特許 7498559 送液装置及び送液方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-06-04

(45)【発行日】2024-06-12

(54)【発明の名称】送液装置及び送液方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 30/32 20060101AFI20240605BHJP

   F04B 49/06 20060101ALI20240605BHJP

【ＦＩ】

G01N30/32 C

F04B49/06 321

【請求項の数】 53

(21)【出願番号】P 2019233153

(22)【出願日】2019-12-24

(65)【公開番号】P2021101179

(43)【公開日】2021-07-08

【審査請求日】2022-12-06

(73)【特許権者】

【識別番号】390030188

【氏名又は名称】ジーエルサイエンス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100063842

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 三雄

(74)【代理人】

【識別番号】100118119

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 大典

(72)【発明者】

【氏名】鈴木 幸治

【審査官】小澤 理

(56)【参考文献】

【文献】特開２０２０－１８６９７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１１－０１２５４１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特許第２９６０４４１（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】特開平０３－０９４１５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１５－１６６７２４（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１４／０１９３２７５（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３０／３２

Ｆ０４Ｂ ４９／０６

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させると共に、流量が変化している時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項2】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時には、常に流量を変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項3】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させると共に、流量が変化している時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項4】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時には、常に流量を減少させることを特徴とする送液装置。

【請求項5】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を一定とし、前記処理終了時のうち前記少なくとも一部の時間とは異なる他の少なくとも一部の時間においては、流量を変化させると共に、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項6】

前記処理終了時における減少率が変化して流量が減少している時には、減少率が連続的に変化することを特徴とする請求項３又は５に記載の送液装置。

【請求項7】

前記減少率は、前記処理終了時の後半に比べて前記処理終了時の前半に小さいことを特徴とする請求項３、５又は６に記載の送液装置。

【請求項8】

前記減少率は、前記処理終了時の前半に比べて前記処理終了時の後半に小さいことを特徴とする請求項３、５又は６に記載の送液装置。

【請求項9】

前記処理終了時の前半において、前記処理終了時の開始時からの時間が短い程、前記減少率が小さいことを特徴とする請求項３、５、６、７又は８に記載の送液装置。

【請求項10】

前記処理終了時の後半において、処理終了後までの時間が短い程、前記減少率が小さいことを特徴とする請求項３、５、６、７、８又は９に記載の送液装置。

【請求項11】

前記処理終了時の時間が１秒以上であることを特徴とする請求項２から１０のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項12】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時の時間が１秒以上であることを特徴とする送液装置。

【請求項13】

前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率が一定であることを特徴とする請求項１２に記載の送液装置。

【請求項14】

前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする請求項２から１３のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項15】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする送液装置。

【請求項16】

前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率が一定であることを特徴とする請求項１５に記載の送液装置。

【請求項17】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させると共に、少なくとも一部の時間においては、流量の増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項18】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理準備前の流量から流量を増加させて処理時の流量にする処理準備時に、所定の時間をかけて、流量を増加させると共に、前記処理準備時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液装置。

【請求項19】

前記処理準備時の前半において、前記処理準備時の開始時からの時間が短い程、前記増加率が小さいことを特徴とする請求項１８に記載の送液装置。

【請求項20】

前記処理準備時の後半において、前記処理時までの時間が短い程、前記増加率が小さいことを特徴とする請求項１８又は１９に記載の送液装置。

【請求項21】

前記処理準備時の時間が１秒以上であることを特徴とする請求項１８から２０のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項22】

前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする請求項１８から２１のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項23】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液を行う送液装置であって、請求項１から１６のうち何れか１項に記載の送液装置であって、且つ、請求項１７から２２のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項24】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液を行う送液装置であって、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液装置であって、且つ、請求項１７から２２のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項25】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液を行う送液装置であって、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液装置であって、且つ、請求項１７から２２のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項26】

前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率が一定であることを特徴とする請求項２５に記載の送液装置。

【請求項27】

流量の増加又は／及び減少を、予め設定された流量の変化又は／及び前記送液ポンプと前記送液対象物間に設置された圧力センサにより測定された圧力の変化に基づいて制御することを特徴とする請求項１から２６のうち何れか１項に記載の送液装置。

【請求項28】

請求項１から２７のうち何れか１項に記載の送液装置を備えることを特徴とする液体クロマトグラフ。

【請求項29】

請求項１から２７のうち何れか１項に記載の送液装置を備えることを特徴とする超臨界流体クロマトグラフ。

【請求項30】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させると共に、流量が変化している時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項31】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時には、常に流量を変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項32】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させると共に、流量が変化している時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項33】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時には、常に流量を減少させることを特徴とする送液方法。

【請求項34】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の減少率を一定とし、前記処理終了時のうち前記少なくとも一部の時間とは異なる他の少なくとも一部の時間においては、流量を変化させると共に、流量の減少率を変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項35】

前記処理終了時における減少率が変化して流量が減少している時には、減少率を連続的に変化させることを特徴とする請求項３２又は３４に記載の送液方法。

【請求項36】

前記減少率を、前記処理終了時の後半に比べて前記処理終了時の前半に小さくすることを特徴とする請求項３２、３４又は３５に記載の送液方法。

【請求項37】

前記減少率を、前記処理終了時の前半に比べて前記処理終了時の後半に小さくすることを特徴とする請求項３２、３４又は３５に記載の送液方法。

【請求項38】

前記処理終了時の前半において、前記処理終了時の開始時からの時間が短い程、前記減少率を小さくすることを特徴とする請求項３２、３４、３５、３６又は３７に記載の送液方法。

【請求項39】

前記処理終了時の後半において、処理終了後までの時間が短い程、前記減少率を小さくすることを特徴とする請求項３２、３４、３５、３６、３７又は３８に記載の送液方法。

【請求項40】

前記処理終了時の時間が１秒以上であることを特徴とする請求項３１から３９のうち何れか１項に記載の送液方法。

【請求項41】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理終了時の時間が１秒以上であることを特徴とする送液方法。

【請求項42】

前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率を一定とすることを特徴とする請求項４１に記載の送液方法。

【請求項43】

前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする請求項３１から４２のうち何れか１項に記載の送液方法。

【請求項44】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする送液方法。

【請求項45】

前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率を一定とすることを特徴とする請求項４４に記載の送液方法。

【請求項46】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させると共に、少なくとも一部の時間においては、流量の増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項47】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理準備前の流量から流量を増加させて処理時の流量にする処理準備時に、所定の時間をかけて、流量を増加させると共に、前記処理準備時のうち少なくとも一部の時間においては、流量の増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液方法。

【請求項48】

前記処理準備時の前半において、前記処理準備時の開始時からの時間が短い程、前記増加率を小さくすることを特徴とする請求項４７に記載の送液方法。

【請求項49】

前記処理準備時の後半において、前記処理時までの時間が短い程、前記増加率を小さくすることを特徴とする請求項４７又は４８に記載の送液方法。

【請求項50】

前記処理準備時の時間が１秒以上であることを特徴とする請求項４７から４９のうち何れか１項に記載の送液方法。

【請求項51】

前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎであることを特徴とする請求項４７から５０のうち何れか１項に記載の送液方法。

【請求項52】

分離カラム、トラップカラム、ガードカラム、反応カラムから選択される１以上の送液対象物への送液ポンプによる送液を行う送液方法であって、請求項３０から４５のうち何れか１項に記載の送液方法であって、且つ、請求項４６から５１のうち何れか１項に記載の送液方法。

【請求項53】

流量の増加又は／及び減少を、目的とする時間毎の流量又は／及び目的とする時間毎の圧力に基づいて制御することを特徴とする請求項３０から５２のうち何れか１項に記載の送液方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、分離カラム等の送液対象物への送液を行うための、送液ポンプを備えた送液装置及び送液対象物への送液を行う送液方法に関する。

【背景技術】

【0002】

試料の分析や分取その他の目的により、分析等を行うための装置や機器を送液対象物として、送液ポンプにより液体を送液することが行われている。一具体例としては、液体クロマトグラフ（液体クロマトグラフィー装置）を用いた分析や分取等において、分析や分取等の目的を達成するための処理である試料中の目的化合物の分離を行うために、内部空間に粒状の充填剤が詰められて構成された充填層を備えた分離カラムを送液対象物として使用することが行われている。又、試料中の目的化合物の分離に対応した移動相（溶離液）を送液対象物としての分離カラムへ送液するために、送液ポンプを備えた送液装置が用いられている。

【0003】

しかし、送液ポンプによる送液開始時に、送液ポンプのモータが停止した状態から、即ち送液をしていない状態から、直ちに分析や分取等の目的に対応した流量で移動相を送液するための駆動状態にすることにより、分離カラム内部の圧力が急激に増加し、圧力ショックが生じる。そして、この圧力ショックを分離カラム内の充填層が受けて、充填剤が圧縮されることで、分離カラム内部の充填層に新たな隙間が作られてしまい、分離カラムの分離性能を落としてしまうことがあった。

【0004】

上記の圧力ショックを防ぐため、液体クロマトグラフ用送液ポンプにおいて、送液ポンプの送液開始時には、駆動用モータを直ちに設定流量に対応する回転数にせず、勾配を持って回転数を上昇させ、送液ポンプ始動時に急激な圧力ショックが発生するのを低減する技術が提案されている（特許文献１）。

【0005】

又、液体クロマトグラフィーにおいて、分離カラムに至る流路に流路切り替えバルブを接続し、複数の種類の分離カラムを切り替えつつ最適な分析条件を探索する場合に、分離カラムの切り替え時に分離カラムに加わるダメージを低減する技術として、分離カラムの切り替え時に送液ポンプの流量を低くし、その後低い流量から目的流量に向かって階段状に増加させる液体クロマトグラフの制御方法が提案されている（特許文献２）。

【0006】

又、送液ポンプが送液する送液対象物としては、液体クロマトグラフィーにおける充填剤が充填された分離カラムの他、送液ポンプにとって背圧になり得る装置である、充填層がモノリス体で形成された分離カラム、抵抗管、フィルター、ノズル、注入装置、反応装置、混合装置等が含まれている。

【0007】

又、送液ポンプが送液する送液対象物としては、送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用される、送液ポンプにとって背圧抵抗になり得る装置が含まれる。液体クロマトグラフィー及び超臨界流体クロマトグラフィーにおいては充填剤が充填された分離カラムの他、充填層がモノリス体で形成された分離カラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたトラップカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたガードカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された反応カラム、フィルター、流路切り替え用や試料注入用等のバルブ、検出器セル、抵抗管、可変抵抗、流路配管、ダンパー、質量分析計用のスプレイヤー等が送液ポンプにとって背圧抵抗になり得る装置、即ち送液対象物として挙げられる。

【0008】

例えば送液ポンプの下流の流路上に試料注入バルブ、充填剤が充填されたガードカラム、充填剤が充填された分離カラム、検出器セルの順番で装置が接続された場合、これらの装置は全て送液ポンプにとっての背圧抵抗であるが、これらの装置の中では相対的に細く長い流路を持ち、抵抗の高い分離カラム、その上流にあるガードカラム及び試料注入バルブは、送液ポンプの送液開始時には、検出器セルよりも高い圧力ショックを受ける。又、分離カラムにおいては、分離カラム入口側の充填層の方が、分離カラム出口側の充填層よりも高い圧力ショックを受ける。

【0009】

又、液体クロマトグラフィー及び超臨界流体クロマトグラフィー以外でも、様々な目的で送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用され、送液ポンプにとっての背圧抵抗になり得る装置としての送液対象物としては、フィルター、流路切り替え用や試料注入用等のバルブ、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された反応カラム、検出器セル、抵抗管、可変抵抗、流路配管、ダンパー、ノズル、注入装置、反応装置、混合装置等が含まれ、送液ポンプの送液開始時には、圧力ショックを受けている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【文献】特開平３－９４１５７号公報

【文献】特許第６３３１４８４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

このように、特許文献１及び特許文献２に開示された技術は、送液対象物としての分離カラムへの送液開始時の送液方法であり、分離カラムへの送液開始によって分離カラムにかかる圧力ショックを低減するための技術であった。

【0012】

又、特許文献１及び特許文献２を含め、液体クロマトグラフを用いた分析や分取における従来の運転方法では、送液ポンプの送液を開始し、分析や分取等の目的に対応した移動相（溶離液）の処理時の流量を分離カラムに流し、分離カラムを平衡化し、その後分析や分取を行っていた。そして、分析や分取を終えた後、必要に応じて分離カラムを洗浄し、その後送液ポンプを停止して、分離カラムへの送液を停止していたが、特許文献１及び特許文献２を含め、送液ポンプの停止は時間をかけずに瞬時に行われ、分離カラムへの移動相の送液は、時間をかけずに停止し、送液量は直ちに処理時の流量からゼロにしていた。

【0013】

しかし、送液ポンプの停止による分離カラムへの送液終了時／処理終了時に、分離カラムへの移動相の流量が処理時の流量から急激にゼロになることにより、分離カラム内の充填層が高い圧力から低い圧力への急激な圧力の変化にさらされ、分離カラム内で充填剤の充填構造の崩れが起こり、分離カラムの分離性能を落としてしまうことがあった。

【0014】

又、特許文献１及び特許文献２に開示された技術は、送液対象物としての分離カラムへの送液開始時に移動相の送液量を処理時の流量まで増加させる際に、特許文献１に記載の技術では、明細書の作用の記載及び図７等からも明らかなように、モータの回転数は直線的上昇、即ち一定の増加率で増加し、分離カラムへの送液量も一定の増加率で増加する技術であり、特許文献２に記載の技術では、請求項１、明細書の段落００２２及び図９からも明らかなように、分離カラムへの送液量は階段状に増加する技術であった。

【0015】

このような、分離カラムへの送液開始時の送液量の増加方法によれば、従来のように、送液をしていない状態から直ちに処理時の流量を送液する方法に比べて、分離カラムにかかる圧力ショックを低減することによる分離カラムの分離性能の低下を抑制することが可能となったが、分離カラムの分離性能の低下の抑制は充分ではなかった。

【0016】

又、充填剤が充填された分離カラム以外の送液対象物の破損の防止や性能低下の抑制については、特に考慮されないことが殆どであった。

【0017】

そこで、本発明は、液体クロマトグラフィーに用いられる、内部に充填剤が詰められた分離カラムに送液するための液体クロマトグラフ用送液ポンプをはじめ、送液ポンプの吐出側出口と配管で接続され、送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用される送液対象物に送液するための送液ポンプの送液による、送液対象物のダメージや性能の低下を抑制することを目的の一つとする。又、送液を終了又は送液する量を減少させる時に、送液対象物にかかる急激な圧力の変化を低減し、送液対象物のダメージを抑制することを目的の一つとする。又、送液を開始又は流量を増加させる時に、送液対象物にかかる圧力による送液対象物のダメージや性能の低下をより抑制することを目的の一つとする。又、分離カラムへの送液時に、分離カラム内における充填剤の充填状態の変化を抑制し、分離カラムの分離性能の低下を抑制することを目的の一つとする。

【課題を解決するための手段】

【0018】

上記課題を解決するための手段としての本発明は、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液装置である。

【0019】

又、送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液装置である。

【0020】

又、上記送液装置において、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率が一定である送液装置である。

【0021】

又、上記送液装置において、前記処理終了時における流量の減少は、減少率が変化する送液装置である。

【0022】

又、上記送液装置において、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率が連続的に変化する送液装置である。

【0023】

又、上記送液装置において、前記減少率は、前記処理終了時の後半に比べて前記処理終了時の前半に小さい送液装置である。

【0024】

又、上記送液装置において、前記減少率は、前記処理終了時の前半に比べて前記処理終了時の後半に小さい送液装置である。

【0025】

又、上記送液装置において、前記処理終了時の前半において、前記処理終了時の開始時からの時間が短い程、前記減少率が小さい送液装置である。

【0026】

又、上記送液装置において、前記処理終了時の後半において、処理終了後までの時間が短い程、前記減少率が小さい送液装置である。

【0027】

又、上記送液装置において、前記処理終了時の時間が１秒以上である送液装置である。

【0028】

又、上記送液装置において、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎである送液装置である。

【0029】

更に、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率が連続的に変化する送液装置である。

【0030】

又、送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理準備前の流量から流量を増加させて処理時の流量にする処理準備時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、前記処理準備時のうち少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率が連続的に変化する送液装置である。

【0031】

又、上記送液装置において、前記処理準備時の前半において、前記処理準備時の開始時からの時間が短い程、前記増加率が小さい送液装置である。

【0032】

又、上記送液装置において、前記処理準備時の後半において、前記処理時までの時間が短い程、前記増加率が小さい送液装置である。

【0033】

又、上記送液装置において、前記処理準備時の時間が１秒以上である送液装置である。

【0034】

又、上記送液装置において、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎである送液装置である。

【0035】

更に、上記送液装置において、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率が連続的に変化する送液装置である。

【0036】

又、上記送液装置において、流量の増加又は／及び減少を、予め設定された流量の変化又は／及び前記送液ポンプと前記送液対象物間に設置された圧力センサにより測定された圧力の変化に基づいて制御する送液装置である。

【0037】

又、上記送液装置を備える液体クロマトグラフである。

【0038】

又、上記送液装置を備える超臨界流体クロマトグラフである。

【0039】

更に、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液方法である。

【0040】

又、送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理時の流量から流量を減少させて処理終了後の流量にする処理終了時に、所定の時間をかけて、流量を減少させる送液方法である。

【0041】

又、上記送液方法において、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率を一定とする送液方法である。

【0042】

又、上記送液方法において、前記処理終了時における流量の減少は、減少率を変化させる送液方法である。

【0043】

又、上記送液方法において、前記処理終了時のうち少なくとも一部の時間における流量の減少は、減少率を連続的に変化させる送液方法である。

【0044】

又、上記送液方法において、前記減少率を、前記処理終了時の後半に比べて前記処理終了時の前半に小さくする送液方法である。

【0045】

又、上記送液方法において、前記減少率を、前記処理終了時の前半に比べて前記処理終了時の後半に小さくする送液方法である。

【0046】

又、上記送液方法において、前記処理終了時の前半において、前記処理終了時の開始時からの時間が短い程、前記減少率を小さくする送液方法である。

【0047】

又、上記送液方法において、前記処理終了時の後半において、処理終了後までの時間が短い程、前記減少率を小さくする送液方法である。

【0048】

又、上記送液方法において、前記処理終了時の時間が１秒以上である送液方法である。

【0049】

又、上記送液方法において、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎである送液方法である。

【0050】

更に、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液方法である。

【0051】

又、送液対象物への送液ポンプによる送液において、処理準備前の流量から流量を増加させて処理時の流量にする処理準備時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、前記処理準備時のうち少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率を連続的に変化させることを特徴とする送液方法である。

【0052】

又、上記送液方法において、前記処理準備時の前半において、前記処理準備時の開始時からの時間が短い程、前記増加率を小さくする送液方法である。

【0053】

又、上記送液方法において、前記処理準備時の後半において、前記処理時までの時間が短い程、前記増加率を小さくする送液方法である。

【0054】

又、上記送液方法において、前記処理準備時の時間が１秒以上である送液方法である。

【0055】

又、上記送液方法において、前記処理時の流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎ～１０００ｍＬ／ｍｉｎである送液方法である。

【0056】

更に、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を減少させる時に、所定の時間をかけて、流量を減少させ、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量を増加させる時に、所定の時間をかけて、流量を増加させ、少なくとも一部の時間における流量の増加は、増加率を連続的に変化させる送液方法である。

【0057】

又、上記送液方法において、流量の増加又は／及び減少を、目的とする時間毎の流量又は／及び目的とする時間毎の圧力に基づいて制御する送液方法である。

【発明の効果】

【0058】

以上のような本発明によれば、液体クロマトグラフィーに用いられる、内部に充填剤が詰められた分離カラムに送液するための液体クロマトグラフ用送液ポンプをはじめ、送液ポンプの吐出側出口と配管で接続され、送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用される送液対象物に送液するための送液ポンプの送液による、送液対象物のダメージや性能の低下を抑制することが可能となった。又、送液を終了又は送液する量を減少させる時に、送液対象物にかかる急激な圧力の変化を低減し、送液対象物のダメージを抑制することが可能となった。又、送液を開始又は流量を増加させる時に、送液対象物にかかる圧力による送液対象物のダメージや性能の低下をより抑制することが可能となった。又、分離カラムへの送液時に、分離カラム内における充填剤の充填状態の変化を抑制し、分離カラムの分離性能の低下を抑制することが可能となった。

【図面の簡単な説明】

【0059】

【図1】本発明液体クロマトグラフの一実施例概略図

【図2】本発明液体クロマトグラフの他実施例概略図

【図3】本発明送液装置の一実施例機能的概略構成ブロック図

【図4】タイムテーブルの一実施例

【図5】液体クロマトグラフ制御装置の一実施例機能的概略構成ブロック図

【図6】本発明超臨界流体クロマトグラフの一実施例概略図

【図7】（ａ）本発明の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図8】本発明の送液方法の概念図

【図9】（ａ）比較例の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図10】（ａ）比較例の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図11】比較例の送液方法の概念図

【図12】本発明の送液方法の概念図

【図13】（ａ）本発明の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図14】本発明の送液方法の概念図

【図15】本発明の送液方法の概念図

【図16】本発明の送液方法の概念図

【図17】（ａ）本発明の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図18】本発明の送液方法の概念図

【図19】（ａ）本発明の送液方法の概念図と（ｂ）その方法を用いた分析結果のクロマトグラム

【図20】本発明の送液方法の概念図

【図21】本発明の送液方法の概念図

【図22】本発明の送液方法の概念図

【図23】本発明の送液方法の概念図

【図24】本発明の送液方法の概念図

【図25】比較例の送液方法の概念図

【図26】本発明の送液方法の概念図

【図27】比較例の送液方法の概念図

【図28】本発明の送液方法の概念図

【図29】比較例の送液方法の概念図

【図30】本発明の送液方法の概念図

【図31】本発明の送液方法の概念図

【発明を実施するための形態】

【0060】

以下、本発明の実施の形態を説明する。本発明は、送液対象物への送液ポンプによる送液を減少させて処理終了後の流量にする際に、所定の時間をかけて、処理時の流量から処理終了後の流量まで流量を減少させる送液装置及び送液方法であり、又、送液対象物への送液ポンプによる送液を増加させて処理時の流量にする際に、所定の時間をかけて、処理準備前の流量から処理時の流量まで流量を増加させ、流量の増加は、前記所定の時間のうち少なくとも一部の時間は、増加率が連続的に変化する送液装置及び送液方法である。

【0061】

送液ポンプが送液する送液対象物としては、液体クロマトグラフィーにおける充填剤が充填された分離カラムの他、送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用され、送液ポンプにとって背圧抵抗になり得る装置が含まれる。具体的には、これらに限定されないが、液体クロマトグラフィーにおいては充填層がモノリス体で形成された分離カラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたトラップカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたガードカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された反応カラム、フィルター、流路切り替え用や試料注入用等のバルブ、検出器セル、抵抗管、可変抵抗、流路配管、ダンパー、質量分析計用のスプレイヤー等が含まれる。

【0062】

又、送液対象物としては、超臨界流体クロマトグラフィーにおいては充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された分離カラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたトラップカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成されたガードカラム、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された反応カラム、フィルター、流路切り替え用や試料注入用等のバルブ、検出器セル、抵抗管、可変抵抗、流路配管、ダンパー、質量分析計用のスプレイヤー等が含まれる。

【0063】

又、液体クロマトグラフィー及び超臨界流体クロマトグラフィー以外においても、様々な目的で送液ポンプの下流の流路上に設置されて使用され、送液ポンプにとっての背圧抵抗になり得る送液対象物があり、これらに限定されないが、フィルター、流路切り替え用や試料注入用等のバルブ、充填剤が充填された又は充填層がモノリス体で形成された反応カラム、検出器セル、抵抗管、可変抵抗、流路配管、ダンパー、ノズル、注入装置、反応装置、混合装置等が含まれる。

【0064】

尚、送液対象物として、一種類の装置が単体で設置されていてもよいし、一種類の装置が複数設置されていてもよい。又、複数種類の装置が組み合わせられて設置されていてもよい。送液対象物として、複数或いは複数種類の装置が設置されている場合は、同じ流路上に直列に設置されていてもよいし、分岐した流路上に並列に設置されていてもよい。又、送液対象物の材質は特に限定されず、シリカゲル、ポリマー、ステンレス、チタン、アルミニウム等の様々な材料で構成される又はこれらの材料を適宜組み合わせて構成される送液対象物が含まれる。

【0065】

送液ポンプが送液する流量の減少、増加等の制御のための送液ポンプの制御は、流量制御で行うこととしてもよいし、圧力制御で行うこととしてもよい。又、圧力制御で送液ポンプの制御を行う場合、送液ポンプ出口の圧力センサで検出される圧力を所定の値に維持するために送液ポンプの流量を変化させることが出来る。即ち、所定の圧力に対応した流量に制御を行うことが出来る。更に、送液ポンプの制御は、流量制御と圧力制御を組み合わせて行うこととしてもよい。

【0066】

以下、液体クロマトグラフィーにおける充填剤が充填された分離カラムを、送液対象物の例として説明する。尚、充填剤は特に限定されず、液体クロマトグラフィーに用いることが出来る充填剤を使用することが出来る。

【0067】

送液ポンプが所定の目的をもって流路に移動相を供給するための工程は、工程順に処理準備前、処理準備時、処理時、処理終了時、処理終了後を含んで構成することが出来る。尚、それぞれの工程において送液ポンプから送液される単位時間あたりの流量を、処理準備前の流量、処理準備時の流量、処理時の流量、処理終了時の流量、処理終了後の流量という。

【0068】

液体クロマトグラフィーにおいては、これらの流量の制御のための送液ポンプの制御は、圧力制御で行うこともあるが、主に流量制御で行われている。又、送液ポンプの制御は、流量制御と圧力制御を組み合わせて行うこととしてもよい。この場合、送液ポンプ出口の圧力センサで検出される圧力を所定の値に維持するために送液ポンプの流量を変化させることが出来る。

【0069】

処理時は、試料中の成分の分析、分取等のための分離カラムによる分離、分離カラムの洗浄、分離カラムの平衡化等、送液ポンプによる送液の目的のための処理が送液対象物において行われている工程である。即ち、送液ポンプが送液対象物に送液をする目的のための作動や作用を、送液ポンプによる送液を受けることで送液対象物が行っている時を処理時という。処理時は、分析や分取等の、送液ポンプによる送液の目的により、処理準備時と処理終了時の間で１回のみならず複数回設定されることがある。

【0070】

又、処理時の流量は、処理の目的に対応して予め決定されている。処理時の流量は、一定流量の場合もあるが、所定の変化をする流量の場合もある。流量が変化する場合には、処理の目的に対応して意図的に流量を変化させる場合や、送液ポンプの制御を、流量制御の他に圧力制御で行う場合、所定の圧力範囲内に維持するために流量を変化させる場合等がある。

【0071】

処理準備前は、処理時に向けた待機状態の工程である。処理準備前の流量は、送液ポンプによる送液を完全に停止して０ｍＬ／ｍｉｎにしてもよいが、例えばこれには限定されないが、ウォームアップ等のために、送液ポンプによる送液を完全に停止せずに処理時の流量未満の所定の流量で送液を行うこととしてもよい。又、処理準備前の流量は、一定でもよいし変化させてもよい。

【0072】

処理準備時は、処理準備前の流量から処理時の流量へ流量を増加させる工程である。処理準備時は、０ｍＬ／ｍｉｎの他、処理時の流量未満の所定の流量から流量を増加させて処理時の流量に達するまでの時間が含まれる。

【0073】

処理終了時は、処理時の流量から処理終了後の流量へ減少させる工程である。処理終了時は、処理時の流量から流量を減少させて０ｍＬ／ｍｉｎの他、処理時の流量未満の所定の流量とするまでの時間が含まれる。

【0074】

処理終了後は、処理時を終了させた後の待機状態の工程である。この工程は次に処理準備前の工程に続く場合と送液ポンプが停止して移動相を供給する工程が終了する場合がある。処理終了後の流量は、送液ポンプによる送液を完全に停止して０ｍＬ／ｍｉｎにしてもよいが、例えばこれには限定されないが、ウォームアップ等のために、送液ポンプによる送液を完全には停止せずに処理時の流量未満の所定の流量で送液を行うこととしてもよい。又、処理終了後の流量は、一定でもよいし変化させてもよい。尚、処理準備前の流量と処理終了後の流量は、同じ流量としてもよく、異なる流量としてもよい。

【0075】

又、処理時から処理終了時へ移行する時点は、分離等の処理が終了した時のみならず、任意に送液ポンプによる送液を停止又は減少させ始める時や、送液ポンプ、送液装置或いは液体クロマトグラフィー装置等のエラーや故障により送液ポンプによる送液が停止又は減少し始める時も含まれる。

【0076】

本発明の液体クロマトグラフは、分析用液体クロマトグラフ（流量５ｍＬ／ｍｉｎ未満で使用される液体クロマトグラフ）及び分取用液体クロマトグラフ（流量５ｍＬ／ｍｉｎ以上で使用される液体クロマトグラフ）を含む。又、低圧液体クロマトグラフ或いは中圧液体クロマトグラフ（０．５～３．０ＭＰａ付近の圧力下で実行される液体クロマトグラフ）及び高性能液体クロマトグラフ（高速液体クロマトグラフ又はＨＰＬＣとも言う。最大４０ＭＰａの圧力下で実行される液体クロマトグラフ）及び超高性能液体クロマトグラフ（超高速液体クロマトグラフ又はＵＨＰＬＣとも言う。４０ＭＰａより大きく２００ＭＰａまでの圧力下で実行される液体クロマトグラフ）を含む。

【0077】

本発明の液体クロマトグラフ１は、図１及び図２に示すように、移動相容器１７内の移動相１７１を、流量を制御して送液対象物である分離カラム２を含む流路６１に供給する送液ポンプ５１と、試料注入用流路切り替えバルブ３１及びサンプルループ３２を備え、所定量の試料を適時に流路に供給する試料注入装置３０と、試料を成分毎に分離する、送液対象物としての分離カラム２と、分離カラム２で分離された試料成分を検出する、検出器セル９１を備えた検出器９と、これらを接続する配管６と、送液ポンプ５１の動作を制御する送液ポンプ制御装置５２と、液体クロマトグラフを制御する液体クロマトグラフ制御装置１０とを備えて構成されている。

【0078】

送液対象物には分離機構、分離装置が含まれ、一具体例として分離カラム２がある。分離カラム２は、内部空間に粒状の充填剤が詰められて構成された充填層を備えた分離カラムである。

【0079】

又、液体クロマトグラフ１は送液装置５を備えて構成されている。本発明の送液装置５は、移動相容器１７内の移動相１７１を流路６１及び分離カラム２に送液して供給するための送液ポンプ５１と、送液ポンプ５１の動作を制御する送液ポンプ制御装置５２を備えて構成されている。

【0080】

送液ポンプ制御装置５２は、送液ポンプ５１の動作を制御して、流路６１及び分離カラム２に供給される移動相１７１の流量を制御するための装置である。送液ポンプ制御装置５２はコンピュータで構成することが出来る。送液ポンプ制御装置５２は、図３に示すように、ＣＰＵを備えて構成される制御部８０、コンピュータプログラムやタイムテーブル等の各種データを記憶する、ＲＯＭ、ＲＡＭ又はメモリ等で構成される記憶装置８２、液体クロマトグラフ制御装置１０や送液ポンプ５１と有線又は無線通信するための通信インターフェイス８３を備えて構成されている。又、送液ポンプ制御装置５２は、操作パネル等で構成される入力装置５２１、ディスプレイ等で構成される表示装置５２２を備えている。入力装置５２１は各種設定、情報や指示の入力を行うための装置であり、表示装置５２２は、入力装置５２１で入力された数値等の情報や各種設定を行うための画面を表示するための装置である。

【0081】

又、送液ポンプ制御装置５２は流量制御部８５を備えている。流量制御部８５は、送液ポンプ５１の動作を制御して、分離カラム２を含む流路６１に供給される移動相１７１の流量を制御する。流量制御部８５は、記憶装置８２に格納された、流路に供給される移動相１７１の流量を制御する流量制御用プログラムが制御部８０のＣＰＵの制御のもとに実行されることにより構成される。

【0082】

このように、送液ポンプ５１の制御は、送液ポンプ制御装置５２から、タイムテーブルに入力され、予め設定された、目的とする時間毎の流量を送液ポンプ５１に送信し、指示して行う流量制御で行うことが出来る。又、送液ポンプ５１の制御は、送液ポンプ制御装置５２から、タイムテーブルに入力された流量を送液ポンプ５１に指示すると共に、送液ポンプ５１に設けた圧力センサ５７により、送液ポンプ５１出口側の圧力を測定し、その測定結果が送液ポンプ制御装置５２に送信され、流量制御部８５が、予め設定された所定の圧力範囲内かを判定し、予め設定された所定の圧力範囲内ではない場合に、予め設定された所定の圧力範囲内に維持するために、送液する流量の増減を送液ポンプ５１に送信し、指示して送液ポンプ５１の流量を制御する方法も採用することが出来る。

【0083】

液体クロマトグラフ１は、図１及び図２に示すように、１台の送液ポンプ５１と１個の移動相容器１７が１つの流路６１に接続されて構成されている。尚、送液装置５の送液ポンプの設置台数は特に限定されず、１つの流路６１に複数台の送液ポンプと複数個の移動相容器が接続された構成や、１つの流路６１に１台の送液ポンプと複数個の移動相容器が接続された構成としてもよい。尚、１種類の移動相を送液する送液ポンプ複数台を１つの流路に接続して使用する高圧グラジエント方式の送液ポンプや、複数の移動相を送液する送液ポンプ１台を１つの流路につないで使用する低圧グラジエント方式の送液ポンプも使用することが出来る。複数台の送液ポンプを設置する場合、夫々の送液ポンプ毎に送液ポンプ制御装置５２を設置する構成としてもよく、１台の送液ポンプ制御装置５２により全ての送液ポンプを制御する構成としてもよい。

【0084】

送液ポンプ５１が流路６１に移動相１７１を供給する時の流量、即ち、処理準備時の流量、処理時の流量、処理終了時の流量或いは更に処理準備前の流量及び処理終了後の流量は、予め記憶装置８２に記憶されたタイムテーブルを用いて制御することが出来る。タイムテーブルは記憶装置８２に記憶されたプログラムに組み込んでもよいが、プログラムとは別個のファイルとして記憶させてもよい。送液ポンプ制御装置５２の流量制御部８５は、記憶装置８２に記憶されるタイムテーブルを抽出し、参照して、送液ポンプ５１に、タイムテーブルに設定された時間毎の流量を流路６１及び分離カラム２に送液するように指示する。

【0085】

タイムテーブルは、分離カラム２及び流路６１に送液ポンプから供給する移動相１７１の流量を時間毎に設定したものであり、処理準備時、処理時、処理終了時或いは更に処理準備前及び処理終了後における時間毎の予め目的とする流量が設定され、記録されて構成されている。このタイムテーブルは、送液の目的、処理対象の試料、分離カラムのサイズ等に応じて予め所定の数値に設定が可能である。

【0086】

又、タイムテーブルには、予め目的とする時間毎の流量が入力されて構成されていてもよいが、タイムテーブルには読み取られた直前の流量が入力されて構成されていてもよい。更に、タイムテーブルの該当工程時の先頭又は／及び最後の流量値が入力されていると共に、時間毎の値を０％から１００％とするような、時間毎の流量の相対値が入力されて構成されていてもよい。この場合、タイムテーブルの該当工程時の先頭の流量値は予め入力されていてもよいが、直前の工程の直前の流量値が流量制御部８５により入力されてもよい。又、タイムテーブルの該当工程時の最後の値は予め入力されていてもよいが、直後の工程の予め設定された最初の流量値が流量制御部８５により入力されてもよい。

【0087】

又、夫々に時間毎の流量の設定値が異なる複数種のタイムテーブルを予め記憶装置８２に記憶させ、当該複数のタイムテーブルから操作者が入力装置５２１又は入力装置７１を介して選択する方法や操作者がタイムテーブルの時間や流量等の項目を入力装置５２１又は入力装置７１を介して自由に設定する方法を採用することが出来る。選択する方法の場合には、出力装置５２２又は出力装置７２に、時間及び流量の選択肢を表示させて操作者に選択を要求する。選択肢の表示方法として、タイムテーブルの表から選択させ、或いは、流量の時間当たりの変化を示すグラフから選択させることが出来る。この場合、処理準備前、処理準備時、処理時、処理終了時及び処理終了後を一括して表示し選択させてもよく、処理準備前、処理準備時、処理時、処理終了時及び処理終了後を分けて表示し選択させてもよい。又、自由に設定する方法の場合には、処理準備時、処理時及び処理終了時の時間及びその時間毎の流量等の入力欄を表示させ操作者に入力を要求する画面を表示させることとしてもよい。このように、タイムテーブルの設定により、処理終了時や処理準備時の流量の制御において、様々な制御が可能となる。

【0088】

図４（ａ）に示すタイムテーブル７７は、処理終了時に参照されるタイムテーブルの一例を部分的に示したものである。尚、このタイムテーブルに従うと、処理終了時の流量の減少率が一定となる。又、処理準備時、処理時、処理終了時に参照されるタイムテーブルには、送液ポンプから流路６１に供給する移動相１７１の流量の時間毎の相対値及び当該テーブルが参照される直前の流量と、当該テーブルを参照して到達を目指す流量を設定、記録することとしても良い。図４（ｂ）に示すタイムテーブル７８には、処理終了時に参照されるタイムテーブルの一例を部分的に示している。

【0089】

又、送液ポンプ５１の制御は、タイムテーブルに替えて又はタイムテーブルと共に関数を用いて行うことも出来る。関数は、１次関数、多次元関数、伝達関数、ベジェ曲線等の関数、これらを組み合わせた関数を用いることが出来る。これらの関数は、分離カラム２及び流路６１に送液ポンプから供給する移動相１７１の流量を時間毎に算出可能に設定された式であり、処理準備時、処理時、処理終了時或いは更に処理準備前及び処理終了後における時間毎の予め目的とする流量を算出することが出来る。この関数は、送液の目的、処理対象の試料、分離カラムのサイズ等に応じて設定が可能である。又、これらの関数は、式として予め記憶装置８２に記憶させ、操作者が入力装置５２１又は入力装置７１を介して選択する方法や自由に設定する方法を採用することが出来る。送液ポンプ制御装置５２の流量制御部８５は、記憶装置８２に記憶される関数式を抽出し、計算して、算出した時間毎の流量を流路６１及び分離カラム２に送液するように指示する。このように、関数の設定により、処理終了時や処理準備時の流量の制御において、様々な制御が可能となる。

【0090】

処理準備時には、送液ポンプ制御装置５２に制御された送液ポンプ５１により、分離カラム２に、処理準備前の流量、即ち０ｍＬ／ｍｉｎ又は処理時の流量未満の所定の流量から処理時の流量に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に増加させて移動相１７１を供給し、処理時の流量に達した後は、分析や分取等の送液目的に対応した処理時の流量、即ち一定の流量又は所定の変化流量を所定の時間送液させて移動相１７１を供給し、処理終了時には、処理時の流量から処理終了後の流量に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に減少させて移動相１７１を供給し、処理終了後の流量、即ち０ｍＬ／ｍｉｎ又は処理時の流量未満の所定の流量にする。

【0091】

処理時の流量から流量を減少させる処理終了時の時間は、０秒でなければ特に限定されないが、送液対象物にかかる急激な圧力の変化を抑制するためには１秒以上が好ましく、より好ましくは２秒以上である。又、処理終了時の時間が長ければ長いほど送液対象物にかかる急激な圧力の変化を抑制することが出来るので、処理終了時の時間は３０分以上でも１時間以上でもよいが、時短の要請がある場合には１０秒以下が好ましい。

【0092】

処理終了時の単位時間当たりの流量の減少量、即ち減少率は一定としてもよく、変化させてもよい。減少率を変化させる場合には、異なる数値の複数の、一定の減少率が組み合わさったものとしてもよく、減少率が連続的に変化するものとしてもよく、減少率が連続的に変化するものと一定の減少率が組み合わさったものとしてもよい。減少率が連続的に変化するものには、減少率が処理終了時の前半において大きく処理終了時の後半において小さい場合や、減少率が処理終了時の前半において小さく処理終了時の後半において大きい場合が含まれる。又、処理終了時又はその前半において、処理終了時の開始時からの時間が短い程、減少率を小さくしてもよく、処理終了時又はその後半において、処理終了後までの時間が短い程、減少率を小さくしてもよい。これらの場合、減少率が連続的に変化してよいが、所定の間隔で変化してもよい。

【0093】

処理準備前の流量から流量を増加させて処理時の流量に達するまでの時間である処理準備時の時間は特に限定されないが、送液対象物にかかる急激な圧力の変化を抑制するためには１秒以上が好ましく、より好ましくは３秒以上である。又、処理準備時の時間が長ければ長いほど送液対象物にかかる急激な圧力の変化を抑制することが出来るので、処理準備時の時間は３０分以上でも１時間以上でもよいが、分析等のための処理サイクルの時短の要請がある場合には１０秒以下が好ましい。

【0094】

処理準備時の単位時間当たりの流量の増加量、即ち増加率は連続的に変化させることが出来る。増加率が連続的に変化する時間は処理準備時の全部の時間としてもよく、一部の時間としてもよい。増加率が連続的に変化する時間が処理準備時の全部の時間の場合、増加率が連続的に変化する変化率は同じでもよいが、途中で変化してもよい。

【0095】

又、増加率が連続的に変化する時間が処理準備時の一部の時間の場合、増加率が連続的に変化するのは、処理準備時のどこの時間でもよい。増加率が連続的に変化するものには、増加率が処理準備時の前半において大きく処理準備時の後半において小さい場合や、増加率が処理準備時の前半において小さく処理準備時の後半において大きい場合が含まれる。又、処理準備時において、増加率が連続的に変化するものと一定の増加率のものを組み合わせてもよい。又、処理準備時又はその前半において、処理準備時の開始時からの時間が短い程、増加率を小さくしてもよく、処理準備時又はその後半において、処理時までの時間が短い程、減少率を小さくしてもよい。

【0096】

尚、処理終了時に処理時の流量から所定の時間をかけて処理終了後の流量まで徐々に減少させる場合、処理準備時は、処理準備前の流量から所定の時間をかけて徐々に処理時の流量まで増加させることが好ましく、更には増加率が連続的に変化する時間がある場合がより好ましいが、時間をかけずに処理時の流量まで増加させること、言い換えれば、処理準備前の流量から直ちに処理時の流量を送液すること、処理準備前の流量が０ｍＬ／ｍｉｎの場合は、処理時の流量で送液を開始すること、即ち処理準備時の時間は０秒とすることも可能である。

【0097】

又、処理準備時の少なくとも一部の時間において、流量を所定の時間をかけて徐々に増加させ、増加率が連続的に変化する時間がある場合、処理終了時の流量は、処理時の流量から所定の時間をかけて徐々に処理終了後の流量まで減少させることが好ましいが、時間をかけずに処理時の流量から処理終了後の流量まで減少させること、言い換えれば、処理時の流量から直ちに処理終了後の流量にすること、処理終了後の流量が０ｍＬ／ｍｉｎの場合は、送液を停止すること、即ち処理終了時の時間は０秒とすることも可能である。

【0098】

処理終了時及び処理準備時の流量の制御において、流量の変化がない時間を挿入することは、本発明の効果が損なわれない範囲で挿入することは可能である。このような流量の変化は、例えばこれに限定されないが、階段状に減少又は増加する変化が挙げられる。

【0099】

又、処理終了時の流量の制御において流量が増加する時間を挿入すること、処理準備時の流量の制御において流量が減少する時間を挿入することは、本発明の効果が損なわれない範囲で挿入することは可能である。

【0100】

分離等の処理が正常に終了し、タイムテーブルどおりに処理時から処理終了時へ正常に移行する時ではなく、任意に送液ポンプによる送液を停止又は減少させる時や、送液ポンプ、送液装置或いは液体クロマトグラフ装置等のエラーや故障により送液ポンプが停止してしまう非常停止時の場合、送液対象物にかかる急激な圧力の変化を抑制するため、流量制御部８５が、その時点で処理時から処理終了時へ移行するように送液ポンプ５１の流量を制御し、所定の時間をかけて徐々に処理終了後の流量まで減少させることが好ましい。この場合、流量制御部８５の制御により、その時点の流量を１００％として、図４（ｂ）に示すような相対値を記載したタイムテーブル７８に従い、送液ポンプ５１の流量を制御することが好ましい。

【0101】

タイムテーブルの最小時間単位と、流量制御用プログラムの解像度との関係は、タイムテーブルの最小時間単位が小さい程、流量制御用プログラムの解像度は大きくなる。そして、直線状のプログラム即ち増加率又は減少率が一定、又は、曲線状のプログラム即ち増加率又は減少率が連続的に変化する場合にも、滑らかな変化を実現することが出来る。尚、タイムテーブルの最小時間単位は特に限定されない。０．１ｓでもよく、０．０１ｓより短い時間であってもよい。

【0102】

液体クロマトグラフ制御装置１０は、液体クロマトグラフ１全体を制御するための装置である。液体クロマトグラフ制御装置１０は、図５に示すように、ＣＰＵを備えて構成される制御部１１、コンピュータプログラムや各種データを記憶する、ＲＯＭ、ＲＡＭ又はメモリ等で構成される記憶装置１２、送液ポンプ制御装置５２を含む、液体クロマトグラフ１を構成する装置との有線通信又は無線通信をするための通信インターフェイス１３を備えて構成されている。又、送液ポンプ制御装置５２に送液ポンプの始動開始の指示や必要な場合に各種データを送信して送液ポンプ５１の動作を制御するポンプ指示部１５、検出器９が出力したデータ信号を処理してクロマトグラムを作成し、記憶装置１２に記憶させると共に、出力装置７２に表示させるデータ処理部１７を備え、これらは記憶装置１２に格納されたプログラムが制御部１１のＣＰＵの制御のもとに実行されることにより構成される。液体クロマトグラフ制御装置１０はコンピュータで構成することが出来る。

【0103】

又、液体クロマトグラフ制御装置１０は、マウス、キーボード又はタッチパネル等で構成される入力装置７１、ディスプレイやプリンタ等で構成される出力装置７２と接続されている。入力装置７１は各種設定、情報や指示の入力を行うための装置であり、出力装置７２は、各種設定を行うための画面や分析結果のクロマトグラム等を表示し、或いはクロマトグラムをプリントするための装置である。

【0104】

尚、送液ポンプ制御装置５２の記憶装置８２ではなく、液体クロマトグラフ制御装置１０の記憶装置１２に流量制御用プログラム及びタイムテーブルを記憶させ、液体クロマトグラフ制御装置１０が、送液ポンプ５１の動作を直接制御する構成としてもよい。この場合、液体クロマトグラフ制御装置１０は、流路６１及び分離カラム２に供給される移動相１７１の流量を制御する、図示しない流量制御部を備え、送液ポンプ５１の動作を制御することで、流路６１及び分離カラム２に供給される移動相１７１の流量を制御する。この様な構成の場合、本発明の送液装置は、送液ポンプ５１及び液体クロマトグラフ制御装置１０の一部を備えて構成されることとなる。又、液体クロマトグラフ制御装置１０が備える流量制御部は記憶装置１２に格納された流量制御用プログラムが制御部１１のＣＰＵの制御のもとに実行されることにより構成される。

【0105】

更に、液体クロマトグラフ制御装置１０が送液ポンプ制御装置５２を介して送液ポンプ５１の動作を制御する構成としてもよい。この場合、送液ポンプ制御装置５２及び液体クロマトグラフ制御装置１０が、流路６１及び分離カラム２に供給される移動相１７１の流量を制御する。この様な構成の場合、本発明の送液装置は、送液ポンプ５１、液体クロマトグラフ制御装置１０の一部を備えて構成されることとなる。

【0106】

試料注入装置３０は、サンプルループ３２を接続して固定した試料注入用流路切り替えバルブ３１を含む構成の固定ループ注入方式のオートサンプラーを用いている。尚、サンプルループを接続して固定した試料注入用流路切り替えバルブを含む構成のマニュアルインジェクター、サンプル容器から試料を吸引するためのニードルを含む流路がサンプルループとしても使用され、試料注入用流路切り替えバルブを含む構成のダイレクト注入方式もしくはダイレクトインジェクション方式のオートサンプラー、試料送液用ポンプからの流路が試料注入用流路切り替えバルブや逆止弁を介して、移動相送液用ポンプと分離カラムをつないだ流路に接続されたオートサンプラー等、移動相送液用ポンプと分離カラムをつないだ流路に、試料注入用流路切り替えバルブや逆止弁を介して試料を注入出来る試料注入装置を用いることが出来る。

【0107】

分離カラム恒温槽３９は、内部に分離カラム２を収納したエアオーブンを用いるが、ウォーターバスやオイルバス等の液体を用いる恒温槽を用いることも出来る。又、金属等の固体を用いる恒温槽を用いることも出来る。エアオーブンの場合は、図１に示すように、試料注入用流路切り替えバルブ３１の流路部をエアオーブン内に収納することも出来る。

【0108】

又、特に分取用液体クロマトグラフの場合は、図２に示すように、試料注入装置３０の前の流路にプレヒートミキサー３８を接続して、恒温槽３９内に収納することが好ましい。このような構成とすることで、分離カラム２と同じ温度に恒温した移動相を分離カラム２による分離に用いることが出来、分離カラム２の中での温度分布を一定にすることが出来、分離カラム２で分離される試料中の成分のピークの形状を良くする効果がある。尚、分析用液体クロマトグラフ、分取用液体クロマトグラフのいずれにおいても、室温で分離カラム２による分離を行う場合、分離カラム恒温槽を用いない場合もある。

【0109】

検出器９は、検出器セル９１を備える検出器を用いるが、質量分析計のように、検出器セル９１を持たない検出器を使用することも出来る。又、検出器の種類によっては、複数の検出器を直列に接続して使用することも出来る。

【0110】

クロマトグラムの採取は、検出器９からデータ処理部１７に送られた信号を、出力装置７２に表示すると共に記憶装置１２に記録することで行われる。試料注入用流路切り替えバルブ３１が切り替わり、試料が分離カラム２と試料注入用流路切り替えバルブ３１の間の配管に注入された時からクロマトグラムの採取を始め、分離カラム２で分離された試料中の成分のピークの検出を確認した後クロマトグラムの採取を終わることが出来るが、試料注入用流路切り替えバルブ３１の切り替えとクロマトグラムの採取はそれぞれ独立させて行うことが出来るので、試料注入用流路切り替えバルブ３１が切り替わり、試料が分離カラム２と試料注入用流路切り替えバルブ３１の間の配管に注入された時からクロマトグラムの採取を始めた後、更に試料注入用流路切り替えバルブ３１を複数回切り替えて試料を分離カラム２と試料注入用流路切り替えバルブ３１の間の配管に注入し、複数の注入回数分の試料中の成分のピークを含むクロマトグラムの採取を行うことが出来る。又、クロマトグラムの採取を先に始めた後、試料注入用流路切り替えバルブ３１を切り替えて試料を分離カラム２と試料注入用流路切り替えバルブ３１の間の配管に注入し、分離カラム２で分離された試料中の成分のピークの検出を確認した後、クロマトグラムの採取を終わることが出来る。

【0111】

本発明の送液装置及び送液方法は、種々の液体クロマトグラフィーだけでなく、超臨界流体クロマトグラフィーにも適用することが出来る。本発明の送液装置を備えた超臨界流体クロマトグラフ１００は、図６に示すように、モディファイアー溶媒容器７０内のモディファイアー溶媒７０１を、流量を制御して流路を介して送液対象物である分離カラム２に供給する送液ポンプ５１と、液化二酸化炭素（液化炭酸ガス）をボンベ５９９から流路に供給する送液ポンプ５０１と、試料注入用流路切り替えバルブ３１及びサンプルループ３２を備え、所定量の試料を適時に流路に供給する試料注入装置３０と、試料を成分毎に分離する、送液対象物としての分離カラム２と、分離カラム２で分離された試料成分を検出する、検出器セル９１を備えた検出器９、これらを接続する配管６と、送液ポンプ５１と送液ポンプ５０１の動作を制御する送液ポンプ制御装置５２０と、超臨界流体クロマトグラフを制御する超臨界流体クロマトグラフ制御装置１１０とを備えて構成されている。

【0112】

試料注入装置３０の前の流路に接続したプレヒートミキサー４１を分離カラム恒温槽４２内に収納することで、分離カラム２と同じ温度に恒温した移動相（超臨界状態の二酸化炭素とモディファイアー溶媒の混合物）を分離カラム２による分離に用いることで、分離カラム２の中での温度分布を一定にすることが出来、分離カラム２で分離される試料中の成分のピークの形状を良くする効果がある。背圧調整弁４４は、二酸化炭素を超臨界状態に保つために使用する。送液ポンプ５１の吐出側出口と送液ポンプ５０１の吐出側出口にそれぞれ設置されたストップバルブ４６は、安全上の設備であり、設置されていることが望ましいが、超臨界流体クロマトグラフの運転に際し必須では無い。

【0113】

又、超臨界流体クロマトグラフ１００は送液装置５８０を備えて構成されている。本発明の送液装置５８０は、モディファイアー溶媒容器７０内のモディファイアー溶媒７０１を流路６１及び分離カラム２に送液して供給するための送液ポンプ５１、液化二酸化炭素をボンベ５９９から流路６１及び分離カラム２に供給する送液ポンプ５０１、送液ポンプ５１及び送液ポンプ５０１の動作を制御する送液ポンプ制御装置５２０を備えて構成されている。

【0114】

送液装置５８０が液体クロマトグラフ１の送液装置５と異なる点は、移動相容器１７内の移動相１７１を送液するか、モディファイアー溶媒容器７０内のモディファイアー溶媒７０１を送液するかの点及び液化二酸化炭素を流路６１に供給する送液ポンプ５０１を備える点である。又、送液ポンプ制御装置５２０が液体クロマトグラフ１の送液ポンプ制御装置５２と異なる点は、送液ポンプ制御装置５２０は送液ポンプ５０１の動作も制御する点である。

【0115】

送液ポンプ制御装置５２０は、送液ポンプ５１の動作を制御して、流路６１及び分離カラム２に供給されるモディファイアー溶媒７０１の流量を制御すると共に、送液ポンプ５０１の動作を制御して、流路６１及び分離カラム２に供給される液化二酸化炭素の流量を制御するための装置である。超臨界流体クロマトグラフ１００は、送液ポンプ制御装置５２０の記憶装置に送液ポンプ５１の制御用の流量制御用プログラム及びタイムテーブルに加えて送液ポンプ５０１の制御用の流量制御用プログラム及びタイムテーブルを備えている。超臨界流体クロマトグラフ１００のその他の構成は、液体クロマトグラフ１と同一の構成とすることが出来る。

【0116】

次に、液体クロマトグラフ１の分析時の処理の流れを説明するが、送液装置５による流量が制御された送液に関する処理の流れに関連する工程のみを説明し、分析時の他の公知の工程の説明は省略する。先ず、液体クロマトグラフ１の機器的な準備が完了後、液体クロマトグラフ制御装置１０が起動される。そして、液体クロマトグラフ制御装置１０のポンプ指示部１５が、送液ポンプ制御装置５２に送液ポンプの始動開始の指示を送信し、液体クロマトグラフ制御装置１０からの送液ポンプ始動開始の指示を受信した送液ポンプ制御装置５２は、流量制御部８５が記憶装置８２に記憶されるタイムテーブルを参照して、送液ポンプ５１に、タイムテーブルに設定された時間毎の流量を流路６１及び分離カラム２に送液するように指示する。送液ポンプ５１は、送液ポンプ制御装置５２の指示に従って、処理準備時の流量、処理時の流量及び処理終了時の流量の順で或いは加えて処理準備時の前に処理準備前の流量及び／又は処理終了時の後に処理終了後の流量を流路６１及び分離カラム２に送液する。

【0117】

処理準備前の流量が０ｍＬ／ｍｉｎの場合は、送液を停止していた送液ポンプ５１が作動し、処理準備時の流量を送液し、処理準備前の流量が０ｍＬ／ｍｉｎ以外の処理時の流量未満の所定の流量の場合は、０ｍＬ／ｍｉｎ以外の処理準備前の流量で送液していた送液ポンプ５１が処理準備時の流量を送液し、続いて処理時の流量を送液する。

【0118】

処理準備時には、送液ポンプ制御装置５２に制御された送液ポンプ５１は、分離カラム２に、処理準備前の流量から処理時の流量に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に増加させて移動相１７１を供給する。処理時の流量に達した後は、分析や分取等の送液目的に対応した処理時の流量を所定の時間送液して移動相１７１を供給する。処理終了時には、処理時の流量から処理終了後の流量に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に減少させて移動相１７１を供給し、処理終了後の流量にする。尚、処理準備時に所定の時間をかけ、増加率が連続的に変化する時間がある場合には、処理終了時の時間は０秒としてもよく、又、処理終了時に所定の時間をかける場合には、処理準備時の時間は０秒としてもよい。

【0119】

又、任意に送液ポンプによる送液を停止又は減少させる時や、送液ポンプ、送液装置或いは液体クロマトグラフ装置等のエラーや故障により送液ポンプが停止してしまう非常停止時の場合、流量制御部８５が、その時点で処理時から処理終了時へ移行するように送液ポンプ５１の流量を制御し、所定の時間をかけて徐々に処理終了後の流量まで減少させることが好ましい。

【0120】

送液ポンプ制御装置５２による送液ポンプ５１の制御は、他の液体クロマトグラフ１の構成要素の制御と連動して行ってもよいが、連動せずに、独立して制御することとしてもよい。具体的には、送液ポンプ５１の送液の開始、流量の変化、送液の停止の制御は、オートサンプラーや分離カラム恒温槽、検出器等の付属装置の制御と連動して行ってもよいが、連動せずに、独立して制御することとしてもよい。より具体的には、分離カラム恒温槽３９内の温度が所定の温度になることにより、送液ポンプ５１の送液を開始するように制御してもよいが、分離カラム恒温槽３９の温度の制御とは無関係に、送液ポンプ５１の送液を開始するように制御してもよい。

【0121】

送液ポンプの制御方法は、以下のようにも実施することが出来る。先ず、送液ポンプの下流の流路に圧力センサと可変抵抗を組み込み、処理時の流量で送液していた送液ポンプが送液を停止し始める或いは制御の流量を逸脱して減少し始めることに合わせて、可変抵抗による送液ポンプへの背圧を、送液ポンプの処理時の流量での送液時に圧力センサで検出されていた圧力と同じ圧力まで上げ、その後可変抵抗による送液ポンプへの背圧を緩やかに下げることにより、送液ポンプの処理終了時の流量が下がる勾配を緩やかにする方法を採用することが出来る。又、送液ポンプの下流の流路にフローセンサを組み込み、処理時の流量で送液していた送液ポンプが送液を停止し始め或いは制御の流量を逸脱して減少し始めた時、フローセンサから送液ポンプ制御装置５２に信号が送られ、処理終了時の送液ポンプの流量が緩やかに下がる制御が実行される方法を採用することが出来る。又、送液ポンプの下流の流路に可変ダンパー等の適したダンパーを組み込み、送液ポンプの送液の停止時或いは制御の流量を逸脱した減少時の勾配を緩やかにする方法を採用することが出来る。

【0122】

上述の実施形態では、送液対象物への送液ポンプによる送液において、流量制御部８５は、送液ポンプ５１に、タイムテーブル等から得られた目的とする時間毎の流量値に基づいて送液の流量を指示することにより送液の流量を制御する流量制御を用いた構成であるが、流量制御部８５が、送液ポンプ５１に、目的とする時間毎の圧力値に基づいて算出された送液の流量を指示することにより送液の流量を制御する圧力制御を用いた構成とすることとしてもよい。以下、流量制御部８５が、送液ポンプ５１に目的とする圧力値から算出された送液の流量を指示する圧力制御を用いた場合の構成について、上述の流量制御部８５が送液ポンプ５１にタイムテーブル等から得られた目的とする流量値から送液の流量を指示する場合と異なる構成のみ説明する。

【0123】

以下、液体クロマトグラフィーに使用する分離カラムを作製する際に使用する、パッカー、充填剤を含むスラリー、空カラムを用いて分離カラムを作製する構成を例として説明する。尚、この場合、充填剤を含むスラリーが空カラムに充填されたものが送液対象物となる。液体クロマトグラフィー用の分離カラムを製造する際、空カラムへの充填剤の充填には送液ポンプを使用する。そして、移動相容器に移動相を入れ、送液ポンプと接続する。送液ポンプの吐出側出口には圧力センサを設置し、その下流の流路に、充填剤を含むスラリーを入れたパッカー、空カラムの順に設置する。送液ポンプは図１及び図２における送液ポンプと同様に、送液装置に含まれる。以下、図１に示す、移動相容器１７内の移動相１７１を、流量を制御して送液対象物と流路６１に供給する送液ポンプ５１、送液ポンプ５１に設けた圧力センサ５７を備え、試料注入装置３０の設置個所にパッカー、カラム２の設置個所に空カラムが設置され、検出器９、分離カラム恒温槽３９及び液体クロマトグラフ制御装置１０を備えない、分離カラムを作製する構成を例に説明する。

【0124】

送液ポンプ５１の送液を開始すると、移動相１７１が流路６１に送られ、パッカー内のスラリーを空カラム内に移動させ、スラリー内の充填剤は空カラム内に充填されていき、スラリー内の溶媒は空カラム出口に排出される。この際、充填剤を均一に空カラム内に充填するためには、充填中に送液対象物である充填剤を含むスラリーが空カラムに充填されたものにかかる圧力が一定であることが望ましいため、送液ポンプ５１は圧力センサ５７で検出される圧力が一定に保たれるように送液する。

【0125】

図３に示すように、送液ポンプ５１を制御する送液ポンプ制御装置５２は流量制御部８５を備える。流量制御部８５は、送液ポンプ５１の動作を制御し、流路６１に供給される移動相１７１の流量に対応する圧力を制御し、流路６１に供給される移動相１７１の流量を制御する。この構成では、流量制御部８５は、記憶装置８２に格納された、流路６１に供給される移動相１７１の流量に対応する圧力を制御する圧力利用流量制御用プログラムが制御部８０のＣＰＵの制御のもとに実行されることにより構成される。

【0126】

尚、処理時の圧力は、処理の目的に対応して予め決定されている。そして、処理時の流量は処理の目的に対応して予め決定されている処理時の圧力を維持するための流量でもある。

【0127】

送液ポンプ５１が流路６１に移動相１７１を供給する時の流量は、予め記憶装置８２に記憶されたタイムテーブルを用いて制御することが出来る。タイムテーブルは、流路６１に移動相１７１を供給する時に目的とする圧力を時間毎に設定、記録したタイムテーブルである。タイムテーブルには、予め目的とする時間毎の圧力が入力されていても良い。即ち、ここでのタイムテーブルは、上述の流量が入力されたタイムテーブルの流量の欄に、流量に替わって圧力センサ５７で検出される圧力が入力される構成であり、その他の構成、記録、入力、使用方法等は上述のタイムテーブルと同様である。

【0128】

又、図４（ｃ）に示すタイムテーブル７９は、処理終了時に参照されるタイムテーブルの一例を部分的に示したものであり、当該テーブルを参照して到達を目指す圧力を時間毎に設定、記録されると共に、時間毎の値を０％から１００％とするような、送液ポンプ５１に設けた圧力センサ５７で検出される圧力の相対値（％）が入力されたタイムテーブルでもよい。

【0129】

送液ポンプ制御装置５２の流量制御部８５は、記憶装置８２に記憶されるタイムテーブルを抽出し、参照して、タイムテーブルに設定された時間毎の圧力に対応する流量を算出して、送液ポンプ５１に、当該算出された流量を流路６１及び分離カラム２に送液するように指示する。

【0130】

送液ポンプ５１に設けた圧力センサ５７により、送液ポンプ５１にとっての背圧抵抗になり得る送液対象物にかかる圧力を測定し、その測定結果が送液ポンプ制御装置５２に送信され、流量制御部８５が、現在の圧力が予め設定された所定の圧力かを判定し、予め設定された所定の圧力ではない場合に、予め設定された所定の圧力に維持するために、送液する流量の増減を送液ポンプ５１に送信し、指示して送液ポンプ５１の流量を制御する。

【0131】

又、処理準備時には、送液ポンプ制御装置５２に制御された送液ポンプ５１により、カラムに、処理準備前の流量に対応する圧力即ち０ＭＰａ又は処理時の流量未満の所定の流量に対応する圧力から処理時の流量に対応する圧力に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に増加させることにより、流量を増加させて移動相１７１を供給し、処理時の流量に対応する圧力に達した後は、パッキング等の送液目的に対応した処理時の流量に対応する圧力即ち一定の圧力又は所定の変化圧力で所定の時間送液させて移動相１７１を供給し、処理終了時には、処理時の流量に対応する圧力から処理終了後の流量に対応する圧力に所定の時間をかけて、即ち０秒より多くの時間をかけて徐々に減少させることにより、流量を減少させて移動相１７１を供給し、処理終了後の流量に対応する圧力即ち０ＭＰａ又は処理時の流量未満の所定の流量に対応する圧力にして、送液し或いは送液を停止する。

【0132】

処理終了時及び処理準備時の圧力の制御において、圧力の変化がない時間を挿入することは、本発明の効果が損なわれない範囲で挿入することは可能である。このような圧力の変化は、例えばこれに限定されないが、階段状に減少又は増加する変化が挙げられる。又、処理終了時の圧力の制御において圧力が増加する時間を挿入すること、処理準備時の圧力の制御において圧力が減少する時間を挿入することは、本発明の効果が損なわれない範囲で挿入することは可能である。

【実施例】

【0133】

以下、本発明の実施例を比較例と比較して説明する。各実施例、比較例及びその結果並びに対応する図の番号を表１に示す。又、送液する流量の時間当たりの変化を線グラフを用いて概念的に示す概念図を図７～図３１のクロマトグラム以外に示している。この線グラフにおいて、送液する流量の増加の増加率が一定の場合には、右肩上がりの直線で表される。増加率が途中で変化し、夫々が一定の増加率であるが互いに異なる増加率が含まれる場合には、右肩上がりの折れ線で表される。更に、増加率が連続して変化する場合には、曲線で表され、曲線は、増加率が工程の前半に大きく工程の後半に小さい場合には斜め上方向の凸状の曲線で表され、増加率が工程の前半に小さく工程の後半に大きい場合には斜め下方向に凹む凹状の曲線で表される。又、この線グラフにおいて、送液する流量の減少の減少率が一定の場合には、右肩下がりの直線で表される。減少率が途中で変化し、夫々が一定の減少率であるが互いに異なる減少率が含まれる場合には、右肩下がりの折れ線で表される。更に、減少率が連続して変化する場合には、曲線で表され、曲線は、減少率が工程の前半に小さく工程の後半に大きい場合には斜め上方向の凸状の曲線で表され、減少率が工程の前半に大きく工程の後半に小さい場合には斜め下方向に凹む凹状の曲線で表される。尚、送液する流量の時間当たりの増加及び減少がなく、流量が一定の場合には水平方向直線で表される。又、時間の経時的変化がなく流量が増加又は減少する場合には、垂直方向直線で表される。尚、表１及び以下の実施例において、単に「直線」及び「直線状」とは増加率又は減少率が一定であることを意味し、単に「曲線」及び「曲線状」とは増加率又は減少率が連続して変化することを意味している。

【0134】

【表1】

【実施例1】

【0135】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時として、処理時の流量での送液を開始し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した。その後、処理終了時に、送液の停止を、流量が処理時の流量から直線状に減少し、０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0136】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0137】

実施例１－１として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量を、２０ｍＬ／ｍｉｎから同一の減少率で（概念図で直線状に）減少させて１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。４００回目のサイクルで試料ピークが割れた（図７）。

【0138】

実施例１－２として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量を、２０ｍＬ／ｍｉｎから同一の減少率で（概念図で直線状に）減少させて２秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図８）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２６０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0139】

比較例１として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１２５回目のサイクルで試料ピークが割れ、２８０回目のサイクルでは試料ピークの形状が大きく崩れた（図９）。

【0140】

比較例２として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して１０秒後に処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２５０回目のサイクルで試料ピークが割れた（図１０）。

【0141】

比較例３として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して３秒後に処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１１）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１４５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0142】

比較例１では１２５回目のサイクルで分離カラムが劣化し、比較例２、比較例３では、それぞれ２５０回目、１４５回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらに対し、実施例１－１及び実施例１－２では、それぞれ４００回目、２６０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理準備時と処理終了時にかける時間を同じとした場合、処理終了時において処理時の流量から処理終了後の流量の０ｍＬ／ｍｉｎまで直線状に流量を減少させる、即ち同一の減少率で減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、処理準備時において処理準備前の流量の０ｍＬ／ｍｉｎから処理時の流量まで直線状に流量を増加させる、即ち同一の増加率で増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことを確認した。

【0143】

又、比較例２では２５０回目のサイクルで分離カラムが劣化し、実施例１－２では２６０回目のサイクルで分離カラムが劣化したことから、処理準備時において処理時の流量まで一定の時間をかけて直線的に流量を増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも、処理終了時において処理時の流量から上述の一定の時間より短い時間をかけて直線的に流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、高いことを確認した。

【実施例2】

【0144】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時として、処理時の流量での送液を開始し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した。その後、処理終了時に、送液の停止を、流量が処理時の流量から曲線を描くように減少し、或いは流量が処理時の流量から直線と曲線を描くように減少し、或いは流量が処理時の流量から勾配の異なる複数の直線を描くように減少し、流量が０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0145】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0146】

実施例２－３として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから同一の減少率で（概念図で直線状に）５秒間減少させ、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程、即ち送液停止時までの時間が短い程緩やかな勾配である曲線を描くように減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１２（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。４８０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0147】

実施例２－４として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程直線状に５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１２（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。７００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0148】

実施例２－５として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒間で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。７００回目のサイクルで試料ピークの形状が変化し始め、９００回目のサイクルでは試料ピークの割れが顕著になった（図１３）。

【0149】

実施例２－６として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に５秒間減少し、続いて前述の５秒間よりも緩やかな勾配で直線状に５秒間減少し、即ち減少させる所定の時間の前期に比べて後期に小さい減少率で、送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１４（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３８５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0150】

実施例２－７として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に５秒間減少し、続いて前述の５秒間よりも急な勾配で直線状に５秒間減少し、即ち減少させる所定の時間の後期に比べて前期に小さい減少率で、送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１４（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。４５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0151】

実施例２－８として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に６．７秒間減少し、続いて前述の６．７秒間よりも緩やかな勾配で直線状に３．３秒間減少し、即ち減少させる所定の時間の前期に比べて後期に小さい減少率で、送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１４（ｃ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３９０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0152】

実施例２－９として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に３．３秒間減少し、続いて前述の３．３秒間よりも急な勾配で直線状に３．４秒間減少し、続いて前述の３．４秒間よりも緩やかな勾配で直線状に３．３秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１４（ｄ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。６８０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0153】

実施例２－１０として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に３．３秒間減少し、続いて前述の３．３秒間よりも急な勾配で直線状に１．７秒間減少し、続いて前述の１．７秒間よりも緩やかな勾配で直線状に１．７秒間減少し、続いて前述の１．７秒間よりも緩やかな勾配で直線状に３．３秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１５（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。６５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0154】

実施例２－１１として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に３．３秒間減少し、続いて前述の３．３秒間よりも急な勾配で直線状に１．７秒間減少し、続いて前述の１．７秒間よりも急な勾配で直線状に１．７秒間減少し、続いて前述の１．７秒間よりも緩やかな勾配で直線状に３．３秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１５（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。６４０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0155】

実施例２－１２として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように４．４秒間減少し、続いて直線状に１．２秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように４．４秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１５（ｃ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。８９５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0156】

実施例２－１３として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に３．３秒間減少し、続いて前述の３．３秒間よりも緩やかな勾配で直線状に３．４秒間減少し、続いて前述の３．４秒間よりも急な勾配で直線状に３．３秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１５（ｄ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。４００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0157】

実施例２－３、実施例２－４では、それぞれ４８０回目、７００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとした場合、流量が処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことを確認した。

【0158】

又、実施例２－６、実施例２－７では、それぞれ３８５回目、４５０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとした場合、流量が処理時の流量に近い前半の方が、０ｍＬ／ｍｉｎに近い後半よりも緩やかな勾配であるように直線状に流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が、流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い後半の方が、処理時の流量に近い前半よりも緩やかな勾配であるように直線状に流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことを確認した。

【0159】

又、実施例２－８、実施例２－９では、それぞれ３９０回目、６８０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとした場合、緩やかな勾配で直線的に流量を減少させる部分が、処理時の流量に近い前部に入ることにより、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が、大きく向上することを確認した。

【0160】

又、実施例２－１０、実施例２－１１では、それぞれ６５０回目、６４０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとして、緩やかな勾配で直線的に流量を減少させる部分が、処理時の流量に近い前部と０ｍＬ／ｍｉｎに近い後部にある場合、分離カラムでのピーク形状を保つ効果はいずれも高く、前部と後部の間の中間部の勾配に変化があっても、分離カラムでのピーク形状を保つ効果には、あまり大きく影響しないことを確認した。

【0161】

又、実施例２－５、実施例２－１２では、それぞれ９００回目、８９５回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとした場合、送液ポンプの流量を下げる制御に、処理時の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配を持つ後部がある場合、分離カラムでのピーク形状を保つ効果はいずれも高く、前部と後部の間の中間部が直線状であっても曲線状であっても、分離カラムでのピーク形状を保つ効果には、大きく影響しないことを確認した。

【0162】

実施例２－９、実施例２－５では、それぞれ６８０回目、９００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時として送液停止にかける時間を同じとした場合、送液停止に用いる流量減少のための送液ポンプ制御のパターンを、直線状から、送液ポンプの流量が処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように減少する曲線状に変更することにより、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が大きく向上することを確認した。

【実施例3】

【0163】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時として、処理時の流量での送液を開始し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した。その後、処理終了時として、送液の停止を、流量が処理時の流量から曲線を描くように減少し、０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0164】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0165】

実施例３－１４として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程、即ち送液停止時までの時間が短い程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから５秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１６（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。５００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0166】

実施例３－１５として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎの処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように１秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから２秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１６（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0167】

実施例３－１４、実施例３－１５では、それぞれ５００回目、３００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。又、実施例２－５では、９００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、送液停止に用いる流量減少のための送液ポンプ制御のパターンを同じ曲線状として、送液停止にかける時間を変化させた場合、より長い時間の方が、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高いことを確認した。

【実施例4】

【0168】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した。その後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が処理時の流量から直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0169】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0170】

実施例４－１６として、処理準備時に、処理準備時の前半に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後処理準備時の後半に、流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３００回目のサイクルで試料ピークが割れた（図１７）。

【0171】

実施例４－１７として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから２．５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから５秒後に２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１８（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0172】

実施例４－１８として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから１．５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように１．５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから３秒後に処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図１８（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１７０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0173】

実施例４－１６、実施例４－１７、実施例４－１８では、それぞれ３００回目、２５０回目、１７０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、送液開始に用いる流量増加のための送液ポンプ制御のパターンを同じ曲線状として、処理準備時として送液開始にかける時間を変化させた場合、より長い時間の方が、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高いことを確認した。

【0174】

実施例４－１６では３００回目、比較例２では２５０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理準備時として送液開始にかける時間を同じとして、送液開始に用いる流量増加のための送液ポンプ制御のパターンを、直線状から、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように増加し、その後流量が処理時の流量に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように増加する曲線状に変更することにより、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が向上することを確認した。

【実施例5】

【0175】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が曲線を描くように減少して０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。又、分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフと送液ポンプを用いて、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して処理時の流量になるように送液し、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直線状に減少して０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0176】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0177】

実施例５－１９として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒後に２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった（図１９）。

【0178】

実施例５－２０として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して１０秒で処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に減少して１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２０（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。５００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0179】

実施例５－２１として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから１．５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように１．５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから３秒後に２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから１秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように１秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから２秒後に０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２０（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。４００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0180】

実施例５－２０では５００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。実施例５－１９では１０００回目のサイクルでも分離カラムの劣化は見られなかった。これらの結果から、処理準備時としての送液開始にかける時間を同じとして、送液開始に用いる流量増加のための送液ポンプ制御のパターンを、直線状から、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように増加し、その後流量が処理時の流量に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように増加する曲線状に変更することと同時に、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとして、送液停止に用いる流量減少のための送液ポンプ制御のパターンを、直線状から、送液ポンプの流量が処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように減少する曲線状に変更することにより、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が大きく向上することを確認した。

【0181】

実施例５－１９では１０００回目のサイクルでも分離カラムの劣化は見られなかった。実施例５－２１では４００回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、送液開始に用いる流量増加のための送液ポンプ制御のパターンを同じ曲線状として、処理準備時としての送液開始にかける時間を変化させ、加えて送液停止に用いる流量減少のための送液ポンプ制御のパターンを同じ曲線状として、処理終了時としての送液停止にかける時間を変化させた場合、送液開始にかける時間と送液停止にかける時間のいずれもより長い時間の方が、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高いことを確認した。

【実施例6】

【0182】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理時に、処理時の流量での送液を開始し、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、流量が部分的に曲線を描くように減少して０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0183】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0184】

実施例６－２２として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから１秒間減少し、流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに達した後直ちに流量が０ｍＬ／ｍｉｎになるように減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２１（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２５５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0185】

実施例６－２３として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに１０ｍＬ／ｍｉｎに減少し、その後０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１０ｍＬ／ｍｉｎから１秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２１（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１７５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0186】

実施例６－２２、実施例６－２３では、それぞれ２５５回目、１７５回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとした場合、流量が処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことを確認した。

【実施例7】

【0187】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が部分的に曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0188】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0189】

実施例７－２４として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから１秒間増加し、その後流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに達した後直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１秒後に２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクル（図２２（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１５５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0190】

実施例７－２５として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに１０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、その後処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１秒間増加するように、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１秒後に２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２２（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0191】

実施例７－２４、実施例７－２５では、それぞれ１５５回目、１５０回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理準備時としての送液開始にかける時間を同じとした場合、送液開始において流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、送液開始において流量が処理時の流量に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことを確認した。

【実施例8】

【0192】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、分離カラムに処理時の流量での送液を開始し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が曲線を描くように減少し、或いは流量が直線と曲線を描くように減少し、０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。又、分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、送液ポンプの流量が曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0193】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。送液ポンプ吐出側出口の圧力センサの値は、５．０ＭＰａであった。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。送液ポンプＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0194】

実施例８－２６として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理準備時の時間を０秒として、送液を行った。処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから２．２秒間減少し、その後直線状に０．６秒間減少し、その後流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．２秒間減少し、その後送液ポンプの流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１０ｍＬ／ｍｉｎから２．２秒間減少し、その後直線状に０．６秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．２秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２３（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。５５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0195】

実施例８－２７として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように２０ｍＬ／ｍｉｎから２．５秒間減少し、その後流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間減少し、その後送液ポンプの流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１０ｍＬ／ｍｉｎから２．５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２３（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。５５５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0196】

実施例８－２８として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから２．５秒間増加し、その後流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間増加し、その後送液ポンプの流量が１０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１０ｍＬ／ｍｉｎから２．５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の２０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように２．５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で２０ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量２０ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が２０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクル（図２３（ｃ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３３０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0197】

又、実施例８－２６、実施例８－２７では、それぞれ５５０回目、５５５回目のサイクルで分離カラムが劣化した。これらの結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとして、処理時の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、処理時の流量の半分の流量に近い程緩やかな勾配を持つ後部がある曲線と、処理時の流量の半分の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配を持つ後部を持つ曲線が組み合わされた曲線を描くような制御により送液ポンプが停止される場合、それぞれの曲線の中間部が直線状であっても曲線状であっても、分離カラムでのピーク形状を保つ効果には、大きく影響しないことを確認した。

【実施例9】

【0198】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎになる制御を行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを２０分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0199】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１８Ｂの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝４５／５５）を１０００ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径１０μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２００ｍｍ、長さ３０ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽であるウォーターバスの設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝４５／５５溶液を使用した。試料注入容量は２５００μＬとした。送液ポンプＰＵ７１８Ｂは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１８Ｂの改造品とした。

【0200】

実施例９－２９として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の１０００ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒後に１０００ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量１０００ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から２０分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が１０００ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１０００ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が１０００ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２４）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、２０分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった。

【0201】

比較例４として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の１０００ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量１０００ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から２０分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が１０００ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクル（図２５（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、２０分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１３０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0202】

比較例５として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して１０秒後に処理時の流量の１０００ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量１０００ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から２０分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が１０００ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２５（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、２０分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３００回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【実施例10】

【0203】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が処理時の流量から曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎになる制御を行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0204】

クロマトグラムの採取は、分析用液体クロマトグラフＬＣ８００（ジーエルサイエンス社）を使用し、分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する送液ポンプの改造品を用いて移動相（アセトニトリル／水＝２０／８０，ｖ／ｖ）を０．４ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクチル化シリカゲル（ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎＳｗｉｆｔ（登録商標） Ｃ８、１．９μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２．１ｍｍ、長さ２ｃｍの分離カラムを使用した。分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する分離カラム恒温槽の設定温度は４０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＭＵ７０１、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（１００ｍｇ／Ｌ）のアセトニトリル／水＝２０／８０溶液を使用した。試料注入容量は０．５μＬとした。分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する送液ポンプは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＬＣ８００に付属する送液ポンプの改造品とした。

【0205】

実施例１０－３０として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の０．４ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０．４ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量０．４ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．４ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０．４ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が０．４ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２６）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった。

【0206】

比較例６として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の０．４ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量０．４ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．４ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクル（図２７（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１２０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0207】

比較例７として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加し、１０秒後に処理時の流量の０．４ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量０．４ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．４ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２７（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２９０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【実施例11】

【0208】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行った。試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が処理時の流量から曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎになる制御を行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0209】

クロマトグラムの採取は、分析用液体クロマトグラフＬＣ８００（ジーエルサイエンス社）を使用し、分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する送液ポンプの改造品を用いて移動相（アセトニトリル／水＝２０／８０，ｖ／ｖ）を０．０５ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径１．０ｍｍ、長さ１ｃｍの分離カラムを使用した。分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する分離カラム恒温槽の設定温度は４０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＭＵ７０１、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（１００ｍｇ／Ｌ）のアセトニトリル／水＝２０／８０溶液を使用した。試料注入容量は０．５μＬとした。分析用液体クロマトグラフＬＣ８００に付属する送液ポンプは、処理準備時、処理終了時等に用いる流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＬＣ８００に付属する送液ポンプの改造品とした。

【0210】

実施例１１－３１として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の０．０５ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒後に０．０５ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量０．０５ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０．０５ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎから１０秒後に０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２８）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった。

【0211】

比較例８として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直ちに処理時の流量の０．０５ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、即ち、処理準備時の時間を０秒として、処理時に、流量０．０５ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクル（図２９（ａ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０５回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0212】

比較例９として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して１０秒後に処理時の流量の０．０５ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量０．０５ｍＬ／ｍｉｎで液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が０．０５ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図２９（ｂ））として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。２７０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【実施例12】

【0213】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた液体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプ吐出側出口に設置された圧力センサで検出される圧力が０．０ＭＰａから曲線を描くように増加して処理時の流量に対応する圧力になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む液体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプに設置された圧力センサで検出される圧力が曲線を描くように減少して０．０ＭＰａになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0214】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍの改造品（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を送液ポンプ吐出側出口の圧力が５．０ＭＰａに対応する流量で送液した。分離カラムはオクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、５μｍ、ジーエルサイエンス社）を充填した内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。ＰＵ７１４Ｍは、処理準備時、処理終了時等に用いる圧力利用流量制御用プログラムの解像度を上げるため、タイムテーブルの最小時間単位を、０．０１ｍｉｎから０．０１ｓに変更して、更にレスポンスは圧力利用流量制御用プログラムに迅速に応答し、スムーズで迅速な駆動が出来るように対応して、ＰＵ７１４Ｍの改造品とした。

【0215】

実施例１２－３２として、処理準備時に、送液ポンプ吐出側出口に設置された圧力センサで検出される圧力が０．０ＭＰａに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０．０ＭＰａから５秒間増加し、その後圧力が５．０ＭＰａに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、圧力が０．０ＭＰａから１０秒後に５．０ＭＰａになるように送液を行い、処理時に、圧力５．０ＭＰａに対応する流量で液体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から３分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプに設置された圧力センサで検出される圧力が５．０ＭＰａに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように５．０ＭＰａから５秒間減少し、その後圧力が０．０ＭＰａに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、圧力が５．０ＭＰａから１０秒後に０．０ＭＰａになるように行う操作を１回のサイクル（図３０）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、３分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１０００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった。

【0216】

実施例１２－３２では１０００回目のサイクルでも分離カラムの劣化は見られなかった。実施例５－１９においても、１０００回目のサイクルでも分離カラムの劣化は見られなかった。これらの結果から、処理準備時に、送液開始に用いる流量増加のための送液ポンプ制御のパターンを、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように増加し、その後流量が処理時の流量に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように増加することと同時に、処理終了時に、送液停止に用いる流量減少のための送液ポンプ制御のパターンを、送液ポンプの流量が処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように減少することにより得られる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果と、処理準備時としての送液開始にかける時間と処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとして、処理準備時に、送液開始に用いる圧力増加のための送液ポンプ制御のパターンを、送液ポンプに設置された圧力センサで検出される圧力が０．０ＭＰａに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように増加し、その後圧力が処理時の流量に対応した圧力に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように増加することと同時に、送液停止に用いる圧力減少のための送液ポンプ制御のパターンを、送液ポンプに設置された圧力センサで検出される圧力が処理時の流量に対応した圧力に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように減少し、その後圧力が０．０ＭＰａに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように減少することにより得られる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果は、同等であることを確認した。

【実施例13】

【0217】

設定温度で平衡化した分離カラム恒温槽内に分離カラムを取り付けた超臨界流体クロマトグラフの送液ポンプを用いて、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから曲線を描くように増加して処理時の流量になるように送液し、処理時に、分離カラムと送液ポンプを含む超臨界流体クロマトグラフ全体が処理時の流量で平衡化した後、試料の注入を行い、試料ピークの溶出を確認した後、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が曲線を描くように減少して０ｍＬ／ｍｉｎになるように制御する操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。１回のサイクルごとにクロマトグラムを３分間採取し、何回目のサイクルで試料ピークの形状が悪化し、分離カラムが劣化したかを確認した。試料ピークの形状が悪化したとする判定の基準は、１本のピークに、明らかに２つ以上のピークトップが現れたと目視で判別出来ることとした。試料ピークの形状が割れたことで、分離カラムが劣化したと判断した。

【0218】

超臨界流体クロマトグラムの採取は、超臨界流体クロマトグラフ（超臨界流体クロマトグラフィー装置）を使用し、送液ポンプを用いて移動相（二酸化炭素／メタノール）を１５ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。移動相中のメタノールの比率を増やすグラジエントは、メタノールの比率を５％から１０分間で４０％になるように行った。分離カラムは粒子径５μｍのジエチルアミノ化シリカゲルを合成、充填した内径１０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使用した。分離カラム恒温槽の設定温度は４０℃とした。検出には、ＵＶ検出器を使用し、検出波長は２５４ｎｍとした。検出器の下流に設置した背圧調整弁の調整圧力は１０．０ＭＰａとした。送液ポンプ吐出側出口に設置された圧力センサで検出された圧力は、１１．０ＭＰａであった。試料には、カフェイン（１００ｍｇ／ｍＬ）のメタノール／水＝５０／５０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0219】

実施例１３－３３として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように０ｍＬ／ｍｉｎから５秒間増加し、その後流量が処理時の流量の１５ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間増加し、即ち送液の開始を、流量が０ｍＬ／ｍｉｎから１０秒後に１５ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量１５ｍＬ／ｍｉｎで超臨界流体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行った。試料注入から１０分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が１５ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように１５ｍＬ／ｍｉｎから５秒間減少し、その後流量が０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように５秒間減少し、即ち送液の停止を、流量が１５ｍＬ／ｍｉｎから１０秒で０ｍＬ／ｍｉｎになるように行う操作を１回のサイクル（図３１）として繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、１０分間行い、試料ピークの溶出を確認した。３００回目のサイクルでも試料ピークは割れなかった。

【0220】

比較例１０として、処理準備時に、送液ポンプの流量が０ｍＬ／ｍｉｎから直線状に増加して１０秒後に処理時の流量の１５ｍＬ／ｍｉｎになるように送液を行い、処理時に、流量１５ｍＬ／ｍｉｎで超臨界流体クロマトグラフ全体が平衡化した後、試料の注入を行い、試料注入から１０分後に、処理終了時に、送液の停止を、送液ポンプの流量が１５ｍＬ／ｍｉｎから直ちに０ｍＬ／ｍｉｎになるように、即ち、処理終了時の時間を０秒として行う操作を１回のサイクルとして繰り返し行った。クロマトグラムの採取は、試料の注入時から開始し、１０分間行い、試料ピークの溶出を確認した。１５０回目のサイクルで試料ピークが割れた。

【0221】

以上の結果より、以下のことがわかる。即ち、実施例１－１及び比較例２の結果から、処理準備時と処理終了時を同じ時間とした場合、送液停止において処理時の流量から０ｍＬ／ｍｉｎまで直線状に流量を下げることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、送液開始において０ｍＬ／ｍｉｎから処理時の流量まで直線状に流量を上げることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことがわかった。

【0222】

又、実施例２の結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとした場合、処理時の流量に近い部分で緩やかな勾配の直線状或いは処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線状に流量を下げるように送液ポンプを制御すると、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高まる傾向があることがわかった。

【0223】

又、実施例２の結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとした場合、処理時の流量に近い部分で緩やかな勾配の直線状或いは処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線状に流量を下げるように送液ポンプを制御し、更に０ｍＬ／ｍｉｎに近い部分で緩やかな勾配の直線状或いは０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配の曲線状に流量を下げるように送液ポンプを制御すると、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が更に高まる傾向があることがわかった。

【0224】

又、実施例２の結果から、処理終了時にかける時間を同じとした場合、送液ポンプの流量を下げる制御に、処理時の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配を持つ後部がある場合、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が更に高まる傾向があることがわかった。

【0225】

又、実施例２と実施例３の結果から、処理終了時の送液ポンプの流量を減少させる制御に用いる曲線のパターンを同じとし、処理終了時としての送液停止にかける時間を変化させた場合、より長い時間の方が、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高いことがわかった。

【0226】

又、実施例４の結果から、処理準備時の、送液ポンプの流量を増加させる制御に用いる曲線のパターンを同じとし、処理準備時の時間を変化させた場合、より長い時間の方が、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が高いことがわかった。

【0227】

又、実施例１と実施例２の結果から、処理終了時の時間を同じとした場合、送液ポンプの流量を処理時の流量から０ｍＬ／ｍｉｎに減少させる制御を直線状に行った結果に比べ、送液ポンプの流量を処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線を描くように減少させ、その後０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配の曲線を描くように減少させた結果は、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が９００／４００＝２．２５倍であった。

【0228】

又、比較例２及び比較例３と実施例４の結果から、処理準備時の時間を同じとした場合、送液ポンプの流量を０ｍＬ／ｍｉｎから処理時の流量に増加させる制御を直線状に行った結果に比べ、送液ポンプの流量を０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配の曲線を描くように増加させ、その後処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線を描くように増加させた結果は、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が３００／２５０＝１．２倍、１７０／１４５＝１．１７倍と、約１．２倍であった。

【0229】

又、実施例５の結果から、送液開始と送液停止にかける時間即ち処理準備時と処理終了時を同じ時間とした場合、処理準備時に送液ポンプの流量を０ｍＬ／ｍｉｎから処理時の流量に増加させる制御を直線状に行い、且つ処理終了時に送液ポンプの流量を処理時の流量から０ｍＬ／ｍｉｎに減少させる制御を直線状に行った結果に比べ、処理準備時に送液ポンプの流量を０ｍＬ／ｍｉｎから処理時の流量に増加させる制御を、送液ポンプの流量を０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配の曲線を描くように増加させ、その後処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線を描くように増加させ、且つ処理終了時に送液ポンプの流量を処理時の流量から０ｍＬ／ｍｉｎに減少させる制御を、送液ポンプの流量を処理時の流量に近い程緩やかな勾配の曲線を描くように減少させ、その後０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配の曲線を描くように減少させた結果は、分離カラムでのピーク形状を保つ効果が１０００／５００＝２倍以上であった。

【0230】

又、実施例６の結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとした場合、処理時の流量に近い程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、０ｍＬ／ｍｉｎに近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を減少させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことが分かった。

【0231】

又、実施例７の結果から、処理準備時としての送液開始にかける時間を同じとした場合、０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果の方が、処理時の流量に近づく程緩やかな勾配である曲線を描くように流量を増加させることによる、分離カラムでのピーク形状を保つ効果よりも高いことが分かった。

【0232】

又、実施例８の結果から、処理終了時としての送液停止にかける時間を同じとし、処理時の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、処理時の流量の半分の流量に近い程緩やかな勾配を持つ後部がある曲線と、処理時の流量の半分の流量に近い程緩やかな勾配を持つ前部、又、０ｍＬ／ｍｉｎに近い程緩やかな勾配を持つ後部を持つ曲線が２つ組み合わされた曲線を描くように流量を減少させる場合、それぞれの曲線の中間部が直線状であっても曲線状であっても、分離カラムでのピーク形状を保つ効果には、大きく影響しないことが分かった。

【0233】

又、実施例１～８にて内径２０ｍｍ、長さ５ｃｍの分離カラムを使い確認した、送液停止と送液開始に用いた送液ポンプの流量の制御による分離カラムでのピーク形状を保つ効果は、実施例９、実施例１０、実施例１１の結果から、分離カラムの内径が１．０ｍｍから２００ｍｍ、分離カラムの長さが１ｃｍから３０ｃｍの範囲内の分離カラムについて、同様に得られることが分かった。

【0234】

又、実施例５の結果と実施例１２の結果から、送液停止と送液開始に用いた送液ポンプの流量の制御による分離カラムでのピーク形状を保つ効果と、送液停止と送液開始に用いた送液ポンプの吐出側出口に設置された圧力センサで検出される圧力の制御による分離カラムでのピーク形状を保つ効果は、送液ポンプの制御方法以外の条件が同じである場合には、同等であることが分かった。

【0235】

上記の実施例において、分離カラム劣化の判定に統一基準として、試料中の成分のピークの２本以上へのピーク割れを採用したが、分離カラムの劣化により現れるピーク形状の変化はこれに限定されるものではなく、ピークのテーリングやリーディング等も含み、本発明の効果として、ピークのテーリングやリーディング等を生じさせる分離カラムの劣化を防ぐことも可能である。

【産業上の利用可能性】

【0236】

以上のような本発明によれば、特に液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーにおいて、分離カラム内における充填剤の充填状態の変化を抑制し、分離カラムの分離性能の低下を抑制することが可能となったので、分離カラムを用いた物質の分析、分取、分離を必要とする多くの産業で有効に使用することが出来る。

【符号の説明】

【0237】

１ 液体クロマトグラフ
１０ 液体クロマトグラフ制御装置
１７ 移動相容器
１７１ 移動相
２ 分離カラム
３０ 試料注入装置
５ 送液装置
５１ 送液ポンプ
５２ 送液ポンプ制御装置
６ 配管
６１ 流路

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】