特許 7531514 操作されたｍＲＮＡ配列及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-01

(45)【発行日】2024-08-09

(54)【発明の名称】操作されたｍＲＮＡ配列及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/11 20060101AFI20240802BHJP

   C12N 15/67 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240802BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240802BHJP

   C12N 15/50 20060101ALN20240802BHJP

【ＦＩ】

C12N15/11 Z ZNA

C12N15/67 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N15/63 Z

C12N15/12

C12N15/50

【請求項の数】 30

(21)【出願番号】P 2021557346

(86)(22)【出願日】2020-03-25

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-28

(86)【国際出願番号】 US2020024674

(87)【国際公開番号】W WO2020198337

(87)【国際公開日】2020-10-01

【審査請求日】2023-03-20

(31)【優先権主張番号】62/823,215

(32)【優先日】2019-03-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514137997

【氏名又は名称】オハイオ・ステイト・イノベーション・ファウンデーション

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】ドン，イージョウ

(72)【発明者】

【氏名】ゼン，チュンシー

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ，ウェイユー

【審査官】田ノ上 拓自

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５０２６７０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ１２Ｎ １／１５

Ｃ１２Ｎ １／１９

Ｃ１２Ｎ １／２１

Ｃ１２Ｎ ５／１０

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

操作されたＲＰＳ２７Ａ ５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列と；
異種核酸配列を含む第２の核酸配列と；
ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列と、を含み、
操作されたＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列が配列番号８２、配列番号８３、または配列番号８４を含む、操作されたｍＲＮＡ。

【請求項2】

前記異種核酸配列が、標的タンパク質をコードする、請求項１に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項3】

前記標的タンパク質が、蛍光タンパク質を含む、請求項２に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項4】

前記蛍光タンパク質が、ＧＦＰまたはｍＣｈｅｒｒｙを含む、請求項３に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項5】

前記標的タンパク質が、ウイルスタンパク質を含む、請求項２に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項6】

前記ウイルスタンパク質が、ＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である、請求項５に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項7】

前記標的タンパク質が、共刺激分子を含む、請求項２に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項8】

前記共刺激分子が、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される、請求項７に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項9】

前記ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列が、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１を含む群から選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項10】

配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または配列番号４０を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項11】

配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項12】

前記操作されたｍＲＮＡが、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項13】

前記少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドが、化学的に修飾された核酸塩基である、請求項１２に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項14】

前記化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、請求項１３に記載の操作されたｍＲＮＡ。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか１項に記載の操作されたｍＲＮＡをコードする核酸を含むベクター。

【請求項16】

請求項１５に記載のベクターを含む細胞。

【請求項17】

タンパク質発現を増加させる方法であって、
操作されたＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列と；
異種核酸配列を含む第２の核酸配列と；
ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列と、を含む、操作されたｍＲＮＡを細胞に導入するステップを含み、
操作された５’ＵＴＲ配列が配列番号８２、配列番号８３、または配列番号８４を含む、前記方法。

【請求項18】

前記異種核酸配列が、標的タンパク質をコードする、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記標的タンパク質が、蛍光タンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記蛍光タンパク質が、ＧＦＰまたはｍＣｈｅｒｒｙを含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記標的タンパク質が、ウイルスタンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記ウイルスタンパク質が、ＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記標的タンパク質が、共刺激分子を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項24】

前記共刺激分子が、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列が、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１を含む群から選択される、請求項１７～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記操作されたｍＲＮＡが、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または配列番号４０を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む、請求項１７～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記操作されたｍＲＮＡが、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む、請求項１７～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記操作されたｍＲＮＡが、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む、請求項１７～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドが、化学的に修飾された核酸塩基である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、請求項２９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年３月２５日に出願した米国仮出願第６２／８２３，２１５号の利益を主張するものであり、これは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0002】

連邦政府支援の研究に関する声明文
本発明は、合衆国国立衛生研究所から与えられた助成金Ｒ３５ＧＭ１１９６７９による合衆国政府の援助を受けてなされたものである。政府は、本発明において特定の権利を有する。

【0003】

本開示は、タンパク質発現を改善するための一連の操作されたｍＲＮＡ配列及び使用方法に関する。

【背景技術】

【0004】

メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、ＤＮＡからタンパク質への遺伝子発現の重要な媒介因子及び調節因子である。すべての生物のタンパク質は、翻訳と呼ばれるプロセス内の青写真としてｍＲＮＡを使用して細胞内で産生される。ｍＲＮＡからタンパク質を作製する細胞内プロセスは、様々なタンパク質の生物学的機能のバランスをとるために細部にわって調節を受ける。

【0005】

メッセンジャーＲＮＡは、５’から３’までのいくつかの主要なセグメント、すなわちキャップ、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、コード領域、３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）、及びテールからなる長いポリヌクレオチド鎖である。５’末端のキャップは、リボソームなど翻訳開始複合体の動員に関与している。コード領域は、翻訳時に産生されるタンパク質を指示する。５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、このｍＲＮＡからコードされたタンパク質の発現レベルを調節する重要な要素である。それらの作用メカニズムは、それらの固有のヌクレオチド配列と、これらの配列を認識する対応するＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）との間の相互作用に大きく依存する。ｍＲＮＡの半減期及び発現効率は、一般に、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲに結合する様々なＲＢＰによって調節される。哺乳動物細胞内のほとんどのｍＲＮＡは、３’末端にポリアデノシン（ｐｏｌｙＡ）テールを含む。ＰｏｌｙＡテールは、ｍＲＮＡの３’から５’への崩壊経路への耐性を伝達することにより、ｍＲＮＡ鎖の安定性に寄与し、このため、ｍＲＮＡの半減期を延長させる。ＰｏｌｙＡテールは、ｍＲＮＡ５’末端に戻ることがわかっており、翻訳開始に関与する。

【0006】

多くの疾患は、細胞のタンパク質合成のエラーから生じ、その結果、不十分な機能性タンパク質または変異した有害なタンパク質がもたらされる。従来のタンパク質療法は、他の生物内で所望のタンパク質を製造し、それらを細胞に直接送達して、失われた細胞機能を補完するかまたは修正する。しかし、送達されるタンパク質の多くは、外因性であるため、低用量では不十分であり、高用量では免疫原性がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

ｍＲＮＡ治療の新しい分野では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写と呼ばれるプロセスを通じて、実験室内でタンパク質をコードするｍＲＮＡを合成し、ｍＲＮＡを細胞に送達する。ｍＲＮＡによってコードされる所望のタンパク質は、細胞内タンパク質合成機構によって産生することができる。しかし、送達されたｍＲＮＡのタンパク質発現レベルは、劇的に異なる。必要なのは、送達されたｍＲＮＡの発現効率及び半減期を改善するための方法である。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本明細書に開示されるのは、タンパク質発現を改善するための一連の操作されたｍＲＮＡ及び方法である。

【0009】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列または操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。

【0010】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含む群から選択される。

【0011】

いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、標的タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、任意の目的のタンパク質（ＰＯＩ）である。

【0012】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、免疫療法タンパク質である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、共刺激分子である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ゲノム編集酵素またはヌクレアーゼである。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、タンパク質補充療法のためのものである。

【0013】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質に融合される。一実施形態では、蛍光タンパク質は、ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈ）である。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＧＦＰまたはＹＦＰである。

【0014】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ウイルスタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、ＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１を含む群から選択される。

【0016】

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡは、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または配列番号４０を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡは、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾された核酸塩基である。いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、シュードウリジンである。

【0019】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡを含むベクターである。いくつかの実施形態では、細胞は、任意の先行する態様のベクターを含む。

【0020】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡを細胞に導入するステップを含む、タンパク質発現を増加させる方法である。

【0021】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含む群から選択される。

【0022】

いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、標的タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、任意の目的のタンパク質（ＰＯＩ）である。

【0023】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質に融合される。一実施形態では、蛍光タンパク質は、ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈ）である。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＧＦＰまたはＹＦＰである。

【0024】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ウイルスタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、ＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である。

【0025】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１を含む群から選択される。

【0026】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または配列番号４０を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0028】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。

【0029】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、または配列番号８６を含む群から選択される。

【0030】

添付の図面は、本明細書に援用されると共に、本明細書の一部を構成し、以下に説明するいくつかの態様を示す。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1A】Ａ５４９（図１Ａ）細胞及びＨｅｐ３Ｂ（図１Ｂ）細胞におけるマウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子からの修飾５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含むまたは含まないルシフェラーゼｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ発現を示す図である。ＡＧ＋Ｇ、ＡＧ＋Ｇｗ／ｏ３ＵＴＲ及びＣＹＢＡは、他の操作されたｍＲＮＡと同一のコード配列を有する対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。

【図1B】同上

【図2A】は、Ａ５４９細胞（図２Ａ）、Ｈｅｐ３Ｂ細胞（図２Ｂ）、及び２９３Ｔ細胞（図２Ｃ）におけるマウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子からの修飾５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含むかまたは含まないｅＧＦＰ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ発現を示す図である。

【図2B】同上

【図2C】同上

【図3】Ａ５４９細胞におけるシュードウリジン修飾を含むかまたは含まない５ＵＴＲ－１８及び３ＵＴＲ－１で操作されたルシフェラーゼｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ発現を示す図である。

【図4A】Ｈｅｐ３Ｂ細胞（図４Ａ）及びＡ５４９細胞（図４Ｂ）において、５ＵＴＲ－２２＋３ＵＴＲ－１で操作され、５ＵＴＲ－２３＋３ＵＴＲ－１で操作されたシュードウリジン修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ発現を示す図である。

【図4B】同上

【図5】本明細書に開示の５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲ配列を有するｅＧＦＰ／ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡによる、または生きたＨｅｐ３Ｂ細胞を使用する市販のイメージングプローブによるオルガネラターゲティングのライブイメージングを示す図である。

【図6A】哺乳動物細胞中で発現の試験を行った、１０ｎｔ（５ＵＴＲ－１２）、３０ｎｔ（５ＵＴＲ－１４）、５０ｎｔ（５ＵＴＲ－１６）、７０ｎｔ（５ＵＴＲ－１８）、または９０ｎｔ（５ＵＴＲ－２４）からなる５’ＵＴＲを有するホタルルシフェラーゼｍＲＮＡを示す図である。これらの結果は、それぞれ、Ｈｅｐ３Ｂ細胞（図６Ａ）及び２９３Ｔ細胞（図６Ｂ）について示されている。

【図6B】同上

【図7A】５’ＵＴＲ内に位置するマイクロＲＮＡ標的部位が、ｍＲＮＡ発現を増強するために除去されたことを示す図である。結果は、それぞれ、Ｈｅｐ３Ｂ細胞（図７Ａ）及び２９３Ｔ細胞（図７Ｂ）について示されている。

【図7B】同上

【図8A】追加の機能的ＲＮＡモチーフが３ＵＴＲ－１の３’末端に付加されて、ｍＲＮＡ発現を増強することを示す図である。結果は、それぞれ、Ｈｅｐ３Ｂ細胞（図８Ａ）及び２９３Ｔ細胞（図８Ｂ）について示している。

【図8B】同上

【発明を実施するための形態】

【0032】

本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ及びＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲの修飾部分を含む一連の操作されたｍＲＮＡ、及びタンパク質発現を改善するための方法である。また、本明細書に開示されるのは、操作された（天然に存在しない）５’ＵＴＲ配列を含む一連の操作されたｍＲＮＡ及びタンパク質発現を改善するための方法である。

【0033】

本発明の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、図面及び実施例に例証されている。しかし、本発明は、多くの異なる形態で具体化されてもよく、本明細書に記載される実施形態に限定されると解釈されるべきではない。

【0034】

別途に定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者に普通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語及びその変形は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語及びその変形と同義に用いられ、限定されていない、非限定的な用語である。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、様々な実施形態を説明するために本明細書で使用されてきたが、「本質的にからなる」及び「からなる」という用語は、より具体的な実施形態を提供するために「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の代わりに使用している場合があり、また開示されている。本開示及び添付の特許請求の範囲に使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。

【0035】

以下の定義は、本明細書で使用されている用語を完全に理解するために提供される。

【0036】

用語
本明細書で使用される「核酸」という用語は、ヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。

【0037】

本明細書で使用される「リボ核酸」及び「ＲＮＡ」という用語は、リボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。

【0038】

「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドモノマーから構成される一本鎖または二本鎖ポリマーを指す。

【0039】

「ポリペプチド」という用語は、Ｄ－アミノ酸もしくはＬ－アミノ酸の一本鎖、またはペプチド結合によって連結されたＤ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸の混合物から構成される化合物を指す。

【0040】

「標的タンパク質」という用語は、所与の操作されたｍＲＮＡによって発現するタンパク質またはポリペプチドを指す。標的タンパク質は、天然に存在する分子または人工の分子であり得る。また、標的タンパク質は改変されていない状態で、または他の種との凝集体として使用することができる。

【0041】

「相補的」という用語は、プローブ分子とその標的の相互作用する表面のトポロジー的適合性または一致を指す。したがって、標的とそのプローブは相補的であると説明することができ、さらに、接触表面の特性は、互いに相補的である。

【0042】

「ハイブリダイゼーション」という用語は、核酸の２つ以上の相補的鎖の間の非共有的、かつ配列特異的相互作用を確立して、単一のハイブリッドにするプロセスを指し、これは２つの鎖の場合には二本鎖と呼ばれる。

【0043】

「アニーリング」という用語は、水素結合によって一本鎖核酸配列が相補的配列に対になり、熱によって分離された相補的鎖の再形成（再生）（熱変性）など、二本鎖核酸配列を形成するプロセスを指す。

【0044】

「融解」という用語は、高温による二本鎖核酸配列の変性を指し、その結果、鎖間の水素結合を切断することによって二本鎖が２つの一本鎖に分離する。

【0045】

「プロモーター」または「調節エレメント」という用語は、転写開始から上流または下流に位置し、転写を開始するためのＲＮＡポリメラーゼ及び他のタンパク質の認識及び結合に関与する領域または配列決定因子を指す。プロモーターは、細菌起源である必要はなく、例えば、ウイルスまたは他の生物に由来するプロモーターは、本明細書に記載の組成物、システム、または方法で使用することができる。「調節エレメント」という用語は、プロモーター、エンハンサー、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル及びポリＵ配列などの転写終結シグナル）を含むことを意図している。そのような調節エレメントは、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．１９９０）に記載されている。調節エレメントとしては、多くのタイプの宿主細胞内でヌクレオチド配列の構成的発現を指示するもの、及びある特定の宿主細胞内でのみヌクレオチド配列の発現を指示するもの（例えば、組織特異的調節配列）が挙げられる。組織特異的プロモーターは、主に、筋肉、ニューロン、骨、皮膚、血液、特定の器官（例えば、肝臓、膵臓）、または特定の細胞型（例えば、リンパ球）などの所望の目的の組織において発現を指示し得る。調節エレメントはまた、細胞周期依存性または発生段階依存性の方法など、時間依存的方法で発現を指示することができ、これは組織または細胞型に特異的であっても、特異的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、ベクターは、１つ以上のｐｏｌ ＩＩＩプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター）、１つ以上のｐｏｌ ＩＩプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ ＩＩプロモーター）、１つ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター）、またはそれらの組み合わせを含む。ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターの例としては、これらに限定されないが、Ｕ６及びＨ１プロモーターが挙げられる。ｐｏｌ ＩＩプロモーターの例としては、これらに限定されないが、レトロウイルス性ルース肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター（任意によりＲＳＶエンハンサーを含む）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（任意によりＣＭＶエンハンサーを含む）［例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，４１：５２１－５３０（１９８５）を参照］、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、β－アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１αプロモーターが挙げられる。「調節エレメント」という用語には、ＷＰＲＥなどのエンハンサーエレメント、ＣＭＶエンハンサー；ＨＴＬＶ－ＩのＬＴＲ内のＲ－Ｕ５’セグメント（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．８（１），ｐ．４６６－４７２，１９８８）；ＳＶ４０エンハンサー；及びウサギβ－グロビンのエクソン２と３の間のイントロン配列（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，Ｖｏｌ．７８（３），ｐ．１５２７－３１，１９８１）も含む。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望の発現レベルなどのような要因に依存し得ることが当業者によって理解されるであろう。

【0046】

「組換え」という用語は、ヒト操作核酸（例えば、ポリヌクレオチド）もしくはヒト操作核酸（例えば、ポリヌクレオチド）の複製もしくは相補体を指し、またはタンパク質（すなわち、「組換えタンパク質」）に関しては、組換え核酸によってコードされるタンパク質（例えば、ポリヌクレオチド）を指す。実施形態において、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーターを含む組換え発現カセットは、ヒト操作の結果として第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチドなど）に対して異種であるプロモーターを含み得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅｓ１－３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４－１９９８）に記載されている方法による）。別の例では、組換え発現カセットは、核酸（例えば、ポリヌクレオチド）が自然界に見出される可能性が非常に低いように組み合わされた核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含み得る。例えば、ヒトが操作する制限部位またはプラスミドベクター配列は、プロモーターを第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に隣接させるかまたは分離させ得る。当業者であれば、核酸（例えば、ポリヌクレオチド）が多くの方法で操作され得、上記の例に限定されないことを認識するであろう。

【0047】

「コードする」は、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指し、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）、または定義されたアミノ酸配列、及びそれらから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び高分子を合成するための鋳型として作用する。

【0048】

「発現カセット」または「ベクター」という用語は、宿主細胞に導入されたときに、それぞれ、ＲＮＡまたはポリペプチドの転写及び／または翻訳をもたらす核酸コンストラクトを指す。実施形態において、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーターを含む発現カセットは、ヒト操作の結果として第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチドなど）に対して異種であるプロモーターを含み得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅｓ１－３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４－１９９８）に記載されている方法による）。いくつかの実施形態では、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたターミネーター（または終結配列）を含む発現カセットは、ヒト操作の結果として、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に対して異種であるターミネーターを含み得る。いくつかの実施形態では、発現カセットは、ヒト操作の結果として、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーター及び第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたターミネーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、内因性プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、内因性ターミネーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、合成（または非天然）プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、合成（または非天然）ターミネーターを含む。

【0049】

「断片」は、断片の活性が、非修飾ペプチドまたはタンパク質と比較して有意に改変または障害されていない限り、他の配列に付着するか否かに関わらず、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択される修飾を含むこともできる。これらの修飾は、いくつかの追加の特性、例えば、ジスルフィド結合可能なアミノ酸を除去するかまたは付加すること、その生物寿命を増長させること、その分泌特性を変化させることなどをもたらすことができる。

【0050】

「増加」は、より高いレベルの遺伝子発現、タンパク質発現、症状の量、疾患、組成物、状態、または活性をもたらすあらゆる変化を指すことができる。物質は、遺伝子、タンパク質、組成物、または状態の量のレベルが、その物質を含まない状態の遺伝子、タンパク質、組成物、またはその状態の量のレベルの産生（ｏｕｔｐｕｔ）と比較してより多い／より高い場合、遺伝子、タンパク質、組成物、またはその状態の量のレベルを増加させていることも理解されている。また、例えば、増加は、症状が以前に観察されたものよりも少なくなるような障害の症状の変化であり得る。増加は、統計的に有意な量の状態、症状、活性、組成物の任意の個々、中央値、または平均の増加であり得る。したがって、増加が統計的に有意である限り、増加は１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の増加であり得る。

【0051】

「減少」は、より低いレベルの遺伝子発現、タンパク質発現、症状の量、疾患、組成物、状態、または活性をもたらすあらゆる変化を指すことができる。物質は、遺伝子、タンパク質、組成物、または状態の量のレベルが、その物質を含まない状態の遺伝子、タンパク質、組成物、またはその状態の量のレベルの産生と比較してより少ない／より低い場合、遺伝子、タンパク質、組成物、またはその状態の量のレベルを減少させていることも理解されている。減少は、統計的に有意な量の状態、症状、活性、組成物の任意の個々、中央値、または平均の減少であり得る。したがって、減少が統計的に有意である限り、減少は１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少であり得る。

【0052】

２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一性」またはパーセント「同一性」という用語は、下記のデフォルトパラメータを使用したＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０シーケンス比較アルゴリズムを使用して、または手動のアライメント及び目視検査によって測定された（例えば、ＮＣＢＩ Ｗｅｂサイトなどを参照）、同一であるか、または同一である特定のパーセンテージ（すなわち、比較ウィンドウまたは指定された領域で最大の対応を得るために比較し、アラインされた場合、指定された領域で、約６０％の同一性、好ましくは６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性）のアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する２つ以上の配列またはサブ配列を指す。そのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。この定義は、試験配列の相補を指すか、または相補に適用され得る。この定義には、欠失及び／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列も含む。以下に記載のとおり、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを説明できる。好ましくは、同一性は、少なくとも約１０アミノ酸もしくは２０ヌクレオチド長である領域、またはより好ましくは、１０～５０アミノ酸もしくは２０～５０ヌクレオチド長である領域に存在する。本明細書で使用される場合、アミノ酸配列同一性パーセント（％）は、参照配列内のアミノ酸と同一である候補配列内のアミノ酸のパーセンテージとして定義され、配列をアラインさせ、必要に応じてギャップを導入した後、最大の配列同一性パーセントを得る。配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど、公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメータは、既知の方法によって決定できる。

【0053】

配列比較のために、典型的には、１つの配列が参照配列として機能し、これと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じてサブシーケンス座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。好ましくは、デフォルトのプログラムパラメータを使用することができるか、または代替的パラメータを指定することができる。その後、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを算出する。

【0054】

配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するために好適であるアルゴリズムの好ましい一例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである（それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して一般に利用可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列における同じ長さのワードと整列するときに何らかの正値の閾値スコアＴと一致するかまたはそれを満たす、問い合わせ配列における長さの短いワードＷを特定することによって、高スコアの配列対（ＨＳＰ）を特定することを伴う。Ｔは、近傍のワードスコア閾値と称する（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０）。これらの最初の近傍のワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見出すために検索を開始するためのシード値として機能する。ワードヒットは、累積整列スコアが増加することができる限り、各配列に沿って両方向に延びる。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（マッチする残基の対に対するリワードスコア；常に０超）及びＮ（ミスマッチの残基に対するペナルティスコア；常に０未満）を使用して算出する。アミノ酸配列については、スコア化マトリックスを使用して累積スコアを算出する。各方向へのワードヒットの拡張は、次の場合に停止される：累積整列スコアがその最大の実績値から量Ｘ分減少する場合、累積スコアが、１つ以上の負のスコアの残基整列の蓄積に起因してゼロ以下になる場合、またはいずれかの配列の終端に達する場合に停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、整列の感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、１１のワード長（Ｗ）、期待値（Ｅ）または１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較をデフォルトで使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、ならびに５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコア化マトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９），Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８９：１０９１５）整列（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較をデフォルトで使用する。

【0055】

ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計的分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムが提供する類似性の１つの測定は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の一致が偶然に起こり得る確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸とを比較した際の最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満である場合に、参照配列に類似していると見なされる。

【0056】

「コドン最適化」という句は、様々な宿主へのトランスフォーメーション用の核酸分子の遺伝子またはコード領域に関する場合、ＤＮＡによってコードされるポリペプチドを改変せずに、選択された生物の典型的なコドン使用頻度を反映するように、そのポリ核酸分子の遺伝子またはコード領域におけるコドンを改変することを指す。このような最適化としては、少なくとも１つ、２つ以上または有意な数のコドンを、選択された生物の遺伝子での使用頻度がより高い１つ以上のコドンに置き換えることが挙げられる。

【0057】

核酸は、それが別の核酸配列と機能的な関係性に置かれるとき、「操作可能に連結」されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結しているか、プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、その配列に操作可能に連結しているか、あるいはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に操作可能に連結されている。概して、「操作可能に連結される」とは、連結されるＤＮＡ配列が互いに近接し、分泌リーダーの場合、連続的であり、リーディング相内にあることを意味する。しかし、操作可能に連結された核酸（例えば、エンハンサー及びコード配列）は、連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在していない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。実施形態では、プロモーターは、そのコード配列からのタンパク質の発現に影響を与える（例えば、プロモーターの非存在に対して調節する）ことができる場合（すなわち、コード配列がプロモーターの転写制御下にある場合）、コード配列と操作可能に連結される。

【0058】

「核酸塩基」という用語は、ワトソン／クリックの塩基対形成機能を保有するヌクレオチドの部分を指す。最も一般的な天然の核酸塩基であるアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、ウラシル（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、及びチミン（Ｔ）は、ある核酸鎖を別の核酸鎖に配列特異的に結合する水素結合機能を保有する。

【0059】

全体を通して使用されるとおり、「対象」（または「宿主」）とは、個体を意味する。したがって、「対象」には、例えば、ネコ、イヌなどの飼育動物、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）、哺乳動物、非ヒト哺乳動物、霊長類、非ヒト霊長類、げっ歯類、トリ、爬虫類、両生類、魚、及び任意の他の動物を挙げることができる。対象は、霊長目またはヒトなどの哺乳動物であり得る。

【0060】

量、パーセンテージなど測定可能な値を指すときに本明細書で使用される「約」という用語は、測定可能な値から±２０％、±１０％、±５％、または±１％の変動を包含することを意味する。

【0061】

核酸配列は、それが外来種に由来する場合、または同じ種に由来する場合、その元の形態からのヒトの作用によって改変される場合、第２の核酸配列に対して「異種」である。例えば、異種コード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、プロモーターが由来するものとは異なる種からのコード配列、または同じ種からのものである場合、天然に存在する対立遺伝子バリアントとは異なるコード配列を指す。

【0062】

本明細書で使用される「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、及びそれらの文法的変形という用語は、障害または状態の１つ以上の付随する症状の強度を部分的または完全に遅延させるか、緩和するか、軽減するか、または減少させること、及び／または障害または状態の１つ以上の原因を緩和するか、軽減するか、または減少させることを含む。本発明による治療は、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｌｙ）、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃａｌｌｙ）、緩和的、または治療的に適用され得る。予防的治療では、発症前、早期発症中、またはがんの確立された発症後に対象に投与される。予防的投与では、感染の症状の出現前に数日から数年間行うことができる。

【0063】

本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、本発明の操作されたｍＲＮＡを含み、対象に投与することができる形態であり、かつ免疫を誘導して、感染症を予防する及び／または改善するため、感染症を改善するため、及び／または感染症の少なくとも１つの症状を減少させるため、及び／またはワクチンの別の用量の有効性を高めるため、十分な防御免疫応答を誘導する製剤を指す。典型的には、ワクチンは、本発明の組成物が懸濁されているかまたは溶解されている従来の生理食塩水または緩衝水溶液媒体を含む。この形態では、本発明の組成物は、感染を予防するか、改善するか、または別の方法で治療するために簡便に使用することができる。宿主に導入されたときに、ワクチンは、これらに限定されないが、抗体及び／またはサイトカインの産生、及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、抗原提示細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、樹状細胞の活性化、及び／または他の細胞応答など、免疫応答を誘発することができる。

【0064】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、製剤中の特定の免疫原と組み合わせて使用される場合、結果として生じる免疫応答を増強するか、さもなければ変化させるかまたは修飾させる化合物を指す。免疫応答を改変することは、抗体及び細胞性免疫応答のいずれかまたは両方の特異性を強化することかまたは拡大することを含む。免疫応答を改変することは、特定の抗原特異的免疫応答を減少するかまたは抑制することを意味し得る。

【0065】

「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、これらに限定されないが、増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の同族結合パートナーを指す。

【0066】

組成物及び方法
本明細書に開示されるのは、タンパク質発現を改善するための一連の操作されたｍＲＮＡ及び方法である。いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列または操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ（３’非翻訳領域）３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。

【0067】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号２である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号３である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号４である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号５である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号６である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号７である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号８である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号９である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１０である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１１である。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１またはその断片または機能的に活性なバリアントを含む群から選択される。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列を含む群から選択される。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１、断片またはその機能的に活性なバリアントを含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２５である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２６である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号８７である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号８９である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号９１である。いくつかの実施形態では、任意の先行する態様のＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、機能的モチーフＡ、モチーフＢ、及び／またはモチーフＣを含み、機能的モチーフＡは、配列番号８８を含み、機能的モチーフＢは、配列番号９０を含み、機能的モチーフＣは、配列番号９２を含む。

【0071】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号８７、配列番号８９、または配列番号９１と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列を含む群から選択される。

【0072】

いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、標的タンパク質をコードする。異種核酸配列または標的タンパク質は、目的の任意の核酸配列／タンパク質であり得る。

【0073】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、免疫療法タンパク質である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、共刺激分子である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ゲノム編集酵素またはヌクレアーゼである。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、タンパク質補充療法のためのものである。

【0074】

いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される。

【0075】

いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＤＲ２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＧＩＴＲである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＳＬＡＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２２６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ガレクチン９である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＦＡ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＬ１Ａである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＧＩＴＲＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ３０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＳＬＡＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ５８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ１５５である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ１１２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ３である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ４である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＡＭ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＦＡ３である。

【0076】

共刺激分子の配列としては、例えば（ヒト配列の場合）、ＩＣＯＳ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１２０９２．３）、ＣＤ２８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．４）、ＣＤ２７（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４２．４）、ＨＶＥＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８２０．３）、ＬＩＧＨＴ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８０７．４）、ＣＤ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００００７４．２）、４－１ＢＢ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１５６１．５）、ＯＸ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２７．４）、ＤＲ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１４８９６５．１）、ＧＩＴＲ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００４１９５．３）、ＣＤ３０（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｍ８３５５４．１）、ＳＬＡＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３０３７．４）、ＣＤ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１３２８６０９．１）、ＣＤ２２６（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５６６．３）、ガレクチン－９（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＢ０４０１３０．２）、ＴＩＭ１（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ０２０８２．１）、Ｂ７－Ｈ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１５２５９．５）、Ｂ７－１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１９１．４）、Ｂ７－２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１７５８６２．５）、ＣＤ７０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５２．５）、ＣＤ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５０．５）、４－１ＢＢＬ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８１１．４）、ＯＸ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２６．５）、ＴＬ１Ａ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１１８．４）、ＧＩＴＲＬ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＹ３５８８６８．１）、ＣＤ３０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４４．３）、ＳＬＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ３３０１７．１）、ＣＤ４８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７８．４）、ＣＤ５８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７９．３）、ＣＤ１５５（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５０５．５）、ＣＤ１１２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０４２７２４．２）、ＴＩＭ３（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ４５０２４２．１）、ＴＩＭ４（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１３８３７９．３）、ＩＣＡＭ１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００２０１．３）が挙げられる。

【0077】

したがって、いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１２０９２．３）、ＣＤ２８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．４）、ＣＤ２７（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４２．４）、ＨＶＥＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８２０．３）、ＬＩＧＨＴ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８０７．４）、ＣＤ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００００７４．２）、４－１ＢＢ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１５６１．５）、ＯＸ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２７．４）、ＤＲ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１４８９６５．１）、ＧＩＴＲ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００４１９５．３）、ＣＤ３０（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｍ８３５５４．１）、ＳＬＡＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３０３７．４）、ＣＤ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１３２８６０９．１）、ＣＤ２２６（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５６６．３）、ガレクチン－９（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＢ０４０１３０．２）、ＴＩＭ１（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ０２０８２．１）、Ｂ７－Ｈ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１５２５９．５）、Ｂ７－１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１９１．４）、Ｂ７－２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１７５８６２．５）、ＣＤ７０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５２．５）、ＣＤ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５０．５）、４－１ＢＢＬ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８１１．４）、ＯＸ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２６．５）、ＴＬ１Ａ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１１８．４）、ＧＩＴＲＬ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＹ３５８８６８．１）、ＣＤ３０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４４．３）、ＳＬＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ３３０１７．１）、ＣＤ４８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７８．４）、ＣＤ５８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７９．３）、ＣＤ１５５（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５０５．５）、ＣＤ１１２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０４２７２４．２）、ＴＩＭ３（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ４５０２４２．１）、ＴＩＭ４（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１３８３７９．３）、ＩＣＡＭ１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００２０１．３）、と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列、またはそのバリアントまたはその断片を含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、ゲノム編集酵素は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはＣＲＩＳＰＲ（クラスター化された規則的に間隔を空けた短いパリンドロームリピート）システムヌクレアーゼから選択される。いくつかの実施形態では、ゲノム編集酵素は、Ｃｐｆ１、またはそのバリアントまたは相同体である。いくつかの実施形態では、ゲノム編集酵素は、Ｃａｓ９、またはそのバリアントまたは相同体である。

【0079】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質に融合される。一実施形態では、蛍光タンパク質は、ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈ）を含む。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＧＦＰを含む。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＹＦＰを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ウイルスタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、コロナウイルスタンパク質である。コロナウイルスは、コロナウイルス科のオルトコロナウイルス亜科、ニドウイルス目、及びリボウィリア領域である。それらは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノム及びらせん対称のヌクレオカプシドを有するエンベロープウイルスである。コロナウイルスのゲノムサイズは、約２７～３４キロベースの範囲である。コロナウイルスの構造は、一般に、スパイクタンパク質、ヘマグルチニンエステラーゼ二量体（ＨＥ）、膜糖タンパク質（Ｍ）、エンベロープタンパク質（Ｅ）、ヌクレオカプシドタンパク質（ｎｕｃｌｅｏｃｌａｐｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｎ）、及びＲＮＡからなる。コロナウイルスファミリーは、例えば、アルファコロナウイルス（例えば、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ、ヒトコロナウイルスＮＬ６３、ミニオプトラスコウモリコロナウイルス１ミニオプトラスコウモリコロナウイルスＨＫＵ８、ブタ流行性下痢ウイルス、リノロフスコウコウモリコロナウイルスＨＫＵ２、スコトフィラスコウモリコロナウイルス５１２）、ベータコロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ベータコロナウイルス１、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１、マウスコロナウイルス、アブラコウモリコロナウイルスＨＫＵ５、ルーセットコウモリコロナウイルスＨＫＵ９、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス、タケコウモリコロナウイルスＨＫＵ４、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３、Ｈｅｄｇｅｈｏｇ コロナウイルス１（ＥｒｉＣｏＶ））、ガンマコロナウイルス（例えば、シロイルカコロナウイルスＳＷ１伝染性気管支炎ウイルス）、及びデルタコロナウイルス（例えば、ヒヨドリコロナウイルスＨＫＵ１１、ブタコロナウイルスＨＫＵ１５）などの属を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルスのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、ＭＥＲＳコロナウイルスのタンパク質である。

【0081】

いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク質、ＣＯＶＩＤ－１９エンベロープタンパク質、ＣＯＶＩＤ－１９膜タンパク質、またはＣＯＶＩＤ－１９ヌクレオカプシドタンパク質、またはそれらの断片などのＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク質の受容体結合ドメインである。

【0082】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、第ＩＸ因子である。第ＩＸ因子は、ザイモゲン、不活性前駆体として産生されるヒトタンパク質である（アクセッション番号：ＨＧＮＣ：３５５１；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２１５８；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０１９８１；ＯＭＩＭ：３００７４６ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ００７４０）。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、フェニルアラニンヒドロキシラーゼである（アクセッション番号：ＨＧＮＣ：８５８２；Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：５０５３；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７１７５９；ＯＭＩＭ：６１２３４９；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ００４３９）。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＣＦＴＲである。他の標的タンパク質としては、これらに限定されないが、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子などが挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ１０，０７１，１１４を参照されたい。

【0083】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号２を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号３を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号８７を含む。

【0084】

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡは、１２０Ａテールをさらに含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡは、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または配列番号４０を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡは、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0087】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、内因性（野生型）ＲＰＳ２７Ａ遺伝子配列の断片である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、ＲＰＳ２７Ａ遺伝子配列の修飾型である（例えば、ヌクレオチドの変更、挿入、欠失などを含む）。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、内因性（野生型）ＲＰＳ２７Ａ遺伝子配列の断片である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、ＲＰＳ２７Ａ遺伝子配列の修飾型である（例えば、ヌクレオチドの変更、挿入、欠失などを含む）。

【0088】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、除去された修飾５’末端オリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）を含む。いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、１つ以上の上流の翻訳開始コドンの修飾を含む。

【0089】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、標的タンパク質の小胞体（ＥＲ）標的化のための配列を含む。いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、カルネキシン配列を含む（例えば、配列番号２７及び２８に開示されるとおり）。

【0090】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、標的タンパク質のミトコンドリア標的化のための配列を含む。いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、ＴＯＭ２０配列を含む（例えば、配列番号２９及び３０に開示されるとおり）。

【0091】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、標的タンパク質のリソソーム標的化のための配列を含む。いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、ＣａｔＢ配列を含む（例えば、配列番号３１及び３２に開示されるとおり）。

【0092】

いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、標的タンパク質の核への標的化のための配列を含む。いくつかの実施形態では、操作されたｍＲＮＡは、核局在化シグナル配列（ＮＬＳ）配列を含む（例えば、配列番号３３及び４０に開示されるように）。

【0093】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。

【0094】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、または配列番号８６を含む群から選択される。

【0095】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１３である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１４である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１５である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１６である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１７である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１８である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１９である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２０である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２１である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２２である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２３である。

【0096】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８１である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８２である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８３である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８５である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８６である。

【0097】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、または配列番号８６、またはその断片または機能的活性バリアントを含む群から選択される。

【0098】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、または配列番号８６に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の同一性を有する核酸配列を含む群から選択される。

【0099】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１８を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２１を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２２を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２３を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号８７を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８２を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８３を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号８９を含む。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号８４を含み、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号９１を含む。

【0100】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質の発現は、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列及び／またはＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列に操作可能に連結されている場合、対照と比較して（例えば、標的タンパク質の内因性５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲと比較して、または、当技術分野において公知である追加の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ配列と比較して）、約１０％より多く、約２０％より多く、約３０％より多く、約４０％より多く、約５０％より多く、約６０％より多く、約７０％より多く、約８０％より多く、約９０％より多く、約１００％より多く、及びそれ以上）増加する。

【0101】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質の発現は、操作された５’ＵＴＲ配列及び／またはＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列に操作可能に連結されている場合、対照と比較して（例えば、標的タンパク質の内因性５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲと比較して、または、当技術分野において公知である追加の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ配列と比較して）、約１０％より多く、約２０％より多く、約３０％より多く、約４０％より多く、約５０％より多く、約６０％より多く、約７０％より多く、約８０％より多く、約９０％より多く、約１００％より多く、及びそれ以上）増加する。

【0102】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様の操作されたｍＲＮＡを含むベクターである。いくつかの実施形態では、細胞は、任意の先行する態様のベクターを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、マウス、ラット、ヒト、または非ヒト霊長類を含む群に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、マウスである。いくつかの実施形態では、細胞は、ラットである。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒトである。いくつかの実施形態では、細胞は、非ヒト霊長類である。

【0103】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡを細胞に導入するステップを含む、タンパク質発現を増加させる方法である。

【0104】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号２である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号３である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号４である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号５である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号６である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号７である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号８である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号９である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１０である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、配列番号１１である。

【0105】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、操作された５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列；異種核酸配列を含む第２の核酸配列；及びＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡを細胞に導入するステップを含む、タンパク質発現を増加させる方法である。

【0106】

いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１２である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１３である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１４である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１５である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１６である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１７である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１８である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号１９である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２０である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２１である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２２である。いくつかの実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、配列番号２３である。

【0107】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示の核酸は、単離される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の核酸は、組み換えである。

【0108】

いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、標的タンパク質をコードする。異種核酸配列または標的タンパク質は、目的の任意の核酸配列／タンパク質であり得る。

【0109】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、蛍光タンパク質に融合される。一実施形態では、蛍光タンパク質は、ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈ）を含む。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＧＦＰを含む。いくつかの実施形態では、蛍光タンパク質は、ＹＦＰを含む。

【0110】

いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２４である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２５である。いくつかの実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、配列番号２６である。

【0111】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列；及び異種核酸配列を含む第２の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、操作された５’ＵＴＲ配列を含む第１の核酸配列；及び異種核酸配列を含む第２の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む核酸配列；及び異種核酸配列を含む第２の核酸配列を含む操作されたｍＲＮＡである。これらの操作されたｍＲＮＡは、本明細書に記載のベクター、細胞、または方法のいずれかで使用することができる。

【0112】

本明細書の実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列は、異種核酸配列に操作可能に連結されている。本明細書の実施形態では、操作された５’ＵＴＲ配列は、異種核酸配列に操作可能に連結されている。本明細書の実施形態では、ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列は、異種核酸配列に操作可能に連結されている。

【0113】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される核酸（操作されたｍＲＮＡ）は、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾された核酸塩基、化学的に修飾されたリボース、化学的に修飾されたホスホジエステル連結、またはそれらの組み合わせを含む。

【0114】

一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾された核酸塩基である。

【0115】

一実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、５－ホルミルシチジン（５ｆＣ）、５－メチルシチジン（５ｍｅＣ）、５－メトキシシチジン（５ｍｏＣ）、５－ヒドロキシシチジン（５ｈｏＣ）、５－ヒドロキシメチルシチジン（５ｈｍＣ）、５－ホルミルウリジン（５ｆＵ）、５－メチルウリジン（５－ｍｅＵ）、５－メトキシウリジン（５ｍｏＵ）、５－カルボキシメチルエステルウリジン（５ｃａｍＵ）、シュードウリジン（Ψ）、Ｎ^１－メチルシュードウリジン（ｍｅ^１Ψ）、Ｎ^６－メチルアデノシン（ｍｅ^６Ａ）、またはチエノグアノシン（^ｔｈＧ）から選択される。

【0116】

いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、５－メトキシウリジン（５ｍｏＵ）である。いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、シュードウリジン（Ψ）である。いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、Ｎ^１－メチルシュードウリジン（ｍｅ^１Ψ）である。

【0117】

これらの修飾核酸塩基の構造を以下に示す：

【化1】

【0118】

一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾されたリボースである。

【0119】

一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－デオキシ－２’－フルオロ－ベータ－Ｄ－アラビノ－核酸（２’Ｆ－ＡＮＡ）、４’－Ｓ、４’－ＳＦＡＮＡ、２’－アジド、ＵＮＡ、２’－Ｏ－メトキシ－エチル（２’－Ｏ－ＭＥ）、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｏ－エチルアミン、２’－Ｏ－シアノエチル、ロックされた核酸（ＬＡＮ）、メチレン－ｃＬＡＮ、Ｎ－ＭｅＯ－アミノＢＮＡ、またはＮ－ＭｅＯ－アミノオキシＢＮＡから選択される。一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）である。一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－フルオロ（２’－Ｆ）である。

【0120】

これらの修飾リボースの構造を以下に示す：

【化2】

【0121】

一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾されたホスホジエステル連結である。

【0122】

一実施形態では、化学的に修飾されたホスホジエステル連結は、ホスホロチオエート（ＰＳ）、ボラノホスフェート、ホスホジチオエート（ＰＳ２）、３’，５’－アミド、Ｎ３’－ホスホルアミデート（ＮＰ）、ホスホジエステル（ＰＯ）、または２’，５’－ホスホジエステル（２’，５’－ＰＯ）から選択される。一実施形態では、化学的に修飾されたホスホジエステル連結は、ホスホロチオエートである。

【0123】

これらの修飾ホスホジエステル連結の構造を以下に示す：

【化3】

【0124】

いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、５’ＵＴＲ配列に対して異種である。いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、３’ＵＴＲ配列に対して異種である。いくつかの実施形態では、異種核酸配列は、５’ＵＴＲ配列及び３’ＵＴＲ配列の両方に対して異種である。いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様の操作されたＲＮＡをコードする核酸を含むベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号４１～６６を含む群から選択される核酸配列を含む。

【0125】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様の操作されたＲＮＡまたはベクターを含む細胞である。

【0126】

いくつかの態様では、タンパク質発現を増加させる方法において本明細書に開示され、本方法は、
ＲＰＳ２７Ａ ５’ＵＴＲ配列または操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列と；
異種核酸配列を含む第２の核酸配列と；
ＲＰＳ２７Ａ ３’ＵＴＲ配列を含む第３の核酸配列と、を含む、操作されたｍＲＮＡを細胞に導入するステップを含む。

【0127】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、ウイルス感染症を治療するか、予防するか、減少させるか、及び／または阻害するためのワクチンであり、ワクチンは、
ＲＰＳ２７Ａ ５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列または操作された５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）配列を含む第１の核酸配列と；
異種核酸配列を含む第２の核酸配列と；
異種核酸配列がウイルスタンパク質をコードする、ＲＰＳ２７Ａ ３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）配列を含む第３の核酸配列と、を含む操作されたｍＲＮＡを含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク質、ＣＯＶＩＤ－１９エンベロープタンパク質、ＣＯＶＩＤ－１９膜タンパク質、またはＣＯＶＩＤ－１９ヌクレオカプシドタンパク質、またはそれらの断片などのＣＯＶＩＤ－１９タンパク質である。いくつかの実施形態では、ウイルスタンパク質は、ＣＯＶＩＤ－１９スパイクタンパク質の受容体結合ドメインである。

【0129】

したがって、いくつかの実施形態では、任意の先行態様のワクチンは、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一であるＲＮＡ配列、またはその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、任意の先行する態様のワクチンは、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、または配列番号９７を含む群から選択されるＲＮＡ配列を含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、ワクチンは、アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、ワクチンは、薬学的に許容される担体をさらに含む。

【0131】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、対象におけるウイルス感染症を治療する、予防する、減少させる、及び／または阻害する方法であり、本方法は、任意の先行する態様の有効量のワクチンを対象に投与することを含む。

【実施例】

【0132】

以下の実施例は、開示された主題による化合物、システム、方法、及び結果を説明するために以下に記載している。これらの実施例は、本明細書に開示される主題のすべての態様を含むことを意図するものではなく、むしろ代表的な方法及び結果を説明することを意図している。これらの実施例は、当業者に明らかである本発明の同等物及び変形を除外することを意図するものではない。

【0133】

実施例１
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子からの修飾５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有するルシフェラーゼｍＲＮＡは、Ａ５４９細胞及びＨｅｐ３Ｂ細胞の文献に公開されたＵＴＲを含むｍＲＮＡよりも優れていた。ＡＧ、ＡＧ＋Ｇ、ＡＧ＋Ｇｗ／ｏ３ＵＴＲ及びＣＹＢＡは、他の操作されたｍＲＮＡと同一のコード配列を有する対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。ＡＧの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、ヒトアルファ－グロビン遺伝子（遺伝子記号：ＨＢＡ１）に由来する。ＡＧ＋Ｇは、完全なコザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）を作製するために、５’ＵＴＲの端に１つの余分なＧが挿入されている修飾ＡＧである。ＡＧ＋Ｇｗ／ｏ３ＵＴＲは、ＡＧ＋Ｇと同じ５’ＵＴＲを有し、３’ＵＴＲは除去された。ＣＹＢＡは、ヒトチトクロームｂ－２４５アルファポリペプチド遺伝子（遺伝子記号：ＣＹＢＡ）からの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有していた。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0134】

実施例２
非天然５’ＵＴＲを含むｅＧＦＰｍＲＮＡは、Ａ５４９細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、及び２９３Ｔ細胞中でのタンパク質発現をさらに増強した（ｎ＝２）。ＡＧ＋Ｇｗ／ｏ３ＵＴＲ及びＣＹＢＡは、実施例１に記載の対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0135】

実施例３
５ＵＴＲ－１８及び３ＵＴＲ－１を含むルシフェラーゼｍＲＮＡは、Ａ５４９細胞（ｎ＝３）において、未修飾ｍＲＮＡよりも、シュードウリジン修飾（ｐＵ）を有するタンパク質発現の増加を示した。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0136】

実施例４
５ＵＴＲ－２２＋３ＵＴＲ－１及び５ＵＴＲ－２３＋３ＵＴＲ－１を含むシュードウリジン修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡは、肺腫瘍細胞株（Ａ５４９）と比較して、肝臓腫瘍細胞株（Ｈｅｐ３Ｂ）中で選択的遺伝子発現を示した。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された（ｎ＝３）。

【0137】

実施例５
本明細書に開示の５’ＵＴＲ配列及び３’ＵＴＲ配列を有するオルガネラ標的化ｅＧＦＰ／ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡは、生きているＨｅｐ３Ｂ細胞のオルガネライメージングに適用できる。これらのオルガネラ標的化ｅＧＦＰ／ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡのオルガネライメージング能力は、市販のオルガネライメージングプローブとの共局在化によって検証された。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0138】

実施例６
図６Ａ及び図６Ａの結果は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞及び２９３Ｔ細胞内でそれぞれ得た。すべてのｍＲＮＡは、同じ３’ＵＴＲ：３ＵＴＲ１を利用した。すべてのｍＲＮＡは、シュードウリジンを使用して合成され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写でＵＴＰを完全に置換した。７０ｎｔの５’ＵＴＲを有するｍＲＮＡが最も高い発現を示した。ＡＧ＋Ｇ及びＣＹＢＡは、以前に公開されたＵＴＲを有する対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。ＡＧ＋Ｇの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、ヒトアルファグロブリン遺伝子（遺伝子記号：ＨＢＡ１）に由来し、５’ＵＴＲの端に１つの余分なＧが挿入され、完全なコザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）を作製する。ＣＹＢＡは、ヒトチトクロームｂ－２４５アルファポリペプチド遺伝子（遺伝子記号：ＣＹＢＡ）からの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有していた。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0139】

実施例７
図７Ａ及び図７Ｂの結果は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞及び２９３Ｔ細胞内でそれぞれ得た。すべてのｍＲＮＡは、同じ３’ＵＴＲ：３ＵＴＲ－１を利用した。すべてのｍＲＮＡは、シュードウリジンを使用して合成され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写でＵＴＰを完全に置換した。５ＵＴＲ－１８中のマイクロＲＮＡ標的部位の除去により、５ＵＴＲ－２８が生成された。５ＵＴＲ－２５中のマイクロＲＮＡ標的部位の除去により、５ＵＴＲ－２７が生成された。５ＵＴＲ－２６中のマイクロＲＮＡ標的部位の除去により、５ＵＴＲ－２９が生成された。５ＵＴＲ－２７を有するｍＲＮＡが最も高い発現を示した。ＡＧ＋Ｇ及びＣＹＢＡは、以前に公開されたＵＴＲを有する対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。ＡＧ＋Ｇの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、ヒトアルファグロブリン遺伝子（遺伝子記号：ＨＢＡ１）に由来し、５’ＵＴＲの端に１つの余分なＧが挿入され、完全なコザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）を作製する。ＣＹＢＡは、ヒトチトクロームｂ－２４５アルファポリペプチド遺伝子（遺伝子記号：ＣＹＢＡ）からの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有していた。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。

【0140】

実施例８
図８Ａ及び図８Ｂの結果は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞及び２９３Ｔ細胞内でそれぞれ得た。すべてのｍＲＮＡは、同じ５’ＵＴＲ：５ＵＴＲ－２７を利用した。３ＵＴＲ－１に機能モチーフＡを付加することにより、３ＵＴＲ－４が生成された。３ＵＴＲ－１に機能モチーフＢを付加することにより、３ＵＴＲ－５が生成された。３ＵＴＲ－１に機能モチーフＣを付加することにより、３ＵＴＲ－６が生成された。３ＵＴＲ－４を有するｍＲＮＡが最も高い発現を示した。すべてのｍＲＮＡは、シュードウリジンを使用して合成され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写でＵＴＰを完全に置換した。ＡＧ＋Ｇ及びＣＹＢＡは、以前に公開されたＵＴＲを有する対照ルシフェラーゼｍＲＮＡである。ＡＧ＋Ｇの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、Ｈｕｍａｎ Ａｌｐｈａ Ｇｌｏｂｉｎ遺伝子（遺伝子記号：ＨＢＡ１）に由来し、５’ＵＴＲの端に１つの余分なＧが挿入され、完全なコザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）を作製する。ＣＹＢＡは、ヒトチトクロームｂ－２４５アルファポリペプチド遺伝子（遺伝子記号：ＣＹＢＡ）からの５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有していた。すべてのｍＲＮＡは、リポフェクタミン３０００によって送達された。














































配列
５ＵＴＲ－１（Ｔ４４）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４４からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＵＵＵＣＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＡＵＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＡＵＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号１）
５ＵＴＲ－２（Ｔ４４－ｔｏｐ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－１の修飾
ＧＧＧＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＡＵＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＡＵＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号２）
５ＵＴＲ－３（Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ）
５ＵＴＲ－２の修飾：ＵＡＧに修飾された２つの上流翻訳開始コドンＡＵＧ
ＧＧＧＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＵＡＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号３）
５ＵＴＲ－４（短縮－Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ）
ＧＧＧ短縮後の最初の８３ヌクレオチドによる５ＵＴＲ－３の修飾
ＧＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４）
５ＵＴＲ－５（短縮－Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ－２ＡＵＧ）
コード領域中のＡＵＧの前に１つの追加のＡＵＧを付加した５ＵＴＲ－４の修飾により、２つのタンデムＡＵＧ翻訳開始コドンが得られる
ＧＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＵＧ（配列番号５）
５ＵＴＲ－６（Ｔ４５）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４５からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＵＣＵＣＵＵＡＡＵＣＧＣＡＵＣＧＧＣＵＧＵＡＵＡＡＧＡＡＡＧＣＣＵＵＵＵＧＡＧＧＣＡＵＵＵＵＵＵＵＵＡＧＵＵＧＡＧＣＡＣＡＵＣＡＵＵＵＣＧＡＧＧＣＣＡＵＵＣＵＧＡＧＧＵＡＡＡＣＣＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＣＧＵＡＡＡＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＧＣＡＡＡＵＣＵＧＧＣＡＣＵＧＣＧＵＵＡＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＡＵＵＣＣＧＣＵＧＣＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＣＡＣＧＵＧＵＧＵＧＧＣＣＧＣＣＵＡＡＧＧＧＧＣＧＧＧＵＣＣＵＵＣＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＣＧＵＣＧＧＣＣＡＣＧＣＵＣＧＧＡＵＣＵＵＣＣＵＵＵＣＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号６）
５ＵＴＲ－７（Ｔ４５－ｔｏｐ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－６の修飾
ＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＡＡＵＣＧＣＡＵＣＧＧＣＵＧＵＡＵＡＡＧＡＡＡＧＣＣＵＵＵＵＧＡＧＧＣＡＵＵＵＵＵＵＵＵＡＧＵＵＧＡＧＣＡＣＡＵＣＡＵＵＵＣＧＡＧＧＣＣＡＵＵＣＵＧＡＧＧＵＡＡＡＣＣＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＣＧＵＡＡＡＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＧＣＡＡＡＵＣＵＧＧＣＡＣＵＧＣＧＵＵＡＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＡＵＵＣＣＧＣＵＧＣＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＣＡＣＧＵＧＵＧＵＧＧＣＣＧＣＣＵＡＡＧＧＧＧＣＧＧＧＵＣＣＵＵＣＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＣＧＵＣＧＧＣＣＡＣＧＣＵＣＧＧＡＵＣＵＵＣＣＵＵＵＣＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号７）
５ＵＴＲ－８（Ｔ１７）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００２７２３１７からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＣＣＣＣＵＣＧＡＣＣＵＣＣＵＵＵＵＡＡＡＡＡＵＵＣＵＣＵＵＡＧＣＣＡＣＧＵＵＧＡＵＵＧＵＡＣＧＧＧＡＡＡＡＧＣＣＵＵＵＵＵＡＡＡＡＣＡＵＣＵＵＵＵＡＣＧＵＵＧＣＵＵＡＡＡＣＣＵＡＣＡＧＵＵＵＣＧＡＡＡＧＣＡＵＵＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＡＡＧＵＧＡＧＡＡＡＵＡＡＧＣＣＣＡＧＧＣＵＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＡＡＧＵＵＣＡＣＧＵＣＣＵＡＧＵＣＵＧＧＣＡＣＣＧＧＧＵＵＧＧＡＵＵＧＵＣＧＣＵＧＧＧＡＣＧＧＣＡＧＵＣＡＧＧＣＡＵＵＵＧＧＵＧＵＧＧＵＣＧＣＣＵＡＡＧＧＧＧＵＧＧＧＵＣＣＵＵＣＧＧＣＧＧＧＡＧＣＵＣＣＧＧＧＡＡＡＣＣＣＣＧＵＧＧＧＣＣＵＧＣＧＣＧＧＣＧＵＵＣＵＵＣＣＵＵＵＵＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号８）
５ＵＴＲ－９（Ｔ１７－ＴＯＰ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－８の修飾
ＧＧＧＡＧＣＣＡＣＧＵＵＧＡＵＵＧＵＡＣＧＧＧＡＡＡＡＧＣＣＵＵＵＵＵＡＡＡＡＣＡＵＣＵＵＵＵＡＣＧＵＵＧＣＵＵＡＡＡＣＣＵＡＣＡＧＵＵＵＣＧＡＡＡＧＣＡＵＵＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＡＡＧＵＧＡＧＡＡＡＵＡＡＧＣＣＣＡＧＧＣＵＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＡＡＧＵＵＣＡＣＧＵＣＣＵＡＧＵＣＵＧＧＣＡＣＣＧＧＧＵＵＧＧＡＵＵＧＵＣＧＣＵＧＧＧＡＣＧＧＣＡＧＵＣＡＧＧＣＡＵＵＵＧＧＵＧＵＧＧＵＣＧＣＣＵＡＡＧＧＧＧＵＧＧＧＵＣＣＵＵＣＧＧＣＧＧＧＡＧＣＵＣＣＧＧＧＡＡＡＣＣＣＣＧＵＧＧＧＣＣＵＧＣＧＣＧＧＣＧＵＵＣＵＵＣＣＵＵＵＵＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号９）
５ＵＴＲ－１０ （Ｔ３５）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００４０４７３５からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＣＧＵＵＣＵＵＣＣＵＵＵＵＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＧＵＧＧＧＵＧＵＣＵＧＣＡＣＵＵＣＧＧＣＵＧＣＵＣＵＣＧＧＧＵＵＡＧＣＡＣＣＣＵＡＵＧＧＵＧＣＣＵＵＣＵＣＵＵＧＵＧＡＵＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＡＣＣＵＧＵＣＵＣＵＵＣＣＵＵＵＵＣＣＵＣＡＡＣＣＵＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号１０）
５ＵＴＲ－１１（Ｔ３５－ＴＯＰ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－１０の修飾
ＧＧＧＣＧＣＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＧＵＧＧＧＵＧＵＣＵＧＣＡＣＵＵＣＧＧＣＵＧＣＵＣＵＣＧＧＧＵＵＡＧＣＡＣＣＣＵＡＵＧＧＵＧＣＣＵＵＣＵＣＵＵＧＵＧＡＵＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＡＣＣＵＧＵＣＵＣＵＵＣＣＵＵＵＵＣＣＵＣＡＡＣＣＵＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ （配列番号１１）
５ＵＴＲ－１２（１０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する１０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１２）
５ＵＴＲ－１３（２０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する２０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１３）
５ＵＴＲ－１４（３０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する３０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１４）
５ＵＴＲ－１５（４０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する４０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１５）
５ＵＴＲ－１６（５０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１６）
５ＵＴＲ－１７（６０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する６０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＣＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１７）
５ＵＴＲ－１８（７０ｎｔ＝０３０５Ｋ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＧＡＧＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１８）
５ＵＴＲ－１９（１００ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する１００ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＣＡＡＧＡＧＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号１９）
５ＵＴＲ－２０（５０ｎｔ＝０３０１Ｋ－１）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する代替的５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＵＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＡＵＡＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号２０）
５ＵＴＲ－２１（５０ｎｔ ＝ ０３０１Ｋ－２）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する代替的５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＡＧＵＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＵＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号２１）
５ＵＴＲ－２２（７０ｎｔ＝１０１５Ｋ－Ａ）
Ｇ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ＡＣＧＵコンテンツ（２５％ＧＣ、２７％Ａ、３７％Ｕ）を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＣＵＵＵＣＡＣＵＡＵＵＵＣＡＵＵＣＡＵＵＵＣＡＵＵＣＡＣＡＣＡＵＵＡＣＡＣＵＵＡＣＡＵＣＡＣＡＵＣＣＡＣＡＵＵＡＣＡＵＵＵＣＵＧＣＣＡＣＣ（配列番号２２）
５ＵＴＲ－２３（７０ｎｔ＝１０１５Ｋ－Ｂ）
Ｇ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ＡＣＧＵコンテンツ（２５％ＧＣ、１７％Ａ、４８％Ｕ）を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＣＵＵＵＣＡＣＵＡＵＵＵＣＡＵＵＣＡＵＵＵＣＡＵＵＣＵＣＵＣＡＵＵＡＣＵＣＵＵＡＣＵＵＣＵＣＵＵＣＣＵＣＡＵＵＡＣＡＵＵＵＣＵＧＣＣＡＣＣ（配列番号２３）
３ＵＴＲ－１（Ｔ４４／４５）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４４及びＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４５からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ（配列番号２４）
３ＵＴＲ－２（Ｔ３５）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００４０４７３５からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＣＵＧＵＡＵＧＡＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＧＡＣＡＵＧＡＡＣＵＡＡＣＡＵＵＵＡＵＵＧＵＵＧＧＧＵＵＵＵＡＵＵＧＣＡＧＵＡＡＡＡＡＧＡＡＵＧＧＵＵＵＵＵＡＡＧＣＡＣＣＡＡＡＵＵＧＡＵＧＧＵＣＡＣＡＣＣＡＵＵＵＣＣＵＵＵＵＡＧＵＡＧＵＧＣＵＡＣＵＧＣＵＡＵＣＧＣＵＧＵＧＵＧＡＡＵＧＵＵＧＣＣＵＣＵＧＧＧＧＡＵＵＡＵＧＵＧＡＣＣＣＡＧＵＧＧＵＵＣＵＧＵＡＵＡＣＣＵＧ（配列番号２５）
３ＵＴＲ－３（Ｔ１７）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００２７２３１７からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＣＵＧＵＡＵＧＡＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＧＡＣＡＵＧＡＡＣＵＡＡＣＡＵＵＵＡＵＵＧＵＵＧＧＧＵＵＵＵＡＵＵＧＣＡＧＵＡＡＡＡＡＧＡＡＵＧＧＵＵＵＵＵＡＡＧＣＡＣＣＡＡＡＵＵＧＡＵＧＧＵＣＡＣＡＣＣＡＵＵＵＣＣＵＵＵＵＡＧＵＡＧＵＧＣＵＡＣＵＧＣＵＡＵＣＧＣＵＧＵＧＵＧＡＡＵＧＵＵＧＣＣＵＣＵＧＧＧＧＡＵＵＡＵＧＵＧＡＣＣＣＡＧＵＧＧＵＵＣＵＧＵＡＵＡＣＣＵＧＣＣＡＧＧＵＧＣＣＡＡＣＣＡＣＵＵＧＵＡＡＡＧＧＵＣＵＵＧＡＵＡＵＵＵＵＣＡＡＵＵＣＵＵＡＧＡＣＵＡＣＣＵＡＵＡＣＵＵＵＧＧＣＡＧＡＡＧＵＵＡＵＡＵＵＵＡＡＵＧＵＡＡＧＵＵＧＵＣＵＡＡＡＵＡＵＡＡ（配列番号２６）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－カルネキシン－ＥＧＦＰ（ＥＲ標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
ＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＵＡＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＵＧＧＡＡＧＧＧＡＡＧＵＧＧＵＵＧＣＵＧＵＧＵＡＵＧＵＵＡＣＵＧＧＵＧＣＵＵＧＧＡＡＣＵＧＣＵＡＵＵＧＵＵＧＡＧＧＣＵＣＡＵＧＡＵＧＧＡＣＡＵＧＡＵＧＡＵＧＡＵＧＵＧＡＵＵＧＡＵＡＵＵＧＡＧＧＡＵＧＡＣＣＵＵＧＡＣＧＡＵＧＵＣＡＵＵＧＡＡＧＡＧＧＵＡＧＡＡＧＡＣＵＣＡＡＡＡＣＣＡＧＡＵＡＣＣＡＣＵＧＣＵＣＣＵＣＣＵＵＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＧＧＵＵＡＣＵＵＡＣＡＡＡＧＣＵＣＣＡＧＵＵＣＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＵＡＵＡＵＵＵＵＧＣＵＧＡＵＵＣＵＵＵＵＧＡＣＡＧＡＧＧＡＡＣＵＣＵＧＵＣＡＧＧＧＵＧＧＡＵＵＵＵＡＵＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＧＡＵＡＣＣＧＡＵＧＡＵＧＡＡＡＵＵＧＣＣＡＡＡＵＡＵＧＡＵＧＧＡＡＡＧＵＧＧＧＡＧＧＵＡＧＡＧＧＡＡＡＵＧＡＡＧＧＡＧＵＣＡＡＡＧＣＵＵＣＣＡＧＧＵＧＡＵＡＡＡＧＧＡＣＵＵＧＵＧＵＵＧＡＵＧＵＣＵＣＧＧＧＣＣＡＡＧＣＡＵＣＡＵＧＣＣＡＵＣＵＣＵＧＣＵＡＡＡＣＵＧＡＡＣＡＡＧＣＣＣＵＵＣＣＵＧＵＵＵＧＡＣＡＣＣＡＡＧＣＣＵＣＵＣＡＵＵＧＵＵＣＡＧＵＡＵＧＡＧＧＵＵＡＡＵＵＵＣＣＡＡＡＡＵＧＧＡＡＵＡＧＡＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＣＣＵＡＵＧＵＧＡＡＡＣＵＧＣＵＵＵＣＵＡＡＡＡＣＡＣＣＡＧＡＡＣＵＣＡＡＣＣＵＧＧＡＵＣＡＧＵＵＣＣＡＵＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＣＵＵＡＵＡＣＧＡＵＵＡＵＧＵＵＵＧＧＵＣＣＡＧＡＵＡＡＡＵＧＵＧＧＡＧＡＧＧＡＣＵＡＵＡＡＡＣＵＧＣＡＣＵＵＣＡＵＣＵＵＣＣＧＡＣＡＣＡＡＡＡＡＣＣＣＣＡＡＡＡＣＧＧＧＵＡＵＣＵＡＵＧＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＵＧＣＵＡＡＧＡＧＧＣＣＡＧＡＵＧＣＡＧＡＵＣＵＧＡＡＧＡＣＣＵＡＵＵＵＵＡＣＵＧＡＵＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＵＣＵＵＵＡＣＡＣＡＣＵＡＡＵＣＵＵＧＡＡＵＣＣＡＧＡＵＡＡＵＡＧＵＵＵＵＧＡＡＡＵＡＣＵＧＧＵＵＧＡＣＣＡＡＵＣＵＧＵＧＧＵＧＡＡＵＡＧＵＧＧＡＡＡＵＣＵＧＣＵＣＡＡＵＧＡＣＡＵＧＡＣＵＣＣＵＣＣＵＧＵＡＡＡＵＣＣＵＵＣＡＣＧＵＧＡＡＡＵＵＧＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＣＣＧＧＡＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＵＵＧＧＧＡＵＧＡＡＡＧＡＣＣＡＡＡＡＡＵＣＣＣＡＧＡＵＣＣＡＧＡＡＧＣＵＧＵＣＡＡＧＣＣＡＧＡＵＧＡＣＵＧＧＧＡＵＧＡＡＧＡＵＧＣＣＣＣＵＧＣＵＡＡＧＡＵＵＣＣＡＧＡＵＧＡＡＧＡＧＧＣＣＡＣＡＡＡＡＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＧＧＵＵＡＧＡＵＧＡＵＧＡＧＣＣＵＧＡＧＵＡＣＧＵＡＣＣＵＧＡＵＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＡＧＡＡＡＣＣＵＧＡＧＧＡＵＵＧＧＧＡＵＧＡＡＧＡＣＡＵＧＧＡＵＧＧＡＧＡＡＵＧＧＧＡＧＧＣＵＣＣＵＣＡＧＡＵＵＧＣＣＡＡＣＣＣＵＡＧＡＵＧＵＧＡＧＵＣＡＧＣＵＣＣＵＧＧＡＵＧＵＧＧＵＧＵＣＵＧＧＣＡＧＣＧＡＣＣＵＧＵＧＡＵＵＧＡＣＡＡＣＣＣＣＡＡＵＵＡＵＡＡＡＧＧＣＡＡＡＵＧＧＡＡＧＣＣＵＣＣＵＡＵＧＡＵＵＧＡＣＡＡＵＣＣＣＡＧＵＵＡＣＣＡＧＧＧＡＡＵＣＵＧＧＡＡＡＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＵＡＣＣＡＡＡＵＣＣＡＧＡＵＵＵＣＵＵＵＧＡＡＧＡＵＣＵＧＧＡＡＣＣＵＵＵＣＡＧＡＡＵＧＡＣＵＣＣＵＵＵＵＡＧＵＧＣＵＡＵＵＧＧＵＵＵＧＧＡＧＣＵＧＵＧＧＵＣＣＡＵＧＡＣＣＵＣＵＧＡＣＡＵＵＵＵＵＵＵＵＧＡＣＡＡＣＵＵＵＡＵＣＡＵＵＵＧＵＧＣＵＧＡＵＣＧＡＡＧＡＡＵＡＧＵＵＧＡＵＧＡＵＵＧＧＧＣＣＡＡＵＧＡＵＧＧＡＵＧＧＧＧＣＣＵＧＡＡＧＡＡＡＧＣＵＧＣＵＧＡＵＧＧＧＧＣＵＧＣＵＧＡＧＣＣＡＧＧＣＧＵＵＧＵＧＧＧＧＣＡＧＡＵＧＡＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＵＧＡＡＧＡＧＣＧＣＣＣＧＵＧＧＣＵＧＵＧＧＧＵＡＧＵＣＵＡＵＡＵＵＣＵＡＡＣＵＧＵＡＧＣＣＣＵＵＣＣＵＧＵＧＵＵＣＣＵＧＧＵＵＡＵＣＣＵＣＵＵＣＵＧＣＵＧＵＵＣＵＧＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＡＵＧＧＡＧＵＡＵＡＡＧＡＡＡＡＣＵＧＡＵＧＣＡＣＣＵＣＡＡＣＣＧＧＡＵＧＵＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＧＡＧＡＵＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＣＵＵＧＡＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＵＧＡＵＧＣＵＧＡＡＧＡＡＧＡＵＧＧＵＧＧＣＡＣＵＧＵＣＡＧＵＣＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＣＵＡＡＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧＧＡＵＧＡＡＡＵＵＵＵＧＡＡＣＡＧＡＵＣＡＣＣＡＡＧＡＡＡＣＡＧＡＡＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＣＵＣＧＡＧＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＵＧＵＵＣＡＣＣＧＧＧＧＵＧＧＵＧＣＣＣＡＵＣＣＵＧＧＵＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＵＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＵＵＣＡＧＣＧＵＧＵＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＵＧＣＣＡＣＣＵＡＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣＡＵＣＵＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＣＣＣＧＵＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＡＣＣＣＵＣＧＵＧＡＣＣＡＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＣＧＧＣＧＵＧＣＡＧＵＧＣＵＵＣＡＧＣＣＧＣＵＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＵＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＵＣＣＧＣＣＡＵＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＣＧＵＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＵＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＵＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＵＧＡＡＧＵＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＵＧＧＵＧＡＡＣＣＧＣＡＵＣＧＡＧＣＵＧＡＡＧＧＧＣＡＵＣＧＡＣＵＵＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＵＣＣＵＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＵＧＧＡＧＵＡＣＡＡＣＵＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＵＣＵＡＵＡＵＣＡＵＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＵＣＡＡＧＧＵＧＡＡＣＵＵＣＡＡＧＡＵＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＵＧＣＡＧＣＵＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＵＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＵＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＵＡＣＣＵＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＣＵＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＵＣＡＣＡＵＧＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＡＧＵＵＣＧＵＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＵＣＡＣＵＣＵＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＵＣＵＡＧＡＵＧＡＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ（配列番号２７）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－カルネキシン－ｍＣｈｅｒｒｙ（ＥＲ標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
ＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＵＡＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＵＧＧＡＡＧＧＧＡＡＧＵＧＧＵＵＧＣＵＧＵＧＵＡＵＧＵＵＡＣＵＧＧＵＧＣＵＵＧＧＡＡＣＵＧＣＵＡＵＵＧＵＵＧＡＧＧＣＵＣＡＵＧＡＵＧＧＡＣＡＵＧＡＵＧＡＵＧＡＵＧＵＧＡＵＵＧＡＵＡＵＵＧＡＧＧＡＵＧＡＣＣＵＵＧＡＣＧＡＵＧＵＣＡＵＵＧＡＡＧＡＧＧＵＡＧＡＡＧＡＣＵＣＡＡＡＡＣＣＡＧＡＵＡＣＣＡＣＵＧＣＵＣＣＵＣＣＵＵＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＧＧＵＵＡＣＵＵＡＣＡＡＡＧＣＵＣＣＡＧＵＵＣＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＵＡＵＡＵＵＵＵＧＣＵＧＡＵＵＣＵＵＵＵＧＡＣＡＧＡＧＧＡＡＣＵＣＵＧＵＣＡＧＧＧＵＧＧＡＵＵＵＵＡＵＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＧＡＵＡＣＣＧＡＵＧＡＵＧＡＡＡＵＵＧＣＣＡＡＡＵＡＵＧＡＵＧＧＡＡＡＧＵＧＧＧＡＧＧＵＡＧＡＧＧＡＡＡＵＧＡＡＧＧＡＧＵＣＡＡＡＧＣＵＵＣＣＡＧＧＵＧＡＵＡＡＡＧＧＡＣＵＵＧＵＧＵＵＧＡＵＧＵＣＵＣＧＧＧＣＣＡＡＧＣＡＵＣＡＵＧＣＣＡＵＣＵＣＵＧＣＵＡＡＡＣＵＧＡＡＣＡＡＧＣＣＣＵＵＣＣＵＧＵＵＵＧＡＣＡＣＣＡＡＧＣＣＵＣＵＣＡＵＵＧＵＵＣＡＧＵＡＵＧＡＧＧＵＵＡＡＵＵＵＣＣＡＡＡＡＵＧＧＡＡＵＡＧＡＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＣＣＵＡＵＧＵＧＡＡＡＣＵＧＣＵＵＵＣＵＡＡＡＡＣＡＣＣＡＧＡＡＣＵＣＡＡＣＣＵＧＧＡＵＣＡＧＵＵＣＣＡＵＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＣＵＵＡＵＡＣＧＡＵＵＡＵＧＵＵＵＧＧＵＣＣＡＧＡＵＡＡＡＵＧＵＧＧＡＧＡＧＧＡＣＵＡＵＡＡＡＣＵＧＣＡＣＵＵＣＡＵＣＵＵＣＣＧＡＣＡＣＡＡＡＡＡＣＣＣＣＡＡＡＡＣＧＧＧＵＡＵＣＵＡＵＧＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＵＧＣＵＡＡＧＡＧＧＣＣＡＧＡＵＧＣＡＧＡＵＣＵＧＡＡＧＡＣＣＵＡＵＵＵＵＡＣＵＧＡＵＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＵＣＵＵＵＡＣＡＣＡＣＵＡＡＵＣＵＵＧＡＡＵＣＣＡＧＡＵＡＡＵＡＧＵＵＵＵＧＡＡＡＵＡＣＵＧＧＵＵＧＡＣＣＡＡＵＣＵＧＵＧＧＵＧＡＡＵＡＧＵＧＧＡＡＡＵＣＵＧＣＵＣＡＡＵＧＡＣＡＵＧＡＣＵＣＣＵＣＣＵＧＵＡＡＡＵＣＣＵＵＣＡＣＧＵＧＡＡＡＵＵＧＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＣＣＧＧＡＡＧＣＣＣＧＡＧＧＡＵＵＧＧＧＡＵＧＡＡＡＧＡＣＣＡＡＡＡＡＵＣＣＣＡＧＡＵＣＣＡＧＡＡＧＣＵＧＵＣＡＡＧＣＣＡＧＡＵＧＡＣＵＧＧＧＡＵＧＡＡＧＡＵＧＣＣＣＣＵＧＣＵＡＡＧＡＵＵＣＣＡＧＡＵＧＡＡＧＡＧＧＣＣＡＣＡＡＡＡＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＧＧＵＵＡＧＡＵＧＡＵＧＡＧＣＣＵＧＡＧＵＡＣＧＵＡＣＣＵＧＡＵＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＡＧＡＡＡＣＣＵＧＡＧＧＡＵＵＧＧＧＡＵＧＡＡＧＡＣＡＵＧＧＡＵＧＧＡＧＡＡＵＧＧＧＡＧＧＣＵＣＣＵＣＡＧＡＵＵＧＣＣＡＡＣＣＣＵＡＧＡＵＧＵＧＡＧＵＣＡＧＣＵＣＣＵＧＧＡＵＧＵＧＧＵＧＵＣＵＧＧＣＡＧＣＧＡＣＣＵＧＵＧＡＵＵＧＡＣＡＡＣＣＣＣＡＡＵＵＡＵＡＡＡＧＧＣＡＡＡＵＧＧＡＡＧＣＣＵＣＣＵＡＵＧＡＵＵＧＡＣＡＡＵＣＣＣＡＧＵＵＡＣＣＡＧＧＧＡＡＵＣＵＧＧＡＡＡＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＵＡＣＣＡＡＡＵＣＣＡＧＡＵＵＵＣＵＵＵＧＡＡＧＡＵＣＵＧＧＡＡＣＣＵＵＵＣＡＧＡＡＵＧＡＣＵＣＣＵＵＵＵＡＧＵＧＣＵＡＵＵＧＧＵＵＵＧＧＡＧＣＵＧＵＧＧＵＣＣＡＵＧＡＣＣＵＣＵＧＡＣＡＵＵＵＵＵＵＵＵＧＡＣＡＡＣＵＵＵＡＵＣＡＵＵＵＧＵＧＣＵＧＡＵＣＧＡＡＧＡＡＵＡＧＵＵＧＡＵＧＡＵＵＧＧＧＣＣＡＡＵＧＡＵＧＧＡＵＧＧＧＧＣＣＵＧＡＡＧＡＡＡＧＣＵＧＣＵＧＡＵＧＧＧＧＣＵＧＣＵＧＡＧＣＣＡＧＧＣＧＵＵＧＵＧＧＧＧＣＡＧＡＵＧＡＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＵＧＡＡＧＡＧＣＧＣＣＣＧＵＧＧＣＵＧＵＧＧＧＵＡＧＵＣＵＡＵＡＵＵＣＵＡＡＣＵＧＵＡＧＣＣＣＵＵＣＣＵＧＵＧＵＵＣＣＵＧＧＵＵＡＵＣＣＵＣＵＵＣＵＧＣＵＧＵＵＣＵＧＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＡＵＧＧＡＧＵＡＵＡＡＧＡＡＡＡＣＵＧＡＵＧＣＡＣＣＵＣＡＡＣＣＧＧＡＵＧＵＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＧＡＧＡＵＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＣＵＵＧＡＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＡＡＡＡＧＵＧＡＵＧＣＵＧＡＡＧＡＡＧＡＵＧＧＵＧＧＣＡＣＵＧＵＣＡＧＵＣＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＣＵＡＡＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧＧＡＵＧＡＡＡＵＵＵＵＧＡＡＣＡＧＡＵＣＡＣＣＡＡＧＡＡＡＣＡＧＡＡＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＣＵＣＧＡＧＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＵＡＡＣＡＵＧＧＣＣＡＵＣＡＵＣＡＡＧＧＡＧＵＵＣＡＵＧＣＧＣＵＵＣＡＡＧＧＵＧＣＡＣＡＵＧＧＡＧＧＧＣＵＣＣＧＵＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡＧＵＵＣＧＡＧＡＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＵＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＵＧＡＣＣＡＡＧＧＧＵＧＧＣＣＣＣＣＵＧＣＣＣＵＵＣＧＣＣＵＧＧＧＡＣＡＵＣＣＵＧＵＣＣＣＣＵＣＡＧＵＵＣＡＵＧＵＡＣＧＧＣＵＣＣＡＡＧＧＣＣＵＡＣＧＵＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＵＣＣＣＣＧＡＣＵＡＣＵＵＧＡＡＧＣＵＧＵＣＣＵＵＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＵＵＣＡＡＧＵＧＧＧＡＧＣＧＣＧＵＧＡＵＧＡＡＣＵＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＵＧＧＵＧＡＣＣＧＵＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＵＵＣＡＵＣＵＡＣＡＡＧＧＵＧＡＡＧＣＵＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＡＡＵＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＵＧＧＧＣＵＧＧＧＡＧＧＣＣＵＣＣＵＣＣＧＡＧＣＧＧＡＵＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＵＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＵＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＵＧＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＵＡＣＧＡＣＧＣＵＧＡＧＧＵＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＵＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＵＧＣＡＧＣＵＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＵＡＣＡＡＣＧＵＣＡＡＣＡＵＣＡＡＧＵＵＧＧＡＣＡＵＣＡＣＣＵＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＵＡＣＡＣＣＡＵＣＧＵＧＧＡＡＣＡＧＵＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＵＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＵＣＵＡＧＡＵＧＡＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ（配列番号２８）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－ＴＯＭ２０－ＥＧＦＰ（ミトコンドリア標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ－ＮＬＳ－ｅＧＦＰ－ＮＬＳ（核標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ－ＮＬＳ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＮＬＳ（核標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－Ｐ２Ａ－カルネキシン－ｅＧＦＰ
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－Ｐ２Ａ－ＮＬＳ－ｅＧＦＰ－ＮＬＳ
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＧＧＧＧＳ４－カレキシン－ｅＧＦＰ
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ＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＵＡＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＵＧＧＵＧＧＧＡＣＧＧＡＡＣＡＧＣＧＣＣＡＵＣＧＣＵＧＣＡＧＧＡＧＵＧＵＧＣＧＧＵＧＣＣＣＵＣＵＵＣＡＵＡＧＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＣＵＡＣＵＵＵＧＡＣＣＧＣＡＡＡＡＧＧＡＧＧＡＧＵＧＡＣＣＣＣＡＡＣＣＵＣＧＡＧＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＵＡＡＣＡＵＧＧＣＣＡＵＣＡＵＣＡＡＧＧＡＧＵＵＣＡＵＧＣＧＣＵＵＣＡＡＧＧＵＧＣＡＣＡＵＧＧＡＧＧＧＣＵＣＣＧＵＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡＧＵＵＣＧＡＧＡＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＵＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＵＧＡＣＣＡＡＧＧＧＵＧＧＣＣＣＣＣＵＧＣＣＣＵＵＣＧＣＣＵＧＧＧＡＣＡＵＣＣＵＧＵＣＣＣＣＵＣＡＧＵＵＣＡＵＧＵＡＣＧＧＣＵＣＣＡＡＧＧＣＣＵＡＣＧＵＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＵＣＣＣＣＧＡＣＵＡＣＵＵＧＡＡＧＣＵＧＵＣＣＵＵＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＵＵＣＡＡＧＵＧＧＧＡＧＣＧＣＧＵＧＡＵＧＡＡＣＵＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＵＧＧＵＧＡＣＣＧＵＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＵＵＣＡＵＣＵＡＣＡＡＧＧＵＧＡＡＧＣＵＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＡＡＵＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＵＧＧＧＣＵＧＧＧＡＧＧＣＣＵＣＣＵＣＣＧＡＧＣＧＧＡＵＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＵＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＵＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＵＧＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＵＡＣＧＡＣＧＣＵＧＡＧＧＵＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＵＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＵＧＣＡＧＣＵＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＵＡＣＡＡＣＧＵＣＡＡＣＡＵＣＡＡＧＵＵＧＧＡＣＡＵＣＡＣＣＵＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＵＡＣＡＣＣＡＵＣＧＵＧＧＡＡＣＡＧＵＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＵＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＧＧＡＧＧＵＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＧＵＧＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＵＵＣＣＧＧＵＧＧＵＧＧＵＧＧＵＡＧＵＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＣＣＵＵＧＡＵＣＣＵＵＣＵＵＵＣＵＵＧＣＣＵＧＣＵＧＧＣＡＣＵＧＡＣＣＡＧＵＧＣＣＣＡＵＧＡＣＡＡＧＣＣＵＵＣＣＵＵＣＣＡＣＣＣＧＣＵＧＵＣＧＧＡＵＧＡＣＣＵＧＡＵＵＡＡＣＵＡＵＡＵＣＡＡＣＡＡＡＣＡＧＡＡＵＡＣＡＡＣＡＵＧＧＣＡＧＧＣＵＧＧＡＣＧＣＡＡＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＵＵＧＡＣＡＵＡＡＧＣＵＡＵＣＵＧＡＡＧＡＡＧＣＵＧＵＧＵＧＧＣＡＣＵＧＵＣＣＵＧＧＧＵＧＧＡＣＣＣＡＡＡＣＵＧＣＣＡＧＧＡＡＧＧＧＵＵＧＣＧＵＵＣＧＧＵＧＡＧＧＡＣＡＵＡＧＡＵＣＵＡＣＣＵＧＡＡＡＣＣＵＵＵＧＡＵＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣＡＡＵＧＧＵＣＣＡＡＣＵＧＣＣＣＧＡＣＣＡＵＵＧＧＡＣＡＧＡＵＵＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＵＣＣＵＧＣＧＧＣＵＣＵＵＧＵＵＧＧＧＣＡＵＵＵＧＧＧＧＣＡＧＵＧＧＡＡＧＣＣＡＵＵＵＣＵＧＡＣＣＧＡＡＣＣＵＧＣＡＵＵＣＡＣＡＣＣＡＡＵＧＧＣＣＧＡＧＵＣＡＡＣＧＵＧＧＡＧＧＵＧＵＣＵＧＣＵＧＡＡＧＡＣＣＵＧＣＵＵＡＣＵＵＧＣＵＧＵＧＧＵＡＵＣＣＡＧＵＧＵＧＧＧＧＡＣＧＧＣＵＧＵＡＡＵＧＧＵＧＧＣＵＡＵＣＣＣＵＣＵＧＧＡＧＣＡＵＧＧＡＧＣＵＵＣＵＧＧＡＣＡＡＡＡＡＡＡＧＧＣＣＵＧＧＵＵＵＣＡＧＧＵＧＧＡＧＵＣＵＡＣＡＡＵＵＣＵＣＡＵＧＵＡＧＧＣＵＧＣＵＵＡＣＣＡＵＡＣＡＣＣＡＵＣＣＣＵＣＣＣＵＧＣＧＡＧＣＡＣＣＡＵＧＵＣＡＡＵＧＧＣＵＣＣＣＧＵＣＣＣＣＣＡＵＧＣＡＣＵＧＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＵＡＣＵＣＣＣＡＧＧＵＧＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＵＧＵＧＡＡＧＣＵＧＧＣＵＡＣＵＣＣＣＣＡＵＣＣＵＡＣＡＡＡＧＡＧＧＡＵＡＡＧＣＡＣＵＵＵＧＧＧＵＡＣＡＣＵＵＣＣＵＡＣＡＧＣＧＵＧＵＣＵＡＡＣＡＧＵＧＵＧＡＡＧＧＡＧＡＵＣＡＵＧＧＣＡＧＡＡＡＵＣＵＡＣＡＡＡＡＡＵＧＧＣＣＣＡＧＵＧＧＡＧＧＧＵＧＣＣＵＵＣＡＣＵＧＵＧＵＵＵＵＣＵＧＡＣＵＵＣＵＵＧＡＣＵＵＡＣＡＡＡＵＣＡＧＧＡＧＵＡＵＡＣＡＡＧＣＡＵＧＡＡＧＣＣＧＧＵＧＡＵＡＵＧＡＵＧＧＧＵＧＧＣＣＡＣＧＣＣＡＵＣＣＧＣＡＵＣＣＵＧＧＧＣＵＧＧＧＧＡＧＵＡＧＡＧＡＡＵＧＧＡＧＵＵＣＣＣＵＡＣＵＧＧＣＵＧＧＣＡＧＣＣＡＡＣＵＣＵＵＧＧＡＡＣＣＵＵＧＡＣＵＧＧＧＧＵＧＡＵＡＡＵＧＧＣＵＵＣＵＵＵＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＣＵＧＵＧＧＣＡＵＵＧＡＡＵＣＡＧＡＡＡＵＵＧＵＧＧＣＵＧＧＡＡＵＣＣＣＡＣＧＣＡＣＵＧＡＣＣＡＧＵＡＣＵＧＧＧＧＡＡＧＡＵＵＣＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＵＧＵＵＣＡＣＣＧＧＧＧＵＧＧＵＧＣＣＣＡＵＣＣＵＧＧＵＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＵＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＵＵＣＡＧＣＧＵＧＵＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＵＧＣＣＡＣＣＵＡＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣＡＵＣＵＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＣＣＣＧＵＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＡＣＣＣＵＣＧＵＧＡＣＣＡＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＣＧＧＣＧＵＧＣＡＧＵＧＣＵＵＣＡＧＣＣＧＣＵＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＵＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＵＣＣＧＣＣＡＵＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＣＧＵＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＵＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＵＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＵＧＡＡＧＵＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＵＧＧＵＧＡＡＣＣＧＣＡＵＣＧＡＧＣＵＧＡＡＧＧＧＣＡＵＣＧＡＣＵＵＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＵＣＣＵＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＵＧＧＡＧＵＡＣＡＡＣＵＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＵＣＵＡＵＡＵＣＡＵＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＵＣＡＡＧＧＵＧＡＡＣＵＵＣＡＡＧＡＵＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＵＧＣＡＧＣＵＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＵＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＵＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＵＡＣＣＵＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＣＵＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＵＣＡＣＡＵＧＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＡＧＵＵＣＧＵＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＵＣＡＣＵＣＵＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＵＧＡＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ（配列番号３９）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＵＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＧＧＧＧＳ４－ＮＬＳ－ｅＧＦＰ－ＮＬＳ
ＧＡＵＣＣＧＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＵＧＡＧＵＧＵＵＡＧＣＵＣＵＧＵＧＧＣＣＧＣＧＣＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＧＧＣＧＣＵＡＣＧＣＧＵＣＧＣＵＣＵＣＡＣＧＧＧＵＧＵＣＧＵＣＧＧＡＵＣＵＡＡＵＣＣＧＵＣＵＣＵＵＵＵＣＧＡＵＡＧＣＡＧＧＵＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＵＧＧＵＧＧＧＡＣＧＧＡＡＣＡＧＣＧＣＣＡＵＣＧＣＵＧＣＡＧＧＡＧＵＧＵＧＣＧＧＵＧＣＣＣＵＣＵＵＣＡＵＡＧＧＧＵＡＣＵＧＣＡＵＣＵＡＣＵＵＵＧＡＣＣＧＣＡＡＡＡＧＧＡＧＧＡＧＵＧＡＣＣＣＣＡＡＣＣＵＣＧＡＧＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＵＡＡＣＡＵＧＧＣＣＡＵＣＡＵＣＡＡＧＧＡＧＵＵＣＡＵＧＣＧＣＵＵＣＡＡＧＧＵＧＣＡＣＡＵＧＧＡＧＧＧＣＵＣＣＧＵＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡＧＵＵＣＧＡＧＡＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＵＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＵＧＡＣＣＡＡＧＧＧＵＧＧＣＣＣＣＣＵＧＣＣＣＵＵＣＧＣＣＵＧＧＧＡＣＡＵＣＣＵＧＵＣＣＣＣＵＣＡＧＵＵＣＡＵＧＵＡＣＧＧＣＵＣＣＡＡＧＧＣＣＵＡＣＧＵＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＵＣＣＣＣＧＡＣＵＡＣＵＵＧＡＡＧＣＵＧＵＣＣＵＵＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＵＵＣＡＡＧＵＧＧＧＡＧＣＧＣＧＵＧＡＵＧＡＡＣＵＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＵＧＧＵＧＡＣＣＧＵＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＵＵＣＡＵＣＵＡＣＡＡＧＧＵＧＡＡＧＣＵＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＡＡＵＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＵＧＧＧＣＵＧＧＧＡＧＧＣＣＵＣＣＵＣＣＧＡＧＣＧＧＡＵＧＵＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＵＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＵＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＵＧＡＡＧＣＵＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＵＡＣＧＡＣＧＣＵＧＡＧＧＵＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＵＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＵＧＣＡＧＣＵＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＵＡＣＡＡＣＧＵＣＡＡＣＡＵＣＡＡＧＵＵＧＧＡＣＡＵＣＡＣＣＵＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＵＡＣＡＣＣＡＵＣＧＵＧＧＡＡＣＡＧＵＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＵＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＧＧＡＧＧＵＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＧＵＧＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＵＵＣＣＧＧＵＧＧＵＧＧＵＧＧＵＡＧＵＡＵＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＧＵＣＧＧＵＡＵＣＣＡＣＧＧＡＧＵＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＵＧＵＵＣＡＣＣＧＧＧＧＵＧＧＵＧＣＣＣＡＵＣＣＵＧＧＵＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＵＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＵＵＣＡＧＣＧＵＧＵＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＵＧＣＣＡＣＣＵＡＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣＡＵＣＵＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＣＣＣＧＵＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＡＣＣＣＵＣＧＵＧＡＣＣＡＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＣＧＧＣＧＵＧＣＡＧＵＧＣＵＵＣＡＧＣＣＧＣＵＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＵＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＵＣＣＧＣＣＡＵＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＣＧＵＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＵＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＵＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＵＧＡＡＧＵＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＵＧＧＵＧＡＡＣＣＧＣＡＵＣＧＡＧＣＵＧＡＡＧＧＧＣＡＵＣＧＡＣＵＵＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＵＣＣＵＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＵＧＧＡＧＵＡＣＡＡＣＵＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＵＣＵＡＵＡＵＣＡＵＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＵＣＡＡＧＧＵＧＡＡＣＵＵＣＡＡＧＡＵＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＵＧＣＡＧＣＵＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＵＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＵＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＵＡＣＣＵＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＣＵＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＵＣＡＣＡＵＧＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＡＧＵＵＣＧＵＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＵＣＡＣＵＣＵＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＡＡＧＣＧＵＣＣＵＧＣＵＧＣＵＡＣＵＡＡＧＡＡＡＧＣＵＧＧＵＣＡＡＧＣＵＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＡＵＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ （配列番号４０）
上記のＲＮＡ配列のＤＮＡ配列も本明細書に開示されている：
５ＵＴＲ－１（Ｔ４４）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４４からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＴＴＴＣＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡＡＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４１）
５ＵＴＲ－２（Ｔ４４－ｔｏｐ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－１の修飾
ＧＧＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡＡＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４２）
５ＵＴＲ－３（Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＵＧ）
５ＵＴＲ－２の修飾：ＴＡＧに修飾された２つの上流翻訳開始コドンＡＴＧ
ＧＧＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴｔａｇＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡｔａｇＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４３）
５ＵＴＲ－４（短縮－Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＴＧ）
ＧＧＧ短縮後の最初の８３ヌクレオチドによる５ＵＴＲ－３の修飾
ＧＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡＴＡＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号 ４４）
５ＵＴＲ－５（短縮－Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＴＧ－２ＡＴＧ）
コード領域中のＡＴＧの前に１つの追加のＡＴＧを付加した５ＵＴＲ－４の修飾により、２つのタンデムＡＴＧ翻訳開始コドンが得られる
ＧＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡＴＡＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡＴＧ（配列番号４５）
５ＵＴＲ－６（Ｔ４５）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４５からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡＴＣＧＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＡＧＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＧＡＧＧＣＡＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＴＴＣＧＡＧＧＣＣＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＡＡＡＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＧＣＡＡＡＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＧＴＴＡＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＡＴＴＣＣＧＣＴＧＣＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＣＡＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＡＡＧＧＧＧＣＧＧＧＴＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＣＧＴＣＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣＧＧＡＴＣＴＴＣＣＴＴＴＣＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４６）
５ＵＴＲ－７（Ｔ４５－ｔｏｐ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－６の修飾
ＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＡＧＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＧＡＧＧＣＡＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＴＴＣＧＡＧＧＣＣＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＡＡＡＧＡＡＡＣＣＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＧＣＡＡＡＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＧＴＴＡＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＡＴＴＣＣＧＣＴＧＣＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＣＡＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＡＡＧＧＧＧＣＧＧＧＴＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＣＧＴＣＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣＧＧＡＴＣＴＴＣＣＴＴＴＣＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ（配列番号４７）
５ＵＴＲ－８（Ｔ１７）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００２７２３１７からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＣＣＣＣＴＣＧＡＣＣＴＣＣＴＴＴＴＡＡＡＡＡＴＴＣＴＣＴＴＡＧＣＣＡＣＧＴＴＧＡＴＴＧＴＡＣＧＧＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＡＣＧＴＴＧＣＴＴＡＡＡＣＣＴＡＣＡＧＴＴＴＣＧＡＡＡＧＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＡＧＡＡＡＴＡＡＧＣＣＣＡＧＧＣＴＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＡＡＧＴＴＣＡＣＧＴＣＣＴＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＧＧＴＴＧＧＡＴＴＧＴＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＧＣＡＧＴＣＡＧＧＣＡＴＴＴＧＧＴＧＴＧＧＴＣＧＣＣＴＡＡＧＧＧＧＴＧＧＧＴＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＧＡＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＡＣＣＣＣＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号４８）
５ＵＴＲ－９（Ｔ１７－ＴＯＰ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－８の修飾
ＧＧＧＡＧＣＣＡＣＧＴＴＧＡＴＴＧＴＡＣＧＧＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＡＣＧＴＴＧＣＴＴＡＡＡＣＣＴＡＣＡＧＴＴＴＣＧＡＡＡＧＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＡＧＡＡＡＴＡＡＧＣＣＣＡＧＧＣＴＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＡＡＧＴＴＣＡＣＧＴＣＣＴＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＧＧＴＴＧＧＡＴＴＧＴＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＧＣＡＧＴＣＡＧＧＣＡＴＴＴＧＧＴＧＴＧＧＴＣＧＣＣＴＡＡＧＧＧＧＴＧＧＧＴＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＧＡＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＡＣＣＣＣＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号４９）
５ＵＴＲ－１０ （Ｔ３５）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００４０４７３５からの５’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＧＧＧＣＧＴＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＣＧＧＧＴＴＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＧＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＡＣＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号５０）
５ＵＴＲ－１１（Ｔ３５－ＴＯＰ）
５’末端オリゴピリミジントラクト（５’ＴＯＰ）を除去した５ＵＴＲ－１０の修飾
ＧＧＧＣＧＣＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＣＧＧＧＴＴＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＴＧＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＡＣＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＡＡＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡ（配列番号５１）
５ＵＴＲ－１２（１０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する１０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５２）
５ＵＴＲ－１３（２０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する２０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５３）
５ＵＴＲ－１４（３０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する３０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５４）
５ＵＴＲ－１５（４０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する４０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５５）
５ＵＴＲ－１６（５０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５６）
５ＵＴＲ－１７（６０ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する６０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５７）
５ＵＴＲ－１８（７０ｎｔ＝０３０５Ｋ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＡＡＡＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５８）
５ＵＴＲ－１９（１００ｎｔ）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する１００ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＣＡＡＧＡＧＡＴＡＡＡＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号５９）
５ＵＴＲ－２０（５０ｎｔ ＝ ０３０１Ｋ－１）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する代替的５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＡＴＡＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号６０）
５ＵＴＲ－２１（５０ｎｔ ＝ ０３０１Ｋ－２）
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する代替的５０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号６１）
５ＵＴＲ－２２（７０ｎｔ＝１０１５Ｋ－Ａ）
Ｇ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ＡＣＧＵコンテンツ（２５％ＧＣ、２７％Ａ、３７％Ｕ）を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＣＴＴＴＣＡＣＴＡＴＴＴＣＡＴＴＣＡＴＴＴＣＡＴＴＣＡＣＡＣＡＴＴＡＣＡＣＴＴＡＣＡＴＣＡＣＡＴＣＣＡＣＡＴＴＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＣＣ（配列番号６２）
５ＵＴＲ－２３（７０ｎｔ＝１０１５Ｋ－Ｂ）
Ｇ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ＡＣＧＵコンテンツ（２５％ＧＣ、１７％Ａ、４８％Ｕ）を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＣＴＴＴＣＡＣＴＡＴＴＴＣＡＴＴＣＡＴＴＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＡＴＴＡＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＡＴＴＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＣＣ（配列番号６３）
３ＵＴＲ－１（Ｔ４４／４５）
マウスリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４４及びＥＮＳＭＵＳＴ０００００１０２８４５からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号６４）
３ＵＴＲ－２（Ｔ３５）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００４０４７３５からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＣＴＧＴＡＴＧＡＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＴＧＡＡＣＴＡＡＣＡＴＴＴＡＴＴＧＴＴＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＧＣＡＧＴＡＡＡＡＡＧＡＡＴＧＧＴＴＴＴＴＡＡＧＣＡＣＣＡＡＡＴＴＧＡＴＧＧＴＣＡＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＧＴＧＣＴＡＣＴＧＣＴＡＴＣＧＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴＧＴＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＴＧＡＣＣＣＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＴＡＴＡＣＣＴＧ（配列番号６５）
３ＵＴＲ－３（Ｔ１７）
ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７ａ遺伝子の転写産物ＥＮＳＴ０００００２７２３１７からの３’ＵＴＲ（遺伝子記号：ＲＰＳ２７Ａ）
ＣＴＧＴＡＴＧＡＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＴＧＡＡＣＴＡＡＣＡＴＴＴＡＴＴＧＴＴＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＧＣＡＧＴＡＡＡＡＡＧＡＡＴＧＧＴＴＴＴＴＡＡＧＣＡＣＣＡＡＡＴＴＧＡＴＧＧＴＣＡＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＧＴＧＣＴＡＣＴＧＣＴＡＴＣＧＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴＧＴＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＴＧＡＣＣＣＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＴＡＴＡＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＡＣＣＡＣＴＴＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＡＡＴＴＣＴＴＡＧＡＣＴＡＣＣＴＡＴＡＣＴＴＴＧＧＣＡＧＡＡＧＴＴＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＴＡＡＧＴＴＧＴＣＴＡＡＡＴＡＴＡＡ（配列番号６６）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－カルネキシン－ＥＧＦＰ（ＥＲ標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
ＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴｔａｇＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡｔａｇＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧａｔｇｇａａｇｇｇａａｇｔｇｇｔｔｇｃｔｇｔｇｔａｔｇｔｔａｃｔｇｇｔｇｃｔｔｇｇａａｃｔｇｃｔａｔｔｇｔｔｇａｇｇｃｔｃａｔｇａｔｇｇａｃａｔｇａｔｇａｔｇａｔｇｔｇａｔｔｇａｔａｔｔｇａｇｇａｔｇａｃｃｔｔｇａｃｇａｔｇｔｃａｔｔｇａａｇａｇｇｔａｇａａｇａｃｔｃａａａａｃｃａｇａｔａｃｃａｃｔｇｃｔｃｃｔｃｃｔｔｃａｔｃｔｃｃｃａａｇｇｔｔａｃｔｔａｃａａａｇｃｔｃｃａｇｔｔｃｃａａｃａｇｇｇｇａａｇｔａｔａｔｔｔｔｇｃｔｇａｔｔｃｔｔｔｔｇａｃａｇａｇｇａａｃｔｃｔｇｔｃａｇｇｇｔｇｇａｔｔｔｔａｔｃｃａａａｇｃｃａａｇａａａｇａｃｇａｔａｃｃｇａｔｇａｔｇａａａｔｔｇｃｃａａａｔａｔｇａｔｇｇａａａｇｔｇｇｇａｇｇｔａｇａｇｇａａａｔｇａａｇｇａｇｔｃａａａｇｃｔｔｃｃａｇｇｔｇａｔａａａｇｇａｃｔｔｇｔｇｔｔｇａｔｇｔｃｔｃｇｇｇｃｃａａｇｃａｔｃａｔｇｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｔａａａｃｔｇａａｃａａｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇｔｔｔｇａｃａｃｃａａｇｃｃｔｃｔｃａｔｔｇｔｔｃａｇｔａｔｇａｇｇｔｔａａｔｔｔｃｃａａａａｔｇｇａａｔａｇａａｔｇｔｇｇｔｇｇｔｇｃｃｔａｔｇｔｇａａａｃｔｇｃｔｔｔｃｔａａａａｃａｃｃａｇａａｃｔｃａａｃｃｔｇｇａｔｃａｇｔｔｃｃａｔｇａｃａａｇａｃｃｃｃｔｔａｔａｃｇａｔｔａｔｇｔｔｔｇｇｔｃｃａｇａｔａａａｔｇｔｇｇａｇａｇｇａｃｔａｔａａａｃｔｇｃａｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｇａｃａｃａａａａａｃｃｃｃａａａａｃｇｇｇｔａｔｃｔａｔｇａａｇａａａａａｃａｔｇｃｔａａｇａｇｇｃｃａｇａｔｇｃａｇａｔｃｔｇａａｇａｃｃｔａｔｔｔｔａｃｔｇａｔａａｇａａａａｃａｃａｔｃｔｔｔａｃａｃａｃｔａａｔｃｔｔｇａａｔｃｃａｇａｔａａｔａｇｔｔｔｔｇａａａｔａｃｔｇｇｔｔｇａｃｃａａｔｃｔｇｔｇｇｔｇａａｔａｇｔｇｇａａａｔｃｔｇｃｔｃａａｔｇａｃａｔｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｔａａａｔｃｃｔｔｃａｃｇｔｇａａａｔｔｇａｇｇａｃｃｃａｇａａｇａｃｃｇｇａａｇｃｃｃｇａｇｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇａｃｃａａａａａｔｃｃｃａｇａｔｃｃａｇａａｇｃｔｇｔｃａａｇｃｃａｇａｔｇａｃｔｇｇｇａｔｇａａｇａｔｇｃｃｃｃｔｇｃｔａａｇａｔｔｃｃａｇａｔｇａａｇａｇｇｃｃａｃａａａａｃｃｃｇａａｇｇｃｔｇｇｔｔａｇａｔｇａｔｇａｇｃｃｔｇａｇｔａｃｇｔａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｃｇｃａｇａｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａｇａｃａｔｇｇａｔｇｇａｇａａｔｇｇｇａｇｇｃｔｃｃｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｃｃｃｔａｇａｔｇｔｇａｇｔｃａｇｃｔｃｃｔｇｇａｔｇｔｇｇｔｇｔｃｔｇｇｃａｇｃｇａｃｃｔｇｔｇａｔｔｇａｃａａｃｃｃｃａａｔｔａｔａａａｇｇｃａａａｔｇｇａａｇｃｃｔｃｃｔａｔｇａｔｔｇａｃａａｔｃｃｃａｇｔｔａｃｃａｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａｃｃｃａｇｇａａａａｔａｃｃａａａｔｃｃａｇａｔｔｔｃｔｔｔｇａａｇａｔｃｔｇｇａａｃｃｔｔｔｃａｇａａｔｇａｃｔｃｃｔｔｔｔａｇｔｇｃｔａｔｔｇｇｔｔｔｇｇａｇｃｔｇｔｇｇｔｃｃａｔｇａｃｃｔｃｔｇａｃａｔｔｔｔｔｔｔｔｇａｃａａｃｔｔｔａｔｃａｔｔｔｇｔｇｃｔｇａｔｃｇａａｇａａｔａｇｔｔｇａｔｇａｔｔｇｇｇｃｃａａｔｇａｔｇｇａｔｇｇｇｇｃｃｔｇａａｇａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｇｃｔｇｃｔｇａｇｃｃａｇｇｃｇｔｔｇｔｇｇｇｇｃａｇａｔｇａａｃｇａｇｇｃａｇｃｔｇａａｇａｇｃｇｃｃｃｇｔｇｇｃｔｇｔｇｇｇｔａｇｔｃｔａｔａｔｔｃｔａａｃｔｇｔａｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇｔｇｔｔｃｃｔｇｇｔｔａｔｃｃｔｃｔｔｃｔｇｃｔｇｔｔｃｔｇｇａａａｇａａａｃａｇａｃｃａｇｔｇｇｔａｔｇｇａｇｔａｔａａｇａａａａｃｔｇａｔｇｃａｃｃｔｃａａｃｃｇｇａｔｇｔｇａａｇｇａａｇａｇｇａａｇａａｇａｇａａｇｇａａｇａｇｇａａａａｇｇａｃａａｇｇｇａｇａｔｇａｇｇａｇｇａｇｇａａｇｇａｇａａｇａｇａａａｃｔｔｇａａｇａｇａａａｃａｇａａａａｇｔｇａｔｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｇｇｔｇｇｃａｃｔｇｔｃａｇｔｃａａｇａｇｇａｇｇａａｇａｃａｇａａａａｃｃｔａａａｇｃａｇａｇｇａｇｇａｔｇａａａｔｔｔｔｇａａｃａｇａｔｃａｃｃａａｇａａａｃａｇａａａｇｃｃａｃｇａａｇａｇａｇＣＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴａＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＴＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣｔＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＣＴＡＧＡｔｇａＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号６７）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－カルネキシン－ｍＣｈｅｒｒｙ（ＥＲ標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
ＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴｔａｇＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡｔａｇＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧａｔｇｇａａｇｇｇａａｇｔｇｇｔｔｇｃｔｇｔｇｔａｔｇｔｔａｃｔｇｇｔｇｃｔｔｇｇａａｃｔｇｃｔａｔｔｇｔｔｇａｇｇｃｔｃａｔｇａｔｇｇａｃａｔｇａｔｇａｔｇａｔｇｔｇａｔｔｇａｔａｔｔｇａｇｇａｔｇａｃｃｔｔｇａｃｇａｔｇｔｃａｔｔｇａａｇａｇｇｔａｇａａｇａｃｔｃａａａａｃｃａｇａｔａｃｃａｃｔｇｃｔｃｃｔｃｃｔｔｃａｔｃｔｃｃｃａａｇｇｔｔａｃｔｔａｃａａａｇｃｔｃｃａｇｔｔｃｃａａｃａｇｇｇｇａａｇｔａｔａｔｔｔｔｇｃｔｇａｔｔｃｔｔｔｔｇａｃａｇａｇｇａａｃｔｃｔｇｔｃａｇｇｇｔｇｇａｔｔｔｔａｔｃｃａａａｇｃｃａａｇａａａｇａｃｇａｔａｃｃｇａｔｇａｔｇａａａｔｔｇｃｃａａａｔａｔｇａｔｇｇａａａｇｔｇｇｇａｇｇｔａｇａｇｇａａａｔｇａａｇｇａｇｔｃａａａｇｃｔｔｃｃａｇｇｔｇａｔａａａｇｇａｃｔｔｇｔｇｔｔｇａｔｇｔｃｔｃｇｇｇｃｃａａｇｃａｔｃａｔｇｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｔａａａｃｔｇａａｃａａｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇｔｔｔｇａｃａｃｃａａｇｃｃｔｃｔｃａｔｔｇｔｔｃａｇｔａｔｇａｇｇｔｔａａｔｔｔｃｃａａａａｔｇｇａａｔａｇａａｔｇｔｇｇｔｇｇｔｇｃｃｔａｔｇｔｇａａａｃｔｇｃｔｔｔｃｔａａａａｃａｃｃａｇａａｃｔｃａａｃｃｔｇｇａｔｃａｇｔｔｃｃａｔｇａｃａａｇａｃｃｃｃｔｔａｔａｃｇａｔｔａｔｇｔｔｔｇｇｔｃｃａｇａｔａａａｔｇｔｇｇａｇａｇｇａｃｔａｔａａａｃｔｇｃａｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｇａｃａｃａａａａａｃｃｃｃａａａａｃｇｇｇｔａｔｃｔａｔｇａａｇａａａａａｃａｔｇｃｔａａｇａｇｇｃｃａｇａｔｇｃａｇａｔｃｔｇａａｇａｃｃｔａｔｔｔｔａｃｔｇａｔａａｇａａａａｃａｃａｔｃｔｔｔａｃａｃａｃｔａａｔｃｔｔｇａａｔｃｃａｇａｔａａｔａｇｔｔｔｔｇａａａｔａｃｔｇｇｔｔｇａｃｃａａｔｃｔｇｔｇｇｔｇａａｔａｇｔｇｇａａａｔｃｔｇｃｔｃａａｔｇａｃａｔｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｔａａａｔｃｃｔｔｃａｃｇｔｇａａａｔｔｇａｇｇａｃｃｃａｇａａｇａｃｃｇｇａａｇｃｃｃｇａｇｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇａｃｃａａａａａｔｃｃｃａｇａｔｃｃａｇａａｇｃｔｇｔｃａａｇｃｃａｇａｔｇａｃｔｇｇｇａｔｇａａｇａｔｇｃｃｃｃｔｇｃｔａａｇａｔｔｃｃａｇａｔｇａａｇａｇｇｃｃａｃａａａａｃｃｃｇａａｇｇｃｔｇｇｔｔａｇａｔｇａｔｇａｇｃｃｔｇａｇｔａｃｇｔａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｃｇｃａｇａｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａｇａｃａｔｇｇａｔｇｇａｇａａｔｇｇｇａｇｇｃｔｃｃｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｃｃｃｔａｇａｔｇｔｇａｇｔｃａｇｃｔｃｃｔｇｇａｔｇｔｇｇｔｇｔｃｔｇｇｃａｇｃｇａｃｃｔｇｔｇａｔｔｇａｃａａｃｃｃｃａａｔｔａｔａａａｇｇｃａａａｔｇｇａａｇｃｃｔｃｃｔａｔｇａｔｔｇａｃａａｔｃｃｃａｇｔｔａｃｃａｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａｃｃｃａｇｇａａａａｔａｃｃａａａｔｃｃａｇａｔｔｔｃｔｔｔｇａａｇａｔｃｔｇｇａａｃｃｔｔｔｃａｇａａｔｇａｃｔｃｃｔｔｔｔａｇｔｇｃｔａｔｔｇｇｔｔｔｇｇａｇｃｔｇｔｇｇｔｃｃａｔｇａｃｃｔｃｔｇａｃａｔｔｔｔｔｔｔｔｇａｃａａｃｔｔｔａｔｃａｔｔｔｇｔｇｃｔｇａｔｃｇａａｇａａｔａｇｔｔｇａｔｇａｔｔｇｇｇｃｃａａｔｇａｔｇｇａｔｇｇｇｇｃｃｔｇａａｇａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｇｃｔｇｃｔｇａｇｃｃａｇｇｃｇｔｔｇｔｇｇｇｇｃａｇａｔｇａａｃｇａｇｇｃａｇｃｔｇａａｇａｇｃｇｃｃｃｇｔｇｇｃｔｇｔｇｇｇｔａｇｔｃｔａｔａｔｔｃｔａａｃｔｇｔａｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇｔｇｔｔｃｃｔｇｇｔｔａｔｃｃｔｃｔｔｃｔｇｃｔｇｔｔｃｔｇｇａａａｇａａａｃａｇａｃｃａｇｔｇｇｔａｔｇｇａｇｔａｔａａｇａａａａｃｔｇａｔｇｃａｃｃｔｃａａｃｃｇｇａｔｇｔｇａａｇｇａａｇａｇｇａａｇａａｇａｇａａｇｇａａｇａｇｇａａａａｇｇａｃａａｇｇｇａｇａｔｇａｇｇａｇｇａｇｇａａｇｇａｇａａｇａｇａａａｃｔｔｇａａｇａｇａａａｃａｇａａａａｇｔｇａｔｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｇｇｔｇｇｃａｃｔｇｔｃａｇｔｃａａｇａｇｇａｇｇａａｇａｃａｇａａａａｃｃｔａａａｇｃａｇａｇｇａｇｇａｔｇａａａｔｔｔｔｇａａｃａｇａｔｃａｃｃａａｇａａａｃａｇａａａｇｃｃａｃｇａａｇａｇａｇＣＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＴＡＡＣＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＧＣＧＣＴＴＣＡＡＧＧＴＧＣＡＣＡＴＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡＧＴＴＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＴＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＴＣＣＣＣＴＣＡＧＴＴＣＡＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＴＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＡＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＧＣＧＧＡＴＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＡＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＴＡＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＣＴＡＧＡｔｇａＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号６８）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ＥＧＦＰ（ミトコンドリア標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
ＧＡＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＡＧＴＧＴｔａｇＣＴＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＧＣＴＡＣＧＣＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＴＣＴＡＡＴＣＣＧＴＣＴＣＴＴＴＴＣＧＡｔａｇＣＡＧＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧＡｔｇｇｔｇｇｇａｃｇｇａａｃａｇｃｇｃｃａｔｃｇｃｔｇｃａｇｇａｇｔｇｔｇｃｇｇｔｇｃｃｃｔｃｔｔｃａｔａｇｇｇｔａｃｔｇｃａｔｃｔａｃｔｔｔｇａｃｃｇｃａａａａｇｇａｇｇａｇｔｇａｃｃｃｃａａｃＣＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴａＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＴＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣｔＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＣＴＡＧＡｔｇａＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号６９）
Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ（ミトコンドリア標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＣａｔＢ－ＥＧＦＰ（リソソーム標的化ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＣａｔＢ－ｍＣｈｅｒｒｙ（リソソーム標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ｔｏｐ－ｕＡＴＧ－ＮＬＳ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＮＬＳ（核標的化ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ）
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－Ｐ２Ａ－カルネキシン－ｅＧＦＰ
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－Ｐ２Ａ－ＮＬＳ－ｅＧＦＰ－ＮＬＳ
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＧＧＧＧＳ４－カレキシン－ｅＧＦＰ
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Ｔ４４－ＴＯＰ－ｕＡＴＧ－ＴＯＭ２０－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＧＧＧＧＳ４－ＣａｔＢ－ｅＧＦＰ
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５ＵＴＲ－２４
ＧＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造を有する９０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ
ＧＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＣＡＡＧＡＧＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＡＵＡＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号８１）
５ＵＴＲ－２５
ＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ヌクレオチド組成物を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ。
ＧＧＡＡＡＣＡＣＡＡＵＡＡＣＡＵＡＡＵＣＡＵＡＣＵＡＣＡＣＡＡＣＵＡＡＣＡＣＡＵＡＣＡＵＣＡＣＡＵＡＣＡＣＡＵＣＡＣＡＵＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号８２）
５ＵＴＲ－２６
ＧＧ、コザック配列（ＧＣＣＡＣＣ）、最小の二次構造、及び修飾ヌクレオチド組成物を有する７０ｎｔの非天然５’ＵＴＲ。
ＧＧＣＵＡＣＡＣＡＣＵＣＵＣＡＣＵＣＵＣＡＵＣＡＣＵＣＡＣＵＡＣＵＣＡＣＵＣＵＣＵＣＡＵＣＡＣＵＣＵＣＡＣＡＵＣＡＣＡＵＣＡＣＵＧＣＣＡＣＣ（配列番号８３）
５ＵＴＲ－２７
５ＵＴＲ－２５中にマイクロＲＮＡ標的部位を有さない５ＵＴＲ－２５と同じ長さ及びヌクレオチド組成物を有する非天然５’ＵＴＲ。
ＧＧＣＡＡＡＡＡＵＣＡＡＡＡＵＣＡＡＵＣＡＵＣＡＵＣＡＣＡＡＣＡＵＣＡＡＣＡＡＵＣＡＡＵＣＡＵＣＡＡＣＡＣＡＵＣＡＵＣＡＡＧＡＣＡＣＣＡＣＣ（配列番号８４）
５ＵＴＲ－２８
５ＵＴＲ－１８中にマイクロＲＮＡ標的部位を有さない５ＵＴＲ－１８と同じ長さ及びヌクレオチド組成物を有する非天然５’ＵＴＲ。
ＧＧＡＡＧＡＧＡＵＣＡＡＡＡＧＣＡＡＣＡＡＡＵＣＡＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＣＡＡＵＵＡＧＡＡＣＡＡＧＡＡＡＣＡＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号８５）
５ＵＴＲ－２９
５ＵＴＲ－２６中にマイクロＲＮＡ標的部位を有さない５ＵＴＲ－２６と同じ長さ及びヌクレオチド組成物を有する非天然５’ＵＴＲ。
ＧＧＣＡＵＣＡＣＡＣＵＣＵＣＡＣＵＣＵＣＡＵＣＵＣＡＡＣＡＣＵＣＣＵＣＣＵＣＡＵＵＣＣＡＡＵＣＵＣＵＣＡＣＡＣＡＵＣＣＣＡＵＵＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号８６）
３ＵＴＲ－４
３’末端に機能モチーフＡ（下線）が付加された修飾３ＵＴＲ－１。
ＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡＡＡＡＡＣＵＣＡＡＵＧＵＡＵＵＵＣＵＧＡＧＧＡＡＧＣＧＵＧＧＵＧＣＡＵＡＡＵＧＣＣＡＣＧＣＡＧＣＧＵＣＵＧＣＡＵＡＡＣＵＵＵＵＡＵＵＡＵＵＵＣＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＣＡＡＣＡＡＡ（配列番号８７）
モチーフＡ
ＡＡＡＡＣＵＣＡＡＵＧＵＡＵＵＵＣＵＧＡＧＧＡＡＧＣＧＵＧＧＵＧＣＡＵＡＡＵＧＣＣＡＣＧＣＡＧＣＧＵＣＵＧＣＡＵＡＡＣＵＵＵＵＡＵＵＡＵＵＵＣＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＣＡＡＣＡＡＡ（配列番号８８）
３ＵＴＲ－５
３’末端に機能モチーフＢ（下線）が付加された修飾３ＵＴＲ－１。
ＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡＵＡＵＧＵＣＵＧＵＵＵＵＵＧＵＡＵＣＵＵＵＡＵＧＣＵＧＵＡＵＵＵＵＡＡＣＡＣＵＵＵＧＵＡＵＵＡＣＵＵＡＧＧＵＵＡＵＵ（配列番号８９）
モチーフＢ
ＵＡＵＧＵＣＵＧＵＵＵＵＵＧＵＡＵＣＵＵＵＡＵＧＣＵＧＵＡＵＵＵＵＡＡＣＡＣＵＵＵＧＵＡＵＵＡＣＵＵＡＧＧＵＵＡＵＵ（配列番号９０）
３ＵＴＲ－６
３’末端に機能モチーフＣ（下線）が付加された修飾３ＵＴＲ－１。
ＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡＡＡＣＵＣＣＡＧＧＡＣＵＧＵＡＵＵＵＧＵＧＡＣＵＡＡＵＵＧＵＡＵＡＡＣＡＧＧＵＵ（配列番号９１）
モチーフＣ
ＡＡＣＵＣＣＡＧＧＡＣＵＧＵＡＵＵＵＧＵＧＡＣＵＡＡＵＵＧＵＡＵＡＡＣＡＧＧＵＵ（配列番号９２）
ＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡワクチン１
５ＵＴＲ－２７、３ＵＴＲ－４、及び１２０Ａテールを利用して、コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）スパイクタンパク質を抗原として発現するためのｍＲＮＡの完全な配列（配列番号９３）
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ＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡワクチン２
５ＵＴＲ－２７、３ＵＴＲ－４、及び１２０Ａテールを利用して、抗原として、スパイクタンパク質のコロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を発現するためのｍＲＮＡの完全な配列（配列番号９４）
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ＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡワクチン３
５ＵＴＲ－２７、３ＵＴＲ－４、及び１２０Ａテールを利用して、コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）エンベロープタンパク質を抗原として発現するためのｍＲＮＡの完全な配列（配列番号９５）
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ＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡワクチン４
５ＵＴＲ－２７、３ＵＴＲ－４、及び１２０Ａテールを利用して、コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）膜タンパク質を抗原として発現するためのｍＲＮＡの完全な配列（配列番号９６）
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ＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡワクチン５
５ＵＴＲ－２７、３ＵＴＲ－４、及び１２０Ａテールを利用して、コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）ヌクレオカプシドタンパク質を抗原として発現するためのｍＲＮＡの完全な配列（配列番号９７）
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【0141】

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、開示されている本発明が属する当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。本明細書において引用される刊行物及び引用される資料は、参照により具体的に組み込まれる。

【0142】

当業者は、多くの変更及び修正が本発明の好ましい実施形態に対して行われ、そのようは変更及び修正が本発明の趣旨から逸脱することなく行われ得ることを理解するだろう。したがって、付属の請求項は、本発明の真の趣旨及び範囲に入る全てのそのような等しい変形例を網羅することが意図される。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【配列表】

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