特許 7525638 白血病の経口処置のための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-07-22

(45)【発行日】2024-07-30

(54)【発明の名称】白血病の経口処置のための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/352 20060101AFI20240723BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 9/30 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20240723BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240723BHJP

【ＦＩ】

A61K31/352

A61P35/02

A61K9/20

A61K9/30

A61K9/08

A61K45/00

A61K38/00

A61K39/395 U

【請求項の数】 30

(21)【出願番号】P 2022562946

(86)(22)【出願日】2021-04-16

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-10

(86)【国際出願番号】 US2021027702

(87)【国際公開番号】W WO2022220841

(87)【国際公開日】2022-10-20

【審査請求日】2022-12-02

(73)【特許権者】

【識別番号】510293969

【氏名又は名称】プロヴェクタス ファーマテック，インク．

(73)【特許権者】

【識別番号】507132329

【氏名又は名称】ユーティーアイ リミテッド パートナーシップ

(74)【代理人】

【識別番号】100086368

【弁理士】

【氏名又は名称】萩原 誠

(72)【発明者】

【氏名】アル ナレンドラン

(72)【発明者】

【氏名】ドミニク ロドリゲス

(72)【発明者】

【氏名】ブルース ホロヴィッツ

(72)【発明者】

【氏名】エドワード ブイ． パーシング

(72)【発明者】

【氏名】エリック エー． ワクター

【審査官】田澤 俊樹

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１９／２２２３６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Lucy Swift et al.，"In Vitro Activity and Target Modulation of PV-10 Against Relapsed and Refractory Pediatric Leukemia"，Blood，2018年，Vol. 132, Supplement 1，5207，DOI: 10.1182/blood-2018-99-119438

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４

９／００－９／７２

３８／００－３９／４４

４５／００－４５／０８

Ａ６１Ｐ １／００－４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

白血病細胞を有する哺乳動物被験体の処置に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、薬学的に許容され得る固体組成物又は液体組成物に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として、治療有効量のハロゲン化キサンテン、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステル（ＨＸ化合物）を含み、白血病細胞を有する前記哺乳動物被験体に経口投与される、薬学的組成物。

【請求項2】

前記経口投与が、繰り返される、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項3】

前記組成物が、固体である、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

前記ＨＸ化合物が、固体希釈媒体中に溶解されているか、又は固体希釈媒体中もしくは固体希釈媒体上に分散されている、請求項３に記載の薬学的組成物。

【請求項5】

前記固体組成物が、錠剤、ロゼンジ又は複数の概して球状の糖小球の形態である、請求項３に記載の薬学的組成物。

【請求項6】

前記固体組成物が、１層又は複数層の前記ＨＸ化合物でコーティングされた概して球状の糖小球を含む、請求項５に記載の薬学的組成物。

【請求項7】

前記固体組成物が、水性媒体中での前記組成物の溶解速度及び／又は崩壊速度を低下させるバリアフィルムでコーティングされている、請求項３に記載の薬学的組成物。

【請求項8】

前記バリアフィルムコーティングが、５又はそれを超える生理学的ｐＨ値において溶解及び／又は崩壊する腸溶コーティングである、請求項７に記載の薬学的組成物。

【請求項9】

前記第１の白血病用細胞傷害剤ハロゲン化キサンテン化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項10】

前記ＨＸ化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項11】

前記組成物が、水性液体である、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記水性液体組成物が、正常なヒトの浸透圧未満の浸透圧として存在する、請求項１１に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

前記経口投与が、薬学的に許容され得る媒体に溶解又は分散された、第２の治療有効量の、第２の異なって作用する白血病用全身性細胞傷害剤を前記哺乳動物被験体に投与することとともに行われ、前記白血病用全身性細胞傷害剤は、小分子、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性分子、電離放射線療法、及びインタクトなチェックポイント阻害抗体又はそのパラトープ含有部分である、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項14】

前記第２の白血病用細胞傷害剤が、薬学的に許容され得る固体媒体に溶解又は分散されている、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項15】

前記第２の白血病用細胞傷害剤を含む前記薬学的に許容され得る固体媒体が、経口的に投与される、請求項１４に記載の薬学的組成物。

【請求項16】

前記第２の白血病用細胞傷害剤が、電離放射線である、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項17】

前記小分子が、前記第１の白血病用細胞傷害剤と相乗作用を示す、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項18】

前記第２の白血病用細胞傷害剤が、薬学的に許容され得る水性媒体に溶解又は分散されている、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項19】

前記第２の白血病用細胞傷害剤を含む前記薬学的に許容され得る水性媒体が、静脈内に投与される、請求項１８に記載の薬学的組成物。

【請求項20】

前記第２の白血病用細胞傷害剤が、約１５０～約１０００Ｄａの分子量を有する小分子である、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項21】

前記小分子が、ビンブラスチン、ビンクリスチン、イマチニブ、モノメチルオーリスタチン、エトポシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、クラドリビン、フルダラビン、ミトキサントロン、６－チオグアニン、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、アザシチジン、アンナマイシン、ソラフェニブ、クロファラビン、シスプラチン、イリノテカン及びシタラビンからなる群のうちの１つ以上から選択される、請求項２０に記載の薬学的組成物。

【請求項22】

前記第２の白血病用細胞傷害剤が、インタクトなモノクローナル抗体又はそのパラトープ含有部分を含む、請求項１９に記載の薬学的組成物。

【請求項23】

前記インタクトなモノクローナル抗体又はそのパラトープ含有部分が、免疫チェックポイント阻害剤である、請求項２２に記載の薬学的組成物。

【請求項24】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＰＤ－Ｌ２、抗ＯＸ４０、抗ＬＡＧ－３、抗ＣＤ４７及び抗ＴＩＭ－３からなる群のうちの１つ以上から選択される１つ以上のタンパク質性材料に結合する、請求項２３に記載の薬学的組成物。

【請求項25】

前記インタクトなモノクローナル抗体が、アダリムマブ、ブロダルマブ、セルトリズマブペゴール、エタネルセプト、ゴリムマブ、グセルクマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、サリルマブ、セクキヌマブ及びウステキヌマブからなる群より選択される、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性分子である、請求項２２に記載の薬学的組成物。

【請求項26】

前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与後に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。

【請求項27】

前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与前に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。

【請求項28】

前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与と同時に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。

【請求項29】

前記第１のＨＸ化合物と前記第２の白血病用細胞傷害剤とが、互いの約３時間以内に同時に投与される、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項30】

前記ＨＸ化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、白血病などの血液の癌（血液癌）を処置するための、特に小児においてそのような処置を行うための、経口治療用レジメンに関する。

【背景技術】

【0002】

成人は、血液１マイクロリットル（μＬ）あたり約７０００個の白血球を有する。それらの白血球のうち、約６５パーセントが顆粒球であり（約４５００個／μＬ）、約３０パーセントが単球であり（約２１００個／μＬ）、約５パーセントがリンパ球である（約３５０個／μＬ）。Ｇｅｙｔｏｎ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｖｅｎｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８６）。当然のことながら、上記の細胞数量は一般化された平均値であり、正常な患者、すなわち疾患のない患者の顆粒球数は、通常約２０００～約７０００個／μＬである。

【0003】

急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は骨髄で始まるリンパ系の血液細胞の癌であり、大量の未熟なリンパ球（リンパ芽球）が発生することを特徴とする。この疾患には基本的なタイプが２つある。１つがＢ細胞を冒すもの（Ｂ－ＡＬＬ）であり、もう１つがＴ細胞を冒すもの（Ｔ－ＡＬＬ）である。急性白血病として、ＡＬＬは、急速に進行し、処置せずにいると、通常、数週間から数ヶ月以内に死に至る。

【0004】

ＡＬＬは、小児と成人の両方において発生し、最も高い割合が３歳～７歳に見られる。症例の約７５パーセントが６歳までに発生し、４０歳を超えると第２の増加が見られる。２００１～２０１４年の米国における小児ＡＬＬの全発生率は、すべての人種／民族の群間で１００万人あたり３４．０例であった。

【0005】

ＡＬＬは通常、はじめに、緩解をもたらすことを目的とした化学療法で処置される。その後、通常３年間にわたってさらなる化学療法が続く。全身化学療法は、中枢神経系への浸透が限定的であり得、中枢神経系はＡＬＬの再発が好発する部位であるので、通常、処置には髄腔内化学療法（脊髄注射）も含まれる。

【0006】

慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）は、骨髄がリンパ球、特にＢ細胞を過剰に作る癌の一種である。ＣＬＬは一般に不治と考えられているが、ほとんどの場合ゆっくり進行する。そのため、ＣＬＬの処置は、完全な治癒ではなく、その疾患及びその症状をコントロールすることに重点を置く。その人の症状又は血球数から、生活の質に影響を及ぼす可能性があるところまで当該疾患が進行していると示される場合に、ＣＬＬ処置を開始する決断が下される。

【0007】

ＣＬＬは、主に高齢者の疾患であり、５０歳を超える人において最もよく発生し、診断時の年齢の中央値は７０歳である。ＣＬＬは、あまり一般的ではないが３０～３９歳の人でも発症することがある。ＣＬＬの発生率は、年齢が上がるにつれて急上昇する。診断後の５年生存率は、米国ではおよそ８３％である。

【0008】

急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、造血幹細胞の障害として骨髄で始まり、成人の白血病の中で最も一般的な形態である。急性骨髄性白血病は、小児と成人の両方で発生する。処置しなければ新しい白血球が作られ続けるので、ＡＭＬは体内で急速に進行し得る。

【0009】

慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は、慢性顆粒球性白血病（ＣＧＬ）としても知られ、同じく骨髄で始まるが、ＡＭＬより進行が急速でない。ＣＭＬは、初期において、白血球増加、末梢血中に多数の未熟な顆粒球が存在すること、脾腫及び貧血を特徴とする。これらの未熟な顆粒球には、好塩基球、好酸球及び好中球が含まれる。また、未熟な顆粒球は、骨髄、脾臓、肝臓に蓄積し、他の組織に蓄積するときもある。この疾患を呈している患者は、１マイクロリットル（μＬ）あたり７５，０００個を超える白血球を有することが特徴的であり、その数は、５００，０００個／μＬを超えることもある。

【0010】

ＣＭＬは、米国における全白血病の約２０パーセントを占める。毎年１００万人あたり約１５例の新規症例が報告されており、１年あたり約３，０００～４，０００例の新規症例が発生していることになる。この疾患は、４５歳未満のヒトでは稀であるが、発生率は、６５歳まで急速に上昇し、その後も上昇したままである。慢性骨髄性白血病患者の診断時からの寿命の中央値は、およそ４年である。

【0011】

ＣＭＬ患者の約６０～８０パーセントは、急性転化を起こす。急性転化は、急性白血病の所見の１つである。芽細胞上に存在するある特定のマーカーによって、急性転化の際にこれらの細胞のリンパ系起源が示唆されることがある。

【0012】

急性転化を処置するために使用される化学療法剤は、他の急性白血病の処置に使用されるものと同じである。例えば、急性骨髄球性白血病の処置に用いられるシタラビン及びダウノルビシンが、ＣＭＬの急性転化を処置するために使用される。急性リンパ性白血病の処置において用いられる治療レジメンであるプレドニゾン及びビンクリスチンも、ＣＭＬの急性転化を処置するために使用される。それにもかかわらず、急性転化段階のＣＭＬのこれらの薬物療法は、他の急性白血病の処置よりもさらに成功しない。

【0013】

小児における癌は、稀であり、１年あたり１００万人（１５歳未満）あたり１４０～１５５人という発生率である。これは、毎年７，０００人に約１人の小児が癌と診断されていることになる。癌は、稀なことであるにもかかわらず、５～１４歳の小児の死因では事故に次いで悪性新生物が最も多く、死亡数の２３％を占める。化学療法が行われるようになる前の時代では多くが致命的であった小児癌からの生存率は、１９６０年代の２０～３０パーセントから１９７０年代には６２パーセント、最近では８３パーセントへと劇的に向上した。Ｓａｌｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌ Ｐｅｄｉａｔｒ ３（２）：１５６－１８２（２０１４）。

【0014】

白血病は、最も一般的な小児癌であり、すべての小児（１～１４歳）癌の診断の約３０％を占める。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が、小児癌の約２５パーセントを占め、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）が、残りの約５パーセントを占める。Ｓａｌｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌ Ｐｅｄｉａｔｒ ３（２）：１５６－１８２（２０１４）

【0015】

ＡＬＬの現行の処置としては、ペグ化アスパラギナーゼ、リポソームダウノルビシン、リポソームアンナマイシン（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、スフィンゴソームビンクリスチン及びリポソームシタラビンが挙げられる。ＡＭＬの場合、現行の処置としては、オールトランス－レチノイン酸（ＡＴＲＡ）の使用、三酸化ヒ素の使用、アントラサイクリンとＡＴＲＡとの併用、及びイダルビシンと高用量シタラビンとの併用が挙げられる。ソラフェニブ（マルチキナーゼ阻害剤）とクロファラビン及びシタラビンとの併用は、第Ｉ相試験で成功しており［Ｉｎａｂａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９：３２９３－３３００（２０１１）］、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）として商業的に知られている、カリケアマイシン結合体化ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブオゾガミシンが有望であると示された［Ｚｗａａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ １４８：７６８－７７６（２０１０）］。

【0016】

小児白血病の生存率は、大幅に改善されたが、再発が、治療失敗の大きな原因となっている。小児ＡＬＬ患者のおよそ１５～２０パーセント及びＡＭＬ患者の３０～４０パーセントが再発し、再発ＡＬＬは、小児で４番目に多い悪性腫瘍と特定されている。

【0017】

再発した小児白血病の処置としては、化学療法レジメンの強化及び骨髄移植（ＢＭＴ）の使用が挙げられる。しかしながら、併用化学療法の強度を高め、第二選択薬を導入することは、累積毒性を伴うことが多く、恩恵の増加はほんのわずかである。

【0018】

小児癌に対する免疫系の相互作用を理解するために重要な要素は、適用可能な動物モデルが利用可能であることである。現在の異種移植モデルは、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおいて確立されているため、免疫系の寄与に関する情報をもたらさないので、限界がある。免疫適格性動物におけるヒト造血幹細胞の再構成などの他のアプローチは、煩雑で費用がかかり、複雑な生物学的変数をその系に持ち込むことが多い。

【0019】

近年、マウス胎児をヒト腫瘍細胞に対して寛容化することによって、免疫適格性マウスにおける新規異種移植腫瘍モデルが開発された［Ｂａｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．４１２：２５６－２６３（２０１８）］。このモデルは、異種移植の手法を通じて、癌性細胞と免疫系との複雑な相互作用をよりよく説明するために用いることができるので、有益である。

【0020】

成人の癌性腫瘍に有用な抗癌剤群の１つは、ハロゲン化キサンテン又はその薬学的に許容される塩である。米国特許第６，３３１，２８６号、同第７，３９０，６６８号、同第７，６４８，６９５号、同第９，１０７，８８７号、同第９，８０８，５２４号、同第９，８３９，６８８号及び同第１０，１３０，６５８号を参照のこと。それらのハロゲン化キサンテンのうち、ローズベンガル二ナトリウム（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン二ナトリウム；ＲＢ）が、特に有効であり、容易に利用されることが見出された。

【0021】

ヨウ素１３１で放射標識されたＲＢの溶液が、乳児の肝機能を計測するために臨床で用いられている［Ｙｖａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ６：３５５－３５９（１９８１）］。注射用の０．９％塩化ナトリウム水溶液中の１０％ｗ／ｖ ＲＢ二ナトリウム滅菌溶液であるＰＶ－１０（登録商標）が、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮのＰｒｏｖｅｃｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．が製造するより最近の製剤である。

【0022】

これまでの研究によって、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液のＲＢ又はその塩が、癌性細胞のリソソームに蓄積し［Ｗａｃｈｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ＳＰＩＥ，Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＩ，Ｐｅｒｉａｓａｍｙ，Ａ．ａｎｄ Ｓｏ，Ｐ．Ｔ．Ｃ．（ｅｄｓ），Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：４６２０：１４３－１４７（２００２）］、一連の成人癌において細胞死を誘導する［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）；Ｔｏｏｍｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（７）：ｅ６８５６１（２０１３）；Ｋｏｅｖａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ４（２）：９９－１０７（２０１２）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８（６）：４０５－４１１（２００８）；及びＺａｍａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃ １１（４）：３６７－３７５（２０１４）］ことが示されている。

【0023】

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、いくつかの臨床試験において、単一の抗癌剤と、モノクローナル抗体抗癌剤との併用の両方において使用され、病巣内（ＩＬ）投与によって固形腫瘍癌に投与された。それらの治験のうちのいくつかを下記で論じる。細胞傷害剤としてＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液を単独で使用した第Ｉ相及び第ＩＩ相臨床研究では、「有害事象は、主に軽度から中等度であり、処置部位に限局しており、処置に関連するグレード４又は５の有害事象は無かった」［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２２（７）：２１３５－２１４２（２０１５）］、及び「治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、各薬物に対して確立されていたパターンと一致し、主としてグレード１～２の注射部位反応が、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液に起因し、グレード１～３の免疫媒介性反応が、ペンブロリズマブに起因し、重大な重複又は予想外の毒性は認められなかった．．．」［Ａｇａｒｗａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３７（１５）ｓｕｐｐｌ ９５５９－９５５９（２０１９年５月２６日）］と実例が報告された。このように、ＲＢは、癌性細胞に対して毒性であるかのように見えるが、非癌性細胞に対しては無毒性である。

【0024】

成人の腫瘍と小児の腫瘍では挙動が大きく異なることが多いので、ＲＢ及び類似のハロゲン化キサンテンを、小児の癌性細胞、特に小児の癌性血液細胞に対して使用したとき、それらが有効であるか否かは不明であった。ＲＢを単独で添加するか又は公知の抗癌剤とともに添加した細胞培養における神経芽腫細胞株に対する、及びマウスにおいて確立された固形腫瘍異種移植片への病巣内注射による、それぞれ予備的なインビトロ試験及び異種移植試験が、小児の癌性細胞の殺滅を示すと本発明者及び共同研究者のうちの一人によって報告された。Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ，１２：１２９３－１３０７（２０１９年２月）。

【0025】

さらに、腫瘍へのハロゲン化キサンテン化合物の病巣内投与は、その活性な細胞傷害剤を最も高い濃度で腫瘍に直接提供する。下記で論じる現在企図されている処置の手法では、投与は、標的の癌性血液細胞から遠位において行われることが多く、それにより、殺癌性（ｃａｎｃｅｒｏｃｉｄａｌ）のハロゲン化キサンテン化合物薬（剤）の有効性が弱まる可能性がある。

【0026】

治療抵抗性転移性黒色腫を有する患者に対する第ＩＩ相臨床試験において、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液を病巣内注射することにより、５１％という全奏効率で腫瘍退縮が誘導された［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２２（７）：２１３５－２１４２（２０１５）］。また、病巣内のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、イントランジット又は転移性の黒色腫を有する患者に対する第ＩＩ相臨床試験において、放射線療法と併用したとき、８６．６％という全奏効率で有効性を示した［Ｆｏｏｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１５（７）：８９１－８９７（２０１７）］。

【0027】

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の病巣内投与は、直接的な癌細胞死を誘導することに加えて、マウス研究［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）；Ｔｏｏｍｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（７）：ｅ６８５６１（２０１３）；及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７（２５）：３７８９３－３７９０５（２０１６）］とヒト臨床試験［Ｌｉｐｐｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１４（３）：３８０－３８４（２０１６）；Ｒｏｓｓ，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １０９（４）：３１４－３１９（２１０４）；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １３（４）：ｅ０１９６０３３（２０１８）；及びＢａｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ４１２：２５６－２６３（２０１８）］の両方において腫瘍特異的な免疫応答を誘導するとも示されている。黒色腫のマウスモデルにおいて、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で病巣内処置することにより、黒色腫細胞のネクローシス及び腫瘍浸潤単核リンパ球の局所的な増加が誘導された［Ｌｉｐｐｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１４（３）：３８０－３８４（２０１６）］。

【0028】

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、免疫原性細胞の死を誘導して、腫瘍抗原を近傍の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に放出し、抗腫瘍Ｔ細胞及び抗腫瘍Ｂ細胞の活性化を促進することが示唆された。同系マウス結腸癌モデルでは、インビトロにおいてＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で処置された癌細胞を、同じ腫瘍を有するマウスに注射したところ、腫瘍の成長が遅くなった［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）］。さらに、同系マウス黒色腫モデルでは、病巣内のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液と抗ＰＤ－１抗体との併用処置によって、腫瘍成長が遅れ、Ｔ細胞活性化が増大した［Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １３（４）：ｅ０１９６０３３（２１０８）］。

【0029】

２０１９年１１月１９日に出願された親出願の米国特許出願第１６／６８８，３１９は、ハロゲン化キサンテン、その薬学的に許容される塩又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルを含む水性組成物との接触によって白血病細胞などの血液癌細胞を首尾よく処置（殺滅）できることを教示している。２０２１年３月２６日出願の共同譲渡された米国特許出願第１７／２１４，５９０は、ハロゲン化キサンテン、そのラクトン又はその薬学的に許容される塩もしくはエステルの経口投与によって、固形癌性腫瘍を首尾よく処置できることを教示している。その経口投与される薬剤は、固体又は液体の形態であり得る。

【0030】

以下の開示は、企図される発明を説明し、小児及び成人の白血病の処置において、経口投与されるローズベンガルなどのハロゲン化キサンテン化合物を使用した研究の結果を提供する。

【発明の概要】

【0031】

本発明は、白血病を有する哺乳動物被験体を処置する方法を企図する。その方法は、そのような哺乳動物被験体に、治療有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に許容され得る塩又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステル（本明細書中で「ＨＸ化合物」と総称される）を、薬学的に許容され得る固体又は液体の希釈媒体に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として投与する工程を含む。企図される投与は、通常、繰り返される。

【0032】

企図される処置方法はまた、薬学的に許容され得る媒体に溶解又は分散された、第２の治療有効量の第２の異なって作用する白血病用全身性細胞傷害剤をその同じ哺乳動物被験体に投与することとともに行うことができる。第２の白血病用全身性細胞傷害剤は、小分子、電離放射線、又はインタクトな抗体もしくはパラトープ含有抗体部分、例えば、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性抗体分子又は免疫チェックポイント抗体であり得る。第１及び第２の白血病用細胞傷害剤は、同じもしくは異なる媒体において一緒に、又は同じもしくは異なる媒体において異なる時点において、投与され得る。第２の白血病用細胞傷害剤は、固体錠剤、カプセル剤、丸剤などとして、液体媒体において、又は静脈内注射もしくは静脈内注入として、投与され得る。

【0033】

１つの態様において、約２００～約１０００Ｄａの分子量を有する白血病用小分子細胞傷害剤の使用が企図される。ドキソルビシン、エトポシド及びビンクリスチンなどの、ＨＸ化合物と相乗作用を示す化合物が好ましい。インタクトな抗体又はパラトープ含有抗体部分が、白血病用細胞傷害剤の第２の群である。これらの作用物質の中で好ましいのは、免疫チェックポイント阻害剤と称されるものである［例えば、Ｄａｒｖｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，５０：１６５（２０１８）を参照のこと］。

【0034】

本発明は、白血病を有する哺乳動物被験体を処置するために、薬学的に許容され得る水性媒体に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として、治療有効量のＨＸ化合物を使用することも企図し、そのハロゲン化キサンテン化合物（ＨＸ化合物）は、白血病細胞の死を誘導するに十分な時間にわたってその哺乳動物被験体において維持される。さらなる実施形態において、第１の白血病用細胞傷害剤であるＨＸ化合物は、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである。なおもさらなる実施形態において、ＨＸ化合物は、ローズベンガル二ナトリウム塩である。さらに、通常処置される白血病細胞は、急性Ｂ細胞リンパ芽球性白血病細胞もしくは急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病細胞、慢性リンパ性白血病細胞又は急性骨髄性白血病細胞である。

【0035】

ＨＸ化合物の低いバイオアベイラビリティ、その薬物の初回通過損失、及び他の状況においてローズベンガル（ＲＢ）などのＨＸ化合物について以前に報告された比較的短い循環半減期（約３０分）を理由に、任意の癌、ましてや直腸結腸癌のような消化管の癌性固形腫瘍が、２０２１年３月２６日出願の米国特許出願第１７／２１４，５９０に開示されているように経口投与されたＨＸ化合物から何らかの影響を受け得るということは、かなり予想外のことであった。したがって、水性希釈剤に溶解された薬学的に許容され得る塩の形態の、例証的なＨＸ化合物であるローズベンガル二ナトリウムを経口投与することにより、何らの処置もない場合に直腸結腸腫瘍を発生するように特別に作出された動物において直腸結腸腫瘍の発生の進行を遅くできたことは、予想外のことであった。経口的に送達された企図されるＨＸ化合物が、これらの特別に作出された動物において直腸結腸癌性腫瘍の形成を予防できたことは、さらに予想外のことであった。

【0036】

経口投与された有効量のＨＸ化合物が、本明細書中に開示されるように、白血病細胞も効果的に殺滅できたことは、上で論じられた理由に加え、白血病細胞が血流中並びに骨髄中において全身に分布しているという事実から、さらに予想外のことであった。したがって、相対的に濃縮されており、腫瘍の動脈から直接供給される、又は腫瘍に直接、病巣内投与することによって接触される、固形腫瘍の細胞よりも、白血病細胞は、白血病用細胞傷害性ＨＸ化合物が「見つけて」取り込まれるための、より低濃度のより拡散した標的を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0037】

本開示の一部を成す図面において。

【0038】

【図1】Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．からのＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスを経口投与のローズベンガル二ナトリウムで処置したときの生存率を示しているグラフである。指数関数的に増殖中のＳＥＭ細胞（ＧＦＰで標識された２．５×１０^６個のヒトＡＬＬ細胞）を各動物の静脈内に注射し、腫瘍の確立をモニターした。４週間、腫瘍を成長させた後、マウスを無作為に３つの群に分けた。群１（ｎ＝９匹のコントロール動物）には、２週間にわたって１週間に２回、１００μＬのＰＢＳを経口投与した。群２（ｎ＝８匹の処置コホートＩ動物）には、０．９％ＮａＣｌ水溶液中に１０％ｗ／ｖで存在する２５μＬのローズベンガル二ナトリウムを最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈したものを、２週間にわたって１週間に２回、経口投与した。群３（ｎ＝８匹の処置コホートＩＩ動物）には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈した、０．９％ＮａＣｌ水溶液中の１２．５μＬの上記１０％ｗ／ｖを、２週間にわたって１週間に２回、経口投与した。疾患進行のエビデンスをすべての動物においてモニターし、処置開始の１２０日後まで生存を追跡した。データをカプラン・マイヤー推定値として示す。５０～１００日の領域を調べると、Ｘ軸に最も近い線は、コントロールのデータを表しており、中央の線は、コホートＩＩ動物のデータを表しており、一番上の線は、コホートＩ動物のデータを示している。

【図2】いくつかの異なる研究からのデータの対数－対数プロットであり、固形腫瘍処置の評価時点までの被験体におけるＨＸ化合物の持続時間の対数に対して、投与されたローズベンガル濃度（モル濃度）の対数をプロットしており、２０２１年３月２６日出願の米国特許出願第１７／２１４，５９０にも以前の形態として示されている。「病巣内投与」は、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５－４１１（２００８）に存在するデータを表しており、「Ｓｗｉｆｔ ２０１８，２０１９」は、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８）及びＳｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３－１３０７（２０１９）からのものであり、「経口Ａｐｃ^Ｍｉｎ」は、米国特許出願第１７／２１４，５９０において報告された研究のデータであり、「経口白血病」は、本願において提示される新しいデータである。

【発明を実施するための形態】

【0039】

１つの態様において、本発明は、哺乳動物被験体に存在する白血病細胞の処置（殺滅）において使用するための、経口投与される薬学的組成物を企図する。その経口薬学的組成物中の主要な細胞傷害剤は、ハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、その薬学的に許容され得る塩、又はそのＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルであり、これらは本明細書中で「ＨＸ化合物」と総称され、白血病を処置する有効量で存在する。経口投与される薬学的組成物は、固体又は液体の形態であり得る。

【0040】

企図されるハロゲン化キサンテン分子には、特に好ましいローズベンガル（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン；ＲＢ）、エリスロシンＢ、フロキシンＢ、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’，７’－テトラ－ヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７－ペンタクロロ－４’，５’，７’－トリヨードフルオレセイン、４，４’，５，６，７－ペンタクロロ－２’，５’，７’－トリヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７，７’－ヘキサクロロ－４’，５’－ジヨードフルオレセイン、４，４’，５，５’，６，７－ヘキサクロロ－２’，７’－ジヨードフルオレセイン、２’，４，５，５’，６，７－ヘキサクロロ－４’，７’－ジヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’－トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，７’－トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’－トリヨードフルオレセイン及び４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，７’－トリヨードフルオレセインが含まれる。

【0041】

上記のハロゲン化キサンテンなどの薬学的化合物と薬学的に許容され得る塩を形成する通常使用される薬学的に許容され得る酸及び塩基のリストについては、Ｂｅｒｇｅ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７ ６８（１）：１－１９を参照されたい。例証的なカチオンとしては、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、並びにアンモニウム、及びマグネシウム及びカルシウムなどのアルカリ土類塩が挙げられる。ローズベンガルの二ナトリウム塩が特に好ましい。

【0042】

企図されるハロゲン化キサンテンのラクトン型は、合成的に形成することができ、非常に純粋なローズベンガルの好ましい前駆体である。さらに、カルボン酸型のハロゲン化キサンテン塩は、哺乳動物の胃に存在するような強酸性の水性環境に置かれると、ラクトン型を自発的に形成する。そのラクトンは、哺乳動物の胃又は同様の酸性の水性媒体中でカルボン酸型又はカルボン酸塩型から形成されるとき、単に形成されるだけでなく、十二指腸及び隣接する小腸の領域では容易に溶解しない又は十二指腸のｐＨ値を有する水性媒体に容易に溶解しない凝集塊に凝集するとみられる。

【0043】

上記のハロゲン化キサンテン化合物のうちの１つのＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルも使用でき、Ｃ_２、すなわちエチルエステルが好ましい。ＲＢ、エチル－レッド３（エリスロシンエチルエステル；２’，４’，５’，７’－テトラヨード－フルオレセインエチルエステル）、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’，７’－テトラヨード－フルオレセイン及びエチル－フロキシンＢ（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラブロモ－フルオレセインエチルエステル）の各々を用いたインビトロ研究は、ＣＣＬ－１４２腎腺癌に対して同様の抗腫瘍活性を示した。

【0044】

企図される芳香族エステルは、独立して窒素、酸素又は硫黄である０、１もしくは２個のヘテロ環原子を含む、５もしくは６員芳香環（ベンジルアルコールを含む）又は５，６－もしくは６，６－縮合芳香環系を有する芳香族アルコールとＨＸ分子との反応によって形成される。芳香族エステルが使用されるとき、それは、好ましくは、ベンジルエステル、フェニルエステル、又は２－、３－もしくは４－ピリジル（ピリジル）エステルであり、他の単環及び縮合環含有芳香族エステルも、本明細書中以後で論じられるように企図される。ベンジルエステルは、「アラルキルエステル」であると考えられることが多いが、本発明の目的では、ベンジルエステルは、芳香族エステルとみなされることが理解されるべきである。

【0045】

そのような芳香族アルコールエステル部分の例証的な例を下記に示し、命名する。式中、Ｏは、酸素原子であり、線－Ｏは、環－酸素がその環の利用可能な任意の炭素からであり得ることを示し、波線を横断するＯ－線は、描かれているアルコキシ基が、別の分子であるエステル化されたＨＸ分子の一部であることを示す。

【0046】

【化1】

【0047】

ローズベンガルが、好ましいＨＸ分子であり、その二ナトリウム塩であるローズベンガル二ナトリウムが、最も好ましいＨＸ化合物である。ローズベンガル二ナトリウムの構造式を下記に示す。

【0048】

【化2】

【0049】

上述のＨＸ化合物を含む薬学的組成物の医薬用途のさらなる詳細は、米国特許第５，９９８，５９７号、同第６，３３１，２８６号、同第６，４９３，５７０号、同第７，３９０，６８８号、同第７，６４８，６９５号、同第８，９７４，３６３号、同第９，１０７，８８７号、同第９，８０８，５２４号、同第９，８３９，６８８号、同第１０，１３０，６５８号及び同第１０，４７１，１４４号（これらの開示は、その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。

【0050】

投薬－図２
０．９％塩化ナトリウム含有水性媒体中の腫瘍細胞をＨＸ化合物に曝露すると、ＨＸ化合物の不可逆的な蓄積が腫瘍のリソソームにおいて生じ、リソソームの完全性を不安定化するのに十分な濃度に達したら、免疫原性の腫瘍の自己分解を引き起こす［Ｗａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＳＰＩＥ ４６２０：１４３－１４７（２００２）］。これは、この細胞死の免疫原性機構が、（濃度）・（時間関数）に基づいて、ある範囲の曝露条件にわたって誘発され得ることを示唆する。ここで、細胞傷害性は、これらの２つのパラメータの積に比例する［すなわち、細胞傷害性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ）であり、式中、「ｔ」は時間である］。

【0051】

例えば、ＲＢが、一連の固形腫瘍（例えば、黒色腫、肝細胞癌、乳癌）への病巣内注射によってインビボで投与されたとき、およそ３０分以内におよそ２５～５０ｍｇ／ｇ腫瘍組織（２５～５０ｍＭ）という腫瘍内のＲＢ濃度で急性腫瘍細胞傷害性が顕われる［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５－４１１（２００８）］。

【0052】

Ｓｗｉｆｔら［Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３－１３０７（２０１９）］は、およそ５０～１００μＭの濃度のＲＢとインビトロにおいて９６時間接触させたとき、処置抵抗性の小児固形腫瘍（神経芽細胞腫及び神経上皮腫）の細胞傷害性を示した。さらに、Ｓｗｉｆｔら［Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８）］は、同等の曝露において、さらなる処置抵抗性小児固形腫瘍（ユーイング肉腫、骨肉腫及び横紋筋肉腫）における細胞傷害性を示した。

【0053】

継続的な経口給餌の状況におけるＲＢへの長期曝露は、２０２１年３月２６日に出願された親出願である米国特許出願第１７／２１４５９０に開示されているように、マウスＡｐｃ^Ｍｉｎ直腸結腸腫瘍モデルにおいて結腸癌の形成を予防し（予防活性）、結腸癌を停止する（治療活性）と示された。治療での使用の場合、飲料水中の１ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＢを自由に摂取させた症候性マウスは、未処置マウスと比べて平均生存時間がおよそ３８％延長した（１２．３±０．５週 対 ９．８±０．８週）。１日の飲料水消費率をおよそ２ｍＬ／１０ｇ体重と仮定すると、これは、およそ２ｍｇＲＢ／１０ｇ（２００ｍｇ／ｋｇ）の消費量に相当する。

【0054】

経口経路を介して水溶液として投与されたＲＢ二ナトリウムのバイオアベイラビリティは、本発明者らが行ったマスバランス試験に基づくと、限定的であるとみられ、０．１～１パーセントと推定され得、０．２～２ｍｇ／ｋｇという１日の全身曝露に相当する。この量が血流を介して分配され、血液量が体重のおよそ１０パーセントを構成すると仮定すると、これは、血液中においてＲＢの推定濃度が２～２０μＭであることに等しい。

【0055】

この同じアプローチを用いて、本願の図１に示されるデータをプロットした。このデータは、小児の急性Ｂリンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）腫瘍細胞株の異種移植片が確立されたＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスの生存を示し、連続した２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によってＲＢを投与した２つの処置群のマウスについて治療活性が観察された。この経口ＲＢのバイオアベイラビリティを１％、投与１回あたりの腸管通過時間を６時間、及び血液量を体重のおよそ１０％と仮定すると、２つの処置群は、血液中において推定１２５～２５０μＭのＲＢに対応する。

【0056】

これらのデータをプロットすると、図２に図示されるように、仮定された関係（すなわち、細胞傷害性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ））が実験結果によって支持されることが確認された。

【0057】

より重要なことには、この関数関係から、全身投与の際に抗腫瘍の治療成績を達成するのに適切な用量レベル及びスケジュールを予測することが可能になる。Ａｐｃ^Ｍｉｎモデルを用いて検討されたものと同等の長期全身処置スケジュールの場合、およそ３ヶ月間のリソソーム蓄積及び腫瘍細胞破壊を達成するのに、低マイクロモル濃度（すなわち、約１０μＭ）の循環ＨＸ化合物で十分であるのに対して、およそ１２ヶ月間にわたって腫瘍細胞破壊を達成するのに、マイクロモル濃度からマイクロモル濃度以下の濃度（すなわち、約１μＭ）で十分である。

【0058】

逆に、この経口白血病モデルで使用されたような、より高用量レベルでの、より短い期間又は断続的な反復全身投薬でも、腫瘍破壊を達成することができる。

【0059】

白血病を有する小児患者の処置などの具体的な適応症に対して、図２の関係は、当業者が医薬品開発において日常的に使用している標準的なアプローチを適用して、潜在的な安全性リスクを最小限に抑えながら治療成績を最大化する適切な用量レベル及びスケジュールを選択できることを示している。

【0060】

出願第１７／２１４５９０のＡｐｃ^Ｍｉｎデータ及び本願の経口白血病処置データは、ＲＢの二ナトリウム塩の単純な製剤が、治療的に活性なレベルのＲＢを送達するのに十分であることを示している。しかしながら、これは、バイオアベイラビリティに関して理想的な効率よりも低い場合がある。したがって、経口送達されたＨＸ化合物の効率的な遊離及び吸収を達成するのに適した配合を決定することは、当業者によく知られた標準的な医薬品開発の問題であり、製剤の特性を変化させることにより、溶解したＨＸ化合物の血流への吸収が最大化するように消化管の適切な場所での遊離（崩壊、脱凝集及び溶解）を制御することによって所望のバイオアベイラビリティを達成することができる。

【0061】

配合の最適化は、所望の投与スケジュールにおいて必要な全身曝露（例えば、数日程度の短期間の曝露の場合は血流中に約１００μＭ、数ヶ月程度の中期の曝露の場合は約１～約１０μＭ、１年程度又はそれ以上の長期間の曝露の場合は約＜１μＭ又はそれ未満）が達成されるように用量レベル及び配合が調整されるように、吸収に関する標準的な薬物動態学的研究によって導かれ得る。

【0062】

二塩基性塩の形態のＨＸ化合物は、およそ５を超えるｐＨを有する溶液中に存在するのに対して、＜５のｐＨ値において、それらのＨＸ化合物は、自然にラクトン型に変換される。二塩基性塩の形態は、水性媒体に非常に可溶性であるのに対して、ラクトン型は、水性媒体に不溶性であるので、前者は、後者に比べて高いバイオアベイラビリティを消化管において示す。したがって、消化管のｐＨ値を適切に補うための配合の最適化は、おそらく、バイオアベイラビリティに影響を与える最も重要なパラメータである。例えば、ｐＨ値が＜４である胃では、溶解したＨＸ化合物は、速やかに不溶性のラクトン型に変換される。ＨＸ化合物は、ラクトン型になったら、ヒステリシスを示し、吸収性の塩の形態に戻るけん化を妨げて、下流のバイオアベイラビリティを遅らせるか又は阻害する。

【0063】

しかしながら、腔内ｐＨ値は、胃の強い酸性から十二指腸のｐＨ６前後に急激に上昇し、さらに小腸のｐＨ６から回腸末端のｐＨ約７．４に上昇する。ｐＨは、盲腸において５．７に低下した後、直腸ではｐＨ６．７に徐々に上昇する［ｐｕｂｍｅｄ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／１０４２１９７８／］。したがって、好ましいｐＨ値が溶解性で吸収性の二塩基性塩の形態でのＨＸ化合物の遊離を容易にする腸内遊離を達成するように薬学的製剤の技術における標準的な手段を適用することによって、バイオアベイラビリティが最適化される。

【0064】

１２ヶ月間の処置レジメンの場合、これらのデータは、およそ１μＭ（１ｍｇ／Ｌ）という目標濃度が血流中で達成されることを示している。血液量が体重のおよそ１０％（すなわち、約７Ｌ）を構成する７０ｋｇの成人の場合、これは、７ｍｇのＨＸ化合物／日という吸収を暗に示している。バイオアベイラビリティが、投与されたＨＸ化合物の１％に限定される場合、この目標血中濃度を達成するためには、１日あたり７００ｍｇの経口（ＰＯ）ＨＸ化合物が必要であり得る。

【0065】

しかしながら、吸収を投与用量の５０％に最適化することによって、必要なＰＯ用量は、１日あたりおよそ１５ｍｇに減少する。より短い処置レジメン（すなわち、３ヶ月間）の場合、これらのデータは、およそ１０μＭ（１０ｍｇ／Ｌ）という目標血中濃度が達成されることを示している。バイオアベイラビリティが１％であると仮定すると、１日あたり７ｇのＰＯのＨＸ化合物が必要であるのに対して、バイオアベイラビリティが５０％となると、必要量が、１日あたりおよそ１５０ｍｇに減少する。

【0066】

企図される１つの薬学的組成物は、ハロゲン化キサンテン化合物（ＨＸ化合物）である第１の白血病用細胞傷害剤の０．１％～約２０％（ｗ／ｖ）水性媒体（液体として）を含む。より好ましくは、その濃度は、約０．２～約１０％（ｗ／ｖ）であり、最も好ましくは、その濃度は、約０．２～約５％（ｗ／ｖ）である。したがって、例えば、１日あたり１５０ｍｇという上記の用量は、３ｍＬの５％（ｗ／ｖ）水溶液を用いることによって容易に達成され得る。

【0067】

特に好ましいハロゲン化キサンテン塩は、ローズベンガル（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン）二ナトリウム（ＲＢ二ナトリウム）塩である。薬学的組成物は、治療有効量の第１の白血病用細胞傷害剤を、白血病、又はより詳細には、Ｔ－ＡＬＬもしくはＢ－ＡＬＬのような急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有するヒトなどの哺乳動物に提供するために経口投与される。

【0068】

哺乳動物被験体は、通常、複数回処置される。白血病細胞を殺滅する事実及び相対量は、所与の白血病の哺乳動物被験体の状態をアッセイするための通常の手段によって明らかにされ得る。維持の持続時間とさらなる投与を行う選択との両方が、哺乳動物の種、個別の哺乳動物被験体、疾患の重症度、疾患のタイプ、被験体の年齢及び健康状態、並びに処置によって引き起こされる白血病細胞の負荷に対して観察される影響に依存し得る。これらの因子は、通常、白血病を処置する分野の熟練の医師によって対処される。

【0069】

さらに、通常は、検出可能な白血病細胞を身体から取り除くことが望まれるが、必ずしもそれを行うことができるわけではない。十分な白血病細胞を殺滅して当該疾患を静穏化させること、又は白血病細胞の負荷を低減して他の治療法を行うことができるようにすることで十分なときもある。

【0070】

本明細書中以後に提供されるデータは、インビトロにおけるいくつかの白血病細胞株に対してＲＢを使用する場合のＩＣ_５０値が、１日から数日の曝露に対して約５０～約１００μＭであることを説明している。ＲＢ二ナトリウムの分子量が、１０１８ｇ／モルであることを考慮すると、上記のＩＣ_５０の値は、約５０～約１００ｍｇのＲＢ／リットルと計算される。インビボ処置中に白血病細胞と接触させるために、その濃度を達成することが好ましい。

【0071】

ＲＢを用いた肝機能の古典的な静脈内（ＩＶ）診断法は、単回のＩＶ用量として１００ｍｇのＲＢを投与して行われた。ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の臨床試験において、ＲＢは、ＩＶ送達の１５００ｍｇにおいて許容された。成人の標準的な血液量は、およそ５Ｌである。したがって、血中において１００ｍｇ／Ｌを達成するために、成人患者は、およそ５００ｍｇのＲＢをＩＶ投与される必要があり得、それにより、ＩＣ_５０値が血流中で達成される。ＲＢが循環から迅速にクリアランスされる（ｔ_１／２が約３０分である）ことに起因して、循環中のＲＢのピークレベルを維持するために（すなわち、最大数時間又はそれ以上にわたって）、ＩＶ投与は、持続注入を必要とし得る。

【0072】

ＩＣ_５０値レベルでの投与は、循環している血液学的な非腫瘍性の白血病細胞すべてに対して毒性であるわけではないだろう。すなわち、ＩＣ_５０値ではおよそ半数の細胞だけしか影響を受けないだろう。ゆえに、ＲＢをＩＣ_５０値の倍数、最大およそ１５００ｍｇ（すなわち、３００μＭ）で投与することが好ましいことがある。

【0073】

あるいは、残存する白血病の負荷に対して機能的な免疫応答を惹起するために、白血病細胞の一部だけを殺滅することで十分である場合がある。迅速に殺滅される白血病細胞が大量に存在することに起因する毒性反応（すなわち、いわゆる「腫瘍崩壊症候群」）を回避するために、後者の場合が好ましいことがある。この状況では、ハロゲン化キサンテンの白血病細胞に対する細胞傷害性が原因の白血病細胞の残屑は、カリウムなどの細胞内内容物を放出して、非特異的な細胞死を引き起こす。このプロセスは、悪性細胞に対して特異的に免疫系を活性化することもある。

【0074】

先に列挙された同様に有用なハロゲン化キサンテン化合物及びそれらの薬学的に許容され得る塩は、互いに約３倍異なる分子量を有し得る（表３、米国特許第７，３９０，６８８号、カラム１５～１６を参照のこと）。使用されるＲＢ以外のハロゲン化キサンテンの正確な量は、そのような各化合物及びＲＢ又はＲＢ二ナトリウムの公表された分子量に基づいて算出されることが好ましい。

【0075】

処置を必要とし（哺乳動物被験体）、且つハロゲン化キサンテン化合物を含む薬学的組成物を投与され得る、白血病を有する哺乳動物被験体は、ヒトなどの霊長類、チンパンジーもしくはゴリラなどの類人猿、カニクイザルもしくはマカクなどのサル、ラット、マウスもしくはウサギなどの実験動物、イヌ、ネコ、ウマなどの伴侶動物、又は雌ウシもしくは雄子牛、ヒツジ、子ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマなどの食用動物などであり得る。

【0076】

本発明の１つの態様において、経口投与用の企図されるＨＸ化合物は、通常、滅菌された水性薬学的組成物に溶解又は分散された状態で使用される。滅菌された水道水又は別の起源からの滅菌水を使用することができる。

【0077】

企図される液体薬学的組成物の特色
ＨＸ化合物は、通常、企図される水性薬学的組成物中に約０．１～約２０％（ｗ／ｖ）で存在する。より好ましくは、その濃度は、約０．２～約１０％（ｗ／ｖ）であり、最も好ましくは、その濃度は、約０．２～約５％（ｗ／ｖ）である。したがって、例えば、１日あたり１５０ｍｇという上記の用量は、３ｍＬの５％（ｗ／ｖ）水溶液を用いることによって容易に達成され得る。

【0078】

ローズベンガル二ナトリウムなどの様々なＨＸ化合物のバイオアベイラビリティは、まだ十分に特徴付けられていない。譲受人の１人が委託した研究では、水溶液中の^１４Ｃ－ＲＢをマウスに経口投与した放射標識研究に基づくと、ローズベンガル二ナトリウムのバイオアベイラビリティは、１％未満（＜１％）であると結論付けられた。ｐＨ値が＜４である胃において、ＨＸ化合物は、ラクトン型である可能性が高い。胃でのラクトンへの変換は、そのＨＸ化合物を破壊しないが、このようなラクトン型への変換は、腸での吸収に必要な可溶性塩の形態への再変換に対して動態学的及び熱力学的な障壁となり得る。

【0079】

米国特許出願第１７／２１４５９０で論じられている、Ａｐｃ^ｍｉｎマウスを用いた研究は、飲料水中の４ｍｇ／ｍＬを自由に消費したそれらのマウスが、疾患の発症を停止したことを示した。それにより、それらのＡｐｃ^ｍｉｎマウスは、およそ８ｍｇ／１０ｇ／日＝８００ｍｇ／ｋｇ／日を消費したと理解される。その量は、そのような用量に耐えられることを示す毒性学データと一致する。例えば、食品着色料（Ｆｏｏｄ Ｒｅｄ Ｎｏ．１０５）としてのローズベンガルを調べたＩｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ，７７：２７７－２８１（１９８６）では、Ｃ５７ＢＬ６Ｎマウスに対して９７０ｍｇ／ｋｇ／日という用量で２年間、継続的に自由に摂取させたローズベンガルに十分耐えられることが見出されている。以前に使用された静脈内（ＩＶ）肝臓診断薬は、標準的な６０ｋｇの成人の場合の１．９ｍｇ／ｋｇと等しい、１１２ｍｇのローズベンガルをボーラスとして送達されていたが、これは、罹患をもたらすと報告されていない。

【0080】

経口投与用の液体薬学的組成物は、血漿の浸透圧未満の浸透圧を有することが好ましい。血漿の浸透圧の正常な（十分な）ヒト参照範囲は、１キログラムあたり約２７５～２９９ミリオスモル（ｍＯｓｍ／ｋｇ）である。

【0081】

より好ましくは、その組成物は、マンニトール及びデキストロースのような糖などの等張化剤（又は張度調整剤）、プロピレングリコール、グリセロール及びソルビトールなどのＣ_３－Ｃ_６ポリヒドロキシ化合物、塩化ナトリウムもしくは塩化カリウムなどの等張塩、並びに／又は風味及び穏やかな緩衝作用（５ｍｍｏｌ未満の緩衝剤）のために提供され得る、クエン酸、リンゴ酸、酢酸及び他の食物の酸並びにそれらの塩などの緩衝剤以外の緩衝剤を含まない。胃及び下部消化管は、通過する材料に対して適切な張度を提供するように十分適合されており、さらなる塩及び／又は緩衝剤を必要としない。周知であるように１つ以上の薬学的に許容され得る味覚マスキング剤又は香味料は、組成物の飲用性を高めるために最大約５重量％で存在できる。

【0082】

水性ビヒクル中でＨＸ化合物の最大溶解度を得るため、及び生物学的組織との適合性を確保するためには、薬学的に許容され得る水性希釈剤のｐＨ値が約５～約９であることが好ましい。特に好ましいｐＨ値は、約５～約８であり、より好ましくは、約６～約７．５である。これらのｐＨ値では、ハロゲン化キサンテンは通常、低ｐＨ値で形成されるラクトンではなく、二塩基性の形態のままである。

【0083】

ローズベンガルなどのＨＸ化合物は、２．５２及び１．８１というｐＫａ値を有する二塩基性である。いくつかの企図されるハロゲン化キサンテンに対するｐＫａ値の決定は、Ｂａｔｓｉｔｅｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｉｍ Ａｃｔａ Ｐａｒｔ Ａ ７９（５）：８８９－８９７（２０１１年９月）に見られる。

【0084】

本発明において、ここでの目的が最終的に、細胞傷害濃度のハロゲン化キサンテン化合物を、白血病細胞をハロゲン化キサンテン化合物と接触できる白血病細胞環境に提供することであるので、その組成物が腫瘍に病巣内注射される場合のように、薬学的組成物中のハロゲン化キサンテン化合物の具体的な量は、重要ではないと考えられている。本明細書中の以後に提供されるデータは、ローズベンガル二ナトリウムのＩＣ_５０濃度が、インビトロで培養された白血病細胞に対して約５０～約１００μＭであることを示している。

【0085】

インビトロで培養された白血病細胞を用いたときの上記で述べた結果は驚いたことに、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：１－１５（２０１９）によって報告された、培養されたＳＫ－Ｎ－ＡＳ、ＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）、ＩＭＲ５、ＬＡＮ１、ＳＨＥＰ及びＳＫ－Ｎ－ＳＨ神経芽腫細胞、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ神経上皮腫細胞、並びに正常な初代線維芽細胞、ＢＪ線維芽細胞及びＷＩ３８線維芽細胞のインビトロ細胞傷害性研究において得られたデータと類似のデータを提供した。その著者らは、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で処置された細胞に対する最大半量阻害濃度（ＩＣ_５０）値が、処置の９６時間後において、アッセイされた神経芽細胞腫株に対しては６５～８５μＭ、及び神経上皮腫株ＳＫ－Ｎ－ＭＣに対しては４９μＭであったことを報告した。その著者らは、３つの組織起源からのヒト上皮細胞に対する毒性も調べ、９３～１４３μＭというＩＣ_５０値を報告した。

【0086】

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の臨床研究において、ＲＢは、ＩＶ送達された１５００ｍｇにおいて許容された。ＲＢが循環から迅速にクリアランスされる（ｔ_１／２が約３０分である）ことに起因して、ＩＶ投与は、単回の投与の間に、循環中のＲＢのピークレベルを維持するために（すなわち、最大数時間又はそれ以上にわたって）、持続注入を必要とし得る。

【0087】

企図される固体薬学的組成物の特色
ＲＢもしくはＲＢ二ナトリウムなどのＨＸ化合物又はＲＢラクトンなどのＨＸ化合物ラクトンが、胃を通過して腸でＨＸ化合物を放出するために腸溶コーティングされた、経口投与用の固体の薬学的組成物として投与されることがさらに企図される。ＨＸ化合物は、通常、固体の希釈媒体中に溶解されているか、又は希釈媒体に溶解もしくは希釈媒体上に分散されている。

【0088】

経口投与された固体の医薬製品の哺乳動物の身体内での溶解において果たされる因子がいくつかある。それらの因子には、消化管に沿った種々の位置における薬剤の滞留時間、粒径、口から肛門までに遭遇する可能性のある体液における薬剤の個々の成分の溶解度、様々なコーティング層が存在する場合にはそれらが薬剤に適用される順序、並びに特定のコーティング層が可溶性であるｐＨ値が含まれる。

【0089】

例えば、強酸性の胃の環境（絶食状態ではｐＨ１．５～２、摂食状態ではｐＨ３～６）は、十二指腸において約ｐＨ６に急上昇し、回腸末端のｐＨ７．４まで小腸に沿って上昇する。盲腸のｐＨ値は、ｐＨ６をわずかに下回り、結腸で再び上昇して直腸でｐＨ６．７に達する［Ｈｕａ，Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。ヒトの胃のｐＨ値を有する水溶液にＲＢ二ナトリウムの溶液を混合したのを観察したところ、その混合物は急速に混濁し、それまで可溶性であったＲＢ二ナトリウムがおそらくラクトン型に凝集することが明らかになった。

【0090】

胃の通過は、絶食状態で０～２時間の範囲であり得、摂食状態では最大６時間まで延長し得る。一般に、小腸の通過時間は、３～４時間前後で比較的一定と考えられているが、健康個体では２～６時間の幅があり得る。結腸の通過時間は、大きく変動することがあり、６～７０時間の範囲が報告されている［Ｈｕａ，Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。

【0091】

薬物が循環器系に吸収されるためには、消化管の内壁を裏打ちする上皮細胞を通過又は透過しなければならない。所与の薬物の上皮細胞による吸収を防ぐことができる細胞バリアは、細胞膜である。細胞膜は、本質的に、半透膜を形成する脂質二重層である。

【0092】

純粋な脂質二重層は、一般に、無電荷の小さな溶質のみ透過させる。ゆえに、イオン性分子は帯電しているので、分子がイオン化しているか否かが吸収に影響する。溶解度は、荷電種に有利に働き、透過度は、中性種に有利に働く。

【0093】

上皮細胞膜は、リン脂質二重層で構成されているので、通常、イオンは、消化管を通って受動的に拡散することができない。この二重層は、２層のリン脂質で構成されており、帯電した親水性頭部が外側を向いており、帯電していない疎水性脂肪酸鎖が、層の中央に存在する。無電荷の脂肪酸鎖は、イオン化した荷電分子に反発する。これは、イオン化した分子が、腸管膜を容易に通過できず、吸収されないことを意味する。

【0094】

エステル化による化学修飾を用いることにより、溶解度を制御することができる。例えば、ＨＸ化合物のＣ_２－Ｃ_４アルキルエステル及び芳香族エステルの形態は、通常、水性液体への溶解度が低く、そのイオン電荷が中性であるため、通常、カルボン酸の形態よりも腸上皮細胞によってより良好に取り込まれる。後に、消化管壁内及び血液中のエステラーゼが、これらのエステルを加水分解することにより、親薬物が放出される。

【0095】

また、錠剤又はペレットへのコーティングフィルムは、一般に水性媒体中、特に胃における、組成物の溶解及び／又は崩壊の速度を低下させるバリアとして作用することができる。コーティングは、溶解が起きる場所を変更するためにも使用することができる。例えば、薬物を含む薬剤に腸溶コーティングを適用することができ、その結果、そのコーティング及び薬物は、腸の基本的な環境でのみ溶解する。消化管の腸の部分及び／又は消化管の特定の位置における薬剤からの薬物の予測可能な放出にとって有用なアプローチの１つは、事前に選択された消化管のｐＨ値（例えば、先に述べたもの）において溶解又は崩壊するｐＨ特異的なコーティング及びマトリックスに依存するものである。

【0096】

下記の表は、標的化放出（局所処置）の目的で単独又は組み合わせで使用されてきたｐＨ依存性ポリマーコーティングのいくつかの例を示しており、それには、いくつかのメタクリル樹脂（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）としてＥｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＡＧ，Ｅｓｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙから商業的に入手可能）及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）としてＤｕＰｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから入手可能、及びＢｅｎｅｃｅｌ（商標）としてＡｓｈｌａｎｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから入手可能）誘導体も含まれる。腸溶コーティングは、特定のｐＨ値範囲において放出の引き金を引くことに加えて、組み込まれた活性な作用物質を苛酷な消化管環境（例えば、胃液、胆汁酸及び微生物分解）から保護でき、延長及び遅延された薬物放出プロファイルをもたらして、治療効率を高めることができる。

【0097】

各ポリマーに対する「公開されている放出ｐＨ」値は、製造者からのものである。この「公開されている放出ｐＨ」値は、すべての組成物又は環境に対して絶対的なものではなく、本明細書中で述べられる溶解又は崩壊のためのｐＨ値は、これらの公開された値に基づく。

【0098】

【表1】

【0099】

従来の非標的化療法は、標的部位に到達する前に薬物が全身に吸収されるため、望ましくない副作用及び低い有効性を有することがあるので、結腸での放出のために、結腸を標的とした薬物送達系が盛んに探求されている。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．７４：３１１－３１５（２０１０）は、内層用の、緩衝剤を含む、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓのアルカリ性水溶液、及び外層用のＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓの有機溶液を使用することによって、二重コーティングのアプローチを採用し、７を超えるｐＨでの薬物溶解を加速させた。続いて、Ｖａｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．８４：５７３－５７７（２０１３）は、この二重コーティングされた系のインビボ性能をヒトにおいて評価したところ、二重コーティングされた錠剤が、主に下部腸管において、より安定して崩壊することが実証された。

【0100】

Ｈａｓｈｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３：４２０－４３４（２０１３）は、プレドニゾロンの結腸送達のために、時間依存性の系とｐＨ依存性の系とを組み合わせたミクロスフェアを開発した。Ｈａｓｈｅｍらは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓとエチルセルロースとの組み合わせを用いることによって、上部腸での薬物の早期放出を防ぎつつ、結腸へのより大きな薬物送達を達成した。

【0101】

Ｅｕｄｒａｃｏｌ（登録商標）は、結腸への標的化薬物送達を薬物の遅延放出かつ均一放出で提供する複合技術の別の例である。この系は、ペレットをＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬ／ＲＳ及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ ３０Ｄでコーティングすることに基づき、ｐＨ及び時間に依存した様式で結腸特異的な薬物放出をもたらす［Ｐａｔｅｌ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．８：１２４７－１２５８（２０１１）］。

【0102】

小腸を標的とする組成物の１つは、約６０～約９５重量％のフリーラジカル重合した、アクリル酸又はメタクリル酸のＣ_１－Ｃ_４－アルキルエステル、及び約５～約４０重量％の、アルキルラジカルに酸性基を含む（メタ）アクリレートモノマーから構成される１層又は複数層の（メタ）アクリレート共重合体でコーティングされた粒状のローズベンガル（ＲＢ）でコーティングされた糖／スクロースビーズの希釈媒体を含む。

【0103】

特に好適な（メタ）アクリレート共重合体は、約１０～約３０重量％のメタクリル酸メチル、約５０～約７０重量％のアクリル酸メチル及び約５～約１５重量％のメタクリル酸（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳタイプ）を含む。同様に好適なのは、約２０～約４０重量％のメタクリル酸及び約８０～約６０重量％のメタクリル酸メチル（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓタイプ）の（メタ）アクリレート共重合体である。単語「（メタ）アクリレート」は、アクリレートモノマーとメタクリレートモノマーのいずれか又は両方を使用できることを意味するために本明細書中で使用される。

【0104】

これらのコーティングポリマーは、その粒子が胃から出る前に任意のＨＸ化合物をほとんど放出させない。十二指腸内の流体のｐＨ値は通常、約６であり、回腸に向かって約７．４に上昇する。

【0105】

通常の錠剤又はロゼンジは、高速ミキサー（ＤＩＯＳＮＡタイプＰ１０，Ｏｓｎａｂｒｕｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において混合されたラクトース（２０％）と活性成分（８０％；ＨＸ化合物）との混合物によって調製され得る。均一な組成物が得られるまで、ポビドン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ，Ｂｕｃｈｓ，ＣＨ）などのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）賦形剤を含む水溶液を少量ずつ加える。その湿った粉末混合物をふるいにかける。その後、周知であるように、それらから錠剤を作製し、乾燥させる。

【0106】

その後、得られた錠剤又はロゼンジは、たいてい流動床装置を用いて、好ましくは保護性ポリマーフィルムでコーティングされる。フィルム形成ポリマーは、通常、周知のプロセスによって可塑剤及び離型剤と混合される。そのフィルム形成剤は、この場合、溶液又は懸濁液の形態であり得る。フィルム形成用の賦形剤も、同様に溶解又は懸濁され得る。有機溶媒もしくは水性溶媒又は有機分散剤もしくは水性分散剤が使用され得る。分散液を安定化するために安定剤をさらに使用できる（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０又は他の好適な乳化剤もしくは安定剤）。

【0107】

離型剤の例は、モノステアリン酸グリセロールもしくは他の好適な脂肪酸誘導体、ケイ酸誘導体又はタルクである。可塑剤の例としては、プロピレングリコール、フタレート、ポリエチレングリコール、セバケート又はシトレート、並びに上記及び文献で述べられた他の物質が挙げられる。

【0108】

別の好ましいタイプの薬剤は、水溶性のカプセル又はブリスターであって、そのカプセルが水又は体液において溶解又は崩壊したらすぐにＨＸ化合物を放出する１層以上のポリマー樹脂で覆われた、ローズベンガル二ナトリウム又はローズベンガルラクトンなどのＨＸ化合物の複数の粒子を含む水溶性のカプセル又はブリスターである。カプセルは通常、ゼラチンでできており、ジェルカプセルと称されることが多い。ゼラチンは、動物性の生成物である。菜食主義者向けのカプセルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）でできていることが多い。

【0109】

いくつかの実施形態において、ＨＸ化合物は、１以上のポリマーコートで直接積層されることにより、概して球状の形状である粒子が形成される。そのような粒子は、ビーズと称されることが多い。好ましい態様において、粒子（ビーズ）は、約９０重量パーセントが２０メッシュの篩（開口部＝８５０μｍ）スクリーンを通り抜け、約９０重量パーセントが、８０メッシュの篩（開口部＝１８０μｍ）スクリーン上に保持されるようなサイズにされる。

【0110】

例示的なｐＨ値感受性のコーティングポリマー樹脂は、上で論じた。コーティングポリマー樹脂のｐＨ値感受性は、上で論じられたものなど、消化管に沿って生理的に存在するｐＨ値に関して理解されるべきである。

【0111】

他の実施形態では、概して球形の小さなコアである、糖／デンプンのシード、ノンパレル又は小球などの小さなペレットが、１層又は複数層のＨＸ化合物及び１層以上のポリマーコーティングでコーティングされる。例証的な糖／デンプンコアは、約４０メッシュの篩（４２５ｍｍの開口部）スクリーンから約５０メッシュの篩（３００ｍｍの開口部）スクリーンを通り抜ける糖スフェアＮＦであって、６２．５パーセント以上且つ９１．５パーセント以下のスクロース（乾燥ベースで計算される）を含み、残りは主にデンプンからなる糖スフェアＮＦである（ＵＳＰ ＮＦ １９９５ ２３１３）。

【0112】

例証的な例では、１００キログラム（ｋｇ）の量のローズベンガル二ナトリウム、７．１ｋｇの量の架橋カルボキシメチルセルロース（好ましくは、クロスカルメロースナトリウムＮＦ）、及び１１．９ｋｇの量のデンプンＮＦを各々半分に分け、これら３つの成分を一緒にブレンドして、２つの同一のバッチを形成する。各バッチを、Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ Ｍｉｌｌなどの粉砕機を用いて８０メッシュスクリーンに通して粉砕する。次いで、その粉砕された２つのバッチをブレンドして混合物を形成し、それを、当業者に周知の一般に認められた品質保証試験法に従って組成について試験する。

【0113】

その後、上記ローズベンガル二ナトリウム混合物を３等分し、第１の部分は、そのまま残し、第２及び第３の部分は、それぞれ５０パーセント、３０パーセント及び２０パーセントのロットに分割する。ステンレス鋼コーティングパンに、２５．６ｋｇの量の４０～５０メッシュの糖／デンプンのシード（例えば、糖スフェアＮＦ）を入れる。粒子上に噴霧するために、８０リットル（Ｌ）の量の５パーセントのポビドン／イソプロパノール（ＩＰＡ）溶液を調製する。

【0114】

コーティングパンは、糖スフェアから開始され、その上にポビドン－アルコール溶液の適用を噴霧し（１回の適用につきおよそ０．１７３ｋｇ）、その上に第１の部分（そのまま残された部分）のローズベンガル二ナトリウム混合物を振りかけて適用する（およそ０．３２ｋｇ）。振りかけは、標準的なふるいを用いて行われる。噴霧及び振りかけの工程は、混合物の第１の部分が糖スフェアに適用され、部分的にコーティングされたスフェアのバッチを形成するまで続けられる。

【0115】

次いで、部分的にコーティングされたスフェアを、２つのロットに等分し、各ロットをコーティングパンに入れる。この２つのロットの各々について別々に、ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及び５０パーセントのロットに分けられたローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを、それらの５０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで継続する。５０パーセントのロットを適用した後、必要であれば２５メッシュスクリーンを用いてスフェアをふるいにかけることができる。

【0116】

ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧と、３０パーセントのロットに分けられたローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを開始し、それらの３０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで継続する。コーティングされたスフェアは、２５メッシュスクリーンを用いて再度ふるいにかけられ得る。

【0117】

２０パーセントのロットに分けた混合物を用いて、それらの２０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで、ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及びローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを継続する。このプロセスのこの時点において、ローズベンガル二ナトリウム混合物の全量がスフェアに適用され、約５０ｋｇの５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液がスフェアに適用された。

【0118】

７．５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液を調製し、シーラントとしてスフェアに適用する。シールされたスフェアを、約１時間タンブル乾燥し、計量し、約１２２°Ｆ（５０℃）のオーブン内に２４時間置く。乾燥後、スフェアを２０メッシュスクリーン及び３８メッシュスクリーンのふるいにかけて、即時放出粒子（遅延型粒子に比べて迅速又は高速）を形成する。

【0119】

また、上で論じたＨＸ化合物含有スフェア又はそのカプセル（又はブリスター）を、先に論じたようにｐＨ値感受性の腸溶コーティングポリマーでコーティングすることもでき、それらのスフェアは、消化管で放出されても、ｐＨ値が少なくとも所望の消化管の位置のものでなければ、活性成分であるＨＸ化合物をその周囲に提供しない。

【0120】

ＨＸ化合物の放出位置を制御する別のやり方は、上で論じたスフェア（ＨＸでコーティングされた粒子）をさらにコートすることであり、それらのスフェアからのＨＸ化合物の放出が制御され、６～１０時間にわたって放出されるように、スフェアの表面にポリマー樹脂の溶解制御コートが適用される。この目的のために用いられる材料は、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチル－セルロース、並びにエタクリル酸及びメタクリル酸の共重合体（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））であり得るがこれらに限定されないか、又は他の任意のアクリル酸誘導体（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）など）を使用することができる。

【0121】

さらに、腸溶コーティング材料も、単独で、又は上記の非ｐＨ感受性コーティングと組み合わせて、使用され得る。これらの材料としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、及びあらゆるセルロースエーテルのフタル酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、アクリル酸誘導体（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））のフタル酸エステル、又は酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。

【0122】

これらのコーティング材料は、表面をコーティングする際に約１．０パーセント（ｗ／ｗ）～約２５％（ｗ／ｗ）の量で使用され得る。好ましくは、これらのコーティング材料は、約８．０～約１２．０パーセント（ｗ／ｗ）で存在する。

【0123】

賦形剤
薬学において通例の賦形剤は、ＨＸ化合物含有薬剤の生成において、それ自体公知の様式で使用され得る。これらの賦形剤は、コア又はコーティング剤に存在し得る。

【0124】

ポリマー
糖小球又は糖スフェアへのＨＸ化合物の接着を助ける際に接着剤として使用されるポリマー材料は、ＨＸ化合物のコーティング層が使用される場合、賦形剤であるとみなされる。そのようなポリマーの例示は、他の水溶性の薬学的に許容され得るフィルム形成ポリマー、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースであるような、ポリビニルピロリドン及びポリビニルアルコールである。

【0125】

乾燥促進剤（非粘着剤）
乾燥促進剤は、以下の特性を有する。乾燥促進剤は、比表面積が大きく、化学的に不活性であり、流動性であり、微細な粒子を含む。これらの特性のため、乾燥促進剤は、官能基として極性コモノマーを含むポリマーの粘着性を低下させる。乾燥促進剤の例は、アルミナ、酸化マグネシウム、カオリン、タルク、ヒュームドシリカ、硫酸バリウム及びセルロースである。

【0126】

崩壊剤
崩壊剤は、脱凝集を助けるために経口固形剤形に加えられる。崩壊剤は、固形剤形が水分と接触したときに急速に崩壊させるために製剤化される。崩壊は、通常、溶解プロセスにおける第１の工程とみなされる。例証的な崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）及びデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。

【0127】

離型剤
離型剤の例は、脂肪酸又は脂肪酸アミドのエステル、脂肪族の長鎖カルボン酸、脂肪アルコール及びそれらのエステル、モンタンろう又はパラフィンろう及び金属せっけんであり、特に、モノステアリン酸グリセロール、ステアリルアルコール、グリセロールベヘン酸エステル、セチルアルコール、パルミチン酸、カルナウバろう、蜜ろうなどが挙げられるだろう。通常の相応の量は、共重合体に基づく０．０５～５重量パーセント、好ましくは、０．１～３重量パーセントの範囲内である。

【0128】

薬学における通例の他の賦形剤
例えば、安定剤、着色料、酸化防止剤、湿潤剤、色素、光沢剤がここで挙げられるだろう。それらは通常、加工助剤として使用され、信頼できる且つ再現性のある生成プロセス及び良好な長期貯蔵安定性を保証するために意図されている。薬学における通例のさらなる賦形剤は、ポリマーコーティングに基づく０．００１重量％～１０重量％、好ましくは、０．１～１０重量％の量で存在し得る。

【0129】

可塑剤
可塑剤として適した物質は通常、１００～２０，０００の分子量を有し、その分子内に１つ以上の親水性基、例えば、ヒドロキシル基、エステル基又はアミノ基を含む。クエン酸、フタル酸、セバシン酸、ひまし油が好適である。さらなる好適な可塑剤の例は、クエン酸アルキルエステル、グリセロールエステル、フタル酸アルキルエステル、セバシン酸アルキルエステル、スクロースエステル、ソルビタンエステル、セバシン酸ジブチル及びポリエチレングリコール４０００～２００００である。好ましい可塑剤は、クエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、セバシン酸ジブチル及びセバシン酸ジエチルである。使用される量は、（メタ）アクリレート共重合体に基づく１～３５、好ましくは、２～１０重量％である。

【0130】

全身バイオアベイラビリティの最適化
固体薬剤の組成物によって送達されるＨＸ化合物の量は、水性組成物からの量と実質的に同じである。ＩＣ_５０レベルの循環ＲＢ濃度を達成するのに十分な、例証的なＨＸ化合物としての、ＲＢの投与は、定義上、循環しているすべての白血病細胞に対して毒性ではないだろう（すなわち、ＩＣ_５０では、白血病細胞のおよそ半数しか影響されないだろう）。いくつかの実施形態において、およそ１５００ｍｇ（すなわち、３００ｍＭ）までの、ＩＣ_５０レベルの倍数である量でＲＢを投与することが好ましいことがある。しかしながら、一方で、個々の投与の結果として、腫瘍細胞の一部だけを殺滅することで十分である場合がある。

【0131】

急速に殺滅された腫瘍細胞の負荷に起因し得る毒性反応（すなわち、「腫瘍崩壊症候群」）を回避するために、後者の場合が好ましいことがある。例えば、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６４（１９）：１８４４－１８５４（２０１１年５月１２日）では、腫瘍崩壊症候群は、白血病などの血液癌を処置する医師が遭遇する最も一般的な疾患関連緊急事態であると報告されている。

【0132】

下記でより詳細に論じるように、残存する白血病細胞の負荷に対して機能的な免疫応答を惹起するために、単一の処置において白血病細胞の一部だけを殺滅することも有益であり得る。ＲＢによって惹起される機能的な免疫系応答は、少なくとも部分的に、体内に循環する、ＲＢによって引き起こされた壊死細胞残屑の作用によって生じると考えられており、ＲＢなどのハロゲン化キサンテンの初回投与の効果を延長することができる免疫応答を誘導する。

【0133】

誘導された免疫応答が生じるのには、接触した白血病細胞の即座の殺滅よりも長い時間がかかることがある。この効果の遅れの理由は、白血病細胞を攻撃して殺滅するのに適切なＢ及びＴ細胞の集団を誘導するため、並びに、その循環が続くことで患者を再発から守ることができる持続性のメモリーＴ細胞を誘導するために時間が必要であるからであり得る。このような初期の遅れは、そのように誘導されたメモリー免疫細胞に起因して、被験者の生涯にわたって増強され得る。

【0134】

併用処置
別の態様では、上記の薬学的組成物は、第２の異なって作用する抗白血病全身性細胞傷害剤、すなわち、作用機序がＨＸ化合物である第１の細胞傷害剤のそれと異なる抗白血病細胞傷害剤とともに使用される。先に述べたように、ハロゲン化キサンテンは、癌細胞のリソソームに局在し、細胞周期のＧ１期にある細胞のパーセンテージを上昇させ、アポトーシスによる細胞死を誘導する［Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ，１２：１２９３－１３０７（２０１９年２月）］。

【0135】

第１のタイプの第２の抗白血病全身性細胞傷害剤は、いわゆる「小分子」である。そのような小分子は、白血病細胞の殺滅において非白血病細胞よりも概して特異的であるに過ぎないという点において、半特異的な細胞毒ととらえることができる。ほぼすべての小分子抗癌剤が、企図されるＨＸ化合物よりも白血病特異性が低く、そのレシピエント被験体に対して病的状態、禿頭症及び他の外傷を引き起こすことがあり、それは、被験体の処置レジメン離れをもたらす可能性がある。

【0136】

これらの小分子は、通常、約１５０～約１０００ダルトン（Ｄａ）、好ましくは、約２５０～約８５０Ｄａの分子量を有する。この群の小分子には、カリケアマイシン（１３６８Ｄａ）、ビンブラスチン（８１１Ｄａ）、ビンクリスチン（８２５Ｄａ）、イマチニブ（４９４Ｄａ）、モノメチルオーリスタチン（７１８Ｄａ）、エトポシド（５８９Ｄａ）、ダウノルビシン（５２８Ｄａ）、ドキソルビシン（５４４Ｄａ）、クラドリビン（２８６Ｄａ）、フルダラビン（３６５Ｄａ）、ミトキサントロン（４４４Ｄａ）、６－チオグアニン（１６７Ｄａ）、メトトレキサート（４５４Ｄａ）、６－メルカプトプリン（１５２Ｄａ）、アザシチジン（２４４Ｄａ）、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）（６４０Ｄａ）、ソラフェニブ（４６５Ｄａ）、クロファラビン（３０４Ｄａ）、シスプラチン（３００Ｄａ）、イリノテカン（５８７Ｄａ）及びシタラビン（２４３Ｄａ）などの血液学的白血病を処置するために使用される小分子の多くが含まれる。上記の抗白血病小分子の１つ以上が、第２の白血病用細胞傷害剤を構成し得る。これらの小分子の多くが、それらの塩、プロドラッグ及び／又はエステル（これらは結果的に上記のそれらのおおよその値よりも大きい分子量を有する）として使用されることに注意されたい。

【0137】

第２の抗白血病全身性細胞傷害剤を有する薬学的組成物は、タンパク質、洗浄剤、及び／又はポリ（エチレングリコール）［ＰＥＧ］などのポリマーなどのより大きな分子に結合体化された上記の小分子も含み得る。そのような結合体は、小分子の毒性を最小限に抑えることが多く、白血病細胞に結合する抗体の使用のように送達位置を強化することが多い。さらに、小分子細胞傷害剤は、白血病細胞に特異的に結合するように及び／又は白血病細胞によってエンドサイトーシスされるように適合され得る、リポソーム、ミセル又はシクロデキストリン分子内に包まれ得る。この被包及び結合体化された小分子の群は、その活性な細胞傷害剤が小分子であるので、先に論じられた第２の全身性細胞傷害剤の小分子の群に含められる。

【0138】

そのような第２の抗白血病全身性細胞傷害剤の例示は、リポソームダウノルビシン、リポソームアンナマイシン、スフィンゴソームビンクリスチン、リポソームシタラビン、ゲムツズマブオゾガミシンと呼ばれるカリケアマイシン結合体化ＣＤ３３抗体、及びブレンツキシマブベドチンと呼ばれるＣＤ３０抗体とモノメチルオーリスタチンＥとのキメラである。

【0139】

簡潔には、リポソームは、概して球形の人工小胞であって、１つ又は２つの二重層を構成し、小分子である第２の全身性細胞傷害剤を被包して送達を補助する、コレステロール及びリン脂質分子から通常は調製される小胞である。Ａｋｂａｒｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｓｃａｌｅ Ｒｅｓ Ｌｅｔｔ，８：１０２（２０１３）を参照のこと。

【0140】

カリケアマイシンは、高分子量の小分子（１３６８Ｄａ）であり、結合した４つのサッカライドがベンゾチオエートＳ－エステル結合によって中断されたもの、ならびにＤＮＡ配列を切断するエン－ジイン基を含む。カリケアマイシンは、毒性が強すぎて単独で使用できず、ヌードマウスにおけるＬＤ_５０は、３２０μｇ／ｋｇである［ＤｉＪｏｓｅｐｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３：１８０７－１８１４（２００４）］。同様に、モノメチルオーリスタチンは、ＣＤ３０（細胞膜タンパク質且つ癌マーカーであるＴＮＦレセプターファミリーメンバー）に対する抗体への結合によって媒介される、一般的な（広範囲の）高い毒性を示し［いくつかの癌細胞株に対して＜１ｎＭのＩＣ_５０；ＡｐｅｘＢｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇ（２０１３）］、大細胞型リンパ腫及びホジキン病に対して有用と報告された［Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０２：１４５８－１４６５（２００３）］のに対して、抗ＣＤ７９ｂモノクローナルへの結合は、ＮＨＬの３つの異種移植モデルの処置において利点を提供した［Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１４：２７２１－２７２９（２００９）］。

【0141】

小分子（非タンパク質性で約１０００グラム／モル未満）であるか又はより大きなタンパク質性分子である全身性抗白血病薬は、その薬が被験体の身体全体に広がるように、処置される哺乳動物被験体に投与される。静脈内投与が、薬の広がりを達成する好ましい方法の１つである。一方、イマチニブは通常、経口投与される。

【0142】

白血病の処置に有用な例証的な小分子抗癌薬としては、親出願の第１６／６８８，３１９において使用されたドキソルビシン、エトポシド、ビンクリスチン、シスプラチン、イリノテカン及びシタラビンが挙げられるのに対して、例示的なタンパク質性分子は、ペグアスパラギナーゼである。それらの小分子薬のうち、各々が哺乳動物被験体にＩＶ投与され得るドキソルビシン、エトポシド及びビンクリスチンは、致死量未満のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液による処置において相乗作用を示すとみられ、好ましい。

【0143】

本明細書中で論じられる第２の白血病用全身性細胞傷害剤のいずれかの投与は、複数回試みることができることが理解されるだろう。そのような複数回の投与は、処置する医師の権限の範囲内であり、第１の白血病用細胞傷害剤であるＨＸ化合物の投与とともに行うこともできるし、別々に行うこともできる。

【0144】

小分子全身性抗白血病薬の有用な有効投与量は、ＦＤＡ、国家機関又は国際機関が承認した薬のラベル情報に示された投与量である。通常、単剤療法の投与スケジュールは、初期段階の臨床試験において最大耐用量（ＭＴＤ）を決定することによって設定される。次いで、そのＭＴＤ（又はそれに近い変動値）は、有効性の評価及びより詳細な安全性の評価のために、後期臨床試験に公表される。これらのＭＴＤはしばしば、臨床試験終了後、確立された治療用量となる。しかしながら、その小分子全身性抗白血病薬は、固体又は液体製剤においてＨＸ化合物とともに使用することが企図されているので、ＭＴＤは、通常使用される最大量であり、通常の手順に従って下方に用量設定される量である。

【0145】

本発明におけるハロゲン化キサンテン療法と併用され得るいくつかの全身性抗癌（抗白血病）薬（剤）の例示的な投与スケジュールを、下記の表Ａに提供する。下記に列挙される薬のいくつかは、上で定義されたような「小分子」であるのに対して、他のものは、抗体、好ましくはモノクローナル抗体などの大きなタンパク質性分子であり、炎症性ケモカイン活性を阻害することに注意されたい。それにもかかわらず、それらは、全身投与される。表Ａの薬は、通常、単一の活性な作用物質として使用される。しかしながら、本明細書中以後で論じられる免疫チェックポイント阻害抗体と同様に、１つ以上のもの、特に抗体を一緒に使用することもできる。

【0146】

【表2】

【0147】

相加効果又は相乗効果があるため、本発明の併用療法及び処置方法は、一般に、下記の治療などのＩＶ投与治療とともに使用されるとき、表Ａに記載されているものなどの全身性の作用物質の典型的な投与スケジュール以下のレベルでその全身性の作用物質を使用することを許容する。しかしながら、表Ａに提供された投与スケジュールは、処置を開始するための有用な指針を提供するものであり、そこから投与量を、所与の患者を担当する医師が適切と判断する量まで漸減することができる。

【0148】

ＨＸ化合物と第２の抗白血病細胞傷害剤とは、一緒に投与される必要もないし、同じ投与手段で投与される必要もないことに注意されたい。したがって、第１の抗白血病細胞傷害剤であるＨＸ化合物を投与するために丸剤又はカプセルの形態を使用することができるのに対して、イマチニブのような小分子又は大分子の第２の抗白血病剤は、ＩＶ又は経口によって投与される。当業者は、抗白血病剤を投与する様々な方法を承知している。

【0149】

ＲＢ二ナトリウム水溶液中又は前記の固形剤形に存在するものなど、ハロゲン化キサンテンとの併用処置に有用な第２のタイプの第２の全身性細胞傷害剤は、特別な全身性抗白血病薬とも見なすことができる免疫チェックポイント阻害剤である。免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞及び一部の白血病細胞などの免疫系細胞によって産生されるある特定のチェックポイントタンパク質に結合してそれを遮断する薬物である。それらのタンパク質は、遮断されないと免疫応答を阻害して、免疫応答の抑制を助け、Ｔ細胞又は他の免疫細胞が白血病細胞を殺滅しないようにする。それらの免疫チェックポイントタンパク質を遮断することにより、免疫系に対する「ブレーキ」が解除されて、免疫細胞が活性化されること及び白血病細胞を殺滅することが可能になる。

【0150】

有用な免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体もしくはヒト化モノクローナル抗体又はそれらの結合部分であり、その投与により、それらのある特定のタンパク質の作用が遮断される。その遮断により、免疫系が白血病細胞を異物として認識すること、及びそれらの白血病細胞を体内から排除するのを助けることが可能になる。

【0151】

例証的な免疫チェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ－４活性を阻止することによって免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、ゆえに白血病に対するＴ細胞応答を増強するようにデザインされた、抗ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４）モノクローナル抗体であるイピリムマブ及びトレメリムマブが挙げられる。同様に、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ、チスレリズマブ（ｔｉｓｌｅｌｉｚｕｍａｂ）、スパルタリズマブ（ｓｐａｒｔａｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）、ペンブロリズマブ、カムレリズマブ（ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、シンチリマブ（ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ）、トリパリマブ（ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ）及びドスタルリマブ（ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ）などのモノクローナル抗体が、ＰＤ－１（プログラム死１）レセプターに結合して、免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、癌性細胞に対するＴ細胞応答を増強する。ＰＤ－１レセプター（抗ＰＤ－１）に対する免疫チェックポイントタンパク質リガンド（抗ＰＤ－Ｌ１）を標的化する３つのモノクローナル抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ及びデュルバルマブである。ＰＤ－１レセプターリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対する抗体（例えば、ＰＤ－Ｌ１に対するＢＭＳ－９３６５５９及びＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ））を用いた最初の研究も、免疫系のダウンレギュレーションの阻害及び白血病に対するＴ細胞応答の増強を示している。

【0152】

上記の免疫チェックポイント阻害抗体は、単独でＨＸ化合物とともに投与されたとき、並びに異なる２タイプの免疫チェックポイント阻害剤をＨＸ化合物とともに使用して投与されたとき、有用であることが見出されている。Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣＩＥＴＹ ｏｆ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＯＮＣＯＬＯＧＹ（ＡＳＣＯ）２０２０ ＶＩＲＴＵＡＬ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＰＲＯＧＲＡＭ（２０２０年５月２９～３１日）のポスターには、抗ＰＤ－１抗体の全身投与又は抗ＰＤ－１抗体とＣＴＬＡ－４抗体の両方の全身投与とともに、ローズベンガル二ナトリウムを、肝臓に転移したブドウ膜黒色腫の腫瘍内に注射して使用した研究のデータが提供された。

【0153】

より最近では、チェックポイント阻害活性を有するいくつかのさらなる抗体群が特定された。それらの作用の類似性から、それらは、本明細書中で免疫チェックポイント阻害剤であるとみなされる。１つの例証的な群は、細胞表面レセプターＯＸ４０（ＣＤ１３４）と免疫反応して、メモリーＴリンパ球及びエフェクターＴリンパ球の増殖を刺激し、それによって、癌性細胞に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する。例示的なそのようなヒト化抗ＯＸ４０モノクローナル抗体としては、現在、文献においてｇｓｋ３１７４９９８（ＩｇＧ１）、ポガリズマブ（ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＯＸＲ０９１６）、ＭＥＤ１０５６２と称されているもの、及びＰＦ－０４５１８６００（ＰＦ－８６００）と命名されたヒト抗ＯＸ４０ ＩｇＧ２抗体が挙げられる。

【0154】

別の群は、リガンドの細胞外ドメインに結合するがゆえに、Ｔ細胞の過剰活性化によって引き起こされる自己免疫を回避することによってＴリンパ球を負に制御する、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（抗ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）と免疫反応する。ＬＡＧ－３は、インビボにおける重要な免疫チェックポイントであり、ヒトの免疫系においてバランスのとれた調節的役割を果たす［Ｓｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ ２０：２０７（２０２０）］。

【0155】

ＬＡＧ－３分子は、Ｔ細胞活性化のシグナル伝達経路を遮断する。しかしながら、ＬＡＧ－３分子の細胞内セグメントは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性を制御すると見出された免疫抑制性シグナルを生成する。ＬＡＧ－３は、３つのやり方でＴ細胞の免疫応答を制御する。第１に、ＬＡＧ－３は、Ｔ細胞の負の制御を介して、Ｔ細胞の増殖及び活性化を直接阻害する。第２に、ＬＡＧ－３は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害機能を促進することができ、次いで、そのＴ細胞応答を間接的に阻害することができる。第３に、ＬＡＧ－３は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の機能を制御することによって、Ｔ細胞の活性化を防ぐことができる［Ｊｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４１０：１２７－１５６（２０１７）］。

【0156】

現在までに、ＬＡＧ－３に対するモノクローナル抗体で、米国食品医薬品局から販売及び使用が承認されたものは知られていない。ＭＫ－４２８０と称されるＭｅｒｃｋのヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体を用いた研究、及びレラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ）というＩＮＮ名を有するＢｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂの別のヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体を用いた研究が進行中である。

【0157】

なおもさらなるタイプの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４７に対するモノクローナル抗体及びマクロファージチェックポイント阻害剤であり、そのマクロファージチェックポイント阻害剤は、マクロファージ上のＳＩＲＰαレセプターによるＣＤ４７の認識を阻害し、ゆえに、マクロファージに飲み込まれるのを回避するために癌細胞が用いる「私を食べるな」というシグナルを遮断する。このモノクローナルは、ＩＮＮ名がマグロリマブ（ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ）であり、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含むいくつかの血液及び固形腫瘍の悪性腫瘍において、Ｇｉｌｉａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．が開発中のものである。マグロリマブは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び濾胞性リンパ腫の処置についてＦＤＡからファスト・トラック指定（Ｆａｓｔ Ｔｒａｃｋ Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を付与されている。マグロリマブは、ＭＤＳ及びＡＭＬについてＦＤＡから、ＡＭＬについて欧州医薬品庁から、希少疾病用医薬品の指定も付与されている。

【0158】

別のチェックポイントマーカーであるＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン３に対するモノクローナル抗体（抗ＴＩＭ－３）は、白血病幹細胞の差次的発現、共阻害性Ｔ細胞コレセプターとしてのその役割、及びおそらくは抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の促進における役割に基づいてＭＤＳ及びＡＭＬ治療において使用するために、サバトリマブ（ｓａｂａｔｏｌｉｍａｂ）（以前のＭＢＧ－４５３）というＩＮＮ名でＮｏｖａｒｔｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｃｏ．による初期開発の段階にある。ＴＩＭ－３は、ＡＭＬ白血病前駆細胞上に発現されているが、正常な造血幹細胞上には見られず、その発現は、骨髄異形成症候群の重症度並びにＡＭＬへの進行の可能性と相関している。現在、ＴＩＭ－３抗体であるＭＢＧ－４５３は、第一線の骨髄異形成症候群及びＡＭＬにおいて複数の治験が行われており、デシタビンと組み合わせて使用したとき、有望な抗白血病活性を示す。

【0159】

インタクトなモノクローナル抗体、並びにそれらのパラトープ含有部分（結合部位含有部分）（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ領域）、並びに一本鎖ペプチド結合配列が、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤として有用であり得る。これらの抗体の多くが、ＩＶ経路を介して投与される。インタクトなチェックポイント阻害性モノクローナル抗体は、ヒトの体内において約１～３週間の半減期を有し［例えば、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）ターミナルｔ_１／２＝１５．４日；添付文書１２／２０１３；Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）ターミナルｔ_１／２＝２３日；添付文書０３／２０１７］、一本鎖オリゴ又はポリペプチドは、インビボにおいてそれより短い半減期を有する傾向がある。

【0160】

小分子である第２の抗白血病細胞傷害剤及びハロゲン化キサンテン化合物含有薬剤は、半減期が比較的短いので、両方の薬剤を単一の組成物又は別々の組成物として投与することができる。別々に投与する場合、両方のタイプの抗癌剤（抗白血病剤）を互いの数分以内から約３時間以内に投与することが好ましい。より好ましくは、両方を、他方の１時間未満のうちに投与する。

【0161】

単語「投与」は、処置レジメンの開始を意味するために本明細書中で使用される。したがって、ＩＶ流を開始する時点のように、錠剤又は他の経口剤形を嚥下することが、処置レジメンの開始である。第１の抗白血病細胞傷害剤と第２の抗白血病細胞傷害剤の両方が、同じ単一の組成物に共に存在するとき、その単位組成物が被験体の体内に入った時点で投与が開始する。

【0162】

第２の抗白血病全身性細胞傷害剤が、モノクローナル抗体などの免疫チェックポイント阻害剤である場合、ハロゲン化キサンテン化合物と第２の抗白血病細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤とは、一緒に投与してもよいし、一方を他方の前に投与してもよく、第２の抗白血病細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤は、ハロゲン化キサンテンの約１ヶ月前までに投与される。好ましくは、それら２つの抗白血病細胞傷害剤は、一緒に投与されるか、又はハロゲン化キサンテンの後、数日以内に第２の抗白血病全身性細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤が投与される。また、第２の抗白血病全身性細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤は、ハロゲン化キサンテンの約１ヶ月後にも投与され得る。

【0163】

研究
マウス：
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒからの雌Ｃ１７ ＳＣＩＤマウス

【0164】

異種移植において使用した細胞株：
まず、急性Ｂリンパ芽球性白血病を有する５歳女性からＳＥＭ細胞株を樹立した。その細胞株は、ＭＬＬ－ＡＦＦＦ１遺伝子融合を有し、ＣＤＫＮ２Ａ及びＴＰ５３についてヘテロ接合性であった。抗癌薬感受性研究におけるこの細胞株の有用性は、報告されている（Ｂａｒｒｅｔｉｎａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４８３：６０３－６０７，２０１２）。

【0165】

指数関数的に増殖中の２．５×１０^６個のＳＥＭ細胞［緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）で標識されたもの］を各動物の静脈内に注射し、腫瘍の確立をモニターした。４週間、腫瘍を成長させた後、マウスを無作為に３つの群に分けた。

【0166】

群１（ｎ＝９）。コントロール
これらの動物には、２週間にわたって１週間に２回、１００μＬのＰＢＳを経口投与した。

【0167】

群２（ｎ＝８）。処置コホートＩ
これらの動物には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈された２５μＬのＰＶ－１０（登録商標）（０．９パーセント食塩水溶液中の１０％ローズベンガル二ナトリウムｗ／ｖ）を、２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によって経口投与した。

【0168】

群３（ｎ＝８）。処置コホートＩＩ
これらの動物には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈された１２．５μＬのＰＶ－１０（登録商標）（上で論じられたとおり）を２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によって経口投与した。

【0169】

疾患進行のエビデンスをすべての動物においてモニターし、処置開始の１２０日後まで生存を追跡した。データをカプラン・マイヤー推定値として図１に示す。

【0170】

図１のグラフから分かるように、ＨＸ化合物の経口送達は、処置されたマウスの用量依存的生存率によって明確に証明される。

【0171】

親出願である第１６／６８８，３１９に開示されている結果は、原発性又は再発性の小児白血病を有する患者由来の、ＰＶ－１０（登録商標）で処置された１１個の商業的に入手可能な白血病細胞株、及び細胞培養中の２つの原発性白血病サンプルを、ＰＶ－１０（登録商標）の用量を増加させて投与することによって殺滅することができたことを示した。細胞生存率は、処置の９６時間後にアラマーブルーアッセイによって計測された。

【0172】

ＰＶ－１０（登録商標）を投与することにより、白血病細胞の生存率が、調べた１１個の小児白血病細胞株（平均ＩＣ_５０９２．８μＭ）及び３つの原発性白血病サンプル（平均ＩＣ_５０１２２．５μＭ）において濃度依存的様式及び時間依存的様式で低下した。この結果から、ＰＶ－１０は、９２．８μＭという平均ＩＣ_５０値で白血病細胞株に対して細胞傷害性であり（下記の表１）、１２２．５μＭという平均ＩＣ_５０値で２つの原発性白血病サンプルに対して細胞傷害性である（下記の表２）ことが示された。

【0173】

【表3】

【0174】

【表4】

【0175】

類似の結果が、白血病細胞株ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＨＬ－６０（ＴＢ）、Ｋ－５６２、ＭＯＬＴ－４、ＲＰＭＩ－８２２６及びＳＲを用いて別々に得られた。

【0176】

これらの研究において使用されたＲＢ二ナトリウムの濃度（ＩＣ_５０値に基づきおよそ１０^－４～約１０^－５モル濃度であった）で白血病細胞を完全に殺滅できたことは驚くべきことである。それでも、必要なＨＸ化合物の濃度は、先に述べたように、本研究において経口投与によって達成されると考えられている濃度より高かった。したがって、図１のデータが示すように、未処置の白血病マウス及びより少ない量のＨＸ化合物で処置された白血病マウスはかなり低い生存率を示したのに対して、ＨＸ化合物で処置された白血病マウスの６２．５％が１２０日間生存したことは、さらにより驚くべきことであった。

【0177】

本明細書に引用された特許、特許出願及び論文は、各々、参照により援用される。冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、その冠詞の１つの又は１つより多い（すなわち、少なくとも１つの）文法上の対象物のことを指すために本明細書中で使用される。本明細書に引用された特許、特許出願及び論文は、各々、参照により援用される。

【0178】

前述の説明及び例は、例証と意図されたものであって、限定と解釈されるべきではない。本発明の趣旨及び範囲内でさらに他の変形が可能であり、当業者はそれらを容易に思いつくだろう。

【図1】

【図2】