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特許7513707ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物、その塩、合成方法、および使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-07-01
(45)【発行日】2024-07-09
(54)【発明の名称】ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物、その塩、合成方法、および使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/605 20060101AFI20240702BHJP
A61K 38/26 20060101ALI20240702BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/12 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/72 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/70 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/02 20060101ALI20240702BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240702BHJP
A61K 9/16 20060101ALI20240702BHJP
C12N 15/16 20060101ALN20240702BHJP
【ＦＩ】
C07K14/605 ZNA
A61K38/26
A61P3/10
A61K9/20
A61K9/48
A61K9/08
A61K9/12
A61K9/72
A61K9/70 401
A61K9/10
A61K9/02
A61P3/04
A61K9/16
C12N15/16
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2022521757
(86)(22)【出願日】2021-02-09
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-13
(86)【国際出願番号】 CN2021076308
(87)【国際公開番号】W WO2021164663
(87)【国際公開日】2021-08-26
【審査請求日】2022-04-08
(31)【優先権主張番号】202010099944.4
(32)【優先日】2020-02-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】522144240
【氏名又は名称】江蘇諾泰澳賽諾生物製薬股▲ふん▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＩＮＯＰＥＰ－ＡＬＬＳＩＮＯ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．２８， Ｌｉｎｐｕ Ｒｏａｄ， Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０００ Ｃｈｉｎａ
(73)【特許権者】
【識別番号】522142671
【氏名又は名称】杭州諾泰澳賽諾医薬技術開発有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＨＡＮＧＺＨＯＵ ＳＩＮＯＰＥＰ－ＡＬＬＳＩＮＯ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＣＯ．， ＬＴＤ
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １２０１－１２０３ Ｂｌｄｇ Ｅ， １３７８ Ｗｅｓｔ Ｗｅｎｙｉｘｉ Ｒｏａｄ， Ｙｕｈａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｈａｎｇｚｈｏｕ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１１１００ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100205936
【弁理士】
【氏名又は名称】崔 海龍
(74)【代理人】
【識別番号】100132805
【弁理士】
【氏名又は名称】河合 貴之
(72)【発明者】
【氏名】趙 呈青
(72)【発明者】
【氏名】施 国強
(72)【発明者】
【氏名】李 順子
(72)【発明者】
【氏名】王 蔡典
【審査官】斉藤 貴子
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１０－１１６４０７（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アミノ酸配列が、Ｈ Ｘａａ１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥ Ｘａａ２ＱＡＡ Ｘａａ３ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
であり、かつＣ末端のアミノ酸がカルボキシル基、またはカルボキシル基がアミド化されたものであるＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物であって、
Ｘａａ１は、
【化1】
Ｘａａ２は、Ｘａａ１と同じであり、
Ｘａａ３は、
【化2】
ｍ、ｎは自然数であることを特徴とする、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物。
【請求項2】
前記ｎは１２－２０の自然数であり、前記ｍは０－３の自然数であることを特徴とする、請求項１に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物。
【請求項3】
前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ３ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
であり、
式中、Ｘ３は、
【化3】
【請求項4】
請求項１から３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の合成方法であって、（１）化合物ポリペプチドの主配列の第１－３１位アミノ酸を固相合成し、第１－４位アミノ酸は、断片Ｂｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）Ｘａａ１Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ－ＯＨを使用し、
式中、
Ｘａａ１は、
【化4】
（２）第２０位Ｌｙｓは、下記の構造式を有する断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ ２０ （Ｘａａ ３ ）－ＯＨを使用し、
【化5】
（３）用いる縮合剤は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、Ｏｘｙｍａｐｕｒｅ／ＤＩＣ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡ、ＰｙＢｏｐ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡのうちの１種または複数種であり、用いる反応溶媒は、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＳＯのうちの１種または複数種の組み合わせであり、用いるＦｍｏｃ除去試薬は、ｖ／ｖ２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液であり、
（４）以下のステップを含み、
ステップ一：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を製造し、
ステップ二：全保護ペプチド樹脂を製造し、以下のステップａおよびステップｂを含み、
ステップａ：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を固相反応器に加え、
ステップｂ：固相合成法によりＦｍｏｃ－Ａｒｇ３０（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ２９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ２８（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ２７－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ２６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ２５（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ２４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ２３－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ２２－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ２１（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１８－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ１７（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ１６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ１５（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ１４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ１３（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ１２（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ１１－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ１０－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ９（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ８（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ７（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ５（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ１（Ｔｒｔ）Ｘａａ１ｇｌｕ３（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ４－ＯＨをＦｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇに逐一連結させ、
前記Ｘａａ１は、
【化6】
前記断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨの構造式は、
【化7】
前記ｎは、１２－２０の自然数であり、前記ｍは、０－３の自然数であり、
ステップ三：前記ペプチド樹脂を開裂し、粗ペプチドを得、
開裂剤は、配合比がＴＦＡ：（チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／フェノール／水）＝９０：５である複合試薬を使用し、捕捉剤は、チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／水の任意の組み合わせであることを特徴とする、合成方法。
【請求項5】
ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩であって、前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物は、請求項１から３のいずれか１項に記載のポリペプチド化合物であり、そのＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドまたはその薬学的に許容できる塩がアミド化されたものであることを特徴とする、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩。
【請求項6】
前記塩は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物と、
塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、ピロ硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、樟脳酸、桂皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、脂肪酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸およびチオシアン酸塩のうちの１種と、
から形成される塩であることを特徴とする、請求項５に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩。
【請求項7】
請求項１から３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を用いて製造される医薬品であって、前記医薬品は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を有効成分とし、剤形が錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ、トローチ剤、吸入剤、噴霧剤、注射剤、膜剤、貼付剤、散剤、顆粒剤、ブロック剤、乳剤、坐剤および配合剤のいずれか１種であることを特徴とする、医薬品。
【請求項8】
ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１から３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を有効原料とし、または請求項５または６に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を有効原料とし、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤をさらに含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項9】
請求項１から３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物または請求項４に記載の合成方法により合成されるＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の使用であって、前記使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における、有効原料とするＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の使用であることを特徴とする、使用。
【請求項10】
請求項５または６に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、請求項７に記載の医薬品、或いは請求項８に記載の医薬組成物の使用であって、前記使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における、有効原料とするポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、医薬品または医薬組成物の使用であることを特徴とする、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポリペプチド化合物分野に関し、具体的には、一連の二重インクレチンペプチド類似化合物であるポリペプチド化合物に関する。ヒトグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）の受容体を活性化させ、２型糖尿病および肥満症の治療に適用できる。本発明は、このポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、ポリペプチド医薬組成物、医薬品、製造方法およびその使用にも関する。
【背景技術】
【0002】
メタボリックシンドロームの病因は、タンパク質、脂肪、炭水化物などのさまざまな物質の異常な代謝である。栄養過剰と身体活動の低下は、肥満や糖尿病などの肥満関連疾患を引き起こす可能性がある。近年、２型糖尿病と脂質異常症の発生率が増加している。２型糖尿病は糖尿病の最も一般的な形態であり、すべての糖尿病の約９０％を占めている。２型糖尿病は、インスリン抵抗性によって引き起こされる高血糖値を特徴としている。現在の２型糖尿病の標準治療には、食事療法、運動、および経口や注射可能な血糖降下薬による治療が含まれる。しかしながら、２型糖尿病の多くの患者はまだ血糖値が十分にコントロールされていない。
【0003】
ＧＬＰ－１は、３７アミノ酸のペプチドであり、インスリン分泌を刺激し、膵臓β細胞を保護し、グルカゴン分泌、胃内容排出、および食物摂取を阻害することで体重を減少させる。ｇＬＰ－１は、インクレチンと呼ばれている。インクレチン素受容体は、シグナル伝達がグルコースの体内バランスに対して重要な役割を果たしている。正常の生理学では、ＧＬＰ－１は食後に腸から分泌され、これらのインクレチンは満腹、インスリン分泌、栄養素処理などの食物に対する生理学的反応を増強させる。２型糖尿病患者のインクレチン反応は低下する。現在市販されているインクレチンアナログまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤は、単一の作用メカニズムのみにより血糖をコントロールしている。二重作用メカニズムを有する２型糖尿病化合物を使用することにより、血糖降下活性および体重減少効果の両方に優れたポリペプチド化合物が得られる。
【0004】
ＧＬＰ－１アナログの投与は、悪心や嘔吐などの副作用によって制限され、投与によって血糖コントロールや体重減少に十分な効果が得られないことがよくある。天然ＧＬＰ－１は、遍在するタンパク質分解酵素、特にジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ－４）によって急速に不活性化されるため、短期間の代謝制御にのみ使用できる。ＤＰＰ－４はエキソペプチダーゼタンパク質分解酵素に属する。ＤＰＰ－４は、ＧＬＰ－１配列の７～８位のペプチド結合を急速に加水分解することができるため、７～８位および配列の他の位置に非天然アミノ酸を導入することにより任意のペプチドのタンパク質分解安定性を高めることができる。従って、非天然アミノ酸の使用は、ＤＰＰ－４タンパク質による分解および他の形態の分解に対するペプチドの安定性を向上できる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明の目的は、従来技術における化合物の体内安定性、血糖降下、体重減少の効果、および副作用などの不足に対して、二重作用メカニズムを利用し、より優れた血糖降下活性および体重減少効果を有するＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を提供し、２型糖尿病、肥満症および心血管疾患などの疾患の治療に使用することである。
【0006】
本発明の別の目的は、前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の製造方法を提供することである。
【0007】
本発明の別の目的は、前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を提供することである。
【0008】
本発明の別の目的は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物を提供することである。
【0009】
本発明の別の目的は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の医薬品を提供することである。
【0010】
本発明の別の目的は、前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物、其薬学的に許容できる塩、その医薬組成物および医薬品の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明の目的は、以下の技術的手段により実現される。
本発明は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合を開示する。そのアミノ酸配列が、
Ｈ Ｘａａ１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥ Ｘａａ２ＱＡＡ Ｘａａ３ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
であり、かつＣ末端のアミノ酸がカルボキシル基、またはカルボキシル基がアミド化されたものであり、
Ｘａａ１は、
から選択され、
Ｘａａ２は、
から選択され、
Ｘａａ１とＸａａ２は同じであっても異なっていてもよく、
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
Ｘａａ３は、
から選択され、
ｍ、ｎは自然数であり、好ましくは、ｎは１２－２０の自然数であり、ｍは０－３の自然数である。
本発明は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合を開示する。そのアミノ酸配列が、
Ｈ Ｘａａ１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥ Ｘａａ２ＱＡＡ Ｘａａ３ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
であり、かつＣ末端のアミノ酸がカルボキシル基、またはカルボキシル基がアミド化されたものであり、
Ｘａａ１は、
【化1】
Ｘａａ２は、
【化2】
Ｘａａ１とＸａａ２は同じであっても異なっていてもよく、
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
Ｘａａ３は、
【化3】
ｍ、ｎは自然数であり、好ましくは、ｎは１２－２０の自然数であり、ｍは０－３の自然数である。
【0012】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物は、好ましいアミノ酸配列が
（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ３ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ４ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ５ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ６ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ７ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ８ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ９ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１０ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
である。
式中
（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ３ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ４ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ５ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ６ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ７ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ８ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ９ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１０ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（１９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
（２２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
である。
式中
【化4】
【0013】
本発明は、前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の合成方法をさらに開示する。
（１）化合物ポリペプチドの主配列の第１－３１位アミノ酸を固相合成し、第１－４位アミノ酸は、断片Ｂｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）Ｘａａ１Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ－ＯＨを使用し、
式中、
Ｘａａ１は、
から選択され、
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
（２）第２０位Ｌｙｓは、下記の構造式を有する断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｘａａ３）を使用し、
前記ｎは、１２－２０の自然数であり、ｍは、０－３の自然数であり、
（３）用いる縮合剤は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、Ｏｘｙｍａｐｕｒｅ／ＤＩＣ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡ、ＰｙＢｏｐ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡのうちの１種または複数種であり、用いる反応溶媒は、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＳＯのうちの１種または複数種の組み合わせであり、用いるＦｍｏｃ除去試薬は、ｖ／ｖ２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液であり、
（４）以下のステップを含み、
ステップ一：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を製造し、
ステップ二：全保護ペプチド樹脂を製造し、以下のステップａおよびステップｂを含み、
ステップａ：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を固相反応器に加え、
ステップｂ：固相合成法によりＦｍｏｃ－Ａｒｇ３０（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ２９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ２８（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ２７－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ２６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ２５（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ２４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ２３－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ２２－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ２１（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１８－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ１７（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ１６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ１５（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ１４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ１３（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ１２（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ１１－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ１０－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ９（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ８（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ７（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ５（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ１（Ｔｒｔ）Ｘａａ１ｇｌｕ３（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ４－ＯＨをＦｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇに逐一連結させ、
前記Ｘａａ１は、
から選択され、
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
前記断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨの構造式は、
であり、
前記ｎは、１２－２０の自然数であり、前記ｍは、０－３の自然数であり、
ステップ三：前記ペプチド樹脂を開裂し、粗ペプチドを得、
開裂剤は、配合比がＴＦＡ：（チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／フェノール／水）＝９０：５である複合試薬を使用し、捕捉剤は、チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／水の任意の組み合わせであり、
ステップ四：逆相クロマトグラフィーによりポリペプチド化合物を製造し、逆相クロマトグラフィー法のフィラとしてシリカ系結合Ｃ８、Ｃ１８フィラを使用し、移動相としてアセトニトリルおよび水溶液を使用し、水溶液は特定のｐＨのＴＦＡ、リン酸、硫酸溶液、またはこれらの酸で形成されるナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などである。
（１）化合物ポリペプチドの主配列の第１－３１位アミノ酸を固相合成し、第１－４位アミノ酸は、断片Ｂｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）Ｘａａ１Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ－ＯＨを使用し、
式中、
Ｘａａ１は、
【化5】
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
（２）第２０位Ｌｙｓは、下記の構造式を有する断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｘａａ３）を使用し、
【化6】
（３）用いる縮合剤は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、Ｏｘｙｍａｐｕｒｅ／ＤＩＣ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡ、ＰｙＢｏｐ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡのうちの１種または複数種であり、用いる反応溶媒は、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＳＯのうちの１種または複数種の組み合わせであり、用いるＦｍｏｃ除去試薬は、ｖ／ｖ２５％ピペリジン／ＤＭＦ溶液であり、
（４）以下のステップを含み、
ステップ一：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を製造し、
ステップ二：全保護ペプチド樹脂を製造し、以下のステップａおよびステップｂを含み、
ステップａ：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇ樹脂を固相反応器に加え、
ステップｂ：固相合成法によりＦｍｏｃ－Ａｒｇ３０（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ２９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ２８（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ２７－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ２６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ２５（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ２４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ２３－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ２２－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ２１（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１８－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ１７（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ１６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ１５（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ１４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ１３（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ１２（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ１１－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ１０－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ９（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ８（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ７（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ５（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ１（Ｔｒｔ）Ｘａａ１ｇｌｕ３（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ４－ＯＨをＦｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇに逐一連結させ、
前記Ｘａａ１は、
【化7】
Ｒ１は、２－６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ－ＣＨ３であり、
式中、Ｒ１およびＲ２アルキル基は、１－６個のハロゲン原子で置換されていてもよく、
前記断片Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｘａａ３）－ＯＨの構造式は、
【化8】
前記ｎは、１２－２０の自然数であり、前記ｍは、０－３の自然数であり、
ステップ三：前記ペプチド樹脂を開裂し、粗ペプチドを得、
開裂剤は、配合比がＴＦＡ：（チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／フェノール／水）＝９０：５である複合試薬を使用し、捕捉剤は、チオアニソール／ＴＩＳ／ＥＤＴ／水の任意の組み合わせであり、
ステップ四：逆相クロマトグラフィーによりポリペプチド化合物を製造し、逆相クロマトグラフィー法のフィラとしてシリカ系結合Ｃ８、Ｃ１８フィラを使用し、移動相としてアセトニトリルおよび水溶液を使用し、水溶液は特定のｐＨのＴＦＡ、リン酸、硫酸溶液、またはこれらの酸で形成されるナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などである。
【0014】
本発明は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩をさらに開示する。前記ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物は、前記ポリペプチド化合物であり、そのＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドまたはその薬学的に許容できる塩がアミド化されたものである。
【0015】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩は、好ましくは、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物と；塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、ピロ硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、樟脳酸、桂皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、脂肪酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸およびチオシアン酸塩のうちの１種と；から形成される塩である。
【0016】
本発明は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物をさらに開示する。この医薬組成物は、上述したいずれかのＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を有効原料とし、または上述したいずれかのＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を有効原料とし、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤をさらに含む
【0017】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物および上記化合物を原料とし、従来技術に開示の通常方法に従って製造される。
【0018】
本発明は、上述したいずれかのＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を用いて製造される医薬品を開示する。前記医薬品は、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ、トローチ剤、吸入剤、噴霧剤、注射剤、膜剤、貼付剤、散剤、顆粒剤、ブロック剤、乳剤、坐剤および配合剤である。医薬品は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物および薬学的に許容できる医薬品添加剤、キャリアまたは希釈剤から構成される。本発明に記載の医薬品は、従来技術における通常方法に従って製造できる。
【0019】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の使用としては、有効原料として糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品または痩せ薬の製造に使用できる。
【0020】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における有効原料とする使用である。
【0021】
本発明に記載のＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物、医薬品は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品または痩せ薬として適用できる。
【0022】
本明細書に使用される略語を下表に示す。
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ－メチルピロリドン
ＨＢＴＵ ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＥＡ／ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ Ｎ－９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＥＤＴ エタンジチオール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ－メチルピロリドン
ＨＢＴＵ ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＥＡ／ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ Ｎ－９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＥＤＴ エタンジチオール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
【0023】
本発明の一部として、非天然アミノ酸の置換は、ＧＬＰ－１アゴニストのインビボ安定性の向上を促進するだけではなく、活性にも大きな影響を与えている。例えば、前記配列におけるアミノ酸Ｘａａ１によって、ＧＬＰ－１アゴニストの活性は大きく違い、また、Ｘａａ１がキラルである場合、１つの光学異性体は、活性がもう１つの置換されたＧＬＰ－１アゴニストよりも高い。また、脂肪酸は、アルブミン結合モチーフにより半減期を延長させることでペプチドの薬物動態を改善することができる。脂肪酸を使用してペプチドの半減期を改善できるが、本出願人は、本発明の一部として脂肪酸鎖の長さ、組成、位置およびペプチドと脂肪酸鎖との間のリンカーが意外にＧＬＰ－１アゴニストの活性に影響があり、ペプチドの半減期を延長できることを発見した。
【発明の効果】
【0024】
従来のポリペプチド化合物および製造技術に比べ、本発明は、以下の有益な効果を有する。
本発明は、二重作用メカニズムを利用し、より優れた血糖降下活性および体重減少効果を有するＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を提供する。本発明のポリペプチド化合物は、血糖降下、体重減少の効果を有し、心血管にも有益であり、有効原料として糖尿病を治療または予防するための医薬品または痩せ薬の製造に適用できる。動物エネルギ消耗データにより、本発明のポリペプチド化合物は、患者の体重を減らす作用を有し、免疫原性が低い特性および週に１回投与可能な薬物動態（ＰＫ）特徴を有し、糖尿病、肥満の治療薬の有効成分として適用される。そのため、２型糖尿病、肥満症および心血管疾患などの疾患の治療に適用できる。
本発明は、二重作用メカニズムを利用し、より優れた血糖降下活性および体重減少効果を有するＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を提供する。本発明のポリペプチド化合物は、血糖降下、体重減少の効果を有し、心血管にも有益であり、有効原料として糖尿病を治療または予防するための医薬品または痩せ薬の製造に適用できる。動物エネルギ消耗データにより、本発明のポリペプチド化合物は、患者の体重を減らす作用を有し、免疫原性が低い特性および週に１回投与可能な薬物動態（ＰＫ）特徴を有し、糖尿病、肥満の治療薬の有効成分として適用される。そのため、２型糖尿病、肥満症および心血管疾患などの疾患の治療に適用できる。
【0025】
本発明の製造方法により製造されたＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物は、血糖降下および体重増加抑制の活性が高く、効果持続時間が長く、収率が高く、合成周期が短く、粗製品の精製が容易で、生産コストが低く、産業の自動化生産が容易である。
【図面の簡単な説明】
【0026】
【図1】実験における各試験薬のｄｂ／ｄｂマウスランダム血糖値に対する影響の図である。
【図2】実験における各試験薬によるｄｂ／ｄｂマウスランダム血糖値の変化率の図である。
【図3】実験における各試験薬のｏｂ／ｏｂマウスの体重に対する影響の図である。
【図4】実験における各試験薬によるｏｂ／ｏｂマウスの体重の変化率の図である。
【発明を実施するための形態】
【0027】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
【0028】
式において、
である。
【化9】
【0029】
（実施例１：配列番号１ポリペプチド化合物の合成）
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
１． 配列番号１ポリペプチド化合物のペプチド鎖の合成
１．１ 樹脂の膨潤
Ｗａｎｇ－Ｒｅｓｉｎ（置換度０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を１０ｇ秤量し、１００ｍＬのＤＣＭで３０ｍｉｎ膨潤した後、吸引濾過してＤＣＭを除去し、さらに１００ｍＬのＤＭＦで３０ｍｉｎ膨潤し、それぞれ１００ｍＬのＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した。
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
１． 配列番号１ポリペプチド化合物のペプチド鎖の合成
１．１ 樹脂の膨潤
Ｗａｎｇ－Ｒｅｓｉｎ（置換度０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を１０ｇ秤量し、１００ｍＬのＤＣＭで３０ｍｉｎ膨潤した後、吸引濾過してＤＣＭを除去し、さらに１００ｍＬのＤＭＦで３０ｍｉｎ膨潤し、それぞれ１００ｍＬのＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した。
【0030】
１．２ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｗａｎｇ－Ｒｅｓｉｎの合成
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ（ｔＢｕ）－ＯＨ（１５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１８ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、得られた溶液を前のステップで得られた樹脂に加えて２時間反応させ、反応終了後、濾過して反応液を除去し、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ（ｔＢｕ）－ＯＨ（１５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１８ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、得られた溶液を前のステップで得られた樹脂に加えて２時間反応させ、反応終了後、濾過して反応液を除去し、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
【0031】
１．３ Ｆｍｏｃ保護基の除去
洗浄後の樹脂に０．１ＭのＨＯＢｔを含む２５％ピペリジン／ＤＭＦ（Ｖ／Ｖ）溶液を加えてＦｍｏｃを除去し、反応終了後、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
洗浄後の樹脂に０．１ＭのＨＯＢｔを含む２５％ピペリジン／ＤＭＦ（Ｖ／Ｖ）溶液を加えてＦｍｏｃを除去し、反応終了後、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
【0032】
１．４ ペプチド鎖の延長
配列に従って、ペプチド鎖の合成が終了してペプチド樹脂が得られるまで、上記の脱保護および連結のステップを繰り返して順に対応するアミノ酸をつけた。具体的な連結保護アミノ酸は以下の通りである。
固相合成法によりＦｍｏｃ－Ａｒｇ３０（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ２９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ２８（Ｐｂｆ）－ＯＨ 、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ２７－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ２６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ２５（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ２４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ２３－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ２２－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ２１（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｏｃｔ（ＯｔＢｕ）－γ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１８－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ１７（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ１６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ１５（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ１４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ１３（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ１２（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ１１－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ１０－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ９（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ８（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ７（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ５（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ１（Ｔｒｔ）Ｘ２Ｇｌｕ３（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ４－ＯＨを逐一Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇに連結させる。
配列に従って、ペプチド鎖の合成が終了してペプチド樹脂が得られるまで、上記の脱保護および連結のステップを繰り返して順に対応するアミノ酸をつけた。具体的な連結保護アミノ酸は以下の通りである。
固相合成法によりＦｍｏｃ－Ａｒｇ３０（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ２９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ２８（Ｐｂｆ）－ＯＨ 、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ２７－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ２６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ２５（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ２４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ２３－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ２２－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ２１（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ２０（Ｏｃｔ（ＯｔＢｕ）－γ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１９－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ１８－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ１７（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ１６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ１５（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ１４－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ１３（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ１２（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ１１－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ１０－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ９（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ８（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ７（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ６－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ５（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ１（Ｔｒｔ）Ｘ２Ｇｌｕ３（ＯｔＢｕ）Ｇｌｙ４－ＯＨを逐一Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ３１－Ｗａｎｇに連結させる。
【0033】
１．５ ペプチド樹脂の分解
トリフルオロ酢酸を秤量して反応器に入れ、－１０～０℃に冷却し、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオールおよび精製水（ＴＦＡ：ＴＩＳ：ＥＤＴ＝９５：２．５：２．５）を加え、撹拌して均一に混合した。ペプチド樹脂をゆっくりと加え、２０～３０℃に昇温し、１１５～１２５ｍｉｎ開裂反応させた。反応終了後、濾過して樹脂を除去し、除去した樹脂をＭ×８×２０％ｍｌのＴＦＡで洗浄し、濾液および洗浄液を全てＭ×８×１．２×４ｍｌのエーテルに移し、５～１０ｍｉｎ撹拌し、１５ｍｉｎ以上静置して沈降させた。沈降懸濁液を遠心分離機に入れ、遠心分離し、固体を収集した。エーテルで固体を６回（毎回５Ｌ以上）洗浄した。固体を２０～３５℃で６～１０ｈ真空乾燥し、粗ペプチド１０．９０ｇを得た。
トリフルオロ酢酸を秤量して反応器に入れ、－１０～０℃に冷却し、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオールおよび精製水（ＴＦＡ：ＴＩＳ：ＥＤＴ＝９５：２．５：２．５）を加え、撹拌して均一に混合した。ペプチド樹脂をゆっくりと加え、２０～３０℃に昇温し、１１５～１２５ｍｉｎ開裂反応させた。反応終了後、濾過して樹脂を除去し、除去した樹脂をＭ×８×２０％ｍｌのＴＦＡで洗浄し、濾液および洗浄液を全てＭ×８×１．２×４ｍｌのエーテルに移し、５～１０ｍｉｎ撹拌し、１５ｍｉｎ以上静置して沈降させた。沈降懸濁液を遠心分離機に入れ、遠心分離し、固体を収集した。エーテルで固体を６回（毎回５Ｌ以上）洗浄した。固体を２０～３５℃で６～１０ｈ真空乾燥し、粗ペプチド１０．９０ｇを得た。
【0034】
２． 配列番号１ポリペプチド化合物の精製
分取液体クロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィー条件は、Ｃ１８カラム（１００ｍｍ×２５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相Ａ：０．１％のＨ３ＰＯ４／水（Ｖ／Ｖ）、移動相Ｂ：０．１％のＨ３ＰＯ４／アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）；移動相グラジエント：移動相Ｂ２０％～６０％、６０ｍｉｎ；流速：２００ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長：２１４ｎｍであった。純度が９８．０％超えた留分を収集し、回転蒸発した後、凍結乾燥して３．１０ｇのサンプルを得た。
分取液体クロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィー条件は、Ｃ１８カラム（１００ｍｍ×２５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相Ａ：０．１％のＨ３ＰＯ４／水（Ｖ／Ｖ）、移動相Ｂ：０．１％のＨ３ＰＯ４／アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）；移動相グラジエント：移動相Ｂ２０％～６０％、６０ｍｉｎ；流速：２００ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長：２１４ｎｍであった。純度が９８．０％超えた留分を収集し、回転蒸発した後、凍結乾燥して３．１０ｇのサンプルを得た。
【0035】
ポリペプチド化合物配列番号２－３０の合成方法は実施例１と同様であった。
【0036】
（実施例２：配列番号２ポリペプチド化合物の合成）
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９３ｇ得た。
ＨＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９３ｇ得た。
【0037】
（実施例３：配列番号３ポリペプチド化合物の合成）
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ３ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．８７ｇ得た。
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ３ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．８７ｇ得た。
【0038】
（実施例４：配列番号４ポリペプチド化合物の合成）
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．５５ｇ得た。
ＨＸ３ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．５５ｇ得た。
【0039】
（実施例５：配列番号５）
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ４ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．６０ｇ得た。
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ４ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．６０ｇ得た。
【0040】
（実施例６：配列番号６）
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．６１ｇ得た。
ＨＸ４ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．６１ｇ得た。
【0041】
（実施例７：配列番号７）
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ５ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．１ｇ得た。
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ５ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．１ｇ得た。
【0042】
（実施例８：配列番号８）
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．３５ｇ得た。
ＨＸ５ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．３５ｇ得た。
【0043】
（実施例９：配列番号９）
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ６ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ６ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
【0044】
（実施例１０：配列番号１０）
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９０ｇ得た。
ＨＸ６ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９０ｇ得た。
【0045】
（実施例１１：配列番号１１）
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ７ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．７４ｇ得た。
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ７ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．７４ｇ得た。
【0046】
（実施例１２：配列番号１２）
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．２２ｇ得た。
ＨＸ７ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．２２ｇ得た。
【0047】
（実施例１３：配列番号１３）
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ８ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．４８ｇ得た。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ８ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．４８ｇ得た。
【0048】
（実施例１４：配列番号１４）
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を５．３０ｇ得た。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を５．３０ｇ得た。
【0049】
（実施例１５：配列番号１５）
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ９ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ９ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
【0050】
（実施例１６：配列番号１６）
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．６７ｇ得た。
ＨＸ９ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．６７ｇ得た。
【0051】
（実施例１７：配列番号１７）
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１０ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．３３ｇ得た。
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１０ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．３３ｇ得た。
【0052】
（実施例１８：配列番号１８）
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．４４０ｇ得た。
ＨＸ１０ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．４４０ｇ得た。
【0053】
（実施例１９：配列番号１９）
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を２．７０ｇ得た。
【0054】
（実施例２０：配列番号２０）
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９２ｇ得た。
ＨＸ１１ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．９２ｇ得た。
【0055】
（実施例２１：配列番号２１）
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．６２ｇ得た。
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１２ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．６２ｇ得た。
【0056】
（実施例２２：配列番号２２）
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．８０ｇ得た。
ＨＸ１２ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＸ１ＱＡＡＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
合成方法は実施例１と同様であった。精製したサンプル溶液を収集し、凍結乾燥して精製品を３．８０ｇ得た。
【0057】
以下、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物（「ポリペプチド化合物」と略す）に関する薬理学的実験方法および結果を示す。
１、ポリペプチド化合物のＧＬＰ－１受容体アゴニスト活性
グルカゴン様ペプチド－１受容体（ＧＬＰ－１Ｒ）は、クラスＢＧタンパク質共役型受容体に属し、血糖と体重の条件下で重要な役割を果たしており、抗糖尿病薬の重要な標的として考えられている。ヒトＧＬＰ－１Ｒを安定して発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）を用いてポリペプチド化合物サンプルおよび対照化合物のＧＬＰ－１Ｒ下流ｃＡＭＰ信号に対する誘導活性を測定する。
１、ポリペプチド化合物のＧＬＰ－１受容体アゴニスト活性
グルカゴン様ペプチド－１受容体（ＧＬＰ－１Ｒ）は、クラスＢＧタンパク質共役型受容体に属し、血糖と体重の条件下で重要な役割を果たしており、抗糖尿病薬の重要な標的として考えられている。ヒトＧＬＰ－１Ｒを安定して発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）を用いてポリペプチド化合物サンプルおよび対照化合物のＧＬＰ－１Ｒ下流ｃＡＭＰ信号に対する誘導活性を測定する。
【0058】
野生型ヒトＧＬＰ－１Ｒ（ＮＭ＿００２０６２．５）を一過性トランスフェクションし、６００μｇ／ｍｌのｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ－Ｂにて２週間選別することにより、ＦｌｐＩｎＣＨＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）細胞安定発現システムに導入した細胞株を得た。ＦｌｐＩｎＣＨＯ細胞の培養条件は、ＤＭＥＭ培養液に１０％熱不活化ウシ胎児血清を加え、５％ＣＯ２インキュベーターにおいて培養することである。
【0059】
下流ｃＡＭＰ信号検出の試験において、細胞を６ウェル細胞培養プレートに接種して一晩培養した後、８０００個の細胞／ウェルの濃度で３８４ウェルプレートに移し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間引き続き培養した。実験では、ＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ検出キットを用いてｃＡＭＰ信号強度を測定した。細胞を３０ｍｉｎインキュベートした後、ＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ検出キットを用い、マイクロプレートリーダーにより蛍光強度を測定し、標準曲線を作成し、蛍光強度を対応するｃＡＭＰ数値に変換し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェアの非線形回帰により化合物のＥＣ５０数値を計算した。
【0060】
＜ｇＬＰ－１ＲのｃＡＭＰ信号分析＞
（ペプチド） （ＧＬＰ－１Ｒ ＥＣ５０（ｐＭ））
セマグルチド ６４５．１７±４８．３７
ＧＬＰ－１（７－３６） １２１．６４±８７．７８
配列番号１ ９１７３３．３３±９６９２．４６
配列番号２ ２１４１０．０±１３２０．２７
配列番号３ ２８４２．３３±５１２．８７
配列番号４ ２０２４．３３±２７６．５
配列番号５ ９１４．６３±１２６．１
配列番号６ ６２３．２２±８３．５
配列番号７ ８７９５．３３±１４０７
配列番号８ ７９２４．７２±１０６２
配列番号９ ６７５．３３±６７
配列番号１０ ５２４．７２±５２
配列番号１１ ８０９５．６５±５０７
配列番号１２ ８９２４．２２±３１０
配列番号１３ ５５９０．１９±５７５
配列番号１４ ５４００．３９±３６４．７
配列番号１５ ２９０１．５６±３９０
配列番号１６ ２５０８．８１±３０７
配列番号１７ ３３２４．８２±６７７．２
配列番号１８ ３１２４．１７±５１１．８
配列番号１９ ７９１．３３±６３．５
配列番号２０ ６９２．８９±５５．７
配列番号２１ ６５２．０７±４１．７
配列番号２２ ６３０．４３±５１．９
（ペプチド） （ＧＬＰ－１Ｒ ＥＣ５０（ｐＭ））
セマグルチド ６４５．１７±４８．３７
ＧＬＰ－１（７－３６） １２１．６４±８７．７８
配列番号１ ９１７３３．３３±９６９２．４６
配列番号２ ２１４１０．０±１３２０．２７
配列番号３ ２８４２．３３±５１２．８７
配列番号４ ２０２４．３３±２７６．５
配列番号５ ９１４．６３±１２６．１
配列番号６ ６２３．２２±８３．５
配列番号７ ８７９５．３３±１４０７
配列番号８ ７９２４．７２±１０６２
配列番号９ ６７５．３３±６７
配列番号１０ ５２４．７２±５２
配列番号１１ ８０９５．６５±５０７
配列番号１２ ８９２４．２２±３１０
配列番号１３ ５５９０．１９±５７５
配列番号１４ ５４００．３９±３６４．７
配列番号１５ ２９０１．５６±３９０
配列番号１６ ２５０８．８１±３０７
配列番号１７ ３３２４．８２±６７７．２
配列番号１８ ３１２４．１７±５１１．８
配列番号１９ ７９１．３３±６３．５
配列番号２０ ６９２．８９±５５．７
配列番号２１ ６５２．０７±４１．７
配列番号２２ ６３０．４３±５１．９
【0061】
ポリペプチド化合物の配列番号３および配列番号４に対して動物体内実験を行い、血糖降下作用および体重減少について詳しい比較実験を行った。実験方法および結果を以下に示す。
【0062】
２、 ポリペプチド化合物の血糖降下作用および体重に対する影響の実験
ＤＢ／ＤＢ高血糖のマウスを５－７日間順応させた後、非断食ランダム血糖値を測定し、１２時間断食させた後、高速血糖計により空腹血糖値を測定した。体重、１２時間断食後の空腹血糖値、ランダム血糖値の結果を総合的に考慮して動物をランダムに群分けし（ランダム化されたブロックデザイン（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｂｌｏｃｋｄｅｓｉｇｎ））、ランダム体重、ランダム血糖値および空腹血糖値に応じて溶媒対照群、ポリペプチド化合物群（試験薬：配列番号３および配列番号４）、陽性対照セマグルチド群、既知対照群ＳＰＮ０１３に分けた。各試験薬群および対照群のマウスにそれぞれ各試験薬または対照群溶液を単回皮下注射し、モデル対照群マウスにＰＢＳ緩衝液を単回皮下注射する。実験の群別および用量設定を表１に示す。
ＤＢ／ＤＢ高血糖のマウスを５－７日間順応させた後、非断食ランダム血糖値を測定し、１２時間断食させた後、高速血糖計により空腹血糖値を測定した。体重、１２時間断食後の空腹血糖値、ランダム血糖値の結果を総合的に考慮して動物をランダムに群分けし（ランダム化されたブロックデザイン（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｂｌｏｃｋｄｅｓｉｇｎ））、ランダム体重、ランダム血糖値および空腹血糖値に応じて溶媒対照群、ポリペプチド化合物群（試験薬：配列番号３および配列番号４）、陽性対照セマグルチド群、既知対照群ＳＰＮ０１３に分けた。各試験薬群および対照群のマウスにそれぞれ各試験薬または対照群溶液を単回皮下注射し、モデル対照群マウスにＰＢＳ緩衝液を単回皮下注射する。実験の群別および用量設定を表１に示す。
【0063】
【表1】
実験機器：高速血糖計（ジョンソン＆ジョンソン，Ｏｎｅ Ｔｏｕｃｈ ＵｌｔｒａＥａｓｙ，型番：ＭＧＣ２３Ｂ４ＥＲ，ＭＧＣ２３Ｂ５ＥＲ）
【0064】
実験観察
臨床症状：この実験プロトコルの策定と変更は、上海マテリアメディカ研究所の動物倫理委員会（ＩＡＣＵＣ）によって評価および承認されてから実施された。動物の健康状況および死亡状況を監視した。
体重：動物を群分けした後、体重を毎日決まった時間に１回測定した。
臨床症状：この実験プロトコルの策定と変更は、上海マテリアメディカ研究所の動物倫理委員会（ＩＡＣＵＣ）によって評価および承認されてから実施された。動物の健康状況および死亡状況を監視した。
体重：動物を群分けした後、体重を毎日決まった時間に１回測定した。
【0065】
実験指標
血糖値：マウスの尾先端から採血し、高速血糖計および血糖テストストリップにより血糖値を測定した。
群分け後に、異なる試験薬を１回皮下投与し、投与の０ｈ、２ｈ、４ｈ、６ｈ、１０ｈ、２４ｈ、３４ｈ、４８ｈ、５８ｈ、７２ｈ、８２ｈ、９６ｈ後にそれぞれ血糖値を測定した。
試験薬の血糖降下効果をＢＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）またはＡＵＣ（ｍｍｏｌ／Ｌ・ｍｉｎ）で評価した。
ＡＵＣの計算
ＡＵＣ＝［（ＢＧ０＋ＢＧ２）ｘ２＋（ＢＧ２＋ＢＧ４）ｘ２＋（ＢＧ４＋ＢＧ６）ｘ２＋（ＢＧ６＋ＢＧ１０）ｘ４＋（ＢＧ１０＋ＢＧ２４）ｘ１４＋（ＢＧ２４＋ＢＧ３４）ｘ１０＋（ＢＧ３４＋ＢＧ４８）ｘ１４＋（ＢＧ４８＋ＢＧ５８）ｘ１０＋（ＢＧ５８＋ＢＧ７２）ｘ１４＋（ＢＧ７２＋ＢＧ８２）ｘ１０＋（ＢＧ８２＋ＢＧ９６）ｘ１４］／２。
データ分析
両群間の比較はＴ検定を使用する。３群以上の間の比較はｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡを使用する。Ｆ値に有意差がある場合、ＡＮＯＶＡ分析の後に多重比較をさらに行う必要がある。ＳＰＳＳ１７．０により全てのデータ分析を行う。ｐ＜０．０５である場合、有意差があるとみなされる。
血糖値：マウスの尾先端から採血し、高速血糖計および血糖テストストリップにより血糖値を測定した。
群分け後に、異なる試験薬を１回皮下投与し、投与の０ｈ、２ｈ、４ｈ、６ｈ、１０ｈ、２４ｈ、３４ｈ、４８ｈ、５８ｈ、７２ｈ、８２ｈ、９６ｈ後にそれぞれ血糖値を測定した。
試験薬の血糖降下効果をＢＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）またはＡＵＣ（ｍｍｏｌ／Ｌ・ｍｉｎ）で評価した。
ＡＵＣの計算
ＡＵＣ＝［（ＢＧ０＋ＢＧ２）ｘ２＋（ＢＧ２＋ＢＧ４）ｘ２＋（ＢＧ４＋ＢＧ６）ｘ２＋（ＢＧ６＋ＢＧ１０）ｘ４＋（ＢＧ１０＋ＢＧ２４）ｘ１４＋（ＢＧ２４＋ＢＧ３４）ｘ１０＋（ＢＧ３４＋ＢＧ４８）ｘ１４＋（ＢＧ４８＋ＢＧ５８）ｘ１０＋（ＢＧ５８＋ＢＧ７２）ｘ１４＋（ＢＧ７２＋ＢＧ８２）ｘ１０＋（ＢＧ８２＋ＢＧ９６）ｘ１４］／２。
データ分析
両群間の比較はＴ検定を使用する。３群以上の間の比較はｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡを使用する。Ｆ値に有意差がある場合、ＡＮＯＶＡ分析の後に多重比較をさらに行う必要がある。ＳＰＳＳ１７．０により全てのデータ分析を行う。ｐ＜０．０５である場合、有意差があるとみなされる。
【0066】
表２－４および図１－２に示すように、血糖降下実験のデータおよび図表の結果から明らかなように、本発明のポリペプチド化合物の投与濃度が３０ｎｍｏｌ／ｋｇである場合、血糖降下効果は、セマグルチドとほぼ同じであり、陽性対照群およびポリペプチド化合物群は、溶媒対照群に比べていずれも有意差があった。表５－６および図３－４の結果から明らかなように、溶媒対照群に単回皮下注射で投与した後、ｄｂ／ｄｂマウスのランダム体重およびその変化量に対して明らかな影響がなかった。陽性対照群およびポリペプチド化合物群は、溶媒対照群に比べていずれも有意差があった。特に、投与の２４時間に差異が最も顕著であった。また、実験結果から分かるように、ポリペプチド化合物の配列番号３、配列番号４、ＳＰＮ０１３を単回皮下注射により投与した２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ後にｄｂ／ｄｂマウスのランダム体重の変化量を顕著に低下でき、セマグルチド群よりも優れた。
【0067】
したがって、ＧＬＰ－１アゴニスト化合物の単回皮下注射投与は、２型糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスのランダム血糖値を顕著に低下できる。配列番号３、配列番号４は、等用量のセマグルチドの作用と相当した。配列番号３、配列番号４のポリペプチド化合物は、より優れた体重制御効果を示した。
【0068】
３、 ポリペプチド化合物的薬物動態実験
セマグルチド、ＳＰＮ００９（配列番号３）およびＳＰＮ０１０（配列番号４）の薬物動態比較実験
９匹の雄ラットを取り、３匹／群で群分けし、それぞれセマグルチド、ＳＰＮ００９およびＳＰＮ０１０を投与した。単回皮下注射、投与量０．０２ｍｇ／ｋｇ。尾の切断により採血し、採血の時点は０ｈ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈであった。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により血漿中の化合物濃度を測定した。全てのデータは、Ｕｎｉｆｉ１．９．３ソフトウェアにより採取して導出され、Ｅｘｃｅｌソフトウェアによりデータを計算した。ＤＡＳ３．０ソフトウェアの非室モデルによりラット投与後の薬物動態パラメータを計算した。結果を表７に示す。
セマグルチド、ＳＰＮ００９（配列番号３）およびＳＰＮ０１０（配列番号４）の薬物動態比較実験
９匹の雄ラットを取り、３匹／群で群分けし、それぞれセマグルチド、ＳＰＮ００９およびＳＰＮ０１０を投与した。単回皮下注射、投与量０．０２ｍｇ／ｋｇ。尾の切断により採血し、採血の時点は０ｈ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈであった。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により血漿中の化合物濃度を測定した。全てのデータは、Ｕｎｉｆｉ１．９．３ソフトウェアにより採取して導出され、Ｅｘｃｅｌソフトウェアによりデータを計算した。ＤＡＳ３．０ソフトウェアの非室モデルによりラット投与後の薬物動態パラメータを計算した。結果を表７に示す。
【0069】
表７に示すように、ラットに単回皮下投与し、投与濃度が０．０２ｍｇ／ｋｇである場合、配列番号３および配列番号４の主な薬物動態パラメータｔ１／２およびＴｍａｘは、セマグルチドよりも優れた。
【0070】
【表2】
【0071】
【表3】
【0072】
【表4】
【0073】
【表5】
【0074】
【表6】
【0075】
【表7】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】