特許7499905腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害を処置するためのプレバイオティック
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-06
(45)【発行日】2024-06-14
(54)【発明の名称】腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害を処置するためのプレバイオティック
(51)【国際特許分類】
A61K 31/715 20060101AFI20240607BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20240607BHJP
A61K 36/28 20060101ALI20240607BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20240607BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20240607BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240607BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240607BHJP
A61P 5/50 20060101ALI20240607BHJP
【ＦＩ】
A61K31/715
A23L33/105
A61K36/28
A61P1/00
A61P3/00
A61P3/04
A61P3/10
A61P5/50
【請求項の数】
10
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023039424
(22)【出願日】2023-03-14
(62)【分割の表示】P 2021509965の分割
【原出願日】2018-09-07
(65)【公開番号】P2023075270
(43)【公開日】2023-05-30
【審査請求日】2023-04-07
(73)【特許権者】
【識別番号】520193161
【氏名又は名称】ニュートリリーズ ビー．ヴイ．
【氏名又は名称原語表記】ＮＵＴＲＩＬＥＡＤＳ Ｂ．Ｖ．
(74)【代理人】
【識別番号】100107456
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 成人
(74)【代理人】
【識別番号】100162352
【弁理士】
【氏名又は名称】酒巻 順一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100123995
【弁理士】
【氏名又は名称】野田 雅一
(74)【代理人】
【識別番号】100206944
【弁理士】
【氏名又は名称】吉川 絵美
(72)【発明者】
【氏名】アルバース， ルード
(72)【発明者】
【氏名】ツゾウマキ， マリア
【審査官】高橋 樹理
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１２／１４８２７７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Carbohydrate Polymer，2016年，Vol.136，p.1074-1084
【文献】Molecules，2017年，Vol.22, 699，p.1-13
【文献】Carbohydrate，2016年，Vol.146，p.187-196
【文献】Obesity Facts，2018年05月，Vol.11, Suppl. 1，p.85, T1P63
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害の治療的又は予防的処置のためのプレバイオティック組成物の製造における、ラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ－Ｉ）多糖の使用であって、前記障害が、体重過多、肥満症、インスリン抵抗性、及び腸のバリア機能不全から選択され、前記組成物が、前記対象に経口投与されるものであり、前記組成物が、乾物で少なくとも０．１重量％の、チコリを起源とするＲＧ－Ｉ多糖を含有し、前記ＲＧ－Ｉ多糖が、１５ｋＤａを超える分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有し、前記ラムノース残基が、アルファ（１→４）－ガラクツロン－アルファ（１→２）－ラムノース残基に含有され、前記ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比が、２０：１～１：１の範囲内にある、使用。
【請求項2】
前記組成物が、１日当たり体重１ｋｇにつき少なくとも１ｍｇのＲＧ－Ｉ多糖を付与する量で少なくとも３日間、前記対象により摂取される、請求項１に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項3】
前記ＲＧ－Ｉ多糖が、前記プレバイオティック組成物に存在するペクチン多糖の少なくとも２０重量％を占める、請求項１又は２に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項4】
前記ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比が、１５：１を超えない、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項5】
前記ＲＧ－Ｉ多糖の、アラビノース残基のラムノース残基に対するモル比が、３０：１を超えない、請求項１～４のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項6】
前記ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクトース残基のラムノース残基に対するモル比が、３０：１を超えない、請求項１～５のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項7】
前記ＲＧ－Ｉ多糖の、前記ガラクツロン酸残基の８５％未満が、メチルエステルの形態にエステル化されている、請求項１～６のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項8】
前記対象が、代謝障害に罹っている又は罹るリスクにある、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項9】
前記対象が、腸のバリア機能不全に罹っている又は罹るリスクにある、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【請求項10】
前記組成物がドリンク、カプセル、錠剤、粉末、バー及びスプレッドから選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載のＲＧ－Ｉ多糖の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の技術分野】
【0001】
本発明は、対象における、腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害の治療的又は予防的処置の方法であって、障害が、代謝障害及び腸のバリア機能不全から選択され、前記方法が、プレバイオティック組成物を対象に経口投与することを含み、前記プレバイオティック組成物が、果実、ニンジン、マメ(pea)、チコリ又はテンサイを起源とするラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ－Ｉ）多糖を含有する、方法に関する。
【0002】
本発明は、更に、前述した処置方法における使用に好適なプレバイオティック組成物及びシンバイオティック組成物に関する。
【発明の背景】
【0003】
腸管微生物叢とヒトの健康との関係が一層認められつつある。現在では、健康な腸管微生物叢が宿主の総体的健康を広く左右することが確立されている。
【0004】
宿主であるヒトは、消化、代謝及び免疫機能の調整において重要な役割を果たし且つ胃腸管を超えて著しい影響を有する微生物群の大規模で多様なエコシステムに、生息場所及び栄養物を提供している。微生物群の多様性及び機能における変化は、宿主の健康に対して広範囲な結果を伴い、機能性腸障害、炎症性腸疾患、並びに他の免疫媒介性疾患（セリアック病、アレルギー）及び代謝状態（２型糖尿病、ＮＡＳＨ）を含む多くの障害と関連している。
【0005】
細菌叢異常（細菌叢異常症とも呼ばれる）は、体表面又は体内の、微生物の不均衡又は適応不良、例えば不良な微生物叢を表す用語である。例えば、宿主の一定の表面積を占める細菌群、例えば腸管微生物叢、皮膚微生物叢又は膣微生物叢は、正常であれば優位を占める種が過小となるように、正常であれば排除される又は抑制される種が望ましくないレベルまで増加するように、修正／変更されることになりうる。そのような群における細菌の集まりは、まとめて微生物叢と呼ばれる。酵母、真菌、ウイルスを含む他の微生物と一緒の局所的微生物叢と、そのような微小環境に住む寄生生物とは、合わせてマイクロバイオームと呼ばれる。細菌叢異常は、微生物叢における不均衡に限定されず、マイクロバイオームにおける他の微生物（例えばウイルス、古細菌及び真菌）もまた包含しうる。
【0006】
マイクロバイオームが、細菌叢正常と呼ばれるようによく均衡がとれているとき、特定の微小環境を占める微生物は、局所的条件によく適合している多少なりとも安定な群を形成し、利用可能な基質の生存代謝能力を有し、ストレッサー及び基質利用性の調整に効率よく対処し、且つ群のメタ安定性及びその宿主の長期の健康に寄与する適切な制御機序を有する。
【0007】
細菌叢異常は、最も一般的には、胃腸管の状態として研究されているが、細菌叢異常は、微生物群が生息する任意の体腔、粘膜及び皮膚表面に影響を及ぼしうる。
【0008】
細菌叢異常は、宿主の病気に関連しており、腸の細菌叢異常は、例としては、炎症性腸疾患、慢性疲労症候群、肥満、がん、心血管代謝状態、インスリン非感受性、（前）糖尿病、細菌性膣症及び大腸炎に関連している。
【0009】
微生物叢の組成及び安定性は、宿主の遺伝的背景によって、又は例えば宿主の食事、ライフスタイル、医薬品（例えば抗生物質）の使用若しくは発達段階（年齢）を含む環境条件若しくはストレッサーによって影響される。これは、宿主と、局所的微生物エコシステムの主な構成要素との間の永久的且つ複合的な相互作用であると解釈される。これらの構成要素には、微生物叢、宿主の免疫系、局所的上皮バリア、及び腸管の事例では腸内神経系が挙げられる。
【0010】
新生児の微生物叢は、誕生以降にそれ自体を確立し、生活の１週間及び１か月間に著しく変動して、３～４歳のころに中心的な成人の微生物叢に近くなる。腸管の、この段階的な微生物の定着は、宿主の免疫系及び腸内神経系、腸管バリア及び機能、並びに宿主の代謝プログラミングの育成及び成熟にとって重要であり、これは、短期間への影響を有し、且つ後に、生活の健康状態及び疾患のリスクに影響を有する。新生児の微生物叢は、母親の食事及び微生物叢によって、送達方法によって、幼児の栄養物（母乳若しくは調整粉乳）及び周囲の環境条件によって、影響される。
【0011】
対照的に、健康な成人の中心的な微生物叢は、多様なストレッサー（例えば抗生物質又は医薬品の使用）によって乱されたときに、微生物叢の回復力として示される、健康な対象におけるその元々の組成に近いものに戻るという意味において、より安定である。多様性の損失、有益な微生物の不在又は低含量、及び回復力の低下は、全て、疾患を伴う。
【0012】
加齢の又は高齢の対象の微生物叢は、組成の変化によって、健康な成人の個体群における微生物叢よりも多様であり、細菌多様性の低下、有益な微生物の減少、及び回復力の低下へと至らせる。これらの変化の全ては、健康状態における変化を伴う。
【0013】
微生物叢は、空間及び源／栄養素を競うきわめて多様な種から構成されるが、それは、それらのそれぞれの発酵生成物を用いて互いに食物を与えることもでき、そのようにして、健康な状態において、宿主である哺乳動物とのシンバイオシスにおいて生きる、微生物のコンソーシアムへと導く。腸の微生物叢内の微生物の高い多様性が宿主の健康にとって有益であると考えられ、その理由は、多様性が、腸の微生物叢を乱す因子（例えば抗生物質、食事の変更、新しい種の侵入）に対して、より回復力に富ませるためである。また重要なのは、微生物のコンソーシアムであり、即ち、互いの発酵生成物の食物を与え且つ利用可能な基質を用いる特定の微小環境において（例えば粘液、細胞放出及び食事から）活発に増殖する多少なりとも安定なエコシステムを合わせて形成する、種々の微生物のメタ安定な組み合わせである。
【0014】
体表面又は体内で見出される典型的な微生物の種は、ほとんど有益である又は無害である。病原性共生生物又は病原体でさえもまた、それらが臨界値を下回ったままである限り、「正常な」微生物叢の一部である。哺乳動物の腸の微生物叢は、消化を助ける、食物からエネルギーを生成する、特定の（ミクロ）栄養素を宿主に付与する、短鎖脂肪酸等の重要な代謝産物を生成する、並びに宿主の免疫系を育成する（新生児及び幼児）又は維持する（成人）等の、一連の有益かつ必要な機能を実行する。それらはまた、入ってくる病原性微生物又は毒性化合物から体を防御することも助ける。
【0015】
微生物の種はまた、多くの種々のタイプの廃棄性副生成物を排泄する。種々の廃棄物徐去の機構を用いて、正常な状況下で、体は、これらの副生成物をほとんどトラブルなく又は全くトラブルなく効率的に管理する。不運にも、大きすぎる微生物の個体群、及びそれらの数が増えたことによる微生物の種の不適切な優勢性は、増加した量のこれらの副生成物を排泄する。微生物の副生成物の量が増加するにつれ、より高い排泄性副生成物レベルが、体の排泄物除去の機構に重荷となりうる。この例は、タンパク質発酵からのアンモニア形成であり、これは、宿主にとって有害な化合物へと更に発酵されうる。
【0016】
細菌叢異常に罹っている対象で観察される負の健康的症状のうちの多くを引き起こすのは、特定の微生物の種の相対的優勢性又は過小性、微生物の代謝産物の低密度及び／又は生成の乱れである。
【0017】
プロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスを消費すると、腸の微生物叢に、好ましい影響を有することができる。
【0018】
プロバイオティクスは、「適切な量で投与されたとき、宿主に健康の利益を授ける生きた微生物」である（世界保健機関の定義）。
【0019】
プレバイオティクスは、群における１つの又は限定された数の微生物の種の増殖及び／又は活性を選択的に刺激することによって宿主に有益に影響を及ぼす非消化性食品成分である。
【0020】
最も知られたプレバイオティクスは、グリコシド結合によって結合された同一の糖（例えばフルクトース、ガラクトース又はアラビノース）の単純なオリゴマーである。これらは、これらの相対的に単純な基質を（急速に）発酵させ、短鎖脂肪酸等の有益な代謝産物を生成する代謝能力を有する微生物の種の選択的増殖を刺激する。そのような発酵されやすい基質の使用の典型的な副作用には、腸の不快感、鼓腸及び逆流が挙げられる。これらの副作用は、ガスの急速な発酵生成によって引き起こされる。
【0021】
ペクチンは、陸生植物の一次細胞壁に存在する構造的なヘテロ多糖である。
ペクチン多糖は、様々な量の多糖成分：
（ｉ）ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
（ｉｉ）キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
（ｉｉｉ）アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
（ｉｖ）ラムノガラクツロナン－Ｉ（ＲＧ－Ｉ）、及び
（ｖ）ラムノガラクツロナン－ＩＩ（ＲＧ－ＩＩ）
を含む多糖の異種群である。
ペクチン多糖は、様々な量の多糖成分：
（ｉ）ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
（ｉｉ）キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
（ｉｉｉ）アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
（ｉｖ）ラムノガラクツロナン－Ｉ（ＲＧ－Ｉ）、及び
（ｖ）ラムノガラクツロナン－ＩＩ（ＲＧ－ＩＩ）
を含む多糖の異種群である。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】は、前述した４種の多糖成分を含む、ペクチン多糖の構造の模式図を提供する。多糖成分ＨＧ、ＸＧ及びＲＧ－ＩＩが、典型的には、ペクチン多糖のごく一部を占めるのみであることが特記される。
【図2】
は、ＲＧ－Ｉの構造の模式図である。
【0023】
多糖成分ＨＧ、ＸＧ及びＲＧ－ＩＩはそれぞれ、α－（１－４）－結合Ｄ－ガラクツロン酸単糖単位の直鎖からなる主鎖を含む。
【0024】
ＲＧ－Ｉのみが、繰り返しの二糖単位４）－α－Ｄ－ガラクツロン酸－（１，２）－α－Ｌ－ラムノース－（１の直鎖からなる主鎖を含む。ＲＧ－Ｉの構造の模式図を図２に示す。
【0025】
ペクチン多糖の組成及び微細構造は、植物源及び適用される抽出条件に応じて広く多様である。ホモガラクツロナンドメインは、最大約１００の連続するＤ－ＧａｌＡ残基の長さを有することができる。側鎖を含有するＲＧ－Ｉドメインは、通常、「枝分かれした領域」又は「毛様領域」と呼ばれ、その一方でホモガラクツロナンドメイン（２つのＲＧ－Ｉドメイン同士の間）は、典型的にはオリゴ糖で置換されない。
【0026】
ＲＧ－ＩのＧａｌＡ残基は、１位及び４位を介してＲｈａ残基に結合し、その一方でＲｈａ残基は、アノマー位及び２－ＯＨ位を介してＧａｌＡ残基に結合する。一般に、Ｒｈａ残基の約２０～８０％が、中性及び酸性の側鎖を有し、（植物源及び単離方法に応じて）４－ＯＨ位において分枝状である。これらの側鎖は、多様な方法で結合されたＡｒａ及びＧａｌ残基から主になり、アラビノガラクタン－Ｉ（ＡＧ－Ｉ）及び／又はＡＧ－ＩＩとして知られるポリマーを構成する。ＡＧＩは、アルファ－Ｌ－アラビノシル基の３－ＯＨでの置換を有するベータ－（１，４）－結合Ｄ－Ｇａｌ主鎖からなり、このＧａｌ主鎖は、間隔が空いたアルファ（１，５）－Ｌ－Ａｒａ単位を有することができる。ＡＧ－ＩＩは、外部に短い（１，６）－結合鎖の置換を有する主に内部のベータ（１，３）－結合Ｄ－Ｇａｌを有する高度に枝分かれしたガラクタンからなる。（１，６）－結合鎖は、（１，３）－及び／又はアルファ（１，５）－結合Ｌ－Ａｒａの更なる結合を有する。オリゴ糖側鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、これらの側鎖のうちのいくつかは、アルファ－Ｌ－フコシド残基、ベータ－Ｄ－グルクロニド残基及び４－Ｏ－メチルベータ－Ｄ－グルコロニル残基で末端化させることができる。
【0027】
Ｇｏｍｅｚら（Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｐｅｃｔｉｎｓ ａｎｄ ｐｅｃｔｉｃ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｌｅｍｏｎ ｐｅｅｌ ｗａｓｔｅｓ ａｎｄ ｓｕｇａｒ ｂｅｅｔ ｐｕｌｐ：Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄｓ、第２０巻、２０１６年１月、１０８～１２１頁）は、そこでテンサイパルプ（ＳＢＰ）及びレモンの皮の廃棄物（ＬＰＷ）が使用されてペクチンオリゴ糖の２種の混合物（それぞれ、ＳＢＰＯＳ及びＬＰＯＳと示される）が得られた、研究の結果を記載した。プレバイオティック効果を引き起こすための、ペクチンオリゴ糖、ＳＢＰ及びＬＰＷからのペクチン、並びに市販のＦＯＳの好適性を、ヒトの便の接種菌液及び８種の種々の細菌プローブを使用して、インビボ発酵及び蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって比較した。ビフィドバクテリウム属（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）とラクトバチリー（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）とを合わせた個体群は、それぞれ、ＬＰＯＳ、ＳＢＰＯＳ及びＦＯＳでの培養において、１９％から、２９％、３４％及び３２％まで増加した。フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びロセブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）のカウントもまた、全ての基質で（特にＬＰＯＳで）増加した。有機酸の最大濃度は、オリゴ糖を含有する培地において観察された。著者らによれば、この作用は、ペクチンオリゴ糖が、ペクチンよりも良好なプレバイオティック特性を提示すること、且つＦＯＳと同様である又はより良好であることを確認している。
【0028】
Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｐｅｃｔｉｎ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｌａｃｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ、Ｊ Ｐｒｏｂ Ｈｅａｌｔｈ ２０１６、４：２）は、そこで異なるタイプの果実廃棄物［（バナナ（Ｍｕｓａ ｓｐ．）及びスイートレモン（Ｃｉｔｒｕｕｓ ｌｉｍｅｔｔａ）及びスイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｌａｎａｔｕｓ）の皮、並びにトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）及びグアバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ）の腐らせた果実］から抽出されたペクチンの、乳酸菌（ＬＡＢ）及びビフィドバクテリウム属［ラクトバチルス・カセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）及びビフィドバクテリウム・ビフィドゥム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）］の増殖に対する効果が試験された研究を報告している。ペクチンが、細菌の増殖、及び滴定酸度をかなり増強できたことが観察された。著者らは、果実廃棄物から抽出されたペクチンが、ラクトバチリー及びビフィドバクテリウムの増殖を促進するのに使用されうると結論づけた。
【0029】
Ｂａｂｂａｒら（Ｐｅｃｔｉｃ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｂｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈ ｂｅｎｅｆｉｔｓ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１６；３６（４）５９４～６０６頁）は、ペクチンを含有する農業副産物が、ペクチンオリゴ糖（ＰＯＳ）として知られる新しいクラスのプレバイオティクスの潜在源であると述べている。化学処理、酵素処理及び水熱処理による、テンサイ、リンゴ、オリーブ及び柑橘類のようなペクチンを含有する農業副産物の制御加水分解を、オリゴ－ガラクトツロニド、ガラクト－オリゴ糖、ラムノガラクツロナン－オリゴ糖などを生成するために使用することができる。
【0030】
Ｈｏｏｎ Ｋｉｍら（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ－ ａｎｄ ｒｈａｍｍｏｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｎ Ｉ－ｒｉｃｈ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｙｏｕｎｇ ｂａｒｌｅｙ ｌｅａｆ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄｓ、２０１７；３５、３８４～３９０頁）では、オオムギ葉から４種の多糖断片を調製し、腸の免疫刺激活性をインビトロで比較した。断片の中で、酵素抽出（ＢＬＥ－Ｐ）によって調製された高分子量の断片が、パイエル板（ＰＰ）を通して骨髄細胞増殖を活性化させる効能、及びサイトカイン生成をインビトロで刺激する効能を示した。ＢＬＥ－Ｐは、ヘミセルロースのグルクロノアラビノキシランと、８０％超を占めるペクチンラムノガラクツロナンＩとの混合物として特定される。続いて、インビボの腸の免疫刺激活性に対する効果を調べるために、ＢＬＥ－Ｐがマウスに２０日間、経口投与された。ＢＬＥ－Ｐの投与は、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）の生成を増加させただけでなく、ＩｇＡ関連サイトカイン、例えばトランスフォーミング増殖因子－β及びインターロイキン－１０のレベルもまた高めた。
【0031】
米国特許出願公開第２０１４／２７５２３３号は、植物組織１グラム当たり少なくとも０．２５ｍｇのグリセオリン含有量を有する、有効量の、単離された植物組織を含む組成物を対象に経口投与することを含む、対象における胃腸の細菌叢異常を処置する方法について記載している。グリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ及びグリセオリンＩＩＩと呼ばれる３種のきわめて似たフィトアレキシンが、植物が、土壌微生物、紫外線（ＵＶ）光又は重金属に曝露されるときに、ダイズによって生成される。
【0032】
国際公開第２０１１／０６９７８１号は、免疫応答を調整することができる多糖について記載しており、前記多糖は、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の種の植物から得られ、多糖の主鎖は、交互のラムノガラクツロナン－Ｉドメイン及びアルファ（１，４）－結合ポリガラクツロン酸又はアルファ（１，４）－結合オリゴガラクツロン酸ドメインを含み、多糖の主鎖の、ガラクツロン酸残基の、ラムノシル残基に対するモル比は、２．５：１～１：１を範囲とし、多糖は、少なくとも７０ｋＤａの分子量を有する。
【0033】
国際公開第２０１２／１４８２７７号は、少なくとも２０重量％の乾物含有量を有する調製品について記載しており、前記調製品は、ペクチン多糖の重量により計算して少なくとも２０％の４０ｋＤａ超の分子量を有するラムノガラクツロナン－Ｉペクチンを含む、乾物で少なくとも５０重量％のペクチン多糖の混合物を含有し、前記ペクチン多糖の混合物は、
２０％以下の、ガラクツロン酸残基のメチル化度、
２０％以下の、ガラクツロン酸残基のアセチル化度
によって特徴づけられ、
調製品は、それが５０ｍＭアンモニウム重炭酸塩の水溶液で２．５重量％の固体含有量まで希釈されるときにゲルを形成しない。この調製品の、免疫応答を調整するための医薬品としての使用も記載されている。
２０％以下の、ガラクツロン酸残基のメチル化度、
２０％以下の、ガラクツロン酸残基のアセチル化度
によって特徴づけられ、
調製品は、それが５０ｍＭアンモニウム重炭酸塩の水溶液で２．５重量％の固体含有量まで希釈されるときにゲルを形成しない。この調製品の、免疫応答を調整するための医薬品としての使用も記載されている。
【0034】
［発明の概要］
発明者らは、腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害、特に代謝障害又は腸のバリア機能不全が、果実、ニンジン、マメ、チコリ又はテンサイを起源とするラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ－Ｉ）多糖を経口投与することによって治療的に又は予防的に処置されうることを予想外に発見し、前記ＲＧ－Ｉ多糖は、１５ｋＤａを超える分子量を有し、ラムノガラクツロナン－Ｉドメイン、及び任意選択でアルファ（ｌ，４）－結合ホモ－ガラクツロン酸ドメインを含む主鎖を有し、前記主鎖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、２０：１～１：１の範囲内にある。
発明者らは、腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害、特に代謝障害又は腸のバリア機能不全が、果実、ニンジン、マメ、チコリ又はテンサイを起源とするラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ－Ｉ）多糖を経口投与することによって治療的に又は予防的に処置されうることを予想外に発見し、前記ＲＧ－Ｉ多糖は、１５ｋＤａを超える分子量を有し、ラムノガラクツロナン－Ｉドメイン、及び任意選択でアルファ（ｌ，４）－結合ホモ－ガラクツロン酸ドメインを含む主鎖を有し、前記主鎖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、２０：１～１：１の範囲内にある。
【0035】
発明者らが理論に束縛されることを望むものではないが、ＲＧ－Ｉ多糖が、腸の微生物叢内の微生物の高い多様性を促進することによって、有益な細菌［例えばアッケルマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）及びビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）］の増殖又は活性を刺激することによって、及び／又は撹乱に対する腸の微生物叢の回復力を高めることによって、プレバイオティクスとして作用することが確信される。
【0036】
ＲＧ－Ｉ多糖の腸の発酵が、有益な短鎖脂肪酸の形成をもたらすことが、更に見出された。驚くべきことに、ＲＧ－Ｉ多糖の、短鎖脂肪酸への発酵変換は、例えばイヌリン等の従来のプレバイオティクスで観察されるよりも著しく少ないガス産生を伴う。
【0037】
したがって、本発明の一態様は、対象における腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害の治療的又は予防的処置の方法における使用のためのプレバイオティック組成物であって、障害が、代謝障害及び腸のバリア機能不全から選択され、前記使用が、プレバイオティック組成物を対象に経口投与することを含み、組成物が、乾物で少なくともの０．１重量％の、果実、ニンジン、マメ、チコリ又はテンサイを起源とするＲＧ－Ｉ多糖を含有し、前記ＲＧ－Ｉ多糖が、１５ｋＤａを超える分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有し、前記ラムノース残基が、アルファ（１→４）－ガラクツロン－アルファ（１→２）－ラムノース残基に含有され、ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比が、２０：１～１：１の範囲内にある、プレバイオティック組成物に関する。
【0038】
本発明に従って利用されるＲＧ－Ｉ多糖は、（例えばポリガラクツロナーゼを使用した）酵素処理と任意選択で組み合わされた水性抽出によって、果実、ニンジン、マメ、チコリ又はテンサイから単離されうる。
【0039】
本発明の別の態様は、
乾物で少なくとも０．１重量％の、前述したＲＧ－Ｉ多糖と、
乾物で少なくとも１重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳オリゴ糖、グアーガム、アラビアガム、又はこれらの任意の組み合わせから選択される１種以上のプレバイオティクスと
を含むプレバイオティック組成物に関する。
乾物で少なくとも０．１重量％の、前述したＲＧ－Ｉ多糖と、
乾物で少なくとも１重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳オリゴ糖、グアーガム、アラビアガム、又はこれらの任意の組み合わせから選択される１種以上のプレバイオティクスと
を含むプレバイオティック組成物に関する。
【0040】
本発明の、なおも別の態様は、
乾物で少なくとも０．１重量％のＲＧ－Ｉ多糖と、
生存可能な微生物、生存不能な微生物、微生物の断片、及びこれらの組み合わせの形態にある、１種以上のプロバイオティック微生物株と
を含むシンバイオティック組成物に関する。
乾物で少なくとも０．１重量％のＲＧ－Ｉ多糖と、
生存可能な微生物、生存不能な微生物、微生物の断片、及びこれらの組み合わせの形態にある、１種以上のプロバイオティック微生物株と
を含むシンバイオティック組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【0041】
本発明の一態様は、対象における腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害の治療的又は予防的処置の方法における使用のためのプレバイオティック組成物であって、障害が、代謝障害及び腸のバリア機能不全から選択され、前記使用が、プレバイオティック組成物を対象に経口投与することを含み、組成物が、乾物で少なくともの０．１重量％の、果実、ニンジン、マメ、チコリ又はテンサイを起源とするラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ－Ｉ）多糖を含有し、前記ＲＧ－Ｉ多糖が、１５ｋＤａを超える分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有し、前記ラムノース残基が、アルファ（１→４）－ガラクツロン－アルファ（１→２）－ラムノース残基に含有され、ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比が、２０：１～１：１の範囲内である、プレバイオティック組成物に関する。
【0042】
用語「腸のマイクロバイオームの乱れた組成又は機能に伴う障害」は、本明細書で使用されるとき、腸の細菌叢異常状態（乱れた組成）、及び腸のマイクロバイオームによる必須代謝産物の不十分な発酵生成に伴う障害（乱れた機能）を包含する。短鎖脂肪酸（アセテート、プロピオネート及びブチレート）は、そのような必須代謝産物の例である。
【0043】
用語「腸の細菌叢異常状態」は、本明細書で使用されるとき、対象の健康に悪影響を及ぼし且つ均衡のとれた腸のマイクロバイオーム（細菌叢正常）からの著しい逸脱によって引き起こされる状態を指す。
【0044】
用語「分枝状の多糖」は、本明細書で使用されるとき、グリコシド結合によって一緒に結合された単糖単位の直鎖状の主鎖の鎖を含む多糖を指し、主鎖の鎖内の単糖単位のうちの少なくとも１つは、１つ以上のグリコシド結合単糖単位の側鎖を有する。
【0045】
用語「主鎖の鎖」と「主鎖」とは同義語である。
【0046】
用語「ペクチン多糖」は、本明細書で使用されるとき、１５ｋＤａを超える分子量を有し且つガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を含む、任意選択で分枝状の多糖を指し、前記ラムノース残基は、アルファ（１→４）－ガラクツロン－アルファ（１→２）－ラムノース残基に含有される。
【0047】
用語「ストレッチ」は、本明細書で使用されるとき、そこに結合している任意の側鎖を除く、多糖の主鎖の２つ以上のグリコシド結合単糖の配列を指す。
【0048】
用語「ドメイン」は、本明細書で使用されるとき、ストレッチ、及び前記ストレッチに結合している任意の側鎖を指す。
【0049】
用語「ラムノガラクツロナン－Ｉストレッチ」又は「ＲＧ－Ｉストレッチ」は、ガラクツロン酸（ＧａｌＡ）とラムノース（Ｒｈａ）とのペアからなるストレッチを指し、このＧａｌＡ残基は、１位及び４位を介してＲｈａ残基に結合し、その一方でＲｈａ残基は、アノマー位及び２－ＯＨ位を介してＧａｌＡ残基に結合し、即ち交互のアルファ（１→４）－ガラクツロン酸－アルファ（１→２）－ラムノース残基である。ＲＧ－Ｉストレッチのガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化されていてもよい。エステル化されたガラクツロン酸は、メチルエステル又はアセチルエステルの形態で存在しうる。
【0050】
ＲＧ－Ｉドメインは、側鎖、例えばガラクタン側鎖、アラビナン側鎖及びアラビノガラクタン側鎖を含むことができる。
【0051】
用語「ラムノガラクツロナン－Ｉ多糖」又は「ＲＧ－Ｉ多糖」は、１種以上のラムノガラクツロナン－Ｉストレッチを含有する主鎖を含む、任意選択で分枝状のペクチン多糖を指す。
【0052】
用語「アルファ（ｌ，４）－結合ガラクツロン酸ストレッチ」は、アルファ（１→４）－ガラクツロン残基からなるストレッチを指す。
【0053】
ＲＧ－Ｉドメイン以外に、本発明のＲＧ－Ｉ多糖は、１種以上のドメイン：
ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
ラムノガラクツロナン－ＩＩ（ＲＧ－ＩＩ）
を含有しうる。
ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
ラムノガラクツロナン－ＩＩ（ＲＧ－ＩＩ）
を含有しうる。
【0054】
ドメインＸＧ、ＡＧ及びＲＧ－ＩＩは、典型的には、ＲＧ－Ｉ多糖の、ごく一部を表す。
【0055】
本発明のＲＧ－Ｉ多糖に任意選択で存在するＨＧドメイン、ＸＧドメイン、ＡＧ及びＲＧ－ＩＩドメインは、２種以上のα－（１－４）－結合Ｄ－ガラクツロン酸の直鎖からなる主鎖を含む。これらのドメインの主鎖のガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化されていてもよい。エステル化されたガラクツロン酸は、メチルエステル又はアセチルエステルの形態で存在しうる。
【0056】
ＨＧドメインは、側鎖を一切含有しない。
ＸＧドメインの主鎖は、Ｄ－キシロースの形態にある１つ以上の側鎖を含有する。
ＡＧドメインの主鎖は、１つ以上のＤ－アピオース残基からなる１つ以上の側鎖を含有する。
ＸＧドメインの主鎖は、Ｄ－キシロースの形態にある１つ以上の側鎖を含有する。
ＡＧドメインの主鎖は、１つ以上のＤ－アピオース残基からなる１つ以上の側鎖を含有する。
【0057】
ＲＧ－ＩＩの主鎖は、排他的にではなくＤ－キシロース又はＤ－アピオースからなる１つ以上の側鎖を含有する。
【0058】
用語「果実」は、本明細書で使用されるとき、顕花植物における種子をつける構造体を指す。
【0059】
用語「プレバイオティック」は、本明細書で使用されるとき、それらの宿主の福祉に寄与する微生物の増殖又は活性を選択的に誘起する物質を指す。
【0060】
用語「プロバイオティック」は、本明細書で使用されるとき、適切な量で経口投与されたときに健康の利益を付与する微生物を指す。これらの微生物は、生存可能な微生物、生存不能な微生物、微生物の断片、及びこれらの組み合わせから選択される。
【0061】
用語「シンバイオティック」は、（ａ）１種以上のプレバイオティクスと（ｂ）１種以上のプロバイオティクスとの組み合わせを含有する組成物を指す。
【0062】
種々の多糖の濃度、及びそれらの単糖の組成は、当業者に既知の分析技術によって測定することができる。酸加水分解の後、単糖の組成は、好適には、高性能陰イオン交換クロマトグラフィーをパルス電流滴定検出と組み合わせて（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）測定することができる。
【0063】
分子サイズ分布は、屈折率（ＲＩ）検出法（濃縮法）、光散乱検出法（分子量検出法）、ＵＶ検出法（タンパク質の存在を示唆）及び差圧検出法（固有粘度検出法）を用いて、高性能サイズ排除クロマトグラフィーによって測定することができる。
【0064】
上に挙げた分析方法は、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ．２０７、第１巻、１９９２、１７６頁（中性糖分析について）、及びＭｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．、Ｖｏｌ６１、第１巻、２０１７、１６００２４３（ガラクツロン酸分析及び分子サイズ分布について）に記載されている。
【0065】
本明細書で挙げる全ての百分率は、別段の記述がない限り、重量百分率を指す。
【0066】
本発明のＲＧ－Ｉ多糖含有組成物が経口投与される対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトの対象である。好ましい実施形態によれば、ヒトの対象は、その中心的な成人の微生物叢を依然として発達させている幼児（＜４歳）、又はその中心的な成人の微生物叢の多様性及び回復力を失うリスクにある高齢者（＞５０歳）である。
【0067】
経口投与は、本処置方法の文脈では、自己投与を包含する。
【0068】
好ましい実施形態によれば、経口投与されるＲＧ－Ｉ多糖含有組成物を受ける対象は、代謝障害に罹っている又は罹るリスクにある。最も好ましくは、対象は、代謝障害に罹っている。
【0069】
本処置によって（治療的に又は予防的に）首尾よく処置されうる代謝障害には、体重過多、肥満症、メタボリックシンドローム、インスリン欠乏又はインスリン抵抗性関連障害、２型糖尿病、グルコース不耐症、脂質代謝異常、高血糖、脂肪肝、脂質異常症、高コレステロール、トリグリセリド上昇が挙げられる。本処置は、体重過多又は肥満症及びインスリン抵抗性の治療的又は予防的処置に特に好適である。
【0070】
別の好ましい実施形態によれば、対象は、腸のバリア機能不全に罹っている又は罹るリスクにある。より好ましくは、対象は、腸のバリア機能不全に罹っている。
【0071】
腸のバリア又は腸の粘膜バリアは、栄養素を吸収する能力を保持しながら、腸内の望ましくない管腔の含有物の適切な封じ込めを確実にする腸の粘膜の性質を指す。体と、腸管の管腔の含有物との間にバリアがもたらす分離は、管腔の含有物が制御されずに体内に移行することを防ぐ。粘膜組織及び循環系を、炎症誘発性病原体、毒素及び抗原への曝露から防御するバリアの役割は、健康及び福祉の維持において重要である。腸のバリア機能不全は、食物アレルギー、微生物感染症、被刺激性腸症候群、炎症性腸疾患、セリアック病、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病及び敗血症性ショック等の多くの健康状態に関係があるとされてきた。
【0072】
本発明の好ましい実施形態によれば、プレバイオティック組成物は、腸の細菌叢異常状態を治療的に又は予防的に処置するために使用される。
【0073】
本発明に従って腸の細菌叢異常状態の処置を受ける対象は、好ましくは、病原性の腸の細菌叢異常状態に罹っている又は罹るリスクにある対象であり、最も好ましくは、そのような病原性の腸の細菌叢異常状態に罹っている対象である。ここで、「病原性の」は、状態が、疾患を引き起こしうる又は悪化させうることを意味する。
【0074】
別の好ましい実施形態によれば、プレバイオティック組成物は、短鎖脂肪酸の、腸の発酵生成を高めるために使用される。
【0075】
本発明に従って利用されるＲＧ－Ｉ多糖は、好ましくは、リンゴ、ピーマン、コケモモ、ニンジン、柑橘類、ブドウ、マメ、チコリ、テンサイ及びオリーブ、オクラ、並びにこれらの組み合わせから選択される植物源を起源とする。更により好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖は、リンゴ（例えばリンゴ搾汁滓）、ピーマン、ニンジン、柑橘類の皮、ブドウ、チコリ、テンサイ（例えばテンサイパルプ）、オリーブ（例えばオリーブパルプ）、オクラ、及びこれらの組み合わせから選択される植物源を起源とする。最も好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖は、ニンジン又はリンゴを起源とする。
【0076】
ＲＧ－Ｉ多糖は、好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖で富化されるペクチン多糖単離物の形態において、プレバイオティック組成物に組み込まれる。したがって、特に好ましい実施形態では、ＲＧ－Ｉ多糖は、プレバイオティック組成物に存在するペクチン多糖の、少なくとも２０重量％、より好ましくは少なくとも４０重量％、更により好ましくは少なくとも５０重量％、最も好ましくは少なくとも６０重量％を占める。
【0077】
ＲＧ－Ｉ多糖は、ラムノガラクツロナン－Ｉストレッチ、及び任意選択でアルファ（１，４）－結合ホモ－ガラクツロン酸ストレッチを含む主鎖を有する。ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、２０：１～１：１の範囲内にある。好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、１５：１～１：１、より好ましくは１２：１～１：１、更により好ましくは１０：１～１：１、最も好ましくは９：１～１：１を範囲とする。
【0078】
好ましくは、ラムノース残基は、ＲＧ－Ｉ多糖の主鎖の単糖残基の、３～５０％、より好ましくは５～５０％、最も好ましくは１０～５０％を占める。
【0079】
ラムノース残基は、典型的には、ＲＧ－Ｉ多糖に含有される全ての単糖残基の、即ち側鎖に含有される単糖残基を含む全ての単糖残基の、３～５０％、より好ましくは３．５～４０％、最も好ましくは４～３５％を占める。
【0080】
ガラクツロン酸残基は、典型的には、ＲＧ－Ｉ多糖の主鎖の単糖残基の、５０～９７％、より好ましくは５０～９５％、最も好ましくは５０～９０％を占める。
【0081】
ガラクツロン酸残基は、典型的には、ＲＧ－Ｉ多糖に含有される全ての単糖残基の、即ち側鎖に含有される単糖残基を含む全ての単糖残基の、１０～８０％、より好ましくは１５～７０％、最も好ましくは２０～６５％を占める。
【0082】
ＲＧ－Ｉ多糖は、典型的には、少なくとも２０ｋＤａの分子量を有する。好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖は、２５ｋＤａ～２，０００ｋＤａの間、より好ましくは３０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの間、更により好ましくは３５ｋＤａ～１，２００ｋＤａの間、最も好ましくは４０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの間の分子量を有する。
【0083】
本組成物に含有されるＲＧ－Ｉ多糖の平均分子量は、好ましくは３０ｋＤａを超え、より好ましくは４０ｋＤａを超え、最も好ましくは６０ｋＤａを超える。
【0084】
好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖のガラクツロン酸残基の８５％未満が、メチルエステルの形態にエステル化されている。より好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖は、０％～７０％の間、より好ましくは０％～６０％の間、更により好ましくは０％～５５％の間、最も好ましくは０％～５０％の間のエステル化度を有する。
【0085】
好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖のガラクツロン酸残基の０～９５％が、アセチルエステルの形態にエステル化されている。より好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖は、５％～９０％の間、より好ましくは７％～５０％の間、最も好ましくは８％～３０％の間のエステル化度を有する。
【0086】
ＲＧ－Ｉ多糖の主鎖は、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる。ＲＧ－Ｉ多糖が１種以上の側鎖を含む場合、多糖は、付加的に、アラビノース及び／又はガラクトースの残基を含有してもよい。更に、ＲＧ－Ｉ多糖の側鎖は、モノマーの、フコース、グルコース、グルクロン酸、キシロース及び／又はウロン酸の少量の残基を付与することができる。１つ以上の側鎖は、好ましくは、ガラクタン側鎖、アラビナン側鎖及びアラビノガラクタン側鎖から選択される。
【0087】
アラビナン側鎖は、少なくとも１つ以上のアルファ（１，５）－結合アラビノース残基を含み、且つＲＧ－Ｉドメインのラムノース残基の４－ＯＨ位において置換される。アラビナン側鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよい。側鎖が直鎖状である事例では、側鎖は、アルファ（１，５）－結合アラビノース残基からなる。アラビナン側鎖が分枝状の側鎖である事例では、１つ以上のアルファ－アラビノース残基は、アルファ（１，５）－結合アラビノースの２－ＯＨ及び／又は３－ＯＨに結合される。アラビナン側鎖の長さ（モノマー単位の数で表される）は、好ましくは１～１００モノマー単位の間、より好ましくは１～５０単位の間、更により好ましくは１～３０単位の間である。
【0088】
ガラクタン側鎖は、少なくとも１つ以上のベータ（１，４）－結合ガラクトース残基を含み、且つＲＧ－Ｉドメインのラムノース残基の４－ＯＨ位において置換される。
【0089】
ガラクタン側鎖は、好ましくは本質的に直鎖状（非分枝状）であり、即ち鎖内のガラクトース残基の１０ｍｏｌ％未満が、ベータ（１，３）－結合又はベータ（１，６）－結合ガラクトース残基であり、好ましくは５モル％未満、好ましくは２モル％未満、好ましくは１モル％未満である。ガラクタン側鎖の長さは、好ましくは１～１００モノマー単位の間、より好ましくは１～５０単位の間、更により好ましくは１～３０単位の間である。
【0090】
アラビノガラクタン側鎖は、ＲＧ－Ｉドメインのラムノース残基の４－ＯＨ位において置換され、且つタイプＩアラビノガラクタン（ＡＧＩ）又はタイプＩＩアラビノガラクタン（ＡＧＩＩ）であることができる。ＡＧＩは、その上でＯ－６位又はＯ－３位において、モノマーＧａｌｐ単位による置換が起こりうる（１→４）－β－Ｄ－Ｇａｌｐ主鎖からなる。ＡＧＩは、α－Ｌ－Ａｒａｆ－ｐ残基で、及び／又は（１→５）－α－Ｌ－Ａｒａｆ短側鎖で、更に置換される。ＡＧＩＩは、（１→６）－β－Ｄ－Ｇａｌｐ第２鎖で装飾されたα（１→３）－β－Ｄ－Ｇａｌｐ主鎖からなり、これらは、アラビノシル化される。
【0091】
好ましくは、ＲＧ－Ｉ多糖の、アラビノース残基のラムノース残基に対するモル比は、３０：１を超えず、より好ましくは１５：１を超えず、更により好ましくは８：１を超えず、最も好ましくは５：１を超えない。
【0092】
ＲＧ－Ｉ多糖の、ガラクトース残基のラムノース残基に対するモル比は、好ましくは３０：１を超えず、より好ましくは１５：１を超えず、更により好ましくは８：１を超えず、最も好ましくは５：１を超えない。
【0093】
好ましい実施形態によれば、ＲＧ－Ｉストレッチのラムノース残基の少なくとも２０％が、４－ＯＨ位において置換される。これらのラムノース残基の、より好ましくは少なくとも３０％、更により好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも４５％が、４－ＯＨ位において置換される。これらのラムノース残基の、好ましくは多くとも９０％、より好ましくは多くとも８０％が、４－ＯＨ位において置換される。
【0094】
本方法における使用のためのプレバイオティック組成物は、好ましくは乾物で少なくとも０．２重量％、より好ましくは０．３～１０重量％、最も好ましくは０．４～５重量％の、本明細書で定義されたＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0095】
本方法における使用のためのプレバイオティック組成物は、有利には、ＲＧ－Ｉ多糖以外に、１種以上の他のプレバイオティクスを含有する。好ましくは、組成物は、乾物で少なくとも１重量％、より好ましくは乾物で少なくとも３重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳オリゴ糖、グアーガム及びアラビアガムから選択される１種以上のプレバイオティクスを含有する。
【0096】
ＲＧ－Ｉ多糖は、それが細胞壁材料のマトリックスで最早もつれない場合、本処置方法において特に効果的であると確信される。したがって、特に好ましい実施形態では、本発明のＲＧ－Ｉ多糖含有組成物は、乾物で少なくとも０．０５重量％、より好ましくは乾物で少なくとも０．１重量％、更により好ましくは乾物で少なくとも０．２重量％、最も好ましくは乾物で少なくとも０．３重量％の、直ちに水に可溶なＲＧ－Ｉ多糖を含有する。ＲＧ－Ｉ多糖含有組成物の、直ちに水に可溶なＲＧ－Ｉ多糖の濃度は、１００ｍｌの脱塩水（２０℃）を十分な量のＲＧ－Ｉ多糖含有組成物と合わせて乾物２．５グラムとし、続いて５分間撹拌し、１００μｍのフィルターでろ過することによって、測定することができる。ろ液のＲＧ－Ｉ多糖は、直ちに水に可溶なＲＧ－Ｉ多糖である。
【0097】
本発明の特に好ましい実施形態によれば、本組成物は、１日当たり体重１キロにつき少なくとも１ｍｇのＲＧ－Ｉ多糖を付与する量で、少なくとも２日間、対象に経口投与される。より好ましくは、１日当たり体重１キロにつき少なくとも４ｍｇのＲＧ－Ｉ多糖の量、更により好ましくは、１日当たり少なくとも１５ｍｇ／体重ｋｇ、最も好ましくは１日当たり体重１キロにつき少なくとも２０～１００ｍｇ／ｋｇのＲＧ－Ｉ多糖が、少なくとも７日間、最も好ましくは少なくとも１４日間、ＲＧ－Ｉ多糖を含有する組成物の食事を与えることによって付与される。
【0098】
別の好ましい実施形態によれば、ＲＧ－Ｉ多糖含有組成物は、少なくとも２１日間、対象に経口投与されて、ＲＧ－Ｉ多糖を、１日当たり体重１ｋｇにつき少なくとも４ｍｇのＲＧ－Ｉ多糖の量で、より好ましくは１日当たり体重１ｋｇにつき１５～３００ｍｇのＲＧ－Ｉ多糖の量で付与する。
【0099】
本発明のプレバイオティック組成物は、特にアッケルマンシア・ムシニフィラ及びビフィドバクテリウム属の健康の利益を付与すると確信される腸の微生物の増殖を誘起することができると見出された。したがって、別の好ましい実施形態では、ＲＧ－Ｉ多糖含有組成物は、対象の腸の微生物叢で、アッケルマンシア・ムシニフィラ及び／又はビフィドバクテリウム属の増殖又は活性を誘起することができる。最も好ましくは、組成物は、対象の腸の微生物叢で、アッケルマンシア・ムシニフィラの増殖又は活性を誘起することができる。
【0100】
本発明のプレバイオティック組成物は、腸の微生物叢によって短鎖脂肪酸の生成を誘起することができると見出されたが、一方で、生成は、イヌリン等の従来のプレバイオティクスに比べて、実質的に少ないガス産生が伴われる。したがって、別の好ましい実施形態では、ＲＧ－Ｉ多糖含有組成物は、急速なガス産生を伴う腸の不快感、鼓腸及び逆流等の副作用の少ない短鎖脂肪酸の腸の発酵生成を促進することができる。
【0101】
特に好ましい実施形態によれば、組成物は、ドリンク、経口投与ユニット、粉末、バー及びスプレッドから選択される。
【0102】
ドリンクは、典型的には液体である。好ましくは、ドリンクは、少なくとも８０重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％の水を含有する。ドリンクは、好ましくは、少なくとも１．５ｇ／ｌ、より好ましくは少なくとも３ｇ／ｌ、最も好ましくは５～２００ｇ／ｌのＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0103】
経口投与ユニットは、好ましくはカプセル又は錠剤である。経口投与ユニットは、好ましくは、５０～１５００ミリグラム、より好ましくは１００～８００ミリグラムの範囲の重量を有する。経口投与ユニットは、典型的には、少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも２０重量％、最も好ましくは４０～９０重量％のＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0104】
粉末の形態にある組成物は、好ましくは、飲料物を調製するのに使用されうる水に可溶な粉末である。典型的には、粉末は、少なくとも０．５重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、最も好ましくは１０～７５重量％のＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0105】
バーの形態にある組成物は、好ましくはバーであり、好ましくは、１０～２００グラム、より好ましくは２５～１００グラムの範囲の重量を有するバーである。バーは、典型的には、少なくとも０．１重量％、より好ましくは少なくとも０．５重量％、最も好ましくは１～２０重量％のＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0106】
スプレッドの形態にある組成物は、好ましくは油中水エマルションであり、好ましくは、２０～９０重量％の脂肪相と１０～８０重量％の水性相とを含む油中水エマルションである。スプレッドは、好ましくは、少なくとも０．３重量％、より好ましくは少なくとも１～１０重量％、最も好ましくは１．５～１６重量％のＲＧ－Ｉ多糖を含有する。
【0107】
本発明の別の態様は、
乾物で少なくとも０．１重量％の、本明細書で前に定義したＲＧ－Ｉ多糖と、
乾物で少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも３重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳オリゴ糖、グアーガム及びアラビアガムから選択される１種以上のプレバイオティクスと
を含むプレバイオティック組成物に関する。
乾物で少なくとも０．１重量％の、本明細書で前に定義したＲＧ－Ｉ多糖と、
乾物で少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも３重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、乳オリゴ糖、グアーガム及びアラビアガムから選択される１種以上のプレバイオティクスと
を含むプレバイオティック組成物に関する。
【0108】
更により好ましくは、製品は、乾物で少なくとも１重量％、より好ましくは乾物で少なくとも３重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖及び乳オリゴ糖から選択される１種以上のプレバイオティクスを含有する。
【0109】
プレバイオティック組成物の好ましい実施形態は、本処置方法における使用のためのプレバイオティック組成物に関して本明細書で前に記載したものと同じである。
【0110】
本発明のなおも別の態様は、
乾物で少なくとも０．１重量％の、本明細書で前に定義したＲＧ－Ｉ多糖と、
生存可能な微生物、生存不能な微生物、微生物の断片、及びこれらの組み合わせの形態にある１種以上のプロバイオティック微生物株と
を含むシンバイオティック組成物に関する。
乾物で少なくとも０．１重量％の、本明細書で前に定義したＲＧ－Ｉ多糖と、
生存可能な微生物、生存不能な微生物、微生物の断片、及びこれらの組み合わせの形態にある１種以上のプロバイオティック微生物株と
を含むシンバイオティック組成物に関する。
【0111】
シンバイオティック組成物の好ましい実施形態は、本処置方法における使用のためのプレバイオティック組成物に関して本明細書で前に記載したものと同じである。
【0112】
シンバイオティック組成物の１種以上のプロバイオティック微生物株は、好ましくは生きている微生物株、より好ましくは生きている細菌株である。
【0113】
１種以上のプロバイオティック微生物株は、酵母株、カビ株、細菌株、及びこれらの組み合わせから選択することができる。好適な酵母株の例には、サッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、デバロミケス属（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ・ピチア属（Ｃａｎｄｉｄａ Ｐｉｃｈｉａ）に属する株、及びこれらの組み合わせが挙げられる。好適なカビ株の例には、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）に属する株、及びこれらの組み合わせが挙げられる。好適な細菌株の例には、ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メリッソコッカス属（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ワイセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、フィーカリバクテリウム属（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アッケルマンシア属（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、アロバクルム属（Ａｌｌｏｂａｃｕｌｕｍ）、ユーバクテリウム属（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する株、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【0114】
特定の好ましい実施形態によれば、１種以上のプロバイオティック微生物株は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、［エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）（（ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ））フェカリス（ｆａｅｃａｌｉｓ）］、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・アリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カセイ亜種カセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．Ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・カセイ、ラクトバチルス・クルバトゥス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・デルブレッキー亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．Ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・サケ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖａｒｉａｎｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・ハロフィルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、スタフィロコッカス・カルノスス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎｏｓｕｓ）、スタフィロコッカス・キシロスス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、アッケルマンシア・ムシニフィラ、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツィ（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）、ロゼブリア・ホミニス（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｈｏｍｉｎｉｓ）及びユーバクテリウム・ハリー（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｌｌｉｉ）から選択される。
【0115】
シンバイオティック組成物は、好ましくは、プロバイオティック微生物株が生存不能な形態で適用される事例において、１種以上のプロバイオティック微生物株を、１０４～１０１０ｃｆｕ又はそれらの当量の濃度で含有する。より好ましくは、シンバイオティック組成物は、１種以上のプロバイオティック微生物株を、１０５～１０９ｃｆｕ又はそれらの当量の濃度で含有する。
【0116】
アッケルマンシア・ムシニフィラは、好ましくは、プロバイオティック組成物に、１０５～１０１０ｃｆｕ／グラム、より好ましくは１０６～１０９ｃｆｕ／グラムの濃度で含有される。
【0117】
ビフィドバクテリウム属は、好ましくは、プロバイオティック組成物に、１０６～１０１０ｃｆｕ／グラム、より好ましくは１０７～１０９ｃｆｕ／グラムの濃度で含有される。
本発明は、以下の非限定的な実施例によって更に例示される。
本発明は、以下の非限定的な実施例によって更に例示される。
【実施例】
【0118】
実施例１
ＲＧ－Ｉ多糖断片を、乾燥ピーマン粉末（Ｐａｐｒｉｋａ Ｍｉｌｄ ８０－１００ Ａｔｓａ Ｓｔｅａｍｔｒ－Ｆｅｌｉｘ Ｒｅｖｅｒｔｅ Ｓ．Ａ．）から、パイロットプラント規模で、以下に説明する手順を用いて単離した。
ＲＧ－Ｉ多糖断片を、乾燥ピーマン粉末（Ｐａｐｒｉｋａ Ｍｉｌｄ ８０－１００ Ａｔｓａ Ｓｔｅａｍｔｒ－Ｆｅｌｉｘ Ｒｅｖｅｒｔｅ Ｓ．Ａ．）から、パイロットプラント規模で、以下に説明する手順を用いて単離した。
【0119】
ピーマンの材料（１００ｋｇ）を、８０％水性エタノールで、穏やかな操縦下で３回洗浄し、即ち８０℃で２時間にわたり２回、次いで室温にて一晩洗浄し、各回１２．５％（ｗ／ｖ）を使用してエタノール可溶性材料を除去した。エタノール不溶性残渣を毎回、遠心分離（１０００Ｇ、１０分間）によって回収した。３回の洗浄サイクル後に得たエタノール不溶性残渣を乾燥させ、９５℃の温度を有する１０００Ｌの熱水で９０分間、９０ｋｇを２回抽出した。各回に、１０００Ｇで１０分間の遠心分離後、上清を保持した。回収した上清を、続いて布を通してろ過し、２ＫＤａ分画分子量の膜を用いて限外ろ過して、分子量の小さい材料を除去した。残余分を乾燥凍結して乾燥ＲＧ－Ｉ富化抽出物を得、およそ５ｋｇの乾燥ＲＧ－Ｉ富化多糖抽出物を得た。
【0120】
ＲＧ－Ｉ多糖富化抽出物の特徴付け
分子量分布：
多糖サンプルの分子量分布を、屈折率（ＲＩ）検出法（濃縮法）、光散乱検出法（分子量検出法）、ＵＶ検出法（タンパク質の存在を示唆）及び差圧検出法（固有粘度検出法）を用いて、高性能サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。プルラン分子量標準を用いて較正した。
分子量分布：
多糖サンプルの分子量分布を、屈折率（ＲＩ）検出法（濃縮法）、光散乱検出法（分子量検出法）、ＵＶ検出法（タンパク質の存在を示唆）及び差圧検出法（固有粘度検出法）を用いて、高性能サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。プルラン分子量標準を用いて較正した。
【0121】
単糖の組成：
多糖サンプルを０．５Ｍ水性トリフルオロ酢酸に溶解し、１２０℃にて２時間、加水分解した。次いで、サンプルをＮａＯＨで中和し、パルス電流検出法（ＰＡＤ）を用いて高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）によって分析するまで凍結を保持した。サンプル中のウロン酸を、自動分析装置（Ｓｋａｌａｒ）で自動化した比色分析ｍ－ヒドロキシジフェニルアッセイ（Ａｃｈｍｅｄ＆Ｌａｂａｖｉｔｃｈ、Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９７８、３６１頁）を用いて測定した。
多糖サンプルを０．５Ｍ水性トリフルオロ酢酸に溶解し、１２０℃にて２時間、加水分解した。次いで、サンプルをＮａＯＨで中和し、パルス電流検出法（ＰＡＤ）を用いて高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）によって分析するまで凍結を保持した。サンプル中のウロン酸を、自動分析装置（Ｓｋａｌａｒ）で自動化した比色分析ｍ－ヒドロキシジフェニルアッセイ（Ａｃｈｍｅｄ＆Ｌａｂａｖｉｔｃｈ、Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９７８、３６１頁）を用いて測定した。
【0122】
エステル化度
多糖サンプルを水酸化ナトリウムで処理し（０．２５Ｍ、５時間、２０℃）、次いで中和した。現像試薬（２Ｍ酢酸アンモニウム中アセチルアセトン及び酢酸）と組み合わせたアルコールオキシダーゼでのインキュベーションの後、４２０ｎｍでの吸光度として、放出したメタノールを測定した。放出した酢酸を、Ｋ－ＡＣＥＴＡＦ酢酸アッセイキット（Ｍｅｇａｚｙｍｅ）を用いて測定した。既知のメチル化度及びアセチル化度を有するテンサイペクチンを標準として使用した。エステル化度は、ウロン酸の量の百分率として、放出したメタノール及び酢酸のモル量として表す。
多糖サンプルを水酸化ナトリウムで処理し（０．２５Ｍ、５時間、２０℃）、次いで中和した。現像試薬（２Ｍ酢酸アンモニウム中アセチルアセトン及び酢酸）と組み合わせたアルコールオキシダーゼでのインキュベーションの後、４２０ｎｍでの吸光度として、放出したメタノールを測定した。放出した酢酸を、Ｋ－ＡＣＥＴＡＦ酢酸アッセイキット（Ｍｅｇａｚｙｍｅ）を用いて測定した。既知のメチル化度及びアセチル化度を有するテンサイペクチンを標準として使用した。エステル化度は、ウロン酸の量の百分率として、放出したメタノール及び酢酸のモル量として表す。
【0123】
ＲＧ－Ｉ多糖断片の分子の特性を表１及び表２に示す。
【0124】
【表1】
【0125】
【表2】
【0126】
実施例２
６週齢の特定の病原体フリーのメスＣ５７ＢＬ／６マウスに、滅菌した飲料水、及び半合成の照射済みＡＩＮ－９３Ｇ食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｗｉｊｋ ｂｉｊ Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ、オランダ）を、３０ｍｍｏｌ／ｋｇカルシウムと共に自由に受けさせ（非感染群及び感染群）、又は１％（ｗ／ｗ）の、ピーマンからのＲＧ－Ｉ富化抽出物を補充した同じ食物を、自由に受けさせた。
６週齢の特定の病原体フリーのメスＣ５７ＢＬ／６マウスに、滅菌した飲料水、及び半合成の照射済みＡＩＮ－９３Ｇ食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｗｉｊｋ ｂｉｊ Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ、オランダ）を、３０ｍｍｏｌ／ｋｇカルシウムと共に自由に受けさせ（非感染群及び感染群）、又は１％（ｗ／ｗ）の、ピーマンからのＲＧ－Ｉ富化抽出物を補充した同じ食物を、自由に受けさせた。
【0127】
マウスを処置群にランダムに割り当て、１ケージ当たりマウス３頭で２週間収容し、次いで個々に、別の１週間、収容した。ＡＩＮ－９３Ｇ食の組成は、Ｒｅｅｖｅｓら（ＡＩＮ－９３ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｄｉｅｔｓ ｆｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｒｏｄｅｎｔｓ：ｆｉｎａｌ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｄ ｈｏｃ ｗｒｉｔｉｎｇ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡＩＮ－７６Ａ ｒｏｄｅｎｔ ｄｉｅｔ．Ｊ Ｎｕｔｒ（１９９３）１２３：１９３９～１９５１頁）によって説明されている。
【0128】
便を、食事介入前にベースラインにて回収し、且つ食事介入３週間後に回収した。ゲノムＤＮＡを、製造者のプロトコル（Ｚｙｍｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ）に従って、便サンプルから抽出した。単離したｇＤＮＡを、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列決定によって、微生物の同定に供した。特定のプライマーを使用して、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＶ３－Ｖ４又はＶ４の超可変領域のような対象のゲノム領域を、ＰＣＲ増幅した。端部対の配列読み出しをＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑシステムを用いて生成した。ＦＡＳＴＱ配列ファイルを、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｃａｓａｖａパイプラインバージョン１．８．３．を用いて生成した。初期の品質評価は、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｃｈａｓｔｉｔｙフィルタリングに基づかせた。続いて、ＰｈｉＸコントロールシグナルを含有する読み出しを、インハウスのフィルタリングプロトコル（Ｂａｓｅｃｌｅａｒ）を用いて取り除いた。加えて、（部分的な）アダプタを含有する読み出しを、（５０ｂｐの最小読み出し長さまで）クリップした。第２の品質評価は、ＦＡＳＴＱＣ品質コントロールツールバージョン０．１０．０．を用いた残りの読み出しに基づかせた。
【0129】
細菌のＤＮＡ配列決定
Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑデータを、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ Ｉｎｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ（ＱＩＩＭＥ、ｖ８）ｐｉｐｅｌｉｎｅ［Ｃａｐｏｒａｓｏら、ＱＩＩＭＥ ａｌｌｏｗｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｄａｔａ、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１０）、７（５）、３３５～３３６頁］、及び［Ｅｄｇａｒ、Ｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ＢＬＡＳＴ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（オックスフォード、イギリス）、（２０１０）、２６（１９）、２４６０～２４６１頁］を利用したワークフローを用いて分析した。バーコードにマッチしないもの及び小さい断片（＞５０ｎｔ）について、データを多重化し、フィルタリングした。ＱＩＩＭＥにおいてＳｉｌｖａ １１１データベースを用いてオープンリファレンスＯＴＵピッキングを実施し、ＵＳＥＡＲＣＨによってキメラを検出し、ＯＴＵからフィルタリングした。フィルタリングしたＯＴＵから、再びＳｉｌｖａ １１１データベースを用いて、バイオームファイル及び系統分類上の階層ファイルを生成した。１サンプル当たりのフィルタリングした読み出し、ＰＤ全体の階層多様性測定、及び比較した存在率でのレベル１～６の分類学的分布等の更なるアウトプットを、ＱＩＩＭＥを介して生成した。
Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑデータを、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ Ｉｎｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ（ＱＩＩＭＥ、ｖ８）ｐｉｐｅｌｉｎｅ［Ｃａｐｏｒａｓｏら、ＱＩＩＭＥ ａｌｌｏｗｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｄａｔａ、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１０）、７（５）、３３５～３３６頁］、及び［Ｅｄｇａｒ、Ｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ＢＬＡＳＴ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（オックスフォード、イギリス）、（２０１０）、２６（１９）、２４６０～２４６１頁］を利用したワークフローを用いて分析した。バーコードにマッチしないもの及び小さい断片（＞５０ｎｔ）について、データを多重化し、フィルタリングした。ＱＩＩＭＥにおいてＳｉｌｖａ １１１データベースを用いてオープンリファレンスＯＴＵピッキングを実施し、ＵＳＥＡＲＣＨによってキメラを検出し、ＯＴＵからフィルタリングした。フィルタリングしたＯＴＵから、再びＳｉｌｖａ １１１データベースを用いて、バイオームファイル及び系統分類上の階層ファイルを生成した。１サンプル当たりのフィルタリングした読み出し、ＰＤ全体の階層多様性測定、及び比較した存在率でのレベル１～６の分類学的分布等の更なるアウトプットを、ＱＩＩＭＥを介して生成した。
【0130】
ＲＧ－１富化多糖抽出物の微生物組成に対する影響
１群当たり１２頭のマウスの個々の便サンプルをＩｌｌｕｍｉｎａ １６Ｓ ｒＲＮＡ配列決定に供して、微生物組成における更なる洞察を得た。１サンプル当たり２６×１０３から７９×１０４の間の読み出しを得た。結果を、表３、表４及び表５に示す。
１群当たり１２頭のマウスの個々の便サンプルをＩｌｌｕｍｉｎａ １６Ｓ ｒＲＮＡ配列決定に供して、微生物組成における更なる洞察を得た。１サンプル当たり２６×１０３から７９×１０４の間の読み出しを得た。結果を、表３、表４及び表５に示す。
【0131】
【表3】
【0132】
【表4】
【0133】
【表5】
【0134】
門のレベルにおいて、ＲＧ－Ｉ富化多糖抽出物を食事に添加すると、放線菌門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）及びベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）の存在率が著しく上がり、その一方でバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）及びプロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）は、それらの存在率が低下し（＞０．５％の存在率、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ、Ｐ＜０．０５）、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）／バクテロイデス門の比の増加がもたらされた。
【0135】
属のレベルにおいて、冗長性分析は、ＲＧ－Ｉ富化多糖抽出物を食事に添加すると、微生物の組成に対して著しい影響を有したことを示した（Ｐ＜０．０５；Ｍｏｎｔｅ Ｃａｒｌｏ ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）。ＲＧ－Ｉ富化多糖抽出物を食事に含ませると、ビフィドバクテリウム属（放線菌門（Ｐｈｙｌｕｍ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ））、アロバクルム属（Ａｌｌｏｂａｃｕｌｕｍ）（ファーミキューテス門（Ｐｈｙｌｕｍ Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ））、アッケルマンシア属（ウェルコミクロビウム門（Ｐｈｙｌｕｍ Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ））、及び割り当てていない細菌群の、より高い存在率へと導かれる。
【0136】
実施例３
非消化性多糖は、主に、ヒトの大腸において腸管微生物叢によって消化される。これは、健康に有益な細菌の増殖へと導き、ｐＨを減少させ、腸の病原体への抵抗力を高め、微生物叢の代謝活性を調整することができる。有益な（プレバイオティック）機能性炭水化物は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ、即ちアセテート、プロピオネート及びブチレート）等の健康に有益な代謝産物の生成を促進し、その一方で、分枝状ＳＣＦＡ及びアンモニア等のタンパク質代謝の望ましくない代謝産物の生成を減少させることになる。
非消化性多糖は、主に、ヒトの大腸において腸管微生物叢によって消化される。これは、健康に有益な細菌の増殖へと導き、ｐＨを減少させ、腸の病原体への抵抗力を高め、微生物叢の代謝活性を調整することができる。有益な（プレバイオティック）機能性炭水化物は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ、即ちアセテート、プロピオネート及びブチレート）等の健康に有益な代謝産物の生成を促進し、その一方で、分枝状ＳＣＦＡ及びアンモニア等のタンパク質代謝の望ましくない代謝産物の生成を減少させることになる。
【0137】
植物由来の多糖抽出物を、微生物叢の代謝活性に対するそれらの影響について、確立された短期間の結腸インキュベーションモデルを用いて試験した。
【0138】
インキュベーションの開始時に、結腸に存在する栄養素（例えばムチン等の宿主由来グリカン）を含有する、糖欠乏のベース結腸培地を、試験抽出物（最終濃度５ｇ／Ｌ）を既に収容していた７０ｍＬペニシリンボトルに導入した。ボトルをゴムストッパーで封止し、Ｎ２でフラッシングして嫌気環境を得た。続いて、ヒトの便の接種菌液を、新たに回収した便サンプルを嫌気性リン酸緩衝液と混合して調製した。遠心分離（２分、５００ｇ）を介して粒子を均質化し除去した後、便の接種菌液を、種々のボトルに添加した。その時点で、４８時間にわたるインキュベーションが開始し、その間、温度を３７℃に制御し、振とう機（９０ｒｐｍ）によって連続混合を確実にした。ｐＨのための６時間、２４時間及び４８時間のインキュベーション（Ｓｅｎｓｅｌｉｎｅ Ｆ４１０；ＰｒｏＳｅｎｓｅ、オーストレハウト、オランダ）、ガス圧（携帯型圧力インジケータＣＰＨ６２００；Ｗｉｋａ、エヒト、オランダ）及びＳＣＦＡ分析の後、サンプルを採った。アセテート、プロピオネート、ブチレート及び分枝状ＳＣＦＡ（イソブチレート、イソバレレート及びイソカプロエート）であるＳＣＦＡを、Ｄｅ Ｗｅｉｒｄｔら（Ｈｕｍａｎ ｆａｅｃａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｄｉｓｐｌａｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｅｃｏｌ．２０１０、７４、６０１～６１１頁）に記載されている通りに測定した。
【0139】
糖欠乏の結腸培地、及び周知のプレバイオティックであるイヌリン（Ｂｅｎｅｏ、ＤＰ≧２３、約１００％イヌリン）を、それぞれ負の参照物及び正の参照物として使用した。
【0140】
サンプルＡをピーマン粉末（Ｐａｐｒｉｋａ ｐｏｅｄｅｒ、Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｐｉｃｅｓ Ｍｉｊｄｒｅｃｈｔ、オランダ）から、水性抽出（１０ｗ／ｗ％、２時間、９０℃）によって、遠心分離して不溶性残渣を除去し、ろ過して（４０ｋＤａ分画）小分子を除去し、乾燥させて粉末を得て、製造した。
【0141】
サンプルＢを、乾燥ニンジン搾汁滓、ニンジン汁生成物の残渣（ニンジン繊維粉末、ＧｒｅｅｎｄＦｉｅｌｄｓ、ポーランド）から製造した。サンプルＢを、ペクチナーゼ（ペクチネックス（Ｐｅｃｔｉｎｅｘ）（商標）Ｕｌｔｒａ Ｍａｓｈ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を使用する水性抽出（１０ｗ／ｗ％、２時間、４５℃）によって、熱不活性化させ（９０℃、１０分）、デカンティングにより不溶性残渣を除去し、限外ろ過（４０ｋＤａ分画）し、最後に乾燥させて、製造した。
【0142】
サンプルＣを、サンプルＢと同じ方法で、リンゴ搾汁滓粉末（リンゴ搾汁滓、ＧｒｅｅｎｄＦｉｅｌｄｓ、ポーランド）から抽出した。
【0143】
サンプルＤを、熱水抽出（１０ｗ／ｗ％、２時間、９０℃）を用いてオクラ粉末（Ｇｒｏｕｎｄ Ｏｋｒａ、Ｍｙ Ｆｏｏｄｓ、Ｂｌｕｅ ｍｏｕｎｔａｉｎ ｐｅａｋ、イギリス）から、水に対して数時間透析して小分子量の材料を除去して、製造した。次いで、透析した抽出物を凍結乾燥させた。前述したサンプルの単糖の組成の測定を、実施例１で説明した通りに実施した。結果を表６に示す。
【0144】
【表6】
【0145】
インキュベーション実験の結果を表７に示す。
【0146】
【表7】
【0147】
結果は、４種の全ての植物由来ＲＧ－Ｉ多糖抽出物が、腸管微生物叢によって直ちに発酵されたことを示す。
【0148】
全てのＲＧ－Ｉ多糖抽出物が、ＳＣＦＡの生成を増加させた。実際に、全ての抽出物が、ＳＣＦＡ生成を、イヌリンで観察したレベルと似たレベルまで、又はそれを超えるレベルまで増加させたことを見出した。
【0149】
全てのＲＧ－Ｉ多糖抽出物は、分枝状ＳＣＦＡ及びアンモニアの生成を減少させた。
【0150】
驚くべきことに、全てのＲＧ－Ｉ多糖抽出物で観察したガス産生は、イヌリンで観察したガス産生よりも実質的に低かった。過剰なガス産生は、イヌリンを含む最も従来型のプレバイオティクスの望まれない副作用をよく説明している腸管の不快感及び膨満感へと至らせうる。
【0151】
実施例４
低温殺菌した乳飲料を、表８に示すレシピに基づいて調製する。
低温殺菌した乳飲料を、表８に示すレシピに基づいて調製する。
【0152】
【表8】
【0153】
ヒトの成人に１日当たりこの乳飲料２００ｍｌを消費させると、腸の健康が改善し、一般の風邪及びインフルエンザに対して格外の防御性が提供される。
【0154】
実施例５
栄養バー（４５ｇ）を、表９に示すレシピに基づいて調製する。
栄養バー（４５ｇ）を、表９に示すレシピに基づいて調製する。
【0155】
【表9】
【0156】
バーを、以下のように製造する：全ての湿潤成分（シロップ、グリセリン、アーモンド脂及び香料）を５０℃にて一緒に混合する。
【0157】
それとは別に、乾燥成分を一緒に混合し、次いで湿潤スラリーを乾燥ミックスに添加し、その塊を高剪断下で２～５分間混合する。ドウを厚切りにし、バーの形状に切断し、その後、包装する。
【0158】
ヒトの成人に１日当たり２本のバーを消費させると、腸の健康が改善し、一般の風邪及びインフルエンザに対して格外の防御性が提供される。
【0159】
実施例６
栄養補助食品を、表１０に示す乾燥ミックスを収容するカプセルの形態で調製する。
栄養補助食品を、表１０に示す乾燥ミックスを収容するカプセルの形態で調製する。
【0160】
【表10】
【0161】
実施例７
ＲＧ－Ｉ多糖断片を、実施例３で説明した短期間の結腸インキュベーションモデルにおける試験のために、種々の源材料から抽出した。糖欠乏の結腸培地、及び周知のプレバイオティックであるイヌリン（Ｂｅｎｅｏ、ＤＰ≧２３、約１００％イヌリン）を、それぞれ負の参照物及び正の参照物として使用した。
ＲＧ－Ｉ多糖断片を、実施例３で説明した短期間の結腸インキュベーションモデルにおける試験のために、種々の源材料から抽出した。糖欠乏の結腸培地、及び周知のプレバイオティックであるイヌリン（Ｂｅｎｅｏ、ＤＰ≧２３、約１００％イヌリン）を、それぞれ負の参照物及び正の参照物として使用した。
【0162】
サンプルＡを、乾燥させてミリングしたマメのさや（Ｃｏｓｕｃｒａ製、ワーコイング、ベルギー）から製造した。この粉末を、脱塩水（１００ｇ／Ｌ）に分散させ、９０℃にて３０分間、熱安定なアルファ－アミラーゼ（Ｍｅｇａｚｙｍｅ）で酵素前加水分解に供し、ペクチナーゼ（２時間、４５℃、０．２ｖ／ｖ％ペクチネックス（商標）Ｕｌｔｒａ Ｍａｓｈ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を用いて更なる加水分解に供した。１００℃にて１０分間加熱して酵素分解を終え、続いて遠心分離し（１８．０００ｇ、１０分）、１２～１４ｋＤａ分画を備えた膜（Ｖｉｓｋｉｎｇ、ロンドン、イギリス）を用いて上清の徹底的な透析を行った。次いで、この材料を凍結乾燥した。
【0163】
サンプルＢを、同じ方法を用いて、乾燥させてミリングしたテンサイパルプ（Ｓｕｉｋｅｒ Ｕｎｉｅ製、ディンテロールト、オランダ）から製造し、但し、α－アミラーゼ前インキュベーションの工程を省いた。
【0164】
サンプルＣを、同じ方法を用いて、乾燥させてミリングしたチコリパルプ（Ｃｏｓｕｃｒａ製、ワーコイング、ベルギー）から製造し、但し、α－アミラーゼ前インキュベーションの工程を省いた。
【0165】
前述したサンプルの単糖の組成を、実施例１で説明した方法を用いて測定した。結果を表１１に示す。
【0166】
【表11】
【0167】
インキュベーション実験の結果を表１２に示す。
【0168】
【表12】
【0169】
これらの結果は、これらの種々の植物に由来するＲＧ－Ｉ多糖抽出物が、腸管微生物叢によって直ちに発酵されたことを示す。
【0170】
全てのＲＧ－Ｉ多糖抽出物は、ＳＣＦＡの生成を増加させた。実際に、全ての抽出物が、イヌリンで観察したレベルと似たレベルまで、又はそれを超えるレベルまで、ＳＣＦＡ生成を増加させることを見出した。
【0171】
全てのＲＧ－Ｉ多糖抽出物は、培地の対照と比べて、分枝状ＳＣＦＡ及びアンモニアの生成を減少させた。
【図1】
【図2】