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特許7508447血糖制御を改善し、炎症性腸疾患を処置するための構造修飾脂肪酸
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-21
(45)【発行日】2024-07-01
(54)【発明の名称】血糖制御を改善し、炎症性腸疾患を処置するための構造修飾脂肪酸
(51)【国際特許分類】
A61K 31/202 20060101AFI20240624BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240624BHJP
A61P 5/50 20060101ALI20240624BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240624BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240624BHJP
A61K 31/232 20060101ALI20240624BHJP
【ＦＩ】
A61K31/202
A61P3/10
A61P5/50
A61P43/00 121
A61P43/00 111
A61K45/00
A61K31/232
【請求項の数】
24
(21)【出願番号】P 2021515298
(86)(22)【出願日】2019-05-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-10-07
(86)【国際出願番号】 IB2019000655
(87)【国際公開番号】W WO2019224602
(87)【国際公開日】2019-11-28
【審査請求日】2022-05-20
(31)【優先権主張番号】20180714
(32)【優先日】2018-05-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】NO
(73)【特許権者】
【識別番号】520456789
【氏名又は名称】ノースシー セラピューティクス ベスローテン フェンノートシャップ
(73)【特許権者】
【識別番号】504453362
【氏名又は名称】ビーエーエスエフ アーエス
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(74)【代理人】
【識別番号】100144794
【弁理士】
【氏名又は名称】大木 信人
(72)【発明者】
【氏名】フレイザー，ディヴィッド アラン
(72)【発明者】
【氏名】スクジェレット，トーレ
(72)【発明者】
【氏名】シュパン，デトレフ
【審査官】伊藤 幸司
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１２－５２６０９４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５２８３５０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５２５４７１（ＪＰ，Ａ）
【文献】Journal of Controlled Release，2008年，132，pp.99-104
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象における食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリンレベルの増加に使用するための、式（Ｉ）【化1】
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１８～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、および直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸（Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、カルボン酸エステル、またはカルボキサミドであり；
・Ｙは、酸素、または硫黄である）
の化合物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物を含む医薬組成物であって、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与されてもよい、医薬組成物。
【請求項2】
Ｒ１の１個の二重結合がオメガ３位にある、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
Ｒ２およびＲ３が、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ならびにペンチル基の群から独立して選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
Ｙが酸素である、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
Ｙが硫黄である、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記化合物が式（ＩＩ）【化2】
の化合物である、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
式（Ｉ）の化合物が２－（（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イル）オキシ）ブタン酸【化3】
２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸
【化4】
【請求項8】
使用が、食後高血糖を低減するためのものである、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
対象が２型糖尿病を有する、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
食後血漿グルコースレベルが２５％低下する、請求項８または９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
食後血漿グルコースレベルが５０％低下する、請求項８または９に記載の医薬組成物。
【請求項12】
食後血漿グルコースレベルが食後１５分および／または３０分で低下する、請求項８から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
使用が、食後血漿インスリン濃度を増加させるためのものである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記化合物が追加の活性剤と共投与され、追加の活性剤がＤＰＰ－４阻害剤である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリン濃度の増加に使用するための、式（Ｉ）【化5】
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１８～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、および直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸（Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、カルボン酸エステル、またはカルボキサミドであり；
・Ｙは、酸素、または硫黄である）の化合物を含む医薬組成物であって、
追加の活性剤と共投与される、医薬組成物。
【請求項16】
Ｙが酸素である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項17】
Ｙが硫黄である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項18】
式（Ｉ）の化合物が２－（（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イル）オキシ）ブタン酸【化6】
２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸
【化7】
【請求項19】
追加の活性剤がＤＰＰ－４阻害剤である、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項20】
使用が食後グルコースレベルを低下させるためのものである、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項21】
それを必要とする対象において食後高血糖を低減し、かつ／または食後血漿インスリン濃度を増加させるための医薬の製造における、式（Ｉ）【化8】
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１８～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、および直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸（Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、カルボン酸エステル、またはカルボキサミドであり；
・Ｙは、酸素、または硫黄である）
の化合物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物の使用。
【請求項22】
Ｙが酸素である、請求項２１に記載の使用。
【請求項23】
Ｙが硫黄である、請求項２１に記載の使用。
【請求項24】
式（Ｉ）の化合物が２－（（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イル）オキシ）ブタン酸【化9】
２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸
【化10】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１８年５月２３日出願のノルウェー特許出願第２０１８０７１４号の優先権の利益を主張している。前述の出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、腸管内分泌グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）産生の刺激剤として使用するための化合物を提供し、化合物は、単独でまたは１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用するための、α置換基を有する構造修飾不飽和脂肪酸である。本開示は、基礎および／または食後高血糖の低減および食後血漿インスリンレベルの増加を含む、血糖制御を改善するための化合物を提供する。本開示はまた、クローン病、潰瘍性大腸炎、および非定型的大腸炎などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の処置に使用するための化合物を提供する。
【背景技術】
【0003】
Ｇタンパク質共役型受容体ＧＰＲ４０（遊離脂肪酸受容体［ＦＦＡＲ］－１としても知られる）は、膵臓のβ細胞で高度に発現し、グルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）を改善することによってリガンド結合に応答する。ＧＰＲ４０は、関連する受容体ＧＰＲ１２０／ＦＦＡＲ４とともに、腸内分泌細胞（内分泌機能を有する消化管および膵臓の特殊な細胞）にも発現し、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）などのインクレチンの分泌を増加させることによってリガンド結合に応答する。それによりＧＬＰ－１はＧＳＩＳを刺激し、肝臓のグルコース放出を減少させる。インスリン分泌のグルコース依存性により、ＧＬＰ－１と受容体ＧＰＲ４０およびＧＰＲ１２０の両方が、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の処置に使用するための優れた安全性プロファイル（低血糖の回避）を備えた治療法を開発するための魅力的なターゲットになる。
【0004】
食後インスリン分泌のメディエーターとしての腸管内分泌ＧＬＰ－１の発見に先行して、静脈内グルコース送達が経口グルコース負荷と同じインスリン応答を刺激しないということが観察された。減量手術直後の耐糖能の改善（減量前）も、遠位腸の細胞が、食後耐糖能の調節に積極的に関与していることを示唆した。
【0005】
耐糖能を調節する極めて重要な腸由来のインクレチンとしてのＧＬＰ－１の同定により、Ｔ２ＤＭのための非経口、最近では経口ＧＬＰ－１療法の急速な発展がもたらされた。しかし、ＧＬＰ－１は腸から放出されてから数分以内に分解されるため、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ－４）阻害剤などの、内因性ＧＬＰ－１分解を阻害する経口化合物、および安定な、依然として大部分が非経口投与される、ＤＰＰ－４分解に抵抗するＧＬＰ－１アナログ（短時間作用型および長時間作用型）は、Ｔ２ＤＭを有する患者にとって効果的な治療戦略になっている。最近では、膵臓のβ細胞ＧＳＩＳを直接刺激するように設計されたＧＰＲ４０アゴニストも臨床開発中である。
【0006】
内因性ＧＬＰ－１濃度を増加させるための代替的戦略は、ＧＰＲ４０および／またはＧＰＲ１２０を介して、天然リガンド、すなわち遊離脂肪酸を用いて、小腸および大腸の腸管内分泌細胞を標的にすることである。しかし、森下ら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ．、２００８年、１３２（２）：９９～１０４頁によって示されているように、インビトロで、腸内分泌細胞からのＧＬＰ－１産生を調節しているＧＰＲ４０とＧＰＲ１２０の両方のリガンドとして長鎖オメガ３（ｎ－３）脂肪酸が同定されているにもかかわらず、長鎖ｎ－３脂肪酸の経口摂取は、臨床的に意義のあるＧＬＰ－１濃度の誘導、および／またはヒトの血糖制御の改善に最小限の効果しかない。理論に拘束されるものではないが、これにはいくつかの理由が考えられる。
【0007】
第１に、前述のように、ＧＬＰ－１は複数の組織においてＤＰＰ－４によって急速に不活性化され、その結果、半減期はヒトでは２分未満、げっ歯類ではそれより短くなる。このことが、ＧＬＰ－１半減期を増加させるためのＤＤＰ－４阻害薬の開発を刺激した。
【0008】
第２に、経口脂肪酸は主に上部小腸で吸収されるため、遠位小腸および大腸において高濃度のＦＦＡＲを標的にすることができない。森下ら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ．、２００８年、１３２（２）：９９～１０４頁によって、エイコサペンタエン酸を介した腸のＧＬＰ－１産生の刺激は部位特異的であり、結腸投与に依存し、胃または空腸への送達では効果が観察されないことがさらに報告されている。
【0009】
第３に、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｐ．、２０１５年３（９）によって報告された研究は、ＦＦＡＲ、ＧＰＲ４０が主に、腸内膜の内腔側ではなく、血管側で活性化されることを示している。したがって、ＧＰＲ４０を最適に活性化するには、長鎖脂肪酸を吸収する必要がある。しかし、経口送達された脂肪酸は、吸収後の腸の血管側に遊離酸形態で最小限存在するが、代わりに、ＦＦＡＲに結合して活性化する能力が最小限のトリグリセリドとしてカイロミクロンに組み込まれる。
【0010】
最後に、Ｔｕｎａｒｕら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１８年、９（１）：１７７によって、ＧＰＲ４０結合脂肪酸のヒドロキシル化代謝物は、オートクリンＧＰＲ４０リガンドとしての親化合物よりもはるかに強力であることが示されている。したがって、我々は、遊離脂肪酸形態の利用性を最大化し、腸細胞における複雑な脂質および分泌前リポタンパク質への組み込みを最小化し、それらの代謝を防止する構造修飾によって、酵素修飾の基質利用性およびより強力なＦＦＡＲリガンドの生成が増大する可能性があると仮定した。
【0011】
食後インスリン分泌に対するその効果に加えて、研究は、ＧＬＰ－１が抗炎症効果も発揮することを示唆する。したがって、腸内でＧＬＰ－１を誘導することを目的とした処置は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に何らかの治療上の利益をもたらす場合がある。
【0012】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は慢性の腸の炎症状態であり、粘膜免疫系の不適切かつ持続的な活性化に起因する制御不能な炎症を特徴とする。Ｕｎｉｋｅｎ Ｖｅｎｅｍａら、Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． ２０１７年、２４１（２）：１４６～１５８頁；Ｈｕａｎｇら、Ａｍ． Ｊ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｒｅｓ．， ２０１６年、８（６）：２４９０～２４９７頁。活性ＩＢＤの特質は、炎症性細胞の動員、腸粘膜および粘膜固有層内でのそれらの浸潤および活性化、ならびに炎症誘発性メディエーターの産生の増強である。Ｆａｋｈｏｕｒｙら、Ｊ． Ｉｎｆｌａｍｍ． Ｒｅｓ．， ２０１４， ７：１１３－１２０； Ｘａｖｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ， ２００７， ４４８（７１５２）：４２７－４３４。ＩＢＤは、Ｔｈ２ Ｔ細胞応答が顕著である潰瘍性大腸炎と、Ｔｈ１ Ｔ細胞応答が顕著であるクローン病に、大まかに分類することができる。潰瘍性大腸炎は腸に限定されているが、クローン病は結腸と小腸の両方に影響を与える可能性がある。３番目のカテゴリーは、潰瘍性大腸炎とクローン病の両方の特徴を有し、ＩＢＤ患者の１０～１５％に発症する非定型的大腸炎である。
【0013】
現在、ＩＢＤの治癒はなく、処置モダリティは、症状を緩和し、将来の合併症を予防し、患者の生活の質を改善するために、炎症プロセスの低減に焦点を合わせている。ＩＢＤの医薬的処置には、生物学的製剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗生物質、および対症療法薬を含む５つの主要なカテゴリーの抗炎症薬が含まれる。しかし、これらの処置は多くの場合、重大な副作用を伴い、一部の患者に成功が限られており、副作用が最小限であるかまたはまったくない新規の治療剤の必要性が浮き彫りになっている。Ａｎａｎｔｈａｋｒｉｓｈｎａら、Ｉｎｆｌａｍｍ． Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．、２０１７年、２３（６）：８８２～８９３頁。
【0014】
副作用が最小限であるＩＢＤのためのそのような治療剤を開発するための以前の努力は、天然に存在するオメガ３脂肪酸の経口投与の使用を含む。しかし、ＩＢＤを処置するためのこれらの努力は不成功であるか、よく言っても決定的なものではない。Ｌｅｖ－Ｔｚｉｏｎら、Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ． Ｒｅｖ．、２０１４年、２８（２）：ＣＤ００６３２０；Ｃａｂｒｅら、Ｂｒ． Ｊ． Ｎｕｔｒｉ．、２０１２年、Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２４０～２５２。この失敗は、少なくとも部分的には、上記のように、経口投与されたオメガ３脂肪酸が主に上部小腸で吸収され、したがって下部腸および結腸の脂肪酸受容体に富むセグメントを標的にすることができない場合があるためである。ＥＰＡおよびＤＨＡの直接結腸送達は、げっ歯類においてＧＬＰ－１分泌を誘導することができるが、このアプローチは、経口投与と比較して患者にとって不便である。重要なことに、オメガ３脂肪酸は、脂肪酸受容体を活性化する代わりに、主に細胞膜に組み込まれるか、または代謝されるため、望ましい効果に必要なオメガ３脂肪酸の用量は、過剰になる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0015】
【文献】森下ら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ．、２００８年、１３２（２）：９９～１０４頁
【文献】Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｐ．、２０１５年３（９）
【文献】Ｔｕｎａｒｕら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１８年、９（１）：１７７
【文献】Ｕｎｉｋｅｎ Ｖｅｎｅｍａら、Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． ２０１７年、２４１（２）：１４６～１５８頁
【文献】Ｈｕａｎｇら、Ａｍ． Ｊ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｒｅｓ．， ２０１６年、８（６）：２４９０～２４９７頁
【文献】Ｆａｋｈｏｕｒｙら、Ｊ． Ｉｎｆｌａｍｍ． Ｒｅｓ．， ２０１４， ７：１１３－１２０
【文献】Ｘａｖｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ， ２００７， ４４８（７１５２）：４２７－４３４
【文献】Ａｎａｎｔｈａｋｒｉｓｈｎａら、Ｉｎｆｌａｍｍ． Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．、２０１７年、２３（６）：８８２～８９３頁
【文献】Ｌｅｖ－Ｔｚｉｏｎら、Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ． Ｒｅｖ．、２０１４年、２８（２）：ＣＤ００６３２０
【文献】Ｃａｂｒｅら、Ｂｒ． Ｊ． Ｎｕｔｒｉ．、２０１２年、Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２４０～２５２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0016】
上記に基づいて、腸内分泌ＧＬＰ－１産生を活性化させるための、および／または血糖制御を改善するための新しい代替方法が必要である。副作用が最小限の、ＩＢＤを処置する経口投与治療法もまた、必要とされている。我々は、脂肪酸に対する特定の構造修飾により、腸のＧＰＲ４０／１２０に結合して刺激する能力および／またはＧＬＰ－１分泌を増加させる能力が改善される可能性があると仮定した。我々は、これらの修飾脂肪酸は、基礎および／もしくは食後グルコースレベルの低下ならびに／または食後インスリン濃度の増加などを通じて血糖制御を改善し、ＩＢＤを処置することができると仮定した。
【0017】
本開示は、腸内分泌ＧＬＰ－１産生の刺激剤として使用するための化合物を提供し、化合物は、単独で、または１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用するための、α位に置換基を有する不飽和脂肪酸である。理論に拘束されるものではないが、修飾脂肪酸は、回腸および大腸に位置する受容体に到達して活性化する能力、および／またはＤＰＰ－４活性を阻害する能力が改善された、ＧＰＲ４０／１２０のリガンドであってもよい。
【0018】
より具体的には、本発明は、腸内分泌ＧＬＰ－１産生の増強剤として使用するための化合物であって、ＧＳＩＳを改善し、満腹感を促進し、胃内容排出を遅らせ、グルコース依存性グルカゴン分泌を阻害し、肝臓グルコース産生を低減させる、化合物を提供する。本開示はまた、基礎および／または食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリンレベルの増加を含む、血糖制御の改善に使用するための化合物を提供する。
【0019】
本開示は、クローン病、潰瘍性大腸炎、および非定型的大腸炎などのＩＢＤの処置に使用するための化合物をさらに提供する。本開示は、ＩＢＤにおける腸の炎症を低減し、ＩＢＤの寛解を誘導し、ＩＢＤの寛解を維持し、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少を低減し、結腸長の減少を低減し、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症を低減し、かつ／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷を低減するための化合物を提供する。
【0020】
一態様では、本発明は、それを必要とする対象においてＧＬＰ－１のレベルを増加させるための方法であって、対象に薬学的に有効な量の式（Ｉ）化合物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において基礎および／または食後高血糖を低減し、かつ／または食後血漿インスリン濃度を増加させるための方法であって、対象に薬学的に有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とする対象においてＩＢＤを処置するための方法であって、対象に薬学的に有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0021】
式（Ｉ）：
【0022】
【化1】
（式中、
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１０～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基、およびアルキルアミノ基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンのようなシクロアルカンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸またはその誘導体であり、誘導体は、カルボキシレート、例として、カルボン酸エステル；グリセリド；無水物；カルボキサミド；リン脂質；もしくはヒドロキシメチル；またはそのプロドラッグであり；
・Ｙは、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホン、またはＣＨ２である）の化合物、
または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物、
および、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤。
【0023】
同等の態様では、本発明は、対象におけるＧＬＰ－１産生の増加に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0024】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象における基礎または食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリン濃度の増加を含む、血糖制御の改善に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0025】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象におけるＩＢＤの処置、ＩＢＤにおける腸の炎症の低減、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少の低減、結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷の低減に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0026】
より具体的には、使用するための、および、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤とともに投与するための化合物は、式（ＩＩ）
【0027】
【化2】
（式中、Ｒ２、Ｒ３、ＹおよびＸは、式Ｉと同様に定義される）
によって提供される。
【0028】
本発明は、
ｉ）式（Ｉ）の化合物である第１の成分と、
ｉｉ）追加の活性剤である第２の成分と、
を含む組み合わせ製品をさらに提供する。
ｉ）式（Ｉ）の化合物である第１の成分と、
ｉｉ）追加の活性剤である第２の成分と、
を含む組み合わせ製品をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【図1】痩せたＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＰＤ）ラットにおける曲線下面積（ＡＵＣ）（０～６０分）グルコース刺激活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）ｘ分に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）阻害剤または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の急性摂取の効果を示す。
【図2】痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ａ単独または化合物Ａ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果を示す。
【図3】痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ｂ単独または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果を示す。
【図4】痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での血漿インスリン（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ａ単独または化合物Ａ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果を示す。
【図5】痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での血漿インスリン（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ｂ単独または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果を示す。
【図6A】Ｔ２ＤＭげっ歯類モデルにおける耐糖能（０～１２０分）に対する、ピオグリタゾンと比較した２用量の化合物Ｂによる２８日間の処置の効果を示す。
【図6B】Ｔ２ＤＭげっ歯類モデルにおける耐糖能に対する、ピオグリタゾンと比較した化合物Ａによる２１日間の処置の効果を示す。
【図7】デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性大腸炎マウスモデルにおける、未処置と比較した、２用量での化合物Ｂによる処置の体重に対する効果を示す。
【図8】ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスモデルにおける、未処置（ビヒクルのみ）と比較した、２用量での化合物Ｂ（Ｌ、低用量；Ｈ、高用量）による処置の結腸長に対する効果を示す。
【図9】ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスモデルにおける、未処置と比較した、２つの異なる用量で化合物Ｂによる処置を受けたマウスの生存率を示す。
【図10】ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスモデルにおける、未処置と比較した、２つの異なる用量で化合物Ｂによる処置を受けたマウスの腸断面の組織学的スコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【0030】
開示された組成物および方法は、本開示の一部を形成する添付の図に関連して取られた以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解され得る。本明細書で引用される全ての参考文献は、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。参照と明細書が矛盾する場合は、本明細書が優先する。
【0031】
本明細書に開示されるのは、腸内分泌ＧＬＰ－１産生を刺激し得る化合物である。また、本明細書に開示されるのは、基礎および／もしくは食後高血糖を低減し、かつ／または食後血漿インスリン濃度を増加させる化合物である。本明細書でさらに開示されるのは、腸の炎症などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の症状を処置および／もしくは緩和し、ＩＢＤの寛解を誘導し、ＩＢＤの寛解を維持し、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少を低減し、ＩＢＤを有する対象における結腸長の減少を低減し、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症を低減し、かつ／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷を低減するための化合物である。これらの化合物は、α位に置換基を含み、好ましくはβ位に組み込まれたヘテロ原子を含むように構造的に修飾された不飽和脂肪酸である。これらの化合物は、単独で、または１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用してもよい。
【0032】
本開示の特定の態様を、以下にて更に詳細に記載する。本出願で使用され、本明細書で明確にされる用語および定義は、本開示内での意味を表すことを意図している。
【0033】
単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。
【0034】
「およそ」および「約」という用語は、参照される数値または値とほぼ同じであることを意味する。本明細書で使用するとき、「およそ」および「約」という用語は、一般に、記載された量、頻度、または値の±５％を包含すると理解されるべきである。
【0035】
「処置する」、「処置すること」、「処置」という用語は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物に有益となり得る任意の治療的または予防的用途を含む。ヒト処置と獣医学的処置の両方は、本開示の範囲内にある。処置は、既存の状態に応答するものであっても、予防的、すなわち予防するものであってもよい。
【0036】
本明細書で使用される「投与する」、「投与」、および「投与すること」という用語は、（１）医師もしくはその委任代理人か、により、またはその指示の下で、本開示による化合物または組成物を、提供すること、付与すること、投薬することおよび／または処方すること、ならびに、（２）ヒト患者もしくはヒト自身、または非ヒト哺乳動物により、本開示による化合物または組成物を投入すること、取り込むこと、または消費すること、を指す。
【0037】
「共投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎまたはｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語は、（ａ）式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物、および（ｂ）追加の治療剤を、調整された様式で、一緒に投与すること、を指す。例えば、共投与は、同時投与、逐次投与、重複投与、間隔投与、連続投与、またはそれらの組み合わせであり得る。投与方法は、化合物および追加の薬剤によって異なる場合があり、共投与としては、任意の投与の様式、例として経口、皮下、舌下、経粘膜、非経口、静脈内、動脈内、腹腔内、頬側、舌下、局所、膣、直腸、眼科、耳、経鼻、吸入、および経皮、またはそれらの組み合わせ投与の様式が挙げられる。非経口投与の例としては、静脈内（ＩＶ）投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、骨内投与、髄腔内投与、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および追加の治療剤は、独立して、例えば経口または非経口投与することができる。一実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を経口投与し、追加の治療剤を非経口投与する。非経口投与は、注射または注入を介して実施してもよい。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物と、ＤＰＰ－４阻害剤などの追加の薬剤の両方を、経口投与する。
【0038】
「予防および／または処置」ならびに「治療的および／または予防的処置」という用語は、互換的に使用してもよい。さらに、「処置」または「処置すること」という用語はまた、予防的処置を包含してもよい。典型的には、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物は、例えば、ＩＢＤ；基礎および／または食後高血糖を処置するために、すなわち治療的処置に使用される。しかし、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物はまた、例えばＩＢＤの寛解の維持を含む、ＩＢＤの予防的処置のために使用してもよい。場合によっては、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物を、腸内分泌ＧＬＰ－１分泌の増強剤として使用してもよく、これによりＧＳＩＳ、満腹感を促進し、胃内容排出を遅らせ、グルコース依存性グルカゴン分泌を阻害し、ＧＬＰ－１を介した肝臓のグルコース産生を低減させることも予見される。
【0039】
「薬学的に有効な量」という用語は、所望の薬理学的および／または治療効果を達成するのに十分な量、すなわち、意図された目的に有効な開示された化合物および薬剤の量を意味する。個々の対象／患者のニーズは異なる場合があるが、開示された化合物の有効量の最適範囲の決定は、当業者の範囲内である。一般に、本明細書にて開示する化合物により疾患および／または状態を処置するための投薬レジメンは、対象／患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事、および／または病状などの様々な要因に従って決定され得る。「医薬組成物」という用語は、本開示による、医療用途に好適な任意の形態の化合物を意味する。
【0040】
開示の化合物
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物は、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物を含む、種々の立体異性体の形態で存在し得る。本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物のすべての光学異性体ならびにそれらの混合物を包含すると理解されるであろう。したがって、ジアステレオマー、ラセミ体、および／またはエナンチオマーとして存在する式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物は、本開示の範囲内にある。
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物は、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物を含む、種々の立体異性体の形態で存在し得る。本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物のすべての光学異性体ならびにそれらの混合物を包含すると理解されるであろう。したがって、ジアステレオマー、ラセミ体、および／またはエナンチオマーとして存在する式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物は、本開示の範囲内にある。
【0041】
一態様では、本発明は、対象におけるＧＬＰ－１産生の増加に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0042】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象における基礎または食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリン濃度の増加に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0043】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象におけるＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少の低減、結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷の低減に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供し、前記化合物を、任意選択で、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて対象に投与する。
【0044】
式（Ｉ）
【0045】
【化3】
（式中、
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１０～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基、およびアルキルアミノ基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンのようなシクロアルカンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸またはその誘導体であり、誘導体は、カルボキシレート、例として、カルボン酸エステル；グリセリド；無水物；カルボキサミド；リン脂質；もしくはヒドロキシメチル；またはそのプロドラッグであり；
・Ｙは、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホン、またはＣＨ２である）の化合物、
または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物。
【0046】
少なくとも一実施形態では、前記化合物を、１つまたは複数の追加の活性剤と共投与する。対象は、動物、典型的には哺乳動物、および好ましくはヒトである。
【0047】
いくつかの実施形態では、Ｙは酸素である。いくつかの実施形態では、Ｙは硫黄である。
【0048】
さらに、開示される化合物は、基礎および／もしくは食後高血糖の処置などの高血糖の治療的処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、これは、ＧＳＩＳの増加および／または肝臓のグルコース放出の減少によるものであり得る。
【0049】
少なくとも一実施形態では、Ｒ１は、３～６個の二重結合、例として５または６個の二重結合を有し、好ましくは１個の二重結合がオメガ３位にあるＣ１８～Ｃ２２アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、５または６個のメチレン中断二重結合を有し、１番目の二重結合は、オメガ末端から３番目と４番目の炭素の間にある、Ｃ１８～Ｃ２２アルケニルである。
【0050】
α置換基Ｒ２およびＲ３は、より好ましくは、水素原子および直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とする。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３のうちの少なくとも１つは、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基およびイソプロピル基、ブチル基、またはペンチル基である。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３の両方がメチル基、エチル基またはｎ－プロピル基であり、最も好ましくは、Ｒ２およびＲ３の両方がエチル基である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３の一方は水素基であり、他方のＲ２またはＲ３はＣ１～Ｃ３アルキル基である。
【0051】
Ｘは、好ましくは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、そのような塩の溶媒和物、を表す。より好ましくは、Ｘは、遊離酸の形態で修飾脂肪酸を提供するカルボン酸基である。
【0052】
Ｙは、好ましくは酸素、硫黄、スルホキシド、またはスルホンであり、最も好ましくは酸素または硫黄である。
【0053】
式（Ｉ）の化合物について、より好ましくは、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素または硫黄である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素または硫黄である。
【0054】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物について、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である。
【0055】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物について、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素である。
【0056】
少なくとも一実施形態では、Ｒ１は、１番目の二重結合がオメガ３位にあるように５つのメチレン中断二重結合を有するＣ２０アルケニル基（すなわち、Ｃ２０：５ｎ３鎖）であり、より好ましくは使用のための式（Ｉ）の化合物は、ＧＬＰ－１産生の増加、基礎および／または食後高血糖の低減、食後血漿インスリンレベルの低下、対象におけるＩＢＤの処置、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症の低減、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤ症状を経験している対象における体重減少の低減、ＩＢＤを有する対象における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷の低減に使用するための、式（ＩＩ）
【0057】
【化4】
（式中、Ｒ２、Ｒ３、ＹおよびＸは、式（Ｉ）と同様に定義される）、の化合物である。
【0058】
したがって、式（ＩＩ）は、式（Ｉ）の化合物の限定された群を表す。
【0059】
式（ＩＩ）の化合物について、より好ましくは、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素または硫黄である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素または硫黄である。
【0060】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物について、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である。
【0061】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物について、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素である。
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは酸素である。
【0062】
Ｒ２およびＲ３が異なる場合、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、立体異性体の形態で存在することができる。本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物のすべての光学異性体ならびにそれらの混合物を包含すると理解されるであろう。
【0063】
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の両方の化合物について、少なくとも一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、およびペンチル基の群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできない。少なくとも一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素原子、メチル基、およびエチル基の群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素原子、メチル基、およびエチル基の群から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とする。
【0064】
少なくとも一実施形態では、Ｒ２およびＲ３の一方は水素原子であり、Ｒ２およびＲ３の他方はＣ１～Ｃ３アルキル基から選択される。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３の一方は水素原子であり、Ｒ２およびＲ３の他方はメチル基およびエチル基の群から選択され、最も好ましくは、Ｒ２およびＲ３の一方は水素原子であり、他方はエチル基である。
【0065】
別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３の両方がＣ１～Ｃ３アルキル基である。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は同じであるかまたは異なっており、それぞれが、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、またはイソプロピル基から独立して選択される。好ましい実施形態では、Ｒ２およびＲ３の両方が同じであり、一対のメチル基、一対のエチル基、一対のｎ－プロピル基、または一対のイソプロピル基から選択される。少なくとも１つの好ましい実施形態では、Ｒ２およびＲ３はエチル基である。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３の一方はメチル基であり、他方はエチル基である。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３の一方はエチル基であり、他方はｎ－プロピル基である。
【0066】
少なくとも一実施形態では、化合物は、エナンチオマー（ＲもしくはＳ）、ジアステレオマー、またはそれらの混合物などの種々の立体異性体の形態で存在する。少なくとも一実施形態では、化合物は、ラセミ形態で存在する。特に、これらの場合、Ｒ２およびＲ３が異なるとき、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、立体異性体の形態で存在することができる。本発明は、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物のすべての光学異性体ならびにそれらの混合物を包含すると理解されるであろう。
【0067】
式（Ｉ）による化合物が、少なくとも１つの不斉中心を有する対イオンの塩、または少なくとも１つの不斉中心を有するアルコールのエステルである場合、化合物は、複数の不斉中心を有し得る。それらの状況において、本開示の化合物は、ジアステレオマーとして存在し得る。したがって、少なくとも一実施形態では、本開示の化合物は、少なくとも１つのジアステレオマーとして存在する。
【0068】
少なくとも一実施形態では、Ｙが酸素である場合、Ｒ２およびＲ３は好ましくは異なり、より好ましくは、Ｒ２およびＲ３の一方はエチルであり、他方は水素である。他の実施形態では、Ｙが硫黄である場合、Ｒ２およびＲ３は好ましくは同じであり、より好ましくはＲ２およびＲ３の両方がエチルである。
【0069】
少なくとも一実施形態では、本開示の使用のための化合物は、２－（（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イル）オキシ）ブタン酸（化合物Ａ）である。
【0070】
【化5】
【0071】
少なくとも一実施形態では、本開示の使用のための化合物は、式
【0072】
【化6】
によって表されるそのＳおよび／またはＲ形態で存在する化合物Ａである。
【0073】
少なくとも一実施形態では、本開示の使用のための化合物は、２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸（化合物Ｂ）である。
【0074】
【化7】
【0075】
さらなる態様では、本発明は、第１および第２の成分を含む組み合わせ製品を提供し、第１の成分は、式（Ｉ）
【0076】
【化8】
（式中、
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１０～Ｃ２２アルケニルから選択され；
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基、およびアルキルアミノ基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンのようなシクロアルカンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸またはその誘導体であり、誘導体は、カルボキシレート、例として、カルボン酸エステル；グリセリド；無水物；カルボキサミド；リン脂質；もしくはヒドロキシメチル；またはそのプロドラッグであり；
・Ｙは、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホン、およびＣＨ２である）
の化合物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物、であり、
第２の成分は、追加の活性剤である。
【0077】
方法および使用を目的とする第１の態様との関係において説明された実施形態および特徴は、本発明のこの他の態様にも適用される。したがって、組み合わせ製品の第１の成分は、使用するための化合物を目的とする第１の態様で開示された化合物の群から選択される。好ましい態様では、組み合わせ製品は、第１の成分として式（ＩＩ）の化合物を含む。一実施形態では、組み合わせ製品は、第１の成分として化合物Ｂを含む。別の実施形態では、組み合わせ製品は、第１の成分として化合物Ａを含む。
【0078】
組み合わせ製品の第１の成分、すなわち式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、医薬組成物などの薬剤として投与してもよい。現在開示されている組成物は、開示されている少なくとも１つの化合物、および任意選択で少なくとも１つの非活性医薬成分、すなわち賦形剤を含み得る。非活性成分は、活性成分を、可溶化し、懸濁させ、増粘させ、希釈し、乳化し、安定化させ、保存し、保護し、着色し、風味付けし、かつ／または加工して、使用するのに安全な、便利な、かつ／または別様に許容され得る、適切かつ効果的な調製物にすることができる。賦形剤の例としては、溶媒、担体、希釈剤、結合剤、充填剤、甘味料、芳香剤、ｐＨ調整剤、粘度調整剤、抗酸化剤、増量剤、保湿剤、崩壊剤、溶液遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、潤滑剤、着色剤、分散剤、および防腐剤、が挙げられるが、これらに限定されない。賦形剤は、２つ以上の役割もしくは機能を有していてもよく、または２つ以上の群に分類されていてもよく；分類は説明のみであり、限定することを意図したものではない。いくつかの実施形態では、例えば、少なくとも１つの賦形剤は、トウモロコシデンプン、ラクトース、グルコース、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、エタノール、グリセロール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、セチルステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロース、および脂肪性物質、例としてハードファット、またはそれらの好適な混合物、から選択され得る。
【0079】
いくつかの実施形態では、組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物、例として式（ＩＩ）のうちの１つ、および少なくとも１つの薬学的に許容される抗酸化剤、例えば、トコフェロール、例としてアルファ－トコフェロール、ベータ－トコフェロール、ガンマ－トコフェロール、およびデルタ－トコフェロール、またはそれらの混合物、ＢＨＡ、例として２－ｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシアニソールおよび３－ｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシアニソール、またはそれらの混合物、およびＢＨＴ（３，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシトルエン）、またはそれらの混合物、を含む。現在開示されている組成物は、経口投与形態、例えば、錠剤またはゼラチンソフトもしくはハードカプセルで製剤化され得る。剤形は、経口投与に好適な任意の形状、例えば、球形、卵形、楕円形、立方体形状、規則的、および／または不規則形状、であり得る。組成物は、ゼラチンカプセルまたは錠剤の形態であり得る。
【0080】
組み合わせ製品の第２の成分である追加の活性剤は、それが存在する薬剤のタイプに好適なものとして製剤化され、薬剤の投与方法を含むいくつかの要因に依存する。例えば、錠剤として経口摂取することができるいくつかのＤＰＰ－４阻害剤が開発されている。好ましい実施形態では、第１の成分および第２の成分の両方が、経口投与用の形態で提供される。
【0081】
式（Ｉ）の化合物の好適な１日投与量は、約５ｍｇ～約４ｇ、例として、約５ｍｇ～約２ｇの範囲であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、日用量は、約１０ｍｇ～約１．５ｇ、約５０ｍｇ～約１ｇ、約１００ｍｇ～約１ｇ、約１５０ｍｇ～約９００ｍｇ、約５０ｍｇ～約８００ｍｇ、約１００ｍｇ～約８００ｍｇ、約１００ｍｇ～約６００ｍｇ、約１５０～約５５０ｍｇ、または約２００～約５００ｍｇ、の範囲である。いくつかの実施形態では、日用量は、約２００ｍｇ～約４００ｍｇ、約２５０ｍｇ～約３５０ｍｇ、約３００～約５００ｍｇ、約４００ｍｇ～約６００ｍｇ、約５５０ｍｇ～約６５０ｍｇ、または約６００ｍｇ～約８００ｍｇの範囲である。
【0082】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の日用量は、約９００ｍｇ～約１．６ｇの範囲である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の日用量は、約１ｇ～約１．５ｇの範囲である。
【0083】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６００ｍｇの１日投与量で投与される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、３００ｍｇの１日投与量で投与される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、２５０ｍｇの１日投与量で投与される。好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、１日あたり３００ｍｇ、６００ｍｇ、１ｇ、または１．５ｇの１日投与量で投与される。
【0084】
少なくとも一実施形態では、日用量は、約２００ｍｇ～約６００ｍｇの範囲である。少なくとも一実施形態では、日用量は、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、または約９００ｍｇである。いくつかの実施形態では、１日投与量は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、または９００ｍｇである。化合物は、例えば、１日１回、２回、または３回投与することができる。少なくとも一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、用量あたり約２００ｍｇ～約８００ｍｇの範囲の量で投与される。少なくとも一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、１日１回投与される。追加の活性剤の用量は、選択された薬剤のタイプに依存し、特定の薬剤の承認された量に従う必要がある。好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、３００ｍｇまたは６００ｍｇの投与量で、１日１回投与される。
【0085】
少なくとも一実施形態では、日用量は、約９００ｍｇ～１．６ｇの範囲である。少なくとも一実施形態では、日用量は、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５５０ｍｇ、または約１６００ｍｇである。
【0086】
少なくとも一実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、用量あたり約２００ｍｇ～約８００ｍｇの範囲の量で、または約９００ｍｇ～約１．６ｇの範囲の量で投与される。少なくとも一実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、１．５ｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、１．２５ｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、１ｇの用量で１日１回投与される。少なくとも一実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、７５０ｍｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、６００ｍｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、５００ｍｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、３００ｍｇの用量で１日１回投与される。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、２５０ｍｇの用量で１日１回投与される。好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は、３００ｍｇ、６００ｍｇ、１ｇ、または１．５ｇの用量で１日１回投与される。
【0087】
好ましくは、化合物Ａは、３００ｍｇまたは６００ｍｇの用量で１日１回投与される。好ましくは、化合物Ｂは、１ｇ～１．５ｇの範囲の用量で１日１回投与される。
【0088】
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ２００９／０６１２０８、ＷＯ２０１０／００８２９９、ＷＯ２０１０／１２８４０１、ＷＯ２０１１／０８９５２９、ＷＯ２０１６／１５６９１２に記載されているように、および以下の実施例に従って調製することができる。加えて、化合物Ａは、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ２０１４／１３２１３５に記載されているように調製することができる。化合物Ｂは、例えば、ＷＯ２０１０／００８２９９に記載されているように調製することができる。
【0089】
ＧＬＰ－１の増加
開示された構造修飾脂肪酸は、非修飾長鎖脂肪酸と比較して、ＧＬＰ－１濃度を増加させる改善された能力を有することが、今では判明している。したがって、より具体的には、本開示は、ＧＳＩＳの増強剤として、および肝臓のグルコース放出の阻害剤として使用するための化合物を提供する。
開示された構造修飾脂肪酸は、非修飾長鎖脂肪酸と比較して、ＧＬＰ－１濃度を増加させる改善された能力を有することが、今では判明している。したがって、より具体的には、本開示は、ＧＳＩＳの増強剤として、および肝臓のグルコース放出の阻害剤として使用するための化合物を提供する。
【0090】
本開示の一態様との関係において説明された実施形態および特徴は、本発明の他の態様にも適用されるという点に留意すべきである。特に、本開示に従ってＧＬＰ－１を増加させる方法に適用される実施形態は、すべて本開示による、例として、ＧＬＰ－１の増加に使用するための化合物、または使用するための、別の薬物と共投与される化合物を含む組成物を目的とした態様、にも適用される。
【0091】
式Ｉによる、またはより好ましくは式ＩＩによって記載された特定の構造修飾脂肪酸は、腸内分泌ＧＬＰ－１分泌を刺激する改善された能力を有することが、今では判明している。理論に拘束されるものではないが、構造修飾脂肪酸は、
ａ）全身吸収を低下させ、それによって遠位小腸および大腸内の腸内分泌Ｌ細胞を標的とすること、および／または
ｂ）腸内分泌Ｌ細胞と長時間接触させて、それによって腸からのＧＬＰ－１の徐放を達成すること、および／または
ｃ）カイロミクロンへの組み込みに抵抗し、それによって腸壁の血管側の／腸内膜に埋め込まれた腸内分泌Ｌ細胞へ、より多くの遊離脂肪酸が送達されるのを促進すること、および／または
ｄ）細胞内エステル化により複雑な脂質になることに抵抗し、それによって、オートクリンＧＰＲ４０／ＧＰＲ１２０結合のためのより強力なリガンドを生成するための、ＣＹＰ４５０／リポキシゲナーゼ修飾のための基質利用性を高めること、および／または
ｅ）肝臓／腸管ＤＰＰ－４活性を阻害し、それによってＧＬＰ－１分解を減少させること、
によって、この効果を達成し得る。
ａ）全身吸収を低下させ、それによって遠位小腸および大腸内の腸内分泌Ｌ細胞を標的とすること、および／または
ｂ）腸内分泌Ｌ細胞と長時間接触させて、それによって腸からのＧＬＰ－１の徐放を達成すること、および／または
ｃ）カイロミクロンへの組み込みに抵抗し、それによって腸壁の血管側の／腸内膜に埋め込まれた腸内分泌Ｌ細胞へ、より多くの遊離脂肪酸が送達されるのを促進すること、および／または
ｄ）細胞内エステル化により複雑な脂質になることに抵抗し、それによって、オートクリンＧＰＲ４０／ＧＰＲ１２０結合のためのより強力なリガンドを生成するための、ＣＹＰ４５０／リポキシゲナーゼ修飾のための基質利用性を高めること、および／または
ｅ）肝臓／腸管ＤＰＰ－４活性を阻害し、それによってＧＬＰ－１分解を減少させること、
によって、この効果を達成し得る。
【0092】
血糖制御の改善
使用のための化合物は、ＧＳＩＳを増加させ、満腹感を促進し、胃内容排出を遅らせ、グルコース依存性グルカゴン分泌を阻害し、および／または肝臓グルコース産生を低減させるための手段を、さらに提供する。
使用のための化合物は、ＧＳＩＳを増加させ、満腹感を促進し、胃内容排出を遅らせ、グルコース依存性グルカゴン分泌を阻害し、および／または肝臓グルコース産生を低減させるための手段を、さらに提供する。
【0093】
さらなる実施形態では、化合物は、上昇した血糖値の治療的処置に使用するためのものである。より具体的には、本発明は、基礎および／または食後高血糖の処置に使用するための式（Ｉ）の化合物を提供する。理論に拘束されるものではないが、これはおそらく、食後および基礎ＧＬＰ－１およびＧＳＩＳの増加、ならびに／または肝臓のグルコース放出の減少によるものである。
【0094】
いくつかの実施形態では、化合物は、血糖制御の改善、例として、基礎および／または食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリン濃度の増加に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、基礎血漿インスリン濃度の低下に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、血中ＨｂＡ１ｃの低下および／またはＨＯＭＡ－ＩＲの低下に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、Ｔ２ＤＭを有する対象の血漿ＡＬＴの低下に使用するためのものである。好ましい実施形態では、化合物は、食後高血糖の低減、および／または食後血漿インスリン濃度の増加に使用するためのものである。
【0095】
血糖制御は、血漿グルコースレベルの調節である。血糖制御の改善は、血漿グルコースレベルを低下させることによって、食後血漿インスリンレベルを増加させることによって、および／または細胞インスリン感受性を高めることによって、および／または肝臓のグルコース放出を低減させることによって達成することができる。
【0096】
式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「基礎高血糖の低減」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、基礎高血糖が低減していることを示す。ヒトにおける基礎高血糖は、食後８時間１３０ｍｇ／ｄｌ以上の血漿グルコースレベルとして定義する。式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「食後高血糖の低減」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、食後高血糖が低減していることを示す。ヒトにおける食後高血糖は、食後１～２時間１８０ｍｇ／ｄｌ以上の血漿グルコースレベルとして定義する。どちらの用語でも、高血糖の低減は、血漿グルコースレベルまたは血糖値の低下を表す。
【0097】
式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「食後血漿インスリン濃度の増加」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、対象の血漿インスリン濃度が食後に増加することを示す。式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「基礎血漿インスリン濃度の低下」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、対象の基礎血漿インスリン濃度が低下することを示す。「血漿インスリン濃度」という用語は、「血漿インスリンレベル」という用語と互換性がある。
【0098】
式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「ＨｂＡ１ｃレベルの低下」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、対象のＨｂＡ１ｃのレベルが低下することを示す。式（Ｉ）の化合物を投与されたＴ２ＤＭを有する対象における「血漿ＡＬＴレベルの低下」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＴ２ＤＭを有する対象と比較して、対象の血漿ＡＬＴレベルが低下することを示す。
【0099】
式（Ｉ）の化合物を投与された対象における「ＨＯＭＡ－ＩＲの低下」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていない対象と比較して、対象のＨＯＭＡ－ＩＲ計算が低下することを示す。ＨＯＭＡ－ＩＲはインスリン抵抗性の評価であり、次の式で計算することができる：空腹時インスリン（マイクロＵ／Ｌ）ｘ空腹時グルコース（ｎｍｏｌ／Ｌ）／２２．５。
【0100】
生物学的実施例１において提供されるように、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったラットと比較して、経口グルコース負荷後の最初の６０分間の痩せたＳＰＤラットにおける活性ＧＬＰ－１濃度を増加させた。上記のように、ＧＬＰ－１はグルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）を増加させ、その結果、食後血漿インスリンレベルが増加する。生物学的実施例２～５は、式（Ｉ）の化合物を投与された痩せたＳＰＤラットでは、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったラットと比較して、経口グルコース負荷後の２４時間ＧＬＰ－１のレベルおよび血漿インスリンレベルの両方が増加したことを示す。これらのデータは、式（Ｉ）の化合物を投与されたラットにおける経口グルコース負荷後の最初の６０分間の血漿インスリン濃度が同様に増加することを支持している。
【0101】
生物学的実施例４および５に提供されるように、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったラットと比較して、経口グルコース負荷後２４時間の痩せたＳＰＤラットの血漿インスリンレベルが増加する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかった対象と比較して、血漿インスリンレベルが２５％増加する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物ではなく、ＤＰＰ４阻害剤を投与された対象と比較して、血漿インスリンレベルが２５％増加する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物を、ＤＤＰ４阻害剤と共に投与して、これにより式（Ｉ）の化合物を投与されなかった対象と比較して、血漿インスリンレベルが４０％増加する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、経口グルコース負荷後２４時間血漿インスリンレベルが増加する。
【0102】
生物学的実施例６および１４に提供されるように、式（Ｉ）の化合物により、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおける食後グルコースレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における食後１５分および３０分血漿グルコースレベルが２５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における食後１５分および３０分血漿グルコースレベルが５０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、ピオグリタゾンを投与されているが式（Ｉ）の化合物を投与されていないＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における食後１５分および３０分血漿グルコースレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における食後１５分～９０分血漿グルコースレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における食後６０分血漿グルコースレベルが５０％低下する。
【0103】
生物学的実施例１４に記載されるように、式（Ｉ）の化合物による長期処置によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおける基礎グルコースレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが２５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが３０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが３５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが４０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが４５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿グルコースレベルが５０％低下する。
【0104】
生物学的実施例１４に記載されるように、式（Ｉ）の化合物による長期処置によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおける基礎血漿インスリンレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿インスリンレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿インスリンレベルが５０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿インスリンレベルが６０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における基礎血漿インスリンレベルが７０％低下する。
【0105】
生物学的実施例１４に記載されるように、式（Ｉ）の化合物による長期処置によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおけるＨＢＡ１ｃレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＢＡ１ｃレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＢＡ１ｃレベルが２５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＢＡ１ｃレベルが３０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＢＡ１ｃレベルが４０％低下する。
【0106】
生物学的実施例１４に記載されるように、式（Ｉ）の化合物による長期処置によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が５０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が６０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が７０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象におけるＨＯＭＡ－ＩＲ値が８０％低下する。
【0107】
生物学的実施例１４に記載されるように、式（Ｉ）の化合物による長期処置によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、Ｔ２ＤＭのマウスモデルにおける血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における血漿ＡＬＴレベルが低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における血漿ＡＬＴレベルが２０％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における血漿ＡＬＴレベルが２５％低下する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物によって、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＴ２ＤＭを有する対象と比較して、Ｔ２ＤＭを有する対象における血漿ＡＬＴレベルが３０％低下する。
【0108】
開示された化合物はまた、記載された適応症のための医薬の製造に使用するのに好適である。例えば、本開示は、基礎および／または食後高血糖を低減し、食後血漿インスリンレベルを増加させるための医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【0109】
一実施形態では、本発明の使用のための方法および化合物は、少なくとも２つの異なる活性剤、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物、および追加の活性剤、好ましくはＤＰＰ－４阻害剤それぞれの使用を提供する。少なくとも２つの活性剤は、「組み合わせ製品」と見なすことができ、薬剤は、例えば、別々に梱包されており、最適な意図された効果を達成するために両方の薬剤が必要である。したがって、本発明によれば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、追加の活性剤と共投与される。いくつかの実施形態では、追加の活性剤は、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ－４）阻害剤であり、この薬剤および式（Ｉ）の化合物は、血漿ＧＬＰ－１濃度の増加に対して相乗効果を有する。ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の非限定的な例のリストには、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、ゲミグリプチン、アナグリプチン、テネリグリプチン、アログリプチン、トレラグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、が含まれる。したがって、開示される方法および使用には、これらまたは類似のＤＰＰ－４阻害剤のいずれかの任意の投与が含まれる。
【0110】
急性（０～６０分）および長期（２４時間）のげっ歯類における血漿ＧＬＰ－１およびインスリン濃度に対する影響に加えて、全身吸収と比較した、腸保持に対する長鎖脂肪酸への特定の構造修飾の影響の両方を評価するために、一連の実験を実施した。
【0111】
実施例に提供されるように、研究は、ＤＰＰ－４阻害剤を、α位に置換基を有する不飽和脂肪酸、すなわち、化合物Ｂなどの式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物と組み合わせることが、血漿ＧＬＰ－１濃度を増加させるために、いずれかの処置単独よりも優れているという概念を支持している。食後高血糖および上昇した基礎高血糖の両方を、グルコース刺激インスリン分泌の増強および／または肝臓グルコース放出の減少を介して低減させることができるので、これらの発見は、ＤＰＰ－４阻害剤のみと比較してＤＰＰ－４阻害剤と組み合わせた構造修飾脂肪酸（例えば、化合物ＡまたはＢ）の優位性を実証している。全体として、データは、ＤＰＰ－４阻害剤と、酸素／硫黄を含む構造修飾脂肪酸との組み合わせが、食後および基礎ＧＬＰ－１の増加ならびにインスリン濃度の増加の両方に対して相乗効果を達成する場合があることを示唆している。
【0112】
有効な２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）薬として経口ＤＰＰ－４阻害剤が広く使用されているけれども、血漿ＧＬＰ－１濃度を増加させる能力は、最終的には内因性ＧＬＰ－１産生に依存している。内因性ＧＬＰ－１は、主に食物摂取後に発生し、食後晩期および一晩の絶食中に、食物由来の腸ＧＰＲ４０／１２０リガンドが上部消化管から吸収されるため減少する。ＤＰＰ－４阻害剤は、ＧＬＰ－１の半減期を数分から２～４時間に増加させる。したがって、下部腸内のＧＰＲ４０／１２０に富む腸内分泌細胞を利用する能力により、総ＧＬＰ－１産生が増加させるため、および絶食状態にある腸からのＧＬＰ－１産生が長期にわたるために、非常に望ましい。したがって、急性グルコース負荷（０～６０分ＧＬＰ－１）に応答してだけでなく、２４時間（ＤＰＰ－４阻害剤によりコーン油によるＧＬＰ－１レベルがもはや増加しなくなったとき）でも、化合物Ｂにより達成された活性ＧＬＰ－１の新規かつ顕著な増加は、化合物Ｂが上部腸と下部腸の両方からＧＬＰ－１産生を誘導でき、それによってＧＬＰ－１レベルの上昇が長期にわたることを示唆している。２４時間でのインスリンレベルの上昇と組み合わせて、これは、化合物ＡもしくはＢを単独で、または好ましくはＤＰＰ－４阻害剤とともに、のいずれかで使用される可能性があり、急性ＧＬＰ－１および長期ＧＬＰ－１の両方を増加させ、それによって食後および基礎血漿グルコースの両方を低減させることができることを示唆している。
【0113】
制御不良の糖尿病患者における糖化ヘモグロビンの主な決定要因は基礎グルコースであり、食後グルコースではないため、血漿ＧＬＰ－１に対するこの長期の影響は、長期のグルコース上昇に関連する大血管および微小血管合併症の予防的処置にかなりの利益をもたらす可能性がある。注目すべきことに、急性効果は、ＧＬＰ－１産生を誘導するために必要な経口ボーラスとして典型的に使用されるわずかな用量（７５ｍｇ／ｋｇ）の脂肪で達成された。これらの効果は、天然に存在する長鎖オメガ３脂肪酸が、胃および空腸を介して投与された場合、ＧＬＰ－１に影響を及ぼさなかったことを示している以前の研究（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｍら、Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ、２００８年、１３２（２）：９９～１０４頁）と比較して、特に驚くべきものである。このことは、ＧＬＰ－１に対する化合物Ｂの効果が、下部消化管に到達する能力に関連しているだけではないことを示唆している。全体として、データは、ＤＰＰ－４阻害剤と最適に組み合わせることができる、グルコース刺激インスリン産生および／または基礎インスリン産生の増強剤として使用するための、腸内分泌ＧＬＰ－１産生の活性化因子としての式（Ｉ）または（ＩＩ）による構造修飾脂肪酸の使用であって、満腹感を促進し、胃内容排出を遅らせ、グルコース依存性グルカゴン分泌を阻害し、ＧＬＰ－１を介して肝臓グルコース産生を低減させる、使用を支持している。
【0114】
上記の発見に基づいて、式（Ｉ）の、または好ましくは式（ＩＩ）の化合物は、ＤＰＰ－４阻害剤とともに最適に共投与され得る。腸内分泌ＧＰＲ４０／ＧＰＲ１２０の活性化が望ましい状態を治療的および／または予防的に処置するために、さらなる化合物を投与してもよい。
【0115】
実施例は、α位に置換基を有する構造修飾脂肪酸を、ＤＰＰ－４阻害剤と組み合わせる可能性を強調している。これらの組み合わせは、ＤＰＰ－４阻害剤と化合物ＡおよびＢの両方を経口投与でき、それにより、注射部位反応のリスクを打ち消すため、単剤療法と比較して有効性関連のアウトカムを改善する場合があるだけでなく、注射用ＧＬＰ－１アゴニストと比較して安全性、忍容性、コンプライアンスを改善する場合もある。化合物ＡとＢの両方が、ヒト（化合物Ａ）およびＡＰＯＥ＊３．ＣＥＴＰマウス（化合物ＡおよびＢ）におけるアテローム生成脂質を大幅に減少させることが実証されているため、化合物ＡまたはＢのいずれかとＤＰＰ－４阻害剤の組み合わせにより、血漿ＧＬＰ－１濃度を最適化すること、および関連する脂質異常症を処置することの両方が可能になる。このことは、インスリン抵抗性／Ｔ２ＤＭおよび高脂血症と罹患率および死亡率の増加との既知の関連を考えると、有利であり得る。
【0116】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、追加の活性剤と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では追加の活性剤は、好ましくは、インクレチンを不活性化する酵素の阻害剤であり、したがって、追加の活性剤は、好ましくは、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ－４）阻害剤である。好ましくは、ＤＰＰ－４阻害剤は、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、ゲミグリプチン、アナグリプチン、テネリグリプチン、アログリプチン、トレラグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、の非限定的な例示的なリストから選択される。一実施形態では、第１および第２の成分は、ＧＬＰ－１などの血漿インクレチン濃度の増加に対して相乗効果を有する。
【0117】
炎症性腸疾患の処置
本発明はまた、腸内分泌ＧＰＲ４０／ＧＰＲ１２０の活性化および／またはＧＬＰ－１の刺激が望ましい胃腸障害の処置として使用するための化合物を提供する。このようなＧＬＰ－１関連障害としては、腸における炎症、特に、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病、非定型的大腸炎などの炎症性腸疾患が挙げられる。
本発明はまた、腸内分泌ＧＰＲ４０／ＧＰＲ１２０の活性化および／またはＧＬＰ－１の刺激が望ましい胃腸障害の処置として使用するための化合物を提供する。このようなＧＬＰ－１関連障害としては、腸における炎症、特に、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病、非定型的大腸炎などの炎症性腸疾患が挙げられる。
【0118】
式Ｉによる、またはより好ましくは式ＩＩによって記載された特定の構造修飾脂肪酸は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の症状を処置または緩和し得ることが、今では判明している。一態様では、化合物は、ＩＢＤの治療的処置に使用するためのものである。ＩＢＤは、腸の慢性免疫調節不全障害の群であり、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、および非定型的大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物は、クローン病の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物は、潰瘍性大腸炎の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物は、非定型的大腸炎の処置に使用するためのものである。さらに、これらの化合物は、ＩＢＤの治療的、対症的および／または予防的処置に使用するためのものである。
【0119】
いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤに関連する腸の炎症の低減に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤの寛解の誘導に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤの寛解の維持に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少の予防に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤを有する対象における結腸長の減少の低減に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＩＢＤを有する対象における腸の損傷の低減に使用するためのものである。
【0120】
式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤを有する対象における「腸の炎症の低減」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤを有する対象と比較して腸の炎症が低減されていることを示す。腸の炎症は、生物学的実施例１２に記載されているような組織学的スコアリング、および生物学的実施例１２に記載されているような炎症性マーカーの発現によって評価することができる。腸の炎症は、内視鏡的組織学的特徴および３つの形態のＩＢＤに適用可能な臨床検査パラメーターを含む臨床的および臨床的組織学的複合スコアによって評価することもできる。ｄｅ Ｊｏｎｇら、Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．、２０１８年、１６（５）：６４８～６６３頁。
【0121】
式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤを有する対象における「寛解の誘導」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤ症状および／または腸の炎症からの寛解が誘導されることを示す。「寛解」という用語は、症状が軽減または欠如している期間と、腸の炎症が欠如している期間の両方を包含する。
【0122】
式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤを有する対象における「寛解の維持」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤ症状および／または腸の炎症の寛解がより長期間維持されることを示す。
【0123】
式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤ症状を有する対象における「体重減少の予防」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤ症状を有する対象と比較して、体重減少が低減することを示す。体重減少の予防は、減量する体重の低減および初期体重の維持を包含する。
【0124】
式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤを有する対象における「結腸長の減少の低減」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤを有する対象と比較して、結腸長の減少が低減するかまたは軽減されることを示す。
【0125】
本明細書で使用される「腸の損傷」という用語は、腸上皮細胞および／または粘膜表面への損傷を説明する。式（Ｉ）の化合物を投与されたＩＢＤを有する対象における「腸の損傷の低減」という用語は、式（Ｉ）の化合物を投与されていないＩＢＤを有する対象と比較して、腸上皮および／または粘膜損傷が低減されることを示す。腸上皮および粘膜損傷は、生物学的実施例１２に記載されているような組織学的スコアリングによって評価することができる。腸上皮および粘膜損傷を評価するための他の方法としては、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳ分析、ＰＣＲおよび腸粘膜のプロテオミクス／ホスホプロテオミクスプロファイリングを使用する免疫学的プロファイリング、およびＩＢＤによる腸の炎症および一般的な炎症の代理血清／血漿または糞便マーカーを使用することが挙げられる。Ｄｉ Ｒｕｓｃｉｏら、Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．、２０１７年、２４（１）：７８～９２頁、Ｉｂｏｒｒａら、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｅｎｄｏｓｃ Ｃｌｉｎ Ｎ Ａｍ．、２０１６年、２６（４）：６４１～６５５頁。
【0126】
ＩＢＤを処置するために天然に存在するオメガ３脂肪酸の経口投与を使用する以前の努力は、成功していない。Ｌｅｖ－Ｔｚｉｏｎら、Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ． Ｒｅｖ．、２０１４年、２８（２）：ＣＤ００６３２０；Ｃａｂｒｅら、Ｂｒ． Ｊ． Ｎｕｔｒｉ．、２０１２年、Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２４０～２５２。これは、少なくとも部分的には、これらの化合物が下部小腸、結腸、および大腸に到達する前に大部分が吸収されるためであり得る。対照的に、本発明者らは、驚くべきことに、式（Ｉ）の化合物が、経口投与後に遠位小腸および結腸に到達するだけでなく、腸のこれらの領域に蓄積することを見出した。具体的には、生物学的実施例７に提供されているように、ラットにおける研究では、単回経口投与後、化合物Ｂが４時間から１日まで盲腸に蓄積が認められ、８時間で大腸に蓄積が認められることが見出された。生物学的実施例８に提供されているように、化合物Ｂは主に糞便を介して排泄され、このことは化合物Ｂが腸に蓄積することを示唆している。小腸および結腸における式（Ｉ）の化合物のこの蓄積は、ＩＢＤを処置するためのこれらの化合物の使用を支持する。
【0127】
生物学的実施例９および１０に提供されているように、大腸炎が誘発されたマウスは、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、式（Ｉ）の化合物で処置された場合、体重減少および結腸長の減少という大腸炎の表現型からの用量依存的な救済を示した。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する対象における体重減少の低減に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する対象における体重を初期体重の１０％以内に維持するのに使用するためのものである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する対象における体重を初期体重の５％以内に維持するのに使用するためのものである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する対象における結腸長の減少の低減に使用するためのものである。
【0128】
生物学的実施例１２に示されるように、大腸炎が誘発されたマウスは、組織学的スコアリングに基づいて、式（Ｉ）の化合物で処置された場合、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったマウスと比較して、結腸損傷および炎症からの用量依存的救済を示した。さらに、生物学的実施例１３に示されるように、大腸炎が誘発されたマウスは、化合物Ｂで処置された場合、炎症の重要マーカーの結腸発現が減少したことを示した。具体的には、化合物Ｂは、炎症性サイトカインおよび／またはＩＢＤに関連するバイオマーカーであるＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、Ｓ１００Ａ８、ＴＮＦα、およびＲｅｇ３ｇの結腸発現を低下させた。Ｅｉｃｈｅｌｅら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２０１７年、２３（３３）：６０１６～６０２９頁。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症の低減に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を投与されなかったＩＢＤを有する対象と比較して、ＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するためのものである。
【0129】
好ましい実施形態では、本開示は、ＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤを有する患者における体重減少の低減、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するための、式（Ｉ）
【0130】
【化9】
（式中、
・Ｒ１は、３～６個の二重結合を有するＣ１０～Ｃ２２アルケニルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基、およびアルキルアミノ基からなる置換基の群から選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンのようなシクロアルカンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸またはその誘導体であり、誘導体は、カルボキシレート、例として、カルボン酸エステル；グリセリド；無水物；カルボキサミド；リン脂質；もしくはヒドロキシメチル；またはそのプロドラッグであり；
・Ｙは硫黄である）の化合物、
または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはそのような塩の溶媒和物、を提供する。
【0131】
好ましい実施形態では、本開示は、ＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤを有する患者における体重減少の低減、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するための、
式（Ｉ）
（式中、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である）の化合物を提供する。
式（Ｉ）
（式中、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である）の化合物を提供する。
【0132】
より好ましい実施形態では、本開示は、ＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤを有する患者における体重減少の低減、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するための、
式（ＩＩ）
式（ＩＩ）
【0133】
【化10】
（式中、
・Ｒ２およびＲ３は、同じかまたは異なっており、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基、およびアルキルアミノ基からなる置換基の群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンのようなシクロアルカンを形成するために結合することができることを条件とし、ならびにＲ２およびＲ３の両方が水素であることはないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸またはその誘導体であり、誘導体は、カルボキシレート、例として、カルボン酸エステル；グリセリド；無水物；カルボキサミド；リン脂質；もしくはヒドロキシメチル；またはそのプロドラッグであり；
・Ｙは硫黄である）
の化合物を提供する。
【0134】
特に好ましい実施形態では、本開示は、ＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤを有する患者における体重減少の低減、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するための、式（ＩＩ）
（式中、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である）
の化合物を提供する。
（式中、
・Ｒ２およびＲ３は、水素原子または直鎖状、分岐鎖状、および／または環状Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択され、ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が水素原子であることはできないことを条件とし；
・Ｘは、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル；または薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはそのような塩の溶媒和物であり；
・Ｙは硫黄である）
の化合物を提供する。
【0135】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＩＢＤの処置、ＩＢＤの寛解の誘導、ＩＢＤの寛解の維持、ＩＢＤを有する患者における体重減少の低減、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少の低減、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症の低減、および／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷の低減に使用するための、
２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸：
２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸：
【0136】
【化11】
を提供する。
【0137】
開示された化合物はまた、記載された適応症のための医薬の製造に使用するのに好適である。例えば、本開示は、潰瘍性大腸炎、クローン病、および非定型的大腸炎などのＩＢＤを処置するための医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。同様に、本開示は、ＩＢＤにおける腸の炎症を低減し、ＩＢＤの寛解を誘導し、ＩＢＤの寛解を維持し、ＩＢＤ症状を経験している対象の体重減少を低減し、結腸長の減少を低減し、ＩＢＤを有する対象における腸の炎症を低減し、かつ／またはＩＢＤを有する対象における腸の損傷を低減するための医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【0138】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＩＢＤを処置し、ＩＢＤの寛解を誘導し、ＩＢＤの寛解を維持し、ＩＢＤを有する患者における体重減少を低減し、ＩＢＤを有する患者における結腸長の減少を低減し、ＩＢＤを有する患者における腸の炎症を低減し、かつ／またはＩＢＤを有する患者における腸の損傷を低減するための、少なくとも２つの異なる活性剤、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物、および追加の活性剤の使用を提供する。ＩＢＤの症状を処置するために現在使用されている薬物のクラスとしては、コルチコステロイド、アミノサリチル酸塩、免疫抑制剤、小分子、および生物学的製剤が挙げられるが、これらに限定されない。免疫抑制剤免疫抑制剤の非限定的なリストには、アザチオプリン（Ａｚａｓａｎ（登録商標）、Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））、メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）、Ｐｕｒｉｘａｎ（登録商標））、シクロスポリン（Ｇｅｎｇｒａｆ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、およびメトトレキサート（Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））が含まれる。生物学的製剤の非限定的なリストには、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ（登録商標））、およびウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標））が含まれる。アミノサリチル酸塩の非限定的なリストには、メサラミン（Ａｓａｃｏｌ ＨＤ（登録商標）、Ｄｅｌｚｉｃｏｌ（登録商標））、バルサラジド（Ｃｏｌａｚａｌ（登録商標））およびオルサラジン（Ｄｉｐｅｎｔｕｍ（登録商標））が含まれる。コルチコステロイドの非限定的なリストには、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、およびブデソニドが含まれる。
【実施例】
【0139】
合成実施例
実施例１：ｔｅｒｔ－ブチル２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イルオキシ）ブタノエートの調製：
実施例１：ｔｅｒｔ－ブチル２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イルオキシ）ブタノエートの調製：
【0140】
【化12】
トルエン（３５ｍＬ）中の（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－オール（３．５０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラブチルアンモニウムクロリド（０．５５ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を、窒素下にて室温で加えた。水酸化ナトリウムの水溶液（５０％（ｗ／ｗ）、１１．７ｍＬ）を、室温で激しく撹拌しながら加え、続いて２－ブロモ酪酸ｔ－ブチル（５．４１ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を５０℃に加熱し、１．５時間（２．７０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）、３．５時間（２．７０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）および４．５時間（２．７０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）後に、追加の２－ブロモ酪酸ｔブチルを加え、全体で１２時間撹拌した。室温まで冷却した後、氷水（２５ｍＬ）を加え、得られた２つの相を分離した。有機相をＮａＯＨ（５％）とブラインとの混合物で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物を、溶離液としてヘプタンと酢酸エチルとの高極性混合物（ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙ ｐｏｌａｒ ｍｉｘｔｕｒｅｓ）（１００：０－＞９５：５）を使用してシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適切な画分の濃縮により、１．８７ｇ（収率３６％）の表題化合物を油として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.10 (m, 6H), 1.35-1.54 (m, 11H), 1.53-1.87 (m, 4H), 1.96-2.26 (m, 4H), 2.70-3.02 (m, 8H), 3.31 (dt, 1H), 3.51-3.67 (m, 2H), 5.10-5.58 (m, 10H).
【0141】
実施例２：２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルオキシ）ブタン酸（化合物Ａ）の調製：
【0142】
【化13】
ｔｅｒｔ－ブチル２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン－１－イルオキシ）ブタノエート（１９．６ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中に溶解させて、窒素下に置いた。トリフルオロ酢酸（５０ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。水を加え、水相をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物を、溶離液としてヘプタン、酢酸エチルおよびギ酸の高極性混合物（９０：１０：１－＞８０：２０：１）を使用してシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーにかけた。適切な画分の濃縮により、１２．１ｇ（収率７１％）の表題化合物を油として得た。1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.00 (m, 6H), 1.50 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 2.80-2.90 (m, 8H), 3.50 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.75 (t, 1H), 5.30-5.50 (m, 10H); MS (エレクトロスプレー): 373.2 [M-H]-.
【0143】
実施例３：２－エチル－２－（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルチオ）ブタン酸（化合物Ｂ）の調製
【0144】
【化14】
ＮａＯＥｔ（ＥｔＯＨ中２１重量パーセント、０．３７ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）を、０°Ｃで保持された乾燥ＥｔＯＨ（７ｍＬ）中の２－メルカプト－２－エチル酪酸（０．０８ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下にて滴加した。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌した後、乾燥ＥｔＯＨ（３ｍＬ）中の（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）－イコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエニルメタンスルホネート（０．１５ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。得られた混濁混合物を周囲温度で２４時間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）（水溶液）（１５ｍＬ）に注ぎ、３Ｍ ＨＣｌをｐＨ約２になるまで加えた後、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物を、溶離液としてヘプタン中の１０～２５パーセント酢酸エチルの勾配を使用してシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適切な画分の濃縮により、０．１２ｇ（収率７０％）の表題化合物を油として得た。1 H-NMR (300 MHz, CDCl3): デルタ 0.88-1.02 (m, 9H), 1.45-1.58 (2xm, 4H), 1.72 (m, 2H), 1.82 (m, 2H) 2.09 (m, 4H), 2.53 (t, 2H), 2.76-2.86 (m, 8H), 5.29-5.39 (m, 10H. MS (エレクトロスプレー): 417.3 [M-H]-.
【0145】
実施例４：（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）－２，２－ジエチルドコサ－４，７，１０，１３，１６，１９－ヘキサエン酸の調製
【0146】
【化15】
工程ａ）
ブチルリチウム（ヘキサン中３８．６ｍＬ、０．６２ｍｏｌ、１．６Ｍ）を、０℃でＮ２下にて乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（９．１ｍＬ、０．６５ｍｏｌ）の撹拌溶液に滴加した。得られた溶液を０℃で３０分間撹拌し、－７８℃に冷却した（溶液Ａ）。乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のエチル（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）－ドコサ－４，７，１０，１３，１６，１９－ヘキサノエート（ｈｅｘａｅｎｏａｔｅ）（ＤＨＡ ＥＥ、２０．０ｇ、０．５６ｍｏｌ）の溶液を、溶液Ａに滴加し、得られた混合物を－７８℃で３０分間撹拌した。ヨードエタン（６．８ｍｌ、０．８４ｍｏｌ）を加え、反応混合物を－１０℃に到達させ、次に水に注ぎ、ヘキサンで抽出した（２ｘ）。合わせた有機相を１Ｍ ＨＣｌ（水溶液）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物を乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解し、－７８℃で溶液Ａの新しいバッチに滴加した。ヨードエタン（６．８ｍＬ、０．８４ｍｏｌ）を加え、反応混合物を周囲温度に到達させた。混合物を一晩撹拌し、水に注ぎ、ヘキサンで抽出した（２ｘ）。合わせた有機相を１Ｍ ＨＣｌ（水溶液）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物を、乾式フラッシュクロマトグラフィーによってシリカゲル上でヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１、続いて９８：２）により溶出して精製し、１０．０ｇ（収率４３％）の表題化合物を油として得た。1H-NMR (200 MHz; CDCl3) δ 0.83 (t, 6H), 0.94 (t, 3H), 1.28 (t, 3H), 1.63 (q, 4H), 2.10 (m, 2H), 2.34 (d, 2H), 2.8-3.0 (m, 10H), 4.15 (q, 2H), 5.3-5.6 (m, 12H); 13C-NMR (50 MHz; CDCl3) δ 8.9, 14.7, 21.0, 23.1, 25.9, 26.0, 26.2, 27.4, 31.2, 50.1, 60.6, 125.5, 127.4, 128.3, 128.6, 128.9, 130.5, 132.4, 177.1; MS (エレクトロスプレー); 413.3 [M+H], 435.3 [M+Na].
【0147】
工程ｂ）
エチル（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）－２，２－ジエチルドコサ－４，７，１０，１３，１６，１９－ヘキサノエート（ｈｅｘａｅｎｏａｔｅ）（２．４２ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、チオフェノール（０．６３ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（０．４１ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、Ｎ２下にて１００℃で１３９時間撹拌した。混合物を冷却し、１Ｍ ＨＣｌ（水溶液）を加え、ジエチルエーテルで抽出した（４×）。有機層をプールし、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ ９：１、続いて４：１、次いで７：３）によって精製して、０．４８ｇ（収率２１％）の表題化合物を油として得た。1H-NMR (200 MHz; CDCl3) δ 0.78 (t, 6H), 0.95 (t, 3H), 1.52-1.68 (m, 4H), 1.98-2.12 (m, 2H), 2.34 (d, 2H), 2.70-2.90 (m, 10H), 3.65 (s, 3H), 5.20-5.50 (m, 12H).
エチル（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）－２，２－ジエチルドコサ－４，７，１０，１３，１６，１９－ヘキサノエート（ｈｅｘａｅｎｏａｔｅ）（２．４２ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、チオフェノール（０．６３ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（０．４１ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、Ｎ２下にて１００℃で１３９時間撹拌した。混合物を冷却し、１Ｍ ＨＣｌ（水溶液）を加え、ジエチルエーテルで抽出した（４×）。有機層をプールし、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ ９：１、続いて４：１、次いで７：３）によって精製して、０．４８ｇ（収率２１％）の表題化合物を油として得た。1H-NMR (200 MHz; CDCl3) δ 0.78 (t, 6H), 0.95 (t, 3H), 1.52-1.68 (m, 4H), 1.98-2.12 (m, 2H), 2.34 (d, 2H), 2.70-2.90 (m, 10H), 3.65 (s, 3H), 5.20-5.50 (m, 12H).
【0148】
生物学的実施例
痩せた雄型ＳＰＤラットにおける２４時間での経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）中の活性ＧＬＰ－１濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの急性効果の評価
活性ＧＬＰ－１およびインスリン濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの経口投与の急性効果を確立するために、痩せた（約３００ｇ）雄型のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＰＤ）ラットを群（ｎ＝６～８）に分けて、以下に概説するように、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の６０分前にジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ－４）阻害剤の同時投与有りかまたはなしのいずれかで、７４および８４ｍｇ／ｋｇ体重の化合物Ａまたは化合物Ｂのそれぞれを摂取させた。コーン油のみ（コーン油＋ビヒクル、ｎ＝１０）またはコーン油とＤＰＰ－４阻害剤（「ＤＰＰ－４ｉ」）（コーン油＋（ＤＰＰ－４ｉ）、ｎ＝１０）のいずれかを投与された並行群を、対照として含めた。ＤＰＰ－４阻害剤はリナグリプチンであった。
痩せた雄型ＳＰＤラットにおける２４時間での経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）中の活性ＧＬＰ－１濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの急性効果の評価
活性ＧＬＰ－１およびインスリン濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの経口投与の急性効果を確立するために、痩せた（約３００ｇ）雄型のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＰＤ）ラットを群（ｎ＝６～８）に分けて、以下に概説するように、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の６０分前にジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ－４）阻害剤の同時投与有りかまたはなしのいずれかで、７４および８４ｍｇ／ｋｇ体重の化合物Ａまたは化合物Ｂのそれぞれを摂取させた。コーン油のみ（コーン油＋ビヒクル、ｎ＝１０）またはコーン油とＤＰＰ－４阻害剤（「ＤＰＰ－４ｉ」）（コーン油＋（ＤＰＰ－４ｉ）、ｎ＝１０）のいずれかを投与された並行群を、対照として含めた。ＤＰＰ－４阻害剤はリナグリプチンであった。
【0149】
【表1】
【0150】
表１に示すように、活性ＧＬＰ－１の測定のために、０、１５、３０および６０分経過時点で試料を収集した。７４および８４ｍｇ／ｋｇ体重の化合物Ａまたは化合物Ｂのそれぞれの２回目の経口用量を２４０分経過時点で投与し、自由摂食を開始した。ＤＰＰ－４阻害剤の２回目の用量は、消灯の４８０分前に投与した。活性ＧＬＰ－１およびインスリンの測定のために、２４時間経過時点で血液試料を収集した。すべての値は平均値であり、図は平均値（ＳＥＭ）を示す。
【0151】
生物学的実施例１．痩せたＳＰＤラットにおける曲線下面積（ＡＵＣ）（０～６０分）グルコース刺激活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）ｘ分に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の急性摂取の効果。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルと比較して活性ＧＬＰ－１（ＡＵＣ ０～６０分）濃度を有意に（ｐ＜０．０５）増加させた（＞２倍増加）が、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、コーン油単独と比較して有意な効果はなかった。結果を図１に示す。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルと比較して活性ＧＬＰ－１（ＡＵＣ ０～６０分）濃度を有意に（ｐ＜０．０５）増加させた（＞２倍増加）が、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、コーン油単独と比較して有意な効果はなかった。結果を図１に示す。
【0152】
生物学的実施例２．痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ａ単独または化合物Ａ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ａは、コーン油＋ビヒクルと比較して２４時間活性ＧＬＰ－１濃度を有意に（ｐ＜０．０５）増加させたが、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、有意な効果はなかった。結果を図２に示す。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ａは、コーン油＋ビヒクルと比較して２４時間活性ＧＬＰ－１濃度を有意に（ｐ＜０．０５）増加させたが、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、有意な効果はなかった。結果を図２に示す。
【0153】
生物学的実施例３．痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での活性ＧＬＰ－１（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ｂ単独または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルと比較して活性ＧＬＰ－１濃度を有意に（ｐ＜０．０１）増加させたが、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、コーン油単独と比較して有意な効果はなかった。結果を図３に示す。
ＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルと比較して活性ＧＬＰ－１濃度を有意に（ｐ＜０．０１）増加させたが、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤単独では、コーン油単独と比較して有意な効果はなかった。結果を図３に示す。
【0154】
生物学的実施例４．痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での血漿インスリン（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ａ単独または化合物Ａ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果。
単独で、またはＤＰＰ４阻害剤と組み合わせるかのいずれかで、化合物Ａは、コーン油＋ビヒクルおよびコーン油＋ＤＰＰ４阻害剤の両方と比較して、インスリン濃度を２５％増加させた（有意ではない）。結果を図４に示す。
単独で、またはＤＰＰ４阻害剤と組み合わせるかのいずれかで、化合物Ａは、コーン油＋ビヒクルおよびコーン油＋ＤＰＰ４阻害剤の両方と比較して、インスリン濃度を２５％増加させた（有意ではない）。結果を図４に示す。
【0155】
生物学的実施例５．痩せたＳＰＤラットにおける２４時間での血漿インスリン（ｐｇ／ｍＬ）に対する、コーン油＋ビヒクル、コーン油＋ＤＰＰ４阻害剤、化合物Ｂ単独または化合物Ｂ＋ＤＰＰ４阻害剤の効果。
単独で、またはＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルおよびコーン油＋ＤＰＰ４阻害剤の両方と比較して、インスリン濃度をそれぞれ２５％および４０％増加させた（有意ではない）。結果を図５に示す。
単独で、またはＤＰＰ４阻害剤と組み合わせると、化合物Ｂは、コーン油＋ビヒクルおよびコーン油＋ＤＰＰ４阻害剤の両方と比較して、インスリン濃度をそれぞれ２５％および４０％増加させた（有意ではない）。結果を図５に示す。
【0156】
生物学的実施例６．ｏｂ／ｏｂマウスにおける耐糖能（０～１２０分）に対する、ピオグリタゾンと比較した化合物Ｂまたは化合物Ａによる効果。
この研究は、Ｔ２ＤＭげっ歯類モデルにおける耐糖能に対する、化合物Ｂまたは化合物Ａによる長期処置の効果を評価するために実施した。
この研究は、Ｔ２ＤＭげっ歯類モデルにおける耐糖能に対する、化合物Ｂまたは化合物Ａによる長期処置の効果を評価するために実施した。
【0157】
化合物Ｂの効果を評価するために、Ｂ６．Ｖ－Ｌｅｐｏｂ／Ｊｒｊマウス（ｏｂ／ｏｂ）マウスに、化合物Ｂを１２５および２５０ｍｇ／ｋｇの２つの用量のうちの１つで、２８日間投与した。８週齢の雄型ｏｂ／ｏｂマウス（群あたり８匹）を、化合物Ｂ（２用量）、ピオグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのいずれかで１日１回強制経口投与して処置し、２８日後に５時間絶食させ、その後、マウスは２ｇ／ｋｇの経口グルコース負荷を受けた。経口グルコース負荷後、血漿グルコースを複数の時点で測定し、グルコースのＡＵＣ（０～１２０分）を計算した。化合物Ｂの両方の用量により耐糖能が改善され、２５０ｍｇ／ｋｇの用量は、ＡＵＣグルコースの強力かつ非常に有意な（ｐ＜０．００１）減少を誘導した（図６Ａ）。
【0158】
化合物Ａの効果を評価するために、ｏｂ／ｏｂマウスに、高脂肪食（２％コレステロール、４０％脂肪（１８％トランス脂肪酸を含む）、２０％フルクトースを含む）を５週齢から１５週間与えた。マウス（群あたり１０匹）に、化合物Ａ（１１２ｍｇ／ｋｇ）、ピオグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルを、１日１回食餌により投与した。２１日後、マウスは２ｇ／ｋｇの経口グルコース負荷を受けた。経口グルコース負荷後、血漿グルコースを０～２４０分の複数の時点で測定した。化合物Ａにより、ビヒクルと比較して、グルコース負荷後１５分から９０分まで耐糖能が有意に改善された（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。化合物Ａはまた、ＡＵＣグルコースを有意に減少させた（ｐ＜０．０１）。
【0159】
生物学的実施例７．［１４Ｃ］－化合物Ｂを公称用量レベル５０ｍｇ／ｋｇ体重で単回経口投与した後の、雄型アルビノラットの腸セグメントにおける放射能濃度。
この研究は、定量的全身オートラジオグラフィー（ＱＷＢＡ）を使用して、［１４Ｃ］－化合物Ｂの単回経口投与後の雄型アルビノラットにおける放射能の腸組織分布を測定するために実施した。［１４Ｃ］－化合物Ｂを５０ｍｇ／ｋｇ（約５ＭＢｑ／ｋｇ）で単回経口投与した後のラットにおける組織分布を、投与後１６８時間までのＱＷＢＡ分析によって調べた。小腸粘膜におけるピーク濃度は４時間で発生し、盲腸への蓄積は４時間から１日まで、大腸では８時間で認められ、このことは、化合物Ｂが遠位小腸および結腸に到達する能力を実証する。結果を表２に提供する。
この研究は、定量的全身オートラジオグラフィー（ＱＷＢＡ）を使用して、［１４Ｃ］－化合物Ｂの単回経口投与後の雄型アルビノラットにおける放射能の腸組織分布を測定するために実施した。［１４Ｃ］－化合物Ｂを５０ｍｇ／ｋｇ（約５ＭＢｑ／ｋｇ）で単回経口投与した後のラットにおける組織分布を、投与後１６８時間までのＱＷＢＡ分析によって調べた。小腸粘膜におけるピーク濃度は４時間で発生し、盲腸への蓄積は４時間から１日まで、大腸では８時間で認められ、このことは、化合物Ｂが遠位小腸および結腸に到達する能力を実証する。結果を表２に提供する。
【0160】
【表2】
【0161】
生物学的実施例８．［１４Ｃ］－化合物Ｂを公称用量レベル５０ｍｇ／ｋｇ体重で単回経口投与した後の、雄型アルビノラットの排泄物中の放射能の回収。
尿および糞便を介した化合物Ｂのクリアランスを評価するために、［１４Ｃ］－化合物Ｂの単回経口投与の排泄パターンを雄型アルビノラットにおいて測定した。排泄パターンは各動物において類似しており、放射能の定量的回収率が得られた（１０１％）。経口投与後の放射能の総排泄量は、最初の４８時間以内に＞９５％であった。尿による排泄量は投与量の１２％を占めた。経口投与後の糞便中排泄量は８６％であり、大量の［１４Ｃ］－化合物Ｂ関連物質が吸収されずに排泄されたことを示唆している。表３には、排泄バランス調査の結果を提供する。
尿および糞便を介した化合物Ｂのクリアランスを評価するために、［１４Ｃ］－化合物Ｂの単回経口投与の排泄パターンを雄型アルビノラットにおいて測定した。排泄パターンは各動物において類似しており、放射能の定量的回収率が得られた（１０１％）。経口投与後の放射能の総排泄量は、最初の４８時間以内に＞９５％であった。尿による排泄量は投与量の１２％を占めた。経口投与後の糞便中排泄量は８６％であり、大量の［１４Ｃ］－化合物Ｂ関連物質が吸収されずに排泄されたことを示唆している。表３には、排泄バランス調査の結果を提供する。
【0162】
【表3】
【0163】
ＤＳＳ誘発性大腸炎マウスの腸の炎症に対する化合物Ｂの効果の評価
デキストラン硫酸ナトリウム誘発性（ＤＳＳ）誘発性大腸炎モデルは、腸の炎症動物モデルの再現可能な化学的誘発として、当技術分野において周知である。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｅら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ， ２０１７年、２３（３３）：６０１６～６０２９、Ｒａｎｄｈａｗａら、Ｋｏｒｅａｎ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． （２０１４） １８：２７９～２８８頁、Ｊｕｒｊｕｓら、Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００４年、５０：８１～９２頁、Ｇａｕｄｉｏら、Ｄｉｇ． Ｄｉｓ． Ｓｃｉ．， １９９９年、４４：１４５８～１４７５頁を参照のこと。ＤＳＳ誘発性大腸炎モデルは、形態学的および症候的にヒトＩＢＤに見られる上皮損傷に類似しており、したがって、腸の炎症の最も広く使用されている実験モデルになっている。Ｏｋａｙａｓｕら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１９９０年、９８：６９４～７０２頁、Ｋａｗａｄａら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２００７年、１３：５５８１～５５９３頁。ＤＳＳ誘発性大腸炎モデルは、ヒトの潰瘍性大腸炎に最も類似しているが、クローン病にも多くの類似点を有する。
デキストラン硫酸ナトリウム誘発性（ＤＳＳ）誘発性大腸炎モデルは、腸の炎症動物モデルの再現可能な化学的誘発として、当技術分野において周知である。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｅら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ， ２０１７年、２３（３３）：６０１６～６０２９、Ｒａｎｄｈａｗａら、Ｋｏｒｅａｎ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． （２０１４） １８：２７９～２８８頁、Ｊｕｒｊｕｓら、Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００４年、５０：８１～９２頁、Ｇａｕｄｉｏら、Ｄｉｇ． Ｄｉｓ． Ｓｃｉ．， １９９９年、４４：１４５８～１４７５頁を参照のこと。ＤＳＳ誘発性大腸炎モデルは、形態学的および症候的にヒトＩＢＤに見られる上皮損傷に類似しており、したがって、腸の炎症の最も広く使用されている実験モデルになっている。Ｏｋａｙａｓｕら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１９９０年、９８：６９４～７０２頁、Ｋａｗａｄａら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２００７年、１３：５５８１～５５９３頁。ＤＳＳ誘発性大腸炎モデルは、ヒトの潰瘍性大腸炎に最も類似しているが、クローン病にも多くの類似点を有する。
【0164】
ＤＳＳは、水溶性の負に帯電した硫酸化多糖であり、分子量は５～１４００ｋＤａの範囲で大きく変動する。マウス大腸炎は、ＤＳＳ誘発性大腸炎にかかりやすいマウス系統の飲料水に約１％から３％のＤＳＳを投与することからもたらされる。理論に拘束されるものではないが、硫酸化多糖は腸の炎症を直接誘発しない場合もあるが、代わりに結腸上皮への直接的な化学毒素として作用し、上皮細胞の損傷をもたらす場合がある。ＤＳＳは腸上皮単層の内膜を破壊し、管腔内細菌および関連する抗原の粘膜への侵入を引き起こし、これにより炎症誘発性腸内容物の基礎組織への播種が可能になると考えられている。滅菌飲料水に添加された約４０～５０ｋＤａのサイズ範囲のＤＳＳは、腸の粘膜に浸透することが示されている。Ｐｅｒｓｅら、Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１２年：７１８６１７。
【0165】
Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウスは、ＤＳＳ誘発性大腸炎にかかりやすい系統である。ＤＳＳ誘発性大腸炎の処置における化合物Ｂの有効性および投与量を評価するために、１．５％ＤＳＳを飲料水に７日間添加することにより、３０匹の９週齢のＣ５６ＢＬ／６Ｊマウスに炎症を誘発させた。マウスには、３０重量パーセントの小麦からなる普通食を与えた。マウスを１０匹の３つの群に分け、ＤＳＳ投与の各日について、各群に、（１）１日あたり１００μＬのコーン油（対照）、（２）１日あたり１２６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂ（（１００μＬのコーン油に溶解した）（「化合物Ｂ－低」もしくは「化合物Ｂ－Ｌ」）、または（３）１日あたり２５２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂ（１００μＬのコーン油に溶解した）（「化合物Ｂ－高」もしくは「化合物Ｂ－Ｈ」）のいずれかを強制経口投与した。ＤＳＳ誘発期間の７日間に続いて、マウスを犠死させ、それらの腸組織を組織病理学的分析および遺伝子発現分析に使用した。
【0166】
生物学的実施例９．
マウスのＤＳＳ誘発性大腸炎の処置における化合物Ｂの有効性を評価するために、マウスの体重を監視した。体重減少は大腸炎の重症度の指標である。図７に示すように、飲料水中の１．５％ＤＳＳを与えられたマウスは、進行性の体重減少を示した。対照群と比較して、化合物Ｂで処置されたマウスは、体重減少の用量依存的低減を示した。対照群と処置群との間の体重減少の差は、化合物Ｂ－高群のＤＳＳ誘発の６日後に統計的に有意であり、化合物Ｂ－高群および化合物Ｂ－低群の両方の７日後に統計的に有意であった。
マウスのＤＳＳ誘発性大腸炎の処置における化合物Ｂの有効性を評価するために、マウスの体重を監視した。体重減少は大腸炎の重症度の指標である。図７に示すように、飲料水中の１．５％ＤＳＳを与えられたマウスは、進行性の体重減少を示した。対照群と比較して、化合物Ｂで処置されたマウスは、体重減少の用量依存的低減を示した。対照群と処置群との間の体重減少の差は、化合物Ｂ－高群のＤＳＳ誘発の６日後に統計的に有意であり、化合物Ｂ－高群および化合物Ｂ－低群の両方の７日後に統計的に有意であった。
【0167】
生物学的実施例１０．
マウスのＤＳＳ誘発性大腸炎の処置における化合物Ｂの有効性を評価するために、試験マウスの結腸長を測定した。結腸長は炎症と逆相関する。図８に示されるように、低用量および高用量の両方の化合物Ｂで処置されたマウスは、対照と比較して結腸長の有意な増加を示した。
マウスのＤＳＳ誘発性大腸炎の処置における化合物Ｂの有効性を評価するために、試験マウスの結腸長を測定した。結腸長は炎症と逆相関する。図８に示されるように、低用量および高用量の両方の化合物Ｂで処置されたマウスは、対照と比較して結腸長の有意な増加を示した。
【0168】
生物学的実施例１１．
図９に示されるように、化合物Ｂで処置されたマウスは、対照と比較して、用量依存的な生存率の増加を示した。低用量の化合物Ｂで処置されたマウスの９０％（ｎ＝９）および高用量の化合物Ｂで処置されたマウスの１００％（ｎ＝１０）と比較して、対照群の未処置マウスの５０％（ｎ＝５）が、大腸炎が誘発されてから７日後に生存していた。対照群の死亡は、敗血症および重度の結腸炎症によるものであった。したがって、化合物Ｂは、大腸炎マウスの生存率に、統計的に有意な影響を及ぼす。
図９に示されるように、化合物Ｂで処置されたマウスは、対照と比較して、用量依存的な生存率の増加を示した。低用量の化合物Ｂで処置されたマウスの９０％（ｎ＝９）および高用量の化合物Ｂで処置されたマウスの１００％（ｎ＝１０）と比較して、対照群の未処置マウスの５０％（ｎ＝５）が、大腸炎が誘発されてから７日後に生存していた。対照群の死亡は、敗血症および重度の結腸炎症によるものであった。したがって、化合物Ｂは、大腸炎マウスの生存率に、統計的に有意な影響を及ぼす。
【0169】
生物学的実施例１２．
組織病理学的分析は、ヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色後のホルマリン固定パラフィン包埋組織の切片において実施した。結腸試料を、Ｎｅｕｒａｔｈら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００２年、１９５：１１２９～１１４３頁に記載されているように、大腸炎活性のスコア割り当てについての組織病理学によって分析した。要約すると、結腸の微視的断面における炎症ならびに上皮損傷および粘膜損傷の程度を、０から４まで半定量的に等級分けした。炎症の場合、スコア０＝炎症の証拠なし；１＝浸潤性単核細胞が散在する低レベルの炎症（１～２つの増殖巣のみ）；２＝複数の増殖巣を伴う中等度の炎症；３＝血管密度の増加および顕著な壁肥厚を伴う高レベルの炎症；ならびに４＝貫壁性白血球浸潤および杯細胞の喪失を伴う炎症の最大重症度。損傷の場合、スコア０＝上皮損傷なし；１＝時折の上皮病変；２＝１～２つの潰瘍の増殖巣；および３＝広範な潰瘍。小腸切片が、追加の対照として非誘発性（すなわち、ＤＳＳなし）動物から採取され、炎症の証拠を示さなかった。図１０に示されるように、高用量の化合物Ｂで処置されたマウスからの試料の組織学的スコアは、未処置のマウスからのものよりも有意に低かった。高用量の化合物Ｂで処置されたマウスでは、未処置のマウスよりも炎症と上皮および粘膜の損傷の両方が低かった。
組織病理学的分析は、ヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色後のホルマリン固定パラフィン包埋組織の切片において実施した。結腸試料を、Ｎｅｕｒａｔｈら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００２年、１９５：１１２９～１１４３頁に記載されているように、大腸炎活性のスコア割り当てについての組織病理学によって分析した。要約すると、結腸の微視的断面における炎症ならびに上皮損傷および粘膜損傷の程度を、０から４まで半定量的に等級分けした。炎症の場合、スコア０＝炎症の証拠なし；１＝浸潤性単核細胞が散在する低レベルの炎症（１～２つの増殖巣のみ）；２＝複数の増殖巣を伴う中等度の炎症；３＝血管密度の増加および顕著な壁肥厚を伴う高レベルの炎症；ならびに４＝貫壁性白血球浸潤および杯細胞の喪失を伴う炎症の最大重症度。損傷の場合、スコア０＝上皮損傷なし；１＝時折の上皮病変；２＝１～２つの潰瘍の増殖巣；および３＝広範な潰瘍。小腸切片が、追加の対照として非誘発性（すなわち、ＤＳＳなし）動物から採取され、炎症の証拠を示さなかった。図１０に示されるように、高用量の化合物Ｂで処置されたマウスからの試料の組織学的スコアは、未処置のマウスからのものよりも有意に低かった。高用量の化合物Ｂで処置されたマウスでは、未処置のマウスよりも炎症と上皮および粘膜の損傷の両方が低かった。
【0170】
ＤＳＳ誘発性マウスの結腸、ならびに非誘発性（すなわち、ＤＳＳなし）マウスの結腸の代表的な組織学的断面を図１１に示す。ＤＳＳ誘発性対照マウス（図１１ＡおよびＢ）では、組織学的断面は、絨毛－陰窩構造の消失、粘膜固有層および粘膜筋板の浮腫および炎症性浸潤／増殖巣、腸上皮細胞の脱落、ならびに保護粘液層の喪失（オレンジ色）を示す。処置されたマウス（図１１Ｃ～Ｆ）において、組織学は、炎症性浸潤および浮腫の用量依存的減弱、ならびに後に絨毛構造および粘液のほぼ正常な形態への再構成を示す。比較すると、高用量の化合物Ｂで処置された結腸の組織学的断面は、ほぼ完全な救済を示し、形態は、ＤＳＳを投与されていないマウスからの結腸の形態に類似している（図１１Ｇ）。図１１Ａ、ＣおよびＥのスケールバーは、は２００μｍである。図１１Ｂ、Ｄ、Ｆ、およびＧのスケールバーは、５０μｍである。
【0171】
生物学的実施例１３．
炎症誘発性サイトカインおよびバイオマーカーのレベルに対する化合物Ｂによる処置の効果を評価するために、小腸および大腸の組織試料（＞１００ｍｇ）から全ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを逆転写によって合成し、リアルタイムＰＣＲによって分析した。結果を、ハウスキーピング遺伝子ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）のレベルに正規化した。ＨＰＲＴ発現に対する試験遺伝子の相対的ｍＲＮＡ発現を、Ｐｉｃｋｅｒｔら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００９年、２０６：１４６５～１４７２頁に記載されている２－ΔΔＣｔ法を使用して計算した。インターロイキン６（ＩＬ６）、ＩＬ１ｂ、カルグラニュリン－Ａ（Ｓ１００Ａ８）、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、潰瘍性大腸炎とクローン病の両方を含むＩＢＤのメディエーターとして関与している。ＩＬ６、ＩＬ１ｂ、およびカルグラニュリン－Ａは、炎症性マクロファージにおいて顕著に発現している。ＩＬ２２依存性の再生膵島由来３ガンマ（Ｒｅｇ３ｇ）は、上皮細胞の炎症に反応して誘発される。ＩＬ１７は、Ｔｈ１７ Ｔヘルパー細胞および自然リンパ球３型（ＩＬＣ３）から分泌される。
炎症誘発性サイトカインおよびバイオマーカーのレベルに対する化合物Ｂによる処置の効果を評価するために、小腸および大腸の組織試料（＞１００ｍｇ）から全ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを逆転写によって合成し、リアルタイムＰＣＲによって分析した。結果を、ハウスキーピング遺伝子ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）のレベルに正規化した。ＨＰＲＴ発現に対する試験遺伝子の相対的ｍＲＮＡ発現を、Ｐｉｃｋｅｒｔら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００９年、２０６：１４６５～１４７２頁に記載されている２－ΔΔＣｔ法を使用して計算した。インターロイキン６（ＩＬ６）、ＩＬ１ｂ、カルグラニュリン－Ａ（Ｓ１００Ａ８）、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、潰瘍性大腸炎とクローン病の両方を含むＩＢＤのメディエーターとして関与している。ＩＬ６、ＩＬ１ｂ、およびカルグラニュリン－Ａは、炎症性マクロファージにおいて顕著に発現している。ＩＬ２２依存性の再生膵島由来３ガンマ（Ｒｅｇ３ｇ）は、上皮細胞の炎症に反応して誘発される。ＩＬ１７は、Ｔｈ１７ Ｔヘルパー細胞および自然リンパ球３型（ＩＬＣ３）から分泌される。
【0172】
図１２に示すように。ＩＬ６、ＩＬ１ｂ、Ｓ１００Ａ８、ＴＮＦαおよびＲｅｇ３ｇのｍＲＮＡレベルは、大腸炎からの救済および炎症の低減と一致して、未処置マウスと比較して、化合物Ｂで処置されたマウスにおいて用量依存的な減少を示した。化合物Ｂ処置に応答したＩＬ１７ａの発現の変化がないことは、ＩＢＤに対する保護と一致している。まとめると、結果は、化合物Ｂが、大腸炎ならびにクローン病および非定型的大腸炎などの他の炎症性腸疾患に対して臨床的に有益な効果をもたらす場合があることを示している。
【0173】
生物学的実施例１４．
Ｔ２ＤＭのげっ歯類モデルにおける化合物Ａによる長期処置の効果を評価するために、６～８週齢の雄型ｏｂ／ｏｂマウスに、混合食を介して化合物Ａの３つの用量（１５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ；４５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ；１３５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）のうちの１つ、混合食を介してピオグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）、混合食を介してフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）を投与するか、またはこれらのマウスを５週間未処置とした（対照）（１群あたり１０匹のマウス）。マウスには、標準的な低脂肪（７％ ｗ／ｗ脂肪）食を与えた。４週間後、マウスを４時間絶食させ、化合物Ａの効果を評価した。化合物Ａの効果の評価には、基礎血糖値、基礎血漿インスリンレベル、ＨｂＡ１ｃレベル、およびインスリン抵抗性の恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ－ＩＲ）が含まれていた。ＨＯＭＡ－ＩＲはインスリン抵抗性の評価であり、次の式で計算する：空腹時インスリン（マイクロＵ／Ｌ）ｘ空腹時グルコース（ｎｍｏｌ／Ｌ）／２２．５。１３５ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａの効果を、表４に提供する。
Ｔ２ＤＭのげっ歯類モデルにおける化合物Ａによる長期処置の効果を評価するために、６～８週齢の雄型ｏｂ／ｏｂマウスに、混合食を介して化合物Ａの３つの用量（１５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ；４５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ；１３５ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）のうちの１つ、混合食を介してピオグリタゾン（３０ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）、混合食を介してフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ ｂｗ／ｄ）を投与するか、またはこれらのマウスを５週間未処置とした（対照）（１群あたり１０匹のマウス）。マウスには、標準的な低脂肪（７％ ｗ／ｗ脂肪）食を与えた。４週間後、マウスを４時間絶食させ、化合物Ａの効果を評価した。化合物Ａの効果の評価には、基礎血糖値、基礎血漿インスリンレベル、ＨｂＡ１ｃレベル、およびインスリン抵抗性の恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ－ＩＲ）が含まれていた。ＨＯＭＡ－ＩＲはインスリン抵抗性の評価であり、次の式で計算する：空腹時インスリン（マイクロＵ／Ｌ）ｘ空腹時グルコース（ｎｍｏｌ／Ｌ）／２２．５。１３５ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａの効果を、表４に提供する。
【0174】
【表4】
【0175】
５週間後、４時間の絶食後に経口グルコース（２ｇ／ｋｇ）耐性試験を実施した。化合物Ａは、グルコースレベルの低下において用量依存的な応答を示した。
【0176】
【表5】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
