に対する肯定的な作用を有し、Ｔｒｅｇの劇的な減少およびメモリーＴ細胞の蓄積がある。

【実施例21】

【0293】

ヘモグロビンの濃度およびヘマトクリットに対するＳＩＲＰａ抗体の作用
方法：抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）、抗ＣＤ４７（ＭＩＡＰ４１０クローン）、および無関係なアイソタイプ対照を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、１２ｍｇ／ｋｇで、０日目および２日目に腹腔内投与した。血液サンプルを、０日目および３日目に、ＥＤＴＡを含有するチューブに採取し、血球数測定を、ＸＳ－８００ｉ血液分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ）を用いて行った。ヘモグロビンのレベル（左）およびヘマトクリットの割合（右）を、３日目に評価した。

【0294】

結果：図１９に示されるように、抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヘモグロビンの濃度およびヘマトクリットに毒性作用を有さない。対照的に、抗ＣＤ４７抗体は、ヘモグロビンの濃度およびヘマトクリットの減少を誘導し、男性においてフェーズ１中に貧血が観察されたことと一致する。

【実施例22】

【0295】

血小板凝集
方法：血液を、健常なドナー志願者から、クエン酸ナトリウムで緩衝したＶａｃｕｅｔｔｅ採血チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）に採取した。多血小板血漿（ＰＲＰ）および少血小板血漿（ＰＰＰ）を、それぞれ、２００ｇで１０分間および３５００ｇで１５分間の遠心分離によって得た。作業するＰＲＰを、３．１０^８個の血小板．Ｌ^－１に調節した。阻害アッセイ：モノクローナル抗体を、ＰＲＰとともに予備インキュベートし、最終濃度４０または５０μｇ．ｍＬ^－１の試験抗体にした。撹拌なしで３分後に、血小板凝集を、ＡＤＰ ５μＭの添加により開始した。凝集は、３７℃で、継続的に撹拌しながら、標準的な光学血小板凝集測定装置（ＴＡ－８Ｖ Ｔｈｒｏｍｂｏ－Ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒ、ＳＤ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ＳＡＳ、Ｆｒｏｕａｒｄ、Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、サンプルを通る光の透過を測定することによって、判定した。ＰＰＰの透過を、１００％に設定した。凝集を、合計５分間、撹拌しながら記録した。誘導アッセイ：血小板凝集を、モノクローナル抗体の添加によって直接的に開始した（５０μｇ．ｍＬ^－１）。凝集を、合計最大１０分間、撹拌しながら記録した。

【0296】

結果：図２０に示されるように、抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヒト赤血球または血小板に結合しない。結果として、抗ＣＤ４７は、インビトロでヒト血小板凝集を誘導するが、抗ＳＩＲＰａ抗体は、誘導しない。同様に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、可逆的ＡＤＰ誘導性ヒト血小板凝集を妨害するが、抗インテグリンアルファ２ｂは、それを完全に抑止する。

【実施例23】

【0297】

卵巣がん腹水に由来するＳＩＲＰａ遮断性ＣＤ１４＋細胞による同種Ｔ細胞の増殖
方法：同種ＣＤ４ Ｔ細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、健常志願者のバフィーコートのｈＰＢＭＣから、陽性選択によって単離した。ＣＤ４を、丸底９６ウェルプレートに播種した（細胞５００００個／ウェル）。ＣＤ１４＋細胞を、卵巣がん患者の腹水から、同じ方法によって単離した。ＣＤ１４＋細胞を、同種ＣＤ４ Ｔ細胞とともに、１：１の比で５日間播種した。一部の条件下において、ヒトＬＰＳ成熟同種単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）を、１：５の比で添加して、Ｔ細胞を刺激し、腹水から精製した異なる比のＣＤ１４＋ＭＤＳＣの免疫抑制作用を分析した。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的とする抗体を、飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）で、増殖試験の開始から添加した。増殖を、培養終了前１２時間の間、Ｈ^３－チミジンの組込みによって測定した。

【0298】

結果：図２１Ａおよび２１Ｂに示されるように、卵巣がん腹水から精製した新しいおよび凍結ヒト骨髄系細胞（ＴＡＭ）は、低刺激性同種ヒトＴリンパ球である。抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、骨髄系細胞の性質を修飾し、ヒトＴ細胞活性化および増殖を可能にする。

【0299】

図２１Ｃに示されるように、卵巣がん腹水から精製したヒト骨髄系細胞（ＭＤＳＣ）は、Ｔ細胞に対する骨髄系細胞の比１：１および２：１で、同種ｍｏＤＣによって誘導されるヒトＴ細胞増殖を抑制することができる。抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヒトＭＤＳＣによって誘導される免疫抑制を強化しない。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図12E】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図15E】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21A】

【図21B】

【図21C】

【配列表】

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