(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-08-01
(45)【発行日】2024-08-09
(54)【発明の名称】リンパ球における阻害経路の中和
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240802BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240802BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240802BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240802BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20240802BHJP
C12Q 1/02 20060101ALN20240802BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T ZNA
A61K39/395 E
A61K45/00
A61P35/00
A61P43/00 121
C07K16/28
C12Q1/02
【請求項の数】
13
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023101829
(22)【出願日】2023-06-21
(62)【分割の表示】P 2018537834の分割
【原出願日】2017-01-20
(65)【公開番号】P2023134490
(43)【公開日】2023-09-27
【審査請求日】2023-07-20
(31)【優先権主張番号】62/281,217
(32)【優先日】2016-01-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】506000184
【氏名又は名称】イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＮＡＴＥ ＰＨＡＲＭＡ ＰＨＡＲＭＡ Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(72)【発明者】
【氏名】パスカル・アンドレ
(72)【発明者】
【氏名】マチュー・ブルリー
(72)【発明者】
【氏名】カロリーヌ・ドゥニ
(72)【発明者】
【氏名】カリーヌ・パトゥレル
(72)【発明者】
【氏名】ニコライ・ヴァクトマン
【審査官】濱田 光浩
(56)【参考文献】
【文献】特表２００９－５４１４４９（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００８／００９５４５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／０４１９４５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】JOSE LUIS PEREZ-GRACIA; SARA LABIANO; MARIA E RODRIGUEZ-RUIZ; MIGUEL F SANMAMED; ET AL，ORCHESTRATING IMMUNE CHECK-POINT BLOCKADE FOR CANCER IMMUNOTHERAPY IN COMBINATIONS，CURRENT OPINION IN IMMUNOLOGY，ELSEVIER，2014年04月，VOL:27，PAGE(S):89 - 97，http://dx.doi.org/10.1016/j.coi.2014.01.002
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３９／３９５
Ａ６１Ｋ ４５／００
Ａ６１Ｐ ３５／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト個人における肺癌の処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体およびＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体を含む組成物であって、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体は、ＮＫＧ２Ａに結合し、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害する抗体であり、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体は、配列番号４～８のいずれか１つに示される配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインおよび配列番号９に記載の配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含み、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、ＭＥＤＩ－４７３６、ＣＴ－０１１、およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択される、組成物。
【請求項2】
前記ヒト個人が、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体による処置時（処置中または処置後）に進行性疾患を生じる、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項3】
ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体が、配列番号５に記載の配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号９に記載の配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項4】
ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体が、配列番号５に記載の配列を有する重鎖、および配列番号９に記載の配列を有する軽鎖を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項5】
ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体がＭＥＤＩ－４７３６である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項6】
肺癌が非小細胞肺癌である、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項7】
肺癌が進行性および／または難治性の肺癌である、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項8】
前記ヒト個人が、増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／またはＣＤ８Ｔ細胞を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項9】
前記ヒト個人が、少なくとも１回のＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体の投与、任意に少なくとも１回のＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体を使用したサイクルでの処置の後に、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫおよび／またはＣＤ８Ｔ細胞の数が増加していると判定される、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項10】
ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体が、ＩｇＧ４抗体、抗体断片、Ｆｃドメインを欠損する抗体または、ＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の結合を減少させるように修飾されたＦｃドメインを含む抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項11】
ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体が、ＮＫおよび／またはＣＤ８Ｔ細胞に対するＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和するのに有効な量で個人に投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項12】
ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体およびＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体を含む、ヒト個人の非小細胞肺がんの処置に使用するための組成物であって、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体は、ＮＫＧ２Ａに結合し、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害する抗体であり、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体は、配列番号５に記載の配列を有する重鎖および配列番号９に記載の配列を有する軽鎖を含み、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体がＭＥＤＩ－４７３６である、組成物。
【請求項13】
前記ヒト個人が、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体による処置時（処置中または処置後）に進行性疾患を生じる、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／２８１，２１７号明細書（あらゆる図面を含めて、参照によってその全体が本明細書中に援用される）の利益を主張する。
本出願は、２０１６年１月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／２８１，２１７号明細書（あらゆる図面を含めて、参照によってその全体が本明細書中に援用される）の利益を主張する。
【0002】
配列表の参照
本出願は、電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、２０１７年１月１９日に作成された「ＮＫＧ２Ａ－ＰＤ１ｂ＿ＳＴ２５」という名称の３８ＫＢサイズのファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、参照によってその全体が本明細書中に援用される。
本出願は、電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、２０１７年１月１９日に作成された「ＮＫＧ２Ａ－ＰＤ１ｂ＿ＳＴ２５」という名称の３８ＫＢサイズのファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、参照によってその全体が本明細書中に援用される。
【0003】
本発明は、ＰＤ－１中和剤に対して応答性が低いがんを処置するためのＮＫＧ２Ａ中和剤の使用、ならびにがんの処置のためのＮＫＧ２Ａ中和剤およびＰＤ－１中和剤の併用に関する。
【背景技術】
【0004】
ＮＫ細胞活性は、活性化シグナルおよび阻害性シグナルの両方を含む複雑な機構によって制御される。ＨＬＡクラスＩ欠損標的細胞のＮＫ細胞媒介性の認識および死滅において重要な役割を果たすいくつかの別個のＮＫ特異的受容体が同定されている。天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）は、活性化受容体タンパク質の種類およびこれらを発現する遺伝子（ＮＫ細胞において特異的に発現される）を指す。ＮＣＲの例としては、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、およびＮＫｐ４６が挙げられる（例えば、（非特許文献１）、（非特許文献２）、（非特許文献３）、（非特許文献４）、（非特許文献５）；（非特許文献６）が参照され、これらの開示全体は参照によって本明細書中に援用される）。これらの受容体はＩｇスーパーファミリーのメンバーであり、特異的なｍＡｂによって誘導されるこれらの架橋は強力なＮＫ細胞活性化をもたらし、その結果、細胞内Ｃａ＋＋レベルの増大、細胞毒性の誘発、およびリンホカインの放出、ならびに多くのタイプの標的細胞に対するＮＫ細胞毒性の活性化が生じる。
【0005】
ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、リンパ球のサブセットにおいて見出される阻害性受容体である。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ－リガンドＨＬＡ－Ｅを発現する細胞に対する特定のリンパ球のサイトカイン放出および細胞毒性反応を制限する（例えば、（特許文献１）を参照）。またＨＬＡ－Ｅは、特定の腫瘍細胞（非特許文献７）および活性化内皮細胞（非特許文献８）によって可溶性形態で分泌されることも見出されている。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を阻害する抗体は、ＨＬＡ－Ｅ発現腫瘍細胞またはウイルス感染細胞に対するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性ＮＫ細胞の応答など、ＨＬＡ－Ｅ陽性標的細胞に対するリンパ球のサイトカイン放出および細胞溶解活性を増大し得る。従って、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを阻害するが、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現細胞の死滅を誘発しない治療抗体（すなわち、非枯渇抗体）はがん患者における腫瘍成長の制御を誘導し得る。
【0006】
ＰＤ－１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１は、活性化されたＢ細胞、Ｔ細胞、および骨髄細胞において発現される（非特許文献９；非特許文献１０）。ＰＤ－１に対する２つのリガンドＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２が同定されており、これらは、ＰＤ－１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３）。ＰＤ－Ｌ１は、様々なヒトがんで豊富にある（非特許文献１４）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用により、腫瘍浸潤リンパ球が減少し、Ｔ細胞受容体に媒介される増殖が減少し、がん性細胞による免疫回避が起こる。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することによって反転させることができ、この効果は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用が同様に遮断されるときに相加的である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】国際公開第９９／２８７４８号パンフレット
【非特許文献】
【0008】
【文献】Ｌａｎｉｅｒ（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２３－２７
【文献】Ｐｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９０：１５０５－１５１６
【文献】Ｃａｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８９：７８７－７９６
【文献】Ｓｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：１１２９－１１３６
【文献】Ｐｅｓｓｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８８（５）：９５３－６０
【文献】Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４０９：１０５５－１０６０
【文献】Ｄｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６；１７７：３１００－７
【文献】Ｃｏｕｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００７；１０９：２８０６－１４
【文献】Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９－８２
【文献】Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：７１１－８
【文献】Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７－３４
【文献】Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１－８
【文献】Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４－４３
【文献】Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７－９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
ＰＤ－１遮断は、多くの臨床試験において印象的な抗腫瘍応答をもたらした。しかしながら、多くのがん（例えば、肺がん）では、全ての患者が抗腫瘍応答を伴って処置に応答するわけではなく、さらに一部の患者は処置後にがんを再発する。従って、当該技術分野では、ＰＤ－１軸（ＰＤ－１ ａｘｉｓ）の阻害剤で処置される患者に対する利益の改善が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0010】
１つの態様では、本発明は、ＰＤ１中和剤（例えば、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）による処置に対する低応答者（ｐｏｏｒ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）である個人において、抗腫瘍免疫応答を引き起こす改良された方法を提供し、この個人は、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤で処置される。ＰＤ－１低応答者における腫瘍浸潤リンパ球は、ＰＤ－１中和抗体による処置後、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを発現することができる。ＰＤ－１低応答者では、ＴＩＬが阻害性ＮＫＧ２Ａ受容体によって制限されるため、ＰＤ－１中和剤による処置にもかかわらず、腫瘍が進行するかまたは免疫監視を回避し得る。ＰＤ－１耐性のマウスリンパ腫モデルは、ＮＫＧ２Ａ中和剤による処置が大多数の個人において完全寛解を誘導することを示す。
【0011】
従って、一実施形態では、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対して低応答者であるか、または応答性が低いがんを有する（例えば、低応答者であるかもしくは応答性が低いことが観察されるか、または低応答者であるかもしくは応答性が低いことが予測される）個人のがんを処置または予防する方法が提供され、本方法は、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物を治療的に活性な量で個人に投与するステップを含む。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物が、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物と併用して投与される。別の実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物が、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物との併用処置を伴わずに投与される。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物が、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置の過程中（処置と併用して）または処置の終了後（処置後）に投与され、任意選択的に、さらに、個人は、不完全な応答を生じている（または完全な応答を生じていない）か、（例えば、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物による処置なしで）ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置中または処置後（例えば、処置の第１の過程またはサイクル後）にがんの再発またはがんの進行を生じており、任意選択的に、個人は、検出可能なおよび／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞ならびに／またはＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａを有する（例えば、有することが決定される）。一実施形態では、がんは、血液系腫瘍、任意選択的にリンパ腫または白血病である。一実施形態では、がんは、がん腫である。一実施形態では、個人は、検出可能なおよび／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞ならびに／またはＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａを有する。
【0012】
一実施形態では、個人のがんを処置または予防する方法であって、
（ａ）ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤を個人に投与するステップ（例えば、薬剤による治療のサイクルまたは過程を施すステップ）と、
（ｂ）ステップ（ａ）の個人のがんが、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤に対して応答性が低いと決定される（例えば、進行している、完全に応答または退縮されていない、非応答性である）場合、（任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物を治療的に活性な量で個人に投与するステップと
を含む方法が提供される。
（ａ）ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤を個人に投与するステップ（例えば、薬剤による治療のサイクルまたは過程を施すステップ）と、
（ｂ）ステップ（ａ）の個人のがんが、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤に対して応答性が低いと決定される（例えば、進行している、完全に応答または退縮されていない、非応答性である）場合、（任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して）ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物を治療的に活性な量で個人に投与するステップと
を含む方法が提供される。
【0013】
一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体である。一実施形態では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗ＰＤ－１または抗ＰＤＬ－１抗体である。個人は、ヒトであることが特定され得る。
【0014】
一実施形態では、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対して応答性が低いがんを有する（例えば、進行している、完全に応答または退縮されていない、非応答性である）個人におけるＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞を活性化する方法が提供され、本方法は、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物を治療的に活性な量で個人に投与するステップを含む。
【0015】
本明細書中の任意の実施形態の１つの態様では、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対して応答性が低いがんを有する個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に（例えば、１つまたは複数の予後因子に基づいて）不完全な応答、治療応答の欠如、検出可能な再発もしくは残存がん、および／または進行性疾患を生じるか、または生じる高い可能性を有することが予測される個人である。一実施形態では、応答性が低いがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置にもかかわらず（例えば、その間またはその後）、応答されていない、完全に応答されていない、検出可能であるかもしくは残存したままであるか、または再発もしくは進行したがん、あるいはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置にもかかわらず、（例えば、１つまたは複数の予後因子に基づいて）応答されない、完全に応答されない、検出可能であるかもしくは残存したままであるか、または再発もしくは進行する高い可能性を有するがんである。一実施形態では、低応答者であるか、または応答性が低いがんを有する個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に不完全な応答を生じている（例えば、完全な応答（ＣＲ）を生じていない）個人である。一実施形態では、低応答者であるか、または応答性が低いがんを有する個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に少なくとも部分的な応答（ＰＲ）を生じているが、がんが検出可能なままであるか、または再発もしくは進行した個人である。
【0016】
一実施形態では、低応答者であるか、または応答性が低いがんを有する個人は、（例えば、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤による処置なしで；単独療法として）ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する不良な疾患予後を有する個人である。不良な疾患予後を有する個人は、例えば、１つまたは複数の予測因子に基づいて、（例えば、良好な疾患予後を有する個人と比較して）がんの進行の高いまたはより高いリスクを有することが決定され得る。一実施形態では、予測因子は、検出可能なおよび／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の存在ならびに／またはＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａを含む。一実施形態では、予測因子は、１つまたは複数の遺伝子における突然変異の存在または非存在を含む。一実施形態では、突然変異は、Ｔ細胞によって認識されるネオエピトープを定義する。一実施形態では、予測因子は、腫瘍細胞における１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質、例えば、ＰＤ－Ｌ１の発現のレベル、腫瘍細胞における減少または増加したレベルのＰＤ－Ｌ１を含む。一実施形態では、予測因子は、循環または腫瘍環境中のＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞における１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質、例えば、ＰＤ－１の発現のレベルを含む。一実施形態では、予測因子は、腫瘍細胞における突然変異荷重、例えば、１エクソーム当たりの非同義突然変異の数を含む。
【0017】
一実施形態では、低応答者であるか、または応答性が低いがんを有する個人は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置に対して応答性が低いことが知られているがん、任意選択的に固形腫瘍、任意選択的に血液悪性疾患、任意選択的に頭頸部扁平上皮細胞がんを有する個人である。
【0018】
１つの態様では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置に対して応答性が低い（例えば、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置後に進行したか、または進行することが予測される）がんの処置または予防に使用するためのヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体を含む組成物が提供され、任意選択的に、がんは、固形がん（例えば、肺がん）であり、任意選択的に、がんは、扁平上皮細胞がん（例えば、ＨＮＳＣＣ）であり、任意選択的に、がんは、血液悪性疾患（例えば、リンパ腫）である。
【0019】
１つの態様では、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対して応答性が低いがんの処置のために、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用するためのヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供される。１つの態様では、肺がん、黒色腫または扁平上皮細胞がん（例えば、ＨＮＳＣＣ）を有する個人の処置における、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供され、処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、および（ｂ）ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体のそれぞれを有効量で個人に投与するステップを含む。
【0020】
１つの態様では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置を受けたかまたは受けている個人のがんの処置または予防に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体を含む組成物が提供され、個人は、腫瘍環境中の検出可能な増加したおよび／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞ならびに／または腫瘍環境中のＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａの増加したレベルの発現を有する。一実施形態では、個人は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置前に観察される数と比較して増加した、および／または基準値と比較して増加した、循環または腫瘍環境中のＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の数を有する（例えば、細胞の数は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物に対して低い応答を生じる患者において観察される値に対応する）。一実施形態では、個人は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置の前に観察されるレベルと比較しておよび／または基準値と比較して、腫瘍環境中のＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａの増加したレベルの発現を有する（例えば、このレベルは、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物に対して低い応答を生じる患者において観察される値に対応する）。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒト患者（インビボ）においてヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和をもたらす量、例えば、ヒト患者においてＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞におけるヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和をもたらす量で個人に投与される。一実施形態では、ヒト患者においてヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和をもたらす量は、（例えば、ＰＢＭＣに対して抗体が漸増される結合アッセイで）ＮＫＧ２Ａ＋細胞の表面上のＮＫＧ２Ａ受容体を実質的に飽和させるのに必要な最低濃度の少なくとも１０倍（例えば、１０～２０倍、１０～５０倍、１０～１００倍、２０～５０倍、２０～１００倍、３０～１００倍、５０～１００倍）、任意選択的に少なくとも５０倍、６０倍、８０倍または１００倍である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＮＫＧ２Ａへの結合についてＨＬＡ－Ｅと競合する。
【0021】
１つの態様では、抗ＮＫＧＡ抗体および抗ＰＤ－１抗体、または抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体による併用処置は、がんを処置するのに特に有効であることが本明細書に示されている。ＮＫＧ２Ａが、ＰＤ１軸を遮断する薬剤の有効性を制限し得るように、抗ＰＤ１による処置が腫瘍浸潤リンパ球におけるＮＫＧ２Ａ受容体の下方制御を引き起こし得ることも本明細書に示されている。これらの受容体が両方とも腫瘍浸潤リンパ球の細胞傷害性活性を制限し得るため、抗体によるこれらの２つの受容体両方の阻害活性の中和は、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋リンパ球ががん細胞を有効に根絶するのを可能にする。一実施形態では、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋リンパ球は、細胞傷害性リンパ球、任意選択的にＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。
【0022】
１つの態様では、本発明は、例えば、抗体の使用による、阻害性受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の組み合わされた中和によって抗腫瘍免疫応答を促進する改良された方法を提供する。併用処置は、ＰＤ－１の阻害活性の中和に対する低応答者であるかどうかにかかわらず、従って、例えば、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者である個人およびＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する良好な応答者である個人を含む、がん（例えば、ＰＤ－１を中和する薬剤に対して応答性が低いことが知られているがん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、腎臓がん、消化管がん、膵臓または食道腺がん、乳がん、腎細胞がん（ＲＣＣ）、黒色腫、大腸がんまたは卵巣がん）を有する個人を処置するのに使用され得る。
【0023】
従って、一実施形態では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置に対して応答性が低いがんを処置または予防する方法が提供され、本方法は、がんを有する個人に（ａ）治療的に活性な量の、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物、および（ｂ）治療的に活性な量の、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物を投与するステップを含む。一実施形態では、がんは、固形腫瘍、任意選択的に浸潤ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞を含む固形腫瘍であり、任意選択的に、ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現し、任意選択的に、ＮＫ細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％がそれらの表面においてＮＫＧ２Ａを発現する。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体である。一実施形態では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗ＰＤ－１または抗ＰＤＬ－１抗体である。個人は、ヒトであることが特定され得る。
【0024】
一実施形態では、個人におけるＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞の活性を活性化または促進する方法が提供され、本方法は、（ａ）治療的に活性な量の、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物、および（ｂ）治療的に活性な量の、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物を個人に投与するステップを含む。一実施形態では、個人における腫瘍浸潤ＮＫ細胞の活性を活性化または促進する方法が提供され、本方法は、（ａ）治療的に活性な量の、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物、および（ｂ）治療的に活性な量の、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物を個人に投与するステップを含む。一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。任意選択的に、任意の実施形態では、個人は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置に対して応答性が低いがんを有する。
【0025】
１つの態様では、本発明は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体と、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体との組み合わせを投与するステップを含む処置を提供する。本明細書中の任意の実施形態の１つの態様では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体と、ＰＤＬ１またはＰＤ１に結合し、ヒトＰＤ－１ポリペプチドの阻害活性を中和する抗体とを含む組成物が提供される。１つの態様では、この組成物は、がんの処置または予防に使用される。
【0026】
１つの態様では、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体およびＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物による処置に対して応答性が低いことが知られているがん、任意選択的に固形腫瘍、任意選択的に血液悪性疾患の処置または予防において併用される。一実施形態では、応答性が低いことが知られているがんは、扁平上皮細胞がん、任意選択的に頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【0027】
本明細書中の任意の実施形態では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する化合物または薬剤は、例えば、ＰＤ－１とその天然のリガンドＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する（任意選択的に、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用をさらに遮断することにより、ＰＤ－Ｌ１誘導性ＰＤ－１シグナル伝達を防ぐポリペプチド（例えば、抗体、Ｆｃドメインに融合されたポリペプチド、免疫付着因子など）を含む。１つの態様では、ポリペプチドは、ＰＤ－１に結合する抗体（抗ＰＤ－１抗体）であり、このような抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用および／またはＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断し得る。別の態様では、ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する。一実施形態では、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを中和する抗体は、ヒト患者（インビボ）においてヒトＰＤ－１の阻害活性の中和をもたらす量、例えば、ヒト患者においてＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞におけるヒトＰＤ－１の阻害活性の中和をもたらす量で投与される／投与された。１つの態様では、抗体は、特定の臨床投与レジメンに従って、特に特定の投与量で特定の投薬スケジュールに従って投与される（または投与のためのものである）。
【0028】
本明細書中の任意の実施形態の１つの態様では、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する化合物または薬剤は、抗体である。１つの態様では、ＮＫＧ２Ａを中和する抗体は、非枯渇抗体、例えば、サンプルまたは対象中に存在するＮＫＧ２Ａ発現細胞の数に悪影響を与えないように、死滅、根絶、溶解しない、またはこのような死滅、根絶もしくは溶解を誘発しない抗体である。１つの態様では、ＮＫＧ２Ａを中和する抗体は、非枯渇抗体である。非枯渇抗体は、例えば、Ｆｃドメインを欠いているか、または１つまたは複数のＦｃγ受容体（例えば、ＣＤ１６）への結合が最小限であるか、または結合しないＦｃドメインを有し得る。例としては、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体からの定常領域を有する抗体、１つまたは複数のＦｃγ受容体（例えば、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂおよび／またはＣＤ６４）への結合を低減または除去するように修飾された定常領域を有する任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）の抗体が挙げられる。
【0029】
本明細書中の任意の実施形態の１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、少なくとも１回の投与サイクルで投与され、投与サイクルは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも１回目および２回目の（および任意選択的に３回目、４回目、５回目、６回目、７回目および／または８回目またはさらなる）投与を含み、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、１回目および２回目の（および任意選択的にさらなる）投与間で少なくとも１０μｇ／ｍｌ（または任意選択的に少なくとも２０、３０、４０または５０μｇ／ｍＬ）の抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与される。所定の連続血中濃度を達成または維持することは、血中濃度が所定の期間の持続時間（例えば、抗体の２回の投与間、数週間）にわたって所定の血中濃度を実質的に下回らないことを意味し、すなわち、血中濃度は、所定の期間中に可変であり得るが、所定の血中濃度は、最低または「トラフ」濃度を表す。
【0030】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、投与時に（例えば、投与の１または２日以内に）約または少なくとも約５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌ、任意選択的に少なくとも約１００μｇ／ｍｌの、ピーク血中濃度を達成するのに有効な量で投与される。
【0031】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗体の投与後、少なくとも１週間、または少なくとも２週間にわたり、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌ、任意選択的に少なくとも約１００μｇ／ｍｌの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与される。
【0032】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、２回の連続する投与間で約または少なくとも約５０、６０、７０または８０μｇ／ｍｌ、任意選択的に少なくとも約１００μｇ／ｍｌの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与される。一実施形態では、１回目および２回目の投与は、約２週間、任意選択的に約１週間の期間で隔てられている。
【0033】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、有効な量において、かつ投与サイクルの持続時間全体にわたって指定される連続（最低）血中濃度を達成する頻度に従って任意選択的に投与され得る。
【0034】
一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の投与を含む投与サイクルにおいて、処置の過程に続いて（処置の過程は、完全に完了されてもまたは完了前に停止されてもよく、または処置の過程の開始に続いて（例えば、不完全な応答、腫瘍進行などの場合）ヒトＰＤ－１ポリペプチドを中和する抗体と共に投与される。別の実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する抗体は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを中和する抗体と併用して投与サイクルにおいて投与され、投与サイクルは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の投与を含む。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、２回の連続する投与間で少なくとも４μｇ／ｍＬ、任意選択的に少なくとも１０μｇ／ｍＬの、血管外組織中（例えば、腫瘍環境中）での連続（最低）濃度を達成するのに有効な量で投与される。任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、投与サイクルの持続時間全体にわたって少なくとも４μｇ／ｍＬ、任意選択的に少なくとも１０μｇ／ｍＬの、血管外組織中（例えば、腫瘍環境中）での連続（最低）濃度を達成するのに有効な量で投与される。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、２回の連続する投与間でまたは投与サイクルの持続期間にわたり、少なくとも４０μｇ／ｍＬ、任意選択的に少なくとも１００μｇ／ｍＬの、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続（最低）血中濃度を達成するのに有効な量で投与される。
【0035】
一実施形態では、がんは、血液がんである。非限定的な一実施形態では、がんは、リンパ腫または白血病である。一実施形態では、がんは、進行したおよび／または難治性の固形腫瘍である。非限定的な一実施形態では、がん（例えば、進行した難治性の固形腫瘍）は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、腎臓がん、消化管がん、膵臓または食道腺がん、乳がん、腎細胞がん（ＲＣＣ）、黒色腫、大腸がん、および卵巣がんからなる群から選択される。
【0036】
ＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物（抗ＮＫＧ２Ａ剤）は、ＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／またはＴ細胞がＨＬＡ－Ｅ発現細胞の死滅を引き起こす能力を増大させる化合物である。任意選択的に、ＮＫＧ２Ａポリペプチドを阻害する化合物は、ＮＫＧ２Ａポリペプチドに結合するポリペプチド、任意選択的に抗体（例えば、モノクローナル抗体）である。
【0037】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、そのリガンドＨＬＡ－Ｅの結合を遮断することによってＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる。すなわち、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害する。配列番号４～８のいずれかの重鎖および配列番号９の軽鎖を有する抗体は、このような抗体の一例である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、そのリガンドＨＬＡ－Ｅの結合を遮断することなくことなくＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる。すなわち、抗ＮＫＧ２Ａ剤は非競合的なアンタゴニストであり、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害しない。それぞれ配列番号１０および１１の重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体は、このような抗体の一例である。
【0038】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、１つまたは複数の活性化ＮＫＧ２受容体に対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。例えば、一実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。付加的または代替的な実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｅに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。付加的または代替的な実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｈに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。
【0039】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに対する結合において、配列番号４～８および９の重鎖および軽鎖をそれぞれ配列番号７の軽鎖を有する抗体、またはそれぞれ配列番号１０および１１の重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体と競合する。薬剤は、例えば、ヒトまたはヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体であり得る。
【0040】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、それぞれ配列番号４～８のいずれかの重鎖のいずれかの重鎖ＣＤＲおよび配列番号９の軽鎖の軽鎖ＣＤＲを有するヒト化抗体である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、それぞれ配列番号４～８のいずれかの重鎖のいずれかの重鎖可変領域および配列番号９の軽鎖の軽鎖可変領域を有するヒト化抗体である。改善された特性（例えば、より低い免疫原性、改善された抗原結合性または他の機能特性など）および／または改善された物理化学的特性（例えば、より良好な安定性など）を有するこのようなヒト化抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）におけるアミノ酸置換のための例示的な相補性決定領域（ＣＤＲ）残基もしくは配列および／または部位が提供される。
【0041】
いくつかの任意選択の態様では、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者である、がんを有する個人を同定する方法が提供され、本方法は、
ａ）ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤で処置された（例えば、この薬剤の少なくとも１回の投与を受けた）個人において、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ（および任意選択的にさらにＰＤ－１）発現のレベルならびに／またはＮＫＧ２Ａ＋（任意選択的にＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋）ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定するステップと、
ｂ）個人が、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞（任意選択的にＰＤ－１発現ＮＫもしくはＴ細胞）における増加したレベルのＮＫＧ２Ａ発現ならびに／または増加した数のＮＫＧ２Ａ＋（任意選択的にＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋）ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞（例えば、基準値と比較して、基準値と比較して増加した、薬剤による処置の前に観察される値と比較して増加した）を有することが決定されると、個人を、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者として同定するステップと
を含む。
ａ）ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤で処置された（例えば、この薬剤の少なくとも１回の投与を受けた）個人において、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ（および任意選択的にさらにＰＤ－１）発現のレベルならびに／またはＮＫＧ２Ａ＋（任意選択的にＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋）ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定するステップと、
ｂ）個人が、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞（任意選択的にＰＤ－１発現ＮＫもしくはＴ細胞）における増加したレベルのＮＫＧ２Ａ発現ならびに／または増加した数のＮＫＧ２Ａ＋（任意選択的にＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋）ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞（例えば、基準値と比較して、基準値と比較して増加した、薬剤による処置の前に観察される値と比較して増加した）を有することが決定されると、個人を、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者として同定するステップと
を含む。
【0042】
いくつかの任意選択の態様では、患者は、腫瘍サンプル（例えば、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織）中の、ＮＫおよび／またはＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ発現の存在を評価することにより、抗ＮＫＧ２Ａ剤による処置のために同定され得る。本明細書中の治療的使用またはがんの処置もしくは予防方法のいずれかの一実施形態では、個人のがんの処置または予防は、
ａ）ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤で処置されたかまたは処置されている、がんを有する個人における、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ発現のレベルならびに／またはＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定するステップと、
ｂ）個人が、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａ発現ならびに／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞を有することが決定されると、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物を個人に投与するステップと
を含む。
ａ）ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤で処置されたかまたは処置されている、がんを有する個人における、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ発現のレベルならびに／またはＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定するステップと、
ｂ）個人が、ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａ発現ならびに／または増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞を有することが決定されると、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物を個人に投与するステップと
を含む。
【0043】
本方法のいずれかの一実施形態では、ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ発現のレベルならびに／またはＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定するステップは、ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドの発現のレベルを決定するステップ、および／または生体サンプルにおけるＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の数を決定し、このレベルを基準レベル（例えば、値、弱いまたは強い細胞表面染色など）と比較するステップを含む。基準レベルは、例えば、健常者、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する薬剤による処置に対して応答性であるかまたは応答性が低い個人、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処理から得られる臨床的利益がない／低い個人、または（任意選択的にヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する薬剤と併用して）抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から実質的な臨床的利益が得られる個人に対応し得る。生体サンプルが、増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞（例えば、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する薬剤による処置から十分な臨床的利益が得られない個人のものに対応する数、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から実質的な臨床的利益が得られる個人のものに対応する数で）を含むという決定は、個人が、例えば、本明細書に記載される処置方法に従って抗ＮＫＧ２Ａ抗体で処置され得るがんを有することを示す。生体サンプルが、増加したレベル（例えば、高い値、強い表面染色、ヒトＰＤ－１ポリペプチドを阻害する薬剤による処置から十分な臨床的利益が得られない個人のものに対応するレベル、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から実質的な臨床的利益が得られる個人にものに対応するレベル、抗ＮＫＧ２Ａ抗体による処置から得られる臨床的利益がない／低い個人に対応するものより高いレベルなど）でＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドを発現するという決定は、個人が、例えば、本明細書に記載される処置方法に従って抗ＮＫＧ２Ａ抗体で処置され得るがんを有することを示す。
【0044】
一実施形態では、ＣＤ８ Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞である。一実施形態では、ＮＫ細胞は、腫瘍浸潤ＮＫ細胞である。一実施形態では、ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の少なくとも１５％、２０ ２５％または３０％が、ＰＤ１＋ＮＫＧ２Ａ＋である。
【0045】
一実施形態では、個人は、表面にＨＬＡ－Ｅポリペプチドを発現する悪性細胞を含むがんを有する。一実施形態では、処置方法は、がんを有する個人中の悪性細胞（例えば、腫瘍細胞）のＨＬＡ－Ｅポリペプチドの状態を決定するステップをさらに含み、悪性細胞が、ＨＬＡ－Ｅ核酸またはポリペプチドを発現するという決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを有することを示す。
【0046】
他の実施形態では、医薬組成物およびキット、ならびにそれらを使用する方法が提供される。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物を含む医薬組成物が提供される。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物およびＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の表面におけるＮＫＧ２Ａの発現を検出することが可能な薬剤（例えば、検出可能な部分に結合される抗体または他のＮＫＧ２Ａ結合剤）を含むキットが提供される。
【0047】
これらの態様は、本明細書で提供される本発明の説明においてより詳細に記載されており、付加的な態様、特徴、および利点は、本明細書で提供される本発明の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1-1】ＰＤ－Ｌ１＋Ｑａ－１＋ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍおよびＡ２０腫瘍細胞が、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞ならびにＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ－１を発現するＣＤ８ Ｔ細胞によって浸潤されることを示す。ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ（上側の列）およびＡ２０（下側の列）腫瘍担持マウスを、腫瘍体積が約５００ｍｍ３であるときに殺処分した。腫瘍細胞（図１Ａ）および腫瘍浸潤リンパ球－ＴＩＬ－（図１Ｂ）を、腫瘍細胞の場合にはＱａ－１およびＰＤＬ－１の発現について、ならびにＴＩＬの場合にはＮＫＧ２Ａ／Ｃ／ＥおよびＰＤ－１の発現について、それぞれフローサイトメトリーによって分析した。ＭＦＩ：蛍光強度の中央値。
【図1-2】同上。
【図2】マウス中のＮＫおよびＴ細胞サブセットにおけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の分布を示す。脾臓から、腫瘍流入（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇ）リンパ節から、および固形腫瘤内からリンパ球を採取した。ＰＤ－１発現は、脾臓およびリンパ節からの全ての細胞サブセットで低頻度であるかまたは存在しなかったが、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）では、全ての細胞サブセットは、ＰＤ－１を発現する細胞の比較的高い割合を有していた。一方、脾臓およびリンパ節では、ＮＫＧ２Ａが、ＮＫ細胞上で見出されたが、Ｔ細胞サブセット上では見出されず、さらに腫瘍では、有意な割合のＴＩＬ上で見出され、平均してＮＫ細胞の３０％超およびＣＤ８ Ｔ細胞の１９％超がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１について二重陽性であった。
【図3-1】腫瘍担持マウス中のＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１発現を示す。ＲＭＡ Ｒａｅ１（上側の列）、ＭＣ３８（中央の列）およびＲＭＡ（下側の列）腫瘍担持マウスを、それらの腫瘍がそれぞれ５００、２０００および８００ｍｍ３の体積に達したときに殺処分した。ＮＫ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８ Ｔ細胞（図３Ｂ）を、ＮＫＧ２Ａ／Ｃ／ＥおよびＰＤ－１発現について、脾臓、腫瘍流入リンパ節（ＬＮ）および腫瘍におけるフローサイトメトリーによって分析した。
【図3-2】同上。
【図4】抗ＰＤ－１ ｍＡｂによるマウスの処置により、ＭＣ３８腫瘍におけるＮＫＧ２Ａ発現ＴＣＤ８細胞の頻度が増加することを示す。ＭＣ３８腫瘍担持マウスを、細胞生着から１１、１４および１７日後に２００μｇのラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（ＩＣ）または抗マウスＰＤ－１抗体のいずれかで処置した。マウスを３１日目に殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞を脾臓、腫瘍流入リンパ節（ＬＮ）および腫瘍におけるフローサイトメトリーによって特性評価した。
【図5】１１、１４および１８日目にアイソタイプ対照、抗マウスＮＫＧ２Ａ ｍＡｂ（２００μｇ、静脈内（ｉｖ））、抗マウスＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ（２００μｇ、腹腔内（ｉｐ））または抗ｍＮＫＧ２Ａ／ｍＰＤＬ－１組み合わせで処置されたマウスにおける腫瘍体積の中央値を経時的に示す。このモデルにおいて、抗ＮＫＧ２Ａでは、アイソタイプ対照と比較して、わずかな抗腫瘍効果が得られたに過ぎず、抗ＰＤ－Ｌ１では、かなりの抗腫瘍効果が得られたが、腫瘍体積は２８日に向けて増加し、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ－Ｌ１による併用処置では、腫瘍成長が完全に消失し、２８日目に観察された腫瘍体積の有意な増加はなかった。
【図6】アイソタイプ対照または中和抗マウスＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂまたは抗マウスＰＤ－１で処置された、ＰＤ－１／－Ｌ１耐性Ａ２０リンパ腫を担持するマウスにおける腫瘍体積の中央値を経時的に示す。アイソタイプ対照、抗ＰＤ１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれも腫瘍成長を制御するのに有効でなかった。
【図7】中和抗マウスＮＫＧ２Ａと併用して、アイソタイプ対照または中和抗マウスＰＤ－１ ｍＡｂまたは抗マウスＰＤ－１で処置された、Ａ２０リンパ腫を担持するマウスにおける腫瘍体積の中央値を経時的に示す。アイソタイプ対照または抗ＰＤ１抗体のいずれも腫瘍成長を制御するのに有効でなかったが、抗ＮＫＧ２Ａ抗体処置が追加されるとき、完全な腫瘍退縮が動物の大部分（７／１０）において観察された。
【図8】中和抗マウスＮＫＧ２Ａと併用して、アイソタイプ対照または中和抗マウスＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂまたは抗マウスＰＤ－Ｌ１で処置された、Ａ２０リンパ腫を担持するマウスにおける腫瘍体積の中央値を経時的に示す。抗ＮＫＧ２Ａ抗体処置が抗ＰＤ－Ｌ１処置に追加されるとき、完全な腫瘍退縮が動物の大部分（９／１１）において観察された。
【発明を実施するための形態】
【0049】
定義
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は１つまたは複数を意味し得る。特許請求の範囲において使用される場合、単語「含む」と共に使用されると、単語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は１つまたは２つ以上を意味し得る。本明細書で使用される場合、「別の」は少なくとも第２のまたはそれを超えるものを意味し得る。
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は１つまたは複数を意味し得る。特許請求の範囲において使用される場合、単語「含む」と共に使用されると、単語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は１つまたは２つ以上を意味し得る。本明細書で使用される場合、「別の」は少なくとも第２のまたはそれを超えるものを意味し得る。
【0050】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択的に「から本質的になる」または「からなる」によって置き換えることができる。
【0051】
ＮＫＧ２Ａ（ＯＭＩＭ１６１５５５、その開示全体は参照によって本明細書中に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループのメンバーである（Ｈｏｕｃｈｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１０１７－１０２０）。ＮＫＧ２Ａは２５ｋｂに及ぶ７つのエクソンによってコードされ、いくらかの差別的スプライシングを示す。ＣＤ９４と一緒に、ＮＫＧ２Ａは、ＮＫ細胞、α／βＴ細胞、γ／δＴ細胞、およびＮＫＴ細胞のサブセットの表面において見出されるヘテロ二量体の阻害性受容体ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを形成する。阻害性ＫＩＲ受容体と同様に、それは、その細胞質ドメインにＩＴＩＭを有する。本明細書で使用される場合、「ＮＫＧ２Ａ」は、ＮＫＧ２Ａ遺伝子またはコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体、またはアイソフォームを指す。ヒトＮＫＧ２Ａは、以下の配列：
の２３３のアミノ酸を３つのドメインに含み、細胞質ドメインが残基１～７０を含み、膜貫通領域が残基７１～９３を含み、細胞外領域が残基９４～２３３を含む。
【化1】
【0052】
ＮＫＧ２Ｃ（ＯＭＩＭ６０２８９１、その開示全体は参照によって本明細書中に援用される）およびＮＫＧ２Ｅ（ＯＭＩＭ６０２８９２、その開示全体は参照によって本明細書中に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループの２つの他のメンバーである（Ｇｉｌｅｎｋｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４８：１６３－１７３）。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ受容体は、ＮＫ細胞およびＴ細胞などのリンパ球のサブセットの表面において見出される活性化受容体である。
【0053】
ＨＬＡ－Ｅ（ＯＭＩＭ１４３０１０、その開示全体は参照によって本明細書中に援用される）は、細胞表面で発現され、例えば、他のＭＨＣクラスＩ分子のシグナル配列に由来する断片などのペプチドの結合によって制御される非古典的なＭＨＣ分子である。ＨＬＡ－Ｅの可溶性型も同定されている。そのＴ細胞受容体結合特性に加えて、ＨＬＡ－Ｅは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｂ、およびＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃに特異的に結合することにより、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）およびＴ細胞（α／βおよびγ／δ）のサブセットに結合する（例えば、その開示全体が参照によって本明細書中に援用されるＢｒａｕｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９１：７９５－７９９を参照）。ＨＬＡ－Ｅの表面発現は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ、Ｔ、またはＮＫＴ細胞クローンによる溶解から標的細胞を保護する。本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ－Ｅ」は、ＨＬＡ－Ｅ遺伝子またはコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体、またはアイソフォームを指す。
【0054】
本発明との関連において、「ＮＫＧ２Ａ」または「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、細胞表面においてＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するリンパ球系（例えば、ＮＫ－、ＮＫＴ－およびＴ細胞）の細胞を指し、これは、例えば、ＣＤ９４およびＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ、またはおよびＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープを特異的に認識する抗体を用いるフローサイトメトリーによって検出することができる。また「ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、リンパ球由来の不死細胞株（例えば、ＮＫＬ、ＮＫ－９２）も含む。
【0055】
本発明との関連において、「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる」、「ＮＫＧ２Ａを中和する」または「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する」は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａが細胞内プロセスに悪影響を与えるその能力において阻害され、サイトカイン放出および細胞毒性応答などのリンパ球応答をもたらすプロセスを指す。これは、例えば、ＮＫ－またはＴ細胞ベースの細胞毒性アッセイにおいて測定することができ、このアッセイでは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球によるＨＬＡ－Ｅ陽性細胞の死滅を刺激する治療用化合物の能力が測定される。一実施形態では、抗体調製物は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性の少なくとも１０％の増強、任意選択的にリンパ球細胞毒性の少なくとも４０％または５０％の増強、または任意選択的にＮＫ細胞毒性の少なくとも７０％の増強を引き起し、記載される細胞毒性アッセイが参照される。抗ＮＫＧ２Ａ抗体がＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのＨＬＡ－Ｅとの相互作用を低減または遮断すれば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性が増大され得る。これは例えば、例えばＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞、およびＨＬＡ－Ｅを発現する標的細胞を用いて、標準的な４時間インビトロ細胞毒性アッセイにおいて評価することができる。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ－Ｅを認識して、リンパ球媒介性の細胞溶解を防止する阻害性シグナル伝達の開始および伝播をもたらすため、このようなＮＫ細胞は、ＨＬＡ－Ｅを発現する標的を効率的に死滅させない。このようなインビトロ細胞毒性アッセイは、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）に記載されるように、当該技術分野において周知の標準的な方法によって実行することができる。また、抗体がリンパ球を刺激してＰ８１５、Ｋ５６２細胞、または適切な腫瘍細胞などの標的細胞を死滅させる能力を評価するためのクロム放出および／または他のパラメータは、Ｓｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９－１１３６；Ｖｉｔａｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８７：２０６５－２０７２；Ｐｅｓｓｉｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８８：９５３－９６０；Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．２００１；８：１１３１－１１３５；Ｐｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９９；１９０：１５０５－１５１６（これらのそれぞれの開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）に開示されている。標的細胞はＮＫ細胞の添加前に５１Ｃｒによって標識化され、次に、死滅の結果としての細胞から培地への５１Ｃｒの放出に比例するように死滅が推定される。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ－Ｅへ結合するのを防止する抗体を添加すると、結果的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａによる阻害性シグナル伝達の開始および伝播が防止される。従って、このような薬剤の添加の結果、リンパ球媒介性の標的細胞の死滅が増大される。このステップは、これにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに誘導される負のシグナル伝達を、例えばリガンド結合の遮断によって防止する薬剤を同定する。特定の５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現ＮＫエフェクター細胞はＨＬＡ－Ｅ陰性ＬＣＬ７２１．２２１標的細胞を死滅させることができるが、ＨＬＡ－Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３対照細胞についてはあまり死滅させない。対照的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを欠いているＹＴＳエフェクター細胞は、両方の細胞株を効率的に死滅させる。従って、ＮＫエフェクター細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ－Ｅ誘導性阻害性シグナル伝達のために、ＨＬＡ－Ｅ＋ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３細胞をあまり効率的に死滅させない。このような５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＮＫ細胞が本発明に従う遮断性の抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ抗体と共にプレインキュベートされる場合、ＨＬＡ－Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３細胞は、抗体濃度に依存した方式でより効率的に死滅される。また抗ＮＫＧ２Ａ抗体の阻害活性（すなわち、細胞毒性増強能）は、いくつかの他の方法のいずれかにおいて、例えば、例えばＳｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９－１１３６（その開示は参照によって本明細書中に援用される）に記載されるような、細胞内遊離カルシウムに対するその効果によって評価することもできる。ＮＫ細胞の細胞毒性の活性化は、例えば、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ－γ産生）または細胞毒性マーカー（例えば、ＣＤ１０７またはＣＤ１３７動員）の増大を測定することによって評価することができる。例示的なプロトコルでは、ＰＢＭＣからのＩＦＮ－ｙの産生は、培養下で４日後に、細胞表面および細胞質内染色ならびにフローサイトメトリーによる分析によって評価される。簡単に言うと、ブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）が、培養の最後の４時間に５μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。次に、細胞は、透過処理（ＩｎｔｒａＰｒｅｐ（商標）；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＰＥ－抗ＩＦＮ－ｙまたはＰＥ－ＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）による染色前に、抗ＣＤ３および抗ＣＤ５６ｍＡｂと共にインキュベートされる。ポリクローナル活性化ＮＫ細胞からのＧＭ－ＣＳＦおよびＩＦＮ－ｙの産生は、ＥＬＩＳＡ（ＧＭ－ＣＳＦ：ＤｕｏＳｅｔ Ｅｌｉｓａ，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ、ＩＦＮ－ｙ：ＯｐｔＥｌＡ ｓｅｔ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて上清において測定される。
【0056】
本明細書で使用される場合、「ＰＤ－１」という用語は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーであるタンパク質プログラム死１（ＰＤ－１）（「プログラム細胞死１」とも呼ばれる）を指す。完全ヒトＰＤ－１配列は、ジェンバンク受託番号Ｕ６４８６３で見出すことができ、以下のように示される。
【化2】
【0057】
「ＰＤ－１」は、ＰＤ－１遺伝子またはコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体、またはアイソフォームも含む。ＰＤ－１は、活性化されたＢ細胞、Ｔ細胞、および骨髄細胞上で発現されるＯｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９－８２；Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：７１１－８）。このファミリーの最初のメンバーであるＣＤ２８およびＩＣＯＳは、モノクローナル抗体の添加後のＴ細胞増殖の増大に対する機能的効果によって発見された（Ｈｕｔｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ３９７：２６３－２６６；Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｓ １０：２４７－２６０）。ＰＤ－１に対する２つのリガンドＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２が同定されており、これらは、ＰＤ－１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２は、両方ともＰＤ－１に結合するが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーに結合しないＢ７相同体である。
【0058】
完全ヒトＰＤ－Ｌ１配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ、識別子Ｑ９ＮＺＱ７－１で見出すことができ、以下のように示される。
【化3】
【0059】
ＰＤ－Ｌ１は、様々なヒトがんで豊富にある（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７－９）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用により、腫瘍浸潤リンパ球が減少し、Ｔ細胞受容体に媒介される増殖が減少し、がん性細胞による免疫回避が起こる（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４－１００）。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することによって反転させることができ、この効果は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用が同様に遮断されるときに相加的である。
【0060】
本発明との関連において、「ヒトＰＤ－１の阻害活性を低下させる」、「ＰＤ－１を中和する」または「ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する」は、ＰＤ－１と、その結合パートナー（ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２など）の１つまたは複数との相互作用から生じる、ＰＤ－１のシグナル伝達能力が阻害されるプロセスを指す。ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤は、ＰＤ－１と、その結合パートナー（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２など）の１つまたは複数との相互作用から生じるシグナル伝達を低減するか、遮断するか、阻害するか、抑止するかまたは妨げる。それにより、このような薬剤は、増殖、サイトカイン産生および／または細胞毒性などのＴ細胞エフェクター機能を促進するように、Ｔリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減することができる。
【0061】
「がんの処置」または同様のものが抗ＮＫＧ２Ａ結合剤（例えば、抗体）と関連して言及される場合は常に、（ａ）がんを処置する方法であり、前記方法は、ＮＫＧ２Ａ結合剤（例えば、一緒にまたはそれぞれ別個に薬学的に許容可能な担体材料中において）を、がんの処置を可能にする用量（治療的に有効な量）、任意選択的に本明細書で指定される用量（量）で、このような処置を必要としている個人、哺乳類、特にヒトに投与する（少なくとも１つの処置のために）ステップを含む；（ｂ）がんの処置のための抗ＮＫＧ２Ａ結合剤の使用、または前記処置（特に、ヒトにおける）で使用するための抗ＮＫＧ２Ａ結合剤；（ｃ）がんの処置のための医薬品を製造するための抗ＮＫＧ２Ａ結合剤の使用、抗ＮＫＧ２Ａ結合剤を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、がんの処置のための医薬品を製造するための抗ＮＫＧ２Ａ結合剤を使用する方法、またはがんの処置のために適切な有効用量の抗ＮＫＧ２Ａ結合剤を含む医薬品；あるいは（ｄ）本出願が提出された国において特許が認められる主題に従うａ）、ｂ）、およびｃ）の任意の組み合わせが含まれる。
【0062】
「生検」という用語は、本明細書で使用される場合、診断の確立などの検査の目的で組織を除去することと定義される。生検のタイプの例としては、例えばシリンジに取り付けられた針を介した吸引の適用によるもの；組織の断片の機器による除去によるもの；内視鏡を介する適切な機器を用いた除去によるもの；外科的切除、例えば病変全体の外科的切除によるものなどが挙げられる。
【0063】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を指す。重鎖内の定常ドメインのタイプに応じて、抗体は５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの１つに割り当てられる。これらのうちのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのサブクラスまたはアイソタイプにさらに分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は四量体を含む。各四量体は２つの同一のペアのポリペプチド鎖で構成され、各ペアは、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を画定する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖を指す。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」および「ミュー」と呼ばれる。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造および三次元配置は周知である。ＩｇＧは、生理学的状況下で最も一般的な抗体であり、研究室環境で最も容易に作製されるため、本明細書で使用される抗体の例示的な種類である。任意選択的に、抗体はモノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化、キメラ、ヒト、または別の方法でヒトに適した抗体である。また「抗体」は、本明細書に記載される抗体のいずれかの任意の断片または誘導体も含む。
【0064】
「特異的に結合する」という用語は、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ、または単離した標的細胞の表面に存在する天然タンパク質のいずれかを用いて評価されるときに、抗体が、好ましくは、競合的結合アッセイにおいて結合パートナー、例えばＮＫＧ２Ａ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１に結合できることを意味する。特異的な結合を決定するための競合的結合アッセイおよび他の方法は当該技術分野において周知である。例えば、結合は、放射標識、質量分析などの物理的方法、または例えば細胞蛍光測定分析（例えば、ＦＡＣＳｃａｎ）を用いて検出される直接もしくは間接的な蛍光標識によって検出することができる。対照の非特異的な薬剤で見られる量を超える結合は、その薬剤が標的に結合することを示す。ＮＫＧ２Ａに特異的に結合する薬剤は、単独のＮＫＧ２Ａ、またはＣＤ９４との二量体としてのＮＫＧ２Ａに結合し得る。
【0065】
抗体が特定のモノクローナル抗体「と競合する」と言われる場合、それは、組換え分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１）または表面発現分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１）のいずれかを用いる結合アッセイにおいて、抗体がモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいて、配列番号４～８のいずれかの重鎖および配列番号９の軽鎖を有する抗体の、ＮＫＧ２ＡポリペプチドまたはＮＫＧ２Ａ発現細胞に対する結合を低減すると、抗体は、このような抗体とそれぞれ「競合する」と言われる。
【0066】
「親和性」という用語は、本明細書で使用される場合、エピトープに対する抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］（式中、［Ａｂ－Ａｇ］は抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は非結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄによって与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）、およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）において見出すことができ、これらの参考文献は、参照によって本明細書中に完全に援用される。ｍＡｂの親和性を測定するための当該技術分野において周知の１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置を用いた分析によるものなど）の使用である。
【0067】
本明細書に関連して、「決定基」は、ポリペプチド上の相互作用または結合の部位を指定する。
【0068】
「エピトープ」という用語は抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上の区域または領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、特異的抗原結合抗体またはペプチドにより効果的に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基とを含み得る。それは、例えば、抗体または受容体と結合し得る複雑な抗原分子上の最も単純な形態または最小の構造領域である。エピトープは、直線的または立体構造的／構造的であり得る。「直線的エピトープ」という用語は、アミノ酸の直鎖配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。「立体構造的または構造的エピトープ」という用語は、全てが連続しているわけではなく、従って、分子の折り畳み（二次、三次および／または四次構造）により互いに近接されるアミノ酸の直鎖配列の分離部を表すアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。立体構造的エピトープは、三次元構造に依存する。「立体構造的」という用語は、従って、「構造的」と互換的に使用されることが多い。
【0069】
「薬剤」という用語は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的材料から作製される抽出物を示すために使用される。「治療薬」という用語は、生物活性を有する薬剤を指す。
【0070】
本明細書中の目的のために、「ヒト化」または「ヒト」抗体は、１つまたは複数のヒト免疫グロブリンの定常および可変フレームワーク領域が動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合された抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を保持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。このような抗体は、抗原負荷に応答して特異的ヒト抗体を産生するように「操作された」トランスジェニックマウスまたは他の動物から得ることができる（例えば、その教示全体が参照によって本明細書中に援用される、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎ ６：５７９を参照）。また完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体トランスフェクション法、およびファージディスプレイ技術によって構築することができ、これらは全て、当該技術分野において知られている（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３を参照）。またヒト抗体は、インビトロの活性化Ｂ細胞により生成することもできる（例えば、参照によってその全体が援用される米国特許第５，５６７，６１０号明細書および米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照）。
【0071】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なるもしくは改変されたクラス、エフェクター機能および／もしくは種の定常領域、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域またはその一部が改変、置換または交換された抗体分子であるか、あるいは（ｂ）可変領域またはその一部が、異なるまたは改変された抗原特異性を有する可変領域によって改変、置換または交換された抗体分子である。
【0072】
「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣ末端断片、例えば、ヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０～約ａａ４５０、または他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体のα、δ、εおよびμ）におけるその対応物の配列、またはその天然に存在するアロタイプを指す。他に規定されない限り、本開示の全体を通して免疫グロブリンに対して一般的に容認されたＫａｂａｔのアミノ酸番号付けが使用される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照）。
【0073】
「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」という用語は、材料がその天然の状態で見出される際に通常付随される成分を実質的または本質的に含まない材料を指す。純度および均質性は、通常、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィなどの分析化学技術を用いて決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は実質的に精製される。
【0074】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。この用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマーと、天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーとに適用される。
【0075】
「組換え」という用語は、例えば、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入、または天然核酸もしくはタンパク質の改変によって修飾されていること、あるいは細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。従って、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態において見出されない遺伝子を発現する、あるいは改変されていなければ異常発現される、低発現される、または全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【0076】
本明細書に関連して、ポリペプチドまたはエピトープに「結合する」抗体という用語は、特異性および／または親和性により前記決定基に結合する抗体を示す。
【0077】
「同一性」または「同一性の」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基の鎖間のマッチの数によって決定されるようなポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により対処されるギャップアライメント（もしあれば）による２つ以上の配列の小さい方の間での同一のマッチのパーセントを測る。関連ポリペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に計算することができる。このような方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【0078】
同一性を決定する方法は、試験される配列間の最大マッチを与えるように設計される。同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記載される。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータプログラム方法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記）から公的に入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用され得る。
【0079】
ＮＫＧ２Ａ中和治療剤
抗ＮＫＧ２Ａ剤はヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分に結合し、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球の表面で発現されるヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の阻害活性を低下させる。一実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合する。すなわち、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ－Ｅとの間の相互作用を遮断する。別の実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合しない。すなわち、薬剤は、ＨＬＡ－Ｅと同時にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合することができる。抗体は、ＣＤ９４およびＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ、またはおよびＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープに結合し得る。
抗ＮＫＧ２Ａ剤はヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分に結合し、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球の表面で発現されるヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の阻害活性を低下させる。一実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合する。すなわち、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ－Ｅとの間の相互作用を遮断する。別の実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合しない。すなわち、薬剤は、ＨＬＡ－Ｅと同時にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合することができる。抗体は、ＣＤ９４およびＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ、またはおよびＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープに結合し得る。
【0080】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびキメラ抗体から選択される抗体である。１つの態様では、薬剤は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。１つの態様では、薬剤は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。１つの態様では、薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマまたはラクダＩｇ）、ＶＨＨ断片、単一ドメインＦＶ、および単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。１つの態様では、薬剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、カッパボディ（ｋａｐｐａ ｂｏｄｙ）、ＩｇＮＡＲ；および多特異性抗体から選択される合成または半合成抗体由来の分子である。
【0081】
任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６に対する実質的な特異的結合を示さない。任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、実質的な特異的結合を欠いており、あるいはヒトＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２ＢまたはＣＤ６４の１つもしくは複数または全てに対する低いまたは低減された特異的結合を有する。例示的な抗体は、Ｆｃγ受容体に結合しないかまたは低い結合を有することが知られている様々な重鎖の定常領域を含み得る。１つのこのような例は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。一実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、インビボでの半抗体の形成（ｆａｂアーム交換）を防ぐような修飾を含み、例えば、抗体は、ＥＵインデックスに従う２２８位に対応する残基２４１におけるセリンからプロリンへの突然変異を含むＩｇＧ４重鎖を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ ｅｄ．，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＬ，１９９１）。このような修飾ＩｇＧ４抗体は、結合親和性を変化させ得る一価の様式でＮＫＧ２Ａに結合するようにインビボでｆａｂアーム交換を受ける天然ＩｇＧ４と対照的に、インビボで原形を保ち、ＮＫＧ２Ａへの二価（高親和性）結合を維持する。あるいは、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片などの定常領域を含まない抗体断片を使用して、Ｆｃ受容体結合を回避することができる。Ｆｃ受容体結合は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて抗体のＦｃ受容体タンパク質への結合を試験することを含む、当該技術分野において知られている方法に従って評価することができる。また、Ｆｃ受容体への結合を最小限または除去するようにＦｃ部分が修飾された任意のヒト抗体タイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を使用することもできる（例えば、参照によってその開示が本明細書中に援用される国際公開第０３１０１４８５号パンフレットを参照）。Ｆｃ受容体結合を評価するためのアッセイ、例えば細胞ベースのアッセイなどは当該技術分野において周知であり、例えば、国際公開第０３１０１４８５号パンフレットに記載されている。
【0082】
従って、本発明は、ＮＫＧ２Ａに結合する抗体または他の薬剤に関する。１つの態様では、抗体は、ヒトＮＫＧ２Ｃおよび／またはＮＫＧ２Ｅに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａに結合する。
【0083】
本発明の１つの態様では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を妨害することにより、例えば、ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ－Ｅの結合を妨害すること、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の立体構造変化を防止または誘導すること、および／またはＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の二量体化および／またはクラスター化に影響することにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現リンパ球のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ媒介性の阻害を低減する。
【0084】
本発明の１つの態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００、または１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。本発明の別の態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅおよび／またはＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００、または１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。これは、例えばＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されるか、または生物系で産生される）の細胞外部分に結合する薬剤の能力が測定され、同じアッセイにおいて同様に生成されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃおよび／または他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体に対する薬剤の結合と比較される。あるいは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを天然に発現するか、または過剰発現（例えば、一過性または安定したトランスフェクション後）する細胞への薬剤の結合が測定され、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃおよび／または他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体を発現する細胞の結合と比較され得る。抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、任意選択的に、ＣＤ９４と一緒に阻害性受容体を形成するＮＫＧ２Ａスプライス変異体であるＮＫＧ２Ｂと結合してもよい。一実施形態では、親和性は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）の実施例８に示されるようにＢｉａｃｏｒｅによって共有結合で固定化されたＮＫＧ２Ａ－ＣＤ９４－Ｆｃ融合タンパク質への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。
【0085】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、例えばＶＨ１＿１８、ＶＨ５＿ａ、ＶＨ５＿５１、ＶＨ１＿ｆ、およびＶＨ１＿４６から選択されるヒトアクセプター配列からのＶＨヒトアクセプターフレームワークと、ＪＨ６ Ｊ－セグメント、または当該技術分野で知られている他のヒト生殖系ＶＨフレームワーク配列とを含むヒト化抗体であり得る。ＶＬ領域ヒトアクセプター配列は、例えばＶＫＩ＿Ｏ２／ＪＫ４であり得る。
【0086】
一実施形態では、抗体は、抗体Ｚ２７０に基づくヒト化抗体である。種々のヒト化Ｚ２７０ＶＨ鎖は配列番号４～８（可変領域ドメインアミノ酸に下線）で示される。ｈｕｍＺ２７０ＶＨ６（配列番号４）はＶＨ５＿５１に基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１（配列番号５）はＶＨ１＿１８に基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ５（配列番号６）はＶＨ５＿ａに基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ７（配列番号７）はＶＨ１＿ｆに基づき、かつｈｕｍＺ２７０ＶＨ８（配列番号８）はＶＨ１＿４６に基づいており、これらは全てＪＨ６ Ｊ－セグメントを有する。これらの抗体はそれぞれＮＫＧ２Ａへの高親和性結合を保持しており、ヒト化構築物のそれぞれのＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２の６つのＣ末端アミノ酸残基がヒトアクセプターフレームワークと同一であるため、抗体に対する宿主免疫応答の可能性が低い。アライメントプログラムＶｅｃｔｏｒＮＴＩを用いて、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１とｈｕｍＺ２７０ＶＨ５、－６、－７、および－８との間の以下の配列同一性を得た：７８，２％（ＶＨ１対ＶＨ５）、７９，０％（ＶＨ１対ＶＨ６）、８８，７％（ＶＨ１対ＶＨ７）、および９６，０％（ＶＨ１対ＶＨ８）。
【0087】
１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号４～８のいずれか、またはそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号９、またはそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを含む。１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号４～８のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。配列番号４～８のいずれかの重鎖と、配列番号９の軽鎖とを有する抗体はＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和するが、実質的に活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧＥまたはＮＫＧ２Ｈに結合しない。さらに、この抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合についてＨＬＡ－Ｅと競合する。１つの態様では、薬剤は、配列番号４～８のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３配列を含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖に由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３配列を含む。
【0088】
重鎖
ＶＨ６：
ＶＨ１：
ＶＨ５：
ＶＨ７：
ＶＨ８：
軽鎖
ＶＨ６：
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【0089】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４～８の残基３１～３５に対応するＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号４～８の残基５０～６０（任意選択的に、ヒト由来のアミノ酸を含む場合には５０～６６）に対応するＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号４～８の残基９９～１１４（Ｋａｂａｔによれば９５～１０２）に対応するＣＤＲ－Ｈ３とを含む抗体である。一実施形態では、配列番号４～８の残基５０～６６に対応するＣＤＲ－Ｈ２である。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。
【0090】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号９の残基２４～３４に対応するＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号９の残基５０～５６に対応するＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号９の残基８９～９７に対応するＣＤＲ－Ｌ３とを含む抗体である。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。
【0091】
１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４～８の残基３１～３５に対応するＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号４～８の残基５０～６０（任意選択的に、５０～６６）に対応するＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号４～８の残基９９～１１４（Ｋａｂａｔに従うと９５～１０２）に対応するＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号９の残基２４～３４に対応するＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号９の残基５０～５６に対応するＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号９の残基８９～９７に対応するＣＤＲ－Ｌ３とを含む抗体である。
【0092】
１つの態様では、薬剤は、配列番号１０のアミノ酸配列をするＶＨに由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３配列を含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３配列を含む。１つの態様では、薬剤は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３配列と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３配列とを含む。配列番号１０の重鎖および配列番号１１の軽鎖を有する抗体はＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和し、活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２ＥまたはＮＫＧ２Ｈにも結合する。抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合に対してＨＬＡ－Ｅと競合しない（すなわち、ＮＫＧ２Ａの非競合的アンタゴニストである）。
【化10】
【0093】
１つの態様では、薬剤は、可変重（ＶＨ）ドメイン（配列番号１０）のアミノ酸残基３１～３５、５０～６０、６２、６４、６６、および９９～１０８と、可変軽（ＶＬ）ドメイン（配列番号１１）のアミノ酸残基２４～３３、４９～５５、および８８～９６とを含み、任意選択的に、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれを超えるアミノ酸置換を有する。
【0094】
１つの態様では、薬剤は、上記の抗体のいずれかが結合するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａエピトープに対して産生された完全ヒト抗体である。
【0095】
上記の抗体を使用可能であるが、抗体がＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和を引き起す限り、他の抗体もＮＫＧ２Ａポリペプチドの任意の部分を認識して、それに対して産生され得ることは理解されるであろう。例えば、ＮＫＧ２Ａ、好ましくは（しかし、排他的ではない）ヒトＮＫＧ２Ａの任意の断片またはＮＫＧ２Ａ断片の任意の組み合わせを免疫原として使用して、抗体を産生させることができ、抗体は、本明細書に記載されるようにＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞においてそのようにできる限り、ＮＫＧ２Ａポリペプチド内の任意の位置のエピトープを認識することができる。任意選択的に、エピトープは、配列番号４～８の重鎖および配列番号９の軽鎖を有する抗体によって特異的に認識されるエピトープである。
【0096】
１つの態様では、薬剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分への結合において、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は参照によって本明細書中に援用される）に開示されるｈｕｍＺ２７０抗体と競合する。競合的結合は、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、ｈｕｍＺ２７０で飽和された固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製される、または生物系で産生される）の細胞外部分に結合するための薬剤の能力が測定される。あるいは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体を天然に発現するか、または過剰発現（例えば、一過性または安定したトランスフェクション後）する細胞（これは、飽和用量のＺ２７０と共にインキュベートされている）への薬剤の結合が測定される。一実施形態では、競合的結合は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）の実施例１５に示されるようにフローサイトメトリーによってＢａ／Ｆ３－ＣＤ９４－ＮＫＧ２Ａ細胞への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。
【0097】
ＰＤ－１中和治療剤
現在、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を遮断する少なくとも６種の薬剤があり、これらの薬剤は、市販されているか、または臨床評価中である。１つの薬剤は、ＢＭＳ－９３６５５８（ニボルマブ／ＯＮＯ－４５３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；以前はＭＤＸ－１１０６）である。ニボルマブ（商品名Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））は、ＰＤ－１およびＣＤ８０の両方へのＰＤ－Ｌ１リガンドの結合を阻害し、開示内容が参照により本明細書に援用される国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットにおいて抗体５Ｃ４として記載されている、ＦＤＡにより承認された完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂである。黒色腫患者の場合、３ｍｇ／ｋｇの用量の最も有意なＯＲが観察された一方、他のがんのタイプの場合、それは１０ｍｇ／ｋｇで観察された。ニボルマブは、一般に、がんの進行まで３週間毎に１０ｍｇ／ｋｇで投与される。
現在、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を遮断する少なくとも６種の薬剤があり、これらの薬剤は、市販されているか、または臨床評価中である。１つの薬剤は、ＢＭＳ－９３６５５８（ニボルマブ／ＯＮＯ－４５３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；以前はＭＤＸ－１１０６）である。ニボルマブ（商品名Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））は、ＰＤ－１およびＣＤ８０の両方へのＰＤ－Ｌ１リガンドの結合を阻害し、開示内容が参照により本明細書に援用される国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットにおいて抗体５Ｃ４として記載されている、ＦＤＡにより承認された完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂである。黒色腫患者の場合、３ｍｇ／ｋｇの用量の最も有意なＯＲが観察された一方、他のがんのタイプの場合、それは１０ｍｇ／ｋｇで観察された。ニボルマブは、一般に、がんの進行まで３週間毎に１０ｍｇ／ｋｇで投与される。
【0098】
ＭＫ－３４７５（Ｍｅｒｃｋ製のヒトＩｇＧ４抗ＰＤ１ ｍＡｂ）（ランブロリズマブまたはペンブロリズマブ（商品名Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））とも呼ばれる）は、黒色腫の処置のためにＦＤＡにより承認されており、他のがんでは試験中である。ペンブロリズマブは、疾患の進行まで２または３週間毎に２ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで試験された。ヒト化抗体ｈ４０９Ａｌｌの重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ構築物が、米国培養細胞系統保存機関の特許寄託機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）により寄託されている。ｈ４０９Ａ－ｌ １の重鎖をコードするＤＮＡを含有するプラスミドは、２００８年６月９日に寄託され、０８１４６９＿ＳＰＤ－Ｈとして識別され、ｈ４０９Ａｌ １の軽鎖をコードするＤＮＡを含有するプラスミドは、２００８年６月９日に寄託され、０８０１４７０＿ＳＰＤ－Ｌ－ｌ １として識別された。ＭＫ－３４７５（Ｍｅｒｃｋ ３７４５またはＳＣＨ－９００４７５としても知られている）は、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットにも記載されている。
【0099】
ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ製の抗ＰＤ－Ｌ１）は、ＦｃγＲ結合、結果として抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を最小限に抑えることにより、有効性および安全性を最適化するように設計される操作Ｆｃドメインを含有するヒト抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂである。１、１０、１５、および２５ｍｇ／ｋｇ以下の用量のＭＰＤＬ３２８０Ａは、最大で１年間にわたって３週間毎に投与された。第３相試験において、ＭＰＤＬ３２８０Ａは、ＮＳＣＬＣにおいて３週間毎に、静脈内注射によって１２００ｍｇで投与される。
【0100】
ＡＭＰ－２２４（ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫ）は、Ｆｃドメインに融合されたＰＤ－Ｌ２細胞外ドメインを含む免疫付着因子である。ＰＤ－１を中和する薬剤の他の例は、ＰＤ－Ｌ２に結合して、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する抗体（抗ＰＤ－Ｌ２抗体）を含み得る。
【0101】
ピジリズマブ（ＣＴ－０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）（ＣｕｒｅＴｅｃｈ／Ｔｅｖａ製のヒト化ＩｇＧ１抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）（例えば、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットを参照）。リツキシマブ感受性の再発ＦＬを有する３０例の患者を、ＣＴ－０１１の最初の注入から２週間後に開始して、４週間にわたって毎週３７５ｍｇ／ｍ２で投与されるリツキシマブと併用して、４回の注入で４週間毎に３ｍｇ／ｋｇの静脈内ＣＴ－０１１で処置した。
【0102】
さらなる公知のＰＤ－１抗体および他のＰＤ－１阻害剤としては、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫに認可されたＢ７－ＤＣ／ＩｇＧ１融合タンパク質）、国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレットに記載されるＡＭＰ－５１４、国際公開第２０１１／０６６３８９号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１３／０３４５５９号明細書に記載される抗体ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発された抗ＰＤ－Ｌ１）、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットに記載される抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（抗ＰＤ－Ｌ１）、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに記載される、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９としても知られている）、ならびに国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット、国際公開第２００９／０１４７０８号パンフレット、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットおよび国際公開第２０１３／０１９９０６号パンフレットに記載される抗体および阻害剤が挙げられ、これらの開示内容は参照により本明細書に援用される。抗ＰＤ１抗体のさらなる例は、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）に開示され、例えば、それぞれ配列番号６、配列番号７および／または配列番号８の軽鎖可変ドメインＣＤＲ１、２および３と、それぞれ配列番号３、配列番号４または配列番号５の抗体重鎖可変ドメインＣＤＲ１、２および３とを有する抗体であり、ここで、配列番号の言及は、開示内容が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレットに従う番号付けである。ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１への結合についてこれらの抗体のいずれかと競合する抗体も使用され得る。
【0103】
例示的な抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブである（例えば、開示内容が参照により本明細書に援用される国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットを参照）。抗ＰＤ－１抗体は、０８１４６９＿ＳＰＤ－ＨとしてＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによってコードされる重鎖可変領域と、０８０１４７０＿ＳＰＤ－Ｌ－ｌ １としてＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによってコードされる軽鎖可変領域とを含む、国際公開第２００８／１５６７１２号パンフレットにおける抗体ｈ４０９Ａｌ １であり得る。他の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、抗体は、０８１４６９＿ＳＰＤ－ＨとしてＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによってコードされるペンブロリズマブのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインと、０８０１４７０＿ＳＰＤ－Ｌ－ｌ １としてＡＴＣＣに寄託されたＤＮＡによってコードされるペンブロリズマブのＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１中和剤は、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１中和剤は、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１の結合を阻害する抗ＰＤ１ ｍＡｂである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１中和剤は、免疫付着因子（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含む免疫付着因子である。
【0105】
別の例示的な抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２および１３に示されるそれぞれの配列またはそれらと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％同一のそれぞれのアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含むニボルマブ、またはその抗原結合フラグメントおよび変異体である。他の実施形態では、抗体は、ニボルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、抗体は、配列番号１２に記載される配列を有するニボルマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１３に記載される配列を有するニボルマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。
【化11】
【0106】
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号１４および１５に示されるそれぞれの配列、またはそれらとそれぞれ少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域、またはその抗原結合フラグメントおよび変異体を含む。他の実施形態では、抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、一実施形態では、抗体は、配列番号１４に記載される配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１５に記載される配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。
【化12】
【0107】
抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびキメラ抗体から選択され得る。本発明の１つの態様では、薬剤は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。本発明の１つの態様では、薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマまたはラクダのＩｇ）、ＶＨＨ断片、単一ドメインＦＶ、および単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。本発明の１つの態様では、薬剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、カッパボディ（ｋａｐｐａ ｂｏｄｙ）、ＩｇＮＡＲ、および多特異性抗体から選択される合成または半合成抗体由来の分子である。
【0108】
抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｆｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６に対する実質的な特異的結合を欠き得る。このような抗体は、Ｆｃ受容体に結合しないことが知られている種々の重鎖の定常領域を含み得る。１つのこのような例は、ＩｇＧ４定常領域である。ＩｇＧ４、あるいはＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片などの定常領域を含まない抗体断片を使用して、Ｆｃ受容体結合を回避することができる。Ｆｃ受容体結合は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて抗体のＦｃ受容体タンパク質への結合を試験することを含む、当該技術分野において知られている方法に従って評価することができる。また、Ｆｃγ受容体への結合を最小限または除去するようにＦｃ部分が修飾された任意のヒト抗体タイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を使用することもできる。従って、抗ＰＤ－１または抗ＰＤＬ１抗体、抗体は、典型的に、低減されたまたは最小のエフェクター機能を有する。１つの態様では、最小のエフェクター機能は、原核細胞中での産生に起因する。１つの態様では、最小のエフェクター機能は、「エフェクターレスＦｃ突然変異」または非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）に起因する。さらに他の実施形態では、エフェクターレスＦｃ突然変異は、定常領域におけるＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【0109】
抗ＮＫＧ２Ａ剤、または抗ＰＤ－１剤、または抗ＰＤ－Ｌ１剤（例えば、抗体など）は、１ｍｇ／ｍｌ～５００ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤中に取り込むことができ、ここで、前記製剤は２．０～１０．０のｐＨを有する。製剤は、緩衝系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定剤および界面活性剤をさらに含み得る。一実施形態では、医薬製剤は水性製剤、すなわち水を含む製剤である。このような製剤は、通常、溶液または懸濁液である。さらなる実施形態では、医薬製剤は水溶液である。「水性製剤」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤であると定義される。同様に、「水溶液」という用語は少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液であると定義され、「水性懸濁液」という用語は少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液であると定義される。
【0110】
別の実施形態では、医薬製剤は凍結乾燥製剤であり、使用前に医師または患者によって溶媒および／または希釈剤が添加される。
【0111】
別の実施形態では、医薬製剤は、事前に溶解することなく直ちに使用可能な乾燥製剤（例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥）である。
【0112】
さらなる態様では、医薬製剤はこのような抗体および緩衝剤の水溶液を含み、ここで、抗体は１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、前記製剤は、約２．０～約１０．０のｐＨを有する。
【0113】
別の実施形態では、製剤のｐＨは、約２．０～約１０．０、約３．０～約９．０、約４．０～約８．５、約５．０～約８．０、および約５．５～約７．５からなるリストから選択される範囲内である。
【0114】
さらなる実施形態では、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、およびトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸またはこれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝剤のそれぞれは、本発明の代替実施形態を構成する。
【0115】
さらなる実施形態では、製剤は、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は等張剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤はキレート剤も含む。本発明のさらなる実施形態では、製剤は安定剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は界面活性剤をさらに含む。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。
【0116】
本発明のペプチド医薬製剤中に他の成分が存在することも可能である。このような付加的な成分には、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、浸透圧調整剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）および双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンおよびヒスチジンなどのアミノ酸）が含まれ得る。このような付加的な成分は、当然ながら、本発明の医薬製剤の全体的な安定性に悪影響を与えてはならない。
【0117】
本発明に係る医薬組成物の投与は、いくつかの投与経路（例えば、静脈内）を介して行われ得る。また適切な抗体製剤は、その他の既に開発された治療用モノクローナル抗体による経験を検討することにより決定することができる。Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｘｏｌａｉｒ（オマリズマブ）、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ、Ｏｎｃｏｌｙｍおよび同様の製剤などの臨床的状況において効果があることが示されているいくつかのモノクローナル抗体は、本発明の抗体と共に使用され得る。例えば、モノクローナル抗体は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および注射用滅菌水中でのＩＶ投与のために処方された、１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの単回使用バイアル中、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給することができる。ｐＨは６．５に調整される。別の実施形態では、抗体は、約２０ｍＭのクエン酸Ｎａ、約１５０ｍＭのＮａＣｌを含む約６．０のｐＨの製剤において供給される。
【0118】
上述した方法に使用するのに適した治療的に有効な量で抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および任意選択的にさらに抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を含むキットも提供される。キットは、このキットに含まれる組成物を、がん（例えば、固形腫瘍）を有する患者に投与するために、実践者（例えば、医師、看護師、または患者）がこの組成物を投与することを可能にする使用説明書（例えば、投与スケジュールを含む）も任意選択的に含み得る。キットは、シリンジも含み得る。
【0119】
任意選択的に、キットは、上に示される方法に従う単回投与のために、有効量の抗ＮＫＧ２Ａ、および任意選択的にさらに抗ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体をそれぞれ含有する単回用量の医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物を投与するのに必要な機器またはデバイスもキットに含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗ＮＫＧ２Ａ、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含有する１つまたは複数の予め充填されたシリンジを提供し得る。
【0120】
一実施形態では、本発明は、ヒト患者の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体耐性がんを処置するためのキットであって、
（ａ）配列番号４～８のいずれかに記載される配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号９に記載される配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む、ある用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体と、
（ｂ）任意選択的に、ある用量の抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と、
（ｃ）任意選択的に、本明細書に記載される方法のいずれかで抗ＮＫＧ２Ａ抗体（および任意選択的に抗ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体）を使用するための使用説明書と
を含むキットを提供する。
（ａ）配列番号４～８のいずれかに記載される配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号９に記載される配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む、ある用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体と、
（ｂ）任意選択的に、ある用量の抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と、
（ｃ）任意選択的に、本明細書に記載される方法のいずれかで抗ＮＫＧ２Ａ抗体（および任意選択的に抗ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体）を使用するための使用説明書と
を含むキットを提供する。
【0121】
悪性腫瘍の診断、予後、および処置
任意選択的にさらに、ＰＤ－１の活性を中和する薬剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と併用して、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する薬剤を用いた、個人のがんの診断、予後、監視、処置および予防において有用な方法が記載される。個人は、任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者、例えば、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に（例えば、１つまたは複数の予後因子に基づいて）不完全な応答、治療応答の欠如、検出可能なもしくは残存がん、および／または進行性疾患を生じるか、または生じる高い可能性を有することが予測される個人であり得る。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に完全な応答を生じていないか、または完全な応答を生じない可能性（例えば、高い可能性）を有することが予測される。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に進行した（例えば、進行性疾患）。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に部分的に応答したかまたは安定した（部分的な応答または安定した疾患）が、進行する可能性を有することが予測される。
任意選択的にさらに、ＰＤ－１の活性を中和する薬剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と併用して、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する薬剤を用いた、個人のがんの診断、予後、監視、処置および予防において有用な方法が記載される。個人は、任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する低応答者、例えば、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に（例えば、１つまたは複数の予後因子に基づいて）不完全な応答、治療応答の欠如、検出可能なもしくは残存がん、および／または進行性疾患を生じるか、または生じる高い可能性を有することが予測される個人であり得る。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に完全な応答を生じていないか、または完全な応答を生じない可能性（例えば、高い可能性）を有することが予測される。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に進行した（例えば、進行性疾患）。一実施形態では、個人のがんは、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に部分的に応答したかまたは安定した（部分的な応答または安定した疾患）が、進行する可能性を有することが予測される。
【0122】
１つの例では、個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置（例えば、単独療法で）に対して応答性が低いことが知られているがんを有する。１つの例では、個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置（例えば、単独療法で）時の腫瘍浸潤ＮＫＧ２Ａ発現ＣＤ８＋またはＮＫ細胞によって特徴付けられることが知られているがんを有する。１つの例では、個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置（例えば、単独療法で）時のがん細胞におけるＨＬＡ－Ｅの発現（または増加した発現）によって特徴付けられることが知られているがんを有する。任意選択的に、がんは、頭頸部扁平上皮細胞がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、腎臓がん、消化管がん、膵臓または食道腺がん、乳がん、腎細胞がん（ＲＣＣ）、黒色腫、大腸がんまたは卵巣がんである。このような個人は、有利には、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤で処置され得る。
【0123】
例えば、個人は、応答性が低い（または耐性もしくは非応答性）であるがん、例えば、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置にもかかわらず（例えば、その間またはその後）再発または進行したがんを有し得る。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤で処置された個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置（例えば、単独療法として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤以外の薬剤との併用療法として）時（その間またはその後）に不完全な応答を生じている（完全な応答（ＣＲ）を生じていない）か、またはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置時（その間またはその後）に少なくとも部分的な応答（ＰＲ）を生じているが、がんが再発または進行した。本明細書中の任意の実施形態では、処置応答は、周知の基準、例えば、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）（第１．１版など）に従って定義および／または評価することができ、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４７、またはＩｍｍｕｎｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ｉｒＲＣ）を参照されたく、Ｗｏｌｃｈｏｃｋ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：７４１２－７４２０を参照されたい。
【0124】
一実施形態では、低応答者である（または応答性が低いがんを有する）個人は、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に対する不良な疾患予後を有する個人である。不良な疾患予後を有する個人は、例えば、１つまたは複数の予測因子に基づいて、（例えば、良好な疾患予後を有する個人と比較して）がんの進行の高いまたはより高いリスクを有することが決定され得る。一実施形態では、予測因子は、増加した数のＮＫＧ２Ａ発現ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の存在を含み、かつ／またはＮＫおよび／もしくはＣＤ８ Ｔ細胞における増加したレベルのＮＫＧ２Ａは、個人が、ＰＤ－１を中和する抗体による処置に対する応答について不良な予後を有することを示し得る。一実施形態では、予測因子は、１つまたは複数の遺伝子における突然変異の存在または非存在を含む。一実施形態では、突然変異は、Ｔ細胞によって認識されるネオエピトープを定義する。一実施形態では、予測因子は、腫瘍細胞における１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質、例えば、ＰＤ－Ｌ１の発現のレベル、腫瘍細胞における減少または増加したレベルのＰＤ－Ｌ１を含む。一実施形態では、予測因子は、循環または腫瘍環境中のＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞における１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質、例えば、ＰＤ－１の発現のレベルを含む。一実施形態では、予測因子は、がん細胞における突然変異荷重、例えば、１エクソーム当たりの非同義突然変異の数を含む。
【0125】
本明細書に記載される処置レジメンおよび方法は、個人から得られる生体サンプル（例えば、がん細胞、がん組織またはがん隣接組織を含む生体サンプル）中の細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現を検出する前のステップを伴うかまたは伴わずに使用され得る。別の実施形態では、本開示は、必要としている個人のがんの処置または予防のための方法であって、
ａ）ＰＤ－Ｌ１を発現する個人からのサンプル中の細胞（例えば、腫瘍細胞、腫瘍浸潤免疫細胞、腫瘍浸潤マクロファージ）を検出するステップと、
ｂ）任意選択的に、応答性が低く、および／またはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤から実質的な利益が得られない個人に対応する基準レベルで、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞がサンプルに含まれることが決定されると、任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤を個人に投与するステップと
を含む方法を提供する。ＰＤ－Ｌ１基準レベルは、任意の好適な従来使用される基準レベルによって特徴付けられ得る。（例えば、免疫組織化学に基づくアッセイを用いて）例えば、腫瘍細胞または腫瘍組織サンプルに由来する細胞の１％以下、任意選択的に５％以下、任意選択的に１０％以下、任意選択的に５０％以下がＰＤ－Ｌ１を発現する場合、サンプルは、応答性が低く、および／またはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤から実質的な利益が得られない個人に対応すると決定され得る。このようなアッセイの例としては、Ｄａｋｏ Ｄｅｎｍａｒｋ Ａ／Ｓ製のｐｈａｒｍＤｘによるＰＤ－Ｌ１ ＩＨＣ ２２Ｃ３アッセイが挙げられる。このアッセイでは、ＰＤ－Ｌ１発現レベルが、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、ＰＤ－Ｌ１についての腫瘍細胞染色の割合（０％～１００％）を用いて測定される。任意選択的に、基準レベルは非高ＰＤ－Ｌ１発現のレベルであり、任意選択的に、５０％未満の腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１を発現する（例えば、患者は、５０％未満のＴＰＳを有する）。
ａ）ＰＤ－Ｌ１を発現する個人からのサンプル中の細胞（例えば、腫瘍細胞、腫瘍浸潤免疫細胞、腫瘍浸潤マクロファージ）を検出するステップと、
ｂ）任意選択的に、応答性が低く、および／またはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤から実質的な利益が得られない個人に対応する基準レベルで、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞がサンプルに含まれることが決定されると、任意選択的に、ＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤を個人に投与するステップと
を含む方法を提供する。ＰＤ－Ｌ１基準レベルは、任意の好適な従来使用される基準レベルによって特徴付けられ得る。（例えば、免疫組織化学に基づくアッセイを用いて）例えば、腫瘍細胞または腫瘍組織サンプルに由来する細胞の１％以下、任意選択的に５％以下、任意選択的に１０％以下、任意選択的に５０％以下がＰＤ－Ｌ１を発現する場合、サンプルは、応答性が低く、および／またはＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤から実質的な利益が得られない個人に対応すると決定され得る。このようなアッセイの例としては、Ｄａｋｏ Ｄｅｎｍａｒｋ Ａ／Ｓ製のｐｈａｒｍＤｘによるＰＤ－Ｌ１ ＩＨＣ ２２Ｃ３アッセイが挙げられる。このアッセイでは、ＰＤ－Ｌ１発現レベルが、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、ＰＤ－Ｌ１についての腫瘍細胞染色の割合（０％～１００％）を用いて測定される。任意選択的に、基準レベルは非高ＰＤ－Ｌ１発現のレベルであり、任意選択的に、５０％未満の腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１を発現する（例えば、患者は、５０％未満のＴＰＳを有する）。
【0126】
本明細書に記載される処置レジメンおよび方法は、固形腫瘍および血液がんの処置に有用であり得る。本発明の方法および組成物は、例えば、限定はされないが、扁平上皮細胞がん、がん腫、例えば、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、頭頸部、前立腺、膵臓、胃、頸部、甲状腺および皮膚のがん腫；リンパ系の造血器腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫、および多発性骨髄腫；骨髄系の造血器腫瘍、例えば、急性および慢性骨髄性白血病、前骨髄球性白血病、および骨髄異形成症候群；間葉由来の腫瘍、例えば、線維肉腫および横紋筋肉腫；他の腫瘍、例えば、黒色腫、精上皮腫、奇形がん腫、神経芽細胞腫および神経膠腫；中枢神経系および末梢神経系の腫瘍、例えば、星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、および神経鞘腫；間葉由来の腫瘍、例えば、線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫；および他の腫瘍、例えば、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、および甲状腺濾胞がんを含む、様々ながんおよび他の増殖性疾患の処置に用いられる。
【0127】
一実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮細胞がん（ＨＮＳＣＣ）である。一実施形態では、ＨＮＳＣＣは、口腔咽頭腫瘍、喉頭腫瘍、口腔の腫瘍、または下咽頭の腫瘍である。一実施形態では、ＨＮＳＣＣは、口腔ＳＣＣ（ＯＣＳＣＣ）である。ＯＣＳＣＣは、唇、舌の前部２／３、口腔底、頬粘膜、歯肉、硬口蓋および臼後三角の扁平上皮細胞がんを含む。一実施形態では、ＨＮＳＣＣは、転移性がんである。
【0128】
固形腫瘍を有する個人を処置するとき、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する化合物（例えば、抗体）は、有利には、本明細書に記載される処置レジメンに従って、がん細胞を除去するための手術を受けたことがないか、またはこのような手術を当期は受けていない、がんを有する個人に投与することができる。しかしながら、がん細胞を除去するための手術を受けた患者、または受けている患者にも化合物が投与され得ることが理解されるであろう。抗ＮＫＧ２Ａ化合物が、がん細胞を除去するため（例えば、ＨＮＳＣＣ細胞を除去するため）の外科的介入を受けていない個人に投与される場合、ＮＫＧ２Ａ結合化合物は、例えば、手術の約１～８週間前に投与され得る。一実施形態では、手術前に少なくとも１回（例えば、１回、２回、３回またはそれを超える）の、抗ＮＫＧ２Ａ化合物による処置の完全な投与サイクルが施される。一実施形態では、投与サイクルは２週間～８週間である。
【0129】
本明細書に示されるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に対して応答性が低いがんの処置のための治療は、がん（例えば、進行した難治性のまたは進行性の固形または血液系腫瘍）に罹患した対象を処置するために、任意選択的にＰＤ－１中和剤、例えば、中和抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の非存在下でまたは任意選択的にそれらと併用して、中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体の投与を含む。一実施形態では、本発明は、固形腫瘍（例えば、固形腫瘍、進行した難治性の固形腫瘍）を有する対象、または血液系腫瘍を有する対象を処置するために、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、および任意選択的にさらに組み合わせて抗ＰＤ－１抗体を提供する。特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号４～８のいずれかの重鎖および配列番号９の軽鎖を含む。一実施形態では、ＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、ＭＥＤＩ－４７３６、ＣＴ－０１１およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択される。
【0130】
本明細書で使用される場合、補助的または併用投与（同時投与）には、同一もしくは異なる剤形における化合物の同時投与、または化合物の別々の投与（例えば、連続投与）が含まれる。従って、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、単一の製剤において同時に投与することができる。あるいは、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、別々の投与のために処方されることが可能であり、同時または連続的に投与される。
【0131】
一実施形態では、本明細書に開示される方法で処置されるがんは、表面においてＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞および／またはＣＤ８ Ｔ細胞の浸潤によって特徴付けられるがんである。一実施形態では、本明細書に開示される方法で処置されるがんは、ＮＫ細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％または５０％が表面においてＮＫＧ２Ａを発現する、ＮＫ細胞の浸潤によって特徴付けられるがんである。
【0132】
一実施形態では、本明細書に開示される方法で処置されるがんは、高レベルのＨＬＡ－Ｅによって特徴付けられるがんである。一実施形態では、がんは、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、腎細胞がん（ＲＣＣ）、黒色腫、頭頸部扁平上皮細胞がん（ＨＮＳＣＣ）、大腸がん、および卵巣がんからなる群から選択される。がんを有する患者が、腫瘍細胞の表面上のＨＬＡ－Ｅの発現を評価するために、前の検出ステップを伴うかまたは伴わずに抗ＮＫＧ２Ａ剤で処置され得ることが理解されるであろう。有利には、処置方法は、個人からの腫瘍の生体サンプル中（例えば、腫瘍細胞上）のＨＬＡ－Ｅ核酸またはポリペプチドを検出するステップを含み得る。生体サンプルの例としては、任意の好適な体液（例えば、血清、リンパ液、血液）、細胞サンプル、または組織サンプルが挙げられる。例えば、組織サンプルは、腫瘍組織または腫瘍隣接組織のサンプルであり得る。任意選択的に、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドは、悪性細胞の表面上で検出される。生体サンプルが、ＨＬＡ－Ｅを発現する（例えば、著しく発現する；基準と比較して、高レベルでＨＬＡ－Ｅを発現する、抗ＨＬＡ－Ｅ抗体による高い強度の染色）という決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤による処置から強力な利益を有し得るがんを有することを示す。一実施形態では、本方法は、生体サンプル中のＨＬＡ－Ｅ核酸またはポリペプチドの発現のレベルを決定し、このレベルを健常者に対応する基準レベル（例えば、値、弱い細胞表面染色など）と比較するステップを含む。生体サンプルが、基準レベルと比較して増加したレベルでＨＬＡ－Ｅ核酸またはポリペプチドを発現するという決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを有することを示し得る。
【0133】
一実施形態では、生体サンプル（例えば、腫瘍細胞、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織を含むサンプル）がＨＬＡ－Ｅ核酸またはポリペプチドを著しく発現するという決定は、個人が、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを有することを示す。「顕著に発現される」は、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに関連する場合、所与の個人から採取された相当な数の腫瘍細胞においてＨＬＡ－Ｅポリペプチドが発現されることを意味する。「顕著に発現される」という用語の定義は正確な割合の値によって制約されないが、いくつかの例では、「顕著に発現される」と言われる受容体は、患者から採取された腫瘍細胞（サンプル中）の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれを超えて存在するであろう。
【0134】
個人が、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドを発現するがん細胞を有するかどうかの決定は、例えば、がん細胞を含む個人からの生体サンプルを入手（例えば、生検の実施により）し、前記細胞を、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させ、かつ細胞がその表面上でＨＬＡ－Ｅを発現するかどうかを検出することを含み得る。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ－Ｅを発現するがん細胞を有するかどうかの決定は、免疫組織化学アッセイを実行することを含む。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ－Ｅを発現するがん細胞を有するかどうかの決定は、フローサイトメトリーアッセイを実行することを含む。
【0135】
この処置方法では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と併用して投与されるとき、抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、別々に、一緒にもしくは順次、または混液で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与前に投与される。例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与の約０～３０日前に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与の約３０分間～約２週間、約３０分間～約１週間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～１日、または約１～５日前に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与と同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与後に投与される。例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与の約０～３０日後に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与の約３０分間～約２週間、約３０分間～約１週間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～１日、または約１～５日後に投与される。
【0136】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体でヒトを処置するための例示的な処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａを阻害する抗体のそれぞれを有効量で患者に投与するステップを含み、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、投与サイクルは２週間～８週間である。
【0137】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体でヒトを処置するための例示的な処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａを阻害する抗体およびヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する抗体のそれぞれを有効量で患者に投与するステップを含み、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、少なくとも１回の用量の抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体が１～２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、投与サイクルは２週間～８週間である。
【0138】
一実施形態では、本方法は、少なくとも１回の投与サイクルを含み、サイクルは、８週間以下の期間であり、少なくとも１回のサイクルのそれぞれについて、２回、３回または４回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、各サイクルは、１～２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量での２回、３回または４回の用量の抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与をさらに含む。
【0139】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、（例えば、ＰＢＭＣにおいて、ＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることによって評価される際に）実質的に完全な（例えば、９０％、９５％）受容体飽和に必要な濃度の少なくとも１０、２０、もしくは３０倍高い循環濃度を達成する量で、または任意選択的に（例えば、ＰＢＭＣにおいて、ＮＫＧ２Ａ発現細胞に対して抗ＮＫＧ２Ａ抗体を漸増させることによって評価される際に）実質的に完全な受容体飽和に必要な濃度の少なくとも１０、２０、もしくは３０倍高い血管外組織（例えば、腫瘍組織または環境）中での濃度を達成する量で有利に投与され得る。
【0140】
ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答が、ＨＬＡ－Ｅ発現標的細胞に対するＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞の細胞傷害活性の好適なアッセイを用いて評価され得る。例としては、ＮＫ細胞活性化のマーカー、例えば、ＣＤ１０７またはＣＤ１３７発現に基づくアッセイが挙げられる。本明細書の実施例において使用されるブロッキング抗ＮＫＧ２Ａ抗体ｈｕｍＺ２７０（例えば、配列番号４～８のいずれかの重鎖および配列番号９の軽鎖を有する）の（例えば、ＣＤ１０７動員アッセイで評価される際の）ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答についてのＥＣ５０は、約４μｇ／ｍｌであり、ＥＣ１００は約１０μｇ／ｍｌである。従って、少なくとも４μｇ／ｍｌの連続（最低）血中濃度を維持するような量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与される。有利には、少なくとも１０μｇ／ｍｌの連続（最低）血中濃度を達成し、および／または維持する量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与され得る。例えば、達成および／または維持される血中濃度は、１０～１２μｇ／ｍｌ、１０～１５μｇ／ｍｌ、１０～２０μｇ／ｍｌ、１０～３０μｇ／ｍｌ、１０～４０μｇ／ｍｌ、１０～５０μｇ／ｍｌ、１０～７０μｇ／ｍｌ、１０～１００μｇ／ｍｌ、１０～１５０μｇ／ｍｌまたは１０～２００μｇ／ｍｌであり得る。血管系外の組織が標的にされる場合（例えば、固形腫瘍の処置において）、少なくとも１０μｇ／ｍｌの組織濃度を達成および／または維持するような量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与され、例えば、少なくとも１００μｇ／ｍｌの血中濃度を達成する量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することにより、少なくとも１０μｇ／ｍｌの組織濃度を達成することが予測される。例えば、組織中で１０μｇ／ｍｌを達成／維持するために、達成および／または維持される血中濃度は、１００～１１０μｇ／ｍｌ、１００～１２０μｇ／ｍｌ、１００～１３０μｇ／ｍｌ、１００～１４０μｇ／ｍｌ、１００～１５０μｇ／ｍｌ、１００～２００μｇ／ｍｌ、１００～２５０μｇ／ｍｌまたは１００～３００μｇ／ｍｌであり得る。
【0141】
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ａ＋リンパ球細胞応答（例えば、ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答）についての少なくともＥＣ５０、任意選択的に約または少なくとも約ＥＣ１００に対応する血液（例えば、血清）中濃度を得るような量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与される。ＮＫＧ２Ａ＋細胞応答（例えば、ＮＫ細胞応答）に関する「ＥＣ５０」（または「ＥＣ１００」）は、その最大応答またはこのようなＮＫＧ２Ａ＋細胞応答（例えば、ＮＫ細胞応答）に関する効果の５０％（またはＥＣ１００を指す場合には１００％）を生じる抗ＮＫＧ２Ａ抗体の効率的な濃度を指す。いくつかの実施形態では、特に固形腫瘍の処置の場合、達成される濃度は、（血管系外の、例えば、腫瘍環境中の）組織中の濃度が、ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答についての少なくともＥＣ５０、任意選択的にＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答についての約、または少なくとも約ＥＣ１００に対応するように設計される。
【0142】
約１０μｇ／ｍｌのＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答についてのＥＣ１００を有する、本明細書の実施例において使用されるｈｕｍＺ２７０などの抗ＮＫＧ２Ａ抗体のための例示的な処置プロトコルは、少なくとも１回の投与サイクルを含み、ここで、少なくとも１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が２～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に６～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～８ｍｇ／ｋｇ、または任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。任意選択的に、少なくとも２、３、４、５、６、７または８回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与される。一実施形態では、投与サイクルは２週間～８週間である。一実施形態では、投与サイクルは８週間である。一実施形態では、投与サイクルは８週間であり、２週間毎に１回の用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体（すなわち、合計で４回の用量）を投与することを含む。
【0143】
本明細書中の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間毎に１回投与される。
【0144】
特に、造血器腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するための例示的な処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与間で少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月に２回、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、２～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～８ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ体重である。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を提供するように投与され得る。１０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成することは、ヒト化Ｚ２７０などの抗体についてのＥＣ１００に対応する。
【0145】
特に、血管外組織中（例えば、腫瘍または腫瘍環境中）で抗ＮＫＧ２Ａ抗体のＥＣ５０濃度が求められる固形腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するための例示的な処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与間で少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１ヶ月に２回、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、２～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ体重である。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を提供するように投与され得る。４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成することは、約４μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外組織、腫瘍環境）濃度を提供することが予測され、これは、従って、ヒト化Ｚ２７０などの抗体についてのＥＣ５０に対応する。
【0146】
特に、血管外組織中（例えば、腫瘍または腫瘍環境中）で抗ＮＫＧ２Ａ抗体ＥＣ５０濃度が求められる固形腫瘍の処置のための、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するための例示的な処置プロトコルは、例えば、有効量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、抗体は、１ヶ月に２回、投与され、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続する投与間で少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量は、４～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～８ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約８ｍｇ／ｋｇ、または任意選択的に約１０ｍｇ／ｋｇである。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を提供するように投与され得る。１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成することは、約１０μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外、腫瘍環境）濃度を提供することが予測され、これは、従って、ヒト化Ｚ２７０などの抗体についてのＥＣ１００に対応する。
【0147】
抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用するためのさらなる例示的な処置プロトコルは、より高い用量の負荷期間、続いて維持期間を用いるレジメンを含む。例えば、負荷期間は、有効量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含んでもよく、抗体は、維持レジメン中の抗ＮＫＧ２Ａ抗体の最初の投与まで少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量で１回または複数回投与される。例えば、１回投与する場合、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の１０ｍｇ／ｋｇの負荷用量が投与され得、負荷用量の約２週間（以下）後に維持レジメン中の抗ＮＫＧ２Ａ抗体の最初の投与が行われる。次に、維持レジメンは、より低い用量および／またはより低い投与の頻度を用いて、維持レジメン中の連続する投与間で少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持することができる。例えば、維持レジメンは、２～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に４～８ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約６ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約８ｍｇ／ｋｇの用量で２週間毎に抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することを含み得る。
【0148】
特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の用量（例えば、各用量）が４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体の用量（例えば、各用量）が１～２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に１０ｍｇ／ｋｇで投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の用量（例えば、各用量）が１０、１５、２０または２５ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に１２００ｍｇの総用量で投与される。特定の実施形態では、併用療法により、抗ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体をより低い用量で投与することが可能となり、一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体の各用量が２または３ｍｇ／ｋｇで投与される。
【0149】
一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、以下の用量で投与される：
（ａ）１～１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および（ｉ）１～１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体または（ｉｉ）１～２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｂ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｃ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体、または
（ｄ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および２ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体。
（ａ）１～１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および（ｉ）１～１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体または（ｉｉ）１～２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｂ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｃ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体、または
（ｄ）４、６、８または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＫＧ２Ａ抗体および２ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体。
【0150】
本明細書中の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間毎に１回投与される。本明細書中の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約３週間毎に１回投与される。本明細書中の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約２週間毎に１回投与される。本明細書中の実施形態のいずれかの１つの態様では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約４週間毎に１回投与される。
【0151】
一実施形態では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。一実施形態では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、同日に投与され、任意選択的にさらに約２週間毎に１回、任意選択的にさらに静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。
【0152】
他の態様では、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋ ＮＫ細胞および／またはＴ細胞を同定する方法が提供される。ＮＫ細胞および／またはＴ細胞におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の同時発現を評価することを診断または予後予測方法に使用することができる。例えば、生体サンプルを個人から（例えば、がん患者から得られるがんまたはがん隣接組織から）得て、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋ ＮＫおよび／またはＴ細胞の存在について分析することができる。このような細胞におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方の発現を使用して、例えば、ＮＫＧ２Ａポリペプチドによって（および任意選択的にさらにＰＤ１ポリペプチドによって）阻害される腫瘍浸潤ＮＫおよび／またはＴ細胞を有する個人を同定することができる。本方法は、例えば、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、ＰＤ１を中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤およびＰＤ１を中和する薬剤による併用処置に対する応答についての予後予測として有用であり得る。
【0153】
一実施形態では、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤およびヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による処置に個人が適しているかどうかを評価する方法が提供され、本方法は、個人からの生体サンプルにおいてＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドおよびＰＤ－１核酸またはポリペプチドの両方を発現するリンパ球集団（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を検出するステップを含む。個人が、ＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドおよびＰＤ－１核酸またはポリペプチドの両方を発現するリンパ球集団を有するという決定は、患者が、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを有することを示す。
【0154】
他の態様では、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋ ＮＫ細胞および／またはＴ細胞を同定する方法が提供される。腫瘍浸潤エフェクターリンパ球が阻害性受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方を発現し得るという発見により、改良された処置方法ならびに診断および予後予測に有用であり得るこのような二重制限／阻害エフェクター細胞を検出する方法が得られる。
【0155】
例えば、生体サンプルを個人から（例えば、がん患者から得られるがんまたはがん隣接組織から）得て、ＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋ ＮＫおよび／またはＴ細胞の存在について分析することができる。このような細胞におけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方の発現を用いて、例えば、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１ポリペプチドの両方によって阻害される腫瘍浸潤ＮＫおよび／またはＴ細胞を有する個人を同定することができる。本方法は、例えば、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、ＰＤ１を中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤およびＰＤ１を中和する薬剤による併用処置に対する応答についての予後予測として有用であり得る。
【0156】
生体サンプル中のＮＫＧ２Ａ－およびＰＤ－１が制限されたＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞を検出することは、より一般に、ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の特性評価が興味の対象となる研究、評価、診断、予後予測および／または予測に使用するのに利点を有し得る。例えば、好ましいまたは好ましくないがんの予後予測は、腫瘍または腫瘍隣接組織が、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方を発現する浸潤ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞によって特徴付けられるかどうかを評価することによって行うことができる。
【0157】
例えば、腫瘍浸潤ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞がＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋であるかどうか（このようなＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞が腫瘍周辺（がん隣接組織中）に存在するかどうかを含む）を評価するために、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ１抗体を用いて、患者のがんを特定評価または評価することができる。本方法は、患者が、（例えば、ＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ－１、またはそれらのそれぞれのリガンドＨＬＡ－ＥまたはＰＤ－Ｌ１に結合することによって）ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞に直接作用するか、または（例えば、ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の活性を調節し得るサイトカインまたは他のシグナル伝達分子を産生することによって）ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞に間接的に作用する治療剤による調節に適し得るＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞によって特徴付けられる病理を有するかどうかを決定するのに有用であり得る。任意選択的に、任意の実施形態では、患者は、ＰＤ－１を中和する薬剤で処置されている。本明細書に記載される方法は、任意選択的に、個人が、腫瘍浸潤ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞に作用する治療剤による調節に適し得る病理を有することが決定されると、このような治療剤を個人に投与するステップをさらに含み得る。
【0158】
１つの態様では、本発明者らは、ＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋リンパ球、任意選択的にＮＫまたはＣＤ８＋ Ｔ細胞を検出するインビトロ方法であって、腫瘍浸潤リンパ球を含む生体サンプルを提供するステップと、リンパ球がＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１を発現するかどうかを決定するステップとを含む方法を提供する。
【0159】
一実施形態では、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤による処置（および任意選択的にさらにヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤による）に個人が適しているかどうかを評価する方法が提供され、本方法は、個人からの生体サンプルにおいてＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドおよびＰＤ－１核酸またはポリペプチドの両方を発現するリンパ球集団（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）を検出するステップを含む。個人が、ＮＫＧ２Ａ核酸またはポリペプチドおよびＰＤ－１核酸またはポリペプチドの両方を発現するリンパ球集団を有するという決定は、患者が、ヒトＰＤ－１の阻害活性を中和する薬剤と併用して、ＮＫＧ２Ａを阻害する薬剤で処置され得るがんを有することを示し得る。
【0160】
他の態様では、がんを有する個人が、ＰＤ－１を中和する薬剤による処置に対する低応答者であるかどうかを評価する方法が提供され、ここで、ＮＫＧ２Ａ＋、および／またはＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ１＋ ＮＫ細胞、および／またはＴ細胞の存在および／または数が評価される。ＮＫＧ２Ａの発現（ならびに／またはＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の同時発現）を評価することは、例えば、個人から（例えば、がん患者から得られるがんまたはがん隣接組織から）生体サンプルを得て、ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫおよび／またはＣＤ８ Ｔ細胞の存在についてサンプルを分析することを含み得る。ＮＫＧ２Ａ（および任意選択的にさらにＰＤ－１）の発現および／またはこのようなＮＫＧ２Ａ＋および／またはＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ－１＋細胞の数の上昇により、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１ポリペプチドの両方によって阻害される腫瘍浸潤ＮＫおよび／またはＴ細胞を有する個人を同定することができる。任意選択的に、（例えば、基準値またはＰＤ－１を中和する薬剤による処置前の値と比較して）ＮＫＧ２Ａ（および任意選択的にさらにＰＤ－１）の発現およびこのようなＮＫＧ２Ａ＋および／またはＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ－１＋細胞の数の増加が、ＰＤ－１を中和する薬剤の個人への投与後に検出される。ＮＫＧ２Ａ（および任意選択的にさらにＰＤ－１）の発現およびこのようなＮＫＧ２Ａ＋および／またはＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ－１＋細胞の数の上昇または増加を有する個人は、ＰＤ－１の活性を中和する薬剤に対する低応答者であることが決定され得る。本方法は、例えば、ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、ＰＤ１を中和する薬剤による処置に対する応答についての予後予測として、またはＮＫＧ２Ａを中和する薬剤およびＰＤ１を中和する薬剤による併用処置に対する応答についての予後予測として有用であり得る。
【0161】
本明細書中の方法のいずれかでは、Ｔおよび／またはＮＫ細胞におけるＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ１を検出するステップは、組織浸潤ヒトＣＤ８ Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞におけるＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ１発現を検出するステップを含んでもよく、前記方法は、個人からの腫瘍サンプル（例えば、サンプルまたは腫瘍組織または腫瘍隣接組織）を提供するステップと、サンプル中のヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ－１ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を用いて、前記サンプル中の組織浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を検出するステップとを含む。任意選択的に、任意の実施形態では、患者は、ＰＤ－１を中和する薬剤で処置されている。一実施形態では、サンプルは、腫瘍細胞、腫瘍組織または腫瘍隣接組織を含む。一実施形態では、ＣＤ８ Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞は、免疫組織化学手法を用いて同定される。一実施形態では、サンプルは、パラフィン包埋サンプルであり、任意選択的に、パラフィン包埋サンプルは、固定され、パラフィン中に包埋され、薄片にされ、脱パラフィンされ、モノクローナル抗体と接触させる前にスライドに移されている。一実施形態では、ＣＤ８ Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞は、フローサイトメトリー方法を用いて同定される。
【実施例】
【0162】
実施例１ － ＲＭＡ－ＳおよびＡ２０腫瘍細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞およびＮＫＧ２Ａおよび／またはＰＤ－１を発現するＣＤ８ Ｔ細胞によって浸潤される
リンパ球は、一般に、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１を同時発現しないことが分かっている。腫瘍浸潤リンパ球におけるこれらの受容体の発現を調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の分布をマウスからの腫瘍中のＮＫおよびＴ細胞サブセットにおいて研究した。リンパ球を脾臓から、腫瘍流入リンパ節から、ならびに固形腫瘍内から採取した。
リンパ球は、一般に、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１を同時発現しないことが分かっている。腫瘍浸潤リンパ球におけるこれらの受容体の発現を調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の分布をマウスからの腫瘍中のＮＫおよびＴ細胞サブセットにおいて研究した。リンパ球を脾臓から、腫瘍流入リンパ節から、ならびに固形腫瘍内から採取した。
【0163】
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、ＰＤＬ－１＋Ｑａ－１＋ＲＭＡ－Ｓ細胞（Ｑａ－１、Ｑｄｍ、Ｂ２ｍ）またはＡ２０腫瘍細胞を生着させた（皮下（ｓｃ））。ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ（上側の列）およびＡ２０（下側の列）腫瘍担持マウスを、腫瘍体積が約５００ｍｍ３であるときに殺処分した。
【0164】
結果が図１Ａおよび１Ｂに示される。腫瘍細胞（図１Ａ）および腫瘍浸潤リンパ球－ＴＩＬ－（図１Ｂ）を、腫瘍細胞の場合にはＱａ－１およびＰＤＬ－１の発現について、およびＴＩＬの場合にはＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の発現について、それぞれフローサイトメトリーによって分析した。３匹のうちの１匹の代表的なマウスが示される。ＭＦＩ：蛍光強度の中央値。
【0165】
両方の腫瘍タイプからの浸潤ＮＫ細胞の半数超がＮＫＧ２Ａを発現しており、これは、腫瘍浸潤ＮＫ細胞がＮＫＧ２Ａによって阻害されることを示唆している。ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞は、一般に、有意な量のＰＤ－１を発現しなかった。しかしながら、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方に対して陽性であるＣＤ８ Ｔ細胞が見られ、これは、ＣＤ８ Ｔ細胞が阻害性受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の両方によって制限され得ることを示唆している。
【0166】
実施例２ － ｒｍａ－ｒａｅ１腫瘍を担持するマウスからのＮＫおよびＴ細胞サブセットは、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の同時発現が可能である
受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の発現をさらに調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の分布をマウス中のＮＫおよびＴ細胞サブセットにおいて研究した。リンパ球を脾臓から、腫瘍流入リンパ節から、ならびに固形腫瘍内から採取した。
受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の発現をさらに調べるために、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１の分布をマウス中のＮＫおよびＴ細胞サブセットにおいて研究した。リンパ球を脾臓から、腫瘍流入リンパ節から、ならびに固形腫瘍内から採取した。
【0167】
Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、ＲＭＡ－Ｒａｅクローン６（２００万個の細胞）を生着させた（皮下（ｓｃ））。これらの腫瘍細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａリガンド、Ｑａ－１を発現する。１２日目（平均腫瘍体積：７２３ｍｍ３、ＳＤ：１６１ｍｍ３、ｎ＝４）にマウスを殺処分した。脾臓、ＬＮおよび腫瘍からの細胞懸濁液の調製後、細胞を以下のように染色した：ＣＤ３ｅ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５、ＮＫＰ４６ Ａｌｅｘａ ６４７、ＮＫＧ２Ａ／Ｃ／Ｅ ＦＩＴＣ、ＰＤ１ ＰＥ、ＣＤ８ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ。
【0168】
結果が図２および表１～３に示される。
【0169】
ＮＫ細胞サブセットでは、流入リンパ節および脾臓の両方における細胞は、約半分がＮＫＧ２Ａ陽性および半分がＮＫＧ２Ａ陰性であったが、いずれの場合もＰＤ１のこれらの有意な発現はなかった。リンパ節からのＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１－（４９．２％）およびＮＫＧ２Ａ－ ＰＤ－１－（４９．５％）であり、ＮＫ細胞の１％未満（平均）が、ＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であった。脾臓からのＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１－（４４．１％）およびＮＫＧ２Ａ－ ＰＤ－１－（５５．７％）であり、ＮＫ細胞の平均０．１％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であった。
【0170】
Ｔ細胞サブセットでは、ほとんどの細胞がＮＫＧ２Ａ陰性であり（リンパ節におけるわずか１．１％および脾臓における４．７％がＮＫＧ２Ａ＋である）、ごく一部の細胞がＰＤ－１＋であり（リンパ節における３．５％および脾臓における１０％がＰＤ－１＋ ＮＫＧ２Ａ－であった）、有意な二重陽性ＮＫＧ２Ａ ＰＤ－１細胞はなかった。リンパ節中のＴ細胞のわずか０．１％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であり、脾臓中のＴ細胞のわずか０．４％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であった。リンパ節からのＴ細胞の９５．１％が二重陰性であり、脾臓からのＴ細胞の８５．６％が二重陰性であった。
【0171】
ＣＤ８ Ｔ細胞サブセットでは、ほとんどの細胞が同様にＮＫＧ２Ａ陰性であり（リンパ節におけるわずか１．６％および脾臓における３．９％がＮＫＧ２Ａ＋である）、ごく一部の細胞がＰＤ－１＋であり（リンパ節における１．１％および脾臓における２．５％がＰＤ－１＋ ＮＫＧ２Ａ－であった）、有意な二重陽性ＮＫＧ２Ａ ＰＤ－１細胞はなかった。リンパ節中のＴ細胞のわずか０．２％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であり、脾臓中のＴ細胞のわずか０．３％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であった。リンパ節からのＴ細胞の９７．３％が二重陰性であり、脾臓からのＴ細胞の９３．６％が二重陰性であった。
【0172】
しかしながら、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の中で、全ての細胞サブセットが、ＰＤ－１を発現する細胞を有していた。ＰＤ－１を発現することが有意な割合でこれまで見出されなかったＮＫ細胞が、ＮＫＧ２Ａ＋サブセット内を含め、ＰＤ－１陽性であることが腫瘍中で観察され、ＮＫ細胞の３１．８％（平均）がＮＫＧ２Ａ＋ＰＤ－１＋であった。腫瘍の外側のほとんどのＣＤ８ Ｔ細胞が、ＮＫＧ２Ａ発現を有していなかった一方、腫瘍中ではＰＤ－１を発現するＣＤ８ Ｔ細胞が高頻度で見られた（腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞サブセットは、平均して２６．３％のＮＫＧ２Ａ＋陽性細胞を有していた）。さらに、このＮＫＧ２Ａ陽性ＣＤ８ Ｔ細胞サブセット内では、細胞のほとんどがＮＫＧ２Ａ＋ ＰＤ－１＋であった（１９．４％（平均）。さらに、ＣＤ８－ Ｔ細胞サブセットの中で、腫瘍におけるＴ細胞のわずか５．１％がＮＫＧ２Ａを発現し、Ｔ細胞のわずか３．６％が二重陽性ＮＫＧ２Ａ ＰＤ－１であったため、ＴＩＬと脾臓またはリンパ節細胞との間で観察されたＮＫＧ２Ａ発現の差はほとんどなかった。
【0173】
【表1】
【0174】
【表2】
【0175】
【表3】
【0176】
実施例３ － 腫瘍担持マウス中のＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１発現
腫瘍担持マウスにおけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１発現をさらに調べるために、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、様々な腫瘍細胞、ＲＭＡ－Ｒａｅ１、ＭＣ３８またはＲＭＡ株のいずれかを生着させた（皮下（ｓｃ））。腫瘍体積の影響を評価するために、マウスを、それらの腫瘍がそれぞれ５００、２０００および８００ｍｍ３の体積に達したときに殺処分した。
腫瘍担持マウスにおけるＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１発現をさらに調べるために、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、様々な腫瘍細胞、ＲＭＡ－Ｒａｅ１、ＭＣ３８またはＲＭＡ株のいずれかを生着させた（皮下（ｓｃ））。腫瘍体積の影響を評価するために、マウスを、それらの腫瘍がそれぞれ５００、２０００および８００ｍｍ３の体積に達したときに殺処分した。
【0177】
ＲＭＡ Ｒａｅ１（上側の列）、ＭＣ３８（中央の列）およびＲＭＡ（下側の列）での結果が、図３Ａおよび３Ｂに示される。ＮＫ細胞（図３Ａ）およびＣＤ８ Ｔ細胞（図３Ｂ）を、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ－１発現について、脾臓、腫瘍流入リンパ節（ＬＮ）および腫瘍におけるフローサイトメトリーによって分析した。２～４匹のうちの１匹の代表的なマウスが示される。
【0178】
ＮＫ細胞サブセットでは、腫瘍、リンパ節および脾臓における細胞は、約半分がＮＫＧ２Ａ陽性であり、半分がＮＫＧ２Ａ陰性であった。流入リンパ節または脾臓からのＮＫ細胞（それらのＮＫＧ２Ａ発現にもかかわらず）は、いずれもＰＤ１の有意な発現を示さなかった。しかしながら、ＲＭＡ－Ｒａｅ１およびＲＭＡからの腫瘍浸潤ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方を有意なレベルで発現した。特に大きい体積（２０００ｍｍ３）で殺処分された腫瘍株ＭＣ３８からの腫瘍浸潤ＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ａを発現した（５０％）が、ＰＤ１を有意に発現しなかった（３％）。
【0179】
集団の約半分でＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞と異なり、脾臓およびリンパ節からのＣＤ８ Ｔ細胞は、一般に、ＮＫＧ２ＡもＰＤ１も発現しなかった。しかしながら、腫瘍中において、ＣＤ８ Ｔ細胞の大部分が、ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方を発現した（ＲＭＡ－Ｒａｅ１における２８％、ＭＣ３８の４３％およびＲＭＡの４０％が二重陽性であった）。結果は、同様に、腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞ならびにＮＫ細胞が、さらに腫瘍細胞のタイプの違いを超えて、阻害性受容体ＮＫＧ２ＡおよびＰＤ１の両方によって制限されることが可能であり得ることを示唆する。
【0180】
実施例４ － ＰＤ－１処置に耐性のあるマウスにおけるＮＫＧ２Ａ発現腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞の増加
ＣＤ８ Ｔ細胞における抗ＰＤ１抗体による処置の効果を評価するために、細胞生着から１１、１４および１７日後にＭＣ３８腫瘍担持マウスを２００μｇのラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（ＩＣ）または中和抗マウスＰＤ－１モノクローナル抗体のいずれかで処置した。マウス（ｎ＝３／群）を３１日目に殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞を脾臓、腫瘍流入リンパ節（ＬＮ）および腫瘍におけるフローサイトメトリーによって特性評価した。ＣＤ８ Ｔ細胞中のＣＤ８ ＮＫＧ２Ａ＋の割合の平均＋／－ＳＤ（ｎ＝３）が示される。Ｐ＜０．００５（＊＊＊）、Ｐ＜０．０００５（＊＊＊＊）、統計的分析を二元配置ＡＮＯＶＡ、続いてテューキーの多重比較検定で実施した。
ＣＤ８ Ｔ細胞における抗ＰＤ１抗体による処置の効果を評価するために、細胞生着から１１、１４および１７日後にＭＣ３８腫瘍担持マウスを２００μｇのラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（ＩＣ）または中和抗マウスＰＤ－１モノクローナル抗体のいずれかで処置した。マウス（ｎ＝３／群）を３１日目に殺処分し、ＣＤ８ Ｔ細胞を脾臓、腫瘍流入リンパ節（ＬＮ）および腫瘍におけるフローサイトメトリーによって特性評価した。ＣＤ８ Ｔ細胞中のＣＤ８ ＮＫＧ２Ａ＋の割合の平均＋／－ＳＤ（ｎ＝３）が示される。Ｐ＜０．００５（＊＊＊）、Ｐ＜０．０００５（＊＊＊＊）、統計的分析を二元配置ＡＮＯＶＡ、続いてテューキーの多重比較検定で実施した。
【0181】
結果が図４に示される。他の実験において観察されるものと同様に、リンパ節の脾臓からのＣＤ８ Ｔ細胞は、ＮＫＧ２Ａを有意に発現しなかった。抗ＰＤ１抗体の投与は、脾臓またはリンパ節Ｔ細胞におけるＮＫＧ２Ａ発現のレベルの変化を全く生じなかった。しかしながら、腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞集団では、抗ＰＤ１抗体の投与により、ＮＫＧ２Ａ発現ＣＤ８ Ｔ細胞の５０％超の増加が生じた。結果は、非応答性のマウスにおいて、アイソタイプ対照ｍＡｂで処置されたマウスと比較して、ＮＫＧ２Ａを発現するＣＤ８ Ｔ細胞の有意な増加があることを示唆する。従って、ＮＫＧ２Ａ受容体は、抗ＰＤ１に対する低応答者において、腫瘍に対するＣＤ８ Ｔ細胞応答の阻害への増加した寄与を有し得る。従って、ＮＫＧ２Ａの中和は、抗ＰＤ１またはＰＤＬ１抗体などのＰＤ－１軸を中和する薬剤で処置された個人におけるＮＫＧ２Ａ制限Ｔ細胞の阻害を反転させるのに有用であり得る。
【0182】
実施例５ － 組み合わせ抗ＮＫＧ２Ａ／抗ＰＤ１遮断は腫瘍成長を阻害する
中和抗ＰＤ１抗体および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体による併用処置の効果を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍細胞を生着させ（皮下（ｓｃ））、中和抗ＰＤ１剤（中和抗ＰＤ－Ｌ１抗体）および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体で処置した。
中和抗ＰＤ１抗体および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体による併用処置の効果を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍細胞を生着させ（皮下（ｓｃ））、中和抗ＰＤ１剤（中和抗ＰＤ－Ｌ１抗体）および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体で処置した。
【0183】
簡潔に述べると、ＲＭＡ－Ｓ Ｑａ－１ Ｑｄｍ Ｂ２ｍ腫瘍体積が約８５ｍｍ３（ｎ＝８マウス／群）である１１日目にＣ５７ＢＬ／６マウスを無作為化し、１１、１４および１８日目にアイソタイプ対照、抗マウスＮＫＧ２Ａ ｍＡｂ（２００μｇ、静脈内（ｉｖ））、抗マウスＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ（２００μｇ、腹腔内（ｉｐ））または抗ｍＮＫＧ２Ａ／ｍＰＤＬ－１組み合わせで処置した。腫瘍体積を週に２回測定し、腫瘍が大きくなったか（体積＞２０００ｍｍ３）、潰瘍を生じたかまたは壊死したとき、マウスを殺処分し、ＮＫおよびＣＤ８ Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって特性評価した。
【0184】
経時的な腫瘍体積の中央値の進展が図５に示される。このモデルにおいて、抗ＮＫＧ２Ａでは、アイソタイプ対照と比較してわずかな抗腫瘍効果が得られたに過ぎず、抗ＰＤ－Ｌ１では、かなりの抗腫瘍効果が得られたが、腫瘍体積は２８日に向けて増加し、抗ＮＫＧ２Ａおよび抗ＰＤ－Ｌ１による併用処置では、腫瘍成長が完全に消失し、２８日目に観察された腫瘍体積の有意な増加はなかった。
【0185】
実施例６ － ＰＤ－１／－Ｌ１耐性がんのインビボモデル
Ａ２０細胞株は、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、Ｑａ－１ｂを発現しないマウスＢ細胞リンパ腫株である。Ｂａｌｂ／ｃマウスへ皮下注入すると、Ａ２０は、固形腫瘍を生じ、この固形腫瘍において、ＰＤ－Ｌ１発現が保持され、Ｑａ－１ｂ発現が誘導された。Ａ２０腫瘍成長は、ＮＫおよびＣＤ８ Ｔ細胞によって制御された。
Ａ２０細胞株は、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、Ｑａ－１ｂを発現しないマウスＢ細胞リンパ腫株である。Ｂａｌｂ／ｃマウスへ皮下注入すると、Ａ２０は、固形腫瘍を生じ、この固形腫瘍において、ＰＤ－Ｌ１発現が保持され、Ｑａ－１ｂ発現が誘導された。Ａ２０腫瘍成長は、ＮＫおよびＣＤ８ Ｔ細胞によって制御された。
【0186】
中和抗ＰＤ１抗体または中和抗ＰＤＬ１抗体による併用処置の効果を評価するために、Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８～１０週齢）に、Ａ２０腫瘍細胞（１×１０６個の細胞）を生着させ（皮下（ｓｃ））、アイソタイプ対照（ＩＣ）または中和抗マウスＰＤ－１抗体または中和抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体（２００μｇの抗ＰＤ１または抗ＰＤ－Ｌ１、腹腔内（ｉｐ）、１３、１７および２０日目）で処置した。腫瘍体積を週に２回測定し、腫瘍が大きくなったか（体積＞２０００ｍｍ３）、潰瘍を生じたかまたは壊死したとき、マウスを殺処分し、ＮＫおよびＣＤ８ Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって特性評価した。
【0187】
経時的な個人の腫瘍体積の進展が図６に示される。抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体のいずれも有意な抗腫瘍効果を生じなかった。アイソタイプ対照（ＩＣ）で処置された９匹のマウスの中で、部分的な退縮、一時的な完全な退縮または完全な退縮が観察されなかった。抗ＰＤ－１抗体処置で処置された９匹のマウスの中で、いずれのマウスも部分的な退縮を有さず、または一時的な完全な退縮が観察されず、２匹のマウスは完全な退縮を有していた。抗ＰＤ－Ｌ１抗体で処置された１０匹のマウスの中で、部分的な退縮または一時的な完全な退縮が観察されず、２匹のマウスは完全な退縮を生じた。
【0188】
多くの免疫浸潤細胞におけるＰＤ－１の高い発現、および腫瘍細胞におけるＰＤ－Ｌ１の高い発現にもかかわらず、抗ＰＤ－１または－ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂによる単独療法は、腫瘍成長のわずかな減少を生じたに過ぎなかった。興味深いことに、Ａ２０腫瘍浸潤ＮＫ細胞の５０％超およびＣＤ８ Ｔ細胞の約１０％がＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現した。ＮＫＧ２Ａ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞集団はまた、ＰＤ－１を同時発現した。Ｑａ－１ｂ発現は、腫瘍細胞の表面だけでなく、インビボで浸潤免疫細胞においても誘導された。
【0189】
実施例７ － 抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ１抗体は、ＰＤ－１／－Ｌ１耐性Ａ２０腫瘍の完全な腫瘍退縮をもたらす
Ａ２０腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１およびＱａ－１ｂの両方を同時発現したため、Ａ２０腫瘍を担持し、かつ中和抗ＰＤ－１抗体（実施例６を参照）を投与されたマウスを中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体でさらに処置した。
Ａ２０腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１およびＱａ－１ｂの両方を同時発現したため、Ａ２０腫瘍を担持し、かつ中和抗ＰＤ－１抗体（実施例６を参照）を投与されたマウスを中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体でさらに処置した。
【0190】
Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８～１０週齢）にＡ２０腫瘍細胞（１×１０６個の細胞）を生着させ（皮下（ｓｃ））、アイソタイプ対照（ＩＣ）、中和抗マウスＰＤ－１抗体、または抗ＰＤ－１および中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体（２００μｇ、腹腔内（ｉｐ）、１０、１３および１７日目）で処置した。腫瘍体積を、キャリパーを用いて週に２回測定した。腫瘍が大きくなったか（体積＞２０００ｍｍ３）、潰瘍を生じたかまたは壊死したとき、動物を安楽死させた。データは、１実験当たりの個人の腫瘍体積を表す。
【0191】
経時的な個人の腫瘍体積の進展が図７に示される。実施例６において観察されるものと同様に、腫瘍は、抗ＰＤ－１抗体またはアイソタイプ対照（ＩＣ）に耐性がある。アイソタイプ対照（ＩＣ）で処置された１０匹のマウスの中で、部分的な退縮が観察されず、１つの一時的な完全な退縮および１つの完全な退縮が観察された一方、抗ＮＫＧ２Ａ単独では、１つの部分的な退縮が観察され、一時的な完全な退縮が観察されず、１つの完全な退縮が観察された。抗ＰＤ－１抗体処置で処置された９匹のマウスの中で、いずれのマウスも部分的な退縮を有さず、１つの一時的な完全な退縮が観察され、３つの完全な退縮が観察された。しかしながら、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が追加される場合（図７において組み合わせと表示される）、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が追加されて処置された１０匹のマウスの中で、７つの完全な退縮が観察された（部分的な退縮または一時的な完全な退縮はなし）。従って、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による処置に耐性があるがんの処置において有望な治療可能性を有する。
【0192】
実施例８ － 抗ＮＫＧ２Ａ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ＰＤ１／－Ｌ１耐性Ａ２０腫瘍の完全な腫瘍退縮をもたらす
Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８週齢、ｎ＝１１／群）の皮下にＡ２０腫瘍細胞（５×１０６個の細胞）を生着させ、マウスを１１日目（腫瘍体積約５０ｍｍ３）に無作為化し、アイソタイプ対照（ＩＣ）、中和抗ＰＤ－Ｌ１抗体（５０μｇ、腹腔内（ｉｐ）、１１、１４、１８、２１、２５、２８日目）、ブロッキング抗ＮＫＧ２Ａ ｍＡｂ（２００μｇ、静脈内（ｉｖ）、１１、１４および１８日目）または両方のｍＡｂの組み合わせで処置した。腫瘍体積を、キャリパーを用いて週に２回測定した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたか、潰瘍を生じたかまたは壊死したとき、動物を安楽死させた。データは、個人の腫瘍曲線を表す。ＰＲ：部分的な退縮、ＣＲ：完全な退縮。
Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８週齢、ｎ＝１１／群）の皮下にＡ２０腫瘍細胞（５×１０６個の細胞）を生着させ、マウスを１１日目（腫瘍体積約５０ｍｍ３）に無作為化し、アイソタイプ対照（ＩＣ）、中和抗ＰＤ－Ｌ１抗体（５０μｇ、腹腔内（ｉｐ）、１１、１４、１８、２１、２５、２８日目）、ブロッキング抗ＮＫＧ２Ａ ｍＡｂ（２００μｇ、静脈内（ｉｖ）、１１、１４および１８日目）または両方のｍＡｂの組み合わせで処置した。腫瘍体積を、キャリパーを用いて週に２回測定した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたか、潰瘍を生じたかまたは壊死したとき、動物を安楽死させた。データは、個人の腫瘍曲線を表す。ＰＲ：部分的な退縮、ＣＲ：完全な退縮。
【0193】
経時的な個人の腫瘍体積の進展が図８に示される。実施例６において観察されるものと同様に、腫瘍は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはアイソタイプ対照（ＩＣ）に耐性がある。アイソタイプ対照（ＩＣ）で処置された１１匹のマウスの中で、部分的な退縮が観察されず、２つの完全な退縮（１８％）が観察された一方、抗ＮＫＧ２Ａ単独では、４つの完全な退縮が観察された。抗ＰＤ－Ｌ１抗体処置単独で処置された１１匹のマウスの中で、いずれもマウスも部分的な退縮を有さず、６つの完全な退縮が観察された。しかしながら、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が追加される場合、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が追加されて処置された１１匹のマウスの中で、９つの完全な退縮が観察された。従って、結果は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体による処置に耐性があるがんの処置において有望な治療可能性を有することを示す。
【0194】
本明細書において援用される刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は参照によってその全体が本明細書に援用され、かつ本明細書中の他の箇所で行われる任意の別個に提供される特定の文献の援用に関係なく、各参考文献が参照によって援用されると個々にかつ具体的に示され、その全体が本明細書中で説明された場合と同じ程度まで（法律で許容される最大範囲まで）援用される。
【0195】
「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」という用語ならびに同様の指示対象の使用は、本発明の説明に関連して、本明細書において他に記載されない限り、または文脈により明らかに否定されない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。
【0196】
他に規定されない限り、本明細書において提供される全ての正確な値は、対応する概略値を代表する（例えば、特定の因子または測定に関して提供される全ての正確な例示的な値は、必要に応じて「約」によって修飾される対応する概略測定値も提供すると考えることができる）。数に関連して「約」が使用される場合、これは、規定される数の＋／－１０％に対応する値を含むと規定され得る。
【0197】
１つまたは複数の要素に関して「含む」、「有する」、「包含する」または「含有する」などの用語を用いて本発明の任意の態様または実施形態を本明細書中で記載することは、他に規定されない限り、または文脈により明らかに否定されない限り、その１つまたは複数の特定の要素「からなる」、「から本質的になる」、または「を実質的に含む」、本発明の同様の態様または実施形態に対する支持を提供することが意図される（例えば、本明細書において特定の要素を含むと記載される組成物は、他に規定されない限り、または文脈により明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物も記載すると理解されるべきである）。
【0198】
本明細書において提供されるいずれかおよび全ての例、または例示的な言葉（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することのみが意図され、他で主張されない限り、本発明の範囲に限定を課さない。本明細書中の言葉は、特許請求されていない任意の要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されてはならない。
【図1-1】
【図1-2】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】