特許 7534886 充填カラムの製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-06

(45)【発行日】2024-08-15

(54)【発明の名称】充填カラムの製造方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 30/56 20060101AFI20240807BHJP

   G01N 30/60 20060101ALI20240807BHJP

【ＦＩ】

G01N30/56 A

G01N30/60 B

【請求項の数】 6

(21)【出願番号】P 2020135320

(22)【出願日】2020-08-07

(65)【公開番号】P2022030969

(43)【公開日】2022-02-18

【審査請求日】2023-07-05

(73)【特許権者】

【識別番号】390030188

【氏名又は名称】ジーエルサイエンス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100063842

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 三雄

(74)【代理人】

【識別番号】100118119

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 大典

(72)【発明者】

【氏名】鈴木 幸治

(72)【発明者】

【氏名】平松 由香

(72)【発明者】

【氏名】難波 健一

(72)【発明者】

【氏名】松浦 浩

【審査官】草川 貴史

(56)【参考文献】

【文献】特表２００５－５３８３７６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特許第５６７１０６５（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】特開平１１－１７４０３６（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許第０５４７２５９８（ＵＳ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３０／００－３０／９６

Ｂ０１Ｊ ２０／２８１－２０／２９２

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

カラム管内に充填剤を充填した後に、フィルタが設置された、ピッチが１～１．５ｍｍのナットを前記カラム管にねじ込んで、前記フィルタが充填層に接触した後、前記ナットを４回転以下回転させて、前記フィルタを前記カラム管内に挿入し、前記フィルタで前記充填層を圧縮することを特徴とする充填カラムの製造方法。

【請求項2】

前記ナットを前記カラム管にねじ込む前の前記カラム管内の充填剤の密度が、０．５９９～０．７２２ｇ／ｃｍ ^３ であることを特徴とする請求項１に記載の充填カラムの製造方法。

【請求項3】

前記カラム管の一端側から前記充填層を圧縮することを特徴とする請求項１又は２に記載の充填カラムの製造方法。

【請求項4】

前記カラム管の両端側から前記充填層を圧縮することを特徴とする請求項１又は２に記載の充填カラムの製造方法。

【請求項5】

前記充填カラムは、カラム管、ナット及びフィルタを備えて構成され、前記カラム管の外側面及びナットの内側面には嵌り合うねじが構成されていることを特徴とする請求項１から４のうちいずれか１項に記載の充填カラムの製造方法。

【請求項6】

前記カラム管の他端側に、前記カラム管内に挿入されないフィルタを設置することを特徴とする請求項３に記載の充填カラムの製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、充填カラムの製造方法に関し、詳しくは、充填剤が充填されていないカラム管に充填剤を充填する充填カラムの製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

液体クロマトグラフ（液体クロマトグラフィー装置）を用いた分析や分取等において、試料中の目的化合物の分離を行うために、カラム管の内部空間に粒状の充填剤が詰められて構成された充填層を備えた、一定の長さ即ち固定長の分離カラムが使用されている。

【0003】

しかし、分離カラム内の充填層即ち吸収剤吸着床は、分離カラムを通る移動相（溶離液）の流れによって生じる流体の力を受ける。この流体の力によって吸収剤吸着床が圧縮され、時間とともに崩壊し、ボイド即ち死体積が生じることで、分離カラムの性能に悪影響を及ぼすことがあった。

【0004】

そこで、上記の吸収剤吸着床の圧縮を常に最小化し、分離カラムへの悪影響を防ぐため、従来の設計による固定長の分離カラムで達成される吸収剤吸着床密度（充填層の充填剤の密度）よりも高い吸収剤吸着床密度を生成するべく、突出フィルタアセンブリを使用して分離カラム内の吸収剤吸着床密度を制御出来る分離カラム及び突出フィルタアセンブリを使用して分離カラム内の吸収剤吸着床密度を制御する方法が提案されている（特許文献１）。

【0005】

又、固定長の分離カラム内に充填剤を充填した後に、更に充填層を圧縮するために、管エンドピースを有するカラム管と、１以上の調節可能なアダプターアセンブリとを備えるクロマトグラフィーカラムであって、上記アダプターアセンブリが、ねじ山によって管エンドピースに取り付けられるエンドスリーブと、エンドスリーブに回転可能に取り付けられるエンドキャップと、エンドキャップを回すことによってプランジャが縦方向に移動できるように回転可能なエンドキャップと螺合するねじ山がねじ山付きプランジャロッドの端部に配置されたプランジャロッドを有するプランジャアセンブリとを備えており、上記プランジャロッドが縦方向溝を備えていて、上記アダプターアセンブリが、上記縦方向溝と係合してプランジャの回転を防ぐ突起を有する回転防止板を備えていて、回転防止板がエンドスリーブと管エンドピースとの間に配置され、回転防止板に、管エンドピースに対する回転防止板の回転を防ぐように構成された回転ロック構造が設けられている、クロマトグラフィーカラムが提案されている（特許文献２）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】特表２００５－５３８３７６号公報

【文献】特許第５６７１０６５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

このように、特許文献１に開示された技術は、突出フィルタアセンブリを使用して固定長の分離カラム内の充填層を圧縮し、充填層の充填剤の密度を上げて分離カラムを作製することで、分離カラムに移動相（溶離液）が流れる際に生じる流体の力により充填層が圧縮されてボイドが生じることを低減するための技術であった。

【0008】

一方、特許文献２に開示された技術は、カラムが、大きくて複雑なデバイスとなってしまい、又、高価な部品となってしまうので、実用性に欠けるという問題点があった。

【0009】

しかし、固定長の分離カラム内に充填剤を高圧充填した後に、更に突出フィルタアセンブリを取り付けて充填層を均一に圧縮するためには相当な力を必要とする。そのため、特許文献２に開示されている、可動ピストン様システムのような、大きくて複雑なデバイスではなく、安価な部品を用いて突出フィルタアセンブリを分離カラムのカラム管内に押し込んで固定するためには、それぞれにネジ溝を設けたカラム管とナットを用い、突出フィルタアセンブリをナットで覆った状態で、ナットをカラム管に回転させながらねじ込むことが適している。

【0010】

一方で、充填層の充填剤にフィルタが押し付けられた状態でナットを回転させながらねじ込むと、フィルタのカラム管側、即ち充填層側の表面が充填剤で擦られたり、フィルタのカラム管側から充填剤が食い込んだりして、又、フィルタの充填層側とは逆側の表面がナットや分散板等で擦られたりして、フィルタが損傷してしまう。そして、フィルタが損傷すると分離カラムの性能が低下してしまう。又、充填層にフィルタが押し付けられた状態でナットを回転させながらねじ込むと、充填層の充填状態が乱れてしまい、分離カラムの性能が低下してしまう。

【0011】

しかし、特許文献１では、上記問題点については触れられておらず、その解決方法についても全く開示されていなかった。

【0012】

そこで、本発明は、固定長の分離カラム内に充填剤を圧力をかけて充填した後に、更にフィルタをナットで覆った状態でナットを回転させながらカラム管にねじ込んで、フィルタが充填層を圧縮する際、フィルタの損傷を抑制し、又、充填剤の充填状態の乱れを抑制し、分離カラムの性能が低下することを抑制することを目的とする。そして、分離カラムを使用して得られるクロマトグラムにおいて、メインピーク後方に小さなピークを出現させないことを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0013】

上記課題を解決するための手段としての本発明は、カラム管内に充填剤を充填した後に、フィルタが設置されたナットを前記カラム管にねじ込んで、前記フィルタが充填層に接触した後、前記ナットを４．２５回転以下回転させて、前記フィルタを前記カラム管内に挿入し、前記フィルタで前記充填層を圧縮する充填カラムの製造方法である。

【0014】

又、上記充填カラムの製造方法において、前記ナットを４．０回転以下回転させる充填カラムの製造方法である。

【0015】

又、上記充填カラムの製造方法において、前記カラム管の一端側から前記充填層を圧縮する充填カラムの製造方法である。

【0016】

又、上記充填カラムの製造方法において、前記カラム管の両端側から前記充填層を圧縮する充填カラムの製造方法である。

【0017】

又、上記充填カラムの製造方法において、前記充填カラムは、カラム管、ナット及びフィルタを備えて構成され、前記カラム管の外側面及びナットの内側面には嵌り合うねじが構成されている充填カラムの製造方法である。

【0018】

又、上記充填カラムの製造方法において、前記カラム管の他端側に、前記カラム管内に挿入されないフィルタを設置する充填カラムの製造方法である。

【発明の効果】

【0019】

以上のような本発明によれば、固定長の分離カラム内に充填剤を圧力をかけて充填した後に、更にフィルタをナットで覆った状態でナットをカラム管にねじ込んで、フィルタが充填層を圧縮する際、フィルタの損傷を抑制すること、又、充填剤の充填状態の乱れを抑制することが可能となった。又、その際に、分離カラムの性能が低下することを抑制することが可能となった。更に、分離カラムを使用して得られるクロマトグラムにおいて、メインピーク後方に小さなピークを出現させないことが可能となった。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】本発明一実施形態製造工程図

【図2】本発明他実施形態製造工程図

【図3】本発明他実施形態製造工程図

【図4】３’－フルオロアセトアニリドの溶出パターンのクロマトグラム

【発明を実施するための形態】

【0021】

以下、本発明の実施の形態を説明する。本発明は、カラム管内に充填剤を充填した後に、更にフィルタをナットで覆った状態で、ナットをカラム管に回転させながらねじ込んで、フィルタが、充填された充填剤で構成された充填層に接触した後、ナットを４．２５回転以下回転させて、フィルタをカラム管内に挿入し、フィルタで充填層を押圧し、圧縮する充填カラムの製造方法である。尚、ナットの回転において、１回転は３６０度の回転を意味する。

【0022】

本発明に用いられる充填カラム１は、カラム管２、ナット３、及びフィルタ４１又は／及びフィルタ４２を備えて構成されている。カラム管２の外側面及びナット３の内側面には嵌り合うねじが構成され、詳しくは、カラム管２の両端外側面２０には、図示しないおねじが構成され、ナット３の内側面３０には、図示しないめねじが構成され、ナット３は、充填カラム１の両端にねじ込まれて設置される。

【0023】

ねじはＩＳＯメートルねじを用いるが、ユニファイ規格やウィット規格のインチねじを用いることが出来る。メートルねじはＩＳＯ規格並目、ＩＳＯ規格細目、旧ＪＩＳ規格を用いることが出来る。又、ねじのピッチは特に限定されないが、０．５ｍｍ～１．５ｍｍのものを用いることが好ましく、特に０．８ｍｍ～１．２ｍｍのもの、更には、１．０ｍｍ程度のものを用いることが好ましい。

【0024】

図１に示す充填カラム１は、カラム管２の一端側２１からフィルタ４１で充填層１００を圧縮するための構成である。カラム管２の一端側２１にはパッキンの先端部５１２が基部５１１より細く構成されてカラム管２内に挿入可能且つカラム管２をシール可能に構成されたパッキン５１が用いられ、フィルタ４１の周縁がパッキン５１で被覆されてパッキン付きフィルタ４５が構成され、パッキン付きフィルタ４５は、パッキンの基部５１１がナット３の内側の底部に設けられた凹部３１に嵌め込まれて設置されている。フィルタ４１の直径及びパッキン５１の先端部５１２の直径はカラム管２の内径より短く構成され、パッキン５１の基部５１１の直径はカラム管２の内径より長く構成されている。

【0025】

カラム管２の他端側２２にはパッキンの先端部５２２が基部５２１より太く、且つカラム管２内に挿入することが出来ない太さで且つカラム管２をシール可能に構成されたパッキン５２が用いられ、フィルタ４２の周縁がパッキン５２で被覆されてパッキン付きフィルタ５４が構成され、パッキン付きフィルタ５４は、パッキンの基部５２１がナット３の凹部３１に嵌め込まれて設置されている。フィルタ４２の直径は、カラム管２の内径と同一に構成され、パッキン５２の先端部５２２の内径はカラム管２の内径と同一に構成され、基部５２１の直径はカラム管２の内径より長く構成されている。尚、パッキン５２でカラム管２をシール可能であれば、パッキン５２の内径を変化させて、フィルタ４２の直径を、カラム管２の内径より長く又は短く構成することとしてもよい。

【0026】

又、ナット３のフィルタ４１、４２が設置される凹部３１の底部には分散スペース３９を設けている。分散スペース３９には、分散板を設置し或いは分散機構を設けてもよい。カラム管２の一端側２１と他端側２２に設置されるナット３は同一形状であり、凹部３１には、カラム管２内に入り充填層１００を押圧するパッキン付きフィルタ４５とカラム管の開口を塞ぐパッキン付きフィルタ５４の両方を設置することが出来る。尚、カラム管２の一端側２１と他端側２２は、どちらが充填カラム１の移動相等が流入する側である入り口側でも、流出する側である出口側であってもよい。

【0027】

カラム管２に充填剤を充填して充填カラムを製造する方法は、先ず、図１（ａ）に示すように、フィルタ４２をナット３で覆った状態で、カラム管２の他端側２２にナット３を回転させてねじ込んで、パッキン付きフィルタ５４を設置する。この際、フィルタ４２及びパッキン５２はカラム管２の内部には挿入されない。パッキン５２により、カラム管２の他端側２２はシールされ、この状態で充填剤をカラム管２の内部に充填し、充填層１００を形成する。この充填時には公知のパッカーを用いて、圧力を加えて、又は加えずに充填する。そして、図１（ｂ）に示すように、フィルタ４１をナット３で覆った状態で、カラム管２の一端側２１に、フィルタ４１が設置されたナット３を回転させながらねじ込んで、パッキン付きフィルタ４５を設置し、フィルタ４１が充填剤で構成された充填層１００に接触した後、図１（ｃ）に示すように、ナット３を４．２５回転以下回転させて、言い換えれば４回と１／４回転以下の回転数でねじ込んで、ナット３をフィルタ４１と共に矢印Ａ方向に移動させ、フィルタ４１をカラム管２内に挿入し、フィルタ４１で矢印Ｂ方向に充填層１００を押圧し、圧縮する。この際、パッキン５１もカラム管２内に挿入され、充填層１００を押圧し、圧縮すると共に、カラム管２の一端側２１をシールする。図１（ａ）の工程での充填完了後は、充填層１００の上面１０１は平面状にし、図１（ｂ）の工程でフィルタ４１が充填層１００に接触する際には、フィルタ４１と充填層１００の上面１０１は面接触とすることが好ましい。又、ナット３のねじ込みの回転数は、１回転～４．２５回転であるが、特に１回転～４．０回転が好ましい。尚、図１（ｂ）の工程で、フィルタ４１が充填層１００に接触した時は、未だフィルタ４１は充填層１００を押圧、圧縮していない。

【0028】

ナット３を４．２５回転以下或いは４．０回転以下の回転数でねじ込むことにより、充填剤やフィルタの表面の損傷を抑制することが可能となった。そして、分離カラムの性能が低下することを抑制することが可能となった。結果として、分離カラムを使用して得られるクロマトグラムにおいて、メインピーク後方に小さなピークを出現させないことが可能となった。

【0029】

以上のような図１に示す実施の形態では、カラム管２の一端側２１のパッキン付きフィルタ４５、即ちフィルタ４１及びパッキン５１と、他端側２２のパッキン付きフィルタ５４、即ちフィルタ４２及びパッキン５２は形状が異なるが、図２に示すように、カラム管２の一端側２１及び他端側２２のパッキン付きフィルタ、即ちフィルタ及びパッキンの形状を同一とすることも出来る。

【0030】

図２に示す充填カラム１は、カラム管２の一端側２１からフィルタ４１で充填層１００を圧縮するための構成である。具体的には、カラム管２の一端側２１及び他端側２２に、パッキンの先端部５１２が基部５１１より細く構成されてカラム管２内に挿入可能且つカラム管２をシール可能に構成されたパッキン５１が用いられ、フィルタ４１の周縁がパッキン５１で被覆されてパッキン付きフィルタ４５が構成され、パッキン付きフィルタ４５は、パッキンの基部５１１がナット３の凹部３１に嵌め込まれて設置されている。フィルタ４１の直径及びパッキン５１の先端部５１２の直径はカラム管２の内径より短く構成され、パッキン５１の基部５１１の直径はカラム管２の内径より長く構成されている。又、ナット３の凹部３１の底部には分散スペース３９を設けている。分散スペース３９には分散板を設置し或いは分散機構を設けてもよい。

【0031】

カラム管２に充填剤を充填して充填カラム１を製造する方法は、先ず、図２（ａ）に示すように、フィルタ４１をナット３で覆った状態で、カラム管２の他端側２２にナット３を回転させながらねじ込んで、フィルタ４１をカラム管２内に挿入し、パッキン付きフィルタ４５を設置する。この際、フィルタ４１及びパッキン５１はカラム管２の内部に挿入され、カラム管２の他端側２２をシールする。この状態で充填剤をカラム管２の内部に充填する。そして、充填剤で充填層１００を形成する。この充填時には公知のパッカーを用いて、圧力を加えて、又は加えずに充填する。そして、図２（ｂ）に示すように、フィルタ４１をナット３で覆った状態で、カラム管２の一端側２１にフィルタ４１が設置されたナット３をねじ込んで、パッキン付きフィルタ４５を設置し、フィルタ４１が充填剤で構成された充填層１００に接触した後、図２（ｃ）に示すように、ナット３を４．２５回転以下回転させて、言い換えれば４回と１／４回転以下の回転数でねじ込んで、ナット３をフィルタ４１と共に矢印Ａ方向に移動させ、フィルタ４１をカラム管２内に挿入し、フィルタ４１で矢印Ｂ方向に充填層１００を押圧し、圧縮する。この際、パッキン５１もカラム管２内に挿入され、充填層１００を押圧し、圧縮すると共に、カラム管２の一端側２１をシールする。又、ナット３のねじ込みの回転数は、１回転～４．２５回転であるが、特に１回転～４．０回転が好ましい。

【0032】

以上のような図１及び図２に示す実施の形態は、カラム管２の一端側２１からのみフィルタ４１で充填層１００を圧縮する方法であるが、図３に示す充填カラム１は、カラム管２の両端側、即ち一端側２１及び他端側２２からフィルタ４１で充填層１００を圧縮するための構成である。

【0033】

パッキンの先端部５１２が基部５１１より細く構成されてカラム管２内に挿入可能且つカラム管２をシール可能に構成されたパッキン５１を２個と、パッキンの先端部５２２が基部５２１より太く、且つカラム管２内に挿入することが出来ない太さで且つカラム管２をシール可能に構成されたパッキン５２が用いられる。

【0034】

カラム管２に充填剤を充填して充填カラムを製造する方法は、先ず、図３（ａ）に示すように、フィルタ４２をナット３で覆った状態で、カラム管２の他端側２２にナット３を回転させながらねじ込んで、パッキン付きフィルタ５４を設置する。この際、フィルタ４２及びパッキン５２はカラム管２の内部には挿入されない。パッキン５２により、カラム管２の他端側２２はシールされ、この状態で充填剤をカラム管２の内部に充填する。そして、充填された充填剤で充填層１００を形成する。この充填時には公知のパッカーを用いて、圧力を加えて、又は加えずに充填する。そして、図３（ｂ）に示すように、フィルタ４１をナット３で覆った状態で、カラム管２の一端側２１にフィルタ４１が設置されたナット３をねじ込んで、パッキン付きフィルタ４５を設置し、フィルタ４１が充填剤で構成された充填層１００に接触した後、図３（ｃ）に示すように、充填カラム１の上下を逆さまにし、カラム管２の他端側２２からナット３を外し、パッキン付きフィルタ５４を外す。

【0035】

そして、図３（ｄ）に示すように、フィルタ４１をナット３で覆った状態で、カラム管２の他端側２２にナット３を回転させながらねじ込んで、パッキン付きフィルタ４５を設置し、フィルタ４１が充填剤で構成された充填層１００に接触した後、図３（ｅ）に示すように、他端側２２及び一端側２１で、夫々ナット３を４．２５回転以下回転させて、言い換えれば４回と１／４回転以下の回転数でねじ込んで、ナット３をフィルタ４１と共に矢印Ａ及び矢印Ａ２方向に移動させ、フィルタ４１をカラム管２内に挿入し、フィルタ４１で矢印Ｂ１及び矢印Ｂ２方向に充填層１００を押圧し、圧縮する。この際、パッキン５１もカラム管２内に挿入され、充填層１００を押圧し、圧縮すると共に、カラム管２の一端側２１をシールする。他端側２２及び一端側２１の夫々で、ナット３をねじ込むが、このねじ込みは同時でもよいが時間差を設け、交互に或いは一方の終了後に他方をねじ込むこととしてもよい。又、ナット３のねじ込みの回転数は、夫々１回転～４．２５回転であるが、特に１回転～４．０回転が好ましい。

【0036】

このように、カラム管２の両端側から充填層１００を圧縮することにより、一端側から圧縮するよりも、同じだけ圧縮する場合に、一方のナットの回転数を半減することが出来、よりフィルタの損傷を抑制することが出来、又、充填剤の充填密度の分布をより均一にすることが出来る。

【0037】

このように、４．２５回転以下、より確実には４．０回転以下の回転数でねじ込むことにより、充填剤の充填状態の乱れやフィルタの表面の損傷を抑制することが可能となった。そして、分離カラムの性能が低下することを抑制することが可能となった。結果として、分離カラムを使用して得られるクロマトグラムにおいて、メインピーク後方に小さなピークを出現させないことが可能となった。ここで、ねじの形状や規格、充填の密度にかかわらず、回転数にのみ影響を受けるのは、回転によりフィルタや充填剤の充填状態が破壊されるからである。

【実施例1】

【0038】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込み、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。夫々の分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表１に示す。

【0039】

詳しくは、図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管２にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管２出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．５９９ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した（図１（ａ））。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に接するまでカラム管２にねじ込んだ（図１（ｂ））。その後入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、比較例として、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した（図１（ｃ））。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管２のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0040】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、４９ｍｍ、４８ｍｍ、４７．５ｍｍ、４７ｍｍ、４６．７５ｍｍ、４６．５ｍｍ、４６．２５ｍｍ、４６ｍｍ、４５．７５ｍｍ、４５．５ｍｍ、４５．２５ｍｍ、４５ｍｍとなった。

【0041】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0042】

【表1】

【0043】

入口側のナット３を１回転～４．２５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層１００に押し込んだ９種の分離カラム（充填層の長さ４９ｍｍ～４５．７５ｍｍの分離カラム）（実施例１－１～実施例１－９）で得られたクロマトグラムでは、一例として示す、ナット３を２回転させて作製した、充填層の長さ４８ｍｍの分離カラムで得た、図４（ａ）のクロマトグラムと同様に、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層１００に押し込んだ３種の分離カラム（充填層の長さ４５．５ｍｍ～４５ｍｍの分離カラム）（比較例１－１～比較例１－３）で得られたクロマトグラムでは、一例として示す、充填層の長さ４５．５ｍｍの分離カラムで得た、図４（ｂ）のクロマトグラムと同様に、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。尚、小さなピークは、表１から表６中においては肩ピークと表す。

【実施例2】

【0044】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。それぞれの分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表２に示す。

【0045】

詳しくは、図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管にねじ込み、出口側フィルタをカラム管２内には入れず、カラム管２出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６５８ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当たるまでカラム管にねじ込んだ。その後入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、比較例として、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0046】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、４９ｍｍ、４８ｍｍ、４７．５ｍム、４７ｍｍ、４６．７５ｍｍ、４６．５ｍｍ、４６．２５ｍｍ、４６ｍｍ、４５．７５ｍｍ、４５．５ｍｍ、４５．２５ｍｍ、４５ｍｍとなった。

【0047】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0048】

【表2】

【0049】

入口側のナット３を１回転～４回転させて入口側のフィルタ４１を充填層１００に押し込んだ８種の分離カラム（充填層の長さ４９ｍｍ～４６ｍｍの分離カラム）（実施例２－１～実施例２－８）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．２５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ４種の分離カラム（充填層の長さ４５．７５ｍｍ～４５ｍｍの分離カラム）（比較例２－１～比較例２－４）では、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。

【実施例3】

【0050】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。それぞれの分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表３に示す。

【0051】

詳しくは、図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管２にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６６９ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当たるまでカラム管にねじ込んだ。その後入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、比較例として、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0052】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、４９ｍｍ、４８ｍｍ、４７．５ｍム、４７ｍｍ、４６．７５ｍｍ、４６．５ｍｍ、４６．２５ｍｍ、４６ｍｍ、４５．７５ｍｍ、４５．５ｍｍ、４５．２５ｍｍ、４５ｍｍとなった。

【0053】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0054】

【表3】

【0055】

入口側のナット３を１回転～４回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ８種の分離カラム（充填層の長さ４９ｍｍ～４６ｍｍの分離カラム）（実施例３－１～実施例３－８）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．２５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ４種の分離カラム（充填層の長さ４５．７５ｍｍ～４５ｍｍの分離カラム）（比較例３－１～比較例３－４）では、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。

【実施例4】

【0056】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。それぞれの分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表５に示す。

【0057】

詳しくは、図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラム管、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６６９ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当接するまでカラム管２にねじ込んだ。その後入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、比較例として、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管のネジの形状はメートル細目ネジＭ３０×１．５とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１．５ｍｍ移動した。

【0058】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、４８．５ｍｍ、４７ｍｍ、４６．２５ｍｍ、４５．５ｍｍ、４５．２２ｍｍ、４４．７５ｍｍ、４４．３７ｍｍ、４４ｍｍ、４３．６２ｍｍ、４３．２５ｍｍ、４２．８７ｍｍ、４２．５ｍｍとなった。

【0059】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0060】

【表4】

【0061】

入口側のナット３を１回転～４．２５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ９種の分離カラム（充填層の長さ４８．５ｍｍ～４３．６２ｍｍの分離カラム）（実施例４－１～実施例４－９）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ３種の分離カラム（充填層の長さ４３．２５ｍｍ～４２．５ｍｍの分離カラム（比較例４－１～比較例４－３））では、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。

【実施例5】

【0062】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。それぞれの分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表５に示す。

【0063】

図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ１００ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管２出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６６８ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層に接触するまでカラム管２にねじ込んだ。その後、入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、比較例として、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管２のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0064】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、９９ｍｍ、９８ｍｍ、９７．５ｍｍ、９７ｍｍ、９６．７５ｍｍ、９６．５ｍｍ、９６．２５ｍｍ、９６ｍｍ、９５．７５ｍｍ、９５．５ｍｍ、９５．２５ｍｍ、９５ｍｍとなった。

【0065】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0066】

【表5】

【0067】

入口側のナット３を１回転～４回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ８種の分離カラム（充填層の長さ９９ｍｍ～９６ｍｍの分離カラム）（実施例５－１～実施例５－８）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．２５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ４種の分離カラム（充填層の長さ９５．７５ｍｍ～９５．０ｍｍの分離カラム）（比較例５－１～比較例５－４）では、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。

【実施例6】

【0068】

図１に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を１回転～５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が１２種の分離カラムを作製した。それぞれの分離カラムを、液体クロマトグラフを用いて評価した。結果を表６に示す。

【0069】

詳しくは、図１に示すように、内径２０ｍｍ、長さ１５０ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管２にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管２出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ－８０Ａ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．７２２ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２にねじ込んだ。その後入口側のナット３を、実施例として、１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、比較例として、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ、ねじ込みの回転数が異なる１２種の分離カラムを作製した。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管２のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0070】

１２種の分離カラムは、入口側のナット３の回転数が１回転、２回転、２．５回転、３回転、３．２５回転、３．５回転、３．７５回転、４回転、４．２５回転、４．５回転、４．７５回転、５回転の順で、充填層の長さが、夫々、１４９ｍｍ、１４８ｍｍ、１４７．５ｍｍ、１４７ｍｍ、１４６．７５ｍｍ、１４６．５ｍｍ、１４６．２５ｍｍ、１４６ｍｍ、１４５．７５ｍｍ、１４５．５ｍｍ、１４５．２５ｍｍ、１４５ｍｍとなった。

【0071】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0072】

【表6】

【0073】

入口側のナット３を１回転～４回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ８種の分離カラム（充填層の長さ１４９ｍｍ～１４６ｍｍの分離カラム）（実施例６－１～実施例６－８）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良かったが、入口側のナット３を４．２５回転～５回転させて入口側のフィルタ４１を充填層に押し込んだ４種の分離カラム（充填層の長さ１４５．７５ｍｍ～１４５ｍｍの分離カラム）（比較例６－１～比較例６－４）では、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークが現れた。また、小さなピークが現れ始めた後は、その小さなピークの面積値は、入口側のナット３の回転数が多くなり、入口側のフィルタ４１が充填層を押し込むほど大きな値となった。

【0074】

以上の実施例１～実施例６の結果より、以下のことがわかる。即ち、充填密度、ネジ規格、カラム長さ、充填層の長さが異なる場合でも、ナットを４．２５回転以下、実施例によっては４回転以下回転させてフィルタを充填層に押し込んだ分離カラムで得られたクロマトグラムのメインピーク形状は良いが、ナットを４．５回転以上、実施例によっては４．２５回転以上回転させてフィルタを充填層に押し込んだ分離カラムで得られたクロマトグラムでは、ピーク割れが起こり、ピーク形状が悪くなることが分かった。

【実施例7】

【0075】

図２に示すように、カラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するように入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３を４回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ分離カラムを作製した。分離カラムは液体クロマトグラフを用いて評価した。

【0076】

詳しくは、図２に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５８ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の出口側のフィルタ４１が設置された出口側のナット３をカラム管２にねじ込み、出口側のフィルタ４１をカラム管２内に４ｍｍ挿入して固定した。カラム管２の入口側に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６６９ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した（図２（ａ））。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、フィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２にねじ込んだ（図２（ｂ））。その後入口側のナット３を４回転させてねじ込み、フィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ分離カラムを作製した（図２（ｃ））。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管２のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３を１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。分離カラムは充填層の長さが、５０ｍｍとなった。

【0077】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0078】

入口側のナット３を４回転させて充填層１００に押し込んだ分離カラム（充填層の長さ５０ｍｍの分離カラム）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良く、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークは現れなかった。

【実施例8】

【0079】

図３に示すように、空の分離カラム、即ちカラム管２に充填剤を高圧充填し、内部の分散スペース３９に接合するようにフィルタ４１が設置された入口側のナット３と出口側のナット３を、フィルタが充填層１００に当たるまでカラム管２に回転させながらねじ込み、その後入口側のナット３と出口側のナット３をそれぞれ夫々４回転させてねじ込み、フィルタ４１が充填層１００を圧縮するように押し込んだ分離カラムを作製した。分離カラムは液体クロマトグラフを用いて評価した。

【0080】

詳しくは、図３に示すように、内径２０ｍｍ、長さ５８ｍｍのカラム管２、即ち空の分離カラムの出口側（ここでは他端側２２）に、カラム管２出口を塞ぐ形の出口側のフィルタ４２が設置された出口側のナット３をカラム管２にねじ込み、出口側のフィルタ４２をカラム管２内には入れず、カラム管２出口を塞ぐように出口側のナット３を固定した。カラム管２の入口側（ここでは一端側２１）に、オクタデシル化シリカゲル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標） ＯＤＳ、粒子径５μｍ、ジーエルサイエンス社）を２－プロパノールに分散させたスラリーを入れた、図示しないパッカーを取り付け、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて２－プロパノールを送液し、充填剤を高圧充填し、充填剤の密度が０．６６９ｇ／ｃｍ^３の充填層１００を形成した（図３（ａ））。その後パッカーを取り外し、カラム管２の入口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の入口側のフィルタ４１が設置された入口側のナット３を、入口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２にねじ込んだ（図３（ｂ））。続いてカラム管２の出口側から出口側のナット３を取り外し（図３（ｃ））、カラム管２の出口側に、カラム管２内に入り充填層１００を押し込める形の出口側のフィルタ４１が設置された出口側のナット３を、出口側のフィルタ４１が充填層１００に当たるまでカラム管２にねじ込んだ（図３（ｄ））。その後入口側のナット３と出口側のナット３それぞれを４回転させてねじ込み、入口側のフィルタ４１と出口側のフィルタ４１それぞれが充填層１００を圧縮するように押し込んだ分離カラムを作製した（図３（ｅ））。入口側のナット３、出口側のナット３及びカラム管のネジの形状はメートル細目ネジＭ２５×１とし、入口側のナット３、出口側のナット３それぞれを１回転させると軸方向に１ｍｍ移動した。

【0081】

クロマトグラムの採取は、分取用液体クロマトグラフＰＬＣ７６１（ジーエルサイエンス社）を使用し、送液ポンプＰＵ７１４Ｍ（ジーエルサイエンス社）を用いて移動相（アセトニトリル／水＝３０／７０，ｖ／ｖ）を２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液した。分離カラム恒温槽ＣＯ７０５Ｃ（ジーエルサイエンス社）の設定温度は３０℃とした。検出には、ＵＶ検出器（ＵＶ７０２、ジーエルサイエンス社）を使用した。検出波長は２５４ｎｍとした。試料には、３’－フルオロアセトアニリド（２０ｍｇ／ｍＬ）のアセトニトリル／水＝３０／７０溶液を使用した。試料注入容量は５０μＬとした。

【0082】

入口側のナット３、出口側のナット３それぞれを４回転させて充填層に押し込んだ分離カラム（充填層の長さ５０ｍｍの分離カラム）で得られたクロマトグラムでは、３’－フルオロアセトアニリドのメインピーク形状は良く、３’－フルオロアセトアニリドのメインピークの後ろ側に小さなピークは現れなかった。

【産業上の利用可能性】

【0083】

以上のような本発明によれば、分離カラムに移動相が流れる際に生じる流体の力により充填層が圧縮されてボイドが生じることを低減すると共に、フィルタの損傷を抑制し、分離カラムの性能が低下することを抑制することができるので、液体クロマトグラフを用いた分析や分取での利用価値が高く、液体クロマトグラフを用いた分析や分取を利用するさまざまな産業において利用される。

【符号の説明】

【0084】

１ 充填カラム
１００ 充填層
２ カラム管
２０ カラム管の外側面
２１ カラム管の一端側
２２ カラム管の他端側
３ ナット
３１ 凹部
３９ 分散スペース
４１ フィルタ
４２ フィルタ
５１ パッキン
５２ パッキン

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】