特許 7538241 ホスホジエステラーゼ５抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-13

(45)【発行日】2024-08-21

(54)【発明の名称】ホスホジエステラーゼ５抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/519 20060101AFI20240814BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20240814BHJP

   A61K 38/15 20060101ALI20240814BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240814BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240814BHJP

【ＦＩ】

A61K31/519 ZNA

A61K31/4985

A61K38/15

A61P35/02

A61P43/00 121

A61P43/00 111

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2022554735

(86)(22)【出願日】2021-03-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-20

(86)【国際出願番号】 KR2021003044

(87)【国際公開番号】W WO2021182897

(87)【国際公開日】2021-09-16

【審査請求日】2022-09-09

(31)【優先権主張番号】10-2020-0030208

(32)【優先日】2020-03-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】514326683

【氏名又は名称】サムスン ライフ パブリック ウェルフェア ファウンデーション

【氏名又は名称原語表記】ＳＡＭＳＵＮＧ ＬＩＦＥ ＰＵＢＬＩＣ ＷＥＬＦＡＲＥ ＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100120031

【弁理士】

【氏名又は名称】宮嶋 学

(74)【代理人】

【識別番号】100120617

【弁理士】

【氏名又は名称】浅野 真理

(74)【代理人】

【識別番号】100126099

【弁理士】

【氏名又は名称】反町 洋

(72)【発明者】

【氏名】キム、ウォンソク

(72)【発明者】

【氏名】パク、チェファ

(72)【発明者】

【氏名】キム、ジュヒョン

【審査官】川合 理恵

(56)【参考文献】

【文献】Ann. Oncol.，2016年，Vol. 27，pp. 508-513

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物であって、
前記薬学的組成物は、ＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性抑制用であり、
前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤がシルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）及びウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）からなる群から選択される一つ以上であり、
前記ＨＤＡＣ抑制剤がロミデプシンである、
ＮＫ－Ｔ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ）細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項2】

前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病である、請求項１に記載のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項3】

前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、ＨＤＡＣ抑制剤によりエプスタイン・バール・ウイルスが再活性されるものである、請求項１に記載のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項4】

ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物であって、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤がシルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）及びウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）からなる群から選択される一つ以上であり、前記ＨＤＡＣ抑制剤がロミデプシンである、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項5】

前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、請求項４に記載のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項6】

前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、ＨＤＡＣ抑制剤によりエプスタイン・バール・ウイルスが再活性されるものである、請求項４に記載のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物。

【請求項7】

ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対する抗がん治療補助用組成物であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性であり、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤がシルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）及びウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）からなる群から選択される一つ以上である、抗がん治療補助用組成物。

【請求項8】

ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性であり、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤がシルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）及びウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）からなる群から選択される一つ以上である、健康機能食品。

【請求項9】

ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性であり、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤がシルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）及びウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）からなる群から選択される一つ以上であり、前記ＨＤＡＣ抑制剤がロミデプシンである、健康機能食品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤を含むＮＫ－Ｔ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ）細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物、抗がん治療補助用組成物及び健康機能食品に関し、特に、ＨＤＡＣ抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性を抑制する薬学的組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ）に属するエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｂｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ））は、９０％以上の健常人に感染され、ほとんどのヒトで無症状の潜伏感染を起こすが、骨髄移植後または臓器移植等で免疫系が長期的に低下した個人でＥＢＶは、リンパ細胞増殖性疾患（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、鼻咽頭癌腫（Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ））、ホジキン疾患（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）等の腫瘍を誘発する原因と知られている。ＥＢＶと関連性のあるリンパ細胞性疾患として、ホジキンリンパ腫を含めて鼻型（ｎａｓａｌ ｔｙｐｅ）リンパ節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫と移植後リンパ増殖性疾患（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ、ＰＴＬＤ）等がある。リンパ増殖性疾患は、非ホジキンリンパ腫に属し、固形臓器移植あるいは造血幹細胞移植後、供与者のＥＢＶの潜伏と持続的な免疫抑制剤投与の結果でリンパ球性あるいは形質細胞性増殖が起こる多重クローンＢリンパ球増殖疾患等の良性疾患から悪性リンパ腫の悪性疾患まで多様な臨床様相を示す疾患であり、臓器移植患者の１－１５％で発生する全身に生じる深刻な合併症である。近年は、一部の胃癌にＥＢＶ遺伝子が発現するものと判明しており、日本と韓国では全体胃癌の５～１０％と知られている。鹿児島大学研究チームは、日本をはじめとする７カ国でＥＢＶ陽性である関連胃癌の分布を調査した結果、ＥＢＶ関連胃癌の頻度（ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ）は、日本（１．０）に比してロシア（１．９）、コロンビア（２．５）、チリ（２．７）等の高い比率を示した。

【0003】

既存の治療法としては、免疫抑制剤の減量、抗ウイルス剤の使用、抗がん化学療法、そしてＲｉｔｕｘｉｍａｂ抗体投与等が施行されてきているが、治療反応率の差があって未だ効果的な治療法は確立されていない状況であり、従って、ＥＢＶ関連腫瘍の治療及び完治のための新たな治療法開発努力が急がれるものと思料される。

【0004】

ＥＢＶ感染に対するＥＢＶ抗原－特異Ｔ細胞（ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ）を利用した養子縁組免疫治療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）は、Ｄｒ．ＢｒｅｎｎｅｒグループでＥＢＶ抗原－特異ＣＴＬを試験管内で誘導して造血幹細胞移植後ＥＢＶ感染疾患またはＥＢＶ－関連リンパ腫、咽喉頭癌等の腫瘍を治療するための研究が進行し、韓国内では本発明者らを含む研究グループで最初にＥＢＶ陽性リンパ腫患者及び急性白血病患者を対象に抗原－特異殺細胞Ｔ細胞を利用した養子縁組免疫治療を成功したことがある。体外で培養された抗原－特異Ｔ細胞を利用した養子縁組免疫治療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）は、抗体治療剤の限界を克服できる長所にもかかわらず、腫瘍－関連抗原に対する免疫寛容（ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）状態を克服し、腫瘍細胞を認識・除去する高－親和性（ｈｉｇｈ ａｖｉｄｉｔｙ）抗原－特異Ｔ細胞の試験管内培養技術の蓄積及び抗原－特異Ｔ細胞生産の高コストが必要な限界等によって汎用的臨床適用及び産業化に制限になっている。

【0005】

近年、腫瘍患者に対して抗体治療剤、治療用細胞性腫瘍ワクチン及び養子縁組細胞免疫治療法の限界を克服する養子縁組免疫治療法として遺伝子－変形（ｇｅｎｅ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）Ｔ細胞を利用した標的－免疫治療法（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）についての研究が盛んに進行している。特に、腫瘍抗原－特異ＴＣＲ遺伝子を利用した戦略は、個人合わせ型（ｔａｉｌｏｒ－ｍａｄｅ）治療法の限界を克服する既製品（ｏｆｆ－ｔｈｅ－ｓｈｅｌｆ）段階の汎用的標的－免疫治療法として開発されるものと予想される。しかし、抗原－特異ＴＣＲ遺伝子を確保するための腫瘍抗原－特異Ｔ細胞クローン確保及びＴＣＲ遺伝子クローニングの困難さによって韓国内の研究が不完全であり、海外研究者によって現在まで制限的に臨床研究が進行している。

【0006】

一方、ヒストンタンパク質は、細胞核の中で遺伝情報であるＤＮＡ鎖を巻いているタンパク質であって、ＤＮＡを凝縮しており、アセチル化とメチル化を通して遺伝子発現を増加または調節する機能を果たす。このようなアセチル化及びメチル化が減少し、調節に失敗する場合、癌が発生し得る。ヒストン脱アセチル化酵素であるＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）は、ヒストンのアセチル化程度を調節してＤＮＡ発現を抑制する機能を果たすところ、ＨＤＡＣが非正常に過発現すると癌が発生し得る。このようにＨＤＡＣの過発現により癌が誘発され得るところ、このような機序を抑制するために、ＨＤＡＣ抑制剤が抗がん剤として投与される。しかし、リンパ腫患者でＨＤＡＣ抑制剤はエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）の再活性化（ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を誘発し、ＥＢＶ再活性化が起こった後にはそれ以上治療方案がない実情である。従って、現在、リンパ腫でＥＢＶ再活性化を防ぐ治療剤の開発が急がれる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

そこで、本発明者らは、ＨＤＡＣ抑制剤により誘発されるエプスタイン・バール・ウイルスの再活性を抑制できる物質を研究していた中で、ホスホジエステラーゼ５抑制剤がＨＤＡＣ抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルスの再活性を抑制することを確認して本発明を完成した。

【0008】

従って、本発明の目的は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物を提供することである。

【0009】

また、本発明のまた他の目的は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を個体に投与するステップを含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法を提供することである。

【0010】

本発明のまた他の目的は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対する抗がん治療補助用組成物を提供することである。

【0011】

本発明のまた他の目的は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0012】

前記目的を達成するために、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、ＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性抑制用である、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物を提供する。

【0013】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物を提供する。

【0014】

前記また他の目的を達成するために、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を個体に投与するステップを含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法であって、ＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性を抑制することを特徴とする、方法を提供する。

【0015】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を個体に投与するステップを含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法を提供する。

【0016】

前記また他の目的を達成するために、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対する抗がん治療補助用組成物であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、抗がん治療補助用組成物を提供する。

【0017】

前記また他の目的を達成するために、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、健康機能食品を提供する。

【0018】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、健康機能食品を提供する。

【発明の効果】

【0019】

本発明に係るホスホジエステラーゼ５抑制剤を利用すれば、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対する抗がん剤として使用されるＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制でき、ＨＤＡＣ抑制剤の副作用を減少させることができ、抗がん効果を顕著に上昇させることができる。従って、前記効果に基づいて医薬業界分野で広く使用され得る。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1a】ＳＮＫ６細胞にロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、シルデナフィル（Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）をそれぞれ単独処理したか同時処理した場合に、処理時間を異にして、ＢＺＬＦ１の発現を確認した図である。

【図1b】ＮＫ９２ＭＩ細胞にロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、シルデナフィル（Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）をそれぞれ単独処理したか同時処理した場合に、処理時間を異にして、ＢＺＬＦ１の発現を確認した図である。

【図2a】ＳＮＫ６細胞にロミデプシン、シルデナフィルをそれぞれ単独処理したか同時処理した場合に、シルデナフィルの処理濃度を異にして、ＢＺＬＦ１の発現を確認した図である。

【図2b】ＮＫ９２ＭＩ細胞にロミデプシン、シルデナフィルをそれぞれ単独処理したか同時処理した場合に、シルデナフィルの処理濃度を異にして、ＢＺＬＦ１の発現を確認した図である。

【図3a】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｄａｕｄｉ）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図3b】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｄａｕｄｉ）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図3c】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｒａｊｉ）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図3d】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｒａｊｉ）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図3e】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（１Ａ２）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図3f】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（１Ａ２）で、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図4a】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｄａｕｄｉ）でも、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性をシルデナフィルが抑制する効果が現れるか否かをＥＢＶコピー数（ＥＢＶ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ）を通して確認した図である。

【図4b】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｄａｕｄｉ）でも、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性をシルデナフィルが抑制する効果が現れるか否かをＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図4c】ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞株以外のＥＢＶ陽性細胞株（Ｄａｕｄｉ）でも、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性をシルデナフィルが抑制する効果が現れるか否かをＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図5a】シルデナフィルがＳＮＫ６細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＥＢＶコピー数（ＥＢＶ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ）を通して確認した図である。

【図5b】シルデナフィルがＳＮＫ６細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図5c】シルデナフィルがＳＮＫ６細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図5d】ＳＮＫ６細胞でシルデナフィルによるＥＢＶ再活性抑制により腫瘍細胞の生存率が減少したことを確認した図である。

【図6a】シルデナフィルがＮＫ９２ＭＩ細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＢＲＬＦ５のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図6b】シルデナフィルがＮＫ９２ＭＩ細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図6c】シルデナフィルがＮＫ９２ＭＩ細胞でＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性を抑制するか否かをＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図6d】ＳＮＫ６細胞でシルデナフィルによるＥＢＶ再活性抑制により腫瘍細胞の生存率が減少したことを確認した図である。

【図7a】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるバルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図7b】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるバルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図7c】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図7d】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図7e】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるタダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＺＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【図7f】ＳＮＫ６細胞にＰＤＥ５抑制剤であるタダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）を単独処理したかロミデプシンと同時処理した場合に、前記ロミデプシンによるＥＢＶ再活性を前記ＰＤＥ５抑制剤が抑制する効果が現れるか否かを、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を通して確認した図である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、ＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性抑制用である、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物を提供する。

【0022】

本発明において、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病であるものであってよく、好ましくは、ＨＤＡＣ抑制剤によりＥＢＶが再活性化されるエプスタイン・バール・ウイルス陽性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病であってよい。

【0023】

本発明において、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＰＤＥ５抑制剤）は、陰茎の陰核海綿体に血液を供給する血管平滑筋細胞でｃＧＭＰ特異ホスホジエステラーゼ５型の分解作用を阻害する薬物と知られている。従って、勃起不全の治療に使用され、ＰＤＥ５は動脈血管壁にも存在するため、肺動脈高血圧の治療効果もあることが公知になっている。しかし、本発明のようにＨＤＡＣ抑制剤の副作用を抑制できる効果については公知になっていない。

【0024】

本発明において、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤は、シルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、ミロデナフィル（ｍｉｒｏｄｅｎａｆｉｌ）、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）、タダラフィル（ｔａｄａｌａｆｉｌ）、ウデナフィル（ｕｄｅｎａｆｉｌ）、ダサンタフィル（ｄａｓａｎｔａｆｉｌ）及びアバナフィル（ａｖａｎａｆｉｌ）からなる群から選択された一つ以上であってよく、好ましくは、シルデナフィル、バルデナフィル、タダラフィルまたはウデナフィルであってよいが、これに制限されない。

【0025】

本発明において、前記ＨＤＡＣ抑制剤は、抗がん効果のあるものであってよいが、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病患者に投与されたとき、ＥＢＶの再活性化が誘導されて抗がん効果が阻害されるものであってよい。本発明の前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤は、ＨＤＡＣ抑制剤により誘導されるＥＢＶの再活性化を抑制するものであってよい。

【0026】

本発明において、ＨＤＡＣ抑制剤は、ロミデプシン（Ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、ボリノスタット（Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、パノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）、ベリノスタット（Ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ）、エンチノスタット（Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ）、モセチノスタット（Ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ジビノスタット（Ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、プラシノスタット（Ｐａｃｔｉｎｏｓｔａｔ）、キシノスタット（Ｑｕｉｓｉｎｏｓｔａｔ）、アベキシノスタット（Ａｂｅｘｉｎｏｓｔａｔ）、ｃｈｒ－３９９６、及びＡＲ－４２からなる群から選択された一つ以上であってよい。

【0027】

本発明において、前記薬学的組成物は、ＨＤＡＣ抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性を抑制する用途に使用されるものであってよい。

【0028】

本発明において使用される用語「予防」は、本発明の組成物の投与で前記エプスタイン・バール・ウイルスの再活性を抑制させるか進行を遅延させる全ての行為を意味する。

【0029】

本発明において使用される用語「治療」は、本発明の組成物の投与でエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性を抑制して、前記ウイルスによる疾患、例えば、リンパ細胞増殖性疾患（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、鼻咽頭癌腫（Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ））、ホジキン疾患（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）等が好転または有益に変更される全ての行為を意味し、臨床的結果を含む有用な結果または好ましい結果を得るための試みを意味する。有用なまたは好ましい臨床的結果は、検出可能であるか可能でなくても、一つ以上の症状または状態の緩和または改善、疾病範囲の縮小、疾病状態の安定化、疾病発生の抑制、疾病拡散の抑制、疾病進行の遅延または遅らせ、疾病発病の遅延または遅らせ、疾病状態の改善または軽減、及び減退（部分または全体）を含むことができ、必ずしもこれに限定されるものではない。また、「治療」は、治療の不在で予測されること以上に患者の生存が延びることを意味し得る。また、「治療」は、疾病進行の抑制、一時的に疾病進行を遅らせることを意味し得、さらに好ましくは、疾病の進行を永遠に停止させることと関連がある。本発明においては、好ましくは、ＨＤＡＣ抑制剤の副作用を抑制してＨＤＡＣ抑制剤による抗がん効果を増進させて患者の生存を向上させることを意味し得る。

【0030】

本発明の薬学的組成物は、それぞれ常法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾル等の経口型剤形、外用剤、坐剤及び滅菌注射溶液の形態に剤形化して使用され得る。前記薬学組成物に含まれ得る担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油が挙げられる。製剤化する場合は、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤等の希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等が含まれ、このような固形製剤は、本発明の抽出物または化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチン等を混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外にマグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤等が該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤等が含まれ得る。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステル等が使用され得る。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン等が使用され得る。

【0031】

本発明の薬学的組成物の投与量は、治療を受ける対象の年齢、性別、体重と、治療する特定疾患または病理状態、疾患または病理状態の深刻度、投与経路及び処方者の判断によって変わるだろう。このような因子に基づいた投与量の決定は、当業者の水準内にあり、一般に、投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～略２０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。さらに好ましい投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１０００ｍｇ／ｋｇ／日である。投与は、一日に一度投与してもよく、数回分けて投与してもよい。前記投与量は、いかなる面でも本発明の範囲を限定するものではない。

【0032】

本発明の薬学的組成物は、マウス、家畜、ヒト等の哺乳動物に多様な経路で投与され得る。投与の全ての方式は予想され得るが、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内注射により投与され得る。

【0033】

本発明において、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物は、有効成分以外に、抗がん効果の上昇及び補強のために既に安全性が検証され、抗がん活性を有するものと公知になった任意の化合物や天然抽出物をさらに含むことができる。

【0034】

本発明の薬学的組成物を利用すれば、ＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶの再活性が抑制され、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を効果的に予防または治療できる。

【0035】

そこで、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を個体に投与するステップを含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法であって、ＨＤＡＣ（Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤によるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性を抑制することを特徴とする、方法を提供する。

【0036】

本発明において使用された用語、「個体」は、癌疾患を有している個体であって、好ましくは、ＨＤＡＣ抑制剤が治療効果を示す癌疾患を有しており、本発明によって前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を投与するとき、前記ＨＤＡＣ抑制剤により引き起こされるＥＢＶ再活性が抑制され、増進された治療効果を示すことのできるヒトを含む馬、羊、豚、山羊、犬等の哺乳動物を意味するが、好ましくは、ヒトを意味する。

【0037】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物を提供する。

【0038】

本発明の薬学的組成物を利用すれば、ＥＢＶの再活性が抑制され、ＨＤＡＣ抑制剤による抗がん効果が効果的に作用するところ、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を効果的に予防または治療できる。

【0039】

併せて、本発明の薬学的組成物は、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病の予防または治療のために単独で、または手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用することができる。

【0040】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を個体に投与するステップを含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法を提供する。

【0041】

前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病を治療する方法において、「個体」は、前述したとおりである。

【0042】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対する抗がん治療補助用組成物であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、抗がん治療補助用組成物を提供する。

【0043】

前記エプスタイン・バール・ウイルス陽性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、ＨＤＡＣ抑制剤によりＥＢＶが再活性化されるものであってよく、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤は、前記ＥＢＶの再活性化を抑制してＨＤＡＣ抑制剤の抗がん治療効果を増進させることを特徴とする。

【0044】

本明細書において使用された用語、「抗がん治療補助用組成物」は、抗がん剤による治療と並行して適用時、前記抗がん剤による副作用を防止して抗がん治療の効果を上昇的に増加させる組成物を意味する。

【0045】

従って、前記抗がん治療補助用組成物は、ＨＤＡＣ抑制剤または他の抗がん剤を利用した癌治療に補助的に使用され得、抗がん補助剤として抗がん剤と共に、同時にまたは順次に投与可能である。

【0046】

併せて、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、健康機能食品を提供する。

【0047】

また、本発明は、ホスホジエステラーゼ５抑制剤及びＨＤＡＣ抑制剤を含む、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または改善用健康機能食品であって、前記ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、エプスタイン・バール・ウイルス陽性である、健康機能食品を提供する。

【0048】

前記エプスタイン・バール・ウイルス陽性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病は、ＨＤＡＣ抑制剤によりＥＢＶが再活性化されるものであってよく、前記ホスホジエステラーゼ５抑制剤は、前記ＥＢＶの再活性化を抑制して前記ウイルスによる疾患、例えば、リンパ細胞増殖性疾患（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、鼻咽頭癌腫（Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ））、ホジキン疾患（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）等の疾患の発病を予防するか状態を改善することを特徴とする。

【0049】

本発明に係る健康機能食品は、機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ ｆｏｏｄ）及び食品添加剤（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）等の全ての形態を含む。前記類型の健康機能食品は、当業界に公知になった常法によって多様な形態に製造できる。

【0050】

例えば、健康食品としては、本発明の健康機能食品そのものを顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取するか、茶、ジュース及びドリンクの形態に製造して飲用するようにすることができる。また、本発明の健康機能食品をＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病に対して改善または治療効果があると知られた公知の物質または活性成分と共に混合して組成物の形態に製造できる。特に、前記公知の物質は、エプスタイン・バール・ウイルスの再活性を引き起こす物質であってよいが、これに制限されるものではない。

【0051】

また、機能性食品としては、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：フルーツ缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージコンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種のドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種の調味料（例：味噌、醤油、ソース等）等に本発明の健康機能食品を添加して製造できる。

【0052】

本発明の健康機能食品の好ましい含有量としては、これに限定されないが、例えば、最終的に製造された食品中、０．０１～８０重量％であってよく、好ましくは、最終的に製造された食品中、０．０１～５０重量％であってよい。

【0053】

また、本発明の健康機能食品を食品添加剤の形態で使用するためには、粉末または濃縮液の形態に製造して使用することができる。

【0054】

重複する内容は、本明細書の複雑性を考慮して省略し、本明細書において別に定義されていない用語は、本発明の属する技術の分野において通常使用される意味を有するものである。

【0055】

以下、本発明を実施例により詳細に説明する。ただし、下記実施例は、本発明を例示するものであるだけで、本発明の内容が下記実施例により限定されるものではない。

【実施例】

【0056】

実施例１．シルデナフィルのＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性化抑制効果確認
ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫細胞株であるＳＮＫ６（出処；ソウル大学校）とＮＫ細胞白血病細胞株であるＮＫ９２ＭＩ（出処；ソウル大学校）細胞株にＨＤＡＣ抑制剤であるロミデプシン１０ｎＭとＰＤＥ５阻害剤であるシルデナフィル１００ｎＭを２４、４８、７２時間の間処理した後、各時間毎に細胞を回収した。その後、ＴＲＩｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｍｂｉｏｎ、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を利用してＲＮＡを抽出し、Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ ＲＴ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を利用してｃＤＮＡ合成過程を経てｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲを通してＥＢＶ再活性過程で発現するｍＲＮＡであるＢＺＬＦ１の発現を確認した、ＤＭＳＯだけを処理した群を対照群とし、ＳＮＫ６細胞に対する結果は図１Ａに示し、ＮＫ９２ＭＩ細胞に対する結果は図１Ｂに示し、ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲで使用したプライマー配列を表１に示した。

【0057】

【表1】

【0058】

図１Ａ及び図１Ｂに示したように、ロミデプシン単独処理時、対照群と比較してＳＮＫ６細胞とＮＫ９２ＭＩ細胞でＢＺＬＦ１の発現が増加する傾向を確認して、ＥＢＶ（ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）が再活性化されることを確認した。これに対して、ロミデプシンとシルデナフィルを７２時間共に処理時、ロミデプシン単独処理群と比較してＢＺＬＦ１の発現が顕著に減少したことを確認して、シルデナフィルがロミデプシンにより増加したＥＢＶの再活性化を抑制することを確認した。

【0059】

実施例２．シルデナフィル濃度別のＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性化抑制効果確認
ＳＮＫ６とＮＫ９２ＭＩ細胞にシルデナフィルの濃度を１０、１００または１０００ｎＭとしてシルデナフィルを単一処理した群とロミデプシン１０ｎＭを同時処理した群を実験群とし、実施例１と同様の方法でＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現を測定した。処理時間は７２時間とし、ＳＮＫ細胞に対する結果は図２Ａに示し、ＮＫ９２ＭＩ細胞に対する結果は図２Ｂに示した。

【0060】

図２Ａ及び図２Ｂに示したように、シルデナフィルを併用処理した場合に、ロミデプシンによるＥＢＶの再活性化を抑制する効果が現れることを確認した。

【0061】

実施例３．シルデナフィルのＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性化抑制効果のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病特異性検証
３．１ ロミデプシンによりＥＢＶ再活性が現れる非－ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫及び非－ＮＫ細胞白血病細胞株の選別
ＳＮＫ６とＮＫ９２ＭＩ以外のＥＢＶ陽性細胞株を収集してロミデプシンによるＥＢＶ再活性とシルデナフィルの効果を確認した。ＥＢＶ陽性細胞株としてバーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｌｙｍｐｈｏｍａ）細胞であるＤａｕｄｉ細胞株（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－２１３）とＲａｊｉ細胞株（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－８６）、リンパ腫細胞である１Ａ２細胞株（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－８１１９）にロミデプシン１または１０ｎＭを７２時間の間処理して、ＥＢＶ再活性で発現が増加する遺伝子であるＢＺＬＦ１とＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現を確認した。前記Ｄａｕｄｉ細胞株のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ａに示し、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ｂに示した。また、前記Ｒａｊｉ細胞株のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ｃに示し、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ｄに示した。併せて、前記１Ａ２細胞株のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ｅに示し、ＢＲＬＦ１のｍＲＮＡ発現に対する結果は図３Ｆに示した。

【0062】

図３Ａ乃至図３Ｆに示したように、Ｄａｕｄｉ細胞株でロミデプシン処理によりＢＺＬＦ１とＢＲＬＦ１の発現が増加することが確認された。Ｒａｊｉ細胞株の場合、ＢＺＬＦ１とＢＲＬＦ１の発現が増加しておらず、１Ａ２細胞株の場合、ＢＲＬＦ１の発現だけが増加したことを確認した。従って、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性は、Ｄａｕｄｉ細胞株でのみ現れることを確認した。

【0063】

３．２ シルデナフィルのＨＤＡＣ抑制剤によるＥＢＶ再活性化抑制効果のＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞特異性検証
実施例３．１で確認したロミデプシンによるＥＢＶ再活性が現れる細胞株であるＤａｕｄｉ細胞株でシルデナフィルとロミデプシンを同時に処理する場合、ロミデプシンによるＥＢＶ再活性が抑制されるか否かを確認する実験を遂行した。Ｄａｕｄｉ細胞株でロミデプシン１０ｎＭ、シルデナフィル１００ｎＭを７２時間の間それぞれ単一処理した群と同時に処理した群を実験群とし、ＤＭＳＯだけを処理した群を対照群とした。ＥＢＶ再活性により細胞外に分泌されるＥＢＶコピー数（ＥＢＶ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ）を測定するために、培地でＤＮＡを抽出してｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲでＣｔ値を測定して基準となるＥＢＶ数と比較する方法で、ＥＢＶコピー数を測定して図４Ａに示し、実施例３．１と同様の方法でＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡ発現を測定して図４Ｂに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡを測定して図４Ｃに示した。

【0064】

図４Ａ乃至図４Ｃに示したように、Ｄａｕｄｉ細胞株でロミデプシンを単独処理した群とロミデプシンとシルデナフィルを同時に処理した群との間に有意な差が確認されなかった。従って、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病細胞でない場合、シルデナフィルによるＥＢＶ再活性抑制効果が現れないことを確認した。

【0065】

実施例４．シルデナフィルによるＥＢＶ抑制効果確認
ＳＮＫ６とＮＫ９２ＭＩ細胞株に１０ｎＭのロミデプシンを７２時間処理して現れるＥＢＶ再活性がシルデナフィル（１００ｎＭ、７２時間）により抑制されることをＥＢＶコピー数、ＢＡＬＦ５、ＢＺＬＦ１及びＢＲＬＦ１発現を通して測定した。また、ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ染色を通して生きている細胞を計数して細胞成長を測定した。ＢＡＬＦ５は、ＥＢＶ再活性を通して生産されるウイルスＤＮＡ生成する機能を有する遺伝子であり、培地でＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を利用してＤＮＡを抽出し、ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲを実施して、ＢＡＬＦ５のｍＲＮＡを測定した。Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲで使用したＢＡＬＦ５プライマー配列を表２に示した。前記のように確認したＳＮＫ６細胞でＥＢＶコピー数を測定した結果は図５Ａに示し、ＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図５Ｂに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図５Ｃに示し、腫瘍細胞の生存率は図５Ｄに示した。また、ＮＫ９２ＭＩ細胞でＢＲＬＦ５ ｍＲＮＡの発現は図６Ａに示し、ＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図６Ｂに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図６Ｃに示し、腫瘍細胞の生存率は図６Ｄに示した。

【0066】

【表2】

【0067】

図５Ａ乃至図５Ｄに示したように、ＳＮＫ６細胞株でロミデプシン単独投与群とロミデプシン及びシルデナフィル投与群を比較したとき、ＥＢＶコピー数、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１がロミデプシン及びシルデナフィル投与群で発現が減少したことを確認して、ＥＢＶの再活性化が抑制されたことを確認し、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫細胞株であるＳＮＫ６細胞株の生存能がロミデプシン及びシルデナフィル投与群で減少したことを確認した。

【0068】

また、図６Ａ乃至図６Ｄに示したように、ＮＫ９２ＭＩ細胞株でロミデプシン単独投与群とロミデプシン及びシルデナフィル投与群を比較したとき、ＢＡＬＦ５、ＢＺＬＦ１及びＢＲＬＦ１がロミデプシン及びシルデナフィル投与群で発現が減少したことを確認して、ＥＢＶの再活性化が抑制されたことを確認し、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫細胞株であるＮＫ９２ＭＩ細胞株の生存能がトリパンブルー染色結果、ロミデプシン及びシルデナフィル投与群で減少したことを確認した。

【0069】

前記結果からシルデナフィルが腫瘍誘発ウイルスであるＥＢＶを効果的に抑制することを確認した。

【0070】

実施例５．シルデナフィル以外のＰＤＥ５抑制剤によるＥＢＶ抑制効果確認
併せて、シルデナフィル以外の他のＰＤＥ５抑制剤のＥＢＶ抑制効果を確認した。

【0071】

ＳＮＫ６細胞株に１０ｎＭのロミデプシンを処理して現れるＥＢＶ再活性が、ＰＤＥ５抑制剤であるバルデナフィル、ウデナフィルまたはタダラフィルにより抑制されることを実施例３．１と同様の方法でＢＺＬＦ１及びＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡ発現をｑＰＣＲで確認して測定した。このとき、バルデナフィルは、１００ｎＭで７２時間処理し、ウデナフィルは、１００ｎＭで４８時間処理し、タダラフィルは、１０００ｎＭで２４時間処理した。バルデナフィル投与実験群のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ａに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ｂに示した。また、ウデナフィル投与実験群のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ｃに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ｄに示した。併せて、タダラフィル投与実験群のＢＺＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ｅに示し、ＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡの発現は図７Ｆに示した。

【0072】

その結果、前記実施例のロミデプシン及びシルデナフィルを同時に処理した実験群と同様に、バルデナフィル、ウデナフィルまたはタダラフィルとロミデプシンを同時処理した実験群もまたＢＺＬＦ１及びＢＲＬＦ１ ｍＲＮＡ発現が減少したことを確認して、ＥＢＶの再活性化が抑制されたことを確認した。

【0073】

まとめると、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫細胞株とＮＫ細胞白血病細胞株にＨＤＡＣ抑制剤とホスホジエステラーゼ５抑制剤を同時処理するとき、ＨＤＡＣ抑制剤により引き起こされるエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）の再活性が抑制されるので、これを通してＨＤＡＣ抑制剤の副作用を減少させることができ、抗がん効果を顕著に上昇させることができることを確認した。

【0074】

以下、本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤を含むＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫またはＮＫ細胞白血病予防または治療用薬学的組成物の製剤例を説明するが、本発明を限定しようとするものではなく、単にこれを具体的に説明しようとするものである。

【0075】

製剤例１．散剤の製造
本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤 １０ｍｇ
乳糖 １ｇ
前記の成分を混合し、気密布に充填して散剤を製造した。

【0076】

製剤例２．錠剤の製造
本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤 １０ｍｇ
トウモロコシデンプン １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造した。

【0077】

製剤例３．カプセル剤の製造
本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤 １０ｍｇ
トウモロコシデンプン １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。

【0078】

製剤例４．丸の製造
本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤 １０ｍｇ
乳糖 １．５ｇ
グリセリン １ｇ
キシリトール ０．５ｇ
前記の成分を混合した後、常法によって１丸当たり４ｇになるように製造した。

【0079】

製剤例５．顆粒の製造
本発明のホスホジエステラーゼ５抑制剤 １０ｍｇ
大豆抽出物 ５０ｍｇ
ブドウ糖 ２００ｍｇ
デンプン ６００ｍｇ
前記の成分を混合した後、３０％エタノール１００ｍｇを添加して摂氏６０℃で乾燥して顆粒を形成した後、布に充填した。

【0080】

以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は、単に好ましい実施様態であるだけで、これによって本発明の範囲が制限されるのではない点は明らかであるだろう。従って、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項とそれらの等価物により定義されるといえるだろう。

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【図3a】

【図3b】

【図3c】

【図3d】

【図3e】

【図3f】

【図4a】

【図4b】

【図4c】

【図5a】

【図5b】

【図5c】

【図5d】

【図6a】

【図6b】

【図6c】

【図6d】

【図7a】

【図7b】

【図7c】

【図7d】

【図7e】

【図7f】

【配列表】

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