(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-07-26
(45)【発行日】2024-08-05
(54)【発明の名称】新規なジンセノサイドを含む更年期症状の予防又は改善用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/7048 20060101AFI20240729BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20240729BHJP
A61P 25/20 20060101ALI20240729BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240729BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20240729BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240729BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20240729BHJP
A61P 5/30 20060101ALI20240729BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240729BHJP
A61K 36/258 20060101ALI20240729BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20240729BHJP
A23G 3/34 20060101ALN20240729BHJP
【ＦＩ】
A61K31/7048
A61P25/18
A61P25/20
A61P19/10
A61P25/24
A61P25/04
A61P3/00
A61P5/30
A61P43/00 111
A61K36/258
A23L33/105
A23G3/34 101
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2020150716
(22)【出願日】2020-09-08
(65)【公開番号】P2021054806
(43)【公開日】2021-04-08
【審査請求日】2023-07-05
(31)【優先権主張番号】10-2019-0119642
(32)【優先日】2019-09-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(73)【特許権者】
【識別番号】506213681
【氏名又は名称】アモーレパシフィック コーポレーション
【氏名又は名称原語表記】ＡＭＯＲＥＰＡＣＩＦＩＣ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ
【住所又は居所原語表記】１００， Ｈａｎｇａｎｇ－ｄａｅｒｏ， Ｙｏｎｇｓａｎ－ｇｕ， Ｓｅｏｕｌ， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
(74)【代理人】
【識別番号】110000556
【氏名又は名称】弁理士法人有古特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ホン， ヨン ドク
(72)【発明者】
【氏名】ジョン， ヒョン ウ
【審査官】三上 晶子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０００－５１５５２３（ＪＰ，Ａ）
【文献】Identification of a novel triterpene saponin from Panax ginseng seeds, pseudoginsenoside RT8, and its antiinflammatory activity，Journal of Ginseng Research，2018年，44，145-153
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／３３－３３／４４
Ａ６１Ｐ １／００－４３／００
Ａ６１Ｋ ３６／２５８
Ａ２３Ｌ ３３／１０５
Ａ２３Ｇ ３／３４
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール（（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１－>２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ,１２ｂ,２５－ｔｒｉｏｌ）、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、更年期症状の予防又は改善用組成物。
【請求項2】
前記有効成分は、下記の化学式１で表される構造を有するものである、請求項１に記載の組成物。【化1】
【請求項3】
前記有効成分は、高麗人参の種子から抽出したものである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
当該組成物は、めまい、睡眠障害、顔面紅潮、骨粗鬆症、夜間発汗、鬱病、頭痛、及び疲労感のうちの一つ以上を含む症状の予防又は改善用途である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
当該組成物の対象への投与時におけるエストロゲン受容体のうちのＥＲα（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α）に対するＥＲβ（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ β）の活性比は１．１倍以上である、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
前記有効成分を、組成物の総重量に対して０．０００１～９９．９重量％の範囲で含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
当該組成物の投与量は、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日～１０ｇ／ｋｇ／日である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
当該組成物の投与対象は、エストロゲン受容体の活性が減少した対象である、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
当該組成物は、食品組成物である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
当該組成物は、薬学組成物である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願に対する相互参照］
本出願は、２０１９年９月２７日付で出願された大韓民国特許出願第１０－２０１９－０１１９６４２号に基づく優先権を主張するものであり、その全内容を本出願に参照として援用する。
本出願は、２０１９年９月２７日付で出願された大韓民国特許出願第１０－２０１９－０１１９６４２号に基づく優先権を主張するものであり、その全内容を本出願に参照として援用する。
【0002】
本明細書は、新規なジンセノサイド及びこれを含む組成物に関して記述する。
【背景技術】
【0003】
高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ.Ａ. Ｍｅｙｅｒ）は、五加皮科人参属に属する植物で、韓国、中国、日本等で２,０００年余りの前から使用されてきた生薬である。高麗人参の代表的生理活性成分として、サポニン、多糖類、ペプチド、シトステロール、ポリアセチレン及び脂肪酸が知られており、これらのうち高麗人参のサポニンをジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）という。高麗人参の効能や効果としては、中枢神経系に対する作用、抗発癌作用と抗癌活性、免疫機能調節作用、抗糖尿作用、肝機能亢進効能、心血管障害改善及び抗動脈硬化作用、血圧調節作用、更年期障害改善及び骨粗鬆症に及ぼす効果、抗ストレス及び抗疲労作用、抗酸化活性及び老化抑制効能などが知られている。前記ジンセノサイドは、高麗人参の根、葉、実、花、種子などの部位に応じてその含量や組成に大きな差異があるが、前記のように知られた効能の大半は、高麗人参の根の部分に関するものであって、高麗人参の根を除いた高麗人参の他の部分に関する研究は不足している実情である。
【0004】
エストロゲンは、エストロゲン受容体と結合して様々な生理現象を発現し、女性の場合、生殖器官である卵巣の機能が低下しつつ更年期になると、エストロゲンホルモンの分泌が減少し且つエストロゲン受容体の活性が減少して様々な症状が発現するようになる。代表的な更年期症状としては、めまい、睡眠障害、顔面紅潮、夜間発汗などの身体的症状と鬱病、疲労感などの心理的症状がある。したがって、女性のエストロゲン受容体の活性管理が更年期症状の改善や予防において極めて重要な役割をするといえる。更年期の前後の時期にエストロゲンを補充することが勧奨され、症状によっては薬物治療が併行される。しかし、従来知られたエストロゲン補充療法（ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ）の場合、乳癌細胞の成長や細胞分裂が増加して乳癌の発病率を高くし、その他子宮内膜炎、血栓塞栓症、高血圧などの副作用を引き起こすことがあると報告されており、人体への副作用の少ない天然物質由来の健康機能性食品や医薬品の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】大韓民国公開特許第１０－２０１６－００８６１４９号公報
【非特許文献】
【0006】
【文献】Deroo BJ et al., J Clin Invest 116:561(2006)
【文献】Harris HA et al., Evaluation of an estrogen receptor-beta agonist in animal models of human disease, Endocrinology 144:4241(2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
一観点において、本発明が解決しようとする課題は、更年期症状の予防又は改善効能を有する新規なジンセノサイドを含む組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
一側面において、本発明は、（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール（（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１－>２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ,１２ｂ,２５－ｔｒｉｏｌ）、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又は溶媒和物を有効成分として含む更年期症状の予防又は改善用組成物を提供する。
【発明の効果】
【0009】
一観点において、本発明は、更年期症状の予防又は改善に優れた効果を有する新規なジンセノサイド、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又は溶媒和物を含む組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイド（Ｃｐｄ．１０）の分離過程を示した図である。
【図2a】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１～３の化学構造を示した図である。
【図2b】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物４～６の化学構造を示した図である。
【図2c】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物７の化学構造を示した図である。
【図2d】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物８の化学構造を示した図である。
【図2e】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物９の化学構造を示した図である。
【図2f】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１０の化学構造を示した図である。
【図2g】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１１の化学構造を示した図である。
【図2h】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１２の化学構造を示した図である。
【図2i】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１３の化学構造を示した図である。
【図2j】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１４の化学構造を示した図である。
【図2k】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１５の化学構造を示した図である。
【図2l】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物１６の化学構造を示した図である。
【図3a】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物１の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図3b】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物２の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図3c】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物３の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図3d】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物４の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図3e】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物５の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図3f】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち既知のジンセノサイドに該当する化合物６の分光学的証拠及び構造を示した図である。
【図4】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図5】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０の１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図6】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０のＣＯＳＹスペクトルを示した図である。
【図7】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０のＨＳＱＣスペクトルを示した図である。
【図8】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０のＨＭＢＣスペクトルを示した図である。
【図9】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０のＭＳスペクトルを示した図である。
【図10】高麗人参の種子抽出物から分画された化合物のうち本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０の核心ＨＭＢＣ相関関係を示した図である。
【図11】高麗人参の種子抽出物から分離した本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０と本発明の比較例であるジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６のエストロゲン受容体ＥＲαの活性調節効果を比較した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【図12】高麗人参の種子抽出物から分離した本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０と本発明の比較例であるジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６のエストロゲン受容体ＥＲβの活性調節効果を比較した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【図13】高麗人参の種子抽出物から分離した本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０と本発明の比較例であるジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６のエストロゲン受容体ＥＲαに対するＥＲβの活性比率を比較した図である。（** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－））
【図14】高麗人参の種子抽出物から分離した本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０と本発明の比較例である高麗人参の種子抽出物（ＧＳＥ）のエストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性調節効果を比較した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【図15】高麗人参の種子抽出物から分離した本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０と本発明の比較例であるジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６が副作用としての乳癌有病率を増加させたか否かを確認するためのＭＣＦ－７乳癌細胞株細胞の成長程度を比較した図である。（** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－））
【図16】紅参指標成分であるジンセノサイドＲｇ１、Ｒｇ３及びＲｂ１と本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０のエストロゲン受容体ＥＲαの活性調節効果を比較した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【図17】紅参指標成分であるジンセノサイドＲｇ１、Ｒｇ３及びＲｂ１と本発明の新規なジンセノサイドに該当するＧＳ#１０のエストロゲン受容体ＥＲβの活性調節効果を比較した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ ｖｓ. （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【図18】本発明の新規なジンセノサイドに該当する化合物１０（ＧＳ#１０）の細胞生存率（％Ｖｉａｂｌｅ ｃｅｌｌｓ）を示した図である。（*** Ｐ＜０．００１ ｖｓ. （－）、** Ｐ＜０．０１ vs （－）、* Ｐ＜０．０５ ｖｓ. （－））
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下、添付した図面を参照しつつ、本出願の実施例についてより詳細に説明することとする。しかし、本出願に開示された技術は、ここで説明される実施例に限定されるものではなく、他の形態に具体化されてもよい。単に、ここで紹介される実施例は、開示された内容が徹底かつ完全となり得るよう、そして、当業者に本出願の思想が十分に伝えられるようにするために提供されるものである。図面において各構成要素を明確に表現するために、構成要素の幅や厚さなどの大きさを多少拡大して示した。また、説明の便宜のために、構成要素の一部のみを図示したが、当業者であれば、構成要素の残りの部分についても容易に把握することができるであろう。また、当該分野における通常の知識を有する者であれば、本出願の技術的思想を逸脱しない範囲内で、本出願の思想を多様な他の形態に具現できるであろう。
【0012】
一実施例において、本発明は、新規なジンセノサイド、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又は溶媒和物を有効成分として含む更年期症状の予防又は改善用組成物を提供することができる。
【0013】
一実施例において、前記ジンセノサイドは、新規なトリテルペンサポニン（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ ｓａｐｏｎｉｎ)であって、（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール（（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１－>２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ,１２ｂ,２５－ｔｒｉｏｌ）である。
【0014】
一実施例は、更年期症状の予防又は改善用組成物の製造に用いるための（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の用途を提供することができる。
【0015】
一実施例は、（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を、これを必要とする対象に有効量で投与することを含む更年期症状の予防又は改善方法を提供することができる。
【0016】
一実施例は、更年期症状の予防又は改善用組成物に用いるための有効成分として、（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を提供することができる。また、更年期症状の予防又は改善のための有効成分として、（２０Ｓ,２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１－>２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ,１２ｂ,２５－トリオール、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の非治療的用途を提供することができる。
【0017】
本明細書において「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｄｏｓａｇｅ）で用いる際に相当な毒性効果を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに用いることができるという政府又はこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は薬局方に列挙され、又はその他一般的な薬局方に記載されたものと認定されることを意味する。
【0018】
本明細書において「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい薬理活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などといった無機酸から形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタン－ジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４－メチルビシクロ［２，２，２］－ｏｃｔ－２－エン－１－カルボン酸、グルコヘプトン酸、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ－ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）；又は、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換されるときに形成される塩を含んでよい。
【0019】
本明細書において「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」は、水が結合している化合物を意味し、水と混合物との間で化学的な結合力のない内包化合物を含む広範な概念である。
【0020】
本明細書において「溶媒和物」は、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間で生じた高次の化合物を意味する。
【0021】
一実施例において、前記ジンセノサイドの分子式は、Ｃ４２Ｈ７０Ｏ１５であり、下記のような化学構造を有する。
【0022】
【化1】
【0023】
本明細書では、前記新規なジンセノサイドを「シュードジンセノーサイドＲＴ８（ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲＴ８）」又は「ＰＧ－ＲＴ８」と命名した。
一実施例において、前記ジンセノサイドは、高麗人参の種子抽出物から分離されたものであってよいが、これに制限されるものではない。一実施例において、前記種子抽出物を得た高麗人参は、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ.ａ. Ｍｅｙｅｒ）である。
一実施例において、前記ジンセノサイドは、高麗人参の種子抽出物から分離されたものであってよいが、これに制限されるものではない。一実施例において、前記種子抽出物を得た高麗人参は、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ.ａ. Ｍｅｙｅｒ）である。
【0024】
本明細書において「分離」とは、高麗人参の種子抽出物から抽出又は分画されたことを含む意味であり、水、有機溶媒などを用いてよく、当業者に知られた如何なる方法も適用可能である。前記分画は、前記抽出以降に行うことであってよい。
【0025】
本明細書において「抽出物」とは、天然物からその中の成分を抽出して得られた物質であれば、抽出方法や成分の種類を問わずいずれも含む。例えば、水や有機溶媒を用いて天然物から溶媒に溶解される成分を抽出して得たもの、天然物の特定の成分のみを抽出して得たものなどをいずれも含む広義の概念である。
【0026】
本明細書において「分画物」は、ある溶媒を用いて特定の物質や抽出物を分画して得たもの又は分画して残ったもの、そして、これらを特定の溶媒で再び抽出して得たものを含む。分画方法や抽出方法は当業界における通常の技術者に知られたものであればいずれも用いてよい。
【0027】
一実施例において、前記ジンセノサイドは、高麗人参の種子のメタノール及びブタノール溶解性抽出物から分離したものであってよい。具体的に、前記ジンセノサイドは、ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ－ＭＳを用いて高麗人参の種子のメタノール及びブタノール溶解性抽出物を分析して検出、分離されたものであってよい。高麗人参の種子抽出物の主成分が脂質であるため、あらゆるトリテルペンやステロイド性サポニンが高麗人参の種子の粗（ｃｒｕｄｅ）抽出物からＨＰＬＣ－ＵＶ又はＨＰＬＣ－ＥＬＳＤによって観察できるものではない。
【0028】
本明細書において用語「更年期症状」は、エストロゲンホルモンの分泌が減る、又はエストロゲン受容体の活性が減少するにつれて現われる身体的又は心理的変化乃至症状を意味する。一実施例として、前記更年期症状は、閉経期症侯群を含んでよい。例えば、前記更年期症状は、めまい、睡眠障害、顔面紅潮、骨粗鬆症、夜間発汗、鬱病、頭痛、及び疲労感のうちの一つ以上を含む身体的又は心理的症状を含んでよい。
【0029】
本明細書において用語「予防」とは、本発明の一実施例に係る組成物を投与して目的とする症状を抑制又は遅延させるすべての行為を意味する。本明細書において用語「治療」とは、本発明の一実施例に係る組成物を投与して目的とする症状又は疾病を好転させたり治したりするすべての行為を意味する。本明細書において用語「改善」とは、本発明の一実施例に係る組成物を投与して目的とする症状を投与の前よりも好転又は良くするすべての行為を意味する。
【0030】
本発明の一実施例に係る前記組成物は、エストロゲン受容体のうちのＥＲα（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α）とＥＲβ（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ β）の活性を増加させることができる。エストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性が増加すると、更年期症状が緩和され得るが、安全な更年期症状の改善のための分子的ターゲットは、ＥＲαよりもＥＲβの方が適合するといえる。本明細書にその全体が参照として取り込まれるDeroo BJ et al., J ClinInvest 116:561(2006)では、大半の乳癌細胞ではＥＲαが過発現しており、これは主にＥＲαの増加によって現われることが報告されている。当該文献に開示した癌で増加するＥＳＲ１はＥＲαである。また、本明細書にその全体が参照として取り込まれるHarris HA et al., Evaluation of an estrogen receptor-beta agonist in animal models of human disease, Endocrinology 144:4241(2003)では、ＥＲβの減少は大腸癌にも影響を及ぼすことが報告されている。本発明の一実施例に係る前記組成物は、特にＥＲαに対するＥＲβの活性比が高く、従来の更年期症状改善製品で現れていた乳癌の発病可能性が高いという副作用を改善して、効果的に更年期症状を予防又は改善することができる。一実施例として、前記組成物の対象への投与時におけるエストロゲン受容体のうちのＥＲαに対するＥＲβの活性比は、１．１倍以上、具体的には、１．１倍以上３倍以下で示されてよいが、これに制限されない。より具体的には、ＥＲαに対するＥＲβの活性比が、１．１倍以上、１．２倍以上、１．３倍以上、１．４倍以上、１．５倍以上、１．６倍以上、１．７倍以上、１．８倍以上、１．９倍以上、２倍以上、２．１倍以上、２．２倍以上、２．３倍以上、２．４倍以上、又は２．５倍以上であり、且つ３倍以下、２．９倍以下、２．８倍以下、２．７倍以下、２．６倍以下、２．５倍以下、２．４倍以下、２．３倍以下、２．２倍以下、２．１倍以下、又は２倍以下であってよい。
【0031】
一実施例において、本発明は、前記有効成分を、組成物の総重量に対して０．０００１～９９．９重量％の範囲で含んでよい。具体的に、前記組成物は、一実施例として、前記有効成分を、組成物の総重量に対して０．０００１重量％以上、０．０００５重量％以上、０．００１重量％以上、０．０１重量％以上、０．１重量％以上、１重量％以上、２重量％以上、３重量％以上、４重量％以上、５重量％以上、６重量％以上、７重量％以上、８重量％以上、９重量％以上、１０重量％以上、１５重量％以上、２０重量％以上、２５重量％以上、３０重量％以上、３５重量％以上、４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、５５重量％以上、６０重量％以上、６５重量％以上、７０重量％以上、７５重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上、又は９９．９重量％以上含んでよいが、前記範囲に制限されるものではない。又は、前記組成物は、一実施例として、前記有効成分を、組成物の総重量に対して１００重量％以下、９９重量％以下、９５重量％以下、９０重量％以下、８５重量％以下、８０重量％以下、７５重量％以下、７０重量％以下、６５重量％以下、６０重量％以下、５５重量％以下、５０重量％以下、４５重量％以下、４０重量％以下、３５重量％以下、３０重量％以下、２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、５重量％以下、４重量％以下、３重量％以下、２重量％以下、１重量％以下、０．５重量％以下、０．１重量％以下、０．０１重量％以下、０．００１重量％以下、又は０．０００５重量％以下含んでよいが、前記範囲に制限されるものではない。
【0032】
本発明の実施例に係る組成物は、前記有効成分を含む食品組成物であってよい。
【0033】
例えば、前記有効成分を含む発酵乳、チーズ、ヨーグルト、ジュース、生菌製剤、及び健康食品などといった機能性食品として加工されてよく、その他、多様な食品添加剤の形態で用いられてよい。一実施例として、組成物は、健康食品用組成物であってよい。一実施例として、前記健康食品用組成物は、丸剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、キャラメル剤又はドリンク剤などに剤形化することができる。他の一実施例として、液剤、粉末、顆粒、錠剤又はティーバッグなどの形態に加工されてもよい。前記組成物は、単純飲用、注射投与、スプレー方式又はスクイーズ方式などの様々な方法で投与されてよい。前記組成物は、本発明の主効果を損なわない範囲内で主効果に相乗効果を与え得る他の成分などを含有してよい。例えば、物性改善のために、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、増粘剤、無機塩類、乳化剤、及び合成高分子物質などの添加剤をさらに含んでよい。その他にも、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、及び海草エキスなどの補助成分をさらに含んでよい。前記成分は、剤形又は使用目的に応じて当業者が適宜選定して配合してよく、その添加量は、本発明の目的及び効果を損なわない範囲内で選択されてよい。例えば、前記成分の添加量は、組成物の全重量を基準に、０．０００１重量％～９９．９重量％の範囲であってよい。一実施例として、前記食品組成物の投与量は、対象の年齢、性別、体重と、対象が持っている特定の疾患又は病理状態、疾患又は病理状態の深刻度、投与経路などの判断に応じて異なり得、このような因子に基づく投与量の決定は当業者の水準内にある。例えば、前記投与量は、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以上又は１ｍｇ／ｋｇ／日以上であってよく、且つ１０ｇ／ｋｇ／日以下、１００ｍｇ／ｋｇ／日以下、又は１０ｍｇ／ｋｇ／日以下であってよいが、前記投与量は、如何なる方法でも本明細書の範囲を限定するものではない。
【0034】
本発明の実施例に係る組成物は、前記有効成分を含む薬剤学的組成物であってよい。前記薬剤学的組成物は、防腐剤、安定化剤、水和剤又は乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び／又は緩衝剤などの薬剤学的補助剤、並びにその他治療的に有用な物質をさらに含有してよい。
【0035】
一実施例として、前記薬剤学的組成物は、経口投与剤であってよく、前記経口投与剤は、例えば、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤などがある。これらの剤形は、有効成分の他、界面活性剤、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム又はカルシウム塩、並びにポリエチレングリコール）を含有してよい。錠剤は、さらに、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリジンといった結合剤を含有してよく、場合に応じて、澱粉、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤などの薬学的添加剤を含有してよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化又はコーティング方法によって製造されてよい。
【0036】
一実施例として、前記薬剤学的組成物は、非経口投与剤であってよく、前記非経口投与剤は、直腸、局所、皮下、径皮投与型剤形であってよい。例えば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチなどの剤形であってよいが、これらに制限されるものではない。
【0037】
一実施例として、前記薬剤学的組成物の投与量は、治療を受ける対象の年齢、性別、体重と、治療する特定の疾患又は病理状態、疾患又は病理状態の深刻度、投与経路及び処方者の判断に応じて異なり得る。このような因子に基づく投与量の決定は当業者の水準内にある。例えば、前記投与量は、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日以上又は１ｍｇ／ｋｇ／日以上であってよく、且つ１０ｇ／ｋｇ／日以下、１００ｍｇ／ｋｇ／日以下、又は１０ｍｇ／ｋｇ／日以下であってよいが、前記投与量は、如何なる方法でも本明細書の範囲を限定するものではない。
【0038】
以下、実施例、比較例、及び試験例を参照して本発明を詳しく説明する。なお、これらは単に本発明をより具体的に説明するために例示したものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例、比較例及び試験例によって制限されないことは当業者にとって自明であろう。
【0039】
以下のすべての実験値は、３回以上の繰り返しの実験により得た値の平均を示すものであり、標準偏差（ＳＤ）は誤差棒で表した。ｐ値は、ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡとＤｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔで計算し、０．０５未満のｐ値は統計的に有意なものと見なした。
【0040】
［実施例１］ジンセノサイドの分離
分画
高麗人参の種子（Ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）５．５ｋｇをミキサーで細かく粉砕して粉末状にしてメタノールで抽出後、ｎ－ヘキサン、エチルアセテート、ｎ－ブタノールなどを用いて段階的に分画した。脂質（Ｌｉｐｉｄ）の大部分はｎ－ヘキサンによって除去され、エチルアセテート分画物に残っている脂質はメタノール：水＝１：１（ｖ／ｖ）で懸濁した後、フリーザーに一晩保管してから上層液だけを取った後、遠心分離機を利用してもう一回除去した。このように前処理が施されたエチルアセテート分画物２．６１ｇとｎ－ブタノール分画物１１４．６４ｇをカラム及びＨＰＣＣＣ（Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ－Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）によって下記のように分画した。
分画
高麗人参の種子（Ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）５．５ｋｇをミキサーで細かく粉砕して粉末状にしてメタノールで抽出後、ｎ－ヘキサン、エチルアセテート、ｎ－ブタノールなどを用いて段階的に分画した。脂質（Ｌｉｐｉｄ）の大部分はｎ－ヘキサンによって除去され、エチルアセテート分画物に残っている脂質はメタノール：水＝１：１（ｖ／ｖ）で懸濁した後、フリーザーに一晩保管してから上層液だけを取った後、遠心分離機を利用してもう一回除去した。このように前処理が施されたエチルアセテート分画物２．６１ｇとｎ－ブタノール分画物１１４．６４ｇをカラム及びＨＰＣＣＣ（Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ－Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）によって下記のように分画した。
【0041】
ｎ－ブタノール分画物のコラム及びＨＰＣＣＣを用いた分画
ｎ－ブタノール分画物１１４．６４ｇに対してＭＰＬＣにて分画を分け、このときに用いた溶媒はｎ－ヘキサン／エチルアセテート＝１０：１→５：１→１：１→ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１０：１→５：１（ｖ／ｖ）であり、流速は５０ｍＬ／ｍｉｎとした。前記条件を用いて合計１２個の下位分画に分け、各分画をさらにＨＰＣＣＣ、ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ－２０カラムなどを用いて各分画に含有されている成分を分離し、ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）、ＵＶ（Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｙｓ）、ＭＳ（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）を用いて構造を同定して１６種の化合物を究明した。
ｎ－ブタノール分画物１１４．６４ｇに対してＭＰＬＣにて分画を分け、このときに用いた溶媒はｎ－ヘキサン／エチルアセテート＝１０：１→５：１→１：１→ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１０：１→５：１（ｖ／ｖ）であり、流速は５０ｍＬ／ｍｉｎとした。前記条件を用いて合計１２個の下位分画に分け、各分画をさらにＨＰＣＣＣ、ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ－２０カラムなどを用いて各分画に含有されている成分を分離し、ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）、ＵＶ（Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｙｓ）、ＭＳ（Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）を用いて構造を同定して１６種の化合物を究明した。
【0042】
前記分離された１６種の化合物は、プロトパナキサトリオールサポニン（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ ｓａｐｏｎｉｎ）であるジンセノサイドＲｇ１（化合物１）、ジンセノサイドＲｇ２（化合物２）及びジンセノサイドＲｅ（化合物３）；プロトパナキサジオールサポニン（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ ｓａｐｏｎｉｎ）であるジンセノサイドＲｄ（化合物４）、ジンセノサイドＲｂ１（化合物５）及びジンセノサイドＲｂ２（化合物６）；ステロールグリコシド（ｓｔｅｒｏｌ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）であるスティグマ－５－エン－３－O－β－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｔｉｇｍａ－５－ｅｎ－３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（化合物７）、スティグマ－５,２４（２８）－ジエン－３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｔｉｇｍａ－５,２４（２８）－ｄｉｅｎ－３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（化合物８）及びスティグマ－５,２２－ジエン－３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｔｉｇｍａ－５,２２－ｄｉｅｎ－３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（化合物９）；本発明の一実施例に係る新規なジンセノサイドとして、天然から初めて分離される新規な化合物である（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１→２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ，１２ｂ，２５－トリオール（（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ，１２ｂ，２５－ｔｒｉｏｌ）（化合物１０）；フェノール性グリコシド（ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）であるフェネチルアルコールβ－Ｄ－キシロピラノシル（１→６）－β－Ｄ－グルコピラノシド（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ β－Ｄ－ｘｙｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→６）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（化合物１２）及びオイゲノールβ－ゲンチオビオシド（Ｅｕｇｅｎｙｌ β－ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ）（化合物１３）；フラボノイドであるイソラムネチン３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシド（ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ ３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（化合物１５）；一次代謝体であるアデノシン（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）（化合物１１）、ウラシル（ｕｒａｃｉｌ）（化合物１４）、及びトリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）（化合物１６）であった。
【0043】
前記化合物１０に該当する本発明の一実施例に係る新規なジンセノサイドの分離過程を図１に示した。前記１６種の化合物の化学構造を図２ａ乃至図２１に示し、前記化合物のうち既知のジンセノサイドである化合物１－６の分光学的証拠及び化学構造を図３ａ乃至図３ｆに別途に示した。
【0044】
化合物１０は、カチオンＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ－ＭＳ（Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－Ｔｉｍｅ－ｏｆ－ｆｌｉｇｈｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）スペクトルにおいてｍ／ｚ ８３７.４６１７［（Ｍ＋Ｎａ）＋ｃａｌｃｄ.８３７.４６１２］でのナトリウム化擬分子イオンピーク（ｓｏｄｉａｔｅｄ ｐｓｅｕｄｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｏｎ ｐｅａｋ）に基づいてＣ４２Ｈ７０Ｏ１５の分子式を示す白色無定形粉末として分離した。前記化合物１０の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、[δＨ １.８６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２８），１.６９（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２９），１.４７（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），１.２５（６Ｈ，ｓ，Ｈ－２１，２６），１.１０（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），０.８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），０.７５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９）]で８個のメチル共鳴を含むものであった。また、２個の糖残基においてアノマー陽子（ａｎｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏｔｏｎ）と炭素原子に相応する二対の信号がδＨ ６.０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.８，Ｈ－２"）／δＣ １０４.０８（Ｃ－１'）及びδＨ４.９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.７，Ｈ－１'）／δＣ １０４.３２（Ｃ－１"）で検出された。１３ＣＮＭＲ及び異種核単一量子相関関係（ＨＳＱＣ）スペクトルは４２個の炭素信号を突き止めた。前記２つの糖残基と別個に、化合物１０のアグリコン（ａｇｌｙｃｏｎｅ）は８個のメチレン、４個のメチン、３個の酸素含有メチン［δＣ ７９.７９（Ｃ－６），７１.４０（Ｃ－１２）及び８６.０９（Ｃ－２４）］、５個の４級炭素原子、２個の酸素化された４級炭素原子［δＣ ８７.１５（Ｃ－２０）及び７０.７８（Ｃ－２５）］、８個のメチル基及びカルボニル炭素［δＣ ２１８.８５（Ｃ－３）]を有していた。１Ｈａｎｄ１３ＣＮＭＲデータの徹底的な解釈結果、化合物１０のアグリコンがシュドジンセングゲニン（ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇｅｎｉｎ）Ｒ１［（２０Ｓ，２４Ｒ）－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６α，１２β，２５－トリオール（［（２０Ｓ，２４Ｒ）－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６α，１２β，２５－ｔｒｉｏｌ］）］に重畳していると示された。化合物１０においてＣ－２０の絶対配列はＣ－２１の化学的移動（δＣ ２７.６７）からＳに推論され、２４Ｒ配列は既に公開されたところに従いＣ－２４（δＣ ８６.０９）の化学的移動によって決定された。二糖単位（ｕｎｉｔ）は、酸加水分解データ及びガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析結果とともに１ＨＮＭＲスペクトル及び１２個の炭素共鳴でアノマー陽子のカップリング定数からβ－Ｄ－グルコピラノシル（β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）残基であることが明らかになった。グリコシド結合はδＨ ６.０２（Ｈ－１"）/δＣ ７９.４９（Ｃ－２'）及びδＨ ４.９１（Ｈ－１'）／δＣ ７９.７９（Ｃ－６）で交差ピークを示した異種核多重結合相関関係（ＨＭＢＣ）によって決定され、２－Ｏ－（β－Ｄ－グルコピラノシル）－β－Ｄ－グルコピラノシル（２－Ｏ－（β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）残基がシュドジンセングゲニン（ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇｅｎｉｎ）Ｒ１でアグリコンのＣ－６に連結されていることを立証した。前記化合物１０の各分析スペクトルと核心のＨＢＭＣ相関関係を図４乃至図１０に示した。
【0045】
前記分析結果、化合物１０の化学構造は（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１→２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ，１２ｂ，２５－トリオール（（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ，１２ｂ，２５－ｔｒｉｏｌ）と決定され、シュードジンセノーサイドＲＴ８（ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ＲＴ８、ＰＧ－ＲＴ８）と命名した。
【0046】
前記高麗人参の種子抽出物から分離されたジンセノサイドのうちＰＰＴ（ＰｒｏｔｏＰａｎａｘＴｒｉｏｌ）系のジンセノサイドであるジンセノサイドＲｇ１（化合物１）、ジンセノサイドＲｇ２（化合物２）、ジンセノサイドＲｅ（化合物３）は、ジンセノサイドバックボーン（ｂａｃｋｂｏｎｅ）に３個のヒドロキシ基（ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｇｒｏｕｐ）を含む。ＰＰＤ（ＰｒｏｔｏＰａｎａｘＤｉｏｌ）系のジンセノサイドであるジンセノサイドＲｄ（化合物４）、ジンセノサイドＲｂ１（化合物５）、ジンセノサイドＲｂ２（化合物６）は、ジンセノサイドバックボーンに２個のヒドロキシ基を含む。一方、本発明において新規に分離同定されたジンセノサイドである化合物１０は、ＰＰＴ系のバックボーンを有しているものの、前記バックボーンの末端ヒドロキシ基がケトン（ｋｅｔｏｎｅ）で、ジンセノーシイドの線形鎖（ｌｉｎｅａｒ ｃｈａｉｎ）がフラン環（ｆｕｒａｎ ｒｉｎｇ）に環化（ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ）された構造であることに構造的差異がある。
【0047】
前記本発明において新規に分離同定した化合物１０の分子式はＣ４２Ｈ７０Ｏ１５であり、ＥＳＩ－Ｑ－ＴＯＦ－ＭＳにおいてｍ／ｚは８３７.４６１７［Ｍ＋Ｎａ］＋であり、１Ｈ、１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルは下記の表に表したとおりである。
【0048】
【表1】
【0049】
【表2】
【0050】
［試験例１］エストロゲン受容体の活性効能の比較
本発明の一実施例に係る高麗人参の種子由来のジンセノサイドＧＳ#１０がエストロゲン受容体の活性を調節できるか否かを調べるために次の実験を実施した。
本発明の一実施例に係る高麗人参の種子由来のジンセノサイドＧＳ#１０がエストロゲン受容体の活性を調節できるか否かを調べるために次の実験を実施した。
【0051】
ヒトＥＲα／βレポーターオセイパネル（#ＩＢ００４２１－４８Ｐ；Ｉｎｄｉｇｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を購買し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０と既存の高麗人参の種子抽出物から分離した他のジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６、高麗人参の種子抽出物を、それぞれ１０μｇ／ｍｌの濃度で２４時間処理し、エストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性増加の度合いを分析した。前記#ＩＢ００４２１－４８Ｐキットに含まれていた細胞では、ＥＲα及びＥＲβがそれぞれ過発現しており、且つＥＲＥ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子（ＥＲＥ－ｌｕｃ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ）が含まれている。これに前記実施例又は比較例をそれぞれ処理してＥＲの活性が増加すると、ＥＲα及びＥＲβがＥＲＥに結合しルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）発現を誘導するので、このときに細胞から発される光の強さを測定してＥＲα及びＥＲβの活性を測定することができる。前記高麗人参の種子抽出物は、本発明の比較例であって、本明細書で上述した実施例１においてジンセノサイドの分離に用いられた高麗人参の種子（Ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）メタノール抽出物であり、前記新規なジンセノサイドＧＳ#１０を約０．２％ ｗ／ｗで少量含有している。
【0052】
陽性対照群としては、前記#ＩＢ００４２１－４８Ｐキットに含まれていた１７β－エストラジオール（１７β－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）を用いた。エストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性が増加すると、更年期症状の緩和はできるものの、７０％以上の乳癌細胞でＥＲが過発現しており、これは、主にＥＲα（ＥＳＲ１）の増加によることが報告されている（Deroo BJ et al., J Clin Invest 116:561(2006)参照）。図１１に示されたように、高麗人参の種子由来のジンセノサイドのうちのＧＳ#０３（ジンセノサイドＲｅ）、ＧＳ#０５（ジンセノサイドＲｂ１）とＧＳ#１０はＥＲαの活性を僅か増加させた。一方、図１２に示されたように、高麗人参の種子由来のジンセノサイドのうちの本発明の一実施例であるＧＳ#１０だけがＥＲβを活性化させた。図１３は、前記図１１及び図１２の結果に基づいてＥＲαに対するＥＲβの活性比を示した図であって、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０は、高麗人参の種子由来のジンセノサイドのうち唯一にＥＲα及びＥＲβ活性をともに増加させながらも、ＥＲαに対するＥＲβの活性比が約１．７倍を示し、１を超えた。これは、陽性対照群よりも著しく改善した効果である。
【0053】
また、図１４に示すように、高麗人参の種子抽出物（ＧＳＥ）そのものでは、エストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性増加効果を示していないのに対し、前記高麗人参の種子抽出物（ＧＳＥ）から分離・精製された分画である本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０では、エストロゲン受容体ＥＲα及びＥＲβの活性増加効果を示した。これは、エストロゲン受容体の活性増加による更年期症侯群の予防又は改善効能が、高麗人参の種子抽出物からは示されない本発明の一実施例に係る新規なジンセノサイドＧＳ#１０だけの固有の効能であることを意味する。
【0054】
［試験例２］乳癌細胞成長活性の比較
前記試験例１において、陽性対照群である１７β－エストラジオールは、ＥＲα及びＥＲβの活性をともに増加させるのに対し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０は、ＥＲαよりもＥＲβの活性を大きく増加させる結果を示した（図１３）。ＥＲαが活性化すると、乳癌細胞の成長や細胞分裂が増加して乳癌の有病率が高くなるが、ＥＲβは、ＥＲαの活性を抑制して癌細胞の成長を抑制することから、ＥＲαよりもＥＲβの活性増加率が高い場合、エストロゲン補充療法（ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ）の代表的な副作用と知られた乳癌の発病可能性が著しく低下することと予想される。そこで、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０が癌細胞の成長を促進する副作用を現すか否かを調べるために、ＭＣＦ－７乳癌細胞株（ＡＴＣＣ）を用いて細胞の成長を観察した。具体的に、ＭＣＦ－７乳癌細胞株（ＡＴＣＣ）に対し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０及び既存の高麗人参の種子抽出物から分離した他のジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６をそれぞれ１０μｇ／ｍｌの濃度で４８時間処理した後、細胞計数装置（ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｄｅｖｉｃｅ；Ｃｏｕｎｔｅｓｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて細胞数を測定した。
前記試験例１において、陽性対照群である１７β－エストラジオールは、ＥＲα及びＥＲβの活性をともに増加させるのに対し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０は、ＥＲαよりもＥＲβの活性を大きく増加させる結果を示した（図１３）。ＥＲαが活性化すると、乳癌細胞の成長や細胞分裂が増加して乳癌の有病率が高くなるが、ＥＲβは、ＥＲαの活性を抑制して癌細胞の成長を抑制することから、ＥＲαよりもＥＲβの活性増加率が高い場合、エストロゲン補充療法（ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ）の代表的な副作用と知られた乳癌の発病可能性が著しく低下することと予想される。そこで、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０が癌細胞の成長を促進する副作用を現すか否かを調べるために、ＭＣＦ－７乳癌細胞株（ＡＴＣＣ）を用いて細胞の成長を観察した。具体的に、ＭＣＦ－７乳癌細胞株（ＡＴＣＣ）に対し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０及び既存の高麗人参の種子抽出物から分離した他のジンセノサイドＧＳ#０１－ＧＳ#０６をそれぞれ１０μｇ／ｍｌの濃度で４８時間処理した後、細胞計数装置（ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｄｅｖｉｃｅ；Ｃｏｕｎｔｅｓｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて細胞数を測定した。
【0055】
その結果、図１５に示すように、１７β－エストラジオールは、優れたＥＲβ活性化効果を示すものの、ＥＲαをも活性化させることから乳癌細胞の成長が促進しているのに対し、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０は、このような副作用を示していない。これは、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０が既存のエストロゲン補充療法（ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ）での副作用を示すことなくエストロゲン受容体活性化効果を奏することを意味する。
【0056】
［試験例３］エストロゲン受容体活性効能の比較
本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０の更年期症状の予防又は改善効能を、本発明の比較例として紅参指標成分であるジンセノサイドＲｇ１、Ｒｇ３、及びＲｂ１（Ｓｉｇｍａ社から購買）と比較した。このとき、前記本発明の比較例であるジンセノサイドＲｇ３の化学構造は次のとおりである。実験は、前記試験例１と同法にてそれぞれ行った。
本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０の更年期症状の予防又は改善効能を、本発明の比較例として紅参指標成分であるジンセノサイドＲｇ１、Ｒｇ３、及びＲｂ１（Ｓｉｇｍａ社から購買）と比較した。このとき、前記本発明の比較例であるジンセノサイドＲｇ３の化学構造は次のとおりである。実験は、前記試験例１と同法にてそれぞれ行った。
【0057】
【化2】
【0058】
その結果、図１６及び図１７に示すように、紅参指標成分であるジンセノサイドＲｂ１、Ｒｇ１、及びＲｇ３ともに、一定のレベルのエストロゲン受容体活性化を示したが、珍しくも、ＥＲα活性増加に関しては、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０がジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１よりも優れていない結果を示したのに対し、ＥＲβ活性効能に関しては、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０がＲｇ１及びＲｂ１に比べて最小３倍以上の高い結果を示した（Ｒｇ１ ３２％、Ｒｂ１ １５％、ＧＳ#１０ １３６％）。これは、本発明の一実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０のほうが紅参指標成分であるジンセノサイドＲｂ１、Ｒｇ１、及びＲｇ３よりもＥＲαに対するＥＲβ活性比が高く、乳癌の発病危険が低いながらも優れたエストロゲン受容体活性化効果を奏することから、更年期症状の予防又は改善剤として製品に商業的な適用が可能な程度に高い薬剤学的可能性のある素材であることを示唆する。
【0059】
［試験例４］細胞毒性
ジンセノサイドが細胞毒性活性を通じて更年期症状の予防又は改善効能に影響を及ぼす可能性を排除するために、ＣＣＫ（Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ)－８を用いて本発明の実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０の存在時の細胞成長を評価した。実験方法は次のとおりである。
ジンセノサイドが細胞毒性活性を通じて更年期症状の予防又は改善効能に影響を及ぼす可能性を排除するために、ＣＣＫ（Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ)－８を用いて本発明の実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０の存在時の細胞成長を評価した。実験方法は次のとおりである。
【0060】
ＣＣＫ－８試薬を、培養中のＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞（Ｄｏｊｉｎｄｏ、ＭＤ、ＵＳＡ）に、９６－ウェルプレート（ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）基準で１０μｌ入れ、３７℃で２時間放置した後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。前記細胞生存力を未処理サンプルに対する各サンプルの絶対光学密度の百分率（％）で表示した。このとき、前記細胞が培養される培地に含まれる本発明の実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０の濃度は、それぞれ０．１、１、５、１０、２０、５０μＭとした。
【0061】
その結果、図１８から確認できるように、本発明の実施例である新規なジンセノサイドＧＳ#１０は、５０μＭまでは細胞毒性を示さなかった。このような結果は、本発明の実施例である新規なジンセノサイドが細胞生存力に有害な影響を与えることなく更年期症状の予防又は改善効果を奏し得ることを示す。
【0062】
以下、本明細書の一実施例に係る組成物の剤形例を説明するが、他の種々の剤形への応用も可能であり、これは、本明細書を限定するためではない単に具体的に説明するためのものである。
【0063】
［剤形例１］錠剤
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ １００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して錠剤を製造した。
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ １００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して錠剤を製造した。
【0064】
［剤形例２］カプセル剤
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ １００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法に従いゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ １００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法に従いゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【0065】
［剤形例３］顆粒剤
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を用いて顆粒に成形した後、分包に充填した。
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を用いて顆粒に成形した後、分包に充填した。
【0066】
［剤形例４］ドリンク剤
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて、各瓶に２００ｍｌずつ充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４～５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて、各瓶に２００ｍｌずつ充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４～５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【0067】
［剤形例５］キャラメル剤形
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、とうもろこしシロップ（ｃｏｒｎ ｓｙｒｕｐ）１．８ｇ、脱脂牛乳０．５ｇ、大豆レシチン０．５ｇ、バター０．６ｇ、植物性硬化油０．４ｇ、砂糖１．４ｇ、マーガリン０．５８ｇ、び食塩２０ｍｇを混合し、キャラメル成形した。
ジンセノサイドＰＧ－ＲＴ８ ５０ｍｇ、とうもろこしシロップ（ｃｏｒｎ ｓｙｒｕｐ）１．８ｇ、脱脂牛乳０．５ｇ、大豆レシチン０．５ｇ、バター０．６ｇ、植物性硬化油０．４ｇ、砂糖１．４ｇ、マーガリン０．５８ｇ、び食塩２０ｍｇを混合し、キャラメル成形した。
【0068】
［剤形例６］健康食品
【0069】
【表3】
【0070】
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法に従い前記成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法に従い健康食品の組成物の製造に用いてよい。
【0071】
［剤形例７］健康飲料
【0072】
【表4】
【0073】
前記表のように総体積９００ｍｌになるように残量の精製水を添加して通常の健康飲料の製造方法に従い前記成分を混合してから約１時間８５℃で撹拌加熱し、これにより調製された溶液をろ過して得られたろ液を滅菌された２リットルの容器に入れて密封滅菌した後に冷蔵保管して健康飲料の組成物の製造に用いてよい。
【0074】
［剤形例８］注射剤
下記の表に記載された組成にて通常の方法に従い注射剤を製造した。
下記の表に記載された組成にて通常の方法に従い注射剤を製造した。
【0075】
【表5】
【0076】
本発明は、一実施例として、次の実施形態を提供することができる。
【0077】
第１実施形態は、（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル（１→２）－β－Ｄ－グルコピラノシド－ダンマル－３－オン－２０,２４－エポキシ－６ａ，１２ｂ，２５－トリオール（（２０Ｓ，２４Ｒ）－６－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→２）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ－ｄａｍｍａｒ－３－ｏｎｅ－２０,２４－ｅｐｏｘｙ－６ａ，１２ｂ，２５－ｔｒｉｏｌ）、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、更年期症状の予防又は改善用組成物を提供することができる。
【0078】
第２実施形態は、第１実施形態において、前記有効成分は、下記化学式１で表される構造を有するものである、組成物を提供することができる。
【0079】
【化3】
【0080】
第３実施形態は、第１実施形態又は第２実施形態において、前記有効成分は高麗人参の種子から抽出したものである、組成物を提供することができる。
【0081】
第４実施形態は、第１実施形態～第３実施形態のいずれか一つ以上において、めまい、睡眠障害、顔面紅潮、骨粗鬆症、夜間発汗、鬱病、頭痛、及び疲労感のうちの一つ以上を含む症状の予防又は改善用途である、組成物を提供することができる。
【0082】
第５実施形態は、第１実施形態～第４実施形態のいずれか一つ以上において、当該組成物の対象への投与時におけるＥＲα（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α）に対するＥＲβ（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ β）の活性比は１．１倍以上である、組成物を提供することができる。
【0083】
第６実施形態は、第１実施形態～第５実施形態のいずれか一つ以上において、前記有効成分を組成物の総重量に対して０．０００１～９９.９重量％の範囲で含む、組成物を提供することができる。
【0084】
第７実施形態は、第１実施形態～第６実施形態のいずれか一つ以上において、当該組成物の投与量は０．０５ｍｇ／ｋｇ／日～１０ｇ／ｋｇ／日の範囲である、組成物を提供することができる。
【0085】
第８実施形態は、第１実施形態～第７実施形態のいずれか一つ以上において、当該記組成物の投与対象は、エストロゲン受容体活性が減少した対象である、組成物を提供することができる。
【0086】
第９実施形態は、第１実施形態～第８実施形態のいずれか一つ以上において、当該組成物は食品組成物である、組成物を提供することができる。
【0087】
第１０実施形態は、第１実施形態～第９実施形態のいずれか一つ以上において、当該組成物は薬学組成物である、組成物を提供することができる。
【0088】
前記実施形態は本発明の説明のために開示されたものであり、前記説明は本発明の範囲を制限するものではない。したがって、本発明の意味及び範囲を逸脱しない限り、種々の修正、変形、及び置き換えが当該技術分野の通常の技術者から生じることがある。
【図1】
【図2a】
【図2b】
【図2c】
【図2d】
【図2e】
【図2f】
【図2g】
【図2h】
【図2i】
【図2j】
【図2k】
【図2l】
【図3a】
【図3b】
【図3c】
【図3d】
【図3e】
【図3f】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】