特許 7525093 改変Ｈ因子結合タンパク質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-07-22

(45)【発行日】2024-07-30

(54)【発明の名称】改変Ｈ因子結合タンパク質

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/31 20060101AFI20240723BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240723BHJP

   A61K 39/095 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 47/62 20170101ALI20240723BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240723BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240723BHJP

   C07K 14/22 20060101ALI20240723BHJP

【ＦＩ】

C12N15/31 ZNA

A61K35/76

A61K39/095

A61K39/39

A61K47/62

A61K48/00

A61P31/04

C07K14/22

【請求項の数】 11

(21)【出願番号】P 2019511993

(86)(22)【出願日】2017-08-31

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-09-19

(86)【国際出願番号】 GB2017052535

(87)【国際公開番号】W WO2018042178

(87)【国際公開日】2018-03-08

【審査請求日】2020-08-28

【審判番号】

【審判請求日】2022-07-29

(31)【優先権主張番号】1614687.0

(32)【優先日】2016-08-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】516245900

【氏名又は名称】オックスフォード ユニバーシティ イノベーション リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＯＸＦＯＲＤ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＩＮＮＯＶＡＴＩＯＮ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】タン，クリストフ エム

【合議体】

【審判長】長井 啓子

【審判官】名和 大輔

【審判官】天野 貴子

(56)【参考文献】

【文献】特表２００９－５１７３７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５３７８８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１６／０８３５８３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，Ｖｏｌ．８，Ｉｓｓｕｅ１０，ｅ１０００２９８１

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N15/00-15/90

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

ＰｕｂＭｅｄ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号４５～７９のいずれかによる配列を含むＰｏｒＡループ、または１、２、３、４もしくは５つ以下のアミノ酸付加、欠失もしくは置換を有するその変異体から選択される外来ペプチドループの付加でさらに改変された、野生型ｆＨｂｐ、ｆＨｂｐの野生型淋菌オルソログ（Ｇｈｆｐ）、または配列番号１～１３の配列のいずれか１つと少なくとも７５％の同一性を有するその変異体を含む、改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）であって、
前記外来ペプチドループが８～２０アミノ酸長であり、前記外来ペプチドループが、配列番号１のアミノ酸残基番号４９～５４、８３～８８、１１４～１２４、１９９～２０６、２２７～２３３および２４０～２４６、またはそれらと同等の残基のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に挿入される、免疫原性を有する改変Ｈ因子結合タンパク質。

【請求項2】

前記改変ｆＨｂｐが、Ｈ因子を結合できないように、または少なくともＨ因子結合活性を低下させるように改変される、請求項１に記載の改変Ｈ因子結合タンパク質。

【請求項3】

前記改変ｆＨｂｐが２つ以上の外来ペプチドループを含むか、または
前記改変ｆＨｂｐが１～７個の外来ペプチドループを含む、請求項１～２のいずれか一項に記載の改変Ｈ因子結合タンパク質。

【請求項4】

前記改変ｆＨｂｐまたはその変異体が、少なくとも２つの位置において外来ペプチドループで改変される、請求項１～３のいずれか一項に記載の改変Ｈ因子結合タンパク質。

【請求項5】

前記改変ｆＨｂｐが、配列番号１～１３のいずれか１つの配列またはその変異体を含み、
少なくとも１つの外来ペプチドループが、配列番号１～１３のいずれかの１つの配列内の追加の挿入物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の改変Ｈ因子結合タンパク質。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか一項に記載の改変ｆＨｂｐをコードする核酸であって、任意で前記核酸がベクターであり、さらに任意でウイルスベクターである、核酸。

【請求項7】

請求項１～５のいずれか一項に記載の改変ｆＨｂｐ、または請求項６に記載の核酸を含む、組成物であって、
任意で、前記組成物が２つ以上の異なる改変ｆＨｂｐ分子を含む、および／または
前記組成物が、薬学的に許容される担体ならびに／もしくはアジュバントを含む、組成物。

【請求項8】

前記組成物が、少なくとも１つの他の予防または治療活性分子をさらに含み、任意で
前記少なくとも１つの他の予防または治療活性分子が、
一価タンパク質：莢膜多糖ワクチン；または
結合型ワクチンであって、外来ペプチドループを保持するｆＨｂｐ足場を含む抗原が、タンパク質担体分子として前記結合型ワクチンに組み込まれた、前記ワクチン
を含む、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

薬剤としての使用のための、請求項７または８に記載の組成物。

【請求項10】

対象の病原性感染またはコロニー形成の治療または予防での使用のための、請求項７または８に記載の組成物。

【請求項11】

請求項１～５のいずれか一項に記載の改変ｆＨｂｐ、請求項６に記載の核酸、または請求項７または８に記載の組成物と、少なくとも１つの他の予防または治療活性分子との組み合わせであって、
任意で少なくとも１つの他の予防または治療活性分子が、タンパク質：莢膜多糖ワクチンを含む、組み合わせ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）、および病原性感染またはコロニー形成に対する、例えば、髄膜炎菌または淋菌に対する免疫応答を誘発するその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

髄膜炎菌（Ｎｍ）は、依然として小児および若年層における敗血症および細菌性髄膜炎の主因である。疾患の発症が極めて早い場合があり、敗血症疾患の致死率は約１０％であり^１、生存者は、四肢喪失および神経学的欠損を含む重大な身体障害を患う恐れがある^１。したがって、予防的免疫付与は、髄膜炎菌感染から個人を保護する最善の方法である。細菌莢膜に基づくワクチンを利用できる^２が、現在ＵＫで症例の８０％超で生じる、地域特有の血清型Ｂ感染に利用できる部分的に有効なワクチンしか存在しない^３；血清型Ｂ莢膜Ｎｍの多糖は、神経組織のヒト糖タンパク質との構造的同一性を有するため、免疫原性が低く、ワクチンとして使用した場合に自己免疫を誘導する可能性があった^４。したがって、新規なワクチンを生成することが急務であり、この重要な目標を達成するために産学両方で懸命な努力がなされている。

【0003】

髄膜炎菌外膜小胞（ＯＭＶ）に対して誘発される免疫応答の主な標的はＰｏｒＡ^{１６、１７、１８}、髄膜炎菌の内在性外膜タンパク質（ＯＭＰ）^１９である。しかし、このタンパク質の配列は多様であり、特定の変異体の優勢は、地理的領域によって異なり、ＯＭＶワクチンは主としてＰｏｒＡ特異的である。ＰｏｒＡの変異体は、タンパク質の可変領域（ＶＲ）の配列により同定され、これはタンパク質の表面露出ループに位置しており、免疫応答の標的である^１７。ＰｏｒＡは、７つの細胞外ループ有する。第４ループは、可変領域２（ＶＲ２）であり、自然感染後およびＯＭＶでの免疫付与後ＰｏｒＡにより生じるほとんどの血清殺菌活性（ＳＢＡ）の標的である^{１６、１８}。ＳＢＡは、髄膜炎菌疾患に対する防御と相関していることが知られている。配列多様性にかかわらず、６つのＰｏｒＡタンパク質を含有するワクチンが、ＵＫ分離株の約７０％を占める（ｈｔｔｐ：／／ｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／ｎｅｓｓｅｒｉａ／ＰｏｒＡ／）。

【0004】

細菌ワクチンの開発の主な障害は、ＰｏｒＡなどの内在性ＯＭＰをその天然立体配座で大量に産生することが困難であることである。これは、ＯＭＰが膜を貫通する疎水性ドメインを含有し、可溶性組換えタンパク質として発現させると正しく折り畳まれないためである。ＳＢＡが、タンパク質の直鎖ではなく立体配座エピトープにより誘発されるため、正しい折り畳みは、ＰｏｒＡにとって必須である^２０。ＰｏｒＡペプチドをワクチンとして使用する以前の試みは、それらが、十分に免疫原性でなく、ＰｏｒＡの免疫原性部分をその正確な立体配座で提示しないため成功しなかった。結果的に、開発中のＰｏｒＡに基づくワクチンはＯＭＶのみであり、これは、幼児における有効性が限られており^２、反応原生であり^２１、規制問題をもたらすことが十分に定義されていない。免疫原性としてのＯＭＶは、整合性および毒性が製造過程で問題となり得るため、好ましくない。例えば、ＯＭＶは、毒性リポ多糖（ＬＰＳ）を含有し得る。

【0005】

髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）は、２つのβバレルからなる表面露出リポタンパク質である^５（図１Ａ）。ｆＨｂｐのＮ末端βバレルは、比較的開放的な構造を有し、Ｃ末端βバレルは、このバレルを形成する７つのβ鎖間の広範な水素結合により安定化される^５。

【0006】

重要なことに、ｆＨｂｐは、Ｐｆｉｚｅｒ、ＧＳＫなどの製薬会社が開発中の血清型Ｂ Ｎｍに対するワクチンにおいて重要な抗原であり、次世代ＯＭＶワクチンに含まれる^{６、７、８}。Ｐｆｉｚｅｒワクチンは、２つのｆＨｂｐからなり、ＧＳＫワクチンは、ＯＭＶを含む他の抗原のカクテルに単一ｆＨｂｐを有する。ｆＨｂｐは、マウスではなくヒトＨ因子（ｆＨ）^９、１０を結合し、補体系をダウンレギュレートする豊富な血漿タンパク質であり^１１、Ｎｍに対する免疫の重大な側面である^１２。ｆＨｂｐでの青年および成人の免疫付与によりＳＢＡが誘発される^１３。

【0007】

ｆＨｂｐは、その予想アミノ酸配列に基づき様々なスキームに分類されている。本願において、３つの変異体群（ｖ１、ｖ２およびｖ３^７）およびペプチド数（ｗｗｗ．ｍｌｓｔ．ｏｒｇ）が認識される。重要なことに、ｖ１ ｆＨｂｐに対して提起された血清は、ｖ２およびｖ３タンパク質を発現するＮｍに対してＳＢＡを媒介せず、逆もまた同様である。ＧＳＫワクチンは、単一ｖ１タンパク質（ｖ１．１）を含有し、Ｐｆｉｚｅｒ製剤は、ｖ１およびｖ３ ｆＨｂｐを含む^{１３、１４}。したがって、現在のワクチンは、ｖ２ ｆＨｂｐを含んでいないが、ＵＫにおける疾患の大部分は、現在この変異体群からのｆＨｂｐを発現する株により引き起こされている^３、１５。

【0008】

国際公開第２０１１０２４０７２号は、宿主動物への投与後、広域殺菌性抗髄膜炎菌抗体を誘発できる配列を有するように選択または遺伝子操作されたｆＨｂｐの使用について記載する特許出願である。この文書は、さらなる髄膜炎菌抗原が、ＮまたはＣ末端融合タンパク質の形態の改変ｆＨｂｐで提供され得ること教示している。しかし、このような提案により、多くの髄膜炎菌抗原の免疫原性部分を提示するタンパク質、例えば、ＰｏｒＡが、正確な立体配座で産生される可能性は低く、これらは十分に免疫原性ではないであろう。

【0009】

本発明の目的は、特に髄膜炎菌または淋菌の感染またはコロニー形成を予防または低減するための、病原性微生物に対するワクチン接種のための代替のおよび改善された免疫原性分子を提供することである。

【0010】

本発明の第１の態様によれば、異なる抗原からの少なくとも１つの外来ペプチドループの付加での改変により、分子足場として作用する、ｆＨｂｐまたはその変異体を含む改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）が提供される。

【0011】

免疫原性ペプチド、例えば、ＰｏｒＡからの免疫原性ペプチドは、分子足場として作用する、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）に導入できることが、本明細書で示された。ｆＨｂｐに導入されるペプチドは、免疫系に提示され、ＳＢＡなどの防御応答を誘発できる。有利には、ｆＨｂｐ分子は、エピトープの表示のため、特に、その天然立体配座での安定化および表示が困難なエピトープのためのペプチドループ、例えば、ＰｏｒＡなどの内在性ＯＭＰからのループを安定的に含むのに理想的な分子足場を提供する。これは、ｆＨｂｐおよび追加の抗原の単純なＮ－またはＣ末端融合では、いくつかの抗原の固有の安定性および溶解性の問題が解決されないであろうという、国際公開第２０１１０２４０７２号などの教示と対照をなす。特に、ＰｏｒＡなどの多くのＯＭＰは、その膜貫通ドメインが不溶性であるため発現が困難である。ＰｏｒＡは、鎖１と２（ループ１）、鎖７と８（ループ４）、鎖９と１０（ループ５）および鎖１１と１２（ループ７）の間に表面露出ループを有する、１６β鎖バレル構造を有し、最も有効な抗原であることが実証された。ｆＨｂｐは、２つのβバレルを含有し、したがって、ＯＭＰからのペプチドループ配列を、ｆＨｂｐのβ鎖間のループの先端に挿入して、内在性ＯＭＰからの細胞外ループフラグメントをその天然立体配座で提示し、免疫付与することができる。したがって、本発明の改変ｆＨｂｐ足場分子は、単一タンパク質が、２つの異なる抗原からの重要なエピトープを提示する、Ｎｍまたは淋菌を対象とした予防および治療ワクチンとして使用できる。

【0012】

一実施形態において、ｆＨｂｐは、髄膜炎菌ｆＨｂｐである。別の実施形態において、ｆＨｂｐは、淋菌ｆＨｂｐである。ｆＨｂｐは、変異体ｖ１、ｖ２およびｖ３のいずれか１つを含み得る。一実施形態において、ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ ｖ１を含み得る。別の実施形態において、ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ ｖ２を含み得る。別の実施形態において、ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ ｖ３を含み得る。

【0013】

一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ１は、変異体ｖ１．１、ｖ１．１３、ｖ１．１４、ｖ１．１５、ｖ１．４またはｖ１．５５であり得る。一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ１は、ｖ１．１でない場合がある。一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ１は、ｖ１．５５でない場合がある。一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ１は、ｖ１．１またはｖ１．５５でない場合がある。一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ２は、変異体ｖ２．１６、ｖ２．１９、ｖ２．２２またはｖ２．２５であり得る。一実施形態において、ｆＨｂｐ変異体ｖ３は、変異体ｖ３．４５であり得る。一実施形態において、ｆＨｂｐはｆＨｂｐ変異体ｖ１．４、ｖ２．２５またはｖ３．４５のいずれか１つを含む。

【0014】

ｆＨｂｐの変異体は、ｆＨｂｐのオルソログを含み得る。例えば、ｆＨｂｐの変異体は、Ｇｈｆｐ、ｆＨｂｐの淋菌ホモログを含み得る。Ｇｈｆｐは非機能性であり、Ｖ３ ｆＨｂｐに密に関連している（＞９５％のａａ同一性、Ｈ因子との解離定数ＫＤ＞１００μＭ）。

【0015】

一実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱ ＴＥＱＩＱＤＳＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＮＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰ ＤＧＫＲＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＧＫ ＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶ ＫＴＶＮＧＩＲＨＩＧ ＬＡＡＫＱ（配列番号１、ｆＨｂｐＶ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0016】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱ ＴＥＱＶＱＤＳＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＳＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＤＬＡＡＳＤＩＫＰ ＤＫＫＲＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱ ＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶ ＥＴＡＮＧＩＲＨＩＧ ＬＡＡＫＱ（配列番号２、ｆＨｂｐＶ１．４ ＧＩ：９８９５５７２３０）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0017】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＫＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱ ＴＥＱＶＱＤＳＥＤＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＫＧＧＳＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＥＬＡＴＡＹＩＫＰ ＤＥＫＲＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱ ＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶ ＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧ ＬＡＡＫＱ（配列番号３、ｆＨｂｐＶ１．１３ ＧＩ：７５２７７４５３３）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0018】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱ ＴＥＱＥＱＤＰＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＲＦＫ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＥＬＡＴＡＹＩＫＰ ＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱ ＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶ ＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧ ＬＡＡＫＱ（配列番号４、ｆＨｂｐＶ１．１４ ＧＩ：６３００５７３７６）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0019】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧ ＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧ ＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤ ＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴ ＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴ ＬＴＬＳＡＱＧＡＥＲ ＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳ ＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫ ＩＳＲＦＤＦＩＲＱＩ ＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥ ＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳ ＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥ ＱＶＱＤＳＥＨＳＧＫ ＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧ ＤＩＶＧＥＨＴＳＦＧ ＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹ ＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡ ＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦ ＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥ ＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤ ＬＡＡＡＤＩＫＰＤＥ ＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶ ＬＹＮＱＡＥＫＧＳＹ ＳＬＧＩＦＧＧＱＡＱ ＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴ ＡＮＧＩＲＨＩＧＬＡ ＡＫＱ（配列番号５、ｆＨｂｐ Ｖ１．１５ ＧＩ：５０４３９４４６２）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0020】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧ ＧＧＶＴＡＤＩＧＴＧ ＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤ ＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴ ＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴ ＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫ ＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴ ＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲ ＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤ ＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥ ＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡ ＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱ ＤＰＥＨＳＥＫＭＶＡ ＫＲＲＦＲＩＧＤＩＡ ＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰ ＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴ ＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫ ＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫ ＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫ ＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶ ＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨ ＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮ ＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧ ＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡ ＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧ ＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号６、ｆＨｂｐ Ｖ１．５５ ＧＩ：４０３５３４８１）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0021】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＤＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号７、ｆＨｂｐ Ｖ２．１６ ＧＩ：４８８１５５５１１）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0022】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号８、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0023】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤ ＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号９、ｆＨｂｐ Ｖ２．２２ ＧＩ：１２０８６５９２２）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0024】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＴＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＴＩＴ ＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＤＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤ ＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号１０、ｆＨｂｐ ２．２５ ＧＩ：４８８１５８７１２）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0025】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳ ＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨ ＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫ ＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬ ＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧ ＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱ ＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧ ＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧ ＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡ ＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬ ＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡ ＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳ ＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹ ＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬ ＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩ ＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥ ＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫ Ｑ（配列番号１１、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0026】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩ ＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡ ＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧ ＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫ ＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤ ＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱ ＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱ ＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶ ＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰ ＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲ ＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥ ＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧ ＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳ ＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹ ＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨ ＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥ ＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬ ＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩ ＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥ ＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧ ＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥ ＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号１２、ｆＨｂｐ Ｖ３．４７ ＧＩ：２８４４６６８９７）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0027】

別の実施形態において、少なくとも１つの外来ペプチドループでさらに改変されるべきＧｈｆｐは、ＭＴＲＳＫＰＶＮＲＴ ＴＦＣＣＬＳＬＴＡＧ ＰＤＳＤＲＬＱＱＲＲ ＧＧＧＧＧＶＡＡＤＩ ＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡ ＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫ ＳＬＴＬＥＡＳＩＰＱ ＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧ ＡＥＫＴＦＫＡＧＧＫ ＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫ ＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶ ＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩ ＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹ ＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬ ＲＩＥＫＩＮＮＰＤＫ ＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦ ＬＶＳＤＬＧＧＥＨＴ ＡＦＮＱＬＰＤＧＫＡ ＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤ ＤＡＤＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫ ＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮ ＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡ ＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧ ＤＴＲＹＧＧＥＥＫＧ ＴＹＲＬＡＬＦＧＤＲ ＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶ ＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧ ＩＡＤＫＱ（配列番号１３、ＧＨＦＰ）の配列を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0028】

ｆＨｂｐの変異体は、改変ｆＨｂｐに提供される外来ペプチドル－プに加えて、野生型ｆＨｂｐに対して、付加、欠失または置換を含む、１つ以上のアミノ酸残基の突然変異を含み得る。例えば、ｆＨｂｐは、外来ペプチドループが提供される足場として作用し得、野生型に対する変異体は、外来ペプチドループの付着点の外側の領域の足場フレームワークにおけるアミノ酸突然変異を含み得る。野生型ｆＨｂｐについての言及は、本明細書で考察されるｆＨｂｐの変異体のいずれか１つ、例えば、配列番号１～１３のいずれか１つを指し得る。

【0029】

ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質のアミノ酸と比較して、少なくとも１つのアミノ酸変化を含み得る。ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質と比較して１つ以下のアミノ酸変化を含み得る。ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質と比較して３つ以下のアミノ酸変化を含み得る。ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質と比較して４つ以下のアミノ酸変化を含み得る。ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質と比較して５つ以下のアミノ酸変化を含み得る。ｆＨｂｐの変異体は、野生型タンパク質と比較して６つ以下のアミノ酸変化を含み得る。一実施形態において、野生型タンパク質と比較して６つのアミノ酸突然変異を含む、ｆＨｂｐの変異体が提供される。

【0030】

アミノ酸置換は、保存的置換であり得る。例えば、突然変異残基は、野生型置換残基と実質的に同様の特性を含み得る。例えば、置換残基は、野生型置換残基と実質的に同様または同等の電荷または疎水性を含み得る。例えば、置換残基は、野生型置換残基と実質的に同様の分子量または立体的嵩を含み得る。

【0031】

一実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも７５％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも８０％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも８５％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも９０％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも９５％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも９８％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも９９％の同一性を有し得る。別の実施形態において、変異体ｆＨｂｐは、野生型と少なくとも９９．５％の同一性を有し得る。上記のパーセンテージの変化は、外来ペプチドループの付加に伴うパーセンテージ同一性の変化を含むことを意図するものではなく（すなわち、それが、野生型に対するｆＨｂｐの構成要素単独でのパーセンテージ同一性である）、他のタンパク質からのループが挿入されるサイトでのｆＨｂｐ配列の欠失を含まない。

【0032】

改変ｆＨｂｐは、Ｈ因子を結合できないように、または少なくともＨ因子結合活性を低下させるように改変され得る。改変ｆＨｂｐは、野生型ｆＨｂｐの機能と比較して非機能性であり得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、野生型タンパク質と比較してＫＤ＞２桁でＣＦＨを結合する能力が低下している。非機能性ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ配列の突然変異により提供され得る。一実施形態において、非機能性ｆＨｂｐは、Ｈ因子の結合サイトを妨害する外来ペプチドループの１つ以上により提供され得る。

【0033】

アミノ酸残基の突然変異は、改変ｆＨｂｐの補体Ｈ因子との結合を妨害または低減し得る。別の実施形態において、アミノ酸残基の突然変異は、ｆＨｂｐの機能に実質的に影響を及ぼさないであろう。一実施形態において、ｆＨｂｐまたはその変異体におけるアミノ酸残基の突然変異は、ｖ１．１ ｆＨｂｐの８５位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、２０４位、２０６位、２１１位、２１２位、２１３位、２２２位、２２５位、２２７位、２３１位、および２５２位、または他のｆＨｂｐの対応する位置のアミノ酸からなる群から選択され得る。

【0034】

一実施形態において、アミノ酸残基の突然変異は、野生型残基の代わりにアラニンへの置換を含み得るか、またはこれからなり得る。一実施形態において、アミノ酸残基の変化は、野生型残基の代わりに任意の他のアミノ酸への置換を含み得るか、またはこれからなり得る。

【0035】

有利には、非機能性（すなわち、Ｈ因子をまったくまたはほぼ結合しない）ｆＨｂｐを提供することにより、Ｈ因子の動員のワクチンの成功に対する何らかの悪影響を排除または低減できる。

【0036】

一実施形態において、アミノ酸残基の突然変異は、特に、改変ｆＨｂｐの安定性を高め得、ｆＨｂｐ Ｖ２が提供される一実施形態において、ｆＨｂｐ Ｖ２は、ｆＨｂｐ Ｖ２配列の突然変異により安定化され得る。Ｖ２の安定のための突然変異の詳細は、参照により本明細書に援用される、国際公開第２０１４０３０００３号に見出され得る。例えば、安定化のためのアミノ酸置換は、ｆＨｂｐ Ｖ２の３５位、３６位、４２位、４６位、１０７位、１１２位、１１４位、１３７位および１３８位のアミノ酸の１つ以上でのアミノ酸置換であり得る。安定化のための置換は、Ｓｅｒ３５、Ｌｅｕ３６、Ａｓｐ４２、Ｇｌｕ４３、Ａｒｇ４６、Ａｓｐ１０７、Ｖａｌ１１２、Ｌｅｕ１１４、Ｓｅｒ１３７およびＧｌｙ１３８の１つ以上での置換であり得る。

【0037】

一実施形態において、外来ペプチドループは免疫原性である。外来ペプチドループは、外膜／表面露出タンパク質に由来し得る。

【0038】

外来ペプチドループは、原核生物起源であり得る。外来ペプチドループは、病原体の外膜タンパク質（ＯＭＰ）などの細菌のタンパク質に由来し得る。ＯＭＰは、内在性ＯＭＰまたはリポタンパク質であり得る。外来ペプチドループは、髄膜炎菌外膜タンパク質などの髄膜炎菌タンパク質に由来し得る。外来ペプチドループは、淋菌などの別の病原体の外膜タンパク質に由来し得る。

【0039】

外来ペプチドループは、膜透過βバレルタンパク質のフラグメントを含み得る。外来ペプチドループは、βバレルポリンタンパク質のフラグメントを含み得る。外来ペプチドループは、ＰｏｒＡのフラグメントを含み得る。別の実施形態において、外来ペプチドループは、ＦｅｔＡのフラグメントを含み得る。

【0040】

ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、１６アミノ酸長であり得る。一実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、８～２０アミノ酸長であり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、８～１６アミノ酸長であり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、１０～１６アミノ酸長であり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、１２～１６アミノ酸長であり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、１４～１８アミノ酸長であり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、免疫原性エピトープを提供するのに十分な任意の長さであり得る。別の実施形態において、ＰｏｒＡフラグメントなどの外来ペプチドループは、野生型のフラグメントに対して、免疫原性エピトープを提供し、天然立体配座を維持するのに十分な任意の長さであり得る。

【0041】

外来ペプチドループは、ＰｏｒＡループ１～７のいずれか１つまたはこれらのフラグメント；および／またはこれらの組み合わせから選択され得る。外来ペプチドループは、ループ１（β鎖１と２の間）、ループ４（β鎖７と８の間）、ループ５（β鎖９と１０の間）およびループ７（β鎖１１と１２の間）のＰｏｒＡループのいずれか１つ；またはこれらのフラグメント；および／またはこれらの組み合わせから選択され得る。

【0042】

外来ペプチドループは、ＰｏｒＡループ１（β鎖１と２の間）；ループ４（βバレル７と８の間）；およびループ５（β鎖９と１０の間）；またはこれらのフラグメント；および／またはこれらの組み合わせから選択される任意の１つのペプチドを含み得る。

【0043】

外来ペプチドループは、ＰｏｒＡループ１（βバレル１と２の間）またはそのフラグメントを含み得る。外来ペプチドループはＰｏｒＡループ４（β鎖７と８の間）またはそのフラグメントを含み得る。外来ペプチドループはＰｏｒＡループ５（β鎖９と１０の間）またはそのフラグメントを含み得る。

【0044】

当業者は、ＰｏｒＡループの変異体配列が、野生型に対するわずかな突然変異で提供され得、エピトープとして依然として機能し得ることを理解するであろう。したがって、外来ペプチドループは、ＰｏｒＡループ変異体を含み得る。変異体は、野生型配列に対して１つ以上のアミノ酸付加、欠失または置換を含み得る。別の実施形態において、変異体は、野生型配列に対して１つ以下のアミノ酸付加、欠失または置換を含み得る。別の実施形態において、変異体は、野生型配列に対して２、３、４または５つ以下のアミノ酸付加、欠失または置換を含み得る。置換は保存的置換であり得る。例えば、実質的に同様の特性、例えば、電荷、疎水性、立体的嵩または分子量を有する代替のアミノ酸残基を提供する。変異体は、野生型ＰｏｒＡループ配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。別の実施形態において、変異体は、野生型ＰｏｒＡループ配列と少なくとも９０％、９５％、９８％、９９％または９９．５％の配列同一性を有する配列を含み得る。

【0045】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、２個以上の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、３個以上の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、１～７個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、１～５個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、１～３個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、２～７個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、３～７個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、２～５個の外来ペプチドループを含み得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、３～５個の外来ペプチドループを含み得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも１つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも２つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも３つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも４つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも５つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも６つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。改変ｆＨｂｐまたはその変異体は、少なくとも７つの位置において外来ペプチドループで改変され得る。

【0046】

ペプチドループは、Ｈ因子結合タンパク質の２つのβシート間に（例えば、ｆＨｂｐを足場として使用して）提供され得る。ペプチドループは、ＰｏｒＡループなどの外来ペプチドループがｖ１．１ ｆＨｂｐのアミノ酸４９～５４、８３～８８、１１４～１２４、１９９～２０６、２２７～２３３および２４０～２４６の間（範囲は、ループのすべての残基を含む）に挿入され得る位置または他のｆＨｂｐの対応する位置から選択されるアミノ酸位置の１つ以上で、ｆＨｂｐまたはその変異体に挿入され得る。

【0047】

少なくとも１つの外来ペプチドループは、ＮまたはＣ末端融合として提供されない場合がある。

【0048】

外来ペプチドループが挿入され得るｆＨｂｐの配列は、以下のｆＨｂｐ Ｖ１．１の一次アミノ酸配列に関連して下線が引かれたこれらの位置のいずれかであり得る。代替の変異体ｆＨＢＰを使用する一実施形態において、挿入サイトは、等価な位置であり得る。

【0049】

ｆＨｂｐの１位（ｐ１）、残基８３～８８
Ｐ２、残基１９９～２０６
Ｐ３、残基２２７～２３３
Ｐ４、残基４９～５４
Ｐ５、残基１１４～１２４
Ｐ７、残基２４０～２４６

【化1】

【0050】

一実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、ｆＨｂｐの１位（Ｐ１）、残基８３～８８（配列ＥＶＤＧＱＬ（配列番号１５））であり得る。別の実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、Ｐ２位、残基１９９～２０６（配列ＫＰＤＧＫＲＨＡ（配列番号１６））であり得る。別の実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、Ｐ３位、残基２２７～２３３（配列ＦＧＧＫＡＱＥ（配列番号１７））であり得る。別の実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、Ｐ４位、残基４９～５４（配列ＡＡＱＧＡＥ（配列番号１８））であり得る。別の実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、Ｐ５位、残基１１４～１２４（配列ＩＱＤＳＥＨＳＧＫＭ（配列番号１９））であり得る。別の実施形態において、外来ペプチドループの挿入サイトは、Ｐ７位、残基２４０～２４６（配列ＫＴＶＮＧＩ（配列番号２０））であり得る。

【0051】

任意の所与の１位～７位の外来ペプチドループの挿入サイトは、ｆＨｂｐの１位～７位で同定された残基のいずれかの間であり得る。あるいは、任意の所与の１位～７位の外来ペプチドループの挿入サイトは、ｆＨｂｐの１位～７位で同定された最初の残基の前または最後の残基の後であり得る。例えば、外来ペプチドループが、４位で挿入される場合、挿入は、＊ＡＡＱＧＡＥ（配列番号２１）、Ａ＊ＡＱＧＡＥ（配列番号２２）、ＡＡ＊ＱＧＡＥ（配列番号２３）、ＡＡＱ＊ＧＡＥ（配列番号２４）、ＡＡＱＧ＊ＡＥ（配列番号２５）、ＡＡＱＧＡ＊Ｅ（配列番号２６）またはＡＡＱＧＡＥ＊（配列番号２７）であり得、＊は挿入サイトを示す。

【0052】

別の実施形態において、当業者は、挿入サイトの領域の１～５個の残基が、ｆＨｂｐ構造に顕著な影響を与えずにｆＨｂｐから除去され得る（例えば、ループで置き換えられ得る）ように、外来ペプチドループの挿入サイトは可変的であり得ることを理解するであろう。一実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の１個以上は、外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。代替実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の２、３、４、５個以上は、外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。別の実施形態において、挿入サイトの領域の１～３個の残基が、ｆＨｂｐ構造に顕著な影響を与えずにｆＨｂｐから除去され得る（例えば、ループに置き換えられ得る）ように、外来ペプチドループの挿入サイトは可変的であり得る。別の実施形態において、挿入サイトの領域の１または２個の残基が、ｆＨｂｐ構造に顕著な影響を与えずにｆＨｂｐから除去され得る（例えば、ループで置き換えられ得る）ように、外来ペプチドループの挿入サイトは可変的であり得る。別の実施形態において、挿入サイトの領域の１個の残基が、ｆＨｂｐ構造に顕著な影響を与えずにｆＨｂｐから除去され得る（例えば、ループで置き換えられ得る）ように、外来ペプチドループの挿入サイトは可変的であり得る。例えば、挿入サイトが、ループの一方の端部でアミノ酸残基８６であり、ループの他方の端部で残基８７である場合、変異体は、言及された挿入サイトの領域での５、４、３、２、または１個の残基とループとの置き換えを含み得る。代替実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の６個以上は、外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。代替実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の７個以上は（該当する場合）外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。代替実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の８個以上は（該当する場合）外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。代替実施形態において、同定された位置のアミノ酸残基の９個以上は（該当する場合）外来ペプチドループで置き換えられる／置換される。挿入位置１～７のいずれかの全アミノ酸残基は、外来ペプチドループで置換され得る。

【0053】

例えば、外来ペプチドループが、４位で挿入され、１個以上の残基を置換する場合、挿入は、Ａ＊ＱＧＡＥ（配列番号２８）、ＡＡ＊ＧＡＥ（配列番号２９）、ＡＡ＊ＡＥ（配列番号： ３０）、ＡＡ＊Ｅ（配列番号３１）、ＡＡ＊、Ａ＊ＧＡＥ（配列番号３２）、Ａ＊ＡＥ（配列番号３３）、ＡＡ＊Ｅ（配列番号３４）、Ａ＊Ｅ、Ａ＊、 ＊ＡＱＧＡＥ（配列番号３５）、＊ＱＧＡＥ（配列番号３６）、＊ＧＡＥ（配列番号３７）、＊ＡＥ、＊Ｅ、ＡＡＱ＊ＡＥ（配列番号３８）、ＡＡＱ＊Ｅ（配列番号３９）、ＡＡＱ＊（配列番号４０）、ＡＡＱＧ＊Ｅ（配列番号４１）、ＡＡＱＧ＊（配列番号４２）、ＡＡＱＧＡ＊（配列番号４３）であり得、＊は、挿入サイトを示し、１個以上の残基が、元の配列から除去される。

【0054】

当業者は、挿入サイトおよび／または外来ペプチドループでの置換の等価な組み合わせが、別の配列の他の同定された挿入位置１～７でなされ得ることを理解するであろう。

【0055】

一実施形態において、挿入サイトの領域は、任意の１位～７位の上流または下流に±５残基移動し得る。あるいは、挿入サイトの領域は、任意の１位～７位の上流または下流に±４残基移動し得る。あるいは、挿入サイトの領域は、任意の１位～７位の上流または下流に±３残基移動し得る。あるいは、挿入サイトの領域は、任意の１位～７位の上流または下流に±２残基移動し得る。あるいは、挿入サイトの領域は、任意の１位～７位の上流または下流に±１残基移動し得る。

【0056】

さらにまたはあるいは、ペプチドループは、ｆＨｂｐ：ＣＦＨの相互作用を立体的に妨害する位置に提供され得る。これらは、以下のＶ１の一次配列に下線が引かれた、残基１１４～１２４、１９９～２０６または２４０～２４６（例えば、２位、５位および７位）の間の任意の１つ以上のサイトに挿入される外来ペプチドループを含む：

【化2】

【0057】

本発明の一実施形態において、改変ｆＨｂｐは免疫原性である。改変ｆＨｂｐは組換えタンパク質であり得る。改変ｆＨｂｐは、組換え融合タンパク質などの融合タンパク質であり得る。改変ｆＨｂｐは、単離された改変ｆＨｂｐ分子であり得る。本発明の改変ｆＨｂｐ分子は、単一タンパク質多価ワクチンとして示され得る。改変ｆＨｂｐはＯＭＶワクチンに含まれ得る。

【0058】

１超の外来ペプチドループがｆＨｂｐまたはその変異体に挿入される実施形態において、外来ペプチドループが同じ、例えば、同じ配列、または実質的に同様であってよい。例えば、ＰｏｒＡエピトープなどのいくつかのエピトープは、ｆＨｂｐ上に個々に表示された場合、十分な機能応答を誘発できない。この場合、本発明を使用して、同じ改変ｆＨｂｐ分子上の複数のサイトに同じエピトープを提供することができ、それにより、エピトープの免疫原性認識が向上する。

【0059】

あるいは、外来ペプチドループは互いに対して異なり得る。例えば、外来ペプチドループは、ＰｏｒＡなどの単一タンパク質に由来する場合、各外来ペプチドループは、ＰｏｒＡなどのタンパク質の別個の領域に由来し得る。一実施形態において、各外来ペプチドループは、ＰｏｒＡなどのタンパク質の重複する領域および別個の領域に由来し得る。

【0060】

１超の外来ペプチドループが、ｆＨｂｐまたはその変異体に挿入される実施形態において、外来ペプチドループは様々な種または株に由来し得る。例えば、多価ワクチンが様々な生物を含む複数の異なる抗原に所望される場合である。

【0061】

ＰｏｒＡペプチドループ配列は、表１に示される配列のいずれか（例えば、配列番号４５～７９のいずれか）から選択され得る。表１の各ＰｏｒＡ配列の組み合わせは、本明細書に記載の挿入サイトＰ１～Ｐ７のいずれかに提供され得る（１サイトあたり１ループ）。さらにまたはあるいは、表１の同じＰｏｒＡ配列の２つ以上は、本明細書に記載の挿入サイトＰ１～Ｐ７のいずれかに提供され得る（１サイトあたり１ループ）。

【0062】

【表1】

【0063】

当業者は、１つまたは２つまたはそれ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を伴う変異体が、免疫原性機能を実質的に除去せずに表１のＰｏｒＡ配列のために提供され得ることを理解するであろう。置換は、例えば、同様のＭＷ、電荷、疎水性もしくは部分を有する同様のアミノ酸残基、または合成類似体に対する置換であり得る。当業者は、変異体が表１のＰｏｒＡ配列のトランケーションであり得、トランケートされた変異体は、認識可能なエピトープを形成するのに十分なアミノ酸残基を提供することをさらに理解するであろう。一実施形態において、ＰｏｒＡ配列は、表１の配列のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有する。別の実施形態において、ＰｏｒＡ配列は、表１の配列のいずれか１つと少なくとも８５％の同一性を有する。別の実施形態において、ＰｏｒＡ配列は、表１の配列のいずれか１つと少なくとも９０％の同一性を有する。別の実施形態において、ＰｏｒＡ配列は、表１の配列のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有する。別の実施形態において、ＰｏｒＡ配列は、表１の配列のいずれか１つと少なくとも９８％の同一性を有する。

【0064】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化3】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0065】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化4】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0066】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化5】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0067】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化6】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0068】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化7】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0069】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化8】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0070】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化9】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0071】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化10】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0072】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化11】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0073】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化12】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0074】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化13】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0075】

一実施形態において、外来ペプチドループでさらに改変されるべきｆＨｂｐは、

【化14】

の配列を含み得るか、またはこれからなり得、表１の任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループの配列は、枠で強調された任意のアミノ酸またはアミノ酸の群に置き換わり得る。

【0076】

改変ｆＨｂｐは、配列番号９２～１０９のいずれか１つの配列を含み得る。

【0077】

改変ｆＨｂｐは、配列番号９２～１０９の配列を含み得、そこで配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＶＲ２ループ配列で置き換えられる。

【0078】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＹＹＴＫＤＴ ＮＮＮＬＴＬＶＰＱＬ ＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶ ＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡ ＦＱＴＥＱＩＱＤＳＥ ＨＳＧＫＭＶＡＫＲＱ ＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨ ＴＳＦＤＫＬＰＥＧＧ ＲＡＴＹＲＧＴＡＦＧ ＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹ ＴＩＤＦＡＡＫＱＧＮ ＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥ ＬＮＶＤＬＡＡＡＤＩ ＫＰＤＧＫＲＨＡＶＩ ＳＧＳＶＬＹＮＱＡＥ ＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧ ＧＫＡＱＥＶＡＧＳＡ ＥＶＫＴＶＮＧＩＲＨ ＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号９２、ｆＨｂｐ Ｖ１．１、ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ１のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0079】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＹＹＴＫＤＴＮＮ ＮＬＴＬＶＰＱＴＩＴ ＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ （配列番号９３、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５、ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ１のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0080】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＹＹＴＫＤ ＴＮＮＮＬＴＬＶＰＱ ＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱ ＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶ ＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰ ＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲ ＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥ ＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧ ＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳ ＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹ ＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨ ＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥ ＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬ ＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩ ＬＧＤＴＲＹＧＧＥＥ ＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧ ＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号９４、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ１のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0081】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱ ＴＥＱＩＱＤＳＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＮＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰ ＤＹＹＴＫＤＴＮＮＮ ＬＴＬＶＰＫＲＨＡＶ ＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡ ＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦ ＧＧＫＡＱＥＶＡＧＳ ＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲ ＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号９５、ｆＨｂｐ Ｖ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ２のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0082】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳ ＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨ ＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫ ＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬ ＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧ ＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱ ＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧ ＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧ ＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡ ＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬ ＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡ ＳＡＥＬＫＡＤＹＹＴ ＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶ ＰＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号９６、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ２のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0083】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬ ＴＬＶＰＫＳＨＡＶＩ ＬＧＤＴＲＹＧＧＥＥ ＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧ ＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号９７、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ２のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0084】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱ ＴＥＱＩＱＤＳＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＮＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰ ＤＧＫＲＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＹＹ ＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬ ＶＰＫＡＱＥＶＡＧＳ ＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲ ＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号９８、ｆＨｂｐ Ｖ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ３のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0085】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳ ＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨ ＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫ ＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬ ＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧ ＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱ ＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧ ＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧ ＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡ ＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬ ＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡ ＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳ ＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹ ＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬ ＡＬＦＧＹＹＴＫＤＴ ＮＮＮＬＴＬＶＰＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号９９、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ３のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0086】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＹＹＴ ＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶ ＰＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号１００、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ３のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0087】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＹＹＴＫＤＴＮＮＮ ＬＴＬＶＰＡＥＫＴＹ ＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫ ＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤ ＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱ ＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱ ＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴ ＡＦＱＴＥＱＩＱＤＳ ＥＨＳＧＫＭＶＡＫＲ ＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥ ＨＴＳＦＤＫＬＰＥＧ ＧＲＡＴＹＲＧＴＡＦ ＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴ ＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧ ＮＧＫＩＥＨＬＫＳＰ ＥＬＮＶＤＬＡＡＡＤ ＩＫＰＤＧＫＲＨＡＶ ＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡ ＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦ ＧＧＫＡＱＥＶＡＧＳ ＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲ ＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号１０１、ｆＨｂｐ Ｖ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ４のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0088】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＹＹＴＫＤ ＴＮＮＮＬＴＬＶＰＡ ＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤ ＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱ ＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴ ＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号１０２、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ４のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0089】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＹＹＴＫＤＴＮＮＮ ＬＴＬＶＰＡＥＫＴＹ ＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫ ＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤ ＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱ ＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱ ＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶ ＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰ ＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲ ＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥ ＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧ ＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳ ＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹ ＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨ ＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥ ＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬ ＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩ ＬＧＤＴＲＹＧＧＥＥ ＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧ ＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号１０３、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ４のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0090】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱ ＴＥＱＩＱＤＳＹＹＴ ＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶ ＰＨＳＧＫＭＶＡＫＲ ＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥ ＨＴＳＦＤＫＬＰＥＧ ＧＲＡＴＹＲＧＴＡＦ ＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴ ＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧ ＮＧＫＩＥＨＬＫＳＰ ＥＬＮＶＤＬＡＡＡＤ ＩＫＰＤＧＫＲＨＡＶ ＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡ ＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦ ＧＧＫＡＱＥＶＡＧＳ ＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲ ＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号１０４、ｆＨｂｐ Ｖ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ５のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0091】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳ ＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨ ＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫ ＩＮＮＰＹＹＴＫＤＴ ＮＮＮＬＴＬＶＰＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号１０５、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ５のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0092】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＹＹＴ ＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶ ＰＫＩＤＳＬＩＮＱＲ ＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥ ＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧ ＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳ ＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹ ＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨ ＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥ ＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬ ＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩ ＬＧＤＴＲＹＧＧＥＥ ＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧ ＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡ ＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号１０６、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ５のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0093】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、配列ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫ ＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱ ＴＥＱＩＱＤＳＥＨＳ ＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲ ＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳ ＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡ ＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤ ＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩ ＤＦＡＡＫＱＧＮＧＫ ＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮ ＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰ ＤＧＫＲＨＡＶＩＳＧ ＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧ ＳＹＳＬＧＩＦＧＧＫ ＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶ ＫＴＶＹＹＴＫＤＴＮ ＮＮＬＴＬＶＰＧＩＲ ＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号１０７、ｆＨｂｐ Ｖ１．１ ＧＩ：３１６９８５４８２、Ｐ７のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0094】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧ ＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬ ＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨ ＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬ ＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬ ＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴ ＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬ ＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩ ＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥ ＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳ ＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨ ＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫ ＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬ ＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧ ＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱ ＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧ ＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧ ＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡ ＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬ ＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡ ＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳ ＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹ ＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬ ＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩ ＡＧＳＡＴＶＫＩＲＹ ＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴ ＬＶＰＫＶＨＥＩＧＩ ＡＧＫＱ（配列番号１０８、ｆＨｂｐ Ｖ３．４５ ＧＩ：２８４４６６８６９、Ｐ７のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0095】

一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡ ＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬ ＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳ ＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶ ＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡ ＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧ ＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮ ＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲ ＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴ ＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫ ＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱ ＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩ ＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬ ＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡ ＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥ ＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤ ＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤ ＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩ ＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶ ＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤ ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤ ＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴ ＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡ ＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫ ＩＲＹＹＴＫＤＴＮＮ ＮＬＴＬＶＰＫＶＨＥ ＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号１０９、ｆＨｂｐ Ｖ２．１９ ＧＩ：４８８１４８６２６、Ｐ７のＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１６）または同じ配列を含み得るか、またはこれからなり得、配列ＹＹＴＫＤＴＮＮＮＬＴＬＶＰ（配列番号６８）は、任意のＰｏｒＡ ＶＲ２ループ配列、例えば、表１に示される任意のＰｏｒＡループ配列で置き換えられる。

【0096】

当業者は、１、２、３または４つ以上のアミノ酸置換、欠失または付加が、その免疫原性機能を実質的に除去せずまたは安定性に影響を与えずに、本明細書の本発明の改変ｆＨｂｐに対してなされ得ることを理解するであろう。置換は、例えば、同様のＭＷ、電荷、疎水性もしくは部分を有する同様のアミノ酸残基、または合成類似体に対する置換であり得る。このような改変は、本発明の一部として想定される。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも７５％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも８５％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも９０％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも９８％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも９９％の同一性を有し得る。一実施形態において、改変ｆＨｂｐは、本明細書に記載の改変ｆＨｂｐのいずれか１つと少なくとも９９．５％の同一性を有し得る。

【0097】

本発明の別の態様によれば、本明細書の本発明による改変ｆＨｂｐを本質的にまたは少なくともコードする核酸が提供される。

【0098】

核酸は、ウイルスベクターなどのベクター中に存在し得る。

【0099】

本発明の別の態様によれば、本明細書の本発明による改変ｆＨｂｐを含む組成物が提供される。

【0100】

組成物は、本明細書の本発明による２つ以上の異なる改変ｆＨｂｐ分子（例えば、その異なる形態／種）を含み得る。例えば、組成物は、本発明による改変ｆＨｂｐの２つ以上の異なる変異体を含み得る。例えば、組成物は、ｆＨｂｐ変異体ｖ１およびｖ２を含み得る。組成物は、ｆＨｂｐ変異体ｖ２およびｖ３を含み得る。別の実施形態において、組成物は、少なくともｆＨｂｐ変異体ｖ２を含む。

【0101】

本発明の別の態様によれば、本明細書の本発明による核酸を含む組成物が提供される。

【0102】

組成物は薬学的に許容される担体を含み得る。組成物はアジュバントをさらに含み得る。

【0103】

本発明のさらなる態様によれば、薬剤としての使用のための本発明による改変ｆＨｂｐ、核酸または組成物が提供される。

【0104】

本発明のさらなる態様によれば、対象の病原性感染またはコロニー形成の治療または予防における使用のための、本発明による改変ｆＨｂｐ、核酸または組成物が提供される。

【0105】

本発明のさらなる態様によれば、本発明による改変ｆＨｂｐ、核酸または組成物の対象への投与を含む、対象の病原性感染またはコロニー形成の治療または予防方法が提供される。

【0106】

本発明のさらなる態様によれば、本発明による改変ｆＨｂｐ、核酸または組成物の対象への投与を含む、ワクチン接種法が提供される。

【0107】

投与は、治療有効量で行われ得る。当業者は、適正投与量および投与の反復を決定できるであろう。

【0108】

対象は、ヒトなどの哺乳動物であり得る。

【0109】

感染は、細菌感染であり得る。例えば、感染は、髄膜炎菌などの髄膜炎または淋菌であり得る。

【0110】

本発明のさらなる態様によれば、本発明による改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）を含む、単一タンパク質多価ワクチンが提供される。

【0111】

ワクチンは、Ｎｍを対象とした予防または治療ワクチンとして用いられ得る。

【0112】

使用は、薬学的に許容される担体との併用であり得る。さらにまたはあるいは、使用はアジュバントとの併用であり得る。好適な薬学的に許容される担体およびアジュバントは、当業者によく知られている。

【0113】

本発明のさらなる態様によれば、本発明による改変ｆＨｂｐと少なくとも１つの他の予防または治療活性分子との組み合わせが提供される。

【0114】

少なくとも１つの他の予防または治療活性分子は、本明細書の本発明による改変ｆＨｂｐと異なるワクチンまたは抗原を含み得る。組み合わせは、組み合わせワクチンまたは療法で用いられ得る。例えば、組み合わせは、別の髄膜炎菌抗原が提供される組み合わせワクチンまたは療法で用いられ得る。

【0115】

一実施形態において、少なくとも１つの他の予防または治療活性分子は、一価タンパク質：莢膜多糖ワクチンを含む。一価タンパク質：莢膜多糖ワクチンは、細菌トキソイドを有する血清型ＣまたはＡ莢膜の、（細菌トキソイドに結合させた血清型ＣおよびＡ莢膜多糖による）二価ワクチン、四価（血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、Ｗ）または五価（血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、Ｗ、Ｘ）結合型ワクチンのいずれかを含み得る。

【0116】

あるいは、少なくとも１つの他の予防または治療活性分子は結合型ワクチンを含み得、外来ペプチドループ（例えば、ＰｏｒＡループ）を保持するｆＨｂｐ足場を含む抗原は、タンパク質担体分子として結合型ワクチンに組み込まれ得る。結合型ワクチンは、Ａ、Ｃ、Ｙ、ＷまたはＸ株からの血清型莢膜多糖のいずれかを個々にまたは組み合わせて含み得る。

【0117】

本発明の別の態様によれば、エピトープ表示足場としてのＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）の使用が提供される。

【0118】

エピトープ表示足場としての使用は、本明細書に記載の改変のいずれかを含むＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）の使用を含み得る。

【0119】

本発明による組成物または改変ｆＨｂｐは、ワクチンとしてのそれらの潜在的使用に加えて、診断試薬として、およびワクチンの免疫能力の尺度として有用であり得る。

【0120】

用語「免疫原性」は、分子が、ヒトまたは動物の体内で免疫応答を誘発することができることを意味する。免疫応答は防御的であり得る。

【0121】

本発明の改変ｆＨｂｐにより誘発される免疫応答は、本発明の改変ｆＨｂｐで免疫した対象を感染させる髄膜炎菌（Ｎｍ）の能力に影響を与え得る。好ましくは、本発明の改変ｆＨｂｐで免疫した対象を感染させるＮｍの能力が、阻害または妨害される。誘発された免疫応答はＮｍを認識および破壊し得る。さらにまたはあるいは、誘発された免疫応答はＮｍの複製を阻害または妨害し得る。さらにまたはあるいは、誘発された免疫応答は、ヒトまたは非ヒト動物においてＮｍ起因疾患を阻害または予防し得る。

【0122】

本明細書で用いられる用語「ペプチドループ」は、両末端に固定された（例えば、ｆＨｂｐなどの足場に固定された）一本鎖ポリペプチド配列を指すことが意図される。用語「ループ」は、ポリペプチドにより採用される任意の特定の二次構造を暗示または要求しない。

【0123】

「外来ペプチドループ」の文脈で用いられる用語「外来」は、ペプチドループが、ｆＨｂｐタンパク質に対して異なる源に由来する（すなわち、ｆＨｂｐまたはそのフラグメントでない）ことを意味することが理解される。しかし、ｆＨｂｐと同じ生物に由来し得る。例えば、改変ｆＨｂｐは、髄膜炎菌ＰｏｒＡに由来する（外来）ペプチドループで改変された髄膜炎菌ｆＨｂｐを含み得る。

【0124】

本明細書で用いられる用語「融合タンパク質」は、異なる遺伝子産物または源からの配列の組み合わせを含むポリペプチドを意味することが理解される。

【0125】

用語「融合タンパク質」は、用語「キメラ分子」と互換的に用いられ得る。

【0126】

本明細書で用いられる配列「同一性」についての言及は、標準的なＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴｐパラメーター（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を用いた２つのアライメントした配列間のパーセント同一性を指し得る。

【0127】

用語「単離された」は、本発明の改変ｆＨｂｐに適用される場合、（ｉ）組換えＤＮＡ法を用いて核酸またはウイルスベクターによりコードされるか；または（ｉｉ）例えば、キメラ合成法により合成されるか；または（ｉｉｉ）生物学的物質から分離され、次いで精製される、タンパク質を意味する。本発明の単離されたポリペプチドは、タンパク質をコードする核酸配列から、またはタンパク質をコードする核酸配列を含有する組換えベクターから発現されたタンパク質を含む。

【0128】

用語「防御的」は、疾患の予防、疾患感染、伝播および／もしくは進行のリスクの低減、疾患の重症度の低減、状態もしくは疾患の治癒、症状の緩和、または疾患もしくは疾患症状の重症度の低減を意味する。

【0129】

用語「予防法」は、疾患の予防または防御的治療を意味する。予防法は、感染、伝播および／もしくは進行のリスクの低減、または疾患の重症度の低減を含み得る。

【0130】

用語「治療」は、状態または疾患の治癒、症状の緩和、または疾患もしくは疾患症状の重症度の低減を意味する。

【0131】

当業者は、本発明の一実施形態または態様の任意選択の特徴が、必要に応じて、本発明の他の実施形態または態様に適用可能であり得ることを理解するであろう。

【0132】

以下、単に例として添付の図面を参照しながら、本発明の実施形態についてさらに詳細に説明する。

【図面の簡単な説明】

【0133】

【図1A】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの設計（Ａ）主な外膜の特徴、リポオリゴ糖およびｔｙｐｅ４ ｐｉｌｉ、ならびに重要な抗原ｆＨｂｐおよびＰｏｒＡを示す髄膜炎菌の表面概略図。免疫原性ＰｏｒＡ ＶＲ２ループは強調されており、ｆＨｂｐがヒトＣＦＨのドメイン６および７と相互作用することが示されている。

【図1B】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの設計（Ｂ）ＰｏｒＡループが挿入されたキメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡを産生するのに使用した６つの位置（Ｐ１～５およびＰ７）を示すＣＦＨドメイン６および７を有するＶ１ ｆＨｂｐの構造。注意：５位は、ｆＨｂｐ：ＣＦＨの界面にある。

【図2A】分子足場としてのｆＨｂｐの使用Ａ）キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡを産生するのに使用した６つの位置（Ｐ１～５およびＰ７）を有するｆＨｂｐ Ｖ１．１のタンパク質構造（灰色、リボン表示）。Ｂ）ｆＨｂｐ Ｖ１．１の二次構造（灰色、矢印はβシートを表し、長方形はαらせんを表す）。ＶＲ２ Ｐ１．１６ ＰｏｒＡ挿入サイトの場所は、黒の実線で示され、数字は、ＰｏｒＡ ＶＲ２ループが挿入され得る残基の範囲を示している（１Ｄの残基番号に対応）。Ｃ）野生型（ＷＴ Ｖ１．１）ｆＨｂｐの１～５位または７位にＰｏｒＡ Ｐ１．１６ ＶＲ２ループを有する精製されたｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。ブロットを、α－Ｖ１ ｆＨｂｐ ｐＡｂおよびα－Ｐ１．１６ ｍＡｂでプローブした。Ｄ）他のタンパク質からのループが挿入され得る１～５位および７位の場所（下線）を示す、Ｖ１．１ ｆＨｂｐの一次配列（配列番号１）

【図2B】分子足場としてのｆＨｂｐの使用Ａ）キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡを産生するのに使用した６つの位置（Ｐ１～５およびＰ７）を有するｆＨｂｐ Ｖ１．１のタンパク質構造（灰色、リボン表示）。Ｂ）ｆＨｂｐ Ｖ１．１の二次構造（灰色、矢印はβシートを表し、長方形はαらせんを表す）。ＶＲ２ Ｐ１．１６ ＰｏｒＡ挿入サイトの場所は、黒の実線で示され、数字は、ＰｏｒＡ ＶＲ２ループが挿入され得る残基の範囲を示している（１Ｄの残基番号に対応）。Ｃ）野生型（ＷＴ Ｖ１．１）ｆＨｂｐの１～５位または７位にＰｏｒＡ Ｐ１．１６ ＶＲ２ループを有する精製されたｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。ブロットを、α－Ｖ１ ｆＨｂｐ ｐＡｂおよびα－Ｐ１．１６ ｍＡｂでプローブした。Ｄ）他のタンパク質からのループが挿入され得る１～５位および７位の場所（下線）を示す、Ｖ１．１ ｆＨｂｐの一次配列（配列番号１）

【図2C】分子足場としてのｆＨｂｐの使用Ａ）キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡを産生するのに使用した６つの位置（Ｐ１～５およびＰ７）を有するｆＨｂｐ Ｖ１．１のタンパク質構造（灰色、リボン表示）。Ｂ）ｆＨｂｐ Ｖ１．１の二次構造（灰色、矢印はβシートを表し、長方形はαらせんを表す）。ＶＲ２ Ｐ１．１６ ＰｏｒＡ挿入サイトの場所は、黒の実線で示され、数字は、ＰｏｒＡ ＶＲ２ループが挿入され得る残基の範囲を示している（１Ｄの残基番号に対応）。Ｃ）野生型（ＷＴ Ｖ１．１）ｆＨｂｐの１～５位または７位にＰｏｒＡ Ｐ１．１６ ＶＲ２ループを有する精製されたｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。ブロットを、α－Ｖ１ ｆＨｂｐ ｐＡｂおよびα－Ｐ１．１６ ｍＡｂでプローブした。Ｄ）他のタンパク質からのループが挿入され得る１～５位および７位の場所（下線）を示す、Ｖ１．１ ｆＨｂｐの一次配列（配列番号１）

【図2D】分子足場としてのｆＨｂｐの使用Ａ）キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡを産生するのに使用した６つの位置（Ｐ１～５およびＰ７）を有するｆＨｂｐ Ｖ１．１のタンパク質構造（灰色、リボン表示）。Ｂ）ｆＨｂｐ Ｖ１．１の二次構造（灰色、矢印はβシートを表し、長方形はαらせんを表す）。ＶＲ２ Ｐ１．１６ ＰｏｒＡ挿入サイトの場所は、黒の実線で示され、数字は、ＰｏｒＡ ＶＲ２ループが挿入され得る残基の範囲を示している（１Ｄの残基番号に対応）。Ｃ）野生型（ＷＴ Ｖ１．１）ｆＨｂｐの１～５位または７位にＰｏｒＡ Ｐ１．１６ ＶＲ２ループを有する精製されたｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。ブロットを、α－Ｖ１ ｆＨｂｐ ｐＡｂおよびα－Ｐ１．１６ ｍＡｂでプローブした。Ｄ）他のタンパク質からのループが挿入され得る１～５位および７位の場所（下線）を示す、Ｖ１．１ ｆＨｂｐの一次配列（配列番号１）

【図3】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの特性評価（Ａ）α－Ｐ１．１６ｍＡｂのＦａｂを有するＰ１．１６ループ（黒、ＰＤＢＩＤ：２ｍｐａ）で覆われたｆＨｂｐ：ＰｏｒＡおよび１位、３位および７位にループを有するｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの構造。エピトープが、殺菌抗体により認識された立体配座であることを実証している。（Ｂ）２０～１２０℃の温度勾配を使用して行われた示差走査熱量分析によるｆＨｂｐのｆＨｂｐ Ｎ末端（ＮＴ）およびＣ末端（ＣＴ）βバレルの安定性。ｆＨｂｐ Ｎ末端（ＮＴ_ＴＭ）およびＣ末端（ＣＴ_ＴＭ）バレルの溶融温度が示されている。ＢＩＡｃｏｒｅ ＣＭ５チップに結合させたｆＨｂｐおよびキメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡでの、ｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの補体Ｈ因子（ＣＦＨ）およびｍＡｂへの結合のＳＰＲ解析。ＣＦＨ（ｆＨ６７）を、０．５～３２ｎＭの希釈範囲で流し、解離定数（Ｋ_Ｄ）を計算した；ｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの解離定数（Ｋ_Ｄ）からは、ｆＨｂｐ：ＣＦＨの界面にぶつかる５位にループを有するｆＨｂｐとＣＦＨとの結合の欠如が確認される（図２Ａ）。ＮＢ＝結合なし。

【図4-1】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのために選択された抗原のレパートリー（Ａ、Ｂ）Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｌｉｂｒａｒｙ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ．ｏｒｇ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｇｅｎｏｍｅ）から２０１０～２０１５年のＵＫにおける髄膜炎菌疾患分離株における、ｆＨｂｐ変異体およびＰｏｒＡ ＶＲ２亜型各々の頻度。特定のｆＨｂｐおよびＰｏｒＡの頻度が円グラフ（上）および表（下）で示されている。注意：Ｖ２ ｆＨｂｐは、分離株の３８．９％を占める。

【図4-2】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのために選択された抗原のレパートリー（Ａ、Ｂ）Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｌｉｂｒａｒｙ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ．ｏｒｇ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｇｅｎｏｍｅ）から２０１０～２０１５年のＵＫにおける髄膜炎菌疾患分離株における、ｆＨｂｐ変異体およびＰｏｒＡ ＶＲ２亜型各々の頻度。特定のｆＨｂｐおよびＰｏｒＡの頻度が円グラフ（上）および表（下）で示されている。注意：Ｖ２ ｆＨｂｐは、分離株の３８．９％を占める。

【0134】

【表2】

正確な配列マッチ
－Ｐｆｉｚｅｒワクチン、３．０２％
－Ｂｅｘｓｅｒｏ ｆＨｂｐ（Ｖ１．１）またはＰｏｒＡ（Ｐ１．１６）、１５．８６％
－キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡ、ｆＨｂｐまたはＰｏｒＡ、７２％（ｆＨｂｐおよびＰｏｒＡで２３．５％）

【図5】マウス免疫血清による髄膜炎菌ｆＨｂｐ（Ａ）およびＰｏｒＡ（Ｂ）抗原の認識。髄膜炎菌株Ｈ４４／７６（ＷＴ）、Ｈ４４／６７ΔｆＨｂｐおよびＨ４４／６７ΔＰｏｒＡからの全細胞溶菌液をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離し、ＰＶＤＦ膜に移し、マウス免疫血清でプローブした。Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５またはＰ７にＶＲ２ループを有する精製されたｆＨｂｐ－ＰｏｒＡキメラ２０μｇでＢａｌｂＣマウスを３回免疫することにより、マウス免疫血清を得た。

【図6】Ｖ２ ｆＨｂｐの安定化：ｆＨｂｐ：ＰｏｒＡの構築および免疫原性（Ａ）６（Ｍ６）または２（Ｍ２）つのａ．ａ．置換を有するＶ２ ｆＨｂｐ Ｖ２．２２およびＶ２．２５の安定化。ＤＳＣ分析を、２０～１２０℃の温度勾配を用いてタンパク質２０μＭで行った。ｆＨｂｐ Ｎ末端（ＮＴ_ＴＭ）およびＣ末端バレル（ＣＴ_ＴＭ）の溶融温度を記録する。（Ｂ）キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡのＰｏｒＡループを、対応するｍＡｂにより認識する。Ｐ１．２、Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５からのＰｏｒＡ ＶＲ２ループを、Ｖ２．２５ ｆＨｂｐの１位に挿入した。精製された野生型Ｖ２．２５ ｆＨｂｐおよびＶ３．４５ ｆＨｂｐ－ＰｏｒＡキメラのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析。ウェスタンブロットをｆＨｂｐ Ｖ２．２５ ｐＡｂおよびループ特異的ＰｏｒＡ ｍＡｂ（ＮＩＢＳＣ）でプローブした。ＣＦＨとの結合が、正常なヒト血清およびＣＦＨ ｐＡｂでのファーウエスタンブロットにより検出された。

【図7】キメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡは防御免疫を誘発する。マウスをキメラｆＨｂｐ：ＰｏｒＡ、すなわちＰ（１）（１）（１３）、Ｐ（２）（１）（１３）およびＰ（３）（１）（１３）で３回免疫し、ＳＢＡを、示された株に対して測定した；ＳＢＡ＞８は防御的とみなされる。ループが１位にある限りはｆＨｂｐバレルから突き出ないため、３位、すなわち、Ｐ（３）（１）（１３）にＶＲ２ループを有するＰｏｒＡにより誘発されるＳＢＡの欠如（すなわち、ｆＨｂｐ突然変異に対してＳＢＡ ０）が起こり得る。

【図8A】ＵＫにおいて２０１６年に単離された髄膜炎菌血清型Ｂ株（ｎ＝２４３）におけるＰｏｒＡ ＶＲ２（Ａ）およびｆＨｂｐ変異体（Ｂ）の頻度。データはＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、２０１７年６月２７日からダウンロードした。他：＜４の分離株で生じる残りの対立遺伝子。（Ｃ）組換えキメラ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。免疫ブロットを、α－ＰｏｒＡ ＶＲ２ ｍＡｂ：Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５でプローブした。（Ｄ）キメラ抗原ｆＨｂｐＶ^１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１．１０＿１}、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１４}およびｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}、ｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．４}およびｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．９}からのマウスポリクローナル抗血清による髄膜炎菌血清型Ｂ分離株のパネルにおけるＰｏｒＡの検出。

【図8B】ＵＫにおいて２０１６年に単離された髄膜炎菌血清型Ｂ株（ｎ＝２４３）におけるＰｏｒＡ ＶＲ２（Ａ）およびｆＨｂｐ変異体（Ｂ）の頻度。データはＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、２０１７年６月２７日からダウンロードした。他：＜４の分離株で生じる残りの対立遺伝子。（Ｃ）組換えキメラ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。免疫ブロットを、α－ＰｏｒＡ ＶＲ２ ｍＡｂ：Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５でプローブした。（Ｄ）キメラ抗原ｆＨｂｐＶ^１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１．１０＿１}、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１４}およびｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}、ｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．４}およびｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．９}からのマウスポリクローナル抗血清による髄膜炎菌血清型Ｂ分離株のパネルにおけるＰｏｒＡの検出。

【図8C】ＵＫにおいて２０１６年に単離された髄膜炎菌血清型Ｂ株（ｎ＝２４３）におけるＰｏｒＡ ＶＲ２（Ａ）およびｆＨｂｐ変異体（Ｂ）の頻度。データはＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、２０１７年６月２７日からダウンロードした。他：＜４の分離株で生じる残りの対立遺伝子。（Ｃ）組換えキメラ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。免疫ブロットを、α－ＰｏｒＡ ＶＲ２ ｍＡｂ：Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５でプローブした。（Ｄ）キメラ抗原ｆＨｂｐＶ^１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１．１０＿１}、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１４}およびｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}、ｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．４}およびｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．９}からのマウスポリクローナル抗血清による髄膜炎菌血清型Ｂ分離株のパネルにおけるＰｏｒＡの検出。

【図8D】ＵＫにおいて２０１６年に単離された髄膜炎菌血清型Ｂ株（ｎ＝２４３）におけるＰｏｒＡ ＶＲ２（Ａ）およびｆＨｂｐ変異体（Ｂ）の頻度。データはＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、２０１７年６月２７日からダウンロードした。他：＜４の分離株で生じる残りの対立遺伝子。（Ｃ）組換えキメラ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。免疫ブロットを、α－ＰｏｒＡ ＶＲ２ ｍＡｂ：Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５でプローブした。（Ｄ）キメラ抗原ｆＨｂｐＶ^１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１．１０＿１}、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１４}およびｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}、ｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．４}およびｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．９}からのマウスポリクローナル抗血清による髄膜炎菌血清型Ｂ分離株のパネルにおけるＰｏｒＡの検出。

【図8E】ＵＫにおいて２０１６年に単離された髄膜炎菌血清型Ｂ株（ｎ＝２４３）におけるＰｏｒＡ ＶＲ２（Ａ）およびｆＨｂｐ変異体（Ｂ）の頻度。データはＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、２０１７年６月２７日からダウンロードした。他：＜４の分離株で生じる残りの対立遺伝子。（Ｃ）組換えキメラ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによる分析。免疫ブロットを、α－ＰｏｒＡ ＶＲ２ ｍＡｂ：Ｐ１．４、Ｐ１．９、Ｐ１．１４およびＰ１．１５でプローブした。（Ｄ）キメラ抗原ｆＨｂｐＶ^１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１．１０＿１}、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１４}およびｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}、ｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．４}およびｆＨｂｐ^{Ｖ３．４５}：ＰｏｒＡ^{１５８／Ｐ１．９}からのマウスポリクローナル抗血清による髄膜炎菌血清型Ｂ分離株のパネルにおけるＰｏｒＡの検出。［実施例１］

【0135】

免疫原性ペプチドをＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）に導入でき、ペプチドを免疫系に提示して、防御応答を誘発できることが示された（図５および７）。この方式の原理を証明するために、内在性膜タンパク質ＰｏｒＡからのペプチドを使用した。ＰｏｒＡは、その膜貫通ドメインが不溶性であるため発現が困難である。分子の免疫原性部分は、免疫系に曝露される細胞外ループに存在する。しかし、有効な免疫応答は、正確な立体配座のループに対してのみ生じる；直鎖ペプチド配列は、機能性免疫応答を誘発しない。ｆＨｂｐ構造の知識から、ＰｏｒＡループをｆＨｂｐに導入し、ＰｏｒＡに対する当該応答を生成することが可能である。これにより、キメラ分子を生成する特定のサイトにｆＨｂｐおよびＰｏｒＡ配列に基づくキメラ分子が得られる。この方式は、任意の他の免疫原性内在性外膜タンパク質に使用できる。

【0136】

ｖ２ ｆＨｂｐがワクチンから除去される理由として考えられるのは、そのＮ末端βバレルの固有の不安定性であることが示された：ｉ）この部分のｖ２ ｆＨｂｐの原子構造の決定が不可能であった^１０、ｉｉ）ｖ２ ｆＨｂｐは、プロテアーゼ消化に感受性である（質量分析から、切断サイトが、Ｎ末端βバレルに存在することが実証される、図示せず）、およびｉｉｉ）示差走査熱量測定は、不安定性がこの領域のｖ２ ｆＨｂｐにあることを確証している^１０。

【0137】

安定なｖ２ ｆＨｂｐの産生に成功した。Ｎ末端バレルに影響を与える突然変異誘発を行って、アミノ酸（ａ．ａ．ｓ）を単独でまたは組み合わせて置換した。Ｍ６ ｆＨｂｐでの６個のアミノ酸の置換により、ｖ２ ｆＨｂｐが安定化される（すなわち、このβバレルのｃ１３０ａ．ａ．ｓで６つの変化、＜０．５％）（突然変異の詳細については国際公開第２０１４０３０００３号参照）。これは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）およびプロテアーゼ感受性から明らかである（詳細については国際公開第２０１４０３０００３号参照）。変更された残基の側鎖は、Ｎ末端バレルのβ－シート間の相互作用を促進し、したがって、分子の中心に向かって配向される；変化は、予想通りタンパク質の免疫原性に影響を与えない（ＳＢＡまたはα－ｆＨｂｐ ＩｇＧレベルにおける相違なし、図示せず）。

【0138】

キメラｖ１．１ ｆＨｂｐは、ＯＭＶワクチンのレシピエントにおいてＳＢＡを誘発する、Ｐ１．１６ＰｏｒＡからの１３アミノ酸ＶＲ２を組み込むことにより産生された^１６。内在性膜タンパク質は、疎水性（それゆえ不溶性）βバレルを含有し、ｆＨｂｐは、高レベルで発現および精製され得る２つのバレルを含有する。ＶＲ２配列をｆＨｂｐの６つの異なる位置に導入した（図２Ｂ）；これらのサイトは、ｆＨｂｐの構造全体を破壊する挿入の可能性が低減されるように、ＰｏｒＡ^２２およびｆＨｂｐの隣接するβシートの類似の間隔に基づき選択された（挿入の予想される影響については図２Ｂ）。ＶＲ２を各ｆＨｂｐに挿入した３つのｆＨｂｐ（図２Ｂ）の免疫原性を評価した。タンパク質はすべて、ｆＨｂｐおよびＰｏｒＡに対して認識する抗体応答を誘発し（図５および７）、重要なことに、（サイト１または２にＶＲ２を有する）これまでに試験した両方のタンパク質が、独立にｆＨｂｐおよびＰｏｒＡに対してＳＢＡを誘発する（Ｎｍ Ｈ４４／７６、５１２に対する、および両方のｆＨｂｐのＮｍ Ｈ４４／７６αｆＨｂｐ、２５６に対するＳＢＡ）。これにより、この方式の原理が証明される。

【0139】

多価ワクチンのための足場としてのｆＨｂｐ
ワクチンとしての非機能性ｆＨｂｐ－ｆＨｂｐの機能は、ｆＨｂｐ含有ワクチンの臨床試験の開始時は知られていなかった；ｆＨｂｐは、変異体群にかかわりなくｆＨ（解離定数＜５ｎＭ）との高親和性相互作用を示し、ｆＨは、ｆＨｂｐの大部分を占める^５。この相互作用は、ｉ）免疫原性エピトープをブロックし、ｆＨと競合し得る抗体の産生を妨害することにより、ならびにｉｉ）（ｆＨの動員により）補体活性、およびそこから免疫誘導サイトでのＢ細胞の活性を低下させることにより、ワクチンとしてのｆＨｂｐの使用を損なう可能性があった。非機能性ｆＨｂｐの使用により、これらの問題が回避される。ｆＨとの相互作用に必要なｖ１、２および３ ｆＨｂｐの重要なアミノ酸が同定され^１０、ｆＨとの結合を妨害するｖ１、ｖ２およびｖ３ ｆＨｂｐの単一ａ．ａ．ｓの改変は、この重要なワクチン抗原の免疫原性を保持するかまたはさらに高めることが示された^{１０、２３}。

【0140】

単一タンパク質多価ワクチン候補の産生および評価
Ｎｍの（そのＰｏｒＡ配列で定義される）優勢な血清亜型からの防御ＰｏｒＡエピトープ^１５を、ｖ１、安定なｖ２およびｖ３タンパク質に導入した；これらの安定性、ならびにＰｏｒＡおよびｆＨｂｐ ｍＡｂによる認識を決定した。ＰｏｒＡ配列は、ＵＫの分離株の多様性に対応するように選択されたが、髄膜炎菌株の任意のコレクションからのデータを使用できる。

【0141】

研究方法
ワクチン候補の産生および特性評価－組換えｆＨｂｐを、標準プラスミドベクターを用いて大腸菌に構築および発現させた；既存のワクチン（ｖ１．１および３．４５）のいずれかに存在するため、またはタンパク質（ｖ２）での経験により、またはＮｍ株でのそれらの優勢により、キメラｖ１、Ｖ２およびＶ３ ｆＨｂｐのタンパク質陰イオン交換およびゲル濾過でＰｏｌｙＨｉｓタグを用いてタンパク質を親和性精製した。ＰｏｒＡループを標準的な方法でｆＨｂｐに導入し、融合タンパク質が、ＰｏｒＡの一般的な血清亜型に対するｍＡｂを結合することを実証した。この戦略を使用して、天然配列および設計された配列を比較し、候補の抗原結合およびｆＨ結合のファインマッピングを行った。ＶＰキャピラリーＤＳＣ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＤＳＣ、および先述のようにＢｉａｃｏｒｅ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＰｒｏｔｅＯｎ ＸＲＰ３６（ＢｉｏＲａｄ）でＳＰＲを実施した。

【0142】

参考文献

【表3】

すべての参考文献が参照により本明細書に援用される。

【0143】

実施例２－免疫応答を生成する、拡大範囲のＰｏｒＡ ＶＲ２ループを含有するキメラ抗原
ｆＨｂｐ：ＰｏｒＡキメラ抗原の適合性を試験するために、ｆＨｂｐとＰｏｒＡ ＶＲ２との様々な組み合わせからなるいくつかのキメラ抗原を産生した。ＵＫで単離された株に利用できる包括的な髄膜炎菌ゲノムデータ（Ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ Ｅｎｇｌａｎｄ、ｔｈｅ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｔｒｕｓｔ Ｓａｎｇｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅおよびｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｘｆｏｒｄにより共同研究開発されたＭｅｎｉｎｇｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ Ｇｅｎｏｍｅ Ｌｉｂｒａｒｙ）から、所与の領域において最も一般的な抗原とマッチする正確な配列を有するキメラ抗原の構築が可能である。２０１６年、血清型Ｂ髄膜炎菌分離株で最も優勢なＰｏｒＡ ＶＲ２は、Ｐ１．４（１５．２％）、Ｐ１．１４（１５．２％）、Ｐ１．９（１２．８％）、Ｐ１．１６（１１．１％）およびＰ１．１５（５．８％、図８Ｂ）であった。ＶＲ２ Ｐ１．１０＿１は、血清型Ｂ分離株の１．６％に存在した。最も優勢な変異体１、変異体２および変異体３ ｆＨｂｐは、Ｖ１．４、Ｖ２．１９およびＶ３．４５であり、各々血清型Ｂ髄膜炎菌分離株の２１．８％、５．３％および４．９％に存在した（図８Ｃ）。５つの異なるキメラ抗原を構築し、ＰｏｒＡ ＶＲ２を、１５１位（Ｖ１．４）または１５８位（Ｖ３．４５、図８Ａ）に挿入した。キメラ抗原の発現および精製後、ウェスタンブロット分析により、これらのキメラ抗原すべてがその同種α－ＶＲ２ ｍＡｂおよびα－ｆＨｂｐ ｐＡｂにより認識されるエピトープを保持することが確認された（図８Ｄ）。野生型ｆＨｂｐ Ｖ１．１、Ｖ１．４およびＶ３．４５ならびにキメラ抗原の熱的安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ、表３）により決定した。

【0144】

免疫応答を誘発するこれらのｆＨｂｐ：ＰｏｒＡキメラ抗原の能力を調べるために、ＣＤ１マウスの群を各キメラ抗原／ａｌｕｍで免疫した；免疫付与後に得られた抗血清をプールした。得られたＰｏｒＡ免疫応答を評価するために、プールした抗血清および血清型Ｂ髄膜炎菌疾患分離株のパネルにウェスタンブロットを行った。図８Ｅは、すべてのキメラ抗原が、その同種ＰｏｒＡ ＶＲ２を認識するα－ＰｏｒＡ抗体を誘発したことを実証している。α－ＰｏｒＡ ＳＢＡ応答を評価するために、プールしたキメラ抗原／ａｌｕｍ抗血清、およびｆＨｂｐ交差防御を無効にするためにミスマッチｆＨｂｐ変異体を有する血清型Ｂ髄膜炎菌株に血清殺菌アッセイを行った。力価は≧２０～≧１２８０の範囲であり、髄膜炎菌に対する防御免疫の許容される相関に対する閾値≧８を上回る（Ａｎｄｒｅｗｓ， Ｎ．ら、Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０、７８０～７８６（２００３））（表４）。

【0145】

【表4】

【0146】

【表5】

αＰｏｒＡ ＳＢＡ力価は、プールしたキメラ抗原／ａｌｕｍ抗血清、およびミスマッチｆＨｂｐ変異体を有する血清型Ｂ髄膜炎菌分離株を用いて生成した。＊ｆＨｂｐは残基２４２でトランケートされた。
ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．１５を有する株のｆＨｂｐはミスマッチしないので、ΔｆＨｂｐ株を産生する必要があったため、ｆＨｂｐ^Ｖ１．４：ＰｏｒＡ^{１５１／Ｐ１．１５}は試験しなかった。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4-1】

【図4-2】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】