特許 7499766 細胞内作用性毒素、細胞内のウイルス及び細菌に対する保護活性を示す新たなジヒドロキナゾリノン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-06-06

(45)【発行日】2024-06-14

(54)【発明の名称】細胞内作用性毒素、細胞内のウイルス及び細菌に対する保護活性を示す新たなジヒドロキナゾリノン

(51)【国際特許分類】

   C07D 417/14 20060101AFI20240607BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240607BHJP

   A61K 31/517 20060101ALI20240607BHJP

   A61K 31/77 20060101ALI20240607BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240607BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240607BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20240607BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20240607BHJP

   A61K 47/59 20170101ALI20240607BHJP

【ＦＩ】

C07D417/14 CSP

A61K47/60

A61K31/517

A61K31/77

A61P31/04

A61P31/12

A61P31/16

A61P31/22

A61K47/59

【請求項の数】 27

(21)【出願番号】P 2021529488

(86)(22)【出願日】2019-11-28

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-28

(86)【国際出願番号】 EP2019082976

(87)【国際公開番号】W WO2020109510

(87)【国際公開日】2020-06-04

【審査請求日】2022-11-07

(31)【優先権主張番号】1872016

(32)【優先日】2018-11-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR

(73)【特許権者】

【識別番号】506423291

【氏名又は名称】コミサリア ア レネルジィ アトミーク エ オ ゼネ ルジイ アルテアナティーフ

【氏名又は名称原語表記】ＣＯＭＭＩＳＳＡＲＩＡＴ Ａ Ｌ’ＥＮＥＲＧＩＥ ＡＴＯＭＩＱＵＥ ＥＴ ＡＵＸ ＥＮＥＲＧＩＥＳ ＡＬＴＥＲＮＡＴＩＶＥＳ

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】サントラ ジャン－クリストフ

(72)【発明者】

【氏名】バルビエ ジュリアン

(72)【発明者】

【氏名】ジレ ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】プリュヴォ アラン

(72)【発明者】

【氏名】クエエール オドレイ

(72)【発明者】

【氏名】テプシ リヴィア

(72)【発明者】

【氏名】ヴァンク ロバン

【審査官】高森 ひとみ

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０２９１５６８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０２５０７８８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０１６６５１７（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２００３／０１７１３８７（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２００７／０１７９１６４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０３１１８１５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／０１７８５３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Bouley, Renee; et.al.，Structure－Activity Relationship for the 4(3H)－Quinazolinone Antibacterials，Journal of Medicinal Chemistry，2016年，Vol.59, No.10，pp.5011-5021，DOI: 10.1021/acs.jmedchem.6b00372

【文献】Alafeefy, Ahmed M.; et.al，Synthesis of some new substituted iodoquinazoline derivatives and their antimicrobial screening，Journal of Saudi Chemical Society ，2011年，Vol.15, No.4，pp.319-325，DOI:10.1016/j.jscs.2011.07.005

【文献】Tiwari, Ravi; et.al.，Evaluation of antibacterial activity of novel quinazoline derivatives，Asian Journal of Chemistry，2010年，Vol.22, No.8，pp.5981-5986

【文献】Noel, Romain; et.al.，N-Methyldihydroquinazolinone Derivatives of Retro-2 with Enhanced Efficacy against Shiga Toxin，Journal of Medicinal Chemistry，2013年，Vol.56, No.8，pp.3404-3413，DOI：10.1021/jm4002346

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式（Ｉ）：

【化1】

（式中、
ｐは、１、２又は３に等しく、
Ｒ_１は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、Ｏ－Ｃ _１ ～Ｃ _３ アルキル基、－ＮＯ_２又は－ＮＨ_２を表し、
Ｒ_２及びＲ_３は、互いに独立して、水素原子、－ＯＨ、－ＯＲ_４、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ_５、－ＳＯ_２－ＮＨ _２ から選択される基を表し、ただし、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも一方は水素原子ではなく、
Ｒ_４ 及びＲ _５ は、互いに独立して、式（ＩＩ）－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－Ｚの基を表し、式中、
ｉ及びｊは、互いに独立して、０又は１を表し、
Ｌは、－Ｃ（＝Ｏ）－又は－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｋ－Ｃ（＝Ｏ）－を表し、ここで、ｋは、１、２又は３であり、
Ｘ及びＹは、互いに独立して、ポリ（乳酸）又はポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）を表し、
ＰＥＧは、ポリ（エチレングリコール）を表し、
Ｚは、水素原子、Ｃ_１～Ｃ_３アルキル、－ＯＨ、Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_３アルキル、又は－Ｌ－Ｒ_ｅから選択される基を表し、ここで、Ｌは、上に定義される通りであり、Ｒ_ｅは、上に定義される前記－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－基に、そのＲ_２基又はＲ_３基を介して連結された式（Ｉ）の残基であり、前記Ｒ_２基又はＲ_３基は、－ＯＨ又は－ＮＨ _２ である）の化合物、並びに立体異性体、立体異性体の混合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

Ｒ _１ のＯ－Ｃ _１ ～Ｃ _３ アルキル基がメトキシ基を表す、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項3】

ｋが２である、請求項１又は２に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項4】

Ｒ_３が水素原子を表す、請求項１～３のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項5】

Ｒ_２が水素原子を表す、請求項１～４のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項6】

ｐが１に等しい、請求項１～５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項7】

Ｒ_１がハロゲン原子を表す、請求項１～６のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項8】

Ｒ _１ がフッ素原子を表す、請求項１～７のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項9】

下記式（Ｉａ）:

【化2】

の化合物である、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項10】

【化3】

及び
から選択される、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項11】

ＲがＰＬＧＡ _１０３６ －ＰＥＧ _１４５０ －ＰＬＧＡ _１０３６ を表す、請求項１０に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項12】

逆行輸送を使用する細胞内作用性毒素によって、又は逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用して細胞に感染するウイルス若しくは細菌によって、又は細胞内寄生体によって誘発される障害の予防及び／又は治療に使用される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項13】

逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用してエンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルス若しくは細菌によって誘発される障害の予防及び／又は治療に使用される、請求項１２に記載の一般式（Ｉ）の化合物。

【請求項14】

前記細胞内作用性毒素が、リシン、シゲラ・ディセンテリアエ（Ｓｔｘ）及び大腸菌（Ｓｔｘ１及びＳｔｘ２）によって産生される志賀毒素及び志賀毒素様毒素（Ｓｔｘｓ）、コレラ毒素（コレラの原因となるビブリオ・コレラエ由来のＣｔｘ）、百日咳菌毒素（百日咳のボルデテラ・パーツシスの作用物質）、スブチラーゼ細胞毒素及び易熱性エンテロトキシン（大腸菌）から選択されることを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の使用のための化合物。

【請求項15】

前記ウイルスが、ポックスウイルス、サイトメガロウイルス、アデノ随伴ウイルス、ポリオーマウイルス、パピローマウイルス、フィロウイルス、エンテロウイルス、ヘルペスウイルス、アレナウイルス属のウイルス、インフルエンザウイルス、ニューモウイルスである、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項16】

前記ポックスウイルスが、天然痘ウイルス、サル痘ウイルス、ワクシニアウイルス及びレポリポックスウイルスから選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項17】

前記レポリポックスウイルスが、粘液腫症ウイルスである、請求項１６に記載の使用のための化合物。

【請求項18】

前記アデノ随伴ウイルスが、血清型２である、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項19】

前記ポリオーマウイルスが、ポリオーマウイルスＪＣ及びポリオーマウイルスＢＫから選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項20】

前記フィロウイルスが、エボラウイルス及びマールブルグウイルスから選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項21】

前記エンテロウイルスが、エンテロウイルス７１である、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項22】

前記ヘルペスウイルスが、単純ヘルペスウイルス２型である、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項23】

前記アレナウイルス属のウイルスが、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスである、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項24】

前記インフルエンザウイルスが、インフルエンザウイルスＡである、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項25】

前記ニューモウイルスが、呼吸器合胞体ウイルスである、請求項１５に記載の使用のための化合物。

【請求項26】

有効成分として少なくとも１つの請求項１～１１のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物又は薬剤。

【請求項27】

空中、経口、非経口又は局所の経路による投与に適合される、請求項２６に記載の医薬組成物又は薬剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、逆行輸送を使用して細胞を毒する（intoxicate）、リシン、志賀毒素及びコレラ毒素等の細胞内作用性毒素、又は逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用して細胞に感染するウイルス若しくは細菌（エンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルス又は細菌を含む）、又は細胞内寄生体の毒作用の阻害物質としての２，３－ジヒドロキナゾリン－４（１Ｈ）－オンの新たな化合物群及びそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

逆行輸送を使用する細胞内作用性毒素は、重大な公衆衛生上のリスクとなり、その中には毎年世界中での１００万人超の死亡に関連するものもある。これらの毒素は、特に、リシン（植物のリシヌス・コムニス（Ricinus communis：トウゴマ）の種子で産生される）、シゲラ・ディセンテリアエ（Shigella dysenteriae：志賀赤痢菌）（Ｓｔｘ）及び大腸菌（E. coli）（Ｓｔｘ１及びＳｔｘ２）によって産生される志賀毒素及び志賀毒素様毒素（Ｓｔｘｓ）、コレラ毒素（コレラの原因となるビブリオ・コレラエ（Vibrio cholerae：コレラ菌）由来のＣｔｘ）、百日咳毒素（百日咳のボルデテラ・パーツシス（Bordetella pertussis：百日咳菌）の作用物質）、スブチラーゼ細胞毒素及び易熱性エンテロトキシン（大腸菌）を含む。

【0003】

リシンは、ジスルフィド架橋によって接続された２つのポリペプチド鎖で構成される６６ｋＤａの糖タンパク質である（図１Ａ）。Ｂ鎖（ＲＴＢ、２６２残基レクチン）により、毒素が細胞膜の糖脂質及び糖タンパク質に結合し、細胞への侵入を確実にする（図１Ａ）。Ａ鎖（ＲＴＡ、２６７アミノ酸）は、リシンのＮ－グリコシダーゼ酵素機能を保証し、標的細胞の２８Ｓ ＲＮＡからの４３２４アデニンの除去を触媒し、タンパク質の合成を停止させる。

【0004】

志賀毒素は、シゲラ・ディセンテリアエによって産生される志賀毒素（Ｓｔｘ）と、大腸菌の腸管出血性株によって産生される志賀毒素様毒素１（Ｓｔｘ１）及び志賀毒素様毒素２（Ｓｔｘ２）とを含む。Ｓｔｘ及びＳｔｘ１の毒素は９９％同一であるが、Ｓｔｘ１及びＳｔｘ２は、それらのアミノ酸配列の同一性を５６％しか共有しない。毒素のＡサブユニット（ＳｔｘＡ）は、リシンと同じ酵素活性を持ち、同様に２８Ｓ ＲＮＡを標的とする（図１Ｂ）。五量体であるＢサブユニット（ＳｔｘＢ）は、グロボトリアオシルセラミドＧｂ３との相互作用を介して毒素を細胞に結合させることで、その内部移行及び細胞内経路を確保する。

【0005】

リシンは、膜受容体に結合した後、複数のエンドサイトーシス経路を介してこれらの細胞に内部移行し、トランスゴルジ網（trans-golgiate network）に到達して、そこで逆行輸送によって小胞体（ＥＲ）に送達される（非特許文献１）。志賀毒素は、独自のエンドサイトーシス経路によって内部移行し、ゴルジ装置に到達して、次いで小胞体にも到達する（同書）。

【0006】

その後、毒素は部分的に展開され、鎖／サブユニットＡが細胞質ゾルに移動する（非特許文献２）。したがって、これらの毒素の作用の最終段階は細胞の細胞質で起こり、毒素はリボソームに非常に効率的に結合し、リボソームのサブユニット６０Ｓの２８Ｓ ＲＮＡのアデニン４３２４を切断する。この２８Ｓ ＲＮＡの脱プリン化により、タンパク質合成が停止し、細胞死につながる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【文献】Johannes, L. et al., Cell 2008, 135, 1175-87

【文献】Lord, J.M. et al., Biochemical Society Transactions 2003, 31, 1260

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

これらの毒素によってもたらされる脅威に対抗するために、幾つかのタイプの抗毒素、すなわち中和抗体、酵素活性の阻害物質（小分子、基質アナログ）、可溶性受容体模倣物、及び毒素によって標的とされる細胞に作用する化学化合物が開発された。

【0009】

近年、細胞内作用性毒素の細胞内経路を遮断する新たな分子の探索が加速している。これらの分子は逆行経路を使用する種々の毒素から細胞を効果的に保護することができるため、かかる分子の主な利点はそれらの広域スペクトル活性である。

【課題を解決するための手段】

【0010】

逆行輸送を遮断する化合物に関する研究、特に上に言及される研究のものよりも有利な化合物に関する研究に関連して、本出願人は、予想外にも、既に説明されている分子の中で最も活性であるＲｅｔｒｏ－２．１よりも優れた生物学的活性を示し、したがって、哺乳動物の真核細胞に感染するために逆行輸送を使用する、少なくとも１種の細胞内作用性毒素による中毒の予防及び／又は治療のみならず、逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用して細胞に感染するウイルス若しくは細菌、特にエンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルス若しくは細菌、又は細胞内寄生体による感染の予防及び／又は治療にも非常に興味深い、オルト位又はメタ位に特異的に置換されたフェニルを持つ、２，３－ジヒドロキナゾリン－４（１Ｈ）－オンに由来する新たな化合物群を特定した。

【0011】

したがって、本発明は、一般式（Ｉ）：

【化1】

（式中、
ｐは、１、２又は３に等しく、
Ｒ_１は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～３のアルコキシラジカル、特にメトキシ基、－ＮＯ_２又は－ＮＨ_２を表し、
Ｒ_２及びＲ_３は、互いに独立して、Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ_４、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ_５、－ＳＯ_２－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６から選択される基を表し、ただし、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも一方はＨではなく、
Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６は、互いに独立して、式（ＩＩ）－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－Ｚの基を表し、式中、
ｉ及びｊは、互いに独立して０又は１を表し、
Ｌは、－Ｃ（＝Ｏ）－又は－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｋ－Ｃ（＝Ｏ）－を表し、ここで、ｋは、１、２又は３、特に２に等しく、
Ｘ及びＹは、互いに独立して、ポリ（乳酸）又はポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）を表し、
ＰＥＧは、ポリ（エチレングリコール）を表し、
Ｚは、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_３アルキル、－ＯＨ、Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_３アルキル、又は－Ｌ－Ｒ_ｅから選択される基を表し、ここで、Ｌは、上に定義される通りであり、Ｒ_ｅは、上に定義される上記－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－基に、そのＲ_２基又はＲ_３基を介して連結された式（Ｉ）の残基であり、上記Ｒ_２基又はＲ_３基は－ＯＨ、－ＮＨ_２又は－ＳＯ_２－ＮＨ_２である）の化合物、並びに立体異性体、立体異性体の混合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩に関する。

【0012】

本発明はまた、一般式（Ｉ）：

【化2】

（式中、
ｐは、１、２又は３に等しく、
Ｒ_１は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、又は炭素数１～３のアルコキシラジカル、特にメトキシ基を表し、
Ｒ_２及びＲ_３は、互いに独立して、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表し、ただし、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも一方はＨではない）の化合物、並びに立体異性体、立体異性体の混合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩に関する。

【0013】

或る実施の形態によれば、Ｒ_２は、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表し、Ｒ_３は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表す。

【0014】

或る実施の形態によれば、Ｒ_３は水素原子を表す。本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：

【化3】

のものである。

【0015】

或る実施の形態によれば、Ｒ_２は水素原子を表す。また、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：

【化4】

のものである。

【0016】

或る実施の形態によれば、Ｒ_２及びＲ_３は、互いに独立して、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表し、特にＲ_２及びＲ_３は－ＯＨを表す。

【0017】

或る実施の形態によれば、ｐは１に等しい。

【0018】

或る実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：

【化5】

のものであり、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は上に定義される通りであり、Ｒ_２及びＲ_３は、特に、互いに独立して、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表し、Ｒ_２及びＲ_３は、例えば－ＯＨを表す。

【0019】

特定の実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：

【化6】

のものである。

【0020】

特定の実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：

【化7】

のものである。

【0021】

或る実施の形態によれば、Ｒ_１はハロゲン原子、特にフッ素原子を表す。

【0022】

特定の実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式（Ｉａ）：

【化8】

のものである。

【0023】

或る実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、下記式（Ｉｂ）：

【化9】

のものである。

【0024】

或る実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、

【化10】

から選択される。

【0025】

或る実施の形態によれば、本発明は、Ｒ_２及びＲ_３が、互いに独立して、Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ_４、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ_５、－ＳＯ_２－ＮＨ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６から選択される基を表し、ただし、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも一方、特にＲ_２は、－ＯＲ_４、－ＮＨＲ_５及び－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６から選択される基を表し、Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６は、上に定義される通りである、一般式（Ｉ）の化合物に関する。

【0026】

式（ＩＩ）－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－Ｚの基に関して、Ｒ_２又はＲ_３が－ＮＨＲ_５又は－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６表す場合、Ｌは特に－Ｃ（＝Ｏ）－を表し、Ｒ_２又はＲ_３が－ＯＲ_４を表す場合、Ｌは特に－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｋ－Ｃ（＝Ｏ）－を表す。

【0027】

或る実施の形態によれば、式（ＩＩ）－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－Ｚの基は、－Ｌ－ＰＥＧ、－Ｌ－ＰＥＧ－ＰＬＡ、及び－Ｌ－ＰＬＧＡ－ＰＥＧ－ＰＬＧＡから選択され、Ｌは、Ｒ_２若しくはＲ_３が－ＮＨＲ_５若しくは－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６を表す場合、特に－Ｃ（＝Ｏ）－を表し、又はＲ_２若しくはＲ_３が－ＯＲ_４を表す場合、特に－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｋ－Ｃ（＝Ｏ）－を表す。

【0028】

或る実施の形態によれば、式（ＩＩ）－Ｌ－（Ｘ）_ｉ－（ＰＥＧ）－（Ｙ）_ｊ－Ｚの基は、特にＲ_２又はＲ_３が－ＮＨＲ_５又は－ＳＯ_２－ＮＨ－Ｒ_６を表す場合、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－ＣＨ_３、及び特にＲ_２又はＲ_３が－ＯＲ_４を表す場合、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｋ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｍ－ＯＣＨ_３から選択され、ｍは１～５００、例えば４～５００に含まれ、ｍは特に３０～６０に含まれ、より詳しくは４５である。

【0029】

或る実施の形態によれば、一般式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＩＩ）：

【化11】

のものであり、式（ＩＩＩ）で言及される基は、上に定義される通りである。

【0030】

或る実施の形態によれば、本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、

【化12】

及び（化合物２）－ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６－（化合物２）又は（化合物２）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－Ｃ（＝Ｏ）－（化合物２）
から選択され、特に下記式：

【化13】

のものである。

【0031】

別の態様によれば、本発明は、有効成分として上に定義される少なくとも１つの一般式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物又は薬剤であって、特に、空中（aerial）、経口、非経口又は局所の経路による投与に好適である、医薬組成物又は薬剤に関する。

【0032】

また、一般式（Ｉ）の化合物の上に言及される実施の形態はいずれも、本明細書において、単独で又は組み合わせて適用されることに留意されたい。

【0033】

別の態様によれば、本発明は、逆行輸送を使用する細胞内作用性毒素によって、又は逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用して細胞に感染するウイルス若しくは細菌、特にエンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルス若しくは細菌によって、又は細胞内寄生体によって誘発される障害の予防及び／又は治療に使用される、上に定義される一般式（Ｉ）の化合物に関する。

【0034】

また、一般式（Ｉ）の化合物の上に言及される実施の形態はいずれも、本発明において、単独で又は組み合わせて適用されることに留意されたい。

【0035】

或る実施の形態によれば、本発明は、逆行輸送を使用する細胞内作用性毒素によって誘発される障害の予防及び／又は治療に使用される、上に定義される一般式（Ｉ）の化合物に関する。

【0036】

特定の実施の形態によれば、逆行輸送を使用する上記細胞内作用性毒素は、リシン、シゲラ・ディセンテリアエ（Ｓｔｘ）及び大腸菌（例えば、Melton-Celsa, Microbiol Spectr. 2014; 2(2)）によって記載される、Ｓｔｘ１及びＳｔｘ２、Ｓｔｘ、Ｓｔｘ１ａ、Ｓｔｘ２ａ、Ｓｔｘ２ｃ、Ｓｔｘ２ｄ、Ｓｔｘ２ｅ）によって産生される志賀毒素及び志賀毒素様毒素（Ｓｔｘｓ）、コレラ毒素（コレラの原因となるビブリオ・コレラエ由来のＣｔｘ）、百日咳毒素（百日咳のボルデテラ・パーツシスの作用物質）、スブチラーゼ細胞毒素及び易熱性エンテロトキシン（大腸菌）から選択される。

【0037】

或る実施の形態によれば、本発明は、逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用して細胞に感染するウイルス若しくは細菌、特にエンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルス若しくは細菌、又は細胞内寄生体によって誘発される障害の予防及び／又は治療に使用される、上に定義される一般式（Ｉ）の化合物に関する。

【0038】

特定の実施の形態によれば、ウイルスは、ポックスウイルス、特に天然痘ウイルス及びワクシニアウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、特にアデノ随伴ウイルス、特に血清型２、ポリオーマウイルス、特にＪＣポリオーマウイルス及びＢＫポリオーマウイルス、パピローマウイルス、フィロウイルス、特にエボラウイルス及びマールブルグウイルス、エンテロウイルス、特にエンテロウイルス７１、ヘルペスウイルス、特に単純ヘルペスウイルス２型、アレナウイルス属のウイルス、特にリンパ球性脈絡髄膜炎のウイルス、インフルエンザウイルス、特にインフルエンザウイルスＡである。

【0039】

特定の実施の形態によれば、ウイルスは、ポックスウイルス、特に天然痘ウイルス、サル痘ウイルス、ワクシニアウイルス及びレポリポックスウイルス、特に粘液腫症ウイルス（myxomatosis virus）、サイトメガロウイルス、アデノ随伴ウイルス、特に血清型２、ポリオーマウイルス、特にＪＣポリオーマウイルス及びＢＫポリオーマウイルス、パピローマウイルス、フィロウイルス、特にエボラウイルス及びマールブルグウイルス、エンテロウイルス、特にエンテロウイルス７１、ヘルペスウイルス、特に単純ヘルペスウイルス２型、アレナウイルス属のウイルス、特にリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、インフルエンザウイルス、特にインフルエンザウイルスＡ、ニューモウイルス、特に呼吸器合胞体ウイルスである。

【0040】

特定の実施の形態によれば、細菌は、クラミジア目、特にクラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、クラミドフィラ・ニューモニエ（Chlamydophila pneumoniae）、クラミドフィラ・プシッタシ（Chlamydophila psyttaci）等のクラミジア属、又はシムカニア・ネゲベンシス等のシムカニア属の細菌である。

【0041】

特定の実施の形態によれば、細胞内寄生体によって誘発される障害は、リーシュマニア症、特にリーシュマニア属のトリパノソーマ、特にリーシュマニア・インファンタム（Leishmania infantum）、リーシュマニア・ドノバニ（Leishmania donovani）又はリーシュマニア・インファンタム／ドノバニハイブリッドによって誘発されるリーシュマニア症である。

【0042】

本発明はまた、逆行輸送を使用する細胞内作用性毒素によって誘発される障害を予防及び／又は治療する方法に関し、有効量の少なくとも１つの上に定義される一般式（Ｉ）の化合物を投与することを含む。

【0043】

また、一般式（Ｉ）の化合物に対して上に言及される実施の形態はいずれも、本明細書において、単独で又は組み合わせて適用されることに留意されたい。

【0044】

合成
本発明の化合物は、以下に記載されるものを含むがこれらに限定されない、当業者によく知られている方法によって、又は有機合成の当業者に知られている標準的な手法を適用することによるかかる方法の変法によって調製され得る。適切な変更及び置換は、当業者によく知られており、容易に明らかであり、又は科学文献から容易に利用可能である。特に、かかる方法はR.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Wiley-VCH Publishers, 1999において見出すことができる。

【0045】

本発明に関連して開示される全てのプロセスは、ミリグラム、グラム、マルチグラム、キログラム、マルチキログラム、又は商業的工業尺度を含む任意の尺度で実施されることが企図される。

【0046】

本発明の化合物は、非対照置換された炭素原子を含むことができ、光学活性体又はラセミ体で単離され得ることに留意すべきである。したがって、具体的な立体化学又は異性体の形態が特に示されない限り、構造の全てのキラル体、ジアステレオマー体、ラセミ体、異性体が企図される。かかる光学活性体を調製し、単離することはよく知られている。例えば、立体異性体の混合物は、限定されるものではないが、ラセミ体の分割、従来のクロマトグラフィー（逆相及びキラル）、優先的塩形成、再結晶等を含む標準的な手法によって、又はキラル原料からのキラル合成によって、又は標的キラル中心の意図的な合成によって分離され得る。

【0047】

本発明の化合物を、様々な合成経路により製造することができる。

【0048】

以下に説明する反応では、反応性官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、又はチオ基が最終生成物に存在する場合、それらが二次的な望ましくない反応に関与しないよう、これらを保護する必要がある場合がある。従来の保護基を、慣例に従って使用することができ、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd ed., John Wiley and Sons, 1999；J. F. W. McOmie in Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, 1973を参照されたい。

【0049】

反応性化合物及び出発化合物は市販されているか、又は当業者によく知られた手法によって容易に合成される。特に明記しない限り、全ての置換基は上に定義される通りである。

【0050】

一般式（Ｉ）の化合物を、下記反応に従って得ることができる。

【化14】

【0051】

この反応は、特に有機溶媒中で行うことができる。

【0052】

或る実施の形態によれば、３つの出発化合物は、有機溶媒、特に酢酸中で混合される。

【0053】

或る実施の形態によれば、有機溶媒は、特に還流又はマイクロ波照射下で、例えば１００℃～１８０℃、特に１１０℃～１４０℃、より詳しくは１２０℃～１３０℃の間の温度に加熱される。

【0054】

加熱時間は、１０分～６時間、例えば３０分～５時間、特に１時間～４時間、より詳しくは２時間～３時間である。

【0055】

Ｒ_１及びｐは、上に定義される通りである。

【0056】

Ｒ_２’及びＲ_３’は、それぞれ基Ｒ_２及びＲ_３に対応するか、又はアドホック保護基に対応する。

【0057】

或る実施の形態によれば、Ｒ_２’及びＲ_３’は、互いに独立して、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＳＯ_２－ＮＨ_２から選択される基を表し、ただし、Ｒ_２及びＲ_３の少なくとも一方はＨではない。

【0058】

特定の実施の形態によれば、Ｒ_２’及び／又はＲ_３’が－ＮＯ_２を表す場合には、Ｒ_２’及び／又はＲ_３’は、特に当業者によく知られている手法の１つ、例えば、酢酸と接触した亜鉛の作用によって、Ｒ_２及び／又はＲ_３＝－ＮＨ_２へと変換される。

【0059】

定義
この明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の値の±１０％の値の範囲を指す。例えば、「約１２０ｍｇ」という用語は、１２０ｍｇ±１０％の値、すなわち１０８ｍｇ～１３２ｍｇの値を含む。

【0060】

この明細書で使用される場合、パーセンテージは、特に明記しない限り、製剤の総重量の重量パーセントを指す。

【0061】

本明細書で使用される場合、「ｘ～ｙ」又は「ｘからｙまで」又は「ｘとｙの間」の形式の値の範囲は、境界値ｘ及びｙ、並びにこれらの境界値の間の整数を含む。例えば、「１～５」又は「１から５」又は「１と５の間」は、１、２、３、４、及び５の整数を指す。好ましい実施の形態は、値の範囲内の個々の各整数、及びそれらの整数の任意のサブコンビネーションを含む。例えば、「１～５」の好ましい値は、整数１、２、３、４、５、１～２、１～３、１～４、１～５、２～３、２～４、２～５等を含み得る。

【0062】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、合理的な医学的判断の範囲内において、妥当なベネフィット／リスク比にみあった、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題のある合併症を伴わない、ヒト及び動物の組織との接触に適した塩を指す。

【0063】

一般式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容可能な塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩又は重硫酸塩、リン酸塩又はリン酸水素塩、酢酸塩、シュウ酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、及びパラトルエンスルホン酸塩を意味する。

【0064】

ハロゲン原子は、元素周期表の第ＶＩＩ族の化学元素、特にフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。

【0065】

炭素数１～３又は４のアルキルラジカルという用語は、直鎖又は分岐状の炭化水素（hydrogencarbon）ラジカルを指し、例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル又はｔｅｒｔ－ブチルが挙げられる。

【0066】

「ＰＥＧ」又は「ポリ（エチレングリコール）」又は「ポリエチレングリコール」とは、特に－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－基を意味し、任意にＨ、Ｃ_１～Ｃ_３アルキル又は－（－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｍ－基から選択される基を終端とし、任意にＨ、－ＯＨ及びＯ－Ｃ_１～Ｃ_３アルキルから選択される基を終端とし、ｍは１～５００、特に４～５００から選択され、３０～６０を含む。

【0067】

ＰＥＧの平均モル質量は、特に、名称の後の「ＰＥＧ」という用語の後に、例えば、ＰＥＧ－１４５０（１４５０ｇ・ｍｏｌ^－１）と示すことができる。

【0068】

「ＰＬＡ」又は「ポリ（乳酸）」又は「ポリ乳酸」とは、特に－（Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ）_ｐ－基を意味し、任意にＨ、Ｃ_１～Ｃ_３アルキル又は－（－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－（Ｃ（＝Ｏ））_ｐ－基から選択される基を終端とし、任意に－ＯＨ及びＯ－Ｃ_１～Ｃ_３アルキルから選択される基を終端とし、ｐは１～２０００、特に５～５００、特に１０～５０から選択される。

【0069】

ＰＬＡの平均モル質量は、特に、名称の後の「ＰＬＡ」という用語の後に、例えば、ＰＬＡ－１０３６（１０３６ｇ・ｍｏｌ^－１）と示すことができる。

【0070】

「ＰＬＧＡ」又は「ＰＬＧ」とは、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）、特に、任意にＨ、Ｃ_１～Ｃ_３アルキルから選択される基を終端とする－（（Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ）_ｐ－（Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ）_ｑ）_ｒ－基、又は任意に－ＯＨ及びＯ－Ｃ_１～Ｃ_３アルキルから選択される基を終端とする－（（Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ））_ｑ－（Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｃ（＝Ｏ））_ｐ）_ｒ－基を意味し、ｐ、ｑ及びｒは、ＰＬＧＡポリマーがランダム（statistical）又はブロック、特にランダムであるようなものであり、特に、例えば名称の後の「ＰＬＧＡ」という用語の後に示されるＰＬＧＡの平均モル質量は、２００ｇ・ｍｏｌ^－１～４０００ｇ・ｍｏｌ^－１、特に８００ｇ・ｍｏｌ^－１～１２００ｇ・ｍｏｌ^－１であるようなものである。ｐ、ｑ及びｒは、特にＰＬＧＡ中の乳酸のモルパーセントが約２０％であるようなものである。特に、ｐ、ｑ及びｒは、ＰＬＧＡが１２個の乳酸単位及び３個のグリコール酸単位からなるようなものである。

【図面の簡単な説明】

【0071】

【図1】リシン（Ａ、結晶構造データベースでの名称はｐｄｂ ２ＡＡＩである）及びＳｔｘ２（Ｂ、ｐｄｂ １Ｒ４Ｐ）の結晶構造を示す図である。

【図2】実験部で実施した細胞アッセイの模式図である。

【図3】実施例の第ＩＩ部で実施されたＩＣ_５０の計算方法を示す図であり、毒性曲線は、阻害物質の不在下（対照）、次いで種々の濃度の阻害物質の存在下で実施される。

【発明を実施するための形態】

【実施例】

【0072】

Ｉ．本発明による化合物の合成
合成に使用される全ての化学物質及び溶媒は反応性グレードのものであり、更に精製することなく使用した。ＣＨ_２Ｃｌ_２を使用前に水素化カルシウムで蒸留した。ガラス器具を真空下で火炎乾燥し、窒素下で室温まで冷却した。全ての反応を乾燥窒素下で行い、ＴＬＣによってモニターした。

【0073】

特に、精製を、ＵＶ－ｖｉｓ検出器及びＲｅｄｉＳｅｐカラムを備えたＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）で行った。試料をセライト又はシリカに吸着させ、固体を満たしたカートリッジに充填した。特に、酢酸エチル／シクロヘキサン又はメタノール／ジクロロメタンの勾配を使用した。特に２５４ｎｍでの検出に基づいて画分を収集した。

【0074】

ＨＰＬＣ－ＭＳによる分析及び精製を、Ｗａｔｅｒｓシステム（バイナリ勾配モジュール２５２５、インラインデガッサー、サンプルマネージャー２７６７、フォトダイオードアレイ検出器２９９６）を溶媒勾配用のバイナリシステムと共に使用して行った。具体的には、溶離液は、（９９．９％水／０．１％ＨＣＯＯＨ）及び（９９．９％ＭｅＣＮ／０．１％ＨＣＯＯＨ）又は（９９．９％水／０．１％ＨＣＯＯＨ）及び（９９．９％ＭｅＯＨ／０．１％ＨＣＯＯＨ）の勾配であった。各化合物を、Ｈ_２Ｏ／ＭｅＣＮ又はＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ９５：５で平衡化した１００ｍｍ×４．６ｍｍ（５ｍｍ）Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８カラムに沈着させた。

【0075】

このシステムを、例えば、ＺＱ２０００四重極型分析装置を備えたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱシステムにつないだ。イオン化をエレクトロスプレーによって行い、他のパラメータは次の通りであった：ソース温度１２０℃、コーン電圧２０Ｖ、及び毎分０．３ｍＬの流量での連続試料注入。ｍ／ｚ１００～２０００の範囲で陽及び陰イオンモードで質量スペクトルを記録し、Ｍａｓｓ Ｌｙｎｘ ４．０ソフトウェアで処理した。

【0076】

赤外線スペクトルを、特にＵＡＴＲ Ｔｗｏ（Perkin Elmer）、Ｄｉａｍｏｎｄ／ＺｎＳｅ（１回の反射）を装備したＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｔｗｏで記録した。

【0077】

ＮＭＲ分析を、特にＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００ Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ分光計で実施した。１Ｈ－ＮＭＲ及び１３Ｃスペクトルを、室温でそれぞれ４００ＭＨｚ及び１００ＭＨｚで記録し、試料をおよそ５ｍＭの濃度でＤＭＳＯ－ｄ６又はＣＤＣｌ_３に溶解した。ＤＭＳＯシングレットシグナルを２．５０ｐｐｍに設定した。化学シフトはｐｐｍで、結合定数はＨｚで与えられる。スペクトルデータは、関連する構造と一致する。

【0078】

化合物１の調製
ニトロ前駆物質１’の合成

【化15】

【0079】

【表1】

【0080】

混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で３時間撹拌した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（３回）、ブライン（２回）及び水（１回）で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９／１→１／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製した（収率：６２％）。

【0081】

化合物１の合成

【化16】

【0082】

【表2】

【0083】

混合物を光から保護しながら室温で一晩撹拌した。

【0084】

得られた残留物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９５／５→０／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製し、次いで最少量のＥｔＯＡｃに溶解して、ペンタンを加えて再沈殿させた（収率：６３％）。

【0085】

¹H NMR (CDCl₃): 2.69 (s, 3H); 2.91 (s, 3H); 4 (s ブロード, 2H); 5.76 (s, 1H); 6.54 (dd, 1H, J: 4, J: 8.9); 6.60 (td, 1H, J: 1.3, J: 7.8); 6.66 (d, 1H, J: 3.7); 6.75 (dd, 1H, J: 1.2, J: 8); 6.84 (dd, 1H, J: 1.4, J: 7.9); 7-7.1 (m, 3H); 7.1 (dd, 1H, J: 3.1, J: 8.7); 7.72 (dd, 1H, J: 3, J: 8.6).
¹³C NMR (CDCl₃): 19.1; 36; 76.2; 111.9; 114.4 (d, J: 7.1), 115.5 (d, J: 24); 116.7; 118.8 (d, J: 7.4); 118.9; 121.3 (d, J: 23.1); 122.7; 125.2; 128.3; 129.2; 129.5; 137.8; 138.6; 142; 143.1; 148.7; 156.6 (d, J: 239); 161; 166.4.
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．２３分。
Ｍ＋Ｈ．：４５１．４。

【0086】

化合物２の調製

【化17】

【0087】

【表3】

【0088】

混合物を１３０℃で２時間撹拌した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（３回）、ブライン（２回）及び水（１回）で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９５／５→１／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製し、次いで最小量のＥｔＯＡｃに溶解して、ペンタンを加えて再沈殿させた（収率：２５％）。

【0089】

¹H NMR (DMSO-d6): 2.62 (s, 3H); 2.9 (s, 3H); 6.16 (s, 1H); 6.75 (td, 1H, J: 1.3, J: 7.7); 6.79 (dd, 1H, J: 4, J: 9); 6.93-7.01 (m, 3H); 7.15 (td, 1H, J: 1.7, J: 7.5); 7.28 (d, 1H, J: 3.6); 7.35 (td, 1H, J: 3.2, J: 8.8); 7.58 (dd, 1H, J: 3.1, J: 8.8); 7.71 (s, 1H).
¹³C NMR (DMSO-d6): 18.5; 35.5; 75.3; 112.7; 113.7 (d, J: 23.6); 115 (d, J: 7); 116.7; 117.8 (d, J: 7); 118.8; 121.1 (d, J: 23.1); 122.6; 126.2; 128.3; 128.7; 129.9; 137.6; 139; 143.3; 147.8; 152.6; 155.3 (d, J: 235); 159.5; 165.9
ＩＲ：１６４６；１４９６；１４５０；１１６３；８０６；７４０
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．２４分。
Ｍ＋Ｈ．：４５２．４。

【0090】

化合物３の調製

【化18】

【0091】

【表4】

【0092】

混合物を１３０℃で２時間撹拌した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液及び蒸留水で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。得られた褐色固体を少量の熱ＥｔＯＡｃで洗浄し、黄色粉末（１７％）を得た。

【0093】

¹H NMR (DMSO-d6): 2.62 (s, 3H); 2.95 (s, 3H); 6.43 (s, 1H); 6.7-6.78 (m, 3H); 6.81 (dd, 1H, J: 4.2, J: 9); 6.97 (d, 1H, J: 3.7); 7.20 (t, 1H, J: 8); 7.33 (d, 1H, J: 3.6); 7.36 (dd, 1H, J: 3, J: 8.8); 7.61 (dd, 1H, J: 3, J: 8.8); 7.71 (s, 1H).
¹³C NMR (DMSO-d6): 18.5; 35.4; 76; 112.8; 113.7; 113.7 (d, J: 23); 114; 115.4 (d, J: 7); 116.8; 118 (d, J: 7); 121.3 (d, J: 23); 122.9; 128.2; 129.5; 137.7; 138.7; 140.8; 143.2; 147.7; 155.5 (d, J: 235); 157.6; 159.8; 166.
ＩＲ：３１６１（ブロード）；１６１２；１４９９；１４５２；１１８７；１１５６；７９５；７６６；７３０。
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．１６分。
Ｍ＋Ｈ．：４５２．３。

【0094】

下記式の化合物７は、化合物２又は化合物３と同様に調製される：

【化19】

【0095】

化合物４の調製
ニトロ前駆物質４’の合成

【化20】

【0096】

【表5】

【0097】

混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で３時間撹拌した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（３回）、ブライン（２回）及び水（１回）で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残留物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９／１→１／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製した（収率：４９％）。

【0098】

化合物４の合成

【化21】

【0099】

【表6】

【0100】

混合物を光から保護しながら室温で一晩撹拌した。

【0101】

得られた残留物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９５／５→０／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製し、次いで最少量のＥｔＯＡｃに溶解して、ペンタンを加えて再沈殿させた（収率：８１％）。

【0102】

¹H NMR (DMSO-d6): 2.62 (s, 3H); 2.90 (s, 3H); 5.04 (s, 2H); 5.97 (s, 1H); 6.48 (td, 1H, J: 1.2, J: 7.3); 6.68 (dd, 1H, J: 1.2, J: 7.7); 6.77 (d, 1H, J: 8.2); 6; 6.87 (dd, 1H, J: 1, J: 8); 6.9-6.96 (m, 2H); 7.03 (td, 1H, J: 1.3, J: 8.4); 7.3 (d, 1H, J: 3.6); 7.48 (td, 1H, J: 1.5, J: 8.6); 7.72 (s, 1H); 7.88 (dd, 1H, J: 1.5, J: 7.7).
¹³C NMR (DMSO-d6): 18.5; 34.9; 74.5; 112.7; 113; 115.9; 116.1; 117; 118.3; 122.6; 124.2; 128.1; 128.4; 128.7; 129.4; 134.2; 137.6; 138.7; 143.8; 143.8; 146.7; 147.8; 160.9; 165.9
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．１８分。
Ｍ＋Ｈ．：４３３．４。

【0103】

化合物５の調製

【化22】

【0104】

【表7】

【0105】

混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で２時間撹拌した。残留物をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３回）、ブライン（２回）及び水（１回）で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残留物をシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９／１→０／１の混合物で溶出するクロマトグラフィー（固体析出）により精製し、次いでジクロロメタン中で再結晶させた（収率：１３％）。

【0106】

¹H NMR (DMSO-d6): 2.63 (s, 3H); 2.85 (s, 3H); 6.18 (s, 1H); 6.85 (dd, 1H, J: 4.2, J: 9.1)]; 6.89 (dd, 1H, J: 1.3, J: 7.4); 6.91 (d, 1H, J: 3.6); 7.32 (d, 1H, J: 7.6); 7.39 (td, 1H, J: 3.2, J: 8.7); 7.47 (s, 2H); 7.57-7.59 (m, 3H); 7.78 (s, 1H); 8.02 (dd, 1H, J: 1.9, J: 7.5).
¹³C NMR (DMSO-d6): 18.5; 35.24; 76.7; 113.09; 113.7 (J: 23.6) 114.9 (J: 7); 116.6 (J: 7); 121.6 (J: 22.9); 122.6; 128.3; 128.84; 129.4; 132.1; 132.5; 136.1; 137.6; 138; 141.2; 143.3; 147.7; 155.1 (J: 235); 160.4; 166.
ＩＲ：３１７５；１６５３；１４９６；１４７４；１４５０；１３５７；１３４２；１１６０；８２１；８１０；７１０。
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．２０分。
Ｍ＋Ｈ．：５１５．４。

【0107】

化合物６の調製（発明外）

【化23】

【0108】

【表8】

【0109】

混合物をマイクロ波照射下、１３０℃で２時間撹拌した。残留物を酢酸エチルに溶解し、有機相をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液及び蒸留水で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。得られた褐色固体を少量の熱ＥｔＯＡｃで洗浄し、黄色粉末（７３％）を得た。

【0110】

¹H NMR (DMSO-d6): 2.60 (s, 3H); 2.89 (s, 3H); 6.32 (s, 1H); 6.74-6.77 (m, 3H); 6.92 (ワイド s, 1H); 7.06 (d, 2H, J: 8.1); 7.3-7.35 (m, 2H); 7.57 (d, 1H, J: 6.6); 7.72 (s, 1H); 9.59 (s, 1H).
¹³C NMR (DMSO-d6): 18.5; 35.3; 76.4; 112.8; 113.7 (J: 24); 115.2 (J: 7); 115.4; 117.9 (J: 7); 121.2 (J: 23); 122.8; 128; 128.4; 131; 137.7; 138.5; 143.3; 147.7; 155.5 (J: 235); 156.3; 159.9; 166.
ＩＲ：３２１６（ブロード）；１６３０；１５１３；１４９８；１２６７；１１６３；８８８；８１１；７３７；７１１。
ＬＣ／ＭＳ：保持時間：３．３３分。
Ｍ＋Ｈ．：４５２．４。

【0111】

ＩＩ．志賀毒素に対する本発明の化合物の保護活性を評価するための測定
プロトコル及びＩＣ_５０の計算
化合物を、志賀毒素（Ｓｔｘ－１及び／又はＳｔｘ－２）に対するＡ５４９細胞（ヒト肺上皮細胞）又はＨｅＬａ細胞（ヒト子宮癌細胞）のいずれかで試験した。ヒト細胞を、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ及びストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬを含むＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）中、１５０ｃｍ^２培養フラスコで、５％ＣＯ_２を含む雰囲気中３７℃で増殖させる。細胞を、９６ Ｃｙｔｏｓｔａｒ－Ｔ固体シンチレーションボトムウェルのプレートに１ウェルあたり５００００細胞の密度で播種する（図２）。細胞（完全なＤＭＥＭ中１００μＬ：ＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎児血清、ＳＶＦ）を、阻害物質とプレインキュベートするか（５０μＬ；種々の濃度、３時間プレインキュベート）、又は阻害物質を含まずにプレインキュベートする。次いで、毒素を添加した完全培地（５０μＬ、変動する濃度範囲）を各ウェルに加える。２０時間のインキュベーション後、培地（２００μＬ）を除去し、１０％ＳＶＦ及び^１４Ｃ－ロイシン（GE）０．５μＣｉ／ｍＬを含むロイシン不含ＤＭＥＭ培地（Eurobio）と交換する。３７℃で７時間インキュベートした後、Ｗａｌｌａｃ １４５０ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンター（PE）でプレートを読み取ることにより、細胞による放射能の取り込みを求める。

【0112】

これらの毒素はタンパク質合成を遮断するため、影響を受けた細胞は放射性標識ロイシンを取り込むことができなくなる。対照的に、阻害物質で処理された細胞は依然としてタンパク質を合成し、したがって放射性標識アミノ酸を取り込む。細胞が放射性元素をウェルの底近くに十分に濃縮すると、プレートに含まれるシンチラント（scintillant）が励起され、シンチレーションカウンターによって検出される光子放出がもたらされる（１分あたりのカウント数ｃｐｍで測定）。このデータを、その後、細胞によるタンパク質合成のパーセンテージとして表す。このように細胞毒性曲線を、阻害物質なし（白丸）又は阻害物質の存在下（黒丸）でプロットすることができる（図２）。非線形回帰によるデータの分析により、ＥＣ_５０、すなわち生存細胞の５０％に相当する放射性ロイシンの５０％の取り込みが観察される有効濃度を推定することができる。ＥＣ_５０値が高いほど、同じ細胞毒性を発生させるにはより高い濃度の毒素が必要となるため、細胞保護が大きくなる。したがって、ＥＣ_５０の比Ｒを計算することにより、阻害物質の有効性を求めることができる（図２）。値が大きいほど（１超）、細胞保護が大きくなる。

【0113】

漸増濃度の阻害物質の不在下、そしてその後存在下で、６つの細胞毒性曲線が得られる。阻害物質の各濃度（Ｃ）について、一連のＲの最大値に対応するＲｍａｘを用いてＰｒｉｓｍソフトウェアによって計算されたＲの値から保護のパーセンテージを求める。
％保護＝［（Ｒ－１）／（Ｒｍａｘ－１）］×１００

【0114】

次いで、ＩＣ_５０を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、非線形回帰により、対応する細胞保護のパーセンテージが各化合物濃度に対してプロットされたグラフから計算する（図３を参照されたい）。

【0115】

ＩＣ_５０は、その阻害力の５０％を与える化合物の濃度に対応する。この濃度が低いほど、阻害物質はより強力になる。

【0116】

結果

【0117】

【表9】

【0118】

化合物Ｒｅｔｒｏ－２．１は下記式：

【化24】

を有する。

【0119】

結論
これらの結果は、試験した化合物がいずれも、化合物Ｒｅｔｒｏ－２．１（ジヒドロキナゾリノンが非置換フェニルを保有する、本発明外の対照）、及び化合物６（ジヒドロキナゾリノンが、ヒドロキシル基によりパラ位で置換されたフェニルを有する本発明外）よりも志賀毒素の細胞効果のより強力な阻害物質であることを示す。

【0120】

ＩＩＩ．リシンに対する本発明の化合物の保護活性を評価するための測定
本発明の化合物のプロトコル及びＩＣ_５０の計算は、リシンを毒素として、段落ＩＩに示したものと同様である。

【0121】

ＩＶ．逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用するウイルス、特にエンドサイトーシスによって細胞に侵入するウイルスに対する本発明の化合物の保護活性を評価するための測定
以下に示す細胞を、１０％のウシ胎児血清を添加したＭＥＭ培地中で９６ウェルのプレートに５０％の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。細胞を一晩放置した。試験化合物を、ＤＭＳＯにそれぞれ２０ｍＭで溶解した。翌日、血清を含むＭＥＭで各化合物を１００倍に希釈し、段階希釈し（５濃度まで）、各ウェルの細胞培地に等量加えた。１時間のプレインキュベーション後、以下に示す感染多重度（ＭＯＩ）でウイルスを加えた。使用されるウイルスは、特に緑色蛍光タンパク質をコードする組換えウイルスを含む（Towner et al. 2005. Virology 332:20-7又はNEOVIRTECHが供給するＡＮＣＨＯＲウイルス）。これらのウイルスは複製することができ、動物では通常の病態形成を呈する。次いで、細胞を１０％ホルマリンで以下に示す時間、固定した。標準的な方法を使用して、細胞核をＤＡＰＩで染色した。次いで、落射蛍光顕微鏡を使用して各ウェルを撮影することにより、感染を分析した。Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアを使用して、ＤＡＰＩ染色細胞及び緑色蛍光細胞をそれぞれ数えることにより、総細胞数及び感染細胞数を数えた。感染細胞の割合を、緑色蛍光細胞の数を細胞の総数で割ることによって計算した。Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェア（Di Veroli et al. Bioinformatics 2016, 32(18), 2866-8）を使用して細胞数の関数としてＩＣ_５０の評価を行った。

【0122】

感染及び固定の条件：
ＭＯＩ １のｈＣＭＶ－ＡＮＣＨＯＲをＭＲＣ５細胞に感染；６日で固定；
ＭＯＩ ０．１のＶＡＣＶ－ＡＮＣＨＯＲをＨｅＬａ細胞に感染；４８時間で固定；
ＭＯＩ ０．０５の粘液腫ウイルス（Myxomavirus）Ｔ１－ＡＮＣＨＯＲをＲＫ１３細胞に感染；６日で固定；
ＭＯＩ ０．２のＲＳＶをＨｅｐ２細胞に感染；７２時間で固定。

【0123】

毒性
１００μＭ～０．２μＭの本発明の化合物濃度を試験した（２回）。上に記載される細胞を、本発明の化合物の添加後７２時間で固定した。ウェルごとに数えた細胞数を、ＤＭＳＯのみで処理された対応するウェルで数えた細胞数に対して正規化する。上に言及されるＣｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェアを使用して、細胞数の関数としてＣＣ_５０の評価を行った。

【0124】

結果
得られた結果を下記表に報告する。

【0125】

【表10】

【0126】

Ｖ．逆行輸送及び／又はシンタキシン５依存性輸送を使用する細菌、特にエンドサイトーシスによって細胞に侵入する細菌に対する本発明の化合物の保護活性を評価するための測定
ＨｅＬａ２２９細胞を、細菌を細胞に添加するまで、２５．５０μＭ及び７５μＭの濃度で評価する本発明の化合物で３０分間前処理した。

【0127】

一次感染を示す細胞を、感染後２４時間（ｈｐｉ）で溶解する。

【0128】

上記化合物で処理した細胞も感染後４８時間で溶解し、得られた溶解物を使用して新たなＨｅＬａ２２９細胞に感染させ、これを感染後２４時間で溶解し、免疫ブロットによって一次感染試料と共に分析する。アドホック抗体を使用して細菌の増殖を検出し、アクチンを対照として使用する。

【0129】

ＶＩ．本発明によるプロドラッグの合成
本発明によるプロドラッグを以下のように合成した：

【化25】

【0130】

このようにして得られた化合物は、優れた水溶性を有する（７００ｍｇ／ｍＬ超、ミニポンプ、点滴、静脈内注射で投与可能）。血漿アミダーゼ及び／又はエステラーゼによるそれらの切断は迅速である（例えば、３７℃のマウス血漿中で２．６時間のｔ_１／２）。

【0131】

熱ゲル化ポリマーの形態の他のプロドラッグを、以下のように取得した：

【化26】

【0132】

あるいは、以下の通りである：
（化合物２）－ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６－（化合物２）（Ｍｎ＝４３９３ｇ／ｍｏｌ）、又は、
（化合物２）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－Ｃ（＝Ｏ）－（化合物２）、特に下記式：

【化27】

のものは、水溶性で熱ゲル化特性を持つ。

【0133】

ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６は、例えば以下の通りに取得される：

【化28】

【0134】

ポリ（エチレングリコール）１４５０（３．００ｇ－２．０７ｍｍｏｌ）をシュレンク管に入れ、油浴中で１００℃に加熱する。シュレンク管を撹拌しながら２時間真空下に置く。グリコリド（０．６ｇ－５．１３ｍｍｏｌ）及びＤ，Ｌ－ラクチド（２．６４ｇ－１８．３ｍｍｏｌ）をシュレンク管に加え、固体が完全に溶融するまで混合物を１３０℃に加熱した。Ｓｎ（Ｏｃｔ）_２（１滴）を加える。混合物を窒素下で撹拌しながら１３０℃で２０時間加熱する。混合物を室温にし、２０ｍＬのアセトンに溶解した。この溶液を、撹拌しながら４℃の蒸留水に１滴ずつ加える。ポリマーが完全に可溶化するまで混合物を４℃で撹拌し、次いでこの混合物を８０℃に加熱した。ポリマーをデカンテーションにより回収する。この順序を繰り返した後、固体をジクロロメタンに溶解する。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発させて半透明のガムを得て、これを４０℃で１５時間、真空乾燥させた。

【0135】

精製された生成物：３．８ｇ（４９％）。
モル質量（ＰＬＡ）＝１７０７ｇ／ｍｏｌ；モル質量（ＰＧＡ）＝３６５ｇ／ｍｏｌ、化合物ＰＬＧＡ１０３６－ＰＥＧ１４５０－ＰＬＧＡ１０３６に対応（Ｍｎ＝３５２２ｇ／ｍｏｌ；ＬＡ／ＧＡ＝３．８）。

【図1】

【図2】

【図3】