特許 7523167 チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体ならびにその調製方法および使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-07-18

(45)【発行日】2024-07-26

(54)【発明の名称】チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体ならびにその調製方法および使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 417/04 20060101AFI20240719BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240719BHJP

【ＦＩ】

C07D417/04 CSP

A61K31/4439

A61P31/00

A61P31/04

【請求項の数】 10

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023053920

(22)【出願日】2023-03-29

(65)【公開番号】P2023147283

(43)【公開日】2023-10-12

【審査請求日】2023-07-06

(31)【優先権主張番号】202210320742.7

(32)【優先日】2022-03-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】521378163

【氏名又は名称】シーアン・カンユアンシェン・バイオメディカル・テクノロジー・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＸＩ’ＡＮ ＫＡＮＧＹＵＡＮＳＨＥＮＧ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】ＲＯＯＭ Ａ‐１１７‐１１， Ｉ ＣＨＵＡＮＧＴＵ ＺＨＯＮＧＣＨＵＡＮＧ ＰＡＲＫ， ＮＯ． １４ ＧＡＯＸＩＮ ２ＮＤ ＲＯＡＤ， ＨＩＧＨ‐ＴＥＣＨ ＺＯＮＥ， ＸＩ’ＡＮ， ７１００７５ ＳＨＡＡＮＸＩ， ＣＨＩＮＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001818

【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ジャ

(72)【発明者】

【氏名】リャン，チェンユアン

(72)【発明者】

【氏名】ティエン，レイ

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，ジエ

(72)【発明者】

【氏名】シン，リャン

(72)【発明者】

【氏名】リ，ジンイ

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ，ユーチン

【審査官】鳥居 福代

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１０６００８３９５（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１１１７０９１１（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１１６８９９１４（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１３１４９９２９（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１０８１８６４８（ＣＮ，Ａ）

【文献】特表２００５－５２９０８８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体であって、
前記チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体が、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体。

【化1】

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ独立して、水素原子、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、ｔｅｒｔ－ブチル、ニトロ、シアノ、ハロゲン原子、またはフェニルから選択される。）

【請求項2】

代表的な化合物が、以下の化合物から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体。

【化2】

【請求項3】

前記薬学的に許容される塩が、一般式Ｉの化合物と、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸、またはアスパラギン酸と、によって形成される塩であることを特徴とする、請求項１に記載のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体。

【請求項4】

請求項１から３のいずれか１項に記載のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を調製するための方法であって、前記方法が以下のステップ：
１）プレウロムチリンをｐ－トルエンスルホニルクロリドと反応させて中間体Ｉを得るステップであって、ここで、前記中間体Ｉが、

【化3】

である、ステップ；
２）ステップ１)で調製した前記中間体Ｉと２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとを、原料として用い、有機溶媒に溶解し、触媒作用および加熱条件下で反応させ、分離および精製後に中間体ＩＩを得るステップであって、ここで、前記中間体ＩＩが、

【化4】

であり、前記触媒が、炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムである、ステップ；
３）ステップ２）で調製した前記中間体ＩＩを原料として用い、様々な置換基を有するベンジルブロミド化合物と反応させ、分離および精製後、一般式Ｉに示す構造のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を得ることができる、ステップ、を含むことを特徴とする、方法。

【請求項5】

ステップ１）において、前記プレウロムチリンと前記ｐ－トルエンスルホニルクロリドとのモル比が１：１．２であり、ステップ２）において、前記中間体Ｉと前記２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとのモル比が１：１．２であり、ステップ３）において、前記中間体ＩＩと、前記様々な置換基を有するベンジルブロミド化合物とのモル比が、１：（２～６）であることを特徴とする、請求項４に記載の、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を調製するための方法。

【請求項6】

抗病原性微生物薬の調製における、請求項１から３のいずれか１項に記載のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体、の使用。

【請求項7】

前記抗病原性微生物薬が、感染症を治療するための医薬製剤であることを特徴とする、請求項６に記載の使用。

【請求項8】

前記感染症が、マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ）または薬剤耐性菌に感染したヒトまたは動物の感染症であることを特徴とする、請求項７に記載の使用。

【請求項9】

前記医薬製剤が、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含むことを特徴とする、請求項７に記載の使用。

【請求項10】

抗生物質薬であって、当該薬が、有効量の、請求項１から３のいずれか１項に記載のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を含み、残部が、医薬賦形剤または他の適合する薬であることを特徴とする、抗生物質薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬化学の技術分野に属し、特に、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体、ならびにその調製方法および使用に関する。

【背景技術】

【0002】

抗生物質の発見は人類の発展の歴史において重要な役割を果たしてきたが、抗生物質の乱用により、多くの細菌において深刻な薬剤耐性が生じ、人間の健康に対する脅威が高まっている。セファロスポリン、アミノグリコシド、マクロライド、さらにはポリミキシンなどの既存の抗生物質は、一部の「スーパーバグ」により引き起こされる感染症を治療できなかったり、重篤な副作用のために広く使用できなかったりする。「抗生物質の時代」に戻るためには、耐性菌の問題を解決することが急務である。そのため、人々は新しい抗菌メカニズム、良好なバイオアベイラビリティ、および低毒性を有する抗生物質の探索を続けている。

【0003】

マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ）は、細胞壁を有さず、高い多形態性を有し、細菌フィルターを通過することができ、人工培地で培養および増殖が可能で、０．１～０．３ミクロンの大きさを有する、最小原核細胞型微生物の一種である。また、それらは、糸状および枝分かれした形状を形成でき、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）と呼ばれている。マイコプラズマ属はヒトや動物に広く存在し、その多くは病原性を有さない。ヒトに対する病原性を有するマイコプラズマ属としては、主に、マイコプラズマ・ニューモニア（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、マイコプラズマ・ホミニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ）、マイコプラズマ・ジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）が挙げられる。マイコプラズマ属は病原性が弱く、一般に血液中には侵入しないが、接着によって宿主細胞に結合し、細胞膜から脂質やコレステロールを取得し、細胞膜に損傷を与える可能性がある。ウレアプラズマ・ウレアリチカムは、尿素を分解し、細胞にとって有毒なアンモニアを多量に放出する可能性がある。

【0004】

プレウロムチリン（Ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ）は、プレロータス（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）によって生成される、優れた抗菌活性および抗薬物耐性を有する広域スペクトルのジテルペン系抗生物質であり、ほとんどのグラム陽性細菌、マイコプラズマ属、および一部のグラム陰性菌を効果的に抑制できる。プレウロムチリンは、３つの環で構成される主骨格を有し、最も基本的な構造は８員環であり、５員環におけるカルボニル基、およびＣ－１１におけるヒドロキシル基は、活性にとって必須の基である。Ｃ－１４は遊離ヒドロキシル基を有し、活性を有さず、現在ではＣ－１４のヒドロキシル基を化学修飾する研究が主流となっている。プレウロムチリンのＣ－１４側鎖の修飾により、２種類の動物用医薬品と２種類のヒト用医薬品の開発に成功し、動物用からヒト用への飛躍を完全に実現し、優れた臨床応用の見通しが示されている。プレウロムチリンおよびその誘導体は、細菌のリボソームサブユニット５０Ｓに結合することにより、細菌のタンパク質合成を阻害することができる。このユニークな作用機序と優れた抗菌活性により、プレウロムチリンに関する研究は国際的な研究ホットスポットとなっている。

【0005】

第４級アンモニウム化合物は、良好な溶解性、安定した化学的性質、便利な使用、低毒性および高効率、広域スペクトルの抗菌効果などの利点を有するカチオン性界面活性剤の一種であり、一般的に医療用消毒および殺菌に使用され、この種の殺菌剤は、強い細胞浸透性、良好な安定性、低毒性、長い殺菌持続時間、顕著な殺菌効果などの特徴を有する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

（発明の概要）
上記先行技術の欠点を克服するために、本発明の目的は、薬剤耐性菌やマイコプラズマ属により引き起こされる感染症を予防および治療するための、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体、ならびにその調製方法および使用を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

上記目的を達成するために、本発明は、以下の技術的解決策を採用する。

【0008】

本発明は、一般式Ｉの化合物である、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体、またはその薬学的に許容される塩、および前記一般式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の、溶媒和物（ｓｏｌｖｅｎｔ）、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、またはラセミ混合物を含む任意の比率でのそれらの混合物、を開示する。

【0009】

【化1】

式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ独立して、水素原子、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、ｔｅｒｔ－ブチル、ニトロ、シアノ、ハロゲン原子、またはフェニルから選択される。

【0010】

好ましくは、代表化合物は、以下の化合物から選択される。

【化2】

【0011】

好ましくは、前記薬学的に許容される塩は、一般式Ｉで示される構造を有する化合物と、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸、またはアスパラギン酸と、によって形成される塩である。

【0012】

本発明はまた、以下のステップを含む、上記チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を調製するための方法を、開示する。

【0013】

１）プレウロムチリンをｐ－トルエンスルホニルクロリドと反応させて中間体Ｉを得るステップであって、ここで、前記中間体Ｉが、

【化3】

である、ステップ。

【0014】

２）ステップ１)で調製した前記中間体Ｉと２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとを、原料として用い、有機溶媒に溶解し、触媒作用および加熱条件下で反応させ、分離および精製後に中間体ＩＩを得るステップであって、ここで、前記中間体ＩＩが、

【化4】

であり、前記触媒が、炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムである、ステップ。

【0015】

３）ステップ２）で調製した前記中間体ＩＩを、原料として用い、様々な置換基を有するベンジルブロミド化合物と反応させ、分離および精製後、一般式Ｉに示す構造のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を得ることができる、ステップ。

【0016】

好ましくは、ステップ１）において、プレウロムチリンとｐ－トルエンスルホニルクロリドとのモル比は１：１．２であり、ステップ２）において、前記中間体Ｉと２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとのモル比は１：１．２であり、ステップ３）において、前記中間体ＩＩと、様々な置換基を有するベンジルブロミド化合物とのモル比は１：（２～６）である。

【0017】

好ましくは、ステップ１）に記載の反応は、溶媒としてジクロロメタン、触媒としてトリエチルアミンおよび４－ジメチルアミノピリジンを用い、室温で８時間撹拌および反応させ、ステップ２）に記載の反応は、溶媒としてＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを用い、６０℃で６時間加熱し、ステップ３）に記載の反応は、溶媒としてアセトニトリル、アセトンまたはトルエンを用いる。

【0018】

本発明はまた、抗病原性微生物薬の調製における、上記したチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体の使用を、開示する。

【0019】

好ましくは、前記抗病原性微生物薬は、感染症を治療するための医薬製剤である。

【0020】

さらに好ましくは、前記感染症は、マイコプラズマ属または薬剤耐性菌に感染したヒトまたは動物の感染症である。

【0021】

さらに好ましくは、前記マイコプラズマ属は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）標準株Ｊ株、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ臨床分離株ＬＨ株、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｒｈｉｎａ）標準株ＢＴＳ－７株、マイコプラズマ・ガリセプチカム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）標準株Ｒ株またはマイコプラズマ・シノビエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｓｙｎｏｖｉａｅ）ＷＶＵ１８５３株である。前記薬剤耐性菌は、多剤耐性緑膿菌（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、多剤耐性肺炎桿菌（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、バンコマイシン耐性腸球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）またはカルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）である。

【0022】

好ましくは、前記医薬製剤は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む。

【0023】

本発明はまた、抗生物質薬を開示し、この薬は、有効量の、上記チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を含み、残部は、医薬賦形剤または他の適合する薬である。

【0024】

従来技術と比較して、本発明は以下の有益な効果を有する。

【0025】

本発明は、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を提供する。チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体は、プレウロムチリンの構造再構成を行い、次いで４級アンモニウム塩化合物で構造改変することにより、調製に成功した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性アッセイにより、本発明により合成された化合物１～化合物１５は、様々な細菌株に対して抑制効果を発揮し、薬剤耐性菌に対するほとんどの当該化合物の抑制能力は、市販の３種類の薬剤（レタパムリン、チアムリン、およびバルネムリン）より強いことが示される。好ましい化合物２は最も優れた抗菌効果を有し、ＡＴＣＣ ２５９２３およびＡＴＣＣ ２９２１３に対するＭＩＣは０．０６２５μg／ｍＬ、ＡＴＣＣ １９６０６に対するＭＩＣは１μｇ／ｍＬ、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ＡＴＣＣ ２５９２２およびＣＭＣＣ ４４１０３）に対するＭＩＣはそれぞれ０．０６２５μｇ／ｍＬおよび０．５μｇ／ｍＬである。全ての臨床薬剤耐性菌（ＭＤＲ－ＰＡ１８－９９３、１８－７５６、１８－１２６、ＭＤＲ－ＫＰ１８－８９３、１８－７５４、１８－１４８２、ＭＲＳＡ １８－１７１、１８－２０９、１８－５７５、ＶＲＥ１８－９４、１８－８０、１８－５０７、ＣＲ－ＡＢ１８－１８４、１８－５６０、および１８－８８２）に対する、好ましい化合物７の抑制効果は、市販薬リタモリン（ｒｉｔａｍｏｌｉｎｅ）の効果よりも優れており、広域スペクトルの抗菌活性を有する。抗マイコプラズマ活性の測定は、好ましい化合物７の抗マイコプラズマ効果が、市販のプレウロムチリン系抗生物質であるチアムリンの効果よりも、優れていることを示す。以上の実験から、このタイプの化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで良好な抗菌活性と、強力なマイコプラズマ阻害活性とを有し、プレウロムチリン誘導体の難溶性を改善し、薬剤耐性菌およびマイコプラズマにより引き起こされる感染症の予防および治療に適用され得、非常に優れた医療開発価値を有する。

【0026】

本発明は、上記のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を調製するための方法を提供し、この方法は、原料が入手しやすい、操作安全性が高い、反応条件が穏やか、低コスト、７２．５１％～８９．１９％の高収率という利点を有し、工業生産に適している。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】図１は、重水素化ＤＭＳＯ中での本発明の化合物１のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図2】図２は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中での化合物１のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図3】図３は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中での化合物２のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図4】図４は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中での化合物２のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図5】図５は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物３のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図6】図６は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物３のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図7】図7は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物４のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図8】図８は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物４のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図9】図９は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物５のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図10】図１０は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物５のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図11】図１１は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物６のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図12】図１２は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物６のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図13】図１３は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物７のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図14】図１４は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物７のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図15】図１５は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物８のＨ ＮＭＲスペクトルである。

【図16】図１６は、本発明における重水素化ＤＭＳＯ中の化合物８のＣ ＮＭＲスペクトルである。

【図17】図１７は、黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ２９２１３）に対する化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性の測定結果を示すグラフである。

【図18】図１８は、黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ２５９２３）に対する化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性の測定結果を示すグラフである。

【図19】図１９は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ３３５９１）に対する化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性の測定結果を示すグラフである。

【図20】図２０は、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）（ＡＴＣＣ １９６０６）に対する化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性の測定結果を示すグラフである。

【図21】図２１は、大腸菌（ＣＭＣＣ ４４１０３）に対する化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性の測定結果を示すグラフである。

【図22】図２２は、マイコプラズマ５株に対する化合物７のＭＩＣ測定結果を示すグラフであり、（Ａ）Ｍｈｐ－Ｊ株、（Ｂ）Ｍｈｐ－ＬＨ株、（Ｃ）Ｍｈｒ－ＢＴＳ－７株、（Ｄ）ＭＧ－Ｒ株、および（Ｅ）ＭＳ－ＷＶＵ１８５３株である。

【発明を実施するための形態】

【0028】

当業者が本発明の解決策をよりよく理解できるようにするために、本発明の実施形態における技術的解決策を、本発明の実施形態における添付図面と共に明確かつ完全に説明する。明らかに、説明された実施形態は、本発明の実施形態の一部に過ぎず、すべての実施形態ではない。本発明の実施形態に基づいて、当業者であれば発明的努力を伴うことなく得られる可能性のある他のすべての実施形態は、本発明の保護範囲内に入る。

【0029】

本発明の説明および特許請求の範囲ならびに上記図面における用語「第１」および「第２」は、類似の対象を区別するために使用されるが、必ずしも特定の順序または連続を説明するために使用されているわけではないことに留意されたい。このように使用されるデータは、本明細書に記載された本発明の実施形態が、本明細書に図示または記載されたもの以外の順序で実施され得るように、適切な状況下で交換可能であることを理解されたい。さらに、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「有する（ｈａｖｅ）」、ならびにそれらの変形は、非排他的な包含を意図しており、例えば、一連のステップまたはユニットを含むプロセス、方法、システム、製品または装置は、必ずしも明示的に列挙されたものに限定されず、明示的に列挙されていない、あるいはプロセス、方法、製品または装置に固有の、他のステップまたはユニットが含まれてもよい。

【0030】

以下、添付図面と共に本発明をさらに詳細に説明する。

【0031】

本発明は、一般式Ｉの化合物である、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体、またはその薬学的に許容される塩、および前記一般式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の、溶媒和物、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、またはラセミ混合物を含む任意の比率でのそれらの混合物を、提供する。

【0032】

【化5】

式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、それぞれ独立して、水素原子、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、ｔｅｒｔ－ブチル、ニトロ、シアノ、ハロゲン原子またはフェニルから選択され、用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指し、前記薬学的に許容される塩は、一般式Ｉで示される構造を有する化合物と、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、グルタミン酸またはアスパラギン酸と、によって形成される塩である。

【0033】

本発明は、上記のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体の調製方法を提供し、当該方法は以下のステップを含む：（１）プレウロムチリンをｐ－トルエンスルホニルクロリドと反応させて中間体Ｉを得るステップであって、その反応式は以下の通りである。

【0034】

【化6】

【0035】

ここで、本反応では、溶媒としてジクロロメタン、触媒としてトリエチルアミンおよび４－ジメチルアミノピリジンを用い、室温で８時間撹拌する；プレウロムチリンとｐ－トルエンスルホニルクロリドとのモル比は１：１．２である。

【0036】

（２）ステップ（１)で調製した中間体Ｉと、２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとを原料として用い、有機溶媒に溶解し、触媒作用および加熱条件下で反応させ、分離および精製後に中間体ＩＩを得るステップであって、反応式は以下の通りである。

【0037】

【化7】

【0038】

ここで、本反応では、溶媒としてＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを用い、６０℃で６時間加熱する。中間体Ｉと２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾールとのモル比は１：１．２である。触媒は炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムである。精製の具体的な操作は、好ましくは、反応終了後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル相を回収し、カラムクロマトグラフィーで分離および精製して中間体ＩＩを得る。

【0039】

（３）ステップ（２)で調製した中間体ＩＩを原料として、様々な置換基を有するベンジル化合物と反応させ、分離および精製後、一般式Ｉに示す構造のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を得ることができるステップであって、反応式は以下の通りである：

【0040】

【化8】

【0041】

ここで、本反応では、溶媒としてアセトニトリル、アセトン、トルエン、より好ましくはアセトニトリルを用い、本反応において、中間体ＩＩと、様々な置換を有するベンジルブロミド化合物とのモル比は１：（２～６）、さらに最適にして１：４である。精製の具体的な操作は、好ましくは、反応終了後、反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィーで分離および精製して目的物を得、溶離液の比率がジクロロメタン：メタノール＝１０：１であること、である。

【実施例】

【0042】

１．化合物１～化合物１５の合成の具体例

【0043】

本発明の代表的な化合物の構造式を以下に示す。

【0044】

【化9】

【0045】

上記化合物の合成例を以下に示す。化合物の構造は、ＮＭＲによって特徴付けられる。

【0046】

実施例１
（１）中間体Ｉの調製

【化10】

【0047】

プレウロムチリン９．５ｇ（２５ｍｍｏｌ）およびｐ－トルエンスルホニルクロリド５．７ｇ（３０ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、ジクロロメタン１５０ｍＬに溶解し、トリエチルアミン１０．５ｍＬ（７５ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン３０５．４ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）を加えて室温で８時間撹拌し、ＴＬＣを用いてモニターした。反応後、反応液を減圧下濃縮して溶媒を除去し、得られた固体を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥して１２．７ｇの中間体Ｉ（収率９５．３２％）を得た。

【0048】

（２）中間体ＩＩの調製

【化11】

【0049】

中間体Ｉ１０．７g（２０ｍｍｏｌ）および２－メルカプト－４－（４－ピリジル）チアゾール４．７ｇ（２４ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド１００ｍＬに溶解し、そこに炭酸カリウム５．５ｇ（４０ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム３３２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で６時間加熱して反応させ、ＴＬＣを用いてモニターした。反応後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル相を回収し、カラムクロマトグラフィー（固定相として２００～３００メッシュシリカゲル粉末を使用、移動相としてジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝２０：１）で分離および精製し、乾燥して１０．２gの中間体ＩＩ（収率９１．９３％）を得た。

【0050】

（１）化合物１の合成
化合物１：１－ベンジル－４－（２－（（（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキシ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チオチアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化12】

【0051】

ステップ(２)で合成した 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）とベンジルブロミド２０５．２ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）とを反応器に入れ、アセトニトリル５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１９３．５ｍｇの化合物１（収率８８．８５％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物１のＨ ＮＭＲスペクトルを図１に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図２に示す。

【0052】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.26 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 8.97 (s, 1H), 8.56 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.49 - 7.40 (m, 3H), 5.99 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 5.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.91 - 4.78 (m, 2H), 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.35 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.2, 10.9 Hz, 1H), 2.11 - 1.91 (m, 3H), 1.68 - 1.56 (m, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.38 - 1.19 (m, 7H), 1.06 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.80 (s, 3H), 0.77 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.58 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。

【0053】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.55, 166.94, 166.69, 148.54, 147.70, 145.74, 141.13, 134.96, 129.76, 129.67, 129.04, 127.11, 124.26, 115.61, 72.89, 70.85, 63.01, 57.60, 45.37, 44.34, 43.89, 41.97, 36.84, 36.72, 36.33, 34.44, 30.50, 28.86, 27.02, 24.89, 16.58, 14.91, 11.97。

【0054】

実施例２
化合物２：１－（４－メチルベンジル）－４－（（２－（（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チオ）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化13】

【0055】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびｐ－メチルベンジルブロミド２２２．１ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、トルエン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してトルエンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８３．７ｍｇの化合物２（収率８２．７９％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物２のＨ ＮＭＲスペクトルを図３に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図４に示す。

【0056】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.24 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 8.97 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.99 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90 - 4.79 (m, 2H), 4.51 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 2.35 (s, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.17 (dd, J = 19.3, 11.0 Hz, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.38 - 1.19 (m, 7H), 1.07 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.81 (s, 3H), 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0057】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.53, 166.92, 166.65, 148.56, 147.64, 145.61, 141.14, 139.36, 131.99, 130.19, 129.13, 127.05, 124.22, 115.59, 72.90, 70.87, 62.87, 57.61, 45.38, 44.36, 43.92, 41.98, 36.85, 36.73, 36.34, 34.45, 30.51, 28.86, 27.02, 24.90, 21.23, 16.57, 14.91, 11.96。

【0058】

実施例３
化合物３：１－（４－（トリフルオロメチル）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化14】

【0059】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）とp－トリフルオロメチルベンジルブロミド２８６．８ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）とを反応器に入れ、アセトン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８６．８ｍｇの化合物３（収率７８．４３％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物３のＨ ＮＭＲスペクトルを図５に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図６に示す。

【0060】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.28 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 8.99 (s, 1H), 8.61 - 8.57 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.15 - 5.87 (m, 3H), 5.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.91 - 4.81 (m, 2H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.37 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.2, 10.9 Hz, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.02 - 1.94 (m, 2H), 1.66 - 1.56 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.39 - 1.17 (m, 7H), 1.09 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.92 (m, 1H), 0.83 (s, 3H), 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.58 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0061】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.55, 166.93, 166.74, 148.55, 147.89, 145.98, 141.19, 139.41, 129.90, 127.29, 126.52, 126.49, 124.34, 115.60, 72.89, 70.88, 62.18, 57.61, 45.38, 44.38, 43.91, 41.98, 36.85, 36.72, 36.34, 34.44, 31.38, 28.90, 27.02, 24.89, 16.57, 14.91, 11.95。

【0062】

実施例４
化合物４：１－（４－（メトキシ）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化15】

【0063】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）および４－メトキシベンジルブロミド １２０．７ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトニトリル５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１７８．９ｍｇの化合物４（収率７８．８９％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物４のＨ ＮＭＲスペクトルを図７に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図８に示す。

【0064】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.24 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 8.97 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.99 (dd, J = 17.8, 11.1 Hz, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.35 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.2, 10.9 Hz, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 2.01 - 1.89 (m, 2H), 1.65 - 1.55 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.38 - 1.18 (m, 7H), 1.06 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.80 (s, 3H), 0.77 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0065】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.56, 166.93, 166.63, 160.44, 148.56, 147.57, 145.45, 141.13, 130.96, 126.99, 126.82, 124.21, 115.61, 115.02, 72.89, 70.85, 62.66, 57.60, 55.75, 45.37, 44.35, 43.89, 41.97, 36.84, 36.72, 36.32, 34.44, 30.50, 28.86, 27.02, 24.89, 16.57, 14.90, 11.96。

【0066】

実施例５
化合物５：１－（４－（トリフルオロメトキシ）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化16】

【0067】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびp－トリフルオロメトキシベンジルブロミド１５３．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ)を反応器に入れ、５ｍＬのトルエンに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してトルエンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８３．９ｍｇの化合物５（収率７５．６９％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物５のＨ ＮＭＲスペクトルを図９に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図１０に示す。

【0068】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.34 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 9.04 (s, 1H), 8.65 - 8.60 (m, 2H), 7.76 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.04 (dd, J = 17.7, 11.2 Hz, 1H), 5.95 (s, 2H), 5.56 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.94 - 4.84 (m, 2H), 4.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.32 (s, 2H), 2.41 (s, 1H), 2.22 (dd, J = 19.7, 10.5 Hz, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 2.05 - 1.98 (m, 2H), 1.70 - 1.61 (m, 2H), 1.54 - 1.45 (m, 1H), 1.42 - 1.23 (m, 7H), 1.12 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.05 - 0.99 (m, 1H), 0.86 (s, 3H), 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.62 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0069】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.54, 166.93, 166.69, 149.30, 148.55, 147.79, 145.81, 141.17, 134.29, 131.38, 127.21, 124.32, 122.15, 115.59, 72.88, 70.86, 61.95, 57.60, 45.37, 44.36, 43.90, 41.97, 36.85, 36.72, 36.34, 34.44, 31.24, 30.50, 28.87, 27.02, 24.89, 16.57, 14.91, 11.94。

【0070】

実施例６
化合物６：１－（４－（ｔｅｒｔ－ブチル）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化17】

【0071】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびｐ－ｔｅｒｔ－ブチルベンジルブロミド１３６．３ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１７０．１ｍｇの化合物６（収率７２．５１％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物６のＨ ＮＭＲスペクトルを図１１に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図１２に示す。

【0072】

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.27 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 8.98 (s, 1H), 8.57 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.48 (s, 4H), 6.01 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 5.83 (s, 2H), 5.53 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.97 - 4.73 (m, 2H), 4.45 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.19 (dd, J = 19.1, 10.8 Hz, 1H), 2.12 - 1.93 (m, 3H), 1.69 - 1.57 (m, 2H), 1.52 - 1.42 (m, 1H), 1.42 - 1.31 (m, 4H), 1.31 - 1.19 (m, 12H), 1.09 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.04 - 0.94 (m, 1H), 0.84 (s, 3H), 0.79 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.59 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。

【0073】

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 216.72, 166.89, 166.62, 152.33, 148.54, 147.61, 145.64, 141.11, 132.07, 128.84, 127.02, 126.42, 124.23, 115.60, 72.87, 70.84, 62.71, 57.58, 49.04, 45.35, 44.32, 43.86, 41.95, 36.82, 36.69, 36.31, 34.87, 31.42, 30.50, 28.86, 27.01, 24.87, 16.56, 14.88, 11.91。

【0074】

実施例７
化合物７：１－（４－（ニトロ）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化18】

【0075】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびｐ－ニトロベンジルブロミド１９４．４ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、５ｍＬのトルエンに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してトルエンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１７９．２ｍｇの化合物７（収率７７．５１％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物７のＨ ＮＭＲスペクトルを図１３に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図１４に示す。

【0076】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.29 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 9.00 (s, 1H), 8.60 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 8.30 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.09 - 5.94 (m, 3H), 5.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90 - 4.82 (m, 2H), 4.51 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.28 (s, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.2, 10.9 Hz, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 2.00 - 1.94 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.49 - 1.40 (m, 1H), 1.38 - 1.19 (m, 7H), 1.09 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.81 (s, 3H), 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。

【0077】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.56, 166.94, 166.77, 148.53, 148.33, 147.98, 146.07, 141.94, 141.17, 130.37, 127.39, 124.61, 124.39, 115.61, 72.88, 70.88, 61.88, 57.60, 45.38, 44.38, 43.89, 41.97, 36.85, 36.73, 36.33, 34.44, 30.50, 28.89, 27.02, 24.89, 16.57, 14.91, 11.96。

【0078】

実施例８
化合物８：１－（４－（シアノ）ベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化19】

【0079】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ)およびｐ－シアノベンジルブロミド１７６．４ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトニトリル５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８２．５ｍｇの化合物８（収率８１．０１％）を得た。重水素化ＤＭＳＯ中での化合物８のＨ ＮＭＲスペクトルを図１５に、重水素化ＤＭＳＯ中でのＣ ＮＭＲスペクトルを図１６に示す。

【0080】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.28 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 9.00 (s, 1H), 8.61 - 8.57 (m, 2H), 7.95 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.05 - 5.95 (m, 3H), 5.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.90 - 4.81 (m, 2H), 4.52 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.2, 10.9 Hz, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.39 - 1.17 (m, 7H), 1.08 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.81 (s, 3H), 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。

【0081】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.56, 166.93, 166.74, 148.54, 147.93, 146.01, 141.17, 140.10, 133.50, 129.93, 127.35, 124.36, 118.80, 115.61, 112.43, 72.89, 70.88, 62.17, 57.61, 45.38, 44.38, 43.89, 41.97, 36.85, 36.72, 36.33, 34.45, 30.51, 28.89, 27.02, 24.89, 16.58, 14.91, 11.97。

【0082】

実施例９
化合物９：１－（４－フルオロベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化20】

【0083】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびp－フルオロベンジルブロミド１７０．１ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１７５．７ｍｇの化合物９（収率７８．７３％）を得た。

【0084】

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.31 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 9.02 (s, 1H), 8.60 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 7.70 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.03 (dd, J = 17.9, 11.2 Hz, 1H), 5.89 (s, 2H), 5.55 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.97 - 4.81 (m, 2H), 4.53 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 2.39 (s, 1H), 2.21 (dd, J = 19.2, 11.0 Hz, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 2H), 1.70 - 1.57 (m, 2H), 1.54 - 1.43 (m, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 7H), 1.11 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 1.01 (t, J = 13.4 Hz, 1H), 0.85 - 0.78 (m, 6H), 0.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。

【0085】

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 216.71, 166.94, 166.68, 148.56, 147.72, 145.66, 141.15, 131.81, 131.73, 127.15, 124.28, 116.69, 116.47, 115.60, 72.90, 70.86, 62.13, 57.61, 45.38, 44.34, 43.91, 41.97, 36.84, 36.72, 36.34, 34.44, 30.51, 28.83, 27.03, 24.89, 16.58, 14.91, 11.96。

【0086】

実施例１０
化合物１０：１－（４－クロロベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化21】

【0087】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）とp－クロロベンジルブロミド３６９．９ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）とを反応器に入れ、アセトニトリル５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して２０３．４ｍｇの化合物１０（収率８９．１９％）を得た。

【0088】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.26 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 8.98 (s, 2H), 8.57 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 17.7, 11.2 Hz, 1H), 5.86 (s, 2H), 5.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.95 - 4.79 (m, 2H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 18.9, 11.2 Hz, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.66 - 1.56 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.40 - 1.18 (m, 7H), 1.08 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 1.02 - 0.93 (m, 1H), 0.82 (s, 3H), 0.78 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.58 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。

【0089】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.55, 166.93, 166.69, 148.54, 147.77, 145.75, 141.16, 134.60, 133.84, 131.17, 129.64, 127.19, 124.28, 115.61, 72.90, 70.87, 62.10, 57.61, 49.06, 45.38, 44.36, 43.91, 41.97, 36.84, 36.72, 34.45, 30.51, 28.88, 27.02, 24.89, 16.58, 14.91, 11.96。

【0090】

実施例１１
化合物１１：１－（４－ブロモベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化22】

【0091】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびp－ブロモベンジルブロミド４４９．９ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、５ｍＬのトルエンに溶解させ、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してトルエンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して２０１．０ｍｇの化合物１１（８３．２６％）を得た。

【0092】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.25 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 8.98 (s, 1H), 8.57 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 17.7, 11.2 Hz, 1H), 5.83 (s, 2H), 5.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90 - 4.81 (m, 2H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.38 - 2.35 (m, 1H), 2.21 - 2.13 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.39 - 1.18 (m, 7H), 1.08 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 1.02 - 0.94 (m, 1H), 0.82 (s, 3H), 0.78 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。

【0093】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.56, 166.94, 166.70, 148.55, 147.78, 145.76, 141.17, 134.24, 132.58, 131.41, 127.19, 124.28, 123.26, 115.61, 72.90, 70.87, 62.18, 57.61, 45.38, 44.37, 43.91, 41.97, 36.85, 36.73, 36.34, 34.45, 30.51, 28.89, 27.02, 24.90, 16.58, 14.91, 11.97。

【0094】

実施例１２
化合物１２：１－（［１，１’－ビフェニル］－４－イルメチル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化23】

【0095】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）および４－ブロモメチルビフェニル（ｂｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌｂｉｐｈｅｎｅ）４４４．９ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１９７．６ｍｇの化合物１２（収率８２．１４％）を得た。

【0096】

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.33 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 9.01 (s, 1H), 8.61 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.68 (dd, J = 11.5, 7.9 Hz, 4H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.03 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 5.94 (s, 2H), 5.55 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.96 - 4.83 (m, 2H), 4.47 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 2.37 (s, 1H), 2.25 - 2.13 (m, 1H), 2.13 - 1.93 (m, 3H), 1.69 - 1.55 (m, 2H), 1.53 - 1.44 (m, 1H), 1.42 - 1.19 (m, 7H), 1.12 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 1.05 - 0.93 (m, 1H), 0.87 (s, 3H), 0.80 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.60 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。

【0097】

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 216.32, 166.94, 166.68, 148.59, 147.74, 145.78, 141.58, 141.17, 139.74, 134.06, 129.77, 129.49, 128.35, 127.91, 127.29, 127.14, 124.31, 115.64, 72.91, 70.88, 62.69, 57.61, 45.37, 44.38, 43.90, 41.98, 36.84, 36.72, 36.34, 34.44, 30.51, 28.91, 27.02, 24.90, 16.58, 14.91, 11.95。

【0098】

実施例１３
化合物１３：１－（３，５－ジメチルベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル)オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル)ピリジルブロミド塩の調製

【化24】

【0099】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）および３，５－ジメチルベンジルブロミド ２９８．６ｍｇ（１．５ｍｍｏl）を反応器に入れ、アセトニトリル５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８９．９ｍｇの化合物１３（収率８３．９５％）を得た。

【0100】

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.29 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 9.05 (s, 1H), 8.59 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 7.17 (s, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.01 (dd, J = 17.7, 11.1 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 5.53 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.91 - 4.81 (m, 2H), 4.53 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.28 (s, 2H), 2.37 (s, 1H), 2.29 (s, 6H), 2.19 (dd, J = 19.1, 10.8 Hz, 1H), 2.12 - 1.92 (m, 3H), 1.68 - 1.56 (m, 2H), 1.52 - 1.43 (m, 1H), 1.41 - 1.20 (m, 7H), 1.08 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 1.04 - 0.94 (m, 1H), 0.83 - 0.76 (m, 6H), 0.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。

【0101】

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 216.53, 166.92, 166.60, 148.55, 147.60, 145.70, 141.17, 138.89, 134.82, 131.06, 127.15, 126.69, 124.21, 115.57, 72.86, 70.84, 62.94, 57.59, 45.35, 44.32, 43.89, 41.95, 36.83, 36.70, 36.32, 34.43, 30.51, 28.80, 27.02, 24.87, 21.29, 16.58, 14.89, 11.95。

【0102】

実施例１４
化合物１４：１－（３，５－ジメトキシベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４,７,９,１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化25】

【0103】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）および３，５－ジメトキシベンジルブロミド３４６．６ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、トルエン５ｍＬに溶解させ、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してトルエンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１９４．５ｍｇの化合物１４（収率８２．５１％）を得た。

【0104】

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.34 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 9.03 (s, 1H), 8.58 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 6.56 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.02 (dd, J = 17.7, 11.2 Hz, 1H), 5.77 (s, 2H), 5.54 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.93 - 4.81 (m, 2H), 4.53 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 3.78 (s, 6H), 2.37 (s, 1H), 2.20 (dd, J = 19.2, 10.8 Hz, 1H), 2.14 - 1.93 (m, 3H), 1.69 - 1.58 (m, 2H), 1.53 - 1.43 (m, 1H), 1.42 - 1.18 (m, 7H), 1.10 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 1.05 - 0.95 (m, 1H), 0.83 (s, 3H), 0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.60 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。

【0105】

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 216.61, 166.93, 166.60, 161.44, 148.57, 147.65, 145.69, 141.14, 136.85, 127.13, 124.16, 115.57, 107.39, 101.19, 72.86, 70.85, 62.93, 57.60, 55.90, 55.41, 45.36, 44.32, 43.92, 41.96, 36.84, 36.71, 34.46, 30.51, 28.79, 27.02, 24.88, 16.58, 14.90, 11.95。

【0106】

実施例１５
化合物１５：１－（３，５－ジフルオロベンジル）－４－（２－（８－ヒドロキシ－４，７，９，１２－テトラメチル－３－オキソ－７－ビニルデカヒドロ－４，９ａ－プロパンシクロペント［８］サイクレン－５－イル）オキシ）－２－オキソエチル）チアゾール－４－イル）ピリジルブロミド塩の調製

【化26】

【0107】

中間体Ｉおよび中間体ＩＩの調製方法は、実施例１と同じである。 中間体ＩＩ １６６．４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）および３，５－ジフルオロベンジルブロミド３１０．５ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を反応器に入れ、アセトン５ｍＬに溶解し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣによりモニターした。反応後、反応混合物を減圧下で濃縮してアセトンを除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール（Ｖ：Ｖ）＝１０：１）で分離および精製し、乾燥して１８５．５ｍｇの化合物１５（収率８１．１９％）を得た。

【0108】

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.29 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 9.00 (s, 1H), 8.60 - 8.56 (m, 2H), 7.41 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 7.38 - 7.33 (m, 1H), 5.99 (dd, J = 17.7, 11.2 Hz, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.90 - 4.78 (m, 2H), 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.17 (dd, J = 19.1, 11.0 Hz, 1H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.99 - 1.89 (m, 2H), 1.66 - 1.56 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.38 - 1.18 (m, 7H), 1.07 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.01 - 0.93 (m, 1H), 0.79 - 0.75 (m, 6H), 0.58 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。

【0109】

¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ 217.53, 166.94, 166.72, 162.78, 148.53, 147.90, 145.89, 141.17, 127.28, 124.32, 115.55, 112.91, 112.74, 72.87, 70.86, 61.62, 57.59, 45.37, 44.31, 43.91, 41.97, 36.84, 36.72, 36.26, 34.43, 31.24, 30.51, 28.77, 27.03, 24.89, 16.60, 14.91, 11.96。

【0110】

２.Ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性アッセイ
本発明のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、モキシフロキサシン（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｍａｃｋｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）を陽性対照として、マイクロブロス希釈法で試験された。同時に、より優れた活性を含むプレウロムチリン誘導体をスクリーニングするために、本発明のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体を、市販のプレウロムチリン系抗生物質であるレタパムリン（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｃｈｅｍｌｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）、チアムリン（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｙｕａｎｙｅ Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）およびバルネムリン（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃｍｅｃ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）と比較した。

【0111】

標準菌株には、グラム陽性菌：表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）ＡＴＣＣ１２２２８、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ ２９２１３、ＡＴＣＣ２５９２３およびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ ３３５９１；グラム陰性菌：サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ＡＴＣＣ １４０２８、アシネトバクター・バウマニＡＴＣＣ １９６０６、大腸菌ＡＴＣＣ ２５９２２およびＣＭＣＣ ４４１０３（すべての菌株はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入）が、含まれる。

【0112】

臨床耐性菌には、多剤耐性緑膿菌（ＭＤＲ－ＰＡ）１８－９９３、１８－７５６、１８－１２６、多剤耐性肺炎桿菌（ＭＤＲ－ＫＰ）１８－８９３、１８－７５４、１８－１４８２、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）１８－１７１、１８－２０９および１８－５７５、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）１８－９４、１８－８０および１８－５０７、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（ＣＲ－ＡＢ）１８－１８４、１８－５６０および１８－８８２（すべての臨床薬剤耐性株は、Ｈｕａｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙからのものであった）が、含まれる。

【0113】

具体的な操作ステップは以下の通りである。

【0114】

（１）ＭＨＢ培地の調製：ＭＨＢ培地（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｈｕａｎｋａｉ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．より購入）２０．０gを計量し、蒸留水１Ｌに加え、完全に溶解するまで加熱煮沸し、三角フラスコに分注し、後に使用するために１２１℃で１５分間のオートクレーブ処理を行った。

【0115】

（２）実験株の対数増殖期までの培養：無菌条件下で、回収した実験株を１００ｍＬのＭＨＢ培地に接種し、後に使用するために３７℃の恒温恒湿インキュベーター内に２０～２２時間放置した。

【0116】

（３）試料溶液の調製：被検試料（本発明で合成した化合物１～化合物１５、レタパムリン、チアムリン、バルネムリン）を秤量し、ＤＭＳＯ溶液に溶解して濃度１０．２４ｍｇ／ｍＬの試料溶液を調製し、陽性対照（モキシフロキサシン）をＤＭＳＯ溶液に溶解して濃度５．１２ｍｇ／ｍＬの試料溶液を調製した。

【0117】

（４）細菌懸濁液の調製：無菌条件下で、対数増殖期まで培養した実験株をＭＨＢ培地でＭｃｆａｒｌａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ０．５に補正し、後に使用するために１：２００の割合で希釈した。

【0118】

（５）微量二倍希釈法によるＭＩＣの測定：滅菌済み９６ウェルプレートに、２番目のウェルにモキシフロキサシン試料溶液１０μＬ、４番目から１１番目のウェルにＤＭＳＯ溶液１０μＬ、３番目と４番目のウェルに勾配希釈した試料溶液１０μＬを加え、１０番目のウェルまで薬剤を２倍希釈し、１１番目のウェルを溶媒対照とした。次いで、各ウェルに最終菌濃度が５×１０^５ＣＦＵ／ｍＬとなるように希釈菌体懸濁液１９０μＬを添加し、３７℃の恒温恒湿インキュベーター内で２０～２２時間インキュベートした。

【0119】

（６）ＭＩＣエンドポイントの解釈：黒背景下にて９６ウェルプレートで認められる細菌の増殖を完全に抑制できる濃度を、細菌に対するその試料の最小発育阻止濃度とする。(代表化合物２のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌結果の一部を図１７～図２１に示す)

【0120】

【表1】

【0121】

表１より、化合物１～化合物１５は、表皮ブドウ球菌（ＡＴＣＣ １２２２８）および黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ２５９２３およびＡＴＣＣ ２９２１３）に対して良好な抑制効果を示し、化合物１～化合物１２の効果は、市販のプレウロムチリン系抗生物質の効果よりも、はるかに優れている。このうち、ＡＴＣＣ ２５９２３に対する化合物１、４、６、７のＭＩＣ値は０．５μｇ／ｍＬ、ＡＴＣＣ ２９２１３に対する化合物１、７、８、１０のＭＩＣ値は０．１２５μｇ／ｍＬ、ＡＴＣＣ ２５９２３およびＣ ２９２１３に対する化合物２のＭＩＣ値は最大で０．０６２５μｇ／ｍＬで、これはすべての化合物の中で最高の抗菌効果である。合成された化合物１～化合物１５はメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ３３５９１）を抑制できる。市販されている３種類のプレウロムチリン系抗生物質と比較すると、化合物１～化合物７および化合物９～化合物１２の抗菌効果が市販薬よりも優れていることがわかる。

【0122】

さらに、化合物１～化合物１５は、サルモネラ（ＡＴＣＣ １４０２８）およびアシネトバクター・バウマニ（ＡＴＣＣ １９６０６）に対しても抗菌作用を示し、すべての化合物のＭＩＣ値は０．５μｇ／ｍＬ～３２μｇ／ｍＬとなった。このうち、化合物４はＡＴＣＣ １４０２８に対して最も優れた抗菌作用を示し（ＭＩＣ＝０．５μｇ／ｍＬ）、化合物２はＡＴＣＣ １９６０６に対して最も優れた抗菌作用を示した（ＭＩＣ＝１μｇ／ｍＬ）。合成された化合物１～化合物１５も、大腸菌（ＡＴＣＣ ２５９２２、ＣＭＣＣ ４４１０３）に対して程度の差こそあれ抑制効果を示し、その抗菌効果は市販の３種類の薬剤よりも弱くはない。このうち、化合物２はＭＩＣ値がそれぞれ０．０６２５、０．５μｇ／ｍＬと最も優れた効果を発揮している。

【0123】

要約すると、本発明のチアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体は、様々な細菌株に対して抑制効果を発揮し、ほとんどの化合物が薬剤耐性菌に対して市販の３種類の薬剤よりも強い抑制能力を有しており、さらなる臨床研究の意義がある。

【0124】

【表2】

【0125】

表２から、化合物２、化合物４および化合物７は、試験した１５種類の臨床薬剤耐性菌に対して様々な程度で抑制効果を発揮することができ、なかでも化合物７は、すべての臨床薬剤耐性菌に対して、レタパムリンの効果より優れた抑制効果を示し、広域スペクトルの抗菌活性を有し、薬剤耐性菌感染症の臨床治療における新たな選択肢として期待できることがわかる。

【0126】

３．抗マイコプラズマ活性アッセイ
様々なマイコプラズマ属に対する、チアゾール－ピリジンベンジル４級アンモニウム塩側鎖を含むプレウロムチリン誘導体の最小発育阻止濃度を、チアムリン（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｙｕａｎｙｅ Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）を陽性対照として、マイクロブロス希釈法で試験し、様々なマイコプラズマに対する抗菌効果を評価した。

【0127】

実験菌株には、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ標準菌株Ｊ株（Ｍｈｐ－Ｊ；ＮＣＴＣ１０１１０）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ臨床分離株ＬＨ株（Ｍｈｐ－ＬＨ）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｒｈｉｎｉ）標準菌株ＢＴＳ－７株（Ｍｈｒ－ＢＴＳ－７； ＮＣＴＣ １０１３０）、マイコプラズマ・ガリセプチカムＲ株（ＭＧ－Ｒ）、マイコプラズマ・シノビエＷＶＵ１８５３株（ＭＳ－ＷＶＵ１８５３；ＮＣＴＣ １０１２４）（英国のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓから購入）が、含まれる。

【0128】

具体的な操作ステップは、以下の通りである。

【0129】

（１）ＫＭ２培地の調製：ＫＭ２培地（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｈｕａｎｋａｉ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ．Ｃｏ．，Ｌｔｄ．より購入）３８．９ｇを秤量し、蒸留水８００ｍＬに加え、煮沸溶解し、後に使用するために１１５℃で２０分間のオートクレーブ処理を行った。

【0130】

（２）細菌液ストックの調製：マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｈｐ）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｒｈｉｎｉ）（Ｍｈｒ)、マイコプラズマ・ガリセプチカム（ＭＧ)、マイコプラズマ・シノビエ（ＭＳ）をそれぞれ０．５ｍＬ取り、ＫＭ２液体培地４．５ｍＬに移し、培地の色が黄色になった時点で各菌をチューブあたり０．５ｍＬでサブパッケージし（ｓｕｂ－ｐａｃｋｅｄ）、細菌液として－７０℃で保存した。

【0131】

（３）細菌液力価（色変化単位、ＣＣＵ）の測定：９６ウェルプレート法を用いて細菌液力価を測定した。保存菌液ストックを－７０℃から採取し、溶融後、室温に平衡化した。９６ウェルプレートの中央４列（つまり４重複で）の各ウェルに０．１８ｍＬのＫＭ２培地を加え、細菌液ストックを０．０２ｍＬ採取して１番目のカラムのウェルにそれぞれ加え、１０^－１１まで１０倍希釈を行った。ＫＭ２培地のみを含む陰性対照を設定した（カラム１２）。プレートを密封し、３７℃のインキュベーターに入れ、日毎に結果を観察した。培地の色が変化し得る最高希釈度は、菌株のＣＣＵ／ｍＬであった。

【0132】

（４）ＭＩＣの測定：マイコプラズマに対する化合物の最小発育阻止濃度を、マイクロブロス希釈法により測定した。各試験薬を濃度２５６０μｇ／ｍＬのストック溶液として調製し、各薬物ストック溶液をＫＭ２液体培地で２倍希釈し、試験濃度範囲を０．０１５～１２８μｇ／ｍＬ（濃度勾配大）および０．０００００４～０．０６μg／ｍＬ（濃度勾配小）とした。適量の種菌液を採取し、その力価に応じて１０^４ＣＣＵ／ｍＬまで連続的に希釈した。９６ウェルプレートに各種希釈度の薬剤を順次添加し、その後、同量の希釈菌液を添加した。陽性対照として希釈マイコプラズマ液２００μＬ、陰性対照としてＫＭ２液体培養液２００μＬ、さらに溶媒対照群（薬剤溶媒１０μＬ＋マイコプラズマ液１９０μＬ）を設定した。各実験に３重複で設定された。全ての培養プレートを密封した後、３７℃で培養させ、毎日観察し、最終的なＭＩＣ値を記録した（５種類のマイコプラズマ株に対する代表的な化合物７のＭＩＣ測定結果については図２２参照）。

【0133】

【表3】

【0134】

【表4】

【0135】

表４の結果は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエＪ株およびマイコプラズマ・ガリセプチカムＲ株に対する化合物７のＭＩＣ値はいずれも０．００４μg／ｍＬ、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ臨床分離株ＬＨ株に対する化合物７のＭＩＣ値は、０.００２μｇ／ｍＬ、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｒｈｉｎｏｉｓ）ＢＴＳ－７株に対する化合物７のＭＩＣ値は０．００８μg／ｍＬ、マイコプラズマ・シノビエＷＶＵ１８５３株に対する化合物７のＭＩＣ値は０．０１５μg／ｍＬであったことを示している。この効果は市販のプレウロムチリン系抗生物質の効果よりも優れており、化合物７にはさらなる研究の意義がある。

【0136】

４.化合物の溶解度の測定

【0137】

実験方法：
溶解度測定のために代表化合物２、４、７を選択し、対照として塩酸レタパムリンを使用した。各試料１ｍｇを採取し、１０ｍＬメスフラスコに定量溶解し、高速液体クロマトグラフィーで吸収ピーク面積を測定した。次いで、代表化合物２、４、７および対照薬レタパムリンの飽和溶液を１０倍に希釈し、ＨＰＬＣにより吸収ピーク面積を測定した。吸収ピーク面積を計算してそれぞれの溶解度を得た。

【0138】

実験装置はＳｈｉｍａｄｚｕＬＣ－１６、クロマトグラフィーカラムはＨｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ１８ ＯＤＳ（４．６×２５０ｍｍ×５μｍ）、流速は１．０ｍＬ／分、検出波長は３００ｎｍ、移動相は０．０５ｍｏｌ／Ｌの酢酸水溶液：アセトニトリル＝３０：７０であった。

【0139】

【表5】

【0140】

表５の試験結果から、試験化合物は、中性水溶液、ヒト胃酸環境のＰＨ＝１．５を模擬した塩酸水溶液、およびｎ－オクタノールに対する溶解度が良好であり、対照薬の塩酸レタパムリンと比較して脂溶性および水溶性が大きく改善されていることがわかる。３つの試験化合物の、水溶液への溶解度は２ｍｇ／ｍＬを超え、ｎ－オクタノールへの溶解度は１０ｍｇ／ｍＬを超えている。これらの良好な特性から、これらの化合物はさらなる開発の可能性を秘めている。

【0141】

上記の内容は、本発明の技術思想を説明するためのものであり、本発明の保護範囲を限定するものではない。本発明で提案される技術的思想に基づく技術的解決策に基づいて行われるいかなる変更も、本発明の特許請求の範囲の保護範囲内に入る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】