特許 7503503 炎症性成分を有する皮膚または粘膜の罹患を予防および処置するための化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-06-12

(45)【発行日】2024-06-20

(54)【発明の名称】炎症性成分を有する皮膚または粘膜の罹患を予防および処置するための化合物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/045 20060101AFI20240613BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240613BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20240613BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240613BHJP

   A61K 8/34 20060101ALI20240613BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20240613BHJP

【ＦＩ】

A61K31/045

A61P17/06

A61P17/04

A61P17/02

A61K8/34

A61Q19/00

【請求項の数】 3

(21)【出願番号】P 2020565400

(86)(22)【出願日】2019-05-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-09-24

(86)【国際出願番号】 EP2019063143

(87)【国際公開番号】W WO2019224211

(87)【国際公開日】2019-11-28

【審査請求日】2022-05-11

(31)【優先権主張番号】102018000005585

(32)【優先日】2018-05-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(73)【特許権者】

【識別番号】504244025

【氏名又は名称】ギウリアニ ソシエタ ペル アチオニ

(74)【代理人】

【識別番号】100166338

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 正夫

(72)【発明者】

【氏名】ギウリアーニ ジャンマリア

(72)【発明者】

【氏名】パウス ラルフ

(72)【発明者】

【氏名】シェレット ジェレミー

(72)【発明者】

【氏名】マルツァーニ バーバラ

(72)【発明者】

【氏名】バローニ セルジオ

【審査官】伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】特開２００１－３４８３０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０７－１０９４８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００３－５０２４８２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１１－０９８８９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００４－３５９６０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許第０５７５９５５６（ＵＳ，Ａ）

【文献】特表２００３－５０５４８９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

Ａ６１Ｑ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

乾癬、酒さ、毛嚢炎、皮膚発疹、臭汗症からなる群から疾患が選択される、デルムシジンによって媒介される免疫刺激活性を促進することにより、皮膚、頭皮または粘膜の疾患の局所治療に使用するためのサンダルペンタノールを含む組成物。

【請求項2】

請求項１に記載の使用のための、生理学的に許容される担体およびサンダルペンタノールを含む組成物。

【請求項3】

皮膚の少なくとも一部が赤み、紅潮、赤色皮膚の影響を受ける美容スキンケアトリートメント用のサンダルペンタノールを含む化粧品組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、皮膚または粘膜の罹患を予防または処置するための化合物に関する。

【0002】

本発明は、局所使用のための化粧品または医薬製品の分野に由来する。

【0003】

具体的には、本発明は、皮膚状態の美容スキンケア処置または炎症成分が役割を果たす特定の皮膚、頭皮もしくは粘膜疾患の皮膚科的処置のための特定の化合物の局所使用に関する。

【背景技術】

【0004】

ヒト皮膚は、外部の剤の攻撃から身体および内部組織を保護するための保護シールドまたは機械的バリアを形成する。

【0005】

皮膚は、広範囲の微生物を支えるひだ、陥入部および特殊なニッチが豊富に存在する多様な生息場所で構成される生態系である。

【0006】

皮膚はまた、外部環境との界面でもあり、多数の異なる微生物によってコロニー形成される。これらの微生物のほとんどは無害であり、いくつかの場合においてヒトゲノムが進化していない生命機能を提供する。共生微生物は、広範囲の皮膚ニッチを占め、より病原性または有害な生物の侵入に対して防御する。これらの微生物はまた、皮膚のＴ細胞を教育し、それらを同様に顕著な病原性微生物に応答するようにプライミングする役割を有し得る。

【0007】

病原体に対して防御するために、皮膚および真皮の細胞は、防御免疫応答を持っている。皮膚の免疫反応は生得的であり、病原性微生物を認識し、病原体と闘う特定の分子の産生を誘導し、特定のペプチドを分泌して病原性微生物を直接死滅させるという主要な役割を果たしている。ＡＭＰとも呼ばれる抗菌ペプチドは、細菌、ウイルスおよび真菌に対して広範囲の抗菌活性を有するペプチドであり、皮膚の特に感染に対して重要な役割を果たす。

【0008】

典型的には、これらのペプチドはカチオン性であり、通常、２０～６０アミノ酸長である。

【0009】

これらのペプチドのカチオン性は、それらがリポ多糖のような細菌膜の負に荷電した分子に結合することを可能にする。

【0010】

さらに、ＡＭＰは、それらが水性環境において、および脂質膜と相互作用することを可能にする疎水性および親水性側を提供される。

【0011】

これらのペプチドは、それらの抗菌活性に加えて、宿主細胞自体に対しても機能を発揮し、感染の電位または皮膚損傷の存在について宿主細胞に警告する能力を有する。

【0012】

さらに、抗菌ペプチドはまた、宿主細胞に対して作用して、サイトカイン産生、細胞増殖、および細胞外マトリックス合成を刺激する。

【0013】

デフェンシンおよびカテリシジンなどのヒト表皮による抗菌ペプチドの産生は、構成的に起こるが、感染症または皮膚損傷の場合には大きく増加する。

【0014】

ある種の皮膚疾患はＡＭＰの発現変化を示すことが観察されており、この現象はこれらの疾患の病態生理を部分的に説明している。

【0015】

したがって、今回の研究から、抗菌ペプチドが微生物に対する感受性をどのように変化させるかを理解することは、特定の皮膚の状態に影響を与え、特定の障害の原因についての洞察を提供することが示唆される。

【0016】

それにもかかわらず、ある数の皮膚疾患の病因は、乾癬、アトピー性皮膚炎、酒さ、ざ瘡、逆性ざ瘡／化膿性汗腺炎および他のものの場合におけるように、多因子性であり、ＡＭＰの発現変化およびその抗菌活性と厳密には相関していないようである。

【0017】

従って、ある種の皮膚疾患、特に、皮膚に定着する有益な細菌種の感染または調節不全に由来しない疾患の病因を調査して、多因子性の病因および炎症性成分を有する皮膚障害または状態の処置に有効である適切な生成物を見出す必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0018】

上記を考慮すると、本発明の目的の１つは、炎症が役割を果たす皮膚状態の予防および／または処置のための化合物の提供にある。

【0019】

本発明の別の目的は、利用可能な医薬品のスキンケア製品とは異なる治療的機会を表す皮膚科学的使用のための製品を提供することにある。

【0020】

本発明のさらなる目的は、皮膚の局面、特に軽度のざ瘡または赤みに罹患した顔の皮膚を改善するのに有用である化粧品の提供にある。

【課題を解決するための手段】

【0021】

本発明の一般的な局面に従って、本発明者らは、以下の式（Ｉ）の特定の選択された化合物が、皮膚に適用される場合、皮膚の炎症の減少を決定する局所的免疫刺激作用を発揮し、炎症成分が役割を果たす皮膚状態または疾患の処置に有用であることを見出した。

【0022】

本発明者らは、本発明の選択された化合物が発揮する局所的抗炎作用がペプチドダームシジンによって媒介されることも観察した。

【0023】

したがって、第一の態様に従って、式（Ｉ）の化合物が提供される。

【化1】

式中：
Ｒ_１およびＲ_２は一緒に二重結合を形成するか、またはＲ_１およびＲ_２は一緒にシクロプロピル基を形成し；
Ｒ_３、Ｒ_４は、同一であるかもしくは異なっており、かつ、独立に、水素、メチルから選択され、またはＲ_３およびＲ_４は一緒に二重結合を形成し；
Ｒ_５、Ｒ_６は、同一であるかまたは異なっており、かつ、独立に、水素、メチルから選択され；
あるいはＲ_５およびＲ_６は一緒に二重結合を形成するか、またはＲ_５およびＲ_６は一緒にシクロプロピル基を形成し；
Ｒ_７＝メチル、またはエチルであり；
Ｒ_８＝水素、またはメチルであり、
炎症性成分が役割を果たす皮膚疾患の予防または処置に使用するためであり、皮膚疾患が乾癬、酒さ、毛包炎および臭汗症からなる群から選択される。

【0024】

典型的には、式（Ｉ）の化合物の局所適用によって処置される皮膚疾患は、炎症性成分、特に本明細書において以下に言及されるものを有する皮膚疾患である。

【0025】

第２の態様によれば、本発明は、化粧品スキンケア処置としての上記で定義された式（Ｉ）の化合物の化粧用使用を提供する。

【0026】

この第２の局面に従って、式（Ｉ）の化合物の化粧用使用は、美的局面が、皮膚、赤色皮膚、または皮膚の皮疹を悪化させるのを改善するために提供される。

【0027】

一実施形態によると、式（Ｉ）の化合物は、皮膚の赤味を低減するのに有用である。

【0028】

追加の局面に従って、有効量の上記定義の式（Ｉ）の化合物および化粧品的または薬学的に許容される担体を含む局所適用のための組成物が提供される。

【0029】

本発明の特定の態様および利点は、添付の図面を参照してさらに説明される。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】図１は、Ｓａｎｄａｌｏｒｅ処置によるヒト頭皮毛包（ＨＦ）の上皮におけるダームシジンタンパク質発現を示す。

【発明を実施するための形態】

【0031】

代表的な画像は、Ｓａｎｄａｌｏｒｅおよびビヒクル処置ヒト頭皮顕微解剖毛包において、５日間（ａ、ｂ）または３日間（ｃ、ｄ）ｅｘ ｖｉｖｏでのダームシジン（白色矢印）を示す。ｎ＝３の独立した実験（３個の供与体）（ａ、ｂ）または１個の独立した実験（１個の供与体）（ｃ、ｄ）の分析に由来する定性的観察。ＨＳ、毛幹；ＩＲＳ、内側根鞘；ＯＲＳ、外側根鞘。

【0032】

実験データは、陽性細胞（ＤＣＤ＋細胞）の数を示す。

【0033】

ビヒクル中には４．４４４±０．６２３（平均±ＳＥＭ）のＤＣＤ＋細胞が存在し、一方５００マイクロＭでの処理においては、ＤＣＤ＋細胞は７．７８６±０．５９６（平均±ＳＥＭ）である。

【0034】

Ｓａｎｄａｌｏｒｅは、ビヒクルに関してＤＣＤ＋細胞の数の統計的に有意な増加を誘導する（ｐ＜０．００１）。

【0035】

本発明の特定の局面によれば、本発明者らは、特定の化合物が皮膚の特定の免疫防御機構を活性化し、かつ／またはダームシジンによって媒介される免疫刺激活性を促進することを見出し、これは、ヒト汗中に構成的に分泌され、典型的には、Ｅｃｈｏ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．ｏｎ Ｓｈｏｃｋ、２０１６年１月；４５（１）：２８－３２に示されるように、自然免疫応答の調節において役割を果たすペプチドである。

【0036】

第１の局面に従って、本発明は、添付した請求項１に特許請求される使用のための式（Ｉ）の化合物を提供する。

【0037】

発明の式（Ｉ）の化合物の医薬的使用のさらなる実施形態は、添付した請求項２～４に定義される。

【0038】

天然のサンダルウッドの合成代替品として式（Ｉ）の化合物を開発した。それらは、サンダルウッドと同様の芳香を提供する。

【0039】

一般に、用語「サンダルウッド」は、サンタル属の樹木からの木のクラスと呼ばれる。サンダルウッドの精油は、通常、成熟したサンダルウッド樹木から木材を水蒸気蒸留することによって抽出され、香料のための周知の価値のある成分である。

【0040】

サンダルウッド油の主成分はα－サンタロールβ－サンタロールであり、基本的にセスキテルペン型鎖を示すアルコールである。

【0041】

α－サンタロールの構造式は、以下の通りである。

【化2】

【0042】

β－サンタロールの構造式は、以下の通りである。

【化3】

【0043】

上記の化学構造は、それぞれ末端トリシクロヘプタ－３－イルまたはビシクロヘプタ－２－イル基を含む。

【0044】

本発明による局所使用のための好ましい化合物の１つは、Ｓａｎｄａｌｏｒｅ（登録商標）としても知られるサンダルペンタノールである。これは、サンダルウッドに似た香りを持つ合成香料であり、香水の成分として、または皮膚軟化剤もしくは皮膚洗浄剤として、またはサンダルウッドの香りを模倣した成分として一般的に使用されている。

【0045】

典型的には、Ｓａｎｄａｌｏｒｅおよびその類似体誘導体は、天然のサンダルウッド油に由来するα－サンタロールβ－サンタロールとは異なる化学構造を有するアルコールである。

【0046】

Ｓａｎｄａｌｏｒｅ、またはサンダルペンタノールは、以下の式を有する：

【化4】

【0047】

典型的には、上記の分子は合成的である。

【0048】

特定の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、末端シクロペンテン－１－イル基を含有し、天然のサンダルウッド油成分に典型的な多環構造を有さない。

【0049】

特定の実施形態に従って、式（Ｉ）の化合物は、以下の表に例示される化合物から選択される：

【0050】

【表1】

【0051】

式（Ｉ）に該当し、上記表に例示される好ましい化合物は、サンダルペンタノール（化合物１）である。

【0052】

特定の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、環の１位にＣ_４～Ｃ_５アルキル基またはＣ_４～Ｃ_５アルケニル基を有する２，２，３－トリメチルシクロペンタ－３－エン－１イル部分を有する。この実施形態に該当する好ましい化合物は、環の１位にＣ_４～Ｃ_５アルキル基を有する部分を有するものであり、例えば、上記表に言及される化合物１、２、４、５、６、７である。

【0053】

特定の実施形態によれば、サンダルシクロペンタンは、式（Ｉ）の化合物から除外される。

【0054】

式（Ｉ）の選択された化合物または上記の実施形態のいずれかに入る化合物は、皮膚上に適用される場合、それらの抗炎症作用の基礎である免疫防御応答または免疫調節作用を活性化または促進することが見出された。

【0055】

典型的には、言及された免疫調節作用は、エクリン腺によって分泌されるタンパク質であるダームシジン（ＤＣＤ）によって媒介される。

【0056】

抗菌ペプチド（ＡＭＰ）とは対照的に、ダームシジンはヒトの汗に構成的に分泌され、炎症または皮膚損傷によって誘導されることはない。

【0057】

さらに、細菌膜に結合し、これを透過するカチオン性ペプチドであるデフェンシンおよびカテリシジンなどのより一般的なＡＭＰとは反対に、ダームシジンはアニオン性ペプチドであり、種々の分子機構によって細菌を死滅させる。

【0058】

これらの特性は、皮膚疾患における式（Ｉ）の選択された化合物のダームシジン媒介抗炎症活性を、カチオン性の性質を有する抗菌ペプチドから誘導不能にし、それらが細菌の膜分子に結合し、破壊することを可能にする。

【0059】

医療用途
本発明者らはまた、式（Ｉ）の化合物の皮膚への適用が、局所的（ｌｏｃａｌ）／局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）抗炎症作用を提供する特異的ペプチドであるダームシジンの発現を刺激することを証明した。

【0060】

これらの化合物は、それらを炎症性成分、特に乾癬、毛包炎、酒さおよび臭汗症、特に重度の臭汗症を伴う特定の皮膚疾患の処置に有用にする炎症性皮膚疾患に対する作用を発揮する。

【0061】

式（Ｉ）の化合物はまた、この障害が起源となる因子の１つが、式（Ｉ）の化合物の生物学的対象であるダームシジンによって調節されるエクリン汗腺からの皮膚分泌の調節不全であるため、臭汗症の処置に有用である。

【0062】

式（Ｉ）の化合物の皮膚への局所適用は、微生物相の組成を病理学的状態から健康な状態へ変化させ、したがって、炎症が成分である多くの異なる皮膚疾患において有効な結果となることも観察されている。

【0063】

これらの局面に従って、式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物の治療的有効量は、処置を必要とする皮膚の領域上に適用される。処置は、完全な回復まで、または関連する疾患の症状が実質的に減少もしくは解消されるまで、少なくとも１日に１回、好ましくは２回、組成物の適用を含むことができる。

【0064】

本開示はまた、皮膚の炎症性疾患の処置方法を提供し、前記方法は、有効量の式（Ｉ）の化合物または前記化合物を含有する組成物および薬学的に許容される担体の局所投与を含む。

【0065】

この態様によれば、本方法は、毛包炎の処置に有用である。

【0066】

本明細書中に開示される方法および組成物は、乾癬、酒さおよび毛包炎を含む、炎症性成分が存在する広範囲の皮膚障害のために使用され得る。

【0067】

これらの障害に対する現在の処置の課題は、抗生物質耐性、副作用、複雑なレジメン、および長期有効性の欠如を含む。本明細書に開示される処置は、抗生物質および／または抗炎症療法の代替物を提供し得、本発明による式（Ｉ）の化合物の使用は、単純な処置レジメンおよび長期有効性で副作用の非常に少ないかまたはないことを提示する。

【0068】

化粧品用途
式（Ｉ）の化合物は、紅潮した肌、赤色皮膚、皮膚皮疹および皮膚の赤みの審美的側面を改善することが観察されている。

【0069】

したがって、本発明の別の態様に従って、化粧品スキンケア処置としての式（Ｉ）の化合物の非治療的使用は、請求項５～１０に従って提供される。

【0070】

いくつかの実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物の、皮膚の不完全性もしくはシミの局所的防止および／もしくは処置のための、例えば、紅潮した肌の審美的局面を改善するための、または皮膚の皮疹を低減するための、または赤色の皮膚もしくは斑点を脱色させるための、化粧用、非治療的使用が提供される。

【0071】

式（Ｉ）の化合物またはそれを含有する組成物の化粧用使用の範囲内には、軽度のざ瘡および過剰な皮脂産生もある。

【0072】

本明細書中で使用される「化粧品的に許容される」という用語は、組成物の成分が、一般に皮膚または粘膜適用に適しており、適用される場合、それらは、望ましくない毒性、アレルギー応答、発赤、不適合性、不安定性、および類似の反応を引き起こさないことを意味する。

【0073】

組成物
本発明の別の態様によれば、本明細書において上記で言及される実施形態のいずれかによる式（Ｉ）の化合物の１つの有効量および生理学的に許容される担体を含む組成物が提供される。

【0074】

組成物は、医薬組成物または化粧品組成物であり得る。適切な担体は、薬学的、生理学的または化粧品的に許容される担体である。

【0075】

典型的には、組成物は、皮膚上または粘膜上への局所適用に適している。

【0076】

本明細書において、「担体」という用語は、活性を有さず、本発明の組成物中に存在し得る賦形剤、担体、希釈剤またはアジュバントを指す。投与に所望される調製物の形成に適した任意の担体および／または賦形剤が、本明細書に記載される使用において企図される。

【0077】

典型的には、化粧品的に許容される担体は、本発明の式（Ｉ）の化合物の化粧用に使用される。

【0078】

特定の実施形態に従って、本発明の組成物は、０．１～２０重量％、０．５～１５重量％、１～１０重量％の範囲の量の、薬学的に許容される、および／または生理学的に許容される担体または式（Ｉ）の化合物を含有する。

【0079】

典型的には、化粧品および医薬用途のいずれかのための本発明の組成物は、局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）／局所的（ｌｏｃａｌ）適用に適した任意の形態であり、固体状、流体または半流体形態であり得る。

【0080】

固体形態の適切な組成物は、クリーム、ペースト、軟膏、ゲル、医薬または化粧品用途のための包帯、およびスティック、メイクアップを含む。

【0081】

好ましい実施形態によれば、組成物は、局所的適用のためのクリームである。

【0082】

流体形態の適切な組成物は、懸濁液、溶液、ローション、ゲル、シャンプーなどの水ベースの配合物を含む。

【0083】

半流体形態の適切な組成物は、発泡体およびエマルションを含む。

【0084】

化粧品用途に適した形態としては、マスク、経皮ペーストまたはパッチが挙げられる。

【0085】

本発明の組成物において、医薬または化粧品製剤の基本的製剤に典型的に使用される１つ以上の賦形剤、例えば、油、グリセリン、エモリエント、乳化剤、分散剤が、所望の用途に典型的である量で包含されてもよい。

【0086】

本発明の組成物の配合物中に、クリーム状配合物のためのαビサボロール、イノシトール、ベタイン、アラントイン、セラミドのような付加的成分が存在してもよい。

【0087】

いくつかの実施形態において、本発明の流体または半流体組成物は、油、例えば水添ヒマシ油などの親油性物質を含有してもよい。

【0088】

液体形態の配合物の場合、水は、希釈剤または溶媒として存在し、任意に、医薬組成物または化粧品組成物の配合に使用される他の液体と混合される。

【0089】

別の実施形態によれば、化粧品組成物は、増粘剤、可溶化剤、防腐剤、水、アルコール、グリセリン、安定剤、化粧品的に許容される抗酸化剤および抗菌剤のうちの１つ以上を、一般的な医薬または化粧品の実際に従う量でさらに含む。

【0090】

本説明は、本発明の実施形態を表す以下の実施例を参照して、以下でさらに説明される。

【実施例】

【0091】

実施例１
クリーム

【表2】

【0092】

実施例２
ローション

【表3】

【0093】

実施例３
消臭剤

【表4】

【0094】

実施例４
ボディクリーム

【表5】

【0095】

実施例５
フェイスクリーム

【表6】

【0096】

実施例６
スプレー液

【表7】

【0097】

実施例７
膣液

【表8】

【0098】

実施例８
サンダルペンタノールによるダームシジンの調節（促進）の実験的証拠。
この実験的証拠はまた、Ｓｈｏｃｋ、２０１６年１月；４５（１）：２８－３２．ｄｏｉ．１０９７／ＳＨＫ０００００００００００００４８８に公開されたＥｃｈｏ Ｗａｎｇらの論文「Ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａ ｓｗｅｄｔ ｇｌａｎｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎｔｉ－ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｒｍｃｉｄｉｎ」において証明されたデルミシジンの抗引火活性に基づいており、特に図３は、デルミシジンがヒト単球によるＬＰＳ－およびＨＭＧＢ１誘導ケモカイン（炎症促進性サイトカイン）放出を調節することを示す。

【0099】

ＨＦ器官培養：
ヒト頭皮試料は、美容整形手順の１日後（すなわち、共同外科医からの一晩輸送後）に得られ、ヒトアナゲンＶＩ頭皮ＨＦを顕微解剖するために同じ日に使用された。本研究で使用される古典的フィルポットアッセイを設定するために使用されるＨＦ顕微解剖技術は、ＨＦの真皮シースを単に除いて、すべての濾胞周囲組織を除去し、したがって、いかなる他の皮膚付属器構造（例えば、エクリン腺要素）も含まない。顕微解剖したヒト頭皮ＨＦを、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｎｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０μｇ／ｍｌのインスリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および１％のペニシリン／ストレプトマイシン混合物（Ｇｉｂｃｏ）（ＷＥＭ）を補充したウィリアムＥ培地の最小培地（ＷＥＭ，Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、５％のＣＯ_２を含む３７℃で培養した。顕微解剖後、最初にＨＦをＷＥＭ中で２４時間インキュベートして再平衡化した。

【0100】

サンダルペンタノールによるヒト顕微解剖ＨＦの化学的刺激
２４時間後、ＷＥＭ媒体は交換され、ＨＦはビヒクル（０．１％のＤＭＳＯ）、サンダルペンタノール５００μＭで、（免疫）組織学について３日または５日間、またはマイクロアレイについて６時間処理された。培養培地を２日ごとに交換し、６日後にＨＦをｃｒｙｏｍａｔｒｉｘ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中に包埋し、（免疫）組織学のために液体窒素中でスナップ凍結した。

【0101】

マイクロアレイ分析
発現の変化は、４人の患者中少なくとも３人で１．８倍以上かつ等方向性の変化が認められた場合のみ有意であると考慮した（独立実験）。

【0102】

ダームシジン免疫蛍光染色
ＯＣＴ包埋試料を、Ｌｅｉｃａクライオスタットで切片化した。４％パラホルムアルデヒド中の組織切片を用いて、ダームシジンタンパク質を検出し、１０％のヤギ血清と共に予備インキュベートし、マウス抗ヒトダームシジン（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｇ－８１、１：２００）と共にインキュベートした。二次抗体（ヤギ抗マウス－Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８）インキュベーションを、室温で４５分間行った。ＤＡＰＩ（１μｇ／ｍＬ）による対比染色を行って、核を可視化した。

【0103】

結果
ダーミシジンタンパク質発現は、３日間および５日間のサンダルペンタノール（５００μＭ）処理後に、毛包外根シースケラティノサイトにおいてｅｘ ｖｉｖｏで増加する（図１）。

【0104】

データは、以下の表１で確認される。

【0105】

マイクロアレイ分析によって、ＡＭＰｓ遺伝子の転写がアップレギュレートされ、特にダームシジン発現が７７．６倍増加したことから、ＳａｎｄａｌｏｒｅはＡＭＰ分泌を有意に促進することが明らかになった。

【0106】

【表9】

【図1】