(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-23
(45)【発行日】2024-05-31
(54)【発明の名称】フロ［３，４－ｂ］ピロール含有ＢＴＫ阻害剤
(51)【国際特許分類】
C07D 519/00 20060101AFI20240524BHJP
A61K 31/4985 20060101ALI20240524BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240524BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240524BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240524BHJP
C07F 9/6561 20060101ALI20240524BHJP
A61K 31/675 20060101ALI20240524BHJP
【ＦＩ】
C07D519/00 301
C07D519/00 CSP
A61K31/4985
A61P35/00
A61P35/02
A61P43/00 111
C07F9/6561 Z
A61K31/675
【請求項の数】
22
(21)【出願番号】P 2021513940
(86)(22)【出願日】2019-09-12
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-04
(86)【国際出願番号】 CN2019105584
(87)【国際公開番号】W WO2020052628
(87)【国際公開日】2020-03-19
【審査請求日】2022-09-07
(31)【優先権主張番号】201811072116.0
(32)【優先日】2018-09-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】516089784
【氏名又は名称】チア タイ ティエンチン ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｈｉａ Ｔａｉ Ｔｉａｎｑｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３６９ Ｙｕｚｈｏｕ Ｓｏｕｔｈ Ｒｄ．，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０６２ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】チャン，インシェン
(72)【発明者】
【氏名】シュウ，ホンジャン
(72)【発明者】
【氏名】レン，ジン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，チンリン
(72)【発明者】
【氏名】ウー，チェヤン
(72)【発明者】
【氏名】ジン，チャオ
(72)【発明者】
【氏名】シ，ウェイ
(72)【発明者】
【氏名】ワン，シャオジン
(72)【発明者】
【氏名】ヘ，シャンイ
(72)【発明者】
【氏名】チャン，シャユン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ジエ
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ，ティエンシャオ
【審査官】早乙女 智美
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１８／１３３１５１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／００１３３１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１７／０７７５０７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０８１２９４８３（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０７７５９６０２（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０６８３１７８９（ＣＮ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）：【化33】
［式中、
環Ｂは、５～６員のヘテロアリールおよびフェニルからなる群から選ばれ、
Ｒ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選ばれ、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは任意選択的にハロゲンで置換されており、
ｍは、０、１、２、３または４から選ばれ、
Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、および－ＯＣ（Ｏ）－からなる群より選ばれ、
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選ばれ、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは任意選択的にハロゲンで置換されており、
ｎは、０、１、２、３または４から選ばれ、
Ｒ３はＨ、ＲａＣ（Ｏ）－、およびＲ ａ Ｓ（Ｏ） ２ －からなる群から選ばれ、
Ｒ５は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選ばれ、
ｐは、０、１、２または３から選ばれ、
Ｒ４は、水素、Ｃ ３－６ シクロアルキル－Ｓ（Ｏ） ２ －、および（Ｃ １－６ アルキル－Ｏ） ２ Ｐ（Ｏ）－からなる群から選ばれ、
ここで、Ｒａは、Ｃ２－３ アルキニル、Ｃ２－３ アルケニル、Ｃ１－３ アルキル、Ｃ３－４ シクロアルキル、（Ｃ１－３ アルキル）ＮＨ－、および（Ｃ １－３ アルキル） ２ Ｎ－からなる群から独立して選ばれ、前記Ｒａは、任意選択的に（Ｃ１－３ アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３ アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲンまたはシアノで置換されている。］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
環Ｂは６員のヘテロアリールから選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
環Ｂはピリジルである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１－３アルキルおよびＣ１－３アルコキシからなる群から独立して選ばれ、前記Ｃ１－３アルキルまたはＣ１－３アルコキシは任意選択的にハロゲンで置換されている、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｒ
１
は、ハロゲンおよび任意選択的にフッ素で置換されているＣ
１－３
アルキルからなる群から独立して選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
Ｒ
１
はトリフルオロメチルである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
ｍは０または１から選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－および－ＯＣ（Ｏ）－からなる群から選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項9】
Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項10】
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－３アルキル、およびＣ１－３アルコキシからなる群から独立して選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項11】
Ｒ
２
は、ハロゲンから独立して選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
Ｒ
２
はフッ素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
ｎは０または１である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
Ｒ
ａ
は、プロピニル、Ｃ２－３アルケニル、メチル、シクロプロピル、シクロブチル、ＣＨ３ＮＨ－、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ－および（ＣＨ３）２Ｎ－からなる群から独立して選ばれ、前記メチル、Ｃ２－３アルケニルおよびシクロプロピルは、任意選択的に（ＣＨ３）２Ｎ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されている、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
Ｒ
３
がＲ
ａ
Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ
ａ
が、ＣＨ
３
Ｃ≡Ｃ－、ＣＨ
２
＝ＣＨ－、およびシクロプロピルからなる群から独立して選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
Ｒ５は、Ｆ、－ＯＨ、－ＮＨ２、メチル、およびメトキシからなる群から独立して選ばれ、ｐは０、１または２である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
Ｒ
４
は水素、シクロプロピル－Ｓ（Ｏ）２－および（ＣＨ３Ｏ）２－Ｐ（Ｏ）－からなる群から選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項18】
Ｒ
４
は水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項19】
前記式（Ｉ）の化合物は、下記の式（II）の化合物および式（III）の化合物からなる群から選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。【化34】
【請求項20】
以下の化合物：【化35】
からなる群から選ばれる化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項21】
医薬組成物であって、請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項22】
ＢＴＫ媒介性の自己免疫性疾患、炎症性疾患、および癌を予防または治療するための、請求項２１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１８年９月１４日に中国国家知的財産局に出願された出願番号がＣＮ２０１８１１０７２１１６．０である中国特許出願に基づく優先権および利益を主張し、当該中国特許出願の内容の全てを本明細書に援用する。
本願は、２０１８年９月１４日に中国国家知的財産局に出願された出願番号がＣＮ２０１８１１０７２１１６．０である中国特許出願に基づく優先権および利益を主張し、当該中国特許出願の内容の全てを本明細書に援用する。
【0002】
本発明は、ＢＴＫ阻害剤としてのフロ［３，４－ｂ］ピロール含有化合物、その製造方法、当該化合物を含む医薬組成物、およびそのＢＴＫ関連疾患の治療における使用に関する。
【背景技術】
【0003】
ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ：ＢＴＫ）は、主にＢ細胞で発現され、リンパ系、造血系および血液系に分布し、構造的に高度な相同性を持っているＴＥＣ、ＩＴＫ／ＴＳＫ／ＥＭＴおよびＢＭＸをさらに含む非受容体型チロシンキナーゼＴｅｃファミリーの一員である。ＢＴＫは、細胞表面Ｂ細胞受容体（Ｂ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）刺激から下流細胞内応答まで接続するＢ細胞シグナル伝達経路において重要な役割を果たし、Ｂ細胞の発育、活性化、シグナル伝達および生存の重要な調節因子である。近年、Ｂ細胞、特にＢ細胞非ホジキンリンパ腫とリウマチ性関節炎に対する研究により、ＢＴＫは異常発現がよく現れることを発見した。
ＢＴＫシグナル伝達経路に基づいて小分子標的薬物を開発し、Ｂ細胞系腫瘍、例えば白血病、多発性骨髄腫およびＢ細胞系免疫疾患の治療に全く新しいアプローチを提供する。現在発売されている不可逆阻害剤、例えばイブルチニブは、そのＢＴＫ結合部位に突然変異がよく発生して薬物活性低下を招くことによって薬剤耐性が生じるため、臨床上より多くのＢＴＫ阻害剤が必要とされ、ＢＴＫに対する選択性が高くなり、それによってオフターゲット効果による毒副作用を回避している。
ＢＴＫシグナル伝達経路に基づいて小分子標的薬物を開発し、Ｂ細胞系腫瘍、例えば白血病、多発性骨髄腫およびＢ細胞系免疫疾患の治療に全く新しいアプローチを提供する。現在発売されている不可逆阻害剤、例えばイブルチニブは、そのＢＴＫ結合部位に突然変異がよく発生して薬物活性低下を招くことによって薬剤耐性が生じるため、臨床上より多くのＢＴＫ阻害剤が必要とされ、ＢＴＫに対する選択性が高くなり、それによってオフターゲット効果による毒副作用を回避している。
【発明の概要】
【0004】
一態様において、本出願は、下記式（Ｉ）：
［式中、
環Ｂは、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルおよびＣ１－６アルコキシは場合によりハロゲンで置換されており、
ｍは、０、１、２、３および４からなる群から選択され、
Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、および－ＯＳ（Ｏ）２－からなる群より選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルおよびＣ１－６アルコキシは場合によりハロゲンで置換されており、
ｎは、０、１、２、３および４からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＲａＣ（Ｏ）－、ＲａＳ（Ｏ）２－、およびＲａ－からなる群から選択され、
Ｒ５は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、
ｐは、０、１、２および３からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－、およびＲａＣ（Ｏ）－からなる群から選択され、
Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲンまたはシアノで置換されている］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化1】
［式中、
環Ｂは、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルおよびＣ１－６アルコキシは場合によりハロゲンで置換されており、
ｍは、０、１、２、３および４からなる群から選択され、
Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、および－ＯＳ（Ｏ）２－からなる群より選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルおよびＣ１－６アルコキシは場合によりハロゲンで置換されており、
ｎは、０、１、２、３および４からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＲａＣ（Ｏ）－、ＲａＳ（Ｏ）２－、およびＲａ－からなる群から選択され、
Ｒ５は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、
ｐは、０、１、２および３からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－、およびＲａＣ（Ｏ）－からなる群から選択され、
Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲンまたはシアノで置換されている］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0005】
他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。
【0006】
他の一態様において、本出願は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、当該治療を必要とする哺乳類に投与することを含む、哺乳類のＢＴＫ関連疾患を予防または治療する方法を提供する。
【0007】
さらに他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物の、ＢＴＫ関連疾患を予防または治療するための医薬の製造における使用を提供する。
【0008】
さらに他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物の、ＢＴＫ関連疾患の予防または治療における使用を提供する。
【0009】
さらに他の一態様において、本出願は、ＢＴＫ関連疾患を予防または治療するための、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物を提供する。
【0010】
〔発明の詳細な説明〕
本出願は、下記式（Ｉ）：
［式中、
環Ｂは、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは、場合によりハロゲンで置換されており、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、および－ＯＳ（Ｏ）２－からなる群より選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは、場合によりハロゲンで置換されており、
ｎは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＲａＣ（Ｏ）－、ＲａＳ（Ｏ）２－、およびＲａ－からなる群から選択され、
Ｒ５は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、
ｐは、０、１、２または３であり、
Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－、およびＲａＣ（Ｏ）－からなる群から選択され、
Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲンまたはシアノで置換されている］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
本出願は、下記式（Ｉ）：
【化2】
［式中、
環Ｂは、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは、場合によりハロゲンで置換されており、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、および－ＯＳ（Ｏ）２－からなる群より選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－６アルキルまたはＣ１－６アルコキシは、場合によりハロゲンで置換されており、
ｎは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＲａＣ（Ｏ）－、ＲａＳ（Ｏ）２－、およびＲａ－からなる群から選択され、
Ｒ５は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、シアノ、Ｃ１－６アルキル、およびＣ１－６アルコキシからなる群から独立して選択され、
ｐは、０、１、２または３であり、
Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－、およびＲａＣ（Ｏ）－からなる群から選択され、
Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲンまたはシアノで置換されている］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【0011】
いくつかの実施形態において、環Ｂは、５～６員のヘテロアリールまたはフェニルから選択され；いくつかの実施形態において、環Ｂは、６員のヘテロアリールから選択され；いくつかの実施形態において；環Ｂはピリジニル（例えば、ピリジン－２－イル）である。
【0012】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１－３アルキル、およびＣ１－３アルコキシからなる群から独立して選択され、前記Ｃ１－３アルキルまたはＣ１－３アルコキシは場合によりハロゲンで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ハロゲンおよび場合によりフッ素で置換されているＣ１－３アルキルからなる群から独立して選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ１はトリフルオロメチルである。
【0013】
いくつかの実施形態において、ｍは、０、１または２であり；いくつかの実施形態において、ｍは、０または１である。
いくつかの実施形態において、環Ｂはピリジン－２－イルであり、ｍは１であり、Ｒ１はトリフルオロメチルであり；いくつかの実施形態において、Ｒ１はピリジン環の４－位にある。
いくつかの実施形態において、環Ｂはピリジン－２－イルであり、ｍは１であり、Ｒ１はトリフルオロメチルであり；いくつかの実施形態において、Ｒ１はピリジン環の４－位にある。
【0014】
いくつかの実施形態において、環Ｂはピリジン－２－イルであり、ｍは０である。
いくつかの実施形態において、Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、および－ＯＣ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－である。
いくつかの実施形態において、Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、および－ＯＣ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｌは－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－である。
【0015】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－３アルキル、およびＣ１－３アルコキシからなる群から独立して選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ２は、ハロゲンから独立して選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ２は、独立してフッ素である。
【0016】
いくつかの実施形態において、ｎは０、１または２であり；いくつかの実施形態において、ｎは０または１である。
いくつかの実施形態において、ｎは１であり、Ｒ２はフッ素である。いくつかの実施形態において、ｎは０である。
いくつかの実施形態において、Ｒ３はＨ、ＲａＣ（Ｏ）－、およびＲａＳ（Ｏ）２－からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、ｎは１であり、Ｒ２はフッ素である。いくつかの実施形態において、ｎは０である。
いくつかの実施形態において、Ｒ３はＨ、ＲａＣ（Ｏ）－、およびＲａＳ（Ｏ）２－からなる群から選択される。
【0017】
いくつかの実施形態において、Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、Ｃ２－３アルキニル、Ｃ２－３アルケニル、Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－４シクロアルキル、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、および（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－からなる群から独立して選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、プロピニル、Ｃ２－３アルケニル、メチル、シクロプロピル、シクロブチル、ＣＨ３ＮＨ－、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ－、および（ＣＨ３）２Ｎ－からなる群から独立して選択され、前記メチル、Ｃ２－３アルケニルおよびシクロプロピルは、場合により（ＣＨ３）２Ｎ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されている。
【0018】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、Ｈ、ＣＨ３Ｃ≡ＣＣ（Ｏ）－、（ＣＨ３）２ＮＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）－、ＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）－、ＣＨ３Ｃ（Ｏ）－、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨＳ（Ｏ）２－、ＨＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、Ｈ２ＮＣＨ２Ｃ（Ｏ）－、シクロブチル－Ｃ（Ｏ）－、（ＣＨ３）２ＮＳ（Ｏ）２－、ＣＨ３ＮＨＳ（Ｏ）２－、および場合によりヒドロキシルで置換されているシクロプロピル－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ＣＨ３Ｃ≡ＣＣ（Ｏ）－、ＣＨ２＝ＣＨＣ（Ｏ）－、およびシクロプロピル－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ＣＨ３Ｃ≡ＣＣ（Ｏ）－から選択される。
【0019】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ＲａＣ（Ｏ）－から選択され、Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、Ｃ２－３アルキニル、Ｃ２－３アルケニル、Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－４シクロアルキル、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、および（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－からなる群から選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、プロピニル、Ｃ２－３アルケニル、メチル、シクロプロピル、シクロブチル、ＣＨ３ＮＨ－、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ－、および（ＣＨ３）２Ｎ－からなる群から選択され、前記メチル、Ｃ２－３アルケニルおよびシクロプロピルは、場合により（ＣＨ３）２Ｎ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、ＣＨ３Ｃ≡Ｃ－、（ＣＨ３）２ＮＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ－、ＣＨ２＝ＣＨ－、ＣＨ３－、ＨＯＣＨ２－、Ｈ２ＮＣＨ２－、シクロブチル、シクロプロピル、および
からなる群から選択される。
【化3】
からなる群から選択される。
【0020】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ＲａＳ（Ｏ）２－から選択され、Ｒａは、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－６シクロアルキル、（Ｃ１－６アルキル）ＮＨ－、（Ｃ１－６アルキル）２Ｎ－、３～６員のヘテロシクロアルキル、５～１０員のヘテロアリール、およびＣ６－１０アリールからなる群から選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、Ｃ２－３アルキニル、Ｃ２－３アルケニル、Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－４シクロアルキル、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、および（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－からなる群から選択され、前記Ｒａは、場合により（Ｃ１－３アルキル）２Ｎ－、（Ｃ１－３アルキル）ＮＨ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、プロピニル、Ｃ２－３アルケニル、メチル、シクロプロピル、シクロブチル、ＣＨ３ＮＨ－、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ－、および（ＣＨ３）２Ｎ－からなる群から選択され、前記メチル、Ｃ２－３アルケニルおよびシクロプロピルは、場合により（ＣＨ３）２Ｎ－、ヒドロキシまたはアミノで置換されており；いくつかの実施形態において、Ｒａは、（ＣＨ３）２ＣＨＮＨ－、（ＣＨ３）２Ｎ－、およびＣＨ３ＮＨ－からなる群から選択される。
【0021】
いくつかの実施形態において、Ｒ５は、－Ｆ、－ＯＨ、－ＮＨ２、メチル、およびメトキシからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態において、ｐは、０、１または２であり；いくつかの実施形態において、ｐは０である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、および（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、Ｃ３－６シクロアルキル－Ｓ（Ｏ）２－、および（Ｃ１－６アルキル－Ｏ）２Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、シクロプロピル－Ｓ（Ｏ）２－、および（ＣＨ３Ｏ）２－Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は水素である。
いくつかの実施形態において、ｐは、０、１または２であり；いくつかの実施形態において、ｐは０である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、ＲａＳ（Ｏ）２－、および（ＲａＯ）２Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、Ｃ３－６シクロアルキル－Ｓ（Ｏ）２－、および（Ｃ１－６アルキル－Ｏ）２Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素、シクロプロピル－Ｓ（Ｏ）２－、および（ＣＨ３Ｏ）２－Ｐ（Ｏ）－からなる群から選択され；いくつかの実施形態において、Ｒ４は水素である。
【0022】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、下記式（ＩＩ）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｍおよびｎは、上記で定義した通りである］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【化4】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｍおよびｎは、上記で定義した通りである］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【0023】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、下記式（ＩＩＩ）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｍおよびｎは、上記で定義した通りである］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【化5】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｍおよびｎは、上記で定義した通りである］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【0024】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、下記式（ＩＶ）：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で定義した通りであり、ｍは０または１であり、ｎは０または１である。ｎが０である場合、Ｒ２は存在しない、即ちベンゼン環は置換されていない。ｍが０である場合、Ｒ１は存在しない、即ちピリジン環は置換されていない。］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【化6】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で定義した通りであり、ｍは０または１であり、ｎは０または１である。ｎが０である場合、Ｒ２は存在しない、即ちベンゼン環は置換されていない。ｍが０である場合、Ｒ１は存在しない、即ちピリジン環は置換されていない。］
の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【0025】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、以下の構造式：
の化合物からなる群から選択される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【化7】
の化合物からなる群から選択される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩である。
【0026】
他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【0027】
他の一態様において、本出願は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物を、当該治療を必要とする哺乳類（好ましくは、ヒト）に投与することを含む、哺乳類のＢＴＫ関連疾患を予防または治療する方法に関する。
【0028】
他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物の、ＢＴＫ関連疾患を予防または治療するための医薬の製造における使用に関する。
【0029】
他の一態様において、本出願は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物の、ＢＴＫ関連疾患の予防または治療における使用に関する。
【0030】
他の一態様において、本出願は、ＢＴＫ関連疾患の予防または治療に用いるための、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、あるいはその医薬組成物に関する。
【0031】
いくつかの実施形態において、ＢＴＫ関連疾患は、ＢＴＫ媒介性疾患である。いくつかの実施形態において、ＢＴＫ関連疾患は、自己免疫性疾患、炎症性疾患、および癌から選択される。いくつかの実施形態において、ＢＴＫ関連疾患はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0032】
〔定義〕
他に断らない限り、本明細書に用いられる下記の用語は、次の意味を有する。特殊な（specific）用語は、そうでない形で具体的に定義されていない場合、当該分野における一般的な意味に従って解されるべきであり、不明確または不明瞭と見なされるべきではない。商品名に言及される場合、その対応の商品またはその活性成分に言及することが意図される。
他に断らない限り、本明細書に用いられる下記の用語は、次の意味を有する。特殊な（specific）用語は、そうでない形で具体的に定義されていない場合、当該分野における一般的な意味に従って解されるべきであり、不明確または不明瞭と見なされるべきではない。商品名に言及される場合、その対応の商品またはその活性成分に言及することが意図される。
【0033】
用語「置換され／置換されている」とは、特定の基の原子価状態が正常であり且つ置換された化合物が安定的なものであればよく、特定の基における任意の１個以上の水素原子が置換基で置換されることを意味する。置換基がオキソ（即ち、＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換され、オキソがアリールの上で発生しないことを意味する。
【0034】
用語「場合により」、「必要に応じて」または「任意に」などは、後述する事情や状況が発生する可能性も、発生していない可能性もあることを意味し、該記載は、前記の事情や状況が発生した場合も、発生していない場合も含む。例えば、エチルが「場合により」ハロゲンで置換されることは、エチルがハロゲンで置換されていない（ＣＨ２ＣＨ３）、一置換された（例えば、ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、多置換された（例えば、ＣＨＦＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＣＨＦ２など）、または全置換された（ＣＦ２ＣＦ３）ものであってもよいことを意味する。１つ以上の置換基を含む任意の基について、任意の空間的に存在し得ないおよび／または合成し得ない置換や置換モードを導入することにならないことは、当業者にとって理解されるべきである。
【0035】
本明細書に記載のＣｍ－ｎとは、この部分が所定範囲内の整数の炭素原子を有することを意味する。例えば、「Ｃ１－６」とは、当該基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子、または６個の炭素原子を有し得ることを意味する。
【0036】
任意の変数（例えば、Ｒ）は、化合物の組成や構造に１回以上現れる場合、その各状況における定義がそれぞれ独立している。例えば、１個の基は２個のＲを含む場合、各Ｒのいずれも独立の選択肢を持っている。
については、Ｌが－ＣＯ（ＮＨ）－である場合、
が
であることを表す。
については、Ｌが－ＣＯ（ＮＨ）－である場合、
が
であることを表す。
【化8】
については、Ｌが－ＣＯ（ＮＨ）－である場合、
【化9】
が
【化10】
であることを表す。
【化11】
については、Ｌが－ＣＯ（ＮＨ）－である場合、
【化12】
が
【化13】
であることを表す。
【0037】
用語「ハロゲン」または「ハロ」とは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素（フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード）を意味する。
用語「ヒドロキシ」とは、－ＯＨ基を意味する。
用語「アミノ」は、－ＮＨ２基を意味する。
用語「シアノ」とは、－ＣＮ基を意味する。
用語「ヒドロキシ」とは、－ＯＨ基を意味する。
用語「アミノ」は、－ＮＨ２基を意味する。
用語「シアノ」とは、－ＣＮ基を意味する。
【0038】
用語「アルキル」とは、例えばＣ１－６アルキル、Ｃ１－３アルキルなどの一般式がＣｎＨ２ｎ＋１である炭化水素基を意味する。該アルキルは直鎖または分岐鎖であってもよい。例えば、用語「Ｃ１－６アルキル」とは、１～６個の炭素原子を有するアルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、１－メチルブチル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ネオペンチル、ヘキシル、２－メチルペンチルなど）を意味する。同様に、アルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、およびアルキルチオにおけるアルキル部分（即ちアルキル）は、上記と同じ定義を持っている。
【0039】
用語「アルコキシ」とは、－Ｏ－アルキル（例えば、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－３アルキル）を意味する。
用語「アルケニル」とは、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分枝鎖の、少なくとも１個の二重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基（例えば、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－３アルケニル）を意味する。アルケニルの非限定的な例には、ビニル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、イソブテニル、１，３－ブタジエニルなどが含まれるがこれらに限定されない。
用語「アルケニル」とは、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分枝鎖の、少なくとも１個の二重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基（例えば、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－３アルケニル）を意味する。アルケニルの非限定的な例には、ビニル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、イソブテニル、１，３－ブタジエニルなどが含まれるがこれらに限定されない。
【0040】
用語「アルキニル」とは、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分枝鎖の、少なくとも１個の三重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基（例えば、Ｃ２－６アルキニル、Ｃ２－３アルキニル）を意味する。アルキニルの非限定的な例には、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、１－プロピニル（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ３）、２－プロピニル（－ＣＨ２－Ｃ≡ＣＨ）、１，３－ブタジイニル（－Ｃ≡ＣＣ≡ＣＨ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0041】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは、完全飽和で且つ単環、架橋環またはスピロ環として存在できる炭素環を意味する。特に断らない限り、該炭素環は、通常３～１０員環、または３～６員環である。シクロアルキルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル（ビシクロ［２．２．１］ヘプチル）、ビシクロ［２．２．２］オクチル、アダマンチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0042】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは、完全飽和で、且つ単環、架橋環またはスピロ環として存在できる環状基を意味する。特に断らない限り、当該ヘテロ環（ヘテロシクロ）は通常、硫黄、酸素および／または窒素からなる群から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（好ましくは１個または２個のヘテロ原子）を含む３～７員環であり、あるいは該ヘテロ環は通常、硫黄、酸素および／または窒素からなる群から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（好ましくは１個または２個のヘテロ原子）を含む３～６員環である。ヘテロシクロアルキルは、酸素および窒素から独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３～６員環である。３員ヘテロシクロアルキルの例には、エポキシエチル、シクロチオエチル、およびアジルジニルが含まれるがこれらに限定されない。４員ヘテロシクロアルキルの非限定的な例には、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニルが含まれるがこれらに限定されない。５員ヘテロシクロアルキルの例には、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、オキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロピラゾリルが含まれるがこれらに限定されない。６員ヘテロシクロアルキルの例には、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、ピペラジニル、１，４－チオキサニル、１，４－ジオキサニル、チオモルホリニル、１，３－ジチアニル、１，４－ジチアニルが含まれるがこれらに限定されない。７員ヘテロシクロアルキルの例には、アゼパニル、オキセパニル、チエパニルが含まれるがこれらに限定されない。好ましくは、５または６個の環原子を有する単環式ヘテロシクロアルキルである。
【0043】
用語「アリール」とは、共役なπ電子系を有する全炭素の単環式または縮合多環式芳香環の基を意味する。例えば、アリールは、６～２０個、６～１４個、６～１２個、または６～１０個の炭素原子を有してもよい。アリールの非限定的な例としては、フェニル、ナフチル、アントリルおよび１，２，３，４－テトラヒドロナフタレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0044】
用語「ヘテロアリール」とは、単環式または縮合多環式系の基を意味し、それらの中にＮ、Ｏ、Ｓから選択される少なくとも１つの環原子を含有し、その残りの環原子がＣであり、且つ、少なくとも１つの芳香環を有する。好ましいヘテロアリールは、単一の４～８員環、特に単一の５～８員環を有するか、または６～１４個、特に６～１０個の環原子を含有する縮合多環を有する。ヘテロアリールの非制限的な例は、ピロリル、フラニル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、トリアゾリル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリル、イソインドリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0045】
用語「治療」とは、本発明に記載の化合物または製剤を投与して疾患または前記疾患関連の１つ以上の症状を緩和したり、解消したりすることを意味し、且つ
（ｉ）疾患または疾患状態を阻害し、即ちその発生・進行を阻害することと、
（ii）疾患または疾患状態を緩和し、即ち疾患または疾患状態を減退させることと
を含む。
（ｉ）疾患または疾患状態を阻害し、即ちその発生・進行を阻害することと、
（ii）疾患または疾患状態を緩和し、即ち疾患または疾患状態を減退させることと
を含む。
【0046】
用語「予防」とは、本発明に記載の化合物または製剤を投与して疾患または前記疾患関連の１つ以上の症状を予防することを意味し、且つ、哺乳類において疾患または疾患状態の発生を予防し、特に、当該哺乳類が前記疾患状態に罹りやすいが、そのような疾患状態にすでに罹患していることがまだ診断されていない場合、予防することを含む。
【0047】
用語「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、状態、または障害を治療または予防し、（ii）特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状を軽減、改善、または解消し、あるいは（iii）本明細書に記載の特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状の発症を予防しまたは遅らせる、本発明の化合物の投与量を意味する。「治療有効量」となる本発明に係る化合物の量は、化合物、疾患状況とその重症度、投与方式および治療しようとする哺乳類の年齢によって変わるが、当業者は、その自身の持つ知識および本発明に開示された内容により通常的に決めることができる。
【0048】
用語「薬学的に許容される」とは、それらの化合物、材料、組成物および／または剤形に対して信頼性を有する医学的判断の範囲においてヒトおよび動物の組織とを接触して使用することに適用するが、過剰な毒性、刺激性、アレルギー性の反応、または他の問題や合併症がなく、合理的なベネフィット・リスク比に見合うことを意味する。
【0049】
薬学的に許容される塩としては、例えば、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性アミノ酸または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。
【0050】
用語「医薬組成物」とは、本発明の１つまたは複数の化合物またはその塩と薬学的に許容される補助剤からなる混合物を意味する。医薬組成物は、本発明の化合物を有機体に投与することに有利となる目的とする。
【0051】
用語「薬学的に許容される補助剤」とは、生体に対して顕著な刺激作用がなく、且つ該活性化合物の生物学的活性や性能を損なうことのない補助剤を意味する。適切な補助剤は、当業者に周知されるもの、例えば炭水化物、ワックス、水溶性および／または水膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などである。
【0052】
用語「含む／含有する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、およびそれらの英語の変形（例えば「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」や「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」など）は、いずれも開放（オープンエンド）式の、包含式の意味、即ち「…を含むが、これらに限定されない」として解釈されるべきである。
【0053】
本発明に係る化合物および中間体は、異なる互変異性体の形態でも存在し得、そしてこのような形態はすべて本発明の保護範囲内に含まれている。用語「互変異性体」または「互変異性型」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能である、異なるエネルギーを有する構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られている）は、ケト－エノールおよびイミン－エナミン異性化のような、プロトン移動による相互変換を含む。プロトン互変異性体の具体例は、プロトンが２つの環窒素原子間を移動可能なイミダゾール部分である。原子価互変異性体は、いくつかの結合電子の再編成による相互変換を含む。
【0054】
また、本発明には、本明細書に記載の同一であるが１つまたは複数の原子が通常自然界に見られる原子量または質量数と異なっている原子で置換されている同位体により標識された本発明の化合物を含む。本発明に係る化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体を含み、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、および３６Ｃｌなどである。
【0055】
いくつかの本発明の同位体標識化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質組織分布のアッセイにおいて有用である。トリチウム化（即ち、３Ｈ）および炭素－１４（即ち、１４Ｃ）同位体は、それらの製造の容易さおよび検出能の観点から特に好ましい。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃおよび１８Ｆなどの陽電子放出同位体は、基質占有率を調べるために陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識化合物は、一般に、同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いることにより、以下のスキームおよび／または実施例に開示されいるのと類似する手順に従って調製することができる。
【0056】
さらに、重同位体（例えば、重水素、即ち２Ｈなど）で置換することにより、さらに高い代謝安定性から生じる特定の治療上の利点（例えば、インビボ半減期の増加、または必要用量の減少など）が得られるため、ある状況によって好ましい場合があり、その中で、重水素置換は部分的でも完全でもよく、部分的重水素置換は少なくとも１個の水素が少なくとも１個の重水素で置換されることを意味する。
【0057】
本発明に係る化合物は非対称であってもよく、例えば、１つ以上の立体異性体を有する。特に断らない限り、全ての立体異性体、例えば光学異性体およびジアステレオマーのいずれも含まれている。本発明の不斉炭素原子含有化合物は、光学活性の純粋な形態で、またはラセミ体の形態で分離することができる。光学活性の純粋な形態は、ラセミ混合物から分割することができ、または、キラル材料やキラル試薬を用いて合成することができる。
【0058】
本発明に係る医薬組成物は、本発明に係る化合物と適切な薬学的に許容される補助剤とを組み合わせて製造することができ、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、クリーム剤、乳剤、懸濁剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェアおよびエアゾールのような固体、半固体、液体または気体の製剤として調製することができる。
【0059】
本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩あるいはその医薬組成物の典型的な投与経路は、経口投与、直腸投与、局所投与、吸入投与、腸管外投与、舌下投与、膣内投与、鼻内投与、眼内投与、腹膜内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明に係る医薬組成物は、例えば通常の混合法、溶解法、造粒法、糖衣錠製法、粉砕法、乳化法、凍結乾燥法等の本技術分野で周知の方法によって製造することができる。
本発明に係る医薬組成物は、例えば通常の混合法、溶解法、造粒法、糖衣錠製法、粉砕法、乳化法、凍結乾燥法等の本技術分野で周知の方法によって製造することができる。
【0060】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は経口投与の形である。経口投与については、活性化合物と当該技術分野で周知の医薬的に許容される補助剤とを混合して当該医薬組成物を調製してもよい。これらの補助剤は、本発明の化合物を、錠剤、丸剤、トローチ剤、糖衣剤、カプセル剤、液剤、ゲル化剤、シロップ剤、懸濁剤等として調製されて患者の経口投与に用いられてもよい。
【0061】
通常の混合法、充填法や打錠法によって経口固形組成物を製造できる。例えば、下記の方法により得ることができ、即ち、前記活性化合物と固体補助剤とを混合し、必要に応じて、得られた混合物をパンミリングし、必要とすれば他の適当な助剤を加え、そして当該混合物を顆粒に加工して錠剤や糖衣剤のコアを得る。適当な補助剤は、粘着剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤、甘味剤または矯味剤等が挙げられれるが、これらに限定されない。
【0062】
医薬組成物は、さらに、適切な単位剤形の無菌液剤、懸濁液や凍結乾燥製品での非経口投与のために適用されてもよい。
【0063】
本明細書に記載の一般式である式Ｉの化合物のすべての投与方法には、単回投与または分割投与の形態で投与し、１日投与量は、０．０１～２００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【0064】
本発明の化合物は、下記に記載の具体的な実施形態およびその他の化学合成方法との組合せてなった実施形態、ならびに当業者にとってよく知られた均等な形態を含む、当業者にとってよく知られている多種類の合成方法により調製することができる。好ましい実施形態には本発明の実施例を含むが、これらに限定されるものではない。
【0065】
本発明の具体的実施形態の化学反応は、適当な溶剤において達成され、当該溶剤は、本発明の化学変化とその所望の試薬および材料に適合させなければならない。当業者は、本発明の化合物を得るために、既存の実施形態に基づいて合成手順や反応スキームを変更したり選択したりする必要となる場合がある。
【0066】
当該技術分野のいずれかの合成経路の計画における重要な考慮要素の１つは、反応性官能基（本明細書に記載のアミノ基のようなもの）に適当な保護基を選択することであり、例えば、「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （４ｔｈ Ｅｄ）． Ｈｏｂｏｋｅｎ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．」を参照することができ、この書類に援用された全ての参考文献は全体として本明細書に組み込まれている。
【0067】
いくつかの実施形態において、本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物は、有機合成分野の当業者が下記スキームを介して本分野の既知の方法により製造できる。
【化14】
【0068】
本明細書には下記の略語が用いられている。
ＰＥは石油エーテルを表し、ＥＡは酢酸エチルを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＤＭＦはＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミドを表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＮＢＳはＮ－ブロモスクシンイミドを表し、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸を表し、ＤＴＴはジチオトレイトールを表し、ＥＧＴＡはエチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）四酢酸を表し、ＨＥＰＥＳは４－ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を表し、ＨＡＴＵは、２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーを表し、ＭｅＣＮはアセトニトリルを表し、ＴＥＡはトリエチルアミンを表し、Ｔ３Ｐは１－ｎ－プロピルリン酸無水物を表し、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニルを表し、Ｃｂｚ－Ｃｌはクロロギ酸ベンジルを表し、Ｐｙはピリジンを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、ＤＭＡＰは４－ジメチルアミノピリジンを表す。
ＰＥは石油エーテルを表し、ＥＡは酢酸エチルを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＤＭＦはＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミドを表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＮＢＳはＮ－ブロモスクシンイミドを表し、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸を表し、ＤＴＴはジチオトレイトールを表し、ＥＧＴＡはエチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）四酢酸を表し、ＨＥＰＥＳは４－ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を表し、ＨＡＴＵは、２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーを表し、ＭｅＣＮはアセトニトリルを表し、ＴＥＡはトリエチルアミンを表し、Ｔ３Ｐは１－ｎ－プロピルリン酸無水物を表し、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニルを表し、Ｃｂｚ－Ｃｌはクロロギ酸ベンジルを表し、Ｐｙはピリジンを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、ＤＭＡＰは４－ジメチルアミノピリジンを表す。
【0069】
明確にするために、以下の実施例によってさらに本発明を説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定することを意図しない。本発明に用いられる全ての試薬は、市販品であり、さらなる精製の必要がないままで使用することができる。
【0070】
実施例１： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（（ベンジル）カルボニル）ヘキサヒドロ１Ｈ－フラン［３，４－ｂ］ピロール－２－カルボン酸の製造（Ａ）
【化15】
【0071】
ステップ１： ２－（アリルオキシ）アセトアルデヒドの製造（中間体Ａ２）
反応フラスコに過ヨウ素酸ナトリウム（９７ｇ）および７０℃の水（１７８ｍＬ）を加えた。激しく撹拌しながら３００～４００メッシュのシリカゲル（３７８ｇ）を加えた。３分間撹拌して過ヨウ素酸ナトリウム／シリカゲル酸化剤を得た。反応フラスコにＤＣＭ（１１２０ｍＬ）を加え、撹拌しながら中間体Ａ１（６０ｇ）のＤＣＭ（１１２０ｍＬ）溶液を加えた。一晩撹拌し、反応終了し、濾過し、濾過ケーキをクロロホルム（２００ｍＬ）で３回リンスし、濾液を合わせ、濾液を濃縮して油状物を得、油状物を減圧蒸留し、蒸気温度４６℃で４０ｍｂａｒの留分を収集し、中間体Ａ２（３０ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．５９ （ｓ， １Ｈ）， ５．９４－５．８４ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０－５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０４－４．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ， ２Ｈ）
反応フラスコに過ヨウ素酸ナトリウム（９７ｇ）および７０℃の水（１７８ｍＬ）を加えた。激しく撹拌しながら３００～４００メッシュのシリカゲル（３７８ｇ）を加えた。３分間撹拌して過ヨウ素酸ナトリウム／シリカゲル酸化剤を得た。反応フラスコにＤＣＭ（１１２０ｍＬ）を加え、撹拌しながら中間体Ａ１（６０ｇ）のＤＣＭ（１１２０ｍＬ）溶液を加えた。一晩撹拌し、反応終了し、濾過し、濾過ケーキをクロロホルム（２００ｍＬ）で３回リンスし、濾液を合わせ、濾液を濃縮して油状物を得、油状物を減圧蒸留し、蒸気温度４６℃で４０ｍｂａｒの留分を収集し、中間体Ａ２（３０ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．５９ （ｓ， １Ｈ）， ５．９４－５．８４ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０－５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０４－４．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ， ２Ｈ）
【0072】
ステップ２： （３ａＳ，５Ｓ，８ａＳ，９ａＲ）－５－フェニルオクタヒドロ－８Ｈ－フロ［３’，４’：４，５］ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］オキサジン－８－オンの製造（中間体Ａ５）
（Ｓ）－５－フェニルモルホリン－２－オン塩酸塩（４ｇ）を水１００ｍＬに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨ８～９に調整し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で３回抽出し、有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、有機層を濃縮して残留物３．１ｇを得た。残留物を反応フラスコに移し、ベンゼン（２０ｍＬ）を加え、２－（アリルオキシ）アセトアルデヒド（中間体Ａ２、１．７７ｇ）を加え、撹拌溶解した後、ベンゼン（２０ｍＬ）を加えた。室温で１時間撹拌した後、混合物を加熱還流して１２時間反応させ、加熱を停止し、濃縮してベンゼンを除去し、残留物に水１００ｍＬを加え、ＥＡ １００ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮して残留物を得、残留物にｎ－ヘキサン１００ｍＬを加えて２回叩解し、濾過して中間体Ａ５（４．１２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．４８－７．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９－７．３６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３２－７．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．３３－４．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．２８－４．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０１－３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６０－３．５８ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０－３．４７ （ｍ， １Ｈ）， ３．４４－３．４２ （ｍ， １Ｈ）， ３．３２－３．２８ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０－３．１７ （ｍ， １Ｈ）， ２．７９－２．７８ （ｍ， １Ｈ）， ２．５２－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．８６－１．８４ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：２６０．３．
（Ｓ）－５－フェニルモルホリン－２－オン塩酸塩（４ｇ）を水１００ｍＬに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨ８～９に調整し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で３回抽出し、有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、有機層を濃縮して残留物３．１ｇを得た。残留物を反応フラスコに移し、ベンゼン（２０ｍＬ）を加え、２－（アリルオキシ）アセトアルデヒド（中間体Ａ２、１．７７ｇ）を加え、撹拌溶解した後、ベンゼン（２０ｍＬ）を加えた。室温で１時間撹拌した後、混合物を加熱還流して１２時間反応させ、加熱を停止し、濃縮してベンゼンを除去し、残留物に水１００ｍＬを加え、ＥＡ １００ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮して残留物を得、残留物にｎ－ヘキサン１００ｍＬを加えて２回叩解し、濾過して中間体Ａ５（４．１２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．４８－７．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９－７．３６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３２－７．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．３３－４．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．２８－４．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０１－３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６０－３．５８ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０－３．４７ （ｍ， １Ｈ）， ３．４４－３．４２ （ｍ， １Ｈ）， ３．３２－３．２８ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０－３．１７ （ｍ， １Ｈ）， ２．７９－２．７８ （ｍ， １Ｈ）， ２．５２－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， １．８６－１．８４ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：２６０．３．
【0073】
ステップ３： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－カルボン酸（中間体Ａ）の製造
反応フラスコに中間体Ａ５（１５ｇ）、ＭｅＯＨ（１．３８０Ｌ）、ＴＦＡ（４１．１ｇ）およびＰｄ（ＯＨ）２（６．９５ｇ）を加えた。Ｈ２存在条件下、室温で一晩反応させ、水酸化パラジウムをろ過除去した。反応液を濃縮して油状物を得、得られた油状物を反応フラスコに移し、１，４－ジオキサン（４１４ｍＬ）とＨ２Ｏ（２７６ｍＬ）と炭酸水素ナトリウム（２４．３１ｇ）を加え、０℃まで降温してこれにＣｂｚ－Ｃｌ（１１．１２ｇ）を加え、添加終了後一晩反応させ、反応終了後反応液を濃縮し、濃縮物に酢酸エチル３００ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を濃縮し、濃縮物を反応フラスコに移し、ＴＨＦ（２７６ｍＬ）とＨ２Ｏ（２７６ｍＬ）を加えて撹拌溶解し、最後にＬｉＯＨ（２．６０ｇ）を加えて５０℃に加熱し、２時間反応させて加熱を停止した反応液を濃縮してＴＨＦを除去した後、酢酸エチル３００ｍＬを加えて２回抽出し、水層を保留した。水層に１Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを２～３に調整し、再び水層を酢酸エチル３００ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過して硫酸ナトリウムを除去し、濾液を濃縮して中間体Ａ（２．０２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １３．６２－１１．８５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３８－７．３０ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１４－５．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４３－４．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８６－３．７９ （ｍ， １Ｈ）， ３．６４－３．６２ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５－３．５１ （ｍ， １Ｈ）， ３．４８－３．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６－２．８３ （ｍ， １Ｈ）， ２．１９－２．１７ （ｍ， １Ｈ）， ２．０６－１．９８ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］－） ｍ／ｚ：２９０．１０１８．
反応フラスコに中間体Ａ５（１５ｇ）、ＭｅＯＨ（１．３８０Ｌ）、ＴＦＡ（４１．１ｇ）およびＰｄ（ＯＨ）２（６．９５ｇ）を加えた。Ｈ２存在条件下、室温で一晩反応させ、水酸化パラジウムをろ過除去した。反応液を濃縮して油状物を得、得られた油状物を反応フラスコに移し、１，４－ジオキサン（４１４ｍＬ）とＨ２Ｏ（２７６ｍＬ）と炭酸水素ナトリウム（２４．３１ｇ）を加え、０℃まで降温してこれにＣｂｚ－Ｃｌ（１１．１２ｇ）を加え、添加終了後一晩反応させ、反応終了後反応液を濃縮し、濃縮物に酢酸エチル３００ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を濃縮し、濃縮物を反応フラスコに移し、ＴＨＦ（２７６ｍＬ）とＨ２Ｏ（２７６ｍＬ）を加えて撹拌溶解し、最後にＬｉＯＨ（２．６０ｇ）を加えて５０℃に加熱し、２時間反応させて加熱を停止した反応液を濃縮してＴＨＦを除去した後、酢酸エチル３００ｍＬを加えて２回抽出し、水層を保留した。水層に１Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを２～３に調整し、再び水層を酢酸エチル３００ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過して硫酸ナトリウムを除去し、濾液を濃縮して中間体Ａ（２．０２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １３．６２－１１．８５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３８－７．３０ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１４－５．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４３－４．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８６－３．７９ （ｍ， １Ｈ）， ３．６４－３．６２ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５－３．５１ （ｍ， １Ｈ）， ３．４８－３．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６－２．８３ （ｍ， １Ｈ）， ２．１９－２．１７ （ｍ， １Ｈ）， ２．０６－１．９８ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］－） ｍ／ｚ：２９０．１０１８．
【0074】
実施例２： （４－（ピリジン－２－イルカルバモイル）フェニル）ホウ酸（中間体Ｆ）の製造
反応フラスコに中間体Ｆ１（２０ｇ）を加え、ＤＭＦ（１８０ｍＬ）に溶解し、０℃で中間体Ｆ２（１３．６１ｇ）とＤＩＰＥＡ（３１．２ｇ）を加え、０℃で１０分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（５５ｇ）を加え、窒素ガスの保護下で８０℃に加熱して５時間反応させ、反応終了後、反応液を反応液体積の２～３倍の氷水に入れ、均一に撹拌した後濾過し、濾過ケーキを氷水で洗浄した後乾燥し、中間体Ｆ（１５．７２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．７１５ （ｓ， １Ｈ）， ８．４０１－８．３８９ （ｔ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２５－８．１９１（ｔ， Ｊ ＝ １７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ７．９９５－７．９７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．９１２－７．８９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８６６－７．８３１（ｍ， １Ｈ）， ７．１８６－７．１６０ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ： ２４３．３ ．
【化16】
反応フラスコに中間体Ｆ１（２０ｇ）を加え、ＤＭＦ（１８０ｍＬ）に溶解し、０℃で中間体Ｆ２（１３．６１ｇ）とＤＩＰＥＡ（３１．２ｇ）を加え、０℃で１０分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（５５ｇ）を加え、窒素ガスの保護下で８０℃に加熱して５時間反応させ、反応終了後、反応液を反応液体積の２～３倍の氷水に入れ、均一に撹拌した後濾過し、濾過ケーキを氷水で洗浄した後乾燥し、中間体Ｆ（１５．７２ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．７１５ （ｓ， １Ｈ）， ８．４０１－８．３８９ （ｔ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２５－８．１９１（ｔ， Ｊ ＝ １７ Ｈｚ， ３Ｈ）， ７．９９５－７．９７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．９１２－７．８９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８６６－７．８３１（ｍ， １Ｈ）， ７．１８６－７．１６０ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ： ２４３．３ ．
【0075】
実施例３： （２－フルオロ－４－（（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）カルバモイル）フェニル）ホウ酸（中間体Ｇ）の製造
反応フラスコに、４－カルボキシ－２－フルオロフェニルボロン酸（１９．４ｇ）、２－アミノ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン（１７．１０ｇ）、ＤＭＦ（２００ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（５４．５ｇ）を順次加え、氷水浴で撹拌しながらＨＡＴＵ（４４．１ｇ）を加え、Ｎ２保護下で８０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を室温まで冷却し、撹拌している氷水に滴下して固形物を析出させ、濾過し、濾過ケーキを減圧下５０℃で乾燥して中間体Ｇ（１０．７１ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ１１．３５ （ｓ， １Ｈ）， ８．７０－８．６９ （ｄ， Ｊ＝４．５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８６－７．８４ （ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７７－７．７５ （ｄ， Ｊ＝９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７０－７．６７ （ｔ， Ｊ＝６．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５６－７．５５ （ｄ， Ｊ＝４Ｈｚ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：３２９．３．
【化17】
反応フラスコに、４－カルボキシ－２－フルオロフェニルボロン酸（１９．４ｇ）、２－アミノ－６－（トリフルオロメチル）ピリジン（１７．１０ｇ）、ＤＭＦ（２００ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（５４．５ｇ）を順次加え、氷水浴で撹拌しながらＨＡＴＵ（４４．１ｇ）を加え、Ｎ２保護下で８０℃に加熱して一晩反応させた。反応液を室温まで冷却し、撹拌している氷水に滴下して固形物を析出させ、濾過し、濾過ケーキを減圧下５０℃で乾燥して中間体Ｇ（１０．７１ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ１１．３５ （ｓ， １Ｈ）， ８．７０－８．６９ （ｄ， Ｊ＝４．５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．４１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８６－７．８４ （ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７７－７．７５ （ｄ， Ｊ＝９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７０－７．６７ （ｔ， Ｊ＝６．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５６－７．５５ （ｄ， Ｊ＝４Ｈｚ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：３２９．３．
【0076】
実施例４： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（ブタ－２－イノイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）フェナシルアミン（化合物Ｉ－１）の製造
【化18】
【0077】
ステップ１： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（（（３－クロロピラジン－２－イル）メチル）カルバモイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体１－２）の製造
反応フラスコに、中間体１（３．９４ｇ）、中間体Ａ（７．４４ｇ）、ＴＥＡ（８．２３ｇ）およびＤＣＭ（２１０ｍＬ）を加え、０℃まで降温し、２０分間撹拌し、反応系にＨＡＴＵ（８．１２ｇ）を加え、０℃で反応を１時間続けた。反応終了後、反応液を０．１Ｍ ＨＣｌ溶液２００ｍＬで２回、５％ ＮａＨＣＯ３溶液２００ｍＬで２回、水２００ｍＬで１回、飽和塩化ナトリウム溶液２００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した。カラムクロマトグラフィーにより精製して中間体１－２（６．１１ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．６２ （ｂｒ ，１Ｈ ）， ８．５１－８．５５ （ｍ， １Ｈ）， ８．４３－８．３９ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５－７．３９ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１３－４．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６８－４．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４５－４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８６－３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．６３－３．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５－３．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５－２．８５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２３－２．１５ （ｍ， １Ｈ）， ２．０５－１．９２ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４１７．３．
反応フラスコに、中間体１（３．９４ｇ）、中間体Ａ（７．４４ｇ）、ＴＥＡ（８．２３ｇ）およびＤＣＭ（２１０ｍＬ）を加え、０℃まで降温し、２０分間撹拌し、反応系にＨＡＴＵ（８．１２ｇ）を加え、０℃で反応を１時間続けた。反応終了後、反応液を０．１Ｍ ＨＣｌ溶液２００ｍＬで２回、５％ ＮａＨＣＯ３溶液２００ｍＬで２回、水２００ｍＬで１回、飽和塩化ナトリウム溶液２００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した。カラムクロマトグラフィーにより精製して中間体１－２（６．１１ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．６２ （ｂｒ ，１Ｈ ）， ８．５１－８．５５ （ｍ， １Ｈ）， ８．４３－８．３９ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５－７．３９ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１３－４．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６８－４．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４５－４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８６－３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．６３－３．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５５－３．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５－２．８５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２３－２．１５ （ｍ， １Ｈ）， ２．０５－１．９２ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４１７．３．
【0078】
ステップ２： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（８－クロロイミダゾ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体１－３）の製造
反応フラスコに、中間体１－２（５ｇ）、ＭｅＣＮ（２５ｍＬ）およびＤＭＦ（２５ｍＬ）を順次加え、氷水浴でＰＯＣｌ３（６．４１ｇ）を滴下した。反応終了後、アンモニア水（２５％）２５０ｍＬと氷水（５００ｇ）との混合物に反応液を注ぎ、撹拌しながら反応液に酢酸エチル３００ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過濃縮して中間体１－３（５．５ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：３９９．３．
反応フラスコに、中間体１－２（５ｇ）、ＭｅＣＮ（２５ｍＬ）およびＤＭＦ（２５ｍＬ）を順次加え、氷水浴でＰＯＣｌ３（６．４１ｇ）を滴下した。反応終了後、アンモニア水（２５％）２５０ｍＬと氷水（５００ｇ）との混合物に反応液を注ぎ、撹拌しながら反応液に酢酸エチル３００ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過濃縮して中間体１－３（５．５ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：３９９．３．
【0079】
ステップ３：（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（１－ブロモ－８－クロロイミダゾ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体１－４）の製造
反応フラスコに、中間体１－３（５．０５ｇ）およびＤＭＦ（７０ｍＬ）を加え、全体が溶解するまで撹拌した。さらにその中にＮＢＳ（２．０６ｇ）を加え、室温で反応させた。反応完了後、反応液を水７０ｍＬと砕氷７０ｇとの混合溶液に注ぎ、酢酸エチル２００ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、濃縮して中間体１－４（４．８８ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４７７．２．
反応フラスコに、中間体１－３（５．０５ｇ）およびＤＭＦ（７０ｍＬ）を加え、全体が溶解するまで撹拌した。さらにその中にＮＢＳ（２．０６ｇ）を加え、室温で反応させた。反応完了後、反応液を水７０ｍＬと砕氷７０ｇとの混合溶液に注ぎ、酢酸エチル２００ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水２００ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、濃縮して中間体１－４（４．８８ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４７７．２．
【0080】
ステップ４： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（８－アミノ－１－ブロモイミダゾ［１，５－ａ］ピリジン－３－イル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体１－５）の製造
１５０ｍＬの封管に中間体１－４（４．３８ｇ）、ＴＥＡ（１．４８ｇ）、アンモニアのイソプロパノール溶液（２Ｍ、１０８．５ｍＬ）を順次加え、反応系（反応混合物）を密封して１２０℃に加熱して反応させた。反応完了後、濃縮して反応液における溶媒を除去し、濃縮物に砕氷１００ｇを加え、さらに１Ｍ ＨＣｌで水層ｐＨを２～３に調整し、ＥＡ ２００ｍＬで２回抽出し、水層を保留し、さらに水層を１Ｍ ＮａＯＨでｐＨを９～１０に調整し、ＥＡ ２００ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせ、有機層を水１００ｍＬと飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した。カラムクロマトグラフィーにより分離して中間体１－５（２．８９ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．７４－７．６０ （ｍ， １Ｈ）， ７．３７－６．７５ （ｍ， ６Ｈ）， ６．６３ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．４６－５．５３ （ｍ， １Ｈ）， ５．０７－４．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５５－４．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．９８－３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．５４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２１－３．０６ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１－２．０４ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４５８．３
１５０ｍＬの封管に中間体１－４（４．３８ｇ）、ＴＥＡ（１．４８ｇ）、アンモニアのイソプロパノール溶液（２Ｍ、１０８．５ｍＬ）を順次加え、反応系（反応混合物）を密封して１２０℃に加熱して反応させた。反応完了後、濃縮して反応液における溶媒を除去し、濃縮物に砕氷１００ｇを加え、さらに１Ｍ ＨＣｌで水層ｐＨを２～３に調整し、ＥＡ ２００ｍＬで２回抽出し、水層を保留し、さらに水層を１Ｍ ＮａＯＨでｐＨを９～１０に調整し、ＥＡ ２００ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせ、有機層を水１００ｍＬと飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した。カラムクロマトグラフィーにより分離して中間体１－５（２．８９ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．７４－７．６０ （ｍ， １Ｈ）， ７．３７－６．７５ （ｍ， ６Ｈ）， ６．６３ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．４６－５．５３ （ｍ， １Ｈ）， ５．０７－４．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５５－４．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．９８－３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．５４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２１－３．０６ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１－２．０４ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４５８．３
【0081】
ステップ５： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（８－アミノ－１－（４－（ピリジン－２－イルカルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体１－６）の製造
封管に中間体１－５（１．３９ｇ）、中間体Ｆ（１．１１ｇ）、Ｋ２ＣＯ３（１．６８ｇ）およびＨ２Ｏ（１４ｍＬ）、１，４－ジオキサン（３５．０ｍＬ）を順次加え、Ｎ２で１０分間バブリングして撹拌した後、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．６２ｇ）を加え、Ｎ２で１分間バブリングして撹拌し、反応混合物をマイクロ波反応器（５０ワット）に入れて８０℃まで加熱して２０分間反応させた。反応終了後、反応液に水２０ｍＬを加え、さらにＥＡ ５０ｍＬで３回抽出した。有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、濃縮し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離して中間体１－６（１．５６ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５７６．４．
封管に中間体１－５（１．３９ｇ）、中間体Ｆ（１．１１ｇ）、Ｋ２ＣＯ３（１．６８ｇ）およびＨ２Ｏ（１４ｍＬ）、１，４－ジオキサン（３５．０ｍＬ）を順次加え、Ｎ２で１０分間バブリングして撹拌した後、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．６２ｇ）を加え、Ｎ２で１分間バブリングして撹拌し、反応混合物をマイクロ波反応器（５０ワット）に入れて８０℃まで加熱して２０分間反応させた。反応終了後、反応液に水２０ｍＬを加え、さらにＥＡ ５０ｍＬで３回抽出した。有機層を合わせて飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄した。洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、濃縮し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離して中間体１－６（１．５６ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５７６．４．
【0082】
ステップ６： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）ベンズアミド（１－７）の製造
室温で中間体１－６（１．４６ｇ）に臭化水素酸の酢酸溶液（３１．１ｍＬ、臭化水素酸１８９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で撹拌しながら１時間反応させた。反応完了後、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、ＤＣＭ ５０ｍＬで１回抽出し、水層を保留した。２Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水層ｐＨを１１～１４まで調整し、ＤＣＭ ５０ｍＬで反応液を３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して中間体１－７（９００ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．８０ （ｓ， １Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １Ｈ）， ８．１７－８．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８８－７．８４ （ｍ， １Ｈ）， ７．８１－７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．７７－７．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．１４ （ｂｒ， ２Ｈ）， ４．７４－４．６８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９－４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７－３．７４ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９８－２．９７ （ｍ， １Ｈ）， ２．３６－２．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．０５－１．９９ （ｍ， ２Ｈ） ． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４４２．４．
室温で中間体１－６（１．４６ｇ）に臭化水素酸の酢酸溶液（３１．１ｍＬ、臭化水素酸１８９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で撹拌しながら１時間反応させた。反応完了後、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、ＤＣＭ ５０ｍＬで１回抽出し、水層を保留した。２Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水層ｐＨを１１～１４まで調整し、ＤＣＭ ５０ｍＬで反応液を３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して中間体１－７（９００ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．８０ （ｓ， １Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １Ｈ）， ８．１７－８．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８８－７．８４ （ｍ， １Ｈ）， ７．８１－７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．７７－７．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．１４ （ｂｒ， ２Ｈ）， ４．７４－４．６８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９－４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７－３．７４ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９８－２．９７ （ｍ， １Ｈ）， ２．３６－２．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．０５－１．９９ （ｍ， ２Ｈ） ． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４４２．４．
【0083】
ステップ７： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（ブタ－２－イノイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１）の製造
室温で、中間体１－７、ブタ－２－イン酸（２８．８ｍｇ）、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌液に、ＨＡＴＵ（１３０ｍｇ）を加えた後、室温で混合物を撹拌しながら３０分間反応させた。反応完了後、反応系に２０ｍＬおよびＤＣＭ ２０ｍＬを加え、有機層を保留した。有機層を濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－１（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．８１ （ｂｒ， １Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １Ｈ）， ８．２３－８．２２ （ｍ， １Ｈ）， ８．１８－８．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８９－７．８４ （ｍ， １．５Ｈ）， ７．７９－７．７３ （ｍ， ２．５Ｈ）， ７．１９－７．１６ （ｍ， １．５Ｈ）， ７．１３－７．１２ （ｍ， ０．５Ｈ）， ６．２５－６．０８ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．９１－５．８５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ５．６９－５．６５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．８５－４．８０ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．７０－４．６４ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．０４－３．９９ （ｍ， ０．５Ｈ）， ３．８９－３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．５８ （ｍ， ２．５Ｈ）， ３．４１－３．３５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ３．２４－３．１８ （ｍ，０．５ Ｈ）， ２．２９－２．１７ （ｍ， １．５Ｈ）， ２．１９－２．１１ （ｍ， ０．５Ｈ）， ２．０５－１．９９ （ｍ， １．５Ｈ）， １．７０－１．６４ （ｍ， １．５Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５０８．２０７５．
室温で、中間体１－７、ブタ－２－イン酸（２８．８ｍｇ）、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌液に、ＨＡＴＵ（１３０ｍｇ）を加えた後、室温で混合物を撹拌しながら３０分間反応させた。反応完了後、反応系に２０ｍＬおよびＤＣＭ ２０ｍＬを加え、有機層を保留した。有機層を濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－１（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．８１ （ｂｒ， １Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １Ｈ）， ８．２３－８．２２ （ｍ， １Ｈ）， ８．１８－８．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８９－７．８４ （ｍ， １．５Ｈ）， ７．７９－７．７３ （ｍ， ２．５Ｈ）， ７．１９－７．１６ （ｍ， １．５Ｈ）， ７．１３－７．１２ （ｍ， ０．５Ｈ）， ６．２５－６．０８ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．９１－５．８５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ５．６９－５．６５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．８５－４．８０ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．７０－４．６４ （ｍ， ０．５Ｈ）， ４．０４－３．９９ （ｍ， ０．５Ｈ）， ３．８９－３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．５８ （ｍ， ２．５Ｈ）， ３．４１－３．３５ （ｍ， ０．５Ｈ）， ３．２４－３．１８ （ｍ，０．５ Ｈ）， ２．２９－２．１７ （ｍ， １．５Ｈ）， ２．１９－２．１１ （ｍ， ０．５Ｈ）， ２．０５－１．９９ （ｍ， １．５Ｈ）， １．７０－１．６４ （ｍ， １．５Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５０８．２０７５．
【0084】
実施例５： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（（Ｅ）－４－（ジ（メチルアミノ））ブタ－２－イノイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－２）の製造
氷浴下で、ＨＡＴＵ（３１．６ｍｇ）を中間体１－７（５０ｍｇ）、（Ｅ）－４－（ジ（メチルアミノ））ブタ－２－イン酸塩酸塩（１３．９１ｍｇ）、トリエチルアミン（０．０４６ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌液に加え、５分間後添加終了し、混合物を氷浴下で５分間撹拌反応させた。反応終了後、反応液に水２０ｍＬとＤＣＭ ２０ｍＬを加え、有機層を分離し、有機層を飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで洗浄し、濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－２（１５ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４２－８．３９（ｍ， １ Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１５－８．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８８－７．８２ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．７９－７．７６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．７５－７．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．７０－７．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．６０－６．５４ （ｍ， １ Ｈ）， ６．４４－６．３７ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３２－６．２６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１８－６．１３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．１２－６．０６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０－５．９６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．７１－５．６７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３５－５．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．８８－４．８４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７７－４．７３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．４４－４．３９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９３－３．８３ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．７７－３．６７ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．５８－３．５３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０７－３．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３８－２．３５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．２８－２．２３ （０．５ Ｈ）， ２．１７－２．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５５３．２６６５．
【化19】
氷浴下で、ＨＡＴＵ（３１．６ｍｇ）を中間体１－７（５０ｍｇ）、（Ｅ）－４－（ジ（メチルアミノ））ブタ－２－イン酸塩酸塩（１３．９１ｍｇ）、トリエチルアミン（０．０４６ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌液に加え、５分間後添加終了し、混合物を氷浴下で５分間撹拌反応させた。反応終了後、反応液に水２０ｍＬとＤＣＭ ２０ｍＬを加え、有機層を分離し、有機層を飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで洗浄し、濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－２（１５ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４２－８．３９（ｍ， １ Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１５－８．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８８－７．８２ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．７９－７．７６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．７５－７．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．７０－７．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．６０－６．５４ （ｍ， １ Ｈ）， ６．４４－６．３７ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３２－６．２６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１８－６．１３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．１２－６．０６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０－５．９６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．７１－５．６７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３５－５．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．８８－４．８４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７７－４．７３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．４４－４．３９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９３－３．８３ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．７７－３．６７ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．５８－３．５３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０７－３．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３８－２．３５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．２８－２．２３ （０．５ Ｈ）， ２．１７－２．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５５３．２６６５．
【0085】
実施例６： ４－（３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－アクリロイルヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）－８－アミノイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－Ｎ－（ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－３）の製造
氷浴下、ＨＡＴＵ（３１．９ｍｇ）を中間体１－７（５０ｍｇ）、アクリル酸（６．１１ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０４６ｍＬ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）撹拌液に加え、滴下終了後、氷浴で混合物を５分間撹拌反応させた。反応終了後、反応液に水１０ｍＬを加えて希釈し、ＤＣＭ １０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を濃縮して溶媒を除去し、濃縮物に濃縮物にをＤＣＭ ２ｍＬを加えて溶解した後、分取ＴＬＣにより分離して化合物Ｉ－３（６ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１５－８．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８６－７．８４ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．７４－７．７．６９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．１３－７．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．５５－６．４８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．３３－６．３５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．２２－６．１５ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１５－６．０６ （ｍ， １．５ Ｈ）， ６．０６－６．０ （ｍ， １ Ｈ）， ５．７３－５．６７ （ｍ， １ Ｈ）， ５．５１－５．４７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３５－５．３１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．９２－４．８７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７９－４．７３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．９４－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７８－３．６６ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．５５－３．５１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．４１－３．３８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０３－２．９４ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３１－２．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２０－２．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．０４－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４９６．２０６５．
【化20】
氷浴下、ＨＡＴＵ（３１．９ｍｇ）を中間体１－７（５０ｍｇ）、アクリル酸（６．１１ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０４６ｍＬ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）撹拌液に加え、滴下終了後、氷浴で混合物を５分間撹拌反応させた。反応終了後、反応液に水１０ｍＬを加えて希釈し、ＤＣＭ １０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた。有機層を濃縮して溶媒を除去し、濃縮物に濃縮物にをＤＣＭ ２ｍＬを加えて溶解した後、分取ＴＬＣにより分離して化合物Ｉ－３（６ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １０．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４１－８．４０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．２３－８．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．１５－８．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８６－７．８４ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．７４－７．７．６９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１９－７．１７ （ｍ， １．５ Ｈ）， ７．１３－７．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．５５－６．４８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．３３－６．３５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．２２－６．１５ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１５－６．０６ （ｍ， １．５ Ｈ）， ６．０６－６．０ （ｍ， １ Ｈ）， ５．７３－５．６７ （ｍ， １ Ｈ）， ５．５１－５．４７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３５－５．３１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．９２－４．８７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７９－４．７３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．９４－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７８－３．６６ （ｍ， １．５ Ｈ）， ３．５５－３．５１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．４１－３．３８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０３－２．９４ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３１－２．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２０－２．１２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．０４－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：４９６．２０６５．
【0086】
実施例７： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（ブタ－２－イノイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－４）、および４－（３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－アセチルヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）－８－アミノイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－５）の製造
【化21】
【0087】
ステップ１： （２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－２－（８－アミノ－１－（２－フルオロ－４－（（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）カルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－１－カルボン酸ベンジル（中間体８－６）の製造
３５ｍＬの封管に中間体１－５（７００ｍｇ）、中間体Ｇ（８４５ｍｇ）、Ｋ２ＣＯ３（８４４ｍｇ）およびＨ２Ｏ（８ｍＬ）、１，４－ジオキサン（２０．００ｍＬ）および［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（３１２ｍｇ）を順次加え、Ｎ２で１０分間バブリングして撹拌し、マイクロ波反応器（５０ワット）に入れ、８０℃で２０分間反応させた。ＴＬＣで反応を検出し、反応系に［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（３１２ｍｇ）および（２－フルオロ－４－（（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）カルバモイル）フェニル）ホウ酸（８４５ｍｇ）を追加し、マイクロ波で反応を２０分間続けた。反応終了後、反応液を濾過し、濾液に水２０ｍＬを加え、さらにＥＡ ５０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄し、洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離して中間体８－６（０．３８ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．０３－８．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６７－７．５２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３０ （ｓ， ２Ｈ）， ７．１７－ ７．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ６．７７－６．７６ （ｍ， １Ｈ）， ６．０３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．６７－５．５２ （ｍ， １Ｈ）， ５．０４－４．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７９－４．５７ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２－３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５６－３．７１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２７－３．０９ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９－２．１０ （ｍ， ２Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６６２．４．
３５ｍＬの封管に中間体１－５（７００ｍｇ）、中間体Ｇ（８４５ｍｇ）、Ｋ２ＣＯ３（８４４ｍｇ）およびＨ２Ｏ（８ｍＬ）、１，４－ジオキサン（２０．００ｍＬ）および［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（３１２ｍｇ）を順次加え、Ｎ２で１０分間バブリングして撹拌し、マイクロ波反応器（５０ワット）に入れ、８０℃で２０分間反応させた。ＴＬＣで反応を検出し、反応系に［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）ジクロリドジクロロメタン錯体（３１２ｍｇ）および（２－フルオロ－４－（（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）カルバモイル）フェニル）ホウ酸（８４５ｍｇ）を追加し、マイクロ波で反応を２０分間続けた。反応終了後、反応液を濾過し、濾液に水２０ｍＬを加え、さらにＥＡ ５０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで２回洗浄し、洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して溶媒を除去し、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにより分離して中間体８－６（０．３８ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．０３－８．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６７－７．５２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３０ （ｓ， ２Ｈ）， ７．１７－ ７．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ６．７７－６．７６ （ｍ， １Ｈ）， ６．０３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．６７－５．５２ （ｍ， １Ｈ）， ５．０４－４．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７９－４．５７ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２－３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５６－３．７１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２７－３．０９ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９－２．１０ （ｍ， ２Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６６２．４．
【0088】
ステップ２： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（中間体８－７）の製造
室温で、３３％のＨＢｒ酢酸溶液（ＨＢｒ ３６．４ｍｍｏｌ）を中間体８－６（０．３８ｇ）に徐々に滴下し、室温で混合物を１時間撹拌しながら反応させた。反応完了後、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、ＤＣＭ ２０ｍＬで１回抽出し、水層を分離した。２Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水層ｐＨを１１～１４まで調整し、ＤＣＭ ２０ｍＬで反応液を３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して中間体８－７（０．３５ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０３－８．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４－７．６１ （ｍ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６４－４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．９６－３．９５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７６－３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６７－３．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９４－２．８７ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９－２．２７ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１－１．９７ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５２６．４．
室温で、３３％のＨＢｒ酢酸溶液（ＨＢｒ ３６．４ｍｍｏｌ）を中間体８－６（０．３８ｇ）に徐々に滴下し、室温で混合物を１時間撹拌しながら反応させた。反応完了後、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、ＤＣＭ ２０ｍＬで１回抽出し、水層を分離した。２Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水層ｐＨを１１～１４まで調整し、ＤＣＭ ２０ｍＬで反応液を３回抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して中間体８－７（０．３５ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０３－８．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４－７．６１ （ｍ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６４－４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．９６－３．９５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７６－３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６７－３．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９４－２．８７ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９－２．２７ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１－１．９７ （ｍ， ２Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５２６．４．
【0089】
ステップ３： 化合物Ｉ－４および化合物Ｉ－５の製造
反応フラスコに、中間体８－７（１００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（５５．１ｍｇ）、トリエチルアミン（６５．２ｍｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を順次加え、氷浴下で混合物にブタ－２－イン酸（２．７１ｍｇ）のＤＣＭ溶液３ｍＬを滴下した。反応終了後、反応液に水２０ｍＬを加えて希釈し、さらにＤＣＭ ２０ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水で２回洗浄し、溶媒を濃縮除去し、得られた濃縮物をＤＣＭ ２ｍＬで溶解した後、分取ＴＬＣにより分離して精製した。化合物Ｉ－４（１１ｍｇ）および化合物Ｉ－５（８ｍｇ）を得た。
化合物Ｉ－４：
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４４ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８９－７．７８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１６－７．１１ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０９－６．０５ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．８９－５．６４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３３－５．３２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．８０－４．５９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．０３－３．８１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７７－３．５８ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２７－２．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， １．６６－１．４８ （ｍ， １．５ Ｈ）， １．４６－１．４５ （ｍ， １．５Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５９２．４．
反応フラスコに、中間体８－７（１００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（５５．１ｍｇ）、トリエチルアミン（６５．２ｍｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を順次加え、氷浴下で混合物にブタ－２－イン酸（２．７１ｍｇ）のＤＣＭ溶液３ｍＬを滴下した。反応終了後、反応液に水２０ｍＬを加えて希釈し、さらにＤＣＭ ２０ｍＬを加えて３回抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水で２回洗浄し、溶媒を濃縮除去し、得られた濃縮物をＤＣＭ ２ｍＬで溶解した後、分取ＴＬＣにより分離して精製した。化合物Ｉ－４（１１ｍｇ）および化合物Ｉ－５（８ｍｇ）を得た。
化合物Ｉ－４：
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４４ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８９－７．７８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１６－７．１１ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０９－６．０５ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．８９－５．６４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．３３－５．３２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．８０－４．５９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．０３－３．８１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７７－３．５８ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２７－２．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， １．６６－１．４８ （ｍ， １．５ Ｈ）， １．４６－１．４５ （ｍ， １．５Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５９２．４．
【0090】
化合物Ｉ－５：
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４４ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０２－７．７８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２９－７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１７－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１１－６．０５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．０３－５．９８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．７９－５．６１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７２ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ４．５９ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ４．４５ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ３．８８－３．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４－３．６３ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２２－２．１３ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０１－２．００（ｍ， １ Ｈ）， １．９９－１．４６ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５６８．４．
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４４ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０２－７．７８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２９－７．２０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６５－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１７－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１１－６．０５ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．０３－５．９８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ５．７９－５．６１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７２ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ４．５９ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ４．４５ （ｓ， ０．５ Ｈ）， ３．８８－３．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４－３．６３ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２２－２．１３ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０１－２．００（ｍ， １ Ｈ）， １．９９－１．４６ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ－Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５６８．４．
【0091】
実施例８： ４－（３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－アクリロイルヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）－８－アミノイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－６）の製造
反応フラスコに中間体８－７（１００ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０６９ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、アクリル酸（１３．６６ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液１ｍＬを徐々に加え、最後に５０％のＴ３Ｐ（０．１９ｍｍｏｌ）を含む酢酸エチル溶液（１２１ｍｇ）を加え、室温で２時間撹拌反応させた。反応終了後、反応液を濃縮し、濃縮物に水２０ｍＬおよびＤＣＭ ２０ｍＬを加え、水層をＤＣＭ ２０ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水で２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－６（１０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４５ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０２ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７９－７．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１７－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１０－５．９９ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．７８－５．６０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７２－４．５９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．５９－４．４５ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８８－３．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４－３．６３ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２２－２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０１－２．００ （ｍ， １ Ｈ）， １．９９－１．４６ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８２．３．
【化22】
反応フラスコに中間体８－７（１００ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０６９ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、アクリル酸（１３．６６ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液１ｍＬを徐々に加え、最後に５０％のＴ３Ｐ（０．１９ｍｍｏｌ）を含む酢酸エチル溶液（１２１ｍｇ）を加え、室温で２時間撹拌反応させた。反応終了後、反応液を濃縮し、濃縮物に水２０ｍＬおよびＤＣＭ ２０ｍＬを加え、水層をＤＣＭ ２０ｍＬで２回抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和食塩水で２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－６（１０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４５ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０２ （ｓ， ２ Ｈ）， ７．７９－７．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１７－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．１０－５．９９ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．７８－５．６０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．７２－４．５９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．５９－４．４５ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８８－３．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４－３．６３ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２２－２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０１－２．００ （ｍ， １ Ｈ）， １．９９－１．４６ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８２．３．
【0092】
実施例９： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（シクロプロパンカルボニル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－７）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（６８ｍｇ）、ＨＡＴＵ（４１．７ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０７６ｍＬ）およびＤＣＭ（６ｍＬ）を加え、シクロプロパンカルボン酸（８．５８ｍｇ）のＤＣＭ溶液２ｍＬを徐々に加え、氷浴下で１０分間反応させ、反応完了後それに水１０ｍＬを加え、ＤＣＭ ２０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた後さらに飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、有機層を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－７（１１ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０３－８．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８０－７．７４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６４－７．６１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１４－７．１３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．０８－７．０７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．０７－６．０４ （ｍ， １．５ Ｈ）， ５．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ４．９５－４．９０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．６５－４．６０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．８１－３．７３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７２－３．６５ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６４－３．５９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．５５－３．４９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．４４－３．３８ （ｍ， １ Ｈ）， ２．９５－２．９９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０２－２．９４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．２９－２．２３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２３－２．１８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．１８－２．１０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．０４－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）， １．７１－１．６３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， １．５２－１．４３ （ｍ， １ Ｈ）， ０．８８－０．７３ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．７３－０．６０ （ｍ， １．５ Ｈ）， ０．６０－０．５２ （ｍ， ０．５ Ｈ） ． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５９６．４．
【化23】
反応フラスコに、中間体８－７（６８ｍｇ）、ＨＡＴＵ（４１．７ｍｇ）、ＴＥＡ（０．０７６ｍＬ）およびＤＣＭ（６ｍＬ）を加え、シクロプロパンカルボン酸（８．５８ｍｇ）のＤＣＭ溶液２ｍＬを徐々に加え、氷浴下で１０分間反応させ、反応完了後それに水１０ｍＬを加え、ＤＣＭ ２０ｍＬで３回抽出し、有機層を合わせた後さらに飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、有機層を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－７（１１ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０３－８．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８０－７．７４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６４－７．６１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１４－７．１３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．０８－７．０７ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．０７－６．０４ （ｍ， １．５ Ｈ）， ５．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ４．９５－４．９０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ４．６５－４．６０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．８１－３．７３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７２－３．６５ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６４－３．５９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．５５－３．４９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．４４－３．３８ （ｍ， １ Ｈ）， ２．９５－２．９９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．０２－２．９４ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．２９－２．２３ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２３－２．１８ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．１８－２．１０ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ２．０４－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）， １．７１－１．６３ （ｍ， ０．５ Ｈ）， １．５２－１．４３ （ｍ， １ Ｈ）， ０．８８－０．７３ （ｍ， ２ Ｈ）， ０．７３－０．６０ （ｍ， １．５ Ｈ）， ０．６０－０．５２ （ｍ， ０．５ Ｈ） ． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５９６．４．
【0093】
実施例１０： ４－（８－（シクロプロパンスルホニルアミノ）－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－８）の製造
反応フラスコに中間体８－７（０．１２ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でシクロプロパンスルホニルクロリド（０．２９ｇ）、ＤＭＡＰ（０．０２８ｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７４ｇ）を加え、添加終了後、加熱還流して反応させ、反応終了後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－８（０．０１５ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ） ， ７．９８－７．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８１－７．８０ （ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８－７．６５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８５－６．８４ （ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３３ （ｍ， １Ｈ）， ４．６６ （ｍ， １Ｈ）， ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．６４（ｍ， ４Ｈ）， ２．９４（ｓ， １Ｈ）， ２．０２－１．９９（ｍ， ２Ｈ）， １．４８－１．４５ （ｍ， １Ｈ）， ０．８７－０．８０ （ｍ， ４Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３２．３．
【化24】
反応フラスコに中間体８－７（０．１２ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でシクロプロパンスルホニルクロリド（０．２９ｇ）、ＤＭＡＰ（０．０２８ｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７４ｇ）を加え、添加終了後、加熱還流して反応させ、反応終了後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－８（０．０１５ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ） ， ７．９８－７．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８１－７．８０ （ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８－７．６５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８５－６．８４ （ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３３ （ｍ， １Ｈ）， ４．６６ （ｍ， １Ｈ）， ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．６４（ｍ， ４Ｈ）， ２．９４（ｓ， １Ｈ）， ２．０２－１．９９（ｍ， ２Ｈ）， １．４８－１．４５ （ｍ， １Ｈ）， ０．８７－０．８０ （ｍ， ４Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３２．３．
【0094】
実施例１１： ４－（８－アミノ－３ －（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（Ｎ－イソプロピルアンモニアスルホニル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－９）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（０．１０ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でＮ－イソプロピルアンモニアスルホニルクロリド（０．０２８ｇ）とトリエチルアミン（０．０７７ｇ）を加え、室温で反応させた。反応終了後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、ＹＭＣ高圧分取ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－９（０．０６８ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ） ， ８．０６－８．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７２－７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７－７．６４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５９－７．５８ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．７９－６．７８ （ｍ， １Ｈ）， ６．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．４５－５．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３－４．４２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６－４．１４（ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．６９（ｍ， １Ｈ）， ３．５８－３．４９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．０６－３．０４（ｍ， １Ｈ）， ２．２６ （ｓ， １Ｈ）， ２．１３（ｓ， １Ｈ）， ０．９６－０．８９（ｍ， ６Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６４９．４．
【化25】
反応フラスコに、中間体８－７（０．１０ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でＮ－イソプロピルアンモニアスルホニルクロリド（０．０２８ｇ）とトリエチルアミン（０．０７７ｇ）を加え、室温で反応させた。反応終了後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、ＹＭＣ高圧分取ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－９（０．０６８ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ） ， ８．０６－８．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７２－７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７－７．６４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５９－７．５８ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１２－７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．７９－６．７８ （ｍ， １Ｈ）， ６．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．４５－５．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３－４．４２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６－４．１４（ｍ， １Ｈ）， ３．７０－３．６９（ｍ， １Ｈ）， ３．５８－３．４９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．０６－３．０４（ｍ， １Ｈ）， ２．２６ （ｓ， １Ｈ）， ２．１３（ｓ， １Ｈ）， ０．９６－０．８９（ｍ， ６Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６４９．４．
【0095】
実施例１２： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（２－ヒドロキシルアセチル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１０）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（０．０６０ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でグリコール酸（０．０５２ｇ）、ＤＭＡＰ（０．０２８ｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２９ｇ）を加え、氷浴で５分間分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（０．４５ｇ）を加え、混合物を還流して４８時間反応させた後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－１０（０．０２９ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １Ｈ） ， ８．２３－８．２１ （ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５－７．６４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５９－７．５８ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．３１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．６９－５．８５ （ｍ， １Ｈ）， ４．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６５ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０（ｓ， １Ｈ）， ３．７３－３．５２（ｍ， ４Ｈ）， ２．２３－２．２１（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０５（ｍ， １Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８６．３．
【化26】
反応フラスコに、中間体８－７（０．０６０ｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、０℃でグリコール酸（０．０５２ｇ）、ＤＭＡＰ（０．０２８ｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２９ｇ）を加え、氷浴で５分間分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（０．４５ｇ）を加え、混合物を還流して４８時間反応させた後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－１０（０．０２９ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １Ｈ） ， ８．２３－８．２１ （ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５－７．６４ （ｍ， １Ｈ）， ７．５９－７．５８ （ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．３１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．６９－５．８５ （ｍ， １Ｈ）， ４．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６５ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０（ｓ， １Ｈ）， ３．７３－３．５２（ｍ， ４Ｈ）， ２．２３－２．２１（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０５（ｍ， １Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８６．３．
【0096】
実施例１３： ４－（８－アミノ－３ －（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（１－ヒドロキシルシクロプロパン－１－カルボニル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１１）の製造
反応フラスコに中間体８－７（０．１５ｇ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を加え、０℃で１－ヒドロキシルシクロプロパン－１－カルボン酸（０．０２８ｇ）およびトリエチルアミン（０．０５８ｇ）を加え、氷浴で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（０．１１ｇ）を加え、混合物を加熱還流して２４時間反応させた後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、ＹＭＣ高圧分取ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－１１（０．０４５ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４２ （ｓ， １Ｈ）， ８．７１ （ｓ， １Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １Ｈ） ， ８．０３－８．０１ （ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８２－７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０９ （ｓ， １Ｈ）， ６．２２－６．１９ （ｄ， Ｊ＝１３Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０３－６．０１ （ｄ， Ｊ＝８．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．７０－５．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．７０－４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１－３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．７４－３．６４（ｍ， ２Ｈ）， ３．５４（ｓ， １Ｈ）， ３．３８－３．３７（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２２－２．１８（ｍ， ２Ｈ）， １．０９－１．０８（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ０．９４－０．８２（ｍ， ２Ｈ）， ０．１６－０．１２（ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６１２．４．
【化27】
反応フラスコに中間体８－７（０．１５ｇ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を加え、０℃で１－ヒドロキシルシクロプロパン－１－カルボン酸（０．０２８ｇ）およびトリエチルアミン（０．０５８ｇ）を加え、氷浴で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（０．１１ｇ）を加え、混合物を加熱還流して２４時間反応させた後、反応液を水１０ｍＬに溶解し、ＤＣＭで抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、ＹＭＣ高圧分取ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－１１（０．０４５ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．４２ （ｓ， １Ｈ）， ８．７１ （ｓ， １Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １Ｈ） ， ８．０３－８．０１ （ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８２－７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０９ （ｓ， １Ｈ）， ６．２２－６．１９ （ｄ， Ｊ＝１３Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０３－６．０１ （ｄ， Ｊ＝８．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．７０－５．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．７０－４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１－３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．７４－３．６４（ｍ， ２Ｈ）， ３．５４（ｓ， １Ｈ）， ３．３８－３．３７（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２２－２．１８（ｍ， ２Ｈ）， １．０９－１．０８（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ０．９４－０．８２（ｍ， ２Ｈ）， ０．１６－０．１２（ｍ， １Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６１２．４．
【0097】
実施例１４： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（シクロブチルカルボニル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１２）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（１８０ｍｇ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、撹拌しながら、さらにＥｔ３Ｎ（０．１９ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１４３ｍｇ）を加え、窒素で３回置換し、－２０℃でシクロブタンカルボン酸（３４．２ｍｇ）のＤＣＭ溶液をバッチで加えた。滴下終了後、室温で一晩反応させた。反応液に水を加え、水層にＤＣＭを加えて抽出し、有機層を合わせた後に飽和食塩で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ－ＭｅＯＨ（９９：１～９５：５））により精製し、化合物Ｉ－１２（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０８－７．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２２．６， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４－７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３５．１， ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ３２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ６２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６９－ ４．５７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０－ ３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３－３．６２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２２－３．１５ （ｍ， １Ｈ）， ３．０６－２．９８ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６－２．８８ （ｍ， １Ｈ）， ２．１９ － ２．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５－１．９２ （ｍ， １Ｈ）， １．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １８．６， ９．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １６．０， ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６２－１．５４ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６１０．２１８５．
【化28】
反応フラスコに、中間体８－７（１８０ｍｇ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、撹拌しながら、さらにＥｔ３Ｎ（０．１９ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１４３ｍｇ）を加え、窒素で３回置換し、－２０℃でシクロブタンカルボン酸（３４．２ｍｇ）のＤＣＭ溶液をバッチで加えた。滴下終了後、室温で一晩反応させた。反応液に水を加え、水層にＤＣＭを加えて抽出し、有機層を合わせた後に飽和食塩で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ－ＭｅＯＨ（９９：１～９５：５））により精製し、化合物Ｉ－１２（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０８－７．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２２．６， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４－７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３５．１， ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ３２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ６２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６９－ ４．５７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０－ ３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３－３．６２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２２－３．１５ （ｍ， １Ｈ）， ３．０６－２．９８ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６－２．８８ （ｍ， １Ｈ）， ２．１９ － ２．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５－１．９２ （ｍ， １Ｈ）， １．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １８．６， ９．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １６．０， ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， １．６２－１．５４ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６１０．２１８５．
【0098】
実施例１５： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（Ｎ，Ｎ－ジメチルスルファモイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１３）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（１５０ｍｇ）およびＰｙ（１０ｍＬ）を加え、窒素ガスで保護し、氷水浴で降温しながらジメチルスルファモイルクロリド（８２ｍｇ）を徐々に加え、添加終了後、３５℃に加熱して４８時間反応させた。反応液を濃縮し、濃縮物にＤＣＭ－ＭｅＯＨ（１０：１）を加えて溶解し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－１３（３０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．０４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５１ （ｓ， １Ｈ）， ４．０７ （ｄ， Ｊ ＝ １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５２ － ３．４２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０ （ｓ， ６Ｈ）， ２．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．３， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０５－１．９４ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３５．１８０８．
【化29】
反応フラスコに、中間体８－７（１５０ｍｇ）およびＰｙ（１０ｍＬ）を加え、窒素ガスで保護し、氷水浴で降温しながらジメチルスルファモイルクロリド（８２ｍｇ）を徐々に加え、添加終了後、３５℃に加熱して４８時間反応させた。反応液を濃縮し、濃縮物にＤＣＭ－ＭｅＯＨ（１０：１）を加えて溶解し、分取ＴＬＣにより精製して化合物Ｉ－１３（３０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．０４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５１ （ｓ， １Ｈ）， ４．０７ （ｄ， Ｊ ＝ １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５２ － ３．４２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０ （ｓ， ６Ｈ）， ２．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．３， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０５－１．９４ （ｍ， １Ｈ）． ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３５．１８０８．
【0099】
実施例１６： （１－（２－フルオロ－４－（（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）カルバモイル）フェニル）－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）リン酸ジメチル（化合物Ｉ－１４）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（１００ｍｇ）、ＤＭＡＰ（２．３２ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（０．０８３ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、添加終了後、クロロホスホン酸ジメチル（２７．４ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液１ｍＬを徐々に加え、添加が完了し、加熱還流して反応させ、反応終了後水で２回洗浄し、有機層を濃縮し、濃縮物をＹＭＣ ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－１４（２０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４２ （ｓ， １ Ｈ）， １０．６５ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７１－８．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９５－７．９１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７０－７．６９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５７－７．５６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．８７－６．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３３ （ｓ， １ Ｈ）， ４．６３－４．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７５－３．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６３－３．６４ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３９－３．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９１－２．９２ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３１－２．２５ （ｍ， １ Ｈ）， ２．０３－１．９９ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３６．４．
【化30】
反応フラスコに、中間体８－７（１００ｍｇ）、ＤＭＡＰ（２．３２ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（０．０８３ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加え、添加終了後、クロロホスホン酸ジメチル（２７．４ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液１ｍＬを徐々に加え、添加が完了し、加熱還流して反応させ、反応終了後水で２回洗浄し、有機層を濃縮し、濃縮物をＹＭＣ ＨＰＬＣにより精製して化合物Ｉ－１４（２０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４２ （ｓ， １ Ｈ）， １０．６５ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．７１－８．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９５－７．９１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７０－７．６９ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５７－７．５６ （ｍ， １ Ｈ）， ６．８７－６．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ５．３３ （ｓ， １ Ｈ）， ４．６３－４．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７５－３．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６３－３．６４ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．３９－３．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９１－２．９２ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３１－２．２５ （ｍ， １ Ｈ）， ２．０３－１．９９ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６３６．４．
【0100】
実施例１７： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－（Ｎ－メチルスルファモイル）ヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１５）の製造
０℃で、メチルスルファモイルクロリド（３５．０ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液（１ｍＬ）に中間体８－７（１５０ｍｇ）およびトリエチルアミン（１１５ｍｇ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）撹拌液に徐々に加え、添加終了後、撹拌を続けて反応させ、反応終了後、カラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－１５（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４２ （ｓ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７４－７．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１１－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．７９－７．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０１ （ｂｒ， ２ Ｈ）， ５．４４－５．４２ （ｍ， １ Ｈ）， ４．４７－４．３９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．１０－４．０７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７０－３．５８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．５７－３．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．２７－２．２７ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２５－２．２１ （ｍ， ３ Ｈ），２．０１－１．９９ （ｍ， １ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６２１．４．
【化31】
０℃で、メチルスルファモイルクロリド（３５．０ｍｇ）を含むＤＣＭ溶液（１ｍＬ）に中間体８－７（１５０ｍｇ）およびトリエチルアミン（１１５ｍｇ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）撹拌液に徐々に加え、添加終了後、撹拌を続けて反応させ、反応終了後、カラムクロマトグラフィーにより分離精製して化合物Ｉ－１５（５０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １１．４２ （ｓ， １ Ｈ）， ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７４－７．３１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６６－７．６４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５８－７．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１１－７．１０ （ｍ， １ Ｈ）， ６．７９－７．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．０１ （ｂｒ， ２ Ｈ）， ５．４４－５．４２ （ｍ， １ Ｈ）， ４．４７－４．３９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．１０－４．０７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７０－３．５８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．５７－３．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．２７－２．２７ （ｍ， １ Ｈ）， ２．２５－２．２１ （ｍ， ３ Ｈ），２．０１－１．９９ （ｍ， １ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：６２１．４．
【0101】
実施例１８： ４－（８－アミノ－３－（（２Ｓ，３ａＲ，６ａＳ）－１－グリシルヘキサヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｂ］ピロール－２－イル）イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－１－イル）－３－フルオロ－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）ピリジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ｉ－１６）の製造
反応フラスコに、中間体８－７（２００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１２３ｍｇ）、トリエチルアミン（１３０ｍｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を順次加え、氷浴で混合物に（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）グリシン（５３．６ｍｇ）のＤＣＭ溶液１ｍＬを滴下した。反応終了後、反応液を水２０ｍＬで２回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、カラムクロマトグラフィーにより分離し、濃縮乾燥して固形物化合物を得た。上記固形物化合物を４Ｍの塩化水素のメタノール溶液１０ｍＬを加え、激しく撹拌しながら反応させ、反応終了後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液２０ｍＬで２回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－１６（３０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８６－７．８２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．７３－７．６９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．６９－７．６１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６０－７．５４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２３－７．１６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．１４－７．０９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．２７－５．９２ （ｂｒ， ２ Ｈ）， ５．９５－５．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ５．７３－５．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ４．７８－４．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９４－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８４－３．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７８－３．７３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７２－３．６６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．６６－３．６１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．５２－３．４７ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．００－２．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３０－２．１９ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０５－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８５．４．
【化32】
反応フラスコに、中間体８－７（２００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１２３ｍｇ）、トリエチルアミン（１３０ｍｇ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を順次加え、氷浴で混合物に（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）グリシン（５３．６ｍｇ）のＤＣＭ溶液１ｍＬを滴下した。反応終了後、反応液を水２０ｍＬで２回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、カラムクロマトグラフィーにより分離し、濃縮乾燥して固形物化合物を得た。上記固形物化合物を４Ｍの塩化水素のメタノール溶液１０ｍＬを加え、激しく撹拌しながら反応させ、反応終了後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液２０ｍＬで２回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、濃縮物を分取ＴＬＣにより分離精製して化合物Ｉ－１６（３０ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．７２－８．７１ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．００ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８６－７．８２ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．７３－７．６９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．６９－７．６１ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６０－７．５４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２３－７．１６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ７．１４－７．０９ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ６．２７－５．９２ （ｂｒ， ２ Ｈ）， ５．９５－５．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ５．７３－５．６６ （ｍ， １ Ｈ）， ４．７８－４．６０ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９４－３．８６ （ｍ， １ Ｈ）， ３．８４－３．７９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７８－３．７３ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７２－３．６６ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．６６－３．６１ （ｍ， ０．５ Ｈ）， ３．５２－３．４７ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．００－２．９１ （ｍ， １ Ｈ）， ２．３０－２．１９ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０５－１．９５ （ｍ， １ Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ， ［Ｍ＋Ｈ］＋） ｍ／ｚ：５８５．４．
【0102】
試験例１：インビトロ活性
１．１ ＢＴＫ阻害活性スクリーニング
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で３５０ｎｇ／μＬのＢＴＫストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０３３４ｎｇ／μＬ（最終濃度：０．０２ｎｇ／μＬ）の作業溶液（希釈標準溶液）６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定し、各ウェルに２つの重複ウェル（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ ｗｅｌｌｓ）を設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×１００μＭ ＡＴＰ（最終濃度：２０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ａｂ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：６２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティング（ｆｏｕｒ－ｐａｒａｍｅｔｅｒｆｉｔｔｉｎｇ）を採用し、ＩＣ５０を計算した。
１．１ ＢＴＫ阻害活性スクリーニング
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で３５０ｎｇ／μＬのＢＴＫストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０３３４ｎｇ／μＬ（最終濃度：０．０２ｎｇ／μＬ）の作業溶液（希釈標準溶液）６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定し、各ウェルに２つの重複ウェル（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ ｗｅｌｌｓ）を設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×１００μＭ ＡＴＰ（最終濃度：２０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ａｂ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：６２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティング（ｆｏｕｒ－ｐａｒａｍｅｔｅｒｆｉｔｔｉｎｇ）を採用し、ＩＣ５０を計算した。
【0103】
１．２ ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体：ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）阻害活性のスクリーニング
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＥＧＦＲ（ＷＴ）ストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０１３３６ｎｇ／μＬ（最終濃度：０．００８ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．４８ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定し、各ウェルに２つの重複ウェルを設定した。酵素と化合物または溶媒とを１０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×２５μＭ ＡＴＰ（最終濃度：５μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＥＧＦＲ（ＷＴ）ストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０１３３６ｎｇ／μＬ（最終濃度：０．００８ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．４８ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定し、各ウェルに２つの重複ウェルを設定した。酵素と化合物または溶媒とを１０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×２５μＭ ＡＴＰ（最終濃度：５μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
【0104】
１．３ ＴＥＣ阻害活性のスクリーニング
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＴＥＣストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０１３３６ｇ／μＬ（最終濃度：０．００８ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×５０μＭ ＡＴＰ（最終濃度：１０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＴＥＣストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０１３３６ｇ／μＬ（最終濃度：０．００８ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×５０μＭ ＡＴＰ（最終濃度：１０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
【0105】
１．４ ＩＴＫ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｋｉｎａｓｅ）阻害活性のスクリーニング
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＩＴＫストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０８３５ｇ／μＬ（最終濃度：０．０５ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×５０μＭ ＡＴＰ（最終濃度：１０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
上記測定結果を表１に示す。
キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０）で５０ｎｇ／μＬのＩＴＫストック溶液を希釈し、ウェルごとに１．６７×０．０８３５ｇ／μＬ（最終濃度：０．０５ｎｇ／μＬ）の作業溶液６μＬを加え、ナノリットルピペッターを用いてＤＭＳＯで溶解された異なる化合物をウェルに加え、ここで化合物の最終濃度を１０００ｎＭ～０．２４ｎＭとし４倍の勾配で合計７つの濃度となるように設定し、同時にブランク対照ウェル（酵素なし）および陰性対照ウェル（酵素あり、溶媒ＤＭＳＯあり）設定した。酵素と化合物または溶媒とを３０分間反応させた後、キナーゼ緩衝液でよく調製された５×５０μＭ ＡＴＰ（最終濃度：１０μＭ）および５×０．５μＭ基質（最終濃度：０．１μＭ、ＵＬｉｇｈｔ－ｐｏｌｙ ＧＴ）を、１：１で混合した後、ウェルごとに４μＬずつウェルに加え、封止用フィルムでプレートを密封した後、室温で２時間反応させた後、ウェルごとに４×４０ｍＭ ＥＤＴＡ（最終濃度：１０ｍＭ）５μＬを加え、室温で５分間インキュベートし、さらにウェルごとに４×８ｎＭ検出試薬（最終濃度：２ｎＭ、Ｅｕ－ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）５μＬを加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取り（励起：３２０ｎｍ、発射：６６５ｎｍ）、４パラメータフィッティングを採用し、ＩＣ５０を計算した。
上記測定結果を表１に示す。
【0106】
【表1】
注：ＮＡは検出されないことを意味する。
【0107】
試験例２： 細胞レベルでのＢＴＫ（Ｙ２２３）リン酸化阻害活性のスクリーニング
３０％の過酸化水素２０μＬを取り、再蒸留水８６０μＬを加えて、２００ｍＭの過酸化水素を調製した。ＰＶ（過バナジン酸ナトリウム）：（２００ｍｍｏｌ／Ｌのオルトバナジン酸ナトリウム１０μＬ）を取り、（２００ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素１０μＬ）を加え、（ＲＰＭＩ１６４０完全培地（フェノールレッド無し）８０μＬ）を加え、室温で１５分間反応させ、ＲＰＭＩ１６４０完全培地（フェノールレッド無し）を加えて６ｍＭまで希釈し、使用に応じて随時に配合した。対数期に成長したＲａｍｏｓリンパ腫細胞を取り、低速卓上遠心機、１５００ｒｐｍで３分間遠心し、適量のＲＰＭＩ１６４０完全培地を再懸濁した後に計数し、適量の細胞懸濁液を取り、対応する培地を適量加えて細胞密度を調整し、細胞密度を約１～２×１０Ｅ７個の細胞／ｍＬに調整した。上記の細胞密度に応じて細胞を３８４ウェルプレートに２０μＬ／ウェルで接種し、化合物５μＬをウェルごとに加えて１時間インキュベートし、２０ｍＭのＰＶを取ってＲＰＭＩ１６４０完全培地を用いて６ｍＭ（最終濃度：１ｍＭ）まで希釈し、続いてプレート分布に従ってウェルごとにＰＶ ５μＬを加え、１５分間～２０分間インキュベートした。ブランク群には、細胞を接種し、化合物を加えず、ＰＶを加えないことにし、対照群には、細胞を接種し、化合物を加えず、ＰＶを加えることにし、そして直ちにブロッキング液を入れた溶解液（４×）１０μＬを加え、室温で３０分間振とうしてインキュベートした。均一に混合した後、溶解物（ｌｙｓａｔｅ）１６μＬを別の３８４ウェル小容量ホワイトボードに移した。検出緩衝液で調製したプリミックス抗体４μＬ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を加え、プレートを覆い、遠心分離して均一に混合し、室温で一晩インキュベートした。ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いて６６５ｎｍ／６２０ｎｍ信号値を検出し、４パラメータフィッティングを採用してＩＣ５０を計算した。測定結果を表２に示す。
３０％の過酸化水素２０μＬを取り、再蒸留水８６０μＬを加えて、２００ｍＭの過酸化水素を調製した。ＰＶ（過バナジン酸ナトリウム）：（２００ｍｍｏｌ／Ｌのオルトバナジン酸ナトリウム１０μＬ）を取り、（２００ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素１０μＬ）を加え、（ＲＰＭＩ１６４０完全培地（フェノールレッド無し）８０μＬ）を加え、室温で１５分間反応させ、ＲＰＭＩ１６４０完全培地（フェノールレッド無し）を加えて６ｍＭまで希釈し、使用に応じて随時に配合した。対数期に成長したＲａｍｏｓリンパ腫細胞を取り、低速卓上遠心機、１５００ｒｐｍで３分間遠心し、適量のＲＰＭＩ１６４０完全培地を再懸濁した後に計数し、適量の細胞懸濁液を取り、対応する培地を適量加えて細胞密度を調整し、細胞密度を約１～２×１０Ｅ７個の細胞／ｍＬに調整した。上記の細胞密度に応じて細胞を３８４ウェルプレートに２０μＬ／ウェルで接種し、化合物５μＬをウェルごとに加えて１時間インキュベートし、２０ｍＭのＰＶを取ってＲＰＭＩ１６４０完全培地を用いて６ｍＭ（最終濃度：１ｍＭ）まで希釈し、続いてプレート分布に従ってウェルごとにＰＶ ５μＬを加え、１５分間～２０分間インキュベートした。ブランク群には、細胞を接種し、化合物を加えず、ＰＶを加えないことにし、対照群には、細胞を接種し、化合物を加えず、ＰＶを加えることにし、そして直ちにブロッキング液を入れた溶解液（４×）１０μＬを加え、室温で３０分間振とうしてインキュベートした。均一に混合した後、溶解物（ｌｙｓａｔｅ）１６μＬを別の３８４ウェル小容量ホワイトボードに移した。検出緩衝液で調製したプリミックス抗体４μＬ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を加え、プレートを覆い、遠心分離して均一に混合し、室温で一晩インキュベートした。ＰＥ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ多機能マイクロプレートリーダーを用いて６６５ｎｍ／６２０ｎｍ信号値を検出し、４パラメータフィッティングを採用してＩＣ５０を計算した。測定結果を表２に示す。
【0108】
【表2】
【0109】
試験例３： インビトロ肝ミクロソームの代謝安定性
３．１ ヒト肝ミクロソーム実験
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：
ヒト肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）と、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）の混合溶液３０μＬと、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬと、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬとを含み、そのうち、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル（ｄｉａｚｅｐａｍ ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
３．１ ヒト肝ミクロソーム実験
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：
ヒト肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）と、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）の混合溶液３０μＬと、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬと、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬとを含み、そのうち、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル（ｄｉａｚｅｐａｍ ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
【0110】
３．２ マウス肝ミクロソーム実験
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：
マウス肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）と、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）の混合溶液３０μＬと、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬと、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬとを含み、そのうち、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：
マウス肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）と、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）の混合溶液３０μＬと、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬと、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬとを含み、そのうち、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
【0111】
３．３ ラット肝ミクロソーム実験
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：ラット肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）３０μＬ、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬ、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬ、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
上記測定結果を表３に示す。
最終インキュベーション系（ｆｉｎａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）３００μＬ：ラット肝ミクロソーム３０μＬ（タンパク濃度：５ｍｇ／ｍＬ、米国ＸＥＮＯＴＥＣＨ社）、ＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）＋ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）３０μＬ、基質となる実施例化合物（５０％アセトニトリル水溶液で溶解させ、１００μＭ）３μＬ、ＰＢＳ緩衝液２３７μＬ、有機溶媒（アセトニトリル）の割合は０．５％であった。各チューブに、基質と酵素との均一に混合された溶液（総体積２７０μＬ）を予め配合し、それぞれ３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ＋ＭｇＣｌ２の混合溶液３０μＬを加えて反応させ、それぞれ０、１５、３０、６０分間で反応液５０μＬを取り出し、内部標準含有ジアゼパム氷アセトニトリル３００μＬ（２０ｎｇ／ｍＬ）で反応を停止させた。反応混合物をボルテックスで５分間振とうした後、１０分間遠心分離（１３０００ｒｐｍ、４℃）した。上清１００μＬを吸引してサンプル瓶に入れ、サンプル１μＬをＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、残りのパーセンテージを計算した。
上記測定結果を表３に示す。
【0112】
【表3】
【0113】
試験例４：マウス体内薬物動態学実験：
ＩＣＲマウスは、体重１８～２２ｇで、３日～５日間適応性飼育を行った後、群ごとに９匹で無作為に群分け、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ用量で関連化合物を胃内投与し、それぞれ１ｍｇ／ｋｇ用量で被検化合物を静脈注射した。被験動物（ＩＣＲマウス）には、投与前１２時間から絶食させ、投与後４時間から給餌し、実験前後も実験中も自由に水を飲んだ。胃内投与後、０．２５（１５分間）、０．５（３０分間）、１、２、４、６、８、１０、２４時間の時点に眼窩から約０．１ｍＬを採血し、静注投与後０．０８３（５分間）、０．１６７（１０分間）、０．５（３０分間）、１、２、６、８、１０、２４時間の時点に眼窩から約０．１ｍＬを採血し、各マウスは３つ～４つの時点で採取し、各時点で３匹のマウスから全血を採取してＥＤＴＡ－Ｋ２とフッ化ナトリウムとを含む遠心管に入れ、３０分間内４℃に移し、４０００ｒｐｍ×１０分間の条件下で血漿を遠心分離した。すべての血漿を採取した直後に、－２０℃で保存して測定用に用意した。２０μＬの被験血漿サンプルと検量線サンプルをピペットで吸引して取り、内部標準（ジアゼパム：２０ｍｇ／ｍＬ）含有アセトニトリル溶液３００μＬを加え、得られた混合物を振動させて５分間均一に混合し、その後１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清８０μＬを取り、超純水８０μＬで希釈し、均一に混合し、得られた溶液１μＬをピペットで吸引し取ってＬＣ／ＭＳ／ＭＳ測定に用いてクロマトグラムを記録した。マウマウス体内薬物動態実験により、本発明に係る化合物の経口投与、静脈注射暴露量（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を評価し、結果を表４に示した。
ＩＣＲマウスは、体重１８～２２ｇで、３日～５日間適応性飼育を行った後、群ごとに９匹で無作為に群分け、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ用量で関連化合物を胃内投与し、それぞれ１ｍｇ／ｋｇ用量で被検化合物を静脈注射した。被験動物（ＩＣＲマウス）には、投与前１２時間から絶食させ、投与後４時間から給餌し、実験前後も実験中も自由に水を飲んだ。胃内投与後、０．２５（１５分間）、０．５（３０分間）、１、２、４、６、８、１０、２４時間の時点に眼窩から約０．１ｍＬを採血し、静注投与後０．０８３（５分間）、０．１６７（１０分間）、０．５（３０分間）、１、２、６、８、１０、２４時間の時点に眼窩から約０．１ｍＬを採血し、各マウスは３つ～４つの時点で採取し、各時点で３匹のマウスから全血を採取してＥＤＴＡ－Ｋ２とフッ化ナトリウムとを含む遠心管に入れ、３０分間内４℃に移し、４０００ｒｐｍ×１０分間の条件下で血漿を遠心分離した。すべての血漿を採取した直後に、－２０℃で保存して測定用に用意した。２０μＬの被験血漿サンプルと検量線サンプルをピペットで吸引して取り、内部標準（ジアゼパム：２０ｍｇ／ｍＬ）含有アセトニトリル溶液３００μＬを加え、得られた混合物を振動させて５分間均一に混合し、その後１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清８０μＬを取り、超純水８０μＬで希釈し、均一に混合し、得られた溶液１μＬをピペットで吸引し取ってＬＣ／ＭＳ／ＭＳ測定に用いてクロマトグラムを記録した。マウマウス体内薬物動態実験により、本発明に係る化合物の経口投与、静脈注射暴露量（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を評価し、結果を表４に示した。
【0114】
【表4】
備考： ｉｇ：胃内投与、 ｉｖ：静脈注射、 ＭＲＴ：平均滞留時間、 Ｖｚ：見かけの分布容積、 ＣＬｚ：クリアランス率。
【0115】
試験例５： 体内薬効研究
ＯＣＩ－ＬＹ１０マウス皮下移植腫瘍（濃度１×１０８／ｍＬ＊０．１ｍＬ／匹）を、無菌条件下でＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの右側腋窩下に接種した（接種時に接種部位を剃毛）。皮下移植腫瘍を接種した後、腫瘍体積が１００～３００ｍｍ３程度になったら、動物を群分けした。
モデル群：溶媒、６匹、Ｉ－１：５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回（ｂｉｄ）、胃内投与（ｉ．ｇ）、６匹、Ｉ－３：５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回（ｂｉｄ）、胃内投与（ｉ．ｇ）、６匹。
ＯＣＩ－ＬＹ１０マウス皮下移植腫瘍（濃度１×１０８／ｍＬ＊０．１ｍＬ／匹）を、無菌条件下でＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの右側腋窩下に接種した（接種時に接種部位を剃毛）。皮下移植腫瘍を接種した後、腫瘍体積が１００～３００ｍｍ３程度になったら、動物を群分けした。
モデル群：溶媒、６匹、Ｉ－１：５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回（ｂｉｄ）、胃内投与（ｉ．ｇ）、６匹、Ｉ－３：５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回（ｂｉｄ）、胃内投与（ｉ．ｇ）、６匹。
【0116】
胃内投与により、溶媒または薬物をそれぞれ１０ｍＬ／ｋｇの体積で１日２回、２３日間連続投与した。瘤体積を週に２回～３回測定し、同時にマウス重量を秤量し、データを記録し、動物の行動を毎日観察した。すべての投与が完了した後、動物を犠牲させ、腫瘍を剥ぎ取って秤量した。
腫瘍体積および腫瘍抑制率は、以下の式を用いて算出した。
腫瘍体積（ＴＶ）＝（長さ×幅２）／２。
腫瘍抑制率（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）＝（１－治療群腫瘍重量／モデル群腫瘍重量）×１００％。
腫瘍体積および腫瘍抑制率は、以下の式を用いて算出した。
腫瘍体積（ＴＶ）＝（長さ×幅２）／２。
腫瘍抑制率（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）＝（１－治療群腫瘍重量／モデル群腫瘍重量）×１００％。
【0117】
【表5】
＊＊Ｐ＜０．０１、モデル群との比較。