【図1】 （図１Ａ～Ｃ）架橋免疫原性アッセイにおける可溶性二量体／多量体標的からの干渉を描写する。（Ａ）ヒト血清サンプル中の陽性対照またはＡＤＡは、ビオチン化薬物およびルテニル化薬物を架橋し、真陽性ＡＤＡシグナルを生成する。（Ｂ）しかしながら、二量体／多量体標的はまた、ビオチン化薬物およびルテニル化薬物の両方に結合し、標的媒介偽陽性シグナルを生成し得る。（Ｃ）抗標的抗体または他の標的遮断試薬は、二量体標的のビオチン化薬物およびルテニル化薬物への結合を防止し、標的媒介偽陽性シグナルを無効にし得る。（Ｃ）の標識試薬は、捕捉薬物（１）、検出薬物（２）、および１つ以上の薬物標的遮断分子（３）を表す。

【図2】 （図２Ａ～Ｃ）標的遮断抗体ＨｕＡｂ１およびアッセイｐＨのアッセイシグナルに対する影響を描写する。（Ａ）標的遮断抗体がない場合、酸解離は、標的をおそらくその内因性結合タンパク質から放出することにより、ナイーブヒト血清サンプルのバックグラウンドアッセイシグナルを増加させた。（Ｂ）中性ｐＨ（約３ｎｇ／ｍＬ～１５０ｎｇ／ｍＬ）で１００μｇ／ｍＬのＨｕＡｂ１を添加すると、標的許容レベルが改善し、ＨｕＡｂ１と弱い塩基性ｐＨとの組み合わせでさらに改善（約１．１μｇ／ｍＬ）した。（Ｃ）塩基性アッセイ条件（ｐＨ８．３）で１００μｇ／ｍＬのＨｕＡｂ１を添加すると、ナイーブヒト血清サンプルの標的媒介シグナルが大幅に低減した。

【図3-1】 （図３Ａ～Ｄ）標的遮断抗体ＨｕＡｂ１およびアッセイｐＨ８．３を使用して、異なる対象からの臨床研究サンプルの分析から得られたＡＤＡシグナルは、標的レベルと相関したが、それらの薬物動態プロファイルと一致しなかったことを描写する。（Ａ）各臨床サンプルの標的濃度。（Ｂ）１００μｇ／ｍＬの標的遮断抗体ＨｕＡｂ１およびｐＨ８．３を使用したＡＤＡシグナル。（Ｃ）試験された３人の対象の薬物Ｘ濃度プロファイル。（Ｄ）ＨｕＡｂ１（１００μｇ／ｍＬ）および弱い塩基性ｐＨと組み合わせた第２の抗標的抗体（１００μｇ／ｍＬのＨｕＡｂ２）の添加は、臨床サンプルにおける標的媒介バックグラウンドシグナルを効果的に低減した。

【図3-2】 同上。

【図4-1】 （図４Ａ～Ｃ）標的干渉を阻害するだけでなく、起こり得る偽陰性シグナルを回避するためにも、さらなるアッセイ最適化後のシグナル対ノイズ比（アッセイバックグラウンドシグナルと比較したサンプルのアッセイシグナル）を描写する。（Ａ）ＨｕＳＲとＨｕＡｂ２との組み合わせは、臨床研究サンプル中の標的干渉を軽減する上で、ＨｕＡｂ１とＨｕＡｂ２との組み合わせと同じくらい効果的であった。（Ｂ）および（Ｃ）のマウスＦｃを用いた標的遮断試薬（ＭｓＳＲおよびＭｓＡｂ２）はいっそう、臨床研究サンプル中の標的干渉を効果的に軽減する。

【図4-2】 同上。

【図5】 （図５）１００μｇ／ｍＬのＭｓＳＲ、１００μｇ／ｍＬのＭｓＡｂ２、およびアッセイｐＨ８．３による臨床研究サンプル中の標的干渉の除去を描写する。４つの異なる時点（１日目、２９日目、５７日目、および１１３日目）で７人の対象からの臨床研究サンプル中でバックグラウンドアッセイシグナルのみが検出された。

【図6-1】 （図６Ａ～Ｂ）免疫ウサギ血清およびラット毒物学サンプルにおけるポリクローナルＡＤＡ検出に対する弱い塩基性アッセイｐＨおよび標的遮断試薬の最小限の影響を描写する。（Ａ）弱い塩基性ｐＨ８．３は、薬物Ｆａｂで免疫したウサギ血清中のＡＤＡ検出に悪影響を有しなかった。（Ｂ）改善されたアッセイ形式は、標的媒介シグナルを軽減し、ラット毒物学サンプル中の実際のＡＤＡシグナルを検出する。

【図6-2】 同上。

【図7-1】 （図７Ａ～Ｂ）標的遮断試薬の不在下および存在下で、異なるアッセイｐＨによる標的の薬物への結合を描写する。（Ａ）異なるアッセイ条件による結合会合および解離曲線。波長シフト（Δｎｍ）は、標的の薬物への結合の結果としてバイオセンサーチップの厚さの変化に正比例する。標的の薬物への会合および解離は、ｐＨ７．３およびｐＨ８．２で、ｐＨ７．３のＭｓＡｂ２およびＭｓＳＲの存在下、ならびにｐＨ８．２のＭｓＡｂ２およびＭｓＳＲの存在下で示される。ｐＨ７．３およびｐＨ８．２での緩衝液対照も示される。標的の薬物への結合は、ｐＨ８．３のみにより部分的に阻害される。中性アッセイｐＨのＭｓＡｂ２とＭｓＳＲとの組み合わせは、標的の薬物への結合を大幅に低減し得るが、結合の完全な阻害は、ＭｓＡｂ２、ＭｓＳＲ、および弱い塩基性ｐＨの組み合わせで達成される。（Ｂ）臨床サンプル中の標的媒介シグナルは、弱い塩基性ｐＨのみ、または中性ｐＨでのＭｓＡｂ２およびＭｓＳＲの存在により部分的に阻害された。しかしながら、標的干渉の完全な阻害は、ＭｓＡｂ２、ＭｓＳＲ、およびｐＨ８．３の組み合わせにより達成される。

【図7-2】 同上。