特許 7523689 粒子状物質による細胞損傷防止活性を有するペプチドおよびその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-07-18

(45)【発行日】2024-07-26

(54)【発明の名称】粒子状物質による細胞損傷防止活性を有するペプチドおよびその用途

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20240719BHJP

   A61K 8/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20240719BHJP

   A61Q 1/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61Q 5/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20240719BHJP

   A61Q 19/10 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 5/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 9/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 9/06 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 11/04 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/08 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 27/04 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240719BHJP

【ＦＩ】

C07K7/06 ZNA

A61K8/00

A61K38/08

A61Q1/00

A61Q5/02

A61Q19/00

A61Q19/08

A61Q19/10

A61P5/00

A61P7/06

A61P9/00

A61P9/02

A61P9/06

A61P11/00

A61P11/02

A61P11/04

A61P11/06

A61P15/00

A61P17/00

A61P17/04

A61P17/06

A61P17/08

A61P17/10

A61P17/16

A61P25/00

A61P25/02

A61P27/02

A61P27/04

A61P27/06

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/08

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2023530927

(86)(22)【出願日】2020-11-26

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-12-15

(86)【国際出願番号】 KR2020016910

(87)【国際公開番号】W WO2022114261

(87)【国際公開日】2022-06-02

【審査請求日】2023-06-05

(31)【優先権主張番号】10-2020-0159849

(32)【優先日】2020-11-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】510271129

【氏名又は名称】ケアジェン カンパニー，リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＣＡＲＥＧＥＮ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110002620

【氏名又は名称】弁理士法人大谷特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チョン ヨンジ

(72)【発明者】

【氏名】キム ウンミ

(72)【発明者】

【氏名】リ ウンジ

(72)【発明者】

【氏名】カン ハンア

(72)【発明者】

【氏名】ファン ボビョル

【審査官】小林 薫

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０２０／１７１２８５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０２０－５１５５４７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド。

【請求項2】

配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による細胞損傷防止用組成物。

【請求項3】

前記細胞損傷は、皮膚細胞、呼吸器細胞または角膜細胞の損傷である、請求項２に記載の粒子状物質による細胞損傷防止用組成物。

【請求項4】

前記ペプチドは、アリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）の活性化を抑制する、請求項２に記載の粒子状物質による細胞損傷防止用組成物。

【請求項5】

前記ペプチドは、シトクロム（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ）Ｐ４５０の活性を抑制する、請求項２に記載の粒子状物質による細胞損傷防止用組成物。

【請求項6】

前記粒子状物質は、多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）を含む、請求項２に記載の粒子状物質による細胞損傷防止用組成物。

【請求項7】

配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による皮膚細胞損傷防止用化粧料組成物。

【請求項8】

前記組成物は、皮膚老化、皮膚シワの増加、皮膚弾力の損傷、皮膚色の損傷、色素過形成、シミ、ソバカス、皮膚の乾燥、皮膚炎症、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または乾癬の改善用途である、請求項７に記載の化粧料組成物。

【請求項9】

前記組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、ゲル、ローション、エッセンス、クリーム、パウダー、せっけん、シャンプー、リンス、パックマスク、界面活性剤－含有クレンジング、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、オイル、リキッドファンデーション、クリームファンデーション、およびスプレーからなる群から選択される１種の剤形を有する、請求項７に記載の化粧料組成物。

【請求項10】

配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質によって引き起こされる疾患の治療または予防用薬学的組成物。

【請求項11】

前記粒子状物質によって引き起こされる疾患は、アトピー皮膚炎、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、ニキビ、皮膚乾燥症、乾癬；アレルギー性鼻炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、肺気腫、肺機能減少、喘息、気管支拡張症、特発性肺線維症、慢性閉鎖性肺疾患、嚢胞性線維症、細気管支炎、急性上気道感染症、肺炎、副鼻腔炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭炎；眼球乾燥症、アレルギー性結膜炎、緑内障、白内障、黄斑変性、網膜出血、網膜剥離、網膜色素変性症、老人性黄斑変性、糖尿病性網膜症；ガン、免疫毒性、末梢神経系損傷、中枢神経系損傷、内分泌腺異常、生殖器官障害、乳児および幼児の発達障害、貧血、不整脈、心臓麻痺、狭心症、および心筋梗塞症からなる群から選択される疾患である、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記ペプチドは、アリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）の活性化を抑制する、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

前記ペプチドは、シトクロム（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ）Ｐ４５０の活性を抑制する、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項14】

前記粒子状物質は、多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）を含む、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、粒子状物質による細胞の損傷を防止する活性を有するペプチドおよびその用途に関する。

【背景技術】

【0002】

粒子状物質（ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｍａｔｔｅｒ）は、目に見えないほど小さな粒子の微粒子を意味する。粒子状物質は、亜硫酸ガス、窒素酸化物、鉛、オゾン、一酸化炭素などを含む大気汚染物質であり、自動車、工場、調理過程などで発生し、大気中に長期間浮遊する。大気中に浮遊する直径５０μｍ以下の微粒子を全浮遊粒子（ＴＳＰ、ｔｏｔａｌ ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｐａｒｔｉｃｌｅ）と称し、通常、このＴＳＰのうち１０μｍより小さい微粒子を粒子状物質と定義する。粒子状物質は、粒子の直径に応じて、１０μｍ以下の直径を有する場合にはＰＭ１０とし、粒子径が２．５μｍ以下である場合にはＰＭ２．５とし、これを「微小粒子状物質」または「極粒子状物質」とも称する。

【0003】

粒子状物質は、炭素、有機炭化水素、硝酸塩、硫酸塩、有害金属成分を含んでおり、呼吸器疾患、心血管系疾患、眼球疾患、ガン、皮膚疾患、頭痛などを直接引き起こすか、これらの疾患をより悪化させるものと知られている。また、粒子状物質は、粒子のサイズが皮膚の毛穴の５分の１ほど小さいため、粒子状物質が皮膚の中に浸透すると、皮膚外層の保護膜の機能が損傷し、刺激に対して敏感になる。

【0004】

粒子状物質の中に含まれている多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）は、皮膚の毛嚢を介して皮膚の中に入ってメラニン細胞と色素斑を増加させ、コラーゲン合成の減少と分解を増加させてシワ生成および弾力低下を引き起こし、皮膚の老化を促進する。多環芳香族炭化水素は、細胞内に浸透することができ、細胞内に浸透したアリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）と結合して、核内に移動する。核内に移動したＡＨＲは、ＡＲＮＴ（ＡＨＲ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）と複合体ＡＨＲ／ＡＲＮＴを形成し、この複合体「ＡＨＲ／ＡＲＮＴ」は、ＤＮＡ上、ＡＨＲＥ（ＡＨＲ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）、ＤＲＥ（Ｄｉｏｘｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）、ＸＲＥ（Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）配列に結合し、活性酸素種（ＲＯＳ、ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ）を発生させるか、ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１などの酵素を介して毒性物質を発生させて細胞の損傷を誘導し、様々な炎症媒介因子、メラニン合成関連転写因子である小眼球症連関転写要素（Ｍｉｃｒｏｐｈｔｈａｌｍｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ；Ｍｉｔｆ）、シワ生成関連酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）の発現を増加させて、皮膚では、皮膚炎、色素過形成（シミ、ソバカスなど）、シワなどを引き起こす。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【文献】韓国登録特許第１０－２０６５１７１号明細書

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明者らは、身体の細胞が粒子状物質と接触する場合に引き起こされる細胞の損傷を防止することができる活性を有するペプチドを開発するために鋭意研究を重ねた。結果、本発明者らが開発したペプチドが、粒子状物質によって誘導されるＡＨＲの活性化を抑制し、且つＡＨＲの活性化によって誘導されるシトクロムＰ４５０の活性も抑制することで、細胞保護活性を有することを実験的に証明し、本発明を完成するに至った。

【0007】

したがって、本発明の目的は、粒子状物質によって誘導される細胞の損傷を効果的に防止する活性を有するペプチドを提供することである。

【0008】

本発明の他の目的は、上述の活性を有するペプチドを有効成分として含む細胞損傷防止用組成物を提供することである。

【0009】

本発明の他の目的は、上述の活性を有するペプチドを有効成分として含む皮膚細胞損傷防止用化粧料組成物を提供することである。

【0010】

本発明のさらに他の目的は、上述の活性を有するペプチドを有効成分として含む粒子状物質との接触によって引き起こされる疾患の治療または予防用薬学的組成物を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0011】

上記の目的を達成するために、
本発明の一側面は、配列番号１のアミノ酸配列からなる、粒子状物質による細胞損傷防止活性を有するペプチドを提供する。

【0012】

本発明の他の側面は、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による細胞損傷防止用組成物を提供する。

【0013】

本発明の他の側面は、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による皮膚細胞損傷防止用化粧料組成物を提供する。

【0014】

本発明のさらに他の側面は、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質によって引き起こされる疾患の治療または予防用薬学的組成物を提供する。

【0015】

以下、本発明を詳細に説明する。

【0016】

１．ペプチドおよび活性
本発明の一様態によると、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを提供する。

【0017】

本明細書の用語「ペプチド」は、ペプチド結合によってアミノ酸残基が互いに結合して形成された直鎖状の分子を意味する。

【0018】

本発明の配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドは、変形なく使用可能であるが、他方、前記ペプチドが有する本来の活性、例えば、粒子状物質による細胞の損傷を保護する活性に影響を及ぼさない範囲内で、アミノ酸残基の欠失、挿入、置換、またはこれらの組み合わせによって相違する配列を有するアミノ酸の変異体または断片であることができる。

【0019】

本発明のペプチドは、その活性を変化させない範囲内で、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、糖化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）などで変形されることができる。

【0020】

本発明のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドと実質的に同一のアミノ酸配列を含むペプチドおよびその変異体またはその活性断片を含む。前記実質的に同一のアミノ酸配列を含むペプチドは、前記配列番号１のアミノ酸配列とは、それぞれ７５％以上、例えば、８０％以上、９０％以上、９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチドを意味する。また、前記ペプチドには、標的化配列、タグ（ｔａｇ）、標識された残基、半減期またはペプチド安定性を増加させるための特定の目的で製造されたアミノ酸配列がさらに含まれることができる。

【0021】

本発明のペプチドは、アミノ酸配列の一部の部位を選定し、その活性を増加させるために、Ｎ－末端および／またはＣ－末端の変形が誘導されていてもよい。このようなＮ－末端および／またはＣ－末端の変形により、本発明のペプチドの安定性を著しく向上させることができ、例えば、ペプチドの生体内投与時に半減期を増加させることができる。前記用語ペプチドの「安定性」は、生体内タンパク質切断酵素の攻撃から本発明のペプチドを保護するインビボでの安定性だけでなく、貯蔵安定性（例えば、常温貯蔵安定性）も含む意味である。

【0022】

前記Ｎ－末端の変形は、ペプチドのＮ－末端に、アセチル基（ａｃｅｔｙｌ ｇｒｏｕｐ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（ｆｌｕｏｒｅｏｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ ｇｒｏｕｐ）、ホルミル基（ｆｏｒｍｙｌ ｇｒｏｕｐ）、パルミトイル基（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ｇｒｏｕｐ）、ミリスチル基（ｍｙｒｉｓｔｙｌ ｇｒｏｕｐ）、ステアリル基（ｓｔｅａｒｙｌ ｇｒｏｕｐ）およびポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ；ＰＥＧ）からなる群から選択された保護基が結合したものであることができる。

【0023】

前記Ｃ－末端の変形は、ペプチドのＣ－末端に、ヒドロキシ基（ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｇｒｏｕｐ、－ＯＨ）、アミノ基（ａｍｉｎｏ ｇｒｏｕｐ、－ＮＨ２）、アジド（ａｚｉｄｅ、－ＮＨＮＨ２）などが結合したものであることができるが、これに限定されるものではない。

【0024】

本発明のペプチドは、本発明が属する技術分野において周知の様々な方法で製造することができる。例えば、本発明のペプチドは、当業界において公知の化学的合成方法、特に、固相合成技術（ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－５４（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ．ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．：Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１（１９８４））または液相合成技術（ＵＳ登録特許第５，５１６，８９１号）によって製造されることができる。

【0025】

本発明のペプチドは、粒子状物質によって引き起こされる細胞の損傷を効果的に防止することができる。

【0026】

粒子状物質の中に含まれている多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）は、細胞内に浸透することができ、細胞内に浸透した多環芳香族炭化水素は、アリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）と結合し、核内に移動する。核内に移動したＡＨＲは、ＡＲＮＴ（ＡＨＲ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）と複合体ＡＨＲ／ＡＲＮＴを形成し、この複合体「ＡＨＲ／ＡＲＮＴ」は、ＤＮＡ上に存在するＡＨＲＥ（ＡＨＲ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）、ＤＲＥ（Ｄｉｏｘｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）、ＸＲＥ（Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）配列に結合し、活性酸素種（ＲＯＳ、ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ）を発生させるか、ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１などの酵素の発現または活性を増加させ、これにより毒性物質を発生させて細胞の損傷を誘導し、様々な炎症媒介因子の発現も増加させる。

【0027】

本発明のペプチドは、粒子状物質との接触によって細胞内で増加するＡＨＲ（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の核内移動（ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）およびこれによって増加するシトクロムＰ４５０活性を著しく抑制することで、粒子状物質によって発生する細胞の損傷を防止することができる。

【0028】

２．細胞損傷防止用組成物
本発明の他の様態によると、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による細胞損傷防止用組成物を提供する。

【0029】

一実施態様において、前記細胞損傷は、皮膚細胞、呼吸器細胞または角膜細胞の損傷であることができる。

【0030】

他の実施態様において、本発明のペプチドは、ＡＨＲ（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の活性化を抑制する活性を有することができる。前記ペプチドによるＡＨＲの活性化の抑制は、ＡＨＲの核内への移動の抑制であることができる。

【0031】

他の実施態様において、本発明のペプチドは、シトクロム（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ）Ｐ４５０の活性を抑制する活性を有することができる。前記ペプチドによるシトクロムＰ４５０の活性の抑制は、シトクロムＰ４５０の活性化の抑制または発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の抑制であることができる。

【0032】

他の実施態様において、前記粒子状物質は、多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）を含むことができる。

【0033】

本発明の他の様態によると、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質による皮膚細胞損傷防止用化粧料組成物を提供する。

【0034】

本発明において、粒子状物質による皮膚細胞の損傷は、例えば、皮膚老化、皮膚シワの増加、皮膚弾力の損傷、皮膚色の損傷、色素過形成、シミ、ソバカス、皮膚の乾燥、皮膚炎症、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または乾癬を含むことができる。

【0035】

前記化粧料組成物は、皮膚老化、皮膚シワの増加、皮膚弾力の損傷、皮膚色の損傷、色素過形成、シミ、ソバカス、皮膚の乾燥、皮膚炎症、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または乾癬の改善用途の組成物であることができる。

【0036】

本発明の組成物は、（ｉ）上述の本発明のペプチドの化粧品学的有効量（ｃｏｓｍｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）；および（ｉｉ）化粧品学的に許容される担体を含むことができる。

【0037】

前記用語「化粧品学的有効量」は、本発明の組成物が粒子状物質による皮膚細胞損傷防止効能を奏するのに十分な量を意味する。

【0038】

本発明の化粧料組成物は、当業界において通常製造される如何なる剤形にも製造可能であり、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、せっけん、界面活性剤－含有クレンジング、オイル、パウダーファンデーション、エマルジョンファンデーション、ワックスファンデーションおよびスプレーなどに剤形化されることができるが、これに限定されるものではない。より詳細には、柔軟化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、スプレーまたはパウダーの剤形に製造されることができる。

【0039】

本発明の化粧料組成物の剤形がペースト、クリームまたはゲルである場合には、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルクまたは酸化亜鉛などが用いられることができる。本発明の化粧料組成物の剤形がパウダーまたはスプレーである場合には、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケートまたはポリアミドパウダーが用いられることができ、特に、スプレーである場合には、さらに、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタンまたはジメチルエーテルのような推進薬を含むことができる。

【0040】

本発明の化粧料組成物の剤形が溶液またはエマルジョンである場合には、担体成分として、溶媒、溶解化剤または乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコールまたはソルビタンの脂肪酸エステルを用いることができる。

【0041】

本発明の化粧料組成物の剤形が懸濁液である場合には、担体成分として、水、エタノールまたはプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステルおよびポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天またはトラガントなどが用いられることができる。

【0042】

本発明の化粧料組成物の剤形が界面－活性剤含有クレンジングである場合には、担体成分として、脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体またはエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられることができる。

【0043】

本発明の化粧料組成物は、有効成分としてのペプチドと前記担体成分の他に、化粧料組成物に通常使用される成分を含むことができ、例えば、抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料および香料のような通常の補助剤を含むことができる。

【0044】

本発明の他の様態によると、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含む粒子状物質によって引き起こされる疾患の治療または予防用薬学的組成物を提供する。

【0045】

一実施態様において、本発明のペプチドは、アリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）の活性化を抑制する活性を有することができる。前記ペプチドによるＡＨＲの活性化の抑制は、ＡＨＲの核内への移動の抑制であることができる。

【0046】

他の実施態様において、本発明のペプチドは、シトクロム（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ）Ｐ４５０の活性を抑制する活性を有することができる。前記ペプチドによるシトクロムＰ４５０の活性の抑制は、シトクロムＰ４５０の活性化の抑制または発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）の抑制であることができる。

【0047】

他の実施態様において、前記粒子状物質は、多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）を含むことができる。

【0048】

前記用語「予防」は、粒子状物質によって引き起こされる疾患による症状またはその合併症による症状の発生の抑制を意味し、前記用語「治療」は、すでに発生した粒子状物質によって引き起こされる疾患またはこの疾患の合併症による症状の軽減または除去を意味する。

【0049】

前記粒子状物質によって引き起こされる疾患は、アトピー皮膚炎、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、ニキビ、皮膚乾燥症、乾癬；アレルギー性鼻炎、急性気管支炎、慢性気管支炎、肺気腫、肺機能減少、喘息、気管支拡張症、特発性肺線維症、慢性閉鎖性肺疾患（ＣＯＰＤ；ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、嚢胞性線維症、細気管支炎、急性上気道感染症、肺炎、副鼻腔炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭炎；眼球乾燥症、アレルギー性結膜炎、緑内障、白内障、黄斑変性、網膜出血、網膜剥離、網膜色素変性症、老人性黄斑変性、糖尿病性網膜症；ガン、免疫毒性、末梢神経系損傷、中枢神経系損傷、内分泌腺異常、生殖器官障害、乳児および幼児の発達障害、貧血、不整脈、心臓麻痺、狭心症、および心筋梗塞症からなる群から選択される疾患であることができるが、これに限定されない。

【0050】

本発明の薬学的組成物は、（ｉ）上述の本発明のペプチドの治療学的有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）；および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む。

【0051】

前記用語「治療学的有効量」は、本発明の組成物が、粒子状物質によって引き起こされる疾患の治療または予防効能を奏するのに十分な量を意味する。

【0052】

前記薬学的に許容される担体は、製剤時に通常用いられるものであり、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルジネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラルオイルなどを含むが、これに限定されるものではない。好適な薬剤学的に許容される担体および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ ｅｄ．，１９９５）に詳細に記載されている。

【0053】

本発明の薬学的組成物は、経口または非経口で投与することができ、非経口投与の場合には、静脈内注入、皮下注入、筋肉内注入、腹腔内注入、経皮投与などで投与することができる。

【0054】

本発明の薬学的組成物の好適な投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、飲食、投与時間、投与経路、排泄速度および反応感応性のような要因に応じて様々であり、普通、熟練された医師は、所望の治療または予防に効果的な投与量を容易に決定および処方することができる。

【0055】

本発明の薬学的組成物の１日投与量は、０．００１～１０，０００ｍｇ／ｋｇである。

【0056】

本発明の薬学的組成物は、当該発明が属する技術分野において通常の知識を有する者が容易に実施することができる方法によって、薬剤学的に許容される担体および／または賦形剤を用いて製剤化することで、単位容量の形態に製造されるかまたは多容量容器内に内入させて製造されることができる。ここで、剤形は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液または乳化液の形態であるか、エキス剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態であってもよく、分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。

【発明の効果】

【0057】

本発明のペプチドは、粒子状物質による細胞損傷防止活性が非常に優れており、粒子状物質から皮膚細胞、呼吸器細胞または角膜細胞の損傷を保護するための活性物質として使用可能されることができる。また、本発明のペプチドは、粒子状物質によって引き起こされる様々な疾患の治療剤としても開発されることができる。

【0058】

ただし、本発明の効果は、上記で言及されている効果に制限されず、言及されていないさらに他の効果は、下記の記載から当業者が明確に理解することができる。

【図面の簡単な説明】

【0059】

【図1】アリール炭化水素受容体（Ａｒｙｌ Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＡＨＲ）によって媒介されるシグナル伝逹メカニズムを示す模式図である。

【図2】ヒト角質形成細胞ＨａＣａＴで粒子状物質処理によって誘導されたＡＨＲの核内移動の増加が、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドの処理によって著しく減少することを示すウェスタンブロット実験の結果である。

【図3】ヒト角質形成細胞ＨａＣａＴで粒子状物質処理によって誘導されたシトクロムＰ４５０の活性増加が、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドの処理によって濃度依存的に減少することを示すＰ４５０活性測定実験の結果である。

【図4】ヒト肺胞上皮細胞Ａ５４９で粒子状物質処理によって誘導されたシトクロムＰ４５０の活性増加が、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドの処理によって濃度依存的に減少することを示すＰ４５０活性測定実験の結果である。

【発明を実施するための形態】

【0060】

以下、本出願を実施例によって詳細に説明する。ただし、下記の実施例は、本出願を具体的に例示するものであって、本出願の内容が下記の実施例によって限定されない。

【0061】

実施例
製造例１：ペプチドの製造
自動ペプチド合成機（Ｌｉｂｅｒｔｙ、ＣＥＭ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）を用いて、下記の表１に記載の配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドを合成し、Ｃ１８逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｕ－３０００、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）を用いて、これらの合成されたペプチドを純粋分離した。カラムは、Ｐｕｒｓｕｉｔ ＸＲｓ Ｃ１８（２５０＊４．６５ｍｍ１００Å、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いた。

【0062】

【表1】

【0063】

実験例１:ＡＨＲの核移動実験（ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）
粒子状物質に存在する多環芳香族炭化水素（ｐｏｌｙａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ、ＰＡＨｓ）は、ＡＨＲのリガンド（ｌｉｇａｎｄ）として作用し、ＰＡＨが細胞内に浸透してＡＨＲに結合する場合、ＡＨＲの核移動を促進する。合成したペプチドの粒子状物質による細胞損傷抑制効果を確認するために、細胞に粒子状物質を処理した後、リガンド－ＡＨＲ結合時に観察されるＡＨＲの核移動（ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）をペプチドが阻害するかを証明する実験を行った。

【0064】

５×１０^５細胞／ウェルの密度（ｄｅｎｓｉｔｙ）で６－ウェルプレートにヒト角質形成細胞（ｈｕｍａｎ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であるＨａＣａＴ細胞を接種した。一晩インキュベーションした後、無血清培地（ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）に交換した。角質形成細胞ＨａＣａＴに合成したペプチドを濃度別（２０μｍ、１００μｍ、２００μｍ）に１時間前処理した。次いで、５０μｇ／ｃｍ^２の都市粒子状物質（Ｕｒｂａｎ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｍａｔｔｅｒ、Ｓｉｇｍａ、ＮＩＳＴ１６４８Ａ）を１時間処理した。角質形成細胞を収集した後、細胞核抽出物を準備してウェスタンブロッティングを行った。ウェスタンブロッティングは、抗－ＡＨＲ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を使用して、当業界において公知のプロトコルにしたがって行った。

【0065】

実験結果、図２に図示されているウェスタンブロッティングの結果から分かるように、粒子状物質を処理していない対照群細胞（Ｃｏｎ）に比べて、粒子状物質を処理した細胞（ＮＣ）において、ＡＨＲの核移動が急激に増加したことを確認することができた。また、配列番号１のアミノ酸配列のペプチドを処理した細胞において、粒子状物質処理によって増加したＡＨＲの核移動の水準が著しく減少することを確認することができた。

【0066】

実験例２：シトクロムＰ４５０活性分析
粒子状物質に存在する多環芳香族炭化水素（ＰＡＨｓ）は、細胞内に浸透してＡＨＲに結合する場合、ＡＨＲの核移動を促進する。核内に移動したＡＨＲは、ＡＲＮＴ（ＡＨＲ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）と複合体ＡＨＲ／ＡＲＮＴを形成し、この複合体は、転写因子（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）として作用して、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰｓ）の発現を促進するものと知られている。合成したペプチドの粒子状物質による細胞損傷抑制効果を確認するために、細胞に粒子状物質を処理した後、シトクロムＰ４５０の活性をペプチドが阻害するかを確認する実験を行った。

【0067】

先ず、１×１０^４細胞／ウェルの密度（ｄｅｎｓｉｔｙ）で９６－ウェルプレートにヒト角質形成細胞（ｈｕｍａｎ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であるＨａＣａＴ細胞を接種した。一晩インキュベーションした後、無血清培地（ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）に交換した。角質形成細胞ＨａＣａＴに合成したペプチドを濃度別（２０μｍ、１００μｍ、２００μｍ）に１時間前処理した。次いで、５０μｇ／ｃｍ^２の都市粒子状物質（Ｕｒｂａｎ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｍａｔｔｅｒ、Ｓｉｇｍａ、ＮＩＳＴ１６４８Ａ）を２４時間処理した。角質形成細胞を収集した後、Ｐ４５０－Ｇｌｏ^ＴＭ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、シトクロムＰ４５０の活性を測定した。

【0068】

実験結果、図３に図示されているシトクロムＰ４５０の活性測定結果から分かるように、粒子状物質を処理していない対照群細胞（Ｃｏｎ）に比べて、粒子状物質を処理した細胞（ＮＣ）において、シトクロムＰ４５０の活性が急激に増加したことを確認することができた。また、配列番号１のアミノ酸配列のペプチドを処理した細胞において、粒子状物質処理によって増加したシトクロムＰ４５０の活性が減少することを確認することができた。また、粒子状物質処理によるシトクロムＰ４５０活性の増加は、ペプチドを処理した場合、処理したペプチドの濃度に依存的な方式で減少した。

【0069】

また、粒子状物質による呼吸器損傷をペプチドが抑制することができるか確認するために、ヒト肺胞上皮細胞（ｈｕｍａｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）であるＡ５４９細胞に対してもシトクロムＰ４５０の活性測定実験を行った。

【0070】

先ず、１．２×１０^４細胞／ウェルの密度（ｄｅｎｓｉｔｙ）で９６－ウェルプレートにヒト肺胞上皮細胞Ａ５４９細胞を接種した。一晩インキュベーションした後、無血清培地（ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）に交換した。肺胞上皮細胞Ａ５４９に合成したペプチドを濃度別（２０μｍ、１００μｍ、２００μｍ）に１時間前処理した。次いで、５０μｇ／ｃｍ^２の都市粒子状物質（Ｕｒｂａｎ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｍａｔｔｅｒ、Ｓｉｇｍａ、ＮＩＳＴ１６４８Ａ）を２４時間処理した。処理した細胞を収集した後、Ｐ４５０－Ｇｌｏ^ＴＭ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、シトクロムＰ４５０の活性を測定した。

【0071】

実験結果、図４に図示されているシトクロムＰ４５０の活性測定結果から分かるように、粒子状物質を処理していない対照群細胞（Ｃｏｎ）に比べて、粒子状物質を処理した細胞（ＮＣ）において、シトクロムＰ４５０の活性が急激に増加したことを確認することができ、配列番号１のアミノ酸配列のペプチドを処理した細胞において、粒子状物質処理によって増加したシトクロムＰ４５０の活性が減少することを確認することができた。また、粒子状物質処理によるシトクロムＰ４５０活性の増加は、ペプチドを処理した場合、処理したペプチドの濃度に依存的な方式で減少した。

【0072】

以上、本出願の代表的な実施例について例示的に説明しているが、本出願の範囲は、前記のような特定の実施例にのみ限定されず、当該分野において通常の知識を有する者であれば、本出願の請求の範囲に記載の範疇内で適切に変更が可能である。

【配列表フリーテキスト】

【0073】

配列番号１：Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｈｅ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

0007523689000001.app