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特許7500812中東呼吸器症候群－コロナウイルススパイクタンパク質に対するヒト抗体
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-07
(45)【発行日】2024-06-17
(54)【発明の名称】中東呼吸器症候群－コロナウイルススパイクタンパク質に対するヒト抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/10 20060101AFI20240610BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240610BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240610BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240610BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240610BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240610BHJP
【ＦＩ】
C07K16/10
C12N15/13 ZNA
A61P31/14
A61P29/00
A61K39/395 S
A61P11/00
【請求項の数】
24
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023060532
(22)【出願日】2023-04-04
(62)【分割の表示】P 2021092024の分割
【原出願日】2015-05-20
(65)【公開番号】P2023085425
(43)【公開日】2023-06-20
【審査請求日】2023-04-28
(31)【優先権主張番号】62/002,233
(32)【優先日】2014-05-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/004,971
(32)【優先日】2014-05-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/051,717
(32)【優先日】2014-09-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/072,716
(32)【優先日】2014-10-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】597160510
【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】クリストス・キラトゥス
(72)【発明者】
【氏名】ネイル・スタール
(72)【発明者】
【氏名】スマティ・シヴァパラシンガム
【審査官】白井 美香保
(56)【参考文献】
【文献】Xian-Chun Tang et al.，Identification of human neutralizing antibodies against MERS-CoV and their role in virus adaptive evolution，PNAS，2014年04月28日，Vol.111,No.19，p.E2018-E2026
【文献】Tianlei Ying et al.，Exceptionally Potent Neutralization of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus by Human Monoclonal Antibodies，Journal of Virology，2014年04月30日，Vol.88,No.14，p.7796-7805
【文献】Liwei Jiang et al.，Potent Neutralization of MERS-CoV by Human Neutralizing Monoclonal Antibodies to the Viral Spike Glycoprotein，Science Translational Medicine，2014年04月30日，Vol.6,No.234，p.1-9
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １／００－１５／９０
Ｃ１２Ｐ ２１／００－２１／０８
Ｃ０７Ｋ １６／００－１６／４６
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）スパイクタンパク質に特異的に結合する、単離された組換え抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１８／２２６と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）／軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含み、ここで、前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２１８／２２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項2】
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であるか；（ｂ）配列番号４５７のアミノ酸残基３６７～６０６から選択される、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける１個またはそれ以上のアミノ酸残基と相互作用するか；
（ｃ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される、１８．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）を有するＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合するか；
（ｄ）遮断ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の結合を９０％超遮断するか；
（ｅ）ウイルス様粒子（ＶＬＰ）中和アッセイにおいて測定される、ヒト宿主細胞のＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を、４ｎＭ未満のＩＣ50で９０％超中和するか；または
（ｆ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を中和し、ここで、該ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるウイルスの単離物を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項3】
配列番号２２０－２２２－２２４－２２８－２３０－２３２の６つのＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項4】
配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、請求項３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項5】
配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項３または４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項6】
配列番号２１８／２２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ結合を遮断する前記抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項8】
請求項７に記載の単離された完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４５７のアミノ酸残基３６７～６０６を含むアミノ酸配列と相互作用する前記完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか１項に記載の単離された組換えヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合し、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物の該スパイクタンパク質と相互作用する前記組換えヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項10】
ヒト細胞上のＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶの結合を遮断する、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項11】
宿主細胞へのＭＥＲＳ－ＣｏＶの侵入を防ぐ、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項12】
多特異性抗原結合分子である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容し得る担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項14】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、（ａ）請求項１～１２のいずれか１項に記載の第１の抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｂ）第２のエピトープにおいてＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント；および
（ｃ）薬学的に許容し得る担体または希釈剤
を含み、
ここで、第１の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質への結合について第２の抗体またはその抗原結合フラグメントと交差競合しない、前記医薬組成物。
【請求項15】
少なくとも第１の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または第２の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ結合を遮断する、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
第１および第２のエピトープは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインに存在し、かつ別個であり、オーバーラップしない、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
【請求項17】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症の少なくとも１つの症状または徴候を予防するか、処置するか、または改善する方法において使用するための請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、もしくは請求項１３～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記方法は、前記医薬組成物または前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象に投与することを含む、前記医薬組成物または前記抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項18】
少なくとも１つの症状または徴候は、肺における炎症、肺胞の損傷、ウイルス負荷、発熱、咳、息切れ、肺炎、下痢、臓器不全、敗血性ショックおよび死からなる群より選択される、請求項１７に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項19】
医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、それを必要とする対象に予防的もしくは治療的に投与される、請求項１７または１８に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項20】
医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、免疫不全状態の個人、年齢が６５歳より高い者、中東にあるエリアへの旅行者、医療労働者、医学的問題の既往歴を有する人、ラクダもしくはコウモリと職業上もしくは娯楽上接触する人、ならびにＭＥＲＳ感染症を有することが確認されたもしくは疑われる人と接触する人からなる群より選択される対象に予防的に投与される、請求項１９に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項21】
医学的問題の既往歴が、心臓の問題または糖尿病の既往歴である、請求項２０に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項22】
医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、第２の治療剤と併用して投与される、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項23】
第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬のような）、抗ウイルス薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する異なる抗体、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのためのワクチン、抗生物質、抗酸化剤のような栄養補助剤、ならびにＭＥＲＳ感染症を処置するための任意の他の対症療法からなる群より選択される、請求項２２に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項24】
医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内もしくは頭蓋内投与される、請求項１７～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、中東呼吸器症候群－コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）のスパイクタンパク質に特異的に結合するヒト抗体およびヒト抗体の抗原結合フラグメントならびにその抗体を用いる治療および診断方法に関する。
【背景技術】
【0002】
中東呼吸器症候群－コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）は、重篤な急性呼吸器系疾患を引き起こす、新たに出現したベータコロナウイルスである。それは、２０１２年にサウジアラビアにおいて最初に単離され（非特許文献１）、それ以来、約１８カ国まで広がり、大部分のケースはサウジアラビアおよびアラブ首長国連邦におけるものであった。２０１４年５月１５日現在で、世界保健機関は、１７１人の死亡を含む、５７１ケースのＭＥＲＳを報告した。２つのケースのＭＥＲＳ感染が、米国において最近発見された。ヒトにおけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染の臨床的特性は、無症候性感染から非常に重篤な肺炎までの範囲に及び、急性呼吸促迫症候群、敗血性ショックおよび死をもたらす多臓器不全の発症を伴う。
【0003】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、コウモリコロナウイルスＨＫＵ４およびＨＫＵ５との類似性を共有する。ウイルスは、標的細胞への侵入のための細胞受容体と相互作用するため、そのスパイクタンパク質を用いる。Ｒａｊらは、ウイルスが、そのスパイクタンパク質の受容体結合ドメインを介して、ヒト上皮および内皮細胞上のジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）に結合することを示した（非特許文献２）。Ｌｕら、２０１３年は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ受容体結合ドメインが、コア、およびＤＰＰ４と相互作用する受容体結合サブドメインからなることを示した（非特許文献３）。
【0004】
特許文献１は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、スパイクタンパク質およびスパイクタンパク質の受容体結合ドメインに対するポリクローナル抗体の単離ならびに特徴を記載する。スパイクタンパク質の受容体結合ドメインに対する中和モノクローナル抗体が、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６および非特許文献７により記載される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】ＷＯ２０１４／０４５２５４
【非特許文献】
【0006】
【文献】Ｚａｋｉら２０１２年、ＮＥＪＭ３６７：１８１４～１８２０頁
【文献】Ｒａｊら２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ４９５：２５１～２５６頁
【文献】Ｌｕら２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ５００：２２７～２３１頁
【文献】Ｄｕら２０１４年、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．
【文献】Ｙｉｎｇら、２０１４年、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．
【文献】Ｔａｎｇら、２０１４年、ＰＮＡＳ
【文献】Ｊｉａｎｇら、２０１４年、Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ．６巻、２３４ｒａ５９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
これまで、ＭＥＲＳ感染を予防するか、もしくは処置するためのワクチンまたは治療剤は存在しなかった。ヒトの健康および高い死亡率（３０％を超える）に対する継続する脅
威を考慮して、ＭＥＲＳ制御のための予防および治療用抗ウイルス療法の緊急の必要性がある。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に高い親和性で特異的に結合し、ウイルス感染性を阻害する、完全ヒト抗体は、ＭＥＲＳ感染の予防および処置において重要であり得る。
威を考慮して、ＭＥＲＳ制御のための予防および治療用抗ウイルス療法の緊急の必要性がある。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に高い親和性で特異的に結合し、ウイルス感染性を阻害する、完全ヒト抗体は、ＭＥＲＳ感染の予防および処置において重要であり得る。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の抗体は、とりわけ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の活性を阻害するか、または中和するのに有用である。ある実施形態において、抗体は、ウイルスのその宿主細胞受容体ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）への結合を阻害し、ＭＥＲＳコロナウイルスの宿主細胞への侵入を防ぐのに有用である。ある実施形態において、抗体は、ウイルスの細胞から細胞への伝達を阻害することにより、機能する。ある種の実施形態において、抗体は、対象におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染の少なくとも１つの症状を予防するか、処置するか、または改善する際に有用である。ある種の実施形態において、抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染を有するか、もしくは有するリスクのある対象に予防的にまたは治療的に投与される。
【0009】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４抗体）であり得るか、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、もしくはｓｃＦｖフラグメント）のみを含み得、機能性に影響するように、例えば、宿主における持続を増大するか、もしくは残りのエフェクター機能を除去するように修飾される（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５～１９３３頁）。ある種の実施形態において、抗体は二重特異性である。
【0010】
第１の態様において、本発明は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合する、単離された組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施形態において、抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）内のエピトープに結合する。ある実施形態において、本発明は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦＳ８８９３６．１（配列番号４５７）のアミノ酸３６７～６０６から選択されるアミノ酸に結合する、抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物ＥＭＣ／２０１２のスパイクタンパク質に結合する。ある種の実施形態において、抗体は、異なるＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物のスパイクタンパク質に結合する。
【0011】
本発明の典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を、本明細書における表２および３に挙げる。表２に、典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別名を記載する。表３に、典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別名を記載する。
【0012】
本発明は、表２に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【0013】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％
の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0014】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対形成される表２に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＶＲとＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態によると、本発明は、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかに含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１０６、１２２／１０６、１３０／１０６、１３８／１０６、１４６／１０６、１５４／１６２、１７０／１６２、１７８／１６２、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、３７８／３８６、３９４／４０２、４１０／４１８、４２６／４３４、および４４２／４５０からなる群より選択される。ある種の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０（例えば、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ）、１８／２６（例えば、Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ）、６６／７４（例えば、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ）、１１４／１０６（例えば、Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２）、１７０／１６２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２）または２１８／２２６（例えば、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎ）の１つから選択される。
【0015】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0016】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0017】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0018】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0019】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0020】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ
ＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
ＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0021】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対形成される表２に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態によると、本発明は、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかに含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号８／１６（例えば、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ）、２４／３２（例えば、Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ）、７２／８０（例えば、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ）、１２０／１１２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２）、１７６／１６８（例えば、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２）および２２４／２３２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎ）からなる群より選択される。
【0022】
本発明はまた、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかに含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号４－６－８－１２－１４－１６（例えば、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ）、２０－２２－２４－２８－３０－３２（例えば、Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ）；６８－７０－７２－７６－７８－８０（例えば、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ）；１１６－１１８－１２０－１０８－１１０－１１２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２）；１７２－１７４－１７６－１６４－１６６－１６８（例えば、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２）および２２０－２２２－２２４－２２８－２３０－２３２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎ）からなる群より選択される。
【0023】
関連する実施形態において、本発明は、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかにより定義される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。例えば、本発明は、配列番号２／１０（例えば、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ）、１８／２６（例えば、Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ）；６６／７４（例えば、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ）；１１４／１０６（例えば、Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２）；１７０／１６２（例えば、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２）および２１８／２２６（例えば、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎ）からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定する方法および技術は、当該技術分野において周知であり、これを用いて、本明細書において開示される特定されたＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定することができる。ＣＤＲの境界を同定するために用いられる典型的な慣例は、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義を含む。一般的な用語において、Ｋａｂａｔ定義は配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造上のループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａのアプローチの間で妥協したものである。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：９２６８～９２７２（１９８９年）を参照。公的データベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
【0024】
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。ある実施形態において、不所望なグリコシル化部位を取り除くための修飾が有用であるか、またはフコース部分を欠く抗体は、オリゴ糖鎖上に示して、例えば、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）機能が増大される（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２年）ＪＢＣ２７７：２６７３３頁を参照）。他の適用において、ガラクトシル化という修飾は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために成される。
【0025】
本発明はまた、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓへの特異的結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体ならびにその抗原結合フラグメントも提供し、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲそれぞれは、表２に挙げられるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0026】
本発明はまた、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓへの結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと交差競合する抗体ならびにその抗原結合フラグメントも提供し、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲそれぞれは、表２に挙げられるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0027】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アゴニスト方法においてＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合する、すなわち、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ結合および／もしくは活性を増強するか、または刺激し；他の実施形態において、抗体は、アンタゴニスト方法においてＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合する、すなわち、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓをその受容体（ＤＰＰ４）への結合から遮断する。
【0028】
本発明はまた、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質結合を遮断する単離された抗体およびその抗原結合フラグメントも提供する。ある実施形態において、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質結合を遮断する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＤＰＰ４と同一のＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質上のエピトープに結合するか、もしくはＤＰＰ４と異なるＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質上のエピトープに結合し得る。ある実施形態において、本発明は、ヒト、ラクダもしくはコウモリＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの結合を遮断する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【0029】
ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性、およびＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性であり、第１および第２のエピトープは別個であり、オーバーラップしない。
【0030】
１つの実施形態において、本発明は、次の特徴のうちの１つもしくはそれ以上を有する単離された抗体または抗原結合フラグメントを提供する：（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；（ｂ）ＨＢＶＸ０６Ｈ０５、ＨＢＶＸ１１Ｈ０４、ＨＢＶＸ１１Ｄ０２、ＨＢＶＺ１０Ｅ１０、ＨＢＶＹ０９Ｆ０８、ＨＢＶＺ０５Ｇ０２、ＨＢＶＺ０９Ｂ０６、ＨＢＶＹ０１Ｆ０８、ＨＢＶＹ１０Ｇ０２、ＨＢＶＹ０４Ｂ０６、ＨＢＶＹ０７Ｄ１０、ＨＢＶＺ０８Ａ０９、ＨＢＶＺ０５Ｇ０４、ＨＢＶＹ０６Ｃ０７、ＨＢＶＹ０３Ｈ０６、ＨＢＶＺ１０Ｇ０６、ＨＢＶＺ０４Ｆ１０、ＨＢＶＸ１１Ｅ０９、ＨＢＶＹ０６Ｈ０９、ＨＢＶＺ０５Ｂ１１、ＨＢＶＹ０２Ｅ０５およびＨＢＶＺ０４Ｃ０７からなる群より選択されるハイブリドーマ細胞株から単離される；（ｃ）配列番号４５７のアミノ酸残基３６７～６０６から選択される、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける１個または複数のアミノ酸残基と相互作用する；（ｄ）表面プラズモン共鳴アッセ
イにおいて測定される、１０－９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を有するＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する；（ｅ）遮断ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の結合を９０％超遮断する；（ｆ）ウイルス様粒子（ＶＬＰ）中和アッセイにおいて測定される、ヒト宿主細胞のＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を、４ｎＭ未満のＩＣ５０で９０％超中和する；（ｇ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を中和し、ここで、ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるウイルスの単離物を含む；ならびに（ｈ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性、およびＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性抗体であり、第１および第２のエピトープは別個であり、オーバーラップしない。
イにおいて測定される、１０－９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を有するＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する；（ｅ）遮断ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の結合を９０％超遮断する；（ｆ）ウイルス様粒子（ＶＬＰ）中和アッセイにおいて測定される、ヒト宿主細胞のＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を、４ｎＭ未満のＩＣ５０で９０％超中和する；（ｇ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を中和し、ここで、ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるウイルスの単離物を含む；ならびに（ｈ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性、およびＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性抗体であり、第１および第２のエピトープは別個であり、オーバーラップしない。
【0031】
第２の態様において、本発明は、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその部分をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表２に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0032】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0033】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＨＣＤＲ１核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0034】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＨＣＤＲ２核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0035】
本発明はまた、表２に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＨＣＤＲ３核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくと
も９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
も９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0036】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＬＣＤＲ１核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0037】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＬＣＤＲ２核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0038】
本発明はまた、表２に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＬＣＤＲ３核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0039】
本発明はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここで、ＨＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）を含み、ここで、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかにより定義される通りである。
【0040】
本発明はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここで、ＬＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含み、ここで、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表２に挙げられる典型的な抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のいずれかにより定義される通りである。
【0041】
本発明はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ両方をコードする核酸分子も提供し、ここで、ＨＣＶＲは、表２に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ここで、ＬＣＶＲは、表２に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む。ある種の実施形態において、核酸分子は、表３に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列、および表３に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。本発明のこの態様によるある種の実施形態において、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはいずれも、表２に挙げられる同一の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体に由来する。
【0042】
本発明は、表２に挙げられる重鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供する。本発明はまた、表２に挙げられる軽鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。
【0043】
関連する態様において、本発明は、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の重鎖または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現する能力を有する組換え発現ベクターを提供する。例えば
、本発明は、上述の核酸分子、すなわち、表３に記載のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。かかるベクターが導入される宿主細胞、ならびに抗体もしくは抗体フラグメントの産生が可能となる条件下で宿主細胞を培養すること、ならびに産生される抗体および抗体フラグメントを回収することにより、抗体またはその部分を産生する方法もまた、本発明の範囲に含まれる。
、本発明は、上述の核酸分子、すなわち、表３に記載のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。かかるベクターが導入される宿主細胞、ならびに抗体もしくは抗体フラグメントの産生が可能となる条件下で宿主細胞を培養すること、ならびに産生される抗体および抗体フラグメントを回収することにより、抗体またはその部分を産生する方法もまた、本発明の範囲に含まれる。
【0044】
第３の態様において、本発明は、治療上有効量の、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つの組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を提供する。関連する態様において、本発明は、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体および第２の治療剤の併用である組成物の特徴を記述する。１つの実施形態において、第２の治療剤は、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と有利に併用される任意の剤である。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と有利に併用される典型的な剤は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶに結合し、および／もしくはＭＥＲＳ－ＣｏＶ活性を阻害する他の剤（他の抗体またはその抗原結合フラグメントなどを含む）、ならびに／またはＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓを直接的に結合しないが、それにもかかわらず、宿主細胞の感染性を含むウイルス活性を阻害する剤を含むが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、本発明は以下を提供する：（ａ）第１の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメント；（ｂ）第２の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで、第１の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質上の第１のエピトープに結合し、第２の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質上の第２のエピトープに結合し、ここで、第１および第２のエピトープは別個であり、オーバーラップしない；ならびに（ｃ）薬学的に許容し得る担体または希釈剤を含む医薬組成物。ある種の実施形態において、本発明は以下を提供する：（ａ）第１の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメント；（ｂ）第２の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメント、ここで、第１の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質への結合について第２の抗体と交差競合しない；および（ｃ）薬学的に許容し得る担体または希釈剤を含む医薬組成物。本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む、さらなる併用療法および同時製剤は、本明細書において他の場所で開示される。
【0045】
第４の態様において、本発明は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体もしくは抗体の抗原結合部分を用いた、対象においてウイルス感染症のようなＭＥＲＳ－ＣｏＶと関連する疾患または障害を処置する治療方法を提供し、ここで、治療方法は、治療上有効量の本発明の抗体もしくは抗体の抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。処置される障害は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ活性の阻害により、好転されるか、改善されるか、阻害されるか、もしくは予防される任意の疾患または状態である。ある種の実施形態において、本発明は、治療上有効量の本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体もしくはその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象に投与することを含む、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染の少なくとも１つの症状を予防するか、処置するか、または改善する方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を投与することにより、対象におけるＭＥＲＳ感染の少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度を改善するか、または低減する方法を提供し、ここで、少なくとも１つの症状または徴候は、肺における炎症、肺胞の損傷、発熱、咳、息切れ、下痢、臓器不全、肺炎、敗血性ショックおよび死からなる群より選択される。ある種の実施形態において、本発明は、対象に、有効量の、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合し、宿主細胞受容体ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ結合を遮断する本発明の抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、対象においてウイルス負荷を低減する方法を提供する。ある実施形態において、抗体あるいはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＳ感染を有するか、もしくは有するリスクのある対象に予防的にまたは治療的に投与される。リスクのある患者は、免疫不全状態の人、高齢者（年齢６５歳より高い）、年齢２歳より小さい子供、中東に
ある国（例えば、サウジアラビア、アラブ首長国連邦、カタール首長国など）への旅行者、医療労働者、ＭＥＲＳ感染を有することが確認されたもしくは疑われる人と密接に接触する成人または子供、および肺の感染症、心臓疾患もしくは糖尿病のような原因となる医学的状態を有する人を含むが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２の治療剤との併用でそれを必要とする対象に投与される。第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬のような）、抗感染症薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する異なる抗体、抗ウイルス薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのためのワクチン、抗酸化剤のような栄養補助剤、ならびに当該技術分野において公知の任意の他の薬物および治療からなる群から選択される。ある種の実施形態において、第２の治療剤は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントに関連する何らかの副作用が生じるようなら、かかる潜在的副作用に対抗するか、または低減するのを助ける剤である。抗体またはそのフラグメントは、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与される。１つの実施形態において、抗体は、対象の血清中の抗体の最大濃度のため、１回の静脈内注射として投与される。抗体またはそのフラグメントは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与される。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、５０ｍｇ～６００ｍｇを含む１回またはそれ以上の用量で投与される。
ある国（例えば、サウジアラビア、アラブ首長国連邦、カタール首長国など）への旅行者、医療労働者、ＭＥＲＳ感染を有することが確認されたもしくは疑われる人と密接に接触する成人または子供、および肺の感染症、心臓疾患もしくは糖尿病のような原因となる医学的状態を有する人を含むが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２の治療剤との併用でそれを必要とする対象に投与される。第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬のような）、抗感染症薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する異なる抗体、抗ウイルス薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのためのワクチン、抗酸化剤のような栄養補助剤、ならびに当該技術分野において公知の任意の他の薬物および治療からなる群から選択される。ある種の実施形態において、第２の治療剤は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントに関連する何らかの副作用が生じるようなら、かかる潜在的副作用に対抗するか、または低減するのを助ける剤である。抗体またはそのフラグメントは、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与される。１つの実施形態において、抗体は、対象の血清中の抗体の最大濃度のため、１回の静脈内注射として投与される。抗体またはそのフラグメントは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与される。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、５０ｍｇ～６００ｍｇを含む１回またはそれ以上の用量で投与される。
【0046】
本発明はまた、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ結合および／もしくは活性の遮断から恩恵を受ける疾患もしくは障害を処置するための医薬の製造における本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメントの使用も含む。
【0047】
他の実施形態は、次の詳細な説明の記載から明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】抗体ハイブリドーマ上清（試料ＩＤによりカラム１において挙げられる）、ならびに本明細書において別の箇所で記載される、結合、遮断および中和アッセイにおけるそれらの特性を挙げる表である。
【図2】抗体交差競合アッセイの結果を示すマトリックスである。ここで、第１の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（ｍＡｂ－１）が、ＭＥＲＳ ＲＢＤでコートされたセンサーチップ、続いて、第２の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（ｍＡｂ－２）での処置に適用された。試験したそれぞれの抗体併用についての結合応答性（数値－０．０５～０．６４）が表される。黒色のフォントを伴った淡いグレーの囲みは、自己競合についての結合応答を表す。抗原結合の順に依存して、両方向での抗体競合は、白色のフォントを伴った黒色の囲みにおいて強調される。競合がないことは、別個の結合領域が、黒色のフォントを伴った白色の囲みとして表されることを示唆する。結合における０．１８ｎｍより大きなシフトを示す抗体は、互いに交差競合しない。
【図3】抗体交差競合アッセイの結果を示すマトリックスである。ここで、第１の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（ｍＡｂ－１）が、ＭＥＲＳ ＲＢＤでコートされたセンサーチップ、続いて、第２の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（ｍＡｂ－２）での処置に適用された。試験したそれぞれの抗体併用についての結合応答性（数値－０．０１～０．５５）が表される。黒色のフォントを伴った淡いグレーの囲みは、自己競合についての結合応答を表す。抗原結合の順に依存して、両方向での抗体競合は、白色のフォントを伴った黒色の囲みにおいて強調される。競合がないことは、別個の結合領域が、黒色のフォントを伴った白色の囲みとして表されることを示唆する。結合における０．１４ｎｍより大きなシフトを示す抗体は、互いに交差競合しない。
【図4】感染の２および４日後に、ヒト化ＤＰＰ４マウスにおいてＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（エンベロープ遺伝子の上流のゲノムの転写されたｍＲＮＡ－ＵｐＥ）の定量的ＰＣＲを示す図である。
【図5】感染の２および４日後において、ヒト化ＤＰＰ４マウスにおけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（ＭＥＲＳ－ＣｏＶゲノム－リーダー配列）の定量的ＰＣＲを示す図である。
【図6】感染の４日後において感染したマウス肺のＭＥＲＳ－ＣｏＶウイルスタイター定量を示す図である。マウス肺ＭＥＲＳ－ＣｏＶレベルが定量され、ホモジネートされたマウス肺のｐｆｕ／ｍｌとして表された。
【図7】ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎ抗体２００μｇ、２０μｇ、もしくは２μｇで、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照で処置されたマウスの肺からＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（エンベロープ遺伝子の上流のゲノムの転写されたｍＲＮＡ－ＵｐＥ）の定量的ＰＣＲを示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図8】ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎ抗体２００μｇ、２０μｇ、もしくは２μｇで、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照で処置されたマウスの肺からＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（ＭＥＲＳ－ＣｏＶゲノム－リーダー配列）の定量的ＰＣＲを示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図9】ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎ抗体２００μｇ、２０μｇ、もしくは２μｇで、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照で処置されたマウスの肺由来の、プラークアッセイにより定量された肺におけるウイルスタイターの分析、およびｐｆｕ／ｍｌとして報告される肺におけるウイルスタイターの分析を示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図10】ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎ抗体２００μｇ、２０μｇ、もしくは２μｇで、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照で処置されたマウスの肺の組織学的分析由来の炎症スコアを示す図である。
【図11】感染の１日後においてＨ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇもしくは５００μｇ、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照、ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇで処置されたマウスの肺からＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（エンベロープ遺伝子の上流のゲノムの転写されたｍＲＮＡ－ＵｐＥ）の定量的ＰＣＲを示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図12】感染の１日後においてＨ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇもしくは５００μｇ、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照、ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇで処置されたマウスの肺からＭＥＲＳ－ＣｏＶ転写物（ＭＥＲＳ－ＣｏＶゲノム－リーダー配列）の定量的ＰＣＲを示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図13】感染の１日後においてＨ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇもしくは５００μｇ、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照、ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日前に、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇで処置されたマウスの肺由来の、プラークアッセイにより定量された肺におけるウイルスタイターの分析、およびｐｆｕ／ｍｌとして報告される肺におけるウイルスタイターの分析を示す図である。全ての試料は、１００％に設定されたｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較された。
【図14】ＭＥＲＳ－ＣｏＶでの感染の１日後に、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇもしくは５００μｇで、またはｈＩｇＧアイソタイプ対照で処置されたマウスの肺の組織学的分析由来の炎症スコアを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0049】
本方法が記載される前に、本発明は、記載される特定の方法および実験条件に制限されず、方法および条件自体が変動することは理解されるべきである。本明細書において用いられる専門用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのみであることも理解されるべきであり、本発明の範囲は、添付の請求項によってのみ制限されるので、制限であることは意図されない。
【0050】
別段定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、本発明が属する当業者により一般的に理解されるのと同一の意味を有する。本明細書において記載されるものと類似または均等な任意の方法および材料は、本発明の実施または試験において用いられるが、好ましい方法および材料がここで記載される。本明細書において述べられる全ての刊行物は、全体として参照によって本明細書に組み入れられる。
【0051】
定義
「ＭＥＲＳコロナウイルス」としても呼ばれる、用語「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ」は、２０１２年にアラビア半島において最初に単離され（Ｚａｋｉら２０１２年、ＮＥＪＭ ３６７：１８１４～１８２０頁）、重篤な急性呼吸器系疾患の大流行の原因として同定された、新たに出現した中東呼吸器症候群－コロナウイルスを指す。それは、ヒトコロナウイルス－ＥＭＣ（Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ；ｈＣｏＶ－ＥＭＣ）と当初呼ばれた。それは、ベータコロナウイルス系統２ｃに属し、２００２年に中国において出現した、重篤な急性呼吸器系症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）に類似した、重篤な呼吸器系疾患を引き起こす。ＭＥＲＳコロナウイルスは、コウモリおよびラクダにおいて見出されたコロナウイルスと密接に関連することが見出された。それは、ウイルスのスパイクタンパク質を介してヒト宿主細胞受容体ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）に結合する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質は、他の種、特に、コウモリおよびラクダのＤＰＰ４に結合することが見出された（Ｒａｊら２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ４９５：２５１～２５４頁）。
「ＭＥＲＳコロナウイルス」としても呼ばれる、用語「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ」は、２０１２年にアラビア半島において最初に単離され（Ｚａｋｉら２０１２年、ＮＥＪＭ ３６７：１８１４～１８２０頁）、重篤な急性呼吸器系疾患の大流行の原因として同定された、新たに出現した中東呼吸器症候群－コロナウイルスを指す。それは、ヒトコロナウイルス－ＥＭＣ（Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ；ｈＣｏＶ－ＥＭＣ）と当初呼ばれた。それは、ベータコロナウイルス系統２ｃに属し、２００２年に中国において出現した、重篤な急性呼吸器系症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）に類似した、重篤な呼吸器系疾患を引き起こす。ＭＥＲＳコロナウイルスは、コウモリおよびラクダにおいて見出されたコロナウイルスと密接に関連することが見出された。それは、ウイルスのスパイクタンパク質を介してヒト宿主細胞受容体ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）に結合する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質は、他の種、特に、コウモリおよびラクダのＤＰＰ４に結合することが見出された（Ｒａｊら２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ４９５：２５１～２５４頁）。
【0052】
「Ｓタンパク質」とも呼ばれる、用語「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ」は、ＭＥＲＳコロナウイルスのスパイクタンパク質を指す。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質は、エンベロープ化されたＭＥＲＳコロナウイルス粒子の表面上のスパイクまたはペプロマーを構成する３量体にアセンブルする、１３５３個のアミノ酸のタイプＩ膜糖タンパク質である。タンパク質は、２つの必須の機能、宿主受容体結合および膜融合を有し、それは、Ｓタンパク質のＮ末端（Ｓ１、アミノ酸残基１～７５１）およびＣ末端（Ｓ２、アミノ酸残基７５２～１３５３）の半分による。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓは、その同族受容体、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）にＳ１サブユニットに存在する約２３０アミノ酸長の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を介して結合する。Ｍｏｕら（２０１３年）は、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（８７巻、９３７９～９３８３頁）において、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＢＤが、スパイクタンパク質の残基３５８～５８８内に位置することを示した。全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸配列は、受託番号ＡＦＳ８８９３６．１としてＧｅｎＢａｎｋにおいて提供されるＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物ＥＭＣ／２０１２のスパイクタンパク質のアミノ酸配列（配列番号４５７）により例示される。用語「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ」はまた、異なるＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物、例えば、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒから単離されたＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のタンパク質変異体も含む。用語「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ」は、組換えＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む。用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、もしくはＲＯＲ１のようなシグナル配列に結
合したＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質またはそのフラグメントも包含する。例えば、用語は、全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸残基３６７～６０６に結合した、Ｃ末端におけるマウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）またはヒトＦｃ（ｈＩｇＧ１）を含む、配列番号４５８において示される配列より例示される配列を含む。用語はまた、全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸残基３６７～６０６に結合した、Ｃ末端におけるヒスチジンタグを含む、タンパク質変異体も含む。
合したＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質またはそのフラグメントも包含する。例えば、用語は、全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸残基３６７～６０６に結合した、Ｃ末端におけるマウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）またはヒトＦｃ（ｈＩｇＧ１）を含む、配列番号４５８において示される配列より例示される配列を含む。用語はまた、全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸残基３６７～６０６に結合した、Ｃ末端におけるヒスチジンタグを含む、タンパク質変異体も含む。
【0053】
用語「ＤＰＰ４」は、ジペプチジルペプチダーゼ４、ＭＥＲＳ－ＣｏＶについての受容体を指す。ＤＰＰ４は、細胞表面上に２量体形態で存在する７６６個のアミノ酸のタイプＩＩ膜貫通型糖タンパク質である。それは、プロリンアミノ酸残基の後のホルモンおよびケモカインからジペプチドを切断し、それにより、それらの生物活性を制御する、エキソペプチダーゼである。ヒトにおいて、ＤＰＰ４は、腎臓、小腸、肝臓および前立腺における上皮細胞上、上および下気道における線毛性および非線毛性細胞上、ならびに免疫細胞（すなわち、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、樹状細胞およびマクロファージ）上で主に発現する。非ヒト種由来であると特定されない限り、本明細書において用いられる、用語「ＤＰＰ４」は、ヒトＤＰＰ４を意味する。
【0054】
中東呼吸器症候群としても特徴付けられる、本明細書において用いられる、用語「ＭＥＲＳ感染」または「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染」はまた、ＭＥＲＳコロナウイルスにより引き起こされ、２０１２年にサウジアラビアにおいて最初に報告された、重篤な急性の呼吸性の病気を指す。用語は、しばしば下気道における、気道感染症を含む。症状は、高熱、咳、息切れ、肺炎、下痢のような胃腸の症状、臓器不全（腎不全および腎臓の機能障害）、敗血性ショック、および重篤なケースにおける死を含む。
【0055】
本明細書において用いられる用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合により相互結合された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合フラグメントを指すことが意図される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）、ならびに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む）を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）、および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存される領域が散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、高頻度可変性の領域にさらに細分される。それぞれのＶＨならびにＶＬは、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。本発明のある種の実施形態において、抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であるか、または天然または人工的に修飾される。アミノ酸連続配列は、２つまたはそれ以上のＣＤＲの隣り合った解析に基づき定義される。
【0056】
１つもしくはそれ以上のＣＤＲ残基の置換、または１つもしくはそれ以上のＣＤＲの除外も可能である。１つまたは２つのＣＤＲを省いても結合する抗体が、科学文献において記載されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～１３９頁）は、公開された結晶構造に基づき、抗体とその抗原の間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基の約５分の１～３分の１のみが抗原と実際に接触すると結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原と接触したアミノ酸を有していない、多くの抗体を見出した（Ｖａｊｄｏｓら２００２年Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ３２０：４１５～４２８頁も参照）。
【0057】
抗原と接触しないＣＤＲ残基は、従前の研究（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要とされない）において、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲの外側にあるＫａ
ｂａｔＣＤＲの領域から、分子モデリングにより、および／または実験的に同定される。ＣＤＲまたはその残基が除外されるなら、それは、別のヒト抗体配列または共通のかかる配列における対応する位置を占めるアミノ酸で通常置換される。置換するためのＣＤＲおよびアミノ酸内の置換のための位置はまた、実験的に選択される。実験的置換は、保存的または非保存的置換である。
ｂａｔＣＤＲの領域から、分子モデリングにより、および／または実験的に同定される。ＣＤＲまたはその残基が除外されるなら、それは、別のヒト抗体配列または共通のかかる配列における対応する位置を占めるアミノ酸で通常置換される。置換するためのＣＤＲおよびアミノ酸内の置換のための位置はまた、実験的に選択される。実験的置換は、保存的または非保存的置換である。
【0058】
本明細書において開示される完全ヒト抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠損を含む。かかる変異は、本明細書において開示されるアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、容易に確かめられる。本発明は、本明細書において開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合フラグメントを含み、ここで、１つもしくはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１個またはそれ以上のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異される（かかる配列変更は、本明細書において「生殖系列変異」としてまとめて言及される）。当業者は、本明細書において開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つもしくはそれ以上の個々の生殖系列変異またはその組み合わせを含む、多数の抗体および抗原結合フラグメントを容易に作り出す。ある種の実施形態において、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークならびに／またはＣＤＲ残基の全てを変異させて、抗体が由来する元の生殖系列配列において見出される残基に戻す。他の実施形態において、ある種の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内で見出される変異した残基、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内で見出される変異した残基のみを変異させて、元の本来の生殖系列配列に戻す。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つまたはそれ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列と異なる、生殖系列配列）の対応する残基に変異される。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２つもしくはそれ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有し、例えば、ここで、ある種の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異され、一方、元の生殖系列配列と異なるある種の他の残基は、維持されるか、もしくは異なる生殖系列配列の対応する残基に変異される。一旦得られると、１つまたはそれ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合フラグメントは、結合特異性の好転、結合親和性の増大、アンタゴニストもしくはアゴニスト生物学的特性の好転または増強（場合によっては）、免疫原性の低減などのような１つまたはそれ以上の所望の特性について容易に試験される。この一般的な方法において得られる抗体および抗原結合フラグメントは、本発明に包含される。
【0059】
本発明はまた、１つもしくはそれ以上の保存的置換を有する、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む完全ヒト抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体も含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／もしくはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに関連する１０もしくはそれ以下、８つもしくはそれ以下、６つもしくはそれ以下、４つもしくはそれ以下などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ならびに／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗体を含む。
【0060】
本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為もしくは部位特異的変異誘発、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含む。しかしながら、本明
細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列に移植されている、ｍＡｂを含むことは意図されない。用語は、非ヒト哺乳類において、または非ヒト哺乳類の細胞において組換え的に産生される抗体を含む。用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生じた抗体を含むことは意図されない。
細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列に移植されている、ｍＡｂを含むことは意図されない。用語は、非ヒト哺乳類において、または非ヒト哺乳類の細胞において組換え的に産生される抗体を含む。用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生じた抗体を含むことは意図されない。
【0061】
本明細書において用いられる用語「組換え体」は、例えば、ＤＮＡスプライシングおよび遺伝子導入発現を含む、組換えＤＮＡ技術として当該技術分野において公知の技術もしくは方法により、作製されるか、発現されるか、単離されるか、もしくは得られる、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。用語は、非ヒト哺乳類（遺伝子導入非ヒト哺乳類、例えば、遺伝子導入マウスを含む）、もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現されるか、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体を指す。
【0062】
用語「特異的に結合する」、または「に特異的に結合する」などは、抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、生理的条件下で比較的安定である抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０－８Ｍまたはそれ以下の平衡解離定数により特徴付けられる（例えば、ＫＤが小さいほど、より強固な結合を示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書において記載される通り、抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により同定され、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合する。さらに、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓにおける１つのドメイン、および１つもしくはそれ以上のさらなる抗原に結合する多特異性抗体、またはＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それにもかかわらず、本明細書において用いられる「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【0063】
用語「高い親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡにより測定される、少なくとも１０－８Ｍ；好ましくは、１０－９Ｍ；より好ましくは、１０－１０Ｍ、なおより好ましくは、１０－１１Ｍ、なおより好ましくは、１０－１２ＭのＫＤとして表される、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに対する結合親和性を有するそのｍＡｂを指す。
【0064】
用語「スローオフレート」、「Ｋｏｆｆ」、または「ｋｄ」は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により決定される、１×１０－３ｓ－１もしくはそれ以下、好ましくは、１×１０－４ｓ－１もしくはそれ以下の速度定数でＭＥＲＳ－ＣｏＶから解離する抗体を意味する。
【0065】
本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。
【0066】
特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体フラグメントは、リガンドのような部分、または抗ウイルス薬、第２の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、もしくはＭＥＲＳ－ＣｏＶにより引き起こされる感染を処置するのに有用な任意の他の治療部分のような治療部分（「免疫複合体」）に結合する。
【0067】
本明細書において用いられる「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗
体（Ａｂ）が実質的にない抗体（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合する、単離された抗体またはそのフラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ以外の抗原に特異的に結合するＡｂが実質的にない）を指すことが意図される。
体（Ａｂ）が実質的にない抗体（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合する、単離された抗体またはそのフラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ以外の抗原に特異的に結合するＡｂが実質的にない）を指すことが意図される。
【0068】
本明細書において用いられる「遮断抗体」もしくは「中和抗体」（または「ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ活性を中和する抗体」もしくは「アンタゴニスト抗体」）は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓへの結合が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶの少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことが意図される。例えば、本発明の抗体は、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ結合を防ぐか、または遮断する。
【0069】
本明細書において用いられる用語「表面プラズモン共鳴」は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を用いた、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による、リアルタイムの生体分子相互作用の解析を可能にする光学現象を指す。
【0070】
本明細書において用いられる用語「ＫＤ」は、特定の抗体と抗原の相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
【0071】
用語「エピトープ」は、パラトープとしても公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する、抗原決定因子を指す。単一の抗原は、１つより多くのエピトープを有する。従って、異なる抗体は、抗原上の異なる範囲に結合し、異なる生物学的作用を有する。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。それはまた、抗体により結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義される。機能的エピトープは、一般に構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に関与するその残基を有する。エピトープはまた立体構造でもあり、すなわち、非直線状のアミノ酸を含む。ある種の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、リン酸基、またはスルホニル基のような分子の化学的に活性な表面基である決定因子を含み、ある種の実施形態において、特異的な３次元の構造的特徴、および／または特異的な変更特徴を有する。
【0072】
本明細書において用いられる、用語「交差競合する」は、抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、抗原に結合し、別の抗体もしくはその抗原結合フラグメントの結合を阻害するか、または遮断することを意味する。用語はまた、方向の両方、すなわち、第２の抗体に結合し、第２の抗体の結合を遮断する第１の抗体、および逆も真なり、における２つの抗体間の競合も含む。ある種の実施形態において、第１および第２の抗体は、同一のエピトープに結合する。あるいは、第１および第２の抗体は、異なるがオーバーラップするエピトープに結合することで、１つの結合が、第２の抗体の結合を、例えば立体障害を介して阻害するか、または遮断するようになる。抗体間の交差競合は、当該技術分野において公知の方法により、例えば、リアルタイム、ラベルフリーバイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイにより測定される。２つの抗体間の交差競合は、自己と自己の結合（ここで、第１および第２の抗体は同一の抗体である）に起因するバックグラウンドシグナル未満である、第２の抗体の結合として表される。２つの抗体間の交差競合は、例えば、ベースラインの自己と自己のバックグラウンド結合（ここで、第１および第２の抗体は同一の抗体である）未満である第２の抗体の％結合として表される。
【0073】
核酸もしくはそのフラグメントに言及している場合、用語「実質的な同一性」または「実質的に同一の」は、適切なヌクレオチド挿入または欠損を伴うかたちで別の核酸（もしくはその相補鎖）と最適に整列されると、以下で考察される通り、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰのような、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムにより測定される、
少なくとも約９０％、より好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド塩基のヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対する実質的な同一性を有する核酸分子は、ある種の例において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同一または実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
少なくとも約９０％、より好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド塩基のヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対する実質的な同一性を有する核酸分子は、ある種の例において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同一または実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
【0074】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な類似性」または「実質的に類似の」は、２つのペプチド配列が、例えば、デフォルトギャップウェイトを用いたプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴにより、最適に整列されると、少なくとも９０％の配列同一性、なおより好ましくは、少なくとも９５％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、残基位置は、同一でなく、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つまたはそれ以上のアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合において、類似性の割合または程度は、置換の保存的性質を補正するよう上方調節される。この調節を成す手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７～３３１頁を参照（参照によって本明細書に組み入れられる）。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例は、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリン、およびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギン、およびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸塩、およびグルタミン酸塩、ならびに７）硫黄含有側鎖：システイン、およびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸置換基は：バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸塩－アスパラギン酸塩、およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１４４３～４５頁（参照によって本明細書に組み入れられる）において開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中程度の保存的」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負でない値を有する任意の変化である。
【0075】
ポリペプチドについての配列類似性は、配列解析ソフトウェアを用いて典型的に測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、様々な置換、欠損、および他の修飾に割り当てられる類似性の測定を用いて、類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、生物の異なる種由来の相同な諸ポリペプチドの間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間のような、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメーターで用いられるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴのようなプログラムを含む。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１を参照。ポリペプチド配列はまた、デフォルトまたは推奨パラメーターを用いたＦＡＳＴＡ；ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１におけるプログラムを用いても比較される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２、およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーと検索配列の間の最適オーバーラップの領域の整列化およびパーセント配列同一性をもたらす（上記、Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する上での別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを用いた、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁、および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２頁を参照（それぞれが、参照によって本明細書に組み入れられる）。
【0076】
語句「治療上有効量」によって、投与されるものに所望の作用を作り出す量が意味される。抽出量は、処置の目的に依存し、公知の技術（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）Ｔｈｅ Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照）を用いて当業者により解明可能だろう。
【0077】
本明細書において用いられる用語「対象」は、ウイルス感染症のような疾患もしくは障害の改善、予防、および／または処置の必要な動物、好ましくは、哺乳類、より好ましくは、ヒトを指す。用語は、ＭＥＲＳ感染を有するか、または有するリスクのあるヒト対象を含む。
【0078】
本明細書において用いられる、用語「処置する」、「処置すること」、または「処置」は、本発明の抗体のような治療剤のそれを必要とする対象への投与に起因する、ＭＥＲＳ感染の少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度の低減または改善を指す。用語は、疾患の進行または感染の悪化の阻害を含む。用語はまた、疾患の正の進行も含み、すなわち、対象は、本発明の抗体のような治療剤の投与の際に、感染を有さないか、または低減したウイルスタイターを有するか、もしくは有さない。治療剤は、対象への治療用量にて投与される。
【0079】
用語「予防する」、「予防すること」または「予防」は、本発明の抗体の投与の際に、ＭＥＲＳ感染の所見もしくはＭＥＲＳ感染の任意の症状もしくは徴候の阻害を指す。用語は、ウイルスに曝露されたか、またはＭＥＲＳ感染を有するリスクのある対象における感染の広がりの予防を含む。
【0080】
本明細書において用いられる用語「抗ウイルス薬」は、対象においてウイルス感染症を処置、予防、もしくは改善するために用いられる任意の抗ウイルス薬または療法を指す。用語「抗ウイルス薬」は、リバビリン、オセルタミビル、ザナミビル、インターフェロン－アルファ２ｂ、鎮痛剤、およびコルチコステロイドを含むが、これらに限定されない。本発明の文脈において、ウイルス感染は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ＿２２９Ｅ、ＨＣｏＶ＿ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ＿ＨＫＵ１、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶを含むが、これらに限定されない、ヒトコロナウイルスにより引き起こされる感染を含む。
【0081】
一般的な説明
感染性疾患の予防または処置のための受動免疫療法は、通常、高タイターの中和抗体を含有する回復期のヒト血清の形態で１世紀より長い間用いられてきた（Ｇｏｏｄら１９９１年；Ｃａｎｃｅｒ６８：１４１５～１４２１頁）。今日、複数の精製されたモノクローナル抗体が、抗微生物剤としての使用のため前臨床および臨床開発に現在ある（Ｍａｒａｓｃｏら２００７年；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５：１４２１～１４３４頁）。
感染性疾患の予防または処置のための受動免疫療法は、通常、高タイターの中和抗体を含有する回復期のヒト血清の形態で１世紀より長い間用いられてきた（Ｇｏｏｄら１９９１年；Ｃａｎｃｅｒ６８：１４１５～１４２１頁）。今日、複数の精製されたモノクローナル抗体が、抗微生物剤としての使用のため前臨床および臨床開発に現在ある（Ｍａｒａｓｃｏら２００７年；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５：１４２１～１４３４頁）。
【0082】
本発明者らは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的に結合し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＳのＤＰＰ４との相互作用を調節する完全ヒト抗体およびその抗原結合フラグメントを本明細書において記載した。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに高親和性で結合する。ある種の実施形態において、本発明の抗体は遮断抗体であり、ここで、抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＳのＤＰＰ４との相互作用を遮断する。ある実施形態において、本発明の遮断抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＳのＤＰＰ４への結合を遮断し、および／または宿主細胞のウイルス感染性を阻害するか、もしくは中和する。ある実施形態において、遮断抗体は、ＭＥＲＳ感染に罹患している対象を処置するのに有用である。ある種の実施形態において、スパイクタンパク質への結合について交差競合しない選択された抗体を併用でカクテルとして用いて、いずれかの成分による選択圧に
応答した変異を介してウイルスが回避する能力を低減する。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象においてＭＥＲＳ－ＣｏＶのようなウイルスによる感染症を低減する。それらを用いて、対象においてウイルス負荷が低減される。それらは、単独で、またはウイルス感染を処置するための当該技術分野において公知の他の治療部分もしくは様式を用いた補助療法として用いられる。これらの抗体が、過去２年の間のウイルスの天然の進化中に保存されたＳタンパク質上のエピトープに結合することも、本明細書において示される。さらに、新規の遺伝子導入マウスモデルを用いて、同定された抗体が、マウスを感染から予防的に保護し、ならびに接種後の処置パラダイムにおいて既に確立された感染を改善することが示された。実施例７において、感染の１日前における抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製を生ウイルスアッセイにおける検出のレベル近くまで、およびウイルスＲＮＡアッセイにおいて３ｌｏｇにより低減することができることを示す。この抗体は、感染の２４時間後に与えられたより少ない用量の抗体が、より低い程度までＭＥＲＳ－ＣｏＶを遮断することができたので、用量依存的保護を示した。加えて、肺組織の組織学的解析は、抗体で予め処置されたマウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶにより誘導された細気管支周囲への細胞浸潤、肺胞肥厚、および全体的な炎症病巣の低減を示したことを実証した。
応答した変異を介してウイルスが回避する能力を低減する。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象においてＭＥＲＳ－ＣｏＶのようなウイルスによる感染症を低減する。それらを用いて、対象においてウイルス負荷が低減される。それらは、単独で、またはウイルス感染を処置するための当該技術分野において公知の他の治療部分もしくは様式を用いた補助療法として用いられる。これらの抗体が、過去２年の間のウイルスの天然の進化中に保存されたＳタンパク質上のエピトープに結合することも、本明細書において示される。さらに、新規の遺伝子導入マウスモデルを用いて、同定された抗体が、マウスを感染から予防的に保護し、ならびに接種後の処置パラダイムにおいて既に確立された感染を改善することが示された。実施例７において、感染の１日前における抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製を生ウイルスアッセイにおける検出のレベル近くまで、およびウイルスＲＮＡアッセイにおいて３ｌｏｇにより低減することができることを示す。この抗体は、感染の２４時間後に与えられたより少ない用量の抗体が、より低い程度までＭＥＲＳ－ＣｏＶを遮断することができたので、用量依存的保護を示した。加えて、肺組織の組織学的解析は、抗体で予め処置されたマウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶにより誘導された細気管支周囲への細胞浸潤、肺胞肥厚、および全体的な炎症病巣の低減を示したことを実証した。
【0083】
全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の全長アミノ酸配列は、配列番号４５７において示される。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質（配列番号４５７）のような１次免疫原、もしくはＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓもしくは修飾されたＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓフラグメント（例えば、配列番号４５８）の組換え形態、続いて２次免疫原で、またはＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの免疫学的に活性なフラグメントで免疫されたマウスから得られる。
【0084】
免疫原は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの生物学的に活性および／もしくは免疫原性フラグメント、またはその活性フラグメントをコードするＤＮＡである。フラグメントは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＳのＮ末端またはＣ末端のドメインに由来する。本発明のある種の実施形態において、免疫原は、配列番号４５７のアミノ酸残基３６７～６０６の範囲にあるＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓのフラグメントである。
【0085】
ペプチドは、タグ付けのため、もしくはＫＬＨのような担体分子への結合の目的のためのある種の残基の付加または置換を含むよう修飾される。例えば、免疫のためのＫＬＨへの結合のためのペプチドを調製するために、例えば、ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端いずれかにシステインが付加されるか、またはリンカー配列が付加される。
【0086】
本発明のある種の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合し、インビトロまたはインビボアッセイにより決定される、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの活性を中和する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの活性を中和する本発明の抗体の能力は、本明細書において記載される、結合アッセイ、もしくは活性アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準的方法を用いて測定される。
【0087】
結合および遮断活性を測定するための非限定的な典型的インビトロアッセイは、本明細書における実施例４～５において説明される。実施例４において、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓについての抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の結合親和性および解離定数は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定された。実施例５において、中和アッセイを用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質を含有するウイルス様粒子の感染性が決定された。
【0088】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに特異的な抗体は、さらなる標識もしくは部分を含有しないか、またはそれらは、Ｎ末端またはＣ末端標識もしくは部分を含有する。１つの実施形態において、標識または部分はビオチンである。結合アッセイにおいて、（もしあれば）標識の
位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの方向が決定される。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。１つの実施形態において、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩで検出可能な標識である。ある種の実施形態において、かかる標識された抗体は、画像化アッセイを含む診断アッセイにおいて用いられる。
位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの方向が決定される。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。１つの実施形態において、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩで検出可能な標識である。ある種の実施形態において、かかる標識された抗体は、画像化アッセイを含む診断アッセイにおいて用いられる。
【0089】
抗体の抗原結合フラグメント
別段具体的に示されない限り、本明細書において用いられる用語「抗体」は、２つの免疫グロブリン重鎖、および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその抗原結合フラグメントを包含することは理解されるだろう。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、ＣＤＲを含有するフラグメント、または単離されたＣＤＲを含む。ある種の実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、多特異性抗原結合分子のポリペプチドフラグメントを指す。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および（場合により）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子操作技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から得ることができる。かかるＤＮＡは公知であり、および／または例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成される。ＤＮＡは、配列決定され、化学的に、または分子生物学技術を用いることにより操作されて、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインが適切な配置に配置されるか、またはコドンが導入されるか、システイン残基が作製されるか、アミノ酸が修飾されるか、付加されるか、もしくは欠損される。
別段具体的に示されない限り、本明細書において用いられる用語「抗体」は、２つの免疫グロブリン重鎖、および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその抗原結合フラグメントを包含することは理解されるだろう。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、ＣＤＲを含有するフラグメント、または単離されたＣＤＲを含む。ある種の実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、多特異性抗原結合分子のポリペプチドフラグメントを指す。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および（場合により）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子操作技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から得ることができる。かかるＤＮＡは公知であり、および／または例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成される。ＤＮＡは、配列決定され、化学的に、または分子生物学技術を用いることにより操作されて、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインが適切な配置に配置されるか、またはコドンが導入されるか、システイン残基が作製されるか、アミノ酸が修飾されるか、付加されるか、もしくは欠損される。
【0090】
抗原結合フラグメントの非限定的な例は：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補決定領域（ＣＤＲ））、または限定されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメインが欠損した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲが移植された抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ミニボディ、ナノボディ（例えば、１価のナノボディ、２価のナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインのような他の操作された分子もまた、本明細書において用いられる、表現「抗原結合フラグメント」に包含される。
【0091】
抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの可変ドメインを典型的に含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であり、少なくとも１つのＣＤＲを一般的に含み、１つもしくはそれ以上のフレームワーク配列に隣接されるか、もしくはインフレームである。ＶＬドメインと繋がったＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で相対的に位置する。例えば、可変領域は、二量体であり、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬ二量体を含有する。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有する。
【0092】
ある種の実施形態において、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有する。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内で見出される可変および定常ドメインの非限定的な典型的配置は：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。上で挙げられる典型的な配置のいずれかを含む、可変および定常ドメインの任意の配置において、可変ならびに定常ドメインは、互いに直接的に結合されるか、または完全もしくは部分的ヒンジもしくはリンカー領域により結合されるか、のいずれかである。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個もしくはそれ以上）のアミノ酸からなり、単一のポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメイン間の可動性または半可動性の結合をもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、（例えば、ジスルフィド結合による）互いにおよび／もしくは１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと非共有結合的に会合した、上で挙げられた可変ならびに定常ドメイン配置のいずれかのホモ－二量体またはヘテロ－二量体（もしくは他の多量体）を含む。
【0093】
全抗体分子と同様に、抗原結合フラグメントは、単特異性または多特異性（例えば、二重特異性）である。抗体の多特異性抗原結合フラグメントは、少なくとも２つの異なる可変ドメインを典型的には含み、ここで、それぞれの可変ドメインは、別々の抗原、または同一抗原上の異なるエピトープに特異的に結合する能力がある。本明細書において開示される典型的な二重特異性抗体フォーマットを含む、任意の多特異性抗体フォーマットは、当該技術分野において利用可能な慣例的技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの文脈において使用するために適合される。
【0094】
ヒト抗体の調製
遺伝子導入マウスにおいてヒト抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。任意のかかる公知の方法を、本発明の文脈において用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合するヒト抗体が作られる。
遺伝子導入マウスにおいてヒト抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。任意のかかる公知の方法を、本発明の文脈において用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合するヒト抗体が作られる。
【0095】
次のいずれか１つを含む免疫原を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する抗体を作製する。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、全長の天然ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦＳ８８９３６．１を参照）（配列番号４５７）、またはタンパク質もしくはそのフラグメントをコードするＤＮＡで免疫されたマウスから得られる。あるいは、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、標準的生化学技術を用いて作り出され、修飾され、免疫原として用いられる。１つの実施形態において、免疫原は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（Ｓ１）である。本発明のある種の実施形態において、免疫原は、配列番号４５７のおよそアミノ酸残基３６７～６０６の範囲にあるＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のフラグメントである。
【0096】
ある実施形態において、免疫原は、エシェリキア・コリ（E.coli）において、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような任意の他の真核生物もしくは哺乳類細胞において発現された組換えＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質受容体結合ドメインペプチドである。
【0097】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）
）、またはモノクローナル抗体を作製する任意の他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに対する高親和性キメラ抗体が、まず単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが、抗原刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域部位に作動可能に結合したヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有する遺伝子導入マウスの作製に関与する。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に結合される。次に、ＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現する能力がある細胞において発現される。
）、またはモノクローナル抗体を作製する任意の他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに対する高親和性キメラ抗体が、まず単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが、抗原刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域部位に作動可能に結合したヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有する遺伝子導入マウスの作製に関与する。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に結合される。次に、ＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現する能力がある細胞において発現される。
【0098】
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、目的の抗原を負荷され、リンパ系細胞（例えば、Ｂ細胞）が、抗体を発現するマウスから回収される。リンパ系細胞は、ミエローマ細胞株と融合されて、不死のハイブリドーマ細胞株を調製し、かかるハイブリドーマ細胞株が、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するためにスクリーニングされ、選択される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、重鎖および軽鎖の所望のアイソタイプの定常領域に結合される。かかる抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞において産生される。あるいは、抗原特異的キメラ抗体、または軽および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡが、抗原特異的リンパ球から直接単離される。
【0099】
最初に、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、高い親和性のキメラ抗体が単離される。以下の実験のセクションにあるように、抗体は、特徴付けられ、親和性、選択性、エピトープなどを含む、所望の特徴について選択される。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域で置き換えて、本発明の完全なヒト抗体、例えば、野生型、または修飾されたＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４を作製する。選択された定常領域が、特定の使用に従い変動する一方、高い親和性の抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に存在する。
【0100】
生物学的等価物
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体および抗体フラグメントは、記載される抗体のものと異なるが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する能力を保持する、アミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。かかる変異体抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較された場合、アミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体のものと実質的に等価物である生物学的活性を示す。同様に、本発明のＤＮＡ配列をコードする抗体は、開示される配列と比較された場合、ヌクレオチドの１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体フラグメントに実質的な生物学的等価物である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含む。
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体および抗体フラグメントは、記載される抗体のものと異なるが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する能力を保持する、アミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。かかる変異体抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較された場合、アミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体のものと実質的に等価物である生物学的活性を示す。同様に、本発明のＤＮＡ配列をコードする抗体は、開示される配列と比較された場合、ヌクレオチドの１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体フラグメントに実質的な生物学的等価物である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含む。
【0101】
２つの抗原結合タンパク質、または抗体は、例えば、吸収の速度および程度が、類似の実験条件下で同一のモル用量、単回用量もしくは複数回用量いずれかで投与される場合、有意な相違を示さない医薬等価物もしくは医薬代替物であるなら、生物学的等価物とみなされる。ある抗体は、その吸収の程度において等価物であるが、その吸収の速度において等価物でないなら、等価物または医薬代替物とみなされ、かかる吸収の速度における相違が意図的であり、標識において反映され、例えば、慢性的使用の際の有効な身体薬物濃度の到達に必須ではなく、研究される特定の薬物製品にとって医薬的に有意でないとみなされるので、生物学的等価物であると依然みなされる。
【0102】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質の安全性、純度、または有効性において臨床上有意義な相違はないなら、２つの抗原結合タンパク質は生物学的等価物である。
【0103】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、患者が、切り替えることなく継続される療法と比較して、免疫原性における臨床上有意な変化、もしくは損なわれた効能を含む副作用のリスクの増大を予期せずに、参照産物と生物学的産物の間で１回またはそれ以上切り替えられるなら、生物学的等価物である。
【0104】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、それら両方が、使用の条件もしくは複数の条件についての作用の通常のメカニズムまたは複数のメカニズムにより、かかるメカニズムが公知である限り、作用するなら、生物学的等価物である。
【0105】
生物学的等価物は、インビボおよび／またはインビトロの方法により実証される。生物学的等価物の測定は、例えば、（ａ）抗体もしくはその代謝産物の濃度が、血液、血漿、血清、もしくは他の生物学的体液において時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験；（ｂ）ヒトインビボバイオアベイラビリティデータと相関し、それを十分に予測するインビトロ試験；（ｃ）抗体（もしくはその標的）の適切な急性薬理作用が、時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験；および（ｄ）抗体の安全性、効能（efficacy）、もしくはバイオアベイラビリティもしくは生物学的均等性を確立する、十分に制御された臨床試験、を含む。
【0106】
本発明の抗体の生物学的等価物は、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を成すこと、または生物学的活性のため必要とされない末端もしくは内部残基もしくは配列を欠損させることにより、構築される。例えば、生物学的活性に必須でないシステイン残基は、欠損されるか、または他のアミノ酸で置換されて、再生の際に不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成が防止される。他の文脈において、生物学的等価物抗体は、アミノ酸変更を含む抗体変異体を含み、抗体のグリコシル化特徴、例えば、グリコシル化を除去するか、または取り除く変異を修飾する。
【0107】
Ｆｃ変異体を含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体
本発明のある種の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するか、もしくは損なう１つまたはそれ以上の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における変異を含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含み、ここで、変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲にあるエンドソームにおいて）、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増大させる。かかる変異は、動物に投与される場合、抗体の血清半減期の増大をもたらす。かかるＦｃ修飾の非限定的な例は、例えば、２５０位（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ、もしくはＴ）、２５４位（例えば、Ｓ、もしくはＴ）、ならびに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ、もしくはＴ）における修飾；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ、もしくはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、もしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、もしくはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０位および／もしくは４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾を含む。１つの実施形態において、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、ならびに３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）、ならびに４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾；２５２、２５４、ならびに２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾；２５０Ｑ、ならびに４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７、ならびに／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆ、もしくは３０８Ｐ）を含む。なお別の実施形態において、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）、および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
本発明のある種の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するか、もしくは損なう１つまたはそれ以上の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における変異を含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含み、ここで、変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲にあるエンドソームにおいて）、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増大させる。かかる変異は、動物に投与される場合、抗体の血清半減期の増大をもたらす。かかるＦｃ修飾の非限定的な例は、例えば、２５０位（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ、もしくはＴ）、２５４位（例えば、Ｓ、もしくはＴ）、ならびに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ、もしくはＴ）における修飾；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ、もしくはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、もしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、もしくはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０位および／もしくは４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾を含む。１つの実施形態において、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、ならびに３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）、ならびに４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾；２５２、２５４、ならびに２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾；２５０Ｑ、ならびに４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７、ならびに／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆ、もしくは３０８Ｐ）を含む。なお別の実施形態において、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）、および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
【0108】
例えば、本発明は、２５０Ｑ、ならびに２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、ならびに２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉ、ならびに３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７Ｉ、およびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉ、ならびに４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７Ｉ、およびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖ、ならびに４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６Ｖ、およびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ、ならびに４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋ、ならびに４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ、およびＮ４３４Ｆ）：からなる群より選択される変異の１つまたはそれ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異と、本明細書において開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内と考えられる。
【0109】
本発明はまた、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体も含み、ここで、キメラＣＨ領域は、１つより多い免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、もしくはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部または全てと組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、もしくはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部または全てを含むキメラＣＨ領域を含む。ある種の実施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部のヒンジ」配列（ＥＵナンバリングによる２２８位～２３６位のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部のヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵナンバリングによる２１６位～２２７位のアミノ酸残基）を含む。ある種の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、またはヒトＩｇＧ４上部のヒンジに由来するアミノ酸残基、およびヒトＩｇＧ２下部のヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書において記載されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある種の実施形態において、抗体の治療または薬物動態特性に有害に作用することなく、修飾されたＦｃエフェクター機能を示す。（例えば、２０１３年２月１日付けで出願された米国仮出願第６１／７５９，５７８（全体として参照によって本明細書に組み入れられる）を参照。）
【0110】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合することにより機能する。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の１つまたはそれ以上のアミノ酸に高い親和性で結合する。例えば、本発明は、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約２０ｎＭ未満のＫＤで２量体ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質ＲＢＤに結合する抗体および抗体の抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ、もしくは約１００ｐＭ未満のＫＤで２量体ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合する。
一般に、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合することにより機能する。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の１つまたはそれ以上のアミノ酸に高い親和性で結合する。例えば、本発明は、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約２０ｎＭ未満のＫＤで２量体ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質ＲＢＤに結合する抗体および抗体の抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ、もしくは約１００ｐＭ未満のＫＤで２量体ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合する。
【0111】
本発明はまた、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似のアッセイを用いて、２５℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約２．１分より長い解離半減期（ｔ１／２）でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施
例４において定義されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉フォーマット）、または実質的に類似のアッセイを用いて、２５℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約５分より長い、約１０分より長い、約３０分より長い、約５０分より長い、約１００分より長い、約１５０分より長い、約２００分より長い、または約２５０分より長いｔ１／２でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する。
例４において定義されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉フォーマット）、または実質的に類似のアッセイを用いて、２５℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約５分より長い、約１０分より長い、約３０分より長い、約５０分より長い、約１００分より長い、約１５０分より長い、約２００分より長い、または約２５０分より長いｔ１／２でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する。
【0112】
本発明はまた、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似のアッセイを用いて、３７℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約１．５分より長い解離半減期（ｔ１／２）でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントも含む。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例４において定義されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉もしくは抗原捕捉フォーマット）、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、３７℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約２分より長い、約５分より長い、約１０分より長い、約２５分より長い、約５０分より長い、約１００分より長い、約１５０分より長い、または約２００分より長いｔ１／２でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する。
【0113】
本発明はまた、例えば、実施例２において示されるＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイアッセイ、または実質的に類似のアッセイを用いて決定される、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ結合の９０％超を遮断する抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。
【0114】
本発明はまた、その宿主細胞についてのＭＥＲＳ－ＣｏＶの感染性を中和するか、もしくは阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。ある種の実施形態において、抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ様偽粒子（ＭＥＲＳｐｐ）の感染性を中和する。ある実施形態において、抗体は、例えば、実施例５において示されるように、最適化されたウイルス様偽粒子（ＶＬＰ）中和アッセイ、もしくは実質的に類似のアッセイにおいて、ヒト宿主細胞上のＭＥＲＳ－ＣｏＶの結合の９０％超を阻害した。抗体は、５８．９ｐＭ～２．９３ｎＭの範囲にあるＩＣ５０でＭＥＲＳｐｐ感染性を中和した。
【0115】
ある実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインに、またはドメインのフラグメントに結合する。ある実施形態において、本発明の抗体は、１つより多くのドメインに結合する（交差反応性抗体）。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓのアミノ酸残基３６７～６０６を含む受容体結合ドメインに位置するエピトープに結合する。１つの実施形態において、抗体は、配列番号４５７に記載の配列セットのアミノ酸残基３６７～６０６からなる群より選択される１個またはそれ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。
【0116】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、アミノ酸配列が配列番号４５７に記載の、全長タンパク質の任意の他の領域もしくはフラグメントに結合することにより、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に関連するＤＰＰ４－結合活性を遮断または阻害することにより機能する。
【0117】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は二重特異性抗体である。本発明の二重特異性抗体は、あるドメインにおけるあるエピトープに結合し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の同じまたは異なるドメインにおける第２のエピトープにも結合する。ある種の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、同一ドメインにおける２つの異なるエピトープに結合する。
【0118】
１つの実施形態において、本発明は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体
またはそのフラグメントは、次の特徴の１つもしくはそれ以上を示す：（ａ）完全なヒトモノクローナル抗体である；（ｂ）配列番号４５７において示される配列のアミノ酸残基３６７～６０６から選択されるスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける１つまたはそれ以上のアミノ酸残基と相互作用する；（ｃ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される、１８．５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する；（ｄ）遮断ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される、ジペプチジルペプチダーゼ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質結合を９０％超遮断する；（ｅ）ＶＬＰ中和アッセイにおいて測定される、ヒト宿主細胞のＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を、４ｎＭ未満のＩＣ５０で９０％超中和する；（ｆ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を中和し、ここで、ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるウイルスの単離物を含む；（ｇ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶが感染した対象においてｉｎ ｖｉｖｏでＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製を遮断する；ならびに（ｈ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性、ならびにＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性抗体であり、ここで、第１および第２のエピトープは、別個であり、オーバーラップしない。
またはそのフラグメントは、次の特徴の１つもしくはそれ以上を示す：（ａ）完全なヒトモノクローナル抗体である；（ｂ）配列番号４５７において示される配列のアミノ酸残基３６７～６０６から選択されるスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける１つまたはそれ以上のアミノ酸残基と相互作用する；（ｃ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される、１８．５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合する；（ｄ）遮断ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される、ジペプチジルペプチダーゼ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質結合を９０％超遮断する；（ｅ）ＶＬＰ中和アッセイにおいて測定される、ヒト宿主細胞のＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を、４ｎＭ未満のＩＣ５０で９０％超中和する；（ｆ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染性を中和し、ここで、ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒからなる群より選択されるウイルスの単離物を含む；（ｇ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶが感染した対象においてｉｎ ｖｉｖｏでＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製を遮断する；ならびに（ｈ）ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性、ならびにＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の受容体結合ドメインにおける第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性抗体であり、ここで、第１および第２のエピトープは、別個であり、オーバーラップしない。
【0119】
本発明の抗体は、前述の生物学的特徴の１つもしくはそれ以上、または任意のその組み合わせを有する。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書における実施例を含む本開示の説明から当業者に明白であろう。
【0120】
エピトープマッピングおよび関連技術
本発明は、Ｎ末端のＳ１ドメイン（アミノ酸残基１～７５１）およびＣ末端のＳ２ドメイン（アミノ酸残基７５２～１３５３）を含む、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質分子の１つもしくはそれ以上のドメイン内で見出されたアミノ酸の１つまたはそれ以上と相互作用する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質分子の前述のドメインのいずれかに位置する、３個またはそれ以上（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個もしくはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなる（例えば、ドメインにおける直線エピトープ）。あるいは、エピトープは、スパイクタンパク質分子の前述のドメインのいずれかまたは両方に位置する、多数の非連続アミノ酸（もしくはアミノ酸配列）からなる（例えば、立体構造エピトープ）。
本発明は、Ｎ末端のＳ１ドメイン（アミノ酸残基１～７５１）およびＣ末端のＳ２ドメイン（アミノ酸残基７５２～１３５３）を含む、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質分子の１つもしくはそれ以上のドメイン内で見出されたアミノ酸の１つまたはそれ以上と相互作用する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質分子の前述のドメインのいずれかに位置する、３個またはそれ以上（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個もしくはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなる（例えば、ドメインにおける直線エピトープ）。あるいは、エピトープは、スパイクタンパク質分子の前述のドメインのいずれかまたは両方に位置する、多数の非連続アミノ酸（もしくはアミノ酸配列）からなる（例えば、立体構造エピトープ）。
【0121】
当業者に公知の種々の技術を用いて、抗体が、ポリペプチドもしくはタンパク質内の「１個またはそれ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかが決定される。典型的な技術は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）において記載されるもののような、慣例的交差－遮断アッセイを含む。他の方法は、アラニンスキャンニング変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２４８：４４３～６３頁）、ペプチド切断解析結晶研究、およびＮＭＲ解析を含む。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出、および化学修飾のような方法が利用される（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いられる別の方法は、質量分析により検出される水素／ジュウテリウム交換である。一般的な用語において、水素／ジュウテリウム交換方法は、目的のタンパク質をジュウテリウム標識すること、続いて、抗体をジュウテリウムで標識されたタンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は水に移され、抗体複合体により保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、接触面の一部でないアミノ酸内の交換可能なプロトンより遅い速度でジュウテリウムから水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体接触面の部分を形成するアミノ酸は、ジュウテリウムを保持し、それ故、接触面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的大きな質量を示す。抗体の解離後、標的タンパク質は、タンパク質分解酵素切断および質量分析の対象とされ、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応するジュウテリウムで標識された残基が明らかにされる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２～２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照。
ｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２４８：４４３～６３頁）、ペプチド切断解析結晶研究、およびＮＭＲ解析を含む。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出、および化学修飾のような方法が利用される（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いられる別の方法は、質量分析により検出される水素／ジュウテリウム交換である。一般的な用語において、水素／ジュウテリウム交換方法は、目的のタンパク質をジュウテリウム標識すること、続いて、抗体をジュウテリウムで標識されたタンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は水に移され、抗体複合体により保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、接触面の一部でないアミノ酸内の交換可能なプロトンより遅い速度でジュウテリウムから水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体接触面の部分を形成するアミノ酸は、ジュウテリウムを保持し、それ故、接触面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的大きな質量を示す。抗体の解離後、標的タンパク質は、タンパク質分解酵素切断および質量分析の対象とされ、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応するジュウテリウムで標識された残基が明らかにされる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２～２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照。
【0122】
用語「エピトープ」は、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、タンパク質の３次フォールディングにより並べて置かれた連続アミノ酸または不連続アミノ酸両方から形成される。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒への曝露の際に典型的に保持され、他方、３次フォールディングにより形成されるエピトープは、変性溶媒での処理の際に典型的に失われる。エピトープは、固有の空間立体構造において少なくとも３個、より通常には、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を典型的に含む。
【0123】
抗原構造ベースの抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾補助プロファイリング（ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾された抗原表面へのそれぞれの抗体の結合プロファイルの類似性により、同一の抗原に対して向けられた多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０、参照によって全体として本明細書に組み入れられる）。それぞれのカテゴリーは、別のカテゴリーにより表されるエピトープと明らかに異なるか、または部分的に重複するいずれかの固有のエピトープを反映する。この技術は、特徴が、遺伝子学的に明確な抗体に焦点を当てられるように、遺伝子学的に一致する抗体の迅速な選別を可能にする。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する稀なハイブリドーマクローンの同定を促進する。ＭＡＰを用いて、本発明の抗体は異なるエピトープに結合する抗体の群に分類される。
【0124】
ある種の実施形態において、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４５７において例示される天然の形態か、もしくは配列番号４５８において例示される組換え産生されているかのいずれかのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質において例示される領域の任意の１つまたはそれ以上の内のエピトープ、またはそのフラグメントに結合する。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のアミノ酸残基３６７～６０６からなる群より選択される１個またはそれ以上のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。
【0125】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、およそ３５８位～およそ４５０の範囲にあるアミノ酸残基；または配列番号４５７のおよそ４５１位～およそ６０６位の範囲にあるアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１個のアミノ酸配列と相互作用する。
【0126】
本発明は、図１において挙げられる細胞株から得られる特異的な代表的な抗体のいずれかと同一のエピトープ、またはエピトープの部分に結合する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。同様に、本発明はまた、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質またはそのフラグメントへの結合について、図１において挙げられるハイブリドーマから得られる特異的な代表的な抗体のいずれかと競合する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体も含む。例えば、本発明は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質への結合について、図１において挙げられるハイブリドーマから得られる抗体の１つまたはそれ以上と交差競合する抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含む。
【0127】
当該技術分野において公知の慣例的方法を用いることにより、抗体が、参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と同一のエピトープに結合するか、または結合について参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と競合するかどうかを容易に決定することができる。例えば、試験抗体が、本発明の参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と同一のエピトープに結合するかを決定するために、参照抗体を飽和条件下でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質またはペプチドに結合させることを可能にする。次に、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質分子に結合する試験抗体の能力が評価される。試験抗体は、参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体との飽和結合後にＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓに結合することができるなら、試験抗体は、参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体より異なるエピトープに結合すると結論付けられる。他方、試験抗体は、参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体との飽和結合後にＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合することができないなら、次に、試験抗体は、本発明の参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体により結合されるエピトープと同一のエピトープに結合する。
【0128】
抗体が、結合について参照抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と競合するかを決定するために、上で記載された結合方法論は、２つの方針で行われる。第１の方針において、参照抗体を、飽和条件下でＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合させることを可能にし、続いて、試験抗体のＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ分子への結合が評価される。第２の方針において、試験抗体を、飽和条件下でＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ分子に結合させることを可能にし、続いて、参照抗体のＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ分子への結合が評価される。両方の方針において、第１の（飽和）抗体のみが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ分子に結合する能力があるなら、次に、試験抗体と参照抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓへの結合について競合すると結論付けられる。当業者により理解される通り、結合について参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と一致するエピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することにより、参照抗体の結合を立体的に遮断する。
【0129】
２つの抗体は、それぞれが、他方の抗原への結合を競合的に阻害（遮断）するなら、同一または重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰の一方の抗体が、他方の結合を、競合的結合アッセイにおいて測定される、少なくとも５０％だが、好ましくは、７５％、９０％、もしくは９９％でさえ阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０年５０：１４９５～１５０２頁を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減するか、もしくは除去する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が、他方の結合を低減するか、または除去するなら、２つの抗体は同一のエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減するか、もしくは除去する、いくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低減するか、または除去するなら、２つの抗体は重複するエピトープを有する。
【0130】
次に、さらなる慣習的実験（例えば、ペプチド変異、および結合解析）を行い、試験抗体の結合の観察された欠如が、事実上、参照抗体と同一のエピトープへの結合に起因するかどうか、または立体的遮断（もしくは別の現象）が、観察された結合の欠如に関与するかが確認される。この選別の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フロー
サイトメトリー、または当該技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを用いて行われる。
サイトメトリー、または当該技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを用いて行われる。
【0131】
免疫複合体
本発明は、毒素、またはＭＥＲＳ感染を処置するための抗ウイルス薬のような、治療部分に結合したヒト抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。本明細書において用いられる用語「免疫複合体」は、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、ペプチドもしくはタンパク質、もしくは治療剤に化学的または生物学的に結合される抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置において、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、ペプチド、または治療剤に結合される。免疫複合体の例は、抗体薬物複合体、および抗体と毒素の融合タンパク質を含む。１つの実施形態において、剤は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する第２の異なる抗体である。ある種の実施形態において、抗体は、ウイルス性に感染した細胞に特異的な剤に結合される。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体に結合される治療部分のタイプは、処置されるべき条件、および達成されるべき所望の治療効果を考慮する。免疫複合体を形成させるのに適切な剤の例は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照。
本発明は、毒素、またはＭＥＲＳ感染を処置するための抗ウイルス薬のような、治療部分に結合したヒト抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。本明細書において用いられる用語「免疫複合体」は、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、ペプチドもしくはタンパク質、もしくは治療剤に化学的または生物学的に結合される抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置において、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、ペプチド、または治療剤に結合される。免疫複合体の例は、抗体薬物複合体、および抗体と毒素の融合タンパク質を含む。１つの実施形態において、剤は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する第２の異なる抗体である。ある種の実施形態において、抗体は、ウイルス性に感染した細胞に特異的な剤に結合される。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体に結合される治療部分のタイプは、処置されるべき条件、および達成されるべき所望の治療効果を考慮する。免疫複合体を形成させるのに適切な剤の例は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照。
【0132】
多特異性抗体
本発明の抗体は、単特異性、二重特異性、または多特異性である。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または１つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有する。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８～２４４頁を参照。
本発明の抗体は、単特異性、二重特異性、または多特異性である。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または１つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有する。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８～２４４頁を参照。
【0133】
本発明の多特異性抗原結合分子のいずれか、またはその変異体は、当業者に公知であろう、標準的分子生物学的技術（例えば、組換えＤＮＡ、およびタンパク質発現技術）を用いて構築される。
【0134】
ある実施形態において、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ特異的抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の別個のドメインに結合する可変領域が、単一の結合分子内に二重－ドメイン特異性を付与するよう一緒に結合される、二重特異性フォーマット（「二重特異性」）で作製する。適切には、設計された二重特異性は、特異性および結合活性両方の増大を通じて、全体的なＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質阻害性効能を増強する。個々のドメイン（例えば、Ｎ末端のドメインのセグメント）についての特異性を有する、または１つのドメイン内の異なる領域に結合する可変領域は、それぞれの領域が、別個のエピトープ、または１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能にする、構造スキャフォールド上で対形成される。二重特異性についての１つの例において、１つのドメインについての特異性を有する結合剤由来の重鎖可変領域（ＶＨ）を、第２のドメインについての特異性を有する、一連の結合剤由来の軽鎖可変領域（ＶＬ）と再度組み合わせて、そのＶＨについての元の特異性を壊すことなく、元のＶＨと対形成させる、非同族ＶＬパートナーが同定される。この方法において、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）は、２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１、およびＶＨ２）と組み合わされて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１－ＶＬ１、およびＶＨ２－ＶＬ１）を含む二重特異性を生じる。単一のＶＬセグメントの使用は、システムの複雑さを低減し、これにより、単純化し、二重特異性を生じるために用いられるクローニング、発現、および精製方法における効率を増大させる（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９、およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照）。
【0135】
あるいは、１つより多くのドメイン、および非限定的に、例えば、第２の異なる抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のような第２の標的に結合する抗体は、本明細書において記載される技術、または当業者に公知の他の技術を用いて、二重特異性フォーマットで調製される。別個の領域に結合する抗体可変領域を、例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓの細胞外ドメイン上の関連部位に結合する可変領域と一緒に結合させて、単一の結合分子内の二重－抗原特異性が確かにされる。適切には、この性質の設計された二重特異性は、二重機能を果たす。細胞外ドメインについての特異性を有する可変領域は、細胞外ドメインの外側についての特異性を有する可変領域と組み合わされ、それぞれの可変領域が、別の抗原に結合することを可能にする、構造スキャフォールド上で対形成される。
【0136】
本発明の文脈において用いられる典型的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメイン、および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用を含み、ここで、第１および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、少なくとも１個のアミノ酸により互いに異なり、ここで、少なくとも１個のアミノ酸相違が、アミノ酸相違を欠く二重特異性抗体と比較して、タンパク質Ａへの二重特異性抗体の結合を低減する。１つの実施形態において、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、タンパク質Ａに結合し、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエキソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによりＨ４３５Ｒ）のようなタンパク質Ａ結合を低減するか、または消失させる、変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによりＹ４３６Ｆ）をさらに含む。第２のＣＨ３内で見出されるさらなる修飾は：ＩｇＧ１抗体の場合において、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合において、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵにより、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合において、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）を含む。上で記載された二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本発明の範囲内であると考えられる。
【0137】
本発明の文脈において用いられる他の典型的な二重特異性フォーマットは、限定されることなく、例えば、ｓｃＦｖ－ベースもしくは二重特異性抗体二重特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ、共通軽鎖（例えば、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、ならびにＭａｂ２二重特異性フォーマットを含む（例えば、前述のフォーマットの説明のため、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ４：６、１～１１頁、およびそこで引用される参考文献を参照）。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸結合を用いても構築され、例えば、ここで、直交性化学反応性（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する非天然のアミノ酸を用いて、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチド結合を生じ、次に、規定された組成、原子価、および幾何学を有する多量体複合体に自己アセンブルする（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照）。
【0138】
治療投与および製剤
本発明は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む治療組成物を提供する。治療組成物は、本発明に従い、輸送、デリバリー、寛容の好転などをもたらすよう製剤に取り込まれる、適切な担体、賦形剤、および他の剤と共に投与される。多数の適切な製剤は、全ての医薬化学者に公知の処方書：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見出される。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ジェル、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオンまたは陰イオン）含有ベシクル（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ジェル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ５２：２３８～３１１頁も参照。
本発明は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む治療組成物を提供する。治療組成物は、本発明に従い、輸送、デリバリー、寛容の好転などをもたらすよう製剤に取り込まれる、適切な担体、賦形剤、および他の剤と共に投与される。多数の適切な製剤は、全ての医薬化学者に公知の処方書：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見出される。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ジェル、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオンまたは陰イオン）含有ベシクル（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ジェル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ５２：２３８～３１１頁も参照。
【0139】
抗体の用量は、投与されるべき対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに依存して変動する。本発明の抗体が、成人患者において疾患もしくは障害を処置するために、またはかかる疾患の予防のため用いられる場合、本発明の抗体を、通常、体重１ｋｇ当たり約０．１～約６０ｍｇ、より好ましくは、体重１ｋｇ当たり約５～約６０、約１０～約５０、または約２０～約５０ｍｇの単回用量で投与することが有利である。状態の重症度に依存して、処置の頻度および持続時間は調節される。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約０．１ｍｇ～約８００ｍｇ、約１～約５００ｍｇ、約５～約３００ｍｇ、または約１０～約２００ｍｇ、～約１００ｍｇ、もしくは～約５０ｍｇの開始用量として投与される。ある種の実施形態において、開始用量に続き、開始用量のものとおよそ同一であるか、またはそれ未満である量における第２または多数の続く用量の抗体またはその抗原結合フラグメントが投与され、ここで、続く用量は、少なくとも１日～３日；少なくとも１週；少なくとも２週；少なくとも３週；少なくとも４週；少なくとも５週；少なくとも６週；少なくとも７週；少なくとも８週；少なくとも９週；少なくとも１０週；少なくとも１２週；または少なくとも１４週により隔てられる。
【0140】
種々のデリバリーシステムが公知であり、これを用いて、本発明の医薬組成物、例えば、リポソームにおけるカプセル封入、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現する能力がある組換え細胞、受容体により仲介されるエンドサイトーシスが投与される（例えば、Ｗｕら（１９８７年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９～４４３２頁を参照）。導入の方法は、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路を含むが、これらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路により、例えば、注入もしくはボーラス注射により、上皮もしくは皮膚粘膜裏層（例えば、経口粘膜、直腸、および腸粘膜など）を通じた吸収により、投与され、他の生物学的に活性な剤と一緒に投与される。投与は全身または局所である。医薬組成物はまた、ベシクル、特に、リポソームにおいてもデリバリーされる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７～１５３３頁を参照）。
【0141】
本発明の抗体をデリバリーするためのナノ粒子の使用も本明細書において考えられる。抗体結合ナノ粒子は、治療上および診断上の適用両方のため用いられる。抗体結合ナノ粒子、ならびに調製および使用方法は、Ａｒｒｕｅｂｏ，Ｍ．ら、２００９年（Ｊ． Ｎａｎｏｍａｔ．における「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」２００９巻、論文番号４３９３８９、２４頁、ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）（参照によって本明細書において組み入れられる）により詳細に記載される。ナノ粒子が開発され、ウイルス性に感染した細胞を標的化するための医薬組成物において含有される抗体に結合される。薬物デリバリー用ナノ粒子はまた、例えば、ＵＳ８２５７７４０、またはＵＳ８２４６９９５（それぞれ、参照によって、全体として本明細書に組み入れられる）においても記載される。
【0142】
ある種の状況において、医薬組成物は、制御放出システムにおいてデリバリーされる。１つの実施形態において、ポンプが用いられる。別の実施形態において、ポリマー材料が用いられる。なお別の実施形態において、制御放出システムは、組成物の標的の近くに置かれ、従って、少量の全身性用量のみが必要とされる。
【0143】
注射可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内および筋内注射用形態、点滴注入用形態などを含む。これらの注射可能な調製物は、公的に公知の方法により調製される。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射のため通常用いられる無菌の水性媒体もしくは油性媒体において、上で記載された抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化することにより、調製される。注射用水性媒体として、例えば、生理的食塩水、グルコースを含有する等調溶液、および他の補助剤などが存在し、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などのような適切な溶解剤と併用で用いられる。油性媒体として、例えば、ゴマ油、大豆油などが利用され、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような溶解剤と併用して用いられる。従って、調製される注射は、適切なアンプルに好ましく充填される。
【0144】
本発明の医薬組成物は、標準的な針およびシリンジで皮下または静脈内にデリバリーされる。加えて、皮下デリバリーに関して、ペンデリバリー装置は、本発明の医薬組成物のデリバリーにおいて容易に適用される。かかるペンデリバリー装置は、再利用可能であるか、または使い捨てである。再利用可能なペンデリバリー装置は、医薬組成物を含有する置換可能なカートリッジを一般に利用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与されると、カートリッジは空になり、空のカートリッジは容易に廃棄され、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで置き換えられる。次に、ペンデリバリー装置は再利用される。使い捨てのペンデリバリー装置において、置き換え可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てのペンデリバリー装置は、装置内のリザーバーにおいて保持される医薬組成物で予め充填される。リザーバーは、医薬組成物が空になると、全体の装置は廃棄される。
【0145】
多数の再利用可能なペン、および自動注射デリバリー装置は、本発明の医薬組成物の皮下デリバリーにおいて適用される。例は、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）（２、３例のみを挙げる）を含むが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下デリバリーにおいて適用される、使い捨てのペンデリバリー装置の例は、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、ならびにＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ
Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）（２、３例のみを挙げる）を含むが、確かにこれらに限定されない。
Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）（２、３例のみを挙げる）を含むが、確かにこれらに限定されない。
【0146】
有利には、上で記載された経口または非経口使用用医薬組成物は、有効成分の用量に適合するよう適した単位用量における投薬形態に調製される。単位用量におけるかかる投薬形態は、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、注射（アンプル剤）、坐剤などを含む。含有される抗体の量は、一般に、単位用量において；特に、注射の形態において１つの投薬形態当たり約５～約５００ｍｇ、他の投薬形態のため約５～約１００ｍｇ、および約１０～約２５０ｍｇの抗体が含有されることが好ましい。
【0147】
抗体の治療上の使用
本発明の抗体は、ＭＥＲＳ感染症のようなＭＥＲＳコロナウイルスと関連する疾患、もしくは障害、もしくは状態の処置、および／もしくは予防に、ならびに／またはかかる疾患、障害、もしくは状態と関連する少なくとも１つの症状を改善するのに有用である。１つの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、治療用量にて、ＭＥＲＳ感染を有する患者に投与される。
本発明の抗体は、ＭＥＲＳ感染症のようなＭＥＲＳコロナウイルスと関連する疾患、もしくは障害、もしくは状態の処置、および／もしくは予防に、ならびに／またはかかる疾患、障害、もしくは状態と関連する少なくとも１つの症状を改善するのに有用である。１つの実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、治療用量にて、ＭＥＲＳ感染を有する患者に投与される。
【0148】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳコロナウイルスにより引き起こされる重篤かつ急性の呼吸器系感染症に罹患している対象を処置するのに有用である。ある実施形態において、本発明の抗体は、宿主におけるウイルスタイターの低減、またウイルス負荷の低減において有用である。１つの実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳを有する対象の肺の炎症の予防または低減において有用である。１つの実施形態において、本発明の抗体は、ＭＥＲＳを有する対象における間質性、細気管支周囲もしくは血管周囲の炎症、肺胞の損傷、および胸膜の変化の予防または低減において有用である。
【0149】
本発明の１つまたはそれ以上の抗体を投与して、疾患または障害の症状または状態のうちの１つまたはそれ以上の重症度が、軽減されるか、または予防されるか、または低減される。抗体を用いて、高熱、咳、息切れ、肺炎、下痢、臓器不全（例えば、腎不全および腎臓の機能障害）、敗血性ショック、および死を含むが、これらに限定されないＭＥＲＳ感染症の少なくとも１つの症状の重症度を改善するか、または低減する。
【0150】
免疫不全状態の人、高齢者（年齢６５歳より高い）、年齢２歳より小さい子供、中東にある国（例えば、サウジアラビア、アラブ首長国連邦、およびカタール首長国）への旅行者、医療労働者、ラクダもしくはコウモリと職業上もしくは娯楽上接触する人、ＭＥＲＳ感染症を有する人と密接な家族の一員、ＭＥＲＳ感染症を有することが確認されたもしくは疑われる人と接触する成人もしくは子供、および医学的既往歴（例えば、肺の感染症、心臓疾患もしくは糖尿病の増大したリスク）を有する患者のようなＭＥＲＳ感染症を発症するリスクのある対象に、本発明の抗体の１つまたはそれ以上を予防的に使用することも、本明細書において考慮される。
【0151】
本発明のさらなる実施形態において、本抗体は、ＭＥＲＳ感染症に罹患している患者を処置するための医薬組成物または医薬の調製のため用いられる。本発明の別の実施形態において、本抗体は、ＭＥＲＳ感染症を処置し、もしくは改善するのに有用な、当業者に公知の任意の他の剤を用いた補助療法、または任意の他の療法として用いられる。
【0152】
併用療法および製剤
併用療法は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性なフラグメントと有利に組み合わされる、任意のさらなる治療剤を含む。本発明の抗体は、ＭＥＲＳを処置するために用いられる薬物もしくは療法の１つまたはそれ以上と相乗的に併用される。ある実施形態において、本発明の抗体を、第２
の治療剤と併用して、ＭＥＲＳを有する患者におけるウイルス負荷が低減されるか、または感染の症状の１つもしくはそれ以上が改善される。
併用療法は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性なフラグメントと有利に組み合わされる、任意のさらなる治療剤を含む。本発明の抗体は、ＭＥＲＳを処置するために用いられる薬物もしくは療法の１つまたはそれ以上と相乗的に併用される。ある実施形態において、本発明の抗体を、第２
の治療剤と併用して、ＭＥＲＳを有する患者におけるウイルス負荷が低減されるか、または感染の症状の１つもしくはそれ以上が改善される。
【0153】
本発明の抗体は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬のような）、抗感染症薬、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する異なる抗体、抗ウイルス薬、インターフェロンアルファ－２ｂおよび筋肉内リバビリン、回復期の血漿、主要なウイルスタンパク質分解酵素の阻害剤、ならびにＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質を標的にする侵入／融合阻害剤、ＭＥＲＳ－ＣｏＶについてのワクチン、抗生物質、抗酸化剤のような栄養補助剤、またはＭＥＲＳ感染症を処置するための任意の他の対症療法との併用で用いられる。
【0154】
ある種の実施形態において、第２の治療剤は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対する別の抗体である。ＭＥＲＳ－ＣｏＶに対する広範な中和または阻害活性を有する抗体の併用（「カクテル」）を使用することが、本明細書において考慮される。ある実施形態において、非競合抗体を併用し、それを必要とする対象に投与して、選択圧の結果としての迅速な変異に起因しＭＥＲＳウイルスが回避する能力を低減する。ある実施形態において、併用を含む抗体は、別個の、スパイクタンパク質上のオーバーラップしないエピトープに結合する。併用を含む抗体は、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ結合を遮断するか、または膜融合を防ぐ／阻害する。併用を含む抗体は、ＥＭＣ／２０１２、Ｊｏｒｄａｎ－Ｎ３／２０１２、Ｅｎｇｌａｎｄ－Ｑａｔａｒ／２０１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿３＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿４＿２０１３、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１２、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１５、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１６、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１７、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１８、Ａｌ－Ｈａｓａ＿１９、Ａｌ－Ｈａｓａ＿２１、Ａｌ－ｈａｓａ＿２５、Ｂｉｓｈａ＿１、Ｂｕｒａｉｄａｈ＿１、Ｅｎｇｌａｎｄ１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－ｂａｔｉｎ＿１、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿２、Ｈａｆｒ－Ａｌ－Ｂａｔｉｎ＿６、Ｊｅｄｄａｈ＿１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１、ＫＦＵ－ＨＫＵ１３、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｑａｔａｒ３、Ｑａｔａｒ４、Ｒｉｙａｄｈ＿１、Ｒｉｙａｄｈ＿２、Ｒｉｙａｄｈ＿３、Ｒｉｙａｄｈ＿４、Ｒｉｙａｄｈ＿５、Ｒｉｙａｄｈ＿９、Ｒｉｙａｄｈ＿１４、Ｔａｉｆ＿１、ＵＡＥ、およびＷａｄｉ－Ａｄ－Ｄａｗａｓｉｒを含むが、これらに限定されない、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物の１つまたはそれ以上のＭＥＲＳ－ＣｏＶ活性を阻害する。
【0155】
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の併用を使用することも本明細書において考慮され、ここで、併用は、交差競合しない抗体の１つまたはそれ以上を含み、ある実施形態において、併用は、狭いスペクトルの単離物に対する活性を有し、第１の抗体と交差競合しない第２の抗体との広範な中和活性を有する第１の抗体を含む。
【0156】
本明細書において用いられる、用語「との併用で」は、さらなる治療上活性な成分が、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与前、同時、または後に投与されることを意味する。用語「との併用」はまた、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体および第２の治療剤の連続または併用投与も含む。
【0157】
さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与に先立ち、対象に投与される。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与されるなら、第１の成分は、第２の成分「に先立ち」投与されるとみなされる。他の実施形態において、さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与後、対象に投与される。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、
４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与されるなら、第１の成分は、第２の成分「の後に」投与されるとみなされる。なお他の実施形態において、さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与と同時に対象に投与される。本発明の目的上、「同時」投与は、例えば、単回投薬形態、または互いに約３０分もしくはそれ以下の内に対象に投与される別の投薬形態における対象への抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、およびさらなる治療上活性な成分の投与を含む。別の投薬形態で投与されるなら、それぞれの投薬形態は、同一の経路を介して投与される（例えば、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、およびさらなる治療上活性な成分両方が、静脈内などで投与される）；あるいは、それぞれの投薬形態は、異なる経路を介して投与される（例えば、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は静脈内投与され、さらなる治療上活性な成分は経口投与される）。任意の現象において、単回投薬形態、同一の経路による別の投薬形態、または異なる経路による別の投薬形態において成分を投与することは、本開示の目的のため、全て「併用投与」とみなされる。本開示の目的のため、さらなる治療上活性な成分の投与「に先立つ」、「同時」、または「の後の」（それらの用語は、本明細書において上で定義された通り）抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与は、さらなる治療上活性な成分「と併用した」抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与とみなされる。
４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与されるなら、第１の成分は、第２の成分「の後に」投与されるとみなされる。なお他の実施形態において、さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与と同時に対象に投与される。本発明の目的上、「同時」投与は、例えば、単回投薬形態、または互いに約３０分もしくはそれ以下の内に対象に投与される別の投薬形態における対象への抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、およびさらなる治療上活性な成分の投与を含む。別の投薬形態で投与されるなら、それぞれの投薬形態は、同一の経路を介して投与される（例えば、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、およびさらなる治療上活性な成分両方が、静脈内などで投与される）；あるいは、それぞれの投薬形態は、異なる経路を介して投与される（例えば、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は静脈内投与され、さらなる治療上活性な成分は経口投与される）。任意の現象において、単回投薬形態、同一の経路による別の投薬形態、または異なる経路による別の投薬形態において成分を投与することは、本開示の目的のため、全て「併用投与」とみなされる。本開示の目的のため、さらなる治療上活性な成分の投与「に先立つ」、「同時」、または「の後の」（それらの用語は、本明細書において上で定義された通り）抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与は、さらなる治療上活性な成分「と併用した」抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与とみなされる。
【0158】
本発明は、医薬組成物を含み、ここで、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、本明細書において他の場所で記載される通り、さらなる治療上活性な成分の１つまたはそれ以上と共製剤化される。
【0159】
投与治療計画
ある種の実施形態により、１回用量の本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（または抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）が、それを必要とする対象に投与される。本発明のある種の実施形態によると、複数回用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（または抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）は、定義される時間経過に渡り、対象に投与される。本発明のこの態様による方法は、対象に、複数回用量の本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を連続して投与することを含む。本明細書において用いられる「連続して投与すること」は、それぞれの用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体が、対象に、時間における異なる点において、例えば、予め決定された間隔（例えば、時間、日、週、または月）により隔てられた異なる日において投与されることを意味する。本発明は、患者に、単回開始用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、続いて、１つまたはそれ以上の２次用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、場合により、続いて、１つまたはそれ以上の３次用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を連続して投与することを含む方法を含む。
ある種の実施形態により、１回用量の本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（または抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）が、それを必要とする対象に投与される。本発明のある種の実施形態によると、複数回用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（または抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）は、定義される時間経過に渡り、対象に投与される。本発明のこの態様による方法は、対象に、複数回用量の本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を連続して投与することを含む。本明細書において用いられる「連続して投与すること」は、それぞれの用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体が、対象に、時間における異なる点において、例えば、予め決定された間隔（例えば、時間、日、週、または月）により隔てられた異なる日において投与されることを意味する。本発明は、患者に、単回開始用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、続いて、１つまたはそれ以上の２次用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体、場合により、続いて、１つまたはそれ以上の３次用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を連続して投与することを含む方法を含む。
【0160】
用語「開始用量」、「２次用量」、および「３次用量」は、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の投与の時間的な並びを指す。従って、「開始用量」は、処置計画の開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」としても言及される）；「２次用量」は、開始用量の後に投与される用量であり；「３次用量」は、２次用量後に投与される用量である。開始、２次、および３次用量は、全て、同一量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を含有するが、一般に、投与の頻度の点で互いに異なる。しかしながら、ある種の実施形態において、開始、２次、および／または３次用量において含有される抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の量は、処置の経過中、互いに異なる（例えば、必要に応じて、上方もしくは下方調節される）。ある種の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、もしくは５回）の用量は、処置治療計画の開始時に、「添加用量」として投与され、続いて、あまり頻繁でない基盤で投与される続く用量（例えば、「維持用量」）が投与される。
【0161】
本発明のある種の典型的な実施形態において、それぞれの２次および／または３次用量は、直前の先行する用量の後、１～４８時間（例えば、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２、１５、１５１／２、１６、１６１／２、１７、１７１／２、１８、１８１／２、１９、１９１／２、２０、２０１／２、２１、２１１／２、２２、２２１／２、２３、２３１／２、２４、２４１／２、２５、２５１／２、２６、２６１／２、またはそれ以上）で投与される。本明細書において用いられる語句「直前の先行する用量」は、複数回投与の並びにおいて、中断のない用量の並びで、まさに次の用量の投与に先立ち患者に投与される、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の用量を意味する。
【0162】
本発明のこの態様による方法は、患者に、任意の数の２次および／または３次用量の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を投与することを含む。例えば、ある種の実施形態において、単回２次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、もしくはそれ以上）の２次用量が患者に投与される。同様に、ある種の実施形態において、単回の３次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、もしくはそれ以上）の３次用量が患者に投与される。
【0163】
本発明のある種の実施形態において、２次および／または３次用量が患者に投与される頻度は、処置治療計画の経過に渡り変動する。投与の頻度もまた、医師による処置の経過中、臨床検査に従い個々の患者のニーズに依存して調節される。
【0164】
抗体の診断上の使用
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を用いて、例えば、診断の目的のため、試料中のＭＥＲＳ－ＣｏＶが検出され、および／または測定される。ある実施形態は、ウイルス感染症のような疾患もしくは障害を検出するためのアッセイにおいて、１つまたはそれ以上の本発明の抗体の使用を考慮する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶについての典型的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と接触させることを含み、ここで、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されるか、または患者試料からＭＥＲＳ－ＣｏＶを選択的に単離するための捕捉リガンドとして用いられる。あるいは、未標識の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、検出可能に標識されたそれ自体である２次抗体と組み合わせた診断適用において用いられる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのようなラジオアイソトープ；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素である。試料中のＭＥＲＳ－ＣｏＶを検出または測定するために用いられる特異的な典型的アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を用いて、例えば、診断の目的のため、試料中のＭＥＲＳ－ＣｏＶが検出され、および／または測定される。ある実施形態は、ウイルス感染症のような疾患もしくは障害を検出するためのアッセイにおいて、１つまたはそれ以上の本発明の抗体の使用を考慮する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶについての典型的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体と接触させることを含み、ここで、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されるか、または患者試料からＭＥＲＳ－ＣｏＶを選択的に単離するための捕捉リガンドとして用いられる。あるいは、未標識の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、検出可能に標識されたそれ自体である２次抗体と組み合わせた診断適用において用いられる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのようなラジオアイソトープ；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素である。試料中のＭＥＲＳ－ＣｏＶを検出または測定するために用いられる特異的な典型的アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。
【0165】
本発明によるＭＥＲＳ－ＣｏＶ診断アッセイにおいて用いられる試料は、患者から得ることができる任意の組織または体液試料を含み、正常もしくは病理条件下で、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質、またはそのフラグメントいずれかの検出可能な量を含有する。一般に、健常患者（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶと関連する疾患に苦しまない患者）から得られる特定の試料中のＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質のレベルは、ベースライン、または標準的ＭＥＲＳ－ＣｏＶレベルをまず確立するために測定される。次に、このＭＥＲＳ－ＣｏＶのベースラインレベルは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ関連状態、またはかかる状態に関連する症状を有することが疑われる個人から得られる試料において測定されるＭＥＲ
Ｓ－ＣｏＶのレベルに対して比較される。
Ｓ－ＣｏＶのレベルに対して比較される。
【0166】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に特異的な抗体は、さらなる標識もしくは部分を含まず、またはそれらは、Ｎ末端もしくはＣ末端の標識もしくは部分を含有する。１つの実施形態において、標識または部分はビオチンである。結合アッセイにおいて、（もしあれば）標識の位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの向きを決定する。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。
【実施例】
【0167】
以下の実施例は、当業者に本発明の方法および組成物の作り方、ならびに用い方の完全な開示または記載を提供するために記述するものであり、本発明者らが彼らの発明とみなすものの範囲を制限することは意図されない。用いた数字（例えば、量、温度など）に関する正確さを保証するよう試みられたが、実験上の誤差および自差がある程度あることは考慮されるべきである。別段示されなければ、部分は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏におけるものであり、室温は約２５℃であり、圧力は雰囲気においてであるか、または雰囲気に近い。
【実施例1】
【0168】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対するヒト抗体の生成
ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対するヒト抗体を作製した。全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質をコードするＤＮＡ構築物、続いて、ＧｅｎＢａｎｋ受託ＡＦＳ８８９３６．１（配列番号４５７）のアミノ酸３６７～６０６の範囲にある精製したスパイクタンパク質のフラグメントを含むブースター用量で、マウスを免疫した。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質（ＥＭＣ／２０１２－ＧｅｎＢａｎｋ ＪＸ８６９０５９）をコードするコドン最適化ｃＤＮＡ配列をＧｅｎｅＡｒｔにより合成し、標準的発現ベクターにクローニングした。受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質変異体をコードするプラスミドを、製造元の指示に従い、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ ＩＩ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した変異誘発により生成した。
ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に対するヒト抗体を作製した。全長ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質をコードするＤＮＡ構築物、続いて、ＧｅｎＢａｎｋ受託ＡＦＳ８８９３６．１（配列番号４５７）のアミノ酸３６７～６０６の範囲にある精製したスパイクタンパク質のフラグメントを含むブースター用量で、マウスを免疫した。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質（ＥＭＣ／２０１２－ＧｅｎＢａｎｋ ＪＸ８６９０５９）をコードするコドン最適化ｃＤＮＡ配列をＧｅｎｅＡｒｔにより合成し、標準的発現ベクターにクローニングした。受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質変異体をコードするプラスミドを、製造元の指示に従い、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ ＩＩ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した変異誘発により生成した。
【0169】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ特異的イムノアッセイにより、抗体免疫応答をモニターした。所望の免疫応答を達成したら、脾細胞を回収し、マウスミエローマ細胞と融合させて生存能を保持し、ハイブリドーマ細胞株を形成させた。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ特異的抗体を産生する細胞株を同定した。抗原特異的抗体を発現する合計６９６種のハイブリドーマのうち、１８２種が、ＤＰＰ４とスパイクタンパク質の間の相互作用を遮断することを見出し、１２３種が、ＭＥＲＳｐｐの標的細胞への侵入を遮断した。この方法で生成した代表的な細胞株を、ＨＢＶＸ０６Ｈ０５、ＨＢＶＸ１１Ｈ０４、ＨＢＶＸ１１Ｄ０２、ＨＢＶＺ１０Ｅ１０、ＨＢＶＹ０９Ｆ０８、ＨＢＶＺ０５Ｇ０２、ＨＢＶＺ０９Ｂ０６、ＨＢＶＹ０１Ｆ０８、ＨＢＶＹ１０Ｇ０２、ＨＢＶＹ０４Ｂ０６、ＨＢＶＹ０７Ｄ１０、ＨＢＶＺ０８Ａ０９、ＨＢＶＺ０５Ｇ０４、ＨＢＶＹ０６Ｃ０７、ＨＢＶＹ０３Ｈ０６、ＨＢＶＺ１０Ｇ０６、ＨＢＶＺ０４Ｆ１０、ＨＢＶＸ１１Ｅ０９、ＨＢＶＹ０６Ｈ０９、ＨＢＶＺ０５Ｂ１１、ＨＢＶＹ０２Ｅ０５およびＨＢＶＺ０４Ｃ０７と命名した。細胞株を用いて、いくつかの抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓキメラ抗体（例えば、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得た；この方法で作成した代表的な抗体を、Ｈ１Ｍ１５２７７Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２７９Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２８０Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２７８Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２７１Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２６７Ｎ、Ｈ２ｂＭ１５２９２Ｎ、Ｈ２ｂＭ１５２９１Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２９０Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２９３Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２８９Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２６９Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２８７Ｎ、Ｈ１Ｍ１５
２８８Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２６８Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２７０Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２８１Ｎ、およびＨ２ａＭ１５２７２Ｎと命名した。
２８８Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２６８Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２７０Ｎ、Ｈ２ａＭ１５２８１Ｎ、およびＨ２ａＭ１５２７２Ｎと命名した。
【0170】
表１は、対応するハイブリドーマ上清から得た選択したキメラ抗体を示す。
【0171】
【表1】
【0172】
米国特許７５８２２９８（参照によって、全体として本明細書に具体的に組み入れる）において記載される通り、ミエローマ細胞に融合させることなく、抗原陽性マウスＢ細胞から抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体も直接的に単離した。この方法を用いて、いくつかの完全ヒト抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体）を得て；この方法で作製した典型的な抗体を、：Ｈ４ｓＨ１５１８８Ｐ、Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５２１１Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２５９Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２０３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５２６０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５２３１Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２３７Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２０８Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２２８Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２３３Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２６４Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２５３Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２１５Ｐ、およびＨ１Ｈ１５２４９Ｐ２と命名した。
【0173】
この実施例の方法に従い作製した典型的な抗体の生物学的特性を、以下で説明する実施例において詳細に記載する。
【実施例2】
【0174】
ハイブリドーマ上清の特徴決定
ＥＬＩＳＡ結合アッセイを行い、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合した（上述のハイブリドーマから得た）抗体上清を同定した。Ｃ末端におけるヒトＩｇＧ１分子のＦｃ部分（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）と共に発現したＭＥＲＳ－Ｃｏ
Ｖ－Ｓの受容体結合ドメインを含む部分（アミノ酸Ｅ３６７～Ｙ６０６）を、２μｇ／ｍｌにて、９６ウェルプレート上、ＰＢＳバッファー中、一晩、４℃にてコートした。ＰＢＳ中の０．５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡの溶液を用いて、非特異的結合部位を続いて遮断した。ハイブリドーマ上清を、遮断バッファー中１：５０希釈し、ＭＥＲＳ ＲＢＤでコートしたプレートに１時間、室温にて結合させた。洗浄後、ＨＲＰ結合抗ｈＦｃポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いて、結合した抗体を検出した。試料を３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン溶液（ＴＭＢ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で展開して、比色分析反応を生じさせ、次に、１Ｍ硫酸で中和し、その後、Ｖｉｃｔｏｒプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上で４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。結果を図１において示す。４５０ｎｍにおけるシグナルの強度を用いて、さらなる特徴決定のため抗体を選択した。
ＥＬＩＳＡ結合アッセイを行い、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に結合した（上述のハイブリドーマから得た）抗体上清を同定した。Ｃ末端におけるヒトＩｇＧ１分子のＦｃ部分（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）と共に発現したＭＥＲＳ－Ｃｏ
Ｖ－Ｓの受容体結合ドメインを含む部分（アミノ酸Ｅ３６７～Ｙ６０６）を、２μｇ／ｍｌにて、９６ウェルプレート上、ＰＢＳバッファー中、一晩、４℃にてコートした。ＰＢＳ中の０．５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡの溶液を用いて、非特異的結合部位を続いて遮断した。ハイブリドーマ上清を、遮断バッファー中１：５０希釈し、ＭＥＲＳ ＲＢＤでコートしたプレートに１時間、室温にて結合させた。洗浄後、ＨＲＰ結合抗ｈＦｃポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いて、結合した抗体を検出した。試料を３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン溶液（ＴＭＢ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で展開して、比色分析反応を生じさせ、次に、１Ｍ硫酸で中和し、その後、Ｖｉｃｔｏｒプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上で４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。結果を図１において示す。４５０ｎｍにおけるシグナルの強度を用いて、さらなる特徴決定のため抗体を選択した。
【0175】
ハイブリドーマ上清への抗原結合についての結合会合および解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）、平衡解離定数および解離半減期（それぞれ、ＫＤおよびｔ１／２）を、Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置（詳細を実施例４において記載）上でのリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを用いて決定した。図１において示す通り、２２種のうち２１種のハイブリドーマ抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に２４５ｐＭ～２１．５ｎＭの範囲にあるＫＤ値で結合した。
【0176】
抗ＭＥＲＳコロナウイルススパイクタンパク質抗体の、同族結合パートナー、ヒトジペプチジルペプチダーゼ４（ｈＤＰＰ４）へのＭＥＲＳの受容体結合ドメイン（ＭＥＲＳ－ＲＢＤ）結合を遮断する能力を、ＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイで評価した。簡単に言うと、ｃ末端において６×ヒスチジンタグと共に発現したヒトジペプチジルペプチダーゼ４（ｈＤＰＰ４－６Ｈｉｓ；Ｒ＆Ｄ カタログ番号１１８０－ＳＥ）を、２μｇ／ｍＬにて、９６ウェルプレート上、ＰＢＳバッファー中、一晩、４℃にてコートした。非特異的結合部位を、ＰＢＳ中の０．５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡの溶液を用いて続いて遮断した。このプレートを用いて、ｃ末端においてヒトＩｇＧ１分子のＦｃ部分（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）と共に発現したＭＥＲＳ－ＲＢＤ（アミノ酸Ｅ３６７～Ｙ６０６）を、抗ＭＥＲＳ抗体上清の希釈液で予め平衡化したＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ溶液で測定した。一定濃度３００ｐＭ ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃを、１０％容量 抗ＭＥＲＳ抗体上清と予め混合し、続いて、１時間、室温（ＲＴ）にてインキュベーションし、抗体と抗原結合を平衡状態に至らせた。次に、平衡化した試料溶液をｈＤＰＰ４－６ｈｉｓでコートしたプレートに移した。ＲＴにおける１時間の結合後、プレートを洗浄し、結合したＭＥＲＳ ＲＢＤを、ＨＲＰ結合抗ｈＦｃポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いて検出した。試料を、ＴＭＢ溶液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、番号５１－２６０６ＫＣおよび番号５１－２６０７ＫＣ）で展開して、比色分析反応を生じさせ、次に、１Ｍ硫酸で中和し、その後、Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ５プレートリーダー上で４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。一定濃度のＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ単独について測定した吸光度を、０％遮断として定義し、添加したＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃのないものについて測定した吸光度を、１００％遮断として定義した。パーセント遮断を、予め定義した１００％遮断から減じたＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ単独とバックグラウンドでのシグナル（ＨＲＰ結合抗ｈＦｃ抗体単独由来のシグナル）間の差に対する抗体の存在下で観察されたシグナルの低減の比として計算した。
【0177】
図１において示す通り、別個の独立したハイブリドーマからもたらされた２２種のうち１７種の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、ＤＰＰ４へのＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の結合の９０％超を遮断した。
【0178】
別個の独立したハイブリドーマからもたらされた抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を、ＭＥＲＳ感染性の中和について試験した（実施例５においてアッセイを詳述する）。図１にお
いて示す通り、２２種のうち１２種の細胞の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓハイブリドーマ抗体は、ＭＥＲＳ感染性の９０％超を、６８．４ｐＭ～３．５８ｎＭの範囲にあるＩＣ５０で阻害するか、または中和した。
いて示す通り、２２種のうち１２種の細胞の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓハイブリドーマ抗体は、ＭＥＲＳ感染性の９０％超を、６８．４ｐＭ～３．５８ｎＭの範囲にあるＩＣ５０で阻害するか、または中和した。
【実施例3】
【0179】
重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸およびヌクレオチド配列
表２には、選択した本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の重鎖および軽鎖可変領域、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別名を記載する。
表２には、選択した本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体の重鎖および軽鎖可変領域、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別名を記載する。
【0180】
【表2】
【0181】
対応する核酸配列識別名を表３に記載する。
【0182】
【表3】
【0183】
抗体は、本明細書において典型的には次の命名法によって言及する：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ４ｘＨ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」など）、続いて、数字で表した識別名（例えば、表２において示す「１５１７７」、「１５２２８」、「１５２６８」など）、続いて「Ｐ」、「Ｐ２」、「Ｎ」、または「Ｂ」接尾辞。従って、この命名法により、本明細書において、例えば、「Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ」、「Ｈ１Ｈ１５２２８Ｐ２」、「Ｈ２Ｍ１５２６８Ｎ」などとして抗体を指す。本明細書において用いた抗体名称上のＨ４ｓＨ、Ｈ１Ｍ、およびＨ２Ｍ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ４
ｓＨ」抗体は、ＵＳ２０１００３３１５２７において開示される２つまたはそれ以上のアミノ酸変更を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２ Ｆｃ（ａもしくはｂのアイソタイプ）を有する（全ての可変領域は、抗体名称において最初の「Ｈ」により示す通り、完全ヒトである）。当業者が理解する通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体などに変換することができる）が、いずれの場合も、表２において示した数字で表した識別名により示した可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同一のままであり、抗原の結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず、一致または実質的に類似であると予測した。
ｓＨ」抗体は、ＵＳ２０１００３３１５２７において開示される２つまたはそれ以上のアミノ酸変更を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２ Ｆｃ（ａもしくはｂのアイソタイプ）を有する（全ての可変領域は、抗体名称において最初の「Ｈ」により示す通り、完全ヒトである）。当業者が理解する通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体などに変換することができる）が、いずれの場合も、表２において示した数字で表した識別名により示した可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同一のままであり、抗原の結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず、一致または実質的に類似であると予測した。
【実施例4】
【0184】
表面プラズモン共鳴により決定したＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓへの抗体結合
Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器におけるリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを用いて、精製した抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはハイブリドーマ上清への抗原結合について、結合ならびに解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）、平衡解離定数、ならびに解離半減期（それぞれ、ＫＤおよびｔ１／２）を決定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、ポリクローナルウサギ抗マウス抗体（ＧＥ、番号ＢＲ－１００８－３８）、またはモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、番号ＢＲ－１００８－３９）のいずれかで誘導体化して、それぞれ、マウスＦｃまたはヒトＦｃいずれかと共に発現させた、およそ１００～９００ＲＵの抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体を捕捉した。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体への結合について試験したＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬は、Ｃ末端のヒトＩｇＧ１ Ｆｃと共に発現した組換えＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ受容体結合ドメイン（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）を含んでいた。Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００における流速３０μＬ／分、またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００における流速５０μＬ／分において、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体捕捉表面に渡り、２００ｎＭ～３．７ｎＭの範囲にある異なる濃度のＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬を注入した。捕捉したモノクローナル抗体へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬の結合を、３～５分間モニターし、一方、抗体からのそれらの解離を、ＨＢＳＴランニングバッファー（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０）において７～１０分間モニターした。２５℃において実験を行った。データを処理し、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線近似ソフトウェアを用いて１：１結合モデルに近似させることにより、動力学的結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。次に、動力学的速度定数から、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａ、およびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０＊ｋｄ）］として、結合解離平衡定数（ＫＤ）、ならびに解離半減期（ｔ１／２）を計算した。
Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器におけるリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを用いて、精製した抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはハイブリドーマ上清への抗原結合について、結合ならびに解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）、平衡解離定数、ならびに解離半減期（それぞれ、ＫＤおよびｔ１／２）を決定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、ポリクローナルウサギ抗マウス抗体（ＧＥ、番号ＢＲ－１００８－３８）、またはモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、番号ＢＲ－１００８－３９）のいずれかで誘導体化して、それぞれ、マウスＦｃまたはヒトＦｃいずれかと共に発現させた、およそ１００～９００ＲＵの抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体を捕捉した。抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体への結合について試験したＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬は、Ｃ末端のヒトＩｇＧ１ Ｆｃと共に発現した組換えＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ受容体結合ドメイン（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）を含んでいた。Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００における流速３０μＬ／分、またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００における流速５０μＬ／分において、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓモノクローナル抗体捕捉表面に渡り、２００ｎＭ～３．７ｎＭの範囲にある異なる濃度のＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬を注入した。捕捉したモノクローナル抗体へのＭＥＲＳ－ＣｏＶ試薬の結合を、３～５分間モニターし、一方、抗体からのそれらの解離を、ＨＢＳＴランニングバッファー（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０）において７～１０分間モニターした。２５℃において実験を行った。データを処理し、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線近似ソフトウェアを用いて１：１結合モデルに近似させることにより、動力学的結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。次に、動力学的速度定数から、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａ、およびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０＊ｋｄ）］として、結合解離平衡定数（ＫＤ）、ならびに解離半減期（ｔ１／２）を計算した。
【0185】
開始実験において、（実施例２において記載した）２２種のハイブリドーマ上清について、結合解離平衡定数および解離半減期を決定した。
【0186】
続く実験において、上述の表面プラズモン共鳴アッセイを用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質への結合について、精製した抗体を試験した。
【0187】
【表4】
【0188】
【表5】
【0189】
表４および５において示した通り、抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質に、２５℃において７７．５ｐＭ～１８．５ｎＭ、および３７℃において１２７ｐＭ～１３．２ｎＭの範囲にあるＫＤ値で結合した。抗体は、２５℃において２．２～２６２分、および３７℃において１．８～２４４分の範囲にある解離半減期（ｔ１／２）値を示した。
【実施例5】
【0190】
ＭＥＲＳ感染性の抗体により仲介される中和
材料および方法
偽粒子の生成
ＭＥＲＳスパイクタンパク質を発現するプラスミド構築物、ＨＩＶ ｇａｇ－ｐｏｌ、およびホタルルシフェラーゼをコードするＨＩＶプロウイルスベクターの混合物を２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクションすることにより、ＭＥＲＳ偽粒子（ＭＥＲＳｐｐ；ウイルス様粒子－ＶＬＰとも呼ばれる）を生成した。トランスフェクションの７２時間後に、ＭＥＲＳｐｐを含有する上清を回収し、遠心分離を用いて清澄化し、濃縮し、等分し、－８０℃において凍結した。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質を発現するプラスミド
をＶｅｓｉｃｕｌａｒ Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＶＳＶｇ）をコードするプラスミドで置き換えることにより、対照偽粒子を生成した。
材料および方法
偽粒子の生成
ＭＥＲＳスパイクタンパク質を発現するプラスミド構築物、ＨＩＶ ｇａｇ－ｐｏｌ、およびホタルルシフェラーゼをコードするＨＩＶプロウイルスベクターの混合物を２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクションすることにより、ＭＥＲＳ偽粒子（ＭＥＲＳｐｐ；ウイルス様粒子－ＶＬＰとも呼ばれる）を生成した。トランスフェクションの７２時間後に、ＭＥＲＳｐｐを含有する上清を回収し、遠心分離を用いて清澄化し、濃縮し、等分し、－８０℃において凍結した。ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質を発現するプラスミド
をＶｅｓｉｃｕｌａｒ Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＶＳＶｇ）をコードするプラスミドで置き換えることにより、対照偽粒子を生成した。
【0191】
ＭＥＲＳｐｐベースのアッセイ
抗体の希釈液をＭＥＲＳｐｐと１時間室温にてインキュベーションした。１％ＥＤＴＡを用いて、完全ＤＭＥＭ培地中のＨｕｈ７細胞を剥離し、洗浄し、抗体／ＭＥＲＳｐｐ混合物と７２時間インキュベーションした。ＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ、ＣＡ、米国）でのルシフェラーゼ検出により、感染有効性を定量し、Ｖｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｘ３プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）において光産生について読み取った。
抗体の希釈液をＭＥＲＳｐｐと１時間室温にてインキュベーションした。１％ＥＤＴＡを用いて、完全ＤＭＥＭ培地中のＨｕｈ７細胞を剥離し、洗浄し、抗体／ＭＥＲＳｐｐ混合物と７２時間インキュベーションした。ＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ、ＣＡ、米国）でのルシフェラーゼ検出により、感染有効性を定量し、Ｖｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｘ３プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）において光産生について読み取った。
【0192】
ウイルスベースのアッセイ
１ウェル当たり１×１０４ベロＥ６細胞を、実験の１日前に９６ウェルプレートに播種した。５００ ＴＣＩＤ５０のＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＥＭＣ／２０１２株を、通常のベロＥ６成長培地１００μｌ中の所定量の抗体と混合し、室温にて３０分間インキュベーションし、次に、混合物をベロＥ６細胞に加えた。感染の２日後において、製造元の指示に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、細胞死を評価した。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）にて、発光を読み取った。データを、偽感染対照のパーセントとして表した。
１ウェル当たり１×１０４ベロＥ６細胞を、実験の１日前に９６ウェルプレートに播種した。５００ ＴＣＩＤ５０のＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＥＭＣ／２０１２株を、通常のベロＥ６成長培地１００μｌ中の所定量の抗体と混合し、室温にて３０分間インキュベーションし、次に、混合物をベロＥ６細胞に加えた。感染の２日後において、製造元の指示に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、細胞死を評価した。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）にて、発光を読み取った。データを、偽感染対照のパーセントとして表した。
【0193】
結果
抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体によるＭＥＲＳ－ＣｏＶの中和
開始実験において、ＭＥＲＳ感染性の中和について、別個の独立したハイブリドーマからもたらされた抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を試験した。図１において示す通り、２２種のうち１２種の細胞の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓハイブリドーマ抗体は、ＭＥＲＳ感染性の９０％超を、６８．４ｐＭ～３．５８ｎＭの範囲にあるＩＣ５０で阻害するか、または中和した。
抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体によるＭＥＲＳ－ＣｏＶの中和
開始実験において、ＭＥＲＳ感染性の中和について、別個の独立したハイブリドーマからもたらされた抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体を試験した。図１において示す通り、２２種のうち１２種の細胞の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓハイブリドーマ抗体は、ＭＥＲＳ感染性の９０％超を、６８．４ｐＭ～３．５８ｎＭの範囲にあるＩＣ５０で阻害するか、または中和した。
【0194】
続く実験において、ＭＥＲＳｐｐおよび生ＭＥＲＳウイルスの中和について、精製した抗体を試験した（単離物：ＥＭＣ／２０１２）。結果を表６および７において示す。
【0195】
【表6】
【0196】
【表7】
【0197】
上記データは、本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶの感受性細胞への侵入を潜在的に遮断し、感染性を中和することを示唆する。
【0198】
抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体による臨床上の単離物の中和
ＲＮＡウイルスは、低フィデリティーゲノム複製機構をコードするため、それらの宿主環境に容易に適応することが可能となる（Ｍａｌｐｉｃａら２００２年；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６２：１５０５～１５１１頁）。しかしながら、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのようなコロナ
ウイルスは、３’－から－５’のエクソ－リボヌクレアーゼ活性を有する非構造タンパク質をコードし、これは、それらの複製中にプルーフリーディング機能をもたらし、変異性カタストロフを導くことなくゲノムのコード能力を非常に増大する（Ｃｏｔｔｏｎら２０１３年；Ｌａｎｃｅｔ ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（１３）６１８８７－５）。それにも関わらず、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ流行の最初の２年の間に試料採取した複数の臨床上の単離物の配列決定により、ウイルスのＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質が、進化することが明らかになった（Ｃｏｔｔｏｎら２０１４年；ＭＢｉｏ ５ ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．０１０６２－１３）。この研究のため、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ臨床上の単離物の３８種のＮＣＢＩ寄託配列を整列させ、第１の単離した株、ＥＭＣ／２０１２の配列と比較した。スクリーニングアッセイの設計に基づき、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質のＲＢＤ内に結合すると予測し、故に、配列の比較が、アミノ酸３６７～６０６に特異的に焦点を合わせた。配列決定した臨床上の単離物と原型ＥＭＣ／２０１２配列、Ａ４３１Ｐ、Ｓ４５７Ｇ、Ｓ４６０Ｆ、Ａ４８２Ｖ、Ｌ５０６Ｆ、Ｄ５０９ＧおよびＶ５３４Ａ間で異なる、７種の異なるアミノ酸を同定した（表８）。
ＲＮＡウイルスは、低フィデリティーゲノム複製機構をコードするため、それらの宿主環境に容易に適応することが可能となる（Ｍａｌｐｉｃａら２００２年；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６２：１５０５～１５１１頁）。しかしながら、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのようなコロナ
ウイルスは、３’－から－５’のエクソ－リボヌクレアーゼ活性を有する非構造タンパク質をコードし、これは、それらの複製中にプルーフリーディング機能をもたらし、変異性カタストロフを導くことなくゲノムのコード能力を非常に増大する（Ｃｏｔｔｏｎら２０１３年；Ｌａｎｃｅｔ ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（１３）６１８８７－５）。それにも関わらず、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ流行の最初の２年の間に試料採取した複数の臨床上の単離物の配列決定により、ウイルスのＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質が、進化することが明らかになった（Ｃｏｔｔｏｎら２０１４年；ＭＢｉｏ ５ ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．０１０６２－１３）。この研究のため、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ臨床上の単離物の３８種のＮＣＢＩ寄託配列を整列させ、第１の単離した株、ＥＭＣ／２０１２の配列と比較した。スクリーニングアッセイの設計に基づき、本発明の抗体は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質のＲＢＤ内に結合すると予測し、故に、配列の比較が、アミノ酸３６７～６０６に特異的に焦点を合わせた。配列決定した臨床上の単離物と原型ＥＭＣ／２０１２配列、Ａ４３１Ｐ、Ｓ４５７Ｇ、Ｓ４６０Ｆ、Ａ４８２Ｖ、Ｌ５０６Ｆ、Ｄ５０９ＧおよびＶ５３４Ａ間で異なる、７種の異なるアミノ酸を同定した（表８）。
【0199】
【表8】
【0200】
ＲＢＤ内の保存された領域に結合し、２０１４年７月のものとして配列決定した全てのＭＥＲＳ－ＣｏＶ臨床上の単離物を中和する抗体の能力を試験するために、部位特異的変異誘発を用いて、全てのＳタンパク質変異体をコードするプラスミド構築物を作製した。これらを用いて、修飾したＳタンパク質で偽型化したＭＥＲＳｐｐを生成し、中和アッセイを行った。上述の変異を有する生成したＭＥＲＳｐｐを用いて、ＭＥＲＳ感染性の中和について、精製した抗体（実施例１において記載した）を試験した。表９および１０は、ＭＥＲＳｐｐ変異体のパーセント中和を示す。
【0201】
【表9】
【0202】
【表10】
【0203】
これらのデータは、本発明の抗体が、ウイルスの自然進化中に保存されるＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質の領域に結合することを示唆する。
【0204】
本発明の抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体は、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗体を従前に単離したより有効な中和剤である
本発明の選択した抗体の力価を、従前に単離したモノクローナル抗体と比較した。３つの群を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体単離方法、すなわち、ファージディスプレイ（Ｔａｎｇら２０１４年、ＰＮＡＳ ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４０２０７４１１１；およびＹｉｎｇら２０１４年、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＶＩ．００９１２－１４）、ならびに酵母ディスプレイ（Ｊｉａｎｇら２０１４年、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ． ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８１４０）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質に結合し、ウイルス侵入を遮断する抗体を選択した。この研究のため、ＭＥＲＳ－ＣｏＶを中和し、多様なエピトープに結合することを報告した、公開した可変ドメイン配列を有する３種の抗体のパネルを選択した。抗体３Ｂ１２（Ｔａｎｇら２０１４年、ＰＮＡＳ ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４０２０７４１１１）、ＭＥＲＳ－４およびＭＥＲＳ－２７（Ｊｉａｎｇら２０１４年
、Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８１４０）についての配列を、ヒトＩｇＧ１定常ドメインにクローニングし、次に、選択した本発明の抗体と同様に発現させ、精製した。原型ＥＭＣ／２０１２配列、および上述の全ての臨床上の単離物で生成した偽粒子を用いて、全ての抗体の中和有効性を試験した。
本発明の選択した抗体の力価を、従前に単離したモノクローナル抗体と比較した。３つの群を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体単離方法、すなわち、ファージディスプレイ（Ｔａｎｇら２０１４年、ＰＮＡＳ ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４０２０７４１１１；およびＹｉｎｇら２０１４年、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＶＩ．００９１２－１４）、ならびに酵母ディスプレイ（Ｊｉａｎｇら２０１４年、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ． ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８１４０）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質に結合し、ウイルス侵入を遮断する抗体を選択した。この研究のため、ＭＥＲＳ－ＣｏＶを中和し、多様なエピトープに結合することを報告した、公開した可変ドメイン配列を有する３種の抗体のパネルを選択した。抗体３Ｂ１２（Ｔａｎｇら２０１４年、ＰＮＡＳ ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４０２０７４１１１）、ＭＥＲＳ－４およびＭＥＲＳ－２７（Ｊｉａｎｇら２０１４年
、Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８１４０）についての配列を、ヒトＩｇＧ１定常ドメインにクローニングし、次に、選択した本発明の抗体と同様に発現させ、精製した。原型ＥＭＣ／２０１２配列、および上述の全ての臨床上の単離物で生成した偽粒子を用いて、全ての抗体の中和有効性を試験した。
【0205】
ＭＥＲＳｐｐ変異体に対する選択した抗体の中和ＩＣ５０を、表１１に示す。表１１に示す通り、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐは、１．３Ｅ－１１Ｍ～６．５Ｅ－１１Ｍの範囲にあるＩＣ５０値で全ての単離物を中和することができた。抗体に対して部分的な抵抗性を示したＶ５３４Ａ変異体を除き、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎについて、類似の値も観察された。しかしながら、このアミノ酸変化が、２０１２年に単離され、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ系統樹の死部門である単一のＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物（Ｒｉｙａｄｈ＿２）においてのみ観察されたことは注目すべきである。
【0206】
Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ２７７Ｎは、最も強力なコンパレーター抗体、ＭＥＲＳ－４より少なくとも１ｌｏｇ小さいＩＣ５０値でＭＥＲＳｐｐを中和する。加えて、３Ｂ１２およびＭＥＲＳ－２７の両方は、複数の臨床上の単離物の配列を有する偽粒子をこれらの抗体で中和できないので、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質上のあまり保存されていない部位に結合するように思われる。
【0207】
【表11】
【0208】
これらのデータは、本発明の抗体が、より広い範囲のＭＥＲＳ－ＣｏＶ単離物を、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ生化学特性に専ら基づき単離したいくつかの抗体と比較して、改良された力価で中和することができることを示唆する。
ｖｉｔｒｏ生化学特性に専ら基づき単離したいくつかの抗体と比較して、改良された力価で中和することができることを示唆する。
【実施例6】
【0209】
抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓ抗体間のＯｃｔｅｔ交差競合
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ）上でのリアルタイム、ラベルフリーバイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイを用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓ抗体間の結合競合を決定した。２５℃にて、ＨＢＳ－Ｐ Ｏｃｔｅｔバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および０．０５％ｖ／ｖ 界面活性剤Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳ
Ａ）中、速度１０００ｒｐｍでプレート振盪しながら、全実験を行った。抗体が、ヒトＦｃタグに融合した組換え発現させたＭＥＲＳスパイクタンパク質受容体結合ドメイン（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）上のそれらのそれぞれのエピトープへの結合について互いに競合することができるかどうかを評価するために、プレミックスアッセイフォーマットを採用し、５０ｎＭ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＲＢＤ－ｍＦｃを５００ｎＭ 異なる抗ＭＥＲＳモノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ－２として言及する）と少なくとも２時間プレインキュベーション後、結合競合アッセイを行った。非特異的なモノクローナル抗体を、アイソタイプ対照としてＭＥＲＳ－ＲＢＳ．ｍＦｃとインキュベーションした。抗ｈＦｃポリクローナル抗体（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、カタログ番号１８－５０６０）でコートしたＯｃｔｅｔバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェルに４分間まず浸し、およそ２ｎｍ 抗ＭＥＲＳ抗体（以後、ｍＡｂ－１と呼ぶ）を捕捉した。捕捉工程後、次に、Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを１００μｇ／ｍＬ非特異的完全ヒトモノクローナル抗体を含有するウェルに浸すことにより、未結合の抗ｈＦｃポリクローナル抗体を飽和させた。最後に、バイオセンサーを、５０ｎＭ ＭＥＲＳ－ＲＢＤ－ｍＦｃおよび５００ｎＭ ｍＡｂ－２のプレミックス試料を含有するウェルに４分間浸漬した。実験の全工程間で、バイオセンサーをＨＢＳ－Ｐ Ｏｃｔｅｔバッファーにおいて洗浄した。実験の経過中、リアルタイム結合応答をモニターし、結合応答を、全工程の終わりに測定した。ＭＥＲＳ－ＲＢＤ－ｍＦｃおよびｍＡｂ－２のプレコンプレックスへのｍＡｂ－１結合の応答を比較し、異なる抗体ＭＥＲＳモノクローナル抗体の競合的／非競合的挙動を決定した。
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ）上でのリアルタイム、ラベルフリーバイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイを用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓ抗体間の結合競合を決定した。２５℃にて、ＨＢＳ－Ｐ Ｏｃｔｅｔバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および０．０５％ｖ／ｖ 界面活性剤Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳ
Ａ）中、速度１０００ｒｐｍでプレート振盪しながら、全実験を行った。抗体が、ヒトＦｃタグに融合した組換え発現させたＭＥＲＳスパイクタンパク質受容体結合ドメイン（ＭＥＲＳ ＲＢＤ－ｈＦｃ；配列番号４５８）上のそれらのそれぞれのエピトープへの結合について互いに競合することができるかどうかを評価するために、プレミックスアッセイフォーマットを採用し、５０ｎＭ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－ＲＢＤ－ｍＦｃを５００ｎＭ 異なる抗ＭＥＲＳモノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ－２として言及する）と少なくとも２時間プレインキュベーション後、結合競合アッセイを行った。非特異的なモノクローナル抗体を、アイソタイプ対照としてＭＥＲＳ－ＲＢＳ．ｍＦｃとインキュベーションした。抗ｈＦｃポリクローナル抗体（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、カタログ番号１８－５０６０）でコートしたＯｃｔｅｔバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェルに４分間まず浸し、およそ２ｎｍ 抗ＭＥＲＳ抗体（以後、ｍＡｂ－１と呼ぶ）を捕捉した。捕捉工程後、次に、Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを１００μｇ／ｍＬ非特異的完全ヒトモノクローナル抗体を含有するウェルに浸すことにより、未結合の抗ｈＦｃポリクローナル抗体を飽和させた。最後に、バイオセンサーを、５０ｎＭ ＭＥＲＳ－ＲＢＤ－ｍＦｃおよび５００ｎＭ ｍＡｂ－２のプレミックス試料を含有するウェルに４分間浸漬した。実験の全工程間で、バイオセンサーをＨＢＳ－Ｐ Ｏｃｔｅｔバッファーにおいて洗浄した。実験の経過中、リアルタイム結合応答をモニターし、結合応答を、全工程の終わりに測定した。ＭＥＲＳ－ＲＢＤ－ｍＦｃおよびｍＡｂ－２のプレコンプレックスへのｍＡｂ－１結合の応答を比較し、異なる抗体ＭＥＲＳモノクローナル抗体の競合的／非競合的挙動を決定した。
【0210】
この実施例において用いた実験条件下で、例えば、（ａ）Ｈ２ａＭ１５２８１Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２９０Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２９３Ｎ、およびＨ２ｂＭ１５２９１Ｎ；（ｂ）Ｈ２ａＭ１５２７２Ｎ、Ｈ２ｂＭ１５２９２Ｎ、およびＨ２ａＭ１５２７１Ｎ；ならびに（ｃ）Ｈ２ａＭ１５２６８Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２６７Ｎ、Ｈ２Ｍ１５２７９Ｎ、Ｈ１Ｍ１５２８９Ｎ、およびＨ１Ｍ１５２７７Ｎについて、交差競合（すなわち、両配向における抗体間の競合）が観察された（図２）。
【0211】
別の実験において、抗原陽性マウスＢ細胞（実施例１において記載した）から直接単離した、選択した抗体間での結合競合を決定した。この実施例において用いた実験条件下で、例えば、（ａ）Ｈ１Ｈ１５２１５Ｐ、Ｈ１Ｈ１５１７７Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２０３Ｐ、およびＨ１Ｈ１５２１１Ｐ；（ｂ）Ｈ１Ｈ１５１８８Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２０８Ｐ、Ｈ１Ｈ１５２２８Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２３３Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２３７Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２５３Ｐ２、およびＨ１Ｈ１５２５９Ｐ２；ならびに（ｃ） Ｈ１Ｈ１５２３１Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２４９Ｐ２、Ｈ１Ｈ１５２６０Ｐ２、およびＨ１Ｈ１５２６４Ｐ２について、交差競合（すなわち、両配向における抗体間の競合）が観察された（図３）。
【0212】
別の実験において、２つの抗体Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎ間の結合競合をモニターした。
【0213】
【表12】
【0214】
表１２は、２つの抗体が互いに阻害しないこと、および１つの抗体のＭＥＲＳ－ＣｏＶ
ＲＢＤへの結合が、第２の抗体の結合を依然可能にすることを示す。これらのデータは、２つの抗体が、別々のオーバーラップしないエピトープに結合することを示唆する。１つの抗体による選択圧の結果としての１つのエピトープに変異が生じても、他方の結合には影響しないはずである。
ＲＢＤへの結合が、第２の抗体の結合を依然可能にすることを示す。これらのデータは、２つの抗体が、別々のオーバーラップしないエピトープに結合することを示唆する。１つの抗体による選択圧の結果としての１つのエピトープに変異が生じても、他方の結合には影響しないはずである。
【実施例7】
【0215】
抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体のＩｎ ｖｉｖｏ有効性
材料および方法
ヒトＤＰＰ４ノックインマウスの作製
ＭＥＲＳスパイクタンパク質は、マウスＤＰＰ４と相互作用しないので、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）テクノロジー（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら２００３年、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：６５２～６５９頁）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症のヒト化モデルを作製した。簡単に言うと、７９ｋｂマウスＤｐｐ４対応物配列を置き換えるための３’ＵＴＲを含むエクソン２～２６由来の８２ｋｂヒトＤＰＰ４ゲノムＤＮＡを含有する、巨大な標的ベクター（ＬＴＶＥＣ）を構築した。Ｂｌａｓｔを用いて、Ｄｐｐ４遺伝子を含有するヒトＢＡＣ ＲＰ１１－６８Ｌ２２およびマウスＢＡＣ ＲＰ２３－３６２Ｎ１５を同定し、イルミナベンチトップシーケンサーＭｉＳｅｑを用いて、配列を確認した。ＬＴＶＥＣを、Ｆ１ハイブリッド（１２９Ｓ６ＳｖＥｖＴａｃ／Ｃ５７ＢＬ６ＮＴａｃ）ＥＳ細胞にエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの１０日後に、Ｇ４１８耐性コロニーを拾い、アレルの消失アッセイにより、正しいターゲッティングについてスクリーニングした。ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）方法を用い（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕら２００７年；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５：９１～９９頁）、ここで、ターゲッティングされたＥＳ細胞を、非緻密８細胞期Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ胚に注入し、ヒトＤＰＰ４遺伝子アレルを有するＥＳ細胞からもたらされたＦ０世代のマウスを作製した。ＮＩＨのＣａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓにおける推奨に厳密に従い、全ての動物の手法を行った。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）により、プロトコールは承認された。この方法は、２０１４年９月１７日付けで出願された米国特許出願第６２／０５１，６２６号において詳細に記載され、全体として本明細書に組み入れられる。遺伝子導入マウスは、マウスゲノムにおけるｈＤＰＰ４遺伝子の無作為挿入によっても作製した。
材料および方法
ヒトＤＰＰ４ノックインマウスの作製
ＭＥＲＳスパイクタンパク質は、マウスＤＰＰ４と相互作用しないので、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）テクノロジー（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら２００３年、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：６５２～６５９頁）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症のヒト化モデルを作製した。簡単に言うと、７９ｋｂマウスＤｐｐ４対応物配列を置き換えるための３’ＵＴＲを含むエクソン２～２６由来の８２ｋｂヒトＤＰＰ４ゲノムＤＮＡを含有する、巨大な標的ベクター（ＬＴＶＥＣ）を構築した。Ｂｌａｓｔを用いて、Ｄｐｐ４遺伝子を含有するヒトＢＡＣ ＲＰ１１－６８Ｌ２２およびマウスＢＡＣ ＲＰ２３－３６２Ｎ１５を同定し、イルミナベンチトップシーケンサーＭｉＳｅｑを用いて、配列を確認した。ＬＴＶＥＣを、Ｆ１ハイブリッド（１２９Ｓ６ＳｖＥｖＴａｃ／Ｃ５７ＢＬ６ＮＴａｃ）ＥＳ細胞にエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの１０日後に、Ｇ４１８耐性コロニーを拾い、アレルの消失アッセイにより、正しいターゲッティングについてスクリーニングした。ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）方法を用い（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕら２００７年；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５：９１～９９頁）、ここで、ターゲッティングされたＥＳ細胞を、非緻密８細胞期Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ胚に注入し、ヒトＤＰＰ４遺伝子アレルを有するＥＳ細胞からもたらされたＦ０世代のマウスを作製した。ＮＩＨのＣａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓにおける推奨に厳密に従い、全ての動物の手法を行った。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）により、プロトコールは承認された。この方法は、２０１４年９月１７日付けで出願された米国特許出願第６２／０５１，６２６号において詳細に記載され、全体として本明細書に組み入れられる。遺伝子導入マウスは、マウスゲノムにおけるｈＤＰＰ４遺伝子の無作為挿入によっても作製した。
【0216】
動物実験
実験に依存して、感染の１日前または感染の１日後に、指定量の抗体または対照として無菌食塩水を、６～８週齢のヒト化ＤＰＰ４マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。鼻腔
内接種に先立ち、キシラジン（０．３８ｍｇ／マウス；Ｌｌｏｙｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およびケタミン（１．３ｍｇ／マウス；Ｈｅｎｒｙ Ｓｃｈｅｉｎ ａｎｉｍａｌ ｈｅａｌｔｈ）の混合物を用い、腹腔内注射によりマウスを麻酔し、ＰＢＳ中に希釈して、マウス１匹当たり総量５０μｌを作製した。麻酔したら、総接種量５０μｌについてＰＢＳまたはＰＢＳに希釈した２×１０５ｐｆｕ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ）のいずれかをマウスに鼻腔内接種した。実験中、感染前および実験の毎日、マウスの体重を測定し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶにより誘導される体重減少を評価した。致死用量のイソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｐｐｌｙ）を用いて、感染の２または４日後において、マウスを安楽死させた。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製物のさらなる分析および病理のため、肺を回収した。
実験に依存して、感染の１日前または感染の１日後に、指定量の抗体または対照として無菌食塩水を、６～８週齢のヒト化ＤＰＰ４マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。鼻腔
内接種に先立ち、キシラジン（０．３８ｍｇ／マウス；Ｌｌｏｙｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およびケタミン（１．３ｍｇ／マウス；Ｈｅｎｒｙ Ｓｃｈｅｉｎ ａｎｉｍａｌ ｈｅａｌｔｈ）の混合物を用い、腹腔内注射によりマウスを麻酔し、ＰＢＳ中に希釈して、マウス１匹当たり総量５０μｌを作製した。麻酔したら、総接種量５０μｌについてＰＢＳまたはＰＢＳに希釈した２×１０５ｐｆｕ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ）のいずれかをマウスに鼻腔内接種した。実験中、感染前および実験の毎日、マウスの体重を測定し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶにより誘導される体重減少を評価した。致死用量のイソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｐｐｌｙ）を用いて、感染の２または４日後において、マウスを安楽死させた。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製物のさらなる分析および病理のため、肺を回収した。
【0217】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡ分析
製造元の指示に従い、Ｍａｇｎａｌｙｚｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて、Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ）１ｍｌにおけるホモジネートにより、マウスの肺からＲＮＡを抽出した。エンベロープ遺伝子（ＵｐＥ）のゲノム上流の領域；ヌクレオカプシドメッセンジャーＲＮＡのリーダー配列（リーダープライマー）を標的とするＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た２本鎖のプライマーを用いて、製造元の指示に従い、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ ｖｉｒｕｓ ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡのレベルを評価し、マウス１８Ｓ ｒＲＮＡ（内在性対照）と比較した。Ｍｉｃｒｏａｍｐ（登録商標）ｆａｓｔ ｏｐｔｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）におけるｑＰＣＲ反応物を、７５００ ｆａｓｔ ＤＸ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で読み取り、未感染の対照を１に設定した、デルタＣｔ方法を用いて、データを分析した。アイソタイプ一致対照抗体で処置した感染マウスにおいて検出したＲＮＡのレベルに対する、検出したパーセントＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡを表した。
製造元の指示に従い、Ｍａｇｎａｌｙｚｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて、Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ）１ｍｌにおけるホモジネートにより、マウスの肺からＲＮＡを抽出した。エンベロープ遺伝子（ＵｐＥ）のゲノム上流の領域；ヌクレオカプシドメッセンジャーＲＮＡのリーダー配列（リーダープライマー）を標的とするＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た２本鎖のプライマーを用いて、製造元の指示に従い、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ ｖｉｒｕｓ ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡのレベルを評価し、マウス１８Ｓ ｒＲＮＡ（内在性対照）と比較した。Ｍｉｃｒｏａｍｐ（登録商標）ｆａｓｔ ｏｐｔｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）におけるｑＰＣＲ反応物を、７５００ ｆａｓｔ ＤＸ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で読み取り、未感染の対照を１に設定した、デルタＣｔ方法を用いて、データを分析した。アイソタイプ一致対照抗体で処置した感染マウスにおいて検出したＲＮＡのレベルに対する、検出したパーセントＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡを表した。
【0218】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶタイターについてのプラークアッセイ
Ｍａｇｎａｌｙｚｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて、ＰＢＳ１ｍｌ中、ガラスビーズで６０秒間６０００ｒｐｍにて、マウス肺をホモジネートした。次に、１０分間、１０，０００ｒｐｍにてホモジネートを遠心分離し、ベロＥ６細胞上でのプラークアッセイにより、上清を分析して、処置後に残存するウイルスのレベルを定量した。プラークを出現させるため、３日間プレートをそのままにしたことを除き、従前に記載された通り、プラークアッセイを行った。
Ｍａｇｎａｌｙｚｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて、ＰＢＳ１ｍｌ中、ガラスビーズで６０秒間６０００ｒｐｍにて、マウス肺をホモジネートした。次に、１０分間、１０，０００ｒｐｍにてホモジネートを遠心分離し、ベロＥ６細胞上でのプラークアッセイにより、上清を分析して、処置後に残存するウイルスのレベルを定量した。プラークを出現させるため、３日間プレートをそのままにしたことを除き、従前に記載された通り、プラークアッセイを行った。
【0219】
組織学的分析
固定し、パラフィン包埋した組織の５μｍの切片から、組織学スライドを調製し、ヘマトキシリンおよびエオジンで染色した。光顕微鏡により視野を調べ、分析した。間質性、細気管支周囲および血管周囲の炎症の程度を、０～５にスコア化した。それぞれの実験群について、スライドを盲検化し、０～５にスコア化し、表にして、株、時間ポイント、および処置を比較した。細気管支上皮および肺胞損傷の存在、胸膜の変化、ならびに気管支血管周囲の炎症の程度のような他の組織学的特性も、テキストにおけるそれぞれの群について述べた。それぞれのマウスについての全体的な炎症スコアを、それぞれの群について平均化し、それぞれの群および時間ポイントにおける全てのマウスの平均スコアとして提示した。
固定し、パラフィン包埋した組織の５μｍの切片から、組織学スライドを調製し、ヘマトキシリンおよびエオジンで染色した。光顕微鏡により視野を調べ、分析した。間質性、細気管支周囲および血管周囲の炎症の程度を、０～５にスコア化した。それぞれの実験群について、スライドを盲検化し、０～５にスコア化し、表にして、株、時間ポイント、および処置を比較した。細気管支上皮および肺胞損傷の存在、胸膜の変化、ならびに気管支血管周囲の炎症の程度のような他の組織学的特性も、テキストにおけるそれぞれの群について述べた。それぞれのマウスについての全体的な炎症スコアを、それぞれの群について平均化し、それぞれの群および時間ポイントにおける全てのマウスの平均スコアとして提示した。
【0220】
結果
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性である、ＤＰＰ４についてのヒト化マウス
抗ウイルス分子のＩｎ ｖｉｖｏ試験は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性である、小
動物モデルを必要とする。マウスはＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性でない。マウスおよびヒトＤＰＰ４の配列の配列比較は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質とその受容体の間の接触部位として従前に同定したアミノ酸が、２つの種の間で異なることを明らかにした。加えて、マウス細胞におけるヒトＤＰＰ４の発現は、ＭＥＲＳｐｐ侵入およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ伝播を可能にするが、これは、ウイルスの侵入が、マウス細胞の感染における律速段階であることを示しており、マウスＤＰＰ４およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ糖タンパク質間での相互作用の欠如が、種についてのトロピズムをｉｎ ｖｉｔｒｏで定義する。
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性である、ＤＰＰ４についてのヒト化マウス
抗ウイルス分子のＩｎ ｖｉｖｏ試験は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性である、小
動物モデルを必要とする。マウスはＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症に感受性でない。マウスおよびヒトＤＰＰ４の配列の配列比較は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質とその受容体の間の接触部位として従前に同定したアミノ酸が、２つの種の間で異なることを明らかにした。加えて、マウス細胞におけるヒトＤＰＰ４の発現は、ＭＥＲＳｐｐ侵入およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ伝播を可能にするが、これは、ウイルスの侵入が、マウス細胞の感染における律速段階であることを示しており、マウスＤＰＰ４およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ糖タンパク質間での相互作用の欠如が、種についてのトロピズムをｉｎ ｖｉｔｒｏで定義する。
【0221】
本発明者らは、マウスＤＰＰ４の代わりにヒトＤＰＰ４を発現するマウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶに感受性であり、抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ試験を可能にすると仮定した。ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）テクノロジーを利用して、マウスＤｐｐ４遺伝子７９ｋｂをそのヒトオルソログ８２ｋｂで置き換えた。得られたマウスは、マウス調節エレメントの制御下で完全ヒトＤＰＰ４を発現し、正しい発現調節およびタンパク質組織分布を保つ。
【0222】
１回の開始実験において、ヒト化マウスおよび遺伝子導入マウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症を支持するかを試験するために、－１日目において抗ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ抗体またはアイソタイプ対照２００μｇで、遺伝子導入マウスを腹腔内処置し、０日目においてＭＥＲＳ－ＣｏＶ（～１０６ｐｆｕ ＥＭＣ２０１２）を鼻腔内感染させた。感染の４日後に、肺を回収し、ウイルスのＲＮＡレベルをＲＴ－ＰＣＲにより測定し、抗体のウイルス負荷に対する効果を調べた。表１３は、ウイルスのゲノムＲＮＡの平均レベルおよび発現した複製ＲＮＡをアイソタイプ対照のパーセンテージとして示す。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐでの処置は、感染したマウスにおいてウイルスＲＮＡの約５００倍の低減をもたらした。
【0223】
【表13】
【0224】
別の実験において、６～８週齢のヒト化ＤＰＰ４（ｈｕＤＰＰ４）マウスに、ＭＥＲＳ－ＣｏＶを鼻腔内接種した。疾患の死亡率または臨床兆候は４日目まで観察されなかったが、接種の２および４日後において、マウスを安楽死させ、それらの肺を解剖した。ウイルスＲＮＡレベルを得るために、Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）において肺をホモジネートし、ＭＥＲＳ－ＣｏＶに特異的なプライマーを用いてリアルタイムＰＣＲにより分析した（図４および５）。ウイルスタイターを得るために、ＰＢＳにおいて肺をホモジネートし、遠心分離により清澄化し、ベロＥ６細胞においてタイター決定した（図６）。肺における頑強なＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製は、感染の２および４日後において明らかであった。複製ＭＥＲＳ－ＣｏＶのみを増幅するために設計した、ＭＥＲＳ－ＣｏＶリーダーに特異的なプライマーセットを用いてＲＮＡを定量したところ、２日目に集めた肺における高レベルのＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製ＲＮＡが示され、これらのレベルは感染の４日後まで維持された（図５）。ベロＥ６細胞における肺ホモジネートのプラークアッセイによって、感染の２日後において～７．２７×１０４ｐｆｕ／肺１ｇ、および４日後において～３．７５ｘ１０５ｐｆｕ／肺１ｇのＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ）レベルが定量され（図６）、これは、ｈｕＤＰＰ４マウスの肺においてＭＥＲＳ－ＣｏＶが活発に複製していることを示している。これらのデータは、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）テクノロジーを用いた受
容体ＤＰＰ４のヒト化によって、ｉｎ ｖｉｖｏでのＭＥＲＳ－ＣｏＶ処置を評価するために用いることができる、ＭＥＲＳ－ＣｏＶの頑強なモデルがマウスにおいて作製されたことを示唆する。
容体ＤＰＰ４のヒト化によって、ｉｎ ｖｉｖｏでのＭＥＲＳ－ＣｏＶ処置を評価するために用いることができる、ＭＥＲＳ－ＣｏＶの頑強なモデルがマウスにおいて作製されたことを示唆する。
【0225】
ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ株）またはＰＢＳ（偽感染）のいずれかを鼻腔内接種したｈｕＤＰＰ４マウス由来の肺を、病理変化について分析した。感染の２日後において、細気管支周囲の炎症は、肺中で見出される細気管支細胞構造の変化から明らかであった。最小の血管周囲の炎症または肺胞構造に対する効果が、この時間ポイントにおいて認められた。感染の４日後において、血管周囲への細胞浸潤および広範な肺胞肥厚で、かなりの間質性浸潤を観察した。細気管支変化は、同様に依然存在した。重要なことに、この病理は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶを有するヒトにおいて観察した間質性肺炎およびかなりの肺疾患の発症のＸ線検査の知見と一致し、これは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症のこのヒト化ＤＰＰ４ｉｎ ｖｉｖｏモデルが、ヒトのＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症において見られる病理的続発症を繰り返すことを示唆する。
【0226】
さらなる実験（以下を参照）において、感染したマウスに、１回またはそれ以上の用量の精製した抗体（実施例１において記載した通り）または抗体の併用を予防的および／または治療的に投与して、ＭＥＲＳ感染症に対するそれらの有効性を試験した。
【0227】
Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎは、ヒト化ＤＰＰ４マウスをＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症から保護する
ヒト化ＤＰＰ４マウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶに感受性であったことを確認し、このモデルを用いて、２つのモノクローナル抗体の活性をｉｎ ｖｉｖｏで評価した。１×１０５ｐｆｕ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ株）での鼻腔内感染の２４時間前に、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎのいずれか２００μｇ、２０μｇもしくは２μｇ、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体２００μｇをマウスにｉ．ｐ．注射した。図７および８において示す通り、抗体の両方が、アイソタイプ対照抗体と比較して、１回のマウス用量当たり２００μｇにて２ｌｏｇを越えて、肺におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ特異的ＲＮＡレベルを有意に低減することができた。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐは用量２０μｇにおいて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡレベルを低減する上で、同一用量におけるＨ１Ｈ１５２７７Ｎと比較してより有効であった。いずれの抗体も投薬量２μｇは、ウイルスＲＮＡレベルを低減する上で、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較して無効であった。ＭＥＲＳ－ＣｏＶタイターを肺において分析したら（図９）、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐの用量２００μｇおよび２０μｇの両方が、ウイルスレベルを低減して、アッセイにおける検出のレベルまで近づける（２×１０３ｐｆｕ／ｍｌ）ことが見出された。Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎは、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐと、用量２００μｇにおいて同等に効率的であり、一方、２０μｇおよび２μｇは、ウイルスの阻害の用量依存的阻害を示す。これらのデータは、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症をｉｎ ｖｉｖｏで有効に遮断することを示唆する。
ヒト化ＤＰＰ４マウスが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶに感受性であったことを確認し、このモデルを用いて、２つのモノクローナル抗体の活性をｉｎ ｖｉｖｏで評価した。１×１０５ｐｆｕ ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（Ｊｏｒｄａｎ株）での鼻腔内感染の２４時間前に、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰもしくはＨ１Ｈ１５２７７Ｎのいずれか２００μｇ、２０μｇもしくは２μｇ、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体２００μｇをマウスにｉ．ｐ．注射した。図７および８において示す通り、抗体の両方が、アイソタイプ対照抗体と比較して、１回のマウス用量当たり２００μｇにて２ｌｏｇを越えて、肺におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ特異的ＲＮＡレベルを有意に低減することができた。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐは用量２０μｇにおいて、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡレベルを低減する上で、同一用量におけるＨ１Ｈ１５２７７Ｎと比較してより有効であった。いずれの抗体も投薬量２μｇは、ウイルスＲＮＡレベルを低減する上で、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較して無効であった。ＭＥＲＳ－ＣｏＶタイターを肺において分析したら（図９）、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐの用量２００μｇおよび２０μｇの両方が、ウイルスレベルを低減して、アッセイにおける検出のレベルまで近づける（２×１０３ｐｆｕ／ｍｌ）ことが見出された。Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎは、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐと、用量２００μｇにおいて同等に効率的であり、一方、２０μｇおよび２μｇは、ウイルスの阻害の用量依存的阻害を示す。これらのデータは、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症をｉｎ ｖｉｖｏで有効に遮断することを示唆する。
【0228】
感染の４日後において、Ｈ１Ｈ１５２７７Ｎ、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で感染の２４時前に処置したマウス由来の肺において、組織学的分析も行った。ｈＩｇＧアイソタイプ対照抗体で予め処置したマウス由来の肺は、増大した間質性炎症、血管周囲への細胞浸潤、および肺胞中隔の肥厚を伴うかなりの肺病理を示した。Ｈ１Ｈ１５２７７ＮまたはＨ１Ｈ１５２１１Ｐのいずれか２００μｇで処置したマウスでは、間質における炎症細胞の最小病巣およびわずかな細気管支への細胞浸潤を伴った炎症が低減されていた。Ｈ１Ｈ１５２７７ＮおよびＨ１Ｈ１５２１１Ｐ２０μｇで予め処置したマウスでは、より高容量の抗体群と比較して中程度のレベルの血管周囲への細胞浸潤ならびに間質性炎症が見出された。対照的に、抗体２μｇで予め処置した群は、かなりの間質性炎症および主な血管周囲の炎症を示すｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と類似の病理
を有していた。盲検組織学的スコア化（図１０）は、処置したマウスについて低減した炎症スコアを反映する。これらの知見は、Ｈ１Ｈ１５２７７ＮおよびＲＥＧＮ ３０５１が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染後の肺病理の用量依存的低減をもたらすことを示し、これは、これらのマウスについて決定されたウイルスＲＮＡレベルおよびウイルスタイターを裏付ける。
を有していた。盲検組織学的スコア化（図１０）は、処置したマウスについて低減した炎症スコアを反映する。これらの知見は、Ｈ１Ｈ１５２７７ＮおよびＲＥＧＮ ３０５１が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染後の肺病理の用量依存的低減をもたらすことを示し、これは、これらのマウスについて決定されたウイルスＲＮＡレベルおよびウイルスタイターを裏付ける。
【0229】
まとめると、これらのデータは、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎが、感染の１日前に注射したとき、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症および疾患をｉｎ ｖｉｖｏで遮断することを示す。本発明者らが知る限り、Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染症のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて有効性を示すことが示された最初の完全ヒト抗体である。
【0230】
Ｈ１Ｈ１５２１１ＰおよびＨ１Ｈ１５２７７Ｎは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶが感染したヒト化ＤＰＰ４マウスを処置する
感染後にＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製および肺病理を阻害する能力が、可能性のある治療剤における所望の形質である。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐが，効果を治療上有するかどうかを評価するために、ｈｕＤＰＰ４マウスをＭＥＲＳ－ＣｏＶで感染させ、次に２４時間後に、ｈＩｇＧアイソタイプ対照５００μｇ、またはＨ１Ｈ１５２１１Ｐ５００μｇもしくは２００μｇをｉ．ｐ．注射した。感染の４日後に、マウスを安楽死させ、ウイルスＲＮＡ、ウイルスタイター、および肺病理について、マウスの肺を分析した。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐの用量５００μｇおよび２００μｇの両方がマウスの肺においてウイルスＲＮＡレベルを、対照抗体で処置したマウスと比較して約１０倍低減することができた（図１１および１２）。同一マウスの肺タイターは肺におけるウイルスレベルの有意な低減を示し、感染の４日後において２ｌｏｇ超低減していた（図１３）。これらのデータは、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐが、ウイルス接種の２４時間後に投与したときでさえ、ウイルス複製を優位に阻害することを示す。
感染後にＭＥＲＳ－ＣｏＶ複製および肺病理を阻害する能力が、可能性のある治療剤における所望の形質である。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐが，効果を治療上有するかどうかを評価するために、ｈｕＤＰＰ４マウスをＭＥＲＳ－ＣｏＶで感染させ、次に２４時間後に、ｈＩｇＧアイソタイプ対照５００μｇ、またはＨ１Ｈ１５２１１Ｐ５００μｇもしくは２００μｇをｉ．ｐ．注射した。感染の４日後に、マウスを安楽死させ、ウイルスＲＮＡ、ウイルスタイター、および肺病理について、マウスの肺を分析した。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐの用量５００μｇおよび２００μｇの両方がマウスの肺においてウイルスＲＮＡレベルを、対照抗体で処置したマウスと比較して約１０倍低減することができた（図１１および１２）。同一マウスの肺タイターは肺におけるウイルスレベルの有意な低減を示し、感染の４日後において２ｌｏｇ超低減していた（図１３）。これらのデータは、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐが、ウイルス接種の２４時間後に投与したときでさえ、ウイルス複製を優位に阻害することを示す。
【0231】
感染の２４時間後にｈＩｇＧ対照抗体、Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ５００μｇまたは２００μｇで処置したマウスにおいて、組織学的分析を行った。対照抗体で処置したマウスは、かなりの間質性炎症、血管周囲への細胞浸潤、および肺胞中隔の肥厚を伴った、上記対照に類似の病理を示した。Ｈ１Ｈ１５２１１Ｐ２００μｇまたは５００μｇのいずれかで処置したマウスは、肺中において、間質性炎症は最小限であり、血管周囲の炎症は低減された、限局的なものに過ぎなかった。盲検組織学的スコア化は、処置したマウスについて低減した炎症スコアを示す（図１４）。これらのデータは、治療用量のＨ１Ｈ１５２１１Ｐが、感染の２４時間後に投与したときでさえ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶにより誘導される肺病理を低減することを示す。
【0232】
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態により、範囲において制限されるべきではない。実際、本明細書に記載されるものに加え本発明の種々の修飾は、前述の記載および添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。かかる修飾は、添付の請求の範囲内にあることが意図される。
本明細書に記載された配列番号のアミノ酸配列および核酸配列は、以下の配列表に示すとおりである。
SEQUENCE LISTING
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> Human Antibodies to Middle East
Respiratory Syndrome - Coronavirus Spike Protein
<130> SP-6651
<140> PCT/US2015/031800
<141> 2015-05-20
<150> 62/002,233
<151> 2014-05-23
<150> 62/004,971
<151> 2014-05-30
<150> 62/051,717
<151> 2014-09-17
<150> 62/072,716
<151> 2014-10-30
<160> 458
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 1
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgttcag cctctggatt cacctttagc agctatgaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attcgtggta gtggtcatac cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240
ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attattgtgt gaaagatggg 300
agtatcgtag ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly His Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Gly Ser Ile Val Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 3
ggattcacct ttagcagcta tgac 24
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1 5
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 5
attcgtggta gtggtcatac caca 24
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 6
Ile Arg Gly Ser Gly His Thr Thr
1 5
<210> 7
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 7
gtgaaagatg ggagtatcgt agggttcgac ccc 33
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 8
Val Lys Asp Gly Ser Ile Val Gly Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 9
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 9
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gactattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 11
cagactatta gtagctgg 18
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 12
Gln Thr Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 13
aaggcgtct 9
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 14
Lys Ala Ser
1
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 15
caacagtata atagttattc gtacact 27
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 16
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr Thr
1 5
<210> 17
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 17
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg ctccttcagc gtctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccaa tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccaggacag attcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gagagagggg 300
gatattgtag tactaccagc tggtaagggg ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 18
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Ser Val Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Phe Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Asp Ile Val Val Leu Pro Ala Gly Lys Gly Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 19
ggaggctcct tcagcgtcta tgct 24
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 20
Gly Gly Ser Phe Ser Val Tyr Ala
1 5
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 21
atcatcccaa tctttggtac agca 24
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 22
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 23
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 23
gcgagagagg gggatattgt agtactacca gctggtaagg ggggtatgga cgtc 54
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 24
Ala Arg Glu Gly Asp Ile Val Val Leu Pro Ala Gly Lys Gly Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 25
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 25
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catggtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttggtttc tcatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaagtcct 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336
<210> 26
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser His Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 27
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 27
cagagcctcc tgcatggtaa tggatacaac tat 33
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 28
Gln Ser Leu Leu His Gly Asn Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 29
ttggtttct 9
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 30
Leu Val Ser
1
<210> 31
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 31
atgcaagctc tacaaagtcc ttggacg 27
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 32
Met Gln Ala Leu Gln Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 33
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 33
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc cgggggggtc cctgagagtc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgaca tgtactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta ttggtgctac cacatattac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccata tccagagaca attccaagaa cacggtgttt 240
ctgcaaatga atagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgt gaaaggggga 300
cctatagtgg ctacggatta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 34
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Gly Ile Gly Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Gly Pro Ile Val Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 35
ggattcacct ttagcaacta tgac 24
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 36
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
<210> 37
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 37
attagtggta ttggtgctac caca 24
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 38
Ile Ser Gly Ile Gly Ala Thr Thr
1 5
<210> 39
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 39
gtgaaagggg gacctatagt ggctacggat tac 33
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 40
Val Lys Gly Gly Pro Ile Val Ala Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 41
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggcatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 43
cagagtatta gtagctgg 18
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 44
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 45
aaggcgtct 9
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 46
Lys Ala Ser
1
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 47
caacagtata atagttattc gtggacg 27
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 48
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 49
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 49
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggagggtc cctaagactc 60
tcctgtacag cctctggatt caccttcagt aattatgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagagaagg ggctggactg ggtttcattc attagtagta gtggtggtgc catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac tcggctattt atttctgtgc gcgatccgac 300
tccggtggta actcgaggta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 50
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Ser Gly Gly Asn Ser Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 51
ggattcacct tcagtaatta tgaa 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Glu
1 5
<210> 53
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 53
attagtagta gtggtggtgc cata 24
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 54
Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
1 5
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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gcgcgatccg actccggtgg taactcgagg tac 33
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 56
Ala Arg Ser Asp Ser Gly Gly Asn Ser Arg Tyr
1 5 10
<210> 57
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 57
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
gtcacttgtc gggcgagtca ggatattagc aactggttag tctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240
gaagattttg cgacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcctac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<223> synthetic
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Gln Asp Ile Ser Asn Trp
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Ala Ala Ser
1
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<223> synthetic
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Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 65
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ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatggg 300
tctatagtga gtatggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly Phe Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Ser Ile Val Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 67
ggattcacct ttagtaatta tgac 24
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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attaggggta gtggttttaa caca 24
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ile Arg Gly Ser Gly Phe Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 71
gcgaaagatg ggtctatagt gagtatggac tac 33
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ala Lys Asp Gly Ser Ile Val Ser Met Asp Tyr
1 5 10
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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gacatccaga tgacccagtc tccttccgcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
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gggaaagccc ctaaactcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 75
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<223> synthetic
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Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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Lys Ala Ser
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<223> synthetic
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Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ile Gly Ser Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 83
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 84
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 85
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ile Ile Gly Ser Gly Tyr Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 87
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 88
Thr Lys Glu Gly Pro Ile Ile Gly Thr Thr Asn
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
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gacgattttg caacttatta ctgccaccaa tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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cagagtatta gtagctgg 18
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<223> synthetic
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Lys Ala Ser
1
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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His Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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115
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 99
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 101
attagtggtg gtggtggtag caca 24
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 104
Ala Ser Tyr Trp Asn Asn Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 105
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 105
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
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Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 107
cagagcatta gcagctat 18
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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1 5
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<212> DNA
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<223> synthetic
<400> 109
gctgcatcc 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<210> 112
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 112
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 113
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctagtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
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cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt ggaactatat attatactgg gaacacctac 180
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 114
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 117
atatattata ctgggaacac c 21
<210> 118
<211> 7
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ile Tyr Tyr Thr Gly Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ala Arg Gln Phe Ala Asp Leu Asn Tyr Val Asp Tyr
1 5 10
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 121
gaggtgcagc tggtggagtc ggggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctcctttagc agctatggca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtggtaa cacatactcc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
cttcaaatga atggcctgag agccgaggac tcggcctttt attactgtgc gaaagtgggg 300
acttatagtt cttcgtcccc ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 122
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 122
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Thr Tyr Ser Ser Ser Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 123
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 123
ggattctcct ttagcagcta tggc 24
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 124
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 125
attagtggtc gtggtggtaa caca 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 126
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
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<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 127
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 128
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1 5 10
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 129
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctctaac agctatccca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gaggtggtaa cacatactac 180
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<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 130
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asn Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Thr Gly Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 131
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 132
Gly Phe Thr Ser Asn Ser Tyr Pro
1 5
<210> 133
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 133
attagtggta gaggtggtaa caca 24
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 134
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 135
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<210> 136
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 136
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 137
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tccctgaaga tgagttctgt gaccgccaca gacacggctc tgtattactg tgcgagacag 300
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 138
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Met Ser Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Gly Ala Asp His Asn Trp Val Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 139
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asn Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 141
atctattata gtgggaatac c 21
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 142
Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 143
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<210> 144
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 144
Ala Arg Gln Gly Ala Asp His Asn Trp Val Asp Pro
1 5 10
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<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 145
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
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<210> 146
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 146
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Ser Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Asp Pro Gly Thr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 147
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 148
Gly Phe Thr Ser Arg Asn Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 149
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<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 150
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 151
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 151
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<210> 152
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 152
Ala Glu Asp Pro Gly Thr Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 153
<211> 390
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 153
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
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ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaggt atatactatg atggaagtaa taaatactat 180
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Arg Gly Asn Asn His Tyr Tyr His Asn Asn Pro Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr His Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
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130
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 155
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 156
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 157
atatactatg atggaagtaa taaa 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 158
Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 159
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 159
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ttggacgtc 69
<210> 160
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 160
Ala Arg Asp Arg Gly Asn Asn His Tyr Tyr His Asn Asn Pro Tyr Tyr
1 5 10 15
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20
<210> 161
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 161
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cagggcacga aggtagaaat caag 324
<210> 162
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 162
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
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50 55 60
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 163
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<210> 164
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 164
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<211> 7
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 167
caacagtacg gaagcagccc gtggacg 27
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 168
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1 5
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<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 169
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 170
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser
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65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Leu Glu Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 171
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 171
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<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 172
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser Tyr
1 5
<210> 173
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 173
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<210> 174
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 174
Val Tyr Tyr Tyr Gly Thr Thr
1 5
<210> 175
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 175
gcgagactgg aactactctt tgactac 27
<210> 176
<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 176
Ala Arg Leu Glu Leu Leu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 177
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acctgcagtg tctctggtgg ctccatcaac aataataatt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggagggggct ggagtggatt gggagtttct tttatagtgg gcccacctac 180
tacaacccgt ccctcaggag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgaactctgt aaccgccgca gacacggcta tatattactg tgcgagacag 300
gatgggaact actaccccct ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
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<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 178
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Asn Asn
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Asp Gly Asn Tyr Tyr Pro Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 179
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 179
ggtggctcca tcaacaataa taattactac 30
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 180
Gly Gly Ser Ile Asn Asn Asn Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 181
<211> 21
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Phe Phe Tyr Ser Gly Pro Thr
1 5
<210> 183
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 183
gcgagacagg atgggaacta ctaccccctc tttgactac 39
<210> 184
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 184
Ala Arg Gln Asp Gly Asn Tyr Tyr Pro Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 185
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 185
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggg ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagccc caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgacct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag atcccttaac 300
tggggacccc cttttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 186
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 186
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Leu Asn Trp Gly Pro Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 187
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 187
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 188
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 188
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 189
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 189
atctattaca gtgggagccc c 21
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 190
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro
1 5
<210> 191
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 191
gcgagatccc ttaactgggg accccctttt gactac 36
<210> 192
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 192
Ala Arg Ser Leu Asn Trp Gly Pro Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 193
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 193
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctctgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcaaaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tttaataact ggccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 194
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 194
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asn Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 195
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 195
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 196
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 197
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 197
ggtgcatcc 9
<210> 198
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 198
Gly Ala Ser
1
<210> 199
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 199
cagcagttta ataactggcc gtacact 27
<210> 200
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 200
Gln Gln Phe Asn Asn Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 201
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 201
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtccag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgctac cacaaagtac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaggaa tacgctatat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaggggggt 300
tcggggagtt atttccctta ctactactac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 202
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 202
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Pro Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ala Thr Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 203
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 203
ggattcacct ttagcaacta tgcc 24
<210> 204
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 204
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 205
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 205
attagtggta gtggtgctac caca 24
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 206
Ile Ser Gly Ser Gly Ala Thr Thr
1 5
<210> 207
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 207
gcgaaggggg gttcggggag ttatttccct tactactact acggtttgga cgtc 54
<210> 208
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 208
Ala Lys Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 209
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 209
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga tagtgccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtggctc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tattataact ggtggacgtt cggccaaggg 300
accaaggtgg aaatcaaa 318
<210> 210
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 210
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Trp Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 211
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 211
cagactgtta gcagcaac 18
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 212
Gln Thr Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 213
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 213
ggtgcatcc 9
<210> 214
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 214
Gly Ala Ser
1
<210> 215
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 215
cagcagtatt ataactggtg gacg 24
<210> 216
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 216
Gln Gln Tyr Tyr Asn Trp Trp Thr
1 5
<210> 217
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 217
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acaccctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatagg 300
ggttttgggt tcttcgatat ctggggccgt ggcaccctgg ccactgtctc ctca 354
<210> 218
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 218
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Ala Thr Val Ser Ser
115
<210> 219
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 219
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 220
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 221
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 221
attagtggtc gtggtggtaa caca 24
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 222
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 223
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 223
gcgaaagata ggggttttgg gttcttcgat atc 33
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 224
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Phe Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 225
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 225
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagt aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tatgataatc tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaaa taaatatcaa a 321
<210> 226
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 226
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Ile Asn Ile Lys
100 105
<210> 227
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 227
caggacatta gtaactat 18
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 228
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 229
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 229
gatgcatcc 9
<210> 230
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 230
Asp Ala Ser
1
<210> 231
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 231
caacagtatg ataatctccc attcact 27
<210> 232
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 232
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 233
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 233
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtagtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtct attactgtgc ggaaggggga 300
gacgtggatt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 234
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 234
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Gly Gly Asp Val Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 235
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 235
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 236
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 236
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 237
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 237
attagtggta gtggtagtag caca 24
<210> 238
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 238
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 239
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 239
gcggaagggg gagacgtgga ttttgactac 30
<210> 240
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 240
Ala Glu Gly Gly Asp Val Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 241
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 241
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 242
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 242
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 243
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 243
cagagcatta gcagctat 18
<210> 244
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 244
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 245
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 245
gctgcatcc 9
<210> 246
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 246
Ala Ala Ser
1
<210> 247
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 247
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 248
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 248
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 249
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 249
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattgggtac atctattaca gtgggagcgc caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctaagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgtgag agaccgggac 300
ctactccttg accactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 250
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 250
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 251
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 251
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 252
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 252
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 253
atctattaca gtgggagcgc c 21
<210> 254
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 254
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala
1 5
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 255
gtgagagacc gggacctact ccttgaccac 30
<210> 256
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 256
Val Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His
1 5 10
<210> 257
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 257
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggaa aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca ggaccactgg tttcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggccgtacac ttttggccag 300
gggaccatgc tggagatcaa a 321
<210> 258
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 258
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Thr Thr Gly Phe Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Met Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 259
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 259
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 260
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 260
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 261
ggtgcatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 262
Gly Ala Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 263
cagcagtata ataactggcc gtacact 27
<210> 264
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 264
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 265
<211> 387
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 265
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc acttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagttga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaggga 300
acgtattacg attctttgac tggttattac acccactact accgtatgga cgtctggggc 360
caagggacca cggtcaccgt ctcctca 387
<210> 266
<211> 129
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 266
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Tyr Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Tyr Thr His
100 105 110
Tyr Tyr Arg Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 267
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 267
ggaggcacct tcagcactta tgct 24
<210> 268
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 268
Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 269
atcatccctt tctttggtac agca 24
<210> 270
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 270
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala
1 5
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<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 271
gcgagagagg gaacgtatta cgattctttg actggttatt acacccacta ctaccgtatg 60
gacgtc 66
<210> 272
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 272
Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Tyr Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Tyr Thr His
1 5 10 15
Tyr Tyr Arg Met Asp Val
20
<210> 273
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 273
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gaccattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg cgacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 274
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 274
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 275
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 275
cagaccatta gcagctat 18
<210> 276
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 276
Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 277
gctgcatcc 9
<210> 278
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 278
Ala Ala Ser
1
<210> 279
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 279
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 280
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 280
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 281
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 281
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg tttctggagt caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac agcaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacggtt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagataat 300
ccggaactaa ctaaggaggg gtactaccac tactacgcta tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 282
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 282
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Val Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asn Pro Glu Leu Thr Lys Glu Gly Tyr Tyr His Tyr Tyr
100 105 110
Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 283
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 283
ggagtcacct tcagcagcta tgct 24
<210> 284
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 284
Gly Val Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 285
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 285
atcatccctt tctttggtac agca 24
<210> 286
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 286
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 287
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 287
gcgagagata atccggaact aactaaggag gggtactacc actactacgc tatggacgtc 60
<210> 288
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 288
Ala Arg Asp Asn Pro Glu Leu Thr Lys Glu Gly Tyr Tyr His Tyr Tyr
1 5 10 15
Ala Met Asp Val
20
<210> 289
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 289
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 290
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 290
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 291
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 291
cagagcatta gcagctat 18
<210> 292
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 292
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 293
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 293
gctgcatcc 9
<210> 294
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 294
Ala Ala Ser
1
<210> 295
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 295
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 296
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 296
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 297
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 297
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagtc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gaggtggtac tacatactac 180
gcagactccg tgatgggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
gtgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatagg 300
gggttcgggg tctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 298
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 298
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Met Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Val Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 299
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 299
ggattcacct ttagcagctt tgcc 24
<210> 300
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 300
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala
1 5
<210> 301
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 301
attagtggta gaggtggtac taca 24
<210> 302
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 302
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 303
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 303
gcgaaagata gggggttcgg ggtctttgac tac 33
<210> 304
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 304
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 305
<211> 315
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 305
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagggtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggtcattaac aattatttaa attcgtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaggtcct gatctgcgat gcatccaatg tggaaacagg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagact 240
gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tatgataatc tcactttcgg cggagggacc 300
aaggtggagg tcaaa 315
<210> 306
<211> 105
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 306
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Val Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Ser Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Cys Asp Ala Ser Asn Val Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
100 105
<210> 307
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 307
caggtcatta acaattat 18
<210> 308
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 308
Gln Val Ile Asn Asn Tyr
1 5
<210> 309
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 309
gatgcatcc 9
<210> 310
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 310
Asp Ala Ser
1
<210> 311
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 311
caacagtatg ataatctcac t 21
<210> 312
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 312
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Thr
1 5
<210> 313
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 313
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgatctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcaact attagtggga gtggtgttaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgcat 240
ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgttt atcactgtgc gaaagaggga 300
ttggattgtg ctaatggtgt atgctataac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 314
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 314
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Leu Asp Cys Ala Asn Gly Val Cys Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 315
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 316
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 317
attagtggga gtggtgttaa caca 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 318
Ile Ser Gly Ser Gly Val Asn Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 319
gcgaaagagg gattggattg tgctaatggt gtatgctata actactacgg tatggacgtc 60
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 320
Ala Lys Glu Gly Leu Asp Cys Ala Asn Gly Val Cys Tyr Asn Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 321
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctttttaa attggtatca tcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaattcct gatctatagt gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcag tctgcaacct 240
gaagattttt caacttacta ctgtcaacag agttacagta tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 322
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 323
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 323
cagagcatta acagcttt 18
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 324
Gln Ser Ile Asn Ser Phe
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 325
agtgcatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 326
Ser Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 327
caacagagtt acagtatccc gctcact 27
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Leu Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 329
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt catcttcggt agttatgaga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gctttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
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ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagagaacgg 300
gggcagctcg gccggggagg gtattactac tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360
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<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Gln Leu Gly Arg Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 331
ggattcatct tcggtagtta tgag 24
<210> 332
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Phe Ile Phe Gly Ser Tyr Glu
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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attagtagta gtggtagtac cata 24
<210> 334
<211> 8
<212> PRT
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<223> synthetic
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Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
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<211> 57
<212> DNA
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<220>
<223> synthetic
<400> 335
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<220>
<223> synthetic
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Ala Arg Glu Arg Gly Gln Leu Gly Arg Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 337
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 337
gaaattgtgt tgacgcggtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccatcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatgtat ggtacatcca tcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc gtggacgttc 300
ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaa 327
<210> 338
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 338
Glu Ile Val Leu Thr Arg Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Thr Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
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Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 339
cagagtgtta gcagcagcta c 21
<210> 340
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 341
ggtacatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Thr Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 343
cagcagtatg gtagctcacc tccgtggacg 30
<210> 344
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 344
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 345
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 345
caggtccggc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggaga caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttgttac aactacctac 180
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ccgtgtatca gctcggctgg tacacgctac cactactgcg ttatggacgt ctggggccaa 360
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<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 346
Gln Val Arg Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Val Thr Thr Thr Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
100 105 110
Cys Val Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 347
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 347
ggagacacct tcagcagcta tgct 24
<210> 348
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 348
Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 349
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 349
atcatccctt tctttgttac aact 24
<210> 350
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 350
Ile Ile Pro Phe Phe Val Thr Thr
1 5
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<211> 63
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 351
gcgagagatc ggccgtgtat cagctcggct ggtacacgct accactactg cgttatggac 60
gtc 63
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<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 352
Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
1 5 10 15
Cys Val Met Asp Val
20
<210> 353
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 353
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 354
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 354
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 355
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 355
cagagcatta gcagttat 18
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 356
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 357
gctgcatcc 9
<210> 358
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 358
Ala Ala Ser
1
<210> 359
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 359
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 360
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 360
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 361
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 361
caggttcaac tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agccatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
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gcacagaact tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacggcctac 240
atggagctga ggaacctgag atctgacgac acggccgtat attattgtgc gagagaaagg 300
ggtccctatt acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 362
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Gly Thr Tyr Asn Ser Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Asn Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 363
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 363
ggttacacct ttaccagcca tggt 24
<210> 364
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 364
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His Gly
1 5
<210> 365
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 365
atcggcactt acaatagtaa caca 24
<210> 366
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 366
Ile Gly Thr Tyr Asn Ser Asn Thr
1 5
<210> 367
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 368
Ala Arg Glu Arg Gly Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 369
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 369
gaaattgtgt tggcgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac agcaactact tagcctggta tcagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gtagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcaa cagtatggta actcactcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatttcaa a 321
<210> 370
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 370
Glu Ile Val Leu Ala Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
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50 55 60
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Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Leu
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100 105
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 371
cagagtgtta acagcaacta c 21
<210> 372
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 372
Gln Ser Val Asn Ser Asn Tyr
1 5
<210> 373
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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ggtgcatcc 9
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 374
Gly Ala Ser
1
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 375
caacagtatg gtaactcact cact 24
<210> 376
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 376
Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Leu Thr
1 5
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<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 377
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aattatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtgata gaggtggtag tatatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgaagtat 240
ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcaagatagg 300
gggttcgggg tctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
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<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 378
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Asp Arg Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gln Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 379
ggattcacct ttagcaatta tgcc 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 380
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 381
attagtgata gaggtggtag tata 24
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 382
Ile Ser Asp Arg Gly Gly Ser Ile
1 5
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<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 383
gcgcaagata gggggttcgg ggtctttgac tac 33
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 384
Ala Gln Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr
1 5 10
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 385
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattggc aactatttaa attggtttca gcagagacca 120
gggaaagccc ctaatctcct gatctacggt gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaggtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatattt ctgtcaacag tatgataatc tccctttcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggaaatcaa a 321
<210> 386
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 386
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 18
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<223> synthetic
<400> 387
caggacattg gcaactat 18
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
1 5
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<223> synthetic
<400> 389
ggtgcatcc 9
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<212> PRT
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<223> synthetic
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Gly Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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caacagtatg ataatctccc tttcact 27
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<211> 9
<212> PRT
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<220>
<223> synthetic
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Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 393
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctaaaga caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac aactacctac 180
gaacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgcg cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac tcggccgtgt attactgtgc gagagatcgg 300
ccgtgtatca gctcggctgg tacacgctac cactactgcg ttatggacgt ctggggccaa 360
gggacaacgg tcaccgtctc ctca 384
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<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 394
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Lys Asp Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr Thr Tyr Glu Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
100 105 110
Cys Val Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 395
aaagacacct tcagcagcta tgct 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 396
Lys Asp Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 397
atcatccctt tctttggtac aact 24
<210> 398
<211> 8
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 398
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr
1 5
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<211> 63
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 399
gcgagagatc ggccgtgtat cagctcggct ggtacacgct accactactg cgttatggac 60
gtc 63
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<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 400
Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
1 5 10 15
Cys Val Met Asp Val
20
<210> 401
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 401
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 402
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 402
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 403
cagagtatta gcagttat 18
<210> 404
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 404
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 405
gctgcatcc 9
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<211> 3
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<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 407
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 408
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
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<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 409
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtaatt actactgggg ctggatccgc 120
cagccccccg ggaaggggct ggagtggttt gggactatct attatagtgg gagcacctac 180
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<210> 410
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 410
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Phe Gly Thr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Ala Ala Val Gly His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 30
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<223> synthetic
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asn Tyr Tyr
1 5 10
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 413
atctattata gtgggagcac c 21
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 414
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
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<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 415
gcgagacggg cagcagttgg tcactttgac tac 33
<210> 416
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 416
Ala Arg Arg Ala Ala Val Gly His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 417
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 417
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt acctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
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<210> 418
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 418
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Phe Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 419
cagagtatta gtacctgg 18
<210> 420
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 420
Gln Ser Ile Ser Thr Trp
1 5
<210> 421
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 421
gaggcgtct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 422
Glu Ala Ser
1
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 423
caacagtata atacttattg gacg 24
<210> 424
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 424
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
1 5
<210> 425
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 425
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggaga caccttcagc acctatgctg tcagctgggt acgtcaggcc 120
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<210> 426
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 426
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Thr Met Val Arg Gly Leu Thr Asn Tyr His Phe Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 427
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 427
ggagacacct tcagcaccta tgct 24
<210> 428
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 428
Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 429
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 429
atcatccctt tctttggtac atca 24
<210> 430
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ser
1 5
<210> 431
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 431
gcgagagaaa ttactatggt tcggggactt accaactacc acttctacgg tatggacgtc 60
<210> 432
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 432
Ala Arg Glu Ile Thr Met Val Arg Gly Leu Thr Asn Tyr His Phe Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
<210> 433
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 433
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta tttccccgat caccttcggc 300
caggggacac gactggagat taaa 324
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 434
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 437
gctgcatcc 9
<210> 438
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 438
Ala Ala Ser
1
<210> 439
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 439
caacagagtt acagtatttc cccgatcacc 30
<210> 440
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 440
Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Ser Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 441
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 441
caggtccagc tggttcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggttcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggggg caccttcaac aactatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgaatg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccaggacag agtcacgatt acctcggacg actcaacgat aacagcctac 240
atggaactga gtcgcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatgaa 300
ccccgtagag atggctacaa ttactaccac tactactata tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 442
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 442
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Asp Ser Thr Ile Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Pro Arg Arg Asp Gly Tyr Asn Tyr Tyr His Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 443
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 443
gggggcacct tcaacaacta tgct 24
<210> 444
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 444
Gly Gly Thr Phe Asn Asn Tyr Ala
1 5
<210> 445
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 445
atcatccctt tctttggtac aaca 24
<210> 446
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 446
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr
1 5
<210> 447
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 447
gcgagagatg aaccccgtag agatggctac aattactacc actactacta tatggacgtc 60
<210> 448
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 448
Ala Arg Asp Glu Pro Arg Arg Asp Gly Tyr Asn Tyr Tyr His Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Met Asp Val
20
<210> 449
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 449
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcatcct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 450
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 450
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu His Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 451
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 451
cagagcatta acagctat 18
<210> 452
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 452
Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> 453
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 453
gctgcatcc 9
<210> 454
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 454
Ala Ala Ser
1
<210> 455
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 455
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 456
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 456
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 457
<211> 1353
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MERS-CoV-S
aa 367-606: RBD
<400> 457
Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
1 5 10 15
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu
20 25 30
Val Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile
35 40 45
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly Ile Ile Tyr Pro Gln Gly Arg Thr Tyr
50 55 60
Ser Asn Ile Thr Ile Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp
65 70 75 80
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr
85 90 95
Pro Gln Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys Gln Phe
100 105 110
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg Ile Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly
115 120 125
Thr Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr
130 135 140
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys
145 150 155 160
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys
165 170 175
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys Ile Leu Glu Pro Arg Ser Gly
180 185 190
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His
195 200 205
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser
210 215 220
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met
225 230 235 240
Tyr Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile
245 250 255
Thr Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp
260 265 270
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp
275 280 285
Thr Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln
290 295 300
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro
305 310 315 320
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala
325 330 335
Ile Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu
340 345 350
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala
355 360 365
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp
370 375 380
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys
385 390 395 400
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser
405 410 415
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala
420 425 430
Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr
435 440 445
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile
450 455 460
Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile
465 470 475 480
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys
485 490 495
Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr
500 505 510
Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser
515 520 525
Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln
530 535 540
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr
545 550 555 560
Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln
565 570 575
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn
580 585 590
Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu
595 600 605
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly
610 615 620
Val Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly
625 630 635 640
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser
645 650 655
Val Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr
660 665 670
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln
675 680 685
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr
690 695 700
Gly Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser
705 710 715 720
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys
725 730 735
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser
740 745 750
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile
755 760 765
Gln Val Asp Gln Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr
770 775 780
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln
785 790 795 800
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys
805 810 815
Cys Glu Gln Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn
820 825 830
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn
835 840 845
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly
850 855 860
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser
865 870 875 880
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp
885 890 895
Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys
900 905 910
Met Gln Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr
915 920 925
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu
930 935 940
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp
945 950 955 960
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile
965 970 975
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu
980 985 990
Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met
995 1000 1005
Gln Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln Asp
1010 1015 1020
Ala Val Asn Asn Asn Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser Glu Leu
1025 1030 1035 1040
Ser Asn Thr Phe Gly Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp Ile Ile Gln
1045 1050 1055
Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp Arg Leu Ile Asn
1060 1065 1070
Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala Gln Gln Leu Val Arg
1075 1080 1085
Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gln Leu Ala Lys Asp Lys Val Asn
1090 1095 1100
Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly
1105 1110 1115 1120
Thr His Ile Val Ser Phe Val Val Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe
1125 1130 1135
Met His Val Gly Tyr Tyr Pro Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala
1140 1145 1150
Tyr Gly Leu Cys Asp Ala Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val
1155 1160 1165
Asn Gly Tyr Phe Ile Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp
1170 1175 1180
Ser Tyr Thr Gly Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu
1185 1190 1195 1200
Asn Thr Lys Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr
1205 1210 1215
Asn Leu Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln
1220 1225 1230
Asp Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn
1235 1240 1245
Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr Tyr
1250 1255 1260
Glu Met Leu Ser Leu Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu Ser Tyr
1265 1270 1275 1280
Ile Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn Lys Trp Pro
1285 1290 1295
Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Val Ala Leu Ala Leu
1300 1305 1310
Cys Val Phe Phe Ile Leu Cys Cys Thr Gly Cys Gly Thr Asn Cys Met
1315 1320 1325
Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp
1330 1335 1340
Leu Glu Pro His Lys Val His Val His
1345 1350
<210> 458
<211> 467
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MERS RBD-hFc
aa1-240: MERS RBD
aa241-467: hFc
<400> 458
Glu Ala Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu
1 5 10 15
Cys Asp Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn
20 25 30
Phe Lys Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu
35 40 45
Leu Ser Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro
50 55 60
Ala Ala Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe
65 70 75 80
Ser Tyr Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly
85 90 95
Pro Ile Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys
100 105 110
Leu Ile Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro
115 120 125
Leu Lys Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp
130 135 140
Arg Thr Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys
145 150 155 160
Val Ser Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg
165 170 175
Lys Gln Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly
180 185 190
Ser Thr Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr
195 200 205
Val Gln Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe
210 215 220
Ala Asn Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys
465
本明細書に記載された配列番号のアミノ酸配列および核酸配列は、以下の配列表に示すとおりである。
SEQUENCE LISTING
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
<120> Human Antibodies to Middle East
Respiratory Syndrome - Coronavirus Spike Protein
<130> SP-6651
<140> PCT/US2015/031800
<141> 2015-05-20
<150> 62/002,233
<151> 2014-05-23
<150> 62/004,971
<151> 2014-05-30
<150> 62/051,717
<151> 2014-09-17
<150> 62/072,716
<151> 2014-10-30
<160> 458
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 1
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgttcag cctctggatt cacctttagc agctatgaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attcgtggta gtggtcatac cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240
ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attattgtgt gaaagatggg 300
agtatcgtag ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly His Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Gly Ser Ile Val Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 3
ggattcacct ttagcagcta tgac 24
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1 5
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 5
attcgtggta gtggtcatac caca 24
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 6
Ile Arg Gly Ser Gly His Thr Thr
1 5
<210> 7
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 7
gtgaaagatg ggagtatcgt agggttcgac ccc 33
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 8
Val Lys Asp Gly Ser Ile Val Gly Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 9
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 9
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gactattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 11
cagactatta gtagctgg 18
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 12
Gln Thr Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 13
aaggcgtct 9
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 14
Lys Ala Ser
1
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 15
caacagtata atagttattc gtacact 27
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 16
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr Thr
1 5
<210> 17
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 17
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg ctccttcagc gtctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccaa tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccaggacag attcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gagagagggg 300
gatattgtag tactaccagc tggtaagggg ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 18
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Ser Val Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Phe Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Asp Ile Val Val Leu Pro Ala Gly Lys Gly Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 19
ggaggctcct tcagcgtcta tgct 24
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 20
Gly Gly Ser Phe Ser Val Tyr Ala
1 5
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 21
atcatcccaa tctttggtac agca 24
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 22
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 23
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 23
gcgagagagg gggatattgt agtactacca gctggtaagg ggggtatgga cgtc 54
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 24
Ala Arg Glu Gly Asp Ile Val Val Leu Pro Ala Gly Lys Gly Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 25
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 25
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catggtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttggtttc tcatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaagtcct 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336
<210> 26
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser His Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 27
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 27
cagagcctcc tgcatggtaa tggatacaac tat 33
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 28
Gln Ser Leu Leu His Gly Asn Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 29
ttggtttct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 30
Leu Val Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 31
atgcaagctc tacaaagtcc ttggacg 27
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 32
Met Gln Ala Leu Gln Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 33
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 33
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc cgggggggtc cctgagagtc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgaca tgtactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta ttggtgctac cacatattac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccata tccagagaca attccaagaa cacggtgttt 240
ctgcaaatga atagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgt gaaaggggga 300
cctatagtgg ctacggatta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 34
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Gly Ile Gly Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Gly Pro Ile Val Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 35
ggattcacct ttagcaacta tgac 24
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 36
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 37
attagtggta ttggtgctac caca 24
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 38
Ile Ser Gly Ile Gly Ala Thr Thr
1 5
<210> 39
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 39
gtgaaagggg gacctatagt ggctacggat tac 33
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 40
Val Lys Gly Gly Pro Ile Val Ala Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 41
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggcatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 43
cagagtatta gtagctgg 18
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 44
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 45
aaggcgtct 9
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 46
Lys Ala Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 47
caacagtata atagttattc gtggacg 27
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 48
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 49
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 49
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggagggtc cctaagactc 60
tcctgtacag cctctggatt caccttcagt aattatgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagagaagg ggctggactg ggtttcattc attagtagta gtggtggtgc catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac tcggctattt atttctgtgc gcgatccgac 300
tccggtggta actcgaggta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 50
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Ser Gly Gly Asn Ser Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 51
ggattcacct tcagtaatta tgaa 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Glu
1 5
<210> 53
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 53
attagtagta gtggtggtgc cata 24
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 54
Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
1 5
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 55
gcgcgatccg actccggtgg taactcgagg tac 33
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 56
Ala Arg Ser Asp Ser Gly Gly Asn Ser Arg Tyr
1 5 10
<210> 57
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 57
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
gtcacttgtc gggcgagtca ggatattagc aactggttag tctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240
gaagattttg cgacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcctac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 59
caggatatta gcaactgg 18
<210> 60
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 60
Gln Asp Ile Ser Asn Trp
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 61
gctgcatcc 9
<210> 62
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 62
Ala Ala Ser
1
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 63
caacaggcta acagtttccc tcctact 27
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 64
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 65
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 65
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag tttctggatt cacctttagt aattatgaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaggg ggctggagtg ggtctcagct attaggggta gtggttttaa cacatattac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatggg 300
tctatagtga gtatggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 66
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly Phe Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Asp Gly Ser Ile Val Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 67
ggattcacct ttagtaatta tgac 24
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 68
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
<210> 69
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 69
attaggggta gtggttttaa caca 24
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 70
Ile Arg Gly Ser Gly Phe Asn Thr
1 5
<210> 71
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 71
gcgaaagatg ggtctatagt gagtatggac tac 33
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 72
Ala Lys Asp Gly Ser Ile Val Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 73
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 73
gacatccaga tgacccagtc tccttccgcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 74
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 75
cagagtatta gtagctgg 18
<210> 76
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 76
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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aaggcgtct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 78
Lys Ala Ser
1
<210> 79
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 79
caacagtata atagttattc gtggacg 27
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 80
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 81
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 81
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc acctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact attattggta gtggttataa cacatactac 180
tcagactccg tgaagggccg gttcaccatg tccagagaca attccaagag cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtac gaaagaaggc 300
cctataattg gaaccacgaa ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 82
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ile Gly Ser Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Glu Gly Pro Ile Ile Gly Thr Thr Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 83
ggattcacct ttagcaccta tggc 24
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 84
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly
1 5
<210> 85
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 85
attattggta gtggttataa caca 24
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 86
Ile Ile Gly Ser Gly Tyr Asn Thr
1 5
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<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 87
acgaaagaag gccctataat tggaaccacg aac 33
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 88
Thr Lys Glu Gly Pro Ile Ile Gly Thr Thr Asn
1 5 10
<210> 89
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 89
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca acagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gacgattttg caacttatta ctgccaccaa tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 91
cagagtatta gtagctgg 18
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 92
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 93
aaggcgtct 9
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 94
Lys Ala Ser
1
<210> 95
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 95
caccaatata atagttattc gtggacg 27
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 96
His Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
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<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 97
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtgcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctttggatt cacctttagc ggctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtg gtggtggtag cacatactac 180
acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gtcctactgg 300
aacaacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351
<210> 98
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Trp Asn Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 99
ggattcacct ttagcggcta tgcc 24
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 100
Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Ala
1 5
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 101
attagtggtg gtggtggtag caca 24
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 102
Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 103
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 103
gcgtcctact ggaacaacgg tatggacgtc 30
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 104
Ala Ser Tyr Trp Asn Asn Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 105
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 105
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 106
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 107
cagagcatta gcagctat 18
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 108
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 109
gctgcatcc 9
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 110
Ala Ala Ser
1
<210> 111
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 111
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 112
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 113
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctagtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agtaatactt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt ggaactatat attatactgg gaacacctac 180
tacaagtcgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccag gaaccagttc 240
tccctgaagc tgacctctgt gaccgccgca gacacggctg tctattactg tgcgcgacag 300
tttgctgact tgaactacgt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 114
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 114
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Thr Ile Tyr Tyr Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Lys Ser Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Phe Ala Asp Leu Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 115
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 115
ggtggctcca tcagtagtaa tacttactac 30
<210> 116
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 116
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 117
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 117
atatattata ctgggaacac c 21
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 118
Ile Tyr Tyr Thr Gly Asn Thr
1 5
<210> 119
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 119
gcgcgacagt ttgctgactt gaactacgtt gactac 36
<210> 120
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 120
Ala Arg Gln Phe Ala Asp Leu Asn Tyr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 121
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 121
gaggtgcagc tggtggagtc ggggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctcctttagc agctatggca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtggtaa cacatactcc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
cttcaaatga atggcctgag agccgaggac tcggcctttt attactgtgc gaaagtgggg 300
acttatagtt cttcgtcccc ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 122
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 122
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Thr Tyr Ser Ser Ser Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 123
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 123
ggattctcct ttagcagcta tggc 24
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 124
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 125
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 125
attagtggtc gtggtggtaa caca 24
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 126
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 127
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 127
gcgaaagtgg ggacttatag ttcttcgtcc ccctttgact ac 42
<210> 128
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 128
Ala Lys Val Gly Thr Tyr Ser Ser Ser Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 129
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 129
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggttcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctctaac agctatccca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gaggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cactctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agtcgaggac acggccgtat attactgtgc ggaaactgga 300
actgcctttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 130
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 130
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asn Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Thr Gly Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 131
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 131
ggattcacct ctaacagcta tccc 24
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 132
Gly Phe Thr Ser Asn Ser Tyr Pro
1 5
<210> 133
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 133
attagtggta gaggtggtaa caca 24
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 134
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 135
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 135
gcggaaactg gaactgcctt tgactac 27
<210> 136
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 136
Ala Glu Thr Gly Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5
<210> 137
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 137
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc aataataatt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggactggatt gggagtatct attatagtgg gaatacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgttg acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaaga tgagttctgt gaccgccaca gacacggctc tgtattactg tgcgagacag 300
ggagcagatc acaactgggt cgacccctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 138
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 138
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Met Ser Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Gly Ala Asp His Asn Trp Val Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 139
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 139
ggtggctcca tcagcaataa taattactac 30
<210> 140
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 140
Gly Gly Ser Ile Ser Asn Asn Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 141
atctattata gtgggaatac c 21
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 142
Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 143
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 143
gcgagacagg gagcagatca caactgggtc gacccc 36
<210> 144
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 144
Ala Arg Gln Gly Ala Asp His Asn Trp Val Asp Pro
1 5 10
<210> 145
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 145
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgttg tctctggatt cacctctaga aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgggag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca atcccaagaa cacgttgtat 240
ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggccctat attactgtgc ggaagatcct 300
ggaacttctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 146
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 146
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Ser Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Asp Pro Gly Thr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 147
ggattcacct ctagaaacta tgcc 24
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 148
Gly Phe Thr Ser Arg Asn Tyr Ala
1 5
<210> 149
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 149
attagtggta gtggtgggag caca 24
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 150
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 151
gcggaagatc ctggaacttc ttttgactac 30
<210> 152
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 152
Ala Glu Asp Pro Gly Thr Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 153
<211> 390
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 153
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tacactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaggt atatactatg atggaagtaa taaatactat 180
ggagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctatat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagagatcgg 300
ggtaataacc actactatca taataatccc tactactatt atcacggttt ggacgtctgg 360
ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 390
<210> 154
<211> 130
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Asn Asn His Tyr Tyr His Asn Asn Pro Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr His Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 155
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 155
ggattcacct tcagtaacta tggc 24
<210> 156
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 156
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 157
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 157
atatactatg atggaagtaa taaa 24
<210> 158
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 158
Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 159
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 159
gcgagagatc ggggtaataa ccactactat cataataatc cctactacta ttatcacggt 60
ttggacgtc 69
<210> 160
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 160
Ala Arg Asp Arg Gly Asn Asn His Tyr Tyr His Asn Asn Pro Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr His Gly Leu Asp Val
20
<210> 161
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 161
gaaatagttt tgacacagag tcccggcaca ctgtcactct ctcccgggga aagagccacc 60
ttgtcatgta gagcaagtca gtcagtctct agctcttatc tcgcctggta ccagcagaag 120
ccgggacagg cccctagact gctgatctac ggggcaagtt ccagggccac cggaatcccc 180
gaccggttca gtggaagcgg aagcggaacc gattttactt tgacgatttc tagactggag 240
ccagaggatt tcgccgttta ctattgtcaa cagtacggaa gcagcccgtg gacgtttggc 300
cagggcacga aggtagaaat caag 324
<210> 162
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 162
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 163
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 163
agagcaagtc agtcagtctc tagctcttat ctcgcc 36
<210> 164
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 164
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 165
ggggcaagtt ccagggccac c 21
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 166
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 167
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 167
caacagtacg gaagcagccc gtggacg 27
<210> 168
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 168
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 169
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 169
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgctctg tctctggtgg ctccatcact agttcctatt ggagctggat ccggcagccc 120
ccaggaaggg gcctggagtg gattggatat gtctattact acgggaccac caaatacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccacatca atggacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aaactgaact ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtttatt actgtgcgag actggaacta 300
ctctttgact actggggcca gggaaccctg gtcactgtct cctca 345
<210> 170
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 170
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Tyr Gly Thr Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Thr Ser Met Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Leu Glu Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 171
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 171
ggtggctcca tcactagttc ctat 24
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 172
Gly Gly Ser Ile Thr Ser Ser Tyr
1 5
<210> 173
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 173
gtctattact acgggaccac c 21
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 174
Val Tyr Tyr Tyr Gly Thr Thr
1 5
<210> 175
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 175
gcgagactgg aactactctt tgactac 27
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 176
Ala Arg Leu Glu Leu Leu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 177
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcagtg tctctggtgg ctccatcaac aataataatt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggagggggct ggagtggatt gggagtttct tttatagtgg gcccacctac 180
tacaacccgt ccctcaggag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgaactctgt aaccgccgca gacacggcta tatattactg tgcgagacag 300
gatgggaact actaccccct ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 178
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 178
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Phe Phe Tyr Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Asp Gly Asn Tyr Tyr Pro Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 179
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 179
ggtggctcca tcaacaataa taattactac 30
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 180
Gly Gly Ser Ile Asn Asn Asn Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 181
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 181
ttcttttata gtgggcccac c 21
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 182
Phe Phe Tyr Ser Gly Pro Thr
1 5
<210> 183
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 183
gcgagacagg atgggaacta ctaccccctc tttgactac 39
<210> 184
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 184
Ala Arg Gln Asp Gly Asn Tyr Tyr Pro Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 185
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 185
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggg ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagccc caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgacct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag atcccttaac 300
tggggacccc cttttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 186
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 186
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Leu Asn Trp Gly Pro Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 187
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 187
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 188
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 188
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 189
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 189
atctattaca gtgggagccc c 21
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 190
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro
1 5
<210> 191
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 191
gcgagatccc ttaactgggg accccctttt gactac 36
<210> 192
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 192
Ala Arg Ser Leu Asn Trp Gly Pro Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 193
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 193
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctctgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcaaaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tttaataact ggccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 194
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 194
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asn Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 195
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 195
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 196
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 197
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 197
ggtgcatcc 9
<210> 198
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 198
Gly Ala Ser
1
<210> 199
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 199
cagcagttta ataactggcc gtacact 27
<210> 200
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 200
Gln Gln Phe Asn Asn Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 201
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 201
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtccag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgctac cacaaagtac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaggaa tacgctatat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaggggggt 300
tcggggagtt atttccctta ctactactac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 202
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 202
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Pro Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ala Thr Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 203
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 203
ggattcacct ttagcaacta tgcc 24
<210> 204
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 204
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 205
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 205
attagtggta gtggtgctac caca 24
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 206
Ile Ser Gly Ser Gly Ala Thr Thr
1 5
<210> 207
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 207
gcgaaggggg gttcggggag ttatttccct tactactact acggtttgga cgtc 54
<210> 208
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 208
Ala Lys Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 209
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 209
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga tagtgccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtggctc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tattataact ggtggacgtt cggccaaggg 300
accaaggtgg aaatcaaa 318
<210> 210
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 210
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Trp Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 211
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 211
cagactgtta gcagcaac 18
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 212
Gln Thr Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 213
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 213
ggtgcatcc 9
<210> 214
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 214
Gly Ala Ser
1
<210> 215
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 215
cagcagtatt ataactggtg gacg 24
<210> 216
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 216
Gln Gln Tyr Tyr Asn Trp Trp Thr
1 5
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<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 217
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acaccctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatagg 300
ggttttgggt tcttcgatat ctggggccgt ggcaccctgg ccactgtctc ctca 354
<210> 218
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 218
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Phe Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Ala Thr Val Ser Ser
115
<210> 219
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 219
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 220
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 221
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 221
attagtggtc gtggtggtaa caca 24
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 222
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 223
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 223
gcgaaagata ggggttttgg gttcttcgat atc 33
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 224
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Phe Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 225
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 225
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagt aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tatgataatc tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaaa taaatatcaa a 321
<210> 226
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 226
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Ile Asn Ile Lys
100 105
<210> 227
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 227
caggacatta gtaactat 18
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 228
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 229
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 229
gatgcatcc 9
<210> 230
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 230
Asp Ala Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 231
caacagtatg ataatctccc attcact 27
<210> 232
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 232
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 233
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 233
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtagtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtct attactgtgc ggaaggggga 300
gacgtggatt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 234
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 234
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Gly Gly Asp Val Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 235
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 235
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 236
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 236
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 237
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 237
attagtggta gtggtagtag caca 24
<210> 238
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 238
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 239
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 239
gcggaagggg gagacgtgga ttttgactac 30
<210> 240
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 240
Ala Glu Gly Gly Asp Val Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 241
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 241
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 242
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 242
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 243
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 243
cagagcatta gcagctat 18
<210> 244
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 244
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 245
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 245
gctgcatcc 9
<210> 246
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 246
Ala Ala Ser
1
<210> 247
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 247
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 248
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 248
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 249
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 249
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattgggtac atctattaca gtgggagcgc caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctaagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgtgag agaccgggac 300
ctactccttg accactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 250
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 250
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 251
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 251
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 252
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 252
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 253
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 253
atctattaca gtgggagcgc c 21
<210> 254
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 254
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala
1 5
<210> 255
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 255
gtgagagacc gggacctact ccttgaccac 30
<210> 256
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 256
Val Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His
1 5 10
<210> 257
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 257
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggaa aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca ggaccactgg tttcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggccgtacac ttttggccag 300
gggaccatgc tggagatcaa a 321
<210> 258
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 258
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Thr Thr Gly Phe Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Met Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 259
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 259
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 260
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 260
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 261
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 261
ggtgcatcc 9
<210> 262
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 262
Gly Ala Ser
1
<210> 263
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 263
cagcagtata ataactggcc gtacact 27
<210> 264
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 264
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 265
<211> 387
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 265
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc acttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagttga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaggga 300
acgtattacg attctttgac tggttattac acccactact accgtatgga cgtctggggc 360
caagggacca cggtcaccgt ctcctca 387
<210> 266
<211> 129
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 266
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Tyr Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Tyr Thr His
100 105 110
Tyr Tyr Arg Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 267
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 267
ggaggcacct tcagcactta tgct 24
<210> 268
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 268
Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 269
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 269
atcatccctt tctttggtac agca 24
<210> 270
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 270
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 271
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 271
gcgagagagg gaacgtatta cgattctttg actggttatt acacccacta ctaccgtatg 60
gacgtc 66
<210> 272
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 272
Ala Arg Glu Gly Thr Tyr Tyr Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Tyr Thr His
1 5 10 15
Tyr Tyr Arg Met Asp Val
20
<210> 273
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 273
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gaccattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg cgacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 274
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 274
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 275
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 275
cagaccatta gcagctat 18
<210> 276
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 276
Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 277
gctgcatcc 9
<210> 278
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 278
Ala Ala Ser
1
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<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 279
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 280
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 280
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 281
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 281
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg tttctggagt caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac agcaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacggtt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagataat 300
ccggaactaa ctaaggaggg gtactaccac tactacgcta tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 282
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 282
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Val Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asn Pro Glu Leu Thr Lys Glu Gly Tyr Tyr His Tyr Tyr
100 105 110
Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 283
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 283
ggagtcacct tcagcagcta tgct 24
<210> 284
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 284
Gly Val Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 285
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 285
atcatccctt tctttggtac agca 24
<210> 286
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 286
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 287
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 287
gcgagagata atccggaact aactaaggag gggtactacc actactacgc tatggacgtc 60
<210> 288
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 288
Ala Arg Asp Asn Pro Glu Leu Thr Lys Glu Gly Tyr Tyr His Tyr Tyr
1 5 10 15
Ala Met Asp Val
20
<210> 289
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 289
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 290
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 290
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 291
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 291
cagagcatta gcagctat 18
<210> 292
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 292
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 293
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 293
gctgcatcc 9
<210> 294
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 294
Ala Ala Ser
1
<210> 295
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 295
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 296
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 296
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 297
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 297
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagtc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gaggtggtac tacatactac 180
gcagactccg tgatgggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
gtgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatagg 300
gggttcgggg tctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 298
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 298
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Met Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Val Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 299
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 299
ggattcacct ttagcagctt tgcc 24
<210> 300
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 300
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala
1 5
<210> 301
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 301
attagtggta gaggtggtac taca 24
<210> 302
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 302
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 303
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 303
gcgaaagata gggggttcgg ggtctttgac tac 33
<210> 304
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 304
Ala Lys Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 305
<211> 315
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 305
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagggtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggtcattaac aattatttaa attcgtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaggtcct gatctgcgat gcatccaatg tggaaacagg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagact 240
gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tatgataatc tcactttcgg cggagggacc 300
aaggtggagg tcaaa 315
<210> 306
<211> 105
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 306
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Val Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Ser Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Cys Asp Ala Ser Asn Val Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
100 105
<210> 307
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 307
caggtcatta acaattat 18
<210> 308
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 308
Gln Val Ile Asn Asn Tyr
1 5
<210> 309
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 309
gatgcatcc 9
<210> 310
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 310
Asp Ala Ser
1
<210> 311
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 311
caacagtatg ataatctcac t 21
<210> 312
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 312
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Thr
1 5
<210> 313
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 313
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgatctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcaact attagtggga gtggtgttaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgcat 240
ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgttt atcactgtgc gaaagaggga 300
ttggattgtg ctaatggtgt atgctataac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360
accacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 314
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 314
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Leu Asp Cys Ala Asn Gly Val Cys Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 315
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 315
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 316
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 316
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 317
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 317
attagtggga gtggtgttaa caca 24
<210> 318
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 318
Ile Ser Gly Ser Gly Val Asn Thr
1 5
<210> 319
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 319
gcgaaagagg gattggattg tgctaatggt gtatgctata actactacgg tatggacgtc 60
<210> 320
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 320
Ala Lys Glu Gly Leu Asp Cys Ala Asn Gly Val Cys Tyr Asn Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
<210> 321
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 321
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctttttaa attggtatca tcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaattcct gatctatagt gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcag tctgcaacct 240
gaagattttt caacttacta ctgtcaacag agttacagta tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 322
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 322
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 323
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 323
cagagcatta acagcttt 18
<210> 324
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 324
Gln Ser Ile Asn Ser Phe
1 5
<210> 325
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 325
agtgcatcc 9
<210> 326
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 326
Ser Ala Ser
1
<210> 327
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 327
caacagagtt acagtatccc gctcact 27
<210> 328
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 328
Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 329
<211> 378
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 329
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt catcttcggt agttatgaga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gctttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagagaacgg 300
gggcagctcg gccggggagg gtattactac tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 330
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Gln Leu Gly Arg Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 331
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 331
ggattcatct tcggtagtta tgag 24
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<223> synthetic
<400> 332
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1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<223> synthetic
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Ala Arg Glu Arg Gly Gln Leu Gly Arg Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 337
gaaattgtgt tgacgcggtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccatcagaaa 120
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cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc gtggacgttc 300
ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaa 327
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 338
Glu Ile Val Leu Thr Arg Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Thr Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
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<223> synthetic
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1
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<223> synthetic
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<223> synthetic
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Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr
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<212> DNA
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<223> synthetic
<400> 345
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tcctgcaagg cttctggaga caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttgttac aactacctac 180
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atggagctga gcagtctgag atctgaggac tcggccgtgt attactgtgc gagagatcgg 300
ccgtgtatca gctcggctgg tacacgctac cactactgcg ttatggacgt ctggggccaa 360
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 346
Gln Val Arg Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Val Thr Thr Thr Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
100 105 110
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<211> 24
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 24
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<223> synthetic
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<212> PRT
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<223> synthetic
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Ile Ile Pro Phe Phe Val Thr Thr
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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gtc 63
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
1 5 10 15
Cys Val Met Asp Val
20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 353
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120
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gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 354
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 354
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<223> synthetic
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<223> synthetic
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Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<223> synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
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<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 361
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tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agccatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggtttgagtg gatgggatgg atcggcactt acaatagtaa cacagactat 180
gcacagaact tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacggcctac 240
atggagctga ggaacctgag atctgacgac acggccgtat attattgtgc gagagaaagg 300
ggtccctatt acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 362
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Gly Thr Tyr Asn Ser Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Asn Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 363
ggttacacct ttaccagcca tggt 24
<210> 364
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 364
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His Gly
1 5
<210> 365
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 365
atcggcactt acaatagtaa caca 24
<210> 366
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 366
Ile Gly Thr Tyr Asn Ser Asn Thr
1 5
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<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 367
gcgagagaaa ggggtcccta ttacggtatg gacgtc 36
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<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 368
Ala Arg Glu Arg Gly Pro Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 369
gaaattgtgt tggcgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac agcaactact tagcctggta tcagcagaaa 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 370
Glu Ile Val Leu Ala Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 371
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<210> 372
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 372
Gln Ser Val Asn Ser Asn Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 373
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 374
Gly Ala Ser
1
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 375
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 376
Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Leu Thr
1 5
<210> 377
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 377
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggggggtc cctgagactc 60
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<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 378
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Asp Arg Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Gln Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 379
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 381
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 381
attagtgata gaggtggtag tata 24
<210> 382
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 382
Ile Ser Asp Arg Gly Gly Ser Ile
1 5
<210> 383
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 383
gcgcaagata gggggttcgg ggtctttgac tac 33
<210> 384
<211> 11
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 384
Ala Gln Asp Arg Gly Phe Gly Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 385
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 385
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattggc aactatttaa attggtttca gcagagacca 120
gggaaagccc ctaatctcct gatctacggt gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaggtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatattt ctgtcaacag tatgataatc tccctttcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggaaatcaa a 321
<210> 386
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 386
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe
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100 105
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 387
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<210> 388
<211> 6
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
1 5
<210> 389
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 389
ggtgcatcc 9
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<211> 3
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 390
Gly Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<210> 392
<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 392
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe Thr
1 5
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<211> 384
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt tctttggtac aactacctac 180
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atggagctga gcagcctgag atctgaggac tcggccgtgt attactgtgc gagagatcgg 300
ccgtgtatca gctcggctgg tacacgctac cactactgcg ttatggacgt ctggggccaa 360
gggacaacgg tcaccgtctc ctca 384
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 394
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 396
Lys Asp Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 397
atcatccctt tctttggtac aact 24
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr
1 5
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 399
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gtc 63
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 400
Ala Arg Asp Arg Pro Cys Ile Ser Ser Ala Gly Thr Arg Tyr His Tyr
1 5 10 15
Cys Val Met Asp Val
20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 401
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
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gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 402
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
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<223> synthetic
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cagagtatta gcagttat 18
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<223> synthetic
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Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<223> synthetic
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gctgcatcc 9
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<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<212> DNA
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<223> synthetic
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caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
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<212> PRT
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<223> synthetic
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Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
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cagccccccg ggaaggggct ggagtggttt gggactatct attatagtgg gagcacctac 180
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<223> synthetic
<400> 410
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<223> synthetic
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<212> DNA
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<223> synthetic
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atctattata gtgggagcac c 21
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<223> synthetic
<400> 414
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 416
Ala Arg Arg Ala Ala Val Gly His Phe Asp Tyr
1 5 10
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 417
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt acctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatt tgggacagaa ttcactctca ccatcagccg cctgcagcct 240
gatgattttg caacttattt ctgccaacag tataatactt attggacgtt cggccaaggg 300
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<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 418
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Phe Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
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100 105
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
<400> 419
cagagtatta gtacctgg 18
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<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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Gln Ser Ile Ser Thr Trp
1 5
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<223> synthetic
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<223> synthetic
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Glu Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 423
caacagtata atacttattg gacg 24
<210> 424
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 424
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 425
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tcctgcaagg cttctggaga caccttcagc acctatgctg tcagctgggt acgtcaggcc 120
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actatggttc ggggacttac caactaccac ttctacggta tggacgtctg gggccaaggg 360
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<210> 426
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 426
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Ile Thr Met Val Arg Gly Leu Thr Asn Tyr His Phe Tyr
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Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 427
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 427
ggagacacct tcagcaccta tgct 24
<210> 428
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 428
Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 429
atcatccctt tctttggtac atca 24
<210> 430
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 430
Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ser
1 5
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<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 431
gcgagagaaa ttactatggt tcggggactt accaactacc acttctacgg tatggacgtc 60
<210> 432
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 432
Ala Arg Glu Ile Thr Met Val Arg Gly Leu Thr Asn Tyr His Phe Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
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<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 433
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
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gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta tttccccgat caccttcggc 300
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 434
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Ser Pro
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Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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cagagcatta gcagctat 18
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> synthetic
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gctgcatcc 9
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 439
caacagagtt acagtatttc cccgatcacc 30
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 440
Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Ser Pro Ile Thr
1 5 10
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<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 441
caggtccagc tggttcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggttcctc ggtgaaggtc 60
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accacggtca ccgtctcctc a 381
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<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 442
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Tyr
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Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<210> 443
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 443
gggggcacct tcaacaacta tgct 24
<210> 444
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 444
Gly Gly Thr Phe Asn Asn Tyr Ala
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<210> 445
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 445
atcatccctt tctttggtac aaca 24
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<211> 8
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Thr
1 5
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 447
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 448
Ala Arg Asp Glu Pro Arg Arg Asp Gly Tyr Asn Tyr Tyr His Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Met Asp Val
20
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<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 449
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
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caagggacac gactggagat taaa 324
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<211> 108
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 450
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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cagagcatta acagctat 18
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<211> 6
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
<400> 453
gctgcatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic
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Ala Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
<223> synthetic
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Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 457
<211> 1353
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MERS-CoV-S
aa 367-606: RBD
<400> 457
Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
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Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu
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Val Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile
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65 70 75 80
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465
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【配列表】