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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-07-01
(45)【発行日】2024-07-09
(54)【発明の名称】磁性粒子及び検査薬
(51)【国際特許分類】
G01N 33/543 20060101AFI20240702BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240702BHJP
【ＦＩ】
G01N33/543 541A
G01N33/53 U
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2021509614
(86)(22)【出願日】2020-03-26
(86)【国際出願番号】 JP2020013814
(87)【国際公開番号】W WO2020196786
(87)【国際公開日】2020-10-01
【審査請求日】2022-12-13
(31)【優先権主張番号】P 2019058530
(32)【優先日】2019-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】390037327
【氏名又は名称】積水メディカル株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110001232
【氏名又は名称】弁理士法人大阪フロント特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】大日方 秀平
(72)【発明者】
【氏名】脇屋 武司
(72)【発明者】
【氏名】稲葉 祐也
【審査官】中村 直子
(56)【参考文献】
【文献】特開２００６－３０７１２６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１０－１３２５１３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０５－１５８２８６（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２００６／０２６９７５１（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特開平１０－０８７７１１（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／４８－３３／９８
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる磁性粒子であって、内部に第１の磁性体を含む磁性体内包樹脂粒子と、
前記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置され、かつ第２の磁性体を含む磁性層と、
前記磁性層の外表面側に担持されており、かつ前記目的物質と特異的に相互作用する物質とを備え、
前記磁性体内包樹脂粒子の外表面から中心に向かって厚み１／３までの領域の１００体積％中における前記第１の磁性体の含有量の、前記磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面に向かって厚み２／３までの領域の１００体積％中における前記第１の磁性体の含有量に対する比が、０．８以上４．０以下である、磁性粒子。
【請求項2】
前記第１の磁性体が、金属又は金属酸化物であり、前記第２の磁性体が、金属又は金属酸化物である、請求項１に記載の磁性粒子。
【請求項3】
前記磁性層の外表面上に配置されたシェル層を更に備え、前記シェル層の材料が、無機酸化物又は有機ポリマーを含み、
前記シェル層と、前記物質とが結合している、請求項１又は２に記載の磁性粒子。
【請求項4】
前記シェル層の材料が、前記無機酸化物を含み、前記無機酸化物が、ケイ素原子、ゲルマニウム原子、チタン原子又はジルコニウム原子を有する無機酸化物である、請求項３に記載の磁性粒子。
【請求項5】
前記物質が、抗原又は抗体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の磁性粒子。
【請求項6】
前記物質が、アビジン又はストレプトアビジンである、請求項１～４のいずれか１項に記載の磁性粒子。
【請求項7】
磁性粒子１００重量％中、前記第１の磁性体と前記第２の磁性体と合計の含有量が、１０重量％以上９５重量％以下である、請求項１～６のいずれか１項に記載の磁性粒子。
【請求項8】
前記第１の磁性体と前記第２の磁性体の含有量の合計１００重量％中、前記第１の磁性体の含有量が、１０重量％以上９０重量％以下である、請求項１～７のいずれか１項に記載の磁性粒子。
【請求項9】
検査薬として用いられる、請求項１～８のいずれか１項に記載の磁性粒子。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか１項に記載の磁性粒子を含む、検査薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、磁性体を含む磁性粒子に関する。また、本発明は、上記磁性粒子を用いた検査薬に関する。
【背景技術】
【0002】
医薬品の研究開発及び臨床検査等の分野において、検体中の目的物質の濃度等を測定するために磁性粒子が用いられている。例えば、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）等のイムノアッセイでは、表面に抗体又は抗原等を有する磁性粒子が広く用いられている。この磁性粒子は、一般に、目的物質である抗原又は抗体等と結合した後、磁石等によって集磁される。
【0003】
従来、磁性粒子として、樹脂粒子の内部に磁性体を有する磁性粒子（例えば、特許文献１，２参照）、及び樹脂粒子の外表面上に形成された磁性層を有する磁性粒子（例えば、特許文献３参照）が用いられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】ＷＯ２００４／０５６８９５Ａ１
【文献】特開昭５９－５００６９１号公報
【文献】特開平０７－０６３７６１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
樹脂粒子の内部に磁性体を有する従来の磁性粒子や、樹脂粒子の外表面上に磁性層を有する従来の磁性粒子では、該磁性粒子中の磁性体の含有量を十分に多くすることが困難である。そのため、従来の磁性粒子では、集磁性が低いことがある。
【0006】
また、従来の磁性粒子では、磁性体が酸化して、経時的に集磁性が低下することがある。
【0007】
また、従来の磁性粒子では、分散性が低いことがある。
【0008】
集磁性の低い磁性粒子を用いた場合には、磁石で集磁しきれない磁性粒子が多くなり、抗体や抗原等の目的物質の濃度等を測定する際に、測定精度及び測定感度が低下することがある。また、分散性の低い磁性粒子を用いた場合には、磁気分離後に磁性粒子が十分に再分散せず、測定精度、測定感度及び測定再現性が低下することがある。
【0009】
本発明の目的は、集磁性及び分散性を高めることができ、かつ集磁性を高く維持することができる磁性粒子を提供することである。また、本発明の限定的な目的は、長期間集磁性を高く維持することができる磁性粒子を提供することである。また、本発明の目的は、上記磁性粒子を用いた検査薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明の広い局面によれば、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる磁性粒子であって、内部に第１の磁性体を含む磁性体内包樹脂粒子と、前記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置され、かつ第２の磁性体を含む磁性層と、前記磁性層の外表面側に担持されており、かつ前記目的物質と特異的に相互作用する物質とを備える、磁性粒子が提供される。
【0011】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記第１の磁性体が、金属又は金属酸化物であり、前記第２の磁性体が、金属又は金属酸化物である。
【0012】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記磁性層の外表面上に配置されたシェル層を更に備え、前記シェル層の材料が、無機酸化物又は有機ポリマーを含み、前記シェル層と、前記物質とが結合している。
【0013】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記シェル層の材料が、前記無機酸化物を含み、前記無機酸化物が、ケイ素原子、ゲルマニウム原子、チタン原子又はジルコニウム原子を有する無機酸化物である。
【0014】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記物質が、抗原又は抗体である。
【0015】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記物質が、アビジン又はストレプトアビジンである。
【0016】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、磁性粒子１００体積％中、前記第１の磁性体と前記第２の磁性体と合計の含有量が、１０重量％以上９５重量％以下である。
【0017】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記第１の磁性体と前記第２の磁性体の含有量の合計１００重量％中、前記第１の磁性体の含有量が、１０重量％以上９０重量％以下である。
【0018】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記磁性体内包樹脂粒子の外表面から中心に向かって厚み１／３までの領域の１００体積％中における前記第１の磁性体の含有量の、前記磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面に向かって厚み２／３までの領域の１００体積％中における前記第１の磁性体の含有量に対する比が、０．８以上４．０以下である。
【0019】
本発明に係る磁性粒子のある特定の局面では、前記磁性粒子は、検査薬として用いられる。
【0020】
本発明の広い局面によれば、上述した磁性粒子を含む、検査薬が提供される。
【発明の効果】
【0021】
本発明に係る磁性粒子は、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。本発明に係る磁性粒子は、内部に第１の磁性体を含む磁性体内包樹脂粒子と、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置され、かつ第２の磁性体を含む磁性層と、上記磁性層の外表面側に担持されており、かつ上記目的物質と特異的に相互作用する物質とを備える。本発明に係る磁性粒子では、上記の構成が備えられているので、集磁性及び分散性を高めることができ、かつ集磁性を高く維持することができる。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【発明を実施するための形態】
【0023】
以下、本発明の詳細を説明する。
【0024】
（磁性粒子）
本発明に係る磁性粒子は、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。本発明に係る磁性粒子は、目的物質と特異的に相互作用させることができる磁性粒子である。本発明に係る磁性粒子は、内部に第１の磁性体を含む磁性体内包樹脂粒子と、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置され、かつ第２の磁性体を含む磁性層と、上記磁性層の外表面側に担持されており、かつ上記目的物質と特異的に相互作用する物質とを備える。
本発明に係る磁性粒子は、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。本発明に係る磁性粒子は、目的物質と特異的に相互作用させることができる磁性粒子である。本発明に係る磁性粒子は、内部に第１の磁性体を含む磁性体内包樹脂粒子と、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置され、かつ第２の磁性体を含む磁性層と、上記磁性層の外表面側に担持されており、かつ上記目的物質と特異的に相互作用する物質とを備える。
【0025】
本発明に係る磁性粒子では、上記の構成が備えられているので、集磁性及び分散性を高めることができ、かつ集磁性を高く維持することができる。本発明では、長期間集磁性を高く維持することができる。本発明に係る磁性粒子では、該磁性粒子を用いた目的物質の測定において、磁性粒子の単位重量あたりの目的物質との結合量を多くすることができ、従って、測定感度を高めることができる。
【0026】
従来の磁性粒子では、集磁性又は分散性が低いことがある。樹脂粒子の内部に磁性体を有する従来の磁性粒子では、樹脂粒子内部の空間が限られているため、磁性体の含有量を十分に多くすることが困難である。そのため、従来の磁性粒子では、集磁性を高めることが困難である。また、樹脂粒子の外表面上に磁性層を有する従来の磁性粒子において、磁性層に含まれる磁性体の含有量を多くした場合には、集磁性をある程度高めることができるものの、磁性粒子の粒子径が大きくなり、磁性粒子の単位面積あたりの目的物質の結合量が低下するため好ましくない。また、樹脂粒子の外表面上の磁性層を厚くすると、磁性粒子間での反発力が低下し、分散性が低下することがある。さらに、樹脂粒子の内部に磁性体を有する従来の磁性粒子及び樹脂粒子の外表面上に磁性層を有する従来の磁性粒子の双方において、粒子径が小さくなるほど磁性体の含有量が減少するため、集磁性が低下し、その結果、測定感度が低下することがある。
【0027】
さらに、樹脂粒子の内部に磁性体を有する従来の磁性粒子や、樹脂粒子の外表面上に磁性層を有する従来の磁性粒子では、磁性体が酸化して、経時的に集磁性が低下することがある。
【0028】
これに対して、本発明に係る磁性粒子では、磁性粒子の粒子径を小さく維持したままで、磁性体の含有量を多くすることができ、集磁性を高めることができる。その結果、磁性粒子の単位重量あたりの表面積を大きくしつつ集磁性を高くすることができるため、測定感度を高めることができる。また、本発明に係る磁性粒子では、分散性を高めることができる。さらに、本発明に係る磁性粒子では、磁性体がある程度劣化したとしても、集磁性を高く維持することができる。例えば、本発明に係る磁性粒子では、上記第２の磁性体を含む特定の磁性層がある程度劣化したとしても、上記第１の磁性体を含むので、集磁性を高く維持することができる。本発明に係る磁性粒子では、該磁性粒子を用いた目的物質の測定において、測定精度、測定感度及び測定再現性を高めることができる。
【0029】
上記磁性粒子の平均粒子径は、好ましくは０．５μｍ以上、より好ましくは１．０μｍ以上であり、好ましくは１０μｍ以下、より好ましくは７μｍ以下、更に好ましくは５μｍ以下、特に好ましくは４μｍ以下、最も好ましくは３．５μｍ以下である。上記磁性粒子の平均粒子径が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記磁性粒子の平均粒子径が上記上限以下であると、単位重量あたりの上記目的物質と特異的に相互作用する物質の含有量を多くすることができ、目的物質の結合量を多くすることができる。
【0030】
上記磁性粒子の平均粒子径は、数平均粒子径である。上記磁性粒子の粒子径は、例えば、任意の磁性粒子５０個を電子顕微鏡又は光学顕微鏡にて観察し、各磁性粒子の粒子径の平均値を算出することにより求められる。上記磁性粒子を乾燥させた試料を作製し、得られた試料を電子顕微鏡又は光学顕微鏡にて観察することが好ましい。
【0031】
上記磁性粒子の平均粒子径の変動係数（ＣＶ値）は、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下である。上記磁性粒子の平均粒子径の変動係数が上記上限以下であると、磁性粒子を用いた目的物質の測定において、測定精度をより一層高めることができる。
【0032】
上記変動係数（ＣＶ値）は、以下のようにして測定できる。
【0033】
ＣＶ値（％）＝（ρ／Ｄｎ）×１００
ρ：磁性粒子の粒子径の標準偏差
Ｄｎ：磁性粒子の粒子径の平均値
ρ：磁性粒子の粒子径の標準偏差
Ｄｎ：磁性粒子の粒子径の平均値
【0034】
以下、図面を参照しつつ、本発明を具体的に説明する。
【0035】
図１は、本発明の第１の実施形態に係る磁性粒子を模式的に示す断面図である。
【0036】
図１に示す磁性粒子１は、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。磁性粒子１は、磁性体内包樹脂粒子２と、磁性層３と、シェル層４と、目的物質と特異的に相互作用する物質５とを備える。物質５は、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、抗原及び抗体等の生理活性物質等である。
【0037】
磁性体内包樹脂粒子２は、樹脂粒子２１と、第１の磁性体２２とを有する。磁性体内包樹脂粒子２は、内部に第１の磁性体２２を含む。磁性体内包樹脂粒子２において、樹脂粒子２１は、内部に第１の磁性体２２を含む。第１の磁性体２２が、磁性体内包樹脂粒子２の内部に分散している。磁性体内包樹脂粒子２において、第１の磁性体２２が、樹脂粒子２１の内部に分散している。
【0038】
第１の磁性体２２が、磁性体内包樹脂粒子２の内部に均一に分布している。上記第１の磁性体は、磁性体内包樹脂粒子の内部に均一に分布していなくてもよい。例えば、磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面にかけて、第１の磁性体の含有量が多くなるように第１の磁性体が配置されていてもよい。
【0039】
磁性層３は、磁性体内包樹脂粒子２の外表面上に配置されている。磁性層３は、磁性体内包樹脂粒子２における樹脂粒子２１の外表面上に配置されている。磁性層３は、第２の磁性体を含む。シェル層４は、磁性層３の外表面上に配置されている。磁性層３の外表面側に、物質５が担持されている。シェル層４の外表面上に、物質５が担持されている。シェル層４と、物質５とが結合している。物質５は、磁性粒子１の表面に存在する。
【0040】
磁性層３は、単層の磁性層である。磁性層３は、磁性体内包樹脂粒子２の外表面の全体を覆っている。上記磁性粒子では、上記磁性層が上記磁性体内包樹脂粒子の外表面の全体を覆っていてもよく、上記磁性層が上記磁性体内包樹脂粒子の表面の一部を覆っていてもよい。上記磁性粒子では、上記磁性層は、単層の磁性層であってもよく、２層以上の層から構成される多層の磁性層であってもよい。
【0041】
シェル層４は、単層のシェル層である。シェル層４は、磁性層３の外表面の全体を覆っている。上記磁性粒子では、上記シェル層が上記磁性層の外表面の全体を覆っていてもよく、上記シェル層が上記磁性層の表面の一部を覆っていてもよい。
【0042】
図２は、本発明の第２の実施形態に係る磁性粒子を模式的に示す断面図である。
【0043】
図２に示す磁性粒子１Ａは、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。磁性粒子１Ａは、磁性体内包樹脂粒子２Ａと、磁性層３Ａと、目的物質と特異的に相互作用する物質５Ａとを備える。物質５Ａは、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、抗原及び抗体等である。磁性粒子１Ａは、上記シェル層を備えない。
【0044】
【0045】
磁性体内包樹脂粒子２Ａでは、第１の磁性体２２Ａが、磁性体内包樹脂粒子２Ａの内部に均一に分布していない。磁性体内包樹脂粒子２Ａの中心から外表面にかけて、第１の磁性体２２Ａの含有量が多くなるように第１の磁性体２２Ａが配置されている。なお、上記第１の磁性体は、磁性体内包樹脂粒子の内部に均一に分布していてもよい。
【0046】
磁性層３Ａは、磁性体内包樹脂粒子２Ａの外表面上に配置されている。磁性層３Ａは、第２の磁性体を含む。磁性層３Ａの外表面上に、物質５Ａが担持されている。物質５Ａは、磁性粒子１Ａの表面に存在する。
【0047】
磁性層３Ａは、単層の磁性層である。磁性層３Ａは、磁性体内包樹脂粒子２Ａの外表面の全体を覆っている。上記磁性粒子では、上記磁性層は、単層の磁性層であってもよく、２層以上の層から構成される多層の磁性層であってもよい。
【0048】
図３は、本発明の第３の実施形態に係る磁性粒子を模式的に示す断面図である。
【0049】
図３に示す磁性粒子１Ｂは、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。磁性粒子１Ｂは、磁性体内包樹脂粒子２Ｂと、磁性層３Ｂと、シェル層４Ｂと、目的物質と特異的に相互作用する物質５Ｂとを備える。物質５Ｂは、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、抗原及び抗体等の生理活性物質等である。
【0050】
磁性体内包樹脂粒子２Ｂは、樹脂粒子２１１Ｂと、第１の磁性体２２Ｂと、樹脂層２１２Ｂとを有する。磁性体内包樹脂粒子２Ｂは、内部に第１の磁性体２２Ｂを含む。磁性体内包樹脂粒子２Ｂにおいて、第１の磁性体２２Ｂが層状に含まれている。磁性体内包樹脂粒子２Ｂは、内部に第１の磁性体２２Ｂを含む磁性層を有する。樹脂粒子２１１Ｂは、第１の磁性体２２Ｂを含まない。樹脂粒子２１１Ｂと樹脂層２１２Ｂとの間に第１の磁性体２２Ｂが配置されていることによって、磁性体内包樹脂粒子２Ｂが、内部に第１の磁性体２２Ｂを含む。磁性体内包樹脂粒子２Ｂにおいて、樹脂粒子２１１Ｂの外表面上に第１の磁性体２２Ｂを含む磁性層が配置されており、該磁性層の外表面上に樹脂層２１２Ｂが配置されている。
【0051】
磁性層３Ｂは、磁性体内包樹脂粒子２Ｂの外表面上に配置されている。磁性層３Ｂは、第２の磁性体を含む。シェル層４Ｂは、磁性層３Ｂの外表面上に配置されている。磁性層３Ｂの外表面側に、物質５Ｂが担持されている。シェル層４Ｂの外表面上に、物質５Ｂが担持されている。シェル層４Ｂと、物質５Ｂとが結合している。物質５Ｂは、磁性粒子１Ｂの表面に存在する。
【0052】
磁性層３Ｂは、単層の磁性層である。磁性層３Ｂは、磁性体内包樹脂粒子２Ｂの外表面の全体を覆っている。上記磁性粒子では、上記磁性層は、単層の磁性層であってもよく、２層以上の層から構成される多層の磁性層であってもよい。
【0053】
シェル層４Ｂは、単層のシェル層である。シェル層４Ｂは、磁性層３Ｂの外表面の全体を覆っている。
【0054】
図４は、本発明の第４の実施形態に係る磁性粒子を模式的に示す断面図である。
【0055】
図４に示す磁性粒子１Ｃは、目的物質と特異的に相互作用させるために用いられる。磁性粒子１Ｃは、磁性体内包樹脂粒子２Ｃと、磁性層３Ｃと、シェル層４Ｃと、目的物質と特異的に相互作用する物質５Ｃとを備える。物質５Ｃは、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、抗原及び抗体等の生理活性物質等である。
【0056】
磁性体内包樹脂粒子２Ｃは、樹脂粒子２１１Ｃと、第１の磁性体２２１Ｃ，２２２Ｃと、樹脂層２１２Ｃとを有する。磁性体内包樹脂粒子２Ｃは、内部に第１の磁性体２２１Ｃ，２２２Ｃを含む。第１の磁性体２２１Ｃが、磁性体内包樹脂粒子２Ｃの内部に分散している。第１の磁性体２２１Ｃが、樹脂粒子２１１Ｃの内部に分散している。磁性体内包樹脂粒子２Ｃにおいて、第１の磁性体２２１Ｃが、樹脂粒子２１１Ｃの内部に分散している。磁性体内包樹脂粒子２Ｃにおいて、第１の磁性体２２２Ｃが層状に含まれている。磁性体内包樹脂粒子２Ｃは、内部に第１の磁性体２２２Ｃを含む磁性層を有する。樹脂粒子２１１Ｃと樹脂層２１２Ｃとの間に第１の磁性体２２２Ｃが配置されていることによって、磁性体内包樹脂粒子２Ｃが、内部に第１の磁性体２２２Ｃを含む。磁性体内包樹脂粒子２Ｃにおいて、樹脂粒子２１１Ｃの外表面上に第１の磁性体２２２Ｃを含む磁性層が配置されており、該磁性層の外表面上に樹脂層２１２Ｃが配置されている。
【0057】
磁性層３Ｃは、磁性体内包樹脂粒子２Ｃの外表面上に配置されている。磁性層３Ｃは、第２の磁性体を含む。シェル層４Ｃは、磁性層３Ｃの外表面上に配置されている。磁性層３Ｃの外表面側に、物質５Ｃが担持されている。シェル層４Ｃの外表面上に、物質５Ｃが担持されている。シェル層４Ｃと、物質５Ｃとが結合している。物質５Ｃは、磁性粒子１Ｃの表面に存在する。
【0058】
磁性層３Ｃは、単層の磁性層である。磁性層３Ｃは、磁性体内包樹脂粒子２Ｃの外表面の全体を覆っている。上記磁性粒子では、上記磁性層は、単層の磁性層であってもよく、２層以上の層から構成される多層の磁性層であってもよい。
【0059】
シェル層４Ｃは、単層のシェル層である。シェル層４Ｃは、磁性層３Ｃの外表面の全体を覆っている。
【0060】
以下、磁性粒子の他の詳細について説明する。
【0061】
（磁性体内包樹脂粒子）
上記磁性体内包樹脂粒子は、樹脂を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、樹脂粒子を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、内部に第１の磁性体を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、以下の（１）又は（２）の構成を備えることによって、内部に第１の磁性体を含むことが好ましい。（１）樹脂粒子と第１の磁性体を含み、該樹脂粒子の内部に該第１の磁性体が分散している。（２）樹脂粒子と、第１の磁性体と、樹脂層とを含み、該樹脂粒子の外表面上において、磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面に向かって、第１の磁性体を含む磁性層と、樹脂層とが交互に配置されている。上記磁性体内包樹脂粒子は、構成（１）のみを備えていてもよく、構成（２）のみを備えていてもよく、構成（１）と構成（２）とを備えていてもよい。なお、上記磁性体内包樹脂粒子が構成（２）を備える場合には、樹脂粒子の外表面上に第１の磁性体を含む磁性層が配置されていることが好ましく、磁性体内包樹脂粒子の最外層は樹脂層であることが好ましい。上記構成（１）を備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図１，２に示す磁性体内包樹脂粒子である。上記構成（２）を備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図３に示す磁性体内包樹脂粒子である。上記構成（１）と上記構成（２）とを備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図４に示す磁性体内包樹脂粒子である。
上記磁性体内包樹脂粒子は、樹脂を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、樹脂粒子を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、内部に第１の磁性体を含む。上記磁性体内包樹脂粒子は、以下の（１）又は（２）の構成を備えることによって、内部に第１の磁性体を含むことが好ましい。（１）樹脂粒子と第１の磁性体を含み、該樹脂粒子の内部に該第１の磁性体が分散している。（２）樹脂粒子と、第１の磁性体と、樹脂層とを含み、該樹脂粒子の外表面上において、磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面に向かって、第１の磁性体を含む磁性層と、樹脂層とが交互に配置されている。上記磁性体内包樹脂粒子は、構成（１）のみを備えていてもよく、構成（２）のみを備えていてもよく、構成（１）と構成（２）とを備えていてもよい。なお、上記磁性体内包樹脂粒子が構成（２）を備える場合には、樹脂粒子の外表面上に第１の磁性体を含む磁性層が配置されていることが好ましく、磁性体内包樹脂粒子の最外層は樹脂層であることが好ましい。上記構成（１）を備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図１，２に示す磁性体内包樹脂粒子である。上記構成（２）を備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図３に示す磁性体内包樹脂粒子である。上記構成（１）と上記構成（２）とを備える磁性体内包樹脂粒子は、例えば、図４に示す磁性体内包樹脂粒子である。
【0062】
上記磁性体内包樹脂粒子が上記構成（２）を備える場合に、該磁性体内包樹脂粒子は、１層の樹脂層と、第１の磁性体を含む１層の磁性層を有していてもよく、２層以上の樹脂層と、第１の磁性体を含む２層以上の磁性層を有していてもよい。
【0063】
＜樹脂粒子及び樹脂層＞
上記樹脂粒子及び上記樹脂層の材料としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン等のポリオレフィン樹脂；ポリメチルメタクリレート及びポリメチルアクリレート等のアクリル樹脂；ポリカーボネート、ポリアミド、フェノールホルムアルデヒド樹脂、メラミンホルムアルデヒド樹脂、ベンゾグアナミンホルムアルデヒド樹脂、尿素ホルムアルデヒド樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、ベンゾグアナミン樹脂、尿素樹脂、エポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、飽和ポリエステル樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリスルホン、ポリフェニレンオキサイド、ポリアセタール、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリエーテルエーテルケトン、ポリエーテルスルホン、ジビニルベンゼン重合体、並びにジビニルベンゼン共重合体等が挙げられる。上記ジビニルベンゼン共重合体等としては、ジビニルベンゼン－スチレン共重合体及びジビニルベンゼン－（メタ）アクリル酸エステル共重合体等が挙げられる。上記樹脂粒子及び上記樹脂層の材料は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。また、上記磁性体内包樹脂粒子が上記構成（２）を備える場合、上記樹脂粒子の材料と上記樹脂層の材料とは同一であってもよく、異なっていてもよい。
上記樹脂粒子及び上記樹脂層の材料としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン等のポリオレフィン樹脂；ポリメチルメタクリレート及びポリメチルアクリレート等のアクリル樹脂；ポリカーボネート、ポリアミド、フェノールホルムアルデヒド樹脂、メラミンホルムアルデヒド樹脂、ベンゾグアナミンホルムアルデヒド樹脂、尿素ホルムアルデヒド樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、ベンゾグアナミン樹脂、尿素樹脂、エポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、飽和ポリエステル樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリスルホン、ポリフェニレンオキサイド、ポリアセタール、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリエーテルエーテルケトン、ポリエーテルスルホン、ジビニルベンゼン重合体、並びにジビニルベンゼン共重合体等が挙げられる。上記ジビニルベンゼン共重合体等としては、ジビニルベンゼン－スチレン共重合体及びジビニルベンゼン－（メタ）アクリル酸エステル共重合体等が挙げられる。上記樹脂粒子及び上記樹脂層の材料は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。また、上記磁性体内包樹脂粒子が上記構成（２）を備える場合、上記樹脂粒子の材料と上記樹脂層の材料とは同一であってもよく、異なっていてもよい。
【0064】
上記磁性体内包樹脂粒子を良好に得る観点からは、上記樹脂粒子は、多孔質構造を有することが好ましい。上記構成（１）を備える磁性体内包樹脂粒子における樹脂粒子は、多孔質構造を有することが好ましい。上記構成（２）を備える磁性体内包樹脂粒子における樹脂粒子は、多孔質構造を有していてもよく、多孔質構造を有していなくてもよい。
【0065】
上記樹脂粒子のＢＥＴ比表面積は、好ましくは２０ｍ２／ｇ以上、より好ましくは４０ｍ２／ｇ以上、更に好ましくは１００ｍ２／ｇ以上であり、好ましくは８００ｍ２／ｇ以下、より好ましくは７００ｍ２／ｇ以下、更に好ましくは６５０ｍ２／ｇ以下である。上記ＢＥＴ比表面積が上記下限以上及び上記上限以下であると、磁性体内包樹脂粒子に内包される第１の磁性体の含有量を多くすることができ、集磁性をより一層高めることができる。
【0066】
上記樹脂粒子の平均細孔径は、好ましくは０．５ｎｍ以上、より好ましくは１ｎｍ以上であり、好ましくは３０ｎｍ以下、より好ましくは１０ｎｍ以下である。上記平均細孔径が上記下限以上及び上記上限以下であると、樹脂粒子の内部に磁性体をより一層容易に含有させることができ、磁性体内包樹脂粒子に内包される第１の磁性体の含有量を多くすることができ、集磁性をより一層高めることができる。
【0067】
上記樹脂粒子のＢＥＴ比表面積、及び平均細孔径は、ＢＪＨ法に準拠して、窒素の吸着等温線から測定することができる。上記樹脂粒子のＢＥＴ比表面積、及び平均細孔径を測定するための測定装置としては、カンタクローム・インスツルメンツ社製「ＮＯＶＡ４２００ｅ」等が挙げられる。
【0068】
上記ＢＥＴ比表面積及び上記平均細孔径等の好ましい範囲を満足する樹脂粒子は、例えば、下記の工程を備える樹脂粒子の製造方法により得ることができる。重合性モノマーと、上記重合性モノマーとは反応しない有機溶剤とを混合し、重合性モノマー溶液を調整する工程。上記重合性モノマー溶液と、アニオン性分散安定剤とを極性溶媒に添加して乳化させて乳化液を得る工程。上記乳化液を数回に分けて添加し、種粒子にモノマーを吸収させて、モノマーが膨潤した種粒子を含む懸濁液を得る工程。上記重合性モノマーを重合させて樹脂粒子を得る工程。上記重合性モノマーとしては、単官能性モノマー、及び多官能性モノマー等が挙げられる。上記重合性モノマーとは反応しない有機溶剤は、重合系の媒体である水等の極性溶媒と相溶しないものであれば、特に限定されない。上記有機溶剤としては、シクロヘキサン、トルエン、キシレン、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アリル、酢酸プロピル、クロロホルム、メチルシクロヘキサン、メチルエチルケトン等が挙げられる。上記有機溶剤の添加量は、上記重合性モノマー成分１００重量部に対して、１重量部～８０重量部であることが好ましく、２０重量部～６０重量部であることがより好ましい。上記有機溶剤の添加量が上記の好ましい範囲であると、ＢＥＴ比表面積及び上記平均細孔径等をより一層好適な範囲に制御することができ、粒子内部で緻密な細孔が得られやすくなる。
【0069】
上記樹脂粒子の平均粒子径は、好ましくは０．５μｍ以上、より好ましくは１μｍ以上、好ましくは１０μｍ以下、より好ましくは７μｍ以下、更に好ましくは５μｍ以下、特に好ましくは４μｍ以下、最も好ましくは３．５μｍ以下である。上記樹脂粒子の平均粒子径が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記樹脂粒子の平均粒子径が上記上限以下であると、磁性粒子の沈降を効果的に抑え、分散性をより一層高めることができ、また、磁性粒子の粒子径を小さくすることができるので、目的物質を効果的に相互作用させることができる。
【0070】
上記樹脂粒子の平均粒子径は、数平均粒子径である。上記樹脂粒子の平均粒子径は、任意の樹脂粒子５０個を電子顕微鏡又は光学顕微鏡にて観察し、各樹脂粒子の粒子径の平均値を算出することにより求められる。上記磁性粒子又は上記樹脂粒子を乾燥させた試料を作製し、得られた試料を電子顕微鏡又は光学顕微鏡にて観察することが好ましい。
【0071】
＜第１の磁性体＞
上記第１の磁性体は、金属又は金属酸化物であることが好ましく、強磁性体又は常磁性体であることがより好ましい。
上記第１の磁性体は、金属又は金属酸化物であることが好ましく、強磁性体又は常磁性体であることがより好ましい。
【0072】
上記第１の磁性体としては、鉄、コバルト、ニッケル、ルテニウム、ランタノイド、フェライト等が挙げられる。上記フェライトとしては、マグへマイト（γＦｅ２Ｏ３）及びＭＦｅ２Ｏ４で表される化合物（ＭＦｅ２Ｏ４中、Ｍは、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｌｉ０．５Ｆｅ０．５等）等が挙げられる。上記フェライトは、四酸化三鉄（Ｆｅ３Ｏ４）であることが好ましい。上記第１の磁性体は、合金であってもよい。上記合金としては、ニッケル－コバルト合金、コバルト－タングステン合金、鉄－白金合金、及び鉄－コバルト合金等が挙げられる。また、上記金属は、金属イオンであってもよい。上記第１の磁性体は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【0073】
集磁性をより一層高め、かつ高い集磁性をより一層長期間維持する観点からは、上記第１の磁性体は、コバルト又はフェライトであることが好ましく、コバルト又は四酸化三鉄であることがより好ましく、コバルトであることが更に好ましい。
【0074】
上記磁性粒子１００体積％中、上記第１の磁性体の含有量は、好ましくは１０体積％以上、より好ましくは２０体積％以上、好ましくは８０体積％以下、より好ましくは７０体積％以下である。上記第１の磁性体の含有量が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記第１の磁性体の含有量が上記上限以下であると、分散性をより一層高めることができる。
【0075】
上記第１の磁性体と上記第２の磁性体の合計１００重量％中、上記第１の磁性体の含有量は、好ましくは１０重量％以上、より好ましくは２０重量％以上、好ましくは９０重量％以下、より好ましくは８５重量％以下である。上記第１の磁性体の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、集磁性をより一層高め、かつ高い集磁性をより一層長期間維持することができる。
【0076】
上記磁性体内包樹脂粒子の外表面から中心に向かって厚み１／３までの領域（Ｒ１）の１００体積％中、上記第１の磁性体の含有量（以下、含有量（１）と記載することがある）は、好ましくは２０体積％以上、より好ましくは３０体積％以上であり、好ましくは７０体積％以下、より好ましくは６０体積％以下である。上記含有量（１）が上記下限以上及び上記上限以下であると、集磁性をより一層高めることができる。また、上記含有量（１）が上記上限以下であると、樹脂骨格が良好に保持され、粒子形状を良好に保持することができる。上記領域（Ｒ１）は、図５において、磁性体内包樹脂粒子２の破線Ｌ１よりも外側の領域である。
【0077】
上記磁性体内包樹脂粒子の中心から外表面に向かって厚み２／３までの領域（Ｒ２）の１００体積％中、上記第１の磁性体の含有量（以下、含有量（２）と記載することがある）は、好ましくは１５体積％以上、より好ましくは３０体積％以上であり、好ましくは７０体積％以下、より好ましくは６０体積％以下である。上記含有量（２）が上記下限以上及び上記上限以下であると、集磁性をより一層高めることができる。上記領域（Ｒ２）は、図５において、磁性体内包樹脂粒子２の破線Ｌ１よりも内側の領域である。
【0078】
上記含有量（１）の上記含有量（２）に対する比（含有量（１）／含有量（２））は、好ましくは０．８以上、より好ましくは１．０以上であり、好ましくは４．０以下、より好ましくは３．０以下である。上記比（含有量（１）／含有量（２））が上記下限以上及び上記上限以下であると、集磁性及び分散性をより一層高めることができる。
【0079】
上記含有量（１）と上記含有量（２）との差の絶対値は、２５体積％以下であることが好ましく、１０体積％以下であることがより好ましい。上記第１の磁性体は、上記磁性体内包樹脂粒子の内部に均一に存在していることが好ましく、上記磁性体内包樹脂粒子の内部に均一に含まれていることが好ましい。
【0080】
上記含有量（１）及び上記含有量（２）は、以下のようにして測定できる。
【0081】
磁性粒子の含有量が３０重量％となるように、Ｋｕｌｚｅｒ社製「テクノビット４０００」に添加し、分散させて、磁性粒子検査用埋め込み樹脂体を作製する。検査用埋め込み樹脂体中に分散した磁性粒子の中心付近を通るようにイオンミリング装置（日立ハイテクノロジーズ社製「ＩＭ４０００」）を用いて、磁性粒子の断面を切り出す。そして、電界放射型透過電子顕微鏡（日本電子社製「ＪＥＭ－２０１０ＦＥＦ」）を用いて、エネルギー分散型Ｘ線分析装置（ＥＤＳ）により、磁性体内包樹脂粒子の厚み方向における第１の磁性体の含有量を測定することで、磁性体内包樹脂粒子の厚み方向における第１の磁性体の含有量の分布結果が得られる。この結果から、上記含有量（１）及び上記含有量（２）を算出することができる。上記含有量（１）及び上記含有量（２）は、任意に選択された２０個の磁性体内包樹脂粒子の含有量（１）及び含有量（２）を算術平均することにより算出された平均含有量であることが好ましい。
【0082】
上記磁性体内包樹脂粒子の製造方法は特に限定されない。例えば、多孔質構造を有する上記樹脂粒子と、上記第１の磁性体とを混合し、該樹脂粒子の内部に該第１の磁性体を導入することで、上記構成（１）を備える磁性体内包樹脂粒子を得ることができる。また、例えば、中実構造を有する上記樹脂粒子と上記第１の磁性体を混合し、該樹脂粒子の外表面に該第１の磁性体を被覆し、次いで該第１の磁性体の外表面を樹脂で被覆することにより、上記構成（２）を備える磁性体内包樹脂粒子を得ることができる。
【0083】
（磁性層）
本発明に係る磁性粒子は、第２の磁性体を含む磁性層を備える。上記第２の磁性体を含む磁性層は、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置される。上記第１の磁性体と上記第２の磁性体とは、同一であってもよく、異なっていてもよい。
本発明に係る磁性粒子は、第２の磁性体を含む磁性層を備える。上記第２の磁性体を含む磁性層は、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に配置される。上記第１の磁性体と上記第２の磁性体とは、同一であってもよく、異なっていてもよい。
【0084】
上記第２の磁性体は、金属又は金属酸化物であることが好ましく、強磁性体又は常磁性体であることがより好ましい。
【0085】
上記第２の磁性体としては、鉄、コバルト、ニッケル、ルテニウム、ランタノイド及びフェライト等が挙げられる。上記フェライトとしては、マグへマイト（γＦｅ２Ｏ３）及びＭＦｅ２Ｏ４で表される化合物（ＭＦｅ２Ｏ４中、Ｍは、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｍｇ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｌｉ０．５Ｆｅ０．５等）等が挙げられる。上記フェライトは、四酸化三鉄（Ｆｅ３Ｏ４）であることが好ましい。上記第２の磁性体は、合金であってもよい。上記合金としては、ニッケル－コバルト合金、コバルト－タングステン合金、鉄－白金合金、及び鉄－コバルト合金等が挙げられる。また、上記金属は、金属イオンであってもよい。上記第２の磁性体は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【0086】
集磁性をより一層高め、かつ高い集磁性をより一層長期間維持する観点からは、上記第２の磁性体は、フェライトであることが好ましく、四酸化三鉄であることがより好ましい。
【0087】
上記第１の磁性体と上記第２の磁性体の合計１００重量％中、上記第２の磁性体の含有量は、好ましくは１０重量％以上、より好ましくは３０重量％以上、好ましくは９０重量％以下、より好ましくは７０重量％以下である。上記第２の磁性体の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、集磁性をより一層高め、かつ高い集磁性をより一層長期間維持することができる。
【0088】
上記磁性粒子１００体積％中、上記第２の磁性体の含有量は、好ましくは４体積％以上、より好ましくは８体積％以上、好ましくは４０体積％以下、より好ましくは２５体積％以下である。上記第２の磁性体の含有量が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記第２の磁性体の含有量が上記上限以下であると、分散性をより一層高めることができる。
【0089】
上記磁性粒子１００重量％中、上記第１の磁性体と上記第２の磁性体との合計の含有量は、好ましくは１０重量％以上、より好ましくは１５重量％以上、好ましくは９５重量％以下、より好ましくは８０重量％以下である。上記合計の含有量が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記合計の含有量が上記上限以下であると、分散性をより一層高めることができる。
【0090】
上記磁性粒子１００体積％中、上記第１の磁性体と上記第２の磁性体との合計の含有量は、好ましくは２０体積％以上、より好ましくは３０体積％以上、好ましくは８０体積％以下、より好ましくは７０体積％以下である。上記合計の含有量が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記合計の含有量が上記上限以下であると、分散性をより一層高めることができる。
【0091】
上記磁性体内包樹脂粒子の外表面の全表面積１００％中、上記第２の磁性体を含む磁性層により覆われている表面積は、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは１００％である。上記表面積が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができ、かつ高い集磁性をより一層長期間維持することができ、さらに分散性をより一層高めることができる。
【0092】
上記磁性層の厚みは、好ましくは２０ｎｍ以上、より好ましくは５０ｎｍ以上であり、好ましくは１０００ｎｍ以下、より好ましくは２００ｎｍ以下である。上記磁性層の厚みは、磁性層が多層である場合には磁性層全体の厚みである。上記磁性層の厚みが上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができ、かつ高い集磁性をより一層長期間維持することができる。上記磁性層の厚みが上記上限以下であると、磁性粒子の沈降を効果的に抑え、分散性をより一層高めることができ、また、磁性粒子の粒子径を小さくすることができるので、磁性粒子の単位重量当たりの目的物質の結合量を多くすることができる。
【0093】
上記磁性層の厚みは、例えば透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて、磁性粒子の断面を観察することにより測定できる。上記磁性層の厚みについては、任意の磁性層の厚み５箇所の平均値を１個の磁性粒子の磁性層の厚みとして算出することが好ましく、磁性層全体の厚みの平均値を１個の磁性粒子の磁性層の厚みとして算出することがより好ましい。上記磁性層の厚みは、任意の磁性粒子１０個について、各磁性粒子の磁性層の厚みの平均値を算出することにより求めることが好ましい。
【0094】
上記磁性層は、連続層であってもよく、上記第２の磁性体が粒子状に集合した粒状物によって形成された層であってもよい。また、上記磁性層は、樹脂粒子の外表面上の全部を被覆していてもよく、一部を被覆していてもよい。また、上記磁性層は、海島構造を有していてもよい。集磁性の低下を効果的に抑える観点からは、上記磁性層は、連続層であることが好ましい。上記連続層は、例えば、微粒子の凝集体のように磁性層に無数の継ぎ目（例えば磁性粒子１個あたり１０００個以上）が存在する形状とは異なり、継ぎ目が少ない或いは継ぎ目が無い構造を有する層を指す。集磁性をより一層高める観点からは、上記磁性層は、第２の磁性体が粒子状に集合した粒状物によって形成された層であることが好ましい。
【0095】
上記磁性層が、上記第２の磁性体が粒子状に集合した粒状物によって形成された層である場合に、該粒状物の平均粒径は、好ましくは１ｎｍ以上、より好ましくは２ｎｍ以上、好ましくは５０ｎｍ以下、より好ましくは２０ｎｍ以下である。上記粒状物の平均粒径が上記下限以上であると、集磁性をより一層高めることができる。上記粒状物の平均粒径が上記上限以下であると、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面に第２の磁性体を良好に配置することができ、磁性層を良好に形成させることができる。
【0096】
上記磁性層の形成方法は、特に限定されない。例えば上記磁性体内包樹脂粒子と上記第２の磁性体の粒状物とを混合することにより、上記磁性体内包樹脂粒子の外表面上に磁性層を形成させることができる。
【0097】
（シェル層）
本発明に係る磁性粒子は、シェル層を備えることが好ましい。上記シェル層の材料は、無機酸化物又は有機ポリマーを含む。上記シェル層は、該シェル層の材料として上記無機酸化物を含む無機酸化物シェル層であるか、又は該シェル層の材料として上記有機ポリマーを含む有機ポリマーシェル層である。上記シェル層は、上記第２の磁性体を含む上記磁性層の外表面上に配置されることが好ましい。上記磁性粒子が上記シェル層を備えることにより、上記目的物質と特異的に相互作用する物質を磁性粒子の表面に良好に配置することができ、また、磁性粒子の分散性をより一層高めることができる。また、上記磁性粒子がシェル層を備えることにより、磁性体内包樹脂粒子等からの不純物の溶出、磁性体の溶出、及び磁性層からの不純物の溶出を強固に防ぐことができる。そのため、上記磁性粒子が上記シェル層を備える場合には、検査薬として好適に用いることができる。
本発明に係る磁性粒子は、シェル層を備えることが好ましい。上記シェル層の材料は、無機酸化物又は有機ポリマーを含む。上記シェル層は、該シェル層の材料として上記無機酸化物を含む無機酸化物シェル層であるか、又は該シェル層の材料として上記有機ポリマーを含む有機ポリマーシェル層である。上記シェル層は、上記第２の磁性体を含む上記磁性層の外表面上に配置されることが好ましい。上記磁性粒子が上記シェル層を備えることにより、上記目的物質と特異的に相互作用する物質を磁性粒子の表面に良好に配置することができ、また、磁性粒子の分散性をより一層高めることができる。また、上記磁性粒子がシェル層を備えることにより、磁性体内包樹脂粒子等からの不純物の溶出、磁性体の溶出、及び磁性層からの不純物の溶出を強固に防ぐことができる。そのため、上記磁性粒子が上記シェル層を備える場合には、検査薬として好適に用いることができる。
【0098】
上記シェル層は、磁性体を含んでもよく、磁性体を含まなくてもよい。上記シェル層は、磁性体を含まないことがより好ましい。上記シェル層は、磁性体を含まない非磁性層であることがより好ましい。
【0099】
磁性粒子の分散性をより一層高める観点からは、上記シェル層の材料は、上記無機酸化物を含むことが好ましく、無機酸化物を含む無機酸化物シェル層であることがより好ましい。
【0100】
＜無機酸化物＞
上記無機酸化物とは、金属元素又は半金属元素と、酸素原子とを少なくとも有する化合物を意味する。上記無機酸化物としては、特に限定されない。上記無機酸化物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が用いられてもよい。
上記無機酸化物とは、金属元素又は半金属元素と、酸素原子とを少なくとも有する化合物を意味する。上記無機酸化物としては、特に限定されない。上記無機酸化物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が用いられてもよい。
【0101】
上記無機酸化物は、ケイ素原子、ゲルマニウム原子、チタン原子又はジルコニウム原子を有する無機酸化物であることが好ましい。また、上記無機酸化物は、上記磁性層の外表面と反応可能な官能基を有することが好ましい。磁性表面と非磁性層を反応させる方法は特に限定されないが、例えば共有結合や配位結合が挙げられる。
【0102】
上記無機酸化物としては、具体的には、オルトケイ酸テトラエチル等のアルコキシシラン及びその加水分解物に代表されるシラン化合物、ゲルマニウムテトラエトキシド等のアルコキシゲルマニウム及びその加水分解物に代表されるゲルマニウム化合物、チタンテトラエトキシド等のアルコキシチタン及びその加水分解物に代表されるチタン化合物、ジルコニウムテトラブトキシド等のアルコキシジルコニウム及びその加水分解物に代表されるジルコニウム化合物等が挙げられる。
【0103】
磁性粒子の分散性を高く維持する観点からは、上記無機酸化物は、比重の小さい化合物であることが好ましく、上記の例示の中では、上記シラン化合物であることが最も好ましい。
【0104】
上記シラン化合物としては、例えば、オルトケイ酸テトラエチル；ビニルトリメトキシシラン、ビニルトリエトキシシラン、７－オクテニルトリメトキシシラン等のビニル基含有シラン化合物；２－（３，４－エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、３－グリシドキシプロピルメチルジメトキシシラン、３－グリシドキシプロピルトリメトキシシラン、３－グリシドキシプロピルメチルジエトキシシラン、３－グリシドキシプロピルトリエトキシシラン、８－グリシドキシオクチルトリメトキシシラン等のエポキシ基含有シラン化合物；ｐ－スチリルトリメトキシシラン等のスチリル基含有シラン化合物；３－メタクリロキシプロピルメチルジメトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルメチルジエトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルトリエトキシシラン、８－メタクリロキシオクチルトリメトキシシラン等のメタクリル基含有シラン化合物；３－アクリロキシプロピルトリメトキシシラン等のアクリル基含有シラン化合物；Ｎ－２－（アミノエチル）－３－アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ－２－（アミノエチル）－３－アミノプロピルトリメトキシシラン、３－アミノプロピルトリメトキシシラン、３－アミノプロピルトリエトキシシラン、３－トリエトキシシリル－Ｎ－（１，３－ジメチル－ブチリデン）プロピルアミン、Ｎ－フェニル－３－アミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ－（ビニルベンジル）－２－アミノエチル－３－アミノプロピルトリメトキシシラン塩酸塩、Ｎ－２－（アミノエチル）－８－アミノオクチルトリメトキシシラン等のアミノ基含有シラン化合物；トリス－（トリメトキシシリルプロピル）イソシアヌレート等のイソシアヌレート基含有シラン化合物；３－ウレイドプロピルトリアルコキシシラン等のウレイド基含有シラン化合物；３－メルカプトプロピルメチルジメトキシシラン、３－メルカプトプロピルトリメトキシシラン等のメルカプト基含有シラン化合物；３－イソシアネートプロピルトリエトキシシラン等のイソシアネート基含有シラン化合物；３－トリメトキシシリルプロピルコハク酸無水物等のカルボン酸無水物含有シラン化合物；３－トリメトキシシリルプロピルコハク酸無水物の加水分解物等のカルボン酸含有シラン化合物等が挙げられる。
【0105】
例えば、磁性層の表面を種々の官能基を有するシラン化合物で処理することにより、上記磁性層の外表面上にケイ素原子を有する無機酸化物シェル層を形成させることができる。
【0106】
上記無機酸化物シェル層１００重量％中、上記無機酸化物の含有量は、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上である。
【0107】
＜有機ポリマー＞
上記有機ポリマーは、特に限定されないが、ビニル系ポリマーであることが好ましい。
上記有機ポリマーは、特に限定されないが、ビニル系ポリマーであることが好ましい。
【0108】
上記ビニル系ポリマーの材料に用いられるビニル系モノマーとしては、スチレン、α－メチルスチレン、クロルスチレン、ジビニルベンゼン等のスチレン単量体；メチルビニルエーテル、エチルビニルエーテル、プロピルビニルエーテル等のビニルエーテル化合物；酢酸ビニル、酪酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ステアリン酸ビニル等の酸ビニルエステル化合物；塩化ビニル、フッ化ビニル等のハロゲン含有単量体；（メタ）アクリル酸；メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２－エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、セチル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、イソボルニル（メタ）アクリレート、エチレングリコール（メタ）アクリレート等のアルキル（メタ）アクリレート化合物；２－ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、グリセロール（メタ）アクリレート、ポリオキシエチレン（メタ）アクリレート、グリシジル（メタ）アクリレート等の酸素原子含有（メタ）アクリレート化合物；トリフルオロメチル（メタ）アクリレート、ペンタフルオロエチル（メタ）アクリレート等のハロゲン含有（メタ）アクリレート化合物；ビニルトリメトキシシラン、ビニルトリエトキシシラン、ジメトキシメチルビニルシシラン、ジメトキシエチルビニルシラン、ジエトキシメチルビニルシラン、ジエトキシエチルビニルシラン、エチルメチルジビニルシラン、メチルビニルジメトキシシラン、エチルビニルジメトキシシラン、メチルビニルジエトキシシラン、エチルビニルジエトキシシラン、ｐ－スチリルトリメトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルメチルジメトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルメチルジエトキシシラン、３－メタクリロキシプロピルトリエトキシシラン、３－アクリロキシプロピルトリメトキシシラン等の重合性二重結合含有シランアルコキシド等が挙げられる。
【0109】
上記ビニル系ポリマーは１種のビニル系モノマーが重合した単独重合体であってもよく、２種以上のビニル系モノマーが重合した共重合体であってもよい。
【0110】
例えば、母粒子の存在下で、主原料としてのビニル系モノマー等の共重合モノマーと、必要に応じて副原料である重合開始剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤等を添加し、液体中で重合を行うことにより、上記磁性層の外表面上に有機ポリマーシェル層を形成させることができる。
【0111】
上記有機ポリマーシェル層１００重量％中、上記有機ポリマーの含有量は、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上である。
【0112】
上記シェル層は、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質と結合する前において、カルボキシル基、水酸基、エポキシ基、アミノ基、トシル基、チオール基、トリエチルアンモニウム基、ジメチルアミノ基及びスルホン酸基等の官能基を有することが好ましい。上記シェル層が上記官能基を有する場合には、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質を上記シェル層の外表面上に良好に担持させることができ、該物質を磁性粒子の表面に良好に配置することができる。
【0113】
上記シェル層は、外表面上にリンカー部を有していてもよい。上記シェル層が上記リンカー部を有することにより、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質との結合点である上記官能基を、上記シェル層の最表面からより離れた位置に配置することができ、立体的な障害がより少ない位置で上記官能基と上記物質とが接触可能になる。このため、上記物質が結合しやすくなり、上記物質を磁性粒子の表面に良好に配置することができる。
【0114】
上記リンカー部は、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質と結合する前において、末端に、カルボキシル基、水酸基、エポキシ基、アミノ基、トシル基、チオール基等の目的物質と共有結合可能な官能基を有していることが好ましい。上記官能基と、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質の官能基とを反応させることにより、上記シェル層と、該物質とを化学結合させることができる。上記エポキシ基は、グリシジル基含有モノマー由来のエポキシ基であってもよい。上記水酸基は、上記エポキシ基の開環により生じる水酸基であってもよい。
【0115】
上記リンカー部の材料は、複数のエポキシ基を末端に有するエポキシ化合物であることが好ましい。上記複数のエポキシ基を末端に有するエポキシ化合物は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、又はトリメチロールプロパンポリグリシジルエーテルであることが好ましい。上記複数のエポキシ基を末端に有するエポキシ化合物は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテルであることがより好ましい。
【0116】
上記シェル層と、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質とは、結合していることが好ましく、化学結合していることがより好ましい。
【0117】
上記第２の磁性体を含む磁性層の外表面の全表面積１００％中、上記シェル層により覆われている表面積は、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上、最も好ましくは１００％である。上記表面積が上記下限以上であると、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質の含有量を多くすることができ、その結果、磁性粒子を用いた目的物質の測定において、測定精度及び測定感度を高めることができる。
【0118】
上記シェル層の厚みは、好ましくは２０ｎｍ以上、より好ましくは４０ｎｍ以上であり、好ましくは５００ｎｍ以下、より好ましくは３００ｎｍ以下である。上記シェル層の厚みが上記下限以上及び上記上限以下であると、磁性粒子の沈降を効果的に抑え、分散性をより一層高めることができ、また、磁性粒子の粒子径を小さくすることができるので、目的物質を効果的に結合させることができる。
【0119】
上記シェル層の厚みは、例えば透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて、磁性粒子の断面を観察することにより測定できる。上記シェル層の厚みについては、任意のシェル層の厚み５箇所の平均値を１個の磁性粒子のシェル層の厚みとして算出することが好ましく、シェル層全体の厚みの平均値を１個の磁性粒子のシェル層の厚みとして算出することがより好ましい。上記シェル層の厚みは、任意の磁性粒子１０個について、各磁性粒子のシェル層の厚みの平均値を算出することにより求めることが好ましい。
【0120】
（目的物質と特異的に相互作用する物質）
本発明に係る磁性粒子の表面において、目的物質と特異的に相互作用する物質が存在する。上記物質としては、糖鎖、ペプチド鎖、タンパク質、抗原、及びヌクレオチド鎖等が挙げられる。上記物質は、該目的物質の種類によって適宜変更可能である。上記物質は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
本発明に係る磁性粒子の表面において、目的物質と特異的に相互作用する物質が存在する。上記物質としては、糖鎖、ペプチド鎖、タンパク質、抗原、及びヌクレオチド鎖等が挙げられる。上記物質は、該目的物質の種類によって適宜変更可能である。上記物質は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【0121】
上記物質と上記目的物質との相互作用としては、例えば、抗原抗体反応及び酵素と基質の相互作用等が挙げられる。上記物質と上記目的物質との相互作用は、上記物質と上記目的物質との非共有結合的な相互作用であってもよく、上記物質と上記目的物質との共有結合であってもよい。上記非共有結合的な相互作用としては、疎水性相互作用、静電的相互作用、ファンデルワールス力、水素結合、配位結合及びイオン結合等が挙げられる。
【0122】
上記目的物質と特異的に相互作用する物質は、上記目的物質と非共有結合的な相互作用が可能な物質であること好ましい。
【0123】
上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質と、該目的物質の組み合わせとしては、抗体と抗原との組み合わせ、糖鎖とレクチン等のタンパク質との組み合わせ、酵素等のタンパク質とインヒビターとの組み合わせ、ペプチドとタンパク質との組み合わせ、ヌクレオチド鎖とヌクレオチド鎖との組み合わせ、ヌクレオチド鎖とタンパク質との組み合わせ等が挙げられる。
【0124】
上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質は、タンパク質であることが好ましく、アビジン又はストレプトアビジンであることがより好ましい。また、上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質は、抗原又は抗体であることが好ましい。
【0125】
上記抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクロナール抗体であってもよい。上記抗体は、パパイン及びペプシン等のタンパク質分解酵素により処理されていてもよく、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメント等であってもよい。
【0126】
上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質の配置方法は、特に限定されない。例えば、上記物質と、該物質が担持される前の磁性粒子とを混合することにより、該物質を該磁性粒子の表面に配置することができる。
【0127】
（目的物質）
上記目的物質とは、上述した物質と特異的に相互作用する物質である。
上記目的物質とは、上述した物質と特異的に相互作用する物質である。
【0128】
上記目的物質としては、タンパク質、核酸、ホルモン、癌マーカー、呼吸器関連マーカー、心疾患マーカー及び薬物等挙げられる。
【0129】
上記タンパク質としては、高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）、超低比重リポタンパク質等の脂質タンパク質；アルカリホスファターゼ、アミラーゼ、酸性ホスファターゼ、γ－グルタミルトランスフェラーゼ（γ－ＧＴＰ）、リパーゼ、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、レニン、プロテインキナーゼ（ＰＫ）、チロシンキナーゼ等の酵素；ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等の免疫グロブリン（又はこれらのＦｃ部、Ｆａｂ部及びＦ（ａｂ）２部等の断片）；例えばフィブリノーゲン、フィブリン分解産物（ＦＤＰ）、プロトロンビン、トロンビン等の血液凝固関連因子；抗ストレプトリジンＯ抗体、抗ヒトＢ型肝炎ウイルス表面抗原抗体（ＨＢｓ抗原）、抗ヒトＣ型肝炎ウイルス抗体、抗リュウマチ因子等の抗体；アルブミン、ヘモグロビン、ミオグロビン、トランスフェリン、プロテインＡ、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）等が挙げられる。
【0130】
上記核酸としては、ＤＮＡ及びＲＮＡ等が挙げられる。
【0131】
上記ホルモンとしては、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、甲状腺ホルモン（ＦＴ３、ＦＴ４、Ｔ３、Ｔ４）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、及びヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）エストラジオール（Ｅ２）等が挙げられる。
【0132】
上記癌マーカーとしては、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９－９、及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）等が挙げられる。
【0133】
上記呼吸器関連マーカーとしては、ＫＬ－６等が挙げられる。
【0134】
上記心疾患マーカーとしては、トロポニンＴ（ＴｎＴ）、及びヒト脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体Ｎ端フラグメント（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）等が挙げられる。
【0135】
上記薬物としては、抗てんかん薬、抗生物質、及びテオフィリン等が挙げられる。
【0136】
（磁性粒子の他の詳細）
上記磁性粒子は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、電気化学発光法（ＥＣＬＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ及びＣＬＥＩＡ）、吸光度測定、並びに表面プラズモン共鳴等の測定において、好適に用いられる。上記磁性粒子は、サンドイッチ法及び競合法の測定において、好適に用いられる。
上記磁性粒子は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、電気化学発光法（ＥＣＬＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ及びＣＬＥＩＡ）、吸光度測定、並びに表面プラズモン共鳴等の測定において、好適に用いられる。上記磁性粒子は、サンドイッチ法及び競合法の測定において、好適に用いられる。
【0137】
上記磁性粒子は、検体中の上記目的物質の濃度を測定にするために好適に用いられる。
【0138】
上記磁性粒子は、検査薬として好適に用いられる。上記磁性粒子は、検査薬として用いることができる磁性粒子であることが好ましい。
【0139】
上記磁性粒子を用いた目的物質の濃度測定は、例えば、以下のようにして行うことができる。
【0140】
上記磁性粒子を含む液（例えば、後述の検査薬）と、目的物質を含む検体とを混合し、混合液を得る。得られた混合液を加温等して、磁性粒子における上記目的物質と特異的に相互作用する上記物質と、検体中の目的物質を結合させた反応液を得る（第１の反応工程）。次いで、磁石等により、反応液に磁力を加え、磁性粒子を集める（集磁工程）。未反応の検体を除去したのち、洗浄液を添加し、混合する（洗浄工程）。なお、集磁工程及び洗浄工程は、複数回繰り返されてもよい。次いで、洗浄液を除去した後、該目的物質と標識物質とを反応させて、目的物質の濃度を測定する（第２の反応工程）。
【0141】
上記標識物質としては、例えば酵素免疫測定法（ＥＩＡ）において好適に用いられるアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース－６－リン酸脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ルシフェラーゼ、チロシナーゼ、酸性ホスファターゼ等の酵素；例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）において好適に用いられる９９ｍＴｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１４Ｃ、３Ｈ、３２Ｐ等の放射性同位元素；例えば蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）において好適に用いられるフルオレセイン、ダンシル、フルオレスカミン、クマリン、ナフチルアミン及びこれらの誘導体、グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等の蛍光性物質、例えばルシフェリン、イソルミノール、ルミノール、ビス（２，４，６－トリフロロフェニル）オキザレート等の発光性物質、例えばフェノール、ナフトール、アントラセン及びこれらの誘導体等の紫外部に吸収を有する物質、例えば４－アミノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル、３－アミノ－２，２，５，５－テトラメチルピロリジン－１－オキシル、２，６－ジ－ｔ－ブチル－α－（３，５－ジ－ｔ－ブチル－４－オキソ－２，５－シクロヘキサジエン－１－イリデン）－ｐ－トリオキシル等のオキシル基を有する化合物等のスピンラベル化剤としての性質を有する化合物等が挙げられる。測定感度を高める観点からは、上記標識物質は、酵素又は蛍光性物質であることが好ましく、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ又はグルコースオキシダーゼであることがより好ましく、ペルオキシダーゼであることが更に好ましい。
【0142】
（検査薬）
上記検査薬は、上述した磁性粒子を含む。
上記検査薬は、上述した磁性粒子を含む。
【0143】
上記検査薬は、緩衝液を含むことが好ましい。
【0144】
上記緩衝液は、ｐＨ５．０以上９．０以下において緩衝能を有する緩衝液であることが好ましい。上記緩衝液としては、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、ベロナール緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びグッド緩衝液等が挙げられる。
【0145】
上記検査薬は、増感剤、タンパク質等の高分子化合物、アミノ酸、及び界面活性剤等の他の成分を含んでいてもよい。
【0146】
上記検査薬が上記増感剤を含むことにより、目的物質と該目的物質と結合可能である化合物との反応を効率的に進行させることができ、また、測定精度を高めることができる。上記増感剤としては、メチルセルロース及びエチルセルロース等のアルキル化多糖化合物、プルラン、並びにポリビニルピロリドン等が挙げられる。
【0147】
上記タンパク質としては、アルブミン（牛血清アルブミン及び卵性アルブミン等）、カゼイン、及びゼラチン等が挙げられる。
【0148】
上記検査薬１００重量％中、上記磁性粒子の含有量は、好ましくは０．５重量％以上、より好ましくは２重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下である。上記磁性粒子の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、目的物質の測定精度をより一層高めることができる。
【0149】
以下、実施例及び比較例を挙げて、本発明を具体的に説明する。本発明は、以下の実施例のみに限定されない。
【0150】
（実施例１）
磁性体内包樹脂粒子の作製：
種粒子として平均粒子径０．６９μｍのポリスチレン粒子を用意した。上記ポリスチレン粒子３．９重量部と、イオン交換水５００重量部と、５．０重量％ポリビニルアルコール水溶液１２０重量部とを混合し、混合液を調製した。上記混合液を超音波により分散させた後、セパラブルフラスコに入れて、均一に撹拌した。
磁性体内包樹脂粒子の作製：
種粒子として平均粒子径０．６９μｍのポリスチレン粒子を用意した。上記ポリスチレン粒子３．９重量部と、イオン交換水５００重量部と、５．０重量％ポリビニルアルコール水溶液１２０重量部とを混合し、混合液を調製した。上記混合液を超音波により分散させた後、セパラブルフラスコに入れて、均一に撹拌した。
【0151】
次に、ジビニルベンゼン（モノマー成分）１５０重量部と、過酸化ベンゾイル（日油社製「ナイパーＢＷ」）２．０重量部とを混合した。さらに、ラウリル硫酸トリエタノールアミン９．０重量部と、トルエン（溶媒）１５０重量部と、イオン交換水１１００重量部とを添加し、乳化液を調製した。
【0152】
セパラブルフラスコ中の上記混合液に、上記乳化液を数回に分けて添加し、１２時間撹拌し、種粒子にモノマーを吸収させて、モノマーが膨潤した種粒子を含む懸濁液を得た。
【0153】
その後、５．０重量％ポリビニルアルコール水溶液４９０重量部を添加し、加熱を開始して８５℃で９時間反応させ、樹脂粒子を得た。
【0154】
撹拌子を入れた３００ｍＬ容のビーカーに、得られた樹脂粒子１重量部、６０％硫酸５０重量部を秤量した後、撹拌し、９０℃で２４時間反応させ、スルホン基が導入された樹脂粒子を得た。
【0155】
その後、撹拌子を入れた２００ｍＬビーカーに、スルホン基が導入された樹脂粒子１．０重量部、硫酸コバルト・７水和物５．０重量部、及び蒸留水２５ｍＬを秤量した後、室温下で２４時間撹拌した。その後、上記粒子及び蒸留水２０ｍＬ、ジメチルアミンボラン５．０重量部を秤量し、超音波照射下、６０℃で１時間反応させ、第１の磁性体としてコバルトを含む磁性体内包樹脂粒子を得た。
【0156】
磁性層（第２の磁性体を含む磁性層）の形成：
磁性体内包樹脂粒子１重量部と、磁性流体ＥＭＧ７０７（平均粒子径約１０ｎｍの四酸化三鉄ナノ粒子の水分散液、フェローテック社製）４重量部（但し、そのうち磁性体の含有量は約１７重量％）とを２５０ｒｐｍで１０間撹拌した。得られた粒子分散液を、水を用いてろ過及び洗浄し、磁性体内包樹脂粒子の外表面上に第２の磁性体としての四酸化三鉄を含む磁性層を形成させて、磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子を得た。
磁性体内包樹脂粒子１重量部と、磁性流体ＥＭＧ７０７（平均粒子径約１０ｎｍの四酸化三鉄ナノ粒子の水分散液、フェローテック社製）４重量部（但し、そのうち磁性体の含有量は約１７重量％）とを２５０ｒｐｍで１０間撹拌した。得られた粒子分散液を、水を用いてろ過及び洗浄し、磁性体内包樹脂粒子の外表面上に第２の磁性体としての四酸化三鉄を含む磁性層を形成させて、磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子を得た。
【0157】
目的物質と特異的に相互作用する物質の配置：
磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子の水分散液０．５ｍＬを試験管に加え、ＰＢＳ溶液を用いて３回洗浄した。分散媒を除去した後、シアル化糖鎖抗原ＫＬ－６（以下、ＫＬ－６と略記）抗体を含むＰＢＳ溶液（０．７５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを加え、２５℃にて一夜撹拌した。その後、１．０重量％ＢＳＡ溶液を１．５ｍＬ添加し、２５℃にて４時間撹拌した。続いて、１．０重量％ＢＳＡ溶液１．５ｍＬを用いて分散と磁石を用いた試験管壁面への集磁を３回繰り返し、抗ＫＬ－６抗体が感作された磁性粒子分散液を調製した。
磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子の水分散液０．５ｍＬを試験管に加え、ＰＢＳ溶液を用いて３回洗浄した。分散媒を除去した後、シアル化糖鎖抗原ＫＬ－６（以下、ＫＬ－６と略記）抗体を含むＰＢＳ溶液（０．７５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを加え、２５℃にて一夜撹拌した。その後、１．０重量％ＢＳＡ溶液を１．５ｍＬ添加し、２５℃にて４時間撹拌した。続いて、１．０重量％ＢＳＡ溶液１．５ｍＬを用いて分散と磁石を用いた試験管壁面への集磁を３回繰り返し、抗ＫＬ－６抗体が感作された磁性粒子分散液を調製した。
【0158】
なお、得られた樹脂粒子における平均粒子径、ＢＥＴ比表面積及び平均細孔径、並びに、得られた磁性粒子における第１の磁性体、第２の磁性体の含有量、含有量（１）の含有量（２）に対する比、及び含有量（１）と含有量（２）との差の絶対値、平均粒子径を表１に示す。なお、これらは、後述の評価の項目に記載の方法で求めた。
【0159】
（実施例２）
トルエン１５０重量部に変えて、トルエン８０重量部用いて樹脂粒子を作製したこと、磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様して、磁性粒子を作製した。
トルエン１５０重量部に変えて、トルエン８０重量部用いて樹脂粒子を作製したこと、磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様して、磁性粒子を作製した。
【0160】
（実施例３）
トルエン１５０重量部に変えて、トルエン３０重量部用いて樹脂粒子を作製したこと、磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様して、磁性粒子を作製した。
トルエン１５０重量部に変えて、トルエン３０重量部用いて樹脂粒子を作製したこと、磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様して、磁性粒子を作製した。
【0161】
（実施例４）
実施例１と同様にして、磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子を得た。
実施例１と同様にして、磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子を得た。
【0162】
シェル層の形成：
得られた磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子１．０重量部にエタノール４００重量部及び２８％アンモニア水溶液（ナカライテスク社製）２０重量部を加えた。次いで、オルトケイ酸テトラエチル５．０重量部及び８－グリシドキシオクチルトリメトキシシラン１５重量部を加え、１時間撹拌した。得られた分散液をろ過後、水で洗浄した。このようにして、表面に官能基を有する無機酸化物シェル層を有する磁性体内包粒子を得た。
得られた磁性層を有する磁性体内包樹脂粒子１．０重量部にエタノール４００重量部及び２８％アンモニア水溶液（ナカライテスク社製）２０重量部を加えた。次いで、オルトケイ酸テトラエチル５．０重量部及び８－グリシドキシオクチルトリメトキシシラン１５重量部を加え、１時間撹拌した。得られた分散液をろ過後、水で洗浄した。このようにして、表面に官能基を有する無機酸化物シェル層を有する磁性体内包粒子を得た。
【0163】
目的物質と特異的に相互作用する物質の配置：
実施例１と同様にして、磁性粒子の表面に抗ＫＬ－６抗体が存在する磁性粒子を得た。
実施例１と同様にして、磁性粒子の表面に抗ＫＬ－６抗体が存在する磁性粒子を得た。
【0164】
（実施例５，６）
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例４と同様にして磁性粒子を得た。
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例４と同様にして磁性粒子を得た。
【0165】
（比較例１）
トルエンを用いなかったこと、ジビニルベンゼン１５０重量部に変えて、ジビニルベンゼン３００重量部を用いたこと、過酸化ベンゾイル２．０重量部に変えて、過酸化ベンゾイル４．０重量部を用いたこと以外は、実施例１と同様にして樹脂粒子を得た。また、比較例１では、第１の磁性体を用いなかった。得られた樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、樹脂粒子の外表面上に第２の磁性体により磁性層を形成した。
トルエンを用いなかったこと、ジビニルベンゼン１５０重量部に変えて、ジビニルベンゼン３００重量部を用いたこと、過酸化ベンゾイル２．０重量部に変えて、過酸化ベンゾイル４．０重量部を用いたこと以外は、実施例１と同様にして樹脂粒子を得た。また、比較例１では、第１の磁性体を用いなかった。得られた樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、樹脂粒子の外表面上に第２の磁性体により磁性層を形成した。
【0166】
シェル層の形成：
得られた磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例４と同様にして、該磁性層の外表面上にシェル層を形成した。
得られた磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例４と同様にして、該磁性層の外表面上にシェル層を形成した。
【0167】
目的物質と特異的に相互作用する物質の配置：
得られたシェル層及び磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、抗ＫＬ－６抗体を配置した。このようにして、第１の磁性体を有さない磁性粒子を得た。
得られたシェル層及び磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、抗ＫＬ－６抗体を配置した。このようにして、第１の磁性体を有さない磁性粒子を得た。
【0168】
（比較例２）
比較例１と同様にして、樹脂粒子を得た。次に、油性磁性流体（平均粒子径約１０ｎｍの四酸化三鉄ナノ粒子の有機溶剤分散液、フェローテック社製「ＥＸＰシリーズ」）にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子（平均一次粒子径：１０ｎｍ）を得た。
比較例１と同様にして、樹脂粒子を得た。次に、油性磁性流体（平均粒子径約１０ｎｍの四酸化三鉄ナノ粒子の有機溶剤分散液、フェローテック社製「ＥＸＰシリーズ」）にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子（平均一次粒子径：１０ｎｍ）を得た。
【0169】
次いで、上記樹脂粒子１．０重量部と上記疎水化された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子１．０重量部とをミキサーでよく混合した。得られた混合物を、ハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ－０型（奈良機械製作所社製）を用いて、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ／秒（１６２００ｒｐｍ）で５分間処理し、樹脂粒子の外表面上に第２の磁性体により磁性層を形成した。
【0170】
シェル層の形成：
得られた磁性層を有する粒子１０重量部と、分散剤としてノニオン性乳化剤（花王社製「エマルゲン１５０」）の０．５％水溶液３００重量部とを１Ｌセパラブルフラスコに投入し、撹拌した。これに、モノマーとして、シクロヘキシルメタクリレート２４重量部及び２－メタクリロイロキシエチルコハク酸６０重量部と、開始剤として、ジ（３，５，５－トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド（日油社製「パーロイル３５５」）１．０重量部とを添加し、８０℃、２００ｒｐｍで８時間撹拌した。このようにして、該磁性層の外表面上にカルボキシル基を有する有機ポリマーシェル層を形成した。上記有機ポリマーは、シクロヘキシルメタクリレートと２－メタクリロイロキシエチルコハク酸との共重合体である。
得られた磁性層を有する粒子１０重量部と、分散剤としてノニオン性乳化剤（花王社製「エマルゲン１５０」）の０．５％水溶液３００重量部とを１Ｌセパラブルフラスコに投入し、撹拌した。これに、モノマーとして、シクロヘキシルメタクリレート２４重量部及び２－メタクリロイロキシエチルコハク酸６０重量部と、開始剤として、ジ（３，５，５－トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド（日油社製「パーロイル３５５」）１．０重量部とを添加し、８０℃、２００ｒｐｍで８時間撹拌した。このようにして、該磁性層の外表面上にカルボキシル基を有する有機ポリマーシェル層を形成した。上記有機ポリマーは、シクロヘキシルメタクリレートと２－メタクリロイロキシエチルコハク酸との共重合体である。
【0171】
目的物質と特異的に相互作用する物質の配置：
得られたシェル層及び磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、抗ＫＬ－６抗体を配置した。このようにして、第１の磁性体を有さない磁性粒子を得た。
得られたシェル層及び磁性層を有する樹脂粒子を用いて、実施例１と同様にして、抗ＫＬ－６抗体を配置した。このようにして、第１の磁性体を有さない磁性粒子を得た。
【0172】
（比較例３）
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、比較例１と同様にして磁性粒子を得た。比較例３で得られた磁性粒子は、第１の磁性体を有さない。
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、比較例１と同様にして磁性粒子を得た。比較例３で得られた磁性粒子は、第１の磁性体を有さない。
【0173】
（比較例４）
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様にして、磁性粒子を作製した。比較例４で得られた磁性粒子は、磁性層を有さない。
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、実施例１と同様にして、磁性粒子を作製した。比較例４で得られた磁性粒子は、磁性層を有さない。
【0174】
（比較例５）
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、比較例４と同様にして磁性粒子を得た。なお、比較例５では、シェル層として、ポリグリシジルメタクリレート（ＰＧＭＡ）を含むシェル層（有機ポリマーシェル層）を形成した。比較例５で得られた磁性粒子は、磁性層を有さない。
樹脂粒子及び磁性粒子の構成を表１に示すように変更したこと以外は、比較例４と同様にして磁性粒子を得た。なお、比較例５では、シェル層として、ポリグリシジルメタクリレート（ＰＧＭＡ）を含むシェル層（有機ポリマーシェル層）を形成した。比較例５で得られた磁性粒子は、磁性層を有さない。
【0175】
（評価）
（１）樹脂粒子及び磁性粒子の平均粒子径
得られた樹脂粒子及び磁性粒子について、走査型電子顕微鏡（日立ハイテクノロジーズ社製「Ｒｅｇｕｌｕｓ８２２０」）を用いて、樹脂粒子及び磁性粒子の平均粒子径を算出した。具体的には、得られた磁性粒子を乾燥させた試料を作製し、得られた試料を走査型電子顕微鏡にて観察し、任意の５０個の磁性粒子、及び磁性粒子における樹脂粒子の粒子径を測定し、平均値を算出することにより求めた。
（１）樹脂粒子及び磁性粒子の平均粒子径
得られた樹脂粒子及び磁性粒子について、走査型電子顕微鏡（日立ハイテクノロジーズ社製「Ｒｅｇｕｌｕｓ８２２０」）を用いて、樹脂粒子及び磁性粒子の平均粒子径を算出した。具体的には、得られた磁性粒子を乾燥させた試料を作製し、得られた試料を走査型電子顕微鏡にて観察し、任意の５０個の磁性粒子、及び磁性粒子における樹脂粒子の粒子径を測定し、平均値を算出することにより求めた。
【0176】
（２）樹脂粒子のＢＥＴ比表面積
得られた樹脂粒子について、カンタクローム・インスツルメンツ社製「ＮＯＶＡ４２００ｅ」を用いて、窒素の吸着等温線を測定した。測定結果から、ＢＥＴ法に準拠して、樹脂粒子の比表面積を算出した。
得られた樹脂粒子について、カンタクローム・インスツルメンツ社製「ＮＯＶＡ４２００ｅ」を用いて、窒素の吸着等温線を測定した。測定結果から、ＢＥＴ法に準拠して、樹脂粒子の比表面積を算出した。
【0177】
（３）樹脂粒子の平均細孔径
得られた樹脂粒子について、カンタクローム・インスツルメンツ「ＮＯＶＡ４２００ｅ」を用いて、窒素の吸着等温線を測定した。測定結果から、ＢＪＨ法に準拠して、樹脂粒子の平均細孔径を算出した。
得られた樹脂粒子について、カンタクローム・インスツルメンツ「ＮＯＶＡ４２００ｅ」を用いて、窒素の吸着等温線を測定した。測定結果から、ＢＪＨ法に準拠して、樹脂粒子の平均細孔径を算出した。
【0178】
（４）第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量
磁性粒子の含有量が３０重量％となるように、Ｋｕｌｚｅｒ社製「テクノビット４０００」に添加し、分散させて、磁性粒子検査用埋め込み樹脂体を作製した。検査用埋め込み樹脂体中に分散した磁性粒子の中心付近を通るようにイオンミリング装置（日立ハイテクノロジーズ社製「ＩＭ４０００」）を用いて、磁性粒子の断面を切り出した。そして、電界放射型透過電子顕微鏡（日本電子社製「ＪＥＭ－２０１０ＦＥＦ」）を用いて、エネルギー分散型Ｘ線分析装置（ＥＤＳ）により、第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を測定し、磁性粒子の内部における第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量の分布結果を得た。得られた結果から、第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を算出した。第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量は、任意に選択された２０個の磁性粒子の第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を算術平均することにより算出した。
磁性粒子の含有量が３０重量％となるように、Ｋｕｌｚｅｒ社製「テクノビット４０００」に添加し、分散させて、磁性粒子検査用埋め込み樹脂体を作製した。検査用埋め込み樹脂体中に分散した磁性粒子の中心付近を通るようにイオンミリング装置（日立ハイテクノロジーズ社製「ＩＭ４０００」）を用いて、磁性粒子の断面を切り出した。そして、電界放射型透過電子顕微鏡（日本電子社製「ＪＥＭ－２０１０ＦＥＦ」）を用いて、エネルギー分散型Ｘ線分析装置（ＥＤＳ）により、第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を測定し、磁性粒子の内部における第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量の分布結果を得た。得られた結果から、第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を算出した。第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量は、任意に選択された２０個の磁性粒子の第１の磁性体及び第２の磁性体の含有量を算術平均することにより算出した。
【0179】
また、磁性粒子の外表面から内側に向かって厚み１／３までの領域（Ｒ１）の１００体積％中、第１の磁性体の含有量を含有量（１）とした。磁性粒子の中心から外側に向かって厚み２／３までの領域（Ｒ２）の１００体積％中、第１の磁性体の含有量を含有量（２）とした。
【0180】
磁性粒子の含有量が３０重量％となるように、Ｋｕｌｚｅｒ社製「テクノビット４０００」に添加し、分散させて、磁性粒子検査用埋め込み樹脂体を作製した。検査用埋め込み樹脂体中に分散した磁性粒子の中心付近を通るようにイオンミリング装置（日立ハイテクノロジーズ社製「ＩＭ４０００」）を用いて、磁性粒子の断面を切り出した。そして、電界放射型透過電子顕微鏡（日本電子社製「ＪＥＭ－２０１０ＦＥＦ」）を用いて、エネルギー分散型Ｘ線分析装置（ＥＤＳ）により、磁性体内包樹脂粒子の厚み方向における第１の磁性体の含有量を測定し、磁性体内包樹脂粒子の厚み方向における第１の磁性体の含有量の分布結果を得た。得られた結果から、上記含有量（１）及び上記含有量（２）を算出した。上記含有量（１）及び上記含有量（２）は、任意に選択された２０個の磁性粒子の含有量（１）及び含有量（２）を算術平均することにより算出した。
【0181】
また、得られた結果から、上記含有量（１）の上記含有量（２）に対する比（含有量（１）／含有量（２））、及び上記含有量（１）の上記含有量（２）との差の絶対値を算出した。
【0182】
（５）集磁率
試料溶液として、波長５５０ｎｍにおける吸光度が０．９～１．１に調整された磁性粒子が水に分散した液を用意した。スペーサー（Ｗ１０ｍｍ×Ｄ１０ｍｍ×Ｈ４ｍｍ）を介し磁石（２８００Ｇ、Ｗ１０ｍｍ×Ｄ１０ｍｍ×Ｈ１ｍｍ）をあてた状態で分光光度計（日立製作所社製「Ｕ－３９００Ｈ」）に設置した石英セルに、試料溶液１．３ｍＬを投入し、試料溶液投入後５秒後～１２５秒後の波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。この１２０秒間での吸光度減衰率を以下の式により算出し、集磁率とした。
試料溶液として、波長５５０ｎｍにおける吸光度が０．９～１．１に調整された磁性粒子が水に分散した液を用意した。スペーサー（Ｗ１０ｍｍ×Ｄ１０ｍｍ×Ｈ４ｍｍ）を介し磁石（２８００Ｇ、Ｗ１０ｍｍ×Ｄ１０ｍｍ×Ｈ１ｍｍ）をあてた状態で分光光度計（日立製作所社製「Ｕ－３９００Ｈ」）に設置した石英セルに、試料溶液１．３ｍＬを投入し、試料溶液投入後５秒後～１２５秒後の波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。この１２０秒間での吸光度減衰率を以下の式により算出し、集磁率とした。
【0183】
集磁率（％）＝［｛（５秒後の吸光度）－（１２５秒後の吸光度）｝／（５秒後の吸光度）］×１００
【0184】
［集磁率の判定基準］
○○：集磁率が８０％以上
○：集磁率が６０％以上８０％未満
△：集磁率が４０％以上６０％未満
×：集磁率が４０％未満
○○：集磁率が８０％以上
○：集磁率が６０％以上８０％未満
△：集磁率が４０％以上６０％未満
×：集磁率が４０％未満
【0185】
（６）分散率
試料溶液として、波長５５０ｎｍにおける吸光度が０．９～１．１に調整された磁性粒子が水に分散した液を用意した。分光光度計（日立製作所社製「Ｕ－３９００Ｈ」）に設置した石英セルに、試料溶液１．３ｍＬを投入し、波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。次いで、磁石（２８０００Ｇ、Ｗ４０ｍｍ×Ｄ４０ｍｍ×Ｈ１０ｍｍ）を用いて、上澄みの吸光度が０になるまで集磁した。その後、ボルテックスにより２０００ｒｐｍ、５秒間、磁性粒子を分散させて、波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。集磁前の吸光度と、集磁及び分散後の吸光度とから、吸光度の変化率を以下の式により算出し、分散率とした。
試料溶液として、波長５５０ｎｍにおける吸光度が０．９～１．１に調整された磁性粒子が水に分散した液を用意した。分光光度計（日立製作所社製「Ｕ－３９００Ｈ」）に設置した石英セルに、試料溶液１．３ｍＬを投入し、波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。次いで、磁石（２８０００Ｇ、Ｗ４０ｍｍ×Ｄ４０ｍｍ×Ｈ１０ｍｍ）を用いて、上澄みの吸光度が０になるまで集磁した。その後、ボルテックスにより２０００ｒｐｍ、５秒間、磁性粒子を分散させて、波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。集磁前の吸光度と、集磁及び分散後の吸光度とから、吸光度の変化率を以下の式により算出し、分散率とした。
【0186】
分散率（％）＝｛（集磁及び分散後の吸光度）／（集磁前の吸光度）｝×１００
【0187】
［分散率の判定基準］
○○：分散率が９５％以上
○：分散率が９０％以上９５％未満
△：分散率が８５％以上９０％未満
×：分散率が８５％未満
○○：分散率が９５％以上
○：分散率が９０％以上９５％未満
△：分散率が８５％以上９０％未満
×：分散率が８５％未満
【0188】
（７）集磁率（１カ月放置後）
得られた磁性粒子を２５℃で１カ月放置した。放置後、（５）集磁率と同様の方法で集磁率を求めた。
得られた磁性粒子を２５℃で１カ月放置した。放置後、（５）集磁率と同様の方法で集磁率を求めた。
【0189】
［集磁率（１カ月放置後）の判定基準］
○○：集磁率が８０％以上
○：集磁率が６０％以上８０％未満
△：集磁率が４０％以上６０％未満
×：集磁率が４０％未満
○○：集磁率が８０％以上
○：集磁率が６０％以上８０％未満
△：集磁率が４０％以上６０％未満
×：集磁率が４０％未満
【0190】
（８）免疫測定（磁性粒子の単位重量当たりの発光量）
ＫＬ－６を含まない溶液（抗原未含有溶液）と、５０００Ｕ／ｍＬのＫＬ－６を含む溶液（抗原含有溶液）を用意した。抗原未含有溶液を用いた免疫測定における発光量と、抗原含有溶液を用いた免疫測定における発光量との差を求めることにより、磁性粒子と目的物質（ＫＬ－６）との結合能を評価した。具体的には、以下の手順で評価を行った。
ＫＬ－６を含まない溶液（抗原未含有溶液）と、５０００Ｕ／ｍＬのＫＬ－６を含む溶液（抗原含有溶液）を用意した。抗原未含有溶液を用いた免疫測定における発光量と、抗原含有溶液を用いた免疫測定における発光量との差を求めることにより、磁性粒子と目的物質（ＫＬ－６）との結合能を評価した。具体的には、以下の手順で評価を行った。
【0191】
ルテニウム錯体標識抗ＫＬ－６抗体（二次抗体）の作製：
ポリプロピレンチューブに抗ＫＬ－６抗体のＰＢＳ－１溶液（抗ＫＬ－６抗体濃度２．０ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを加え、次いでＲｕ－ＮＨＳ（１０ｍｇ／ｍＬ）を１３μＬ加えた。２５℃にて振動撹拌した後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを用いて精製し、ルテニウム錯体標識抗ＫＬ－６抗体を得た。
ポリプロピレンチューブに抗ＫＬ－６抗体のＰＢＳ－１溶液（抗ＫＬ－６抗体濃度２．０ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを加え、次いでＲｕ－ＮＨＳ（１０ｍｇ／ｍＬ）を１３μＬ加えた。２５℃にて振動撹拌した後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを用いて精製し、ルテニウム錯体標識抗ＫＬ－６抗体を得た。
【0192】
免疫測定：
電気化学発光免疫測定法を測定原理としたＥＣＬＩＡ自動分析装置（積水メディカル社製「ピコルミＩＩＩ」）を用いて、以下のようにして発光量の測定を行った。反応溶液（正常ウサギ血清を含む緩衝液）２００μＬに５０００Ｕ／ｍＬのＫＬ－６を含む溶液（抗原含有溶液）２０μＬを加えたのち、磁性粒子２５μＬを加えた。３０℃で９分間反応させたのち、ピコルミＢＦ洗浄液（１０ｍＭトリス緩衝液）を３５０μＬ加え、磁性粒子を磁石でトラップしながら３回洗浄した。次いで、１．０μｇ／ｍＬのルテニウム錯体標識抗ＫＬ－６抗体を含むルテニウム標識抗体含有液２００μＬを加え、３０℃で９分間反応させたのち、ピコルミＢＦ洗浄液（１０ｍＭトリス緩衝液）を３５０μＬ加え、磁性粒子を磁石でトラップしながら３回洗浄した。次いで、０．１Ｍトリプロピルアミンを含むピコルミ発光電解液３００μＬを加え、電極表面に送液し、磁性粒子に結合したルテニウム錯体の発光量を測定した。抗原未含有溶液を用いた免疫測定における発光量と、抗原含有溶液を用いた免疫測定における発光量との差Ｘを求めた。
電気化学発光免疫測定法を測定原理としたＥＣＬＩＡ自動分析装置（積水メディカル社製「ピコルミＩＩＩ」）を用いて、以下のようにして発光量の測定を行った。反応溶液（正常ウサギ血清を含む緩衝液）２００μＬに５０００Ｕ／ｍＬのＫＬ－６を含む溶液（抗原含有溶液）２０μＬを加えたのち、磁性粒子２５μＬを加えた。３０℃で９分間反応させたのち、ピコルミＢＦ洗浄液（１０ｍＭトリス緩衝液）を３５０μＬ加え、磁性粒子を磁石でトラップしながら３回洗浄した。次いで、１．０μｇ／ｍＬのルテニウム錯体標識抗ＫＬ－６抗体を含むルテニウム標識抗体含有液２００μＬを加え、３０℃で９分間反応させたのち、ピコルミＢＦ洗浄液（１０ｍＭトリス緩衝液）を３５０μＬ加え、磁性粒子を磁石でトラップしながら３回洗浄した。次いで、０．１Ｍトリプロピルアミンを含むピコルミ発光電解液３００μＬを加え、電極表面に送液し、磁性粒子に結合したルテニウム錯体の発光量を測定した。抗原未含有溶液を用いた免疫測定における発光量と、抗原含有溶液を用いた免疫測定における発光量との差Ｘを求めた。
【0193】
［磁性粒子の単位重量当たりの発光量の判定基準］
○○：差Ｘが１５００００以上
○：差Ｘが１２５０００以上１５００００未満
△：差Ｘが１０００００以上１２５０００未満
×：差Ｘが１０００００未満
○○：差Ｘが１５００００以上
○：差Ｘが１２５０００以上１５００００未満
△：差Ｘが１０００００以上１２５０００未満
×：差Ｘが１０００００未満
【0194】
磁性粒子の構成及び結果を下記の表１，２に示す。
【0195】
【表1】
【0196】
【表2】
【符号の説明】
【0197】
１，１Ａ，１Ｂ，１Ｃ…磁性粒子
２，２Ａ，２Ｂ，２Ｃ…磁性体内包樹脂粒子
３，３Ａ，３Ｂ，３Ｃ…磁性層
４，４Ｂ，４Ｃ…シェル層
５，５Ａ，５Ｂ，５Ｃ…物質
２１，２１Ａ，２１１Ｂ，２１１Ｃ…樹脂粒子
２２，２２Ａ，２２Ｂ，２２１Ｃ，２２２Ｃ…第１の磁性体
２１２Ｂ，２１２Ｃ…樹脂層
２，２Ａ，２Ｂ，２Ｃ…磁性体内包樹脂粒子
３，３Ａ，３Ｂ，３Ｃ…磁性層
４，４Ｂ，４Ｃ…シェル層
５，５Ａ，５Ｂ，５Ｃ…物質
２１，２１Ａ，２１１Ｂ，２１１Ｃ…樹脂粒子
２２，２２Ａ，２２Ｂ，２２１Ｃ，２２２Ｃ…第１の磁性体
２１２Ｂ，２１２Ｃ…樹脂層
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】