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特許7523164コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを標的とするＰＲＯＴＡＣ、およびその調製方法と応用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-07-18
(45)【発行日】2024-07-26
(54)【発明の名称】コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを標的とするＰＲＯＴＡＣ、およびその調製方法と応用
(51)【国際特許分類】
C07D 401/14 20060101AFI20240719BHJP
A61K 31/53 20060101ALI20240719BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240719BHJP
【ＦＩ】
C07D401/14 CSP
A61K31/53
A61P31/14
【請求項の数】
5
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023036522
(22)【出願日】2023-03-09
(65)【公開番号】P2023152797
(43)【公開日】2023-10-17
【審査請求日】2023-06-12
(31)【優先権主張番号】202210335448.3
(32)【優先日】2022-03-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】522281350
【氏名又は名称】シャンシー・パンロン・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＡＮＸＩ ＰＡＮＬＯＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】ＮＯ． ２８０１， ＢＡＬＩＵ ２ＮＤ ＲＯＡＤ， ＭＯＤＥＲＮ ＴＥＸＴＩＬＥ ＩＮＤＵＳＴＲＩＡＬ ＰＡＲＫ， ＢＡＱＩＡＯ ＤＩＳＴＲＩＣＴ， ＸＩ’ＡＮ， ７１００２５ ＳＨＡＡＮＸＩ， ＣＨＩＮＡ
(74)【代理人】
【識別番号】110001818
【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ
(72)【発明者】
【氏名】チェンユアン・リャン
(72)【発明者】
【氏名】リャン・シン
(72)【発明者】
【氏名】レイ・ティエン
(72)【発明者】
【氏名】ジュアン・シア
(72)【発明者】
【氏名】ナン・チン
(72)【発明者】
【氏名】ジンイー・リー
(72)【発明者】
【氏名】タオタオ・チアン
(72)【発明者】
【氏名】ハン・リー
(72)【発明者】
【氏名】シューチュアン・ワン
(72)【発明者】
【氏名】シャオリン・シエ
(72)【発明者】
【氏名】ドゥジュー・ジャン
(72)【発明者】
【氏名】チンボー・ジャオ
(72)【発明者】
【氏名】ジェンフェン・シー
(72)【発明者】
【氏名】ミン・リー
(72)【発明者】
【氏名】シャオジュン・ジャン
(72)【発明者】
【氏名】カンシオン・ウー
(72)【発明者】
【氏名】キャサリン・ジェー・リー
(72)【発明者】
【氏名】マギー・レウィス
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ・マー
(72)【発明者】
【氏名】シュイファ・ジョウ
【審査官】中村 政彦
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０２１／２３１７７８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】UNOH, Y. et al.，“Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19”，Journal of Medicinal Chemistry，2022年03月30日，Vol. 65, No. 9，pp. 6499-6512，DOI: 10.1021/acs.jmedchem.2c00117
【文献】DESANTIS, J. et al.，“Indomethacin-based PROTACs as pan-coronavirus antiviral agents”，European Journal of Medicinal Chemistry，2021年，Vol. 226，pp. 113814，DOI: 10.1016/j.ejmech.2021.113814
【文献】内藤 幹彦 他，“分子間相互作用を基盤とするユビキチン・プロテアソーム創薬”，日本薬理学雑誌，2021年，第156巻，第1号，pp. 9-12，DOI: 10.1254/fpj.20070
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ４０１／００
Ａ６１Ｋ ３１／００
Ａ６１Ｐ ３１／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉまたは式ＩＩの化合物、その薬学的に許容される塩、またはその互変異性体。【化1】
【化2】
【請求項2】
前記化合物が、【化3】
【請求項3】
前記薬学的に許容される塩が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群から選択されるうちの１つを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項4】
請求項１に記載の化合物を含む、抗コロナウイルス医薬製剤。
【請求項5】
前記コロナウイルスが、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項４に記載の抗コロナウイルス医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０２２年３月３１日に出願された中国特許出願第２０２２１０３３５４４８．３号の優先権を主張し、この出願は、本明細書に完全に記載されているかのように、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。
【0002】
本発明は、医薬化学の分野に関し、具体的には、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを標的とするＰＲＯＴＡＣ、およびその調製方法と応用に関する。
【背景技術】
【0003】
ＣＯＶＩＤ－１９（新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、感染力が強く、病原性も高く、その変異株であるデルタ株とオミクロン株は、より強い感染力を有する。絶え間なく生じる変異株は、世界の疫病状況をより複雑にしている。新型コロナウイルスは、人間の健康、社会の安定、および経済の発展に深刻な脅威をもたらしている。
【0004】
３ＣＬｐｒｏ（３Ｃ様プロテアーゼ、主要プロテアーゼＭｐｒｏとしても知られている）は、コロナウイルスの重要な非構造タンパク質として、マイクロＲＮＡウイルスの３Ｃプロテアーゼと同様の切断部位特異性を有し、子孫ウイルスの複製と転写に極めて重要な役割を果たす。３ＣＬｐｒｏは、３０６個のアミノ酸から構成される約３３ｋＤａのシステインプロテアーゼ（Ｓタンパク質よりはるかに小さい）であり、非構造タンパク質ＮＳＰ４－ＮＳＰ１６の１１個の切断部位を特異的に認識して切断し、それによってコロナウイルスの他の非構造タンパク質を遊離することができる。３ＣＬｐｒｏを阻害することで、ＲＮＡの複製と転写のプロセスが効果的にブロックされ、ウイルスの増殖がブロックされる。したがって、３ＣＬｐｒｏは、コロナウイルスを標的とする薬剤開発のための最も魅力的な標的の１つと考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
タンパク質分解標的キメラ分子（ＰＲＯＴＡＣ）は、近年の医薬品開発において最も革新的な技術の一つである。タンパク質分解標的キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）は、タンパク質を化学的に分解する技術である。標的タンパク質とＥ３ユビキチンリガーゼとを同時に結合させ、標的タンパク質をＥ３ユビキチンリガーゼに近づけ、標的タンパク質をユビキチン化し、ユビキチン－プロテアソーム系（ＵＰＳ）の分解により標的タンパク質を分解することができる。なお、標的タンパク質の機能に関係なく、ＰＲＯＴＡＣ技術で分解できることは、言及する価値がある。
【課題を解決するための手段】
【0006】
（発明の概要）
１つの実施形態において、本願は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物、その薬学的に許容される塩、またはその互変異性体を開示する。
１つの実施形態において、本願は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物、その薬学的に許容される塩、またはその互変異性体を開示する。
【化1】
【0007】
前記リンカーは、
であり、ｎは１～６である。
【化2】
【0008】
別の実施形態では、前記化合物は、
からなる群から選択される。
【化3】
【0009】
別の実施形態では、前記薬学的に許容される塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群から選択されるうちの１つを含む。
【0010】
別の実施形態において、本願は、本願の化合物を含む抗コロナウイルス医薬製剤、を開示する。
【0011】
別の実施形態において、前記抗コロナウイルス医薬製剤では、前記コロナウイルスは、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
【0012】
従来技術と比較して、本発明は、以下の有益な効果を有する。
【0013】
３ＣＬｐｒｏ阻害活性実験結果は、本発明で合成された化合物が３ＣＬｐｒｏに対して強力な阻害作用を有し、化合物３、化合物４、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１４および化合物１７のＩＣ５０値が１００ｎＭ未満であることを示している。３ＣＬｐｒｏ分解活性実験結果は、本発明で合成された化合物はすべて３ＣＬｐｒｏに対して分解活性を有し、３ＣＬｐｒｏに対する化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６および化合物１７のＤＣ５０値はすべて１００ｎＭ未満であることを示す。本発明により提供される化合物は、単一構造タイプ、限られた薬力学的経路（阻害効果のみ）などの既存のコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害剤の欠点を、克服する。
【0014】
本発明は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを標的とするＰＲＯＴＡＣの調製方法を提供する。この方法は、購入可能な様々な低コストの合成ビルディングブロックを原料として使用し、一般的な化学反応により高い収率で目的生成物を得ることができる。すべての反応は、高温、高圧、高毒性試薬の使用を避け、反応装置に対する要求が低く環境汚染が少ない比較的温和な条件で、実行され得、同時に、原子効率（ａｔｏｍ ｅｃｏｎｏｍｙ）が高く、工業生産に適している。
【発明を実施するための形態】
【0015】
（詳細な説明）
当業者が本発明の解決策をよりよく理解できるようにするために、本発明の実施形態における技術的解決策を、本発明の実施形態における添付図面を参照して、以下に明確にかつ完全に説明する。明らかに、記載された実施形態は、本発明の一部の実施形態に過ぎず、実施形態の全てではない。本発明の実施形態に基づき、創造的な努力なしに当業者によって得られる他のすべての実施形態は、本発明の保護範囲に入る。
当業者が本発明の解決策をよりよく理解できるようにするために、本発明の実施形態における技術的解決策を、本発明の実施形態における添付図面を参照して、以下に明確にかつ完全に説明する。明らかに、記載された実施形態は、本発明の一部の実施形態に過ぎず、実施形態の全てではない。本発明の実施形態に基づき、創造的な努力なしに当業者によって得られる他のすべての実施形態は、本発明の保護範囲に入る。
【0016】
このように使用されるデータは、本明細書に記載される本発明の実施形態が本明細書に図示または記載される以外の順序で実施され得るように、適切な状況下で交換され得ることを理解されたい。さらに、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、ならびにそれらの任意の変形は、非排他的な包含をカバーすることを意図しており、例えば、一連のステップまたはユニットを含むプロセス、方法、システム、生成物またはデバイスは、必ずしも明示的に列挙したものに限られない。むしろ、それらのステップまたはユニットには、明示的に列挙されていない、またはこれらのプロセス、方法、生成物またはデバイス固有の、他のステップもしくはユニットが含まれ得る。
【0017】
本願は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物、その薬学的に許容される塩、またはその互変異性体を開示する。
【化4】
【0018】
前記リンカーは、
であり、ｎは１～６である。
【化5】
【0019】
前記薬学的に許容される塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群から選択されるうちの１つを含む。
【0020】
本願の化合物は、以下の操作ステップを含む方法により、合成され得る。
【0021】
（１）３－ｔｅｒｔ－ブチル－６－（エチルチオ）－１，３，５－トリアジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオンを原料として、２，４，５－トリフルオロベンジルブロミドをアルキル化して化合物（ａ１）を得る；６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール単位がトリアジン核の６位に導入されて化合物（ａ２）を得、化合物（ａ２）のトリアジン核の３位のｔｅｒｔ－ブチル基を酸性溶媒中で除去して化合物（ａ３）を得、化合物（ａ３）のトリアジン核の３位に３－プロピニル基を導入し、最終的に化合物（ａ４）を得る。反応スキームは以下の通りである。
【0022】
【化6】
【0023】
化合物（ａ１）の合成プロセスで使用する溶媒は、アセトニトリルである。３－ｔｅｒｔ－ブチル－６－（エチルチオ）－１，３，５－トリアジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオンと２，４，５－トリフルオロベンジルブロミドとのモル比は１：１．１である。反応は、炭酸カリウムを用い、加熱還流条件下で行う。化合物（ａ２）の合成プロセスにおいて、化合物（ａ１）と６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミンとのモル比は１：１．３、反応温度は０℃、使用される溶媒はテトラヒドロフラン、使用される触媒はリチウムビストリメチルシリルアミド（ＬｉＨＭＤＳ）である。化合物（ａ３）の合成プロセスにおいて、使用される酸溶媒は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）である。化合物（ａ４）の合成において、化合物（ａ３）と３－ブロモプロピンとのモル比は１：１．２、使用される溶媒はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、反応温度は６０℃である。
【0024】
（２）レナリドミドを原料として、鎖長の異なるブロモアルカン酸との酸－アミン縮合反応により、対応する化合物（ｂ１）～（ｂ６）を得る。化合物（ｂ１）～（ｂ６）を、ヨウ化カリウムの触媒下でアジ化ナトリウムと反応させ、対応する化合物（ｃ１）～（ｃ６）を得る。
【0025】
あるいは、ポマリドミドを原料として、鎖長の異なるブロモアルカン酸との酸－アミン縮合反応を行い、対応する化合物（ｂ７）～（ｂ１２）を得る。化合物（ｂ７）～（ｂ１２）をヨウ化カリウムの触媒下でアジ化ナトリウムと反応させ、対応する化合物（ｃ７）～（ｃ１２）を得る。反応スキームは以下の通りである。
【0026】
【化7】
【0027】
あるいは、レナリドミドを原料とし、アジド－ポリエチレングリコール－酢酸化合物との酸－アミン縮合反応を行い、対応する化合物（ｄ１）～（ｄ３）を得る。
【0028】
あるいは、ポマリドミドを原料とし、アジド－ポリエチレングリコール－酢酸化合物との酸－アミン縮合反応を行い、対応する化合物（ｄ４）～（ｄ６）を得る。
【0029】
【化8】
【0030】
（３）化合物（ａ４）は、化合物（ｃ１）～（ｃ６）または化合物（ｄ１）～（ｄ３）と反応し、式Ｉの化合物が合成される。
【0031】
あるいは、化合物（ａ４）は、化合物（ｃ７）～（ｃ１２）または化合物（ｄ４）～（ｄ６）と反応し、式ＩＩの化合物が合成される。
【0032】
【化9】
【0033】
反応における化合物（ａ４）と、化合物（ｃ１）～（ｃ１２）または化合物（ｄ１）～（ｄ６）とのモル比は１：１．２、反応に用いる溶媒はテトラヒドロフランと水との混合溶媒であり、体積比はテトラヒドロフラン：水＝１０：１である。触媒は硫酸銅五水和物およびアスコルビン酸ナトリウムである。反応条件は、アルゴン保護下で４５℃である。
【実施例】
【0034】
上記化合物の合成例を以下に示す。
【0035】
実施例１
化合物１：（Ｅ）－３－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）プロパンアミドの調製
化合物１：（Ｅ）－３－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）プロパンアミドの調製
【0036】
（１）化合物(ａ４）の調製
【化10】
【0037】
ステップ１：化合物（ａ１）の合成
３－ｔｅｒｔ－ブチル－６－（エチルチオ）－１，３，５－トリアジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（９１．７２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、２，４，５－トリアジンフルオロベンジルブロミド（９９．０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６６．３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトニトリル１０ｍＬに溶解し、加熱還流し、３時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、反応液を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。得られた固体残渣を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルにて抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン：酢酸エチル（Ｖ：Ｖ）＝８：２）で分離精製し、乾燥して１３３．３ｍｇの化合物（ａ１）（収率８９．２５％）を得た。
３－ｔｅｒｔ－ブチル－６－（エチルチオ）－１，３，５－トリアジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（９１．７２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、２，４，５－トリアジンフルオロベンジルブロミド（９９．０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６６．３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトニトリル１０ｍＬに溶解し、加熱還流し、３時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、反応液を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。得られた固体残渣を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルにて抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン：酢酸エチル（Ｖ：Ｖ）＝８：２）で分離精製し、乾燥して１３３．３ｍｇの化合物（ａ１）（収率８９．２５％）を得た。
【0038】
ステップ２：化合物（ａ２）の合成
化合物(ａ１)（１８６．７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ)と６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（１１８．１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。テトラヒドロフラン中の１ｍｍｏｌのリチウムビストリメチルシリルアミド（ＬｉＨＭＤＳ）（０．２ｍＬ、１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で反応器にゆっくりと加え、反応物を３時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、混合物を室温まで冷却し、塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。反応液を減圧下で濃縮し、テトラヒドロフランを除去した。得られた残渣を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルにて抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離し、乾燥して６０．７ｍｇの化合物（ａ２）（収率２４．６３％）を得た。
化合物(ａ１)（１８６．７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ)と６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（１１８．１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させた。テトラヒドロフラン中の１ｍｍｏｌのリチウムビストリメチルシリルアミド（ＬｉＨＭＤＳ）（０．２ｍＬ、１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で反応器にゆっくりと加え、反応物を３時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、混合物を室温まで冷却し、塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。反応液を減圧下で濃縮し、テトラヒドロフランを除去した。得られた残渣を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルにて抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離し、乾燥して６０．７ｍｇの化合物（ａ２）（収率２４．６３％）を得た。
【0039】
ステップ３：化合物(ａ３)の合成
得られた化合物（ａ２）（２４６．４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）３ｍＬを加え、室温で一晩撹拌し、トルエンと共沸濃縮して溶媒を除去し、乾燥して２０１．０ｍｇの化合物（ａ３）（収率９２．０３％）を得た。
得られた化合物（ａ２）（２４６．４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）３ｍＬを加え、室温で一晩撹拌し、トルエンと共沸濃縮して溶媒を除去し、乾燥して２０１．０ｍｇの化合物（ａ３）（収率９２．０３％）を得た。
【0040】
ステップ４：化合物(ａ４)の合成
化合物（ａ３）(４３６．８ｍｇ、１ｍｍｏｌ)、３－ブロモプロピン(０．１ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１６５．９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、Ｎ，Ｎ－ジメチルメタン１０ｍＬに溶解して６０℃で５時間加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターをした。反応終了後、反応液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン：酢酸エチル（Ｖ：Ｖ）＝６：４）で分離精製し、乾燥して３１２．０ｍｇの化合物（ａ４）（収率６５．７１％）を得た。
化合物（ａ３）(４３６．８ｍｇ、１ｍｍｏｌ)、３－ブロモプロピン(０．１ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１６５．９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、Ｎ，Ｎ－ジメチルメタン１０ｍＬに溶解して６０℃で５時間加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターをした。反応終了後、反応液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機相を回収し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン：酢酸エチル（Ｖ：Ｖ）＝６：４）で分離精製し、乾燥して３１２．０ｍｇの化合物（ａ４）（収率６５．７１％）を得た。
【0041】
（２）化合物（ｃ１）の調製
【化11】
【0042】
ステップ１：化合物（ｂ１）の合成
３－ブロモプロピオン酸（３０５．９ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を塩化チオニル５ｍＬに溶解し、２時間加熱還流させた。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。 次に、テトラヒドロフラン１０ｍＬ中のレナリドミド（１ｍｍｏｌ、２５９．３ｍｇ）を添加し、ＴＬＣでモニターしながら、反応物を５時間還流下に加熱した。反応終了後、反応混合物を室温まで冷却し、２ｍＬのメタノールを加え、１時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮して除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）で精製し、３６２．１ｍｇの化合物（ｂ１）（収率９１．８５％）を得た。
３－ブロモプロピオン酸（３０５．９ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を塩化チオニル５ｍＬに溶解し、２時間加熱還流させた。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去した。 次に、テトラヒドロフラン１０ｍＬ中のレナリドミド（１ｍｍｏｌ、２５９．３ｍｇ）を添加し、ＴＬＣでモニターしながら、反応物を５時間還流下に加熱した。反応終了後、反応混合物を室温まで冷却し、２ｍＬのメタノールを加え、１時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮して除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）で精製し、３６２．１ｍｇの化合物（ｂ１）（収率９１．８５％）を得た。
【0043】
ステップ２：化合物（ｃ１）の合成
化合物ｂ１（１９７．１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（９７．５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（８．３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、１０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解して７０℃で５時間加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターをした。反応終了後、反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機相を回収して乾燥して、１５１．６ｍｇの化合物（ｃ１）（収率８５．１６％）を得た。
化合物ｂ１（１９７．１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（９７．５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（８．３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、１０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解して７０℃で５時間加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターをした。反応終了後、反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機相を回収して乾燥して、１５１．６ｍｇの化合物（ｃ１）（収率８５．１６％）を得た。
【0044】
（４）化合物１の調製
【化12】
【0045】
化合物（ａ４）（１４２．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、化合物（ｃ１）（１２８．３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）および硫酸銅五水和物（３０．０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（２３．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、テトラヒドロフラン１０ｍＬと水１ｍＬとの混合物に溶解してアルゴン下にて４５℃で一晩加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターをした。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１５：１）で分離精製し、乾燥して９５．７ｍｇの化合物１（収率３８．４１％）を得た。
【0046】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.62-7.50 (m, 2H), 7.44-7.37 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.12 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.57 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.45-4.23 (m, 2H), 4.12 (3H, s), 3.04-2.86 (m, 1H), 2.70 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.33-2.12 (m, 2H), 1.95-1.78 (m, 2H)。
【0047】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.34, 171.42, 171.25, 168.38, 155.61, 155.17, 150.54, 150.41, 148.55, 146.65, 146.31, 145.74, 143.88, 134.34, 133.12, 132.13, 129.10, 129.02, 127.24, 125.89, 125.82 , 120.70, 120.41, 119.44, 118.11, 116.74, 116.36, 106.12, 52.08, 46.94, 40.28, 40.13, 38.05, 36.15, 35.60, 31.65, 28.68。
【0048】
実施例２
化合物２：（Ｅ）－４－(４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ブタンアミドの調製
化合物２：（Ｅ）－４－(４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ブタンアミドの調製
【0049】
【化13】
【0050】
化合物２を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率３５．２３％）。
【0051】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.12 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.88 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.65-7.53 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.32-7.21 (m, 1H), 5.28 (s, 2H), 5.21 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.43-4.29 (m, 2H), 4.16 (3H, s), 3.02-2.81 (m, 1H), 2.60 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.50-2.38 (m, 3H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.92-1.80 (m, 2H)。
【0052】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.35, 171.46, 171.26, 168.39, 155.65, 155.15, 150.56, 150.42, 148.57, 146.69, 146.34, 145.77, 143.89, 134.36, 133.15, 132.16, 129.12, 129.00, 127.23, 125.91, 125.80, 120.71, 120.43, 119.46, 118.10, 116.79, 116.32, 106.11, 52.06, 46.84, 40.21, 40.10, 38.06, 36.12, 35.59, 31.61, 27.58, 24.65。
【0053】
実施例３
化合物３：（Ｅ）－５－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ-３－（２，４，５－トリフルオロベンジル））－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ペンタンアミドの調製
化合物３：（Ｅ）－５－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ-３－（２，４，５－トリフルオロベンジル））－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ペンタンアミドの調製
【0054】
【化14】
【0055】
化合物３を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率３０．７６％）。
【0056】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.11 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.84 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.63-7.52 (m, 2H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.32-7.22 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.20 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.72 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.44-4.30 (m, 2H), 4.18 (3H, s), 3.06-2.88 (m, 1H), 2.61 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.51-2.40 (m, 3H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.82-1.70 (m, 2H), 1.57-1.41 (m, 2H)。
【0057】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.45, 171.56, 171.34, 168.43, 155.62, 155.11, 150.53, 150.41, 148.54, 146.67, 146.33, 145.88, 143.81, 134.34, 133.17, 132.19, 129.10, 129.08, 127.22, 125.90, 125.75, 120.72, 120.44, 119.49, 118.12, 116.80, 116.34, 106.12, 52.00, 46.87, 40.22, 40.11, 38.08, 36.04, 35.62, 32.37, 31.65, 27.5
【0058】
実施例４
化合物４：（Ｅ）－６－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ヘキサンアミドの調製
化合物４：（Ｅ）－６－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ヘキサンアミドの調製
【0059】
【化15】
【0060】
化合物４を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率３６．５５％）。
【0061】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.05 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.83 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65-7.54 (m, 2H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.32-7.25 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 5.18 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.67 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.47-4.31 (m, 2H), 4.15 (3H, s), 3.02-2.88 (m, 1H), 2.64 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.44-2.30 (m, 3H), 2.10-2.02 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 2H), 1.72-1.60 (m, 2H), 1.57-1.41 (m, 2H)。
【0062】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.35, 171.68, 171.56, 168.33, 155.58, 155.22, 150.50, 150.43, 148.52, 146.60, 146.38, 145.98, 143.84, 134.26, 133.17, 132.35, 129.12, 129.10, 127.21, 125.93, 125.79, 120.76, 120.54, 119.53, 118.12, 116.70, 116.46, 106.16, 52.00, 46.96, 40.29, 40.06, 38.04, 36.08, 35.61, 32.47, 31.57.1, 23.66
【0063】
実施例５
化合物５：（Ｅ）－７－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ヘプタミドの調製
化合物５：（Ｅ）－７－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキシピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）ヘプタミドの調製
【0064】
【化16】
【0065】
化合物５を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率２１．１８％）。
【0066】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.67-7.54 (m, 2H), 7.49-7.41 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.32-7.25 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.17 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.63 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.49-4.31 (m, 2H), 4.16 (3H, s), 3.02-2.88 (m, 1H), 2.65 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.42-2.29 (m, 2H), 2.20-2.03 (m, 4H), 1.90-1.79 (m, 2H), 1.70-1.61 (m, 2H), 1.54-1.39 (m, 2H)。
【0067】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.39, 171.62, 171.49, 168.36, 155.49, 155.23, 150.51, 150.43, 148.54, 146.62, 146.39, 145.90, 143.81, 134.22, 133.19, 132.29, 129.09, 129.03, 127.26, 125.90, 125.75, 120.72, 120.54, 119.52, 118.11, 116.76, 116.41, 106.14, 52.08, 46.95, 40.30, 40.05, 38.03, 35.59, 31.70, 27.62, 23.35, 23.35。
【0068】
実施例６
化合物６：（Ｅ）－８－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２-（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）オクタミドの調製
化合物６：（Ｅ）－８－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２-（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）オクタミドの調製
【0069】
【化17】
【0070】
化合物６を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率１７．８３％）。
【0071】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.12 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.88 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.67-7.54 (m, 2H), 7.48-7.42 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.31-7.25 (m, 1H), 5.25 (s, 2H), 5.16 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.45-4.30 (m, 2H), 4.17 (3H, s), 3.08-2.80 (m, 1H), 2.69 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.44-2.29 (m, 2H), 2.24-2.05 (m, 4H), 1.95-1.76 (m, 4H), 1.69-1.58 (m, 2H), 1.49-1.38 (m, 2H)。
【0072】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.38, 171.58, 171.46, 168.35, 155.43, 155.24, 150.50, 150.41, 148.53, 146.61, 146.36, 145.91, 143.83, 134.23, 133.18, 132.29, 129.12, 129.02, 127.24, 125.95, 125.78, 120.71, 120.56, 119.52, 118.14, 116.72, 116.44, 106.18, 52.12, 46.98, 40.33, 40.10, 38.08, 35.61, 32.77, 30.15, 27.65, 24.76, 23.42。
【0073】
実施例７
化合物７：（Ｅ）－３－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）プロピオンアミドの調製
化合物７：（Ｅ）－３－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）プロピオンアミドの調製
【0074】
【化18】
【0075】
化合物７を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率３７．５４％）。
【0076】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.79 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.69 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.32-7.22 (m, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.14 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.68 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.21 (s, 3H) ), 2.56-2.44 (m, 2H), 2.33-2.21 (m, 2H), 1.95-1.83 (m, 2H)。
【0077】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.32, 172.23, 170.40, 168.21, 167.23, 155.78, 155.33, 150.89, 150.55, 148.63, 146.66, 146.34, 145.86, 143.82, 136.91, 136.62, 132.32, 131.89, 129.43, 127.32, 126.87 , 125.89, 120.82, 120.43, 118.82, 117.78, 116.71, 116.38, 106.21, 48.34, 40.45, 39.89, 37.05, 35.29, 34.22, 32.29, 28.78。
【0078】
実施例８
化合物８：（Ｅ）－４－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１,３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ブタンアミドの調製
化合物８：（Ｅ）－４－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１,３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ブタンアミドの調製
【0079】
【化19】
【0080】
化合物８を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率３３．７７％）。
【0081】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.09 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.86 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.63-7.53 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 5.20 (s, 2H), 5.16 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H) ), 2.95-2.88 (m, 1H), 2.66-2.54 (m, 2H), 2.43-2.31 (m, 1H), 2.25-2.14 (m, 2H), 1.98-1.84 (m, 2H)。
【0082】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.29, 172.19, 170.29, 168.12, 167.21, 155.45, 155.23, 150.55, 150.44, 148.55, 146.62, 146.31, 145.90, 143.85, 136.89, 136.57, 132.34, 131.95, 129.12, 127.31, 126.92, 125.91, 120.75, 120.52, 118.80, 117.69, 116.69, 116.42, 106.17, 49.33, 40.31, 40.12, 38.03, 35.73, 35.20, 32.09, 30.45.24。
【0083】
実施例９
化合物９：（Ｅ）－５－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ペンタンアミドの調製
化合物９：（Ｅ）－５－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ペンタンアミドの調製
【0084】
【化20】
【0085】
化合物９を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率２７．６４％）。
【0086】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.13 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.86 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.30-7.22 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.18 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.61 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H) ), 2.98-2.87 (m, 1H), 2.68-2.52 (m, 4H), 2.13-2.01 (m, 1H), 1.95-1.84(m, 2H), 1.81-1.64 (m, 2H)。
【0087】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.24, 172.17, 170.26, 168.07, 167.14, 155.57, 155.20, 150.51, 150.42, 148.51, 146.64, 146.37, 145.97, 143.81, 136.91, 136.56, 132.35, 131.97, 129.10, 127.36, 126.94, 125.93, 120.76, 120.54, 118.86, 117.65, 116.70, 116.46, 106.16, 49.38, 40.29, 40.06, 38.04, 35.78, 35.17, 32.02, 21.45。
【0088】
実施例１０
化合物１０：（Ｅ）－６－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ヘキサンアミドの調製
化合物１０：（Ｅ）－６－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ヘキサンアミドの調製
【0089】
【化21】
【0090】
化合物１０を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率２２．１９％）。
【0091】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 8.49 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.87 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.62-7.50 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.32-7.21 (m, 1H), 5.25 (s, 2H), 5.19 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.71 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H ), 3.02-2.87 (m, 2H), 2.69-2.50 (m, 4H), 2.23-2.11 (m, 2H), 1.91-1.83(m, 2H), 1.72-1.65 (m, 2H)。
【0092】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.19, 172.09, 170.32, 168.12, 167.10, 155.63, 155.22, 150.49, 150.43, 148.55, 146.67, 146.39, 146.02, 143.79, 136.88, 136.52, 132.38, 132.01, 129.14, 127.38, 126.96, 125.95, 120.78, 120.55, 118.88, 117.66, 116.74, 116.42, 106.14, 50.02, 40.39, 40.16, 38.24, 35.92, 35.27, 32.32, 31.589, 25.2。
【0093】
実施例１１
化合物１１:（Ｅ）－７－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ヘプタミドの調製
化合物１１:（Ｅ）－７－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）ヘプタミドの調製
【0094】
【化22】
【0095】
化合物１１を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率１９．５３％）。
【0096】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.13 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 8.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.83 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.61-7.52 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.31-7.20 (m, 1H), 5.27 (s, 2H), 5.21 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.74 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H) ), 3.04-2.85 (m, 2H), 2.72-2.55 (m, 4H), 2.24-1.88 (m, 6H), 1.82-1.68 (m, 2H)。
【0097】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.20, 172.12, 170.34, 168.16, 167.12, 155.67, 155.34, 150.83, 150.52, 148.67, 146.80, 146.42, 146.12, 143.80, 136.81, 136.12, 132.42, 132.10, 129.21, 127.42, 126.93, 125.91, 120.92, 120.51, 118.82, 117.76, 116.77, 116.38, 106.16, 50.09, 40.42, 40.18, 35.88, 32.43, 31.54, 27.34, 23.92, 22.45。
【0098】
実施例１２
化合物１２：（Ｅ）－８－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）オクタミドの調製
化合物１２：（Ｅ）－８－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）オクタミドの調製
【0099】
【化23】
【0100】
化合物１２を、異なる出発物質を使用して化合物１と同じ方法で、調製した（収率１５．８７％）。
【0101】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.09 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.87 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.50 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.32-7.23 (m, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.24 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.78 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.25 (s, 3H ), 3.01-2.82 (m, 2H), 2.68-2.35 (m, 4H), 2.14-1.82 (m, 6H), 1.74-1.54 (m, 4H)。
【0102】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.22, 172.15, 170.42, 168.23, 167.17, 155.71, 155.39, 150.97, 150.58, 148.71, 146.89, 146.56, 146.09, 143.85, 136.79, 136.09, 132.45, 132.14, 129.19, 127.45, 126.88, 125.89, 120.89, 120.49, 118.79, 117.81, 116.79, 116.41, 106.21, 50.11, 40.52, 40.21, 38.41, 35.32, 32.63, 31.44, 27.34, 25.56, 22.92, 21.65。
【0103】
実施例１３
化合物１３：（Ｅ）－２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシイル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）アセトアミドの調製
化合物１３：（Ｅ）－２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシイル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソキノリン－４－イル）アセトアミドの調製
【0104】
（１）化合物（ａ４）の調製
調製方法は、実施例１と同様である。
調製方法は、実施例１と同様である。
【0105】
（２）化合物（ｄ１）の調製
【化24】
【0106】
２－（２－アジドエトキシ）酢酸（２９０．２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を塩化チオニル５ｍＬに溶解し、２時間加熱還流した。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、テトラヒドロフラン１０ｍＬを溶媒としてレナリドミド（１ｍｍｏｌ、２５９．３ｍｇ）を添加した。反応物を還流下で５時間加熱し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、反応混合物を室温まで冷却し、メタノール２ｍＬを加え、混合物を１時間撹拌しつづけた。減圧下で濃縮して溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）により２９６．８ｍｇの化合物（ｄ１）（収率７６．８３％）を得た。
【0107】
（３）化合物１３の調製
【化25】
【0108】
化合物（ａ４）（１４２．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、化合物（ｄ１）（１３９．１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、硫酸銅五水和物（３０．０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（２３．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、テトラヒドロフラン１０ｍＬと水１ｍＬとの混合物に溶解した。混合物をアルゴン下４５℃で一晩加熱撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）で分離精製し、乾燥して６６．２ｍｇの化合物１３（収率２５．６３％）を得た。
【0109】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.12 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.65-7.53 (m, 2H), 7.46-7.35 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.26-7.13 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.17 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.12 (3H, s), 3.95-3.82 (m, 2H), 3.75 ( t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.80-2.65 (m, 2H), 2.43-2.24 (m, 2H)。
【0110】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.52, 171.32, 171.12, 168.42, 155.69, 155.31, 150.56, 150.48, 148.60, 146.61, 146.34, 145.70, 143.89, 134.38, 133.11, 132.21, 129.14, 129.06, 127.28, 125.92, 125.73, 120.69, 120.38, 119.46, 118.09, 116.81, 116.36, 106.09, 69.10, 68.24, 52.08, 51.73, 46.92, 40.31, 40.10, 38.07, 31.55, 29.18。
【0111】
実施例１４
化合物１４：（Ｅ）－２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－４－イル）アセトアミド
化合物１４：（Ｅ）－２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－４－イル）アセトアミド
【0112】
【化26】
【0113】
化合物１４を、異なる出発物質を使用して化合物１３と同じ方法で、調製した（収率２１．４５％）。
【0114】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.23 (s, 1H), 9.86 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.22-7.14 (m, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.16 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.09 (3H, s), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.64 ( t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.35 (s, 4H), 2.76-2.59 (m, 2H), 2.23-2.04 (m, 2H)。
【0115】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.68, 171.42, 171.23, 168.38, 155.71, 155.34, 150.61, 150.52, 148.63, 146.66, 146.31, 145.72, 143.91, 134.42, 133.12, 132.24, 129.16, 129.01, 127.32, 125.91, 125.77, 120.71, 120.42, 119.51, 118.11, 116.84, 116.32, 106.14, 69.16, 68.45, 68.34, 68.16, 52.12, 51.75, 46.96, 40.34, 313.06, 298.1。
【0116】
実施例１５
化合物１５：（Ｅ）－２－（２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ））－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１,３,５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－４－イル）エチルアミドの調製
化合物１５：（Ｅ）－２－（２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ））－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１,３,５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－４－イル）エチルアミドの調製
【0117】
【化27】
【0118】
化合物１５を、異なる出発物質を使用して化合物１３と同じ方法で、調製した（収率１６．３６％）。
【0119】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.18 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.92 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.65-7.54 (m, 2H), 7.44-7.33 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.24-7.16 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 5.12 (dd , J = 13.3, 4.8 Hz, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 4.08 (3H, s), 3.82-3.71 (m, 2H), 3.63 ( t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.39 (s, 8H), 2.67-2.53 (m, 2H), 2.24-2.07 (m, 2H)。
【0120】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.71, 171.46, 171.25, 168.42, 155.78, 155.41, 150.69, 150.58, 148.67, 146.72, 146.35, 145.71, 144.02, 134.46, 133.21, 132.25, 129.22, 129.08, 127.34, 126.02, 125.81, 120.77, 120.45, 119.53, 118.17, 116.84, 116.36, 106.16, 70.41, 70.12, 69.21, 68.46, 68.21, 52.82, 47.03, 40.19, 31.62, 29.27, 29.27。
【0121】
実施例１６
化合物１６：（Ｅ）－２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシイル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１,３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アセトアミド
化合物１６：（Ｅ）－２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ）－２,６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシイル）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１,３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アセトアミド
【0122】
【化28】
【0123】
化合物１６を、異なる出発物質を使用して化合物１３と同じ方法で、調製した（収率２６．４４％）。
【0124】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.11 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.81 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.43 (s, 1H), 7.31-7.19 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 5.12 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.19 (s, 3H), 3.73-3.58 (m, 2H), 3.51 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.32-2.19 (m, 2H), 2.10-1.93 (m, 2H)。
【0125】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.42, 172.31, 170.48, 168.19, 167.26, 155.82, 155.34, 150.91, 150.58, 148.66, 146.71, 146.38, 145.92, 143.79, 136.89, 136.67, 132.34, 131.91, 129.48, 127.29, 126.91, 125.95, 120.81, 120.47, 118.90, 117.83, 116.71, 116.42, 106.25, 68.91, 67.23, 52.14, 48.37, 40.41, 39.92, 37.06, 32.32, 28。
【0126】
実施例１７
化合物１７：（Ｅ）－２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル)イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソキノリン－４－イル）アセトアミド
化合物１７：（Ｅ）－２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル)イミノ）－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１，３，５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソキノリン－４－イル）アセトアミド
【0127】
【化29】
【0128】
化合物１７を、異なる出発物質を使用して化合物１３と同じ方法で、調製した（収率２０．８１％）。
【0129】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.16 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.70 (s, 1H), 8.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.82 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.59-7.47 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.32-7.21 (m, 1H), 5.28 (s, 2H), 5.14 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.52(s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.76-3.61 (m, 2H), 3.48 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.39 (s, 4H), 2.28-2.17 (m, 2H), 2.11-1.95 (m, 2H)。
【0130】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.38, 172.28, 170.51, 168.21, 167.22, 155.84, 155.36, 150.89, 150.62, 148.65, 146.73, 146.42, 145.91, 143.80, 136.94, 136.72, 132.36, 131.88, 129.54, 127.34, 126.85, 125.88, 120.79, 120.52, 118.93, 117.80, 116.74, 116.42, 106.21, 69.74, 69.12, 68.85, 17.22, 52.16, 48.39, 40.38, 39.91, 27.4。
【0131】
実施例１８
化合物１８：（Ｅ）－２－（２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ））－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１,３,５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－1－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソキノリン－４－イル）アセトアミドの調製
化合物１８：（Ｅ）－２－（２－（２－（２－（４－（（４－（（６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－イル）イミノ））－２，６－ジオキシ－３－（２，４，５－トリフルオロベンジル）－１,３,５－トリアジン－１－イル）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－1－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソキノリン－４－イル）アセトアミドの調製
【0132】
【化30】
【0133】
化合物１８を、異なる出発物質を使用して化合物１３と同じ方法で、調製した（収率１７．２６％）。
【0134】
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.15 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.47 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.84 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.60-7.49 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.34-7.20 (m, 1H), 5.33 (s, 2H), 5.16 (dd, J = 12.8, 5.3 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.18 (s, 3H), 3.73-3.59 (m, 2H), 3.53 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.42 (s, 8H), 2.23-2.14 (m, 2H), 2.06-1.87 (m, 2H)。
【0135】
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 173.42, 172.33, 170.49, 168.28, 167.23, 155.92, 155.34, 150.90, 150.63, 148.67, 146.76, 146.44, 145.96, 143.83, 136.92, 136.71, 132.38, 131.90, 129.51, 127.36, 126.87, 125.91, 120.83, 120.54, 118.91, 117.87, 116.72, 116.48, 106.25, 71.01, 70.87, 69.68, 68.90, 67.43, 52.25, 40.52, 39.98, 32.27, 28.96。
【0136】
２．生理活性アッセイ
【0137】
（１）３ＣＬｐｒｏ阻害活性試験
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏに対する化合物の阻害活性は、蛍光共鳴エネルギー移動を用いて測定した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏに対する化合物の阻害活性は、蛍光共鳴エネルギー移動を用いて測定した。
【0138】
様々な濃度で調製した化合物溶液１０μＬ（最終濃度１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８１、３．９０、１．９５ｎＭ、ＤＭＳＯ中）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏ４０μＬ（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、最終濃度：０．５μＭ、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１００ ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で希釈））を混合し、黒色の９６ウェルプレートに加え、３７℃で１０分間インキュベートした。蛍光基質Ｄａｂｃｙｌ－ＫＴＳＡＶＬＱＳＧＦＲＫＭＥ－Ｅｄａｎｓ（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｂｉｙｕｎｔｉａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、最終濃度：２０μＭ）を５０μＬ加えて反応を開始し、１０分間インキュベートし、蛍光検出用の多機能マイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ）により測定を行った（励起波長：３４０ｎｍ、発光波長：４９０ｎｍ）。蛍光値を記録し、試料の阻害率を算出した。酵素活性対照として、化合物を含まないＤＭＳＯを使用し、ブランク対照として、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏを含まないＴｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを使用し、処理方法は同じであった。試料（化合物１～化合物１８）のＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた非線形回帰分析により算出した。
【0139】
阻害率（％）＝（ＲＦＵ酵素活性対照－ＲＦＵ試料）／（ＲＦＵ＿酵素活性対照－ＲＦＵ＿ブランク対照）×１００％
【0140】
実験結果を表１に示す（表１中、ＩＣ５０の欄、Ａ：ＩＣ５０＜１００ｎＭ、Ｂ：ＩＣ５０＝１００～１０００ｎＭ）、実施例の化合物はいずれも３ＣＬｐｒｏに対して阻害活性を有しており、なかでも化合物３、化合物４、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１４および化合物１７は、ＩＣ５０値が１００ｎＭ未満と、３ＣＬｐｒｏに対して強い阻害作用を有する。
【0141】
（２）ウエスタンブロットによる３ＣＬｐｒｏ分解活性の判定
対数増殖期のＨＥＫ２９３Ｅ細胞（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ ＳｃｉｅｎｃｅｓのＣｅｌｌ Ｂａｎｋ）を６ウェルプレートに６．０×１０５細胞数／ウェルの密度で播種し、５％ＣＯ２の３７℃インキュベーターで８～２４時間インキュベートした。密度が７０％コンフルエントに達した時点で、プレートを、２ｍＬの予め温めた血清フリー培地に交換した（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｏｐｍａｘ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ，Ｌｔｄ．)。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏ発現プラスミド（２μg／ウェル、１×ＨＢＳで調製、Ｂｅｉｊｉｎ Ｙｉｑｉａｏ Ｓｈｅｎｚｈｏｕ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）を、３：４の質量対体積比にて、１０μＭ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン、Ｓｈａｎｇｈａｉ ＭｃＬｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）でトランスフェクトした。ＰＥＩ－プラスミド混合物を上記無血清培地に滴下して穏やかに振盪混合し、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーターで１０時間インキュベートした。トランスフェクション試薬を含む培地を除去し、勾配濃度（最終試料濃度１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８１、３．９０、１．９５ｎＭ）の被験試料を含む培地を添加した。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間培養後、上清を捨て、細胞を回収し、ＲＩＰＡ細胞溶解バッファー（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＭｃＬｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を加え、氷上で３０分間細胞を溶解し、３ＣＬｐｒｏの発現をウエスタンブロットにより検出した。Ｉｍａｇｅ Ｊで３ＣＬｐｒｏの相対発現量を解析し、タンパク質分解率を算出した。なお、被験試料を含まない培地を対照群とし、それ以外の処理方法は同じとした。各試料のタンパク質分解活性（ＤＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた非線形回帰分析により算出した。
対数増殖期のＨＥＫ２９３Ｅ細胞（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ ＳｃｉｅｎｃｅｓのＣｅｌｌ Ｂａｎｋ）を６ウェルプレートに６．０×１０５細胞数／ウェルの密度で播種し、５％ＣＯ２の３７℃インキュベーターで８～２４時間インキュベートした。密度が７０％コンフルエントに達した時点で、プレートを、２ｍＬの予め温めた血清フリー培地に交換した（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｏｐｍａｘ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ，Ｌｔｄ．)。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏ発現プラスミド（２μg／ウェル、１×ＨＢＳで調製、Ｂｅｉｊｉｎ Ｙｉｑｉａｏ Ｓｈｅｎｚｈｏｕ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）を、３：４の質量対体積比にて、１０μＭ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン、Ｓｈａｎｇｈａｉ ＭｃＬｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）でトランスフェクトした。ＰＥＩ－プラスミド混合物を上記無血清培地に滴下して穏やかに振盪混合し、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーターで１０時間インキュベートした。トランスフェクション試薬を含む培地を除去し、勾配濃度（最終試料濃度１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８１、３．９０、１．９５ｎＭ）の被験試料を含む培地を添加した。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間培養後、上清を捨て、細胞を回収し、ＲＩＰＡ細胞溶解バッファー（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＭｃＬｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を加え、氷上で３０分間細胞を溶解し、３ＣＬｐｒｏの発現をウエスタンブロットにより検出した。Ｉｍａｇｅ Ｊで３ＣＬｐｒｏの相対発現量を解析し、タンパク質分解率を算出した。なお、被験試料を含まない培地を対照群とし、それ以外の処理方法は同じとした。各試料のタンパク質分解活性（ＤＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた非線形回帰分析により算出した。
【0142】
分解率（％）＝（３ＣＬｐｒｏ相対発現対照群－３ＣＬｐｒｏ相対試料群）／３ＣＬｐｒｏ相対対照群×１００％
【0143】
実験結果を表１に示す（表1中、ＤＣ５０は欄内、Ａ：ＤＣ５０＜１００ｎＭ、Ｂ：ＤＣ５０＝１００～１０００ｎＭ）、実施例の化合物はいずれも３ＣＬｐｒｏに対して分解活性を有し、そのうち化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６および化合物１７は３ＣＬｐｒｏに対する分解活性が強く、ＤＣ５０値はいずれも１００ｎＭ未満であった。
【0144】
【表1】
【0145】
表１のデータから、化合物１～１８は、３ＣＬｐｒｏの阻害および分解の程度が異なることが示される。３ＣＬｐｒｏに対する化合物３、化合物４、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１４および化合物１７のＩＣ５０およびＤＣ５０値は、すべて１００ｎＭ未満である。また、本発明の化合物は、３ＣＬｐｒｏに対する阻害活性と良好な分解活性の両方を有しており、抗コロナウイルス候補薬として開発・研究され得ることが示される。
【0146】
上記の内容は、本発明の技術的思想を説明するためのものであり、本発明の保護範囲を限定するものではない。本発明の技術的思想に基づいて提案された技術的解決策に基づいて行われるいかなる変更も、本発明の特許請求の範囲に含まれる。