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特許7498889ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を抑制するペプチドおよびその利用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-05
(45)【発行日】2024-06-13
(54)【発明の名称】ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を抑制するペプチドおよびその利用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/47 20060101AFI20240606BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20240606BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240606BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240606BHJP
【ＦＩ】
C07K14/47 ZNA
A61K38/17
A61P43/00 105
C12N15/12
【請求項の数】
3
(21)【出願番号】P 2020013463
(22)【出願日】2020-01-30
(65)【公開番号】P2021120355
(43)【公開日】2021-08-19
【審査請求日】2023-01-06
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）国立研究開発法人科学技術振興機構戦略的創造事業［細胞外微粒子］（課題名：シグナルペプチド：細胞外微粒子機能の新規マーカー）の委託研究、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(73)【特許権者】
【識別番号】000003034
【氏名又は名称】東亞合成株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100117606
【弁理士】
【氏名又は名称】安部 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100136423
【弁理士】
【氏名又は名称】大井 道子
(72)【発明者】
【氏名】ベイリー小林 菜穂子
(72)【発明者】
【氏名】吉田 徹彦
【審査官】小田 浩代
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２００９／０９３６９２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００２－５０５６７３（ＪＰ，Ａ）
【文献】Anjos S. et al.，J Biol Chem，2002年，Vol. 277，pp. 46478-46486
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＴＬＡ４（cytotoxic T lymphocyte antigen-4）と、Ｂ７タンパク質であって、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方のタンパク質との結合を抑制する人為的に合成された合成ペプチドであって、配列番号３４～３６のうちのいずれかに示すアミノ酸配列からなる、合成ペプチド。
【請求項2】
ＣＴＬＡ４（cytotoxic T lymphocyte antigen-4）と、Ｂ７タンパク質であって、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方のタンパク質との結合を抑制するための組成物であって、薬学上許容され得る少なくとも一種の担体と、
配列番号３４～３６のうちのいずれかに示すアミノ酸配列からなる、合成ペプチドと、
を含む、組成物。
【請求項3】
インビトロにおいてＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質であって、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方のタンパク質との結合を抑制する方法であって、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７－１またはＢ７－２とが共存する系に対して、請求項１に記載の合成ペプチドを少なくとも一回供給することを包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を抑制するペプチドおよびその利用に関する。詳しくは、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を抑制する構成のアミノ酸配列を備える合成ペプチドおよびその利用に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、がんの治療方法の一つとして、生体の免疫監視機構の働きを利用する、いわゆる「免疫療法」が着目されている。「免疫療法」に関する基礎研究および臨床研究が盛んに行われている。
免疫監視機構は、がん化した細胞（がん細胞、腫瘍細胞）を異物として認識し、除去することができる。このような免疫監視機構の働きによって、がん細胞の増殖、ひいては腫瘍組織の拡大が抑制および阻止され得る。免疫監視機構ががん細胞を除去するに際しては、種々の免疫細胞が関与している。なかでも、Ｔ細胞は、腫瘍細胞を除去して腫瘍組織の拡大を阻害する主体となり得る。Ｔ細胞は、がんの免疫療法に関する今日の諸研究の主なターゲットとされている。
免疫監視機構は、がん化した細胞（がん細胞、腫瘍細胞）を異物として認識し、除去することができる。このような免疫監視機構の働きによって、がん細胞の増殖、ひいては腫瘍組織の拡大が抑制および阻止され得る。免疫監視機構ががん細胞を除去するに際しては、種々の免疫細胞が関与している。なかでも、Ｔ細胞は、腫瘍細胞を除去して腫瘍組織の拡大を阻害する主体となり得る。Ｔ細胞は、がんの免疫療法に関する今日の諸研究の主なターゲットとされている。
【0003】
ところで、Ｔ細胞の活性化は、例えばＴ細胞受容体（T cell receptor；ＴＣＲ）および補助刺激受容体を介したシグナルによって制御されている。例えば腫瘍抗原を提示する抗原提示細胞（樹状細胞等）が、ＴＣＲを介して腫瘍抗原の情報をＴ細胞に伝達するとき、抗原提示細胞上のＢ７タンパク質（例えば、Ｂ７－１：ＣＤ８０、Ｂ７－２：ＣＤ８６）がＴ細胞上の補助刺激受容体の１つであるＣＤ２８と結合する。そして、Ｔ細胞に活性化シグナルが伝達される。
一方、Ｔ細胞は、他の補助刺激受容体としてcytotoxic T lymphocyte antigen-4（ＣＴＬＡ４）を発現している。ＣＴＬＡ４は、Ｂ７－１およびＢ７－２と結合し得る。ＣＴＬＡ４は細胞内ドメインとして抑制性モチーフを有しているため、上記結合によって、Ｔ細胞に抑制性のシグナルを発生させる。そして、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２との結合によってＴ細胞の活性化が抑制されると、細胞傷害性Ｔ細胞の増殖が抑制される。これによって、腫瘍細胞の除去が阻害され得る。そして、このことは、腫瘍組織の拡大を促す要因となり得る。
一方、Ｔ細胞は、他の補助刺激受容体としてcytotoxic T lymphocyte antigen-4（ＣＴＬＡ４）を発現している。ＣＴＬＡ４は、Ｂ７－１およびＢ７－２と結合し得る。ＣＴＬＡ４は細胞内ドメインとして抑制性モチーフを有しているため、上記結合によって、Ｔ細胞に抑制性のシグナルを発生させる。そして、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２との結合によってＴ細胞の活性化が抑制されると、細胞傷害性Ｔ細胞の増殖が抑制される。これによって、腫瘍細胞の除去が阻害され得る。そして、このことは、腫瘍組織の拡大を促す要因となり得る。
【0004】
ところで、ＣＴＬＡ４は、今日のがんの免疫療法における重要なターゲットとなっている。特許文献１では、抗ＣＴＬＡ４抗体の投与によって、一部の腫瘍の増殖が抑制されることが確認されている。そして、臨床において、抗ＣＴＬＡ４抗体が治療薬として使用されている（特許文献１、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】ＷＯ００／３２２３１
【非特許文献】
【0006】
【文献】CTLA-4 and PD-1/PD-L1 Blockade: New Immunotherapeutic Modalities with Durable Clinical Benefit in Melanoma Patients, 2013, Clinical Cancer Research, 19, 5300-5309
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかしながら、治療薬としての抗ＣＴＬＡ４抗体は、極めて高価である。そのため、当該治療薬による治療によって、例えば、がん医療にかかるコストが深刻な問題となっている。
【0008】
そこで本発明は、高価な抗体を使用しないで、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を抑制し得る技術、即ち、Ｔ細胞の表面に発現するＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を阻害することによって、Ｔ細胞の活性化抑制および細胞傷害性Ｔ細胞の増殖抑制を回避することを実現し得る比較的安価なペプチド医薬を提供することを課題（目的）として創出されたものである。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者は、Ｔ細胞の膜タンパク質であって、Ｔ細胞の機能を抑制し得るタンパク質に着目した。
そして、驚くべきことに、上記のような膜タンパク質であるＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を備えた合成ペプチドが、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を阻害することを見出し、本発明を完成するに至った。
そして、驚くべきことに、上記のような膜タンパク質であるＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を備えた合成ペプチドが、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を阻害することを見出し、本発明を完成するに至った。
【0010】
即ち、ここで開示される合成ペプチドは、ＣＴＬＡ４（cytotoxic T lymphocyte antigen-4）と、Ｂ７タンパク質であって、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方（以下、本明細書においては単に「Ｂ７タンパク質」ともいう。）との結合を抑制する人為的に合成された合成ペプチドである。
当該ペプチドは、ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を抑制するＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列を備える。
上記ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列は、以下の（１）～（３）に示すアミノ酸配列：
（１）ＴＩＭ３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）のシグナルペプチド（signal peptide；ＳＰ）を構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＴＩＭ３－ＳＰ関連配列；
（２）ＬＡＧ３（Lymphocyte Activation Gene-3）のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＬＡＧ３－ＳＰ関連配列；および、
（３）ＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列；
のうちのいずれかである。
好ましい一態様では、ここで開示される合成ペプチドは、総アミノ酸残基数が１００以下である。製造コスト、合成のしやすさ、取り扱い性の観点からは、総アミノ酸残基数が８０以下（例えば、７０以下、６０以下、５０以下、４０以下）であるものがさらに好ましい。
当該ペプチドは、ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を抑制するＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列を備える。
上記ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列は、以下の（１）～（３）に示すアミノ酸配列：
（１）ＴＩＭ３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）のシグナルペプチド（signal peptide；ＳＰ）を構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＴＩＭ３－ＳＰ関連配列；
（２）ＬＡＧ３（Lymphocyte Activation Gene-3）のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＬＡＧ３－ＳＰ関連配列；および、
（３）ＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された改変アミノ酸配列からなるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列；
のうちのいずれかである。
好ましい一態様では、ここで開示される合成ペプチドは、総アミノ酸残基数が１００以下である。製造コスト、合成のしやすさ、取り扱い性の観点からは、総アミノ酸残基数が８０以下（例えば、７０以下、６０以下、５０以下、４０以下）であるものがさらに好ましい。
【0011】
好ましい一態様では、ここで開示される合成ペプチドは、上記ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列が、配列番号１～１５のうちのいずれかに示すアミノ酸配列である。
【0012】
好ましい一態様では、ここで開示される合成ペプチドは、配列番号３４～３６のうちのいずれかに示すアミノ酸配列を有することを特徴とする。
【0013】
また、本発明は、ここで開示されるいずれかの合成ペプチド（ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド）と、薬学上許容され得る少なくとも一種の担体とを備える、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合を抑制する組成物を提供する。
かかる組成物は、ここで開示される合成ペプチドを含むことにより、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制剤としての利用することができる。
かかる組成物は、ここで開示される合成ペプチドを含むことにより、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制剤としての利用することができる。
【0014】
また、本発明は、インビトロまたはインビボにおいてＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質であって、Ｂ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を抑制する方法を提供する。
当該方法は、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７－１またはＢ７－２とが共存する系に対して、上記合成ペプチドを少なくとも一回供給すること、を包含する。
かかる構成の方法では、ここで開示される合成ペプチドを供給することによって、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合を抑制することができる。
当該方法は、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７－１またはＢ７－２とが共存する系に対して、上記合成ペプチドを少なくとも一回供給すること、を包含する。
かかる構成の方法では、ここで開示される合成ペプチドを供給することによって、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【発明を実施するための形態】
【0016】
以下、本発明の好適な実施形態を説明する。本明細書において特に言及している事項（例えばここで開示される合成ペプチドの一次構造や鎖長）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えばペプチドの化学合成法、細胞培養技法、ペプチドを成分とする組成物の調製に関するような一般的事項）は、細胞工学、生理学、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、遺伝学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、アミノ酸を１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。
本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
【0017】
また、本明細書において「合成ペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみ独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成あるいは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造され、所定の組成物中で安定して存在し得るペプチド断片をいう。ここで「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されないが、典型的には全アミノ酸残基数が概ね１００以下のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
なお、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、常に左側がＮ末端側であり右側がＣ末端側である。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
なお、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、常に左側がＮ末端側であり右側がＣ末端側である。
【0018】
本明細書において所定のアミノ酸配列に対して「改変アミノ酸配列」とは、当該所定のアミノ酸配列が有する機能（即ち、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合抑制性）を損なうことなく、１個から数個（典型的には９個以下、好ましくは５個以下）のアミノ酸残基、例えば、１個、２個または３個のアミノ酸残基が置換、欠失または付加（挿入）されて形成されたアミノ酸配列をいう。
例えば、１個、２個または３個のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列：例えばリジン残基とアルギニン残基との相互置換）、あるいは、所定のアミノ酸配列について１個、２個または３個のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列等は、本明細書でいうところの改変アミノ酸配列に包含される典型例である。
従って、ここで実施例として開示される合成ペプチドには、各配列番号のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列で構成される合成ペプチドに加え、各配列番号のアミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が置換（例えば、上記の同類置換）、欠失又は付加された改変アミノ酸配列であって、同様にＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を示すアミノ酸配列からなる合成ペプチドを包含する。
例えば、１個、２個または３個のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列：例えばリジン残基とアルギニン残基との相互置換）、あるいは、所定のアミノ酸配列について１個、２個または３個のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列等は、本明細書でいうところの改変アミノ酸配列に包含される典型例である。
従って、ここで実施例として開示される合成ペプチドには、各配列番号のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列で構成される合成ペプチドに加え、各配列番号のアミノ酸配列において１個、２個または３個のアミノ酸残基が置換（例えば、上記の同類置換）、欠失又は付加された改変アミノ酸配列であって、同様にＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を示すアミノ酸配列からなる合成ペプチドを包含する。
【0019】
ここで開示される人為的に合成される合成ペプチドは、Ｂ７タンパク質との結合を抑制すること（即ち、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性）が本発明者によって見出された天然には存在しない短鎖のペプチドであり、以下の（１）～（３）に示すアミノ酸配列；
（１）ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、
（２）ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列、および、
（３）ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列
のうちのいずれかを備えることで特徴付けられるペプチドである。
（１）ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、
（２）ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列、および、
（３）ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列
のうちのいずれかを備えることで特徴付けられるペプチドである。
【0020】
ここで、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列とは、ＴＩＭ３（T-cell immunoglobulin and mucin domain 3）を構成するタンパク質の、シグナルペプチド（signal peptide；ＳＰ）を構成するアミノ酸配列またはその改変アミノ酸配列のことをいう。
ＴＩＭ３は、典型的には、典型的には３０１程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤＱ０）。上掲の非特許文献１には、ＴＩＭ３はＴ細胞表面に発現しており、Ｔ細胞の機能を抑制し得ることが記載されている。
また、ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列とは、ＬＡＧ３（Lymphocyte Activation Gene-3）を構成するタンパク質の、ＳＰを構成するアミノ酸配列またはその改変アミノ酸配列のことをいう。
ＬＡＧ３は、典型的には、典型的には５２５程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１８６２７）。上掲の非特許文献１には、ＴＩＭ３はＴ細胞表面に発現しており、Ｔ細胞の機能を抑制し得ることが記載されている。
ＴＩＭ３は、典型的には、典型的には３０１程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤＱ０）。上掲の非特許文献１には、ＴＩＭ３はＴ細胞表面に発現しており、Ｔ細胞の機能を抑制し得ることが記載されている。
また、ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列とは、ＬＡＧ３（Lymphocyte Activation Gene-3）を構成するタンパク質の、ＳＰを構成するアミノ酸配列またはその改変アミノ酸配列のことをいう。
ＬＡＧ３は、典型的には、典型的には５２５程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１８６２７）。上掲の非特許文献１には、ＴＩＭ３はＴ細胞表面に発現しており、Ｔ細胞の機能を抑制し得ることが記載されている。
【0021】
ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列とは、ＣＴＬＡ４（cytotoxic T lymphocyte antigen-4）を構成するタンパク質の、ＳＰを構成するアミノ酸配列またはその改変アミノ酸配列のことをいう。
ＣＴＬＡ４は、典型的には２２３程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１６４１０）。上掲の特許文献１および非特許文献１には、ＣＴＬＡ４はＴ細胞表面に発現しており、例えば抗原提示細胞（例えば樹状細胞等）表面に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６（Ｂ７－１／Ｂ７－２）と結合することによって、例えば過剰なＴ細胞の活性化を抑制する負の調節因子として機能することが記載されている。
ＣＴＬＡ４は、典型的には２２３程度のアミノ酸残基からなる膜タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１６４１０）。上掲の特許文献１および非特許文献１には、ＣＴＬＡ４はＴ細胞表面に発現しており、例えば抗原提示細胞（例えば樹状細胞等）表面に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６（Ｂ７－１／Ｂ７－２）と結合することによって、例えば過剰なＴ細胞の活性化を抑制する負の調節因子として機能することが記載されている。
【0022】
しかしながら、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３およびＣＴＬＡ４のシグナルペプチドそれ自体が、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を有することは見出されておらず、かかるシグナルペプチドのアミノ酸配列を合成し、人為的に合成されたＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチドが得られることは、本願出願当時、全く予想されていないことであった。
【0023】
例えば、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３およびＣＴＬＡ４をコードする遺伝子（ｃＤＮＡである場合を包含する。）の情報ならびにアミノ酸配列情報は、種々の公的な国際機関の知識ベース（データベース）にアクセスすることにより取得することができる。例えば、Universal Protein Resource (UniProt)において、種々の生物種由来のＴＩＭ３、ＬＡＧ３およびＣＴＬＡ４の全アミノ酸配列情報ならびにシグナルペプチドのアミノ酸配列情報を得ることができる。当該データベースによると、少なくともヒト、イヌ、マウス、ラット、ラビット、ブタ等の哺乳類におけるＴＩＭ３、ＬＡＧ３およびＣＴＬＡ４の情報を取得することができる。
【0024】
本発明の実施に当たって好ましく使用される上記（１）に係るＴＩＭ３－ＳＰ関連配列は、例えば配列番号１～３にそれぞれ示されている。
具体的には、配列番号１のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成する合計２１アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号１には、ヒト由来のＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
具体的には、配列番号１のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成する合計２１アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号１には、ヒト由来のＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
【0025】
例えば、配列番号２のアミノ酸配列は、マウス(Mus musculus)由来のＴＩＭ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＶＩＭＯ）のシグナルペプチドを構成する合計１９アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
例えば、配列番号３のアミノ酸配列は、ラット(Rattus norvegicus )由来のＴＩＭ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０Ｃ０Ｋ５）のシグナルペプチドを構成する合計２１アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
例えば、配列番号３のアミノ酸配列は、ラット(Rattus norvegicus )由来のＴＩＭ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０Ｃ０Ｋ５）のシグナルペプチドを構成する合計２１アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
【0026】
本発明の実施に当たって好ましく使用される上記（２）に係るＬＡＧ３－ＳＰ関連配列は、例えば配列番号４～７にそれぞれ示されている。
具体的には、配列番号４のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成する合計２２アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号４には、ヒト由来のＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
例えば、上記（２）に係るＬＡＧ３－ＳＰ関連配列としては、配列番号５に示すアミノ酸配列を使用してもよい。配列番号５のアミノ酸配列は、上記配列番号４のアミノ酸配列のＮ末端に、６アミノ酸残基が結合したアミノ酸配列である。
具体的には、配列番号４のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成する合計２２アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号４には、ヒト由来のＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
例えば、上記（２）に係るＬＡＧ３－ＳＰ関連配列としては、配列番号５に示すアミノ酸配列を使用してもよい。配列番号５のアミノ酸配列は、上記配列番号４のアミノ酸配列のＮ末端に、６アミノ酸残基が結合したアミノ酸配列である。
【0027】
また、例えば、配列番号６のアミノ酸配列は、マウス(Mus musculus)由来のＬＡＧ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６１７９０）のシグナルペプチドを構成する合計２３アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
例えば、配列番号７のアミノ酸配列は、ラット(Rattus norvegicus )由来のＬＡＧ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ５ＢＫ５４）のシグナルペプチドを構成する合計２３アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
例えば、配列番号７のアミノ酸配列は、ラット(Rattus norvegicus )由来のＬＡＧ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ５ＢＫ５４）のシグナルペプチドを構成する合計２３アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
【0028】
本発明の実施に当たって好ましく使用される上記（３）に係るＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列は、例えば配列番号８～１５にそれぞれ示されている。
具体的には、配列番号８のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号８には、ヒト由来のＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
具体的には、配列番号８のアミノ酸配列は、ヒト(Homo sapiens)由来のＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
なお、上記配列番号８には、ヒト由来のＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を示したが、当該配列はあくまでも例示であり、利用可能なアミノ酸配列はこれに限定されない。
【0029】
例えば、配列番号９のアミノ酸配列は、イヌ(Canis familiaris)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＸＳＩ１）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１０のアミノ酸配列は、マウス(Mus musculus)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０９７９３）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
さらに、配列番号１１のアミノ酸配列は、ラビット(Oryctilagus cuniculus)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－４２０７２）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１２のアミノ酸配列は、ブタ(Sus scrofa)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＭＹＸ７）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１０のアミノ酸配列は、マウス(Mus musculus)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０９７９３）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
さらに、配列番号１１のアミノ酸配列は、ラビット(Oryctilagus cuniculus)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－４２０７２）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１２のアミノ酸配列は、ブタ(Sus scrofa)由来のＣＴＬＡ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＭＹＸ７）のシグナルペプチドを構成する合計３５アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
【0030】
なお、ＣＴＬＡ４をコードする遺伝子（ｃＤＮＡである場合を包含する。）の情報ならびにアミノ酸配列情報を、National Center for Biotechnology information (NCBI)において取得することができる。
例えば、配列番号１３のアミノ酸配列は、ナイトモンキー(Aotus trivirgatus)由来のＣＴＬＡ４（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＫ３７５３０．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１４のアミノ酸配列は、アヌビスヒヒ(Papio anubis)由来のＣＴＬＡ４（ＮＰ＿００１１０６１０４．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
さらに、配列番号１５のアミノ酸配列は、アカゲザル(Macaca mulatta)由来のＣＴＬＡ４（ＮＰ＿００１０３８２０４．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
上記配列番号８～１５に示すアミノ酸配列は、いずれもＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列として好ましく採用され得る。
例えば、配列番号１３のアミノ酸配列は、ナイトモンキー(Aotus trivirgatus)由来のＣＴＬＡ４（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＫ３７５３０．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
また、配列番号１４のアミノ酸配列は、アヌビスヒヒ(Papio anubis)由来のＣＴＬＡ４（ＮＰ＿００１１０６１０４．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
さらに、配列番号１５のアミノ酸配列は、アカゲザル(Macaca mulatta)由来のＣＴＬＡ４（ＮＰ＿００１０３８２０４．１）のシグナルペプチドを構成する合計３７アミノ酸残基からなるアミノ酸配列である。
上記配列番号８～１５に示すアミノ酸配列は、いずれもＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列として好ましく採用され得る。
【0031】
ここで開示される合成ペプチドは、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限りにおいて、上記ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列以外のその他の配列（アミノ酸残基）部分を含み得る。該その他の配列部分は、例えば、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の機能（即ち、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性）を、より効果的に実現し得る補助的ペプチド配列であってよい。
【0032】
例えば、補助的ペプチド配列は、合成ペプチドを所定の溶媒に対する溶解性あるいは分散性を向上させることを目的として、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列に付加されるものであってよい。
上記所定の溶媒としては、特に限定されないが、例えば、水、生理食塩水およびリン酸緩衝液（ＰＢＳ）等の緩衝液、細胞培養液、アルコール（エタノール等）水溶液、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ならびにメタノールおよびエタノール等の低級アルコール等の有機溶媒が挙げられる。合成ペプチドを溶解あるいは分散させる溶媒に応じて、補助的ペプチド配列のアミノ酸配列を適宜決定することができる。補助的ペプチド配列は、例えば複数個（典型的には、例えば２０個以下、１０個以下、５個以下）の親水性アミノ酸残基を含むものであってよく、複数個（典型的には、例えば２０個以下、１０個以下、５個以下）の疎水性アミノ酸残基を含むものであってもよい。また、上記所定の溶媒への溶解性あるいは分散性を好ましく設定するために、親水性アミノ酸残基および疎水性アミノ酸残基を組み合わせて補助的ペプチド配列を設計してもよい。
なお、親水性アミノ酸としては、例えば極性アミノ酸（例えば極性無電荷アミノ酸、酸性アミノ酸、および塩基性アミノ酸）が挙げられる。疎水性アミノ酸残基としては、非極性アミノ酸）が挙げられる。
上記所定の溶媒としては、特に限定されないが、例えば、水、生理食塩水およびリン酸緩衝液（ＰＢＳ）等の緩衝液、細胞培養液、アルコール（エタノール等）水溶液、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ならびにメタノールおよびエタノール等の低級アルコール等の有機溶媒が挙げられる。合成ペプチドを溶解あるいは分散させる溶媒に応じて、補助的ペプチド配列のアミノ酸配列を適宜決定することができる。補助的ペプチド配列は、例えば複数個（典型的には、例えば２０個以下、１０個以下、５個以下）の親水性アミノ酸残基を含むものであってよく、複数個（典型的には、例えば２０個以下、１０個以下、５個以下）の疎水性アミノ酸残基を含むものであってもよい。また、上記所定の溶媒への溶解性あるいは分散性を好ましく設定するために、親水性アミノ酸残基および疎水性アミノ酸残基を組み合わせて補助的ペプチド配列を設計してもよい。
なお、親水性アミノ酸としては、例えば極性アミノ酸（例えば極性無電荷アミノ酸、酸性アミノ酸、および塩基性アミノ酸）が挙げられる。疎水性アミノ酸残基としては、非極性アミノ酸）が挙げられる。
【0033】
補助的アミノ酸配列は、例えば、細胞膜透過性ペプチド（cell penetrating peptide；ＣＰＰ）として機能するアミノ酸配列（即ち、ＣＰＰ関連配列）であってもよい。
ＣＰＰ関連配列としては、従来公知の種々のＣＰＰが挙げられる。例えば、３個以上、好ましくは５個以上であって１１個以下、好ましくは９個以下のアルギニン残基からなる、いわゆるポリアルギニン（Ｒｎ）は、ここで用いられるＣＰＰとして好適である。その他、公知である種々のＣＰＰを採用することができる。
ＣＰＰは、複数個の塩基性アミノ酸を含むことから極性（即ち、塩基性）が高く、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の極性溶媒（例えば水、ＰＢＳ、生理食塩水等）への溶解性を高めることができる。
ＣＰＰ関連配列としては、従来公知の種々のＣＰＰが挙げられる。例えば、３個以上、好ましくは５個以上であって１１個以下、好ましくは９個以下のアルギニン残基からなる、いわゆるポリアルギニン（Ｒｎ）は、ここで用いられるＣＰＰとして好適である。その他、公知である種々のＣＰＰを採用することができる。
ＣＰＰは、複数個の塩基性アミノ酸を含むことから極性（即ち、塩基性）が高く、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の極性溶媒（例えば水、ＰＢＳ、生理食塩水等）への溶解性を高めることができる。
【0034】
特に限定するものではないが、配列番号１６～３２にＣＰＰとして機能するアミノ酸配列の好適例を示す。具体的には、以下のとおりである。
配列番号１６のアミノ酸配列は、ＦＧＦ２（塩基性線維芽細胞増殖因子）由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳ（核小体局在シグナル：Nucleolar localization signal）に対応する。
配列番号１７のアミノ酸配列は、核小体タンパク質の１種（ＡｐＬＬＰ）由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号１８のアミノ酸配列は、ＨＳＶ－１（単純ヘルペスウイルス タイプ１）のタンパク質（γ（１）３４．５）由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号１９のアミノ酸配列は、ＨＩＣ（human I-mfa domain-containing protein）のｐ４０タンパク質由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２０のアミノ酸配列は、ＭＤＶ（Ｍａｒｅｋ病ウイルス）のＭＥＱタンパク質由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２１のアミノ酸配列は、アポトーシスを抑制するタンパク質であるSurvivin- deltaEx3由来の合計１７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２２のアミノ酸配列は、血管増殖因子であるAngiogenin由来の合計７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２３のアミノ酸配列は、核リンタンパク質であってｐ５３腫瘍抑制タンパク質と複合体を形成するＭＤＭ２由来の合計８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２４のアミノ酸配列は、ベータノダウイルスのタンパク質であるＧＧＮＮＶα由来の合計９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２５のアミノ酸配列は、ＮＦ－κＢ誘導性キナーゼ（ＮＩＫ）由来の合計７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２６のアミノ酸配列は、Nuclear VCP-like protein由来の合計１５アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２７のアミノ酸配列は、核小体タンパク質であるｐ１２０由来の合計１８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２８のアミノ酸配列は、ＨＶＳ（ヘルペスウイルスsaimiri）のＯＲＦ５７タンパク質由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２９のアミノ酸配列は、細胞内情報伝達に関与するプロテインキナーゼの１種であるヒト内皮細胞に存在するキナーゼ２（LIM Kinase 2）の第４９１番目のアミノ酸残基から第５０３番目のアミノ酸残基までの合計１３アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３０のアミノ酸配列は、ＩＢＶ（トリ伝染性気管支炎ウイルス：avian infectious bronchitis virus）のＮタンパク質（nucleocapsid protein）に含まれる合計８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３１のアミノ酸配列は、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス：Human Immunodeficiency Virus）のＴＡＴに含まれるタンパク質導入ドメイン由来の合計９アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
配列番号３２のアミノ酸配列は、上記ＴＡＴを改変したタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ４）の合計１１アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
配列番号３３のアミノ酸配列は、ショウジョウバエ（Drosophila）の変異体であるAntennapediaのＡＮＴ由来の合計１８アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
これらのうち、特にＮｏＬＳやＴＡＴに関連するアミノ酸配列（又はその改変アミノ酸配列）が好ましい。例えば、配列番号２９や配列番号３０に示すようなＮｏＬＳ関連のＣＰＰ配列、或いは配列番号３２、３３のＴＡＴやＡＮＴ関連のＣＰＰ配列は、ここで開示される合成ペプチドを構築するために好適に用いることができる。
配列番号１６のアミノ酸配列は、ＦＧＦ２（塩基性線維芽細胞増殖因子）由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳ（核小体局在シグナル：Nucleolar localization signal）に対応する。
配列番号１７のアミノ酸配列は、核小体タンパク質の１種（ＡｐＬＬＰ）由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号１８のアミノ酸配列は、ＨＳＶ－１（単純ヘルペスウイルス タイプ１）のタンパク質（γ（１）３４．５）由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号１９のアミノ酸配列は、ＨＩＣ（human I-mfa domain-containing protein）のｐ４０タンパク質由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２０のアミノ酸配列は、ＭＤＶ（Ｍａｒｅｋ病ウイルス）のＭＥＱタンパク質由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２１のアミノ酸配列は、アポトーシスを抑制するタンパク質であるSurvivin- deltaEx3由来の合計１７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２２のアミノ酸配列は、血管増殖因子であるAngiogenin由来の合計７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２３のアミノ酸配列は、核リンタンパク質であってｐ５３腫瘍抑制タンパク質と複合体を形成するＭＤＭ２由来の合計８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２４のアミノ酸配列は、ベータノダウイルスのタンパク質であるＧＧＮＮＶα由来の合計９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２５のアミノ酸配列は、ＮＦ－κＢ誘導性キナーゼ（ＮＩＫ）由来の合計７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２６のアミノ酸配列は、Nuclear VCP-like protein由来の合計１５アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２７のアミノ酸配列は、核小体タンパク質であるｐ１２０由来の合計１８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２８のアミノ酸配列は、ＨＶＳ（ヘルペスウイルスsaimiri）のＯＲＦ５７タンパク質由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２９のアミノ酸配列は、細胞内情報伝達に関与するプロテインキナーゼの１種であるヒト内皮細胞に存在するキナーゼ２（LIM Kinase 2）の第４９１番目のアミノ酸残基から第５０３番目のアミノ酸残基までの合計１３アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３０のアミノ酸配列は、ＩＢＶ（トリ伝染性気管支炎ウイルス：avian infectious bronchitis virus）のＮタンパク質（nucleocapsid protein）に含まれる合計８アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３１のアミノ酸配列は、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス：Human Immunodeficiency Virus）のＴＡＴに含まれるタンパク質導入ドメイン由来の合計９アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
配列番号３２のアミノ酸配列は、上記ＴＡＴを改変したタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ４）の合計１１アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
配列番号３３のアミノ酸配列は、ショウジョウバエ（Drosophila）の変異体であるAntennapediaのＡＮＴ由来の合計１８アミノ酸配列から成る膜透過性モチーフに対応する。
これらのうち、特にＮｏＬＳやＴＡＴに関連するアミノ酸配列（又はその改変アミノ酸配列）が好ましい。例えば、配列番号２９や配列番号３０に示すようなＮｏＬＳ関連のＣＰＰ配列、或いは配列番号３２、３３のＴＡＴやＡＮＴ関連のＣＰＰ配列は、ここで開示される合成ペプチドを構築するために好適に用いることができる。
【0035】
上記のようなＣＰＰ関連配列を補助的ペプチド配列として備えることによって、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列を上記所定の溶媒に溶解および分散しやすくすることができる。また、例えばＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列を細胞（培養細胞、培養組織等）等に供給する際、当該ペプチド配列が対象となる細胞の細胞膜を透過しやすくなり得る。例えば、ここで開示される合成ペプチドがＣＰＰ関連配列を備えることによって、外部から対象となる細胞へとアプローチしやすくなり得る。あるいは、当該合成ペプチドが細胞膜において局在し、ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質との結合を、より効果的に抑制し得る。
【0036】
ここで開示される合成ペプチドが、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列および補助的ペプチド配列をともに備える場合、補助的ペプチド配列は、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の、相対的にＮ末端側あるいはＣ末端側に配置されていればよい。例えば、補助的ペプチド配列は、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の、Ｎ末端側あるいはＣ末端側に、隣接して配置されていることが好ましい。
【0037】
具体的には、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列と補助的ペプチド配列との間に、両配列部分に包含されないアミノ酸残基が存在しないことが好ましい。あるいは、リンカーが存在していても、上記２つの配列を連結させるリンカーとしては、１０個以下（より好ましくは５個以下、例えば１個または２個のアミノ酸残基）であることが好ましい。
【0038】
ここで開示される合成ペプチドは、ペプチド鎖を構成する全アミノ酸残基数が１００以下であることが適当であり、８０以下が好ましく、７０以下（例えば、好ましくは４０～６０程度のペプチド鎖、４０個以下のペプチド鎖）が好ましい。このような鎖長の短いペプチドは、化学合成が容易であり、容易に合成ペプチドを提供することができる。特に限定されるものではないが、免疫原（抗原）になり難いという観点から直鎖状又はヘリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。
【0039】
合成したペプチド全体のアミノ酸配列に対するＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列の占める割合は、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限り特に限定されないが、当該割合は概ね３５個数％以上が望ましく、４０個数％以上が望ましく、４５個数％以上が望ましく、５０個数％以上が望ましく、５５個数％以上が望ましく、６０個数％以上が好ましい。
合成したペプチド全体のアミノ酸配列に対するＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列および補助的ペプチド配列の占める割合は、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限り特に限定されないが、当該割合は概ね６０個数％以上が望ましく、７０個数％以上が望ましく、８０個数％以上が望ましく、９０個数％以上が好ましい。
なお、全てのアミノ酸残基がＬ型アミノ酸であるものが好ましいが、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部または全部がＤ型アミノ酸に置換されているものであってもよい。
合成したペプチド全体のアミノ酸配列に対するＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列および補助的ペプチド配列の占める割合は、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限り特に限定されないが、当該割合は概ね６０個数％以上が望ましく、７０個数％以上が望ましく、８０個数％以上が望ましく、９０個数％以上が好ましい。
なお、全てのアミノ酸残基がＬ型アミノ酸であるものが好ましいが、ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部または全部がＤ型アミノ酸に置換されているものであってもよい。
【0040】
好ましくは、ここで開示される合成ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されているものが好ましい。アミノ酸残基（典型的にはペプチド鎖のＣ末端アミノ酸残基）のカルボキシル基のアミド化により、合成ペプチドの構造安定性（例えばプロテアーゼ耐性）を向上させることができる。例えば、合成ペプチドのＣ末端をＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性ペプチド配列部分が構成するとき、該配列部分のＣ末端アミノ酸残基をアミド化することが好ましい。一方、例えば合成ペプチドが補助的ペプチド配列を含み、該合成ペプチドのＣ末端を補助的ペプチド配列部分が構成するとき、該配列部分のＣ末端アミノ酸残基をアミド化することが好ましい。好ましい他の一態様では、例えば配列番号３４～３６のアミノ酸配列を有する合成ペプチドのＣ末端アミノ酸残基をアミド化して、合成ペプチドの安定性を向上することができる。
【0041】
ここで開示される合成ペプチドは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethoxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される合成ペプチドは、市販のペプチド合成機を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
ここで開示される合成ペプチドは、市販のペプチド合成機を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
【0042】
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて合成ペプチドを生合成により作製してもよい。即ち、所望する合成ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のポリヌクレオチド（典型的にはＤＮＡ）を合成する。そして、合成したポリヌクレオチド（ＤＮＡ）と該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の合成ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の合成ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
【0043】
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち合成ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の（株）セルフリーサイエンスから入手可能）が市販されている。
【0044】
ここで開示される合成ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造（合成）することができる。即ち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、合成ペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、ＤＮＡ合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド（一本鎖）を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖ＤＮＡを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段（典型的にはＰＣＲ）を採用して目的の二本鎖ＤＮＡを得ることができる。また、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡの形態であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、合成ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、合成ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
【0045】
ここで開示される合成ペプチドは、ＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合を抑制する用途の組成物の有効成分として好適に使用し得る。なお、合成ペプチドは、上記結合抑制性を失わない限りにおいて塩の形態であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る合成ペプチドの酸付加塩を使用することができる。従って、本明細書および特許請求の範囲に記載の「ペプチド」は、かかる塩形態のものを包含する。
【0046】
ここで開示される組成物は、有効成分である合成ペプチドの活性を失わない限りにおいて、使用形態に応じて薬学（医薬）上許容され得る種々の担体を含み得る。例えば、希釈剤、賦形剤等としてペプチド医薬において一般的に使用される担体を適用し得る。
ここで開示される組成物の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。あるいはリポソームであってもよい。また、組成物に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等が挙げられる。
組成物（薬剤）の典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水または適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、合成ペプチド（主成分）および種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の組成物（薬剤）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
ここで開示される組成物の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。あるいはリポソームであってもよい。また、組成物に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等が挙げられる。
組成物（薬剤）の典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水または適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、合成ペプチド（主成分）および種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の組成物（薬剤）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
【0047】
ここで開示される組成物（合成ペプチド）のＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性は、例えば以下のような方法で評価することができる。
ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性の評価方法は、おおまかにいって、基材表面にＣＴＬＡ４を配置することと、ＣＴＬＡ４に対してここで開示される組成物（合成ペプチド）を供給することと、Ｂ７タンパク質を供給することと、ＣＴＬＡ４に結合したＢ７タンパク質を検出することとを包含する。
ＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性の評価方法は、おおまかにいって、基材表面にＣＴＬＡ４を配置することと、ＣＴＬＡ４に対してここで開示される組成物（合成ペプチド）を供給することと、Ｂ７タンパク質を供給することと、ＣＴＬＡ４に結合したＢ７タンパク質を検出することとを包含する。
【0048】
当該方法では、まず初めに、基材表面にＣＴＬＡ４を配置する。配置する手段は特に限定されず、種々のコーティング手段、および固相化手段を用いることができる。例えば、基材表面にＣＴＬＡ４の溶液あるいは分散液等を所定の期間接触させることによって、基材表面にＣＴＬＡ４を配置することができる。その条件は特に限定されないが、例えば４℃の温度条件で一晩程度の期間において基材表面とＣＴＬＡ４を含む溶液（または分散液）とを接触させることが好ましい。
基材としては、その表面にＣＴＬＡ４を配置できるものであれば、特に限定されないが、例えば樹脂製およびガラス製の基材を使用することができる。例えば、市販されるマイクロプレート、ディッシュ、マイクロビーズ等を好適に使用し得る。例えば基材表面におけるＣＴＬＡ４の占有率（即ち、配置面積、コーティング率、存在率）を向上させるために、必要に応じて基材の表面に改質処理を行ってもよい。
なお、基材表面におけるＣＴＬＡ４を配置させる程度は、特に限定されない。
基材としては、その表面にＣＴＬＡ４を配置できるものであれば、特に限定されないが、例えば樹脂製およびガラス製の基材を使用することができる。例えば、市販されるマイクロプレート、ディッシュ、マイクロビーズ等を好適に使用し得る。例えば基材表面におけるＣＴＬＡ４の占有率（即ち、配置面積、コーティング率、存在率）を向上させるために、必要に応じて基材の表面に改質処理を行ってもよい。
なお、基材表面におけるＣＴＬＡ４を配置させる程度は、特に限定されない。
【0049】
次いで、ＣＴＬＡ４に対して、適当量の、ここで開示される組成物（合成ペプチド）を、少なくとも一回供給する。１回当たりの供給量および供給回数は、ＣＴＬＡ４が配置された基材の種類、基材表面における存在率、温度条件等によって異なり得るため特に限定されない。例えば、ＣＴＬＡ４とのインキュベート時における合成ペプチドの最終濃度は、概ね０．１μＭ以上１００μＭ以下の範囲内、好ましくは１μＭ以上５０μＭ以下（例えば２．５μＭ以上２５μＭ以下）の範囲内となることが好ましい。
【0050】
ＣＴＬＡ４に対するＢ７タンパク質の供給は、上記のようにＣＴＬＡ４に対してここで開示される組成物（合成ペプチド）を供給した後に行ってもよく、当該組成物（合成ペプチド）の供給と同時に行ってもよい。
例えばＣＴＬＡ４に対して組成物（合成ペプチド）を供給した後にＢ７タンパク質を供給する場合は、合成ペプチドが存在する状態でＢ７タンパク質を供給することが好ましい。
例えばＣＴＬＡ４に対して合成ペプチドと、Ｂ７タンパク質とを同時に供給する場合は、あらかじめ合成ペプチドとＢ７タンパク質とを所定の期間接触させておいてもよい。
Ｂ７タンパク質の、１回当たりの供給量および供給回数は、ＣＴＬＡ４が配置された基材の種類、基材表面における占有率、温度条件等によって異なり得るため特に限定されない。
例えばＣＴＬＡ４に対して組成物（合成ペプチド）を供給した後にＢ７タンパク質を供給する場合は、合成ペプチドが存在する状態でＢ７タンパク質を供給することが好ましい。
例えばＣＴＬＡ４に対して合成ペプチドと、Ｂ７タンパク質とを同時に供給する場合は、あらかじめ合成ペプチドとＢ７タンパク質とを所定の期間接触させておいてもよい。
Ｂ７タンパク質の、１回当たりの供給量および供給回数は、ＣＴＬＡ４が配置された基材の種類、基材表面における占有率、温度条件等によって異なり得るため特に限定されない。
【0051】
ＣＴＬＡ４に結合したＢ７タンパク質を検出する方法としては、特に限定されないが、典型的には、例えばＢｉｏｔｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ結合を検出すること、および免疫学的検出方法等が挙げられる。例えばＢｉｏｔｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ結合に基づいてＣＴＬＡ４に結合したＢ７タンパク質を検出することが好ましい。例えば、Ｂｉｏｔｉｎ標識されたＢ７タンパク質を用い、さらに蛍光標識あるいは酵素標識（例えば、ｈｏｒｓｅｒａｄｄｉｓｈ由来ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識およびアルカリフォスファターゼ標識等）されたＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎを好適に使用することができる。
なお、特に限定するものではないが、下記の実施例では、当該結合抑制評価方法の一例が示されている。
なお、特に限定するものではないが、下記の実施例では、当該結合抑制評価方法の一例が示されている。
【0052】
ここで開示される組成物（合成ペプチド）を用いて、生体内（インビボ）、または、生体外（インビトロ）においてＣＴＬＡ４と、Ｂ７タンパク質との結合を抑制する方法が提供される。当該方法では、ＣＴＬＡ４とＢ７タンパク質とが共存する系に対して、ここで開示される組成物（合成ペプチド）を少なくとも一回供給することを包含する。
上記「系」は、インビボにおいては、例えば種々の組織、臓器、器官、血液、およびリンパ液等を包含する。上記「系」は、インビトロにおいては、例えば生体から摘出された種々の細胞塊、組織、臓器、器官、血液、およびリンパ液ならびに、セルライン等を包含する。
上記「系」は、インビボにおいては、例えば種々の組織、臓器、器官、血液、およびリンパ液等を包含する。上記「系」は、インビトロにおいては、例えば生体から摘出された種々の細胞塊、組織、臓器、器官、血液、およびリンパ液ならびに、セルライン等を包含する。
【0053】
ここで開示される組成物は、従来のペプチド製剤と同様、その形態および目的に応じた方法や用量で使用することができる。例えば、液剤として、静脈内、筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内への注射によって患者(即ち生体)の患部（典型的には悪性腫瘍組織）に所望する量だけ投与することができる。あるいは、錠剤等の固体形態のものや軟膏等のゲル状若しくは水性ジェリー状のものを、直接所定の組織（即ち腫瘍細胞を含む組織や器官等の患部）に投与することができる。あるいは、錠剤等の固体形態のものは経口投与することができる。経口投与の場合は、消化管内での消化酵素分解を抑止すべくカプセル化や保護（コーティング）材の適用が好ましい。
【0054】
あるいは、生体外（インビトロ）において培養しているＣＴＬＡ４発現細胞とＢ７タンパク質発現細胞に対し、例えばこれらの細胞の共培養下で、ここで開示される組成物の適当量（即ち合成ペプチドの適当量）を、少なくとも１回、対象とする培養細胞（組織等）の培地に供給するとよい。１回当たりの供給量および供給回数は、培養する細胞の種類、細胞密度（培養開始時の細胞密度）、継代数、培養条件、培地の種類、等の条件によって異なり得るため特に限定されないが、培地中の合成ペプチド濃度が概ね０．５μＭ以上１００μＭ以下の範囲内、好ましくは３μＭ以上５０μＭ以下（例えば６．２５μＭ以上２５μＭ以下）の範囲内となるように、１回、２回またはそれ以上の複数回添加することが好ましい。
なお、上記ＣＴＬＡ４発現細胞としては、例えばＴ細胞（培養細胞株、又は生体から摘出された細胞塊又はＴ細胞を含む組織又は器官である場合を包含する。）、培養細胞に対して従来公知の遺伝子操作（例えばトランスフェクション等）することによって作製されたＣＴＬＡ４発現細胞等が挙げられる。また、上記Ｂ７タンパク質発現細胞としては、抗原提示細胞（培養細胞株、又は生体から摘出された細胞塊又はこれらの細胞を含む組織又は器官である場合を包含する。）、培養細胞に対して従来公知の遺伝子操作（例えばトランスフェクション等）することによって作製されたＢ７タンパク質発現細胞等が挙げられる。
なお、上記ＣＴＬＡ４発現細胞としては、例えばＴ細胞（培養細胞株、又は生体から摘出された細胞塊又はＴ細胞を含む組織又は器官である場合を包含する。）、培養細胞に対して従来公知の遺伝子操作（例えばトランスフェクション等）することによって作製されたＣＴＬＡ４発現細胞等が挙げられる。また、上記Ｂ７タンパク質発現細胞としては、抗原提示細胞（培養細胞株、又は生体から摘出された細胞塊又はこれらの細胞を含む組織又は器官である場合を包含する。）、培養細胞に対して従来公知の遺伝子操作（例えばトランスフェクション等）することによって作製されたＢ７タンパク質発現細胞等が挙げられる。
【0055】
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
【0056】
＜試験例１：ペプチド合成＞
表１に示す６種のサンプルペプチドを市販のペプチド合成機を用いて製造した。具体的には次のとおりである。
サンプル１は、ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列として配列番号８に示されるヒトＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３４）。
サンプル２は、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列として配列番号１に示されるヒトＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３５）。
サンプル３は、ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列として配列番号５に示されるヒトＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３６）。
表１に示す６種のサンプルペプチドを市販のペプチド合成機を用いて製造した。具体的には次のとおりである。
サンプル１は、ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列として配列番号８に示されるヒトＣＴＬＡ４のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３４）。
サンプル２は、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列として配列番号１に示されるヒトＴＩＭ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３５）。
サンプル３は、ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列として配列番号５に示されるヒトＬＡＧ３のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、および、補助的アミノ酸配列として配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）をともに備える合成ペプチドである（配列番号３６）。
【0057】
サンプル４は、ヒトＰＤ－１のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列である（配列番号３７）。
サンプル５は、ヒトＰＤ－１のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列のタンデムリピート配列からなる合成ペプチドである（配列番号３８）。
サンプル６は、サンプル１～３の補助的アミノ酸配列である配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）からなる合成ペプチドである（配列番号３９）。
サンプル５は、ヒトＰＤ－１のシグナルペプチドを構成するアミノ酸配列のタンデムリピート配列からなる合成ペプチドである（配列番号３８）。
サンプル６は、サンプル１～３の補助的アミノ酸配列である配列番号２９に示すアミノ酸配列（ＬＩＭキナーゼ２）からなる合成ペプチドである（配列番号３９）。
【0058】
【表1】
【0059】
上記サンプルペプチドは、市販のペプチド合成機を用いてマニュアルどおりに固相合成法（Ｆｍｏｃ法）を実施することによって、合成された。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。なお、表１に記載した合成ペプチドは、配列番号３４～３９に示すアミノ酸配列を有するペプチドにおいて、Ｃ末端アミノ酸残基のカルボキシル基（－ＣＯＯＨ）はアミド化（－ＣＯＮＨ２）された。
合成したサンプルペプチドは、ＰＢＳに溶かされ、ストック液（濃度２．５ｍＭ）が調製された。
合成したサンプルペプチドは、ＰＢＳに溶かされ、ストック液（濃度２．５ｍＭ）が調製された。
【0060】
＜試験例２：ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合抑制性の評価試験＞
上記試験例１で合成した６種類のサンプルペプチドについて、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合抑制性を評価した。
本試験において、以下の表２に示すように、使用するサンプルペプチドの種類とペプチド濃度に応じて試験例２－１～２－９を設定した。また、試験例２－１０として、ペプチド無添加区を設定した。以上合計１０の区分の試験を、以下のとおり実施した。なお、表２の「Ｎｏ．」欄に記載される数字「１～１０」は、本試験例２においては「試験例２－１～２－１０」を表している。また、上記各例の試験ウェル数（ｎ）は、いずれも２に設定した。
上記試験例１で合成した６種類のサンプルペプチドについて、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合抑制性を評価した。
本試験において、以下の表２に示すように、使用するサンプルペプチドの種類とペプチド濃度に応じて試験例２－１～２－９を設定した。また、試験例２－１０として、ペプチド無添加区を設定した。以上合計１０の区分の試験を、以下のとおり実施した。なお、表２の「Ｎｏ．」欄に記載される数字「１～１０」は、本試験例２においては「試験例２－１～２－１０」を表している。また、上記各例の試験ウェル数（ｎ）は、いずれも２に設定した。
【0061】
【表2】
【0062】
－試験例２－１－
試験例２－１では、現在市場において入手可能な以下のキット：
ＣＴＬＡ４ Ｂ７－１（Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製、ＢＰＳ＃７２００９）
を用いた。上記キットのデータシートに記載された“ＡＳＳＡＹ ＰＲＯＴＯＣＯＬ”に基づき、本試験例を実施した。簡潔な手順を以下に示す。
まず、９６穴プレートの各ウェルに、ＣＴＬＡ４をコーティングした。具体的には、９６穴プレートの各ウェルに、ＣＴＬＡ４溶液（２μｇ／ｍｌ）を分注し、当該プレートを４℃で一晩インキュベートした。
次いで、ＣＴＬＡ４溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
次いで、ブロッキングを行った。具体的には、キットに含まれるＢｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを各ウェルに分注し、プレートを室温で１時間インキュベートした。
試験例２－１では、現在市場において入手可能な以下のキット：
ＣＴＬＡ４ Ｂ７－１（Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製、ＢＰＳ＃７２００９）
を用いた。上記キットのデータシートに記載された“ＡＳＳＡＹ ＰＲＯＴＯＣＯＬ”に基づき、本試験例を実施した。簡潔な手順を以下に示す。
まず、９６穴プレートの各ウェルに、ＣＴＬＡ４をコーティングした。具体的には、９６穴プレートの各ウェルに、ＣＴＬＡ４溶液（２μｇ／ｍｌ）を分注し、当該プレートを４℃で一晩インキュベートした。
次いで、ＣＴＬＡ４溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
次いで、ブロッキングを行った。具体的には、キットに含まれるＢｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを各ウェルに分注し、プレートを室温で１時間インキュベートした。
【0063】
次いで、サンプル１の溶液を各ウェルに分注し、プレートを室温で１時間インキュベートした。
次いで、Ｂｉｏｔｉｎ標識Ｂ７－１溶液（１．２５ｎｇ／ｍｌ）を、９６穴プレートの各ウェルに分注し、当該プレートを室温で２時間インキュベートした。
上記インキュベーションの後、ペプチド溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
その後、上記のようにブロッキングを行った。
次いで、Ｂｉｏｔｉｎ標識Ｂ７－１溶液（１．２５ｎｇ／ｍｌ）を、９６穴プレートの各ウェルに分注し、当該プレートを室温で２時間インキュベートした。
上記インキュベーションの後、ペプチド溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
その後、上記のようにブロッキングを行った。
【0064】
上記ブロッキングの後、各ウェルにＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ溶液（１，０００倍希釈液）を分注し、プレートを室温で４５分間インキュベートした。
上記インキュベーションの後、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
その後、１０分間のブロッキングを行った。
上記インキュベーションの後、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ溶液を除去し、各ウェルを洗浄した。
その後、１０分間のブロッキングを行った。
【0065】
次いで、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを除去し、上記キットに含まれる化学発光試薬を各ウェルに分注し、各ウェルにおける化学発光強度をｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒで測定した。
【0066】
各ウェルにおける化学発光強度の平均値から、ブランクウェルにおける化学発光強度の平均値を減じた値を試験例２－１の測定値とした。
【0067】
－試験例２－２－
サンプル１のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－２を行った。
－試験例２－３－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－３を行った。
－試験例２－４－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－４を行った。
－試験例２－５－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル３のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－５を行った。
－試験例２－６－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル４のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－６を行った。
－試験例２－７－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル５のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－７を行った。
－試験例２－８－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－８を行った。
－試験例２－９－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－９を行った。
－試験例２－１０－
サンプルペプチドを添加しなかった以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－１０を行った。
サンプル１のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－２を行った。
－試験例２－３－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－３を行った。
－試験例２－４－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－４を行った。
－試験例２－５－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル３のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－５を行った。
－試験例２－６－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル４のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－６を行った。
－試験例２－７－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル５のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－７を行った。
－試験例２－８－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－８を行った。
－試験例２－９－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－９を行った。
－試験例２－１０－
サンプルペプチドを添加しなかった以外は、試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例２－１０を行った。
【0068】
上記得られた試験例２－１～２－１０についての測定値を、図１に示す。
図１に示されるように、サンプルペプチドを添加しなかった試験例２－１０では、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合が確認された。一方、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合は、今回実施したペプチド濃度（５μＭ、１０μＭ）のいずれにおいても、サンプル１、サンプル２、サンプル３のいずれかを添加することによって、顕著に抑制されることが確認された（試験例２－１～試験例２－５）。一方、サンプル４およびサンプル５のいずれにも、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合の抑制作用は確認されなかった（試験例２－６，試験例２－７）。さらに、各サンプル１～５の、補助的配列であるＬＩＭＫ２のアミノ酸配列からなる合成ペプチドであるサンプル６は、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合を抑制しなかった（試験例２－８，試験例２－９）。
上記結果より、サンプル１～３にそれぞれ示されるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、およびＬＡＧ３－ＳＰ関連配列は、優れたＣＴＬＡ４－Ｂ７－１結合抑制性を有することが確認された。
図１に示されるように、サンプルペプチドを添加しなかった試験例２－１０では、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合が確認された。一方、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合は、今回実施したペプチド濃度（５μＭ、１０μＭ）のいずれにおいても、サンプル１、サンプル２、サンプル３のいずれかを添加することによって、顕著に抑制されることが確認された（試験例２－１～試験例２－５）。一方、サンプル４およびサンプル５のいずれにも、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合の抑制作用は確認されなかった（試験例２－６，試験例２－７）。さらに、各サンプル１～５の、補助的配列であるＬＩＭＫ２のアミノ酸配列からなる合成ペプチドであるサンプル６は、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合を抑制しなかった（試験例２－８，試験例２－９）。
上記結果より、サンプル１～３にそれぞれ示されるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、およびＬＡＧ３－ＳＰ関連配列は、優れたＣＴＬＡ４－Ｂ７－１結合抑制性を有することが確認された。
【0069】
＜試験例３：ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合抑制性の評価試験＞
上記試験例１で合成した６種類のサンプルペプチドについて、ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合抑制性を評価した。
本試験において、上掲の表２に示すように、使用するサンプルペプチドの種類とペプチド濃度に応じて試験例３－１～３－９を設定した。また、試験例３－１０として、ペプチド無添加区を設定した。以上合計１０の区分の試験を、以下のとおり実施した。なお、表２の「Ｎｏ．」欄に記載される数字「１～１０」は、本試験例３においては「試験例３－１～３－１０」を表している。また、上記各例の試験ウェル数（ｎ）は、いずれも２に設定した。
上記試験例１で合成した６種類のサンプルペプチドについて、ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合抑制性を評価した。
本試験において、上掲の表２に示すように、使用するサンプルペプチドの種類とペプチド濃度に応じて試験例３－１～３－９を設定した。また、試験例３－１０として、ペプチド無添加区を設定した。以上合計１０の区分の試験を、以下のとおり実施した。なお、表２の「Ｎｏ．」欄に記載される数字「１～１０」は、本試験例３においては「試験例３－１～３－１０」を表している。また、上記各例の試験ウェル数（ｎ）は、いずれも２に設定した。
【0070】
－試験例３－１－
試験例３－１では、現在市場において入手可能な以下のキット：
ＣＴＬＡ４ Ｂ７－２（Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＰＳ＃７９６５８）
を用いた。上記キットのデータシートに記載された“ＡＳＳＡＹ ＰＲＯＴＯＣＯＬ”に基づき、本試験例を実施した。
なお、上記キットを使用したこと以外は試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－１を行った。
試験例３－１では、現在市場において入手可能な以下のキット：
ＣＴＬＡ４ Ｂ７－２（Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢＰＳ＃７９６５８）
を用いた。上記キットのデータシートに記載された“ＡＳＳＡＹ ＰＲＯＴＯＣＯＬ”に基づき、本試験例を実施した。
なお、上記キットを使用したこと以外は試験例２－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－１を行った。
【0071】
－試験例３－２－
サンプル１のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－２を行った。
－試験例３－３－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－３を行った。
－試験例３－４－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－４を行った。
－試験例３－５－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル３のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－５を行った。
－試験例３－６－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル４のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－６を行った。
－試験例３－７－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル５のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－７を行った。
－試験例３－８－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－８を行った。
－試験例３－９－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－９を行った。
－試験例３－１０－
サンプルペプチドを添加しなかった以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－１０を行った。
サンプル１のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－２を行った。
－試験例３－３－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－３を行った。
－試験例３－４－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル２のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－４を行った。
－試験例３－５－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル３のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－５を行った。
－試験例３－６－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル４のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－６を行った。
－試験例３－７－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル５のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－７を行った。
－試験例３－８－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－８を行った。
－試験例３－９－
サンプル１のペプチドに替えてサンプル６のペプチドを表２に示す濃度で使用した以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－９を行った。
－試験例３－１０－
サンプルペプチドを添加しなかった以外は、試験例３－１と同じ材料およびプロセスで試験例３－１０を行った。
【0072】
上記得られた試験例３－１～３－１０についての測定値を、図２に示す。
図２に示されるように、サンプルペプチドを添加しなかった試験例３－１０では、ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合が確認された。ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合は、今回実施したペプチド濃度（５μＭ、１０μＭ）のいずれにおいても、サンプル１～５のいずれかを添加することによって、抑制されることが確認された（試験例３－１～３－７）。ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合は、サンプル１、サンプル２、サンプル３のいずれかを添加することによって、より強く抑制されることが確認された。各サンプル１～５の、補助的配列であるＬＩＭＫ２のアミノ酸配列からなる合成ペプチドであるサンプル６は、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合を抑制しなかった（試験例３－８，試験例３－９）。上記結果より、特にサンプル１～３にそれぞれ示されるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、およびＬＡＧ３－ＳＰ関連配列は、優れたＣＴＬＡ４－Ｂ７－２結合抑制性を有することが確認された。
図２に示されるように、サンプルペプチドを添加しなかった試験例３－１０では、ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合が確認された。ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合は、今回実施したペプチド濃度（５μＭ、１０μＭ）のいずれにおいても、サンプル１～５のいずれかを添加することによって、抑制されることが確認された（試験例３－１～３－７）。ＣＴＬＡ４とＢ７－２との結合は、サンプル１、サンプル２、サンプル３のいずれかを添加することによって、より強く抑制されることが確認された。各サンプル１～５の、補助的配列であるＬＩＭＫ２のアミノ酸配列からなる合成ペプチドであるサンプル６は、ＣＴＬＡ４とＢ７－１との結合を抑制しなかった（試験例３－８，試験例３－９）。上記結果より、特にサンプル１～３にそれぞれ示されるＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列、ＴＩＭ３－ＳＰ関連配列、およびＬＡＧ３－ＳＰ関連配列は、優れたＣＴＬＡ４－Ｂ７－２結合抑制性を有することが確認された。
【0073】
以上より、ＣＴＬＡ４－ＳＰ関連配列、ＬＡＧ３－ＳＰ関連配列およびＴＩＭ３－ＳＰ関連配列が、優れたＣＴＬＡ４－Ｂ７タンパク質結合抑制性を有することがわかった。
【産業上の利用可能性】
【0074】
上述したように、ここで開示される合成ペプチドおよび組成物によると、ＣＴＬＡ４とＢ７－１およびＢ７－２の少なくともいずれか一方との結合を抑制することができる。このように、本発明によって提供される合成ペプチドおよび組成物は、抗ＣＴＬＡ４抗体と同様の活性を有する。そのため、ここで開示される合成ペプチドおよび組成物を使用することによって、例えば、上記抗体を含む抗体医薬品と同様の活性を有する医薬組成物を提供することができる。そして、ここで開示される技術は、医療産業および医学研究等において好適に実施することができる。
【配列表フリーテキスト】
【0075】
配列番号１～３９ 合成ペプチド
【図1】
【図2】
【配列表】