特許 7520731 β－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）中のビタミンＤの安定性

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-07-12

(45)【発行日】2024-07-23

(54)【発明の名称】β－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）中のビタミンＤの安定性

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/155 20160101AFI20240716BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20240716BHJP

   A61P 3/02 20060101ALI20240716BHJP

   A61K 31/593 20060101ALI20240716BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240716BHJP

【ＦＩ】

A23L33/155

A23L33/10

A61P3/02 102

A61K31/593

A61K47/12

【請求項の数】 5

(21)【出願番号】P 2020572417

(86)(22)【出願日】2019-06-25

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-10-27

(86)【国際出願番号】 US2019038948

(87)【国際公開番号】W WO2020263229

(87)【国際公開日】2020-12-30

【審査請求日】2022-06-21

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】512157966

【氏名又は名称】メタボリック・テクノロジーズ，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100157923

【弁理士】

【氏名又は名称】鶴喰 寿孝

(72)【発明者】

【氏名】ラスメイチャー，ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ププラ，マーティン

【審査官】大久保 智之

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１４－５０９８４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００６／００１９９３３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１７－５１０６２９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ２３Ｌ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

遊離酸型のβ－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）、ビタミンＤおよび少なくとも１つの安定化賦形剤を含む、安定配合物であって、該安定化賦形剤が、ＥＤＴＡ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、カルニチン、ローズマリー抽出物、カルノソル酸、およびソルビン酸からなるリストより選択される、安定配合物。

【請求項2】

安定化賦形剤が、ＥＤＴＡおよびブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）からなるリストより選択される、請求項１の配合物。

【請求項3】

配合物が、カプセル、ソフトゲル、液体、および食品からなるリストより選択される送達型内に含有される、請求項１の配合物。

【請求項4】

ビタミンＤおよび遊離酸型のβ－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）を含有する配合物中に、少なくとも１つの安定化賦形剤を含める工程を含む、酸性組成物中のビタミンＤを安定化させる方法であって、該安定化賦形剤が、ＥＤＴＡ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、カルニチン、ローズマリー抽出物、カルノソル酸、およびソルビン酸からなるリストより選択される、方法。

【請求項5】

遊離酸型のβ－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）およびビタミンＤを含有する酸性配合物中のビタミンＤの分解を最小限にする方法であって、前記配合物中に少なくとも１つの安定化賦形剤を含める工程を含み、該安定化賦形剤が、ＥＤＴＡ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、カルニチン、ローズマリー抽出物、カルノソル酸、およびソルビン酸からなるリストより選択される、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１８年６月２５日出願の米国仮特許出願第６２／６８９，３０５号に優先権を請求し、そして該仮出願は本明細書に援用される。
１． 分野
本発明は、β－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）およびビタミンＤを含む組成物に関する。特に、本発明は、ＨＭＢおよびビタミンＤを含有する組成物、ならびにビタミンＤを酸性組成物と組み合わせた際に、ビタミンＤを安定化させる方法に関する。

【発明の概要】

【0002】

２． 背景
ビタミンＤは、古典的に、カルシウムおよびリン代謝、ならびに骨強度と関連付けられてきている。最近まで、ビタミンＤ欠乏疾患であるクル病を用いて、適切なビタミンＤレベルが定義されてきた。近年、ビタミンＤは、カルシウムおよび骨構造以外の代謝に、より広い影響を有することが見出されてきている。低ビタミンＤ状態は、以下：骨粗鬆症、転倒（ｆａｌｌｓ）、Ｉ型糖尿病、癌、自己免疫疾患、高血圧、歯周病、多発性硬化症、感染に対する感受性／劣った反応に関連付けられてきている^１。

【0003】

ビタミンＤ欠乏症は世界的な問題であり、日光への曝露が減少しており、そして日焼け止めの使用が増加するにつれて、問題は悪化する一方である。食餌および健康状態もまた、ビタミンＤレベルに対する軽減要因になりうる。脂肪吸収不良症候群、慢性疾患、特定の投薬中、または肥満の被験体は、ビタミンＤ欠乏症のより高いリスクを有する^２。肌の色合いもまた影響を有する可能性もあり、肌の色合いがより濃いと、同じ量のビタミンＤを産生するためにより多くの時間を要する。したがって、ビタミンＤを増加させ、そして欠乏症を減少させる最適の方法は補充である^２。コレカルシフェロール（ビタミンＤ_３）は、皮膚中の７－デヒドロコレステロールの照射を通じてヒトによって合成可能であるか、またはラノリンから抽出されうる。

【0004】

天然存在食品でビタミンＤを含有するものは非常にわずかであるが、脂肪の多い魚肉および魚肝油は最適な供給源である。少量のビタミンＤが、ウシ肝臓、乳製品、および各卵黄（ｅａｃｈ ｙｏｌｋ）に見られる。いくつかのキノコはビタミンＤ_２を提供するが、量は多様である。ビタミンＤはわずかな食品にのみに、そしてしばしば少量でしか含有されないため、食品の強化または栄養補助食品を通じた補充が必要である。１９３０年以来、食品および飲料製造業者は、ミルク、パン、ホットドッグ、ソーダそしてさらにはビールなどの食品の強化を開始した。ビタミンＤはまた、栄養補助食品中でも摂取可能である。

【0005】

ビタミンＤ_３は、巨大でそして疎水性のステロール分子であり、水溶性はわずかで、光および酸素によって容易に分解される。ビタミンＤの安定性は、水、光、酸性の非存在下、および低温で優れている^３。酸および光に曝露された際、５，６－トランス異性体およびイソタキステロールが形成されうる^４。ビタミンは、ビタミンＡよりも酸化に感受性でないが、ビタミンＤの酸化は、セコステロイド構造の５，６および７，８位の共役二重結合系での分解の主な経路でありうる^３。ビタミンＤは、液乳産生のために用いられるプロセスまたは脱脂粉乳産生において、非常に安定である^４。９５℃で注入される蒸気では有意な損失は観察されなかった^５。より最近、ビタミンＤは、およそ４のｐＨを有するオレンジジュース中で安定であることが見出された^６。生物学的利用能は、カプセル型で消費された際と等しく利用可能である。しかし、４およびそれより低いｐＨでのビタミンＤ３の長期安定性は決定されてきていない。

【0006】

ＨＭＢ
アルファ－ケトイソカプロン酸（ＫＩＣ）は、ロイシンの最初の主な、そして活性である代謝産物である。ＫＩＣ代謝の少量の産物は、β－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（ＨＭＢ）である。ＨＭＢは、多様な適用の背景内で有用であることが見出されてきている。特に、米国特許第５，３６０，６１３号（Ｎｉｓｓｅｎ）において、ＨＭＢは総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールの血中レベルを減少させるために有用であると記載される。米国特許第５，３４８，９７９号（Ｎｉｓｓｅｎら）において、ＨＭＢはヒトにおいて窒素保持を促進するために有用であると記載される。米国特許第５，０２８，４４０号（Ｎｉｓｓｅｎ）は、動物における除脂肪組織発展を増加させるためのＨＭＢの有用性を論じる。また、米国特許第４，９９２，４７０号（Ｎｉｓｓｅｎ）には、ＨＭＢは哺乳動物の免疫反応を増進させる際に有効であると記載される。米国特許第６，０３１，０００号（Ｎｉｓｓｅｎら）は、疾患関連消耗を治療するためのＨＭＢおよび少なくとも１つのアミノ酸の使用を記載する。

【0007】

タンパク質分解を抑制するためのＨＭＢの使用は、ロイシンがタンパク質節約特性を有するという観察から生じる。必須アミノ酸であるロイシンは、タンパク質合成に用いられるかまたはアミノ基転移されてα－ケト酸（α－ケトイソカプロン酸、ＫＩＣ）になるかいずれかでありうる。１つの経路において、ＫＩＣは酸化されてＨＭＢになる可能性があり、そしてこれはロイシン酸化のおよそ５％を占める。ＨＭＢは、筋量および強度の増進においてロイシンより優れている。ＨＭＢの最適効果は、ＨＭＢのカルシウム塩として与えられた場合、１日あたり３．０グラムで、または１日あたり０．０３８ｇ／体重ｋｇで達成可能である一方、ロイシンの最適効果は、１日あたり３０．０グラムより多くを必要とする。

【0008】

ひとたび産生されるかまたは摂取されると、ＨＭＢは２つの運命を有するようである。第一の運命は、尿中の単純排出である。ＨＭＢが摂取された後、尿濃度が増加し、ＨＭＢの尿へのおよそ２０～５０％喪失が生じる。別の運命は、ＨＭＢのＨＭＢ－ＣｏＡへの活性化に関する。ひとたびＨＭＢ－ＣｏＡに変換されると、ＨＭＢ－ＣｏＡのＭＣ－ＣｏＡへの脱水、または細胞内コレステロール合成の基質を提供するＨＭＢ－ＣｏＡのＨＭＧ－ＣｏＡへの直接変換のいずれかが起こりうる。いくつかの研究によって、ＨＭＢがコレステロール合成経路内に取り込まれて、そして損傷を受けた細胞膜の再生に用いられる、新規細胞膜の供給源となりうることが示されてきている。ヒト研究によって、血漿ＣＰＫ（クレアチンホスホキナーゼ）上昇によって測定される、激しい運動後の筋損傷が、最初の４８時間以内のＨＭＢ補充で減少することが示されてきている。ＨＭＢの保護効果は、連続して毎日使用していれば、最大３週間持続する。多くの研究によって、ＨＭＢの有効用量はＣａＨＭＢ（カルシウムＨＭＢ）として１日あたり３．０グラム（～３８ｍｇ・ｋｇ体重^－１・日^－１）であることが示されてきている。ＨＭＢは安全性に関して試験されており、健康な若者または高齢成人で副作用はまったく見られない。Ｌ－アルギニンおよびＬ－グルタミンとのＨＭＢの組み合わせもまた、ＡＩＤＳおよび癌患者に補充された際、安全であることが示されてきている。

【0009】

ＨＭＢの送達型であるＨＭＢ遊離酸（「ＨＭＢＦＡ」）が開発されてきている。この送達型は、ＣａＨＭＢよりもより迅速に吸収され、そしてより高い組織クリアランスを有することが示されてきている。この送達型は、米国特許公報第２０１２００５３２４０号に記載されており、該文献は本明細書にその全体が援用される。

【0010】

ＨＭＢは、筋量増加、強度増加、および筋機能改善に有効であることが示されてきている。これらの効果は、血中のビタミンＤレベルが十分である場合に最も有意であり、該レベルは、少なくともおよそ２５ｎｇ／ｍｌまたはそれより高いとさらに定義されてきている。

【0011】

したがって、筋量、強度および機能に対するＨＭＢの影響を最大にするために、ＨＭＢとビタミンＤを組み合わせることが望ましい。しかし、ビタミンＤ、および特にビタミンＤ３は、遊離酸型のＨＭＢ（ＨＭＢＦＡ）を含む酸性組成物と組み合わされた際、安定ではないことが見出されてきている。ＨＭＢＦＡおよびビタミンＤのみを含む組成物中のビタミンＤレベルは、経時的に有意に分解される。ＨＭＢＦＡは、筋に対する効果に関して、ＨＭＢのより有効な送達型でありうるため、ＨＭＢの有効性を最大にするためにＨＭＢＦＡとビタミンＤを組み合わせることが望ましい。したがって、ＨＭＢＦＡおよびビタミンＤを含有する安定配合物を開発する必要性がある。この目的に向けて、ＨＭＢを含有する配合物を含む酸性配合物において、少なくとも１つの安定化賦形剤を包含して、ビタミンＤが安定化されることが発見されてきている。

【0012】

発明の要旨
本発明の１つの目的は、ＨＭＢＦＡおよび安定であるビタミンＤを含有する組成物を提供することである。

【0013】

本発明の別の目的は、ビタミンＤが経時的に有意に減少しない、ＨＭＢＦＡおよびビタミンＤを含有する組成物を提供することである。
本発明のこれらのおよび他の目的は、以下の明細書、図、および請求項を参照すると、当業者には明らかとなるであろう。

【0014】

本発明は、従来遭遇されてきた困難を克服することを意図する。この目的に向けて、ＨＭＢＦＡおよびビタミンＤを含む組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、配合物７中のビタミンＤの安定性を示す。

【図2】図２は、配合物１０中のビタミンＤの安定性を示す。

【図3】図３は、配合物１１中のビタミンＤの安定性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

ビタミンＤをＨＭＢと組み合わせた際に、ビタミンＤの安定性を改善するための配合物を本明細書に開示する。ＨＭＢおよびビタミンＤの配合物において、安定化賦形剤として作用するさらなる構成要素を含めると、ビタミンＤの安定性が改善されることが発見されてきている。安定化賦形剤の代表的な例には、限定されるわけではないが、ＥＤＴＡ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、カルニチン、ローズマリー抽出物、カルノソル酸（ｃａｌｎｏｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、および／またはソルビン酸が含まれる。ＨＭＢおよびビタミンＤを含有する配合物における、これらの添加剤の少なくとも１つの包含は、配合物中のビタミンＤの経時的な損失を最小限にする。酸性構成要素（例えばＨＭＢＦＡ）と組み合わされたビタミンＤを含有する配合物への添加剤の添加は、経時的な分解に対してビタミンＤを安定化させる。

【0017】

ビタミンＤは、ビタミンＤ_２、Ｄ_３、およびＤ_４ならびに関連類似体を含むよう意図される。
本発明に含まれる安定化賦形剤には、ＥＤＴＡ、あるいはＢＨＴ、ＢＨＡ、パルミチン酸アスコルビル、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、アスコルビン酸、システイン、メチオニン、モノチオグリセロール、チオ硫酸ナトリウム、または亜硫酸塩を含む、酸化防止剤が含まれる。

【0018】

ビタミンＤは、酸性配合物中に含まれた際、経時的に有意に分解されることが見出されてきている。低ｐＨの酸性配合物中で、ビタミンＤをＨＭＢＦＡと組み合わせることが望ましいため、ＨＭＢおよびビタミンＤの安定配合物に関する必要性が存在する。安定化賦形剤、例えばＥＤＴＡ、ＢＨＴ、カルニチン、ローズマリー抽出物、カルノソル酸、および／またはソルビン酸を含むと、ビタミンＤが経時的な分解に対して安定化された配合物が生じる。

【0019】

大部分の例では、臨床研究に利用され、そしてエルゴジェニックな補助として市販されているＨＭＢは、カルシウム塩型である。最近の進歩によって、ＨＭＢが、ヒトおよび動物使用のために、そして好ましくは栄養補助食品として、または食品に取り込まれて使用されるために、遊離酸型で製造されることが可能になってきている。遊離酸型のＨＭＢ（ＨＭＢＦＡ）が開発されてきており、これはＣａＨＭＢより迅速に吸収されて、より迅速でそしてより高いピーク血清ＨＭＢレベル、および組織への血清クリアランス改善を生じることが示されてきている。ＨＭＢＦＡのｐＨは＜３である。

【0020】

したがって、ＨＭＢ遊離酸は、特に、激しい運動直前に投与する際には、カルシウム塩型よりもより効率的なＨＭＢ投与法である可能性もある。しかし、一般の当業者は、本発明が任意の型のＨＭＢを含むことを認識するであろう。

【0021】

約０．５グラムＨＭＢから約３０グラムＨＭＢの典型的な投薬範囲を生じるような方式での送達および／または投与型に、任意の型のＨＭＢを取り込んでもよい。
本発明の背景内で、任意の適切な用量のＨＭＢを用いてもよい。適切な用量を計算する方法が、当該技術分野に周知である。

【0022】

組成物を食用型で経口投与する場合、組成物は、好ましくは栄養補助食品、食品または薬学的媒体の形、より好ましくは、栄養補助食品または食品の形である。組成物を含む任意の適切な栄養補助食品または食品を、本発明の背景内で利用してもよい。一般の当業者は、組成物が、形（例えば栄養補助食品、食品または薬学的媒体）に関わらず、アミノ酸、ビタミン、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂肪、糖、ミネラルおよび／または微量元素を含んでもよいことを理解するであろう。

【0023】

栄養補助食品または食品として組成物を調製するため、組成物は、通常、組成物が栄養補助食品または食品中で実質的に均一に分布するような方式で、組み合わせられるかまたは混合されるであろう。あるいは、組成物を液体中、例えば水中に溶解してもよい。

【0024】

栄養補助食品の組成物は、粉末、ゲル、液体であってもよいし、あるいは例えばソフトゲル配合物中に錠剤化されるかまたは被包されてもよい。以下の実施例は、ソフトゲルまたはカプセル送達型で、ＨＭＢと組み合わされた際のビタミンＤの安定性を調べた。本発明は、いかなる特定の送達型にも限定されず、そして本発明には、液体配合物、ゲルおよび食品中のＨＭＢおよびビタミンＤの組み合わせが含まれてもよい。

【0025】

組成物を含む任意の適切な薬学的媒体を本発明の背景内で利用してもよいが、好ましくは、組成物は、適切な薬学的キャリアー、例えばデキストロースまたはスクロースと組み合わせられる。

【0026】

さらに、薬学的媒体の組成物を、任意の適切な方式で静脈内投与してもよい。静脈内注入を通じた投与のため、組成物は、好ましくは、水溶性非毒性型である。静脈内投与は、静脈内（ＩＶ）療法を受けている入院患者に特に適している。例えば、組成物を、患者に投与するＩＶ溶液中（例えば生理食塩水またはグルコース溶液）中に溶解してもよい。また、組成物を栄養ＩＶ溶液に添加してもよく、これにはアミノ酸、グルコース、ペプチド、タンパク質および／または脂質が含まれてもよい。静脈内投与しようとする組成物の量は、経口投与で用いるレベルと同様であってもよい。経口注入は、経口投与よりもより制御され、そして正確でありうる。

【0027】

組成物を投与する頻度を計算する方法は、当該技術分野に周知であり、そして任意の適切な投与頻度を本発明の背景内で（例えば１日１回６ｇ用量または１日２回３ｇ用量）、そして任意の適切な期間に渡って用いてもよい（例えば５分間の期間に渡って、または１時間の期間に渡って単回用量を投与してもよいし、あるいは長期間に渡って多数回の用量を投与してもよい）。組成物を長期間、例えば数週、数ヶ月または数年に渡って投与してもよい。

【0028】

ＨＭＢおよびビタミンＤの任意の適切な用量を本発明の背景内で用いてもよい。適切な用量を計算する方法が当該技術分野に周知である。
用語、投与することまたは投与には、組成物およびその組み合わせを消費する哺乳動物に組成物を提供する工程が含まれる。

【実施例】

【0029】

以下の実施例は、さらに詳細に本発明を例示するであろう。本明細書の実施例において、一般的に記載され、そして例示されるような本発明の組成物は、多様な配合物および投薬型で合成されてもよいことが容易に理解されるであろう。したがって、本発明の方法、配合物および組成物の現在好ましい態様の以下のより詳細な説明は、請求するような本発明の範囲を限定するとは意図されず、単に本発明の現在好ましい態様の代表でしかない。

【0030】

以下の実験の目的は、異なる配合物中のＨＭＢＦＡ中のビタミンＤ_３の安定性を試験することであった。１０％未満のビタミンＤ_３の損失は、許容されうると見なされた。
方法：１１の異なるＨＭＢＦＡ／ビタミンＤ_３配合物を試験した。これらの配合物を、経時的なビタミンＤ_３の安定性に関して試験した。配合物は以下の通りであった：
１． ＨＭＢＦＡ＋ビタミンＤ３（１００ＨＰ、ＢＡＳＦ、デンマーク）
２． 塩化コリン（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ）を加えたＨＭＢ ＦＡ中のビタミンＤ３（１００ＨＰ、ＢＡＳＦ、デンマーク）
３． ベタイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えたＨＭＢ ＦＡ中のビタミンＤ_３（１００ＨＰ、ＢＡＳＦ、デンマーク）
４． 緩衝ＨＭＢＦＡ＋ビタミンＤ_３（１００ＨＰ、ＢＡＳＦ、デンマーク）
５． 緩衝ＨＭＢＦＡ＋ＢＡＳＦ保護ビタミンＤ_３（１００ＧＦＰ／ＨＰ、ＢＡＳＦ、デンマーク）
６． ＨＭＢＦＡ＋ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ（登録商標）保護ビタミンＤ_３（ＡｑｕａＮｏｖａ（登録商標）、ドイツ）
７． ６０ｐｐｍ ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｖｅｒｓｅｎｅ^ＴＭ ＮＡキレート剤、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州ミッドランド）で安定化された、緩衝ＨＭＢ遊離酸＋ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ（登録商標）保護ビタミンＤ_３（ＡｑｕａＮｏｖａ、ドイツ）
８． ６０ｐｐｍ ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｖｅｒｓｅｎｅ^ＴＭ ＮＡキレート剤、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州ミッドランド）で安定化された、ＨＭＢＦＡ＋ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ（登録商標）保護ビタミンＤ_３（ＡｑｕａＮｏｖａ、ドイツ）
９． ６０ｐｐｍ ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｖｅｒｓｅｎｅ^ＴＭ ＮＡキレート剤、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州ミッドランド）で安定化された、緩衝ＨＭＢＦＡ＋ビタミンＤ_３（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）
１０． ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で安定化された、緩衝ＨＭＢＦＡ＋ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ（登録商標）ビタミンＤ_３（ＡｑｕａＮｏｖａ、ドイツ）＋Ｌ－カルニチン
１１． ＮｏｖａＳｏｌローズマリー（登録商標）、ＮｏｖａＳｏｌ ＤＳ／４（登録商標）、およびＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で安定化された、緩衝ＨＭＢＦＡ＋ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ（登録商標）ビタミンＤ３（ＡｑｕａＮｏｖａ、ドイツ）＋Ｌ－カルニチン
ビタミンＤ３を、ＨｅａｒｔｌａｎｄアッセイによりＨＰＬＣによって測定した。

【0031】

結果：試験した１１の配合物のうち、６０ｐｐｍ ＥＤＴＡ二ナトリウム（Ｖｅｒｓｅｎｅ^ＴＭ ＮＡ）で安定化された、ＮｏｖａＳｏｌ Ｄ保護ビタミンＤ３に加えて緩衝ＨＭＢＦＡを含有する配合物７、ＢＨＴで安定化されたＮｏｖａＳｏｌ Ｄ保護ビタミンＤ３に加えてＨＭＢＦＡを含有する配合物１０、ならびにＮｏｖａＳｏｌローズマリー、ＮｏｖａＳｏｌ ＤＳ／４、およびＢＨＴで安定化された、緩衝ＨＭＢＦＡ＋ＮｏｖａＳｏｌ ＤビタミンＤ３を含有する配合物１１は安定であった。以下の表に、ビタミンＤ３のパーセント変化を提示する。

【0032】

表１

【0033】

【表1】

【0034】

図１、２、および３は、それぞれ、配合物７、１０、および１１におけるビタミンＤ３の安定性を例示する。結論として、これらの研究は、緩衝ＨＭＢＦＡおよびＥＤＴＡ二ナトリウムとともに配合した場合、またはＢＨＴをＥＤＴＡ二ナトリウムに置換した場合、ビタミンＤ_３が安定であることを立証する。保護ビタミンＤ_３、例えばＮｏｖａＳｏｌ Ｄもまた必要である。

【0035】

遊離酸型の緩衝ＨＭＢ（ＨＭＢＦＡ）の調製
簡潔には、４００ｇ ＨＭＢＦＡ（ＴＳＩロット１２１１１０３６）を１リットルビーカー内に測り入れ、そして次いで、３７．８ｇの炭酸カリウム（Ｋ_２ＣＯ_３）をＨＭＢＦＡに添加した。攪拌バーを加え、そして混合物を６０時間攪拌した。生じたｐＨはおよそ４．５であった。あるいは、水（３５ｇ）を炭酸カリウム（３７ｇ）と混合し、そして次いで、ＨＭＢＦＡ（４００ｇ）を添加することによって、反応を加速してもよい。

【0036】

配合物７中のビタミンＤ３は、ＡｑｕａＮｏｖａ由来であり、そしてＮｏｖａＳＯＬ Ｄと記載される。このビタミンＤ３製品は、ポリソルベート８０で保護されている。該製品は水溶性および脂溶性であり、透明な溶液を生じる。必要な構成物質の量を計算するため、以下を用いた：カプセルあたり、２５０ＩＵビタミンＤ３（計算１μｇ＝４０ＩＵ）、すなわちこの０．２５％ＮｏｖａＳＯＬ Ｄ製品に基づき６．２５μｇを用いるため、カプセルあたり２．５ｍｇのＮｏｖａＳＯＬ Ｄが必要である。

【0037】

配合物７および配合物８に用いたＥＤＴＡは、ＤｏｗのＥＤＴＡ二ナトリウムであった（Ｖｅｒｓｅｎｅ^ＴＭ ＮＡキレート剤、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州ミッドランド）。配合物１０および１１において、ＥＤＴＡ二ナトリウムは保存剤ＢＨＴで置換された。さらに、配合物１１はまた、カルノソル酸が豊富な酸化防止剤ＮｏｖａＳｏｌローズマリー抽出物および保存剤ＮｏｖａＳｏｌ ＤＳ／４（ソルビン酸）も含有した。

【0038】

前述の説明および図は、本発明の例示的態様を含む。前述の態様および本明細書記載の方法は、当業者の能力、経験、および好みに基づいて多様であってもよい。特定の順序での方法工程の単なる列挙は、方法工程の順序に対するいかなる制限も構成しない。前述の説明および図は、本発明を単に説明し、そして例示し、そして本発明は、請求項がそう制限されていない限り、こうしたものに限定されない。本開示を示された当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、その修飾および変動を行うことが可能であろう。

【0039】

参考文献

【0040】

【化1】

【図1】

【図2】

【図3】