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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-10
(45)【発行日】2024-06-18
(54)【発明の名称】抗ＰＣＳＫ９抗体を含む安定製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240611BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240611BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240611BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240611BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240611BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240611BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240611BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20240611BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 P ZNA
A61K9/08
A61K47/18
A61K47/22
A61K47/26
A61P3/06
A61P43/00 111
C07K16/40
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2021523466
(86)(22)【出願日】2019-10-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-25
(86)【国際出願番号】 CN2019114233
(87)【国際公開番号】W WO2020088492
(87)【国際公開日】2020-05-07
【審査請求日】2022-10-14
(31)【優先権主張番号】201811283440.7
(32)【優先日】2018-10-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】320000850
【氏名又は名称】上海君▲実▼生物医▲薬▼科技股▲分▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＪＵＮＳＨＩ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ １３， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ２， Ｎｏｓ． ３６ ａｎｄ ５８， Ｈａｉｑｕ Ｒｏａｄ， Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２１０ ＣＨＩＮＡ
(73)【特許権者】
【識別番号】519301559
【氏名又は名称】▲蘇▼州君盟生物医▲薬▼科技有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110001070
【氏名又は名称】弁理士法人エスエス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼洪川
(72)【発明者】
【氏名】▲劉▼沛想
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼静
(72)【発明者】
【氏名】丁申皓
(72)【発明者】
【氏名】▲張▼梅
(72)【発明者】
【氏名】▲呉▼▲純▼
(72)【発明者】
【氏名】▲馮▼▲輝▼
(72)【発明者】
【氏名】武海
【審査官】春田 由香
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／０８８７８２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１４－５２５９１５（ＪＰ，Ａ）
【文献】Jorgensen, L. et al.，Recent trends in stabilising peptides and proteins in pharmaceutical formulation - considerations in the choice of excipients，Expert Opinion on Drug Delivery，2009年，Vol.6, No.11，p.1219-1230，doi:10.1517/17425240903199143
【文献】Shire, S. J.，4 - Formulation of proteins and monoclonal antibodies (mAbs)，Monoclonal Antibodies，Woodhead Publishing，2015年，p.93-120，https://doi.org/10.1016/B978-0-08-100296-4.00004-X.，ISBN 9780081002964
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４
Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２
Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９
Ｃ０７Ｋ １６／００－１６／４６
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）緩衝液と、（ｂ）安定剤と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、
アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、
アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、
アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、
アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、
アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む、ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと、
を含み、ｐＨ値が５．５～６．５である、安定的な抗体製剤であって、
前記緩衝液はヒスチジン緩衝液であり、前記緩衝液の濃度は１５～２５ｍＭであって、
前記安定剤はアルギニン若しくはその塩であって、前記アルギニン若しくはその塩の濃度が５０～２００ｍＭである、又は、前記安定剤はアルギニンの塩とマンニトールの組合せであって、前記製剤における前記アルギニン塩の濃度が５０～１５０ｍＭであり、前記マンニトールの濃度が５０～２００ｍＭであり、２種類の前記安定剤の総濃度が５０ｍＭ～２５０ｍＭの範囲内であって、
濃度０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０をさらに含む、抗体製剤であって、
前記抗体又はその抗原結合フラグメントはアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を有する重鎖（ＨＣ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を有する軽鎖（ＬＣ）と、を含むこと、を特徴とする抗体製剤。
【請求項2】
前記ヒスチジン緩衝液はＬ‐ヒスチジンとＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製されたこと、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項3】
前記ヒスチジン緩衝液は１～１０ｍＭのヒスチジンと１０～２０ｍＭのヒスチジン塩を含むこと、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項4】
前記ヒスチジンと前記ヒスチジン塩のモル比が１：１～１：４の範囲内であること、を特徴とする請求項３に記載の抗体製剤。
【請求項5】
前記安定剤は１３０ｍＭ～１６０ｍＭのアルギニン塩であること、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項6】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントはアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含むこと、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項7】
（ａ）２０ｍＭの前記ヒスチジン緩衝液と、（ｂ）１００ｍＭ～２００ｍＭのアルギニン塩と、
（ｃ）０．０２％ポリソルベート２０と、
（ｄ）１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの前記ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントと、
を含むこと、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項8】
前記製剤における前記アルギニン塩の濃度が１３０ｍＭ～１６０ｍＭであること、を特徴とする請求項７に記載の抗体製剤。
【請求項9】
前記抗体製剤は、（Ａ） （１）１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が５．５～６．５である、１０～５０ｍＭの前記ヒスチジン緩衝液と、（３）５０ｍＭ～２００ｍＭのアルギニン塩と、（４）０．０１％～０．０５％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｂ） （１）１５０±１０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が５．５～６．５である、２０ｍＭの前記ヒスチジン緩衝液と、（３）６０±５ｍＭ、１３０±５ｍＭ又は１６０±５ｍＭのアルギニン塩と、（４）０．０１％～０．０５％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｃ） （１）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、１５０±１０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が５．５～６．５である、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）１６０±５ｍＭのアルギニンと、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｄ） （１）アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９である重鎖と、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０である軽鎖と、を含む、全長抗体である、１５０±１０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が５．５～６．５である、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）１６０±５ｍＭのアルギニンと、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｅ） （１）１５０ｍｇ／ｍｌの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）１６０ｍＭのアルギニン塩酸と、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｆ） （１）１５０ｍｇ／ｍｌの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）１２０ｍＭのアルギニン塩酸および６０ｍＭのマンニトールと、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、或いは
（Ｇ） （１）１５０ｍｇ／ｍｌの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）６０ｍＭのアルギニン塩酸および１６０ｍＭのマンニトールと、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、
（Ｈ） （１）１５０ｍｇ／ｍｌの前記抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）１３０ｍＭ～１６０ｍＭのアルギニン塩酸と、（４）０．０２％のポリソルベート２０と、
を含む抗体製剤から選ばれること、を特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項10】
請求項１～９の何れか１項に記載の抗体製剤を含む送達装置。
【請求項11】
請求項１～９の何れか１項に記載の抗体製剤を含む薬剤充填済み注射器。
【請求項12】
請求項１～９の何れか１項に記載の抗体製剤の、任意のＰＣＳＫ９活性に関連する疾患の治療、予防又は改善のための医薬品の製造における使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は治療性抗体製剤分野に関する。特に、本発明はヒトプロタンパク質転換酵素サブチリシン９（ＰＣＳＫ９）と特異的に結合するヒト化抗体を含む医薬製剤分野に関する。
【背景技術】
【0002】
プロタンパク質転換酵素サブチリシン９（ＰＣＳＫ９）はプロタンパク質転換酵素であり、肝臓細胞表面の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体の分解を促進することで血漿中のＬＤＬコレステロールの含有量を増加させる効果を有し、その発現上昇がヒト血中脂質異常及び心血管関連疾患と密接に関連している。
特許文献１には数種類の抗ＰＣＳＫ９抗体がＰＣＳＫ９生理活性を拮抗することで血中ＬＤＬ濃度を明らかに低下させることが開示されており、高コレステロール血症などの関連疾患の治療分野において重要な将来性を示している。治療性抗ＰＣＳＫ９抗体は、全てのタンパク質治療剤と同様に、製造又は保存において、例えば、凝集、変性、架橋、脱アミド化、異性化、酸化、及び剪断などの物理的及び化学的不安定性の影響を受けている（非特許文献１）。そのため、抗体の物理的及び化学的性質を安定的に保持することができる抗体製剤の開発は大きな課題である。
通常、高コレステロール血症などの関連疾患が慢性疾患であるため、患者が病院外又は自分で投与できる利便性を提供することは非常に重要である。通常、タンパク質治療剤が胃腸以外の経路だけで投与できるが、皮下注射（ＳＣ）又は筋肉注射（ＩＭ）の投与経路は治療コストの低下、及び投与期間における患者と医療従事者の利便性の改善を図ることができる。また、ＳＣ又はＩＭ注射剤に必要とされる小体積（一般的に０．５～２ｍＬ）に関して、その他の製剤の課題が提示された。治療レベルを図るために、一般的に１００ｍｇ～１ｇのタンパク質／剤の高濃度抗体製剤で投与する必要があるためである。ところが、高度に濃縮されたタンパク質製剤は、通常、タンパク質の凝集、沈殿、及び粘度を増加させることから、加工、製造、及び保存期間においてデメリットが発生する。粘度増加により製剤の投与に、例えば、疼痛、灼熱症状、及び薬物送達装置選定の制限などの悪い影響が与えられる（非特許文献２）
そのため、本分野において、特に患者の疼痛を軽減させる低粘度且つ高濃度タンパク質製剤を必要とされている。
特許文献１には数種類の抗ＰＣＳＫ９抗体がＰＣＳＫ９生理活性を拮抗することで血中ＬＤＬ濃度を明らかに低下させることが開示されており、高コレステロール血症などの関連疾患の治療分野において重要な将来性を示している。治療性抗ＰＣＳＫ９抗体は、全てのタンパク質治療剤と同様に、製造又は保存において、例えば、凝集、変性、架橋、脱アミド化、異性化、酸化、及び剪断などの物理的及び化学的不安定性の影響を受けている（非特許文献１）。そのため、抗体の物理的及び化学的性質を安定的に保持することができる抗体製剤の開発は大きな課題である。
通常、高コレステロール血症などの関連疾患が慢性疾患であるため、患者が病院外又は自分で投与できる利便性を提供することは非常に重要である。通常、タンパク質治療剤が胃腸以外の経路だけで投与できるが、皮下注射（ＳＣ）又は筋肉注射（ＩＭ）の投与経路は治療コストの低下、及び投与期間における患者と医療従事者の利便性の改善を図ることができる。また、ＳＣ又はＩＭ注射剤に必要とされる小体積（一般的に０．５～２ｍＬ）に関して、その他の製剤の課題が提示された。治療レベルを図るために、一般的に１００ｍｇ～１ｇのタンパク質／剤の高濃度抗体製剤で投与する必要があるためである。ところが、高度に濃縮されたタンパク質製剤は、通常、タンパク質の凝集、沈殿、及び粘度を増加させることから、加工、製造、及び保存期間においてデメリットが発生する。粘度増加により製剤の投与に、例えば、疼痛、灼熱症状、及び薬物送達装置選定の制限などの悪い影響が与えられる（非特許文献２）
そのため、本分野において、特に患者の疼痛を軽減させる低粘度且つ高濃度タンパク質製剤を必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【文献】国際公開第２０１７／０８８７８２号
【非特許文献】
【0004】
【文献】Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ９６ ：１‐２６，２００７（Ｗａｎｇなど、「製薬科学雑誌」、第９６巻第１‐２６ページ、２００７年））
【文献】Ｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ９３：１３９０‐１４０２，２００４（Ｓｈｉｒｅなど、「製薬科学雑誌」、第９３巻第１３９０‐１４０２ページ、２００４年）。
【発明の概要】
【0005】
本発明はヒトプロタンパク質転換酵素サブチリシン９（ＰＣＳＫ９）と特異的に結合するヒト化抗体を含む医薬製剤を提供する。
一方、本発明は、（１）緩衝液と、（２）安定剤と、（３）抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗原結合フラグメントと、を含む安定的な抗体製剤を提供する。
好ましい一実施形態として、前記安定的な抗体製剤は、非イオン性界面活性剤をさらに含んでもよい。
一方、本発明は、（１）緩衝液と、（２）安定剤と、（３）抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗原結合フラグメントと、を含む安定的な抗体製剤を提供する。
好ましい一実施形態として、前記安定的な抗体製剤は、非イオン性界面活性剤をさらに含んでもよい。
【0006】
一実施形態において、前記緩衝液はヒスチジン緩衝液である。一実施形態において、当該ヒスチジン緩衝液はＬ‐ヒスチジン、及びＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製される。
一実施形態において、当該ヒスチジン緩衝液の濃度は約２０ｎＭである。
一実施形態において、当該ヒスチジン緩衝液の濃度は約２０ｎＭである。
【0007】
一実施形態において、前記安定剤はアルギニン又はその塩、ソルビトール、マンニトール又はショ糖から選ばれる１種類又は複数種類を含む。一実施形態において、前記安定剤はアルギニン塩である。一実施形態において、アルギニン又はその塩の濃度は約５０ｍＭ～約２００ｍＭである。具体的な一実施形態において、アルギニン又はその塩の濃度は約６０ｍＭ、１３０ｍＭ、１６０ｍＭ又は１６５ｍＭである。
【0008】
一実施形態において、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む。具体的な一実施形態において、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。具体的な一実施形態において、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を有する重鎖（ＨＣ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を有する軽鎖（ＬＣ）と、を含む。一実施形態において、前記抗体又は抗原結合フラグメントの濃度は約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬである。具体的な一実施形態において、前記抗体又は抗原結合フラグメントの濃度は約１５０ｍｇ／ｍＬである。
【0009】
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、濃度約０．０１％～約０．０５％のポリソルベート２０又はポリソルベート８０を含む。具体的な一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、濃度約０．０２％のポリソルベート２０を含む。
【0010】
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、（１）約２０ｍＭのヒスチジンで調製された緩衝液と、（２）約５０ｍＭ～約２００ｍＭのアルギニン又はその塩の安定剤と、（３）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体又はその抗原結合フラグメントと、（４）約０．０２％のポリソルベート２０と、を含む。
【0011】
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、４０℃で２８日間保存した後に、少なくとも９４％の抗体が天然立体配座を有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、４０℃で２８日間保存した後に、少なくとも４５％の抗体が主要帯電バリアントを有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、２～８℃で１２ヶ月保存した後に、少なくとも９８％の抗体が天然立体配座を有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、２～８℃で１２ヶ月保存した後に、少なくとも８７％の抗体が主要帯電バリアントを有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、４０℃で２８日間保存した後に、少なくとも４５％の抗体が主要帯電バリアントを有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、２～８℃で１２ヶ月保存した後に、少なくとも９８％の抗体が天然立体配座を有する。
一実施形態において、本発明に係る抗体製剤は、２～８℃で１２ヶ月保存した後に、少なくとも８７％の抗体が主要帯電バリアントを有する。
【0012】
一方、本発明は、本発明に係る何れか１種の抗体製剤を含む送達装置を提供する。
一方、本発明は、本発明に係る何れか１種の抗体製剤を含む薬剤充填済み注射器を提供する。
一方、本発明は、本発明に係る何れか１種の抗体製剤を含む送達装置又は薬剤充填済み注射器を用いて、任意のＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害を治療、予防及び改善するための方法を提供する。
一方、本発明は、本発明に係る何れか１種の抗体製剤を含む薬剤充填済み注射器を提供する。
一方、本発明は、本発明に係る何れか１種の抗体製剤を含む送達装置又は薬剤充填済み注射器を用いて、任意のＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害を治療、予防及び改善するための方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はその抗原結合部分の安定的な水性液体薬物製剤が、本技術分野における周知の製剤と比べて、改善された性質を有すること、を特徴とする。本発明に係る高濃度製剤は、高安定性と低粘度を有する、という予想外の特徴を持っている。
【0015】
本発明は具体的な方法、試薬、化合物、組成物又は生体系に限らず、当然、上記に対して変化を行うことができる。本願で使用される用語は、具体的な実施形態を説明するためのものに過ぎず、限定を加えるためのものではない。別途で明確な説明がない限り、本明細書及び添付の請求項で使用される「１つ」、「１種類」及び「当該」の単数表現は複数の意味を含む。従って、例えば、「１種類のポリペプチド」は、２種類以上のポリペプチドなどの組合せを含む。
【0016】
本願で使用される「約」は、測定可能な数値（例えば、数量、持続時間など）を表す場合、開示された方法に適用できるように、±２０％又は±１０％のような具体的な数値を除く変化、例えば、±５％、±１％、±０．１％などを含むものとする。
【0017】
別途で定義しない限り、本願で使用される全ての技術と科学用語は当業者の一般的な理解と同じ意味を有する。本願で開示された方法及び材料と類似又は同様の如何なるものは本発明の実践に適用できるが、本願には好ましい材料及び方法が説明された。本発明の請求項を説明及び請求する際に、下記の用語を使用する。
【0018】
「治療活性抗体」又は「治療性抗体」とは、治療目的に利用される、即ち、受検者障害の治療に利用される抗体である。ただし、治療性タンパク質が治療目的に利用できるが、インビトロ研究にも利用できることから、本発明は治療用途に限定しない。
【0019】
用語「薬物製剤」又は「製剤」とは、活性成分の生理活性を有効にする形態が採用されるとともに、当該製剤の投与を受ける受検者に対して許容されない毒性があるその他の成分を含まない製品である。当該製剤は滅菌されたものである。
【0020】
用語「液体製剤」とは、液体状態である製剤であり、再懸濁される凍結乾燥製剤ではない。本発明に係る液体製剤は安定的に保存できるとともに、その安定性が凍結乾燥（又はその他の状態変換方法、例えば、噴霧乾燥）によるものではない。
【0021】
用語「水性液体製剤」とは、水を溶媒とする液体製剤である。一実施形態において、水性液体製剤とは、凍結乾燥、噴霧乾燥及び／又は冷凍を必要とせず、安定性（例えば、科学的及び／又は物理的安定性及び／又は生理活性）が維持できる製剤である。
【0022】
用語「賦形剤」とは、必要な特性（例えば、コンシステンシー、高安定性）の提供、及び／又は浸透圧の調製のために製剤に添加できる試薬である。一般的に使われる賦形剤の実例は、糖類、ポリオール、アミノ酸、界面活性剤、及びポリマーを含むが、これらに限定されない。
【0023】
本明細書において、用語「ｐＨ値が約５．５～約６．５である緩衝剤」とは、その酸／塩基共役成分により当該試薬を含む溶液のｐＨ値変化が抑制される試薬である。本発明に係る製剤に使用される緩衝液は、ｐＨ値が約５．５～約６．５範囲内、又は約５．５～約６．０範囲内であってもよい。一実施形態において、ｐＨ値が約６．０である。
【0024】
本明細書において、ｐＨ値を当該範囲内に制御する「緩衝剤」の実例は、酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸塩（例えば、コハク酸ナトリウム）、グルコン酸、ヒスチジン及び／又はその塩、メチオニン、クエン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩／リン酸塩、イミダゾール、これらの組合せ、及びその他の有機酸緩衝剤を含む。一実施形態において、緩衝剤はタンパク質ではない。一実施形態において、当該緩衝剤はヒスチジン及び／又はその塩であり、Ｌ‐ヒスチジン及び／又はその塩が好ましい。通常、製剤における緩衝剤の濃度は５～１００ｍＭの範囲内であってもよく、或いは、約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、又は、例えば、１０～３０ｍＭ又は１５～２５ｍＭなど、上記何れか２つの数値を基数とする範囲内である。一実施形態において、緩衝剤の濃度は約２０ｍＭである。
【0025】
「ヒスチジン緩衝剤」はヒスチジン及び／又はその塩の緩衝剤を含む。ヒスチジンの塩はヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩、ヒスチジンリン酸塩、及びヒスチジン硫酸塩の１種類又は複数種類である。本発明の一実施形態において、ヒスチジン緩衝剤は、１～１０ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１０～２０ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製されたヒスチジン緩衝剤である。一実施形態において、ヒスチジン製剤は、４．５ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１５．５ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製された、ｐＨ値６．０のヒスチジン緩衝剤である。一実施形態において、ヒスチジン製剤は、９．５ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１０．５ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製された、ｐＨ値５．５のヒスチジン緩衝剤である。一実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：１～１：４で調製される。
【0026】
本明細書で使用される用語「界面活性剤」は、一般的に、例えば、抗体凝集の低減又は製剤における粒子状物質形成の最小化を図るために、抗体が空気／溶液界面の張力、溶液／表面の張力の影響を受けないようにすることで、タンパク質を保護する試薬である。例示された界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、ポリエチレン‐ポリプロピレン共重合体、ポリエチレン‐ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン‐ステアリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ‐Ｘ）、ポリオキシエチレン‐ポリプロピレンオキシド共重合体（プルロニック（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの、非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、当該非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０である。一実施形態において、ポリソルベート２０の濃度は約０～０．１％（ｗ／ｖ）である。一実施形態において、ポリソルベート２０の濃度は約０．０２％（ｗ／ｖ）である。一実施形態において、当該非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０である。一実施形態において、ポリソルベート８０の濃度は約０～０．１％（ｗ／ｖ）である。一実施形態において、ポリソルベート８０の濃度は約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【0027】
本明細書で使用される用語「安定剤」は抗体及びその他のタンパク質の凝集を低減させる。例示された安定剤は、ヒト血清アルブミン（ｈｓａ）、ウシ血清アルブミン（ｂｓａ）、α‐カゼイン、グロブリン、α‐ラクトアルブミン、ＬＤＨ、リゾチーム、ミオグロビン、オボアルブミン、Ｒｎａｓｅ Ａを含むが、これらに限定されない。安定剤は、例えば、アルギニン、グリシン、アラニン（α‐アラニン、β‐アラニン）、ベタイン、ロイシン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、４‐ヒドロキシプロリン、サルコシン、γ‐アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、オパイン（ｏｐｉｎｅｓ）（アラノピン、オクトピン、ストロンビン（ｓｔｒｏｍｂｉｎｅ））、トリメチルアミンのＮ‐酸化物（ＴＭＡＯ）などの、アミノ酸、その代謝産物、及びその塩、例えばその塩酸塩、をさらに含む。安定剤は、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＣａＣｌ２、ショ糖、マンニトール、ソルビトールなどの、糖、ポリオール、及びその代謝産物などをさらに含む。一実施形態において、当該安定剤はマンニトールである。一実施形態において、当該安定剤はショ糖である。一実施形態において、当該安定剤はソルビトールである。一実施形態において、当該安定剤はアミノ酸又はその塩である。一実施形態において、当該アミノ酸はアルギニン又はアルギニン塩酸である。一実施形態において、アルギニン又はアルギニン塩酸の濃度は約２０～２００ｍＭである。一実施形態において、アルギニン又はアルギニン塩酸の濃度は約５０～２００ｍＭである。一実施形態において、アルギニン又はアルギニン塩酸の濃度は約６０ｍＭ、１３０ｍＭ、１６０ｍＭ又は１６５ｍＭである。
【0028】
本明細書で使用される用語「粘度」は「動粘度」又は「絶対粘度」であってもよい。「動粘度」とは、流体が重力の影響で発生した流動抵抗を測定するための指標である。「絶対粘度」とは、粘性係数や粘性率とも呼ばれ、動粘度と流体密度の積（絶対粘度＝動粘度×密度）である。動粘度のディメンションはＬ２／Ｔである。ただし、Ｌは長さで、Ｔは時間である。通常、動粘度はセンチストークス（ｃＳｔ）で表す。動粘度の国際単位系単位はｍｍ２／ｓであり、即ちｌｃＳｔである。絶対粘度はセンチポアズ（ｃＰ）で表す。絶対粘度の国際単位系単位はミリパスカル秒（ｍＰａ・ｓ）である。１ｃＰ = １ｍＰａ・ｓである。
【0029】
本発明に係る液体型製剤について、本明細書で使用される用語「低レベル粘度」とは約１５センチポアズ（ｃＰ）より低い絶対粘度である。例えば、標準粘度測定技術で測定する場合、当該製剤の絶対粘度が約１５ｃＰ、約１４ｃＰ、約１３ｃＰ、約１２ｃＰ、約１１ｃＰ、約１０ｃＰ、約９ｃＰ、約８ｃＰ、又はさらに低い粘度であれば、本発明に係る液体型製剤は「低粘度」と見なされる。本発明に係る液体型製剤について、本明細書で使用される用語「中レベル粘度」とは約３５ｃＰ～約１５ｃＰの絶対粘度である。例えば、標準粘度測定技術で測定する場合、当該製剤の絶対粘度が約３４ｃＰ、約３３ｃＰ、約３２ｃＰ、約３１ｃＰ、約３０ｃＰ、約２９ｃＰ、約２８ｃＰ、約２７ｃＰ、約２６ｃＰ、約２５ｃＰ、約２４ｃＰ、約２３ｃＰ、約２２ｃＰ、約２１ｃＰ、約２０ｃＰ、約１９ｃＰ、約１８ｃＰ、約１７ｃＰ、約１６ｃＰ、又は約１５ｃＰであれば、本発明に係る液体型製剤は「中粘度」と見なされる。本発明に係る液体型医薬製剤の一部の実施形態において、低レベルから中レベルの粘度を示している。本発明の一実施形態において、濃度約１００～２００ｍＭの抗体と、６０～１６５ｍＭのアルギニン又はその塩と、を一緒に調製することで、低粘度の液体型製剤を得ることが、意外的に発見された。一実施形態において、アルギニン又はその塩により、例えば、ショ糖、ソルビトール、マンニトールなどのその他の張化剤を含む製剤の粘度を明らかに低下させることが、さらに発見された。
【0030】
「等張」とは、当該製剤がヒト血液とほぼ同じ浸透圧を有することである。等張製剤は一般的に約２５０～３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。蒸気圧式又は氷点降下方式の浸透圧計で等張性を測定する。
【0031】
「安定的な」製剤とは、製造期間及び／又は保存期間において含まれる抗体の物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生理活性が基本的に保持される製剤である。たとえ、一定の期間で保存した後、含まれる抗体の化学構造又は生理機能が１００％保持できなくても、医薬製剤も安定的である。一定の期間で保存した後、抗体構造又は機能が約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％保持できるのであれば、「安定的」と見なされる場合がある。タンパク質安定性を測定するための各解析技術が本技術分野において獲得できるものであり、「ペプチド及びタンパク質の薬物送達」（Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）２４７‐３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編集長，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１），及びＪｏｎｅｓ，Ａ．（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９‐９０に記載されている（両者を参考として引用）。
【0032】
製剤は、一定の温度及び期間で保存した後、その中に残された天然抗体のパーセンテージを測定すること（及びその他の方法）により、その安定性を測定することができる。その他の方法以外に、天然抗体のパーセンテージはサイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー[ＳＥ‐ＨＰＬＣ]）により測定できるが、「天然」とは凝集されていない、及び分解されていないことである。一実施形態において、タンパク質の安定性は、分解された（例えば、断片化）及び／又は凝集されたタンパク質を低いパーセンテージで有する溶液における、タンパク質単体のパーセントにより決まられる。一実施形態において、製剤は、室温、約２５～３０℃又は４０℃で、少なくとも２週間、少なくとも２８日間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、又はさらに長期間で、多くとも約６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％を超えない範囲で凝集された抗体を、安定的に保存できる。
【0033】
イオン交換期間における、抗体の主要留分（「主要荷電形態」）よりやや酸性である留分の中で遷移する抗体（「酸性形態」）のパーセンテージを測定すること（及その他の方法）により、安定性を測定することができるが、安定性は酸性形態抗体のパーセンテージに反比例する。その他の方法以外に、「酸性化」抗体のパーセンテージは、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、カチオン交換高速液体クロマトグラフィー[ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ]）により測定できる。一実施形態において、許容可能な安定性とは、当該製剤を一定の温度及び期間で保存した後、測定された酸性形態の抗体が多くとも約４９％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％を超えないことである。安定性を測定する前に保存された一定の期間は、少なくとも２週間、少なくとも２８日間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、又はさらに長期間である。安定性を評価する際に、医薬製剤を保存できる一定の温度は、約‐８０℃～約４５℃範囲内の温度であり、例えば、約‐８０℃、約‐３０℃、約‐２０℃、約０℃、約２～８℃、約５℃、約２５℃、又は約４０℃である。
【0034】
抗体に対して色及び／又は清澄度の肉眼観察、又はＵＶ光散乱又は穴径排除クロマトグラフィーによる測定を行った場合、例えば、凝集、沈殿及び／又は変性の痕跡が基本的に現れなければ、前記抗体は当該薬物製剤において「その物理的安定性が保持される」。凝集とは、単独の分子又は複合物が共有結合又は非共有結合により結合して凝集体を形成する過程である。凝集は見える沈殿物が形成されるまで行ってもよい。
【0035】
製剤の例えば、物理的安定性などの安定性は、サンプルの表面消衰係数（吸光度又は光学濃度）の測定など、本技術分野における周知の方法により評価する。この消衰係数の測定は製剤の濁度と関わる。製剤の濁度の一部は溶液に溶解されるタンパク質の固有性質によるものであり、通常、比濁法により測定され、比濁法の濁度単位（ＮＴＵ）で表す。
【0036】
例えば、溶液における１種類又は複数種類の成分の濃度（例えば、タンパク質及び／又は塩の濃度）に応じて変化する濁度レベルは、製剤の「混濁」又は「混濁外観」とも呼ばれる。濁度レベルは既知濁度の懸濁液の検量線を参考にして算出される。医薬組成物の濁度レベルを測定するための対比用標準品は「欧州薬局方」基準に従ってもよい（「欧州薬局方」（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）、第四版、「欧州薬品品質委員会指令」（Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅ）（ＥＤＱＭ）、Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ、Ｆｒａｎｃｅ）。「欧州薬局方」基準によれば、清澄溶液は「欧州薬局方」基準に基づく約３の対比用懸濁液より低い又は同じ濁度を有する溶液と定義される。比濁法による濁度測定は、結合が発生しない又は非理想効果の場合におけるレイリー散乱を測定することができるが、レイリー散乱が一般的に濃度に従って直線的に変化する。物理的安定性を評価するためのその他の方法は本技術分野において周知である。
【0037】
抗体は所定タイミングにおける化学的安定性で下記に定義されるその生理活性が依然として保持されるのであれば、前記抗体は薬物製剤において「その化学的安定性が保持される」。例えば、抗体の化学的変化を測定又は定量的にすることで化学的安定性を評価する。サイズ変化（例えば、短く切断）を含む化学的変化は、例えば、穴径排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ及び／又はマトリックス補助レーザー脱離イオン化法／飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ ＭＳ）により評価する。電荷変化（例えば、脱アミド又は酸化の結果として発生）を含むその他の化学的変化は、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価する。
【0038】
薬物製剤における抗体がその予期目的に対して生理活性を有するのであれば、前記抗体は薬物製剤において「その生理活性が保持される」。例えば、製剤を例えば、５℃、２５℃、４５℃などの温度及び一定の期間（例えば、１～１２ヶ月）で保存した後、当該製剤に含まれる抗ＰＣＳＫ９抗体とＰＣＳＫ９と結合する親和力が保存前の前記抗体の結合親和力の少なくとも９０％、９５％又はそれ以上であれば、本発明に係る製剤は安定的である。結合親和力は例えばＥＬＩＳＡ又はプラズマ共鳴技術により測定される。
【0039】
本発明の実施形態において、薬理学の観点から、抗体の「治療有効量」又は「有効量」とは、抗体で有効的に治療できる障害についてその症状の予防、治療又は軽減に対して有効である量である。
【0040】
用語「受検者」又は「患者」とは哺乳類動物の生体を含む。受検者／患者の実例は、ヒト、及び、例えば、ヒト以外の霊長類、イヌ、乳牛、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びヒト以外の遺伝子組換え動物などのヒト以外の哺乳類動物を含む。本発明の特定の実施形態において、受検者はヒトである。
【0041】
（抗ＰＣＳＫ９抗体）
本発明に係る製剤は、ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。本明細書で使用される用語「ＰＣＳＫ９」はヒトプロタンパク質転換酵素であり、サブチリシン族を分泌するプロテアーゼＫ亜族に属される。既存文献では、ＰＣＳＫ９による低密度リポタンパク質粒子受容体との結合及びその分解の促進により、血漿ＬＤＬレベルが上昇される。
本発明に係る製剤は、ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。本明細書で使用される用語「ＰＣＳＫ９」はヒトプロタンパク質転換酵素であり、サブチリシン族を分泌するプロテアーゼＫ亜族に属される。既存文献では、ＰＣＳＫ９による低密度リポタンパク質粒子受容体との結合及びその分解の促進により、血漿ＬＤＬレベルが上昇される。
【0042】
本明細書で使用される用語「抗体」は完全な抗体分子及びその抗原結合フラグメントを含む。本明細書で使用される用語抗体の「抗原結合部分」又は「抗原結合フラグメント」（或いはその略称「抗体部分」又は「抗体フラグメント」）とは、ヒトＰＣＳＫ９又はそのエピトープと特異的に結合する能力が保持されている、抗体における１つ又は複数のフラグメントである。
【0043】
本明細書で使用される用語「全長抗体」とは４本のペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子であり、２本の重（Ｈ）鎖（全長の場合は約５０～７０ｋＤａ）と２本の軽（Ｌ）鎖（全長の場合は約２５ｋＤａ）はジスルフィド結合によりお互いに連結される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略される）と重鎖定常領域（本明細書においてＣＨと略される）からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略される）と軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ領域とＶＬ領域は、高可変性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、その間に保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域と、さらに細かく区分される。各ＶＨ領域又はＶＬ領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ基末端からカルボキシル基末端まで配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。重鎖と軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫グロブリンが宿主組織又は因子（免疫系の各細胞（例えば、エフェクター細胞）と代表的な補体系の第一成分（Ｃ1ｑ）を含む）に対する結合を仲介することができる。
【0044】
本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」とは抗体可変配列における相補性決定領域である。各重鎖と軽鎖の可変領域に３つのＣＤＲが存在するが、各重鎖と軽鎖の可変領域に対して、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と名づけられた。これらのＣＤＲは系によってそれぞれの正確な境界が定義された。Ｋａｂａｔ（同上）により説明された系は、抗体の任意の可変領域に適用できる明確な残基番号系が提供されただけでなく、３つのＣＤＲの正確な残基境界が定義された。これらのＣＤＲはＫａｂａｔ ＣＤＲとも呼ばれる。Ｋａｂａｔ ＣＤＲのある部分がアミノ酸配列レベルに関して明らかな多様性を示しているが、ほぼ同じペプチド骨格構造を持っていること（Ｃｈｏｔｈｉａなど、（１９８７）Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１‐９１７；Ｃｈｏｔｈｉａなど、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７‐８８３）は、Ｃｈｏｔｈｉａなどにより発見された。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重なるＣＤＲのその他の境界はＰａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ Ｊ． ９：１３３‐１３９及びＭａｃＣａｌＩｕｍ（１９９６） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２（５）：７３２‐４５により説明された。さらに、その他のＣＤＲの境界の定義は本明細書で説明された何れか系に厳重に従わない可能性があるが、予測又は実験により特定の残基、残基組合わせ又はＣＤＲ全体が抗原結合に対して明確な影響を与えていないことが発見されたことから、当該その他のＣＤＲの境界が短縮又は延長されたにも関わらず、依然としてＫａｂａｔ ＣＤＲと重なる。本明細書で使用される方法は、一部の実施形態においてＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用したにも関わらず、これらの何れか系により定義されたＣＤＲを使用してもよい。
【0045】
本発明に係る抗ＰＣＳＫ９抗体又はその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１７／０８８７８２号に説明された何れか１種類の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む。一実施形態において、本発明に係る方法及び組成物で使用される抗体は抗体ＪＳ００２由来の６つのＣＤＲを含む。
【0046】
本明細書に係る「抗原結合フラグメント」は抗体のフラグメント又は誘導体を含むが、通常、親抗体の抗原結合領域又は可変領域（例えば、１種類又は複数種類のＣＤＲ）の少なくとも１つのフラグメントを含み、親抗体の少なくとも一部の結合特異性を保持している。抗原結合フラグメントの実例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、及びＦｖフラグメント、二重抗体、線形抗体、ｓｃ‐Ｆｖなどの一本鎖抗体分子、抗体フラグメントから形成されるナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、及び多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。抗原結合活性がモル濃度で示される場合、結合フラグメント又は誘導体は、通常、その抗原結合活性の少なくとも１０％を保持する。結合フラグメント又は誘導体が親抗体の抗原結合親和力の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％又はより高い親和力を保持することは好ましい。抗体の抗原結合フラグメントは、その生理活性を明らかに変えない保存又は非保存アミノ酸置換（抗体の「保存バリアント」又は「機能性保存バリアント」をいう）を含むことが期待される。
【0047】
一実施形態において、本発明に係る抗ＰＣＳＫ９抗体又はその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む。
【0048】
一実施形態において、本発明に係る抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
【0049】
本明細書の実施例で使用される非限定的、代表的な抗体は「ＪＳ００２」と呼ばれ、ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合するヒト化完全抗体であり、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９である重鎖と、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０である軽鎖と、を含む。
【0050】
（医薬製剤）
本発明に係る製剤は高濃度の活性抗体を含む、高安定性、低粘度の液体性製剤である。特に、本発明において、アルギニン塩を含む製剤の粘度が張化剤を含む調製液より明らかに低いことは発見された。また、調製液に含まれるアルギニン塩により張化剤を含む調製液が明らかに低下される。
本発明に係る製剤は高濃度の活性抗体を含む、高安定性、低粘度の液体性製剤である。特に、本発明において、アルギニン塩を含む製剤の粘度が張化剤を含む調製液より明らかに低いことは発見された。また、調製液に含まれるアルギニン塩により張化剤を含む調製液が明らかに低下される。
【0051】
本発明に係る製剤は、ヒトＰＣＳＫ９と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、緩衝液、及び安定剤を含む。本発明に係る製剤のｐＨ値が５．５～６．５の範囲内であることが好ましい。
【0052】
本発明に係る製剤において、抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントは、通常、１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの範囲である。一実施形態において、本発明に係る製剤は１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又は抗原結合フラグメントを含む。好ましい実施形態において、本発明に係る製剤に含まれる抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む。前記抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、含むことが更に好ましい。前記抗体又は抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を有する重鎖（ＨＣ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を有する軽鎖（ＬＣ）と、を含むことが更に好ましい。
【0053】
本発明に係る製剤において、緩衝液は酢酸塩緩衝液又はヒスチジン緩衝液であってもよく、ヒスチジン緩衝液が好ましい。緩衝液のｐＨ値は５．５～６．０の範囲であることが好ましい。本発明に係るヒスチジン緩衝液はヒスチジンと本明細書に係るヒスチジンの塩を含むことが好ましい。通常、本発明で使用されるヒスチジン緩衝液は、１～１０ｍＭのヒスチジンと１０～２０ｍＭのヒスチジン塩（例えば、一塩酸塩）を含む。ヒスチジン緩衝液において、ヒスチジンとヒスチジンの塩のモル比が１：１～１：４の範囲内であることが好ましい。本発明に係る製剤において、緩衝液の濃度は１０～５０ｍＭであってもよく、１５～２５ｍＭが好ましく、例えば、２０ｍＭである。
【0054】
本発明に係る製剤において、安定剤はアルギニン又はその塩、ソルビトール、マンニトールとショ糖の１種類又は複数種類から選ばれ、アルギニン塩が好ましい。例示されたアルギニン塩はアルギニン塩酸を含む。薬学的に安定剤として適用されるその他のアルギニン塩も本発明に使用されてもよい。通常、本発明に係る製剤に含まれる安定剤の濃度は５０ｍＭ～３００ｍＭの範囲内であってもよいが、例えば、５０～２００ｍＭ、１３０～２００ｍＭ又は１６０～２５０ｍＭである。単独でアルギニン塩を使用する場合、その製剤における濃度は５０～２００ｍＭであってもよいが、例えば、１３０～２００ｍＭの範囲内である。一実施形態において、安定剤はアルギニン塩とマンニトール又はソルビトールの混合物である。アルギニン塩とマンニトール又はソルビトールの組合せを使用する場合、製剤におけるアルギニン塩の濃度は５０～１５０ｍＭの範囲内であってもよく、マンニトール又はソルビトールの濃度は５０～２００ｍＭの範囲内であってもよいが、２種類の安定剤の総濃度は５０ｍＭ～３００ｍＭであってもよく、例えば、５０ｍＭ～２５０ｍＭの範囲内である。
【0055】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５であるヒスチジン緩衝液と、（３）アルギニン塩と、を含む。
【0056】
本発明の一実施形態において、本発明に係る製剤は本明細書に係る非イオン性界面活性剤をさらに含む。通常、非イオン性界面活性剤を含む場合、その製剤における濃度は０．１％（ｗ／ｖ）を超えないが、例えば、０．０１～０．０５％（ｗ／ｖ）である。好ましい非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及び／又はポリソルベート８０を含むが、特に好ましい濃度は約０．０２％である。
【0057】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約１０～５０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約５０ｍＭ～約２００ｍＭのアルギニン塩と、（４）約０％～約０．１％の非イオン性界面活性剤と、を含む。
【0058】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）約１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約６０±５ｍＭ、１３０±５ｍＭ又は１６０±５ｍＭのアルギニン塩と、（４）約０％～約０．１％の非イオン性界面活性剤と、を含む。
【0059】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）約１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約１６０±５ｍＭのアルギニン塩と、（４）約０．０２％のポリソルベート２０と、を含む。
【0060】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を有するＨＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を有するＨＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を有するＨＣＤＲ３と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を有するＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を有するＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を有するＬＣＤＲ３と、を含む、約１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約１６０±５ｍＭのアルギニンと、（４）約０．０２％のポリソルベート２０と、を含む。
【0061】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、ｐＨ値が５．５～６．５であり、（１）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、約１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約１６０±５ｍＭのアルギニンと、（４）約０．０２％のポリソルベート２０と、を含む。
【0062】
一実施形態において、本発明に係る製剤は、（１）アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９である重鎖と、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０である軽鎖と、を含む、全長抗体である、約１５０±１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の抗体又はその抗原結合フラグメントと、（２）ｐＨ値が約５．５～６．５である、約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、（３）約１６０±５ｍＭのアルギニンと、（４）約０．０２％のポリソルベート２０と、を含む。
【0063】
（薬物製剤の容器及び投与方法）
本発明に係る薬物製剤は、薬物及びその他の医薬組成物の保存に適用できる任意の容器に保存されてもよい。例えば、本発明に係る薬物製剤は、小瓶、バイアル、注射器、カートリッジ、又は瓶などの、一定の体積を持つ、密封される殺菌済みのプラスチック製又はガラス製容器に保存される。各種類の小瓶は本発明に係る製剤の保存に使用されてもよいが、例えば、透明及び不透明（例えば、琥珀色）のガラス製又はプラスチック性小瓶を含む。同様に、各種類の注射器を用いて、本発明に係る薬物製剤を収納及び／又は投与することができる。
本発明に係る薬物製剤は、薬物及びその他の医薬組成物の保存に適用できる任意の容器に保存されてもよい。例えば、本発明に係る薬物製剤は、小瓶、バイアル、注射器、カートリッジ、又は瓶などの、一定の体積を持つ、密封される殺菌済みのプラスチック製又はガラス製容器に保存される。各種類の小瓶は本発明に係る製剤の保存に使用されてもよいが、例えば、透明及び不透明（例えば、琥珀色）のガラス製又はプラスチック性小瓶を含む。同様に、各種類の注射器を用いて、本発明に係る薬物製剤を収納及び／又は投与することができる。
【0064】
薬物製剤は、例えば、注射（例えば、皮下、静脈、筋肉、腹膜など）、又は経皮、粘膜、鼻、呼吸道及び／又は口腔などの胃腸以外の経路で患者に投与される。複数種類の繰返し使用可能な注射ペン及び／又は自動注射器の送達装置で皮下経路により本発明に係る薬物製剤を投与する。本発明に係る医薬組成物の皮下投与に使用される使い捨て注射ペン及び／又は自動注射器送達装置の実例は、幾つかの例として、ＳＯＬＯＳＴＡＲTM注射ペン（ｓａｎｏｆｉ‐ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮTM（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ＫＷＩＫＰＥＮTM（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫTM自動注射器（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴTM（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，ドイツ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、及びＨＵＭＩＲＡTM注射ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）を含むが、これらに限定されない。
【0065】
微量輸液装置が本発明に係る製剤の送達に使用される用途は本明細書に含まれる。本明細書で使用される用語「微量輸液装置」は、長時間（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０分間又はさらに長い時間）で大用量（例えば、約２．５ｍＬ又はさらに多い容量）の治療製剤を緩やかに投与するための皮下送達装置である。例えば、Ｕ．Ｓ．６，６２９，９４９、ＵＳ６，６５９，９８２とＭｅｅｈａｎなど、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ４６：１０７‐１１６（１９９６）を参考にする。微量輸液装置は特に、高濃度（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍｇ／ＭＬ又はさらに高い濃度）及び／又は粘着溶液に含まれる大用量の治療たんぱく質の送達に使用される。
【0066】
（医薬製剤の治療用途）
その他の用途以外に、本発明に係る医薬製剤は、ＰＣＳＫ９により仲介される疾患又は障害を含む、何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防又は改善に使用される。本発明に係る医薬製剤により治療又は予防される代表的、非限定的な疾患及び障害は各種類の血中脂質異常症を含むが、例えば、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、１ ３／４脂血症、家族性１ ３／４脂血症、異常ＩＩＩ型リポタンパク血症、家族性異常ＩＩＩ型リポタンパク血症、１ ３／４トリグリセリド血症、及び家族性高トリグリセリド血症である。
本発明は本発明に係る何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防及び改善に使用される薬剤の調製における本発明に係る抗体製剤の適用を含む。本発明に係る何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防又は改善に使用される本明細書に係る抗体製剤をさらに含む。
その他の用途以外に、本発明に係る医薬製剤は、ＰＣＳＫ９により仲介される疾患又は障害を含む、何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防又は改善に使用される。本発明に係る医薬製剤により治療又は予防される代表的、非限定的な疾患及び障害は各種類の血中脂質異常症を含むが、例えば、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、１ ３／４脂血症、家族性１ ３／４脂血症、異常ＩＩＩ型リポタンパク血症、家族性異常ＩＩＩ型リポタンパク血症、１ ３／４トリグリセリド血症、及び家族性高トリグリセリド血症である。
本発明は本発明に係る何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防及び改善に使用される薬剤の調製における本発明に係る抗体製剤の適用を含む。本発明に係る何れかのＰＣＳＫ９活性に関連する疾患又は障害の治療、予防又は改善に使用される本明細書に係る抗体製剤をさらに含む。
【0067】
以下では、実施形態を利用して本発明の詳細を説明するが、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書は既に本発明について詳細に説明し、その具体的実施例形態も開示するが、当業者にとって、本発明の要旨を逸脱しない範囲で本発明の具体的実施形態に対して様々な変化及び改善を行うことが明らかである。
【実施例】
【0068】
実施例１：緩衝液系及びｐＨ値の選定試験
液体型抗体製剤において、緩衝液系及びｐＨ値が抗体の安定性に大きな影響を与えており、特別な物理的及び化学的性質を有する抗体はそれぞれ最適な緩衝液の種類及びｐＨ値を持っている。最適な緩衝液系及びｐＨ値を選定することで、臨床適用に適用できるように本発明に開示された抗ＰＣＳＫ９抗体が最適な安定性を持つようにする。
液体型抗体製剤において、緩衝液系及びｐＨ値が抗体の安定性に大きな影響を与えており、特別な物理的及び化学的性質を有する抗体はそれぞれ最適な緩衝液の種類及びｐＨ値を持っている。最適な緩衝液系及びｐＨ値を選定することで、臨床適用に適用できるように本発明に開示された抗ＰＣＳＫ９抗体が最適な安定性を持つようにする。
【0069】
本研究は約１５０ｍｇ／ｍＬ濃度のＪＳ００２を対象とし、１３０ｍＭのアルギニン塩酸を添加物として実施したものである。透析バッグで透析と液交換を行い、ＪＳ００２たんぱく質を対応する処方に置き、サンプルを密封された遠心管に入れて緩衝液を選定する。酢酸ナトリウム緩衝液及びヒスチジン緩衝液（ヒスチジンとヒスチジン塩酸のモル比が１：１）の２種類を選定して、ｐＨ値を５．０～６．０に調製する（例えば、表１に示される）。サンプルを４０℃／ＲＨ環境に置き、それぞれ２週目及び４週目に取り出して分析と測定を行った。たんぱく質分解の主要経路は凝集物、分解製品及び帯電バリアントの形成である。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）により天然形態（たんぱく質単体）と凝集形態のＪＳ００２のパーセンテージが測定され、カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ）により酸性と塩基性形態のｍＡｂのパーセンテージが測定される。試験開始（０Ｗ）、静置２週間（２Ｗ）及び静置４週間（４Ｗ）のＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量及びＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量を使って直線当てはめを行い、下降傾斜度（％／週間）を計算し、ＪＳ００２抗体安定性への各緩衝液系及び各ｐＨ値による影響を考察した。結果は表２に示される。
【0070】
【表1】
【0071】
【表2】
【0072】
表２に示されるように、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ実験により測定されたところ、抗体がｐＨ値５．５～６．０範囲内の製剤において比較的に安定的に保持することができるが、高温４０℃で４週間静置後、サンプル単体含有量が９４％以上であり、単体純度の下降傾斜度が１．５％／週間以下であり、サンプルの主要電荷が４５％以上であり、主要電荷の下降傾斜度が１０％／週間以下である。緩衝系がヒスチジン緩衝液であり、ｐＨ値が６．０（処方番号３）である場合、高温４０℃で４週間静置後、サンプルの単体純度が最も高く（約９７％）、単体純度の下降傾斜度が僅か０．５７％／週間である。上記の結果によれば、ｐＨ値５．５～６．０の２０ｍＭヒスチジン緩衝剤を液体型ＪＳ００２製剤の開発に使用する。
【0073】
実施例２：安定剤の選定試験
抗体安定性と粘度への各賦形剤による影響をさらに研究するために、ショ糖、アルギニン塩酸、ソルビトール又はマンニトールの１種類又はその組合せの製剤を使って対比試験を実施した。即ち、上記各賦形剤又はその組合せを、約１５０ｍｇ／ｍＬ ＪＳ００２が含まれる２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ値５．５又は６．０）にそれぞれ入れるが、具体的な処方情報が表３に示される。各処方製剤を分注してから４０℃で静置し、それぞれ２週目及び４週目で取り出して、抗体の安定性及び調製液の粘度の分析と測定を行った。分子排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）によりＪＳ００２単体含有量の変化が測定され、弱カチオン高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ）によりＪＳ００２電荷主ピーク含有量が測定され、さらに４週目で標準方法により製剤の粘度が測定される。表４に示されるように、処方にショ糖、アルギニン塩酸、ソルビトール又はマンニトールの１種類又はその組合せが含まれる場合、抗体が比較的に強い熱安定性を有し、即ち、製剤が高温４０℃で４週間静置された後、サンプル単体含有量が９８％以上であり、主要電荷が５１％以上占める。
抗体安定性と粘度への各賦形剤による影響をさらに研究するために、ショ糖、アルギニン塩酸、ソルビトール又はマンニトールの１種類又はその組合せの製剤を使って対比試験を実施した。即ち、上記各賦形剤又はその組合せを、約１５０ｍｇ／ｍＬ ＪＳ００２が含まれる２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ値５．５又は６．０）にそれぞれ入れるが、具体的な処方情報が表３に示される。各処方製剤を分注してから４０℃で静置し、それぞれ２週目及び４週目で取り出して、抗体の安定性及び調製液の粘度の分析と測定を行った。分子排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）によりＪＳ００２単体含有量の変化が測定され、弱カチオン高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ）によりＪＳ００２電荷主ピーク含有量が測定され、さらに４週目で標準方法により製剤の粘度が測定される。表４に示されるように、処方にショ糖、アルギニン塩酸、ソルビトール又はマンニトールの１種類又はその組合せが含まれる場合、抗体が比較的に強い熱安定性を有し、即ち、製剤が高温４０℃で４週間静置された後、サンプル単体含有量が９８％以上であり、主要電荷が５１％以上占める。
【0074】
特に、各データを総合的に分析したところ、アルギニン塩しか含まない製剤の場合、抗体の安定性が最も強く、粘度が最も低い。具体的に、高温４０℃で４週間静置後、アルギニン塩しか含まない製剤群は、（１）抗体構造の安定性について、抗体単体純度の下降傾斜度が０．１％／週間と最も低く、最も高いショ糖群の約２５～３０％であり、抗体の単体純度が９８．８％と高く、抗体安定性へのショ糖、ソルビトール又はマンニトールによる影響がある程度で改善された；（２）抗体電荷の安定性について、抗体主要電荷の下降傾斜度が６．２５％／週間と最も低く、主要電荷が６１．２％と高い；（３）製剤の粘度について、アルギニンしか含まない製剤の粘度が５ｃＰ（表５）より低く、その他の各群処方より明らかに低く、特にショ糖が含まれる製剤群の約２０～２５％しかない。また、アルギニン塩により、ショ糖、ソルビトール又はマンニトールが含まれる製剤の粘度が明らかに改善され、約５０％低下される。
【0075】
高濃度の抗体溶液では、一般的に抗体の凝集、沈殿などがさらに簡単に発生されることから、抗体安定性が低下されるが、溶液粘度の増加によって注射（特に皮下又は筋肉注射）投与が難しくなる。上記の実験によれば、液体製剤において、アルギニン塩により、抗体ＪＳ００２の安定性が確保されるだけでなく、液体粘度も明らかに低下されることは、発見された。特に、緩衝液がヒスチジン緩衝液（ｐＨ値５．５又は６．０）であり、アルギニン塩という１種類の安定剤しか含まない場合、抗体安定性及び溶液の粘度効果が最適である。
【0076】
【表3】
【0077】
【表4】
【0078】
【表5】
【0079】
実施例３：界面活性剤の選定試験
液体製剤に添加される界面活性剤は、一般的に、例えば、抗体凝集の低減又は製剤における粒子状物質形成の最小化を図るために、抗体が保存中に空気／溶液界面の張力、溶液／表面の張力の影響を受けないようにすることで、タンパク質を保護するための試薬であり、抗体の物理的及び化学的性質の安定に繋げる。２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ値６．０）、１３０ｍＭアルギニン塩酸と１５０ｍｇ／ｍｌのＪＳ００２が含まれる製剤に、異なる濃度（０～０．５％）のポリソルベート２０又はポリソルベート８０をそれぞれ入れて、４０℃で２週間静置後、分析と測定を行った。表６に示されるように、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量とＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量の測定結果によれば、異なる濃度（０～０．５％）のポリソルベート２０又はポリソルベート８０が含まれる製剤において、抗体ＪＳ００２の熱安定性は明らかな変化がなく、高安定性を保持している。
液体製剤に添加される界面活性剤は、一般的に、例えば、抗体凝集の低減又は製剤における粒子状物質形成の最小化を図るために、抗体が保存中に空気／溶液界面の張力、溶液／表面の張力の影響を受けないようにすることで、タンパク質を保護するための試薬であり、抗体の物理的及び化学的性質の安定に繋げる。２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ値６．０）、１３０ｍＭアルギニン塩酸と１５０ｍｇ／ｍｌのＪＳ００２が含まれる製剤に、異なる濃度（０～０．５％）のポリソルベート２０又はポリソルベート８０をそれぞれ入れて、４０℃で２週間静置後、分析と測定を行った。表６に示されるように、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量とＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量の測定結果によれば、異なる濃度（０～０．５％）のポリソルベート２０又はポリソルベート８０が含まれる製剤において、抗体ＪＳ００２の熱安定性は明らかな変化がなく、高安定性を保持している。
【0080】
【表6】
【0081】
実施例４：製剤長時間安定性の検討
通常、治療性抗体が含まれる液体薬物製品が２～８℃の条件で保存されるため、製剤が長時間保存において高安定性を保持することは、非常に重要である。上記の選定結果に基づき、４つの処方で製剤の長時間安定性について検討が行われた。
表７に示される４つの処方製剤を調製して透明な小瓶にそれぞれ保存し、２～８℃の条件で数ヶ月静置した後、各サンプルに対して分析と測定を行った。（ａ）肉眼観察による外観；（ｂ）光遮蔽法により測定される不溶性微粒子（ＯＤ４０５ｎｍ）；（ｃ）ｐＨ値；（ｄ）ＣＥ‐ＳＤＳ法により測定される抗体の分子量；（ｄ）ＳＥＣ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体単体（品質標準：≧９７．０％）、ポリマー（品質標準：≦３．０％）、又はフラグメントの含有量（品質標準：≦１．０％）；（ｅ）ＣＥＸ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体の主要電荷（品質標準：≧７０．０％）、酸性電荷（品質標準：≦３０．０％）、又は塩基性電荷の含有量（品質標準：≦１５．０％）；（ｆ）ＥＬＩＳＡ法により測定される抗体の結合活性（品質標準：対比品の７０％～１３０％）；及び、（ｇ）抗体の生物活性（ＨｅｐＧ２細胞へのＬＤＬ摂取実験、品質標準：対比品の７０％～１３０％）などの、パラメータにより、安定性を評価した。表８に示されるように、４種類の製剤処方を２～８℃の条件で１～１２ヶ月保存する間に、非常に良好な安定性を有する。
通常、治療性抗体が含まれる液体薬物製品が２～８℃の条件で保存されるため、製剤が長時間保存において高安定性を保持することは、非常に重要である。上記の選定結果に基づき、４つの処方で製剤の長時間安定性について検討が行われた。
表７に示される４つの処方製剤を調製して透明な小瓶にそれぞれ保存し、２～８℃の条件で数ヶ月静置した後、各サンプルに対して分析と測定を行った。（ａ）肉眼観察による外観；（ｂ）光遮蔽法により測定される不溶性微粒子（ＯＤ４０５ｎｍ）；（ｃ）ｐＨ値；（ｄ）ＣＥ‐ＳＤＳ法により測定される抗体の分子量；（ｄ）ＳＥＣ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体単体（品質標準：≧９７．０％）、ポリマー（品質標準：≦３．０％）、又はフラグメントの含有量（品質標準：≦１．０％）；（ｅ）ＣＥＸ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体の主要電荷（品質標準：≧７０．０％）、酸性電荷（品質標準：≦３０．０％）、又は塩基性電荷の含有量（品質標準：≦１５．０％）；（ｆ）ＥＬＩＳＡ法により測定される抗体の結合活性（品質標準：対比品の７０％～１３０％）；及び、（ｇ）抗体の生物活性（ＨｅｐＧ２細胞へのＬＤＬ摂取実験、品質標準：対比品の７０％～１３０％）などの、パラメータにより、安定性を評価した。表８に示されるように、４種類の製剤処方を２～８℃の条件で１～１２ヶ月保存する間に、非常に良好な安定性を有する。
【0082】
【表7】
【0083】
【表8-1】
【0084】
【表8-2】
【0085】
実施例５：高濃度抗ＰＣＳＫ９抗体の室温保存安定性
通常、治療性抗体が含まれる液体薬物製品が２～８℃で保存期間満了まで保存される。従って、患者が薬品の購入から使用までの期間において薬品を冷蔵する必要がある。提示された投与計画によるが、患者自身で薬物を投与する場合、患者による保存期間が数週間まで延びる可能性がある。そのため、冷蔵条件で保存する必要がない薬物は、家庭介護製品として、患者利便性の明らかな向上、及び薬物品質への間違った保存条件による影響の低下を示していることから、クレーム比率の低減及び温度偏差に対する監視の免除を実現した。
表９に示されるように、本発明に開示された製剤（処方番号：２０）はタンパク質分解に対して更なる高安定性を有し、２５℃で測定される分解動力学パラメータが６ヶ月保存の要求を満たした。
通常、治療性抗体が含まれる液体薬物製品が２～８℃で保存期間満了まで保存される。従って、患者が薬品の購入から使用までの期間において薬品を冷蔵する必要がある。提示された投与計画によるが、患者自身で薬物を投与する場合、患者による保存期間が数週間まで延びる可能性がある。そのため、冷蔵条件で保存する必要がない薬物は、家庭介護製品として、患者利便性の明らかな向上、及び薬物品質への間違った保存条件による影響の低下を示していることから、クレーム比率の低減及び温度偏差に対する監視の免除を実現した。
表９に示されるように、本発明に開示された製剤（処方番号：２０）はタンパク質分解に対して更なる高安定性を有し、２５℃で測定される分解動力学パラメータが６ヶ月保存の要求を満たした。
【0086】
【表9-1】
【0087】
【表9-2】
【0088】
実施例６：ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和力測定（生物発光干渉法）
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和力は既存の方法により測定される。簡単に言えば、４ｍｇ ＪＳ００２（処方番号：２９）とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂ（１４０ｍｇ／ｍｌ／本、ＡＭＧＥＮにより購入、ロット番号：１０６３１３５）を取り、それぞれ１０ＫＤ限外濾過デバイスでリン酸塩緩衝液により１００倍液交換を行ってから、２８０ｎｍの吸収値でたんぱく質含有量を測定し、濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整した。ビチオンを取って室温まで平衡させ、２ｍｇＳｕｌｆｏ‐ＮＨＳ‐Ｂｉｏｔｉｎを量って３００μＬ超純水に入れ、１０ｍＭのビチオン母液を調製した。２ｍｇ／ｍＬ ＪＳ００２とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂをそれぞれ１ｍＬ取って新しいＥＰ管に入れ、たんぱく質：ビチオン＝１：６で８μＬのビチオン母液を入れ、均一に混ぜ、室温で１～２時間反応させた。ビチオンの反応が終了してから、１０ＫＤ限外濾過デバイスでリン酸塩緩衝液により１００倍液交換を行ってから、２８０ｎｍの吸収値でたんぱく質含有量を測定し、濃度を１～２ｍｇ／ｍＬ範囲内に調整した。ビチオン化されたたんぱく質を１管あたり０．１ｍＬで分注し、‐８０℃で保存し、１回以内で凍結融解させた。ビチオン化されたＪＳ００２とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂ抗体（５μｇ／ｍＬ）をストレプトアビジン（ＳＡ）バイオプローブに結合し、実験緩衝液（０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ‐２０及び１×ＰＢＳ）を３００秒間平衡させてから、ＪＳ００２プレートとＥｖｏｌｏｃｕｍａｂプレートのそれぞれに異なる濃度まで希釈されたＰＣＳＫ９を順に注入し、３００秒間結合して、解離時間を１８００秒間とした。計算式＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより親和力定数が計算された。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和力は既存の方法により測定される。簡単に言えば、４ｍｇ ＪＳ００２（処方番号：２９）とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂ（１４０ｍｇ／ｍｌ／本、ＡＭＧＥＮにより購入、ロット番号：１０６３１３５）を取り、それぞれ１０ＫＤ限外濾過デバイスでリン酸塩緩衝液により１００倍液交換を行ってから、２８０ｎｍの吸収値でたんぱく質含有量を測定し、濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整した。ビチオンを取って室温まで平衡させ、２ｍｇＳｕｌｆｏ‐ＮＨＳ‐Ｂｉｏｔｉｎを量って３００μＬ超純水に入れ、１０ｍＭのビチオン母液を調製した。２ｍｇ／ｍＬ ＪＳ００２とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂをそれぞれ１ｍＬ取って新しいＥＰ管に入れ、たんぱく質：ビチオン＝１：６で８μＬのビチオン母液を入れ、均一に混ぜ、室温で１～２時間反応させた。ビチオンの反応が終了してから、１０ＫＤ限外濾過デバイスでリン酸塩緩衝液により１００倍液交換を行ってから、２８０ｎｍの吸収値でたんぱく質含有量を測定し、濃度を１～２ｍｇ／ｍＬ範囲内に調整した。ビチオン化されたたんぱく質を１管あたり０．１ｍＬで分注し、‐８０℃で保存し、１回以内で凍結融解させた。ビチオン化されたＪＳ００２とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂ抗体（５μｇ／ｍＬ）をストレプトアビジン（ＳＡ）バイオプローブに結合し、実験緩衝液（０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ‐２０及び１×ＰＢＳ）を３００秒間平衡させてから、ＪＳ００２プレートとＥｖｏｌｏｃｕｍａｂプレートのそれぞれに異なる濃度まで希釈されたＰＣＳＫ９を順に注入し、３００秒間結合して、解離時間を１８００秒間とした。計算式＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより親和力定数が計算された。
【0089】
試験結果が表１０に示される。Ｆｏｒｔｅｂｉｏ結果によれば、ＪＳ００２は同じターゲットの薬物ＥｖｏｌｏｃｕｍａｂよりＰＣＳＫ９との結合親和力が明らかに優れる。
【0090】
【表10】
【0091】
実施例７：ＪＳ００２細胞生物活性の検討（ＨｅｐＧ２細胞へのＬＤＬ摂取法）
本実験は、ＪＳ００２（処方番号：２９）による、ヒトＰＣＳＫ９‐Ｄ３４７Ｙに暴露されたＨｅｐＧ２細胞へのＬＤＬ摂取状況を細胞レベルから評価して、市販される同じターゲットの薬物Ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ（１４０ｍｇ／ｍｌ／本、ＡＭＧＥＮにより購入、ロット番号：１０６３１３５）と比較した。簡単に言えば、ヒト肝臓癌細胞系（ＨｅｐＧ２）細胞（ＡＴＣＣ、ロット番号：６２５９１３６８）を２．０×１０4個／ウェルの密度で播種し（８０μＬ／ウェル）、３７℃、７％ＣＯ2で一晩培養した。ＪＳ００２抗体とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂをそれぞれ濃度勾配希釈し（開始濃度２０μｇ／ｍＬ、２倍で濃度勾配希釈）、１０μＬの抗体希釈液を取ってＨｅｐＧ２細胞に入れ、３０分間インキュベートした。それと同時に、抗原を１μｇ／ｍＬまで希釈し、１０μＬの抗原希釈液を取ってＨｅｐＧ２細胞に入れ、抗原、抗体と細胞を同時に４～６時間インキュベートした。蛍光標識が加えられたＬＤＬ（３μｇ／ｍＬ）と細胞を同時に１６～１８時間インキュベートしてから、マイクロプレートリーダにより細胞内へ摂取された蛍光量を測定した。
本実験は、ＪＳ００２（処方番号：２９）による、ヒトＰＣＳＫ９‐Ｄ３４７Ｙに暴露されたＨｅｐＧ２細胞へのＬＤＬ摂取状況を細胞レベルから評価して、市販される同じターゲットの薬物Ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ（１４０ｍｇ／ｍｌ／本、ＡＭＧＥＮにより購入、ロット番号：１０６３１３５）と比較した。簡単に言えば、ヒト肝臓癌細胞系（ＨｅｐＧ２）細胞（ＡＴＣＣ、ロット番号：６２５９１３６８）を２．０×１０4個／ウェルの密度で播種し（８０μＬ／ウェル）、３７℃、７％ＣＯ2で一晩培養した。ＪＳ００２抗体とＥｖｏｌｏｃｕｍａｂをそれぞれ濃度勾配希釈し（開始濃度２０μｇ／ｍＬ、２倍で濃度勾配希釈）、１０μＬの抗体希釈液を取ってＨｅｐＧ２細胞に入れ、３０分間インキュベートした。それと同時に、抗原を１μｇ／ｍＬまで希釈し、１０μＬの抗原希釈液を取ってＨｅｐＧ２細胞に入れ、抗原、抗体と細胞を同時に４～６時間インキュベートした。蛍光標識が加えられたＬＤＬ（３μｇ／ｍＬ）と細胞を同時に１６～１８時間インキュベートしてから、マイクロプレートリーダにより細胞内へ摂取された蛍光量を測定した。
【0092】
図１に示される実験結果によれば、ＪＳ００２が細胞表面のヒトＰＣＳＫ９‐Ｄ３４７Ｙと結合することで、ＪＳ００２とＬＤＬＲとの結合が抑制され、ＬＤＬＲとＬＤＬとの結合及びＬＤＬＲへのＬＤＬ摂取が増加された。さらに、ＪＳ００２（ＥＣ５０＝９２．６８ｎｇ／ｍＬ）はＥｖｏｌｏｃｕｍａｂ（ＥＣ５０＝１５１．１ｎｇ／ｍＬ）よりＬＤＬエンドサイトーシスの促進効果が明らかに優れた。
【0093】
実施例８：高脂血症アカゲザルに対するＪＳ００２血中脂質低下効果の検討
本試験に選ばれた１９匹高脂血症アカゲザル（ＬＤＬ≧ｌ．３ｍｍｏｌ／Ｌ）は、アトルバスタチンカルシウム群（１～４週目１．２ｍｇ／ｋｇで投与、５～８週目２．４ｍｇ／ｋｇで投与、４匹）と、ＪＳ００２高用量群（１２ｍｇ／ｋｇ、５匹）と、ＪＳ００２低用量群（４ｍｇ／ｋｇ、５匹）と、プラセボ群（５匹）と、計４群に分けられた。アトルバスタチンカルシウム群は、経口投与で５６日間連続的に投与し、溶出期間が２１日間である。ＪＳ００２高用量群とＪＳ００２低用量群は、４週間で１回、計２回投与し、７８日間連続的に観察した。投与期間及び溶出期間で主要治療効果の分析指標（ＬＤＬ‐Ｃ、ＴＣ、ＨＤＬ‐Ｃ、ＡｐｏＡＬ、ＡｐｏＢ、ＴＧ）、副次治療効果の指標（体重）、及び安全性指標（血液生化学、血液一般検査指標、臨床観察）の変化を定期的に観察した。上記指標を総合的に考えて、高脂血症アカゲザルに対するＪＳ００２（処方番号：２０）の血中脂質低下効果について分析と評価を行った。
本試験に選ばれた１９匹高脂血症アカゲザル（ＬＤＬ≧ｌ．３ｍｍｏｌ／Ｌ）は、アトルバスタチンカルシウム群（１～４週目１．２ｍｇ／ｋｇで投与、５～８週目２．４ｍｇ／ｋｇで投与、４匹）と、ＪＳ００２高用量群（１２ｍｇ／ｋｇ、５匹）と、ＪＳ００２低用量群（４ｍｇ／ｋｇ、５匹）と、プラセボ群（５匹）と、計４群に分けられた。アトルバスタチンカルシウム群は、経口投与で５６日間連続的に投与し、溶出期間が２１日間である。ＪＳ００２高用量群とＪＳ００２低用量群は、４週間で１回、計２回投与し、７８日間連続的に観察した。投与期間及び溶出期間で主要治療効果の分析指標（ＬＤＬ‐Ｃ、ＴＣ、ＨＤＬ‐Ｃ、ＡｐｏＡＬ、ＡｐｏＢ、ＴＧ）、副次治療効果の指標（体重）、及び安全性指標（血液生化学、血液一般検査指標、臨床観察）の変化を定期的に観察した。上記指標を総合的に考えて、高脂血症アカゲザルに対するＪＳ００２（処方番号：２０）の血中脂質低下効果について分析と評価を行った。
【0094】
実験結果は図２に示される。本試験において、プラセボ群の血中脂質レベルが安定であり、陽性対照であるアトルバスタチンカルシウム群の薬効結果が臨床文献の報告と類似することから、実験系が安定で信頼性があることは証明された。
本実験系において、供試品ＪＳ００２高用量群１２ｍｇ／ｋｇ（臨床計画用量４２０ｍｇ／７０ｋｇヒト、４週間で１回、皮下注射計２回、に相当）は、高脂血症アカゲザルＬＤＬ‐Ｃに対して非常に明らかな低下効果を有し、ベースラインと比べれば、ＬＤＬ‐Ｃ投与後、Ｄ２‐Ｄ７１低下レベルが４０％～７０％に維持される。ＪＳ００２低用量群４ｍｇ／ｋｇ（臨床計画用量１４０ｍｇ／７０ｋｇヒト、４週間で１回、皮下注射計２回、に相当）は、ベースラインと比べれば、ＬＤＬ‐Ｃ投与後、Ｄ２‐Ｄ５７低下レベルが２０％～７０％に維持され、Ｄ５７‐Ｄ７８の薬効が明らかに低下し、リバウンドが現れた。ＪＳ００２高用量群はＪＳ００２低用量群より、効果の強度及び持続時間が優れた（図２）。全体の投与期間において、ＴＧ、ＦＰＧ、ＡｐｏＡｌとＨＤＬ‐Ｃは明らかな変化を示さず、各安全性指標は投与に関連する変化を示していない。
本実験系において、供試品ＪＳ００２高用量群１２ｍｇ／ｋｇ（臨床計画用量４２０ｍｇ／７０ｋｇヒト、４週間で１回、皮下注射計２回、に相当）は、高脂血症アカゲザルＬＤＬ‐Ｃに対して非常に明らかな低下効果を有し、ベースラインと比べれば、ＬＤＬ‐Ｃ投与後、Ｄ２‐Ｄ７１低下レベルが４０％～７０％に維持される。ＪＳ００２低用量群４ｍｇ／ｋｇ（臨床計画用量１４０ｍｇ／７０ｋｇヒト、４週間で１回、皮下注射計２回、に相当）は、ベースラインと比べれば、ＬＤＬ‐Ｃ投与後、Ｄ２‐Ｄ５７低下レベルが２０％～７０％に維持され、Ｄ５７‐Ｄ７８の薬効が明らかに低下し、リバウンドが現れた。ＪＳ００２高用量群はＪＳ００２低用量群より、効果の強度及び持続時間が優れた（図２）。全体の投与期間において、ＴＧ、ＦＰＧ、ＡｐｏＡｌとＨＤＬ‐Ｃは明らかな変化を示さず、各安全性指標は投与に関連する変化を示していない。
【0095】
実施例９：カニクイザルによる薬物動態学の検討
試験により健康なカニクイザルに異なる用量のＪＳ００２（処方番号：２０）を１回又は複数回で投与した後の薬物動態学の性質を観察した。カニクイザル実験の群れ分けと投与状況は表１１に示される。Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ群は１回投与であり、投与量がそれぞれ２ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇであり、Ａ、ＢとＣ群の投与方式は皮下注射であり、Ｄ群の投与方式は静脈注射である。Ｅ群は連続投与であり、投与量が１０ｍｇ／ｋｇであり、週に１回投与で、連続的に４回投与した。
試験により健康なカニクイザルに異なる用量のＪＳ００２（処方番号：２０）を１回又は複数回で投与した後の薬物動態学の性質を観察した。カニクイザル実験の群れ分けと投与状況は表１１に示される。Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ群は１回投与であり、投与量がそれぞれ２ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇであり、Ａ、ＢとＣ群の投与方式は皮下注射であり、Ｄ群の投与方式は静脈注射である。Ｅ群は連続投与であり、投与量が１０ｍｇ／ｋｇであり、週に１回投与で、連続的に４回投与した。
【0096】
【表11】
１．ｓｃ：皮下注射。
２．ｉｖ：静脈注射。
３．ＱＷ：週に１回。
【0097】
サンプリングした後、血清サンプルを調製し、方法論で検証された酵素結合免疫吸着分析法により定量的に測定した。結果が表１２に示される。
【0098】
【表12】
【0099】
結果によれば、カニクイザルに異なる用量（２、１０、５０ｍｇ／ｋｇ）の供試薬物ＪＳ００２を皮下注射で１回投与した後、血清薬物の暴露レベルが用量の増加に応じて増加し、非線形性薬物動態学の特徴を示している。ＪＳ００２排出相の半減期ｔ1/2が５６～７４時間であり、３３６時間内の有効半減期が５０～１３９時間である。
カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇの受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で１回投与した後、生物学的利用率が８９．１５％である。
カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇ（週に１回、連続的に４回）のＪＳ００２を皮下注射で連続的に複数回投与した後、生体内における薬物の暴露量が当該用量で１回投与した群より明らかに高く、薬物が生体内に明らかに蓄積した。
カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇの受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で１回投与した後、生物学的利用率が８９．１５％である。
カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇ（週に１回、連続的に４回）のＪＳ００２を皮下注射で連続的に複数回投与した後、生体内における薬物の暴露量が当該用量で１回投与した群より明らかに高く、薬物が生体内に明らかに蓄積した。
【0100】
実施例１０：カニクイザル免疫毒性と免疫原性の検討
本試験はカニクイザルに受検薬物ＪＳ００２（処方番号：２０）を皮下注射で投与する４週間繰返投与毒性試験と共に考察した。ＣＦＤＡによるＧＬＰ制度の要求に基づき、組換えヒト化抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体の注射液による免疫毒性と免疫原性を評価した。本実験は、賦形剤対照群（０ｍｇ／ｋｇ）、低用量群（３０ｍｇ／ｋｇ）、中用量群（１００ｍｇ／ｋｇ）、高用量群（３００ｍｇ／ｋｇ）などの４つの用量群を設けて、１群につき動物１０匹、雌雄それぞれ半数である。週に１回投与で、４週間連続的に投与し、回復期を４週間とする。検討の用量範囲内で、カニクイザルに賦形剤及び異なる用量（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ）の受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で複数回投与した後、全個体の異なるタイミングの血液サンプルは抗薬物抗体が測定されず、各群のサンプル陽性率と個体陽性率が共に０．０％である。結果によれば、異なる用量（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ）の受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で複数回投与した後、そのカニクイザル生体内における免疫原性が比較的に低い。各群の動物腎臓組織に対して免疫複合体の測定を行ったところ、免疫複合体の沈積が現れてない。その他の免疫関連指標によれば、各群動物の白血球絶対数と分類数、免疫グロブリンレベルとＡＩＧ比、リンパ器官／組織の肉眼解剖学観察、胸腺や脾臓の臓器重量／係数などは投与に関連する異常変化が見られず、リンパ球亜群の分布は投与に関連する規律的な変化が見られていない。それと同時に、組織病理学の測定は正常に示されている。
本試験はカニクイザルに受検薬物ＪＳ００２（処方番号：２０）を皮下注射で投与する４週間繰返投与毒性試験と共に考察した。ＣＦＤＡによるＧＬＰ制度の要求に基づき、組換えヒト化抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体の注射液による免疫毒性と免疫原性を評価した。本実験は、賦形剤対照群（０ｍｇ／ｋｇ）、低用量群（３０ｍｇ／ｋｇ）、中用量群（１００ｍｇ／ｋｇ）、高用量群（３００ｍｇ／ｋｇ）などの４つの用量群を設けて、１群につき動物１０匹、雌雄それぞれ半数である。週に１回投与で、４週間連続的に投与し、回復期を４週間とする。検討の用量範囲内で、カニクイザルに賦形剤及び異なる用量（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ）の受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で複数回投与した後、全個体の異なるタイミングの血液サンプルは抗薬物抗体が測定されず、各群のサンプル陽性率と個体陽性率が共に０．０％である。結果によれば、異なる用量（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ）の受検薬物ＪＳ００２を皮下注射で複数回投与した後、そのカニクイザル生体内における免疫原性が比較的に低い。各群の動物腎臓組織に対して免疫複合体の測定を行ったところ、免疫複合体の沈積が現れてない。その他の免疫関連指標によれば、各群動物の白血球絶対数と分類数、免疫グロブリンレベルとＡＩＧ比、リンパ器官／組織の肉眼解剖学観察、胸腺や脾臓の臓器重量／係数などは投与に関連する異常変化が見られず、リンパ球亜群の分布は投与に関連する規律的な変化が見られていない。それと同時に、組織病理学の測定は正常に示されている。
【図1】
【図2】
【配列表】