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特許7491966ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物を含有する乾癬病に使用するための医薬組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-20
(45)【発行日】2024-05-28
(54)【発明の名称】ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物を含有する乾癬病に使用するための医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4184 20060101AFI20240521BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240521BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240521BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4184
A61P17/06
C12N15/12 ZNA
【請求項の数】
8
(21)【出願番号】P 2022095986
(22)【出願日】2022-06-14
(65)【公開番号】P2023154372
(43)【公開日】2023-10-19
【審査請求日】2022-06-14
(31)【優先権主張番号】202210355367.X
(32)【優先日】2022-04-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】521557687
【氏名又は名称】孫 良丹
【氏名又は名称原語表記】ＳＵＮ Ｌｉａｎｇｄａｎ
【住所又は居所原語表記】２１８ Ｊｉｘｉ Ｒｏａｄ， Ｓｈｕｓｈａｎ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｈｅｆｅｉ Ｃｉｔｙ， Ａｎｈｕｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ２３００２２， Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100205936
【弁理士】
【氏名又は名称】崔 海龍
(74)【代理人】
【識別番号】100132805
【弁理士】
【氏名又は名称】河合 貴之
(72)【発明者】
【氏名】孫 良丹
(72)【発明者】
【氏名】甄 ▲き▼
(72)【発明者】
【氏名】李 報
【審査官】堂畑 厚志
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１１３８５５８０７（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１１５４１４４８３（ＣＮ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／４１８４
Ａ６１Ｐ １７／０６
Ｃ１２Ｎ １５／１２
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物を含有する乾癬病の治療に使用するための医薬組成物であって、前記化合物は、式Ｉで表される構造を有する化合物である【化1】
【請求項2】
前記化合物は薬用塩の形式で存在することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用であって、前記抑制剤は、式Ｉで表される構造を有する化合物を含む【化2】
【請求項4】
前記抑制剤は、乾癬病の病変組織のＡＩＭ２タンパク活性を抑制する薬品であることを特徴とする請求項３に記載の乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用。
【請求項5】
前記化合物は薬用塩の形式で存在することを特徴とする請求項３または４に記載の乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用。
【請求項6】
前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は、カプセル、錠剤、経口製剤、マイクロカプセル製剤、注射流体、坐薬、噴霧剤または軟膏剤であることを特徴とする請求項３に記載の乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用。
【請求項7】
前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は、カプセル、錠剤、経口製剤、マイクロカプセル製剤、注射流体、坐薬、噴霧剤または軟膏剤であることを特徴とする請求項６に記載の乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用。
【請求項8】
薬物組成物であって、前記薬物組成物は、乾癬病を治療することに用いられ、且つ少なくとも、化合物、薬用キャリアと／或いは稀釈剤を含み、前記化合物は、式Ｉで表される構造を有する化合物である【化3】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、タンパク抑制薬品の技術分野に属し、具体的に、ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物の乾癬病の治療薬物としての使用に関するものである。
【背景技術】
【0002】
乾癬病（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）は、世界的病気であり、治療しにくく、発病率が高い炎症性皮膚病であり、現在の医療技術でそれを完全に治療することができない。乾癬病を治療する臨床治療方法は多いが、多数は免疫システムを幅広く抑制することにより病症を緩和する。例えば、ホルモン及び免疫抑制剤（Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）を用いるとともに物理的治療方法及び漢方薬を使用する。広域スペクトルの治療方法は、対症治療（Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の効果がよくなく、病気が再び発病するか或いは他のシステムに影響を与えるおそれがある。近年、乾癬病の効率的な治療方法により受来の治療方法の欠点を解決することができるが、現在の生物学的薬剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｎｔｓ）は、多数が乾癬病の炎症経路の下流の奏効因子、例えばＩＬ－１７、ＴＮＦ－αとＩＬ－２３等に影響を与えることにより乾癬病の表現形を除去する。
【0003】
従来の治療方法と比較してみると、一定の時間内において、生物学的製剤は、乾癬病の治療の効率を増加させ、薬品の飲用の間隔を延長させ、コンプライアンス（ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ）を増加させることができる。しかしながら、生物学的製剤も従来の治療方法の欠点を有している。乾癬病の治療に向く市販の生物学的製剤は、依然として、下流の奏効分子のエフィシェンシーをブロックすることにより表現形を低減する対症治療方法であり、生物学的製剤の飲用を半年以上停止させると、乾癬病が再び発病するリスクが大幅に増加する。また、生物学的製剤は、値段が高く、それを長時間飲む必要があり、治療の効果が低下すると複数の生物学的製剤を一緒に飲む必要があるので、患者に大きい経済的負担を与える。
【0004】
以上のとおり、従来の乾癬病の治療薬品を広域スペクトルの免疫調節薬品とターゲット式薬品に分けることができる。広域スペクトルの免疫調節薬品は長期的効果がよくないという欠点を有しており、生物学的製剤であるターゲット式薬品は従来の薬品の欠点を解決することができるが、生物学的製剤は値段が高くかつ適用性がよくないという欠点を有している。市販されている乾癬病治療のターゲット式薬品（天然小分子または人工的化合物）の種類が少なく、かつそれはいずれも、乾癬病の発病の過程において下流の奏効経路にのみ影響を与え、乾癬病の重要な細胞因子ＩＬ－１７及び上流の開始経路に影響を殆ど与えない。そのような対症治療方法は、乾癬病の炎症経路の上流の因子に影響を与える治療方法であり、長期的効果がよくないという欠点を有している。
【0005】
したがって、従来の治療方法と生物学的薬剤の利点を採用できる新型薬物を発明する必要がある。それにより、従来の薬物の欠点を補充し、かつ薬物の有効性、標的化（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）、経済性、安全性、コンプライアンス等を確保することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明の目的はＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物の乾癬病の治療薬物としての使用を提供することにある。前記化合物を乾癬病の治療薬物として使用することにより、ＩＬ－１βの生成を効率的に抑制し、ＩＭＱネズミのＣＤ３＋ＴＣＲ ｄ＋ＲＯＲ γＴ＋比例を低減し、ＩＭＱネズミの炎症表現形（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を効率的に改善することができる。
【課題を解決するための手段】
【0007】
具体的に、前記化合物の式Ｉは、つぎのとおりである。
本発明の実施例において、ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する化合物の乾癬病の治療薬物としての使用を提供する。
【化1】
【0008】
本発明の実施例において、前記化合物は薬用塩の形式で存在する。
【0009】
本発明の実施例において、前記化合物は薬用酸に塩を添加する形式で存在する。
【0010】
本発明の他の実施例において、乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用を更に提供する。
【0011】
本発明の実施例において、前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は乾癬病の病変組織のＡＩＭ２タンパク活性を抑制する薬品である。
【0012】
本発明の実施例において、前記化合物は薬用塩の形式で存在する。
【0013】
本発明の実施例において、前記化合物は薬用酸に塩を添加する形式で存在する。
【0014】
本発明の実施例において、前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は、カプセル、錠剤、経口製剤、マイクロカプセル製剤、注射流体、坐薬、噴霧剤または軟膏剤である。
【0015】
本発明の他の実施例において、乾癬病の治療に用いられる薬物組成物を提供し、その薬物組成物は少なくとも、下記式Ｉ
に示される化合物、薬用キャリアと／或いは稀釈剤を含む。
【化2】
【発明の効果】
【0016】
（１）本発明の化合物Ｉ（ＳＬＤ－１）はＡＩＭ２に向くＡＩＭ２タンパクの活性小分子であり、その化合物で乾癬病を治療する薬物を製造することができる。従来の広域スペクトル免疫調節薬（Ｂｒｏａｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ）と比較してみると、本発明の化合物は、より強いターゲティング効果を具備し、正確性、快速性、有効性、安全性、安定性を更に向上させることができる。本発明の化合物は、ＡＩＭ２ヒューマンプロテイン及びマウスオリジンプロテインとの結合力が強く、結合常数を１．０２９Ｅ－５Ｍと１．０３３Ｅ－５Ｍまで向上させることができる。
（２）本発明の化合物およびそれで製造される薬物が乾癬病を結合抑制する目標位置はＡＩＭ２経路の上流に位置する。従来の生物学的抑制剤（生物学的抑制剤はいずれも、乾癬病免疫炎症経路の中下流に位置し、対症治療方法に属するが、治療効果の安定性がよくないという欠点を有している。したがって、生物学的抑制剤の飲用を停止させると、半年後乾癬病が再び發作するリスクが高い）と比較してみると、本発明の化合物は、炎症因子をブロックするレベルが高く、生物学的抑制剤より一層よい予防の効果を有している。従来の生物学的抑制剤は、多数が注射であり、他のシステムに影響を与えるおそれがある。本発明の化合物は、吸収性がよく、薬品の飲用によるいろいろな副作用を避け、安全性が高く、適用の範囲が広く、使用の利便性がよく、コンプライアンスがよいという利点を有している。
（３）本発明の化合物は、白色の結晶の小分子、液体または無色溶剤に溶解できる無色の液体である。それにより、本発明の薬品を皮膚に塗るとき違和感を与えることを防止することができる。
（２）本発明の化合物およびそれで製造される薬物が乾癬病を結合抑制する目標位置はＡＩＭ２経路の上流に位置する。従来の生物学的抑制剤（生物学的抑制剤はいずれも、乾癬病免疫炎症経路の中下流に位置し、対症治療方法に属するが、治療効果の安定性がよくないという欠点を有している。したがって、生物学的抑制剤の飲用を停止させると、半年後乾癬病が再び發作するリスクが高い）と比較してみると、本発明の化合物は、炎症因子をブロックするレベルが高く、生物学的抑制剤より一層よい予防の効果を有している。従来の生物学的抑制剤は、多数が注射であり、他のシステムに影響を与えるおそれがある。本発明の化合物は、吸収性がよく、薬品の飲用によるいろいろな副作用を避け、安全性が高く、適用の範囲が広く、使用の利便性がよく、コンプライアンスがよいという利点を有している。
（３）本発明の化合物は、白色の結晶の小分子、液体または無色溶剤に溶解できる無色の液体である。それにより、本発明の薬品を皮膚に塗るとき違和感を与えることを防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】ＡＩＭ２の結晶構造を示す図である。
【図2】バーチャルスクリーニングのステップを示す流れ図である。
【図3】ＨａＣａｔ細胞においてＩＬ－１βｍＲＮＡで随時の蛍光量ＰＣＲ測定を実施してえた結果を示す図である。
【図4】ＳＬＤ－１の核磁気スペクトルを示す図である。
【図5】ＳＬＤ－１のＬＣＭＳスペクトルを示す図である。
【図6】ＳＬＤ－１とＡＩＭ２タンパクのインタラクションモードを示す図である。
【図7】ＳＬＤ－１とＡＩＭ２ヒューマンプロテインの親和力を測定することを示す図である。
【図8】ＳＬＤ－１とＡＩＭ２マウスオリジンプロテインの親和力を測定することを示す図である。
【図9】いろいろな用量のＳＬＤ－１に処理されるＨａＣａｔ細胞のＩＬ－βトランスクリプションレベルを示す図である。
【図10】２５ｕＭのＳＬＤ－１に処理されるＨａＣａｔ細胞の形態の変化を示す図である。
【図11】２５ｕＭのＳＬＤ－１に処理されるＨａＣａｔ細胞のＡＩＭ２経路の遺伝子トランスクリプションレベルを示す図である。
【図12】２５ｕＭのＳＬＤ－１に処理されるＨａＣａｔ細胞のＡＩＭ２経路のタンパクのエクスプレッション状況を示す図である。
【図13】各処理組のネズミのＰＡＳＩ評価を示す図である。
【図14】２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を塗布したネズミの表現形を示す図である。
【図15】各処理組のネズミの皮膚の病理学的表現形を示す図である。
【図16】各処理組のネズミの皮膚のフローサイトメトリーの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、本発明の実施例により本発明の技術的事項を詳細に説明するが、下記実施例は本発明の例示にしか過ぎないものであるため、本発明は下記実施例の構成にのみ限定されない。この技術分野の技術者は本発明の要旨を逸脱しない範囲内において設計の改良、変更等をすることができ、それらがあっても本発明に含まれることは勿論である。
【0019】
この明細書中の事項は、本発明の所定の実施例を説明するものであり、本発明を限定するものでない。特別な説明がない限り、単数（例えば、１つ、１個等）の事項は複数の事項を含むこともできる。この明細書中の「含む」、「具備する」、「有する」という用語は、特徴、数字、操作、モジュール、部品、素子、材料またはそれらの組合せの存在を説明するものである。本発明の明細書に記載されている事項に、１個または複数個の他の特徴、数字、操作、モジュール、部品、素子、材料またはそれらの組合せを添加することができる。特別な説明がない限り、この明細書中の符合「／」は「と」または「或いは」を表すことができる。
【0020】
本発明の目的は、化合物（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）またはその化合物の薬用デリバティブ（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）でＡＩＭ２タンパク活性（Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を抑制する応用を提供することにある。前記化合物を乾癬病（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）の治療薬品として使用することにより、ＩＭＱネズミの皮膚病変（ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ）中のＣＤ３＋ＴＣＲ ｄ＋ＲＯＲ γＴ＋比例を効率的に低減し、ＩＭＱネズミの炎症表現形（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を効率的に改善することができる。
【0021】
具体的に、前記化合物は下記式Ｉのとおりである。
【化3】
【0022】
本発明の実施例において、前記化合物またはその化合物の薬用デリバティブでＡＩＭ２タンパク活性を抑制する応用を提供する。
【0023】
具体的に、乾癬病の患者とイミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）に誘導される乾癬病ネズミの単細胞（ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ）のトランスクリプトームシーケンシング（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、ＡＴＡＣシーケンシング、トランスクリプトミクス（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ）、遺伝学オミックス（ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｏｍｉｃｓ）等のマルチオミックス（Ｍｕｌｔｉ－ｏｍｉｃｓ）の研究によると、ＡＩＭ２インフマソーム遺伝子（ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ ｇｅｎｅ）のみが乾癬病の皮膚病変（ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ）と末梢血（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ）において効率的に活性化されることが分かることができる。また、ＡＩＭ２－ＩＬ－１β－ＩＬ－１７信号経路（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ）に複数の乾癬病の感受性遺伝子（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｇｅｎｅ）が存在し、ＡＩＭ２経路が乾癬病の発病と加重において重要な役割をし、ＡＩＭ２経路の活性を調節することによりイミキモドネズミモデルの乾癬病サンプルの炎症表現形を制御できることが分かることができる。ＡＩＭ２は、経路の上流の起動者であり、乾癬病においてＡＩＭ２タンパクをブロックするとともに下流タンパク（Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）を活性化する機能を有し、経路を効率的にブロックする効果を獲得でき、実行因子ＩＬ－１７のみを除去するものより効率的でありかつ長期的な治療効果を有している。従来の系統的生物治療において、上流分子（Ｕｐｓｔｒｅａｍ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）をブロックすることにより、その上流分子に係る経路の影響による他のシステム以上を招来するおそれがある。本発明において、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００装置を採用しかつアミノ結合法（Ａｍｉｎｏ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ）に基づいてタンパクモデル（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｅｌ）の化合物親和力を測定する。つぎに、コンピュータで親和力のレベルを配列することにより１００個のＡＩＭ２小分子（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ）の抑制剤を選び出す。最後に、ＨａＣａｔ細胞モデルにおいて抑制効果を有しておりかつ安全な化合物を選び出す。その化合物は前記Ｉが示す化合物である。
【0024】
具体的に、前記化合物の薬用デリバティブとは、母核（Ｍｏｔｈｅｒ ｎｕｃｌｅｕｓ）構造を保ち、母核構造以外の化合物の構造を変更することにより獲得する化合物を指す。構造が変更される化合物は、ＡＩＭ２タンパクの活性を抑制する機能を保つか或いは化合物の活性を向上させるか或いは薬物動態学的特性（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）等を改善することができる。
【0025】
前記化合物は薬用塩の形式で存在することができる。
【0026】
前記化合物は薬用酸に塩を添加する形式で存在することができるが、他の塩の形式で存在することもできる。
【0027】
本発明の他の実施例において、前記乾癬治療用薬品の製造におけるＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤の使用を提供する。
【0028】
前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は乾癬病の病変組織のＡＩＭ２タンパク活性を抑制する薬品である。以上のとおり、前記化合物は、乾癬病のＡＩＭ２－ＩＬ－１β－ＩＬ－１７信号経路でＡＩＭ２タンパクの活性を抑制することにより乾癬病を治療し、前記化合物は主としてＡＩＭ２に影響を与えることにより、生物学的活性（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を具備しているｃａｓｐａｓｅ－１ ｐ２０とＩＬ－１β ｐ１７の含量を低減する。以上のとおり、前記化合物は、乾癬病のＡＩＭ２－ＩＬ－１β－ＩＬ－１７信号経路にのみ影響を与え、他のシステムに影響を与えず、乾癬病の治療効果がよく、副作用が少ないことが分かることができる。
【0029】
前記化合物は薬用塩の形式で存在することができる。
【0030】
前記化合物は薬用酸に塩を添加する形式で存在することができる。
【0031】
前記ＡＩＭ２タンパク活性の抑制剤は、カプセル（ｃａｐｓｕｌｅ）、錠剤（ｔａｂｌｅｔ）、経口製剤（ｏｒａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）、マイクロカプセル製剤（ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、注射流体（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）、坐薬（ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ）、噴霧剤または軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）であることができる。具体的に、この技術分野の技術者は具体的な薬品供給経路（ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｒｏｕｔｅ）と薬品供給対象により所定の剤型を選択することができる。
【0032】
本発明の他の実施例において、乾癬病の治療に用いられる薬物組成物を提供する。その薬物組成物は少なくとも、式Ｉに示される化合物、薬用キャリア（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃａｒｒｉｅｒ）と／或いは稀釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）を含む。
【化4】
【0033】
薬用キャリアと／或いは稀釈剤を、溶液剤型、カプセル溶液剤型、乳液剤型、懸濁剤型（Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）、気体分散剤型（Ｇａｓ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）、粒子分散剤型（Ｐａｒｔｉｃｌｅ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）、固体分散剤型のうちいずれか一種に用いることができる。
【0034】
前記式Ｉに示される化合物と他の乾癬病治療薬品を一緒に使用することによりもっとよい治療効果を獲得することができる。例えば、前記化合物と下流分子ＩＬ－１７またはＩＬ－２３に向く生物製剤を一緒に使用することができる。その場合、生物製剤の最低有効用量を低減し、生物製剤が他のシステムに影響を与えることをある程度低減することができる。生物製剤のみを使用する場合と比較してみると、より安定であり、より安全な効果を獲得することができる。
【0035】
具体的に、前記薬物の化合物の有効成分の使用量は２．５ｍｇ／ｋｇである。
【0036】
本発明において、ＡＩＭ２タンパク活性の抑制に応用される化合物は、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００装置を採用しかつアミノ結合法に基づいてタンパクモデルの化合物親和力を測定する。つぎに、コンピュータで親和力のレベルを配列することにより１００個のＡＩＭ２小分子の抑制剤を選び出す。最後に、ＨａＣａｔ細胞モデルにおいて抑制効果を有しておりかつ安全な化合物を選び出す。その過程は具体的に下記ステップを含む。
【0037】
（１）ＡＩＭ２タンパクの結晶構造を検出する
ＡＩＭ２タンパク（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎＡＩＭ２，ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｏ１４８６２）のアミノ酸配列（Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ、例えばＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すとおり）とタンパク三次元構造により参考用のタンパク結合ドメイン（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）を選び出す。ＲＣＳＢＰＤＢライブラリーにおいて、ＡＩＭ２のタンパク三次元結晶構造は下記５種がある。表１に示すとおり、その５種において、レゾリューションがよいものは３ＶＤ８と４Ｏ７Ｑである。３ＶＤ８の結晶構造が４Ｏ７Ｑアミノ酸配列より多いので、３ＶＤ８は先に選択可能な結晶構造に配列される。
ＡＩＭ２タンパク（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎＡＩＭ２，ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｏ１４８６２）のアミノ酸配列（Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ、例えばＳＥＱＩＤＮＯ：１に示すとおり）とタンパク三次元構造により参考用のタンパク結合ドメイン（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）を選び出す。ＲＣＳＢＰＤＢライブラリーにおいて、ＡＩＭ２のタンパク三次元結晶構造は下記５種がある。表１に示すとおり、その５種において、レゾリューションがよいものは３ＶＤ８と４Ｏ７Ｑである。３ＶＤ８の結晶構造が４Ｏ７Ｑアミノ酸配列より多いので、３ＶＤ８は先に選択可能な結晶構造に配列される。
【0038】
【表1】
【0039】
（２）結合部位（ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ）の選択
ＡＩＭ２に向くＰＹＤドメインは下流信号経路の調節において重要な役割をする。ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２アミノ酸は特異性を有しており、ＰＹＤドメインは６個のｈｅｌｉｘで構成され、ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８は、ＡＩＭ２とリガンドタンパク質（Ｌｉｇａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）ＡＳＣのＰＹＤがＰＹＤ－ＰＹＤ相互作用を確保する重要なアミノ酸である。したがって、結晶構造３ＶＤ８を参考とし、Ｄ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８で構成される結合部位を選択してＡＩＭ２タンパクの新型小分子抑制剤のバーチャルスクリーニング（ｖｉｒｔｕａｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）を実施する。
ＡＩＭ２に向くＰＹＤドメインは下流信号経路の調節において重要な役割をする。ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２アミノ酸は特異性を有しており、ＰＹＤドメインは６個のｈｅｌｉｘで構成され、ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８は、ＡＩＭ２とリガンドタンパク質（Ｌｉｇａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）ＡＳＣのＰＹＤがＰＹＤ－ＰＹＤ相互作用を確保する重要なアミノ酸である。したがって、結晶構造３ＶＤ８を参考とし、Ｄ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８で構成される結合部位を選択してＡＩＭ２タンパクの新型小分子抑制剤のバーチャルスクリーニング（ｖｉｒｔｕａｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）を実施する。
【0040】
（３）コンピュータのバーチャルスクリーニングの流れ、小分子ライブラリーを確定し、ターゲットプロテイン（Ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）を選択するとともに用意する
コンピュータのバーチャルスクリーニングの流れにおいて、ＡＩＭ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８で構成される結合部位を新型小分子抑制剤のスクリーニング部位にし、ＡＩＭ２三次元結晶構造（ＰＤＢＩＤ：３ＶＤ８）を参考とし（図１に示すとおり）、バーチャルスクリーニングの計画操作ステップは図２に示すとおりである。
コンピュータのバーチャルスクリーニングの流れにおいて、ＡＩＭ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８で構成される結合部位を新型小分子抑制剤のスクリーニング部位にし、ＡＩＭ２三次元結晶構造（ＰＤＢＩＤ：３ＶＤ８）を参考とし（図１に示すとおり）、バーチャルスクリーニングの計画操作ステップは図２に示すとおりである。
【0041】
小分子化合物ライブラリー：小分子データベースにおいてＣｈｅｍｄｉｖを選択する。
ターゲットプロテインを選択するとともに用意する：ＡＩＭ２の三次元構造（３ｖｄ８．ｐｄｂ）に基づいて、ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１の「ＰｒｅｐａｒｅＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅ」モジュールでＡＩＭ２タンパクを処理する。「ＲｅｍｏｖｅＳｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ」においてすべての水分子を選択する。すなわちすべての水分子を除去する。つぎに、「ＡｎａｌｙｚｅＳｅｌｅｃｔｅｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ」でタンパクを分析するとともに修正することにより、タンパクに水素を添加する操作を実施する。最後に、ｓｙｂｙｌのｐｒｏｔｏｍｏｌモジュールで、ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８を選択し、「Ｒｅｓｉｄｕｅ」の活性部位の形成方法により小分子抑制剤の結合キャビティファイルを形成する。すなわち、３ｖｄ８＿Ｈ－Ｒ－０．５０－０．ｓｆｘｃをターゲットプロテインとして処理した出力ファイルを形成する。
ターゲットプロテインを選択するとともに用意する：ＡＩＭ２の三次元構造（３ｖｄ８．ｐｄｂ）に基づいて、ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１の「ＰｒｅｐａｒｅＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅ」モジュールでＡＩＭ２タンパクを処理する。「ＲｅｍｏｖｅＳｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ」においてすべての水分子を選択する。すなわちすべての水分子を除去する。つぎに、「ＡｎａｌｙｚｅＳｅｌｅｃｔｅｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ」でタンパクを分析するとともに修正することにより、タンパクに水素を添加する操作を実施する。最後に、ｓｙｂｙｌのｐｒｏｔｏｍｏｌモジュールで、ＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２のＤ１９、Ｅ２０、Ｄ２３、Ｆ２７、Ｆ２８を選択し、「Ｒｅｓｉｄｕｅ」の活性部位の形成方法により小分子抑制剤の結合キャビティファイルを形成する。すなわち、３ｖｄ８＿Ｈ－Ｒ－０．５０－０．ｓｆｘｃをターゲットプロテインとして処理した出力ファイルを形成する。
【0042】
（４）バーチャルスクリーニング計算
ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１の「ＣｏｍｐｏｕｄＦｉｌｔｅｒｉｎｇ」モジュールでデータベース中の化合物を検出する。すなわち下記規則を満たす化合物を検出する。（ａ）分子量が７００以下であること。（ｂ）ｃＬｏｇＰ（脂質と水の分離係数、ｌｉｐｉｄ－ｗａｔｅｒ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）が－４～６の間にあること。（ｃ）水素ボンドアクセプター（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ ａｃｃｅｐｔｏｒ）の数量が１５個以下であること。（ｄ）水素ボンドドナー（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ ｄｏｎｏｒ）の数量が６個以下であること。（ｅ）回転可能なボンドの数量が１１個より少ないこと。その項目はｓｙｂｙｌ薬物設計プラットフォームの「ｃｏｍｐｏｕｎｄＦｉｌｔｅｒｉｎｇ」モジュールで小分子データベースのプライマリースクリーニング（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）を実施し、原則として前記五規則を守る。しかしながら、五規則を完全に守ることにより、小分子データベースの化合物の数量を大幅に減少させ、化合物の多様性を大幅に低減するおそれがある。また、コンピュータでバーチャルスクリーニングをする目的は、薬物の選択の範囲を大幅に減少させることにあり、どの化合物が所定の生物活性を有しているかを確定するものでない（実験によりそれを確定する必要がある）。化合物の多様性を増加させるため、一定の生物活性を有しているリード化合物（Ｌｅａｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の数量を増加させ、バーチャルスクリーニングの過程において「五規則」のパラメータ範囲をある程度拡大する必要がある。例えば、分子量を７００に拡大し、ｃｌｏｇＰで化合物の親水性／疎水性を表し、範囲を拡大し、親水性を親脂性に変更する。水素ボンドのドナーとレシピエント、回転可能なボンドの数量を所定の範囲内において適当に拡大することができる。
ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１の「ＣｏｍｐｏｕｄＦｉｌｔｅｒｉｎｇ」モジュールでデータベース中の化合物を検出する。すなわち下記規則を満たす化合物を検出する。（ａ）分子量が７００以下であること。（ｂ）ｃＬｏｇＰ（脂質と水の分離係数、ｌｉｐｉｄ－ｗａｔｅｒ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）が－４～６の間にあること。（ｃ）水素ボンドアクセプター（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ ａｃｃｅｐｔｏｒ）の数量が１５個以下であること。（ｄ）水素ボンドドナー（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ ｄｏｎｏｒ）の数量が６個以下であること。（ｅ）回転可能なボンドの数量が１１個より少ないこと。その項目はｓｙｂｙｌ薬物設計プラットフォームの「ｃｏｍｐｏｕｎｄＦｉｌｔｅｒｉｎｇ」モジュールで小分子データベースのプライマリースクリーニング（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）を実施し、原則として前記五規則を守る。しかしながら、五規則を完全に守ることにより、小分子データベースの化合物の数量を大幅に減少させ、化合物の多様性を大幅に低減するおそれがある。また、コンピュータでバーチャルスクリーニングをする目的は、薬物の選択の範囲を大幅に減少させることにあり、どの化合物が所定の生物活性を有しているかを確定するものでない（実験によりそれを確定する必要がある）。化合物の多様性を増加させるため、一定の生物活性を有しているリード化合物（Ｌｅａｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の数量を増加させ、バーチャルスクリーニングの過程において「五規則」のパラメータ範囲をある程度拡大する必要がある。例えば、分子量を７００に拡大し、ｃｌｏｇＰで化合物の親水性／疎水性を表し、範囲を拡大し、親水性を親脂性に変更する。水素ボンドのドナーとレシピエント、回転可能なボンドの数量を所定の範囲内において適当に拡大することができる。
【0043】
［１］１回目のバーチャルスクリーニング計算
Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェア中のＳｕｒｆｌｅｘモジュールでスクリーニングを実施する。一部の分子のドッキングパラメータ（Ｄｏｃｋｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）を修正することにより１回目のバーチャルスクリーニングを加速化させ、選択された分子はスコアリングバリュー（Ｓｃｏｒｉｎｇ ｖａｌｕｅ）がｔｏｐ１％に位置する小分子化合物である。具体的に、「ＭａｘｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｐｅｒＦｒａｇｍｅｎｔ」を黙認の２０から１０に減少させ、「Ｍａｘｎｕｍｂｅｒｏｆｒｏｔａｔａｂｌｅｂｏｎｄｓｐｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ」を黙認の１００から５０に減少させる。黙認の「Ｐｅｒ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」と「Ｐｏｓｔ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」の選択を取り消す。「Ｍａｘｉｍｕｍｎｕｍｂｅｒｏｆｐｏｓｅｓｐｅｒｌｉｇａｎｄ」を黙認の２０から３に減少させる。すなわち、前３位の各リガンド分子（Ｌｉｇａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）の分子コンホメーション（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のみを保留し、ドッキングの速度を加速化させることにより、最後にｔｏｐ１％の化合物を獲得する。
Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェア中のＳｕｒｆｌｅｘモジュールでスクリーニングを実施する。一部の分子のドッキングパラメータ（Ｄｏｃｋｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）を修正することにより１回目のバーチャルスクリーニングを加速化させ、選択された分子はスコアリングバリュー（Ｓｃｏｒｉｎｇ ｖａｌｕｅ）がｔｏｐ１％に位置する小分子化合物である。具体的に、「ＭａｘｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｐｅｒＦｒａｇｍｅｎｔ」を黙認の２０から１０に減少させ、「Ｍａｘｎｕｍｂｅｒｏｆｒｏｔａｔａｂｌｅｂｏｎｄｓｐｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ」を黙認の１００から５０に減少させる。黙認の「Ｐｅｒ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」と「Ｐｏｓｔ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」の選択を取り消す。「Ｍａｘｉｍｕｍｎｕｍｂｅｒｏｆｐｏｓｅｓｐｅｒｌｉｇａｎｄ」を黙認の２０から３に減少させる。すなわち、前３位の各リガンド分子（Ｌｉｇａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）の分子コンホメーション（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のみを保留し、ドッキングの速度を加速化させることにより、最後にｔｏｐ１％の化合物を獲得する。
【0044】
［２］２回目のバーチャルスクリーニング計算
Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェア中のＳｕｒｆｌｅｘモジュールで２回目のスクリーニングを実施する。１回目のスクリーニングにより獲得したｔｏｐ１％のｈｉｔｓにおいて、黙認パラメータ（すなわち、「ＭａｘｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｐｅｒＦｒａｇｍｅｎｔ」は黙認の２０であり、「Ｍａｘｎｕｍｂｅｒｏｆｒｏｔａｔａｂｌｅｂｏｎｄｓｐｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ」は黙認のものである。「Ｐｅｒ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」と「Ｐｏｓｔ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」の選択肢を黙認の選択肢にし、化合物のドッキング前後のエネルギーの最小化と最適化を実施し、各分子の最初のコンホメーションの数量を４個に増加させる）を回復させ、ｔｏｐ５００のターゲット中の化合物に対して人工的スクリーニングを実施する。
Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェア中のＳｕｒｆｌｅｘモジュールで２回目のスクリーニングを実施する。１回目のスクリーニングにより獲得したｔｏｐ１％のｈｉｔｓにおいて、黙認パラメータ（すなわち、「ＭａｘｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｐｅｒＦｒａｇｍｅｎｔ」は黙認の２０であり、「Ｍａｘｎｕｍｂｅｒｏｆｒｏｔａｔａｂｌｅｂｏｎｄｓｐｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ」は黙認のものである。「Ｐｅｒ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」と「Ｐｏｓｔ－ＤｏｃｋＭｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ」の選択肢を黙認の選択肢にし、化合物のドッキング前後のエネルギーの最小化と最適化を実施し、各分子の最初のコンホメーションの数量を４個に増加させる）を回復させ、ｔｏｐ５００のターゲット中の化合物に対して人工的スクリーニングを実施する。
【0045】
［３］人工的スクリーニングと再検査
２回目のスクリーニングにより獲得した５００個のターゲット中の化合物に対して人工的スクリーニングを実施し、それらを総合的に考慮する。前記化合物とＡＩＭ２のＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２には安定のインタラクション（水素ボンド、疎水、π－π堆積シミュレーション）が形成される。具体的に、前記化合物とＡＩＭ２上のＡｒｇ２４、Ｌｅｕ７２、Ａｓｎ７３等の複数のアミノ酸は複数の水素ボンドのインタラクションを形成する。また、結合部位に複数の疎水性アミノ酸、例えばＰｈｅ２７、Ｐｈｅ２８、Ａｌａ３６、Ｌｅｕ４０、Ｌｅｕ７２が存在することにより疎水性ポケット（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｐｏｃｋｅｔ）を形成することができる。ターゲット中の化合物は多数の水素ボンドのドナー（とレシピエント）のグループ、芳香環（Ａｒｏｍａｔｉｃ ｒｉｎｇ）構造と疎水性置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）を具備する。化合物の構造は所定の剛性を有する必要がある。回転可能なボンドの数量が多すぎるといけない。
２回目のスクリーニングにより獲得した５００個のターゲット中の化合物に対して人工的スクリーニングを実施し、それらを総合的に考慮する。前記化合物とＡＩＭ２のＰＹＤドメインのａｌｐｈａ２には安定のインタラクション（水素ボンド、疎水、π－π堆積シミュレーション）が形成される。具体的に、前記化合物とＡＩＭ２上のＡｒｇ２４、Ｌｅｕ７２、Ａｓｎ７３等の複数のアミノ酸は複数の水素ボンドのインタラクションを形成する。また、結合部位に複数の疎水性アミノ酸、例えばＰｈｅ２７、Ｐｈｅ２８、Ａｌａ３６、Ｌｅｕ４０、Ｌｅｕ７２が存在することにより疎水性ポケット（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｐｏｃｋｅｔ）を形成することができる。ターゲット中の化合物は多数の水素ボンドのドナー（とレシピエント）のグループ、芳香環（Ａｒｏｍａｔｉｃ ｒｉｎｇ）構造と疎水性置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）を具備する。化合物の構造は所定の剛性を有する必要がある。回転可能なボンドの数量が多すぎるといけない。
【0046】
【表2】
【0047】
（５）ＨａＣａｔ細胞モデルにおいて抑制の効果を具備している化合物を選択する
選択された１００種の化合物でＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔが刺激したＨａＣａｔ細胞のピロプトシスの保護能力を評価し、その評価の標準は刺激後の細胞中のＩＬ－１βｍＲＮＡに対して随時蛍光量ＰＣＲを実施する測定である。陽性対照組と比較してみると、１００個の小分子抑制剤において抑制の効果が最もよい（ｐ＜０．０００１）小分子を選択して、それらを理想的な抑制剤にする。本発明において化合物Ｉ（ＳＬＤ－１またはＤ３００－０２７０ともいう）を使用する。
選択された１００種の化合物でＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔが刺激したＨａＣａｔ細胞のピロプトシスの保護能力を評価し、その評価の標準は刺激後の細胞中のＩＬ－１βｍＲＮＡに対して随時蛍光量ＰＣＲを実施する測定である。陽性対照組と比較してみると、１００個の小分子抑制剤において抑制の効果が最もよい（ｐ＜０．０００１）小分子を選択して、それらを理想的な抑制剤にする。本発明において化合物Ｉ（ＳＬＤ－１またはＤ３００－０２７０ともいう）を使用する。
【0048】
［１］実験組に陽性対照（ＰＣ）と陰性対照（ＮＣ）を設置する。ＰＣ組はＬｉｐ３０００（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ）とＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔのインクルージョン（ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔ：Ｌｉｐ３０００：Ｐ３０００＝１：１：２５、ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔの濃度は１ｕｇ／ｍＬである）でＨａＣａｔ細胞をトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）する。各処理組において、Ｌｉｐ３０００－ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔインクルージョンと１０ｕＭの小分子抑制剤でＨａＣａｔ細胞をトランスフェクションし、ＮＣ組には同量のトランスフェクション試薬（Ｌｉｐ３０００：Ｐ３０００＝１：１）を添加する。
【0049】
［２］各実験組を５％の細胞インキュベーター（Ｃｅｌｌ ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）を送入して３７℃で２４時間の孵化を実施し、収集した細胞を随時蛍光量ＰＣＲ測定方法で測定する。１００個の小分子抑制剤において抑制の効果が最もよい（ｐ＜０．０００１）小分子を選択して、それらを理想的な抑制剤にする。その結果は図３に示すとおりである。
【0050】
前記方法で選び出した小分子化合物Ｉ（ＳＬＤ－１またはＤ３００－０２７０ともいう）の名称は、５－［２－［４－［（２－アミノ）メチル］フェノキシ］－１－ヒドロキシエチル］－１，３－ジメチルベンズイミダゾール－２－ケトンであり、分子量は４６１．２７であり、化学式は下記式Ｉに示すとおりである。
【化5】
【0051】
選択された小分子化合物Ｉに対してキャラクタライゼーション（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を実施する。その過程は具体的に下記ステップを含む。
（１）小分子化合物Ｉに対して核磁気キャラクタライゼーション（Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を実施し、その結果は図４に示すとおりである。芳香環特性水素（Ａｒｏｍａｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ）及びシュウヒドライル（ｏｘｈｙｄｒｙｌ）は明確であり、スプリット（ｓｐｌｉｔ）は明らかであり、化合物の構造は正確である。
（１）小分子化合物Ｉに対して核磁気キャラクタライゼーション（Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を実施し、その結果は図４に示すとおりである。芳香環特性水素（Ａｒｏｍａｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ）及びシュウヒドライル（ｏｘｈｙｄｒｙｌ）は明確であり、スプリット（ｓｐｌｉｔ）は明らかであり、化合物の構造は正確である。
【0052】
（２）小分子化合物Ｉに対してＬＣＭＳ測定を実施し、その結果は図５に示すとおりである。保持時間は２．１１であり、ＭＳ＋１は化合物の目標分子量であり、フラグメントイオンピーク（Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｉｏｎ ｐｅａｋ）４４４．７は化合物のシュウヒドライルが除去された二重ＭＳ＋１であり、それは目標化合物の特性に合う。
【0053】
検出された小分子化合物Ｉの合成流れはつぎのとおりである。
【化6】
【0054】
下記実施例のデータの統計分析方法において、型番がＳＰＳＳ２３．０とＲＶｅｒｓｉｏｎ４．０．２であるソフトウェアによりデータの処理と分析を実施する。すべての測定はツーテールテスト（Ｔｗｏ－ｔａｉｌｅｄ ｔｅｓｔ）であり、Ｐ値が０．０５より小さいものを統計の意義があるものと見なす。
【0055】
本発明をより詳細に説明するため、以下、具体的な実施例により本発明の事項を詳細に説明するが、本発明は下記実施例にのみ限定されるものでない。
【0056】
＜実施例１において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２タンパクのインタラクションモード（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ）＞
ＳＬＤ－１とＡＩＭ２タンパクが結合された後の構造をシミュレーション（ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ）する。まず、Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェアのＳｕｒｆｌｅｘモジュールで二回の結合のシミュレーションをする。つぎに、ＡＩＭ２上のＡｒｇ２４、Ｌｅｕ７２、Ａｓｎ７３等の複数のアミノ酸と形成された複数の水素ボンドのインタラクションにより人工的スクリーニングと再検査を実施する。図６の結果に示されるとおり、ＳＬＤ－１と複数のアミノ酸、例えばＡｒｇ２４（サイドチェーンの疎水部分）、Ｌｙｓ２６（サイドチェーンの疎水部分）、Ｐｈｅ２７、Ｐｈｅ２８、Ｌｅｕ４０、Ｈｉｓ４１、Ｌｙｓ７１及びＬｅｕ７２との間に強烈な疎水シミュレーションが生ずることが分かることができる。また、化合物ＳＬＤ－１とＰｈｅ２７及びＰｈｅ２８との間にπ－π堆積シミュレーションが生ずることが分かることができる。疎水、π－π堆積等のシミュレーションにより化合物ＳＬＤ－１とタンパクＡＩＭ２の結合を維持することができる。
ＳＬＤ－１とＡＩＭ２タンパクが結合された後の構造をシミュレーション（ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ）する。まず、Ｓｙｂｙｌ－Ｘ２．１ソフトウェアのＳｕｒｆｌｅｘモジュールで二回の結合のシミュレーションをする。つぎに、ＡＩＭ２上のＡｒｇ２４、Ｌｅｕ７２、Ａｓｎ７３等の複数のアミノ酸と形成された複数の水素ボンドのインタラクションにより人工的スクリーニングと再検査を実施する。図６の結果に示されるとおり、ＳＬＤ－１と複数のアミノ酸、例えばＡｒｇ２４（サイドチェーンの疎水部分）、Ｌｙｓ２６（サイドチェーンの疎水部分）、Ｐｈｅ２７、Ｐｈｅ２８、Ｌｅｕ４０、Ｈｉｓ４１、Ｌｙｓ７１及びＬｅｕ７２との間に強烈な疎水シミュレーションが生ずることが分かることができる。また、化合物ＳＬＤ－１とＰｈｅ２７及びＰｈｅ２８との間にπ－π堆積シミュレーションが生ずることが分かることができる。疎水、π－π堆積等のシミュレーションにより化合物ＳＬＤ－１とタンパクＡＩＭ２の結合を維持することができる。
【0057】
＜実施例２において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２ヒューマンプロテインが強い親和力を具備していることを測定する＞
本発明の実施例において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２ヒューマンプロテイン（Ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）の親和力を測定する。まず、ｐＥＴ２８Ａキャリアでヒューマン全長ＡＩＭ２タンパクをエクスプレッション（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）するととも純化する。つぎに、Ｂｉａｃｏｒｅの表面プラズモンレゾナンス（ｓｕｒｆａｃｅ－ｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）方法とＣＭ５チップのアミノ結合法で親和力を測定する。測定の結果は図７に示すとおりであり、その結果によると、ＳＬＤ－１とヒューマンＡＩＭ２プロテインは特異結合特性を具備しており、結合常数は１．０２９Ｅ－５Ｍであり、結合程度が強いことが分かることができる。
本発明の実施例において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２ヒューマンプロテイン（Ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）の親和力を測定する。まず、ｐＥＴ２８Ａキャリアでヒューマン全長ＡＩＭ２タンパクをエクスプレッション（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）するととも純化する。つぎに、Ｂｉａｃｏｒｅの表面プラズモンレゾナンス（ｓｕｒｆａｃｅ－ｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）方法とＣＭ５チップのアミノ結合法で親和力を測定する。測定の結果は図７に示すとおりであり、その結果によると、ＳＬＤ－１とヒューマンＡＩＭ２プロテインは特異結合特性を具備しており、結合常数は１．０２９Ｅ－５Ｍであり、結合程度が強いことが分かることができる。
【0058】
＜実施例３において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２マウスオリジンプロテインが強い親和力を具備していることを測定する＞
本発明の実施例において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２マウスオリジンプロテイン（Ｍｕｒｉｎｅ ｏｒｉｇｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）の親和力を測定する。まず、ｐＥＴ２８Ａキャリアでマウスオリジン全長ＡＩＭ２タンパクをエクスプレッションするととも純化する。つぎに、Ｂｉａｃｏｒｅの表面プラズモンレゾナンス（ｓｕｒｆａｃｅ－ｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）方法とＣＭ５チップのアミノ結合法で親和力を測定する。測定の結果は図８に示すとおりであり、その結果によると、ＳＬＤ－１とマウスオリジンＡＩＭ２プロテインは特異結合特性を具備しており、結合常数は１．０３３Ｅ－５Ｍであり、結合程度が強いことが分かることができる。
本発明の実施例において、ＳＬＤ－１とＡＩＭ２マウスオリジンプロテイン（Ｍｕｒｉｎｅ ｏｒｉｇｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）の親和力を測定する。まず、ｐＥＴ２８Ａキャリアでマウスオリジン全長ＡＩＭ２タンパクをエクスプレッションするととも純化する。つぎに、Ｂｉａｃｏｒｅの表面プラズモンレゾナンス（ｓｕｒｆａｃｅ－ｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）方法とＣＭ５チップのアミノ結合法で親和力を測定する。測定の結果は図８に示すとおりであり、その結果によると、ＳＬＤ－１とマウスオリジンＡＩＭ２プロテインは特異結合特性を具備しており、結合常数は１．０３３Ｅ－５Ｍであり、結合程度が強いことが分かることができる。
【0059】
＜実施例４において、ＳＬＤ－１がＨａＣａｔ細胞モデルにおいてＡＩＭ２タンパクの活性を効率的に抑制する＞
（１）陽性対照（ＰＣ）、陰性対照（ＮＣ）及び各処理組を設置する。ＰＣ組はＬｉｐ３０００（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ）とＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔのインクルージョン（ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔ：Ｌｉｐ３０００：Ｐ３０００＝１：１：２５、ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔの濃度は１ｕｇ／ｍＬである）でＨａＣａｔ細胞をトランスフェクションする。ＮＣ組には同量のトランスフェクション試薬（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ）を添加する。各処理組はいろいろなグラジェントドーズ（０．１ｕＭ、１ｕＭ、５ｕＭ、１０ｕＭ、２５ｕＭ）のＳＬＤ－１に向いてＬｉｐ３０００－ＯｌｉｇｏｄＡ－ＴインクルージョンでＨａＣａｔ細胞をトランスフェクションする。
（１）陽性対照（ＰＣ）、陰性対照（ＮＣ）及び各処理組を設置する。ＰＣ組はＬｉｐ３０００（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ）とＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔのインクルージョン（ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔ：Ｌｉｐ３０００：Ｐ３０００＝１：１：２５、ＯｌｉｇｏｄＡ－Ｔの濃度は１ｕｇ／ｍＬである）でＨａＣａｔ細胞をトランスフェクションする。ＮＣ組には同量のトランスフェクション試薬（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ）を添加する。各処理組はいろいろなグラジェントドーズ（０．１ｕＭ、１ｕＭ、５ｕＭ、１０ｕＭ、２５ｕＭ）のＳＬＤ－１に向いてＬｉｐ３０００－ＯｌｉｇｏｄＡ－ＴインクルージョンでＨａＣａｔ細胞をトランスフェクションする。
【0060】
（２）前記陽性対照（ＰＣ）、陰性対照（ＮＣ）及び各処理組を５％のＣＯ２の細胞インキュベーターを送入して３７℃で２４時間の孵化を実施し、収集した細胞を随時蛍光量ＰＣＲ測定方法で測定することにより異なる用量の抑制剤がＨａＣａｔ細胞のＡＩＭ２経路の活性化に与える影響を測定する。図９の結果に示されるとおり、陽性対照組と比較してみると、２５ｕＭのＳＬＤ－１が５個のグラジェントドーズにおいてＨａＣａｔ細胞に対するＩＬ－βトランスクリプションレベル（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ）の減少が最も多いことが分かることができる。
【0061】
（３）１００倍と４００倍の顕微鏡で２５ｕＭグラジェント（ｇｒａｄｉｅｎｔ）の細胞の状態を観察し、その結果は図１０に示すとおりである。その組の細胞の状態は陰性対照組の細胞の状態に接近し、透明なピロプトシス（ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ）細胞の比例が非常に少なく、細胞の密度が高く、アタッチメント（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）がよいことが分かることができる。
【0062】
（２）と（３）において獲得した結果によると、２５ｕＭのＳＬＤ－１がＨａＣａｔ細胞のＡＩＭ２活性を抑制できる最適な使用量であることが分かることができる。
【0063】
（４）つぎに、２５ｕＭのＳＬＤ－１がＨａＣａｔ細胞モデルのＡＩＭ２経路の遺伝子トランスクリプションレベルに与える影響を測定し、その結果は図１１に示すとおりである。陽性対照組と比較してみると、ＡＩＭ２経路の重要な遺伝子のトランスクリプションレベルが大幅に低下することが分かることができる。
【0064】
（５）つぎに、２５ｕＭのＳＬＤ－１に処理されるＨａＣａｔ細胞のＡＩＭ２下流タンパクのエクスプレッション状況を測定する。図１２の結果に示されるとおり、２５ｕＭのＳＬＤ－１に対する処理は、ＡＩＭ２下流のｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－１とｐｒｏＩＬ－１βに影響を与えず、ｃａｓｐａｓｅ－１ｐ２０とＩＬ－１βｐ１７の含量を低減する。それは、ＳＬＤ－１が活性ｃａｓｐａｓｅ－１と活性ＩＬ－１βのエクスプレッションを効率的に低減することを意味する。
【0065】
＜実施例５において、ＳＬＤ－１が乾癬病動物のモデルにおいてＡＩＭ２タンパクの活性を効率的に抑制する＞
ＤＭＳＯでＳＬＤ－１粉末を溶解させ、いろいろな使用量に対応する粉末の重量を測定する。つぎに、β－サイクロデキストリン（β－Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）で希釈することによりＤＭＳＯの最後の濃度を５％以下にする。ＳＬＤ－１のドーズグラジェントをそれぞれ、０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇに設定する。各ネズミの重量を２０ｇに仮定する場合、各ネズミに０ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇの薬品を投げ与える必要がある。
ＤＭＳＯでＳＬＤ－１粉末を溶解させ、いろいろな使用量に対応する粉末の重量を測定する。つぎに、β－サイクロデキストリン（β－Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）で希釈することによりＤＭＳＯの最後の濃度を５％以下にする。ＳＬＤ－１のドーズグラジェントをそれぞれ、０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇに設定する。各ネズミの重量を２０ｇに仮定する場合、各ネズミに０ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇの薬品を投げ与える必要がある。
【0066】
年齢が７歳であるＣ５７／ＢＬ６ネズミを選択し、ＳＰＦレベルの環境においてその飼養とモデリンクを実施し、下記８個の実験組を形成する。
（１）イミキモド（ＩＭＱ）と０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（２）ＩＭＱと２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（３）ＩＭＱと５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（４）ＩＭＱと１０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（５）ワセリン（Ｖａｓｅｌｉｎｅ）と０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（６）Ｖａｓｅｌｉｎｅと２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（７）Ｖａｓｅｌｉｎｅと５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（８）Ｖａｓｅｌｉｎｅと１０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（１）イミキモド（ＩＭＱ）と０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（２）ＩＭＱと２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（３）ＩＭＱと５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（４）ＩＭＱと１０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（５）ワセリン（Ｖａｓｅｌｉｎｅ）と０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（６）Ｖａｓｅｌｉｎｅと２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（７）Ｖａｓｅｌｉｎｅと５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
（８）Ｖａｓｅｌｉｎｅと１０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１を皮膚に塗布する。
【0067】
各組の６匹のネズミにおいて、ネズミの背中の毛を剃ることにより面積が４ｃｍ２である背中の皮膚を露出させ、実験の開始日付をＤａｙ０に設定し、終止日付をＤａｙ６に設定する。Ｄａｙ０～Ｄａｙ５において、毎日１００マイクロリットルの薬品を取ってネズミの背中に均等に塗布することによりその薬品がネズミの背中に染み込むようにする。Ｄａｙ２～Ｄａｙ５において、毎日ＳＬＤ－１を塗布してから２０分が過ぎると、各ネズミに６２．５ｍｇのＩＭＱを塗布する。毎日ネズミの皮膚の状態を評価し、Ｄａｙ５においてネズミの安楽死を実施した後、皮膚組織を取っていろいろな測定を実施する。
【0068】
ＩＭＱモデリンクのネズミのＰＡＳＩ評価の結果、皮膚の表現形及び皮膚の病理学的表現形（Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）は、図１３、図１４及び図１５に示すとおりである。３つの使用量のＳＬＤ－１でＩＭＱネズミの炎症表現形をある程度低減することができる。具体的に、２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１による治療の効果が最もよく、５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１と１０ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１による治療の効果は類似している。
【0069】
つぎに、各組のネズミの皮膚のリンパ細胞（ネズミの皮膚のリンパ細胞中のＣＤ３＋ＴＣＲｄ＋ＲＯＲγＴ＋のＴリンパ細胞の比例を測定し、そのような細胞は乾癬病においてＡＩＭ２経路に誘導される重要な奏効細胞（ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌ）であり、大量のＩＬ－１７細胞因子を分泌することより乾癬病がより激しくなる）を取ってフローサイトメトリー（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を実施する。その結果は図１６に示すとおりである。ＳＬＤ－１を使用しないＩＭＱネズミと比較してみると、２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１で処理することによりＩＭＱネズミのＣＤ３＋ＴＣＲｄ＋ＲＯＲγＴ＋比例を効率的に低減することができる。
【0070】
つぎに、ネズミの皮膚のＡＩＭ２経路の遺伝子のトランスクリプションレベルを測定する。各組の間には統計学的差異が存在せず、タンパクレベルは図１７に示すとおりである。その結果によると、２．５ｍｇ／ｋｇのＳＬＤ－１に処理されたネズミの皮膚のＡＩＭ２下流のｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－１とｐｒｏＩＬ－１βに影響を与えず、ｃａｓｐａｓｅ－１ｐ２０とＩＬ－１βｐ１７含量を低減できることが分かることができる。それは、ＳＬＤ－１が活性ｃａｓｐａｓｅ－１と活性ＩＬ－１βのエクスプレッションを効率的に低減することを意味する。
【0071】
以上、本発明の好適な実施例を説明してきたが、前記実施例は、本発明の例示にしか過ぎないものであり、本発明は前記実施例の構成にのみ限定されるものでない。この技術分野の技術者は本発明の要旨を逸脱しない範囲内において設計の変更、改良等をすることができ、それらがあっても本発明の特許請求の範囲が定めた範囲に含まれることは勿論である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【配列表】