特許 7506606 脊髄性筋萎縮症を治療する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-06-18

(45)【発行日】2024-06-26

(54)【発明の名称】脊髄性筋萎縮症を治療する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7125 20060101AFI20240619BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240619BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240619BHJP

   G01N 33/68 20060101ALI20240619BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240619BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7125

A61P21/00

A61P43/00 121

G01N33/68 ZNA

C12N15/12

【請求項の数】 52

(21)【出願番号】P 2020561604

(86)(22)【出願日】2019-01-25

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-05-06

(86)【国際出願番号】 US2019015185

(87)【国際公開番号】W WO2019147960

(87)【国際公開日】2019-08-01

【審査請求日】2022-01-13

(31)【優先権主張番号】62/622,027

(32)【優先日】2018-01-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/684,507

(32)【優先日】2018-06-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/738,134

(32)【優先日】2018-09-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514198367

【氏名又は名称】バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｂｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】フェアウェル， ウィルドン

(72)【発明者】

【氏名】スタロポリ， ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ， グオリン

(72)【発明者】

【氏名】マッキャンベル， アレクサンダー

(72)【発明者】

【氏名】ステビンス， クリストファー コーディー

【審査官】春日 淳一

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／２０７６００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００９－５４５６１７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１２－５２６０４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１０／０２６７０７３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０２８５８２２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１７／０３６３６４３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１３／０２８０７３３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】「スピンラザ髄注１２ｍｇ」添付文書，バイオジェン・ジャパン株式会社，2017年09月

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ，Ａ６１Ｐ

ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とするヒト対象において脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療するための、ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩を含む組成物であって、前記ヒト対象が前もって、前記ヒト対象から得られた生体試料中で、前記治療の開始前にニューロフィラメントレベルが対照よりも高いと判定されており、前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記組成物。

【請求項2】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法において使用するための、ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩を含む組成物であって、前記方法は、
治療の開始前に前記ヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
前記ヒト対象に前記組成物を投与することであって、前記ヒト対象が、対照より高い、治療の開始前の前記ヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを有する、前記投与することと
を含む、前記組成物。

【請求項3】

前記生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが４００ｐｇ／ｍＬを上回る、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

それを必要とするヒト対象において脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療する方法において使用するためのＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物であって、前記方法は、
治療の開始前に前記ヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第１の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
前記ヒト対象に前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物を投与することであって、前記ヒト対象が、対照より高い、治療の開始前の前記ヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを有する、前記投与することと、
前記治療の開始後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメント軽鎖または前記リン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第２の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと
を含み、
前記ＳＭＡ治療剤が、ヌシネルセン、ヌシネルセン塩、オレソキシム、ＡＶＸ－１０１、ＣＫ－２１２７１０７、ＲＧ７９１６、ＲＧ７８００、ＲＯ７０３４０６７、ＬＭＩ０７０、ＳＲＫ－０１５、ＡＡＶ９－ＳＭＮ１、ＡＶＸＳ－１０１、バルプロ酸、酪酸ナトリウム、フェニル酪酸、またはトリコスタチンＡである、前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項5】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルよりも低い、請求項４に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項6】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルの１０％～９５％である、請求項５に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項7】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から４０～９０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項４～６のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項8】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から５０～８０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項４～６のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項9】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から６０～７０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項４～６のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項10】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から約６４日後に前記ヒト対象から得られる、請求項４～６のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項11】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する、請求項７～１０のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項12】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する、請求項７～１０のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項13】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する、請求項７～１０のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項14】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する、請求項７～１０のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項15】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する、請求項７～１０のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項16】

前記第１の生体試料で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べての、前記第２の生体試料で測定されたニューロフィラメントレベルの前記減少パーセントに基づいて、前記ヒト対象に次に投与するための前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の用量が変更される、請求項７～１５のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項17】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルよりも高い、請求項４に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項18】

前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の投与が継続される、請求項４～１７のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項19】

前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の投与が中止される、請求項１７に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項20】

異なるＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物が、前記治療の中止後に前記ヒト対象に投与されることを特徴とする、請求項１９に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項21】

前記異なるＳＭＡ治療剤が、ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩である、請求項２０に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項22】

前記第１の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが３００ｐｇ／ｍＬを上回る、請求項４～２１のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項23】

前記第１の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが５，０００ｐｇ／ｍＬを上回る、請求項４～２１のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項24】

それを必要とするヒト対象において脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療する方法において使用するためのＳＭＡ治療剤またはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物であって、前記方法は、
前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の候補量の投与前に前記ヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第１の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の前記候補量の投与後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメント軽鎖または前記リン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第２の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液であり、前記第２の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが前記第１の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルよりも低いことにより、前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の前記候補量が治療有効量であることが示される、前記測定することと、
前記第２の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベル低下を測定した後に、前記ヒト対象に前記ＳＭＡ治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物の前記治療有効量を投与することと
を含み、
前記ＳＭＡ治療剤が、ヌシネルセン、ヌシネルセン塩、オレソキシム、ＡＶＸ－１０１、ＣＫ－２１２７１０７、ＲＧ７９１６、ＲＧ７８００、ＲＯ７０３４０６７、ＬＭＩ０７０、ＳＲＫ－０１５、ＡＡＶ９－ＳＭＮ１、ＡＶＸＳ－１０１、バルプロ酸、酪酸ナトリウム、フェニル酪酸、またはトリコスタチンＡである、前記治療剤または前記ＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項25】

生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルを、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の予後の指標とする方法であって、前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、
両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた前記生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルを対照と比較することとを含み、
前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、前記方法。

【請求項26】

前記生体試料が、ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩による治療の開始前に前記ヒト対象から得られ、前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、治療の不在下で前記ヒト対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記生体試料が、ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩による治療の開始後に前記ヒト対象から得られ、前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記治療を受けている間に前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、請求項２５に記載の方法。

【請求項28】

前記生体試料が、前記治療の開始から少なくとも２週間後に前記ヒト対象から得られる、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記生体試料が、前記治療の開始から少なくとも２ヵ月後に前記ヒト対象から得られる、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩による治療の開始前および開始後の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルを、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の予後の指標とする方法であって、前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、
治療の開始前に、両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第１の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
ヌシネルセンまたはヌシネルセン塩による治療の開始後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、前記第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記第２の生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することと、
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルを、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比較することとを含み、
前記第１の生体試料で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べての前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、前記方法。

【請求項31】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から４０～９０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から５０～８０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から６０～７０日後に前記ヒト対象から得られる、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記第２の生体試料が、前記治療の開始から約６４日後に前記ヒト対象から得られる、請求項３０に記載の方法。

【請求項35】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記対照が、予め確立されたニューロフィラメントのカットオフ値である、請求項１に記載の組成物。

【請求項41】

前記対照が、予め確立されたニューロフィラメントのカットオフ値である、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記対照が、ＳＭＡを有しないヒト対象１例以上から得られた生体試料（１つまたは複数）中の前記ニューロフィラメントレベルである、請求項１に記載の組成物。

【請求項43】

前記対照が、ＳＭＡを有しないヒト対象１例以上から得られた生体試料（１つまたは複数）中の前記ニューロフィラメントレベルである、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

ニューロフィラメントレベルを測定するための方法であって、前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、
両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた生体試料を準備することと、
前記生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントが、ニューロフィラメント軽鎖またはリン酸化ニューロフィラメント重鎖であり、前記生体試料が、血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、前記測定することとを含む、前記方法。

【請求項45】

前記ニューロフィラメントがリン酸化ニューロフィラメント重鎖である、請求項１～３、４０もしくは４２のいずれか１項に記載の組成物、または請求項４～２７のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤もしくはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項46】

前記ニューロフィラメントがリン酸化ニューロフィラメント重鎖である、請求項２５～３９、４１、４３または４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記ニューロフィラメントがニューロフィラメント軽鎖である、請求項１～３、４０もしくは４２のいずれか１項に記載の組成物、または請求項４～１８、１９～２４のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤もしくはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項48】

前記ニューロフィラメントがニューロフィラメント軽鎖である、請求項２５～３９、４１、４３または４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ヒト対象が乳幼児である、請求項１～３、４０、４２、４５もしくは４７のいずれか１項に記載の組成物、または請求項４～２４のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤もしくはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項50】

前記ヒト対象が１８歳未満である、請求項１～３、４０、４２、４５もしくは４７のいずれか１項に記載の組成物、または請求項４～２４のいずれか１項に記載のＳＭＡ治療剤もしくはＳＭＡ治療剤の組み合わせ物。

【請求項51】

前記ヒト対象が乳幼児である、請求項２５～３９、４１、４３、４４、４６もしくは４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記ヒト対象が１８歳未満である、請求項２５～３９、４１、４３、４４、４６もしくは４８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６２／６２２，０２７号（２０１８年１月２５日出願）、米国仮特許出願第６２／６８４，５０７号（２０１８年６月１３日出願）、及び米国仮特許出願第６２／７３８，１３４号（２０１８年９月２８日出願）の優先権を主張する。前述の出願の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

技術分野
本開示は概して、脊髄性筋萎縮症のバイオマーカーに関する。

【背景技術】

【0003】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす常染色体劣性遺伝性障害であり、ＳＭＮタンパク質の欠乏は、ひいては前角運動ニューロンの喪失、軸索の劣化、ならびに進行性筋消耗、運動障害、及び呼吸不全の表現型をもたらす。疾患の重症度は５つのタイプ（０～４）に分類され、０型の患者は、最も重度の（新生児致死）表現型を有し、４型の患者は、最も軽度の症状を有するにとどまり、寿命は正常である。

【0004】

ＳＭＡを有する対象をタイムリーかつ適切に治療するには、ＳＭＡを治療するための療法を用いた治療を必要とする症状発現前の対象を選択し、そのＳＭＡ療法が有効であるかを判定する能力が求められる。したがって、ＳＭＡのバイオマーカーが必要である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

ニューロフィラメントは神経細胞骨格の主要な構成要素であり、特にニューロフィラメントが成長及び維持に必須な軸索においては主要な構成要素である。構造的には、ニューロフィラメントは３つの絡み合ったコアサブユニット：ニューロフィラメント重（ＮＦ－Ｈ）、中／中間（ＮＦ－Ｍ）、及び軽（ＮＦ－Ｌ）ポリペプチドからなり、これらのサブユニットが「ニューロフィラメントトリプレット」を形成する。本開示は、少なくとも部分的には、ニューロフィラメントレベルが脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）に対する有効なバイオマーカーとして働くという知見に基づく。

【0006】

１つの態様において、本開示はＳＭＡを治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法を特徴とする。当該方法は、ヒト対象にＳＭＡ療法の治療有効量を投与することを含み、このときヒト対象は前もって、ヒト対象から得られた生体試料中で、ＳＭＡ療法の開始前にニューロフィラメントレベルが対照よりも高いと判定されている。当該方法は、例えば、症状発現前の対象の治療に使用することができる。

【0007】

別の態様において、本開示は、ヒト対象におけるＳＭＡを治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。当該方法は、ＳＭＡ療法を開始する前のヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、ヒト対象にＳＭＡ療法の治療有効量を投与することとを含む。

【0008】

上記の２つの態様におけるいくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、リン酸化ニューロフィラメント重（ＰＮＦ－Ｈ）レベル）は対照レベルを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は３００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は４００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は５００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は６００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は７００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は８００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は９００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，１００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，２００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，３００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，４００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は１，５００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は２，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は３，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は４，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は５，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。これらのニューロフィラメントレベルは、本出願の実施例セクションに記載のアッセイを用いて得ることができる。異なる読出し（例えば、Ｏ．Ｄ．または国際単位）をもたらす異なるニューロフィラメントアッセイが使用される場合、ニューロフィラメントレベルの値が異なり得ることを理解されたい。

【0009】

別の態様において、本開示は、ＳＭＡを治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法を特徴とする。当該方法は、ＳＭＡ療法の開始前にヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することと、ヒト対象にＳＭＡ療法（例えば、ＳＭＡ療法の治療有効量）を投与することと、ＳＭＡ療法の開始後にヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することとを含む。

【0010】

別の態様において、本開示は、ＳＭＡを治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法を特徴とする。当該方法は、ＳＭＡ療法の候補量の投与前にヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することと、ＳＭＡ療法の候補量の投与後にヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することとであって、第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルが第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルよりも低いことにより、ＳＭＡ療法の候補量が治療有効量であることが示される、測定することと、第２の生体試料中のニューロフィラメントレベル低下を測定した後に、ヒト対象にＳＭＡ療法の治療有効量を投与することとを含む。

【0011】

ある特定の実施形態において、第１の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、３００ｐｇ／ｍＬ超、４００ｐｇ／ｍＬ超、５００ｐｇ／ｍＬ超、６００ｐｇ／ｍＬ超、７００ｐｇ／ｍＬ超、８００ｐｇ／ｍＬ超、９００ｐｇ／ｍＬ超、１，０００ｐｇ／ｍＬ超、１，５００ｐｇ／ｍＬ超、２，０００ｐｇ／ｍＬ超、３，０００ｐｇ／ｍＬ超、４，０００ｐｇ／ｍＬ超、または５，０００ｐｇ／ｍＬ超である。ある特定の実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルよりも低い。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルに対する３０％超の低下を示す。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの１０％～８０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの２０％～９５％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～９０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～９５％である。このような場合には、ＳＭＡ療法の投与が継続される。ある特定の実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルよりも高い。このような場合には、ＳＭＡ療法の投与が中止される。

【0012】

いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から５０～８０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から６０～７０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から約６４日後にヒト対象から得られる。

【0013】

第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する。

【0014】

第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する。

【0015】

第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べての第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの減少パーセントに基づいて、ヒト対象に次に投与するためのＳＭＡ療法の用量が変更される。

【0016】

別の態様において、本開示は、ＳＭＡの予後を予測する方法に関する。当該方法は、両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異（変異はホモ接合性であってもヘテロ接合性であってもよい）を有するヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することを含む。当該方法はさらに、生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を対照と比較することを含む。対照と比べての生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、対照が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる。

【0017】

ある特定の実施形態において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始前にヒト対象から得られ、対象と比べての生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、治療の不在下でヒト対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる。

【0018】

いくつかの実施形態において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始後にヒト対象から得られ、対象と比べての生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、ＳＭＡ療法を受けている間に対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも２週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも４週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも６週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも８週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも１０週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも１２週間後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも２ヵ月後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも３ヵ月後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも４ヵ月後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも５ヵ月後にヒト対象から得られる。ある特定の場合において、生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から少なくとも６ヵ月後にヒト対象から得られる。

【0019】

別の態様において、本開示は、ＳＭＡの予後を予測する方法に関する。当該方法は、ＳＭＡ療法の開始前の、両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異（変異はホモ接合性であってもヘテロ接合性であってもよい）を有するヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することを含む。当該方法はさらに、ＳＭＡ療法の開始後にヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することを含む。当該方法はさらに、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）と比較することを含む。第１の生体試料で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）と比べての第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）は、対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる。概して、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）と比べての第２の試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）の減少パーセントが大きいほど、ヒト対象の将来的な運動機能の予後判定は良好である。

【0020】

いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から５０～８０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から６０～７０日後にヒト対象から得られる。いくつかの実施形態において、第２の生体試料は、ＳＭＡ療法の開始から約６４日後にヒト対象から得られる。

【0021】

第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する。

【0022】

第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する。第２の生体試料がＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後、５０～８０日後、６０～７０日後、または約６４日後にヒト対象から得られるいくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する。

【0023】

以下の実施形態は、上記の態様のいずれにも適用される。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法はヌシネルセンまたはヌシネルセン塩を含む。いくつかの場合において、ＳＭＡ療法はヌシネルセンナトリウムを含む。ある特定の場合において、ヌシネルセンナトリウムは、５ｍＬの２．４ｍｇ／ｍＬ溶液の髄腔内注入によって投与される。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法は、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）、オレソキシム、ＡＶＸ－１０１、ＣＫ－２１２７１０７、ＲＧ７９１６、ＲＧ７８００、ＲＯ７０３４０６７、ＬＭＩ０７０、またはＳＲＫ－０１５の１つ以上を含む。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法は小分子を含む。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法は遺伝子療法を含む。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法はｐ３８ａＤＭＡＰＫ阻害剤を含む。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法はＤｃｐＳ阻害剤を含む。ある特定の場合において、ＳＭＡ療法はＪＮＫ阻害剤を含む。ある特定の場合において、対照は、予め確立されたニューロフィラメントのカットオフ値である。いくつかの場合において、対照は、ＳＭＡを有しないヒト対象１例以上から得られた生体試料（１つまたは複数）中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）である。

【0024】

別の態様において、本開示は、ニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定するための方法を特徴とする。当該方法は、両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた生体試料を準備することと、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈレベル）を測定することとを含む。

【0025】

これらの実施形態は、上記の態様のいずれにも適用される。ある特定の場合において、ニューロフィラメントはニューロフィラメント重鎖（例えば、リン酸化ＮＦ－Ｈ）である。ある特定の場合において、ニューロフィラメントはニューロフィラメント中鎖／中間鎖である。ある特定の場合において、ニューロフィラメントはニューロフィラメント軽鎖である。ある特定の場合において、ニューロフィラメントはインターネキシンである。ある特定の場合において、ニューロフィラメントはペリフェリンである。ある特定の場合において、生体試料は血液、血清、血漿、または脳脊髄液である。ある特定の場合において、ＮＦ－Ｈは、ポリクローナル抗ＮＦ－Ｈ抗体を用いて検出される。ある特定の場合において、ＮＦ－Ｈは、高リン酸化形態のＮＦ－Ｈを特異的に検出するポリクローナル抗ＮＦ－Ｈ抗体（例えば、Ｅｎｃｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙカタログ番号ＲＰＣＡ－ＮＦ－Ｈ及び／またはカタログ番号ＣＰＣＡ－ＮＦ－Ｈ）を用いて検出される。いくつかの事例において、ＮＦ－Ｈは、モノクローナル抗ＮＦ－Ｈ抗体を用いて検出される。ある特定の実施形態において、ヒト対象は胎児である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は乳幼児である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は生後６ヵ月未満である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は生後６ヵ月超である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は１２歳未満である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は１８歳未満である。ある特定の実施形態において、ヒト対象は１８歳以上の成人である。

【0026】

別途定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施または試験においては、本明細書に記載されたものに類似するまたは同等の方法及び材料を使用してもよいが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により援用される。矛盾が生じる場合は、定義を含めて本出願が優先される。材料、方法、及び実施例は、例示的なものに過ぎず、限定的であるようには意図されていない。

【0027】

本発明におけるその他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかとなる。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記ヒト対象に、ＳＭＡ療法の治療有効量を投与することを含み、前記ヒト対象が前もって、前記ヒト対象から得られた生体試料中で、前記ＳＭＡ療法の開始前にニューロフィラメントレベルが対照よりも高いと判定されている、前記方法。
（項目２）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
ＳＭＡ療法の開始前に前記ヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記ヒト対象に前記ＳＭＡ療法の治療有効量を投与することとを含む、前記方法。
（項目３）
前記生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが４００ｐｇ／ｍＬを上回る、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
ＳＭＡ療法の開始前に前記ヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記ヒト対象にＳＭＡ療法を投与することと、
前記ＳＭＡ療法の開始後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することとを含む、前記方法。
（項目５）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルよりも低い、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルの１０％～９５％である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後に前記ヒト対象から得られる、項目４～６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から５０～８０日後に前記ヒト対象から得られる、項目４～６のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から６０～７０日後に前記ヒト対象から得られる、項目４～６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から約６４日後に前記ヒト対象から得られる、項目４～６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する、項目７～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する、項目７～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する、項目７～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する、項目７～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する、項目７～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記第１の生体試料で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べての、前記第２の生体試料で測定されたニューロフィラメントレベルの前記減少パーセントに基づいて、前記ヒト対象に次に投与するための前記ＳＭＡ療法の用量が変更される、項目７～１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルよりも高い、項目４に記載の方法。
（項目１８）
前記ＳＭＡ療法の投与が継続される、項目４～１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記ＳＭＡ療法の投与が中止される、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療することを、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、
ＳＭＡ療法の候補量の投与前に前記ヒト対象から得られた第１の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記ＳＭＡ療法の前記候補量の投与後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することであって、前記第２の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルが前記第１の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベルよりも低いことにより、前記ＳＭＡ療法の前記候補量が治療有効量であることが示される、前記測定することと、
前記第２の生体試料中の前記ニューロフィラメントレベル低下を測定した後に、前記ヒト対象に前記ＳＭＡ療法の前記治療有効量を投与することとを含む、前記方法。
（項目２１）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の予後を予測する方法であって、
両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルを対照と比較することとを含み、
前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、前記方法。
（項目２２）
前記生体試料が、ＳＭＡ療法の開始前に前記ヒト対象から得られ、前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、治療の不在下で前記ヒト対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記生体試料が、ＳＭＡ療法の開始後に前記ヒト対象から得られ、前記対照と比べての前記生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記ＳＭＡ療法を受けている間に前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から少なくとも２週間後に前記ヒト対象から得られる、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から少なくとも２ヵ月後に前記ヒト対象から得られる、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の予後を予測する方法であって、
ＳＭＡ療法の開始前に、両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記ＳＭＡ療法の開始後に前記ヒト対象から得られた第２の生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することと、
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルを、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比較することとを含み、
前記第１の生体試料で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べての前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記対象が罹患するＳＭＡの重症度またはタイプを予測できる、前記方法。
（項目２７）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から４０～９０日後に前記ヒト対象から得られる、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から５０～８０日後に前記ヒト対象から得られる、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から６０～７０日後に前記ヒト対象から得られる、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
前記第２の生体試料が、前記ＳＭＡ療法の開始から約６４日後に前記ヒト対象から得られる、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも５０％減少する、項目２６～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも６０％減少する、項目２６～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて少なくとも７０％減少する、項目２６～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて５０％未満減少する、項目２６～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記第２の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルが、前記第１の生体試料中で測定された前記ニューロフィラメントレベルと比べて４０％未満減少する、項目２６～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記ＳＭＡ療法がヌシネルセンまたはヌシネルセン塩である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記ＳＭＡ療法がヌシネルセンナトリウムである、項目１～３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
前記ＳＭＡ療法が、オレソキシム、ＡＶＸ－１０１、ＣＫ－２１２７１０７、ＲＧ７９１６、ＲＧ７８００、ＲＯ７０３４０６７、ＬＭＩ０７０、またはＳＲＫ－０１５である、項目１～３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記対照が、予め確立されたニューロフィラメントのカットオフ値である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記対照が、ＳＭＡを有しないヒト対象１例以上から得られた生体試料（１つまたは複数）中の前記ニューロフィラメントレベルである、項目１～３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４１）
ニューロフィラメントレベルを測定するための方法であって、
両方のコピーのＳＭＮ１遺伝子において機能的ＳＭＮタンパク質の欠乏をもたらす変異を有するヒト対象から得られた生体試料を準備することと、
前記生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することとを含む、前記方法。
（項目４２）
前記ニューロフィラメントがニューロフィラメント重鎖である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記ニューロフィラメントがリン酸化ニューロフィラメント重鎖である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記ニューロフィラメントがニューロフィラメント中鎖／中間鎖である、項目１～４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記ニューロフィラメントがニューロフィラメント軽鎖である、項目１～４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記生体試料が血液、血清、血漿、または脳脊髄液である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】ＥＭＢＲＡＣＥ及びＮＵＲＴＵＲＥ臨床試験からの同じ対象における同じ時点の血漿及びＣＳＦ試料中のリン酸化ニューロフィラメント重鎖（ｐＮＦ－Ｈ）レベルを示している。

【図2】２コピー、３コピー、または４コピーのＳＭＮ２を有する、ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ臨床試験からの対象における血漿試料中のｐＮＦ－Ｈレベルを示している。

【図3】２コピーのＳＭＮ２を有する対象における、年齢増加に伴うｐＮＦ－Ｈレベルを示す図である。

【図4】３コピーのＳＭＮ２を有する対象における、年齢増加に伴うｐＮＦ－Ｈレベルを示す図である。

【図5】２、３、または４コピーのＳＭＮ２を有する対象におけるｐＮＦ－Ｈレベル及び症状発症年齢を示す図である。

【図6】ベースラインのｐＮＦ－Ｈレベル別にベースラインの特徴及びＳＭＡ既往歴を示す表である。

【図7】ベースラインのｐＮＦ－Ｈレベル別にベースラインの特徴及びＳＭＡ既往歴を示す表である。

【図8】ベースラインのｐＮＦ－Ｈレベル別にベースラインの特徴及びＳＭＡ既往歴を示す表である。

【図9】ベースライン対数（ｐＮＦ－Ｈ）レベルとベースラインＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアとの相関を示している。

【図10】ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈレベルによってベースラインの表現型を関連づける能力を示す表である。

【図11】ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈレベルを示すグラフである。

【図12】ＥＮＤＥＡＲにおけるＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図13】ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈレベルに対するＳＭＡ薬物療法を示すグラフである。

【図14】ＥＮＤＥＡＲにおけるＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントに対するＳＭＡ薬物療法を示すグラフである。

【図15】様々な時点におけるｐＮＦ－Ｈレベルの変化を示す図である。

【図16】１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。

【図17】１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性（共変数を伴う）を示している。

【図18】１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。

【図19】１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性（共変数を伴う）を示している。

【図20】ＨＩＮＥ－２（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリーに対する１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを示す図である。

【図21】ＨＩＮＥ－２（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリーに対する１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図22】ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリーに対する１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを示すグラフである。

【図23】ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリーに対する１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図24】ＮＵＲＴＵＲＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルに基づく薬物効果の維持を示すグラフである。

【図25】ＥＭＢＲＡＣＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルに基づく薬物効果の維持を示すグラフである。

【図26】ＮＵＲＴＵＲＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルの変化パーセントに対する薬物効果を示すグラフである。

【図27】ＥＭＢＲＡＣＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルの変化パーセントに対する薬物効果を示すグラフである。

【図28】１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。上のグラフ：ルートＭＳＥ：２．８７０６９；Ｒ２乗：０．０１８４；調整済みＲ２乗：０．０００２。下のグラフ：ルートＭＳＥ：１．７０５７６；；Ｒ２乗：０．２２４；調整済みＲ２乗：０．１８３１。ＤＦ＝自由度；ＭＳＥ＝平均２乗誤差。

【図29】１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。上のグラフ：ルートＭＳＥ：１０．０９３９９；Ｒ２乗：０．０７５４；調整済みＲ２乗：０．０５８３。下のグラフ：ルートＭＳＥ：９．４１１６６；；Ｒ２乗：０．２１７６；調整済みＲ２乗：０．１７６４。ＤＦ＝自由度；ＭＳＥ＝平均２乗誤差。

【図30】３０２日目の欠損値を伴わない生存乳児における経時的なｐＮＦ－Ｈレベルを示すグラフである。

【図31】３０２日目の欠損値を伴わない生存乳児における経時的なｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図32】１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。

【図33】１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。上のグラフ：ルートＭＳＥ：０．５６４０１；Ｒ２乗：０．０１６４；調整済みＲ２乗：－０．００２９。下のグラフ：ルートＭＳＥ：０．１８９３３；；Ｒ２乗：０．２９０６；調整済みＲ２乗：０．２５１２。ＤＦ＝自由度；ＭＳＥ＝平均２乗誤差。

【図34】１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ（複合筋活動電位）振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。ルートＭＳＥ：０．２４９０４；；Ｒ２乗：０．１７４６；調整済みＲ２乗：０．１６３３。ＤＦ＝自由度；ＭＳＥ＝平均２乗誤差。

【図35】１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性を示すグラフである。上のグラフ：ルートＭＳＥ：０．２８２４；Ｒ２乗：０．０５１７；調整済みＲ２乗：０．０３３８。下のグラフ：ルートＭＳＥ：０．１１１１８；；Ｒ２乗：０．２４０６；調整済みＲ２乗：０．１９８４。ＤＦ＝自由度；ＭＳＥ＝平均２乗誤差。

【図36A】２９日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定が３０２日目の運動機能の予測に有効であることを示す受信者動作特性（ＲＯＣ）グラフである。

【図36B】６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定が３０２日目の運動機能の予測に有効であることを示す受信者動作特性（ＲＯＣ）グラフである。

【図36C】１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定が３０２日目の運動機能の予測に有効であることを示す受信者動作特性（ＲＯＣ）グラフである。

【図37】ｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定がＥＮＤＥＡＲにおけるＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダー（Ａ）及び運動マイルストーンレスポンダー（Ｂ）の予測因子として有効であることを示すグラフである。

【図38A】ｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定がＣＨＥＲＩＳＨにおけるＨＦＭＳＥレスポンダーの予測因子として有効であることを示すグラフである。

【図38B】ｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定がＣＨＥＲＩＳＨにおけるＲＵＬＭレスポンダーの予測因子として有効であることを示すグラフである。

【図38C】ｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントの測定がＣＨＥＲＩＳＨにおけるＷＨＯレスポンダーの予測因子として有効であることを示すグラフである。

【図39A】患者集団別の初回用量時年齢（Ａ）及びＳＭＮ２コピー数（Ｂ）に対するベースラインの脳脊髄液中ｐＮＦ－Ｈレベルを示すグラフである。

【図39B】同上。

【図40】ヌシネルセンを用いた治療後の脳脊髄液中ｐＮＦ－Ｈレベルの低下を示すグラフである。

【図41A】ヌシネルセンを用いた治療後の、症状発現前の対象のＣＳＦ中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図41B】ヌシネルセンを用いた治療後の、乳児発症型の対象のＣＳＦ中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図41C】ヌシネルセンを用いた治療後の、乳児発症型の対象の血漿中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図41D】ヌシネルセンを用いた治療後の、遅発型の対象の血漿中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの変化パーセントを示すグラフである。

【図41E】ヌシネルセンを用いた治療後の、乳児発症型の対象の血漿中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの絶対値変化を示すグラフである。

【図41F】ヌシネルセンを用いた治療後の、遅発型の対象の血漿中におけるｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルの絶対値変化を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本開示は、部分的には、ニューロフィラメント（ＮＦ）レベルがＳＭＡの有効なバイオマーカーとして機能し得るという驚くべき知見に基づいている。

【0030】

１．脊髄性筋萎縮症
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、コーカサス人においては嚢胞性線維症に次いで２番目に多い致死性の常染色体劣性障害である。この疾患は、脊髄前角におけるアルファ運動ニューロンの進行性変性を特徴とし、筋萎縮、麻痺、そして場合によっては死をも引き起こす。ＳＭＡの最も一般的な形態は、５ｑ１３運動ニューロン生存（ＳＭＮ１）遺伝子における変異によって引き起こされる。この障害は、６，０００～１０，０００例に１例の乳児が発症し、保因者の頻度は４０例に１例である。ＳＭＡについてはいくつかの臨床型が説明されており、当該障害を発症年齢及び症状の進行に応じて分類している。

【0031】

上記分類によれば、ＳＭＡには５つの型：０型（胚形態）、Ｉ型（ウェルドニッヒ・ホフマン型）、ＩＩ型（中間型）、ＩＩＩ型（クーゲルベルク・ウェランダー型）、及びＩＶ型（成人形態）が存在する。最も重症の０型は、妊娠３０～３６週における胎児の運動減少及び非常に短い余命を特徴とする。Ｉ型はその次に重症の形態であり、生後６ヵ月より前に発症し、およそ２年の余命である。ＩＩ型及びＩＩＩ型は慢性形態として知られており、重症度はより低く、それぞれ生後６～１８ヵ月（ＩＩ型）及び生後１８ヵ月以後（ＩＩＩ型）に発症する。多くの事例において、ＩＶ型はＩＩＩ型の症状によく似ているが、発症時期は１８歳以後（典型的にはおよそ３０歳）である。余命が正常であることは、この成人形態に特徴的である。

【0032】

ＳＭＡ決定遺伝子ＳＭＮ１は、５ｑ１１．２－１３．３領域にマッピングされた。ＳＭＮ１ エクソン７のホモ接合性欠失はＳＭＡ患者に最も一般的に見られる変異であるが、欠失及び異なる点変異が検出された複合ヘテロ接合型患者の症例もいくつか存在する。ヒトにおいては、各アレルにＳＭＮ遺伝子の２つの形態：テロメア形態（ＳＭＮ１）及びセントロメア形態（ＳＭＮ２）が存在する。ＳＭＮ１遺伝子の転写により、ＳＭＮタンパク質をコードする全長メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物が産生される。ＳＭＮ２遺伝子は、８４０位におけるＣからＴの置換を除いてＳＭＮ１遺伝子と同一であり、この置換は転写中のエクソン７の排除をもたらす。得られた切断タンパク質は機能せず、急速に分解される。重要なことには、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡからのエクソン７の排除が完全ではないため、ＳＭＮ２から生じる全ｍＲＮＡ転写物のうちのごく一部（およそ１０％～１５％）はエクソン７を含み、正常なＳＭＮタンパク質をコードする。ただし、全長ＳＭＮタンパク質が合成される量は、運動ニューロン生存を維持することができないほど少量である。

【0033】

ＳＭＡを有する全ての患者は、機能的なＳＭＮ１遺伝子が欠如しているため、生存に必要なＳＭＮタンパク質の産生をＳＭＮ２遺伝子に依存する。したがって、ＳＭＡは、ＳＭＮタンパク質の欠乏によって引き起こされる。いくつかの遺伝型／表現型解析により、ＳＭＮ２コピー数とより軽度のＳＭＡ表現型との間に正の相関があることが示されている。ＳＭＮ２コピー数はＳＭＡの重症性における主要な決定因子であるが、唯一の表現型修飾因子でないことは明らかである。当技術分野は、軽度の３ｂ表現型及び２コピーのみのＳＭＮ２を有する成人患者少なくとも３例について説明している。この一見矛盾した知見は、これらの個体がｃ．８５９Ｇ＞Ｃエクソン７変異を有し、この変異によって、全長ＳＭＮタンパク質の増加及びより軽度の表現型をもたらすエクソンスプライス強化エレメントが作成されるという事実によって説明された。他の修飾因子についても説明されており、ＳＭＡの分子的病因の理解が緻密化するに伴い、さらなる修飾因子が予想されている。これらの知見は、ＳＭＡ表現型が必ずしもＳＭＮ２コピー数の決定のみから推測できるとは限らないことを示している。

【0034】

２．ＳＭＡの療法
ＳＭＡ治療のための１つの療法は、ヌシネルセンを含む化合物ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）（別名ＡＳＯ－１０－２７／ＩＳＩＳ ３９６４４３／ＩＳＩＳ ＳＭＮＲｘ／ＩＳＩＳ－３９６４４３／ＩＳＩＳ－ＳＭＮＲｘ）である。ヌシネルセンは、エクソン７のイントロン下流におけるＳＭＮ２転写物の特定の配列に結合する修飾アンチセンスヌクレオチド化合物（２’－ヒドロキシ基がリボフラノシル環の２’－Ｏ－２－メトキシエチル基で置き換えられ、リン酸結合がホスホロチオエート結合で置き換えられていることによる修飾）である。ヌシネルセンのナトリウム塩（ヌシネルセンナトリウム）は、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）という商品名で販売されている。ヌシネルセンは、ＳＭＮタンパク質欠乏をもたらす染色体５ｑ変異によって引き起こされるＳＭＡを治療するように設計されている。ヌシネルセンは、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ及びＳＭＡのトランスジェニック動物の試験を用いることで、ＳＭＮ２メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）転写物内にエクソン７を含めることと全長ＳＭＮタンパク質の産生とを高めることが示された。ヌシネルセンは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシング効率を高めることにより、ＳＭＡの原因となるＳＭＮタンパク質欠乏を抑えるように作用する。

【0035】

ヌシネルセンは、１８ｍｅｒの２’－ＭＯＥホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである。ヌシネルセンは、エクソン７と８との間のイントロン性スプライシングサイレンシング部位１（ＩＳＳ－１）におけるヘテロリボヌクレオタンパク質（ｈｎＲＮＰ）を置き換えるようにＳＭＮ２プレｍＲＮＡ上の特定の標的配列と対合して、パラロガス遺伝子ＳＭＮ２からより完全なＳＭＮタンパク質の翻訳が可能になるように設計された。ヌシネルセンは、脳脊髄液（ＣＳＦ）内に髄腔内注入することで、ＣＳＦから標的の中枢神経系（ＣＮＳ）組織に分配させることができる。ヌシネルセンの全配列は、［２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）］（３’－５’）（Ｐ－チオ）（Ｔ－５ｍＣ－Ａ－５ｍＣ－Ｔ－Ｔ－Ｔ－５ｍＣ－Ａ－Ｔ－Ａ－Ａ－Ｔ－Ｇ－５ｍＣ－Ｔ－Ｇ－Ｇ）（配列番号４）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼの分解を減少させ、相補的ＲＮＡへの結合親和性を強化するための２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（２’－ＭＯＥ）－オリゴリボヌクレオチドを含む。

【0036】

ＳＭＡの治療には、他にもいくつかの療法が存在する。このような療法としては、ＳＭＮレベルを増加させる化合物、例えば、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、アミノグリコシド、及びキナゾリン誘導体が挙げられる。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えば、バルプロ酸、酪酸ナトリウム、フェニル酪酸、トリコスタチンＡは、ＳＭＮ２プロモーターを活性化して全長ＳＭＮタンパク質の増加をもたらす。その他の療法としては、ＣＫ－２１２７１０７（速筋骨格筋トロポニン活性化剤）、ＬＭＩ０７０（ブラナプラン（旧称ＮＶＳ－ＳＭ１））、オレソキシム（コレステロールオキシムファミリーメンバー）、ＲＧ７９１６（スプライシング修飾剤）、ＳＭＮ遺伝子療法（ＡＡＶ９－ＳＭＮ１；ＡＶＸＳ－１０１（ＡＡＶヒトＳＭＮ導入遺伝子））、及びＳＲＫ－０１５（ミオスタチンの潜在的形態の選択的かつ局在的な阻害剤抗体）が挙げられる。いくつかの場合において、これらの薬剤のうちの１つ以上は、ＳＭＡの治療のために併用して使用される。本発明の方法は、ＳＭＡのあらゆる治療を網羅するように意図されている。

【0037】

３．ＳＭＡのバイオマーカー
ＳＭＡ療法（例えば、上述のＳＭＡ療法のうちの１つ以上）を用いた治療から利益を受けると考えられる対象を同定するには、または療法が機能しているかを判定するには、バイオマーカーがあると有用である。バイオマーカーは、正常な生物学的プロセス、病理学的プロセス、または治療介入に対する薬理学的応答の指標として客観的に測定及び評価することができる特性値である。バイオマーカーは、生物学的尺度（例えば、小分子、代謝産物、ペプチド、タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ）、生理学的尺度（例えば、血圧、筋電図検査、呼吸機能）、または構造的尺度（例えば、超音波、磁気共鳴イメージング、または組織学的評価）であり得る。バイオマーカーは、将来の臨床的転帰を予測する予後バイオマーカー、疾患の影響の重症度を示す疾患進行バイオマーカー、療法に対する将来の臨床的応答を予測し療法の分類の一助となる予測的バイオマーカー、治療効果をモニターまたは定量化する薬力学バイオマーカー、及びエンドポイントの変化が将来の臨床的応答に結びつく、療法に対する将来の臨床的応答を予測する代理エンドポイントバイオマーカーであり得る。

【0038】

ＳＭＡにはいくつかの既知のバイオマーカーが存在する。このようなバイオマーカーとしては、予後バイオマーカー、例えば、疾患重症度の指標としてのＳＭＮ２コピー数；疾患進行バイオマーカー、例えば、運動ニューロン喪失の指標として機能する複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）振幅；予測バイオマーカー、例えば、ＳＭＮ修復療法に対する応答が小さいことを示すＣＭＡＰ振幅の減少；薬力学バイオマーカー、例えば、ＳＭＮ２遺伝子の有効な誘導の指標としての全長ＳＭＮ転写物の増加及び／またはＳＭＮタンパク質の増加；ならびに代理エンドポイントバイオマーカー、例えば、身体機能改善の指標としての運動単位数推定（ＭＵＮＥ）の増加が挙げられる。

【0039】

本開示は、ＳＭＡの新規バイオマーカーとしてのニューロフィラメントレベルの使用を示す。ニューロフィラメント（ＮＦ）は、神経細胞における主要な細胞骨格要素であり、機械的安定性の付与だけでなく軸索内径の決定においても役割を果たしている。ヒトＮＦは、３つのタンパク質サブユニット、ＮＦ－Ｌ、ＮＦ－Ｍ、及びＮＦ－Ｈから構成されている。これらのタンパク質は、他の中間径フィラメントサブユニットタンパク質と同じ基本構造を共有する。哺乳類神経系のニューロフィラメントはタンパク質インターネキシンも含み、末梢神経系のニューロフィラメントはタンパク質ペリフェリンも含み得る。したがって、本明細書で使用する場合、「ニューロフィラメントタンパク質」とは、ニューロフィラメント重鎖（ＮＦ－Ｈ）、ニューロフィラメント中鎖／中間鎖（ＮＦ－Ｍ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦ－Ｌ）、インターネキシン、またはペリフェリンを意味する。ＳＭＡバイオマーカーは、ＮＦ－Ｈ、ＮＦ－Ｍ、ＮＦ－Ｌ、インターネキシン、及びペリフェリンのうちの１つ以上であり得る。ある特定の場合において、ＳＭＡバイオマーカーはリン酸化ＮＦ－Ｈ（ｐＮＦ－Ｈ）である。ある特定の場合において、ＳＭＡバイオマーカーはリン酸化ＮＦ－Ｌである。ニューロフィラメントバイオマーカーのレベルは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）またはタンパク質を用いて評価することができる。

【0040】

ヒトＮＦ－Ｈのアミノ酸配列は、配列番号１及び配列番号５ならびにＬｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，７（７）；１９４７－１９５５（１９８８）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１２０３６、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿００８４０４．１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０６６５５４．２に示されている。
配列番号１
ＭＭＳＦＧＧＡＤＡＬＬＧＡＰＦＡＰＬＨＧＧＧＳＬＨＹＡＬＡＲＫＧＧＡＧＧＴＲＳＡＡＧＳＳＳＧＦＨＳＷＴＲＴＳＶＳＳＶＳＡＳＰＳＲＦＲＧＡＧＡＡＳＳＴＤＳＬＤＴＬＳＮＧＰＥＧＣＭＶＡＶＡＴＳＲＳＥＫＥＱＬＱＡＬＮＤＲＦＡＧＹＩＤＫＶＲＱＬＥＡＨＮＲＳＬＥＧＥＡＡＡＬＲＱＱＱＡＧＲＳＡＭＧＥＬＹＥＲＥＶＲＥＭＲＧＡＶＬＲＬＧＡＡＲＧＱＬＲＬＥＱＥＨＬＬＥＤＩＡＨＶＲＱＲＬＤＤＥＡＲＱＲＥＥＡＥＡＡＡＲＡＬＡＲＦＡＱＥＡＥＡＡＲＶＤＬＱＫＫＡＱＡＬＱＥＥＣＧＹＬＲＲＨＨＱＥＥＶＧＥＬＬＧＱＩＱＧＳＧＡＡＱＡＱＭＱＡＥＴＲＤＡＬＫＣＤＶＴＳＡＬＲＥＩＲＡＱＬＥＧＨＡＶＱＳＴＬＱＳＥＥＷＦＲＶＲＬＤＲＬＳＥＡＡＫＶＮＴＤＡＭＲＳＡＱＥＥＩＴＥＹＲＲＱＬＱＡＲＴＴＥＬＥＡＬＫＳＴＫＤＳＬＥＲＱＲＳＥＬＥＤＲＨＱＡＤＩＡＳＹＱＥＡＩＱＱＬＤＡＥＬＲＮＴＫＷＥＭＡＡＱＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＣＲＩＧＦＧＰＩＰＦＳＬＰＥＧＬＰＫＩＰＳＶＳＴＨＩＫＶＫＳＥＥＫＩＫＶＶＥＫＳＥＫＥＴＶＩＶＥＥＱＴＥＥＴＱＶＴＥＥＶＴＥＥＥＥＫＥＡＫＥＥＥＧＫＥＥＥＧＧＥＥＥＥＡＥＧＧＥＥＥＴＫＳＰＰＡＥＥＡＡＳＰＥＫＥＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＡＫＥＥＡＫＳＰＰＥＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＡＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＴＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＴＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＥＫＡＫＴＬＤＶＫＳＰＥＡＫＴＰＡＫＥＥＡＲＳＰＡＤＫＦＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＬＫＥＤＡＫＡＰＥＫＥＩＰＫＫＥＥＶＫＳＰＶＫＥＥＥＫＰＱＥＶＫＶＫＥＰＰＫＫＡＥＥＥＫＡＰＡＴＰＫＴＥＥＫＫＤＳＫＫＥＥＡＰＫＫＥＡＰＫＰＫＶＥＥＫＫＥＰＡＶＥＫＰＫＥＳＫＶＥＡＫＫＥＥＡＥＤＫＫＫＶＰＴＰＥＫＥＡＰＡＫＶＥＶＫＥＤＡＫＰＫＥＫＴＥＶＡＫＫＥＰＤＤＡＫＡＫＥＰＳＫＰＡＥＫＫＥＡＡＰＥＫＫＤＴＫＥＥＫＡＫＫＰＥＥＫＰＫＴＥＡＫＡＫＥＤＤＫＴＬＳＫＥＰＳＫＰＫＡＥＫＡＥＫＳＳＳＴＤＱＫＤＳＫＰＰＥＫＡＴＥＤＫＡＡＫＧＫ
配列番号５
ＭＭＳＦＧＧＡＤＡＬＬＧＡＰＦＡＰＬＨＧＧＧＳＬＨＹＡＬＡＲＫＧＧＡＧＧＴＲＳＡＡＧＳＳＳＧＦＨＳＷＴＲＴＳＶＳＳＶＳＡＳＰＳＲＦＲＧＡＧＡＡＳＳＴＤＳＬＤＴＬＳＮＧＰＥＧＣＭＶＡＶＡＴＳＲＳＥＫＥＱＬＱＡＬＮＤＲＦＡＧＹＩＤＫＶＲＱＬＥＡＨＮＲＳＬＥＧＥＡＡＡＬＲＱＱＱＡＧＲＳＡＭＧＥＬＹＥＲＥＶＲＥＭＲＧＡＶＬＲＬＧＡＡＲＧＱＬＲＬＥＱＥＨＬＬＥＤＩＡＨＶＲＱＲＬＤＤＥＡＲＱＲＥＥＡＥＡＡＡＲＡＬＡＲＦＡＱＥＡＥＡＡＲＶＤＬＱＫＫＡＱＡＬＱＥＥＣＧＹＬＲＲＨＨＱＥＥＶＧＥＬＬＧＱＩＱＧＳＧＡＡＱＡＱＭＱＡＥＴＲＤＡＬＫＣＤＶＴＳＡＬＲＥＩＲＡＱＬＥＧＨＡＶＱＳＴＬＱＳＥＥＷＦＲＶＲＬＤＲＬＳＥＡＡＫＶＮＴＤＡＭＲＳＡＱＥＥＩＴＥＹＲＲＱＬＱＡＲＴＴＥＬＥＡＬＫＳＴＫＤＳＬＥＲＱＲＳＥＬＥＤＲＨＱＡＤＩＡＳＹＱＥＡＩＱＱＬＤＡＥＬＲＮＴＫＷＥＭＡＡＱＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＣＲＩＧＦＧＰＩＰＦＳＬＰＥＧＬＰＫＩＰＳＶＳＴＨＩＫＶＫＳＥＥＫＩＫＶＶＥＫＳＥＫＥＴＶＩＶＥＥＱＴＥＥＴＱＶＴＥＥＶＴＥＥＥＥＫＥＡＫＥＥＥＧＫＥＥＥＧＧＥＥＥＥＡＥＧＧＥＥＥＴＫＳＰＰＡＥＥＡＡＳＰＥＫＥＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＡＫＥＥＡＫＳＰＰＥＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＡＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＡＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＴＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＥＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＡＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＴＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＡＫＳＰＥＫＡＫＳＰＥＫＡＫＴＬＤＶＫＳＰＥＡＫＴＰＡＫＥＥＡＲＳＰＡＤＫＦＰＥＫＡＫＳＰＶＫＥＥＶＫＳＰＥＫＡＫＳＰＬＫＥＤＡＫＡＰＥＫＥＩＰＫＫＥＥＶＫＳＰＶＫＥＥＥＫＰＱＥＶＫＶＫＥＰＰＫＫＡＥＥＥＫＡＰＡＴＰＫＴＥＥＫＫＤＳＫＫＥＥＡＰＫＫＥＡＰＫＰＫＶＥＥＫＫＥＰＡＶＥＫＰＫＥＳＫＶＥＡＫＫＥＥＡＥＤＫＫＫＶＰＴＰＥＫＥＡＰＡＫＶＥＶＫＥＤＡＫＰＫＥＫＴＥＶＡＫＫＥＰＤＤＡＫＡＫＥＰＳＫＰＡＥＫＫＥＡＡＰＥＫＫＤＴＫＥＥＫＡＫＫＰＥＥＫＰＫＴＥＡＫＡＫＥＤＤＫＴＬＳＫＥＰＳＫＰＫＡＥＫＡＥＫＳＳＳＴＤＱＫＤＳＫＰＰＥＫＡＴＥＤＫＡＡＫＧＫ

【0041】

ヒトＮＦ－Ｌのアミノ酸配列は、配列番号２ならびにＪｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，９０９：１０－２０（１９８７）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０７１９６、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１４９．２、及びＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿００８４９２．１に示されている。
配列番号２
ＭＳＳＦＳＹＥＰＹＹＳＴＳＹＫＲＲＹＶＥＴＰＲＶＨＩＳＳＶＲＳＧＹＳＴＡＲＳＡＹＳＳＹＳＡＰＶＳＳＳＬＳＶＲＲＳＹＳＳＳＳＧＳＬＭＰＳＬＥＮＬＤＬＳＱＶＡＡＩＳＮＤＬＫＳＩＲＴＱＥＫＡＱＬＱＤＬＮＤＲＦＡＳＦＩＥＲＶＨＥＬＥＱＱＮＫＶＬＥＡＥＬＬＶＬＲＱＫＨＳＥＰＳＲＦＲＡＬＹＥＱＥＩＲＤＬＲＬＡＡＥＤＡＴＮＥＫＱＡＬＱＧＥＲＥＧＬＥＥＴＬＲＮＬＱＡＲＹＥＥＥＶＬＳＲＥＤＡＥＧＲＬＭＥＡＲＫＧＡＤＥＡＡＬＡＲＡＥＬＥＫＲＩＤＳＬＭＤＥＩＳＦＬＫＫＶＨＥＥＥＩＡＥＬＱＡＱＩＱＹＡＱＩＳＶＥＭＤＶＴＫＰＤＬＳＡＡＬＫＤＩＲＡＱＹＥＫＬＡＡＫＮＭＱＮＡＥＥＷＦＫＳＲＦＴＶＬＴＥＳＡＡＫＮＴＤＡＶＲＡＡＫＤＥＶＳＥＳＲＲＬＬＫＡＫＴＬＥＩＥＡＣＲＧＭＮＥＡＬＥＫＱＬＱＥＬＥＤＫＱＮＡＤＩＳＡＭＱＤＴＩＮＫＬＥＮＥＬＲＴＴＫＳＥＭＡＲＹＬＫＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＴＲＬＳＦＴＳＶＧＳＩＴＳＧＹＳＱＳＳＱＶＦＧＲＳＡＹＧＧＬＱＴＳＳＹＬＭＳＴＲＳＦＰＳＹＹＴＳＨＶＱＥＥＱＩＥＶＥＥＴＩＥＡＡＫＡＥＥＡＫＤＥＰＰＳＥＧＥＡＥＥＥＥＫＤＫＥＥＡＥＥＥＥＡＡＥＥＥＥＡＡＫＥＥＳＥＥＡＫＥＥＥＥＧＧＥＧＥＥＧＥＥＴＫＥＡＥＥＥＥＫＫＶＥＧＡＧＥＥＱＡＡＫＫＫＤ

【0042】

ヒトＮＦ－Ｍのアミノ酸配列は、配列番号３及び配列番号６ならびにＭｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，６（６）：１６１７－１６２６（１９８７）及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０７１９７に示されている。
配列番号３
ＭＳＹＴＬＤＳＬＧＮＰＳＡＹＲＲＶＴＥＴＲＳＳＦＳＲＶＳＧＳＰＳＳＧＦＲＳＱＳＷＳＲＧＳＰＳＴＶＳＳＳＹＫＲＳＭＬＡＰＲＬＡＹＳＳＡＭＬＳＳＡＥＳＳＬＤＦＳＱＳＳＳＬＬＮＧＧＳＧＰＧＧＤＹＫＬＳＲＳＮＥＫＥＱＬＱＧＬＮＤＲＦＡＧＹＩＥＫＶＨＹＬＥＱＱＮＫＥＩＥＡＥＩＱＡＬＲＱＫＱＡＳＨＡＱＬＧＤＡＹＤＱＥＩＲＥＬＲＡＴＬＥＭＶＮＨＥＫＡＱＶＱＬＤＳＤＨＬＥＥＤＩＨＲＬＫＥＲＦＥＥＥＡＲＬＲＤＤＴＥＡＡＩＲＡＬＲＫＤＩＥＥＡＳＬＶＫＶＥＬＤＫＫＶＱＳＬＱＤＥＶＡＦＬＲＳＮＨＥＥＥＶＡＤＬＬＡＱＩＱＡＳＨＩＴＶＥＲＫＤＹＬＫＴＤＩＳＴＡＬＫＥＩＲＳＱＬＥＳＨＳＤＱＮＭＨＱＡＥＥＷＦＫＣＲＹＡＫＬＴＥＡＡＥＱＮＫＥＡＩＲＳＡＫＥＥＩＡＥＹＲＲＱＬＱＳＫＳＩＥＬＥＳＶＲＧＴＫＥＳＬＥＲＱＬＳＤＩＥＥＲＨＮＨＤＬＳＳＹＱＤＴＩＱＱＬＥＮＥＬＲＧＴＫＷＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＴＲＦＳＴＦＡＧＳＩＴＧＰＬＹＴＨＲＰＰＩＴＩＳＳＫＩＱＫＰＫＶＥＡＰＫＬＫＶＱＨＫＦＶＥＥＩＩＥＥＴＫＶＥＤＥＫＳＥＭＥＥＡＬＴＡＩＴＥＥＬＡＶＳＭＫＥＥＫＫＥＡＡＥＥＫＥＥＥＰＥＡＥＥＥＥＶＡＡＫＫＳＰＶＫＡＴＡＰＥＶＫＥＥＥＧＥＫＥＥＥＥＧＱＥＥＥＥＥＥＤＥＧＡＫＳＤＱＡＥＥＧＧＳＥＫＥＧＳＳＥＫＥＥＧＥＱＥＥＧＥＴＥＡＥＡＥＧＥＥＡＥＡＫＥＥＫＫＶＥＥＫＳＥＥＶＡＴＫＥＥＬＶＡＤＡＫＶＥＫＰＥＫＡＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＳＫＳＰＶＥＥＫＡＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＡＫＳＫＡＥＶＧＫＧＥＱＫＥＥＥＥＫＥＶＫＥＡＰＫＥＥＫＶＥＫＫＥＥＫＰＫＤＶＰＥＫＫＫＡＥＳＰＶＫＥＥＡＶＡＥＶＶＴＩＴＫＳＶＫＶＨＬＥＫＥＴＫＥＥＧＫＰＬＱＱＥＫＥＫＥＫＡＧＧＥＧＧＳＥＥＥＧＳＤＫＧＡＫＧＳＲＫＥＤＩＡＶＮＧＥＶＥＧＫＥＥＶＥＱＥＴＫＥＫＧＳＧＲＥＥＥＫＧＶＶＴＮＧＬＤＬＳＰＡＤＥＫＫＧＧＤＫＳＥＥＫＶＶＶＴＫＴＶＥＫＩＴＳＥＧＧＤＧＡＴＫＹＩＴＫＳＶＴＶＴＱＫＶＥＥＨＥＥＴＦＥＥＫＬＶＳＴＫＫＶＥＫＶＴＳＨＡＩＶＫＥＶＴＱＳＤ
配列番号６
ＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＴＲＦＳＴＦＡＧＳＩＴＧＰＬＹＴＨＲＰＰＩＴＩＳＳＫＩＱＫＰＫＶＥＡＰＫＬ
ＫＶＱＨＫＦＶＥＥＩＩＥＥＴＫＶＥＤＥＫＳＥＭＥＥＡＬＴＡＩＴＥＥＬＡＶＳＭＫＥＥＫＫＥＡＡＥＥＫＥＥＥＰＥＡＥＥＥＥＶＡＡＫＫＳＰＶＫＡＴ
ＡＰＥＶＫＥＥＥＧＥＫＥＥＥＥＧＱＥＥＥＥＥＥＤＥＧＡＫＳＤＱＡＥＥＧＧＳＥＫＥＧＳＳＥＫＥＥＧＥＱＥＥＧＥＴＥＡＥＡＥＧＥＥＡＥＡＫＥＥＫ
ＫＶＥＥＫＳＥＥＶＡＴＫＥＥＬＶＡＤＡＫＶＥＫＰＥＫＡＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶ
ＰＫＳＰＶＥＥＫＧＫＳＰＶＳＫＳＰＶＥＥＫＡＫＳＰＶＰＫＳＰＶＥＥＡＫＳＫＡＥＶＧＫＧＥＱＫＥＥＥＥＫＥＶＫＥＡＰＫＥＥＫＶＥＫＫＥＥＫＰＫ
ＤＶＰＥＫＫＫＡＥＳＰＶＫＥＥＡＶＡＥＶＶＴＩＴＫＳＶＫＶＨＬＥＫＥＴＫＥＥＧＫＰＬＱＱＥＫＥＫＥＫＡＧＧＥＧＧＳＥＥＥＧＳＤＫＧＡＫＧＳＲ
ＫＥＤＩＡＶＮＧＥＶＥＧＫＥＥＶＥＱＥＴＫＥＫＧＳＧＲＥＥＥＫＧＶＶＴＮＧＬＤＬＳＰＡＤＥＫＫＧＧＤＫＳＥＥＫＶＶＶＴＫＴＶＥＫＩＴＳＥＧＧ
ＤＧＡＴＫＹＩＴＫＳＶＴＶＴＱＫＶＥＥＨＥＥＴＦＥＥＫＬＶＳＴＫＫＶＥＫＶＴＳＨＡＩＶＫＥＶＴＱＳＤ

【0043】

ヒトインターネキシンのアミノ酸配列は、配列番号７に示されている。
配列番号７
ＭＳＦＧＳＥＨＹＬＣＳＳＳＳＹＲＫＶＦＧＤＧＳＲＬＳＡＲＬＳＧＡＧＧＡＧＧＦＲＳＱＳＬＳＲＳＮＶＡＳＳＡＡＣＳＳＡＳＳＬＧＬＧＬＡＹＲＲＰＰＡＳＤＧＬＤＬＳＱＡＡＡＲＴＮＥＹＫＩＩＲＴＮＥＫＥＱＬＱＧＬＮＤＲＦＡＶＦＩＥＫＶＨＱＬＥＴＱＮＲＡＬＥＡＥＬＡＡＬＲＱＲＨＡＥＰＳＲＶＧＥＬＦＱＲＥＬＲＤＬＲＡＱＬＥＥＡＳＳＡＲＳＱＡＬＬＥＲＤＧＬＡＥＥＶＱＲＬＲＡＲＣＥＥＥＳＲＧＲＥＧＡＥＲＡＬＫＡＱＱＲＤＶＤＧＡＴＬＡＲＬＤＬＥＫＫＶＥＳＬＬＤＥＬＡＦＶＲＱＶＨＤＥＥＶＡＥＬＬＡＴＬＱＡＳＳＱＡＡＡＥＶＤＶＴＶＡＫＰＤＬＴＳＡＬＲＥＩＲＡＱＹＥＳＬＡＡＫＮＬＱＳＡＥＥＷＹＫＳＫＦＡＮＬＮＥＱＡＡＲＳＴＥＡＩＲＡＳＲＥＥＩＨＥＹＲＲＱＬＱＡＲＴＩＥＩＥＧＬＲＧＡＮＥＳＬＥＲＱＩＬＥＬＥＥＲＨＳＡＥＶＡＧＹＱＤＳＩＧＱＬＥＮＤＬＲＮＴＫＳＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＤＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＡＹＲＫＬＬＥＧＥＥＴＲＦＳＴＳＧＬＳＩＳＧＬＮＰＬＰＮＰＳＹＬＬＰＰＲＩＬＳＡＴＴＳＫＶＳＳＴＧＬＳＬＫＫＥＥＥＥＥＥＡＳＫＶＡＳＫＫＴＳＱＩＧＥＳＦＥＥＩＬＥＥＴＶＩＳＴＫＫＴＥＫＳＮＩＥＥＴＴＩＳＳＱＫＩ

【0044】

ヒトペリフェリンのアミノ酸配列は、配列番号８に示されている。
配列番号８
ＭＳＨＨＰＳＧＬＲＡＧＦＳＳＴＳＹＲＲＴＦＧＰＰＰＳＬＳＰＧＡＦＳＹＳＳＳＳＲＦＳＳＳＲＬＬＧＳＡＳＰＳＳＳＶＲＬＧＳＦＲＳＰＲＡＧＡＧＡＬＬＲＬＰＳＥＲＬＤＦＳＭＡＥＡＬＮＱＥＦＬＡＴＲＳＮＥＫＱＥＬＱＥＬＮＤＲＦＡＮＦＩＥＫＶＲＦＬＥＱＱＮＡＡＬＲＧＥＬＳＱＡＲＧＱＥＰＡＲＡＤＱＬＣＱＱＥＬＲＥＬＲＲＥＬＥＬＬＧＲＥＲＤＲＶＱＶＥＲＤＧＬＡＥＤＬＡＡＬＫＱＲＬＥＥＥＴＲＫＲＥＤＡＥＨＮＬＶＬＦＲＫＤＶＤＤＡＴＬＳＲＬＥＬＥＲＫＩＥＳＬＭＤＥＩＥＦＬＫＫＬＨＥＥＥＬＲＤＬＱＶＳＶＥＳＱＱＶＱＱＶＥＶＥＡＴＶＫＰＥＬＴＡＡＬＲＤＩＲＡＱＹＥＳＩＡＡＫＮＬＱＥＡＥＥＷＹＫＳＫＹＡＤＬＳＤＡＡＮＲＮＨＥＡＬＲＱＡＫＱＥＭＮＥＳＲＲＱＩＱＳＬＴＣＥＶＤＧＬＲＧＴＮＥＡＬＬＲＱＬＲＥＬＥＥＱＦＡＬＥＡＧＧＹＱＡＧＡＡＲＬＥＥＥＬＲＱＬＫＥＥＭＡＲＨＬＲＥＹＱＥＬＬＮＶＫＭＡＬＤＩＥＩＡＴＹＲＫＬＬＥＧＥＥＳＲＩＳＶＰＶＨＳＦＡＳＬＮＩＫＴＴＶＰＥＶＥＰＰＱＤＳＨＳＲＫＴＶＬＩＫＴＩＥＴＲＮＧＥＶＶＴＥＳＱＫＥＱＲＳＥＬＤＫＳＳＡＨＳＹ

【0045】

ある特定の場合において、ＮＦレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）は、１つ以上の他のＳＭＡバイオマーカーとの併用で使用される。

【0046】

４．ＳＭＡの診断
本開示は、対象（例えば、症状発現前の対象）が生物学的に活性の疾患を有するか（例えば、ＳＭＡが活性であるか、及びその重症度）を診断する方法を特徴とする。当該方法は、対象から得られた生体試料中のニューロフィラメントレベルを測定することを含む。ＳＭＡは、対象のニューロフィラメントレベルが対照レベルよりも高い場合に診断される。ニューロフィラメントレベルは疾患の重症度も予測し、ＮＦレベルが対照との対比で高いほどＳＭＡは重症である。

【0047】

いくつかの場合において、当該方法は、対象から得られた生体試料中のＮＦ－Ｈレベルを測定することを含む。いくつかの場合において、当該方法は、対象から得られた生体試料中のｐＮＦ－Ｈレベルを測定することを含む。いくつかの場合において、当該方法は、対象から得られた生体試料中のＮＦ－Ｍレベルを測定することを含む。いくつかの場合において、当該方法は、対象から得られた生体試料中のＮＦ－Ｌレベルを測定することを含む。

【0048】

生体試料は、例えば、血液、血清、血漿、または脳脊髄液であり得る。いくつかの場合において、生体試料は血漿である。

【0049】

ある特定の場合において、対象はヒト胎児である。ある特定の場合において、対象は新生児のヒトである。ある特定の場合において、対象は、生後６ヵ月以下（例えば、生後２日、生後３日、生後４日、生後５日、生後６日、生後１週間、生後２週間、生後３週間、生後１ヵ月、生後２ヵ月、生後３ヵ月、生後４ヵ月、生後５ヵ月、または生後６ヵ月）である。ある特定の場合において、対象は、生後６ヵ月超生後１８ヵ月以下（例えば、生後７ヵ月、生後８ヵ月、生後９ヵ月、生後１０ヵ月、生後１１ヵ月、生後１２ヵ月、生後１３ヵ月、生後１４ヵ月、生後１５ヵ月、生後１６ヵ月、生後１７ヵ月、または生後１８ヵ月）である。いくつかの場合において、対象は生後１８ヵ月超のヒトである。いくつかの場合において、対象は１８歳超のヒトである。

【0050】

いくつかの場合において、ＮＦレベルは、生体試料中のＮＦ ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）のレベルを評価することによって測定される。

【0051】

いくつかの場合において、ＮＦレベルは、生体試料中のＮＦタンパク質（ＮＦ－Ｈ、ＮＦ－Ｍ、またはＮＦ－Ｌタンパク質）のレベルを評価することによって測定される。ある特定の場合において、ＮＦタンパク質はｐＮＦ－Ｈである。目的タンパク質（１つまたは複数）の濃度は、免疫学的アッセイなどの当技術分野で知られている任意の方法を用いて測定することができる。このような方法の非限定的な例としては、酵素免疫測定法、放射性免疫測定法、化学発光免疫測定法、電気化学発光免疫測定法、ラテックス比濁免疫測定法、ラテックス測光免疫測定法、免疫クロマトグラフィー測定法、及びウェスタンブロッティングが挙げられる。ある特定の実施形態において、目的タンパク質（１つまたは複数）の濃度は、質量分析法によって測定される。

【0052】

いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）は対照レベルを超える。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは３００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは４００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは５００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは６００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは７００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは８００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは９００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，１００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，２００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，３００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，４００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは１，５００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは２，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは３，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは４，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態において、生体試料中のニューロフィラメントレベルは５，０００ｐｇ／ｍＬを上回る。

【0053】

ＳＭＡを有すると診断されたヒト対象には、任意のＳＭＡ療法を投与することができる。ある特定の事例において、（例えば、対象からの生体試料中のＮＦレベルを測定することによって）ＳＭＡを有すると前もって判定されているヒト対象は、ＳＭＡ療法を投与される。いくつかの場合において、療法はＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）である。いくつかの事例において、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）は、投与当たり１２ｍｇの用量で髄腔内投与される。いくつかの場合において、ＳＭＡ療法は併用療法である。

【0054】

ＳＭＡを有する対象における例示的なｐＮＦ－Ｈレベルを下記の表に示す。

【表1】

【0055】

５．治療への応答性
ＮＦレベルは、ＳＭＡ療法を受けている対象が治療に応答しているかを判定するために使用することもできる。これは、ＳＭＡ療法を対象に投与する前の対象からの第１の生体試料と、ＳＭＡ療法を対象に投与した後の第２の生体試料とを得、このような試料中のＮＦ（例えば、ＮＦ－Ｈ、ＮＦ－Ｍ、またはＮＦ－Ｌ）レベルを測定することにより、評価することができる。１つの場合において、ＮＦレベルはｐＮＦ－Ｈレベルである。いくつかの場合において、療法はＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）である。いくつかの事例において、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）は、投与当たり１２ｍｇの用量で髄腔内投与される。いくつかの場合において、ＳＭＡ療法は併用療法である。

【0056】

ある特定の場合において、第１の生体試料（１つまたは複数）は、治療前の任意時に、例えば、ＳＭＡ療法を投与する１週間前、数日前、１日前、数時間前、１時間前、または１時間未満前に、対象から収集することができる。同様に、第２の生体試料（１つまたは複数）は、ＳＭＡ治療投与後の任意時に、例えば、ＳＭＡ療法を投与してから１時間未満後、１時間後、数時間後、１日後、数日後、１週間後、数週間後、１ヵ月後、２ヵ月後、３ヵ月後、４ヵ月後、５ヵ月後、６ヵ月後、７ヵ月後、または８ヵ月後に、対象から収集することができる。ＳＭＡ療法開始後にＮＦレベルが減少すれば、ＳＭＡ療法の有効性が示される。このような場合には、ＳＭＡ療法の継続が必要である。ＳＭＡ療法の開始後にＮＦレベルが減少しなければ、ＳＭＡ療法の用量を変更する（例えば、用量を増加させる）必要があること、またはその特定のＳＭＡ療法の有効性が欠如していることが示される。後者の場合には、その特定のＳＭＡ療法の中止が示唆され得、異なるＳＭＡ療法（１つまたは複数）の使用を検討する必要がある。

【0057】

ＮＦレベルは、ＲＮＡまたはタンパク質のレベルの測定によって評価することができる。いくつかの場合において、ｐＮＦ－Ｈレベルが決定される。目的のＮＦタンパク質（１つまたは複数）の濃度は、免疫学的アッセイなどの当技術分野で知られている任意の方法を用いて測定することができる。このような方法の非限定的な例としては、酵素免疫測定法、放射性免疫測定法、化学発光免疫測定法、電気化学発光免疫測定法、ラテックス比濁免疫測定法、ラテックス測光免疫測定法、免疫クロマトグラフィー測定法、及びウェスタンブロッティングが挙げられる。ある特定の実施形態において、目的タンパク質（１つまたは複数）の濃度は、質量分析法によって測定される。

【0058】

ある特定の場合において、第１の生体試料中のニューロフィラメントレベル（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）は、３００ｐｇ／ｍＬ超、４００ｐｇ／ｍＬ超、５００ｐｇ／ｍＬ超、６００ｐｇ／ｍＬ超、７００ｐｇ／ｍＬ超、８００ｐｇ／ｍＬ超、９００ｐｇ／ｍＬ超、１，０００ｐｇ／ｍＬ超、１，５００ｐｇ／ｍＬ超、２，０００ｐｇ／ｍＬ超、３，０００ｐｇ／ｍＬ超、４，０００ｐｇ／ｍＬ超、または５，０００ｐｇ／ｍＬ超である。ある特定の実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルよりも低い。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルに対する３０％超（例えば、３１％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％）の低下を示す。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの１０％～８０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの２０％～８０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの２０％～８５％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの２０％～９０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの２０％～９５％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～８０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～８５％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～９０％である。いくつかの実施形態において、第２の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルは、第１の生体試料中で測定されたニューロフィラメントレベルの３０％～９５％である。

【0059】

ある特定の場合において、対象は症状発現前のヒトである。ある特定の場合において、対象は新生児のヒトである。ある特定の場合において、対象は、生後６ヵ月以下（例えば、生後２日、生後３日、生後４日、生後５日、生後６日、生後１週間、生後２週間、生後３週間、生後１ヵ月、生後２ヵ月、生後３ヵ月、生後４ヵ月、生後５ヵ月、または生後６ヵ月）である。ある特定の場合において、対象は、生後６ヵ月超生後１８ヵ月以下（例えば、生後７ヵ月、生後８ヵ月、生後９ヵ月、生後１０ヵ月、生後１１ヵ月、生後１２ヵ月、生後１３ヵ月、生後１４ヵ月、生後１５ヵ月、生後１６ヵ月、生後１７ヵ月、または生後１８ヵ月）である。いくつかの場合において、対象は生後１８ヵ月超のヒトである。いくつかの場合において、対象は１８歳超のヒトである。

【0060】

６．疾患進行の予測
対象からの生体試料中のＮＦのレベルも、将来の表現型を予測するように機能し得る。例えば、ＮＦのレベルは、将来の運動機能を予測し得る。一例として、治療開始から１～２ヵ月後のｐＮＦ－Ｈレベルは治療開始から１０ヵ月後の運動機能を予測し得る。療法開始から１～２ヵ月後のｐＮＦ－Ｈレベルが対照との対比で低いほど、対象は、療法の開始から１～２ヵ月後のｐＮＦ－Ｈレベルがより高い対象に比べて運動機能を改善する可能性が高くなる。この予測可能性により、医療従事者は対象の投薬及び治療を修正または調整することができる。

【0061】

７．対照
上記で説明されているように、本開示の方法は、対象（例えば、症状発現前のヒト対象）からの生体試料中の１つ以上のＮＦ遺伝子またはタンパク質の発現レベル（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質濃度）を測定することを含み得、このとき、対照と比べての１つ以上のＮＦ遺伝子またはタンパク質の発現レベルは、対象がＳＭＡを有するか、ＳＭＡの重症度、将来の表現型、及び対象がＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を含む治療に対するレスポンダーであるかそうでないかを予測する。

【0062】

ある特定の実施形態において、対象がＳＭＡを有するか診断するときに、生体試料中のＮＦタンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）の濃度が対照より高い場合、対象はＳＭＡを有する可能性があると同定される。この文脈において、「対照」という用語は、ＳＭＡを有しないことが分かっている同じまたは類似の年齢の対象から得られた試料（同じ供給源（例えば、血液、血漿、血清、ＣＳＦ）からのもの）を含む。例えば、新生児の対象に試験を行っている場合は、対照も、ＳＭＡを有しない新生児からのものであり、６～１８歳の対象に試験を行っている場合は、対照も、ＳＭＡを有しない６～１８歳の対象からのものである。また、「対照」という用語は、ＳＭＡを有しないことが分かっている対象から過去に得られ、ＳＭＡが予測される対象から採取された試料を試験するために将来の比較用の基準として使用される、（同じ組織からの）試料も含む。また、特定のＮＦタンパク質における「対照」発現レベル／濃度は、ＳＭＡを有しない類似の年齢のヒト対象１例以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０例またはそれ以上）におけるタンパク質発現を解析することによって、事前確立することもできる。そして、この事前確立された基準値（ＳＭＡを有しない複数の対象から得られた発現レベル／濃度の平均または中央値であり得る）は、試験試料との比較におけるタンパク質または核酸の「対照」濃度／発現レベルとして使用することができる。このような比較において、解析されているＮＦの発現レベルが事前確立された基準よりも高い場合、対象はＳＭＡを有することが予測される。

【0063】

本開示の方法は、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象からの生体試料中の１つ以上の遺伝子（例えば、１つ以上のＮＦ遺伝子）の発現レベル（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質濃度）を測定することを含み得、このとき、対照と比べての１つ以上のＮＦ遺伝子の発現レベルは、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を含む治療に対する対象の応答性を予測する。ある特定の実施形態において、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象からの生体試料中のＮＦタンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）の濃度が対照より低い場合、対象はＳＭＡを含む療法に応答する可能性があると同定される。この文脈において、「対照」という用語は、ＳＭＡに応答しないことが分かっている同じまたは類似の年齢の対象から得られた試料（同じ供給源（例えば、プラズマ、血液、血清、ＣＳＦ）からのもの）を含む。また、「対照」という用語は、そのＳＭＡ療法に応答しないことが分かっている対象から過去に得られ、治療応答性が予測される対象から採取された試料を試験するために将来の比較用の基準として使用される、（同じ組織からの）試料も含む。特定の細胞タイプまたは組織中の特定のＮＦタンパク質における「対照」発現レベル／濃度は、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を用いた治療に応答しなかった同じまたは類似の年齢のヒト対象１例以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０例またはそれ以上）におけるタンパク質発現を解析することによって、事前確立させることができる。そして、この事前確立された基準値（療法に応答しなかった複数の対象から得られた発現レベル／濃度の平均または中央値であり得る）は、試験試料との比較におけるタンパク質または核酸の「対照」濃度／発現レベルとして使用することができる。このような比較において、解析されているＮＦ遺伝子の発現レベルが事前確立された基準よりも低い場合、対象はＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を含む療法に応答することが予測される。

【0064】

特定の生体液、細胞タイプ、または組織中の特定のタンパク質（例えば、ＮＦ－Ｈ）の「対照」濃度は、代替的に、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を用いた治療に応答した対象１例以上における遺伝子発現を解析することによって事前確立させることができる。そして、この事前確立された基準値（療法に応答した複数の対象から得られた発現レベルの平均または中央値であり得る）は、試験試料との比較における「対照」発現レベルとして使用することができる。このような比較において、解析されているタンパク質の濃度が事前確立された基準と同じであるまたはそれに匹敵する（基準の８５％以上１００％未満）場合は、対象はＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答することが予測される。

【0065】

ある特定の実施形態において、「対照」は所定のカットオフ値である。

【0066】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、目的のＮＦタンパク質（複数可）の濃度が所定のカットオフ値を上回るか下回るかを決定することを含む。

【0067】

カットオフ値とは、典型的には、それを上回るか下回るかで何か（例えば、ＳＭＡに罹患する可能性、または目的療法に対する対象の応答性）を予測できると考えられるタンパク質の濃度である。したがって、本明細書に記載の方法によれば、ＮＦタンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）の基準濃度はカットオフ値として同定され、カットオフ値を上回るか下回るかでＳＭＡを有する対象、またはＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に対する応答性を示す対象を予測できる。カットオフ値の中には、臨床的相関がそのカットオフのいずれかの側の値範囲にわたり依然として有意にとどまる可能性がある点で絶対的ではないものもあるが、特定の試料タイプに対しＮＦタンパク質濃度の最適なカットオフ値（例えば、変動するＨスコア）を選択することは可能である。本明細書に記載の方法で使用するために決定されたカットオフ値は、例えば、公表されたＮＦ濃度範囲と比較してもよいが、使用された方法論及び患者集団に個別化してもよい。最適なカットオフ値の改善は、使用する統計的手法の精巧性や、異なるタンパク質、遺伝子、及び試料タイプに対する基準レベル値の決定に使用する試料の数及び供給源に応じて決定され得ることを理解されたい。そのため、確立されたカットオフ値は、定期的な再評価または方法論もしくは集団分布の変化に基づき、上下に調整することができる。

【0068】

１つ以上のＮＦタンパク質の基準濃度は、様々な方法によって決定することができる。基準レベルは、例えば、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答するまたはＳＭＡ療法に応答しない対象（例えば、患者）の集団において、目的ＮＦタンパク質の濃度を比較することによって決定することができる。これは、例えば、ヒストグラム解析によって遂行することができ、ヒストグラム解析では患者のコホート全体が図式的に提示され、第１の軸は目的タンパク質の濃度を表し、第２の軸はコホート内の対象の数を表し、当該対象の試料は１つ以上の濃度を含む。次いで、タンパク質の基準濃度の決定は、これらの別々のグループを最もよく区別する量または濃度に基づいて行うことができる。基準レベルはあらゆる対象に一様に適用可能な１つの数字であってもよく、または基準レベルは対象の特定のサブ集団に応じて変動してもよい。例えば、高年齢の対象は低年齢の対象とは異なる基準レベルを有してもよい。加えて、より重症の疾患を有する対象は、より軽度の疾患形態を有する対象とは異なる基準値を有してもよい（例えば、Ｉ型対ＩＶ型ＳＭＡ、Ｉ型対ＩＩＩ型ＳＭＡ、Ｉ型対ＩＩ型ＳＭＡ）。

【0069】

事前確立されたカットオフ値は、受診者動作特性（ＲＯＣ）解析に基づいて決定するＮＦタンパク質濃度（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）であり得る。ＲＯＣ曲線は、臨床試験のカットオフ値を決定するために使用される。２つの患者群が存在し、確立された標準的な技法を使用することにより、一方の群はＳＭＡ療法に応答することが分かっており、他方の群はＳＭＡ療法に応答しないことが分かっている状況を検討する。２つの群の全てのメンバーからの生体試料を用いた測定は、ＳＭＡ療法に対する応答性を試験するために使用される。試験によって、ＳＭＡ療法に応答するレスポンダーが、全てではないが何例か見出される。この試験で見出されたレスポンダーの、（確立された標準的な技法によって分かっている）レスポンダーの総数に対する比率が、真陽性率（感度としても知られている）である。試験によって、ＳＭＡ療法に応答しないノンレスポンダーが、全てではないが何例か見出される。この試験で見出されたノンレスポンダーの、（確立された標準的な技法によって分かっている）ノンレスポンダーの総数に対する比率が、真陰性率（特異度としても知られている）である。期待されるのは、ＳＭＡ療法応答性試験のＲＯＣ曲線解析によって、疑陽性及び偽陰性の数を最小限に抑えるカットオフ値が見出されることである。ＲＯＣは、識別閾値が変化したときの２元クラス層別化システムの性能を示す図式的プロットである。ＲＯＣは、様々な閾値設定で、陰性における偽陽性の割合に対し陽性における真陽性の割合をプロットすることによって作成される。

【0070】

１つの実施形態において、ＮＦタンパク質濃度は、陽性予測値によりＳＭＡ療法に対する応答を予測するＲＯＣ解析に基づいて決定され、このとき、事前確立されたカットオフ値以下の目的タンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）の濃度は目的タンパク質の低い濃度とし、事前確立されたカットオフ値より高い値は目的タンパク質の高い濃度とする。陽性予測値は真陽性である陽性試験結果の割合である。陽性予測値は、陽性試験が試験されている基礎的条件を反映する確率を反映する。ＲＯＣ曲線を構築し、陽性予測値を決定する方法は、当技術分野で周知されている。

【0071】

別の実施形態において、事前確立されたカットオフ値は、ＳＭＡ療法に対する応答を予測するシミュレーションモデルに基づいて決定されるＮＦタンパク質濃度であり得、このとき、事前確立されたカットオフ値以下の目的タンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）の濃度は目的タンパク質の低い濃度とし、事前確立されたカットオフ値より高い値は目的タンパク質の高い濃度とする。

【0072】

８．生体試料
本明細書に記載の方法に好適な生体試料としては、ＮＦタンパク質または核酸（例えば、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ））などの目的アナライト生体分子を含む任意の生体液、細胞、組織、またはこれらの画分が挙げられる。生体試料は、例えば、ヒト対象から得られた試験片であってもよく、このような対象に由来するものであってもよい。例えば、試料は、生検で得られた組織切片、保管された生体液、または組織培養に入れたもしくは適合させた細胞であり得る。いくつかの場合において、生体試料は、血液、血漿、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿などの生体液、または基質（例えば、ガラス、ポリマー、紙）に吸収させたこのような試料である。生体試料は、所望の場合はさらに分画して特定の細胞タイプを含む画分にしてもよい。例えば、血液試料を分画して血清にしてもよく、または赤血球もしくは白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））などの特定のタイプの血球を含む画分にしてもよい。所望の場合は、試料は、対象からの試料の組合せ、例えば、組織及び液体試料の組合せであってもよい。

【0073】

生体試料は、ＳＭＡを有するか、有する疑いがあるか、罹患するリスクがある対象から得ることができる。ある特定の実施形態において、対象はヒト胎児である。ある特定の実施形態において、対象は症状発現前のヒト乳児である。ある特定の実施形態において、対象は症状発現前のヒト小児である。ある特定の実施形態において、対象は症状発現前のヒト成人である。

【0074】

生体試料を得るための任意の好適な方法を用いることができるが、例示的な方法としては、例えば、静脈切開術、穿刺吸引生検手順が挙げられる。また、試料は、例えば、マイクロダイセクション（例えば、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（ＬＣＭ）またはレーザーマクロダイセクション（ＬＭＤ））によって収集することもできる。

【0075】

試料中の分子（例えば、核酸またはタンパク質）の活性または完全性を保持する試料を得る及び／または保管するための方法は、当業者に周知されている。例えば、生体試料はさらに、試料中の分子（例えば、核酸もしくはタンパク質）を保持するまたは分子の変化を最小限に抑える１つ以上のさらなる薬剤、例えば、緩衝液及び／または阻害剤（ヌクレアーゼ、プロテアーゼ、及びホスファターゼ阻害剤のうちの１つ以上を含む）に接触させることができる。このような阻害剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコールビス（Ｐ－アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ１，Ｎ１－四酢酸（ＥＧＴＡ）などのキレート剤、フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、アプロチニン、ロイペプチン、アンチパインなどのプロテアーゼ阻害剤、リン酸塩、フッ化ナトリウム、バナジン酸塩などのホスファターゼ阻害剤が挙げられる。分子を単離するための好適な緩衝液及び条件は当業者に周知されており、例えば、キャラクタリゼーションを行う試料中の分子のタイプに応じて変動し得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ４７），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９９９）；Ｔｉｅｔｚ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ ｅｄ．Ｂｕｒｔｉｓ ａｎｄ Ａｓｈｗｏｏｄ，ｅｄｓ．Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）を参照）。また、試料を処理して、妨害物質の存在を排除するまたは最小限に抑えることもできる。例えば、生体試料を分画または精製して、１つ以上の目的外の物質を除去することができる。生体試料を分画または精製する方法としては、限定されるものではないが、クロマトグラフィー法、例えば、液体クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、または親和性クロマトグラフィーが挙げられる。本明細書に記載の方法での使用に関し、試料は様々な物理的状態であり得る。例えば、試料は、液体であっても固体であってもよく、液体に溶解させても懸濁させてもよく、エマルジョンまたはゲル中にあってもよく、材料に吸収させてもよい。

【0076】

９．バイオマーカーの発現レベル／濃度の決定
遺伝子発現は、例えば、標的遺伝子のタンパク質またはＲＮＡの発現として検出することができる。すなわち、遺伝子の存在または発現レベル（量）は、遺伝子のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルを検出及び／または測定することによって決定することができる。いくつかの実施形態において、遺伝子発現は、ＮＦ遺伝子によってコードされるタンパク質の活性として検出することができる。

【0077】

１つの実施形態において、遺伝子の発現は、遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または濃度を検出及び／または測定することによって決定することができる。タンパク質の発現／濃度を決定する方法は当技術分野で周知されている。一般的に使用されている方法は、目的の標的タンパク質に特異的な抗体の使用を含む。例えば、タンパク質発現を決定する方法としては、限定されるものではないが、ウェスタンブロットまたはドットブロット解析、免疫組織化学検査（例えば、定量的免疫組織化学検査）、免疫細胞化学検査、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、放射性免疫測定法、化学発光免疫測定法、電気化学発光免疫測定法、ラテックス比濁免疫測定法、ラテックス測光免疫測定法、免疫クロマトグラフィー測定法、及び抗体アレイ解析（例えば、米国特許出願公開第２００３／００１３２０８号及び第２００４／１７１０６８号を参照（これらの各々が参照によりその全体が本明細書に援用される））が挙げられる。上記の方法及びタンパク質発現を検出するためのさらなる方法についてのさらなる説明は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（前掲）に見出すことができる。

【0078】

１つの例では、ＮＦ遺伝子（例えば、ＮＦ－Ｈ）のＮＦタンパク質発現の存在または量は、ウェスタンブロッティング技法を用いて決定することができる。例えば、ライセートは生体試料から調製することができ、または生体試料自体をレムリー緩衝液と接触させ、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）に供してもよい。次に、サイズによって分離したＳＤＳ－ＰＡＧＥ分解タンパク質を濾過膜（例えば、ニトロセルロース）に移し、検出可能に標識された、目的タンパク質に特異的な抗体を用いてイムノブロッティング技法に供することができる。結合している検出可能に標識された抗体の存在または量は、生体試料中のタンパク質の存在または量を示す。

【0079】

１つの実施形態において、ＳｉｍｐｌｅＰｌｅｘプラットフォームは、ＮＦ－Ｈ（例えば、リン酸化ＮＦ－Ｈ）のレベルを測定するために使用される。ＳｉｍｐｌｅＰｌｅｘは、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されている（Ｄｙｓｉｎｇｅｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ．４５１：１－１０，２０１７を参照）。

【0080】

１つの実施形態において、ＮＦ－Ｌ（例えば、リン酸化ＮＦ－Ｌ）を測定するためのアッセイが用いられる。血清中のＮＦ－Ｌを測定するためのアッセイが説明されている（例えば、Ｇａｉｏｔｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８：ｅ７５０９１，２０１３；Ｋｕｈｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ８６（３）：２７３－２７９，２０１４を参照）。１つの例では、対象からの血清を１０００ｇで１０分間室温で遠心分離し、収集から２時間以内に－８０℃で保管する。血清中ＮＦ－Ｌ濃度は、すぐに使用可能な酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ｍａｂｔｅｃｈ ＡＢ，Ｎａｃｋａ Ｓｔｒａｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）、またはＧａｉｏｔｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８：ｅ７５０９１，２０１３に記載の電気化学発光（ＥＣＬ）免疫測定法、またはＤｉｓａｎｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．８１（６）：８５７－８７０，２０１７に記載の単一分子アレイ（ＳＩＭＯＡ）法を用いて、（例えば、２連で）測定することができる。アッセイ法は、Ｋｕｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５４（１０）：１６５５－１６６１，２０１６で比較されている。ＳＩＭＯＡアッセイ（詳細にはＳｉｍｏａ ＮＦ－ｌｉｇｈｔ Ａｄｖａｎｔａｇｅキットと呼ばれる）は、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ Ｃｏｒｐ． （Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から市販されている。

【0081】

別の例では、免疫測定法が、遺伝子（例えば、ＮＦ－Ｈ遺伝子）のタンパク質発現を検出及び／または測定するために使用され得る。上記のように、検出の目的で、免疫測定法は、検出部分（例えば、蛍光剤または酵素）を有する抗体を用いて実施することができる。生体試料からのタンパク質は、固相マトリックス（例えば、マルチウェルアッセイプレート、ニトロセルロース、アガロース、セファロース、コードされた粒子、もしくは磁気ビーズ）と直接結合体化させてもよく、または特定の結合対（例えば、ストレプトアビジンまたはビオチン）の第２のメンバーと結合したときに固相マトリックスに付着する特定の結合対（例えば、ビオチンもしくはストレプトアビジン）の第１のメンバーと結合体化させてもよい。固相マトリックスにこのように付着させることにより、タンパク質は、検出抗体と接触させる前に、生体試料の他の妨害的または無関係な成分を取り除いて精製することができ、またその後に、結合していない抗体を洗浄することもできる。ここでも上記のように、結合している検出可能に標識された抗体の存在または量は、生体試料中のタンパク質の存在または量を示す。

【0082】

抗体の形態については特定の制約は存在せず、本開示はポリクローナル抗体に加えてモノクローナル抗体も含む。また、免疫動物によって、例えば、本発明のタンパク質またはそのフラグメント（すなわち、ＮＦタンパク質のタンパク質またはその免疫学的フラグメント）を有するウサギによって得られる抗血清、ならびに全てのクラスのポリクローナル及びモノクローナル抗体、ヒト抗体、ならびに遺伝子組換えによって産生されたヒト化抗体も含まれる。

【0083】

インタクトなタンパク質またはその部分ペプチドを免疫化のための抗原として使用してもよい。タンパク質の部分ペプチドとしては、例えば、タンパク質のアミノ（Ｎ）末端側フラグメント及びカルボキシ（Ｃ）末端側フラグメントを挙げることができる。

【0084】

目的タンパク質またはそのフラグメント（例えば、免疫学的フラグメント）をコードする遺伝子を既知の発現ベクターに挿入し、本明細書に記載のベクターで宿主細胞を形質転換することにより、宿主細胞の内部または外部から所望のタンパク質またはそのフラグメントが標準的な方法を用いて回収される。このタンパク質は、感作抗原として使用することができる。また、本発明のタンパク質を発現する細胞、細胞ライセート、または化学合成タンパク質も感作抗原として使用することができる。

【0085】

感作抗原によって免疫化する哺乳類に制約はないが、細胞融合で使用する親細胞との適合性を考慮して動物を選択することが好ましい。概して、げっ歯目、ウサギ目、または霊長目に属する動物が使用される。使用され得るげっ歯目に属する動物の例としては、例えば、マウス、ラット、及びハムスターが挙げられる。使用され得るウサギ目に属する動物の例としては、例えば、ウサギが挙げられる。使用され得る霊長目に属する動物の例としては、例えば、サルが挙げられる。使用するサルの例としては、狭鼻下目（旧世界ザル）、例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、アカゲザル、マントヒヒ、及びチンパンジーが挙げられる。

【0086】

周知されている方法を使用して、動物を感作抗原で免疫化することができる。例えば、感作抗原は、哺乳類の腹腔内または皮下に注入される。具体的には、感作抗原を生理食塩水、リン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）などで好適に希釈及び懸濁し、所望に応じて好適な量の一般的アジュバント（例えば、フロイント完全アジュバント）と混合する。次いで、溶液を乳化し、哺乳類に注入する。その後、フロイント不完全アジュバントと好適に混合した感作抗原を、好ましくは４～２１日ごとに数回投与する。感作抗原で動物を免疫化するときに、好適な担体を使用してもよい。免疫化の後、通常の方法によって血清抗体レベルの上昇が検出される。

【0087】

本開示のタンパク質に対するポリクローナル抗体は、以下のように調製することができる。所望の血清抗体レベルに達したことを確認した後、抗原で感作した哺乳類から血液を採取する。従来の方法を用いて、この血液から血清を単離する。ポリクローナル抗体を含む血清をポリクローナル抗体として用いてもよく、または必要に応じて、血清からポリクローナル抗体を含む画分をさらに単離してもよい。例えば、本発明のタンパク質を特異的に認識する抗体の画分は、タンパク質が結合するアフィニティーカラムを使用することによって調製することができる。次いで、免疫グロブリンＧまたはＭを調製するために、プロテインＡまたはプロテインＧカラムを使用することによって画分をさらに精製してもよい。

【0088】

モノクローナル抗体を得るには、上記の抗原で感作した哺乳類において所望の血清抗体レベルに達したことを確認した後、その哺乳類から免疫細胞を採取し、細胞融合に使用する。この目的において、脾細胞は好ましい免疫細胞として挙げることができる。上記免疫細胞と融合した親細胞としては、哺乳類の骨髄腫細胞を使用することが好ましい。より好ましくは、薬剤による融合細胞の区別に使用され得る特徴を獲得した骨髄腫細胞を、親細胞として使用する。

【0089】

上記免疫細胞と骨髄腫細胞との間の細胞融合は、既知の方法、例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（Ｇａｌｆｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：３－４６，１９８１）による方法に従って、行うことができる。

【0090】

細胞融合から得られたハイブリドーマは、標準的な選択培地、例えば、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む培地）中で細胞を培養することによって選択される。このＨＡＴ培地での培養は、目的ハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な期間（通常は数日から数週間）継続される。次いで、通常の限界希釈法を行い、目的抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニングしクローニングする。

【0091】

上記の、ヒト以外の動物を抗原で免疫化することによってハイブリドーマを得る方法以外において、タンパク質に結合する活性を有する、目的ヒト抗体を産生するハイブリドーマは、ヒトリンパ球（例えば、ＥＢウイルスに感染したヒトリンパ球）をタンパク質、タンパク質発現細胞、またはそのライセートによりｉｎ ｖｉｔｒｏで感作し、感作リンパ球を、恒久的な細胞分裂能力を有するヒト由来の骨髄腫細胞（例えば、Ｕ２６６）と融合する方法によって、得ることができる。

【0092】

得られたハイブリドーマをマウスの腹腔に移植し、腹水を抽出することによって得られるモノクローナル抗体は、例えば、硫酸アンモニウム沈殿法、プロテインＡまたはプロテインＧカラム、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー、本開示のタンパク質が結合するアフィニティーカラムなどによって精製することができる。

【0093】

また、モノクローナル抗体は、遺伝子操作技法を使用することによって産生される組換え抗体として得ることもできる（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ Ｃ．Ａ．Ｋ．ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ，Ｊ．Ｗ．，ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（ＭＡＣＭＩＬＬＡＮ ＰＵＢＬＩＳＨＥＲＳ ＬＴＤにより英国で発行）（１９９０）を参照）。組換え抗体は、免疫細胞（例えば、ハイブリドーマまたは抗体を産生する感作リンパ球）からコードＤＮＡをクローニングし、好適なベクターに組み込み、抗体を産生させるためにこのベクターを宿主に導入することにより、産生される。本開示は、このような組換え抗体も包含する。

【0094】

１つ以上のバイオマーカーによってコードされたタンパク質に対し特異的な抗体または抗体フラグメントは、ファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法によって生成することもできる。

【0095】

さらに、本開示の抗体は、本発明のバイオマーカーによってコードされるタンパク質に結合する限りにおいて、抗体フラグメントであっても修飾抗体であってもよい。例えば、Ｈ鎖Ｆｖ及びＬ鎖Ｆｖがリンカーによって好適に結合しているＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９－５８８３，（１９８８））は、抗体フラグメントとして挙げることができる。具体的には、抗体フラグメントは、抗体を酵素（例えば、パパインまたはペプシン）で処理することによって生成される。代替的に、抗体フラグメントは、抗体フラグメントをコードする遺伝子を構築し、これを発現ベクターに導入し、このベクターを好適な宿主細胞内で発現させることにより、生成することができる（例えば、Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８－２９７６，１９９４；Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１７８：４７６－４９６，１９８９；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１７８：４９７－５１５，１９８９；Ｌａｍｏｙｉ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１：６５２－６６３，１９８６；Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１：６６３－６６９，１９８６；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，９：１３２－１３７，１９９１を参照）。

【0096】

抗体は、蛍光物質、放射性物質、及び発光物質などの様々な分子と結合体化させることができる。このような部分を抗体に付着させる方法は、当技術分野では既に確立し、一般に行われている（例えば、ＵＳ５，０５７，３１３及び５，１５６，８４０を参照）。

【0097】

抗体の抗原結合活性をアッセイする方法の例としては、例えば、吸光度の測定、酵素結合性免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、及び／または免疫蛍光法が挙げられる。例えば、ＥＬＩＳＡを使用する場合、本発明のバイオマーカーによってコードされるタンパク質を、本開示の抗体でコーティングされたプレートに添加し、次いで抗体試料（例えば、抗体産生細胞の培養上清、または精製抗体）を添加する。次いで、アルカリホスファターゼ及びこのような酵素で標識した、一次抗体を認識する二次抗体を添加し、プレートをインキュベートし、洗浄し、吸光度を測定して、ｐ－ニトロフェニルリン酸などの酵素基質を添加した後の抗原結合活性を評価する。タンパク質としては、タンパク質フラグメント、例えば、Ｃ末端を含むフラグメントまたはＮ末端を含むフラグメントを使用することができる。本発明の抗体の活性を評価するために、ＢＩＡｃｏｒｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用することができる。

【0098】

これらの方法を使用することにより、本発明の抗体及び本発明のタンパク質を含むと推定される試料を接触させ、上述の抗体とタンパク質との間で形成された免疫複合体を検出またはアッセイすることにより、本発明のバイオマーカーによってコードされたタンパク質を検出またはアッセイする。

【0099】

質量分析に基づく定量的アッセイ法、例えば、限定されるものではないが、安定同位体で標識された内部標準物質を併用した多重反応モニタリング（ＭＲＭ）に基づくアプローチは、タンパク質の定量的測定を行う上で免疫測定法の代替となる手段である。このようなアプローチは抗体の使用が求められないため、コスト効率及び時間効率の高い方法で解析を実施することができる（例えば、Ａｄｄｏｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２７：６３３－６４１，２００９；Ｋｕｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，８：１８６０－１８７７，２００９；Ｐａｕｌｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ Ｃｌｉｎ．Ａｐｐｌ．，２：１３８６－１４０２，２００８を参照）。加えて、ＭＲＭは優れた多重化能力を提供し、多数のタンパク質を並行して同時に定量化することができる。これらの方法の基本理論は確立されており、小分子の薬物代謝及び薬物動態解析に広く利用されている。

【0100】

別の実施形態において、目的ＮＦ遺伝子の発現レベルは、ＲＮＡレベルを測定することによって決定される。様々な好適な方法を用いて、遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを検出及び／または測定することができる。例えば、ｍＲＮＡ発現は、ノーザンブロットもしくはドットブロット解析、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ、例えば、定量的ＲＴ－ＰＣＲ）、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（例えば、定量的ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション）、または核酸アレイ（例えば、オリゴヌクレオチドアレイまたは遺伝子チップ）解析を用いて決定することができる。このような方法の詳細は、下記及び例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｖｏｌ．１，２ ａｎｄ ３．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ，Ｎｏｖ．１９８９；Ｇｉｂｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，６（１０）：９９５－１００１；及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｎｖｉｒｏｎ． Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，３９（８）：２７７７－２７８５；米国特許出願公開第２００４０８６９１５号；欧州特許第０５４３９４２号；及び米国特許第７，１０１，６６３号で説明されており、これらの各々の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。

【0101】

１つの例では、生体試料中の１つ以上の別々のｍＲＮＡ集団の存在または量は、生体試料から総ｍＲＮＡを単離し（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（前掲）及び米国特許第６，８１２，３４１号を参照）、単離したｍＲＮＡをアガロースゲル電気泳動に供してサイズごとにｍＲＮＡを分離することにより、決定することができる。次いで、サイズで分離したｍＲＮＡを（例えば、拡散によって）ニトロセルロース膜などの固体支持体に移す。次いで、生体試料中の１つ以上のｍＲＮＡ集団の存在または量は、１つ以上の検出可能に標識されたポリヌクレオチドプローブを用いて決定することができる。このプローブは目的ｍＲＮＡ配列に相補的であり、対応するｍＲＮＡ集団に結合することでそのｍＲＮＡ集団を検出可能にする。検出可能な標識としては、例えば、蛍光標識（例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、またはフィコエリトリン）、発光標識（例えば、ユーロピウム、テルビウム、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）が供給するＱｄｏｔ（商標）ナノ粒子）、放射線標識（例えば、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、または^３Ｈ）、及び酵素標識（西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ）が挙げられる。

【0102】

別の例において、生体試料中の別々のｍＲＮＡ（例えば、１つ以上のＮＦ遺伝子によってコードされたｍＲＮＡ）集団の存在または量は、核酸（またはオリゴヌクレオチド）アレイを用いて決定することができる。例えば、生体試料からの単離ｍＲＮＡは、例えば、ランダムヘキサマーまたはオリゴ（ｄＴ）プライマー媒介の第１の鎖合成を伴って、ＲＴ－ＰＣＲを用いて増幅することができる。アンプリコンは、より短いセグメントにフラグメント化することができる。ＲＴ－ＰＣＲステップは、アンプリコンを検出可能に標識するのに使用することができ、または任意選択で、アンプリコンはＲＴ－ＰＣＲステップの後で検出可能に標識することができる。例えば、検出可能な標識は、任意の様々な好適な技法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（前掲）を参照）を用いて、酵素的に（例えば、ニックトランスレーションまたはキナーゼ（例えば、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ）により）、または化学的にアンプリコンと結合体化させることができる。次いで、検出可能に標識されたアンプリコンを複数のポリヌクレオチドプローブセットに接触させる。このセットの各々は、対応するアンプリコンに特異的（かつ結合可能）な１つ以上のポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）プローブを含み、複数が、異なるアンプリコンに各々対応する多くのプローブセットを含む。概して、プローブセットは固体支持体に結合しており、各プローブセットは固体支持体上で所定の位置にある。検出可能に標識されたアンプリコンがプローブセットの対応プローブに結合することで、生体試料中の標的ｍＲＮＡの存在または量が示される。核酸アレイを用いてｍＲＮＡ発現を検出するためのさらなる方法は、例えば、米国特許第５，４４５，９３４号、第号、第６，０２７，８８０号、第６，０５７，１００号、第６，１５６，５０１号、第６，２６１，７７６号、及び第６，５７６，４２４号に記載されており、これらの各々の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。

【0103】

検出可能な標識を検出及び／または定量化する方法は、標識の性質に依存する。適切な酵素によって触媒された反応の産物（検出可能な標識が酵素である場合（上記参照））は、限定されるものではないが、蛍光、発光、もしくは放射性であり得、またはこのような産物は可視光もしくは紫外光を吸収し得る。このような検出可能な標識を検出するのに好適な検出器の例としては、限定されるものではないが、Ｘ線フィルム、放射能カウンター、シンチレーションカウンター、分光光度計、比色計、蛍光光度計、照度計、及び濃度計が挙げられる。

【0104】

遺伝子発現（例えば、タンパク質またはｍＲＮＡ発現）を検出または測定するための方法は、任意選択で、複数の試料の迅速な調製、処理、及び解析を可能にする形式で実施することができる。これは、例えば、マルチウェルアッセイプレート（例えば、９６ウェルもしくは３８６ウェル）またはアレイ（例えば、核酸チップもしくはタンパク質チップ）であり得る。様々な試薬のためのストック溶液は、手動または自動で提供することができ、その後の試料調製（例えば、ＲＴ－ＰＣＲ、標識、もしくは細胞固定）、ピペット操作、希釈、混合、分配、洗浄、インキュベート（例えば、ハイブリダイゼーション）、試料読取り、データ収集（光学データ）、及び／または解析（コンピューター援用画像解析）は、市販の解析ソフトウェア、ロボット工学、及びアッセイから生成されたシグナルを検出可能な検出装置を用いて自動で行うことができる。そのような検出器の例としては、限定されるものではないが、分光光度計、照度計、蛍光光度計、及び放射性同位体減衰を測定するデバイスが挙げられる。例示的な高スループットの細胞ベースアッセイ（例えば、細胞内の標的タンパク質の存在またはレベルの検出）は、ＡｒｒａｙＳｃａｎ（登録商標）ＶＴＩ ＨＣＳリーダーまたはＫｉｎｅｔｉｃＳｃａｎ（登録商標）ＨＣＳリーダー技術（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ Ｉｎｃ．，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ，ＰＡ）を利用することができる。

【0105】

いくつかの実施形態において、１つのＮＦ遺伝子、２つのＮＦ遺伝子、または３つのＮＦ遺伝子の発現レベルを評価及び／または測定することができる。

【0106】

ＮＦ遺伝子のうちの１つ以上の存在または発現レベルの検出を支援するため、遺伝子の核酸配列の任意の部分を、例えば、ハイブリダイゼーションポリヌクレオチドプローブまたはプライマー（例えば、増幅または逆転写用に）として使用することができる。プローブ及びプライマーは、生体試料から単離されたＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはこれらのフラグメントに対する特異的ハイブリダイゼーションをもたらすのに十分な長さのオリゴヌクレオチドであり得る。特定の用途に応じて、様々なハイブリダイゼーション条件を用いて、標的配列に対する様々な程度のプローブまたはプライマーの選択性を実現することができる。プライマー及びプローブは、検出を容易にする試薬（例えば、蛍光標識、化学標識（例えば、米国特許第４，５８２，７８９号及び第４，５６３，４１７号を参照）、または修飾塩基）を用いて、検出可能に標識することができる。

【0107】

標準的なストリンジェンシー条件は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（前掲）及びＨａｙｍｅｓ， ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（１９８５）によって説明されている。核酸分子がプライマーまたはプローブとして機能するためには、核酸分子は、用いられる特定のハイブリダイゼーション条件下（例えば、溶媒及び塩の濃度）で安定した２本鎖構造を形成することができるように、配列が十分に相補的であればよい。

【0108】

ハイブリダイゼーションは、２つの核酸配列間の相同性の評価に使用することができる。本明細書に記載の核酸配列またはそのフラグメントは、標準的なハイブリダイゼーション技法に従ってハイブリダイゼーションプローブとして使用することができる。目的プローブ（例えば、本明細書に記載のヌクレオチド配列またはその補体の一部を含むプローブ）における、試験供給源からのＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、またはこれらのフラグメントに対するハイブリダイゼーションは、試験供給源中にプローブに対応するＤＮＡまたはＲＮＡが存在することを示す。ハイブリダイゼーション条件は当業者に公知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，６．３．１－６．３．６，１９９１で見出すことができる。中程度のハイブリダイゼーション条件は、３０℃における２×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリダイゼーション、及びその後の５０℃における１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中での洗浄として定義される。高度にストリンジェントな条件は、４５℃における６×ＳＳＣ中でのハイブリダイゼーション、及びその後の６５℃における０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中での洗浄である。

【0109】

プライマーは、様々なＰＣＲタイプの方法で使用することができる。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技法を使用して、全ゲノムＤＮＡまたは全細胞ＲＮＡからの配列を含めたＤＮＡ及びＲＮＡからの特定の配列を増幅することができる。ＰＣＲプライマーは、増幅の関心対象となる領域に隣接するように設計されている。プライマーは、増幅対象となるヌクレオチド配列内の５’末端付近、３’末端付近、または任意の位置に配置することができる。アンプリコン長は、実験の目標によって規定される。ｑＰＣＲの場合、標的長は１００塩基対に近く、標準的なＰＣＲの場合、標的長は５００塩基対前後である。概して、目的領域の末端以降からの配列情報は、増幅対象の鋳型の対向鎖と配列が同一であるかまたは類似するオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために用いられる。ＰＣＲプライマーは、単一核酸分子として（例えば、ホスホロアミダイト技術を用いた３’→５’方向の自動化ＤＮＡ合成を用いて）、または一連のオリゴヌクレオチドとして、化学合成することができる。例えば、所望の配列を含む長いオリゴヌクレオチド（例えば、＞１００ヌクレオチド）の１つ以上の対は、各対が相補性を有する短いセグメント（例えば、約１５ヌクレオチド）を含み、オリゴヌクレオチド対がアニーリングされたときにデュプレックスが形成されるように、合成することができる。ＤＮＡポリメラーゼはオリゴヌクレオチドを伸長するために使用され、オリゴヌクレオチド対ごとに単一の２本鎖核酸分子をもたらす。

【0110】

加えて、核酸配列またはそのフラグメント（例えば、オリゴヌクレオチドプローブ）は、遺伝子発現の検出及び／または定量化のために核酸アレイで使用することができる。

【0111】

１０． 治療方法
本明細書で開示する方法は、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象がＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答する可能性があるかそうでないかの評価を可能にする。ＳＭＡ療法に応答する可能性がある、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象には、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を投与することができる。逆に、ＳＭＡ療法に応答する可能性が低い、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象には、ＳＭＡの治療に好適な別のＳＭＡ療法を投与することができる。

【0112】

また、本開示の方法は、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象を、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を含む治療から利益を受ける可能性がより高い対象の群と、利益を受ける可能性がより低い対象の群とに層別化することも可能にする。ＳＭＡ療法を用いた治療が検討されているＳＭＡ対象のプールからこのような対象を選択する能力は、対象に有効な治療を投与するために有益である。

【0113】

ＳＭＡ療法を含む治療が検討される対象としては、限定されるものではないが、ＳＭＡを有する対象、ＳＭＡを有することが疑われる対象、またはＳＭＡに罹患する可能性がある対象が挙げられる。１つの実施形態において、ＳＭＡ療法を用いて治療される対象は、０型ＳＭＡを有するか、有することが疑われるか、またはこれに罹患する可能性がある。１つの実施形態において、ＳＭＡ療法を用いて治療される対象は、Ｉ型ＳＭＡを有するか、有することが疑われるか、またはこれに罹患する可能性がある。１つの実施形態において、ＳＭＡ療法を用いて治療される対象は、ＩＩ型ＳＭＡを有するか、有することが疑われるか、またはこれに罹患する可能性がある。１つの実施形態において、ＳＭＡ療法を用いて治療される対象は、ＩＩＩ型ＳＭＡを有するか、有することが疑われるか、またはこれに罹患する可能性がある。１つの実施形態において、ＳＭＡ療法を用いて治療される対象は、ＩＶ型ＳＭＡを有するか、有することが疑われるか、またはこれに罹患する可能性がある。

【0114】

ＳＭＡを有する対象が、ＳＭＡ療法に応答する可能性がより高い（上記のバイオマーカー（例えば、ｐＮＦ－Ｈタンパク質）のうちの１つ以上の濃度に基づく）場合、対象にＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））の有効量を投与することができる。化合物の有効量は、例えば、患者の特性（年齢、性別、体重、人種など）、疾患の進行、及び薬物に対する事前暴露を考慮して、医療従事者が適切に決定することができる。対象が、あるＳＭＡ療法に応答する可能性がより低い場合、対象には任意選択で別のＳＭＡ療法を投与することができる。

【0115】

全ての年齢の対象がＳＭＡを発症し得る。そのため、本明細書に記載の方法で使用する生体試料は、胎児、乳児、小児、青年、または成人を含めたあらゆる年齢のヒト対象から、例えば、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる成人から得ることができる。

【0116】

当該方法は、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））によって治療可能なＳＭＡに罹患するリスクがある個体にも適用することができる。このような個体には、（ｉ）このような障害の家族歴（もしくは遺伝的素因）、または（ｉｉ）このような障害に罹患する１つ以上のリスク因子を有する個体が含まれる。

【0117】

ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答する可能性が高いまたは低いかに基づいて対象を層別化または選択した後、医療従事者（例えば、医師）は、対象に適切な治療モダリティーを投与することができる。ＳＭＡ療法を投与する方法は、当技術分野において公知である。

【0118】

本明細書に記載の任意の療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）を含む療法またはＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）を含まない療法）は、１つ以上の追加の治療剤を含んでもよいことを理解されたい。すなわち、本明細書に記載の任意の療法は、１つ以上の追加の治療剤（例えば、限定されるものではないが、本明細書に記載の他のＳＭＡ療法）と共に同時投与（併用投与）されてもよい。さらに、本明細書に記載の任意の療法は、治療のための１つ以上の薬剤、またはＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を含む療法における１つ以上の副作用を含む場合がある。

【0119】

併用療法（例えば、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））と、１つ以上の追加のＳＭＡ療法または追加の治療剤との同時投与）は、例えば、同時でも連続的であってもよい。例えば、ＳＭＡ療法及び追加の治療剤（複数可）は、同時に投与しても異なる時間に投与してもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の治療剤を時間内で最初に投与し、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を時間内で２番目に投与することができる。

【0120】

ＳＭＡを有し、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答すると予測される対象が、以前ＳＭＡ療法を投与されたことがある場合、療法は、以前投与されたまたは現在投与されている療法を置き換えるかまたは増強することができる。例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）を用いて治療する際に、非ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）療法の投与を中止または縮小（例えば、低レベルで投与）することができる。以前の療法の投与は、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）を含む療法が投与されている間、維持することができる。いくつかの実施形態において、以前の療法は、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）のレベルが治療効果をもたらすのに十分なレベルに達するまで、維持することができる。

【0121】

いくつかの事例において、治療方法は、胎児を子宮内で治療することを含む。治療対象となる胎児は、対照との対比で高いＮＦレベル（例えば、ｐＮＦ－ＨまたはＮＦ－Ｌ）に基づき、ＳＭＡ療法を用いた治療が必要であると判定される。例えば、胎児が、遺伝子検査に基づいてＳＭＡを有すると同定され、かつＮＦレベルが上昇していると同定された場合、胎児はＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を用いて治療することができる。いくつかの場合において、治療方法は０型患者に関連する。胎児が、非常に高いＮＦレベル及び１コピーのＳＭＮ２を有すると同定される場合、胎児が０型ＳＭＡを有する可能性が高い。このような胎児を出生前にＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））を用いて治療すれば、その胎児を有効に治療することができる。

【0122】

１１． キット
本開示はキットも提供する。ある特定の実施形態において、キットは、本明細書で開示するバイオマーカーのうちの１つ以上またはそれらの濃度もしくは発現レベルの検出に使用することができる抗体（１つまたは複数）を含むことができる。例えば、キットは、ＮＦ－Ｈ（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）と特異的に結合する抗体を含むことができる。キット内の抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、さらに、検出可能な標識と結合体化させることができる。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書で開示する任意のバイオマーカーの同定または検出に使用することができるプローブを含む。いくつかの実施形態において、キットは任意の核酸アレイを含む。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書で開示する任意のバイオマーカーまたはそれらの発現もしくは発現レベルの同定または検出に使用することができる、プローブまたは抗体を含む。キットは、任意選択で、生体試料中の１つ以上のタンパク質の濃度またはｍＲＮＡのレベルを検出及び／または測定するための説明書を含むことができる。

【0123】

キットは、任意選択で、例えば、対照（例えば、評価対象のタンパク質に対する濃度標準物質）、またはアレイの核酸プローブによって認識される既知の濃度の１つ以上のアンプリコンを含む対照標識アンプリコンセットを含むことができる。いくつかの場合において、対照は、ＳＭＡ、またはＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に対する応答性を予測できる１つ以上のタンパク質（例えば、ｐＮＦ－Ｈ）またはＲＮＡの発現レベルまたは発現レベル範囲を含む添付文書（例えば、紙の添付文書、またはＣＤ、ＤＶＤ、もしくはフロッピー（登録商標）ディスクなどの電子媒体）であり得る。

【0124】

いくつかの実施形態において、キットは、生体試料を処理するための１つ以上の試薬（例えば、較正試薬、緩衝液、希釈剤、呈色試薬、反応を停止するための試薬）を含むことができる。例えば、キットは、生体試料からタンパク質を単離するための試薬及び／または生体試料中のタンパク質の存在及び／または量を検出するための試薬（例えば、検出アッセイの対象であるタンパク質に結合する抗体及び／またはタンパク質に結合する抗体に結合する抗体）を含むことができる。

【0125】

ある特定の実施形態において、キットは、少なくとも１つのマイクロプレート（例えば、９６ウェルプレート、すなわち８ウェルの１２ストリップ）を含む。マイクロプレートは、対応するプレートカバーを備えることができる。マイクロプレートは、ポリスチレンまたは他の任意の好適な材料であり得る。マイクロプレートは、各ウェル内にコーティングされた特定のバイオマーカーの存在を同定するのに使用される抗体を有することができる。抗体は、検出可能な標識と結合体化させることができる。また、キットは、少なくとも１つの接着ストリップを含んでもよい。

【0126】

いくつかの実施形態において、キットは、例えば、発現プロファイルまたはマイクロアレイ解析の結果を解析するための、ソフトウェアパッケージを含むことができる。

【0127】

また、キットは、本明細書に記載の任意の遺伝子（例えば、ＮＦ－Ｈ）のタンパク質発現を検出するための１つ以上の抗体を含んでもよい。例えば、キットは、本明細書に記載の任意の遺伝子によってコードされる１つ以上のタンパク質と特異的に結合可能な１つまたは複数の抗体、任意選択で、１つ以上のタンパク質の濃度を検出及び／または測定するための説明書、及び／または複数のうちの少なくとも１つの抗体に結合可能な検出可能に標識された抗体を含む検出抗体を含む（または場合によってはそれからなる）ことができる。いくつかの実施形態において、キットは、ＮＦ－Ｈ、ＮＦ－Ｌ、及び／またはＮＦ－Ｍを認識する抗体を含むことができる。いくつかの実施形態において、キットは、ｐＮＦ－Ｈを認識する抗体を含むことができる。

【0128】

ある特定の実施形態において、キットは、任意選択で、ＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））の１つ以上の単位用量を含んでもよい。

【0129】

また、本明細書に記載のキットは、１つ以上のタンパク質の濃度または１つ以上のＲＮＡの発現レベルが、ＳＭＡを有するか、または有することが疑われる対象がＳＭＡ療法（例えば、ＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標））に応答することを予測する場合に、任意選択で、ＳＭＡ療法を投与するための説明書を含んでもよい。

【0130】

特定の実施形態において、キットは以下のうちの１つ以上を含む。
（ｉ）マイクロプレート（例えば、９６ウェルプレート）。マイクロプレートは、検出可能な標識と結合体化した抗ＮＦ－Ｈ抗体でコーティングすることができる。抗ＮＦ－Ｈ抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、例えば、マウス、ウサギ、ラット、またはモルモットからのものであり得る。検出可能な標識は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ビオチン、蛍光部分、放射性部分、ヒスチジンタグ、またはペプチドタグであり得る。マイクロプレートは、カバーと、任意選択で、１つ以上の接着ストリップとを備えることができる。
（ｉｉ）検出可能な標識と結合体化した抗ＮＦ－Ｈを含むバイアル。検出可能な標識は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ビオチン、蛍光部分、ヒスチジンタグ、ペプチドタグであり得る。バイアルは防腐剤を含んでもよい。
（ｉｉｉ）既知の濃度のＮＦ－Ｈ標準物質を含むバイアル。ＮＦ－Ｈは、組換えヒトＮＦ－Ｈであり得る。
（ｉｖ）アッセイ希釈剤を含むバイアル。
（ｖ）較正物質希釈剤を含むバイアル。
（ｖｉ）洗浄緩衝液を含むバイアル。緩衝液は濃縮物として提供されてもよい。
（ｖｉｉ）呈色試薬を含む１つ以上のバイアル。
（ｖｉｉｉ）比色反応を停止するための停止液を含むバイアル。

【0131】

以下の実施例は、特許請求対象の発明をより十分に例示するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。特定の材料が言及されている範囲内において、それは単なる例示目的のものであり、本発明を限定する意図はない。当業者は、発明の範囲から逸脱することなく、発明能力の行使を伴わずに同等の手段又は反応物を開発することができる。

【実施例】

【0132】

以下の実施例では、ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨという名称のいくつかの臨床試験について言及する。

【0133】

ＥＮＤＥＡＲは、症候性の乳児発症型ＳＭＡを有する対象における、ＩＳＩＳ ３９６４４３の第３相多施設ランダム化二重盲検シャム手順対照試験であった。本試験の最終解析の結果は、髄腔内（ＩＴ）ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象が、シャム手順を投与した対照群の対象に比べて、運動マイルストーンの獲得における統計的に有意かつ臨床的に意味のある改善を達成し、さらに、無イベント生存期間、全生存期間、運動機能、及び運動ニューロン健康状態における持続的かつ臨床的に意味のある改善を達成したという明らかなエビデンスをもたらした。対照と対比しての改善は、治療開始から早くも２ヵ月後（負荷用量期間終了時）に認められ、治療開始から６ヵ月後には対照との明らかな分離が認められた。

【0134】

最終解析の時点では、対象１２１例に対し、腰椎穿刺（ＬＰ）によるＩＴ注入として投与されたＩＳＩＳ ３９６４４３［ｎ＝８０］またはシャム手順（ｎ＝４１）を少なくとも１回用量投与した。これらの対象のうち、８９例の対象（ＩＳＩＳ ３９６４４３群の６５例、対照群の２４例）が試験を完了した。試験終了時点では、合計４２例の対象（ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象３２例及び対照群の対象１０例）が試験にとどまり、早期試験終了による治療中止として記録した。ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象２例、対照群の対象１例は、非盲検治療への移行前に自由意志により中止し、対象２９例（ＩＳＩＳ ３９６４４３群の１３例及び対照群の１６例）が死亡した。

【0135】

本研究における対象１２１例の人口統計学的特徴及びＳＭＡ既往歴は、Ｉ型ＳＭＡ集団と一致するものであった。
・対象のうち男性が４５％、女性が５５％で、８６％が白人であった。
・ほとんどの対象（８６％）は、１２週齢未満で症状を発症した。年齢中央値は、ＳＭＡ症状発症が８．０週（範囲：１～２０週）、ＳＭＡ診断が１２．０週（範囲：０～３０週）、スクリーニングが１６６日（範囲：２０～２１１日）であった。登録時の疾患期間中央値は、１３．１週（範囲：０．０～２５．８６週）であった。
・ほとんどの対象（９９％）は、試験組入れ時の現地での臨床検査によれば、２コピーのＳＭＮ２遺伝子を有していた。
・ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象８０例のうち、７３例（９１％）に少なくとも４回用量のＩＳＩＳ ３９６４４３を投与（すなわち、負荷用量段階を完了）し、対象３２例（４０％）に計画された６回用量全てを投与した。対照群の対象４１例のうち、対象３４例（８３％）に少なくとも４回のシャム手順を実施し、対象１４例（３４％）に６回全ての手順を実施した。

【0136】

ＣＨＥＲＩＳＨは、遅発型ＳＭＡを有する対象における、ＩＳＩＳ ３９６４４３の第３相二重盲検ランダム化シャム手順対照試験であった。およそ１１７人の対象を試験に登録し、ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いた治療またはシャム対照に２：１の比で割り付けた。ＩＳＩＳ ３９６４４３は、負荷レジメンを用いてＩＴ投与し（１日目、２９日目、及び８５日目に投薬）、その６ヵ月後に維持用量を投与した（２７４日目に投薬）。

【0137】

中間解析の結果は、ＩＴ ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象が、シャム手順を投与した対照群の対象に比べて、運動機能における統計的に有意な増加を達成し、さらに、運動マイルストーンにおける持続的かつ臨床的に意味のある改善を達成したという明らかなエビデンスをもたらした。運動機能の改善は全ての時点で認められたが、対照群からの分離は、治療開始から６ヵ月後、明らかに生じた。ＩＳＩＳ ３９６４４３のリスクベネフィットの評価に基づいて、治験依頼者は試験の早期終了を決定し、対象には非盲検継続試験に登録する機会を与えた。

【0138】

中間解析の時点では、対象１２６例に対し、ＩＳＩＳ ３９６４４３（ｎ＝８４）またはシャム手順（ｎ＝４２）を少なくとも１回用量投与した。治療を中止した対象も、試験を中止した対象もいなかった。データカットオフ日時点では、ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象８４例のうち４９例（５８％）、対照群の対象４２例のうち２３例（５５％）が試験を継続していた。１５ヵ月時におけるＨＦＭＳＥスコアのベースラインからの変化に対する一次解析は、対象１２６例（８４例がＩＳＩＳ ３９６４４３を用いた治療、４２例がシャム手順を受けた）から構成されたＩＴＴセットに基づくものであった。ＷＨＯ運動マイルストーンの主要な解析は、中間有効性セットを用いて実施した。このセットは、４５６日目（すなわち、１５ヵ月目）の来院時に評価の機会を有する対象５４例（対象３５例がＩＳＩＳ ３９６４４３を用いた治療を受け、対象１９例がシャム手順を受けた）から構成された。その他の全ての二次及び三次エンドポイント解析はＩＴＴセットで実施した。

【0139】

本試験における対象１２６例の人口統計学的特徴及びベースライン疾患特性（ＳＭＡ及び病歴を含む）は、ＩＩ型またはＩＩＩ型ＳＭＡに罹患する可能性が高い集団と一致するものであった。
・男性が４７％、女性が５３％で、７５％が白人であった。
・年齢中央値は、ＳＭＡ症状発症が１１ヵ月（範囲：６～２０）、ＳＭＡ診断が１８ヵ月（範囲：０～４８）、スクリーニングが３．０年（範囲：２～９年）であった。登録時の疾患期間中央値は、３５．７ヵ月（範囲：８～９４ヵ月）であった。
・ほとんどの対象（８８％）は、試験組入れ時の臨床検査によれば、３コピーのＳＭＮ２遺伝子を有し、対象の８％は２コピーを有した。
・ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象８４例のうち、全例に少なくとも３回用量のＩＳＩＳ ３９６４４３を投与（すなわち、負荷用量を完了）し、対象７６例（９０％）に４回用量全てを投与した。対照群の対象４２例のうち、全例に少なくとも３回のシャム手順を実施し、対象４０例（９５％）に４回全ての手順を実施した。
・試験期間中央値は、２つの治療群間でほぼ同じ（すなわち、ＩＳＩＳ ３９６４４３群で４１２．５日、対照群で４１９．５日）であった。試験における人年の総数は１３４．０６（ＩＳＩＳ ３９６４４３群で８８．８４人年、対照群で４５．２２人年）であった。

【0140】

ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象は、シャム手順を行った対象に比べて臨床的に意味のある利益が実現した。このような利益には、ＨＦＭＳＥによる測定における統計的に有意に大きな運動機能の増加と、上肢の機能的能力の改善とが含まれた。

【0141】

ＮＵＲＴＵＲＥは、症状発現前のＳＭＡにおけるＩＳＩＳ ３９６４４３の有効性、安全性、忍容性、及びＰＫを評価するための、進行中の第２相非盲検多施設単一群試験である。本試験は、５ｑ ＳＭＡの遺伝子文書管理、２コピーまたは３コピーのＳＭＮ２遺伝子、ＣＭＡＰ≧１ｍＶ、及びＳＭＡの徴候または症状の不在を伴った、登録時点で生後６週以下の対象において行われている。最大２５例の対象が計画されている。現時点で利用可能な有効性データからは、ほとんどの対象における運動マイルストーンの発達及び達成が、Ｉ型ＳＭＡの自然経過よりも正常な発達との一致性が高いことが示されている。

【0142】

ＮＵＲＴＵＲＥのデータカットオフ時点では、対象２０例が登録されており、少なくとも１回用量のＩＳＩＳ ３９６４４３を投与していた。全ての対象が試験を継続している。４回全ての負荷用量の投与を受けた、または６４日目の来院を完了する機会を有した対象１８例が、有効性セットを構成する。
・ほとんどの対象は男性（５５％）及び白人（５０％）である。
・初回用量時の年齢は生後３～４２日の範囲であり、中央値は１９日であった。
・対象１８例のうち、対象１３例（７２％）が２コピーのＳＭＮ２遺伝子を有し、対象５例（２８％）が３コピーを有する。

【0143】

有効性データは、６４日目時点で対象１８例、１８３日目時点で対象１６例、３０２日目時点で対象１１例、３６５日目時点で対象９例、及び４２１日目時点で対象５例で利用可能であった。これらの来院の後半の結果は、Ｉ型ＳＭＡ及び対象のきょうだい患者の経験とは一致せず、健康な乳幼児の同齢の期待値と一致する発達を示している。

【0144】

ＥＭＢＲＡＣＥは、ＥＮＤＥＡＲにもＣＨＥＲＩＳＨにも参加資格がないＳＭＡを有する対象における、ＩＳＩＳ ３９６４４３の第２相ランダム化シャム手順対照多施設試験である。本試験は、ＣＨＥＲＩＳＨに適格となるには低すぎる年齢で乳児発症型ＳＭＡの症状を示した対象、またはＥＮＤＥＡＲに適格となるには高すぎる年齢でＳＭＡの遅発型症状を示し、ＥＮＤＥＡＲに適格となるには高すぎる年齢でスクリーニングされたもしくはＳＭＮ２のコピー数が多すぎた対象、の独自のセットを評価した。したがって、本試験の集団は、最大３コピーのＳＭＮ２を有する対象における乳児発症型及び遅発型両方のＳＭＡの文脈でＩＳＩＳ ３９６４４３の安全性、忍容性、及び有効性を探索する機会をもたらした。

【0145】

本試験は、当初は二重盲検試験として設計されたが、ＩＳＩＳ ３９６４４３臨床開発プログラムにおけるピボタル試験から肯定的かつロバストな結果が観察された後に、二重盲検段階（パート１）及び非盲検継続段階（パート２）を含む２パートの試験に発展した。パート１は、ランダム化二重盲検シャム手順対照試験であった。米国及びドイツの７施設からの対象２１例を試験に登録した。対象のランダム化は、ＳＭＡの年齢に基づいて層別化した（乳児発症型［≦６ヵ月］ｖｓ遅発型［＞６ヵ月］）。対象は、およそ１０ヵ月の投薬期間にわたり、合計６回の髄腔内（ＩＴ）注入または６回のシャム手順の投与が予定された。ただし、ＩＳＩＳ ３９６４４３臨床開発プログラムのピボタル試験の１つについての中間解析で、肯定的かつロバストな有効性結果が観察されたため、本試験のパート１は早期終了した。試験依頼者がＩＳＩＳ ３９６４４３のリスクベネフィット評価に基づいて本試験のパート１を早期終了することを決定した結果、全ての対象に、パート１終了評価を早期に完了し本試験のパート２に参加することを依頼した。パート１に対象が参加した合計期間はおよそ１５ヵ月となるように計画されていたが、本試験のパート１が早期終了したため、適格な対象には、パート１終了評価の直後に本試験のパート２に登録する機会を与えた。

【0146】

合計２１例の対象を本試験に登録した。対象を、ＩＳＩＳ ３９６４４３または対照（シャム手順）に２：１の比でランダム化した。ランダム化は、ＳＭＡと一致する臨床徴候及び症状が発生した年齢に基づいて層別化した（≦６ヵ月［乳児発症型］ｖｓ＞６ヵ月［遅発型］）。本試験のパート１では対象１４例にＩＳＩＳ ３９６４４３を投与し、対象７例にシャム手順を投与した。

【0147】

合計２１例の対象をスクリーニングし、本試験のパート１に登録した。全ての対象を２：１の比でランダム化して、対象１４例にＩＳＩＳ ３９６４４３を投与し、対象７例に対照治療（シャム手順）を投与した。加えて、ランダム化は、乳児型発症（≦６ヵ月）及び遅発型（＞６ヵ月）ＳＭＡと一致する臨床徴候及び症状が発生した年齢に基づいて層別化した。最初の対象は２０１５年８月１９日に治療し、試験終了（パート１）は２０１６年１２月２０日であった。ランダム化割付けに従って全ての対象に試験治療を投与した。

【0148】

ＩＴＴセットを構成したランダム化及び投薬を行う対象２１例を２ヵ国の７試験施設で登録した。対象１６例（７６％）は米国の６施設で登録し、対象５例（２４％）はドイツの１施設で登録した。施設を横断して対象をランダム化した。ランダム化した対象２１例のうち、１３例が≦６ヵ月でＳＭＡを発症し、残りの８例が＞６ヵ月でＳＭＡを発症した。

【0149】

対象２１例に治療を投与し、このうち対象１４例は試験の早期終了により完了した（対照群の対象６例［８６％］及びＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象８例［５７％］）。対象９例（４３％）が３０２日目までに治療を完了した（対照群の対象２例［２９％］及びＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象７例［５０％］）。対象６例（２９％）（全てＩＳＩＳ ３９６４４３群）がパート１最終追跡調査評価（４２２日目）を完了した。対照群に割り付けた対象１例（５％）は、試験２８９日目に脳死により死亡した。

【0150】

人口統計学的特徴及びベースライン疾患特性：
試験における対象２１例のうち、１１例（５２％）が男性、１０例（４８％）が女性であった。初回用量時の年齢は７ヵ月～５３ヵ月の範囲であった（中央値：１７ヵ月）。対象１１例（５２％）が生後７～１８ヵ月であり、対象１０例（４８％）が生後１８ヵ月超であった。対象９例（４３％）が白人、対象５例（２４％）がアジア人、対象２例（１０％）がその他であった。

【0151】

有効性及び薬物動態
・ＩＳＩＳ ３９６４４３群の対象は、対照群の対象よりも人工呼吸器の使用が少なかった。
・ＨＩＮＥ運動マイルストーンレスポンダーの割合は、ＩＳＩＳ ３９６４４３群の方が対照群よりも高く、各ＨＩＮＥ運動マイルストーンカテゴリーにおいて少なくとも１例のＩＳＩＳ ３９６４４３群からのレスポンダーが認められ、最多数の対象が首の座り、寝返り、及び座位の改善を示した。

【0152】

安全性
本試験では、複数回のＩＴ注入（負荷用量４回の後に４ヵ月ごとの維持用量）として投与した場合におけるＩＳＩＳ ３９６４４３の忍容性は良好であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の全体的な安全プロファイルにおいて、新たな安全性上の懸念は確認されなかった。

【0153】

このＩＳＩＳ ３９６４４３の第２相ランダム化シャム手順対照試験のパート１からの結果からは、ＩＳＩＳ ３９６４４３の髄腔内投与が乳児発症型または遅発型ＳＭＡを有する対象の集団に有効であるという明らかなエビデンスが示された。シャム投与のみを受けた試験対象の対照群と比較すると、ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象は運動マイルストーンの増加を達成及び持続しており、また、治験責任医師及び介護者の評価に基づけば、概して成長及び成功しているように思われた。ＣＳＦ ＩＳＩＳ ３９６４４３濃度とＨＩＮＥ運動マイルストーン合計スコアとの間には正の相関が観察され、これは経時的に増加した。新たな安全性上の懸念が確認されず、また安全性の結果がＩＳＩＳ ３９６４４３臨床開発プログラムの他の試験結果と一致していたことから、ＩＳＩＳ ３９６４４３の投薬レジメンは安全かつ忍容性良好であった。全ての主要な安全性及び探索的有効性のパラメーターにわたって観察された結果に基づけば、また未治療対照群で観察された結果とは対照的に、ＩＳＩＳ ３９６４４３は乳児発症型及び遅発型ＳＭＡを有する対象の運動機能を改善する。

【0154】

方法
選択した時点の血漿をアッセイして、ｐＮＦ－Ｈ濃度を検出した。全ての血漿試料を、使用するまで－７０℃で凍結した。選択したスケジュール時間時の血漿試料を、アッセイ希釈緩衝液を用いて最小希釈倍率（ＭＲＤ）で希釈した。

【0155】

Ｅｎｃｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（カタログ番号ＲＰＣＡ－ＮＦ－Ｈ及び／またはカタログ番号ＣＰＣＡ－ＮＦ－Ｈ）製のポリクローナル抗ＮＦ－Ｈ抗体を用いてＮＦ－Ｈをアッセイした。このような抗体は、ＮＦ－Ｈの高リン酸化形態を特異的に検出する。

【0156】

任意の患者試料をアッセイする前に、適格性実験を行った。このような実験は、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ（登録商標）によって開発されたＥｌｌａ技術プラットフォームによって生成されたｐＮＦ－Ｈ濃度の再現性及び変動性を評価することを目的とした。Ｅｌｌａ技術は、予め装填された試薬を含むマイクロ流体カートリッジを利用して、試料及び洗浄緩衝液のみがカートリッジに装填されるようにしている。カートリッジが装填されると、当該プラットフォームは、その内蔵された工場較正標準曲線を用いて自動的にｐＮＦ－Ｈ濃度を計算する。

【0157】

各カートリッジの品質及びリアルタイムでの任意の予期しない潜在的交絡効果を評価するため、４つの品質管理（ＱＣ）試料を各カートリッジに含め、３つの緩衝液添加ＱＣ（高濃度、中濃度、及び低濃度）、ならびに市販されている多発性硬化症（ＭＳ）患者からの内因性品質管理（ＥＱＣ）試料（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ）を実行する。これら４つのＱＣを使用して、生体解析法の性能をモニターし、個別バッチで解析された未知の試料の結果の完全性及び妥当性を評価する。

【0158】

同じ対象からの試料を同じカートリッジで解析した。各試料の２つのアリコートをランダムな順序で同じカートリッジ上に配置して、可能性が考えられる配置効果が試料解析で確実に考慮されるようにした。

【0159】

実施例１：ＣＳＦと血漿とのｐＮＦ－Ｈレベルの相関
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥ及びＥＭＢＲＡＣＥからの血漿及びＣＳＦ試料を、同じ時点及び同じ対象において解析して、ｐＮＦ－Ｈレベルの相関を決定した。ＣＳＦと血漿との間でｐＮＦ－Ｈレベルの高い相関（Ｒ＝０．８８）が同定された（図１）。この結果は、ｐＮＦ－Ｈ及び他のニューロフィラメントサブユニットの血漿中レベルが、これらの同じタンパク質のＣＳＦレベルを十分に予測できることを示唆するものである。

【0160】

実施例２：疾患及び重症度の予測因子としてのｐＮＦ－Ｈの血漿中レベル
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３（ＮＵＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）またはシャム手順（ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。健康なボランティア（４～１８歳）からの血漿試料についてもｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。

【0161】

健康なボランティアからの結果は、全年齢でｐＮＦ－Ｈ＜３００ｐｇ／ｍＬを示した。ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、ＣＨＥＲＩＳＨからの結果は、臨床試験のＳＭＡを有する対象におけるｐＮＦ－Ｈの血漿中レベルがほぼ全て＞３００ｐｇ／ｍＬであることを示している。一部の対象は最大でおよそ５０，０００ｐｇ／ｍＬのレベルである。概して、２コピーのＳＭＮ２を有する対象は、３コピーのＳＭＮ２を有する対象よりも高いレベルを有する。さらに、症状発症が≦生後６ヵ月の対象（ＥＮＤＥＡＲ）は、症状発症が＞生後６ヵ月の対象（ＣＨＥＲＩＳＨ）よりも高いレベルを有する。図２を参照。

【0162】

ただし、重要な例外が観察されている。ＮＵＲＴＵＲＥ内の対象１例は２コピーのＳＭＮ２を有し、３コピーのＳＭＮ２を有する対象との一致性がより高いｐＮＦ－Ｈレベルを有する。この対象には、同様に２コピーのＳＭＮ２を有するきょうだいが存在し、このきょうだいはＩＩ型ＳＭＡに罹患している。したがって、この対象は、Ｉ型ＳＭＡに罹患することが示唆されるＳＭＮ２コピー数を有するものの、ＩＩ型ＳＭＡに罹患することを示唆する家族歴を有する。ｐＮＦ－Ｈレベルは、ＳＭＮ１欠失及びＳＭＮ２コピー数以外でのさらなる診断的洞察をもたらす可能性がある。ＥＮＤＥＡＲ内の対象１例は３コピーのＳＭＮ２を有し、２コピーのＳＭＮ２を有する対象との一致性がより高いｐＮＦ－Ｈレベルを有する。この対象は症状発症が≦生後６ヵ月であり、そのためＩＩ型ＳＭＡ（多くの場合３コピーのＳＭＮ２）よりもＩ型ＳＭＡ（多くの場合２コピーのＳＭＮ２）との一致性が高かった。

【0163】

全体的に見ると、結果からは、ＳＭＡを有する対象の中でｐＮＦ－Ｈの血漿中レベルが健康なボランティアに比べて著しく高いことが示されている。また、ＳＭＡを有する対象の中で、重症度がより高い表現型を有する対象は重症度がより低い表現型を有する対象よりも高い血漿中ｐＮＦ－Ｈレベルを有する。

【0164】

実施例３：ｐＮＦ－Ｈと年齢との相関（ＳＭＮ２コピー数＝２）
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３（ＮＵＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）またはシャム手順（ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、対象を２コピーのＳＭＮ２を有する者に限定した。ベースラインの対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルを、初回用量（またはシャム手順）時の年齢に対しプロットした。概して、低年齢の対象は高年齢の対象よりも高いｐＮＦ－Ｈレベルを有した。図３を参照。

【0165】

この結果は、２コピーのＳＭＮ２を有する対象の中で、ｐＮＦ－Ｈレベルが年齢の増加と共に低下することを示唆するものである。

【0166】

実施例４：ｐＮＦ－Ｈと年齢との相関（ＳＭＮ２コピー数＝３）
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３（ＮＵＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）またはシャム手順（ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、対象を３コピーのＳＭＮ２を有する者に限定した。ベースラインの対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルを、初回用量（またはシャム手順）時の年齢に対しプロットした。概して、低年齢の対象は高年齢の対象よりも高いｐＮＦ－Ｈレベルを有した。図４を参照。

【0167】

この結果は、３コピーのＳＭＮ２を有する対象の中で、ｐＮＦ－Ｈレベルが年齢の増加と共に低下することを示唆するものである。

【0168】

実施例５：ｐＮＦ－Ｈと年齢との相関
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３（ＮＵＴＵＲＥ、ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）またはシャム手順（ＥＮＤＥＡＲ、ＥＭＢＲＡＣＥ、及びＣＨＥＲＩＳＨ）を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、対象を、症状発症年齢（症状発現前（ＮＵＲＴＵＲＥ）、＜６ヵ月、≧６ヵ月）及びＳＭＮ２コピー数（２、３、４、または該当なし）によって層別化した。概して、症状発症年齢及びＳＭＮ２コピー数の各層内において、低年齢の対象は高年齢の対象よりも高いｐＮＦ－Ｈレベルを有した。図５を参照。

【0169】

この結果は、症状発症年齢またはＳＭＮ２コピー数とは無関係に、ｐＮＦ－Ｈレベルが年齢の増加と共に低下することを示唆するものである。

【0170】

実施例６：ｐＮＦ－Ｈと年齢との相関
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３またはシャム手順を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、全体の試験集団内におけるｐＮＦ－Ｈの四分位数が同定された。四分位数は、２３９０～１０，９００ｐｇ／ｍＬ、１０，９００～１５，４００ｐｇ／ｍＬ、１５，４００～２１，６００ｐｇ／ｍＬ、及び２１，６００～５０，１００ｐｇ／ｍＬとして定義された。概して、ベースライン時のｐＮＦ－Ｈレベルがより高い対象は、初回用量時により低年齢であり、症状発症時により低年齢であり、ＳＭＡ診断時により低年齢であるように思われた。さらに、ベースライン時のｐＮＦ－Ｈレベルがより高い対象は、ベースライン時の平均ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（フィラデルフィア小児病院乳児神経筋障害検査（Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｉｎｆａｎｔ Ｔｅｓｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ））スコア及び腓骨ＣＭＡＰ振幅がより低いように思われた。図６～８を参照。

【0171】

これらの結果は、初回用量時にｐＮＦ－Ｈレベルがより高いことが、症状発症時により低年齢であること、運動機能がより低いこと（ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ）、及び運動ニューロン健康状態がより不良であること（ＣＭＡＰ振幅）として示されているように、より重症度の高い表現型に関連することを示唆するものである。

【0172】

実施例７：ｐＮＦ－Ｈレベル及び運動機能
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３またはシャム手順を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルを、ベースラインＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤに対しプロットした。概して、ｐＮＦ－Ｈレベルがより高い対象はＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤがより低く、ｐＮＦ－Ｈレベルがより低い対象はＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤがより高く、－０．３の相関が見られた。図９を参照。

【0173】

この結果は、ｐＮＦ－Ｈレベルが運動機能と反比例的関係にあることを示唆するものである。この関係は線形であると思われる。

【0174】

実施例８：ｐＮＦ－Ｈレベルに基づく運動機能の予測
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、ベースライン時（ＩＳＩＳ ３９６４４３またはシャム手順を用いた治療の前）のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した。この解析では、線形回帰モデルを構築して、ベースラインＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤにおける様々な潜在的予測因子間の関係を調べた。統計的有意性を保った変数のみを含む最終モデルを同定した（ベースラインＮＦ－Ｈ；治療群、疾患期間（週）；性別；初回用量時の年齢（日）；ＳＭＡ症状発症時の年齢（週）；ＳＭＡ診断時の年齢（週）；在胎期間（週）；ベースライン体重（ｋｇ）；（在胎期間＋初回用量時の年齢）×（在胎期間＋ＳＭＡ症状発症時の年齢）；（在胎期間＋ＳＭＡ診断時の年齢）。この最終モデルでは、ベースラインのログ変換したｐＮＦ－Ｈレベルは統計的に有意であった。図１０を参照。

【0175】

この結果は、ｐＮＦ－Ｈレベルがベースライン運動機能の重要な予測因子であることを示唆するものである。

【0176】

実施例９：ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（シャム手順）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対値を対数変換し、試験日別にプロットした。経時的に、平均ｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１日目のおよそ１８，０００ｐｇ／ｍＬから試験３０２日目のおよそ５，０００ｐｇ／ｍＬへとほぼ線形的に低下している。図１１を参照。

【0177】

実施例１０：ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルの変化パーセント
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（シャム手順）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対値に対するベースラインからの変化パーセントを試験日別にプロットした。経時的に、ｐＮＦ－Ｈレベルの平均変化パーセントは、試験１日目のおよそ０％から試験３０２日目のおよそ－６０％へとほぼ線形的に低下している。図１２を参照。

【0178】

実施例１１：ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルに及ぼす薬物効果
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対値を対数変換し、試験日別にプロットした。経時的に、平均ｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１日目の１８，０００ｐｇ／ｍＬから試験６４日目のおよそ５，０００ｐｇ／ｍＬ、そして試験３０２日目のおよそ１，０００ｐｇ／ｍＬへと低下している。図１３を参照。

【0179】

この結果は、ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象が、ｐＮＦ－Ｈレベルの低下において、シャム対照を投与した対象に比べて異なるパターンを有することを示唆するものである。

【0180】

実施例１２：ＥＮＤＥＡＲにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルの変化パーセントに及ぼす薬物効果
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対値に対するベースラインからの変化パーセントを試験日別にプロットした。経時的に、ｐＮＦ－Ｈレベルの平均変化パーセントは、試験１日目のおよそ０％から試験６４日目のおよそ－７０％、及び試験３０２日目の－９０％へとほぼ線形的に低下している。図１４を参照。

【0181】

この結果は、ＩＳＩＳ ３９６４４３を用いて治療した対象が、ｐＮＦ－Ｈレベルの低下において、シャム対照を投与した対象に比べて異なるパターンを有することを示唆するものである。

【0182】

実施例１３：様々な時点におけるｐＮＦ－Ｈレベルの変化
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、各試験日において、ＩＳＩＳ ３９６４４３を投与した対象の中でｐＮＦ－Ｈの絶対値に対しベースラインから特定のレベルの変化パーセントに達した対象のパーセントを、シャム対照を投与した対象と比較した。統計的有意性（ｐ＜０．０５）は、まず６４日目に２つの試験群間で同定された。ｐＮＦ－Ｈの特定の変化を達成した各群のパーセンテージ間の最大の差は試験１８３日目に発生し、－８０％の変化となった。図１５を参照。

【0183】

この結果は、群の差は早くも試験６４日目に同定することができ、変化の閾値として－８０％を用いて群間の最も良好な分離が生じることを示唆するものである。

【0184】

実施例１４：１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目に合計運動マイルストーンスコア（ＨＩＮＥ－２（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｉｎｆａｎｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ ２））を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと関連するかどうかを判定した。試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと有意に関連していた（ｐ＝０．０００６）。図１６を参照。

【0185】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の運動マイルストーンを予測し得ることを示唆するものである。

【0186】

実施例１５：１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性（共変数を伴う）
試験ＣＳ３Ｂ（ＥＮＤＥＡＲ）からの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の合計運動マイルストーンスコア（ＨＩＮＥ－２（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｉｎｆａｎｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ ２））を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、複数の潜在的交絡因子を考慮した後に、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと関連するかどうかを判定した。複数の交絡因子を制御した後、最終モデルには６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈ（ｐ＜０．０００１）及び疾患期間（ｐ＝０．００２９）が含まれた。図１７を参照。

【0187】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、治療及びその他の潜在的交絡因子を制御した後に、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の運動マイルストーンを予測し得ることを示唆するものである。

【0188】

実施例１６：１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤを評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと関連するかどうかを判定した。試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと有意に関連していた（ｐ＜０．０００１）。図１８を参照。

【0189】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的運動機能を予測し得ることを示唆するものである。

【0190】

実施例１７：１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性（共変数を伴う）
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアを評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、複数の潜在的交絡因子を考慮した後に、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと関連するかどうかを判定した。複数の交絡因子を制御した後、最終モデルには６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈ（ｐ＝０．０００１）、治療群（ｐ＝０．００５）、及び疾患期間（ｐ＝０．０００３）が含まれた。図１９を参照。

【0191】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、治療及びその他の潜在的交絡因子を制御した後に、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的運動機能を予測し得ることを示唆するものである。

【0192】

実施例１８：ＨＩＮＥ－２（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリー及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目、試験１８３日目から試験３０２日目の間、試験３０２日目以降のＨＩＮＥ－２（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｉｎｆａｎｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ ２）レスポンダー状態を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。対象がＨＩＮＥ－２レスポンダーのプロトコル定義に基づくレスポンダーとなった場合、これが達成された時期を記録した。対象が試験ＣＳ３Ｂ内でレスポンダーにならなかった場合、そのことを記録した。シャム対照群の対象で試験ＣＳ３Ｂの間にＨＩＮＥ－２レスポンダーになった者はいなかった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとなった対象は、ほとんどが試験１８３日目までにレスポンダーとなった。シャム対照対象の中では、ほとんど全ての対象のｐＮＦ－Ｈレベルが全体の中央値（２１３０ｐｇ／ｍＬ）を上回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目までにレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目から３０２日目の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験３０２日目から試験終了の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＥＮＤＥＡＲ内でＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとならなかった対象の中では、およそ半数の対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値（２１３０ｐｇ／ｍＬ）を下回った。図２０を参照。

【0193】

これらの結果は、治療開始から１８３日後までにｐＮＦ－Ｈのある特定の閾値に達することが、治療をシャム対照から区別し、治療における最終的なレスポンダーを予測し得ることを示唆するものである。

【0194】

実施例１９：ＨＩＮＥ－２（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリー及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントにおけるｐＮＦ－Ｈレベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目、試験１８３日目から試験３０２日目の間、試験３０２日目以降のＨＩＮＥ－２レスポンダー状態を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。ｐＮＦ－Ｈの変化パーセントは、ベースラインと試験１８３日目との間で計算した。対象がＨＩＮＥ－２レスポンダーのプロトコル定義に基づくレスポンダーとなった場合、これが達成された時期を記録した。対象が試験ＣＳ３Ｂ内でレスポンダーにならなかった場合、そのことを記録した。シャム対照群の対象で試験ＣＳ３Ｂの間にＨＩＮＥ－２レスポンダーになった者はいなかった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとなった対象は、ほとんどが試験１８３日目までにレスポンダーとなった。シャム対照対象の中では、全ての対象でｐＮＦ－Ｈレベルの低下が＜８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目までにレスポンダーとなった対象の中では、ほぼ半数の対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの低下が＞８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目から３０２日目の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験３０２日目から試験終了の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。ＥＮＤＥＡＲ内でＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとならなかった対象の中では、およそ半数の対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。図２１を参照。

【0195】

これらの結果は、治療開始から１８３日後までにｐＮＦ－Ｈのある特定の低下の閾値に達することが、治療をシャム対照から区別し、治療における最終的なレスポンダーを予測し得ることを示唆するものである。

【0196】

実施例２０：ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリー及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目、試験１８３日目から試験３０２日目の間、試験３０２日目以降のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダー状態を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。対象がＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダーのプロトコル定義に基づくレスポンダーとなった場合、これが達成された時期を記録した。対象が試験ＣＳ３Ｂ内でレスポンダーにならなかった場合、そのことを記録した。シャム対照群の対象１例が、試験ＣＳ３Ｂの間にＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダーとなった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとなった対象は、ほとんどが試験１８３日目までにレスポンダーとなった。シャム対照対象の中では、ほとんど全ての対象のｐＮＦ－Ｈレベルが全体の中央値を上回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目までにレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目から３０２日目の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験３０２日目から試験終了の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。ＥＮＤＥＡＲ内でＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとならなかった対象の中では、およそ半数の対象のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の試験中央値を下回った。図２２を参照。

【0197】

これらの結果は、治療開始から１８３日後ｐＮＦ－Ｈのある特定の閾値に達することが、治療をシャム対照から区別し、治療における最終的なレスポンダーを予測し得ることを示唆するものである。

【0198】

実施例２１：ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（レスポンダー／ノンレスポンダー）カテゴリー及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントにおけるｐＮＦ－Ｈレベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目、試験１８３日目から試験３０２日目の間、試験３０２日目以降のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダー状態を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。ｐＮＦ－Ｈの変化パーセントは、ベースラインと試験１８３日目との間で計算した。対象がＨＩＮＥ－２レスポンダーのプロトコル定義に基づくレスポンダーとなった場合、これが達成された時期を記録した。対象が試験ＣＳ３Ｂ内でレスポンダーにならなかった場合、そのことを記録した。シャム対照群の対象１例が、試験ＣＳ３Ｂの間にＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤレスポンダーとなった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとなった対象は、ほとんどが試験１８３日目までにレスポンダーとなった。シャム対照対象の中では、１例を除く全ての対象でｐＮＦ－Ｈレベルの低下が＜８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目までにレスポンダーとなった対象の中では、ほぼ半数の対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの低下が＞８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験１８３日目から３０２日目の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受け試験３０２日目から試験終了の間にレスポンダーとなった対象の中では、ほとんどの対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。ＥＮＤＥＡＲ内でＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けレスポンダーとならなかった対象の中では、およそ半数の対象で試験１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化が＞８０％であった。図２３を参照。

【0199】

これらの結果は、治療開始から１８３日後までにｐＮＦ－Ｈのある特定の低下の閾値に達することが、治療をシャム対照から区別し、治療における最終的なレスポンダーを予測し得ることを示唆するものである。

【0200】

実施例２２：薬物効果の維持：ＮＵＲＴＵＲＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベル
臨床試験ＮＵＲＴＵＲＥからの血漿試料について、試験の１、６４、１８３、３０２、及び４２１日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対レベルを試験日別にプロットした。図２４を参照。

【0201】

この解析の結果は、顕著な低下が試験６４日目までに発生し、この新たなレベルが試験４２１日目まで安定していると思われることを示唆するものである。

【0202】

実施例２３：薬物効果の維持：ＥＭＢＲＡＣＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベル
臨床試験ＥＭＢＲＡＣＥからの血漿試料について、試験の１、６４、及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対レベルを試験日別にプロットした。図２５を参照。

【0203】

この解析の結果は、顕著な低下が試験６４日目までに発生し、この新たなレベルが試験１８３日目まで安定していると思われることを示唆するものである。

【0204】

実施例２４：薬物効果の維持：ＮＵＲＴＵＲＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベルの変化パーセント
試験２３２ＳＭ２０１（ＮＵＲＴＵＲＥ）からの血漿試料について、試験の１、６４、１８３、３０２、及び４２１日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈのベースラインからの変化パーセントレベルを試験日別にプロットした。図２６を参照。

【0205】

この解析の結果は、顕著な低下（－８０％）が試験６４日目までに発生し、この新たなレベルが試験４２１日目まで安定しているようであることを示唆するものである。

【0206】

実施例２５：薬物効果の維持：ＥＭＢＲＡＣＥにおけるｐＮＦ－Ｈ（ｐｇ／ｍＬ）レベル
臨床試験ＥＭＢＲＡＣＥからの血漿試料について、試験の１、６４、及び１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３）。この解析では、ｐＮＦ－Ｈの絶対レベルを試験日別にプロットした。図２７を参照。

【0207】

この解析の結果は、顕著な低下（－５０％）が試験６４日目までに発生し、この新たなレベルが試験１８３日目まで安定しているようであることを示唆するものである。

【0208】

実施例２６：１８３日目のＨＩＮＥ－２スコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の合計運動マイルストーンスコア（ＨＩＮＥ－２）を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと関連するかどうかを判定した。ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照の投与を受けた対象の間で別々の解析を行った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと統計的に有意に関連していなかった（ｐ＝０．３１８６）が、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い合計ＨＩＮＥ－２スコアと関連する傾向は見られた。シャム対照の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の合計ＨＩＮＥ－２スコアと統計的に有意に関連しており（ｐ＝０．０３０２）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い合計ＨＩＮＥ－２スコアと関連していた。図２８を参照。

【0209】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の運動マイルストーンを予測し得ることを示唆するものである。

【0210】

実施例２７：１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアを評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと関連するかどうかを判定した。ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照の投与を受けた対象の間で別々の解析を行った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと統計的に有意に関連しており（ｐ＝０．０４０６）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い合計ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと関連していた。シャム対照の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと統計的に有意に関連しており（ｐ＝０．０３３０）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低いＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤスコアと関連していた。図２９を参照。

【0211】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の運動機能を予測し得ることを示唆するものである。

【0212】

実施例２８：３０２日目に欠損値を伴わない生存乳児における経時的なｐＮＦ－Ｈレベル
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム手順）。この解析では、集団を、試験３０２日目まで生存し、かつ試験３０２日目にｐＮＦ－Ｈレベルを測定した対象に限定した。ｐＮＦ－Ｈの絶対値を試験日別にプロットした。経時的に、シャム手順の投与を受けた対象の中で、平均ｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１日目のおよそ１６，０００ｐｇ／ｍＬから試験３０２日目のおよそ７，０００ｐｇ／ｍＬへとほぼ線形的に低下している。経時的に、ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、平均ｐＮＦ－Ｈは、試験１日目の１８，０００ｐｇ／ｍＬから試験６４日目のおよそ４，０００に低下し、その後試験３０２日目ではおよそ１，０００ｐｇ／ＭＬで安定性を保っている。図３０を参照。

【0213】

この解析結果は、両方のコホートの低下が真であり生存バイアスではないことを示唆するものである。

【0214】

実施例２９：３０２日目に欠損値を伴わない生存乳児における経時的なｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセント
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について、試験の１、２、２９、６４、１８３、及び３０２日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム手順）。この解析では、集団を、試験３０２日目まで生存し、かつ試験３０２日目にｐＮＦ－Ｈレベルを測定した対象に限定した。ベースラインからの変化を試験日別にプロットした。経時的に、シャム手順の投与を受けた対象の中で、ｐＮＦ－Ｈレベルの変化は、試験３０２日のおよそ－５０％へとほぼ線形的に低下している。経時的に、ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、ｐＮＦ－Ｈの変化は、試験６４日目におよそ－７０％に低下し、その後試験３０２日目ではおよそ－９０％で安定性を保っている。図３１を参照。

【0215】

この解析結果は、両方のコホートの低下が真であり生存バイアスではないことを示唆するものである。

【0216】

実施例３０：１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と関連するかどうかを判定した。試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と有意に関連していた（ｐ＝０．００２１）。図３２を参照。

【0217】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的な運動神経健康状態を予測し得ることを示唆するものである。

【0218】

実施例３１：１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と関連するかどうかを判定した。ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照の投与を受けた対象の間で別々の解析を行った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と統計的に有意に関連しておらず（ｐ＝０．３６１２）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い腓骨ＣＭＡＰ振幅に対するある傾向を伴って関連していた。シャム対照の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と統計的に有意に関連しており（ｐ＝０．０１４２）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い腓骨ＣＭＡＰ振幅と関連していた。図３３を参照。

【0219】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的な運動ニューロン健康状態を予測し得ることを示唆するものである。

【0220】

実施例３２：１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と関連するかどうかを判定した。試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と有意に関連していた（ｐ＝０．０００２）。図３４を参照。

【0221】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的な運動神経健康状態を予測し得ることを示唆するものである。

【0222】

実施例３３：１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルとの関連性
臨床試験ＥＮＤＥＡＲからの血漿試料について試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルを解析し、試験１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅を評価した（ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照）。この解析では、線形回帰モデルを構築して、試験６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルが試験１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅と関連するかどうかを判定した。ＩＳＩＳ ３９６４４３及びシャム対照の投与を受けた対象の間で別々の解析を行った。ＩＳＩＳ ３９６４４３の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルは、試験１８３日目の腓骨ＣＭＡＰ振幅と統計的に有意に関連しておらず（ｐ＝０．０９５２）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い尺骨ＣＭＡＰ振幅に対するある傾向を伴って関連していた。シャム対照の投与を受けた対象の中で、試験６４日目の対数変換したｐＮＦ－Ｈレベルと試験１８３日目の尺骨ＣＭＡＰ振幅との関連は統計的に有意であり（ｐ＝０．０２８１）、より高いｐＮＦ－Ｈレベルがより低い尺骨ＣＭＡＰ振幅と関連していた。図３５を参照。

【0223】

この結果は、現在のｐＮＦ－Ｈレベルが、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児における将来の全般的な運動ニューロン健康状態を予測し得ることを示唆するものである。

【0224】

実施例３４：ｐＮＦ－Ｈレベル中央値によって二分したＥＮＤＥＡＲベースライン特性
以下は、ＥＮＤＥＡＲ試験からのｐＮＦ－Ｈレベル中央値によって二分した（＜１５，４００及び≧１５，４００ｐｇ／ｍＬ）ベースライン特性を示す表である。

【表2-1】

【表2-2】

ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ＝フィラデルフィア小児病院乳児神経筋障害検査（Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｉｎｆａｎｔ Ｔｅｓｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）；
ＣＭＡＰ＝複合筋活動電位；
ＨＩＮＥ－２＝ハマースミス乳児神経学的検査セクション２（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｉｎｆａｎｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ ２）。
^ａベースラインｐＮＦ－Ｈの中央値。
^ｂ連続変数の結果はスチューデントの２標本ｔ検定からのものであり、割合の結果はフィッシャーの正確確率検定からのものである。
^ｃ表の参加者数は、いずれかのカテゴリーでもベースラインｐＮＦ－Ｈが欠損していない参加者を示す。

【0225】

実施例３５：ＥＮＤＥＡＲにおけるベースライン特性とｌｏｇ（ｐＮＦ－Ｈ）レベルとの相関
以下の表は、ＥＮＤＥＡＲ試験におけるベースライン特性とｌｏｇ（ｐＮＦ－Ｈ）レベルとの相関を示している。

【表3】

【0226】

実施例３６：ｐＮＦ－Ｈレベル中央値によって二分したＣＨＥＲＩＳＨベースライン特性
以下は、ＣＨＥＲＩＳＨ試験からのｐＮＦ－Ｈレベル中央値によって二分した（＜１，２００及び≧１，２００ｐｇ／ｍＬ）ベースライン特性を示す表である。

【表4】

ＨＦＭＳＥ＝拡大ハマースミス運動機能評価スケール（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍｏｔｏｒ Ｓｃａｌｅ － Ｅｘｐａｎｄｅｄ）。
^ａベースラインｐＮＦ－Ｈの中央値。
^ｂ連続変数の結果はスチューデントの２標本ｔ検定からのものであり、割合の結果はフィッシャーの正確確率検定からのものである。
^ｃ表の参加者数は、いずれかのカテゴリーでもベースラインｐＮＦ－Ｈが欠損していない参加者を示す。

【0227】

実施例３７：ＣＨＥＲＩＳＨにおけるベースライン特性とｌｏｇ（ｐＮＦ－Ｈ）レベルとの相関
以下の表は、ＣＨＥＲＩＳＨ試験におけるベースライン特性とｌｏｇ（ｐＮＦ－Ｈ）レベルとの相関を示している。

【表5-1】

【表5-2】

ＨＦＭＳＥ＝拡大ハマースミス運動機能評価スケール（Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍｏｔｏｒ Ｓｃａｌｅ － Ｅｘｐａｎｄｅｄ）。
ＷＨＯ＝世界保健機関

【0228】

実施例３８：治療後のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを測定することによる将来の運動機能の予測
受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線を使用して、治療した個体における将来の運動機能を最も良好に予測するニューロフィラメントレベルの変化パーセントを測定するための期間の選択を試みた。ＥＮＤＥＡＲでは、２９日目、６４日目、及び１８３日目の各々でｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントを測定し、治療した対象の３０２日目の運動機能と比較した。ＲＯＣ曲線により、６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントが２９日目または１８３日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントよりも良好に３０２日目の運動機能を予測することが明らかになった。図３６Ａ～３６Ｃを参照。ＥＮＤＥＡＲでは、初回用量時の年齢を制御した後であっても、６４日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントは、３０２日目のＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ（≧４ポイントの改善）及び運動マイルストーン（改善を伴うＨＩＮＥ－２運動マイルストーンの方が悪化よりも多い）のレスポンダーを予測した。図３７Ａ～Ｂを参照。ＣＨＥＲＩＳＨでは、疾患期間を制御した後であっても、８５日目のｐＮＦ－Ｈレベルの変化パーセントは、４５６日目のＨＦＭＳＥ（拡大ハマースミス運動機能評価スケール；≧３ポイントの改善）、ＲＵＬＭ（上肢モジュール改訂版；≧２ポイントの改善）、及びＷＨＯ（世界保健機関；≧１つの運動マイルストーンの達成）のレスポンダーを予測した。図３８Ａ～３８Ｃを参照。

【0229】

実施例３９：ベースライン時及びヌシネルセンを用いた治療後の脳脊髄液ｐＮＦ－Ｈレベル
症状発現前、乳児発症型、及び遅発型の患者、ならびに２または３コピーのＳＭＮ２を有する患者において、ベースライン脳脊髄液（ＣＳＦ）ｐＮＦ－Ｈレベルを測定した。ＣＳＦ中のベースラインｐＮＦ－Ｈレベルは、症状発現前の乳児と、２コピーのＳＭＮ２を有する最も低年齢の乳児とにおいて最も高かった。図３９Ａ～３９Ｂを参照。ＮＵＲＴＵＲＥ試験では、ヌシネルセンを用いた治療は、ＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈレベルの迅速な低下及びその後の安定化と関連していた。図４０を参照。

【0230】

実施例４０：複数の脊髄性筋萎縮症集団間での異なるマトリックスにおけるリン酸化ニューロフィラメント重鎖（ｐＮＦ－Ｈ）及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦ－Ｌ）の比較
症状発現前ＳＭＡ（Ｉ／ＩＩ型に罹患する可能性が最も高い）、乳児発症型ＳＭＡ（Ｉ／ＩＩ型を有する、もしくはそれに罹患する可能性が最も高い）、または遅発型ＳＭＡ（ＩＩ／ＩＩＩ型を有する、もしくはそれに罹患する可能性が最も高い）を有するヌシネルセン臨床試験からの個体において、血漿及び脳脊髄液（ＣＳＦ）中のｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの濃度を比較した。ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ（商標）ＳｉｍｐｌｅＰｌｅｘ ＥＬＬＡ免疫測定法を用いて血漿及びＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈ濃度を評価した。ＮＦ－Ｌ濃度は、ＳＩＭＯＡアッセイ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標））を用いて評価した。以下に報告する結果は、ｐｇ／ｍＬの単位である。

【0231】

各ＳＭＡ集団について、ＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの濃度は同様であったが、血漿中のＮＦ－Ｌ濃度はｐＮＦ－Ｈの濃度よりも低かった。血漿中のＮＦ－Ｌ濃度とｐＮＦ－Ｈ濃度との間の差は、乳児発症型ＳＭＡを有する乳児よりも症状発現前の乳児の方が著明であった。ＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの濃度は、ヌシネルセン治療により、症状発現前ＳＭＡコホート（１８３日目の減少パーセンテージ：図４１Ａ）及び乳児発症型ＳＭＡコホート（３０２日目の減少パーセンテージ：図４１Ｂ）において、同様の速度で経時的に低下した。同等の結果は、乳児発症型ＳＭＡコホート（６４日目の減少パーセンテージ：図４１Ｃ）及び遅発型ＳＭＡコホート（１６９日目における減少パーセンテージ：図４１Ｄ）における血漿中のｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの濃度でも示された。図４１Ｃに示されているデータの絶対値は図４１Ｅに提示されており、図４１Ｄに示されているデータの絶対値は図４１Ｆに提示されている。加えて、血漿及びＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈ濃度の変化速度は、症状発現前及び乳児発症型の両方のＳＭＡコホートで類似していた。ＮＦ－Ｌの場合、血漿及びＣＳＦ中の濃度は、乳児発症型コホートでは同様の軌跡をたどって低下した。

【0232】

全体的には、ベースラインのｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの幾何平均（９５％ ＣＩ）濃度は、２コピーのＳＭＮ２を有する症状発現前乳児の中ではそれぞれ２０１３９（１００７５～４０２５７）及び７２７２（３２８７～１６０９０）ｐｇ／ｍＬであり、３コピーのＳＭＮ２を有する者の中ではそれぞれ９５２（３６７～２４７０）及び５１９（２３１～１１６４）ｐｇ／ｍＬであった。乳児発症型ＳＭＡの参加者においては、ベースラインのｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの幾何平均（９５％ ＣＩ）濃度は、それぞれ３７９１（２９８０～４８２３）及び３７１８（２８３２～４８８２）ｐｇ／ｍＬであった。遅発型ＳＭＡの参加者においては、ベースラインのｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌの幾何平均（９５％ ＣＩ）濃度は、それぞれ３８１（３３１～４３８）及び１８５（１５４～２２２）ｐｇ／ｍＬであった。

【0233】

したがって、血漿中ｐＮＦ－Ｈレベルと同様に、ＣＳＦ中のｐＮＦ－Ｈ及びＮＦ－Ｌのレベルは、２コピーのＳＭＮ２を有する症状発現前のＳＭＡ参加者で最も高く、遅発型ＳＭＡを有する参加者で最も低いように思われる。

【0234】

その他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて説明してきたが、以上の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図しており、限定することは意図していない。その他の態様、利点、及び変更は以下の特許請求の範囲内にある。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36A】

【図36B】

【図36C】

【図37】

【図38A】

【図38B】

【図38C】

【図39A】

【図39B】

【図40】

【図41A】

【図41B】

【図41C】

【図41D】

【図41E】

【図41F】

【配列表】

0007506606000001.app