(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-07-08
(45)【発行日】2024-07-17
(54)【発明の名称】高濃度インスリン製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 38/28 20060101AFI20240709BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240709BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240709BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240709BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240709BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240709BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240709BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240709BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240709BHJP
【ＦＩ】
A61K38/28
A61K47/02
A61K47/22
A61K47/12
A61K47/10
A61P3/10
A61P17/02
A61P9/10
A61K9/08
【請求項の数】
15
(21)【出願番号】P 2022501304
(86)(22)【出願日】2020-07-10
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-09-20
(86)【国際出願番号】 EP2020069512
(87)【国際公開番号】W WO2021009027
(87)【国際公開日】2021-01-21
【審査請求日】2023-07-06
(31)【優先権主張番号】19185958.6
(32)【優先日】2019-07-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】509091848
【氏名又は名称】ノヴォ ノルディスク アー／エス
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】イェッペ・ストゥリス
(72)【発明者】
【氏名】スヴェン・ハヴェルンド
(72)【発明者】
【氏名】カレン－マルグレーテ・ペダーセン
【審査官】堂畑 厚志
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１３－５４５７８２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５０７８６９（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／０６０７３５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１６－５２３８０７（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２０１２／０２４５０８５（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１０－５３０３６８（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
可溶性インスリン調製物であって、・２４００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートと、
・７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物。
【請求項2】
前記ＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの前記濃度が、約３０００ｎｍｏｌ／ｍｌである、請求項１に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項3】
前記亜鉛イオンの前記濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである、請求項１または２に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項4】
ナイアシンアミドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項5】
１３５ｍＭ～１９５ｍＭ、または１５０ｍＭ～１８０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項6】
トレプロスチニルを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項7】
０．０２μｇ／ｍｌ～０．５μｇ／ｍｌ、０．０４μｇ／ｍｌ～０．３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ～０．２μｇ／ｍｌ、または０．１～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む、請求項６に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項8】
１５ｍＭ～３０ｍＭ、６ｍＭ～２０ｍＭ、または２０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項9】
ｐＨ７．６を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項10】
フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項11】
前記フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールである、請求項１０に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項12】
前記フェノールの濃度が、１．３ｍｇ／ｍｌ～２．０ｍｇ／ｍｌであり、前記ｍ－クレゾールの濃度が、１．５ｍｇ／ｍｌ～２．３ｍｇ／ｍｌである、請求項１１に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項13】
３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
６ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、請求項１に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項14】
３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、５.５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
２０ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、請求項１に記載の可溶性インスリン調製物。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の可溶性インスリン調製物を含む、ストレス誘発性高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病を含む高血糖症、ならびに熱傷、手術創傷、および同化作用が必要とされる他の疾患もしくは傷害、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈心疾患、および他の心血管障害の治療または予防、ならびに重篤な糖尿病患者および非糖尿病患者の治療用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アシル化インスリンの医薬組成物の分野、およびそのような組成物を疾患の治療に使用するための方法に関する。また、本発明は、そのような医薬組成物の製造分野に関する。
【背景技術】
【0002】
現在、１型糖尿病および２型糖尿病の両方の糖尿病の治療は、いわゆる強化インスリン治療にますます依存している。このレジメンによれば、患者は、食事に関連するインスリン必要量をカバーするための速効型インスリンのボーラス注射によって補われる、基礎インスリン必要量をカバーするための長時間作用型インスリンの１日１回または２回の注射を含む、毎日複数回のインスリン注射で治療される。
【0003】
長時間作用型インスリン組成物は、当該技術分野で周知である。したがって、１つの主要なタイプの長時間作用型インスリン組成物は、インスリン結晶または無結晶性インスリンの注射用水性懸濁液を含む。これらの組成物では、利用されるインスリン化合物は、典型的には、プロタミンインスリン、亜鉛インスリン、またはプロタミン亜鉛インスリンである。他の長時間作用型インスリン組成物は、例えば、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ）（登録商標）およびトレシーバ（Ｔｒｅｓｉｂａ）（登録商標）であり、ヒトインスリンと比較して、持続的作用特性を有する。
【0004】
結晶化インスリンは、それが注射時にプロタミン結晶化するかどうか、または注射時にインスリン組成物が結晶化するかどうかにかかわらず、潜在的な免疫原性反応、均質性、組織刺激および反応などの多くの欠点を有する。
【0005】
長時間作用型インスリン組成物の別のタイプは、ｐＨ値が生理的ｐＨを下回る溶液であり、溶液が注射されたときにｐＨ値が上昇するためにインスリンが沈殿する。これらの溶液による欠点は、注射時に組織内に形成された沈殿物の粒度分布、およびそれゆえ薬剤の放出特性が、注射部位の血流および他のパラメータにいくぶん予測不可能な様式で依存することである。さらなる欠点は、インスリンの固体粒子が、注射部位の組織の炎症を引き起こす局所刺激物として作用し得ることである。
【0006】
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島で産生される５１個のアミノ酸ペプチドホルモンである。その主要機能は単量体として作用し、膜貫通受容体に結合し活性化することによって脂肪および筋組織の細胞膜を横断するグルコース分子の輸送を促進することである。
【0007】
インスリンの特徴的な特性は、その六量体に会合する能力であり、この六量体では、ホルモンが生合成および保存中の化学的および物理的分解から保護される。インスリンに関するＸ線結晶学的研究は、六量体が３倍の回転軸によって関連する３つの二量体で構成されていることを示す。これらの二量体は、３倍軸上に位置付けられたそのコアにおける２つの亜鉛イオンの相互作用を介して密接に関連付けられる。
【0008】
高濃度医薬品製剤の形態でヒトインスリンを皮下に注射すると、それは自己会合し、ここでは単量体への解離は比較的遅い。インスリンの六量体および二量体は、単量体よりも毛細血管壁への浸透が遅い。
【0009】
亜鉛およびフェノール添加物は、貯蔵中の分解に対する予防策として、六量体形成を促進するために治療用インスリン調製物に定期的に使用される。しかしながら、この形態では、六量体が皮下を通して拡散し、二量体および単量体に解離する間、注射されたインスリンの作用は遅延される。
【0010】
インスリン製剤の強度は、単位（Ｕ）で記載され、ここで、１単位は、０．０３５ｍｇのヒトインスリンに相当する。したがって、１００Ｕ／ｍｌのヒトインスリン製剤は、３．５ｍｇ／ｍｌのヒトインスリンの濃度を有する。インスリンデグルデク（ＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリン）は、１００Ｕ／ｍｌ製品および２００Ｕ／ｍｌ製品として市販されている。
【0011】
インスリンの製剤は通常、酸性条件下で少量の水にインスリンを溶解することによって調製される。次いで、亜鉛を製剤に添加し、続いて中和し、フェノールおよびｍ－クレゾールなどの保存剤を添加する。しかしながら、濃縮インスリン製剤は、保存および使用時に不安定となる傾向があり、同様に、インスリン濃度によってＰＫプロファイルが変化することも重要である。
【0012】
ＷＯ２００８／１３２２２４は、糖尿病の治療のための高濃度インスリン溶液を作製するための、噴霧乾燥インスリンを含む医薬組成物を開示している。
【0013】
ＷＯ２００７／０７４１３３は、インスリンデグルデクを含む医薬組成物を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
保存および使用中に安定である濃縮インスリン製剤を有することは有利である。そのような濃縮された製剤は、使い捨て注射ペンの交換頻度を少なくし、耐久性のある注射装置におけるカートリッジの交換頻度を少なくするであろう。また、注射器具内の実質的な開発には、多くの場合、高濃度のインスリン組成物が必要である。
【0015】
インスリン製剤中のインスリン濃度が増加すると、薬物動態プロファイルが変化する一般的な傾向がある。より具体的には、インスリンの所与の用量について、製剤中のインスリン濃度が増加すると、ＣｍａｘおよびＡＵＣ（生物学的利用能）が減少する傾向がある。インスリン濃度をスケーリングする際の薬物動態特性の変化は、通常、異なるインスリン濃度が所望される異なる投与装置に入るインスリン製品に対する課題となっている。
【0016】
本発明は、先行技術の問題を解決する、ＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの特定の医薬組成物に関する。
【課題を解決するための手段】
【0017】
驚くべきことに、貯蔵中および使用中も安定な状態のまま、対応する通常のＵ２００製品と実質的に同様のＰＫプロファイルを有する高濃度の可溶性インスリン製剤が作製され得ることが見出された。
【0018】
したがって、第一の態様では、本発明は、可溶性インスリン調製物であって、
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）と、７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物を提供する。
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）と、７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物を提供する。
【0019】
本発明の第一の実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである。
【0020】
本発明の別の実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである。
【0021】
別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。
【0022】
別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、７．４～７．８の範囲のｐＨを有する。
【0023】
別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む。
【0024】
別の実施形態では、前述のフェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物は、フェノールおよびｍ－クレゾールの混合物である。
【0025】
別の態様では、本発明は、本発明による可溶性インスリン調製物の治療有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与することによって、哺乳動物における血糖値を低下させる方法を提供する。
【0026】
本発明により、糖尿病を有する者は、用量を調整することなく、例えば、ＮεＢ２９ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンのＵ２００製剤とＵ５００製剤とを切り替えることができる。
【0027】
また、例えば１６０Ｕ／日を超えるような非常に高用量の基礎インスリンを必要とする個人は、１日１回の投与でこれを達成することも可能となった。
【0028】
さらに、通常のインスリンペンまたはカートリッジは、通常３ｍＬを含有するため、１本のペンまたはカートリッジに６００Ｕをはるかに超える量、例えば、Ｕ５００製品については１５００Ｕが含まれ、これは、ペンまたはカートリッジの交換頻度がより少ないことを意味する。また、ペンまたはカートリッジをほとんど使い切った時に、用量を頻繁に分割する必要がない。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【発明を実施するための形態】
【0030】
第一の態様では、本発明は、可溶性インスリン調製物であって、
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートと、
７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物を提供する。
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートと、
７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物を提供する。
【0031】
別の態様では、本発明は、可溶性インスリン調製物であって、
・３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
・６ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物に関する。
・３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
・６ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物に関する。
【0032】
別の態様では、本発明は、可溶性インスリン調製物であって、
・３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
・２０ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物に関する。
・３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
・２０ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物に関する。
【0033】
インスリン調製物の場合、インスリンの濃度は通常、ミリリットルあたりの単位、Ｕ／ｍＬで与えられるＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリン１００単位（１００Ｕ）のＵ／ｍＬは、３．６６ｍｇまたは６００ｎｍｏｌのＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトと同等である。
【0034】
また、亜鉛を含むインスリン調製物では、六量体として計算されたインスリンの濃度に対する亜鉛濃度、すなわち、インスリン濃度を６で割った濃度を述べることが一般的である。このモル比は“Ｚｎ／６Ｉｎｓ”と称され、すなわち、インスリン濃度の６分の１に対する亜鉛の相対モル濃度を記述する。
【0035】
インスリン製剤中のインスリン濃度が増加すると、薬物動態プロファイルが変化する一般的な傾向がある。より具体的には、インスリンの所与の用量について、製剤中のインスリン濃度が増加すると、ＣｍａｘおよびＡＵＣ（生物学的利用能）が減少する傾向がある。これは、同じ量のインスリンが投与されるにもかかわらず、Ｕ５００製剤のグルコース低下効果が、Ｕ２００製剤のグルコース低下効果よりも小さいことを意味する。したがって、二つの製剤は生物学的に同等ではない。
【0036】
インスリンは、異なる濃度のインスリンが非常に望ましいいくつかの異なる投与装置に入るため、このスケーラビリティの欠如は、インスリン調製物にとって課題である。
【0037】
本発明者らは、ＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの可溶性調製物について、シトレートおよびナイアシンアミドの添加が、ＣｍａｘおよびＡＵＣ（生物学的有用性）の増加を引き起こすことを発見し、それによって、同じインスリンのＵ２００調製物と生物学的に同等であるＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの高濃度製剤を作製することが可能になる。トレプロスチニルの添加によって同じことが観察された。
【0038】
可溶性インスリン調製物は、１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンを含む。いくつかの実施形態では、前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度は、２４００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３６００ｎｍｏｌ／ｍｌ、または２７００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３３００ｎｍｏｌ／ｍｌである。別の実施形態では、ヒトインスリンのＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）濃度は、約３０００ｎｍｏｌ／ｍｌである。
【0039】
本明細書で使用される「約」という用語は、プラスまたはマイナス１０％、例えばプラスまたはマイナス５％を意味することを意図している。したがって、「約１００Ｕ」という用語は、９０Ｕ～１１０Ｕである。
【0040】
可溶性インスリン調製物は、例えば、酢酸亜鉛または塩化亜鉛として添加され得る亜鉛を含む。可溶性調製物は、４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの範囲の亜鉛イオンを含み得る。一実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである。別の実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、４．７Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．７Ｚｎ／６Ｉｎｓである。別の実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである。さらに別の実施形態では、前述の亜鉛イオンの濃度は、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである。別の実施形態では、本発明による可溶性インスリン調製物は、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの亜鉛イオンの濃度を有する。別の実施形態では、本発明による可溶性インスリン調製物は、５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの亜鉛イオンの濃度を有する。別の実施形態では、本発明による可溶性インスリン調製物は、６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの亜鉛イオンの濃度を有する。
【0041】
本発明による可溶性インスリン調製物は、１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む。一実施形態では、可溶性インスリン調製物は、ナイアシンアミドを含む。可溶性インスリン調製物は、一実施形態では、１３５ｍＭ～１９５ｍＭ、または１５０ｍＭ～１８０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含み得る。別の実施形態では、可溶性調製物は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭ、または１９０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、１１０ｍＭ～１７０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、１５０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。
【0042】
別の実施形態では、可溶性調製物は、約１６０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、約２００ｎＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、２０４ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、約２１０ｎＭの濃度のナイアシンアミドを含む。別の実施形態では、可溶性調製物は、２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む。
【0043】
別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、トレプロスチニルを含む。別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、０．０２μｇ／ｍｌ～０．５μｇ／ｍｌ、０．０４μｇ／ｍｌ～０．３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ～０．２μｇ／ｍｌ、または０．１～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む。別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、０．１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む。
【0044】
本明細書に記載される可溶性インスリン調製物は、６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートを含む。シトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）という用語は、クエン酸塩（ｃｉｔｒａｔｅ ｓａｌｔ）およびクエン酸（ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）を含むと理解されるべきである。一実施形態では、可溶性インスリン調製物は、１５ｍＭ～３０ｍＭ、６ｍＭ～２０ｍＭ、または２０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートを含む。本明細書に記載される可溶性インスリン調製物は、６ｍＭの濃度のシトレートを含む。本明細書に記載される可溶性インスリン調製物は、１０ｍＭの濃度のシトレートを含む。本明細書に記載される可溶性インスリン調製物は、２０ｍＭの濃度のシトレートを含む。
【0045】
本発明の可溶性インスリン調製物は、７．０～８．０の範囲のｐＨを有する。一実施形態では、ｐＨは、７．２～８．０、７．４～７．８、７．０～７．５、７．４～８．０、または７．４～７．８である。別の実施形態では、可溶性インスリン調製物のｐＨはｐＨ７．６である。
【0046】
可溶性インスリン調製物は、滅菌液体であるため、防腐剤を含んでいてもよく、または任意の防腐剤を含まなくてもよい。一実施形態では、本発明による可溶性インスリン調製物は、フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む。一実施形態では、前述の防腐剤は、フェノールである。別の実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾールの混合物などのフェノール系防腐剤の混合物である。別の実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾールの混合物であり、フェノールの濃度は、１．３ｍｇ／ｍｌ～２．０ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度は、１．５ｍｇ／ｍｌ～２．３ｍｇ／ｍｌである。別の実施形態では、防腐剤は、フェノールおよびｍ－クレゾールの混合物であり、フェノールの濃度は１．８ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度は２．０５ｍｇ／ｍｌである。
【0047】
いくつかの実施形態では、可溶性インスリン調製物は、さらなる等張性剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）を含む。一実施形態では、前述の等張性剤はグリセロールである。そのような等張性剤の添加の必要性は、可溶性インスリン調製物の他の成分の濃度が決定されるときに、明らかとなるであろう。別の実施形態では、可溶性インスリン調製物は、さらなる等張性剤を含まない。
【0048】
一実施形態では、可溶性インスリン調製物は、さらなる緩衝剤を含まない。
【0049】
一態様では、本発明は、本明細書に記載の可溶性インスリン調製物の治療有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与することによって、哺乳動物における血糖値を低下させる方法を提供する。
【0050】
一態様では、本発明は、本明細書に記載の可溶性インスリン調製物を前述の対象に投与することを含む、対象における真性糖尿病の治療のための方法が提供される。
【0051】
別の態様では、ストレス誘発性高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、ならびに熱傷、手術創傷、および同化作用（ａｎａｂｏｌｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）が必要とされる他の疾患もしくは傷害、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈心疾患、および他の心血管障害、ならびに重篤な糖尿病患者および非糖尿病患者の治療を含む、高血糖症の治療または予防における使用のための可溶性インスリン調製物が提供される。
【0052】
本発明のインスリン調製物は、当技術分野で公知のように、例えば、実施例に記載されるように調製されてもよい。
【0053】
本発明を、以下の実施形態に要約する。
【0054】
１．可溶性インスリン調製物であって、
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートと、
・７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物。
２．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－ガンマ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、２４００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３６００ｎｍｏｌ／ｍｌである、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、２７００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３３００ｎｍｏｌ／ｍｌである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
４．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、約３０００ｎｍｏｌ／ｍｌである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
５．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
６．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
７．前述の亜鉛イオンの濃度が、４．７Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．７Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
８．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
９．ナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１０．１３５ｍＭ～１９５ｍＭ、または１５０ｍＭ～１８０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１１．１１０ｍＭ～１４０ｍＭ、または１９０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１２．１５０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１３．１１０ｍＭ～１７０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１４．トレプロスチニルを含む、実施形態１～８のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１５．０．０２μｇ／ｍｌ～０．５μｇ／ｍｌ、０．０４μｇ／ｍｌ～０．３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ～０．２μｇ／ｍｌ、または０．１～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む、実施形態１４に記載の可溶性インスリン調製物。
１６．１５ｍＭ～３０ｍＭ、６ｍＭ～２０ｍＭ、または２０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１７．６ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１８．１０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１９．２０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２０．７．２～８．０、７．４～７．８、７．０～７．５、７．４～８．０、または７．４～７．８のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２１．ｐＨ７．６を有する、実施形態２０に記載の可溶性インスリン調製物。
２２．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２３．前述のフェノール系防腐剤が、フェノールである、実施形態２２に記載の可溶性インスリン調製物。
２４．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールである、実施形態２２に記載の可溶性インスリン調製物。
２５．フェノールの濃度が、１．３ｍｇ／ｍｌ～２．０ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度が、１．５ｍｇ／ｍｌ～２．３ｍｇ／ｍｌである、実施形態２３に記載の可溶性インスリン調製物。
２６．フェノールの濃度が、１．８ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度が、２．０５ｍｇ／ｍｌである、実施形態２５に記載の可溶性インスリン調製物。
２７．さらなる等張性剤を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２８．前述の等張性剤が、グリセロールである、実施形態２７に記載の可溶性インスリン調製物。
２９．さらなる等張性剤を含まない、実施形態１～２６のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
３０．さらなる緩衝剤を含まない、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
３１．３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
６ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３２．３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
２０ｍＭの濃度のシトレートと、ｐＨ７．６と、を含む、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３３．先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物の治療有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与することによって、哺乳動物における血糖値を低下させる、方法。
３４．実施形態１～３２のいずれか一つに記載の可溶性インスリン調製物を前述の対象に投与することを含む、対象における真性糖尿病の治療のための、方法。
３５．ストレス誘発性高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、ならびに熱傷、手術創傷、および同化作用が必要とされる他の疾患もしくは傷害、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈心疾患、および他の心血管障害、ならびに重篤な糖尿病患者および非糖尿病患者の治療を含む、高血糖症の治療または予防における使用のための、実施形態１～３２のいずれか一つに記載の可溶性インスリン調製物。
・１８００ｎｍｏｌ／ｍｌ～４２００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
・４．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～７．０Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
・１１０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドまたは０．０２μｇ／ｍｌ～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルと、
・６ｍＭ～４０ｍＭの濃度のシトレートと、
・７．０～８．０の範囲のｐＨと、を含む、可溶性インスリン調製物。
２．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－ガンマ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、２４００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３６００ｎｍｏｌ／ｍｌである、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、２７００ｎｍｏｌ／ｍｌ～３３００ｎｍｏｌ／ｍｌである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
４．前述のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンの濃度が、約３０００ｎｍｏｌ／ｍｌである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
５．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
６．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～６．０Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
７．前述の亜鉛イオンの濃度が、４．７Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．７Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
８．前述の亜鉛イオンの濃度が、５．０Ｚｎ／６Ｉｎｓ～５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓである、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
９．ナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１０．１３５ｍＭ～１９５ｍＭ、または１５０ｍＭ～１８０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１１．１１０ｍＭ～１４０ｍＭ、または１９０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１２．１５０ｍＭ～２２０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１３．１１０ｍＭ～１７０ｍＭの濃度のナイアシンアミドを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１４．トレプロスチニルを含む、実施形態１～８のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１５．０．０２μｇ／ｍｌ～０．５μｇ／ｍｌ、０．０４μｇ／ｍｌ～０．３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ～０．２μｇ／ｍｌ、または０．１～１μｇ／ｍｌの濃度のトレプロスチニルを含む、実施形態１４に記載の可溶性インスリン調製物。
１６．１５ｍＭ～３０ｍＭ、６ｍＭ～２０ｍＭ、または２０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１７．６ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１８．１０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
１９．２０ｍＭの濃度のクエン酸を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２０．７．２～８．０、７．４～７．８、７．０～７．５、７．４～８．０、または７．４～７．８のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２１．ｐＨ７．６を有する、実施形態２０に記載の可溶性インスリン調製物。
２２．フェノール系防腐剤またはフェノール系防腐剤の混合物をさらに含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２３．前述のフェノール系防腐剤が、フェノールである、実施形態２２に記載の可溶性インスリン調製物。
２４．フェノール系防腐剤の混合物が、フェノールおよびｍ－クレゾールである、実施形態２２に記載の可溶性インスリン調製物。
２５．フェノールの濃度が、１．３ｍｇ／ｍｌ～２．０ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度が、１．５ｍｇ／ｍｌ～２．３ｍｇ／ｍｌである、実施形態２３に記載の可溶性インスリン調製物。
２６．フェノールの濃度が、１．８ｍｇ／ｍｌであり、ｍ－クレゾールの濃度が、２．０５ｍｇ／ｍｌである、実施形態２５に記載の可溶性インスリン調製物。
２７．さらなる等張性剤を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
２８．前述の等張性剤が、グリセロールである、実施形態２７に記載の可溶性インスリン調製物。
２９．さらなる等張性剤を含まない、実施形態１～２６のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
３０．さらなる緩衝剤を含まない、先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物。
３１．３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
２１１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
６ｍＭの濃度のシトレートと、７．６のｐＨと、を含む、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３２．３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度のＮεＢ２９－ヘキサデカンジオイル－γ－Ｇｌｕ－（ｄｅｓＢ３０）ヒトインスリンと、
５．５Ｚｎ／６Ｉｎｓの濃度の亜鉛イオンと、
１６１ｍＭの濃度のナイアシンアミドと、
２０ｍＭの濃度のシトレートと、ｐＨ７．６と、を含む、実施形態１に記載の可溶性インスリン調製物。
３３．先行する実施形態のいずれかに記載の可溶性インスリン調製物の治療有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与することによって、哺乳動物における血糖値を低下させる、方法。
３４．実施形態１～３２のいずれか一つに記載の可溶性インスリン調製物を前述の対象に投与することを含む、対象における真性糖尿病の治療のための、方法。
３５．ストレス誘発性高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、ならびに熱傷、手術創傷、および同化作用が必要とされる他の疾患もしくは傷害、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈心疾患、および他の心血管障害、ならびに重篤な糖尿病患者および非糖尿病患者の治療を含む、高血糖症の治療または予防における使用のための、実施形態１～３２のいずれか一つに記載の可溶性インスリン調製物。
【実施例】
【0055】
実施例１－ブタ研究用の製剤
この研究の目的は、トレシーバ（登録商標）Ｕ１００、トレシーバ（登録商標）Ｕ２００および３０００ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｕ５００）での同様のデグルデクの製剤を比較し、フェノールおよびｍ－クレゾールの組み合わせをフェノールのみで置き換える効果を評価し、相対的亜鉛濃度（Ｚｎ／６Ｉｎｓ）を低下させる効果を評価し、ナイアシンアミドの添加の効果を評価し、さらにブタ研究によるシトレートの添加の効果を評価することであった。製剤は、使用試験および保存による物理的および化学的安定性について事前に試験する必要がある。
この研究の目的は、トレシーバ（登録商標）Ｕ１００、トレシーバ（登録商標）Ｕ２００および３０００ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｕ５００）での同様のデグルデクの製剤を比較し、フェノールおよびｍ－クレゾールの組み合わせをフェノールのみで置き換える効果を評価し、相対的亜鉛濃度（Ｚｎ／６Ｉｎｓ）を低下させる効果を評価し、ナイアシンアミドの添加の効果を評価し、さらにブタ研究によるシトレートの添加の効果を評価することであった。製剤は、使用試験および保存による物理的および化学的安定性について事前に試験する必要がある。
【0056】
インスリンデグルデクを約８ｍＭまで水に加え、溶解させた。ｐＨを０．２Ｎ ＮａＯＨによりｐＨ７．６に調整し、ストック溶液を滅菌濾過し、含量を決定した。インスリンデグルデクストック溶液に、過剰の水、グリセロール（２０％（ｗ／ｖｏｌ））、フェノール（５００ｍＭ）、ｍ－クレゾール（１６０ｍＭ）、ナイアシンアミド（１０００ｍＭ）、クエン酸三ナトリウム（１００ｍＭ）、および酢酸亜鉛（２０ｍＭ、塩酸でｐＨを６．６に調整）を記載された順序で添加した。酢酸亜鉛は徐々に添加した。次いで、０．２Ｎ水酸化ナトリウム／塩酸で、ｐＨを７．６に調整し、容量を水で調整し、製剤を滅菌濾過した。製剤を、インスリンペン用３ｍＬカートリッジに充填した。
【0057】
カートリッジのサブセットを、３０℃で１２週間使用試験し、各カートリッジの１ｍＬ製剤に２５μＬの空気を加え、１分／日回転させた。カートリッジは、目視検査により定期的に検査され、期間中、製剤のいずれについても変化または粒子形成は見出されなかった。製剤を、３０℃で１２週間の共有結合高分子量生成物（ＨＭＷＰ）の決定による化学的安定性について試験したが、全てが安定で、ほぼ同じ低い共有結合二量体形成率であることが分かった。
【表1】
【0058】
実施例２－動物実験、研究ＫＭＲＰ１８０８０２
１６頭のメスの家畜ブタ（平均体重約８０ｋｇ）を、試験前に一晩絶食させ、試験インスリン製剤の投与の８時間後に給餌した。インスリンデグルデクの異なる製剤を調査するために、各ブタは、表２に概説されるスケジュールに従って、バランスのとれた非無作為化クロスオーバーデザインで表１に記述された製剤の投与を受けた。
１６頭のメスの家畜ブタ（平均体重約８０ｋｇ）を、試験前に一晩絶食させ、試験インスリン製剤の投与の８時間後に給餌した。インスリンデグルデクの異なる製剤を調査するために、各ブタは、表２に概説されるスケジュールに従って、バランスのとれた非無作為化クロスオーバーデザインで表１に記述された製剤の投与を受けた。
【表2】
【0059】
研究中、１頭のブタを交換する必要があったため、合計で１７頭のブタが研究された。
【0060】
朝、ブタに投与し、２つの抗体を利用した特定の発光酸素チャネリング免疫アッセイ（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｏｘｙｇｅｎ ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）を使用してインスリンデグルデクを測定するために、図１に示すように試料を採取した。
【0061】
ノンコンパートメント解析（Ｐｈｏｅｎｉｘソフトウェア）によって導出されたＡＵＣについてデータ解析を行い、製剤が意図される濃度とわずかに異なるため、用量正規化ＡＵＣ（ＡＵＣ／用量）を計算した。
【0062】
結果
製剤ＡおよびＢの比較は、製剤ＢのＰＫ曲線が、Ｕ１００製剤のＰＫ曲線よりも平坦であることを示すが、総用量正規化ＡＵＣは、顕著な違いはない（図１Ａおよび表３）。製剤Ｂは５．５Ｚｎ／６インスリン分子（トレシーバ（登録商標）Ｕ２００など）が含有され、製剤Ａは５Ｚｎ／６インスリン分子（トレシーバ（登録商標）Ｕ１００など）が含有されていた。５Ｚｎ／６インスリン分子を含む製剤Ｃ中のインスリン濃度を３０００ｎｍｏｌ／ｍｌに増加させることにより、ＰＫ曲線のさらなる平坦化が観測されるが、製剤ＡおよびＢに比べて約１８％の生物学的利用能の減少は明らかである（図１Ａおよび表３）。この比較的大きな低下は、インスリンデグルデクの３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの製剤を１２００ｎｍｏｌ／ｍｌの製剤と生物学的に同等にすることは困難であり、同等の血糖降下効果を与えるためにＵ２００製剤と比較してＵ５００製剤の方が高用量が必要であることを示す。１９ｍＭのフェノールおよび１９ｍＭのｍ－クレゾールから６０ｍＭのフェノールおよび０ｍＭのｍ－クレゾールへの変更は、ＰＫプロファイル（製剤Ｂと比較して約２０％のＡＵＣ／用量の低下）にさらなる影響を与えなかったが、Ｚｎの低下は、生物学的利用能を部分的に増加させ、シトレートまたはナイアシンアミドのいずれかを添加すると、製剤ＡおよびＢと比較して生物学的利用能がより強く増加した。製剤ＧおよびＨについては、製剤Ｂと比較したＡＵＣの低下は、製剤Ｆで見られたものよりも少なく、製剤Ｇについては１０％のみであり、製剤Ｈについては２％のみであった。
製剤ＡおよびＢの比較は、製剤ＢのＰＫ曲線が、Ｕ１００製剤のＰＫ曲線よりも平坦であることを示すが、総用量正規化ＡＵＣは、顕著な違いはない（図１Ａおよび表３）。製剤Ｂは５．５Ｚｎ／６インスリン分子（トレシーバ（登録商標）Ｕ２００など）が含有され、製剤Ａは５Ｚｎ／６インスリン分子（トレシーバ（登録商標）Ｕ１００など）が含有されていた。５Ｚｎ／６インスリン分子を含む製剤Ｃ中のインスリン濃度を３０００ｎｍｏｌ／ｍｌに増加させることにより、ＰＫ曲線のさらなる平坦化が観測されるが、製剤ＡおよびＢに比べて約１８％の生物学的利用能の減少は明らかである（図１Ａおよび表３）。この比較的大きな低下は、インスリンデグルデクの３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの製剤を１２００ｎｍｏｌ／ｍｌの製剤と生物学的に同等にすることは困難であり、同等の血糖降下効果を与えるためにＵ２００製剤と比較してＵ５００製剤の方が高用量が必要であることを示す。１９ｍＭのフェノールおよび１９ｍＭのｍ－クレゾールから６０ｍＭのフェノールおよび０ｍＭのｍ－クレゾールへの変更は、ＰＫプロファイル（製剤Ｂと比較して約２０％のＡＵＣ／用量の低下）にさらなる影響を与えなかったが、Ｚｎの低下は、生物学的利用能を部分的に増加させ、シトレートまたはナイアシンアミドのいずれかを添加すると、製剤ＡおよびＢと比較して生物学的利用能がより強く増加した。製剤ＧおよびＨについては、製剤Ｂと比較したＡＵＣの低下は、製剤Ｆで見られたものよりも少なく、製剤Ｇについては１０％のみであり、製剤Ｈについては２％のみであった。
【0063】
ブタは、ヒトには見られないインスリンデグルデクの吸収における早期のピークを呈する。したがって、Ｃｍａｘの推定および比較は、不確実性を伴う。第２のピーク（投与後１０～１２時間あたりに生じる最大曝露）を考慮すると、製剤Ｆの低下は、製剤Ｂの約３８％であることが観察された。Ｃｍａｘは、製剤Ｇ（製剤Ｂと比較して１０％低下のみ）および製剤Ｈ（製剤Ｂと比較して２１％低下のみ）で増加した。これらの違いは、図１Ｂおよび図２で確認できる。明確にするために、図１Ｂは、２４時間のみにプロットされたすべての平均データを示し、図２は、２４時間にプロットされたデータのみを含む製剤Ａ、Ｂ、Ｆ、ＧおよびＨのデータを示す。
【表3】
【0064】
結論
Ｕ５００製剤がＵ２００製剤と生物学的に同等ではない範囲において、インスリンデグルデクを１２００ｎｍｏｌ／ｍｌ（Ｕ２００）から３０００ｎｍｏｌ／ｍｌ（Ｕ５００）に濃度を上げる場合、およびＵ２００製剤と比較してＵ５００製剤の高用量が同等の血糖降下効果を与えるために必要とされる場合には、相対的生物学的利用能の低下および後期Ｃｍａｘの低下が観察される。我々は、シトレートおよびナイアシンアミドの両方がＡＵＣと部分的にＣｍａｘをほぼ回復することを示してこの問題を解決し、また、シトレートおよびナイアシンアミドの組み合わせを試験して、Ｕ２００トレシーバ（登録商標）と生物学的に同等であり、同じ用量のＵ５００製剤とＵ２００トレシーバ（登録商標）が同等の血糖降下効果をもたらすであろうＵ５００製剤を作製するように誘導した。
Ｕ５００製剤がＵ２００製剤と生物学的に同等ではない範囲において、インスリンデグルデクを１２００ｎｍｏｌ／ｍｌ（Ｕ２００）から３０００ｎｍｏｌ／ｍｌ（Ｕ５００）に濃度を上げる場合、およびＵ２００製剤と比較してＵ５００製剤の高用量が同等の血糖降下効果を与えるために必要とされる場合には、相対的生物学的利用能の低下および後期Ｃｍａｘの低下が観察される。我々は、シトレートおよびナイアシンアミドの両方がＡＵＣと部分的にＣｍａｘをほぼ回復することを示してこの問題を解決し、また、シトレートおよびナイアシンアミドの組み合わせを試験して、Ｕ２００トレシーバ（登録商標）と生物学的に同等であり、同じ用量のＵ５００製剤とＵ２００トレシーバ（登録商標）が同等の血糖降下効果をもたらすであろうＵ５００製剤を作製するように誘導した。
【0065】
実施例３－ブタ研究用の製剤 ＪＳＴＵ１９０６０１
この研究の目的は、デグルデクＵ２００と類似のデグルデク製剤を３０００ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｕ５００）で比較し、２つのレベルでシトレートの効果を評価し、等張性にナイアシンアミドを添加してグリセロールを省略することの効果を評価し、シトレートおよびナイアシンアミドの２つの組み合わせの効果を評価し、および最後に追加のブタ研究によりトレプロスチニルを追加することの効果を試験することであった。製剤は、使用試験および保存による物理的および化学的安定性について事前に試験する必要がある。
この研究の目的は、デグルデクＵ２００と類似のデグルデク製剤を３０００ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｕ５００）で比較し、２つのレベルでシトレートの効果を評価し、等張性にナイアシンアミドを添加してグリセロールを省略することの効果を評価し、シトレートおよびナイアシンアミドの２つの組み合わせの効果を評価し、および最後に追加のブタ研究によりトレプロスチニルを追加することの効果を試験することであった。製剤は、使用試験および保存による物理的および化学的安定性について事前に試験する必要がある。
【0066】
インスリンデグルデクを約７ｍＭまで水に加え、溶解させた。ｐＨを０．２Ｎ ＮａＯＨによりｐＨ７．８に調整し、ストック溶液を滅菌濾過し、含量を決定した。デグルデクストック溶液に、過剰の水、グリセロール（２０％（ｗ／ｖｏｌ））、フェノール（５００ｍＭ）、クレゾール（１６０ｍＭ）、酢酸亜鉛（２０ｍＭ、塩酸でｐＨを６．６に調整、徐々に添加）、ナイアシンアミド（１０００ｍＭ）、クエン酸三ナトリウム（３００ｍＭ）、およびトレプロスチニル（１０μｇ／ｍＬ）を記載された順序で添加した。次いで、０．２Ｎ水酸化ナトリウム／塩酸で、ｐＨを７．６に調整し、容量を水で調整し、製剤を滅菌濾過した。製剤を、インスリンペン用３ｍＬカートリッジに充填した。
【表4】
【0067】
実施例４－動物実験
この研究は、Ｌａｒｓ Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｈｉｌｌｅｒｏｄｖｅｊ ７０，Ｌｙｎｇｅ，Ｄｅｎｍａｒｋから引き渡されたＳＰＦ起源のメスＬＹＤブタ１６頭を対象に実施された。順化期間の開始時、ブタの体重は５９．５～６８．５ｋｇの範囲内であり、最初の投与日では予想される最小体重は７０ｋｇであった。研究中、追加の動物４頭が利用可能であり、これらのうち３頭はカテーテルの機能不全および／または感染のため含められた。
この研究は、Ｌａｒｓ Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｈｉｌｌｅｒｏｄｖｅｊ ７０，Ｌｙｎｇｅ，Ｄｅｎｍａｒｋから引き渡されたＳＰＦ起源のメスＬＹＤブタ１６頭を対象に実施された。順化期間の開始時、ブタの体重は５９．５～６８．５ｋｇの範囲内であり、最初の投与日では予想される最小体重は７０ｋｇであった。研究中、追加の動物４頭が利用可能であり、これらのうち３頭はカテーテルの機能不全および／または感染のため含められた。
【0068】
動物は、試験前に一晩絶食させ、試験インスリン製剤の投与の８時間後に給餌した。インスリンデグルデクの異なる製剤を調査するために、各ブタは、表５に概説されるスケジュールに従って、バランスのとれた非無作為化クロスオーバーデザインで表４に記述された製剤の投与を受けた。
【表5】
【0069】
４頭の追加動物のうち３頭を使用して、機能不全のカテーテルを有する動物と交換したので、合計１９頭のブタを試験した。注射カテーテルの不具合のため、合計で７回の投与は実施されなかった。第８群からの１頭の動物は、その動物におけるサンプリングが、インスリン投与後１５０分を超えてその日に不可能であったため、データ解析から除外された。
【0070】
結果：
図３は、実験ＪＳｔｕ１９０６０１からのＰＫ曲線を示す。実施例２は、シトレートまたはナイアシンアミドのいずれかを添加すると、生物学的利用能がどのように増加したかを示し、ＪＳｔｕ１９０６０１では、シトレートおよびナイアシンアミドの組み合わせを試験した。表６は、シトレートおよびナイアシンアミドの濃度を用量設定して、Ｕ５００製剤のＡＵＣをＵ２００製剤と一致させる方法を示す。具体的には、シトレートおよびナイアシンアミドの両方を含有する製剤６も製剤７も、ＡＵＣに関して製剤１とは顕著に異なっておらず、数値的には、Ｕ５００インスリンデグルデク製剤７のＡＵＣは、Ｕ２００インスリンデグルデク製剤１の２％以内であった。
図３は、実験ＪＳｔｕ１９０６０１からのＰＫ曲線を示す。実施例２は、シトレートまたはナイアシンアミドのいずれかを添加すると、生物学的利用能がどのように増加したかを示し、ＪＳｔｕ１９０６０１では、シトレートおよびナイアシンアミドの組み合わせを試験した。表６は、シトレートおよびナイアシンアミドの濃度を用量設定して、Ｕ５００製剤のＡＵＣをＵ２００製剤と一致させる方法を示す。具体的には、シトレートおよびナイアシンアミドの両方を含有する製剤６も製剤７も、ＡＵＣに関して製剤１とは顕著に異なっておらず、数値的には、Ｕ５００インスリンデグルデク製剤７のＡＵＣは、Ｕ２００インスリンデグルデク製剤１の２％以内であった。
【表6】
【0071】
ブタは、ヒトには見られないインスリンデグルデクの吸収における早期のピークを呈する。したがって、Ｃｍａｘの推定および比較は、不確実性を伴う。明確にするために、図４は、２４時間にプロットされたデータのみを使用した、製剤１、２、６、および７のデータを示す。第２のピーク（投与後１０～１２時間あたりに発生する最大曝露）を考慮すると、Ｕ５００製剤２の低下は、Ｕ２００製剤１のそれに対して約４２％である（ｐ＜０．００１）ことが観察された。Ｃｍａｘは、６ｍＭのシトレートと２１１ｍＭのナイアシンアミドを含有するＵ５００製剤６（製剤１と比較して４％の低下のみ、統計的に有意ではない）で増加し、２０ｍＭのシトレートと１６１ｍＭのナイアシンアミドを含有する製剤７でさらに増加した（製剤１と比較して１０％の増加、統計的に有意ではない）。
【0072】
我々は、ナイアシンアミドとシトレートの両方を製剤に添加する場合、ＡＵＣと後期Ｃｍａｘの両方を調整することで、我々が探索したＵ２００製剤空間におけるナイアシンアミドとシトレートの濃度を有するデグルデクＵ５００製剤が、臨床試験においてトレシーバ（登録商標）Ｕ２００と生物学的に同等であることを証明できるほど十分に近づけて、デグルデクＵ２００製剤中の値に一致させることができることに留意する。
【0073】
結論：
実施例４は、インスリンデグルデクのＵ５００製剤におけるシトレートおよびナイアシンアミドの適切な組み合わせによって、ＣｍａｘとＡＵＣの両方をＵ２００デグルデク製剤と一致させることが可能であり、それによって、トレシーバ（登録商標）Ｕ２００と生物学的に同等であるインスリンデグルデクのＵ５００製剤を作製することが可能であることを示す。
実施例４は、インスリンデグルデクのＵ５００製剤におけるシトレートおよびナイアシンアミドの適切な組み合わせによって、ＣｍａｘとＡＵＣの両方をＵ２００デグルデク製剤と一致させることが可能であり、それによって、トレシーバ（登録商標）Ｕ２００と生物学的に同等であるインスリンデグルデクのＵ５００製剤を作製することが可能であることを示す。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】