特許 7497082 マツタケ類の子実体原基の誘導方法、マツタケ類の子実体原基の製造方法、菌床培地、培養液

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-05-31

(45)【発行日】2024-06-10

(54)【発明の名称】マツタケ類の子実体原基の誘導方法、マツタケ類の子実体原基の製造方法、菌床培地、培養液

(51)【国際特許分類】

   A01G 18/10 20180101AFI20240603BHJP

   A01G 18/20 20180101ALI20240603BHJP

   A01G 18/50 20180101ALI20240603BHJP

【ＦＩ】

A01G18/10

A01G18/20

A01G18/50

【請求項の数】 6

(21)【出願番号】P 2022578843

(86)(22)【出願日】2022-09-09

(86)【国際出願番号】 JP2022033935

【審査請求日】2022-12-20

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成３１年度、農林水産省、高級菌根性きのこ栽培技術の開発委託事業、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願

(73)【特許権者】

【識別番号】501186173

【氏名又は名称】国立研究開発法人森林研究・整備機構

(74)【代理人】

【識別番号】100087398

【弁理士】

【氏名又は名称】水野 勝文

(74)【代理人】

【識別番号】100128783

【弁理士】

【氏名又は名称】井出 真

(74)【代理人】

【識別番号】100128473

【弁理士】

【氏名又は名称】須澤 洋

(74)【代理人】

【識別番号】100160886

【弁理士】

【氏名又は名称】久松 洋輔

(74)【代理人】

【識別番号】100192603

【弁理士】

【氏名又は名称】網盛 俊

(72)【発明者】

【氏名】山中 高史

(72)【発明者】

【氏名】市原 優

(72)【発明者】

【氏名】太田 明

【審査官】田辺 義拓

(56)【参考文献】

【文献】特開昭５２－００６６３２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平１１－３１８４３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１３－０５９３１７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００１－１６９６５９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００２－２６２６６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平１０－３０９１８８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ０１Ｇ １８／１０

Ａ０１Ｇ １８／２０

Ａ０１Ｇ １８／５０

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

培養液と前記培養液が浸透した培地基材とを含む菌床培地でマツタケ類の種菌を培養することを含み、
前記培養液は、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのグルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのピルビン酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのオキサロ酢酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのコハク酸及び０．００１～５．０ｇ／Ｌのリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、マツタケ類の子実体原基の誘導方法。

【請求項2】

前記一次代謝産物がピルビン酸と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）であることを特徴とする、請求項１に記載の誘導方法。

【請求項3】

前記培養液における前記ピルビン酸の濃度が０．０１～１ｇ／Ｌであり、
前記培養液における前記還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度が０．１～１５ｍｇ／Ｌである、
ことを特徴とする請求項２に記載の誘導方法。

【請求項4】

培養液と前記培養液が浸透した培地基材とを含む菌床培地でマツタケ類の種菌を培養することを含み、
前記培養液は、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのグルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのピルビン酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのオキサロ酢酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのコハク酸及び０．００１～５．０ｇ／Ｌのリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、マツタケ類の子実体原基の製造方法。

【請求項5】

マツタケ類の種菌を培養するための菌床培地であって、
培養液と前記培養液が浸透した培地基材を含み、
前記培養液が、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのグルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのピルビン酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのオキサロ酢酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのコハク酸及び０．００１～５．０ｇ／Ｌのリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、菌床培地。

【請求項6】

マツタケ類の種菌を培養するための菌床培地に含有される培養液であって、
０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌのフラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌの還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのグルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、０．００１～５．０ｇ／Ｌのピルビン酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのオキサロ酢酸、０．００１～５．０ｇ／Ｌのコハク酸及び０．００１～５．０ｇ／Ｌのリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、培養液。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、マツタケ類の子実体原基を誘導する誘導方法などに関する。

【背景技術】

【0002】

マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）は、キシメジ科に属する担子菌類であり、アカマツの根に菌根を作って共生する菌根菌である。マツタケがアカマツに共生することで作られるマツタケの子実体は、独特の香りを有し、日本では好まれて食されている。

【0003】

マツタケは、生育条件などの様々な条件が揃わないと、子実体を形成しない。このため、山などで自然に繁殖するマツタケの子実体は、その収穫量に限りがあり、高値で取引されている。このような状況に鑑み、マツタケの菌床栽培（人工栽培）するための技術が求められている。しかしながら、マツタケは、枯れた木や落ち葉などを分解して成長する腐生菌（シイタケなど）と比較して菌床栽培が難しく、商業的に利用可能な菌床栽培方法は未だ確立されていない。

【0004】

マツタケの子実体は、菌糸が集合して形成される子実体原基が成長したものである。このため、マツタケの菌床栽培を行うには、マツタケ種菌から子実体原基を誘導することが必要である。マツタケ種菌から子実体原基を誘導する技術については、例えば、以下のような報告がある。

【0005】

非特許文献１では、アカマツ林土壌（古生層土壌）に対して所定の組成の培養液を添加した菌床培地でマツタケ種菌を培養することで、子実体原基が形成されたと報告されている。非特許文献２では、バーミキュライトに対して所定の組成の培養液を添加した菌床培地でマツタケ種菌を培養することで、子実体原基が形成されたと報告されている。また、特許文献１には、３０℃以下の温度で、菌根性キノコ類の種菌を水湿潤状態の麦を含む菌床培地で培養することで、菌根性キノコの子実体原基が得られたと記載されており、菌根性キノコの一例としてマツタケが挙げられている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】特開平０７－１１５８４４号公報

【非特許文献】

【0007】

【文献】小川眞、浜田稔，「純粋培養によるマツタケ子実体原基の形成」，日菌報，１６巻， ｐｐ.４０６－４１５，１９７５年

【文献】川合正允、小川真，まつたけの培養に関する研究「第４報 種菌培養の検討と菌床栽培の試み」，日菌報，１７巻，ｐｐ.４９９－５０５，１９７６年

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、マツタケ類の子実体原基を誘導する新規な技術を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者等は、非特許文献１に記載される培養液や、非特許文献２に記載される培養液を用いて、マツタケの菌床栽培を試みた。しかしながら、いずれの培養液を用いた場合であっても、マツタケの子実体原基を誘導することができなかった。

【0010】

この試験結果に基づいて、本発明者等は、鋭意検討した。その結果、菌床培地に添加される培養液に、特定の一次代謝産物を含有することで、特定の一次代謝産物を含有しない場合と比較して、マツタケの子実体原基が誘導されやすくなることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0011】

本発明の要旨は以下のとおりである。
［１］培養液と前記培養液が浸透した培地基材とを含む菌床培地でマツタケ類の種菌を培養することを含み、前記培養液は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、マツタケ類の子実体原基の誘導方法。
［２］前記一次代謝産物がピルビン酸と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）であることを特徴とする、［１］に記載の誘導方法。
［３］前記培養液における前記ピルビン酸の濃度が０．０１～１ｇ／Ｌであり、
前記培養液における前記還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度が０．１～１５ｍｇ／Ｌである、ことを特徴とする［２］に記載の誘導方法。
［４］培養液と前記培養液が浸透した培地基材とを含む菌床培地でマツタケ類の種菌を培養することを含み、前記培養液は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、マツタケ類の子実体原基の製造方法。
［５］マツタケ類の種菌を培養するための菌床培地であって、培養液と前記培養液が浸透した培地基材を含み、前記培養液が、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、菌床培地。
［６］マツタケ類の種菌を培養するための菌床培地に含有される培養液であって、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、培養液。

【発明の効果】

【0012】

本発明によれば、マツタケ類の子実体原基を誘導する新規な技術を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、試験管１本あたりの平均子実体原基数を示すグラフである（試験番号１～２７）。

【図2】図２は、試験管１本あたりの平均子実体原基数を示すグラフである（試験番号２８～４８）。

【図3】図３は、マツタケの子実体原基が形成された菌床培地の写真である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下、本発明の一実施形態について説明する。

【0015】

本実施形態は、マツタケ類の子実体原基（以下、「マツタケ類子実体原基」という）を誘導する誘導方法に関する。本実施形態の誘導方法は、所定の菌床培地でマツタケ類の種菌を培養すること（以下、この工程を「培養工程」ともいう）を含む。なお、本明細書において、マツタケ類とは、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）、バカマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｂａｋａｍａｔｓｕｔａｋｅ）、ニセマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｆｕｌｖｏｃａｓｔａｎｅｕｍ）、及びマツタケモドキ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｒｏｂｕｓｔｕｍ）の４種の菌種を指し、培養工程では、これらの４種の菌種のうち少なくとも１種の種菌を培養する。

【0016】

培養工程で用いられる菌床培地は、培養液と、培養液が浸透した培地基材とを含んでおり、培養液には、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群（以下、「一次代謝産物群」ともいう）から選択される１種以上の一次代謝産物（以下、単に「特定の一次代謝産物」ともいう）が含まれている。なお、本明細書において、一次代謝産物とは、生体を維持するために必要な物質の総称である。

【0017】

前述した一次代謝産物群のうち、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）以外の物質は、糖代謝（糖を分解してエネルギーを生成する反応）に関与する一次代謝産物であり、糖を分解してエネルギーを生成するまでの間に生じる中間生成物及び最終生成物（以下、「糖代謝の生成物」ともいう）と、糖を分解してエネルギーを生成するまでの各種反応を進行（又は促進）させるために必要な酵素及び補酵素（以下、「糖代謝の触媒物質」ともいう）である。

【0018】

前述一次代謝産物群のうち、糖代謝の生成物は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸である。一方、前述した特定の一次代謝産物群のうち、糖代謝の触媒物質（より具体的には、補酵素）は、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）である。

【0019】

培養液に含まれる特定の一次代謝産物は、前述した一次代謝産物群から選択される１種以上の一次代謝産物であればよいが、前述した一次代謝産物群の中でも、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を用いることが好ましい。

【0020】

培養液に含まれる特定の一次代謝産物には、一次代謝産物群から選択した１種の物質を用いてもよく、一次代謝産物群から選択した２種以上の物質を用いてよい。一次代謝産物群から選択した２種以上の物質を用いる場合、その組み合わせは特に限定されるものではないが、例えば、ピルビン酸（糖代謝の中間生成物）と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）（糖代謝の触媒物質）を組み合わせて用いることができる。

【0021】

培養液における特定の一次代謝産物の濃度は、特に限定されるものではないが、好ましい濃度は、以下に示す通りである。

【0022】

マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、培養液におけるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の濃度は、それぞれ、０．０２～５０．０ｍｇ／Ｌとすることが好ましく、０．１～１５．０ｍｇ／Ｌとすることがより好ましく、０．２～５．０ｍｇ／Ｌとすることが特に好ましい。

【0023】

マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、培養液におけるグルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸、リンゴ酸の濃度は、それぞれ、０．００１～５．０ｇ／Ｌとすることが好ましく、０．００５～３．０ｇ／Ｌとすることがより好ましく、０．０１～１．０ｇ／Ｌとすることが特に好ましい。

【0024】

上述した特定の一次代謝産物が含有される培養液は、キノコ（マツタケ類に限らない）の生育に必要な養分を含む液体であり、前述した特定の一次代謝産物の他に、少なくとも、栄養源と水を含んでいる。

【0025】

栄養源は、キノコ（マツタケ類に限らない）の生育に必要な養分であり、例えば、炭素源、窒素源、無機塩、ビタミン類、植物ホルモン類を挙げることができる。

【0026】

炭素源としては、例えば、ぶどう糖（グルコース）、麦芽糖、糖蜜、デキストリン、グリセリン、澱粉などの炭水化物を挙げることができる。

【0027】

窒素源としては、例えば、アスパラギン酸、アルギニン、シトルリン、オルニチン、セリン、グルタミン、アラニン、グリシン、メチオニン、Ｌ－イソロイシン、ＤＬ－イソロイシンなどのアミノ酸を挙げることができる。窒素源は、アミノ酸単体に限定されるものではなく、アミノ酸とアミノ酸以外の成分を含む窒素源であってもよい。このような窒素源としては、例えば、ペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、乾燥酵母、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、ＮＺ－アミン（登録商標）を挙げることができる。また、窒素源は、アミノ酸を含まない窒素源が用いられてもよい。このような窒素源としては、例えば、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどを挙げることができる。

【0028】

無機塩としては、例えば、リン酸二水素カリウム、リン酸ナトリウム、食塩、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガン、塩化鉄(ＩＩＩ)、クエン酸第一鉄、クエン酸第二鉄、硫酸亜鉛、硫酸マンガン(ＩＩ)、硫酸銅（ＩＩ）、硫酸コバルト（ＩＩ）、硫酸ニッケル（ＩＩ）などを挙げることができる。

【0029】

ビタミン類は、ビタミン及びそれと同様の作用を有する物質を指し、例えば、塩酸チアミン（ビタミンＢ１）、ニコチン酸（ビタミンＢ３）、葉酸、ビオチン（ビタミンＢ７）、塩化カルニチン、アデニン硫酸塩などを挙げることができる。

【0030】

植物ホルモン類は、植物ホルモン及びそれと同様の作用を有する物質を指し、例えば、ベンジルアデニン、ジベレリン酸（ＧＡ３）などを挙げることができる。

【0031】

培養液に含有される栄養源は、水に溶解する水溶性の物質であってもよいが、水に溶解しない不溶性の物質であってもよい。不溶性の物質としては、例えば、乾燥酵母などが挙げられる。

【0032】

培養液に含有される上述した各成分（栄養源）の濃度は、キノコ（マツタケ類に限らない）の生育が可能な公知の菌床培地（又は培養液）における各成分（栄養源）の濃度に基づいて設定することができ、特に限定されるものではない。

【0033】

培養液に含有される水としては、例えば、純水、イオン交換水、ろ過水、水道水、井水を挙げることができる。

【0034】

培養液には、特定の一次代謝産物、栄養源、及び水の他に、他の成分が含まれていてもよい。培養液に含まれ得る他の成分としては、例えば、塩酸、クエン酸、水酸化カリウムなどのｐＨ調整剤や、アデニル酸（ＡＭＰ）、グアニル酸（ＧＭＰ）、シチジル酸（ＣＭＰ）、ウリジル酸（ＵＭＰ）などのリボヌクレオチドや、チミジル酸（ＴＭＰ）などのデオキシリボヌクレオチを挙げることができる。

【0035】

培養液のｐＨは、特に限定されるものではないが、例えば、４．０～６．０とすることができる。

【0036】

菌床培地における培養液の量は、浸透する培養液によって培地基材が十分に湿潤し、一方で、培地基材から培養液が漏出しない量とすればよく、用いる培地基材の吸水性や保水性を考慮して決定することができる。例えば、培地基材として押麦とおがくずの混合物（例えば、質量比で２．５：１（押麦：おがくず））を用いる菌床培地では、培養液の含有量は、菌床培地１００質量％に対して、６０～７５質量％とすることができ、マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、６５～７０質量％とすることが好ましい。また、例えば、培地基材として土壌を用いる菌床培地では、培養液の含有量は、菌床培地１００質量％に対して、１０～２０質量％とすることができ、マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、１５～２０質量％であることが好ましい。また、例えば、培地基材としてバーミキュライトを用いる菌床培地では、培養液の含有量は、菌床培地１００質量％に対して、７５～８５質量％とすることができ、マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、８０～８５質量％とすることが好ましい。

【0037】

本実施形態の誘導方法において、特定の一次代謝産物を含有する培養液は、栄養源と水を含む公知の培養液（特定の一次代謝産物を含まない培養液）に対し、特定の一次代謝産物を含有させたものであってもよい。栄養源と水を含む公知の培養液（特定の一次代謝産物を含まない培養液）としては、非特許文献１に記載される培養液（浜田培地）や、非特許文献２に記載される培養液（川合・小川培地）を挙げることができる。

【0038】

培養液が浸透する培地基材は、キノコ（マツタケ類に限らない）の菌糸を伸長させるために必要な水分を保持するとともに、菌糸を伸長させるために必要な空間を提供するための固形分である。培地基材は、培養液が浸透可能なものであればよく、例えば、おがくず、押麦、チップダスト、ヤマゴケ、ミズゴケ、コーンコブ、綿実殻、バガス、アルファルファ、ビートパルプ、モミガラ、チモシー、オカラ、マメカワ、シリカゲル、高吸水ポリマー、自然環境から採取した土壌、人為的に作成した人工土壌（例えば、バーミキュライト）を用いることができる。なお、これらの成分（培地基材）は、２種以上を混合して用いてもよく、また、粒度を調整して用いてもよい（例えば、粒度を２～５ｍｍ）。

【0039】

菌床培地の製造方法は、特定の一次代謝産物を含む培養液が培地基材に浸透するようなものであればよく、特に限定されるものではない。一例としては、特定の一次代謝産物と栄養源と水を混合して予め培養液を作成しておき、この培養液を培地基材に添加して浸透させることで、菌床培地を製造することができる。

【0040】

その他にも、特定の一次代謝産物を含有しない培養液と、特定の一次代謝産物を含有する培養液を、培地基材に順次添加して浸透させていくことで、菌床培地を製造してもよい。なお、この方法で製造される菌床培地において、培養液中の特定の一次代謝産物の濃度は、菌床培地に含まれる培養液の総体積（つまり、特定の一次代謝産物を含有しない培養液と特定の一次代謝産物を含有する培養液の合計体積）に対する、その培養液に含まれる一次代謝産物の質量の割合として求められる。

【0041】

菌床培地の製造過程には、培地基材や培養液に含まれる微生物（菌を含む）を死滅（又は除去）させる滅菌工程が含まれていることが好ましい。滅菌工程で用いられる滅菌の手段は、特に限定されるものではないが、加熱により微生物を死滅させる加熱滅菌や、ろ過により微生物を除去するろ過滅菌を用いることができる。加熱滅菌における加熱条件は、常圧による加熱滅菌であれば、９８～１００℃で４～１２時間の加熱条件とすることができ、高圧による加熱滅菌であれば、１１０～１２５℃で３０～１８０分間の加熱条件とすることができる。ろ過滅菌には、例えば、アドバンテック東洋（株）社製のメンブレンフィルターＡ０２０Ａ０２５Ａを用いることができる。

【0042】

ここで、培地基材や培養液に含まれる微生物を死滅（又は除去）させる滅菌処理は、培地基材に培養液を浸透させて菌床培地を製造した後に、製造した菌床培地に対して行われてもよいが、特定一次代謝産物の中には、加熱により変性（失活）してしまう物質もある。このため、菌床培地の製造過程に滅菌工程を含める場合には、培地基材（又は、一次代謝産物が含有しない培養液を浸透させた培地基材）に予め加熱滅菌処理をしておき、この培地基材に対して、ろ過滅菌した特定の一次代謝産物を含む培養液を添加して浸透させることが好ましい。

【0043】

菌床培地で培養するマツタケ類の種菌には、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）、バカマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｂａｋａｍａｔｓｕｔａｋｅ）、ニセマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｆｕｌｖｏｃａｓｔａｎｅｕｍ）、及びマツタケモドキ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｒｏｂｕｓｔｕｍ）からなる群から選択される少なくとも１種の種菌を用いればよいが、子実体原基が誘導されやすくなる観点からは、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌を用いることが好ましい。

【0044】

菌床培地で培養するマツタケ類の種菌には、公知のマツタケ類の菌株を用いることができ、菌株について限定されるものではない。公知のマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の菌株としては、例えば、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６３、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６４、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６６、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６７、及びＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６８の受託番号を付与された菌株を挙げることができる。これらのマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の菌株は、ブダペスト条約の規定に基づく国際寄託機関である独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（〒２９２－０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２２年８月１６日付で国際寄託されている。また、これらの菌株の他に、公知のマツタケの菌株としては、ＮＢＲＣ３３１３６（Ａｃｃｅｐｔｅｄ Ｄａｔｅ：２０００年６月２日）や、ＮＢＲＣ１０８７１３（Ａｃｃｅｐｔｅｄ Ｄａｔｅ：２０１１年７月２９日）を挙げることができる。これらのマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の菌株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）（〒２９２－０８１８ 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に保存されており、所定の手続きを経ることによってその分譲を受けることができる。なお、菌床培地で培養するマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌は、前述した菌株に限定されるものではなく、後述する実施例で使用した菌株を用いることもできる。後述する実施例で使用したマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の菌株のうち、「ＦＦＰＲＩ」から始まる番号が付された菌株は、国立研究開発法人森林研究・整備機構（日本国茨城県つくば市松の里１）に保存されており、所定の手続きを経ることによってその分譲を受けることができる。

【0045】

なお、マツタケ類の種菌として用いるマツタケ類は、菌根菌（共生菌）の増殖又は維持に使用する培地、例えばＯｈｔａ培地（Ｏｈｔａ,Ａ.（１９９０） Ｔｒａｎｓ.Ｍｙｃｏｌ.Ｓｏｃ.Ｊａｐａｎ ３１： ３２３－３３４）、ＭＭＮ培地（Ｍａｒｘ,Ｄ.Ｈ. （１９６９） Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５９： １５３－１６３）、浜田培地（浜田 （１９６４） マツタケ, ９７－１００）などを用いて増殖させることができ、前述した公知の培地で増殖させた（又は維持させた）マツタケ類を本実施形態に係る菌床培地で培養することができる。

【0046】

菌床培地に接種するマツタケ類の種菌の量（以下、単に「接種量」ともいう）は、特に限定されるものではないが、菌床培地上面の表面積１平方ｃｍあたり、例えば、乾燥重量で０．０４～３．６ｍｇのとすることができ、マツタケ類の子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、乾燥重量で０．４～０．９ｍｇとすることが好ましい。

【0047】

培養工程におけるマツタケ類の種菌の培養方法は、キノコ（マツタケ類に限らない）の生育が可能なものであればよく、特に限定されるものではない。例えば、振とう培養法や静置培養法などを用いることができる。

【0048】

培養工程におけるマツタケ類の種菌の培養条件も、キノコ（マツタケ類に限らない）の生育が可能なものであればよく、特に限定されるものではない。例えば、培養温度は、１０～２８℃とすることができ、マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、１５～２３℃とすることが好ましい。培養湿度は、例えば、５０～９５％とすることができ、マツタケ類子実体原基をより誘導しやすくする観点からは、７０～９０％とすることが好ましい。培養期間は、例えば、使用する菌株によっても異なるが、例えば、３０～２００日間とすることができる。日照条件は、マツタケ類子実体原基の誘導に影響を及ぼすものではないが、例えば、８～１６時間／１日とすることができ、暗黒条件とすることもできる。培養容器内外の気圧および気相の組成は、例えば、通常の空気とすることができる。

【0049】

以上説明した培養工程を含む本実施形態の誘導方法によれば、特定の一次代謝産物を含んでいない培養液を用いた菌床培地でマツタケ類の種菌を培養する場合と比較して、マツタケ類子実体原基が誘導されやすくなる。なお、本明細書において、マツタケ類子実体原基とは、菌床培地の表面に形成される毛玉状の構造物（菌糸の集合体）であり、マツタケ類子実体原基が誘導されると、菌床培地から突出する毛玉状の突起を目視で確認することができる。

【0050】

また、上述した培養工程を含む本実施形態の誘導方法によれば、マツタケ類の子実体原基が誘導されるため、本発明の一実施形態としては、培養工程を含むマツタケ類の子実体原基の製造方法を提供することもできる。

【実施例】

【0051】

次に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明する。ただし、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

【0052】

＜評価１：特定の一次代謝産物の有効性＞
下記評価１－１～評価１－２を行い、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の子実体原基の誘導性能について、特定の一次代謝産物の有効性を評価した。

【0053】

［評価１－１：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６３を用いた特定の一次代謝産物の有効性］
下記表１に示す各成分（栄養源、ｐＨ調整剤）を水に混合して、ｐＨ５．１の培養液を得た。培養液１０００ｍｌ当たりの各成分の含量は、下記表１に示す通りであった。

【0054】

【表1】

【0055】

得られた培養液を、２３．５ｍｌずつ複数に分けた。２３．５ｍｌの培養液のうちの８ｍｌの培養液に対し、下記表２に示す一次代謝産物をそれぞれ混合し、一次代謝産物を含む培養液（以下、「培養液_metabo」という）を得た。得られた培養液_metaboに含まれる一次代謝産物の濃度は、後述する表２に示す通りであった。一方、残りの培養液（以下、「培養液_non-metabo」という）１５．５ｍｌには、一次代謝産物を含有させなかった。

【0056】

培地基材として押麦とおがくずを用意した。なお、これらの培地基材には、一次代謝産物は含まれていなかった。用意した押麦７．５ｇに、１３．５ｍｌの培養液_non-metaboをそれぞれ加えて４～１６時間静置し、押麦を膨潤させた。用意したおがくず３ｇを、膨潤した押麦に混ぜ、２ｍｌの培養液_non-metaboをさらに加えて混合した。この操作により、押麦（７．５ｇ）とおがくず（３ｇ）からなる培地基材（以下、単に「押麦培地基材」という）に、培養液_non-metaboが合計で１５．５ｍｌ浸透した。

【0057】

培養液_non-metaboが浸透した押麦培地基材を、内径３０ｍｍの試験管に充填して信越ポリマー（株）社製シンエツシリコセンＴ－３２で栓をし、１２１℃で６０分間滅菌してから冷却した。アドバンテック東洋（株）社製のメンブレンフィルターA020A025Aを用いて濾過滅菌した、８ｍｌの培養液_metaboを、冷却した押麦培地基材に加えて浸透させ、菌床培地（以下、この菌床培地を「押麦培地」という）を得た。

【0058】

なお、得られた押麦培地には、１５．５ｍｌの培養液_non-metaboと、８ｍｌの培養液_metaboが含まれており、合計で２３．５ｍｌの培養液（以下、「培養液_total」という）が含まれていた。押麦培地に含まれるこの培養液_totalにおいて、一次代謝産物の濃度は、後述する表２に示す通りであった。

【0059】

マツタケの種菌として、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６３を用意した。用意したマツタケの種菌を、一次代謝産物を含む押麦培地に接種して培養した。具体的には、試験管に充填されている上記押麦培地に対して、液体培養したマツタケの菌糸体５．４ｍｇ（乾燥重量）を接種して、試験管を信越ポリマー（株）社製シンエツシリコセンＴ－３２で栓をした。下記表２に示す試験番号（Ｎｏ．）１つにつき、５本の試験管（以下、それぞれ「試験管１～５」という）内の押麦培地にマツタケの種菌が接種できるよう、この操作を繰り返し行った。その後、下記培養条件で９０日間培養した。また、一次代謝産物を含有させないこと以外は上述の押麦培地（一次代謝産物を含む押麦培地）と同様の条件で製造した押麦培地を、コントロール培地として用いて、前述した培養方法と同様の方法でマツタケの種菌を接種して培養した。
＜培養条件＞
温度：２２℃で３０日間、のち１７℃で６０日間
雰囲気：室内と同じ（空気）
照明：なし
培養法：静置培養

【0060】

マツタケの種菌を接種して９０日間培養した後、押麦培地の表面に形成される直径が１ｍｍ以上の毛玉状の突起（子実体原基）の数をカウントした。下記表２に示す試験番号（Ｎｏ．）毎に、試験管１本あたりの子実体原基の数（以下、「平均子実体原基数」という）を求めた。結果を表２及び図１に示す。

【0061】

【表2】

【0062】

図１及び表２に示すように、押麦培地に含有される培養液に一次代謝産物群から選択される特定の一次代謝産物が含まれている場合には、一次代謝産物が含まれない場合と比較して、子実体原基の形成数が上昇した。この結果から、押麦培地に含まれる培養液に、特定の一次代謝産物が含有されることで、子実体原基が誘導されることが明らかとなった。

【0063】

なお、図１～２において、ＰｉＡｃはピルビン酸を表し、ＯｘＡｃはオキサロ酢酸を表し、ＳｃＡｃはコハク酸を表し、ＭａＡｃはリンゴ酸を表す。

【0064】

［評価１－２：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６２を用いた特定の一次代謝産物の有効性］
本評価では、評価１－１で用いた特定の一次代謝産物のうちの一部の一次代謝産物を用いた。また、押麦培地に摂取するマツタケの種菌としてＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６２を用いた。これら以外は評価１－１と同様の条件で、上記（１）に示す試験管１本あたりの平均子実体原基数を求めた。結果を表３及び図２に示す。

【0065】

【表3】

【0066】

図２及び表３に示すように、押麦培地に含有される培養液に、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸又はリンゴ酸が含まれる場合には、これら特定の一次代謝産物が含まれない場合と比較して、子実体原基の形成数が増加した。この結果から、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６２を用いた場合であっても、押麦培地に含まれる培養液に特定の一次代謝産物が含有されることで、子実体原基が誘導されることが明らかとなった。

【0067】

＜評価２：菌床培地の組成による影響＞
下記評価２－１～評価２－３を行い、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の子実体原基の誘導性能に対する、菌床培地の組成が及ぼす影響を評価した。

【0068】

［評価２－１：土壌培地における誘導性能］
下記表４に示す各成分（栄養源、ｐＨ調整剤）を水に混合して、ｐＨ５．１の培養液を得た。培養液１０００ｍｌ当たりの各成分の濃度は、下記表４に示す通りであった。なお、この培養液は、非特許文献１に記載される培養液（浜田培地）に相当するものである。

【0069】

【表4】

【0070】

得られた培養液を、１２．５ｍｌずつ複数に分けた。１２．５ｍｌの培養液のうちの１．２５ｍｌの培養液に対し、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とピルビン酸をそれぞれ混合して、これらの一次代謝産物を含む培養液（以下、「培養液_metabo」）を得た。得られた培養液_metaboにおいて、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度は２５ｍｇ／Ｌであり、ピルビン酸の濃度は２．５ｇ／Ｌであった。一方、残りの１１．２５ｍｌの培養液（以下、「培養液_non-metabo」という）には、一次代謝産物を含有させなかった。

【0071】

培地基材として花崗岩を母材とする土壌（日本国滋賀県で採取）を用意した。なお、この培地基材には、一次代謝産物は含まれていなかった。用意した土壌６２ｇ（５５ｍＬ）を内径３０ｍｍの試験管に充填して、１２０℃で５０分間滅菌し、その後冷却して土壌からなる培地基材（以下、単に「土壌培地基材」という）とした。別途、１１．２５ｍｌの培養液_non-metaboを１２０℃１５分間滅菌し、その後冷却した。これを土壌培地基材に加えて、培養液_non-metaboを浸透させた。培養液_non-metaboが浸透した土壌培地基材に、アドバンテック東洋（株）社製のメンブレンフィルターＡ０２０Ａ０２５Ａを用いて濾過滅菌した、１．２５ｍｌの培養液_metaboを加えて浸透させ、菌床培地（以下、この菌床培地を「土壌培地」という）を得た。

【0072】

なお、得られた土壌培地には、１１．２５ｍｌの培養液_non-metaboと、１．２５ｍｌの培養液_metaboが含まれており、合計で１２．５ｍｌの培養液（以下、「培養液_total」という）が含まれていた。土壌培地に含まれるこの培養液_totalにおいて、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度は２．５ｍｇ／Ｌであり、ピルビン酸の濃度は０．２５ｇ／Ｌであった。

【0073】

マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６６、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６７、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６８を用意した。また、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＦＦＰＲＩ４６０５５３、ＦＦＰＲＩ４６０５５５，ＦＦＰＲＩ４６０５５６，ＦＦＰＲＩ４６０５５８，ＦＦＰＲＩ４６０５６４、ＦＦＰＲＩ４６０５６５、ＦＦＰＲＩ４６０５６６、ＦＦＰＲＩ４６０５６７，ＦＦＰＲＩ４６０５６８（これらは日本国長野県上田市で採取した異なる子実体から分離，いずれも国立研究開発法人 森林研究・整備機構保存）を用意した。

【0074】

用意したマツタケの種菌を、それぞれ一次代謝産物を含む土壌培地に接種して培養した。具体的には、液体培養したマツタケの種菌４．５ｍｇ（乾燥重量）を、それぞれ、一次代謝産物を含む上述の土壌培地に接種し、下記培養条件で１５０日間培養した。また、一次代謝産物を含有させないこと以外は上述の土壌培地（一次代謝産物を含む土壌培地）と同様の条件で製造した土壌培地を、コントロール培地として用いて、前述した培養方法と同様の方法でマツタケの種菌を培養した。
＜培養条件＞
温度：２２℃で３０日間、その後１７℃で１２０日間
雰囲気：室内と同じ（空気）
日照時間：なし
培養法：静置培養

【0075】

マツタケの種菌を１５０日間培養した後、土壌培地の表面に形成される毛玉状の突起（子実体原基）の有無を目視で確認するとともにその直径を測定した。直径が１ｍｍ以上の毛玉状の突起が形成されている場合に、子実体原基が形成されていると判断して、子実体原基が確認できる土壌培地の数をカウントした。カウント結果を、下記表５に示す。また、図３（ａ）に、子実体原基が形成された土壌培地の写真を示す。なお、下記表５に示す分数について、分子は子実体原基が確認できた試験管（土壌培地）の数を表し、分母はマツタケの種菌を摂取した試験管（土壌培地）の数を表す。

【0076】

【表5】

【0077】

表５に示すように、土壌培地に含有された培養液に、一次代謝産物として還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とピルビン酸が含まれる場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（土壌培地）のうちの少なくとも一つで子実体原基が誘導された。一方で、土壌培地に含有された培養液に一次代謝産物が含まれない場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（土壌培地）の全てにおいて、子実体原基は誘導されなかった。

【0078】

［評価２－２：バーミキュライト培地における誘導性能］
下記表６に示す各成分を水に混合して、ｐＨ５．０～５．２の第１液を得た。第１液１０００ｍｌ当たりの各成分の濃度は、下記表６に示す通りであった。また、下記表７に示す各成分を水に混合して、ｐＨ５．０～５．２の第２液を得た。第２液１０００ｍｌ当たりの各成分の濃度は、下記表７に示す通りであった。なお、これらの培養液は、非特許文献２に記載される培養液（川合・小川培地）に相当する。

【0079】

【表6】

【0080】

【表7】

【0081】

得られた第２液に対し、さらに還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とピルビン酸をそれぞれ混合し、一次代謝産物を含む培養液（以下、「培養液_metabo」ともいう）を得た。得られた培養液_metaboにおいて、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度は２５ｍｇ／Ｌであり、ピルビン酸の濃度は２．５ｇ／Ｌであった。

【0082】

培地基材としてバーミキュライトを用意した。なお、この培地基材には、一次代謝産物は含まれていなかった。用意したバーミキュライト２７ｇ（２００ｍＬ）を５００ｍｌフラスコに充填し、バーミキュライトからなる培地基材（以下、単に「バーミ培地基材」という）とした。これに１２０ｍｌの第１液をそれぞれ加えて密封し、１２０℃で５０分間滅菌して、その後冷却した。アドバンテック東洋（株）社製のメンブレンフィルターＡ０２０Ａ０２５Ａを用いて濾過滅菌した、１２ｍｌの培養液_metaboを、冷却したバーミ培地基材に加えて浸透させ、菌床培地（以下、この菌床培地を「バーミ培地」という）を得た。

【0083】

なお、得られたバーミ培地には、１２０ｍｌの第１液と、１２ｍｌの培養液_metaboが含まれており、合計で１３２ｍｌの培養液（以下、「培養液_total」という）が含まれていた。バーミ培地に含まれるこの培養液_totalにおいて、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度は２．３ｍｇ／Ｌであり、ピルビン酸の濃度は０．２３ｇ／Ｌであった。

【0084】

マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６６、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６７、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６８を用意した。また、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＦＦＰＲＩ４６０５５２、ＦＦＰＲＩ４６０５５８，ＦＦＰＲＩ４６０５５９，ＦＦＰＲＩ４６０５６０，ＦＦＰＲＩ４６０５６１，ＦＦＰＲＩ４６０５６３，ＦＦＰＲＩ４６０５６４、ＦＦＰＲＩ４６０５６７（これらは日本国長野県上田市で採取した異なる子実体から分離，いずれも国立研究開発法人 森林研究・整備機構保存）を用意した。

【0085】

用意したマツタケの種菌を、それぞれ一次代謝産物を含む上述のバーミ培地に接種して培養した。具体的には、液体培養したマツタケの種菌４３．２ｍｇ（乾燥重量）を、それぞれ、一次代謝産物を含む上述のバーミ培地に接種し、下記培養条件で１５０日間培養した。
＜培養条件＞
温度：１７℃
雰囲気：室内と同じ（空気）
照明：なし
培養法：静置培養

【0086】

マツタケの種菌を１５０日間培養した後、土壌培地の表面に形成される毛玉状の突起（子実体原基）の有無を目視で確認するとともにその直径を測定した。直径が１ｍｍ以上の毛玉状の突起が形成されている場合に、マツタケの子実体原基が形成されていると判断して、子実体原基が確認できる試験管（土壌培地）の数をカウントした。カウント結果を、下記表８に示す。また、図３（ｂ）に、マツタケの子実体原基が形成されたバーミ培地の写真を示す。なお、下記表８に示す分数について、分子は子実体原基が確認できた試験管（バーミ培地）の数を表し、分母はマツタケの種菌を摂取した試験管（バーミ培地）の数を表す。

【0087】

【表8】

【0088】

表８に示すように、バーミ培地に含有される培養液に、一次代謝産物として、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とピルビン酸が含まれる場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（バーミ培地）のうちの少なくとも一つで子実体原基が誘導された。一方で、バーミ培地に含有される培養液に一次代謝産物が含まれない場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（土壌培地）の全てにおいて、子実体原基は誘導されなかった。

【0089】

［評価２－３：押麦培地における誘導性能］
使用した各原料を２倍量（つまり、押麦１５ｇ、オガクズ６ｇ、培養液４７ｍｌにして３００ｍｌフラスコ内で押麦培地を作成）にしたこと、培養液に含有する一次代謝産物として還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）及びピルビン酸を用いたこと以外は、評価１－１と同様の方法で押麦培地を作成した。作成した押麦培地に含まれる培養液_total（４７ｍｌ）において、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の濃度は１．７ｍｇ／Ｌであり、ピルビン酸の濃度は０．１７ｇ／Ｌであった。

【0090】

マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６３、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６４、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６６、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６７、ＮＩＴＥ ＢＰ－０３６６８を用意した。また、マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ）の種菌として、ＦＦＰＲＩ４６０５６１、ＦＦＰＲＩ４６０５６４、ＦＦＰＲＩ４６０５６５、ＦＦＰＲＩ４６０５６６、ＦＦＰＲＩ４６０５６７（これらは日本国長野県上田市で採取した異なる子実体から分離，いずれも国立研究開発法人 森林研究・整備機構保存）を用意した。

【0091】

用意したマツタケの種菌を、それぞれ一次代謝産物を含む上述の押麦培地に接種して培養した。具体的には、液体培養したマツタケの種菌３６ｍｇ（乾燥重量）を、それぞれ、一次代謝産物を含む上述の押麦培地に接種し、下記培養条件で１５０日間培養した。また、一次代謝産物を含有させないこと以外は上述の押麦培地（一次代謝産物を含む押麦培地）と同様の条件で製造した押麦培地を、コントロール培地として用いて、前述した培養方法と同様の方法でマツタケの種菌を培養した。
＜培養条件＞
温度：２２℃で３０日間、その後１７℃で１２０日間
雰囲気：室内と同じ（空気）
日照時間：なし
培養法：静置培養

【0092】

マツタケの種菌を１２０日間培養した後、押麦培地の表面に形成される毛玉状の突起（子実体原基）の有無を目視で確認するとともにその直径を測定した。直径が１ｍｍ以上の毛玉状の突起が形成されている場合に、マツタケの子実体原基が形成されていると判断して、子実体原基が確認できる試験管（押麦培地）の数をカウントした。カウント結果を、下記表９に示す。また、図３（ｃ）に、マツタケの子実体原基が形成された押麦培地の写真を示す。なお、下記表９に示す分数について、分子は子実体原基が確認できた試験管（押麦培地）の数を表し、分母はマツタケの種菌を摂取した試験管（押麦培地）の数を表す。

【0093】

【表9】

【0094】

表９に示すように、押麦培地に含有される培養液に、一次代謝産物として、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）とピルビン酸が含まれる場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（押麦培地）のうちの少なくとも一つで子実体原基が誘導された。一方で、押麦培地に含有される培養液に一次代謝産物が含まれない場合には、マツタケの種菌を摂取した試験管（押麦培地）の全てにおいて、子実体原基は誘導されなかった。

【0095】

以上説明した評価２－１～２－３の結果から、菌床培地の組成（つまり、培地基材の種類や培養液の組成）が変わっても、培養液に特定の一次代謝産物が含まれていれば、マツタケの子実体原基が誘導されることが明らかとなった。また、評価２－１～２－３に示すように、培養液に一次代謝産物が含まれていれば、様々な菌株のマツタケの種菌について、子実体原基が誘導されることが明らかとなった。

【要約】

【課題】マツタケ類の子実体原基を誘導する新規な技術を提供することを目的とする。
【解決手段】培養液と前記培養液が浸透した培地基材とを含む菌床培地でマツタケ類の種菌を培養することを含み、前記培養液は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、サイクリックＡＭＰ（ｃ－ＡＭＰ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、グルコース６リン酸（Ｇ６Ｐ）、ピルビン酸、オキサロ酢酸、コハク酸及びリンゴ酸からなる群から選択される１種以上の一次代謝産物を含むことを特徴とする、マツタケ類の子実体原基の誘導方法。
【選択図】図３

【図1】

【図2】

【図3】