特許 7538601 キメラ活性化受容体及びキメラ刺激受容体を発現する細胞並びにその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-14

(45)【発行日】2024-08-22

(54)【発明の名称】キメラ活性化受容体及びキメラ刺激受容体を発現する細胞並びにその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240815BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240815BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240815BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N5/10 ZNA

C12N15/63 Z

A61K35/17

A61K38/17

A61K39/00 H

A61P37/04

A61P35/00

A61P35/02

C12N15/12

C12N15/13

C12N5/0783

【請求項の数】 31

(21)【出願番号】P 2019558623

(86)(22)【出願日】2018-04-24

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-06-18

(86)【国際出願番号】 US2018029218

(87)【国際公開番号】W WO2018200583

(87)【国際公開日】2018-11-01

【審査請求日】2021-04-22

(31)【優先権主張番号】62/490,576

(32)【優先日】2017-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/490,578

(32)【優先日】2017-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/490,580

(32)【優先日】2017-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】321002949

【氏名又は名称】ユーリカ セラピューティックス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】リュー， ホン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ペンボー

(72)【発明者】

【氏名】ホラン， ルーカス

(72)【発明者】

【氏名】シュー， イーヤン

(72)【発明者】

【氏名】ステイリー， ビナズ ケー．

(72)【発明者】

【氏名】リュー， リャンシン

(72)【発明者】

【氏名】ユン， ホンルオ

【審査官】坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２００４／００４３４０１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１５／０１７２１４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１５－５３５６８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１５－５２８２９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】Nature Reviews Cancer，2003年，Vol.3，p.35-45

【文献】J.Clin. Immunol.，2012年，Vol.32，p.1059-1070

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ ５／１０

Ｃ１２Ｎ ５／０７８３

Ｃ１２Ｎ １５／０９

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＷＰＩＤＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫細胞であって、
（ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、
ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール；
ｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＭ）（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）であって、
１）第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲαのＴＭに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲβのＴＭに由来する；
２）第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲαのＴＭに由来し、第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲβのＴＭに由来する；
３）第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲδのＴＭに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲγのＴＭに由来する；又は
４）第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲδのＴＭに由来し、第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲγのＴＭに由来する、
ＴＣＲＭ；及び
ｉｉｉ）Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌモジュール、Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ２モジュール、Ｃ_Ｈ３－Ｃ_Ｈ３モジュール、及びＣ_Ｈ４－Ｃ_Ｈ４モジュールからなる群から選択される、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置する安定化モジュール
を含み、
ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、ｃａＴＣＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を含まない、ｃａＴＣＲと、
（ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、
ｉ）標的リガンドと結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、
ｉｉ）膜貫通モジュール、及び
ｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、
リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同一の分子に由来せず、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠く、ＣＳＲと、
を含む、免疫細胞。

【請求項2】

ｃａＴＣＲの標的抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５からなる群から選択される細胞表面抗原である、請求項１に記載の免疫細胞。

【請求項3】

免疫細胞であって、
（ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、
ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール；
ｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＭ）（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）であって、
１）第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲαのＴＭに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲβのＴＭに由来する；
２）第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲαのＴＭに由来し、第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲβのＴＭに由来する；
３）第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲδのＴＭに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲγのＴＭに由来する；又は
４）第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲδのＴＭに由来し、第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲγのＴＭに由来する、
ＴＣＲＭ；及び
ｉｉｉ）Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌモジュール、Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ２モジュール、Ｃ_Ｈ３－Ｃ_Ｈ３モジュール、Ｃ_Ｈ４－Ｃ_Ｈ４モジュール、Ｃα－Ｃβモジュール、及びＣγ－Ｃδモジュールからなる群から選択される、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置する安定化モジュール
を含み、
標的抗原が、ペプチド及び主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質を含む複合体であり、
ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進し、
ｃａＴＣＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を含まない、ｃａＴＣＲと、
（ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、
ｉ）標的リガンドと結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、
ｉｉ）膜貫通モジュール、及び
ｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、
リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同一の分子に由来せず、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠く、ＣＳＲと、
を含む、免疫細胞。

【請求項4】

ペプチドが、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｈ３．３、及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項３に記載の免疫細胞。

【請求項5】

（ａ）ＣＳＲが、いずれの一次免疫細胞シグナル伝達配列も欠く、
（ｂ）ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールが多重特異性である、且つ／又は
（ｃ）ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つが天然に存在しないものである、
請求項１～４のいずれか１項に記載の免疫細胞。

【請求項6】

ｉ）一次免疫細胞シグナル伝達配列が、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄに由来する；
ｉｉ）ｃａＴＣＲが、Ｃα、Ｃβ、Ｃγ、及びＣδのいずれかのＩｇ様定常ドメインを含まない；且つ／又は
ｉｉｉ）第１のＴＣＲ－ＴＭが、配列番号５－２６の何れか１つのアミノ酸配列を含み、第２のＴＣＲ－ＴＭが、配列番号５－２６の何れか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の免疫細胞。

【請求項7】

標的抗原と標的リガンドが同一である、請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項8】

標的抗原と標的リガンドが異なる、請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項9】

標的リガンドが、標的抗原を提示する細胞の表面に発現するリガンドである、請求項１～８のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項10】

（ａ）標的リガンドが、疾患関連リガンドである、
（ｂ）標的リガンドが免疫調節分子である、又は
（ｃ）標的リガンドがアポトーシス分子である、
請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項11】

（ｉ）標的リガンドが疾患関連リガンドであり、疾患関連リガンドががん関連リガンドである；
（ｉｉ）標的リガンドが疾患関連リガンドであり、疾患関連リガンドがウイルス関連リガンドである；
（ｉｉｉ）標的リガンドが免疫調節分子であり、免疫調節分子が免疫抑制受容体であり、ＣＳＲのリガンド結合モジュールが免疫抑制受容体のアンタゴニストである；
（ｉｖ）標的リガンドが免疫調節分子であり、免疫調節分子が免疫刺激受容体であり、ＣＳＲのリガンド結合モジュールが免疫刺激受容体のアゴニストである；
（ｖ）標的リガンドが免疫調節分子であり、標的リガンドが免疫チェックポイント分子である；又は
（ｖｉ）標的リガンドが免疫調節分子であり、標的リガンドが阻害性サイトカインである、
請求項１０に記載の免疫細胞。

【請求項12】

（ａ）ＣＳＲのリガンド結合モジュールが抗体部分である、又は受容体の細胞外ドメインに由来する、
（ｂ）ＣＳＲの膜貫通モジュールが、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７もしくはＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む、
（ｃ）ＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、ＴＣＲの共刺激受容体の細胞内ドメインに由来する、且つ／又は
（ｄ）ＣＳＲの発現が誘導可能である、
請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項13】

（ａ）共刺激受容体が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、且つ／又は
（ｂ）ＣＳＲの発現が免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、
請求項１２に記載の免疫細胞。

【請求項14】

ＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、配列番号８８又は８９のアミノ酸配列を含むＣＤ３０断片を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項15】

（ａ）
（ｉ）ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールがＣＤ１９に結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールがＣＤ１９に結合するｓｃＦｖを含む；又は
（ｉｉ）ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールがＣＤ１９に結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールがＣＤ２０に結合するｓｃＦｖを含み；且つ／又は
（ｂ）ＣＳＲの膜貫通モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは両方ともＣＤ２８に由来する、
請求項１、２、及び５～１３のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項16】

（ａ）ＣＤ１９に結合する抗体部分が、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含み、ＣＤ１９に結合するｓｃＦＶが、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含み；且つ／又は
（ｂ）ＣＤ１９に結合する抗体部分が、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含み、ＣＤ２０に結合するｓｃＦＶが、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む、
請求項１５に記載の免疫細胞。

【請求項17】

ｃａＴＣＲが、配列番号７２及び７３、又は配列番号７４及び７５のアミノ酸配列を含む二つのポリペプチド鎖を含む、請求項１５又は１６に記載の免疫細胞。

【請求項18】

ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールが、ＡＦＰペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体（ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体又はＡＭＣ）に結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に結合するｓｃＦｖを含み、ＣＳＲの膜貫通モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは両方ともＣＤ２８に由来する、
請求項１、及び３～１３のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項19】

ＡＭＣに結合する抗体部分が、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含み；且つＧＰＣ３に結合するｓｃＦｖが、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む、請求項１８に記載の免疫細胞。

【請求項20】

ｃａＴＣＲが、配列番号６８及び６９、又は配列番号７０及び７１のアミノ酸配列を含む二つのポリペプチド鎖を含む、請求項１８又は１９に記載の免疫細胞。

【請求項21】

ＣＳＲが、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８断片を含む、請求項１～１３及び１５～２０のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項22】

ＣＳＲが、配列番号８０～８２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項23】

請求項１～２２のいずれか一項に記載の免疫細胞のｃａＴＣＲをコードする核酸とＣＳＲをコードする核酸の両方を含む１つ以上の核酸であって、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲがそれぞれ、１つ以上の核酸によりコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなり、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが１つの核酸により共にコードされる、又は２以上の核酸により分離してコードされる、１つ以上の核酸。

【請求項24】

請求項２３に記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクター。

【請求項25】

請求項２３に記載の１つ以上の核酸又は請求項２４に記載の１つ以上のベクターを含む、免疫細胞。

【請求項26】

免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、請求項１～２２及び２５のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項27】

請求項１～２２、２５及び２６のいずれか一項に記載の免疫細胞と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項28】

標的細胞を請求項１～２２、２５及び２６のいずれか一項に記載の免疫細胞又は請求項２７に記載の医薬組成物とインビトロで接触させることを含む、標的抗原を提示する標的細胞を殺傷するインビトロの方法であって、免疫細胞のｃａＴＣＲが標的抗原に特異的に結合する、方法。

【請求項29】

免疫細胞のｃａＴＣＲが標的抗原に特異的に結合することを特徴とする、標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において標的抗原関連疾患を治療する方法であって、有効量の医薬組成物を前記個体に投与することを含む方法における使用のための、請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項30】

標的抗原関連疾患ががん又はウイルス感染である、請求項２９に記載の医薬組成物。

【請求項31】

請求項１～２２のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲを含むか又は請求項１～２２のいずれか一項に記載のｃａＴＣＲをコードする１つ以上の核酸で形質導入された免疫細胞に共刺激シグナルを提供する方法であって、ＣＳＲをコードする、請求項２３に記載の１つ以上の核酸又は請求項２４に記載の１つ以上のベクターをインビトロで前記免疫細胞に導入することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７６号、２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５７８号、及び、２０１７年４月２６日出願の米国特許仮出願第６２／４９０，５８０号に対する優先権を主張するものであり、それらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
［ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出］

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５００４２００１０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１８年４月２４日、サイズ：１０７ＫＢ）。

【0003】

本発明は、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）及びキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）構築物を含む免疫細胞（Ｔ細胞など）に関する。ＣａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激シグナル伝達ドメインと、を含む。

【背景技術】

【0004】

Ｔ細胞媒介性免疫は、ウイルス、細菌、寄生虫感染、又は悪性細胞を排除するために抗原（Ａｇ）特異的Ｔリンパ球を発現する適応過程である。それはまた、自己抗原の異常認識を伴い、自己免疫炎症性疾患をもたらす。Ｔリンパ球のＡｇ特異性は、Ａｇ提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子により提示される固有の抗原ペプチドのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を通じた認識に基づく（Ｂｒｏｅｒｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１１）。各Ｔリンパ球は、胸腺における成熟時の発生選択の結果として、細胞表面に固有のＴＣＲを発現する。ＴＣＲは、αβヘテロ二量体又はγδヘテロ二量体のいずれかとして２つの形態で生じる。Ｔ細胞は、細胞表面にαβ形態又はγδ形態のいずれかのＴＣＲを発現する。４つの鎖、α／β／γ／δは全て、高多型「免疫グロブリン可変領域」様のＮ末端ドメイン及び「免疫グロブリン定常領域」様の第２のドメインからなる特徴的な細胞外構造を有する。これらのドメインのそれぞれが、特徴的なドメイン内ジスルフィド架橋を有する。定常領域は、細胞膜の近位にあり、連結ペプチド、膜貫通領域、及び短い細胞質尾部が続く。ヘテロ二量体ＴＣＲの２つの鎖間の共有結合は、細胞外定常ドメインと膜貫通領域とを架橋する短い連結ペプチド配列内に位置するシステイン残基によって形成され、それは対応する位置で対になったＴＣＲ鎖システイン残基とジスルフィド結合を形成する（Ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，２００１）。

【0005】

Αβ及びγδのＴＣＲは、非多型膜結合ＣＤ３タンパク質に関連して、ＴＣＲヘテロ二量体及び３つの二量体シグナル伝達分子、ＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε、及びＣＤ３ζ／ζ又はζ／ηからなる、機能性八量体ＴＣＲ－ＣＤ３複合体を形成する。各サブユニットの膜貫通ドメイン内のイオン化可能な残基は、複合体を一緒に保持する相互作用の極性ネットワークを形成する。Ｔ細胞活性化のために、ＴＣＲのＮ末端可変領域は、標的細胞の表面に提示されるペプチド／ＭＨＣ複合体を認識し、一方、ＣＤ３タンパク質は、シグナル伝達に関与する（Ｃａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１１１（７）：９６７－７９，２００２；Ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，２００１）。

【0006】

通常型ＴＣＲとも呼ばれるαβのＴＣＲは、ほとんどのリンパ球で発現し、グリコシル化多型α及びβ鎖からなる。異なるαβのＴＣＲｓは、寸法及び形状が比較的一定である、ＭＨＣ ＩＩ（主にＡＰＣ細胞表面で発現）とＭＨＣ Ｉ（全ての有核細胞で発現される）の分子の表面に埋め込まれた異なるペプチドを区別することができる。αβのＴＣＲと構造的に類似しているが、γδのＴＣＲは、ＭＨＣ提示とは独立した様式で、炭水化物、ヌクレオチド、又はリン含有抗原を認識する（Ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，２００１、Ｇｉｒａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６（１）：２５－３１，２００６、Ｈａｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６（６）：８２７－３８，２００２）。

【0007】

過去２０年間、免疫学と腫瘍生物学の基礎的な進展は、多数の腫瘍抗原の同定と相まって、細胞ベースの免疫療法の分野で大きな進歩をもたらした。Ｔ細胞療法は、細胞ベースの免疫療法の分野において大きな部分を占め、自家性及びエクスビボで増殖したＴ細胞を患者に移植することによってがんを治療することを目的とし、いくつかの顕著な抗腫瘍応答をもたらした（Ｂｌａｔｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０５（５６８１）：２００－５，２００４）。例えば、エクスビボで増幅した天然に存在する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の投与は、肝臓、肺、軟組織、及び脳を含む複数の部位における嵩高な浸潤性腫瘍を含む、黒色腫患者において、５０～７０％の範囲の客観的応答率を媒介する（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．８（４）：２９９－３０８，２００８；Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１０）：２３４６－５７，２００５）。

【0008】

ＴＩＬ療法の広範な適用に対する主な制限は、抗腫瘍可能性を有するヒトＴ細胞の生成における困難である。代替的なアプローチとして、外因性高親和性ＴＣＲを、Ｔ細胞遺伝子操作を通じて患者の正常な自家性Ｔ細胞に導入することができる。リンパ球枯渇患者へのこれらの細胞の養子移入は、黒色腫、大腸直腸癌、及び滑膜肉腫などのがんにおけるがん退縮を媒介することが示されている（Ｋｕｎｅｒｔ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３，２０１３）。滑膜肉腫に対する抗ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲを使用する最近の第Ｉ相臨床試験は、６６％の全体の応答率を報告し、Ｔ細胞療法を受けている患者のうちの１人において完全な応答が達成された（Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１（５）：１０１９－２７，２０１５）。

【0009】

ＴＣＲ遺伝子操作Ｔ細胞療法の利点の１つは、ＭＨＣ提示を通して細胞表面に加工及び送達される潜在的な細胞内腫瘍特異的タンパク質のアレイ全体を標的とすることができることである。更に、ＴＣＲは高感度であり、ごく少数の抗原ペプチド／ＭＨＣ分子によって活性化することができ、ひいては、サイトカイン分泌、Ｔ細胞増殖、及び明確に定義された標的細胞の細胞溶解を含む、細胞溶解性Ｔ細胞応答を誘起することができる。したがって、抗体療法又は小分子療法と比較して、ＴＣＲ遺伝子操作Ｔ細胞は、標的細胞内抗原の非常に少数のコピーによって標的細胞を殺傷する能力にとって特に有用である（Ｋｕｎｅｒｔ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３，２０１３）。

【0010】

しかしながら、大部分がハイブリドーマ又はディスプレイ技術によって発見される治療抗体とは異なり、標的特異的ＴＣＲの同定は、患者Ｔ細胞からの標的ペプチド／ＭＨＣ特異的ＴＣＲクローンの確立と、最適な標的抗原結合親和性を有する正しいα－β鎖の組み合わせのスクリーニングとを必要とする。非常に多くの場合、ファージ／酵母ディスプレイは、ＴＣＲの標的結合親和性を更に向上させるために、患者Ｔ細胞からのＴＣＲのクローニング後に使用される。プロセス全体は、多くの領域において専門知識を必要とし、時間がかかる（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３（１）：ｅ２７２５８，２０１４）。ＴＣＲ発見プロセスにおける困難は、ＴＣＲ遺伝子操作されたＴ細胞療法の広範な適用を大きく妨げる。これはまた、治療関連毒性、特に、腫瘍細胞上で過剰発現するが健康な細胞にも発現する抗原に対するＴＣＲによって、又は、オフ標的ペプチド／ＭＨＣ複合体を認識するＴＣＲによっても妨害されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８（６２３０）：６２－８，２０１５）。

【0011】

標的化がん免疫療法のためにＴ細胞を利用するために、近年、異なるアプローチが開発されてきた。この新規のアプローチは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ－Ｔ）と呼ばれる。それは、モノクローナル抗体の絶妙な標的特異性を、細胞傷害性Ｔ細胞によって提供される強力な細胞傷害性及び長期持続性と融合させる。ＣＡＲは、細胞表面抗原を認識する細胞外ドメイン、膜貫通領域、及び細胞内シグナル伝達ドメインから構成される。細胞外ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に融合されるモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖からの抗原結合可変領域からなる。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ又はＦｃＲγからのものなどの免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）、及びＣＤ２８、４－１ＢＢ又はＯＸ４０からのものなどの１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む（Ｂａｒｒｅｔｔ ＤＭ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６５：３３３－４７，２０１４；Ｄａｖｉｌａ ＭＬ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１（９）：１５７７－１５８３，２０１２）。Ｔ細胞表面上に移植されたＣＡＲによる標的抗原の結合は、Ｔ細胞エフェクター機能を、ＴＣＲ－ペプチド／ＭＨＣ複合体相互作用と独立して誘起することができる。したがって、ＣＡＲを含むＴ細胞は、Ｔ細胞上のＴＣＲのＭＨＣタイプと一致しないが標的細胞表面抗原を発現するものを含む、多様な細胞を攻撃するように再指向され得る。このアプローチは、ＭＨＣ拘束ＴＣＲ認識の制約を克服し、抗原提示又はＭＨＣ分子発現における機能障害を介する腫瘍回避を避ける。臨床試験は、神経芽細胞腫（Ｌｏｕｉｓ ＣＵ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１１８（２３）：６０５０－６０５６，２０１１）、Ｂ－ＡＬＬ（Ｍａｕｄｅ，ＳＬ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３７１：１６：１５０７－１５１７，２０１４）、ＣＬＬ（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ＲＪ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１８：１８：４８１７－４８２８，２０１１）、及びＢリンパ腫（Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，ＪＮ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１６：２０：４０９９－４１０２，２０１０）におけるＣＡＲ－Ｔ療法の臨床的に有意な抗腫瘍活性を示している。１つの研究では、ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ療法で治療したＢ－ＡＬＬを有する３０人の患者における９０％の完全寛解率を報告した（Ｍａｕｄｅ，ＳＬ，ｅｔ ａｌ．、前出）。

【0012】

これまでに研究された全てのＣＡＲは、高い細胞表面発現を有する腫瘍抗原を対象としてきた。全ての既知の腫瘍特異的抗原の９５％を表す低コピー数細胞表面腫瘍抗原及び細胞内腫瘍抗原を標的とするために、より強力かつ有効な遺伝子操作された細胞療法を開発する必要がある（Ｃｈｅｅｖｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５（１７）：５３２３－３７，２００９）。
Ｔ細胞受容体エフェクター機能に特異的な抗体を有するキメラ受容体分子を遺伝子操作するためのいくつかの試みがなされてきた。例えば、Ｋｕｗａｎａ，Ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（３）：９６０－９６８，１９８７、Ｇｒｏｓｓ，Ｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２４－１００２８，１９８９、Ｇｒｏｓｓ，Ｇ ＆ Ｅｓｈｈａｒ，Ｚ，ＦＡＳＥＢ Ｊ．６（１５）：３３７０－３３７８，１９９２、及び米国特許第７，７４１，４６５号を参照されたい。今日まで、これらのキメラ受容体はいずれも臨床使用のために採用されておらず、ヒトＴ細胞における発現及び機能性が改善された抗体－ＴＣＲキメラ受容体の新規な設計が必要とされている。
本明細書で参照した全ての出版物、特許、特許出願、及び特許出願公開の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５８３０５は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【文献】米国特許第７７４１４６５号明細書

【非特許文献】

【0014】

【文献】Ｂｒｏｅｒｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１１

【文献】Ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，２００１

【文献】Ｃａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１１１（７）：９６７－７９，２００２；Ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，２００１

【文献】Ｇｉｒａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６（１）：２５－３１，２００６

【文献】Ｈａｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６（６）：８２７－３８，２００２

【文献】Ｂｌａｔｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０５（５６８１）：２００－５，２００４

【文献】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．８（４）：２９９－３０８，２００８

【文献】Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１０）：２３４６－５７，２００５

【文献】Ｋｕｎｅｒｔ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６３，２０１３

【文献】Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１（５）：１０１９－２７，２０１５

【文献】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３（１）：ｅ２７２５８，２０１４

【文献】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８（６２３０）：６２－８，２０１５

【文献】Ｂａｒｒｅｔｔ ＤＭ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６５：３３３－４７，２０１４

【文献】Ｄａｖｉｌａ ＭＬ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１（９）：１５７７－１５８３，２０１２

【文献】Ｌｏｕｉｓ ＣＵ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１１８（２３）：６０５０－６０５６，２０１１

【文献】Ｍａｕｄｅ，ＳＬ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３７１：１６：１５０７－１５１７，２０１４

【文献】Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ＲＪ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１８：１８：４８１７－４８２８，２０１１

【文献】Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，ＪＮ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１６：２０：４０９９－４１０２，２０１０

【文献】Ｃｈｅｅｖｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５（１７）：５３２３－３７，２００９

【文献】Ｋｕｗａｎａ，Ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（３）：９６０－９６８，１９８７

【文献】Ｇｒｏｓｓ，Ｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：１００２４－１００２８，１９８９

【文献】Ｇｒｏｓｓ，Ｇ ＆ Ｅｓｈｈａｒ，Ｚ，ＦＡＳＥＢ Ｊ．６（１５）：３３７０－３３７８，１９９２

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0015】

一態様では本出願は、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）及びキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）構築物を含む免疫細胞（Ｔ細胞など）に関する。ＣａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含み、ＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激シグナル伝達ドメインと、を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール、並びにｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、Ｔ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）が、少なくとも１つのＴＣＲ－関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含む、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）と、ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、ｉｉ）膜貫通モジュール、並びにｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは、同一の分子から誘導されない、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を含み、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞が提供される。

【0017】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする１つ以上の核酸が提供され、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲはそれぞれ、１つ以上の核酸によりコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなる。

【0018】

いくつかの実施形態では、ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール、並びにｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含み、Ｔ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）が、少なくとも１つのＴＣＲ－関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、ｃａＴＣＲが１つ以上のポリペプチド鎖からなる、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）と、ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、ｉｉ）膜貫通モジュール、並びにｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは、同一の分子から誘導されない、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、をコードし、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠き、ＣＳＲが１つ以上のポリペプチド鎖からなる、１つ以上の核酸が提供される。

【0019】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の核酸を含む１つ以上のベクターが提供される。

【0020】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の核酸又は１つ以上のベクターを含む組成物が提供される。

【0021】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の核酸又は１つ以上のベクターを含む免疫細胞が提供される。

【0022】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される免疫細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物が提供される。

【0023】

いくつかの実施形態では、標的抗原を提示する標的細胞を殺傷する方法であって、標的細胞を本明細書に記載される免疫細胞と接触させることを含む、方法が提供される。

【0024】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患の治療を必要とする個体において標的抗原関連疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。

【0025】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲを含むか、又はｃａＴＣＲをコードする核酸で形質導入された免疫細胞に共刺激シグナルを提供する方法であって、本明細書に記載される、１つ以上の核酸又は１つ以上のベクターを上記細胞に導入することを含む、方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】異なる抗原結合モジュールを有するいくつかのｃａＴＣＲ分子の概略図を示す。

【0027】

【図2】抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＣＤ１９ ＣＳＲ単独、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＮＡＬＭ６（ＣＤ１９^＋）の殺傷による特異的溶解パーセントを示す。

【0028】

【図3】抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＣＤ１９ ＣＳＲ単独、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＮＡＬＭ６のインビトロ殺傷後の上清中に見出されるサイトカイン（ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－α）の濃度を示す。

【0029】

【図4】がん細胞株ＮＡＬＭ６による刺激後の、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＣＤ１９ ＣＳＲ単独、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞における脱顆粒活性（ＣＤ１０７ａ発現により決定される）を示す。

【0030】

【図5】がん細胞株ＢＶ１７３又はＮＡＬＭ６による刺激後の、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０単独又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞の増殖（ＣＦＳＥ色素希釈により決定される）を示す。

【0031】

【図6】抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ単独、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＦＰ^＋／ＧＰＣ３^＋）及びＨｅｐＧ２－ＧＰＣ３．ｋｏ（ＡＦＰ^＋／ＧＰＣ３^－）の殺傷による特異的溶解パーセントを示す。

【0032】

【図7】抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ単独、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＨｅｐＧ２及びＨｅｐＧ２－ＧＰＣ３．ｋｏのインビトロ殺傷後の上清中に見出されるサイトカイン（ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－α）の濃度を示す。

【0033】

【図8】がん細胞株ＨｅｐＧ２によって刺激された後の、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ単独、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞における脱顆粒活性（ＣＤ１０７ａ発現により決定される）を示す。

【0034】

【図9】がん細胞株ＨｅｐＧ２によって刺激された後の、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ単独、又は抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊２：０１ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞の増殖（ＣＦＳＥ色素希釈により決定される）を示す。

【0035】

【図10】抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ２０ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株Ｒａｊｉ、ＢＶ１７３、ＮＡＬＭ６、及びＪｅｋｏ－１（各々、ＣＤ１９^＋／ＣＤ２０^＋）の殺傷による特異的溶解率を示す。

【0036】

【図11】抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０単独、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ２０ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株Ｒａｊｉのインビトロ殺傷後の上清中に見出されるサイトカイン（ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－α）の濃度を示す。

【0037】

【図12】がん細胞株Ｒａｊｉによって刺激された後の、抗ＣＤ２０ ｃａＴＣＲ－１－０単独、抗ＣＤ２０ ＣＳＲ単独、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ（１－０及び１－ＴＭ５）＋抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞における脱顆粒活性（ＣＤ１０７ａ発現により決定される）を示す。

【0038】

【図13A】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略構造を示す。

【図13B】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略構造を示す。

【図13C】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略構造を示す。

【図13D】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略構造を示す。

【図13E】例示的な二重特異性ｃａＴＣＲ分子の概略構造を示す。

【0039】

【図14】がん細胞株ＮＡＬＭ６による刺激後の、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲを発現するＴ細胞の増殖（ＣＦＳＥ色素希釈により決定される）を示す。

【図15】がん細胞株ＮＡＬＭ６による刺激後の、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１－０及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲを発現するＴ細胞の増殖（ＣＦＳＥ色素希釈により決定される）を示す。

【0040】

【図16】モック処理、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１、若しくは抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－１と組み合わせて抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１を発現するＴ細胞の単回の腫瘍内注射を伴う、ＮＡＬＭ６の皮下マウスモデルにおける腫瘍増殖を示す。

【0041】

【図17】抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するＴ細胞、又は抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－１の両方を発現するＴ細胞により処理したマウスにおける血清サイトカインレベルを示す。スチューデントｔ検定を使用して、２つの群における血清サイトカインレベルの統計的有意性を分析する（^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。

【0042】

【図18】モック処理、又は抗ＡＦＰ ＣＡＲ、若しくは抗ＧＰＣ３ ＣＳＲと組み合わせて抗ＡＦＰ ＣＡＲを発現するＴ細胞の単回の腫瘍内注射を伴う、ＨｅｐＧ２の皮下マウスモデルにおける腫瘍増殖を示す。

【発明を実施するための形態】

【0043】

本出願は、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）及びキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）構築物を含む免疫細胞（Ｔ細胞など）に関する。ｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。ＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することが可能な共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインと、を含み、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を含まない。標的抗原及び標的リガンドは、疾患細胞表面上のＭＨＣ提示疾患関連抗原ペプチドなどの、細胞表面に発現するタンパク質、又はペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体（本明細書では「ｐＭＨＣ複合体」若しくは「ｐＭＨＣ」と呼ばれる）であり得る。ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞受容体活性化を制御する天然に存在する機構によって調節され、ＣＳＲを介したシグナル伝達は、ｃａＴＣＲによって媒介される免疫応答を増強することができる。

【0044】

本発明者らは、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲ構築物を含む一連の新規Ｔ細胞を開発した。これらは、標的細胞結合に応答して、ＣＳＲの非存在下でｃａＴＣＲのみを発現する細胞と比較して増加したサイトカイン発現を伴って標的を持つ腫瘍細胞に対する強力な細胞傷害性を示した。これらの細胞内にＣＳＲを含めることにより、ｃａＴＣＲのみを発現する細胞と比較して、脱顆粒、増殖、及び生存率を更に向上させる。

【0045】

したがって、本出願は、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲと標的リガンドに特異的なＣＳＲとを含む免疫細胞を提供し、このｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含み、ＣＳＲは、ａ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインとを含み、ｂ）機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を含まない。ｃａＴＣＲは、抗原結合モジュール及び／又はＴＣＲＭの変動を有する多数のフォーマットのうちのいずれかをとることができる。例えば、ｃａＴＣＲは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ａ（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖからなる群から選択される部分を含む抗原結合モジュールと、膜貫通ドメイン、連結ペプチド、及び細胞内ドメインのうちの１つ以上における変異型を含む、α／β又はγ／δのＴＣＲに由来する１つ以上の配列を含むＴＣＲＭとを含むことができる。図１を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。ＣＳＲは同様に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖからなる群から選択される部分を含むリガンド結合モジュールを有することができる。いくつかの実施形態では、標的抗原と標的リガンドは同一である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの抗原結合モジュール及びＣＳＲのリガンド結合モジュールは同一であるか、又はＣＤＲ若しくは可変ドメインなどの抗原特異性を付与する同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、標的抗原と標的リガンドは異なる。

【0046】

更に他の態様では、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードしている１つ以上の核酸、ｂ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする１つ以上の核酸を含む免疫細胞、並びにｃ）ｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含むか、又はｉｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする１つ以上の核酸を含む免疫細胞を含む組成物が提供される。組成物は、医薬組成物であり得る。

【0047】

また、治療目的のためにｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む免疫細胞を作製及び使用する方法、並びにそのような方法に有用なキット及び製品も提供される。ＣａＴＣＲ及びＣＳＲを含む免疫細胞を使用して疾患を治療する方法が更に提供される。
定義

【0048】

「抗体」又は「抗体部分」という用語は、完全長抗体及びその抗原結合断片を含む。完全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。両方の鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変のループ（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）を含む。本明細書に開示される抗体及び抗原結合断片のＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９、Ｋａｂａｔ １９８７、Ｋａｂａｔ １９９１）の慣例によって定義又は同定することができる。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られる隣接する区間の間に介在し、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持する足場を形成する。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在によって特徴付けられるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭである。いくつかの主要な抗体のクラスは、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、又はｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分類される。

【0049】

本明細書で使用するとき、「抗原結合断片」という用語は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓ ｄｉａｂｏｄｙ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む、抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合するのと同一の抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ以上の異なるヒト抗体からフレームワーク領域に移植された特定のヒト抗体からの１つ以上のＣＤＲを含み得る。

【0050】

本明細書で使用するとき、第１の抗体部分が第２の抗体部分の標的抗原結合を、第１の抗体部分の等モル濃度の存在下で、又はその逆で、少なくとも約５０％（少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％のいずれかなど）阻害するとき、第１の抗体部分は、標的抗原との結合について、第２の抗体部分と「競合する」。それらの交差競合に基づく抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスは、ＰＣＴ公開ＷＯ０３／４８７３１に記載されている。

【0051】

本明細書で使用するとき、用語「特異的に結合する」又は「～に特異的である」は、標的と抗体又は抗体部分との間の結合などの、測定可能かつ再現性のある相互作用を指し、これは、生物分子を含む分子の異種集団の存在下での、標的の存在を判定する。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体部分は、他の標的に対するその結合よりも、この標的に、より高い親和性で、より強い結合活性で、より容易に、及び／又はより長時間結合する抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原に特異的に結合する抗体部分は、抗原の１つ以上の抗原決定基（例えば、細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）と、他の標的に対する結合親和性の少なくとも約１０倍である結合親和性で反応する。

【0052】

「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」という用語は、Ｔ細胞の表面上で対をなすαβ鎖又はγδ鎖から構成されるヘテロ二量体受容体を指す。各α、β、γ、及びδ鎖は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識を付与する可変ドメイン（Ｖ）である２つのＩｇ様ドメインと、後に続く、連結ペプチド及び膜貫通（ＴＭ）領域によって細胞膜に固定される定常ドメイン（Ｃ）とで構成される。ＴＭ領域は、ＣＤ３シグナル伝達器の不変サブユニットと結合する。Ｖドメインのそれぞれは、３つのＣＤＲを有する。これらのＣＤＲは、主要組織適合複合体（ｐＭＨＣ）によりコードされるタンパク質に結合する抗原ペプチド間の複合体と相互作用する（Ｄａｖｉｓ ａｎｄ Ｂｊｏｒｋｍａｎ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ，３３４，３９５－４０２、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６，５２３－５４４、Ｍｕｒｐｈｙ（２０１２），ｘｉｘ，８６８ ｐ．）。

【0053】

「ＴＣＲ関連シグナル伝達分子」という用語は、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体の一部である細胞質の免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する分子を指す。ＴＣＲ関連シグナル伝達分子には、ＣＤ３γε、ＣＤ３δε、及びζζ（ＣＤ３ζ又はＣＤ３ζζとしても知られる）が含まれる。

【0054】

ＣＤ３を発現する細胞に関して本明細書で使用するとき、「活性化」は、細胞増殖及びサイトカイン産生を含むがこれらに限定されない、ＣＤ３シグナル伝達経路の下流のエフェクター機能の検出可能な増加を誘導するのに十分に刺激されている細胞の状態を指す。

【0055】

タンパク質の一部を指すとき、「モジュール」という用語は、タンパク質を構成する１つ以上のポリペプチドの構造的及び／又は機能的に関連する部分を含むことを意味する。例えば、二量体受容体の膜貫通モジュールは、膜にまたがる受容体の各ポリペプチド鎖の部分を指し得る。モジュールはまた、単一のポリペプチド鎖の関連部分を指すことができる。例えば、単量体受容体の膜貫通モジュールは、膜にまたがる受容体の単一のポリペプチド鎖の部分を指し得る。モジュールはまた、ポリペプチドの単一部分のみを含んでもよい。

【0056】

本明細書で使用するとき、「単離された核酸」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、若しくは合成起源の核酸、又はこれらのいくつかの組み合わせを意味することを意図し、「単離された核酸」は、その起源のために、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全て又は一部とは関連していないか、（２）天然では連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結されているか、又は（３）より大きい配列の一部として天然では発生しない。

【0057】

本明細書で使用されるとき、「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見られる非連続抗原結合部位を意味することを意図する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、定義は、互いに比較したときにアミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体のＣＤＲ又はその移植された抗体若しくは変異型を指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され使用される用語の範囲内にあることが意図されている。上に引用した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表１に記述されている。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、当該技術分野で公知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）、及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）を含む。本段落で引用される参考文献の内容は、本発明で使用するためにその全体が参照により本明細書に組み込まれ、本特許請求の範囲の請求項の１つ以上に包含可能である。

【表1】

^１残基の付番は、前出のＫａｂａｔらの命名法に従う。
^２残基の付番は、前出のＣｈｏｔｈｉａらの命名法に従う。
^３残基の付番は、前出のＭａｃＣａｌｌｕｍらの命名法に従う。
^４残基の付番は、前出のＬｅｆｒａｎｃらの命名法に従う。
^５残基の付番は、前出のＨｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎの命名法に従う。

【0058】

「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種由来の抗体中又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同であり、鎖の残余の部分が、別の種由来の抗体中又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である抗体を指し、また、本発明の生物活性を示す限り、そのような抗体の断片を指す（米国特許第４８１６５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４）を参照されたい）。

【0059】

抗体又は抗体部分に関する「半合成」という用語は、抗体又は抗体部分が、１つ以上の天然に存在する配列及び１つ以上の天然に存在しない（すなわち、合成の）配列を有することを意味する。

【0060】

抗体又は抗体部分に関する「完全合成」という用語は、抗体又は抗体部分が、固定された天然に存在するＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌフレームワークの対を有するが、重鎖及び軽鎖の両方の６つ全てのＣＤＲの天然に存在しない（すなわち、合成の）配列を有することを意味する。

【0061】

非ヒト（例えばげっ歯動物）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分において、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）由来の残基が、所望の抗体の特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基と置き換えられている。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、対応する非ヒト残基で置換されている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体内にない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能を更に改良するためになされる。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの可変領域の実質的に全て、典型的には２つの可変領域を含み、全て又は実質的に全ての超可変ループは非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全て又は実質的に全てのＦＲは、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、所望により、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。

【0062】

「相同性」は、２つのポリペプチド間又は２つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が、同一の塩基又はアミノ酸の単量体のサブユニットによって占められているとき、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子は、その位置において「相同」である。２つの配列間の「相同性パーセント」又は「配列同一性パーセント」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して、２つの配列によって共有される一致するか又は相同である位置の数を比較された位置の数で割り１００を乗じた関数である。例えば、２つの配列中の位置の１０個のうち６個が一致又は相同である場合、２つの配列は６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣ及びＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を共有する。一般に、２つの配列がアライメントされて最大相同性を与えるときに比較が実施される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公けに入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当該技術分野の範囲内にある様々な方法で達成できる。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメント測定用の適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを使用してアミノ酸配列同一性％の値が生成される（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４）。

【0063】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「Ｃ_Ｈ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、アミノ酸約１１８～アミノ酸約２１５（ＥＵ付番システム）まで延びている。

【0064】

別段の定めがない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンである、同一のアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンではイントロン（複数可）を含み得る程度まで、イントロンを含んでもよい。

【0065】

「作動可能に連結された」という用語は、制御配列と異種核酸配列との間の機能的結合を指し、後者の発現をもたらす。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係を有して配置されるとき、第１の核酸配列は第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は連続しており、必要に応じて２つのタンパク質コード領域を結合するために、同一のリーディングフレーム内にある。

【0066】

「誘導可能なプロモーター」という用語は、１つ以上の特定のシグナルを付加又は除去することによって活性を調節することができるプロモーターを指す。例えば、誘導可能なプロモーターは、特定の条件のセット、例えば、プロモーターを活性化させる及び／又はプロモーターの抑制を緩和する誘導剤又は条件の存在下で、作動可能に連結された核酸の転写を活性化し得る。

【0067】

本明細書で使用するとき、「治療」又は「治療する」は、臨床結果を含めて有益な又は所望の結果を得るための方法である。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、以下のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：疾患がもたらす１つ以上の症状を軽減すること、疾患の範囲を縮小させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を防止する若しくは遅らせること）、疾患の拡散（例えば、転移）を防止する若しくは遅らせること、疾患の再発を防止する若しくは遅らせること、疾患の進行を遅らせる若しくは減速させること、疾患状態を寛解させること、疾患の寛解（部分又は完全）をもたらすこと、疾患を治療するために必要な１つ以上の他の投薬の用量を減らすこと、疾患の進行を遅らせること、生活の質を向上若しくは改善させること、体重増加を向上すること、及び／又は生存期間を延ばすこと。また、「治療」に包含されるのは、疾患の病理学的結果の低減である（例えば、がんにおける腫瘍体積など）。本発明の方法は、治療のこれらの態様のうちのいずれか１つ以上を企図する。

【0068】

「再発（recurrence）」、「再発する（relapse）」、又は「再発した（relapsed）」という用語は、疾患の消失の臨床評価後のがん又は疾患の再発を指す。遠位の転移又は局所的再発の診断は、再発と見なすことができる。

【0069】

「難治性」又は「耐性」という用語は、治療に応答していないがん又は疾患を指す。

【0070】

本明細書に開示されるとき、ｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物の「有効量」は、具体的に記載された目的を実行するのに十分な量である。「有効量」は、経験的に、及び記載された目的に関連する既知の方法によって決定することができる。

【0071】

「治療有効量」という用語は、本明細書に開示されるｃａＴＣＲを含むｃａＴＣＲ又は組成物の、個体における疾患又は障害を「治療する」ために有効である量を指す。がんの場合、本明細書に開示される治療有効量のｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、がん細胞の数を低減することができ、腫瘍のサイズ又は重量を低減することができ、末梢臓器へのがん細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させる）ことができ、腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させる）ことができ、ある程度、腫瘍増殖を阻害することができ、及び／又はがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和することができる。本明細書に開示されるｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、存在するがん細胞の増殖を防止、及び／又は存在するがん細胞を殺傷し得る程度で、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であり得る。いくつかの実施形態では、治療有効量は、増殖抑制量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存率を改善する量である。ウイルス感染などの感染性疾患の場合、本明細書に開示される治療有効量のｃａＴＣＲ又はｃａＴＣＲを含む組成物は、病原体によって感染された細胞の数を低減することができ、病原体由来抗原の産生又は放出を低減することができ、病原体の未感染細胞への拡散を阻害する（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止する）ことができ、及び／又は感染に関連する１つ以上の症状をある程度緩和することができる。いくつかの実施形態では、治療有効量は、患者の生存期間を延長する量である。

【0072】

本明細書で使用されるとき、「医薬的に許容される」又は「薬理的に適合される」は、生物学的又は非生物学的に望ましくないものではない物質を意味し、例えば、その物質を、望ましくない生物学的影響をほとんど起こさずに、又は、それが含有される組成物の他の任意の構成成分と悪い相互作用をせずに、患者に投与される医薬組成物中に組み込むことができる。医薬的に許容される担体又は賦形剤は、好ましくは、必要な毒性学的及び製造的検査基準を満たしており、並びに／又は、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎが作成したＩｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅに含まれている。

【0073】

本明細書に記載の本発明の実施形態は、実施形態「からなる」及び／又は「から本質的になる」を含むことを理解されたい。

【0074】

本明細書に記載の「約」のついた値又はパラメーターへの言及は、値又はパラメーター自体を対象とする変化を含む（及び記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。

【0075】

本明細書で使用するとき、「～されない」などの否定（not）を伴うある値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター「以外」が肯定されることを一般に意味し、記載する。例えば、「方法は、タイプＸの癌を治療するのに使用されない」は、「方法は、Ｘ以外のタイプの癌を治療するのに使用される」を意味する。

【0076】

本明細書及び添付の「特許請求の範囲」で使用するとき、単数形の「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から単数であることが明確に読み取れる場合を除き、対象の複数形も含まれるものとする。
ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞

【0077】

本発明は、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ及びＣＳＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞など）を提供する（そのような免疫細胞は、本明細書において「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞」とも呼ばれる）。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸を含み、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現し、免疫細胞表面に局在化する。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、Ｔ細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、免疫細胞の内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。

【0078】

例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲをコードする核酸と、本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかによるＣＳＲとを含む免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、核酸から発現し、免疫細胞表面に局在化する。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、同一のベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳類発現ベクター、並びにウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ベクターのうちの１つ以上は、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列はそれぞれ、異なるプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同一の配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。

【0079】

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲと本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲとを発現する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、このｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列とを含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現してｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖が、ＣＳＲ核酸から発現してＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在化する。いくつかの実施形態では、第１のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれ、第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれ、ＣＳＲ核酸配列は、第３のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列の一部又は全ては、同一のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列のそれぞれは、個別に、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、核酸配列の一部又は全ては、単一のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同一の配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0080】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲと本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲとを表面に発現する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、このｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモーターを含む第１のベクターと、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモーターを含む第２のベクターと、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモーターを含む第３のベクターとを含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現してｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖が、ＣＳＲ核酸配列から発現してＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在化する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同一の配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0081】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）であって、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１のプロモーター、及びｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２プロモーターを含む、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモーターを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現して、ｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖がＣＳＲ核酸配列から発現してＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲが免疫細胞の表面に局在化する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供される。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態も想到されることを理解されたい。

【0082】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に発現する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）であって、ａ）ｉ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び、ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列を含む第１のベクターであって、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列が第１のプロモーターの制御化にある、第１のベクターと、ｂ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第２プロモーターを含む第２のベクターと、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現してｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖がＣＳＲ核酸配列から発現してＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが、免疫細胞の表面に局在化する、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、プロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態も想到されることを理解されたい。

【0083】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲと本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲとを表面に発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、このｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ａ）ｃａＴＣＲの第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｂ）ｃａＴＣＲの第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列と、ｃ）ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含むベクターを含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にあり、第１及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖が、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列から発現してｃａＴＣＲを形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖が、ＣＳＲ核酸配列から発現してＣＳＲを形成し、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在化する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、個々に内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーによって他の核酸配列に連結される核酸配列のうちの１つに作動可能に連結され、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列が、プロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写されるようにされる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞はαβ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ及びγ鎖に由来する配列を含み、又は、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞であり、導入されたｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβ鎖に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれたウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。
キメラ抗体／Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）構築物

【0084】

一態様では、本明細書に記載される標的抗原特異的キメラ抗体／Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）は、標的抗原（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はζζなど）を動員することができる。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの天然に存在しないＴＣＲドメインを含む。ｃａＴＣＲは、抗原特異性を提供する抗原結合モジュールと、ＣＤ３動員及びシグナル伝達を可能にするＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）と、を含む。抗原結合モジュールは、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭ中のポリペプチド鎖のアミノ末端に連結される。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。ＴＣＲＭは、αβ及び／又はγδ ＴＣＲなどの１つ以上のＴＣＲ（ＴＣＲ－ＴＭ）の膜貫通ドメインに由来する膜貫通モジュールを含み、所望により、ＴＣＲ及び／又は１つ以上のＴＣＲ細胞内ドメイン又はその断片の連結ペプチド若しくはその断片のうちの１つ又は両方を更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２つのポリペプチド鎖を含み、各ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端へ向けて、連結ペプチド、膜貫通ドメイン、及び必要に応じてＴＣＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ以上の天然に存在しないＴＣＲドメインを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、１つ又は２つの天然に存在しないＴＣＲ膜貫通ドメインを含む。天然に存在しないＴＣＲドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換によって、及び／又は対応するドメインの一部を、別のＴＣＲと類似のドメインの一部と置換することによって改変された天然に存在するＴＣＲの対応するドメインであってもよい。ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含んでもよく、第１及び第２のポリペプチド鎖は共に、抗原結合モジュール及びＴＣＲＭを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ｃａＴＣＲは二量体などの多量体である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列を更に含む。１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、個別に、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲ－ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間にある。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに対してカルボキシ末端側にある。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲはＴ細胞共刺激シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメイン間のスペーサモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインを連結する１つ以上のペプチドリンカーを含む。

【0085】

本明細書に記載されるｃａＴＣＲは、このセクションに記載される１つ以上の特徴を有してもよい。本明細書に記載されるｃａＴＣＲ（例えば、抗原結合モジュール、ＴＣＲＤ、ＴＣＲ－ＴＭ、スペーサモジュール、安定化モジュール、Ｔ細胞共刺激配列、及び様々なリンカーなど）の各構成要素のための特徴のいずれかを、各及び全ての組み合わせが個別に記載されるかのように、ＣＳＲの特徴のいずれかと、及びＳＳＥの特徴のいずれかと互いに組み合わせることができることが意図される。

【0086】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュール（抗体部分など）は、ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００、若しくはそれ以上のうちのいずれかを含む）の親和性で、又はｂ）他の分子に結合するためのＫ_ｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００、若しくはそれ以下など）のＫ_ｄで標的抗原に特異的に結合する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。Ｋ_ｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。

【0087】

安定化ドメインの例としては、Ｆｃ領域、ヒンジ領域、Ｃ_Ｈ３ドメイン、Ｃ_Ｈ４ドメイン、Ｃ_Ｈ１又はＣ_Ｌドメイン、ロイシンジッパードメイン（例えば、ｊｕｎ／ｆｏｓロイシンジッパードメイン、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８：１５４７－１５５３，１９９２を参照されたい、若しくは酵母ＧＣＮ４ロイシンジッパードメイン）、イソロイシンジッパードメイン、二量体化細胞表面受容体の二量体化領域（例えば、インターロイキン－８受容体（ＩＬ－８ Ｒ）；又はＬＦＡ－１若しくはＧＰＩＩＩｂ／ＩＩＩａなどのインテグリンヘテロ二量体）、分泌型二量体化リガンド（例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、若しくは脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の二量体化領域；例えば、Ａｒａｋａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２７８３３－２７８３９，１９９４，及びＲａｄｚｉｅｊｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１３５０，１９９３を参照されたい）；コイルドコイル二量化ドメイン（例えば、ＷＯ２０１４１５２８７８、Ｆｌｅｔｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ，ＡＣＳ Ｓｙｎｔｈ．Ｂｉｏｌ．１：２４０－２５０，２０１２；及びＴｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３５（１３）：５１６１－５１６６、２０１３を参照されたい）、並びに、少なくとも１つのシステイン残基（例えば、約１、２、又は３～約１０のシステイン残基）を含むポリペプチドであって、ジスルフィド結合がポリペプチドと少なくとも１つのシステイン残基を含む第２のポリペプチドとの間に形成するようにできるポリペプチドが挙げられる。

【0088】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭは、ａ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）と、ｂ）第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭは、Ｔ細胞受容体（αβ ＴＣＲ又はγδ ＴＣＲなど）の膜貫通ドメインのうちの１つに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭは、Ｔ細胞受容体の他の膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。ＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員は、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体表面発現のＦＡＣＳ分析、又はＣＤ３サブユニットとｃａＴＣＲとの同時免疫沈降などの、当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。

【0089】

例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＴＣＲＭの第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＣＩ７３８９５）の膜貫通ドメイン又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、ＴＣＲＭの第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ β鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＣＩ７３８９３）の膜貫通ドメイン又はその変異体を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ δ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＱ５７２７２）の膜貫通ドメイン又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ γ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＧＥ９１７８８）の膜貫通ドメイン又はその変異体を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲＭの第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ、ＴＣＲ α鎖定常ドメイン（例えば、配列番号１）の膜貫通ドメイン、又はその変異型、及びＴＣＲ β鎖定常ドメイン（例えば、配列番号２）の膜貫通ドメイン、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ、ＴＣＲ δ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号３）の膜貫通ドメイン、又はその変異型、及びＴＣＲ γ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号４）の膜貫通ドメイン、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ配列番号５及び６のアミノ酸配列、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ配列番号７及び８のアミノ酸配列、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。膜貫通ドメインの変異型としては、参照配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有する膜貫通ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、変異型膜貫通ドメインは、参照配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対してアミノ末端側の第１の連結ペプチドを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインに対してアミノ末端側の第２の連結ペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の連結ペプチドは、それぞれ、ＴＣＲ α鎖定常ドメイン（例えば、配列番号１）の連結ペプチドの全て又は一部、又はその変異型、及びＴＣＲ β鎖定常ドメイン（例えば、配列番号２）の連結ペプチドの全て又は一部、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の連結ペプチドは、それぞれ、配列番号２７若しくは２８の連結ペプチド又はその変異型の全て又は一部、及び配列番号２９若しくは３０の連結ペプチド又はその変異型の全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の連結ペプチドは、それぞれ、ＴＣＲ δ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号３）の連結ペプチドの全て又は一部、又はその変異型、及びＴＣＲ γ鎖定常ドメイン（例えば、配列番号４）の連結ペプチドの全て又は一部、又はその変異型を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の連結ペプチドは、それぞれ、配列番号３１若しくは３２の連結ペプチド又はその変異型の全て又は一部、及び配列番号３３若しくは３４の連結ペプチド又はその変異型の全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭに対してカルボキシ末端側の第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭに対してカルボキシ末端側の第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン若しくはその変異型の全て若しくは一部を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン若しくはその変異型の全て若しくは一部を含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３５－３６又はその変異型のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、天然に存在するＴＣＲ又はその変異型の１つの鎖の断片であり、及び／又は第２のＴＣＲＤは、天然に存在するＴＣＲ又はその変異型のうちの他の鎖の断片である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、ジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲＤは、第１の連結ペプチド中の残基と第２の連結ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζのそれぞれを動員して、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体を形成することができる（すなわち、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する）。

【0090】

想到されるｃａＴＣＲ構築物としては、例えば、細胞表面抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲ、細胞表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合するｃａＴＣＲ、及び細胞表面抗原及び細胞表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体の両方に特異的に結合するｃａＴＣＲが挙げられる。

【0091】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は単特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は多重特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は二重特異性である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖｓを含むタンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、直接結合していない２つのｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体部分は、完全ヒト、ヒト抗体フレームワーク領域を有する半合成、又はヒト化したものである。

【0092】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、Ｖ_Ｈ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、Ｖ_Ｌ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ抗体ドメイン及びＶ_Ｌ抗体ドメインＣＤＲは、同じ抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ抗体ドメイン及びＶ_Ｌ抗体ドメインＣＤＲの一部は、異なる抗体部分に由来する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ抗体ドメイン及び／又はＶ_Ｌ抗体ドメインは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。

【0093】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、完全ヒト配列及び１つ以上の合成領域を含む半合成である抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、完全ヒトＶ_Ｌと、完全ヒトＦＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域及び合成ＨＣ－ＣＤＲ３を含む半合成Ｖ_Ｈと、を含む半合成抗体部分である。いくつかの実施形態では、半合成Ｖ_Ｈは、約５～約２５（約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５のいずれかなど）の長さのアミノ酸の配列を有する完全合成ＨＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、半合成Ｖ_Ｈ又は合成ＨＣ－ＣＤＲ３は、約５～約２５（約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５のいずれかなど）の長さのアミノ酸の配列を有する完全合成ＨＣ－ＣＤＲ３領域を含む半合成ライブラリー（半合成ヒトライブラリーなど）から得られ、配列中の各アミノ酸は、互いに独立して、システインを除く標準的なヒトアミノ酸からランダムに選択される。いくつかの実施形態では、合成ＨＣ－ＣＤＲ３は、約１０～約１９（約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又は１９のいずれかなど）の長さのアミノ酸である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、半合成Ｖ_Ｌ及び半合成Ｖ_Ｈを含む半合成抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、固定ヒトＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌフレームワークペアを含む完全合成抗体部分であるが、重鎖及び軽鎖の両方の６つのＣＤＲ全てについてランダム化及び合成配列である。

【0094】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、１つ以上の抗体部分（モノクローナル抗体など）に由来する特異的ＣＤＲ配列、又は１つ以上のアミノ酸置換を含むそのような配列の特定の変異型を含む抗体部分である。いくつかの実施形態では、変異型配列中のアミノ酸置換は、抗原結合モジュールが標的抗原に結合する能力を実質的に低下させない。標的抗原結合親和性を実質的に改善するか、又は標的抗原の関連変異型との特異性及び／又は交差反応性などのいくつかの他の特性に影響を及ぼす変更も想到される。

【0095】

いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、抗体部分から誘導される。例えば、いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、Ｃ_Ｈ１抗体ドメイン又はその変異型を含む第１の安定化ドメインと、Ｃ_Ｌ抗体ドメイン又はその変異型を含む第２の安定化ドメインと、を含む。別の実施形態では、安定化モジュールは、Ｃ_Ｈ３抗体ドメイン又はその変異型を含む第１の安定化ドメインと、Ｃ_Ｈ３抗体ドメイン又はその変異型を含む第２の安定化ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体重鎖定常ドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１又はＣ_Ｈ３）は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＭ、又はＩｇＥ重鎖、所望によりヒトに由来する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体重鎖定常ドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１又はＣ_Ｈ３）は、それが由来する配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異型である。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）は、カッパ又はラムダ軽鎖、所望によりヒトに由来する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールに含まれる抗体軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）は、それが由来する配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異型である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の安定化ドメインは、互いに結合親和性を実質的に変化させない１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の安定化ドメインは、互いに結合親和性を増加させ、及び／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ改変（例えば、Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２４８：７－１５，２００１を参照されたい）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ改変を含む抗体定常ドメイン領域（例えば、Ｃ_Ｈ３ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、それらの結合を増強するための静電的ステアリングによって改変された抗体定常ドメイン領域（例えば、Ｃ_Ｈ３ドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２００６１０６９０５及びＧｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８５：１９６３７－４６，２０１０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。

【0096】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、所望により安定化モジュールを含む、本明細書に記載のＴＣＲＭに連結された本明細書に記載の抗原結合モジュールを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＤの一方又は両方のＮ末端に連結された抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭと抗原結合モジュールとの間の安定化モジュールを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメイン間のスペーサモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、約５～約７０（約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０のいずれかなど、これらの値間の任意の範囲を含む）の長さのアミノ酸の１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに対してカルボキシ末端側である。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアクセサリー細胞内ドメインは、個々に、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、免疫共刺激分子（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなど）の細胞内ドメインの全て又は一部を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、配列番号５１～５６、又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列の全て又は一部を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、疾患細胞において発現する疾患関連抗原である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。ペプチド／ＭＨＣ複合体としては、例えば、疾患細胞で発現する疾患関連抗原に由来するペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む表面提示複合体が挙げられる。いくつかの実施形態では、完全長疾患関連抗原は、疾患細胞の表面に通常発現しない（例えば、疾患関連抗原は、細胞内又は分泌タンパク質である）。いくつかの実施形態では、疾患はがんであり、疾患関連抗原は、がん細胞において発現する腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍性タンパク質である。いくつかの実施形態では、腫瘍性タンパク質は、がん原遺伝子における変異の結果であり、腫瘍性タンパク質は、変異を含むネオエピトープを含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面腫瘍関連抗原（例えば、ネオエピトープを含む腫瘍性タンパク質）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、がん細胞表面では通常発現しない（例えば、細胞内又は分泌の腫瘍関連抗原）腫瘍関連抗原（例えば、ネオエピトープを含む腫瘍性タンパク質）に由来するペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、疾患はウイルス感染であり、疾患関連抗原は、感染細胞において発現するウイルス関連抗原である。例えば、いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、細胞表面のウイルス関連抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ウイルス感染細胞の表面に通常発現しないウイルス関連抗原（例えば、細胞内又は分泌のウイルス関連抗原）に由来するペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ構築物は、約０．１ｐＭ～約５００ｎＭ（約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、又は５００ｎＭのいずれかなど、これらの値間の任意の範囲を含む）のＫ_ｄで標的抗原に結合する。

【0098】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、細胞表面抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものである。完全な抗原、例えば、細胞表面抗原への特異的結合は、しばしば、「非ＭＨＣ拘束結合」と呼ばれる。

【0099】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、ペプチドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものからなる群から選択されるタンパク質に由来する。ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体への特異的結合は、しばしば「ＭＨＣ拘束結合」と呼ばれる。

【0100】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原など）及びＭＨＣクラスＩタンパク質に由来するペプチドを含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、又はＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、又はＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ｂである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ０１、ＨＬＡ－Ａ０２、ＨＬＡ－Ａ０３、ＨＬＡ－Ａ０９、ＨＬＡ－Ａ１０、ＨＬＡ－Ａ１１、ＨＬＡ－Ａ１９、ＨＬＡ－Ａ２３、ＨＬＡ－Ａ２４、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２８、ＨＬＡ－Ａ２９、ＨＬＡ－Ａ３０、ＨＬＡ－Ａ３１、ＨＬＡ－Ａ３２、ＨＬＡ－Ａ３３、ＨＬＡ－Ａ３４、ＨＬＡ－Ａ３６、ＨＬＡ－Ａ４３、ＨＬＡ－Ａ６６、ＨＬＡ－Ａ６８、ＨＬＡ－Ａ６９、ＨＬＡ－Ａ７４、又はＨＬＡ－Ａ８０である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１－５５５、例えばＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０８、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０９、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１０、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１７、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１８、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１９、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２０、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２２、又はＨＬＡ－Ａ^＊０２：２４のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１である。

【0101】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原など）に由来するペプチド及びＭＨＣクラスＩＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、又はＨＬＡ－ＤＲである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＰである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＱである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＲである。

【0102】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、ａ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、ｂ）ＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の膜貫通ドメインに由来する第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含むＴＣＲＭとを含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭ中の１つ以上のポリペプチド鎖のアミノ末端に連結する。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、２つのポリペプチド鎖を含み、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭポリペプチド鎖の一方又は両方のアミノ末端に連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ－ＴＭに対してアミノ末端側のＴＣＲの少なくとも１つの連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ－ＴＭに対してカルボキシ末端側のＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む、少なくとも１つのＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ鎖の断片に由来するＴＣＲＤを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ＴＣＲ－ＴＭに対してカルボキシ末端側のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは共刺激シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｖ_Ｈ抗体ドメイン及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成、又は完全合成である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、安定化ドメインを連結する少なくとも１つのジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲはヘテロ二量体などのヘテロ多量体である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のＴＣＲＤを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体であり、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のポリペプチド鎖に連結される。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0103】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲはαβ ＴＣＲであり、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲはγδ ＴＣＲであり、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ γ及びδサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片であり、及び／又は、第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0104】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）天然に存在するαβ ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び天然に存在するαβ ＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片であり、及び／又は、第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβ Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0105】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）天然に存在するγδ ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び天然に存在するγδ ＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片であり、及び／又は、第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するγδ Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0106】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0107】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0108】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメイン由来の連続したアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメイン由来の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３又は４に含まれる膜貫通ドメイン由来の約１０以下（約９、８、７、６、５、又はそれ以下など）の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１又は第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号３に含まれる膜貫通ドメイン由来であり、他のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号４に含まれる膜貫通ドメイン由来である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、それが第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列と相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号１及び２に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0109】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0110】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0111】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列のうちの１つに含まれる膜貫通ドメインに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメイン由来の連続したアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメイン由来の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１又は２に含まれる膜貫通ドメイン由来の約１０以下（約９、８、７、６、５、又はそれ以下など）の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１又は第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号１に含まれる膜貫通ドメイン由来であり、他のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号２に含まれる膜貫通ドメイン由来である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、それが第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列と相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる連結ペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号１～４のアミノ酸配列又はその変異型のいずれか１つに含まれる細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号３及び４に含まれる膜貫通ドメインの配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0112】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0113】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0114】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、配列番号７又は８由来の連続したアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、配列番号７又は８由来の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、配列番号７又は８由来の約１０以下（約９、８、７、６、５、又はそれ以下など）の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１又は第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号７由来であり、他のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号８由来である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、それが第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列と相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号５及び６の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0115】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0116】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0117】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列のうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び他のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、ＴＣＲ－ＴＭの少なくとも１つは、配列番号５又は６由来の連続したアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、配列番号５又は６由来の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、配列番号５又は６由来の約１０以下（約９、８、７、６、５、又はそれ以下など）の連続するアミノ酸の一部を含むキメラ配列を含む。いくつかの実施形態では、第１又は第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号５由来であり、他のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、配列番号６由来である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列は、それが第２のＴＣＲ－ＴＭ中のキメラ配列と相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチド及び第２の連結ペプチドはそれぞれ、互いに独立して、配列番号２７～３４又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメイン及び第２のＴＣＲ細胞内ドメインはそれぞれ、互いに独立して、配列番号３５若しくは３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（二重特異性など）である。

【0118】

異なる態様は、以下の様々なセクションで更に詳細に論じられる。
ＴＣＲ－ＴＭ変異型

【0119】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲのＴＣＲ－ＴＭはＴ細胞受容体に由来し、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは天然に存在しない。Ｔ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸の置換によって改変されたＴ細胞受容体由来の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸に対して近位（一次配列中又は空間的のいずれか）にある。例えば、いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸から３個以下（０、１、２、又は３など）のアミノ酸で離れている。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸から約１５Å以下（約１４、１２、１０、８、６、４、２Å、又は１Åのいずれか以下など）で離れている。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0120】

例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変されたα、β、γ、又はδ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0121】

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号１に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号５）のアミノ酸配列を含むα ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、α ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号１に含まれる膜貫通ドメインの５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、α ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号１に含まれる膜貫通ドメインの単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0122】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号５のアミノ酸配列を含むα ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、α ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号５中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、α ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号５中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0123】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号２に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号６）のアミノ酸配列を含むβ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、β ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号２に含まれる膜貫通ドメインの５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、β ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号２に含まれる膜貫通ドメインの単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0124】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号６のアミノ酸配列を含むβ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、β ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号６中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、β ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号６中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0125】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号３に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号７）のアミノ酸配列を含むδ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、δ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインの５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、δ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインの単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0126】

いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号７）のアミノ酸配列を含み、配列番号７中の以下のアミノ酸、Ｌ４、Ｍ６、Ｖ１２、Ｎ１５、Ｆ２４５、及びＬ２５に対応するアミノ酸における１つ以上の置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号７中のＶ１２及びＮ１５に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号７中の以下の置換、Ｌ４Ｃ、Ｍ６Ｖ、Ｖ１２Ｆ、Ｎ１５Ｓ、Ｆ２４５Ｓ、及びＬ２５Ｓに対応する１つ以上の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号３に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号７中のＶ１２Ｆ及びＮ１５Ｓの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号９～１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0127】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号７のアミノ酸配列を含むδ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、δ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号７中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、δ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号７中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0128】

いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、配列番号７中の以下のアミノ酸、Ｌ４、Ｍ６、Ｖ１２、Ｎ１５、Ｆ２４５、及びＬ２５に対応するアミノ酸における１つ以上の置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、配列番号７のアミノ酸、Ｖ１２及びＮ１５に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、配列番号７中の以下の置換、Ｌ４Ｃ、Ｍ６Ｖ、Ｖ１２Ｆ、Ｎ１５Ｓ、Ｆ２４５Ｓ、及びＬ２５Ｓに対応する１つ以上の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、配列番号７中のＶ１２Ｆ及びＮ１５Ｓの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号９～１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号４に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号８）のアミノ酸配列を含むγ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、γ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインの５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、γ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインの単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0130】

いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメイン（例えば、配列番号８）のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の以下のアミノ酸、Ｙ１、Ｙ２、Ｍ３、Ｌ５、Ｌ８、Ｖ１２、Ｖ１３、Ｆ１５、Ａ１６、Ｉ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、及びＣ２１に対応するアミノ酸における１つ以上の置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８のアミノ酸、Ｙ２、Ｍ３、Ａ１６、及びＩ１８に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｌ８、Ｖ１２、及びＦ１５に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８中の以下の置換、Ｙ１Ｑ、Ｙ２Ｌ、Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｖ、Ｍ３Ｉ、Ｌ５Ｃ、Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、Ｖ１３Ｙ、Ｆ１５Ｓ、Ａ１６Ｖ、Ａ１６Ｉ、Ｉ１８Ｖ、Ｉ１８Ｌ、Ｃ１９Ｍ、Ｃ２０Ｍ、及びＣ２１Ｇに対応する１つ以上の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８のＹ２Ｌ、Ｍ３Ｖ、Ａ１６Ｖ、及びＩ１８Ｖの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８のＹ２Ｉ、Ｍ３Ｉ、Ａ１６Ｉ、及びＩ１８Ｌの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号４に含まれる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を含み、配列番号８のＬ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、及びＦ１５Ｓの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号１４～２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞受容体に由来する天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、１つ以上のアミノ酸残基の置換によって改変された、配列番号８のアミノ酸配列を含むγ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、γ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号８中の５個以下のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、γ ＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインは、配列番号８中の単一のアミノ酸残基の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、対応する非置換残基よりも疎水性の残基で置換される。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。いくつかの実施形態では、置換アミノ酸のそれぞれは、結合ＣＤ３に含まれるＴＣＲＭ中のアミノ酸の近位にある。

【0132】

いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の以下のアミノ酸、Ｙ１、Ｙ２、Ｍ３、Ｌ５、Ｌ８、Ｖ１２、Ｖ１３、Ｆ１５、Ａ１６、Ｉ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、及びＣ２１に対応するアミノ酸における１つ以上の置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｙ２、Ｍ３、Ａ１６、及びＩ１８に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｌ８、Ｖ１２、及びＦ１５に対応するアミノ酸における置換（より疎水性の残基による置換など）によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の以下の置換、Ｙ１Ｑ、Ｙ２Ｌ、Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｖ、Ｍ３Ｉ、Ｌ５Ｃ、Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、Ｖ１３Ｙ、Ｆ１５Ｓ、Ａ１６Ｖ、Ａ１６Ｉ、Ｉ１８Ｖ、Ｉ１８Ｌ、Ｃ１９Ｍ、Ｃ２０Ｍ、及びＣ２１Ｇに対応する１つ以上の置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｙ２Ｌ、Ｍ３Ｖ、Ａ１６Ｖ、及びＩ１８Ｖの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｙ２Ｉ、Ｍ３Ｉ、Ａ１６Ｉ、及びＩ１８Ｌの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、配列番号８中の、Ｌ８Ｆ、Ｖ１２Ｆ、及びＦ１５Ｓの置換に対応する置換によって改変される。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＴＣＲ－ＴＭは、配列番号１４～２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び９～１３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、並びに配列番号８及び１４～２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、表２に列挙されるｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、配列番号３１若しくは３２又はその変異型のアミノ酸配列を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、配列番号３３若しくは３４又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。

【表2】

抗原結合モジュール

【0134】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによると、抗原結合モジュールは抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分が、第１の抗体部分鎖及び第２の抗体部分鎖を含む多量体である場合、ｃａＴＣＲは、第１又は第２の抗体部分鎖に連結された第１のＴＣＲＤと、他方の抗体部分鎖に連結された第２のＴＣＲＤとを含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。

【0135】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによると、抗原結合モジュールは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメインを含む抗体部分である。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）重鎖、所望によりヒトに由来する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、それが由来する配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異型である。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７～４７、又はその変異型のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７、又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｌドメインは、カッパ又はラムダ軽鎖、所望によりヒトに由来する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｌドメインは、それが由来する配列と比較して、１つ以上の改変（例えば、アミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失）を含む変異型である。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｌドメインは、配列番号４８、又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び／又はＣ_Ｌドメインは、互いに結合親和性を実質的に変化させない１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び／又はＣ_Ｌドメインは、互いに結合親和性を増加させ、及び／又は天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つ以上の改変を含む。

【0136】

いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによると、抗体部分は、標的抗原に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１８年３月３０日出願のＵＳＳＮ６２／６５０，９５５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１７年４月２６日出願のＵＳＳＮ６２／４９０，５８６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０及びＷＯ２０１６／１８７２１６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７及びＷＯ２０１６／０９０３２０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９及びＷＯ２０１６／０９０３１２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４、ＷＯ２０１５／０７００７８、及びＷＯ２０１５／０７００６１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６－Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｖ_Ｈドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインを含む１つのＦａｂ鎖と、Ｖ_Ｌドメイン及びＣ_Ｌドメインを含む別のＦａｂ鎖と、を含むＦａｂである。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７～４７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、Ｃ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。
ｃａＴＣＲ構築物

【0137】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、安定化モジュールは、ＴＣＲＭと抗体部分との間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0138】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び９～１３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号８及び１４～２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、表２に列挙されるｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、配列番号３１若しくは３２又はその変異型のアミノ酸配列を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、配列番号３３若しくは３４又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0139】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分と、を含み、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ、配列番号７及び８、９及び８、７及び１４、７及び１５、７及び１６、１０及び１６、７及び１７、７及び１８、７及び１９、７及び２０、７及び２１、７及び２２、１１及び２３、１２及び２４、７及び２５、又は１３及び２６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、配列番号３１若しくは３２又はその変異型のアミノ酸配列を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、配列番号３３若しくは３４又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。

【0140】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに連結する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）ＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに連結する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１及び第２のＦａｂ鎖は、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、ａ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、又はｂ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１のＴＣＲＤに連結されたＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含む第１のＦａｂ鎖を含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＴＣＲＤに連結されたＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含む第２のＦａｂ鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１のＴＣＲＤに連結されたＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含む第１のＦａｂ鎖と、ｂ）第２のＴＣＲＤに連結されたＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含む第２のＦａｂ鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方とそれらの連結したＦａｂ鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメイン内の残基とＣ_Ｌドメイン内の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び／又はＣ_Ｌドメインは、互いにＦａｂ鎖の結合親和性を増加させる１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメインは、Ｆａｂ鎖のうちの１つがＶ_Ｈ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、他方のＦａｂ鎖がＶ_Ｌ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含むように交換される。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその連結されたＦａｂ鎖との間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその連結されたＦａｂ鎖との間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0141】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）配列番号７及び９～１３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに連結する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、ｂ）配列番号８及び１４～２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに連結する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１及び第２のＦａｂ鎖は、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、表２に列挙されるｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、ａ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、又はｂ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７～４７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、Ｃ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、配列番号３１若しくは３２又はその変異型のアミノ酸配列を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、配列番号３３若しくは３４又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0142】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤに連結する第１のＦａｂ鎖を含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤに連結する第２のＦａｂ鎖を含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖と、を含み、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、それぞれ、配列番号７及び８、９及び８、７及び１４、７及び１５、７及び１６、１０及び１６、７及び１７、７及び１８、７及び１９、７及び２０、７及び２１、７及び２２、１１及び２３、１２及び２４、７及び２５、又は１３及び２６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１及び第２のＦａｂ鎖は、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、ａ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、又はｂ）第１のＦａｂ鎖はＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ鎖はＶ_Ｈ及びＣ_Ｈ１抗体ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７～４７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、及び／又はＣ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、Ｃ_Ｌドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、配列番号３１若しくは３２又はその変異型のアミノ酸配列を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、配列番号３３若しくは３４又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号３６又はその変異型のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、配列番号７及び８の配列を有するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。

【0143】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合するＦａｂ’と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、Ｆａｂ’は、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１、及び部分ヒンジ抗体ドメインを含む第１のＦａｂ’鎖、並びにＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含む第２のＦａｂ’鎖を含み、第１のＦａｂ’鎖は第１又は第２のＴＣＲＤに連結し、第２のＦａｂ’鎖は他のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方とそれらの連結したＦａｂ’鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメイン内の残基とＣ_Ｌドメイン内の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び／又はＣ_Ｌドメインは、互いにＦａｂ’鎖の結合親和性を増加させる１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメインは、第１のＦａｂ’鎖がＶ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及び部分ヒンジ抗体ドメインを含み、第２のＦａｂ’鎖がＶ_Ｌ及びＣ_Ｈ１ドメインを含むように交換される。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ’は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ’は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその連結されたＦａｂ’鎖との間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその連結されたＦａｂ’鎖との間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0144】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する（Ｆａｂ’）２と、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、（Ｆａｂ’）２は、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１、及び部分ヒンジ抗体ドメインを含む第１及び第２の（Ｆａｂ’）２鎖、並びにＶ_Ｌ及びＣ_Ｌ抗体ドメインを含む第３及び第４の（Ｆａｂ’）２鎖を含み、第１の（Ｆａｂ’）２鎖は第１又は第２のＴＣＲＤに連結し、第２の（Ｆａｂ’）２鎖は他のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方とそれらの連結した（Ｆａｂ’）２鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１ドメイン内の残基とＣ_Ｌドメイン内の残基との間にジスルフィド結合が存在する。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び／又はＣ_Ｌドメインは、互いに（Ｆａｂ’）２鎖の結合親和性を増加させる１つ以上の改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメインは、第１及び第２の（Ｆａｂ’）２鎖がＶ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及び部分ヒンジ抗体ドメインを含み、第３及び第４の（Ｆａｂ’）２鎖がＶ_Ｌ及びＣ_Ｈ１ドメインを含むように交換される。いくつかの実施形態では、（Ｆａｂ’）２は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、（Ｆａｂ’）２は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその連結された（Ｆａｂ’）２鎖との間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその連結された（Ｆａｂ’）２鎖との間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0145】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合するＦｖと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、Ｆｖは、Ｖ_Ｈ抗体ドメインを含む第１のＦｖ鎖、及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含む第２のＦｖ鎖を含み、第１のＦｖ鎖は第１又は第２のＴＣＲＤに連結し、第２のＦｖ鎖は他のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＤの一方又は両方とそれらの連結したＦｖ鎖との間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のＴＣＲＤとその連結されたＦｖ鎖との間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤとその連結されたＦｖ鎖との間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0146】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、第１のｓｃＦｖは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含み、第１のｓｃＦｖは、第１又は第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のｓｃＦｖに連結するか、又は第１のｓｃＦｖに連結していないＴＣＲＤに連結する第２の抗原結合モジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは、標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは、標的抗原以外の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合モジュールは第２のｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖとその連結したＴＣＲＤとの間、及び／又は第２の抗原結合モジュールとその連結したｓｃＦｖ又はＴＣＲＤとの間にペプチドリンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のｓｃＦｖとその連結されたＴＣＲＤとの間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。

【0147】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合し、ａ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤと、ｂ）標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、及び第２のｓｃＦｖと、を含み、第１及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することのできるＴＣＲＭを形成し、第１及び第２のｓｃＦｖは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含み、第１のｓｃＦｖは、第１又は第２のＴＣＲＤに連結し、第２のｓｃＦｖは他のＴＣＲＤに連結する。いくつかの実施形態では、第２のＴＣＲＤは、標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖ．のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、標的抗原以外の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のｓｃＦｖは、個々に、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものを含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のｓｃＦｖは、個々に、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１又は第２の安定化ドメインは、第１のｓｃＦｖとその連結されたＴＣＲＤとの間に位置し、他の安定化ドメインは、第２のｓｃＦｖとその連結されたＴＣＲＤとの間に位置する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。
多重特異性ｃａＴＣＲ

【0148】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、２つ以上（例えば、２、３、４、又はそれ以上）の異なる標的抗原又はエピトープに特異的に結合する多重特異性ｃａＴＣＲである。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、２つ以上（例えば、２、３、４、又はそれ以上）の異なる標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、同じ標的抗原上の２つ以上（例えば、２、３、４、又はそれ以上）の異なるエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、抗原又はエピトープごとの抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの抗原又はエピトープのための２つを超える抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは、抗原又はエピトープに各々特異的に結合する２つ以上（例えば、２、３、４、又はそれ以上）の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは二重特異性である。いくつかの実施形態では、多重特異性ｃａＴＣＲは三重特異性である。

【0149】

多重特異性分子は、少なくとも２つの異なる抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する分子である（例えば、二重特異性抗体は、２つの抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する）。２を超える価数及び／又は特異性を有する多重特異性ｃａＴＣＲも想到される。二重特異性抗体は、記載されており、例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ Ｕ．ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ．Ｅ．（２０１７）ＭＡＢＳ，９（２），１８２－２１２を参照されたい。三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照されたい。当業者は、当該技術分野において既知の個々の多重特異性分子の適切な特徴を選択して、多重特異性ｃａＴＣＲを形成することができることを理解されたい。

【0150】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ（本明細書では「多重特異性ｃａＴＣＲ」とも称される）は、ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、及び第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、ｂ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片であり、及び／又は、第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体部分、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、天然に存在するαβ Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び第２のＴＣＲ－ＴＭの両方は、天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭは、それが由来する膜貫通ドメインと比較して、最大５個のアミノ酸置換（例えば、単一のアミノ酸置換）を含み、及び／又は、第２のＴＣＲ－ＴＭは、それが由来する膜貫通ドメインと比較して、最大５個のアミノ酸置換（例えば、単一のアミノ酸置換）を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸は、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸に近接している。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換アミノ酸は、ＣＤ３への結合に関与する第１又は第２のＴＣＲ－ＴＭ中のアミノ酸に近接している。いくつかの実施形態では、１つ以上の（例えば、各）置換アミノ酸は、それらの対応する非置換アミノ酸よりも疎水性である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭは、配列番号７及び９～１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み、第２のＴＣＲ－ＴＭは、配列番号８及び１４～２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0151】

二重特異性ｃａＴＣＲの例示的な構造は図１３Ａ～１３Ｅに示され、標的抗原がＣＤ１９及びＣＤ２２であるが、当業者は、他の標的抗原又はエピトープを標的化する二重特異性ｃａＴＣＲが、同じ構造フォーマットを使用して調製し得ることを容易に理解する。

【0152】

例えば、ＤＶＤ ＩｇＧｓに由来する二重可変ドメイン（ＤＶＤ）（ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ３（５）：４８７－４９４を参照されたい）は、ｃａＴＣＲ内の二重特異性抗原結合モジュールとして使用することができる（図１３Ａ）。外側可変ドメイン及び内側可変ドメインの融合のための様々なリンカーが開発され、ＤＶＤモジュールを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であり得るＤＶＤ－Ｉｇｓのために最適化されている。しかしながら、ＤＶＤモジュールにおける可変ドメインスタッキング手法は、内側可変ドメインの折り畳み及び標的結合親和性に影響を及ぼし得る。２つの可変ドメインの間のリンカーと２つの可変ドメインの順序とは、ｃａＴＣＲの有効性に影響を及ぼし得る。

【0153】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１の標的抗原に特異的に結合するＦｖ、及び第２の標的抗原に特異的に結合するＦａｂを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、ｂ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。

【0154】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ１－Ｌ１－Ｖ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ１－Ｌ２－Ｖ_Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ１－Ｌ１－Ｖ_Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ１－Ｌ２－Ｖ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ１－Ｌ１－Ｖ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ１－Ｌ２－Ｖ_Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、又は（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ１－Ｌ１－Ｖ_Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ１－Ｌ２－Ｖ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、を含み、Ｖ_Ｈ１及びＶ_Ｌ１は、第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを形成し、Ｖ_Ｈ２及びＶ_Ｌ２は、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２は、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５～約５０（例えば、約５～１０、約１０～１５、又は約１５～３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ａに示す。

【0155】

ＣＯＤＶ－ＩｇＧｓ由来のクロスオーバー二重可変ドメイン（ＣＯＤＶ）（Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ，ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ（２０１６），８（５）：８６７－８７８を参照）を、ｃａＴＣＲ中の二重特異性抗原結合モジュールとして使用することができる（図１３Ｂ）。ＣＯＤＶは、各Ｆｖに対する比較的障害のない抗原結合部位を可能にする。重鎖及び軽鎖可変領域の融合のための様々なリンカーが開発され、ＣＯＤＶモジュールを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であり得るＣＯＤＶ－Ｉｇｓのために最適化されている。しかしながら、ＣＯＤＶモジュールの適切な折り畳みは困難であり得、ＣＯＤＶモジュールで使用される長いリンカーは、免疫原性の潜在的な供給源であり得、タンパク質溶解切断を受けやすい可能性がある。

【0156】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１のＦｖ、及び第２の標的抗原に特異的に結合する第２のＦｖを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、ｂ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌを更に含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ１－Ｌ１－Ｖ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ２－Ｌ２－Ｖ_Ｌ１－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、又は（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ１－Ｌ１－Ｖ_Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ２－Ｌ２－Ｖ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、を含み、Ｖ_Ｈ１及びＶ_Ｌ１は、第１の標的抗原に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを形成し、Ｖ_Ｈ２及びＶ_Ｌ２は、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２は、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５～約５０（例えば、約５～２０、約１５～３０、又は約３０～５０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｂに示す。

【0158】

Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ８（４）：７６１－７７４に記載されているものなどの、ｓｃＦｖ－融合タンパク質由来の二重特異性抗原結合モジュールは、二重特異性ｃａＴＣＲ（図１３Ｃ）で使用されてもよい。同様の融合フォーマットを有する二重特異性抗体の発現は、このフォーマットの適切な折り畳み及び安定性を示している。ｓｃＦｖを定常ドメインに融合させるための様々なリンカーが開発され、同様のｓｃＦｖ融合ドメインを有する二重特異性ｃａＴＣＲを構築するのに有用であり得るこれらの二重特異性抗体について最適化されている。しかしながら、ｓｃＦｖ間の立体障害は、ｓｃＦｖのそれらの標的抗原への結合を損なう可能性がある。

【0159】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１の標的抗原に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、及び第２の標的抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、ｂ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌを更に含む。

【0160】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ１－Ｌ１－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ２－Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、又は、（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ２－Ｌ１－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ１－Ｌ２－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、を含み、ｓｃＦｖ１は、第１の標的抗原に特異的に結合し、ｓｃＦｖ２は、第２の標的抗原に特異的に結合し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２は、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５～約５０（例えば、約５～１０、約１０～１５、又は約１５～３０）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は異なる長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、異なるアミノ酸配列を有する。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｃに示す。

【0161】

ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体又はＦａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ二重特異性抗体由来の二重特異性抗原結合モジュールを、二重特異性ｃａＴＣＲにおいて使用することができる。１つのフォーマット（図１３Ｄ）では、ｓｃＦｖは、ＦａｂのＶ_Ｈ又はＶ_Ｌのいずれかに結合し、これにより、ｓｃＦｖのより高い柔軟性、したがってＦａｂのその標的抗原へのより大きなアクセスを可能にする。しかしながら、ｓｃＦｖ－Ｆａｂモジュールは安定性の問題を有し得る。第２のフォーマット（図１３Ｅ）では、Ｆａｂは第１のＴＣＲＤに融合され、ｓｃＦｖは、第２のＴＣＲＤに融合される。

【0162】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、ａ）第１の標的抗原に特異的に結合するｓｃＦｖ、及び第２の標的抗原に特異的に結合するＦａｂを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合モジュールと、ｂ）第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ１）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ（ＴＣＲＤ２）を含むＴＣＲＭと、を含み、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進する。

【0163】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、又は、（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ２－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－ＴＣＲＤ２を含む第２のポリペプチド鎖、を含み、ｓｃＦｖは、第１の標的抗原に特異的に結合し、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２は、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５～約５０（例えば、約５～１０、約１０～１５、又は約１５～３０）のアミノ酸長である。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｄに示す。

【0164】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｌ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１を含む第２のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ２－ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖、（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｌ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ２－ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖、（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１を含む第２のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｌ２－ＴＣＲＤ２；を含む第３のポリペプチド鎖、又は、（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖ－Ｌ１－ＴＣＲＤ１を含む第１のポリペプチド鎖、Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチド鎖、及びＮ末端からＣ末端に向けて、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｌ２－ＴＣＲＤ２を含む第３のポリペプチド鎖、を含み、ｓｃＦｖは、第１の標的抗原に特異的に結合し、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２の標的抗原に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを形成し、ＴＣＲＤ１及びＴＣＲＤ２は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲＭを形成し、Ｌ１及びＬ２は、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌ１及び／又はＬ２は、約５～約５０（例えば、約５～１０、約１０～１５、又は約１５～３０）のアミノ酸長である。例示的な二重特異性ｃａＴＣＲを図１３Ｅに示す。ｓｃＦｖとＴＣＲＤとの間のペプチドリンカーの長さ、及びＦａｂとＴＣＲＤとの間のペプチドリンカーの長さは、ｓｃＦｖ及びＦａｂのそれらの標的抗原への接近性に影響を及ぼし得るため最適化することができる。

【0165】

多重特異性ｃａＴＣＲの多重特異性抗原結合モジュールは、標的抗原又はエピトープの任意の適切な組み合わせに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、少なくとも１つの細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５、その変異型又は変異体を含むものからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、少なくとも１つのペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプチド／ＭＨＣ複合体は、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ヒストンＨ３．３、及びＰＳＡ、その変異型又は変異体を含むものからなる群から選択されるタンパク質に由来するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、第１の細胞表面抗原及び第２の細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、第１のペプチド／ＭＨＣ複合体及び第２のペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合モジュールは、細胞表面抗原及びペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。
キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）構築物

【0166】

本明細書に記載されるリガンド特異的キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）は、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、表面に、標的リガンドを、標的リガンド結合により機能的に発現する免疫細胞を刺激することができる。ＣＳＲは、リガンド結合特異性、膜貫通モジュール、及び免疫細胞の刺激を可能にする共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを提供するリガンド結合モジュールを含む。ＣＳＲは、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、あらゆる一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを含む単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１及び第２のポリペプチド鎖は共に、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ＣＳＲは二量体などの多量体である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって共有結合されている。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、誘導可能である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。

【0167】

本発明のＣＳＲに使用する共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインの例としては、ｃａＴＣＲと協調して作用してｃａＴＣＲ結合後のシグナル伝達を開始することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異型、及び同じ機能能力を有する任意の合成配列が挙げられる。

【0168】

いくつかの状況下では、ＴＣＲのみを介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次又は共刺激シグナルも必要とされる。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、細胞内シグナル伝達配列の２つの異なるクラス：ＴＣＲを介して抗原依存的一次活性化を開始するもの（本明細書では「一次Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称される）、及び抗原独立様式で作用して、二次又は共刺激シグナルを提供するもの（本明細書では「共刺激Ｔ細胞シグナル伝達配列」と称される）によって媒介される。

【0169】

刺激様式で作用する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含んでもよい。ＩＴＡＭ含有一次免疫細胞シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適切な受容体に作動可能に結合するときに免疫細胞活性化シグナルを変換することができる配列である。一次免疫細胞シグナル伝達配列の断片又は変異型を含み得る「非機能性」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫細胞活性化シグナルを変換することができない。本明細書に記載のＣＳＲは、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列などの機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、あらゆる一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。

【0170】

共刺激免疫細胞シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部であり得る。

【0171】

いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、標的抗原を提示する細胞の表面に提示される分子である。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの標的抗原は、がん細胞に提示されるがん関連抗原であり、標的リガンドは、インテグリンなどのがん細胞の表面に発現する偏在的分子である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、非限定的に、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５を含む細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ペプチドは、非限定的に、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号５８を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号５９を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６０を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６１を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、２０１８年３月３０日出願のＵＳＳＮ６２／６５０，９５５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号１０１を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号１０２を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、２０１７年４月２６日出願のＵＳＳＮ６２／４９０，５８６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６４を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６５を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０及びＷＯ２０１６／１８７２１６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７及びＷＯ２０１６／０９０３２０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９及びＷＯ２０１６／０９０３１２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４、ＷＯ２０１５／０７００７８、及びＷＯ２０１５／０７００６１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６－Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４を参照されたい）。

【0173】

いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュールは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はそれに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ－３を含む。

【0174】

いくつかの実施形態では、膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する、１つ以上の膜貫通ドメインを含む。

【0175】

いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達モジュールは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢの断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢの断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＯＸ４０の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＯＸ４０の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号８６又は８７のアミノ酸配列を含むＣＤ２７の断片を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達分子は、配列番号８８又は８９のアミノ酸配列を含むＣＤ３０の断片を含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールのいずれかの間にスペーサモジュールを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、２つのＣＳＲモジュールを連結する１つ以上のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、スペーサモジュールは、約５～約７０（約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０のいずれかなど、これらの値間の任意の範囲を含む）の長さのアミノ酸の１つ以上のペプチドリンカーを含む。

【0177】

いくつかの実施形態では、リガンド結合モジュール（抗体部分など）は、ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００、若しくはそれ以上のうちのいずれかを含む）の親和性で、又はｂ）他の分子に結合するためのＫ_ｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００、若しくはそれ以下など）のＫ_ｄで標的抗原に特異的に結合する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。Ｋ_ｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。

【0178】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）と、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、ＣＳＲは、標的リガンドが、標的リガンド結合の際に機能的に表面に発現する免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はそれに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ－３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰはＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。

【0179】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドは細胞表面抗原であり、ＣＳＲは、標的リガンドが、標的リガンド結合の際に機能的に表面に発現する免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はそれに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ－３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰはＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。

【0180】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンドに特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、標的リガンドはペプチド／ＭＨＣ複合体であり、ＣＳＲは、標的リガンドが、標的リガンド結合の際に機能的に表面に発現する免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰはＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。

【0181】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは抗体部分であり、ＣＳＲは、標的リガンドが、標的リガンド結合の際に機能的に表面に発現する免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４を含む膜貫通タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、ｆＴＭＰはＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通ドメイン及びＣＳＲ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。

【表3】

【0182】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲはＣＤ２８のｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインと、ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインと、を含む。

【0183】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、４－１ＢＢのｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインと、ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢの断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢの断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号９１又は９２のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインと、を含む。

【0184】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲはＣＤ２７のｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインと、ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤ２７の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤ２７の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号９３又は９４のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインと、を含む。

【0185】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ３０のｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインと、ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤ３０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤ３０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号９５又は９６のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインと、を含む。

【0186】

いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＯＸ４０のｆＣＳＭを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインと、ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＯＸ４０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＯＸ４０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、標的リガンド結合ドメインと、配列番号９７又は９８のアミノ酸配列を含むＣＳＲドメインと、を含む。

【0187】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、ａ）標的リガンド結合ドメインと、ｂ）膜貫通ドメインと、ｃ）共刺激シグナル伝達ドメインと、を含み、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部であり（又はそれに由来し）、ＣＳＲは、標的リガンドが、標的リガンド結合の際に機能的に表面に発現する免疫細胞を刺激することができる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、同じ免疫細胞で発現するｃａＴＣＲの標的抗原と異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンド受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ－３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の断片は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０３を含むペプチドリンカー、及びＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号８０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。

【0189】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合し、ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の断片は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０３を含むペプチドリンカー、及びＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。

【0190】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＧＰＣ３に特異的に結合し、ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の断片は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０３を含むペプチドリンカー、及びＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号８２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。

【0191】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ２０に特異的に結合し、ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ２８の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の断片は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０３を含むペプチドリンカー、及びＣＤ２８の断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。

【0192】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５３又は５４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、４－１ＢＢの断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢの断片は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、及び４－１ＢＢの断片を含む。

【0193】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲはＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ８の断片と、ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる４－１ＢＢの断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、ＣＤ８の断片、及び４－１ＢＢの断片を含む。

【0194】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲはＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ８の断片と、ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるＯＸ４０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、ＣＤ８の断片、及びＯＸ４０の断片を含む。

【0195】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５６又は５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＯＸ４０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０の断片は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、及びＯＸ４０の断片を含む。

【0196】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲはＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ８の断片と、ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるＣＤ２７の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、ＣＤ８の断片、及びＣＤ２７の断片を含む。

【0197】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号８６又は８７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ２７の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７の断片は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、及びＣＤ２７の断片を含む。

【0198】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲはＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ８の断片と、ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるＣＤ３０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、ＣＤ８の断片、及びＣＤ３０の断片を含む。

【0199】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＳＲは、ＣＤ１９に特異的に結合し、ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌドメインを含むｓｃＦｖと、ｂ）配列番号８８又は８９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、ＣＤ３０の断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、Ｖ_Ｌドメイン、配列番号７６のアミノ酸配列を含むペプチドリンカー、及びＶ_Ｈドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０の断片は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ｓｃＦｖ、配列番号１０４を含むペプチドリンカー、及びＣＤ３０の断片を含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、誘導可能である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導可能なプロモーターのいずれかを含む誘導可能なプロモーターに作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかのそのような実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達に応答してプロモーター又は調節要素に作動可能に連結されたＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞由来プロモーターの核因子（ＮＦＡＴ）に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、ＮＦＡＴ由来のミニマルプロモーターである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５－１７２４（１９８８）、Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２ ３５７（６３８０）：６９５－７、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１．１７（２０１１）：５６９７－５７０６、及びＺｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ １９．４（２０１１）：７５１－７５９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、配列番号８５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲをコードする核酸配列は、ＩＬ－２プロモーターに作動可能に連結される。
分泌二次エフェクター（ＳＳＥ）構築物

【0201】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（Ｔ細胞など）は、分泌二次エフェクター（ＳＳＥ）を分泌することができる。このような免疫細胞は、本明細書では、「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞」とも称される。ＳＳＥは、それが機能的に発現及び分泌されるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞によって媒介される免疫応答を強化する。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、他の免疫細胞（バイスタンダーＴ細胞又はＮＫ細胞など）を標的疾患細胞（標的がん細胞など）に再指向することができる。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫細胞（Ｔ細胞又はＮＫ細胞など）及び疾患細胞（がん細胞など）を標的化する多重特異性抗体（二重特異性抗体など）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制性腫瘍環境などの免疫抑制環境から、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞を保護する。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞上の刺激受容体の自己活性化をもたらす。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、外来性増殖因子又は刺激性サイトカインである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、誘導可能である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。

【0202】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞及び疾患細胞を標的化する多重特異性抗体（二重特異性抗体など）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞表面抗原はＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、疾患関連抗原（がん関連抗原など）に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、疾患細胞（がん細胞など）の表面抗原である。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＣＤ４７、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ－ＥＳＯ、ＨＰＶ１６、又はＦｏｘＰ３、その変異型又は変異体を含むものである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、Ｔ細胞表面抗原を標的化する第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。

【0203】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的化する第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ－ＥＳＯ、ＨＰＶ１６、又はＦｏｘＰ３、その変異型又は変異体を含むものである。

【0204】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的化する第１のｓｃＦｖと、ＧＰＣ３を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるＶ_Ｈドメインと、配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるＶ_Ｌドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈドメインは、Ｖ_Ｌドメインに対してアミノ末端側である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｌドメインは、Ｖ_Ｈドメインに対してアミノ末端側である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖに対してアミノ末端側である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖに対してアミノ末端側である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。

【0205】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的化する第１のｓｃＦｖと、ＣＤ４７を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ３を標的化する第１のｓｃＦｖと、ＭＵＣ１６を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。

【0206】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞及び疾患関連抗原（がん関連抗原など）を標的化する多重特異性抗体（二重特異性抗体など）である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞表面抗原はＣＤ１６ａである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、疾患関連抗原（がん関連抗原など）に特異的に結合する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、疾患細胞（がん細胞など）の表面抗原である。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ－ＥＳＯ、ＨＰＶ１６、又はＦｏｘＰ３、その変異型又は変異体を含むものである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＮＫ細胞表面抗原を標的化する第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。

【0207】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的化する第１のｓｃＦｖと、疾患関連抗原を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、疾患関連抗原は、ＧＰＣ３、ＣＤ４７、ＭＵＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＣＭＡ、ＦＣＲＬ５、ＮＹ－ＥＳＯ、ＨＰＶ１６、又はＦｏｘＰ３、その変異型又は変異体を含むものである。

【0208】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的化する第１のｓｃＦｖと、ＧＰＣ３を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的化する第１のｓｃＦｖと、ＣＤ４７を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ１６ａを標的化する第１のｓｃＦｖと、ＭＵＣ１６を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖである。

【0209】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＳＥは、疾患関連抗原に特異的に結合する抗体部分を含み、抗体部分は、疾患関連抗原に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７０６６１３６Ａ２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号５８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１８年３月３０日出願のＵＳＳＮ６２／６５０，９５５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１７年４月２６日出願のＵＳＳＮ６２／４９０，５８６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８７２２０及びＷＯ２０１６／１８７２１６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１４２７６８を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２７及びＷＯ２０１６／０９０３２０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３２９及びＷＯ２０１６／０９０３１２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／０９０３３７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５８５４、ＷＯ２０１５／０７００７８、及びＷＯ２０１５／０７００６１を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１３９０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６－Ｅ７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１８２９５７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０３６５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１９１２４６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２０１１２４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１５４０４７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１７／０１５６３４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分はｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ａ）Ｔ細胞の表面抗原（ＣＤ３など）又はＮＫ細胞の表面抗原（ＣＤ１６ａなど）に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）抗体部分と、を含み、郊外部分が第２のｓｃＦｖである、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ペプチドリンカーによって連結された第１及び第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖに対してアミノ末端側である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖに対してアミノ末端側である。

【0210】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、１つ以上の可溶性免疫抑制剤を標的化する多重特異性抗体（二重特異性抗体など）である。そのようなＳＳＥは、可溶性免疫抑制剤をそれらの標的から隔離するためのトラップとして作用することができ、それによってそれらの免疫抑制効果を低減する。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、１つ以上の可溶性免疫抑制剤に特異的に結合する１つ以上の抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は免疫抑制サイトカインである。いくつかの実施形態では、免疫抑制サイトカインとしては、ＴＧＦ－βファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦ－β１～４）、ＩＬ－４、及びＩＬ－１０、これらの変異型又は変異体を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは二重特異性抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、第１の免疫抑制サイトカイン（ＴＧＦβなど）を標的化する第１のｓｃＦｖと、第２の免疫抑制サイトカイン（ＩＬ－４など）を標的化する第２のｓｃＦｖと、を含むタンデムｓｃＦｖである。

【0211】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫チェックポイント分子を標的化する抗体部分である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、及びＡ２ａＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。いくつかの実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＣＤ４０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体部分はｓｃＦｖである。

【0212】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＰＤ－１を標的化するアンタゴニスト抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＤ－１に特異的なアンタゴニスト抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、ＷＯ２０１６／２１０１２９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分はｓｃＦｖである。

【0213】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ＣＤ４７を標的化するアンタゴニスト抗体部分である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分は、ＣＤ４７に特異的なアンタゴニスト抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメイン）を含む（例えば、配列番号６６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｈドメイン、及び／又は配列番号６７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶ_Ｌドメイン、或いはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体部分はｓｃＦｖである。

【0214】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、ａ）他の分子に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００、若しくはそれ以上のうちのいずれかを含む）の親和性で、又はｂ）他の分子に結合するためのＫ_ｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００、若しくはそれ以下など）のＫ_ｄで標的抗原に結合する抗体部分を含む。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、又は放射線免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。Ｋ_ｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は例えばＳａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する動的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。

【0215】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体のリガンドに特異的に結合する可溶性分子である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体の細胞外ドメインに由来するリガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、受容体の細胞外ドメインの一部である。いくつかの実施形態では、免疫抑制受容体は、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＳＩＲＰα、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、及びＴＩＭ－３からなる群から選択される。

【0216】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体に特異的に結合して拮抗する可溶性分子である。いくつかの実施形態では、ＳＳＥは、免疫抑制受容体のリガンドの細胞外ドメインに由来する受容体結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、受容体結合ドメインは、リガンドの細胞外ドメインの一部である。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＦａｓＬ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ４７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０Ｌ、及びＧＡＬ９からなる群から選択される。

【0217】

いくつかの実施形態では、ＳＳＥは外来性刺激性サイトカインである。本明細書に記載の外来性サイトカインは、外来性遺伝子から発現するサイトカインである。いくつかの実施形態では、外因性刺激性サイトカインは、ＩＬ－１２ファミリーメンバーである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１２ファミリーメンバーは、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、又はＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、外因性刺激性サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、又はＩＬ－２１である。いくつかの実施形態では、外因性刺激性サイトカインは、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞上のサイトカインの受容体の自己活性化をもたらすことができる。

【0218】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、誘導可能である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞は、本明細書に記載の誘導可能なプロモーターのいずれかを含む誘導可能なプロモーターに作動可能に連結されたＳＳＥをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞におけるＳＳＥの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかのそのような実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ及びＳＳＥ免疫細胞は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達に応答してプロモーター又は調節要素に作動可能に連結されたＳＳＥをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞由来プロモーターの核因子（ＮＦＡＴ）に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、ＮＦＡＴ由来のミニマルプロモーターである（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５－１７２４（１９８８）、Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２ ３５７（６３８０）：６９５－７、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１．１７（２０１１）：５６９７－５７０６、及びＺｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ １９．４（２０１１）：７５１－７５９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、配列番号８５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＳＳＥをコードする核酸配列は、ＩＬ－２プロモーターに作動可能に連結される。
核酸

【0219】

本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及び／又はＳＳＥをコードする核酸分子も想到される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥのいずれかによると、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及び／又はＳＳＥをコードする核酸（又は核酸のセット）が提供される。

【0220】

本発明はまた、本発明の核酸が挿入されるベクターも提供する。

【0221】

簡潔に述べると、ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸による本明細書に記載のｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの発現は、核酸を適切な発現ベクターに挿入し、核酸を、例えばプロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、５’及び３’調節要素に作動可能に連結するようにして達成できる。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製及び組み込みに適し得る。典型的なクローニング及び発現ベクターは、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列、並びに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。

【0222】

本発明の核酸は、標準的な遺伝子送達プロトコールを使用して、核酸免疫及び遺伝子治療に使用してもよい。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同５，５８０，８５９号、同５，５８９，４６６号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明は、遺伝子治療用ベクターを提供する。

【0223】

核酸は、多数の種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及びコスミドを含むがこれらに限定されないベクターにクローニングすることができる。特に重要なベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及びシークエンシングベクターが挙げられる。

【0224】

更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態の細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、及び他の生物学的及び分子生物学的マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物で機能する複製起点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択可能なマーカーを含む（例えば、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８、及び米国特許第６，３２６，１９３号を参照されたい）。

【0225】

哺乳類細胞への遺伝子導入のために、多数のウイルスベースの系が開発されてきた。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムのための便利なプラットフォームを提供する。当該技術分野において既知の技術を使用して、選択された遺伝子をベクターに挿入し、レトロウイルス粒子にパッケージ化することができる。次いで、組換えウイルスを単離し、インビボ又はエクスビボのいずれかで対象の細胞に送達することができる。多くのレトロウイルス系が当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。多くのアデノウイルスベクターが当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、長期的に安定した導入遺伝子の組み込み及び娘細胞におけるその伝播を可能にするため、長期間の遺伝子導入を達成するのに適したツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。これらはまた、低免疫原性という更なる利点を有する。

【0226】

例えば、エンハンサーなどの追加のプロモーター要素は、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の上流の３０～１１０ｂｐの領域に位置しているが、多くのプロモーターが開始部位の下流にも同様に機能的要素を含むことが最近示されている。プロモーター要素間の間隔は、多くの場合、柔軟性があり、そのため、要素が互いに対して反転又は移動されるときにプロモーター機能が保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーター要素間の間隔は、活性が低下し始める前に５０ｂｐまで増加させることができる。

【0227】

適切なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長増殖因子－１α（ＥＦ－１α）である。しかしながら、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、ニワトリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターなどが挙げられるがこれらに限定されないヒト遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列を使用してもよい。

【0228】

更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導可能なプロモーターもまた、本発明の一部として想到される。誘導型プロモーターの使用は、そのような発現が望まれるときに作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることが可能であるか、又は発現が望まれない場合に発現をオフにすることが可能である分子スイッチを提供する。真核細胞で使用する例示的な誘導可能プロモーター系としては、ホルモン調節要素（例えば、Ｍａｄｅｒ，Ｓ．ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｈ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５６０３－５６０７）、合成リガンド制御要素（例えば、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｄ．Ｍ．ｅｔ ａｌ １９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：１０１９－１０２４を参照されたい）、及び電離放射線調節要素（例えば、Ｍａｎｏｍｅ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１０６０７－１０６１３、Ｄａｔｔａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０１４－１０１５３を参照されたい）が挙げられるが、これに限定されない。インビトロ又はインビボの哺乳類系で使用するための更なる例示的な誘導可能なプロモーター系は、Ｇｉｎｇｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２１：３７７－４０５に概説されている。

【0229】

本発明で使用するための例示的な誘導可能なプロモーター系は、Ｔｅｔシステムである。このようなシステムは、Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）によって記載されるＴｅｔシステムに基づく。例示的な実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、１つ以上のＴｅｔオペレーター（ＴｅｔＯ）部位を含むプロモーターの制御下にある。非活性状態では、Ｔｅｔレプレッサー（ＴｅｔＲ）は、ＴｅｔＯ部位に結合し、プロモーターからの転写を抑制する。活性状態では、例えば、テトラサイクリン（Ｔｃ）、無水テトラサイクリン、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、又はそれらの活性類似体などの誘導剤の存在下で、誘導剤は、ＴｅｔＯからＴｅｔＲを放出させ、それによって転写を実施させることができる。ドキシサイクリンは、１－ジメチルアミノ－２，４ａ，５，７，１２－ペンタヒドロキシ－１１－メチル－４，６－ジオキソ－１，４ａ，１１，１１ａ，１２，１２－ヘキサヒドロテトラセン－３－カルボキサミドの化学名を有する抗生物質のテトラサイクリンファミリーのメンバーである。

【0230】

一実施形態では、ＴｅｔＲは、哺乳類細胞、例えば、マウス又はヒト細胞における発現のためにコドン最適化される。多くのアミノ酸は、遺伝子コードの縮重により、１つを超えるコドンによりコードされており、核酸によりコードされるアミノ酸配列の任意の変更なしに、所与の核酸のヌクレオチド配列の実質的な変異を可能にする。しかしながら、多くの生物は、「コドンバイアス」（すなわち、所与のアミノ酸の特定のコドンを使用するためのバイアス）としても知られるコドン使用の相違を示す。コドンバイアスは、多くの場合、転じてｍＲＮＡ翻訳の効率を増加させる、特定のコドンのためのｔＲＮＡの優勢な種の存在と相関する。したがって、特定の生物（例えば、原核生物）由来のコード配列は、コドン最適化を介して異なる生物（例えば、真核生物）における発現の改善に合わせて微調整され得る。

【0231】

Ｔｅｔシステムの他の特定の変形例としては、以下の「Ｔｅｔ－Ｏｆｆ」及び「Ｔｅｔ－Ｏｎ」システムが挙げられる。Ｔｅｔ－Ｏｆｆシステムでは、転写は、ＴＣ又はＤｏｘの存在下で非活性である。このシステムでは、テトラサイクリン制御トランス活性化因子タンパク質（ｔＴＡ）は、単純ヘルペスウイルス由来のＶＰ１６の強力なトランス活性化ドメインに融合したＴｅｔＲで構成され、テトラサイクリン応答性プロモーター要素（ＴＲＥ）の転写制御下にある標的核酸の発現を調節する。ＴＲＥは、プロモーター（一般に、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）の最初期プロモーターに由来するミニマルプロモーター配列）に融合したＴｅｔＯ配列のコンカテマーで形成される。Ｔｃ又はＤｏｘの非存在下では、ｔＴＡはＴＲＥに結合し、標的遺伝子の転写を活性化する。Ｔｃ又はＤｏｘの存在下では、ｔＴＡはＴＲＥに結合することができず、標的遺伝子からの発現は非活性なままである。

【0232】

逆に、Ｔｅｔ－Ｏｎシステムでは、転写はＴｃ又はＤｏｘの存在下で活性である。Ｔｅｔ－Ｏｎシステムは、逆テトラサイクリン制御トランス活性化因子、ｒｔＴＡに基づく。ｔＴＡと同様に、ｒｔＴＡは、ＴｅｔＲリプレッサー及びＶＰ１６トランス活性化ドメインからなる融合タンパク質である。しかしながら、ＴｅｔＲ ＤＮＡ結合部分における４つのアミノ酸変化は、Ｄｏｘの存在下で標的導入遺伝子のＴＲＥにおけるｔｅｔＯ配列のみを認識できるように、ｒｔＴＡの結合特性を変化させる。したがって、Ｔｅｔ－Ｏｎシステムでは、ＴＲＥ調節された標的遺伝子の転写は、Ｄｏｘの存在下でのみｒｔＴＡによって刺激される。

【0233】

別の誘導可能なプロモーター系は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来のｌａｃリプレッサー系である。（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４９：６０３－６１２（１９８７）を参照されたい）。ｌａｃリプレッサー系は、ｌａｃオペレーター（ｌａｃＯ）を含むプロモーターに作動可能に連結された目的のポリヌクレオチドの転写を調節することによって機能する。ｌａｃリプレッサー（ｌａｃＲ）は、ＬａｃＯに結合して目的のポリヌクレオチドの転写を防止する。目的のポリヌクレオチドの発現は、適切な誘導剤、例えば、イソプロピル－β－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）により誘導される。

【0234】

本発明で使用するための別の例示的な誘導可能プロモーターシステムは、活性化Ｔ細胞系の核因子（ＮＦＡＴ）である。ＮＦＡＴファミリーの転写因子は、Ｔ細胞活性化の重要な調節因子である。ＮＦＡＴ応答要素は、例えば、ＩＬ－２プロモーターにおいて見出される（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５－１７２４（１９８８）、Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２ ３５７（６３８０）：６９５－７、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１．１７（２０１１）：５６９７－５７０６、及びＺｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ １９．４（２０１１）：７５１－７５９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の誘導可能プロモーターは、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、又はそれ以上）のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、誘導可能プロモーターは、例えば、配列番号８３のヌクレオチド配列を含む６個のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の誘導可能プロモーターは、ミニマルＴＡプロモーターなどのミニマルプロモーターに連結された１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、又はそれ以上）のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、ミニマルＴＡプロモーターは、配列番号８４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、配列番号８５のヌクレオチド配列を含む。

【0235】

ポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入される発現ベクターはまた、形質導入するか又はウイルスベクターを介して感染させることが求められる細胞集団からの発現細胞の同定及び選択を促進するために、選択マーカー遺伝子若しくはレポーター遺伝子のいずれか又はその両方を含み得る。他の態様では、選択マーカーは、ＤＮＡの別個の断片上に担持され、共トランスフェクション手順で使用できる。選択マーカー及びレポーター遺伝子の両方は、宿主細胞における発現を可能にするために適切な制御配列を隣接させてもよい。有用な選択マーカーとしては、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。

【0236】

レポーター遺伝子は、場合によって形質導入された細胞を同定するため、及び制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織内に存在しないか又は発現していない遺伝子であり、一部の容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって発現が明らかになるポリペプチドをコードする遺伝子である。ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後、レポーター遺伝子の発現を適切な時間でアッセイする。適切なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ、又は緑色蛍光タンパク質遺伝子（例えば、，Ｕｉ－Ｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０００ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２）をコードする遺伝子を挙げ得る。適切な発現系は公知であり、既知の技術を使用して調製することができ、又は商業的に入手することができる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示すミニマル５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用されてもよい。

【0237】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥのいずれかによるｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃａＴＣＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＣＳＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸配列のそれぞれは、別個のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の少なくとも一部は、同じベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の全ては、同じベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳類発現ベクター、並びにウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択され得る。

【0238】

例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体であり、ＣＳＲは、単一のＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体であり、核酸は、第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、第２のｃａＴＣＲ鎖をコードする第２の核酸、及びＣＳＲポリペプチド鎖をコードする第３の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は第１のベクターに含まれ、第２の核酸配列は第２のベクターに含まれ、第３の核酸配列は第３のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２の核酸配列は第１のベクターに含まれ、第３の核酸配列は第２のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第３の核酸配列は第１のベクターに含まれ、第２の核酸配列は第２のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第２及び第３の核酸配列は第１のベクターに含まれ、第１の核酸配列は第２のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３の核酸配列は、同じベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核酸配列は第２のプロモーターの制御下にあり、第３の核酸配列は第３のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のプロモーターの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のプロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３の核酸配列の一部又は全ては、マルチシストロン性ベクターにおける単一のプロモーターの制御下で単一の転写物として発現される。例えば、Ｋｉｍ，ＪＨ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）：ｅ１８５５６，２０１１を参照されたい。いくつかの実施形態では、１つ以上のプロモーターは誘導可能である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードする第３の核酸配列は、誘導可能なプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、ＮＦＡＴ応答要素などの免疫細胞活性化に応答する１つ以上の要素を含む。

【0239】

いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３の核酸配列の一部又は全ては、宿主細胞（Ｔ細胞など）において同様（実質的に又はほぼ同じなど）の発現レベルを有する。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３の核酸配列のうちのいくつかは、宿主細胞（Ｔ細胞など）において、少なくとも約２倍（少なくとも約２、３、４、５倍、又はそれ以上）異なる発現レベルを有する。発現は、ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルで決定することができる。ｍＲＮＡ発現レベルは、ノーザンブロット、定量的ＲＴ－ＰＣＲ、マイクロアレイ解析などを含む様々な公知の方法を使用して、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって決定することができる。タンパク質発現レベルは、免疫細胞化学染色、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析などを含む既知の方法によって測定することができる。

【0240】

本明細書に記載される実施形態の特徴は、任意の数の核酸配列を含む実施形態、例えば、ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸が５つ以上の核酸配列（例えば、ｃａＴＣＲ及びＳＳＥがそれぞれ２つ以上の異なるポリペプチド鎖を含む場合）を含む実施形態を包含するように適合され、組み合わされ得ることを理解されたい。

【0241】

したがって、いくつかの実施形態では、核酸であって、ａ）本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体ｃａＴＣＲと、ｂ）本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによる単一のＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体ＣＳＲと、をコードし、核酸が、ｉ）第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列、及びｉｉ）第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列を含み、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列を更に含む、核酸が提供される。いくつかの実施形態では、第１のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれ、第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれ、ＣＳＲ核酸配列は、第３のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列の一部又は全ては、同一のベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列のそれぞれは、個々に、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ核酸配列は、誘導可能なプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、免疫細胞活性化に応答する１つ以上の要素を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ核酸配列は、ＮＦＡＴ由来のプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ベクターの一部又は全ては、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0242】

いくつかの実施形態では、ａ）本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸を含む第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）であって、ｉ）第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第１プロモーター、及びｉｉ）第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列に作動可能に連結された第２プロモーターを含む、第１のベクターと、ｂ）本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体ＣＳＲをコードする核酸を含む第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）であって、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第３のプロモーターを含む、第２のベクターと、が提供される。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては、異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターの一部又は全ては誘導可能である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のベクターは、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0243】

いくつかの実施形態では、ａ）本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸を含む第１のベクター（レンチウイルスベクターなど）であって、ｉ）第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列、及びｉｉ）第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列が第１のプロモーターの制御下にある、第１のベクターと、ｂ）本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体ＣＳＲをコードする核酸を含む第２のベクター（レンチウイルスベクターなど）であって、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列に作動可能に連結された第２のプロモーターを含む、第２のベクターと、が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、第１のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のプロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に作動可能に連結され、第２のｃａＴＣＲ核酸配列の３’末端を第１のｃａＴＣＲ核酸配列の５’末端に連結させる、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１のｃａＴＣＲ核酸配列及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のプロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは誘導可能である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のベクターは、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。第１又は第２のｃａＴＣＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態も想到されることを理解されたい。

【0244】

いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、ウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターなど）であって、ａ）本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖、及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸であって、ｉ）第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列、及びｉｉ）第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列を含む核酸と、ｂ）ＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列を含む、本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体ＣＳＲをコードする核酸と、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、ＣＳＲ核酸配列は、第２のプロモーターの制御下にある、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択された核酸リンカーによって他のｃａＴＣＲ核酸配列に連結されるｃａＴＣＲ核酸配列のうちの１つに作動可能に連結され、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列が、第１のプロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写されるようにされる。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは誘導可能である。いくつかの実施形態では、第２のプロモーターは誘導可能なプロモーターである。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、免疫細胞活性化に応答する１つ以上の要素を含む。いくつかの実施形態では、第２のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来プロモーターである。いくつかの実施形態では、ＮＦＡＴ由来プロモーターは、配列番号８５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0245】

いくつかの実施形態では、ベクター（レンチウイルスベクターなど）であって、ａ）本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖、及び第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖を含む二量体ｃａＴＣＲをコードする核酸であって、ｉ）第１のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第１のｃａＴＣＲ核酸配列、及びｉｉ）第２のｃａＴＣＲポリペプチド鎖をコードする第２のｃａＴＣＲ核酸配列を含む核酸と、ｂ）ＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列を含む、本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体ＣＳＲをコードする核酸と、を含み、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列、並びにＣＳＲ核酸配列は、単一のプロモーターの制御下にある、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、個々に内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａなど）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーによって他の核酸配列に連結される核酸配列のうちの１つに作動可能に連結され、第１及び第２のｃａＴＣＲ核酸配列並びにＣＳＲ核酸配列が、プロモーターの制御下で単一ＲＮＡとして転写されるようにされる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導可能である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。

【0246】

遺伝子を細胞に導入及び発現させる方法は、当該技術分野において既知である。発現ベクターの文脈において、ベクターは、当該技術分野における任意の方法により、宿主細胞、例えば、哺乳類、細菌、酵母、又は昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的、又は生物学的手段によって宿主細胞に導入され得る。

【0247】

ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝突、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクター及び／又は外因性核酸を含む細胞を産生する方法は、当該技術分野において公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。いくつかの実施形態では、宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって行われる。

【0248】

宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳類、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用されている方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号及び同第５，５８５，３６２号を参照されたい。

【0249】

ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段としては、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、及び水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベース系が挙げられる。インビトロ及びインビボで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば人工膜小胞）である。

【0250】

非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルはリポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞（インビトロ、エクスビボ、又はインビボ）に核酸を導入するために想到される。別の態様では、核酸は脂質と結合していてもよい。脂質に結合する核酸は、リポソームの脂質二重層内に散在するリポソームの水性内部に封入されてもよく、リポソーム及びオリゴヌクレオチドの両方に結合する連結分子を介してリポソームに結合していてもよく、リポソームに封入されてもよく、リポソームと複合体化されてもよく、脂質を含む溶液に分散されてもよく、脂質と混合されてもよく、脂質と混合されてもよく、脂質と組み合わされてもよく、脂質中の懸濁液として含まれてもよく、ミセルに含まれるか若しくは複合体化されてもよく、又はそうでなければ、脂質と結合していてもよい。脂質、脂質／ＤＮＡ、又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセルとして二重層構造で、又は「潰れた」構造で存在してもよい。これらはまた、単に溶液中に散在してもよく、場合によっては、サイズ又は形状が均一ではない凝集体を形成してもよい。脂質は、天然に存在し得る脂肪物質又は合成脂質である。例えば、脂質としては、天然に細胞質中に生じる脂肪液滴、並びに長鎖脂肪族炭化水素及び脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、及びアルデヒドなどの誘導体を含む化合物の類が挙げられる。

【0251】

外因性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法、又は本発明の阻害剤に細胞を曝露するために使用される方法にかかわらず、宿主細胞中の組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが行われてもよい。このようなアッセイとしては、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲなどの、当業者に公知の「分子生物学的」アッセイが挙げられる。例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）による特定のペプチドの有無を検出することなどの「生化学的」アッセイ、又は薬剤を同定するための本明細書に記載のアッセイは、本発明の範囲内に含まれる。
ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥの調製

【0252】

いくつかの実施形態では、抗体部分を含む本明細書に記載のｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥのいずれかによると、抗体部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖ）は、モノクローナル抗体に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体由来のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体由来のＣ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメイン、又はその変異型を更に含む。モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）及びＳｅｒｇｅｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１７（１６）：４２６２－４２７２に記載されるもののようなハイブリドーマ法を使用して調製することができる。

【0253】

ハイブリドーマ法では、ハムスター、マウス、又は他の適切な宿主動物は、典型的には、免疫化剤により免疫されて、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するか、又は産生できるリンパ球を誘発する。別の方法としては、リンパ球をインビトロで免疫化できる。免疫化剤は、目的のタンパク質のポリペプチド若しくは融合タンパク質、又はペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体などの少なくとも２つの分子を含む複合体を含むことができる。一般に、ヒト由来細胞が望まれる場合は末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）を使用するか、又は、非ヒト哺乳類源が望まれる場合は脾臓細胞若しくはリンパ節細胞を使用する。その後、リンパ球を、好適な融合剤、例えばポリエチレングリコールを用いて不死化細胞株と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９－１０３を参照されたい。不死化細胞株は、通常は、形質転換された哺乳類細胞、特に、げっ歯類、ウシ及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常は、ラット又はマウス骨髄腫細胞株を用いる。ハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の不死化細胞の増殖又は生存を阻害する１種以上の物質を含む好適な培養培地中で培養し、増殖することができる。例えば、親細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む（「ＨＡＴ培地」）。

【0254】

いくつかの実施形態では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である。いくつかの実施形態では、不死化細胞株は、例えば、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから得ることができるマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）ｐｐ．５１－６３。

【0255】

ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、続いて、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイできる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降法により、又は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって測定することができる。このような手法及びアッセイ法は、当該技術分野において既知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）の標準的な分析によって決定することができる。

【0256】

所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈手順によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる。Ｇｏｄｉｎｇ、前出。この目的のために好適な培養培地として、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。代替的に、ハイブリドーマ細胞を哺乳類中の腹水としてインビボで増殖させることもできる。

【0257】

サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地又は腹水から単離又は精製することができる。

【0258】

いくつかの実施形態では、抗体部分を含む本明細書に記載のｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥのいずれかによると、抗体部分は、抗体部分ライブラリー（ｓｃＦｖ又はＦａｂ断片を提示するファージライブラリーなど）から選択されるクローン由来の配列を含む。クローンは、所望の活性又は複数の活性を有する抗体断片のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって同定され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野において既知である。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００１）に概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に更に記載される。

【0259】

特定のファージディスプレイ方法では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに組み替えられ、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載される抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片を提示する。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブ型レパートリーを（例えば、ヒトから）クローン化して、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているような任意の免疫化なしに、非自己及び更に自己抗原も含む広範囲の抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されているように、ナイーブライブラリーはまた、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して高度に可変のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することにより、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。

【0260】

抗体部分は、標的抗原に特異的な抗体（ペプチド／ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ複合体又は細胞表面抗原など）のライブラリーをスクリーニングするために、ファージディスプレイを使用して調製することができる。ライブラリーは、少なくとも１×１０^９（少なくとも約１×１０^９、２．５×１０^９、５×１０^９、７．５×１０^９、１×１０^１０、２．５×１０^１０、５×１０^１０、７．５×１０^１０、１×１０^１１のいずれかなど）の固有のヒト抗体断片の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであり得る。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、ヒトのＰＭＢＣから抽出されるＤＮＡ及び健康なドナーからの脾臓から構築されたナイーブ型ヒトライブラリーであり、全てのヒト重鎖及び軽鎖サブファミリーを包含する。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、自己免疫疾患を有する患者、がん患者、及び感染性疾患を有する患者などの様々な疾患を有する患者から単離されるＰＢＭＣから抽出されるＤＮＡから構築されたナイーブ型ヒトライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは半合成ヒトライブラリーであり、重鎖ＣＤＲ３は完全にランダム化され、全てのアミノ酸（システイン以外）は、任意の所与の位置に存在する尤度が等しくなる（例えば、Ｈｏｅｔ，Ｒ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（３）：３４４－３４８，２００５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５～約２４（約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４のいずれかなど）の長さのアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、完全合成ファージディスプレイライブラリーである。いくつかの実施形態では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。

【0261】

高い親和性で標的抗原に結合するファージクローンは、固体支持体（例えば、溶液パニングのためのビーズ又は細胞パニングのための哺乳類細胞など）に結合した標的抗原へのファージの反復的な結合によって選択することができ、続いて非結合ファージを除去し、特異的に結合したファージの溶出によって選択することができる。溶液パニングの例では、標的抗原は、固体支持体への不動化のためにビオチン化され得る。ビオチン化標的抗原は、ファージライブラリーと、ストレプトアビジンコンジュゲートＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２８０などの固体担体と混合され、次いで、標的抗原－ファージ－ビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンを溶離して使用し、発現及び精製のために大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅなどの適切な宿主細胞を感染させる。細胞パニングの例では、ＡＦＰペプチドを負荷したＴ２細胞（ＴＡＰ欠乏、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１^＋リンパ芽細胞株）をファージライブラリーと混合した後、細胞を収集し、結合したクローンを溶離して使用し、発現及び精製のために適切な宿主細胞を感染させる。パニングは、標的抗原に特異的に結合するファージクローンを濃縮するために、溶液パニング、細胞パニング、又はそれらの両方の組み合わせのいずれかで、複数（約２、３、４、５、６、又はそれ以上のいずれか）のラウンドで行うことができる。濃縮ファージクローンは、例えば、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳを含む、当該技術分野において既知の任意の方法による標的抗原への特異的結合について試験することができる。
ヒト及びヒト化抗体部分

【0262】

ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及びＳＳＥ抗体部分は、ヒト又はヒト化であり得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体部分のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を典型的に含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、又は抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体部分として、レシピエントのＣＤＲの残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種のＣＤＲの残基（ドナー抗体）で置換されている、ヒト免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（レシピエント抗体）が挙げられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置換される。ヒト化抗体部分は、レシピエント抗体部分においても移入されたＣＤＲ若しくはフレームワーク配列においても見られない、残基も含み得る。一般に、ヒト化抗体部分は、少なくとも１つの実質的に全て、典型的には２つの可変ドメインを含み得、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのものと一致し、全て又は実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。

【0263】

一般的に、ヒト化抗体部分は、非ヒト源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には「移入」可変ドメインから取り込まれた「移入」残基と呼ばれることが多い。いくつかの実施形態によれば、ヒト化は、本質的にＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ ｃｏ－ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓ Ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８））の方法に従って、げっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体部分の対応する配列に置換することにより、実施できる。したがって、そのような「ヒト化」抗体部分は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている、抗体部分である（米国特許第４８１６５６７号）。実際には、ヒト化抗体部分は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位由来の残基で置換された、ヒト抗体部分である。

【0264】

ヒト化の代替として、ヒト抗体部分を生成してもよい。例えば、今では、免疫化によって、内因性免疫グロブリンを産生せずにヒト抗体の完全なレパートリーを産生可能な、トランスジェニック動物（例えば、マウス）の作製が可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失により、内在性抗体産生が完全に阻害されることが報告されている。ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイをこのような生殖系変異マウスに導入すると、抗原誘発によってヒト抗体が産生する。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５－２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５９１，６６９号、同第５，５４５，８０７、及びＷＯ ９７／１７８５２を参照されたい。代替的に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されている、トランスジェニック動物、例えば、マウスに導入することによって、ヒト抗体を作製できる。誘発時、遺伝子再配列、集合、及び抗体レパートリーなどの全ての点において、ヒトで見られるものとよく似たヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、及び同第５，６６１，０１６号、並びにＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１４：８２６（１９９６）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５－９３（１９９５）、に記載されている。

【0265】

ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照されたい）によって、又はファージディスプレイライブラリーを含む当該技術分野において既知の様々な技術を使用することによって生成されてもよい。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．の技術もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）。
追加の変異型

【0266】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合モジュールのアミノ酸配列変異型が想到される。例えば、これは、抗原結合モジュールの結合親和性及び／又はその他生物学的特性を改善するのに望ましい場合がある。抗原結合モジュールのアミノ酸配列変異型は、抗原結合モジュールをコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変として、例えば、抗原結合モジュールのアミノ酸配列内の残基の、欠失及び／又は挿入及び／又は置換が挙げられる。最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を有することを条件として、欠失、挿入、及び置換のいずれかの組み合わせを施して最終構築物に到達させることができる。

【0267】

いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗原結合モジュール変異型が提供される。置換変異導入の目的の部位としては、抗体部分のＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。アミノ酸置換は、目的の抗原結合モジュールに導入してもよく、生成物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合又は減少した免疫原性についてスクリーニングされる。

【0268】

保存的置換を以下の表４に示す。

【表4】

【0269】

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従って異なるクラスに分類され得る。
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0270】

非保存的置換は、これらの分類のうち１つを別の分類のものに交換することを伴う。

【0271】

例示的な置換変異型は、親和性成熟抗体部分であり、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して都合よく生成することができる。簡潔に述べると、１つ以上のＣＤＲ残基が変異しており、ファージに提示される変異型抗体部分は、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。例えば、抗体部分親和性を改善するために、改変（例えば、置換）をＨＶＲ中でなすことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又は特異性決定残基（ＳＤＲ）によってなされ、得られた変異型Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築及び再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。

【0272】

親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、多様な方法（例えば、エラー発生ＰＣＲ、鎖シャッフル、又はオリゴヌクレオチド指向変異導入）のいずれかによって成熟するために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体部分変異型を同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異導入又はモデリングを用いて特異的に同定され得る。ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３は、特に標的化されることが多い。

【0273】

いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗体部分の抗原に結合する能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）は、ＨＶＲにおいて行われてもよい。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側にあってもよい。上記に提供された変異型Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列のいくつかの実施形態では、各ＨＶＲは、変更されていないか、又は１つ以下、２つ又は３つ以下のアミノ酸置換を含む。

【0274】

変異導入の標的となり得る抗原結合モジュールの残基又は領域の同定のための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５（１９８９）に記載されている。この方法では、標的残基の１つ又は群の残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、中性又は負荷電アミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換されて、抗原結合モジュールの抗原との相互作用に影響を及ぼすかどうかを判定する。更なる置換は、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。代替的に、又はそれに加えて、抗原抗原結合モジュール複合体の結晶構造を決定して、抗原結合モジュールと抗原との間の接触点を同定することができる。このような接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的化又は排除され得る。変異型をスクリーニングして、所望の特性を含むかどうかを判定することができる。

【0275】

アミノ酸配列挿入として、１つの残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲の、アミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに、単一若しくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗原結合モジュールが挙げられる。抗原結合モジュールのその他の挿入変異体として、酵素に対する抗原結合モジュールのＮ末端若しくはＣ末端への融合（例えば、ＡＤＥＰＴのために）又は、抗原結合モジュールの血清半減期を延長するポリペプチドが挙げられる。
誘導体

【0276】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ及び／又は本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲ及び／又は本明細書に記載のＳＳＥのいずれかによるＳＳＥは、当該技術分野において既知であり、容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含むように更に改変されてもよい。ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの誘導体化に適切な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中安定性から、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝型又は非分枝型であってよい。ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥに付加されたポリマー数は可変であり、２種類以上のポリマーが付加されている場合、それらは同一分子であっても異なる分子であっていてもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善するｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの特定の特性又は機能が挙げられるが、これらに限定されない点、ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥの誘導体を特定の条件下での治療に使用するか、などに基づいて決定できる。

【0277】

いくつかの実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得るｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥ並びに非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を害しないが、非タンパク質性部分を、ｃａＴＣＲ－及び／又はＣＳＲ－及び／又はＳＳＥの非タンパク質性部分の近位の細胞が殺傷される温度まで非タンパク質性部分を加熱するものが挙げられるが、これらに限定されない。
ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の調製

【0278】

一態様では、本発明は、本明細書に記載される実施形態のいずれかによるｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現する免疫細胞（例えば、リンパ球、例えばＴ細胞）を提供する。ｃａＴＣＲ及びＣＳＲ（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞などのｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞）を発現する免疫細胞（Ｔ細胞など）を調製する例示的な方法が、本明細書で提供される。

【0279】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、標的抗原（疾患関連抗原など）に特異的に結合するｃａＴＣＲ（本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかなど）、及び標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲ（本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかなど）をコードする１つ以上の核酸（例えば、レンチウイルスベクターを含む）を免疫細胞に導入することによって生成することができる。１つ以上の核酸を免疫細胞に導入することは、核酸について本明細書に記載される技術など、当該技術分野において既知の技術を使用して達成することができる。いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、インビボで複製することができ、その結果、標的抗原の発現に関連する疾患（がん又はウイルス感染など）の持続的な制御をもたらし得る長期持続性をもたらし得る。

【0280】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する、遺伝子改変Ｔ細胞を、例えば、リンパ球注入を使用するがん又はウイルス感染を含む、標的抗原の発現と関連する疾患及び／又は障害（本明細書では、「標的抗原陽性」又は「ＴＡ陽性」疾患又は障害とも称される）を有するか、発症するリスクがある患者の治療のために投与することに関連する。いくつかの実施形態では、自己リンパ球注入は、治療に使用される。自己ＰＢＭＣは、治療を必要とする患者から収集され、Ｔ細胞は、本明細書に記載され、当該技術分野において既知の方法を使用して活性化及び増殖され、次いで患者に注入される。

【0281】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲのいずれかによる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する、Ｔ細胞（本明細書では「ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞」とも称される）が提供される。本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ロバストなインビボＴ細胞増殖を受けることができ、血液及び骨髄中で長期間にわたって高レベルで持続する標的抗原特異的メモリー細胞を確立することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、標的抗原関連疾患を有する患者において、インビボで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示がん又はウイルス感染細胞を排除することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、少なくとも１つの従来の治療に難治性である標的抗原関連疾患を有する患者において、インビボで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示がん又はウイルス感染細胞を排除することができる。

【0282】

Ｔ細胞の増殖及び遺伝子改変の前に、Ｔ細胞源は対象から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹膜、胸膜滲出液、脾臓組織、及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。本発明のいくつかの実施形態では、当該技術分野において利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に既知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液の単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後続の処理工程のために適切な緩衝液又は培地に細胞を配置することができる。いくつかの実施形態では、細胞はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを含まず、マグネシウムを含まなくてもよく、又は二価カチオンが全く存在しない場合には多く存在しなくてもよい。当業者であれば容易に理解するように、洗浄工程は、製造業者の説明書に従って、半自動化「フロースルー」遠心分離器（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ，ｔｈｅ Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ，ｏｒ ｔｈｅ Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによるなどの、当該技術分野において既知の方法によって達成され得る。洗浄後、細胞は、Ｃａ^２＋フリー、Ｍｇ^２＋フリーＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、又は緩衝剤を有する又は有さない他の生理食塩水溶液などの様々な生体適合性緩衝液中に再懸濁されてもよい。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁させてもよい。

【0283】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることにより、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離、又は遠心分離エルトリエーションによる遠心分離によって単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３^＋、ＣＤ２８^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、及びＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団は、陽性又は陰性選択技術によって更に単離され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたって、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって、単離される。いくつかの実施形態では、期間は約３０分である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分～３６時間又はそれ以上（これらの値間の全ての範囲を含む）の範囲である。いくつかの実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は２４時間である。白血病患者からＴ細胞を単離するために、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用は、細胞収量を増加させることができる。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍組織又は免疫不全個体から単離する際など、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ない状況で、Ｔ細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。更に、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。したがって、単に時間を短縮又は延長することによって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させることができ、及び／又は、Ｔ細胞に対するビーズの比を増加若しくは減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始のために、若しくは培養開始時に、又はプロセス中の他の時点で優先的に選択することができる。加えて、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比を増加又は減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始のために、若しくは培養開始時に、又は他の所望の時点で、又はそれに対して優先的に選択することができる。当業者であれば、本発明の文脈において、複数ラウンドの選択も使用できることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、選択手順を実行し、活性化及び増殖プロセスにおいて「非選択」細胞を使用することが望ましい場合がある。「非選択」細胞はまた、選択の更なるラウンドに供され得る。

【0284】

陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択された細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせで達成することができる。１つの方法は、負に選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、陰性磁気免疫接着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ８βに対する抗体を含む。いくつかの実施形態では、典型的には、ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ^＋、及びＦｏｘＰ３^＋を発現する制御性Ｔ細胞を濃縮又は陽性選択することが望ましい場合がある。代替的に、いくつかの実施形態では、制御性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズ又は他の同様の選択方法によって枯渇される。

【0285】

陽性又は陰性選択による細胞の所望の集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変化させることができる。いくつかの実施形態では、細胞及びビーズの最大接触を確実にするために、ビーズ及び細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億個の細胞／ｍｌより多いものが使用される。いくつかの実施形態では、約１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、又は５０００万個の細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、又は１億個の細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２５００万又は約１億５０００万個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増殖の増加をもたらすことができる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）から、より効率的な細胞の捕捉を可能にする。このような細胞集団は、治療値を有してもよく、得られることが望ましい。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、通常より弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８^＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。

【0286】

本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、治療直後に患者から得られる。この点に関し、特定のがん治療後、特に、免疫系を損傷する薬物による特定の治療後、患者が通常治療から回復する期間中に治療直後に、得られるＴ細胞の質は、エクスビボで増殖する能力に関して最適であるか、又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したエクスビボ操作後、これらの細胞は、強化された生着及びインビボ増殖のための好ましい状態であり得る。したがって、この回復期中に、Ｔ細胞、樹状細胞、又は造血系の他の細胞を含む血液細胞を収集することが、本発明の文脈内で想到される。更に、いくつかの実施形態では、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦによる動員）及び前処置レジメンを使用して、特に治療後の定義された時間範囲中に、特定の細胞型の再集団化、再循環、再生、及び／又は増殖が好ましい状況を対象においてもたらすことができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞が挙げられる。

【0287】

Ｔ細胞の遺伝子改変の前又は後に、所望のｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、及び所望によりＳＳＥを発現するかどうかにかかわらず、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載されている方法を使用して、全般に活性化及び増殖させることができる。

【0288】

一般的に、本発明のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤を結合して有する表面と、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドとの接触によって増殖される。具体的には、Ｔ細胞集団は、抗ＣＤ３抗体、若しくはその抗原結合断片との接触、又は表面上に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触、又はカルシウムイオノフォアと組み合わされたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブレソスタチン）との接触によってなどで、刺激されてもよい。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞又はＣＤ８^＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するためには、抗ＣＤ３抗体、及び抗ＣＤ２８抗体である。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎcｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、と当該技術分野において公知の他の方法で使用できるように使用できる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７，１９９８、Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９、Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３，１９９９）。
遺伝子改変

【0289】

いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、本明細書に記載のｃａＴＣＲ及び本明細書に記載のＣＳＲをコードする１つ以上のウイルスベクターを免疫細胞（本明細書に記載の方法によって調製されるＴ細胞など）に形質導入することによって生成される。ウイルスベクター送達系は、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスを含み、それらは、免疫細胞への送達後にエピソームであるか、又はゲノムに組み込まれる。遺伝子治療手順の概説については、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：８０８－８１３（１９９２）、Ｎａｂｅｌ ＆ Ｆｅｉｇｎｅｒ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：２１１－２１７（１９９３）、Ｍｉｔａｎｉ ＆ Ｃａｓｋｅｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：１６２－１６６（１９９３）、Ｄｉｌｌｏｎ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：１６７－１７５（１９９３）、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３５７：４５５－４６０（１９９２）、Ｖａｎ Ｂｒｕｎｔ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６（１０）：１１４９－１ １５４（１９８８）、Ｖｉｇｎｅ，Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ８：３５－３６（１９９５）、Ｋｒｅｍｅｒ ＆ Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ５１（ｌ）：３１－４４（１９９５）、及びＹｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １：１３－２６（１９９４）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞ゲノムに組み込まれた１つ以上のベクターを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、そのゲノムに組み込まれたレンチウイルスベクターを含むｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞である。

【0290】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、その内因性のＴＣＲ鎖のうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であり、又はｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。

【0291】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して生成される。遺伝子編集のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの概説については、例えば、Ｊｉａｎ Ｗ ＆ Ｍａｒｒａｆｆｉｎｉ ＬＡ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９，２０１５、Ｈｓｕ ＰＤ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１５７（６）：１２６２－１２７８，２０１４、及びＯ’Ｃｏｎｎｅｌｌ ＭＲ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５１６：２６３－２６６，２０１４を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＴＡＬＥＮ系ゲノム編集を使用して生成される。
濃縮

【0292】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のいずれかによるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の不均質な細胞集団を濃縮する方法が提供される。

【0293】

標的抗原及び標的リガンドに特異的に結合するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）の特定の亜集団は、陽性選択技術によって濃縮され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、所望のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたって標的抗原コンジュゲートビーズ及び／又は標的リガンドコンジュゲートビーズとのインキュベーションによって濃縮される。いくつかの実施形態では、期間は約３０分である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分～３６時間又はそれ以上（これらの値間の全ての範囲を含む）の範囲である。いくつかの実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は２４時間である。異種細胞集団において低レベルで存在するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の単離のために、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用は、細胞収量を増加させることができる。他の細胞型と比較して、少ないｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞が存在する任意の状況において、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。当業者であれば、本発明の文脈において、複数ラウンドの選択も使用できることを認識する。

【0294】

陽性選択によるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の所望の集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変更することができる。いくつかの実施形態では、細胞及びビーズの最大接触を確実にするために、ビーズ及び細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億個の細胞／ｍｌより多いものが使用される。いくつかの実施形態では、約１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、又は５０００万個の細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、又は１億個の細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２５００万又は約１億５０００万個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増殖の増加をもたらすことができる。更に、高細胞濃度の使用は、ｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲを弱く発現し得るｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のより効率的な捕捉を可能にする。

【0295】

本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の疲弊を最小限に抑えるか、又は実質的に全く疲弊させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）が疲弊したものになる結果をもたらす。免疫細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。

【0296】

本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の終末分化を最小限に抑えるか、又は実質的に全く終末分化させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）が終末分化したものになる結果をもたらす。免疫細胞の終末分化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。

【0297】

本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲの内部移行を最小限に抑えるか、又は実質的に全くｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲを内部移行させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞上の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）のｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲが内部移行したものになる結果をもたらす。ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞上のｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲの内部移行は、本明細書に記載される任意の手段を含む当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。

【0298】

本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の増殖の増加をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、濃縮後のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の数の少なくとも約１０％（少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００％、又はそれ以上のいずれかなど）の増加をもたらす。

【0299】

したがって、いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲ、及び標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の異種細胞集団を濃縮する方法であって、ａ）異種細胞集団を、標的抗原若しくはその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む第１の分子、及び／又は標的リガンド若しくはその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む第２の分子と接触させて、第１の分子に結合したｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞及び／又は第２の分子に結合したｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む複合体を形成することと、ｂ）複合体を異種細胞集団から分離することにより、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞について濃縮された細胞集団を生成することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の分子は、個々に固体支持体に固定化される。いくつかの実施形態では、固体支持体は粒子状（ビーズなど）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、表面（ウェルの底部など）である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の分子は、タグで個別に標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ、又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、本方法は、第１及び／又は第２の分子からｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を溶離させることと、溶離液を回収することと、を更に含む。
ライブラリースクリーニング

【0300】

いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的な候補ｃａＴＣＲ構築物を単離するために、ｃａＴＣＲライブラリー、例えば、複数のｃａＴＣＲをコードする核酸のライブラリーを発現する細胞は、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子に曝露され、続いて捕捉分子に特異的に結合するライブラリーの親和性メンバーを単離することができる。いくつかの実施形態では、捕捉分子は固体支持体上に固定化される。いくつかの実施形態では、支持体は、ビーズ、マイクロタイタープレート、免疫チューブ、又はそのような目的に有用な当該技術分野において既知の任意の材料の表面であってもよい。いくつかの実施形態では、相互作用は、タグ付き捕捉分子（例えば、ビオチン化捕捉分子）と溶液中で行われる。いくつかの実施形態では、この手順は、非特異的及び非反応性のライブラリーメンバーを除去するための１つ以上の洗浄工程（パニング）を伴う。いくつかの実施形態では、溶液中の複合体を精製するために、これらを、固定化又は遠心分離のいずれかによって収集する。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、可溶性ビオチン化捕捉分子上に捕捉され、続いてストレプトアビジンビーズ上の親和性複合体（親和性メンバー及び捕捉分子）の固定化が続く。いくつかの実施形態では、固体支持体はビーズである。いくつかの実施形態では、ビーズとしては、例えば、磁気ビーズ（例えば、Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎｃ．，Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ又はＱｕａｎｔｕｍ Ｍａｇｎｅｔｉｃからの）、非磁性ビーズ（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ ａｎｄ Ｕｐｓｔａｔｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、単分散ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ及びＭｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｇｍｂｈ）、及び多分散ビーズ（例えば、Ｃｈｅｍａｇｅｎ）が挙げられる。磁気ビーズの使用は、文献（Ｕｈｌｅｎ，Ｍ，ｅｔ ａｌ（１９９４）ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｍａｇｎｅｔｉｃ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｐｒｅｓｓ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）に記載されている。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、望ましくないライブラリーメンバーを除去するための陰性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性及び陰性選択工程の両方によって精製される。

【0301】

いくつかの実施形態では、標的リガンドに特異的な候補ＣＳＲ構築物を単離するために、ＣＳＲライブラリー、例えば、複数のＣＳＲをコードする核酸のライブラリーを発現する細胞は、標的リガンド又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子に曝露され、続いて捕捉分子に特異的に結合するライブラリーの親和性メンバーを単離することができる。いくつかの実施形態では、捕捉分子は固体支持体上に固定化される。いくつかの実施形態では、支持体は、ビーズ、マイクロタイタープレート、免疫チューブ、又はそのような目的に有用な当該技術分野において既知の任意の材料の表面であってもよい。いくつかの実施形態では、相互作用は、タグ付き捕捉分子（例えば、ビオチン化捕捉分子）と溶液中で行われる。いくつかの実施形態では、この手順は、非特異的及び非反応性のライブラリーメンバーを除去するための１つ以上の洗浄工程（パニング）を含む。いくつかの実施形態では、溶液中の複合体を精製するために、これらを、固定化又は遠心分離のいずれかによって収集する。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、可溶性ビオチン化捕捉分子上に捕捉され、続いてストレプトアビジンビーズ上の親和性複合体（親和性メンバー及び捕捉分子）の固定化が続く。いくつかの実施形態では、固体支持体はビーズである。いくつかの実施形態では、ビーズとしては、例えば、磁気ビーズ（例えば、Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎｃ．，Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ又はＱｕａｎｔｕｍ Ｍａｇｎｅｔｉｃからの）、非磁性ビーズ（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ ａｎｄ Ｕｐｓｔａｔｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、単分散ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ及びＭｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｇｍｂｈ）、及び多分散ビーズ（例えば、Ｃｈｅｍａｇｅｎ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、望ましくないライブラリーメンバーを除去するための陰性選択によって精製される。いくつかの実施形態では、親和性メンバーは、陽性及び陰性選択工程の両方によって精製される。

【0302】

一般に、ライブラリー構築物を調製するために使用される技術は、既知の遺伝子工学技術に基づく。この点に関し、ライブラリー内で発現するｃａＴＣＲ又はＣＳＲをコードする核酸配列は、使用される発現系の種類に適切な発現ベクターに組み込まれる。ＣＤ３＋細胞などの細胞内での提示に使用するための適切な発現ベクターは公知であり、当該技術分野において記載されている。例えば、いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクターである。

【0303】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれか１つによる複数のｃａＴＣＲをコードする配列を含む核酸ライブラリーが提供される。いくつかの実施形態では、核酸ライブラリーは、複数のｃａＴＣＲをコードするウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。

【0304】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれか１つによる複数のＣＳＲをコードする配列を含む核酸ライブラリーが提供される。いくつかの実施形態では、核酸ライブラリーは、複数のＣＳＲをコードするウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。

【0305】

いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲをコードする配列について、本明細書に記載される実施形態のいずれかに記載の核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、ａ）核酸ライブラリーを複数の細胞に導入することにより、ｃａＴＣＲを複数の細胞の表面に発現することと、ｂ）複数の細胞を、標的抗原又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子と共にインキュベートすることと、ｃ）捕捉分子に結合した細胞を収集することと、ｄ）工程ｃ）で収集された細胞からｃａＴＣＲをコードする配列を単離することにより、標的抗原に特異的なｃａＴＣＲを同定することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の洗浄工程を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の洗浄工程は、工程ｂ）と工程ｃ）との間で実施される。いくつかの実施形態では、複数の細胞は、複数のＣＤ３＋細胞である。いくつかの実施形態では、捕捉分子は固体支持体上に固定化される。いくつかの実施形態では、固体支持体はビーズである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を収集することは、固体支持体に結合した捕捉リガンドから細胞を溶離させ、溶離液を回収することを含む。いくつかの実施形態では、捕捉分子はタグで標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ、又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を収集することは、細胞及び標識されたリガンドを含む複合体を単離することを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、複合体から解離される。

【0306】

いくつかの実施形態では、標的リガンドに特異的なＣＳＲをコードする配列について、本明細書に記載される実施形態のいずれかに記載の核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、ａ）核酸ライブラリーを複数の細胞に導入することにより、ＣＳＲを複数の細胞の表面に発現することと、ｂ）複数の細胞を、標的リガンド又はその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む捕捉分子と共にインキュベートすることと、ｃ）捕捉分子に結合した細胞を収集することと、ｄ）工程ｃ）で収集された細胞からＣＳＲをコードする配列を単離することにより、標的リガンドに特異的なＣＳＲを同定することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の洗浄工程を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の洗浄工程は、工程ｂ）と工程ｃ）との間で実施される。いくつかの実施形態では、複数の細胞は、複数のＣＤ３＋細胞である。いくつかの実施形態では、捕捉分子は固体支持体上に固定化される。いくつかの実施形態では、固体支持体はビーズである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を収集することは、固体支持体に結合した捕捉リガンドから細胞を溶離させ、溶離液を回収することを含む。いくつかの実施形態では、捕捉分子はタグで標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ、又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、捕捉分子に結合した細胞を収集することは、細胞及び標識されたリガンドを含む複合体を単離することを含む。いくつかの実施形態では、細胞は、複合体から解離される。
ＭＨＣタンパク質

【0307】

ＭＨＣクラスＩタンパク質は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の２つの一次クラスのうちの１つ（他方はＭＨＣクラスＩＩである）であり、生体のほぼ全ての有核細胞上に見出される。それらの機能は、細胞内からＴ細胞へのタンパク質の断片を提示することであり、健康な細胞は無視されるが、外来又は変異タンパク質を含む細胞は、免疫系によって攻撃される。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、細胞質タンパク質由来のペプチドを提示するため、ＭＨＣクラスＩ提示の経路は、細胞質又は内因性の経路と呼ばれることが多い。クラスＩ ＭＨＣ分子は、プロテアソームによる細胞質タンパク質の分解から主に生成するペプチドに結合する。次いで、ＭＨＣ Ｉ：ペプチド複合体を細胞の原形質膜に挿入する。ペプチドは、クラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外部分に結合する。したがって、クラスＩ ＭＨＣの機能は、細胞内タンパク質を細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）に提示することである。しかしながら、クラスＩ ＭＨＣはまた、交差提示として知られるプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドを提示することができる。

【0308】

ＭＨＣクラスＩタンパク質は、２つのポリペプチド鎖、α及びβ２－ミクログロブリン（β２Ｍ）からなる。２つの鎖は、β２Ｍとα３ドメインとの相互作用によって非共有結合的に連結される。α鎖のみが多型であり、ＨＬＡ遺伝子によりコードされる一方で、β２Ｍサブユニットは多型ではなく、β－２ミクログロブリン遺伝子によりコードされる。α３ドメインは、原形質膜に広がり、Ｔ細胞のＣＤ８共受容体と相互作用する。α３－ＣＤ８相互作用は、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）がそのα１－α２ヘテロ二量体リガンドに結合して抗原性のために結合されたペプチドを確認する間、ＭＨＣ Ｉ分子を定位置に保持する。α１及びα２ドメインは、結合するペプチドのための溝を形成するように折り畳まれる。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、８～１０の長さのアミノ酸であるペプチドに結合する。

【0309】

ＭＨＣクラスＩＩ分子は、樹状細胞、単核食細胞、いくつかの内皮細胞、胸腺上皮細胞、及びＢ細胞などの抗原提示細胞のみに通常見られる分子のファミリーである。クラスＩＩペプチドによって提示される抗原は、細胞外タンパク質（クラスＩのような細胞質ではない）由来であり、したがって、抗原提示のＭＨＣクラスＩＩ－依存経路は、エンドサイトーシス又は外因性経路と呼ばれる。ＭＨＣクラスＩＩ分子のローディングは、食作用によって生じ、細胞外タンパク質は、エンドサイトーシスされ、リソソームで消化され、得られたエピトープペプチド断片は、細胞表面への移動の前に、ＭＨＣクラスＩＩ分子上にローディングされる。

【0310】

ＭＨＣクラスＩ分子と同様に、クラスＩＩ分子もヘテロ二量体であるが、この場合、２つの均質なペプチド、α及びβ鎖からなる。サブ表記α１、α２などは、ＨＬＡ遺伝子内の別個のドメインを指し、各ドメインは、通常、遺伝子内の異なるエクソンによってコードされ、いくつかの遺伝子は、リーダー配列、膜貫通配列などをコードする更なるドメインを有する。ＭＨＣクラスＩＩ分子の抗原結合溝は両端で開放し、一方、クラスＩ分子上の対応する溝は、各末端で閉鎖されているため、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって提示される抗原は、より長く、概して１５～２４個のアミノ酸残基長である。

【0311】

ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子は、ＭＨＣ遺伝子のヒト型である。ヒトにおける３つの主要なＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃである一方、３つのマイナーなものは、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇである。ヒトにおける抗原提示に関与する３つの主要なＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＤＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲである一方、他のＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＨＬＡ－ＤＭ及びＨＬＡ－ＤＯは、抗原の内部プロセシング及びローディングに関与する。ＨＬＡ－Ａは、ヒトにおける遺伝子の中で、最速で進化するコード配列に分類されている。２０１３年１２月で、１７４０個の活性タンパク質及び１１７のヌルタンパク質をコードする２４３２個の既知のＨＬＡ－Ａ対立遺伝子が存在した。ＨＬＡ－Ａ遺伝子は、第６染色体の短腕上に位置し、ＨＬＡ－Ａのより大きいα鎖構成要素をコードする。ＨＬＡ－Ａ α鎖の変異型は、ＨＬＡ機能に重要である。この変異型は、集団における遺伝的多様性を促進する。各ＨＬＡは特定の構造のペプチドに対して異なる親和性を有するため、より多様なＨＬＡは、細胞表面上に「提示」されるより多様な抗原を意味し、集団のサブセットが任意の所与の外来の侵入体に対して耐性である尤度を高める。これにより、単一の病原体がヒト集団全体を一掃する能力を有する尤度が減少する。各個体は、それらの親のそれぞれから１つずつ、２種類までのＨＬＡ－Ａを発現することができる。いくつかの個体は、両方の親から同じＨＬＡ－Ａを遺伝し、それらの個々のＨＬＡの多様性を減少させる。しかしながら、個体の大部分は、ＨＬＡ－Ａの２つの異なるコピーを受容する。この同じパターンは、全てのＨＬＡグループに関して続く。換言すれば、ヒトは、２４３２の既知のＨＬＡ－Ａ対立遺伝子のうちのいずれか１つ又は２つのみを発現することができる。

【0312】

全ての対立遺伝子は、少なくとも４桁の分類、例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１２を受容する。Ａは、その対立遺伝子がどのＨＬＡ遺伝子に属するかを意味する。血清型による分類が分類を単純化するように、多くのＨＬＡ－Ａ対立遺伝子が存在する。次の１対の数字は、この割り当てを示す。例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、及びＨＬＡ－Ａ^＊０２：３２４は、全てがＡ２血清型のメンバー（^＊０２プレフィックスによって指定）である。この群は、ＨＬＡ適合性に関与する一次因子である。この後の全ての数は、血清型によって決定することができず、遺伝子シークエンシングによって指定される。第２の数字のセットは、どのＨＬＡタンパク質が産生されているかを示す。これらは発見のために割り当てられ、２０１３年１２月で、既知の４５６個の異なるＨＬＡ－Ａ０２タンパク質が存在する（割り当てられた名称ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１～ＨＬＡ－Ａ^＊０２：４５６）。可能な限り短いＨＬＡ名は、これらの詳細の両方を含む。各延長部は、タンパク質を変化させても変化しなくてもよいヌクレオチド変化を意味する。

【0313】

いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原など）に由来するペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、又はＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、又はＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ｂである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ０１、ＨＬＡ－Ａ０２、ＨＬＡ－Ａ０３、ＨＬＡ－Ａ０９、ＨＬＡ－Ａ１０、ＨＬＡ－Ａ１１、ＨＬＡ－Ａ１９、ＨＬＡ－Ａ２３、ＨＬＡ－Ａ２４、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２８、ＨＬＡ－Ａ２９、ＨＬＡ－Ａ３０、ＨＬＡ－Ａ３１、ＨＬＡ－Ａ３２、ＨＬＡ－Ａ３３、ＨＬＡ－Ａ３４、ＨＬＡ－Ａ３６、ＨＬＡ－Ａ４３、ＨＬＡ－Ａ６６、ＨＬＡ－Ａ６８、ＨＬＡ－Ａ６９、ＨＬＡ－Ａ７４、又はＨＬＡ－Ａ８０である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１－５５５、例えばＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０８、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０９、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１０、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１７、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１８、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：１９、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２０、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：２２、又はＨＬＡ－Ａ^＊０２：２４のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１である。ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１は、全ての白人の３９～４６％で発現し、したがって、本発明で使用するためのＭＨＣクラスＩタンパク質の適切な選択を表す。

【0314】

いくつかの実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原など）に由来するペプチド及びＭＨＣクラスＩＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、又はＨＬＡ－ＤＲである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＰである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＱである。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ－ＤＲである。

【0315】

Ｆａｂ様抗原結合モジュールの生成に使用するのに適したペプチドは、例えば、当業者に既知のコンピュータ予測モデルを使用して、ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１）結合モチーフ並びにプロテアソーム及び免疫プロテアソームの切断部位の存在に基づいて決定することができる。ＭＨＣ結合部位を予測するために、このようなモデルとしては、ＰｒｏＰｒｅｄ１（Ｓｉｎｇｈ ａｎｄ Ｒａｇｈａｖａ，ＰｒｏＰｒｅｄ：ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ－ＤＲ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ．ＢＩＯＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ １７（１２）：１２３６－１２３７，２００１でより詳細に記載される）、及びＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Ｓｃｈｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ，Ｄａｔａｂａｓｅ ｆｏｒ Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ ４０９（１）：７５－９３，２００７を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0316】

適切なペプチドが同定されると、当業者に公知のプロトコールに従ってペプチド合成を行うことができる。これらの比較的小さいサイズのため、本発明のペプチドは、従来のペプチド合成技術に従って溶液中又は固体担体上で直接合成され得る。様々な自動合成装置が市販されており、既知のプロトコールに従って使用することができる。溶液相中のペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模生産のための十分に確立された手順となっており、したがって、本発明のペプチドを調製するための好適な代替方法である（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｍｏｒｒｏｗ Ｓｔｅｗａｒｔ、及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｍｅｚ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｍｉｄａｔｉｏｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ Ｖｏｌ．３９，ｐａｇｅｓ １５１７－１５２０，１９９８を参照されたい）。
医薬組成物

【0317】

本明細書では、本明細書に記載されるｃａＴＣＲのいずれかによるｃａＴＣＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞など）を含む、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物（医薬組成物など、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0318】

組成物は、同じ細胞型のものであり、同じｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む均質な細胞集団、又は異なる細胞型のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、異なるｃａＴＣＲを発現し、及び／又は異なるＣＳＲを発現する、複数のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む異種細胞集団を含んでもよい。組成物は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞ではない細胞を更に含んでもよい。

【0319】

したがって、いくつかの実施形態では、同じ細胞型のものであり、同じｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）の均質な細胞集団を含む、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0320】

いくつかの実施形態では、異なる細胞型のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、異なるｃａＴＣＲを発現し、及び／又は異なるＣＳＲを発現する複数のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含む異種細胞集団を含むｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、互いに独立して、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。いくつかの実施形態では、組成物中のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全ては、同じ細胞型のものである（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全ては細胞傷害性Ｔ細胞である）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型のものである（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は細胞傷害性Ｔ細胞からなり、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、ナチュラルキラーＴ細胞からなる）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0321】

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含むｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供され、組成物中のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが同じ細胞型であり（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが細胞傷害性Ｔ細胞である）、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他のものとは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0322】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含むｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供され、組成物中のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが同じ細胞型であり（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが細胞傷害性Ｔ細胞である）、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他のものとは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0323】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含む組成物が提供され、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲ免疫細胞の集団の全ては、異なる細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、互いに独立して、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他のものとは異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他のものとは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などのがんに関連する）。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。

【0324】

組成物の調製中の様々な時点において、細胞を凍結保存することが必要であるか、又は有益であり得る。用語「凍結される／凍結する」及び「凍結保存される／冷凍保存する」は、互換可能に使用することができる。凍結は凍結乾燥を含む。

【0325】

当業者には理解されるように、細胞の凍結は破壊的であり得る（Ｍａｚｕｒ，Ｐ．，１９７７，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ １４：２５１－２７２を参照されたい）が、そのような損傷を防止するために利用可能な多くの手順が存在する。例えば、損傷は、（ａ）凍結保護剤の使用、（ｂ）凍結速度の制御、及び／又は（ｃ）分解反応を最小限に抑えるために十分な低い温度で保管することによって回避することができる。例示的な凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ，１９５９，Ｎａｔｕｒｅ １８３：１３９４－１３９５、Ａｓｈｗｏｏｄ－Ｓｍｉｔｈ，１９６１，Ｎａｔｕｒｅ １９０：１２０４－１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリドン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６０，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５７６）、ポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ ａｎｄ Ｒａｖｄｉｎ，１９６２，Ｎａｔｕｒｅ １９６：５４８）、アルブミン、デキストラン、スクロース、エチレングリコール、ｉ－エリスリトール、Ｄ－リビトール、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，１９６２，Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．２１：１５７）、Ｄ－ソルビトール、ｉ－イノシトール、Ｄ－ラクトース、塩化コリン（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９６０，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５：５２０）、アミノ酸（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２０：６５１）、メタノール、アセトアミド、グリセロールモノアセテート（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ，１９５４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．５６：２６５）、及び無機塩（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１０４：３８８、Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６１，Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｌｌｅｒｙ ｅｄ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，Ｌｏｎｄｏｎ，ｐ．５９）が挙げられる。特定の実施形態では、ＤＭＳＯを使用することができる。血漿の添加（例えば、２０～２５％の濃度まで）は、ＤＭＳＯの保護効果を増強することができる。ＤＭＳＯを添加した後、１％のＤＭＳＯ濃度は４℃を超える温度で毒性であり得るため、凍結まで細胞を０℃で維持することができる。

【0326】

細胞の冷凍保存において、低速制御冷却速度は重要であり得、異なる凍結保護剤（Ｒａｐａｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９６８，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（１）：１８－２５）及び異なる細胞型は、異なる最適冷却速度を有する（例えば、Ｒｏｗｅ ａｎｄ Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６２，Ｂｌｏｏｄ ２０：６３６、Ｒｏｗｅ，１９６６，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ３（１）：１２－１８、Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ ａｌ．，１９６７，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ７（１）：１７－３２、並びに、幹細胞の生存及びそれらの移植可能性に対する冷却速度の影響についてのＭａｚｕｒ，１９７０，Ｓｃｉｅｎｃｅ １６８：９３９－９４９を参照されたい）。水が氷になる融解相の熱は、最小限であるべきである。冷却手順は、例えば、プログラム可能な凍結装置又はメタノール浴手順の使用によって実行することができる。プログラム可能な凍結装置は、最適な冷却速度の決定を可能にし、標準的な再現可能な冷却を促進する。

【0327】

特定の実施形態では、ＤＭＳＯ処理した細胞を、氷上で予め冷却し、冷却メタノールを収容するトレーに移すことができ、転じて－８０℃の機械的冷凍庫（例えば、Ｈａｒｒｉｓ又はＲｅｖｃｏ）内に定置する。メタノール浴及び試料の熱電対測定値は、１℃～３℃／分の冷却速度を示すことが好ましくあり得る。少なくとも２時間後、試料は－８０℃の温度に到達することができ、液体窒素（－１９６℃）に直接配置することができる。

【0328】

完全凍結後、細胞は、長期凍結保存容器に迅速に移され得る。好ましい実施形態では、試料は、液体窒素（－１９６℃）又は蒸気（－１℃）に低温保存することができる。このような貯蔵は、高効率の液体窒素冷凍庫の利用可能性によって促進される。

【0329】

細胞の操作、冷凍保存、及び長期保存のための更なる検討及び手順は、以下の例示的な参考文献：米国特許第４，１９９，０２２号、同第３，７５３，３５７号、及び同第４，５５９，２９８号、Ｇｏｒｉｎ，１９８６，Ｃｌｉｎｉｎ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １５（１）：１９－４８、Ｂｏｎｅ－Ｍａｒｒｏｗ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ Ｐａｎｅｌ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｊｕｌｙ ２２－２６，１９６８，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｔｏｍｉｃ Ｅｎｅｒｇｙ Ａｇｅｎｃｙ，Ｖｉｅｎｎａ，ｐｐ．１０７－１８６、Ｌｉｖｅｓｅｙ ａｎｄ Ｌｉｎｎｅｒ，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ ３２７：２５５、Ｌｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３４（９）：１ １２３－１ １３５、Ｓｉｍｉｏｎｅ，１９９２，Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４６（６）：２２６－３２に見出すことができる。

【0330】

冷凍保存後、凍結した細胞を、当業者に既知の方法に従って使用するために解凍することができる。凍結した細胞は、好ましくは迅速に解凍され、解凍直後に冷却される。特定の実施形態では、凍結した細胞を収容するバイアルを、温水浴中でその頸状部まで浸漬することができ、穏やかな回転により、解凍するときの細胞懸濁液の混合、及び温水から内部氷塊への熱伝達の増加を確実にする。氷が完全に融解するとすぐに、直ちに氷の上にバイアルを載せることができる。

【0331】

特定の実施形態では、解凍中の細胞凝集を防止する、方法を使用することができる。例示的な方法としては、ＤＮａｓｅ（Ｓｐｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃａｎｃｅｒ ４５：３０７５－３０８５）、低分子量デキストラン及びクエン酸、ヒドロキシエチルデンプン（Ｓｔｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０：１７－２４）などの凍結前及び／又は凍結後の添加が挙げられる。［０１６２］当業者には理解されるように、ヒトに毒性がある凍結保護剤が使用される場合、治療的使用の前に除去されるべきである。ＤＭＳＯは、深刻な毒性を有さない。

【0332】

細胞の例示的な担体及び投与方法は、米国特許公開第２０１０／０１８３５６４号の１４～１５ページに記載されている。追加の医薬担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ ｏｆ Ｍａｃｙ，２１ ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｖｉｄ Ｂ．Ｔｒｏｙ，ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）に記載されている。

【0333】

特定の実施形態では、細胞を培養培地から採取し、洗浄し、治療有効量で担体に濃縮することができる。例示的な担体としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、生理食塩水、水、Ｈａｎｋｓ溶液、リンガー溶液、Ｎｏｎｎｏｓｏｌ－Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（Ｒ）（Ｂａｘｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）、グリセロール、エタノール、及びこれらの組み合わせが挙げられる。

【0334】

特定の実施形態では、担体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又は他のヒト血清成分又はウシ胎児血清を補充することができる。特定の実施形態では、注入のための担体は、５％ＨＡＳ又はデキストロースを有する緩衝化生理食塩水を含む。さらなる等張剤として、三価以上の糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、又はマンニトールを含む多価糖アルコールが挙げられる。

【0335】

担体としては、クエン酸緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、酒石酸緩衝剤、フマル酸緩衝剤、グルコン酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、及び／又はトリメチルアミン塩などの緩衝剤を挙げることができる。

【0336】

安定剤は、容器壁への細胞の接着を防止するのに役立つ増量剤から添加剤までの範囲で機能することができる、広範囲の賦形剤を指す。典型的な安定剤としては、多価糖アルコール；アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、及びスレオニンなどのアミノ酸；ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオニシトール、ガラクチトール、グリセロール、などの有機等又は糖アルコール、及びイノシトールなどのシクリトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなどのイオウ含有還元剤；低分子量ポリペプチド（すなわち、＜１０残基）；ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；キシロース、マンノース、フルクトース、及びグルコースなどの単糖類；ラクトース、マルトース、及びスクロースなどの二糖類；ラフィノースなどの三糖類、及びデキストランなどの多糖類を挙げることができる。

【0337】

必要な又は有益な場合、組成物は、注射部位における疼痛を和らげるためにリドカインなどの局所麻酔剤を含むことができる。

【0338】

例示的な防腐剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ－クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハライド、ヘキサメトニウムクロリド、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、及び３－ペンタノールが挙げられる。

【0339】

組成物内の治療的に有効な量は、１０^２細胞超、１０^３細胞超、１０^４細胞超、１０^５細胞超、１０^６細胞超、１０^７細胞超、１０^８細胞超、１０^９細胞超、１０^１０細胞超、又は１０^１１細胞超であり得る。

【0340】

本明細書に開示される組成物及び製剤において、細胞は、概して、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下、又は１００ｍｌ以下の容積中にある。したがって、投与される細胞の密度は、典型的には、１０^４細胞／ｍｌ、１０^７細胞／ｍｌ、又は１０^８細胞／ｍｌ超である。

【0341】

本明細書では、本明細書に記載のｃａＴＣＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸のいずれかを含む核酸組成物（医薬組成物など、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、核酸組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、核酸組成物は、等張剤、賦形剤、希釈剤、増粘剤、安定剤、緩衝剤、及び／若しくは防腐剤、並びに／又は精製水、水性糖溶液、緩衝液、生理食塩水、水性ポリマー溶液、又はＲＮａｓｅ遊離水などの水性媒体のいずれかを更に含む。そのような添加剤及び添加される水性媒体の量は、核酸組成物の使用形態に従って適切に選択することができる。

【0342】

本明細書に開示される組成物及び製剤は、例えば、注射、注入、灌流、又は洗浄によって投与するために調製することができる。組成物及び製剤は、骨髄、静脈内、皮内、動脈内、節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所内、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、膀胱内、及び／又は皮下の注射のために更に製剤化することができる。

【0343】

インビボ投与に使用される製剤は、滅菌される必要がある。これは、例えば、滅菌ろ過膜を通じたろ過によって容易に達成される。
ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を使用する治療方法

【0344】

本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、例えば、がん及び感染性疾患（ウイルス感染症など）を含む、標的抗原（ＴＡ）発現に関連する疾患及び／又は障害（本明細書では、「標的抗原陽性」又は「ＴＡ陽性」疾患又は障害とも呼ばれる）を治療するために、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本出願は、本明細書に記載される実施形態のいずれか１つによるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む有効量の組成物（医薬組成物など）を個体に投与することを含む、個体における標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。

【0345】

例えば、いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及びＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｉｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、ｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲはαβ ＴＣＲであり、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ α及びβサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲはγδ ＴＣＲであり、第１及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、ＴＣＲ γ及びδサブユニット膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ連結ペプチド又はその断片を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の連結ペプチドは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はその変異型を含み、及び／又は第２の連結ペプチドは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの連結ペプチドの全て若しくは一部、又はこれらの変異型を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の連結ペプチドは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含み、及び／又は第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、及び／又は第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片であり、及び／又は、第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ－ＴＭが由来するＴＣＲサブユニットの断片である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、又はＣＤ４０由来など）を含む、少なくとも１つのアクセサリー細胞内ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、ジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の安定化ドメインは、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌ抗体ドメインなどの抗体ドメイン、又はその変異型を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲＭは、ｃａＴＣＲ－ＣＤ３複合体形成を促進する。いくつかの実施形態では、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール間又はドメイン間にスペーサモジュールが存在する。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合モジュールは、多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原などの疾患関連抗原である。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、表面提示ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（腫瘍関連抗原又はウイルスコード抗原など）に由来するペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含み、ペプチドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ－Ａである。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ａは、ＨＬＡ－Ａ０２である。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ Ａ０２は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲの標的リガンドは、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲの標的リガンド及びｃａＴＣＲの標的抗原は同じである。いくつかの実施形態では、標的リガンドと標的抗体は異なる。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、疾患関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、がん関連リガンドである。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＦＣＲＬ５である。いくつかの実施形態では、がん関連リガンドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡを含むタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、ウイルス関連リガンドである。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９を含む。いくつかの実施形態では、標的リガンドは、アポトーシス分子である。いくつかの実施形態では、アポトーシス分子は、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２を含む。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体部分である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインの抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、リガンド結合ドメインは、標的リガンドの受容体の細胞外ドメインの全て又は一部である（又はそれに由来する）。いくつかの実施形態では、受容体は、例えば、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、及びＴＩＭ－３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲの膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲの共刺激シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む免疫細胞共刺激分子の細胞内ドメインの全て又は一部を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの間にスペーサドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサドメインは、２つのＣＳＲドメインを連結するペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はγδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。

【0346】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）天然に存在するαβ ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び天然に存在するαβ ＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｉｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。

【0347】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）天然に存在するγδ ＴＣＲの膜貫通ドメインのうちの１つに由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び天然に存在するγδ ＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｉｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。

【0348】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号５のアミノ酸配列に由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号６のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。

【0349】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号７のアミノ酸配列に由来する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号８のアミノ酸配列に由来する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、互いに独立して、それが由来するアミノ酸配列と比較して、１つ以上（２、３、４、５、又はそれ以上など）のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭはそれぞれ、互いに独立して、それらが由来するアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ－ＴＭのそれぞれは、それが由来するアミノ酸配列と比較して、単一のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つは、ｃａＴＣＲにおいて、第２のＴＣＲ－ＴＭ中の置換アミノ酸のうちの少なくとも１つと相互作用することができるように配置される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲ－ＴＭ及び第２のＴＣＲ－ＴＭは、表２に列挙されるｃａＴＣＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。

【0350】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、抗原結合モジュールが第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結する、標的抗原に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、共刺激分子の断片が、配列番号５１～５６及び８６～８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、膜貫通タンパク質の断片は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメインに続くスペーサペプチドを含む。いくつかの実施形態では、スペーサペプチドは、配列番号１０３又は１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、標的抗原はＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、標的リガンドはＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールは、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、を含むＦａｂ様抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、標的抗原はＣＤ１９であり、標的リガンドはＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号７７のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的抗原はＣＤ１９であり、標的リガンドはＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号７８のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的抗原はＡＦＰペプチド／ＭＨＣ複合体（例えば、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ０２複合体）であり、標的リガンドはＧＰＣ３である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールは、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、を含むＦａｂ様抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。

【0351】

いくつかの実施形態では、ＣＤ１９関連疾患（がんなど）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインを含む第１のＦａｂ鎖及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む第２のＦａｂ鎖を含む、Ｆａｂ様抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１のＦａｂ鎖が第１及び第２のＴＣＲＤのうちの１つに連結し、第２のＦａｂ鎖が他のＴＣＲＤに連結する、ＣＤ１９に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む、ＣＤ１９に特異的に結合するｓｃＦｖ、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、共刺激分子の断片が、配列番号５１～５６及び８６～８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、膜貫通タンパク質の断片は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメインに続くスペーサペプチドを含む。いくつかの実施形態では、スペーサペプチドは、配列番号１０３又は１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号７７のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９関連疾患は、白血病、例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。

【0352】

いくつかの実施形態では、ＣＤ１９／ＣＤ２０関連疾患（がんなど）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインを含む第１のＦａｂ鎖及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む第２のＦａｂ鎖を含む、Ｆａｂ様抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１のＦａｂ鎖が第１及び第２のＴＣＲＤのうちの１つに連結し、第２のＦａｂ鎖が他のＴＣＲＤに連結する、ＣＤ１９に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む、ＣＤ２０に特異的に結合するｓｃＦｖ、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、共刺激分子の断片が、配列番号５１～５６及び８６～８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、膜貫通タンパク質の断片は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメインに続くスペーサペプチドを含む。いくつかの実施形態では、スペーサペプチドは、配列番号１０３又は１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号８１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。

【0353】

いくつかの実施形態では、ＡＦＰ／ＧＰＣ３関連疾患（例えば、肝臓癌などのがんなど）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、ａ）ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第１のＴＣＲ－ＴＭを含む第１のＴＣＲＤ、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤ、並びにｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインを含む第１のＦａｂ鎖及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む第２のＦａｂ鎖を含む、Ｆａｂ様抗原結合モジュールを含み、第１及び第２のＴＣＲＤが少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することができるＴＣＲＭを形成し、第１のＦａｂ鎖が第１及び第２のＴＣＲＤのうちの１つに連結し、第２のＦａｂ鎖が他のＴＣＲＤに連結する、ＡＦＰペプチド／ＭＨＣ複合体（例えば、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ０２複合体）に特異的に結合するｃａＴＣＲと、ｂ）ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメイン及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインを含む、ＧＰＣ３に特異的に結合するｓｃＦｖ、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することのできる細胞内シグナル伝達ドメインを含む免疫細胞共刺激分子の断片（ｆＣＳＭ）を含み、共刺激分子の断片が、配列番号５１～５６及び８６～８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞など）を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質の断片（ｆＴＭＰ）を含み、膜貫通タンパク質の断片は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合ドメインに続くスペーサペプチドを含む。いくつかの実施形態では、スペーサペプチドは、配列番号１０３又は１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲドメインは、表３に列挙されるＣＳＲのいずれかに従って選択される。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合ドメインは、配列番号８２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。

【0354】

異なるｃａＴＣＲ及び／又は異なるＣＳＲを発現する複数の免疫細胞を含む組成物を個体に投与することを含む、治療を必要とする個体における標的抗原関連疾患を治療する方法も想到される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される個体における標的抗原関連疾患を治療するための方法のいずれかによると、組成物は、本明細書に記載される異種ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物である。

【0355】

いくつかの実施形態では、個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、臨床患者、臨床治験ボランティア、実験動物などである。いくつかの実施形態では、個体は、約６０歳よりも若い（例えば、約５０、４０、３０、２５、２０、１５、又は１０歳のうちのいずれかよりも若い）。いくつかの実施形態では、個体は、約６０歳よりも老いている（例えば、約７０、８０、９０、又は１００歳のうちのいずれかよりも老いている）。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記載される疾患若しくは障害（がん又はウイルス感染など）のうちの１つ以上と診断されるか、又は環境的に若しくは遺伝的に発症する傾向にある。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記載される１つ以上の疾患又は障害に関連する１つ以上のリスク因子を有する。

【0356】

いくつかの実施形態では、本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、標的抗原発現を伴う疾患又は障害を治療するために、第２、第３、又は第４の薬剤（例えば、抗腫瘍剤、増殖抑制剤、細胞傷害性剤、又は化学療法剤を含む）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、サイトカイン（ＩＬ－２など）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させる、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を強化する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、及び化学療法剤を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、及びＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、薬剤は、Ｈｓｐ９０阻害剤であり、例えば、タエピマイシン（１７－ＡＡＧ）、アレベピマイシン（１７－ＤＭＡＧ）、リタピマイシン（ＩＰＩ－５０４）、ＩＰＩ－４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ－３１００、Ｄｅｂｉｏ ０９３２（ＣＵＤＣ－３０５）、ＰＵ－Ｈ７１、Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ（ＳＴＡ－９０９０）、ＮＶＰ－ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ－５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ－２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ－５４２２、ＤＳ－２２４８、及びＸＬ８８８を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば５－フルオロウラシル及びｎｕｔｌｉｎ－３を含むｐ５３発現のエンハンサーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、及びビンブラスチンを含む化学療法剤である。

【0357】

いくつかの実施形態では、標的抗原陽性疾患を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、本明細書に記載される実施形態のいずれかによるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を、サイトカイン（ＩＬ－２など）と組み合わせて個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及びサイトカインは同時に投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及びサイトカインは、順次投与される。

【0358】

いくつかの実施形態では、標的抗原陽性疾患を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、標的抗原を発現する細胞は、標的抗原及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体を、表面に通常には提示しないか、又は比較的低レベルで提示し、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増加させる及び／又はＭＨＣクラスＩタンパク質による標的抗原の表面提示を強化する薬剤と組み合わせて、本明細書に記載される実施形態のいずれかに記載のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、及び化学療法剤を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、及びＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。いくつかの実施形態では、薬剤は、Ｈｓｐ９０阻害剤であり、例えば、タエピマイシン（１７－ＡＡＧ）、アレベピマイシン（１７－ＤＭＡＧ）、リタピマイシン（ＩＰＩ－５０４）、ＩＰＩ－４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ－３１００、Ｄｅｂｉｏ ０９３２（ＣＵＤＣ－３０５）、ＰＵ－Ｈ７１、Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ（ＳＴＡ－９０９０）、ＮＶＰ－ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ－５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ－２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ－５４２２、ＤＳ－２２４８、及びＸＬ８８８を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば５－フルオロウラシル及びｎｕｔｌｉｎ－３を含むｐ５３発現のエンハンサーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、及びビンブラスチンを含む化学療法剤である。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び薬剤は同時に投与される。いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び薬剤は、順次投与される。

【0359】

いくつかの実施形態では、標的抗原関連疾患（がん又はウイルス感染症など）を、治療を必要とする個体において治療する方法であって、本明細書に記載される実施形態のいずれかによるｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同５，５８０，８５９号、同５，５８９，４６６号を参照されたい。

【0360】

がん治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、進行時間、生存期間、無増悪生存率、全奏功率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線学的イメージングによる応答の測定を含む、治療の有効性を判定するためのアプローチを利用することができる。

【0361】

いくつかの実施形態では、治療の有効性は、式１００－（Ｔ／Ｃ×１００）を使用して計算された腫瘍増殖阻害パーセント（ＴＧＩ％）として測定され、式中、Ｔは、治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、未治療腫瘍の平均相対腫瘍体積である。いくつかの実施形態では、ＴＧＩ％は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、又は９５％超である。

【0362】

ウイルス感染治療は、例えば、ウイルス負荷、生存期間、生活の質、タンパク質発現、及び／又は活性によって評価することができる。
疾患

【0363】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、標的抗原に関連するがんを治療するのに有用であり得る。本明細書に記載される方法のいずれかを使用して治療され得るがんには、血管新生化されていない、又はまだ実質的に血管新生化されていない腫瘍、並びに血管新生化腫瘍が含まれる。がんは、非固形腫瘍（白血病及びリンパ腫などの血液腫瘍など）を含み得るか、又は固形腫瘍を含み得る。本発明のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞で治療すべきがんの種類としては、がん腫、芽細胞腫、及び肉腫並びに特定の白血病又はリンパ性悪性疾患、良性及び悪性の腫瘍、並びに悪性腫瘍、例えば肉腫、がん腫、及び黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。成人の腫瘍／がん及び小児の腫瘍／がんもまた含まれる。

【0364】

血液がんは、血液又は骨髄の癌である。血液学的（又は血液系）がんの例としては、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄球性、単球性及び赤血球性白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、多発性血中血症、リンパ腫、ホジキンリンパ疾患、非ホジキンリンパ腫（緩慢性及び高悪性度形態）、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、及び骨髄異形成症を含む白血病が挙げられる。

【0365】

固形腫瘍は、通常、嚢胞又は液体領域を含まない異常な組織塊である。固形腫瘍は、良性又は悪性であり得る。異なる種類の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の種類（例えば、肉腫、癌腫、及びリンパ腫）に関して命名されている。肉腫及び癌腫などの固形腫瘍の例としては、副腎皮質癌、胆管細胞癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、心臓横紋筋肉腫、結腸癌、胃癌、リンパ系悪性疾患、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺髄様癌及び乳頭甲状腺癌）、褐色細胞腫皮脂腺癌、乳頭癌癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌（例えば、子宮頸癌及び浸潤前の子宮頸部異形成）、大腸直腸癌、肛門癌、肛門管、又は肛門癌、膣癌、外陰部の癌（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、及び線維肉腫）、陰茎癌、中咽頭癌、食道癌、頭部癌（例えば、扁平上皮癌）、頸部癌（例えば、扁平上皮癌）、精巣癌（例えば、セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫瘍、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、及び脂肪腫）、膀胱癌、腎臓癌、黒色腫、子宮癌（例えば、子宮内膜癌）、尿路上皮癌（例えば、扁平上皮癌、転移細胞癌、腺癌、尿管癌、及び膀胱癌）、並びにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹膠腫及び混合神経膠腫など）、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫としても知られる）、星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽芽腫、シュワン細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽腫、網膜芽細胞腫、及び脳転移など）が挙げられる。

【0366】

がん治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、進行時間、生存期間、無増悪生存率、全奏功率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線学的イメージングによる応答の測定を含む、治療の有効性を判定するためのアプローチを利用することができる。

【0367】

他の実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、病原体関連（ウイルスコードなど）抗原を標的化することによって、感染性疾患を治療するのに有用であり得る。感染は、例えば、ウイルス、細菌、原虫、又は寄生体によって引き起こされ得る。標的抗原は、病原体によって引き起こされる疾患に関与する病原性タンパク質、ポリペプチド、若しくはペプチドであってもよく、又は病原体に感染した宿主において免疫応答を誘導することができる。ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞によって標的化され得る病原性抗原としては、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、アナプラマ属、Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｂｅｓｉａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ、Ｂｋウイルス、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ボルレア属、ボルレア属、ボルレア属、ブッジラ属、Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ、ブニヤウイルス科、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ及び他のバークホルデリア属、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、カリシウイルス科、カンピロバクター属、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、カンジダ属、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＣＪＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、クロストリジウム属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、コクシジオイデス属、コロナウイルス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、クリプトスポリジウム属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デング熱ウイルス（ＤＥＮ－１、ＤＥＮ－２、ＤＥＮ－３、及びＤＥＮ－４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、エシェリコッカス属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ属、エンテロウイルス、主にコクサッキーＡウイルス及びエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、エピデルモフィトン属、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１、及びＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ及びＦａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、フィラノイデスーパーファミリー、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、フソバクテリウム属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、顎口虫属、ＧＳＳプリオン、グアナアリスウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、インフルエンザ菌、ヘリコバクターピロリ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスニパウイルス、）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１及び２（ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ－６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ－７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、Ｋｕｒｕプリオン、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、リーシュマニア属、レプトスピラ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス、マラセチア属、マールブルクウイルス、麻疹ウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、おたふく風邪ウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、ノカルジア属、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、オルソミクソウイルス科（インフルエンザ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、パラゴニムス属、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、パルボウイルスＢ１９、パスツレラ属、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ Ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ、リケッチア属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、サルモネラ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、住血吸虫属、シゲラ属、シンノンブレウイルス、ハンタウイルス属、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、ブドウ球菌属、ブドウ球菌属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、条虫属、Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ又はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、トリコフィトン属、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、大痘瘡又は小痘瘡、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、西ナイルウイルス、西ウマ脳炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱病、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、及びＹｅｒｓｉｎｉａ Ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓが挙げられる。

【0368】

いくつかの実施形態では、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、発がん性ウイルスによる感染などの発がん性感染症を治療するために使用される。発がん性ウイルスとしては、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ－１、ＨＩＶ－１、及びＨＣＶが挙げられるが、これらに限定されない。ｃａＴＣＲの標的抗原は、Ｔａｘ、Ｅ７、Ｅ６／Ｅ７、Ｅ６、ＨＢｘ、ＥＢＮＡタンパク質（例えば、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｃ、及びＥＢＮＡ２）、ｖ－サイクリン、ＬＡＮＡ１、ＬＡＮＡ２、ＬＭＰ－１、ｋ－ｂＺＩＰ、ＲＴＡ、ＫＳＨＶ Ｋ８、及びこれらの断片が挙げられるが、これらに限定されないウイルス性がんタンパク質であり得る。Ａｈｕｊａ，Ｒｉｃｈａ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｓｃｉ．，２０１４を参照されたい。
製品及びキット

【0369】

本発明のいくつかの実施形態では、がん（例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、若しくは甲状腺癌）又はウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ－１、ＨＩＶ－１、又はＨＣＶによる感染）などの標的抗原陽性疾患の治療に有用な材料を含む製品が提供される。製品は、容器と、この容器上にある又はこの容器に付随したラベル又は添付文書と、を含むことができる。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成することができる。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患又は障害を治療するのに有効な組成物を保持するものであり、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈輸液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、表面上に本発明のｃａＴＣＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞である。ラベル又は添付文書は、組成物が、特定の状態を治療するために使用されることを表示する。ラベル又は添付文書は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を患者に投与するための説明書を更に含む。本明細書に記載の併用療法をなす製品及びキットもまた想到される。

【0370】

添付文書は、治療用製品の商品パッケージに習慣的に含まれている、このような治療用製品の使用に関しての指示、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を記載している説明書を参照する。いくつかの実施形態では、添付文書は、組成物が、標的抗原陽性がん（副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、又は甲状腺癌など）の治療のために使用されることを示す。他の実施形態では、添付文書は、組成物が標的抗原陽性ウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ－１、ＨＩＶ－１、又はＨＣＶによる感染）の治療のために使用されることを示す。

【0371】

加えて、製品は、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー液及びブドウ糖液など、医薬上許容される緩衝液を含む第２の容器を更に含んでよい。これは、他の緩衝液、希釈液、濾過器、針、及び注射器を含めて、商業上及び利用者の立場からの他の望ましい材料を更に含んでよい。

【0372】

例えば、本明細書に記載される標的抗原陽性疾患又は障害の治療のために、所望により製品と組み合わせて、様々な目的で有用であるキットも提供される。本発明のキットは、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物（又は単位剤形及び／又は製品）を収容する１つ以上の容器を含み、いくつかの実施形態では、別の薬剤（本明細書に記載の薬剤など）及び／又は本明細書に記載される方法のいずれかに従って使用するための説明書を更に含む。このキットは、治療に適している個体の選択についての説明を更に含んでよい。本発明のキットで提供される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械読み出し可能な命令（例えば、磁気又は光学記憶ディスクで実行される命令）も許容可能である。

【0373】

例えば、いくつかの実施形態では、キットは、表面上にｃａＴＣＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にｃａＴＣＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤と、を含み、他の薬剤は、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を強化する（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、又はＨｓｐ９０阻害剤）。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にｃａＴＣＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のために、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にｃａＴＣＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤であって、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を強化する他の薬剤（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、又はＨｓｐ９０阻害剤）と、ｃ）標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のために、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び他の薬剤を個体に投与するための指示書と、を含む。ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び他の薬剤は、別個の容器又は単一の容器内に存在し得る。例えば、キットは、１つの別個の組成物又は２つ以上の組成物を含んでもよく、１つの組成物はｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、別の組成物は他の薬剤を含む。

【0374】

いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを、免疫細胞（例えば、個体に由来する免疫細胞、例えばＴ細胞又はナチュラルキラー細胞など）と組み合わせて、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のためにｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）免疫細胞（細胞傷害性細胞など）と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）免疫細胞（細胞傷害性細胞など）と、ｃ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを免疫細胞と組み合わせて、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のためにｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。

【0375】

いくつかの実施形態では、キットは、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（免疫細胞など）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）ｉ）宿主細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）中でｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現すること、ｉｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、並びにｉｉｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のために個体に投与することのための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は個体に由来する。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（免疫細胞など）と、ｃ）宿主細胞中でｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現すること、ｉｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、並びにｉｉｉ）ｃａＴＣＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（がん又はウイルス感染など）の治療のために個体に投与することのための指示書と、を含む。

【0376】

本発明のキットは、好適なパッケージに入っている。好適なパッケージには、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性パッケージ（例えば、密閉マイラー又はプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、所望により、緩衝材及び解釈的情報など追加構成要素を提供してよい。したがって、本出願はまた、バイアル（密閉バイアルなど）、ボトル、ジャー、可撓性パッケージなどを含む製品を提供する。

【0377】

ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物の使用に関する説明書は、意図する治療向けの用量、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を概ね含む。容器は、単位用量、大量容器（例えば、多用量パッケージ）又は亜単位用量であってよい。例えば、本明細書に開示するように十分な用量のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を含んで、１週間、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３か月、４か月、５か月、７か月、８か月、９か月、又はそれ以上のうちのいずれかなど長期間にわたって個体の有効な治療を提供するキットを提供し得る。キットはまた、複数のｃａＴＣＲ及びＣＳＲの単位用量と、医薬組成物と、使用説明書と、を含んでよく、例えば、院内薬局及び調剤薬局など薬局での保管及び使用に十分な量でパッケージ化される。

【0378】

当業者は、本発明の範囲及び趣旨内でいくつかの実施形態が可能であることを理解するであろう。次に、以下の非限定的な実施例を参照して、本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を更に説明するが、当然のことながら、決してその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
例示的な実施形態

【0379】

実施形態１ 一実施形態では、免疫細胞であって、
ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、
ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール、並びに
ｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、
ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ－関連シグナル伝達分子の動員を促進する、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）と、
ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、
ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、
ｉｉ）膜貫通モジュール、及び
ｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、
リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同一の分子に由来せず、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠く、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、を含む、免疫細胞が提供される。

【0380】

実施形態２ ＣＳＲが、いずれの一次免疫細胞シグナル伝達配列も欠く、実施形態１に記載の免疫細胞。

【0381】

実施形態３ 標的抗原が細胞表面抗原である、実施形態１又は２に記載の免疫細胞。

【0382】

実施形態４ 細胞表面抗原が、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択される、実施形態３に記載の免疫細胞。

【0383】

実施形態５ 細胞表面抗原が、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５からなる群から選択される、実施形態４に記載の免疫細胞。

【0384】

実施形態６ 標的抗原が、ペプチド及び主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質を含む複合体である、実施形態１又は２に記載の免疫細胞。

【0385】

実施形態７ ペプチドが、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態６に記載の免疫細胞。

【0386】

実施形態８ 第１のＴＣＲ－ＴＭが、第１のＴ細胞受容体の膜貫通ドメインのうちの１つに由来し、第２のＴＣＲ－ＴＭが、第１のＴ細胞受容体の他の膜貫通ドメインに由来する、実施形態１～７のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0387】

実施形態９ ＴＣＲ－ＴＭのうちの少なくとも１つが天然に存在しないものである、実施形態８に記載の免疫細胞。

【0388】

実施形態１０ ＴＣＲＭが、第１のＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を強化させる、実施形態９に記載の免疫細胞。

【0389】

実施形態１１ 第１のＴＣＲ－ＴＭが、それが由来する膜貫通ドメインと比較して、最大５個のアミノ酸置換を含み、及び／又は、第２のＴＣＲ－ＴＭが、それが由来する膜貫通ドメインと比較して、最大５個のアミノ酸置換を含む、実施形態８～１０のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0390】

実施形態１２ 第１のＴＣＲ－ＴＭが、単一のアミノ酸置換を含み、及び／又は第２のＴＣＲ－ＴＭが、単一のアミノ酸置換を含む、実施形態１１に記載の免疫細胞。

【0391】

実施形態１３ 第１のＴ細胞受容体がγ／δ Ｔ細胞受容体である、実施形態８～１２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0392】

実施形態１４ 第１のＴ細胞受容体がα／β Ｔ細胞受容体である、実施形態８～１２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0393】

実施形態１５ 抗原結合モジュールが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体部分である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0394】

実施形態１６ 抗原結合モジュールが、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインが、ＴＣＲＤのうちの１つのアミノ末端に連結され、Ｖ_Ｌドメインが、他のＴＣＲＤのアミノ末端に連結されている、実施形態１５に記載の免疫細胞。

【0395】

実施形態１７ Ｖ_Ｈドメインが、Ｃ_Ｈ１ドメインを介してＴＣＲＤのうちの１つに連結され、Ｖ_Ｌドメインが、Ｃ_Ｌドメインを介して他のＴＣＲＤに結合されている、実施形態１６に記載の免疫細胞。

【0396】

実施形態１８ ｃａＴＣＲが、少なくとも１つの追加の抗原結合モジュールを更に含む、実施形態１５に記載の免疫細胞。

【0397】

実施形態１９ 少なくとも１つの追加の抗原結合モジュールが抗体部分である、実施形態１８に記載の免疫細胞。

【0398】

実施形態２０ ｃａＴＣＲが多重特異性である、実施形態１８又は１９に記載の免疫細胞。

【0399】

実施形態２１ 抗原結合モジュールが、ＴＣＲＤのうちの１つのアミノ末端に融合したｓｃＦｖを含む、実施形態１５～２０のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0400】

実施形態２２ ｃａＴＣＲが、第１のＴＣＲＤのアミノ末端に融合した第１のｓｃＦｖと、第２のＴＣＲＤのアミノ末端に融合した第２のｓｃＦｖとを含む、実施形態２１に記載の免疫細胞。

【0401】

実施形態２３ 第１のｓｃＦｖが、第２のｓｃＦｖとは異なる標的に結合する、実施形態２２に記載の免疫細胞。

【0402】

実施形態２４ ｃａＴＣＲが、第１のＴＣＲＤを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体であり、抗原結合モジュールが、第１及び第２のＴＣＲＤの一方又は両方のアミノ末端に連結されている、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0403】

実施形態２５ ｃａＴＣＲが、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールを更に含み、第１及び第２の安定化ドメインが、ｃａＴＣＲを安定化させる、互いの結合親和性を有する、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0404】

実施形態２６ 安定化モジュールが、Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌモジュール、Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ２モジュール、Ｃ_Ｈ３－Ｃ_Ｈ３モジュール、及びＣ_Ｈ４－Ｃ_Ｈ４モジュールからなる群から選択される、実施形態２５に記載の免疫細胞。

【0405】

実施形態２７ 第１の安定化ドメインと第２の安定化ドメインとの間に共有結合が存在する、実施形態２５又は２６に記載の免疫細胞。

【0406】

実施形態２８ 共有結合がジスルフィド結合である、実施形態２７に記載の免疫細胞。

【0407】

実施形態２９ 安定化モジュールが、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に位置する、実施形態２５～２８のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0408】

実施形態３０ ｃａＴＣＲが、
ａ）第１のＴＣＲＤのアミノ末端に融合した第１の安定化ドメインを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲＤのアミノ末端に融合した第２の安定化ドメインを含む第２のポリペプチド鎖と、を含み、抗原結合モジュールが、第１及び第２の安定化ドメインの一方又は両方のアミノ末端に融合するヘテロ二量体である、実施形態２５～２９のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0409】

実施形態３１ ｃａＴＣＲが、約０．１ｐＭ～約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で標的抗原に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0410】

実施形態３２ ＴＣＲ関連シグナル伝達分子が、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びζζからなる群から選択される、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0411】

実施形態３３ 標的抗原と標的リガンドが同一である、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0412】

実施形態３４ 標的抗原と標的リガンドが異なる、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0413】

実施形態３５ 標的リガンドが、標的抗原を提示する細胞の表面に発現するリガンドである、実施形態３４に記載の免疫細胞。

【0414】

実施形態３６ 標的リガンドが疾患関連リガンドである、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0415】

実施形態３７ 標的リガンドが、がん関連リガンドである、実施形態３６に記載の免疫細胞。

【0416】

実施形態３８ がん関連リガンドが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＩＬ４、ＧＰＣ－３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＦＣＲＬ５からなる群から選択される、実施形態３７に記載の免疫細胞。

【0417】

実施形態３９ がん関連リガンドが、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、及びＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来するペプチドを含むペプチド／ＭＨＣ複合体である、実施形態３７に記載の免疫細胞。

【0418】

実施形態４０ 標的リガンドが、ウイルス関連リガンドである、実施形態３６に記載の免疫細胞。

【0419】

実施形態４１ 標的リガンドが免疫調節分子である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0420】

実施形態４２ 免疫調節分子が免疫抑制受容体であり、ＣＳＲが免疫抑制受容体のアンタゴニストである、実施形態４１に記載の免疫細胞。

【0421】

実施形態４３ 免疫調節分子が免疫刺激受容体であり、ＣＳＲが免疫刺激受容体のアゴニストである、実施形態４１に記載の免疫細胞。

【0422】

実施形態４４ 標的リガンドが免疫チェックポイント分子である、実施形態４１に記載の免疫細胞。

【0423】

実施形態４５ 免疫チェックポイント分子が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びＧＡＬ９からなる群から選択される、実施形態４４に記載の免疫細胞。

【0424】

実施形態４６ 標的リガンドが阻害性サイトカインである、実施形態４１に記載の免疫細胞。

【0425】

実施形態４７ 標的リガンドがアポトーシス分子である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0426】

実施形態４８ アポトーシス分子が、ＦａｓＬ、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、及びＴＮＦＲ２からなる群から選択される、実施形態４７に記載の免疫細胞。

【0427】

実施形態４９ リガンド結合モジュールが抗体部分である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0428】

実施形態５０ ＣＳＲの抗体部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される、実施形態４９に記載の免疫細胞。

【0429】

実施形態５１ ＣＳＲの抗体部分がｓｃＦｖである、実施形態５０に記載の免疫細胞。

【0430】

実施形態５２ リガンド結合モジュールが、受容体の細胞外ドメインに由来する、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0431】

実施形態５３ 受容体が、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、及びＩＬ－４Ｒからなる群から選択される、実施形態５２に記載の免疫細胞。

【0432】

実施形態５４ ＣＳＲの膜貫通モジュールが、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１～５３のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0433】

実施形態５５ 共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、ＴＣＲの共刺激受容体の細胞内ドメインに由来する、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0434】

実施形態５６ 共刺激受容体が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、及びＣＤ４０からなる群から選択される、実施形態５５に記載の免疫細胞。

【0435】

実施形態５７ ＣＳＲの発現が誘導可能である、実施形態１～５６のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0436】

実施形態５８ ＣＳＲの発現が、免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、実施形態５７に記載の免疫細胞。

【0437】

実施形態５９ ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールが、ＣＤ１９に結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールがＣＤ１９に結合するｓｃＦｖを含み、膜貫通モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは両方ともＣＤ２８に由来する、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0438】

実施形態６０ ＣＤ１９に結合する抗体部分が、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインとを含み、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖが、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、を含み、ＣＳＲが、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片を含む、実施形態５９に記載の免疫細胞。

【0439】

実施形態６１ ｃａＴＣＲが、配列番号７２と７３又は配列番号７４と７５のアミノ酸配列を含む２つのポリペプチド鎖を含み、及び／又はＣＳＲが配列番号８０のアミノ酸配列を含む、実施形態６０に記載の免疫細胞。

【0440】

実施形態６２ ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールが、ＡＦＰに結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールがＧＰＣ３に結合するｓｃＦｖを含み、膜貫通モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは両方ともＣＤ２８に由来する、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0441】

実施形態６３ ＡＦＰに結合する抗体部分が、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインとを含み、ＧＰＣ３に結合するｓｃＦｖが、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、を含み、ＣＳＲが、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片を含む、実施形態６２に記載の免疫細胞。

【0442】

実施形態６４ ｃａＴＣＲが、配列番号６８と６９又は配列番号７０と７１のアミノ酸配列を含む２つのポリペプチド鎖を含み、及び／又はＣＳＲが配列番号８２のアミノ酸配列を含む、実施形態６３に記載の免疫細胞。

【0443】

実施形態６５ ｃａＴＣＲの抗原結合モジュールが、ＣＤ１９に結合する抗体部分を含み、ＣＳＲのリガンド結合モジュールがＣＤ２０に結合するｓｃＦｖを含み、膜貫通モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは両方ともＣＤ２８に由来する、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0444】

実施形態６６ ＣＤ１９に結合する抗体部分が、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインとを含み、ＣＤ２０に結合するｓｃＦｖが、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈドメインと、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌドメインと、を含み、ＣＳＲが、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の断片を含む、実施形態６５に記載の免疫細胞。

【0445】

実施形態６７ ｃａＴＣＲが、配列番号７２と７３又は配列番号７４と７５のアミノ酸配列を含む２つのポリペプチド鎖を含み、及び／又はＣＳＲが配列番号８１のアミノ酸配列を含む、実施形態６６に記載の免疫細胞。

【0446】

実施形態６８ 一実施形態では、実施形態１～６７のいずれか１つに記載のｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードしている１つ以上の核酸であって、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲがそれぞれ、１つ以上の核酸によりコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなる、１つ以上の核酸が提供される。

【0447】

実施形態６９ 一実施形態では、１つ以上の核酸であって、
ａ）キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）であって、
ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール、並びに
ｉｉ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ－ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）、及び第２のＴＣＲ－ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、ＴＣＲＭが、少なくとも１つのＴＣＲ－関連シグナル伝達分子の動員を促進し、ｃａＴＣＲは、１つ以上のポリペプチド鎖からなる、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）と、
ｂ）キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であって、
ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール、
ｉｉ）膜貫通モジュール、並びに
ｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含み、リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは、同一の分子から誘導されない、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）と、をコードし、ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠き、ＣＳＲが１つ以上のポリペプチド鎖からなる、１つ以上の核酸が提供される。

【0448】

実施形態７０ ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが、同じ核酸分子上にコードされている、実施形態６８又は６９に記載の１つ以上の核酸。

【0449】

実施形態７１ ｃａＴＣＲ及びＣＳＲが異なる核酸分子上にコードされている、実施形態６８又は６９に記載の１つ以上の核酸。

【0450】

実施形態７２ 誘導可能なプロモーターに作動可能に連結されたＣＳＲをコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態６８～７１のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸。

【0451】

実施形態７３ 誘導可能なプロモーターが、免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、実施形態７２に記載の１つ以上の核酸。

【0452】

実施形態７４ 誘導可能なプロモーターが、活性化Ｔ細胞由来プロモーターの核因子（ＮＦＡＴ）である、実施形態７２に記載の１つ以上の核酸。

【0453】

実施形態７５ 一実施形態では、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクターが提供される。

【0454】

実施形態７６ ベクターのうちの少なくとも１つが、ｃａＴＣＲをコードする核酸配列を含み、少なくとも１つの他のベクターが、ＣＳＲをコードする核酸配列を含む、実施形態７５に記載の１つ以上のベクター。

【0455】

実施形態７７ １つ以上の核酸を含む単一のベクターを含む、実施形態７５に記載の１つ以上のベクター。

【0456】

実施形態７８ 一実施形態では、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸、又は実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の１つ以上のベクターを含む、組成物が提供される。

【0457】

実施形態７９ 一実施形態では、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸、又は実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の１つ以上のベクターを含む、免疫細胞が提供される。

【0458】

実施形態８０ 免疫細胞が、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸又は実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の１つ以上のベクターから発現するｃａＴＣＲを更に含む、実施形態７９に記載の免疫細胞。

【0459】

実施形態８１ 免疫細胞が、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸、又は実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の１つ以上のベクターから発現するＣＳＲを更に含む、実施形態７９又は８０に記載の免疫細胞。

【0460】

実施形態８２ 免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態１～６７及び７９～８１のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0461】

実施形態８３ 実施形態１～６７及び７９～８２のいずれか１つに記載の免疫細胞であって、
ａ）ｃａＴＣＲが、第１のＴＣＲＤを含む第１のポリペプチド鎖と、第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体であり、抗原結合モジュールが、ＴＣＲＤの一方又は両方のアミノ末端に連結されている、１つ又は２つのポリペプチド鎖を含み、
ｂ）ＣＳＲが、単一のポリペプチド鎖を含み、免疫細胞が、
ｉ）ｃａＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と、
ｉｉ）ｃａＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列と、
ｉｉｉ）ＣＳＲをコードする第３の核酸配列と、を含む、免疫細胞。

【0462】

実施形態８４ 実施形態８３の免疫細胞であって、
ａ）第１のプロモーターの制御下の第１の核酸配列を含む第１のベクターと、
ｂ）第２のプロモーターの制御下の第２の核酸配列を含む第２のベクターと、
ｃ）第３のプロモーターの制御下の第３の核酸配列を含む第３のベクターと、を含む、免疫細胞。

【0463】

実施形態８５ 実施形態８３の免疫細胞であって、
ａ）第１のベクターであって、
ｉ）第１のプロモーターの制御下の第１の核酸配列、及び
ｉｉ）第２のプロモーターの制御下の第２の核酸配列を含む、ベクターと、
ｂ）第３のプロモーターの制御下の前記第３の核酸配列を含む第２のベクターと、を含む、免疫細胞。

【0464】

実施形態８６ 実施形態８３の免疫細胞であって、
ａ）第１のプロモーターの制御下の第１の核酸配列と、
ｂ）第２のプロモーターの制御下の第２の核酸配列と、
ｃ）第３のプロモーターの制御下の第３の核酸配列と、を含むベクターを含む、免疫細胞。

【0465】

実施形態８７ 第１のプロモーター及び／又は第２のプロモーターが、常時活性型のプロモーターである、実施形態８４～８６のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0466】

実施形態８８ 第３のプロモーターが誘導可能なプロモーターである、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0467】

実施形態８９ 実施形態８３の免疫細胞であって、
ａ）単一の第１のプロモーターの制御下の、第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む、第１のベクターと、
ｂ）第２のプロモーターの制御下の第３の核酸配列を含む第２のベクターと、を含む、免疫細胞。

【0468】

実施形態９０ 実施形態８３の免疫細胞であって、
ａ）単一の第１のプロモーターの制御下の、第１の核酸配列及び第２の核酸配列と、
ｂ）第２のプロモーターの制御下の第３の核酸配列と、を含むベクターを含む、免疫細胞。

【0469】

実施形態９１ 第１のプロモーターが常時活性型のプロモーターである、実施形態８９又は９０に記載の免疫細胞。

【0470】

実施形態９２ 第２のプロモーターが誘導可能なプロモーターである、実施形態８９～９１のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0471】

実施形態９３ 誘導可能なプロモーターが、免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、実施形態８８又は９２に記載の免疫細胞。

【0472】

実施形態９４ 誘導可能なプロモーターが、ＮＦＡＴ由来のプロモーターである、実施形態８８又は９２に記載の免疫細胞。

【0473】

実施形態９５ すべてが単一のプロモーターの制御下の、第１の核酸配列と、第２の核酸配列と、第３の核酸配列を含むベクターと、を含む、実施形態８３に記載の免疫細胞。

【0474】

実施形態９６ ベクターが免疫細胞ゲノムに組み込まれている、実施形態８４～９５のいずれか１つに記載の免疫細胞。

【0475】

実施形態９７ 一実施形態では、実施形態１～６７及び７９～９６のいずれか１つに記載の免疫細胞と、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が提供される。

【0476】

実施形態９８ 一実施形態では、標的抗原を提示する標的細胞を殺傷する（又は標的抗原関連疾患を治療する）方法であって、標的細胞を実施形態１～６７及び７９～９６のいずれか１つに記載の免疫細胞と接触させることを含む、方法が提供される。

【0477】

実施形態９９ 接触させることがインビボで実施される、実施形態９８に記載の方法。

【0478】

実施形態１００ 接触させることがインビトロで実施される、実施形態９８に記載の方法。

【0479】

実施形態１０１ 一実施形態では、標的抗原関連疾患を、それを必要とする個体において治療する方法であって、有効量の実施形態９７に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法が提供される。

【0480】

実施形態１０２ 標的抗原関連疾患が、がんである、実施形態１０１に記載の方法。

【0481】

実施形態１０３ がんが、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌である、実施形態１０２に記載の方法。

【0482】

実施形態１０４ 標的抗原関連疾患がウイルス感染である、実施形態１０１に記載の方法。

【0483】

実施形態１０５ ウイルス感染が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、実施形態１０４に記載の方法。

【0484】

実施形態１０６ 免疫細胞が個体にとって自家性である、実施形態１０１～１０５のいずれか１つに記載の方法。

【0485】

実施形態１０７ 一実施形態では、ｃａＴＣＲを含むか、又はｃａＴＣＲをコードする核酸で形質導入された免疫細胞に共刺激シグナルを提供する方法であって、実施形態６８～７４のいずれか１つに記載の１つ以上の核酸又は実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の１つ以上のベクターを上記細胞に導入することを含む、方法が提供される。

【実施例】

【0486】

材料及び方法
細胞試料、細胞株、及び抗体
細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ ＨＢ－８０６５、ＨＬＡ－Ａ２＋、ＡＦＰ^＋）、ＳＫ－ＨＥＰ－１（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－５２、ＨＬＡ－Ａ２＋、ＡＦＰ^－）、Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８６、ＣＤ１９^＋）、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４８、ＣＤ１９^＋）、Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２８９９、ＣＤ１９^－）、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５３）、Ｊｅｋｏ－１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－３００６、ＣＤ１９^＋）、ＴＨＰ－１（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２、ＣＤ１９^－）、Ｄａｕｄｉ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２１３、ＣＤ１９^＋）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２６）、及びＭＣＦ－７（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２２）をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。Ｊｕｒｋａｔは、Ｔ細胞白血病由来のヒトＴリンパ球細胞株である。Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５は、Ｔ細胞受容体β鎖を欠くＪｕｒｋａｔ細胞由来の変異株である。Ｒａｊｉは、ＣＤ１９を発現するバーキットリンパ腫細胞株である。Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ノックアウト（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ＫＯ）株を、ＣＲＩＳＰＲ技術によって生成した。３つの異なるガイド配列を、Ｒａｊｉ細胞内のＣＤ１９を標的化するように設計した。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ベクターをＯｒｉｇｅｎｅから購入し、各ガイドをｐＣａｓ－Ｇｕｉｄｅベクターに別々にクローニングした。エレクトロポレーションの３日後、各ガイドによるノックアウト効率をフローサイトメトリーによって評価し、限界希釈法によるクローン選択のために最良のＣＤ１９ノックアウトプールを選択した。選択されたクローンを、シークエンシングによって完全なＣＤ１９ノックアウトとして確認した。全ての細胞株を、３７℃／５％ＣＯ_２で、１０％ＦＢＳ及び２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０又はＤＭＥＭ中で培養した。

【0487】

ＦＩＴＣ又はＡＰＣにコンジュゲートしたヒトＨＬＡ Ａ０２（クローンＢＢ７．２）に対するモノクローナルＡｂ、及びＦＩＴＣ又はＡＰＣにコンジュゲートしたアイソタイプ対照マウスＩｇＧ２ｂ、ヒト又はマウスＣＤ３に対する抗体、ヒトＴ細胞受容体の様々なサブユニット、３×Ｆｌａｇタグ、ＨＡタグ、ＰＥ又はＦＩＴＣにコンジュゲートしたヤギＦ（ａｂ）２抗ヒトＩｇＧ、並びに蛍光コンジュゲートヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を購入した。ＡＦＰ１５８に対する抗イディオタイプ抗体／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１特異的抗体を開発し、Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの工場内で産生した。フローサイトメトリーデータをＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩを使用して収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアパッケージを使用して分析した。

【0488】

全てのペプチドを購入し、Ｅｌｉｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍａにより合成した。ペプチドは、＞９０％の純度であった。ペプチドを１０ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させ、又は生理食塩水で希釈し、－８０℃で凍結した。ビオチン化単鎖ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１及び対照ペプチド／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１複合体単量体を、組換えＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１及びβ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）を用いてペプチドを再折り畳みすることにより生成した。単量体は、ＢｉｒＡ酵素によるＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣ末端に連結されたＢＳＰペプチドを介してビオチン化した。蛍光標識ストレプトアビジンをビオチン化ペプチド／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１複合体単量体と混合して、蛍光標識されたペプチド／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１四量体を形成した。

【0489】

ヒトＣＤ１９特異的若しくはＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１特異的なＣＡＲ又はｃａＴＣＲを含むレンチウイルスを、例えば、キメラ構築物をコードするベクターを用いた２９３Ｔ細胞のトランスフェクションによって作製した。初代培養ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍｌのインターロイキン－２（ＩＬ－２）の存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による１日間の刺激後に形質導入に使用した。濃縮レンチウイルスを、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ）コーティングされた６ウェルプレート中のＴ細胞に９６時間適用した。抗ＡＦＰ及び抗ＣＤ１９キメラ構築物の形質導入効率を、それぞれＰＥコンジュゲートストレプトアビジン又は抗ｍｙｃ抗体を有するビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１四量体（「ＡＦＰ１５８四量体」）を使用して、フローサイトメトリーによって評価した。繰り返しフローサイトメトリー分析を５日目及びその後３～４日おきに行った。

【0490】

細胞株は、ｃａＴＣＲ構築物の２つのサブユニットをコードする１つ又は２つのベクターのいずれかで形質導入した。形質導入から５日後に、抗ＨＡ（抗ＨＡタグ抗体－ＣｈＩＰグレード、Ａｂｃａｍ）又は抗Ｆｌａｇ抗体（Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ Ｒａｂｂｉｔ，Ｓｉｇｍａ）を使用するウェスタンブロットのために細胞溶解物を生成した。

【0491】

腫瘍細胞傷害性を、Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によりアッセイした。ＣＤ３^＋Ｔ細胞は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、グリコホルリンＡ発現細胞を陰性に枯渇させるＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＰＢＭＣ濃縮全血から調製した。ヒトＴ細胞を活性化し、例えば、製造元のプロトコールに従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養して維持し、７～１４日目に使用した。活性化Ｔ細胞（免疫細胞）及び標的細胞を、様々なエフェクター対標的比（例えば、２．５：１又は５：１）で１６時間共培養し、細胞傷害性についてアッセイした。
実施例１キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）設計

【0492】

様々なキメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）設計が想到され、６つの異なる例が図１に示される（ｃａＴＣＲ－１、ｃａＴＣＲ－２、ｃａＴＣＲ－３、ｃａＴＣＲ－４、ｃａＴＣＲ－５、及びｃａＴＣＲ－６）。これらの設計では、様々な抗体部分（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖ）は、可変ドメイン及び定常ドメインを欠くＴ細胞受容体α／β鎖又はγ／δ鎖のアミノ末端に融合され、それらの連結ペプチド（定常ドメイン後の領域）、それらの膜貫通ドメイン又はその変異型、及び任意の細胞内ドメインの全て又は一部を含み、Ｔ細胞の表面に発現され得るｃａＴＣＲヘテロ二量体を形成する。天然のＴＣＲでは、Ｖα／Ｖβ又はＶδ／Ｖγドメインは、ＴＣＲの抗原結合ドメインを形成する。本発明者らの設計は、様々な抗体部分を有するＶα－Ｃα／Ｖβ－Ｃβ又はＶδ－Ｃδ／Ｖγ－Ｃγ領域を置換し、少なくとも１つのＴＣＲ膜貫通ドメインを導入し、したがって、抗体の結合特異性を構築物に付与し、天然に存在するＴＣＲ膜貫通ドメインのみを有するＴＣＲ又は関連する構築物と比較して、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζζなどのＴＣＲ複合体において、ＴＣＲ複合体中のアクセサリー分子を動員する構築物の向上した能力をもたらす。ｃａＴＣＲ構築物を以下のように命名した：ｃａＴＣＲ－［設計番号］－［変異位置］［番号］。設計番号１は、Ｆａｂ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号２は、Ｆａｂ’抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号３は、（Ｆａｂ’）２抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号４は、Ｆｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号５は、単一のｓｃＦｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応し、設計番号６は、２つのｓｃＦｖ抗体部分を有するｃａＴＣＲに対応する（図１を参照されたい）。変異位置及び番号０（例えば、ｃａＴＣＲ－１－０）は、天然に存在するＴＣＲドメインを有する構築物に対応し、＃≧１は、変異位置における特定の変異を有するｃａＴＣＲに対応する（例えば、ｃａＴＣＲ－１－ＴＭ１は、１つの膜貫通ドメイン変異型に対応し、ｃａＴＣＲ－１－ＥＣ１は、１つの細胞外ドメイン変異型に対する、表２を参照されたい）。

【0493】

ｃａＴＣＲ－１（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ＴＣＲδ／ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ－ＴＣＲγ）設計では、抗体重鎖の可変ドメイン及び第１の定常ドメイン（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメイン及び定常ドメイン（ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。

【0494】

ｃａＴＣＲ－１の一実施形態では、１つの鎖は、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメイン及び連結ペプチドの全て又は一部を含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分に融合された、ＩｇＣ_Ｈ１ドメイン（配列番号３７～４７のうちのいずれか１つ）に融合された抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１抗体（配列番号６２）のＩｇＶ_Ｈドメインを含み、また、他方の鎖は、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメイン及び連結ペプチドの全て又は一部を含むＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分に融合された、ＩｇＣ_Ｌドメイン（配列番号４８）に融合された抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１抗体（配列番号６３）のＩｇＶ_Ｌドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ膜貫通ドメインの両方が天然に存在する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ膜貫通ドメインのうちの少なくとも１つは、１つ以上のアミノ酸置換を含む天然に存在しない変異型である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号３１又は３２のアミノ酸配列を有する連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号７及び９～１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号３３又は３４のアミノ酸配列を有する連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分は、配列番号８及び１４～２６のいずれか１つのアミノ酸配列を有する膜貫通ドメインを含む。

【0495】

ｃａＴＣＲ－２（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ－ＴＣＲδ／ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ－リンカー－ＴＣＲγ）設計では、抗体重鎖の可変ドメイン、第１の定常ドメイン、及びヒンジ（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。リンカー（ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ－リンカー）に融合された対応する抗体軽鎖の可変ドメイン及び定常ドメインは、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。

【0496】

ｃａＴＣＲ－３（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ－ＴＣＲδ／ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ－ＴＣＲγ＋ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ）設計では、抗体重鎖の可変ドメイン、第１の定常ドメイン、及びヒンジ（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。抗体重鎖の可変ドメイン、第１の定常ドメイン、及びヒンジ（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１－ヒンジ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。対応する抗体軽鎖（ＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＣ_Ｌ）の可変ドメイン及び定常ドメインは、ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＣ_Ｈ１ドメインと結合する。

【0497】

ｃａＴＣＲ－４（ＩｇＶ_Ｈ－ＴＣＲδ／ＩｇＶ_Ｌ－ＴＣＲγ）設計では、抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶ_Ｈ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメイン（ＩｇＶ_Ｌ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。

【0498】

ｃａＴＣＲ－５（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ－ＴＣＲδ／ＴＣＲγ）設計では、対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ又はＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＶ_Ｈ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分は、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で欠失し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。

【0499】

ｃａＴＣＲ－６（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ－ＴＣＲδ／ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ－ＴＣＲγ）設計では、対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ又はＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＶ_Ｈ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶδ－Ｃδ領域に続くＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインに融合した抗体重鎖の可変ドメイン（ＩｇＶ_Ｈ－ＩｇＶ_Ｌ又はＩｇＶ_Ｌ－ＩｇＶ_Ｈ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分を、境界位置まで、又はＶγ－Ｃγ領域に続くＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの連結ペプチド内で置換し、所望により、ＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインは、１つ以上のアミノ酸の置換などにより改変されている。
実施例２：抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９キメラ刺激受容体で形質導入されたＴ細胞の構築及び特性評価

【0500】

抗ＣＤ１９結合部分をコードする核酸断片（配列番号５８及び５９）を使用して、ＣＤ２８膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号５１）を含むキメラ共刺激受容体（ＣＳＲ；本明細書では「ＣＳＲ１」とも称される）並びにｃａＴＣＲ－１構築物（ｃａＴＣＲ－１－０又はｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５）の両方を生成した。初代培養Ｔ細胞を、ＣＳＲ単独、ｃａＴＣＲ－１－０単独、ＣＳＲと組み合わせたｃａＴＣＲ－１－０、又はＣＳＲと組み合わせたｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５のいずれかで形質導入した。形質導入効率は、細胞表面染色によって決定され、全てのｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞は、モックＴ細胞と混合することにより、およそ４０％の受容体陽性で一致した。
インビトロでの殺傷

【0501】

ＣＤ８０／８６陰性ＮＡＬＭ６細胞（ＣＤ１９を発現する白血病細胞）を、２．５：１．のエフェクター対標的比でのＴ細胞刺激の標的細胞として使用した。Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１６時間インキュベーション後に特異的Ｔ細胞溶解を測定した。

【0502】

抗ＣＤ１９－ｃａＴＣＲ－１－０又は抗ＣＤ１９－ｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５のいずれかでの抗ＣＤ１９－ＣＳＲの発現は、インビトロでＮＡＬＭ６腫瘍細胞を溶解することができる完全機能的細胞傷害性Ｔ細胞を作製した（図２）。ＣａＴＣＲ－１－０のみを発現しているＴ細胞並びにｃａＴＣＲ－１（ｃａＴＣＲ－１－０又はｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５）及びＣＳＲの両方を発現しているＴ細胞は全て、ＮＡＬＭ６標的細胞のほぼ１００％を溶解することができたため、２種類のＴ細胞間では、殺傷された標的細胞数の有意な差は観察されなかった。
サイトカイン分泌

【0503】

インビトロ殺傷反応の上清に放出されたサイトカインの濃度を、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８ ｐｌｅｘキット（ＢｉｏＲａｄ）を使用してＢｉｏｐｌｅｘ２００（Ｌｕｍｉｎｅｘ）により測定した。ＣＳＲを発現するＴ細胞は、ｃａＴＣＲ（ＣＳＲ陽性及びｃａＴＣＲ陽性Ｔ細胞）と組み合わせて、ＣＡ－ＴＣＲ－１－０単独を発現するＴ細胞よりも、より多くの細胞傷害性のサイトカインを放出した（図３）。
細胞内サイトカイン発現

【0504】

Ｔ細胞を、分泌阻害剤ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）の存在下で４時間、１：２のＥ：Ｔ比で、標的細胞で刺激した。Ｔ細胞を透過処理し、サイトカイン特異的抗体を使用して、腫瘍刺激に応答して発現したサイトカインを検出した。サイトカイン陽性細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーを用いて決定した。ＣＳＲ陽性及びｃａＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、ｃａ－ＴＣＲ－１－０単独を発現するＴ細胞よりも、より多くの細胞内サイトカインを発現した（表５）。

【表5】

【0505】

まとめると、結果は、ＣＳＲの添加が、ｃａＴＣＲ Ｔ細胞の感度及び応答性を増加させることを示す。ＣＳＲ－ｃａＴＣＲの二重陽性Ｔ細胞で発現し放出されるサイトカインの量が増加すると、ｃａＴＣＲ－１及びＣＳＲの両方の共刺激がＴ細胞の細胞傷害性の可能性を上昇させることを示す。
脱顆粒

【0506】

Ｔ細胞が腫瘍細胞を溶解する一次機構は、標的細胞中に放出される細胞傷害性分子の分泌顆粒を産生することによる。ＣＤ１０７ａは、脱顆粒活性のマーカーとして使用することができ、ＣＤ１０７ａの発現の増加は、細胞傷害性Ｔ細胞機能の増加と相関する。

【0507】

Ｔ細胞を蛍光コンジュゲート抗ＣＤ１０７ａと混合し、エンドサイトーシス阻害剤モネンシンの存在下で４時間、１：２のＥ：Ｔ比で、標的細胞で刺激した。Ｔ細胞表面上で検出されたＣＤ１０７ａの量は、抗原認識により誘導される細胞傷害性脱顆粒の程度の直接的な尺度である。ｃａＴＣＲ Ｔ細胞上のＣＳＲの結合はＴ細胞脱顆粒を増加させ、ＣＳＲが治療用Ｔ細胞を意図された腫瘍細胞に向かってより反応性にすることを更に実証する（図４）。
増殖

【0508】

遺伝的に改変されたＴ細胞の増殖及び持続は、がんを治療する際の養子Ｔ細胞移植療法の成功に重要である。Ｔ細胞増殖及び持続性に対するＣＳＲの効果をアッセイするために、本発明者らは、細胞内色素ＣＦＳＥでＴ細胞を標識し、腫瘍細胞で刺激したときにＴ細胞が分裂するときの色素の希釈を観察した。また、示された日に残ったＣＦＳＥ陽性細胞の数を計数することにより、Ｔ細胞の持続性を測定することも可能であった。

【0509】

それぞれのＴ細胞を一晩血清飢餓処理し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｃ３４５５４）を用いてＣＦＳＥで標識した。１００，０００個のＴ細胞を、２：１のＥ：Ｔ比でインキュベートし、示された日に、フローサイトメトリーを使用してＴ細胞が分裂するときのＣＦＳＥ色素の連続希釈を観察した。Ｔ細胞の総数をＦＡＣｓで計数した。

【0510】

ＣＦＳＥ希釈はＣＳＲ刺激により増加し、これらのＴ細胞はより高い増殖可能性を有したことを示した（図５）。重要なことに、細胞数の増加はまた、細胞がより良好に増殖するだけでなく、それらの持続性も維持されることを意味する（表６）。

【表6】

【0511】

結果は、本発明者らにより、標的リガンド及び標的抗原の両方を発現する腫瘍細胞でＣＳＲ及びｃａＴＣＲの両方を同時に刺激することができ、ＣＳＲ及びｃａＴＣＲの共刺激は、ｃａＴＣＲ Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖可能性、及び持続性を強化したことを示す。これらは、養子移植を用いてｃａＴＣＲに基づく治療の治療可能性を増加させる全ての特性である。
実施例３．抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞の構築及び特性評価

【0512】

抗ＡＦＰ結合部分をコードする核酸断片（配列番号６２及び６３）を使用して、ｃａＴＣＲ－１構築物（ｃａＴＣＲ－１－０又はｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５）を生成した。抗ＧＰＣ３結合部分をコードする核酸断片（配列番号６４及び６５）を使用して、ＣＤ２８膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号５１）を含むＣＳＲ（すなわち、ＣＳＲ１）を生成した。
インビトロでの殺傷

【0513】

ＨＥＰＧ２細胞（ＡＦＰ及びＧＰＣ３を発現しているヒト肝癌細胞）並びにＨＥＰＧ２－ＧＰＣ３．ＫＯ細胞（ＧＰＣ３遺伝子の標的化ノックアウトを有するＨＥＰＧ２細胞）を、２．５：１のエフェクター対標的比でのＴ細胞刺激の標的細胞として使用した。Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１６時間インキュベーション後に特異的Ｔ細胞溶解を測定した。

【0514】

抗ＡＦＰ－ｃａＴＣＲ－１－０又は抗ＡＦＰ－ｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５のいずれかでの抗ＧＰＣ３－ＣＳＲの発現は、インビトロでＨＥＰＧ２細胞を溶解することができる完全機能的細胞傷害性Ｔ細胞をもたらした（図６）。ｃａＴＣＲ－１－０のみを発現しているＴ細胞は、ｃａＴＣＲ－１（ｃａＴＣＲ－１－０又はｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５）及びＣＳＲ（約５５％～約６５％）の両方を発現しているものよりもはるかに少ない（約１５％）特異的殺傷を有した。対照的に、特異的殺傷は、ＨＥＰＧ２－ＧＰＣ３．ＫＯ標的細胞を使用するとき、ｃａＴＣＲ及びＣＳＲの両方を発現するＴ細胞については、約１０％に減少し（図６）、これは、ＣＳＲとその標的リガンドとの結合が、増加した細胞傷害性に関与することを示している。
サイトカイン分泌

【0515】

インビトロ殺傷実験の上清に放出されたサイトカインの濃度を、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８ ｐｌｅｘキット（ＢｉｏＲａｄ）を使用してＢｉｏｐｌｅｘ２００（Ｌｕｍｉｎｅｘ）により測定した。ＣＳＲ陽性及びｃａＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、ｃａＴＣＲ標的抗原及びＣＳＲ標的リガンドの両方を発現するＨＥＰＧ２標的細胞に対して、ＣＡ－ＴＣＲ－１－０単独を発現するＴ細胞よりも、より多くの細胞傷害性のサイトカインを放出した（図７）。対照的に、ＣＡ－ＴＣＲ－１－０単独又はｃａＴＣＲ及びＣＳＲの両方を発現しているＴ細胞の間では、ＣＳＲ標的リガンドを欠くＨＥＰＧ２－ＧＰＣ３．ＫＯ標的細胞に対する差はほとんど又は全く差がなかった（図７）。
細胞内サイトカイン発現

【0516】

Ｔ細胞を、分泌阻害剤ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）の存在下で４時間、１：２のＥ：Ｔ比で、標的細胞（ＨＥＰＧ２）で刺激した。Ｔ細胞を透過処理し、サイトカイン特異的抗体を使用して、腫瘍刺激に応答して発現したサイトカインを検出した。サイトカイン陽性細胞のパーセントを、フローサイトメトリーを用いて決定した。ＣＳＲ陽性及びｃａＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、ｃａ－ＴＣＲ－１－０単独を発現するＴ細胞よりも、より多くの細胞内サイトカインを発現した（表７）。

【表7】

【0517】

まとめると、結果は、ＣＳＲの添加が、異なるｃａＴＣＲ標的抗原及びＣＳＲ標的リガンドを有するｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞の感度及び応答性を増加させることを示す。これらのＣＳＲ－ｃａＴＣＲ個二重陽性Ｔ細胞で発現し放出されるサイトカインの量が増加すると、ｃａＴＣＲ－１及びＣＳＲの両方の共刺激がＴ細胞の細胞傷害性の可能性を上昇させる証拠を更に示す。
脱顆粒

【0518】

Ｔ細胞を蛍光コンジュゲート抗ＣＤ１０７ａと混合し、エンドサイトーシス阻害剤モネンシンの存在下で４時間、１：２のＥ：Ｔ比で、ＨＥＰＧ２標的細胞で刺激した。ｃａＴＣＲ Ｔ細胞上のＣＳＲの結合はＴ細胞脱顆粒を増加させ、ＣＳＲが治療用Ｔ細胞を意図された腫瘍細胞に向かってより反応性にすることを更に実証する（図８）。
増殖

【0519】

Ｔ細胞を細胞内色素ＣＦＳＥで標識し、指示された日で、染料希釈及び残っているＣＦＳＥ陽性細胞の数を測定した。

【0520】

それぞれのＴ細胞を一晩血清飢餓処理し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｃ３４５５４）を用いてＣＦＳＥで標識した。１００，０００個のＴ細胞を、２：１のＥ：Ｔ比でインキュベートし、示された日に、フローサイトメトリーを使用してＴ細胞が分裂するときのＣＦＳＥ色素の連続希釈を観察した。Ｔ細胞の総数をＦＡＣｓで計数した。

【0521】

ＣＦＳＥ希釈はＣＳＲ刺激により増加し、これらのＴ細胞はより高い増殖可能性を有したことを示した（図９）。重要なことに、細胞数の増加はまた、細胞がより良好に増殖するだけでなく、それらの持続性も維持されることを意味する（表８）。

【表8】

【0522】

結果は、本発明者らにより、ＣＳＲ及びｃａＴＣＲの両方をリガンド陽性腫瘍細胞で同時に刺激することができ、ＣＳＲ及びｃａＴＣＲの共刺激は、ｃａＴＣＲ Ｔ細胞の細胞傷害性、増殖可能性、及び持続性を強化したことを示す。これらは全て、養子移植を用いてｃａＴＣＲに基づく治療の治療可能性を増加させる特性である。
実施例４抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ２０ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞の構築及び特性評価

【0523】

抗ＣＤ２０結合部分（配列番号６０及び６１）をコードする核酸断片を使用して、抗ＣＤ１９結合部分（配列番号５８及び５９）を使用して生成される抗ＣＤ１９ｃａＴＣＲ－１－０又はｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５を発現する同じベクター上に発現させた、ＣＤ２８膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号５１）を含む抗ＣＤ２０ ＣＳＲ（すなわち、「ＣＳＲ１」）を生成した。
インビトロでの殺傷

【0524】

Ｒａｊｉ、ＢＶ１７３、ＮＡＬＭ６、及びＪｅｋｏ－１細胞（ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現する細胞株）を、２．５：１．のエフェクター対標的比でＴ細胞殺傷のための標的細胞として使用した。Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１６時間インキュベーション後に特異的Ｔ細胞溶解を測定した。

【0525】

抗ＣＤ１９－ｃａＴＣＲ－１－０又は抗ＣＤ１９－ｃａＴＣＲ－１－ＴＭ５のいずれかでの抗ＣＤ２０－ＣＳＲの発現は、インビトロで様々なＣＤ１９陽性細胞、ＣＤ２０陽性腫瘍細胞を溶解することができる完全機能的細胞傷害性Ｔ細胞を作製した（図１０）。
サイトカイン分泌

【0526】

Ｒａｊｉインビトロ殺傷実験の上清に放出されたサイトカインの濃度を、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８ ｐｌｅｘキット（ＢｉｏＲａｄ）を使用してＢｉｏｐｌｅｘ２００（Ｌｕｍｉｎｅｘ）により測定した。ＣＳＲ陽性及びｃａＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、ＣＡ－ＴＣＲ－１－０単独を発現するＴ細胞よりも、より多くのＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαを放出した（図１１）。
脱顆粒

【0527】

Ｔ細胞を蛍光コンジュゲート抗ＣＤ１０７ａと混合し、エンドサイトーシス阻害剤モネンシンの存在下で４時間、１：２のＥ：Ｔ比で、Ｒａｊｉ標的細胞で刺激した。ｃａＴＣＲ Ｔ細胞上のＣＳＲの結合はＴ細胞脱顆粒を増加させ、ＣＳＲが治療用Ｔ細胞を意図された腫瘍細胞に向かってより反応性にすることを更に実証する（図１２）。

【0528】

実施例２～４は、ＣＳＲが、様々な抗原標的部分と組み合わせて使用されて、広範囲の疾患細胞に対してｃａＴＣＲ発現Ｔ細胞の治療可能性を増加させることができるモジュール式分子であることを示す。
実施例５：抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９キメラ刺激受容体変異型で形質導入されたＴ細胞の構築及び特性評価

【0529】

抗ＣＤ１９結合部分をコードする核酸断片（配列番号５８及び５９）を使用して、キメラ共刺激受容体（ＣＳＲ）及びｃａＴＣＲ－１－０構築物（この実施例では、「ｃａＴＣＲ－１」と称される）の両方を生成した。抗ＣＤ１９結合部分をＣＳＲ配列に融合させることによって、異なるＣＳＲを調製した。ＣＳＲ１は、ＣＤ２８膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号９０）を含む。ＣＳＲ２は、ＣＤ８膜貫通配列及び４－１ＢＢ細胞内（instracellular）シグナル伝達配列（配列番号９１）を含む。ＣＳＲ３は、４－１ＢＢ膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号９２）を含む。ＣＳＲ４は、ＣＤ８α膜貫通配列及びＣＤ２７細胞内シグナル伝達配列（配列番号９３）を含む。ＣＳＲ５は、ＣＤ２７膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号９４）を含む。ＣＳＲ６は、ＣＤ８膜貫通配列及びＣＤ３０細胞内シグナル伝達配列（配列番号９５）を含む。ＣＳＲ７は、ＣＤ３０膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号９６）を含む。ＣＳＲ８は、ＣＤ８膜貫通配列及びＯＸ４０細胞内シグナル伝達配列（配列番号９７）を含む。ＣＳＲ９は、ＯＸ４０膜貫通及び細胞内シグナル伝達配列（配列番号９８）を含む。

【0530】

抗ＣＤ１９ ＣＳＲ単独で、又は抗ＣＤ１９ ＣＳＲと組み合わせた抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１で、初代培養Ｔ細胞を形質導入した。形質導入効率は、細胞表面染色によって決定され、全てのｃａＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は、モックＴ細胞と混合することにより、およそ４０％の受容体陽性で一致した。
抗ＣＤ１９ ＣＳＲ単独を発現するＴ細胞
インビトロでの殺傷

【0531】

Ｒａｊｉ又はＮＡＬＭ６細胞を、２．５：１．のエフェクター対標的比でのＴ細胞刺激の標的細胞として使用した。Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１６時間インキュベーション後に特異的Ｔ細胞溶解を測定した。抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－６、ＣＳＲ－７、ＣＳＲ－８、又はＣＳＲ－９単独を発現しているＴ細胞は、形質導入されていないモックＴ細胞と比較して、多くの数の殺傷された標的細胞をもたらさなかった（データ示さず）。
サイトカイン分泌

【0532】

インビトロ殺傷反応の上清に放出されたサイトカインの濃度を、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８ ｐｌｅｘキット（ＢｉｏＲａｄ）を使用してＢｉｏｐｌｅｘ２００（Ｌｕｍｉｎｅｘ）により測定した。抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－６、ＣＳＲ－７、ＣＳＲ－８、又はＣＳＲ－９単独を発現するＴ細胞は、Ｒａｊｉ又はＮＡＬＭ６と共にインキュベートされるときに有意な量のＩＦＮγを放出しなかった（データ示さず）。
抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲを発現するＴ細胞

【0533】

２つの異なる実験バッチでは、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲの両方を発現するそれぞれのＴ細胞を一晩血清飢餓処理し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｃ３４５５４）を用いてＣＦＳＥで標識した。Ｔ細胞を、２：１のＥ：Ｔ比でＮＡＬＭ６とインキュベートし、示された日に、フローサイトメトリーを使用してＴ細胞が分裂するときのＣＦＳＥ色素の連続希釈を観察した。Ｔ細胞の総数をＦＡＣｓで計数した。これらの実験を、第２のドナーから得られた初代培養Ｔ細胞を使用して繰り返した。同様の結果が観察された（データ示さず）。

【0534】

抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲの両方を発現している全てのＴ細胞において、ＣＦＳＥ希釈を観察し、これらのＴ細胞の高い増殖可能性を示した（図１４－１５）。加えて、抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲの両方を発現しているＴ細胞は、１０日間にわたって有意な持続性を示した（表９）。対照実験では、抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－１から抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－５ｍまでのいずれか１つを単独で発現しているＴ細胞は、経時的に、増殖可能性又は持続性の増加を示さなかった（データ示さず）。

【表9】

実施例６：抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞のインビボ有効性試験

【0535】

抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－１の両方を発現しているＴ細胞のインビボ抗腫瘍活性を、ヒトＣＤ１９＋ＮＡＬＭ－６プレＢ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）モデルで試験した。Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ発現ＮＡＬＭ－６細胞を、ＮＯＤ ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）免疫不全マウスに静脈内（ｉ．ｖ．）移植し、腫瘍由来生物発光を測定することにより、腫瘍量を評価した。腫瘍移植から６日後、マウスを、治療群への全生物発光流量に基づいて無作為化した：（１）５×１０^６個の形質導入されていないドナーに適合した（Ｍｏｃｋ）Ｔ細胞のｉ．ｖ．注射、（２）抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１のみを発現する２×１０^６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞」）のｉ．ｖ．注射、及び（３）抗ＣＤ１９ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＣＤ１９ ＣＳＲ－１の両方を発現する２×１０^６個のＴ細胞（「ｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞」）のｉ．ｖ．注射、（ｎ＝６マウス／群）。マウスにおけるＴ細胞注入から得られる健康効果を、それらの全身外観、体重、及び他の有害応答の臨床的徴候（低体温、努力性呼吸、及び後肢麻痺／衰弱を含む）をモニタリングすることによって評価した。

【0536】

図１６に示すように、ｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞及びｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理の両方が腫瘍増殖阻害をもたらす一方、ｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞は、ｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞と比較して抗腫瘍活性の増強を示した。全てのｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞処理及びｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理マウスは、試験期間にわたる正常な歩行、姿勢、及び活動／応答性を示した。加えて、ｃａＴＣＲ－１ Ｔ細胞処理及びｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理マウスは、試験中に体重を減少させなかった。全体として、処理されたマウスにおける観察可能な異常パラメーターの欠如は、ｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞療法の安全性を示す。

【0537】

インビボでのサイトカイン放出レベルを決定するために、臨床のサイトカイン放出症候群に関連するものを含む主要なサイトカインを、ＮＡＬＭ－６腫瘍担持マウスに抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞又はｃａＴＣＲ－１ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞と共に投与した２４時間後に分析した。ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘキットを使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｍａｇｐｉｘ技術によりサイトカインレベルを定量した。図１７のｃａＴＣＲ－１に示すように、ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理マウスは、ＣＡＲ－Ｔ処理マウスよりも顕著に低いサイトカイン放出レベルを有した。
実施例７：抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＧＰＣ３ ＣＳＲで形質導入されたＴ細胞のインビボ有効性試験

【0538】

抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１（構築物の情報について、実施例３を参照されたい）の両方を発現するＴ細胞のインビボ抗腫瘍活性を、確立されたヒトＡＦＰ^＋／ＨＬＡ－Ａ２^＋ Ｈｅｐ Ｇ２肝癌異種移植モデルにおいて試験した。Ｈｅｐ Ｇ２細胞を、ＳＣＩＤ－Ｂｅｉｇｅマウスの右脇腹に皮下（ｓ．ｃ．）移植した。腫瘍が約１００ｍｍ^３に達したとき、マウスは、（１）５×１０^６個の形質導入していないドナー一致（モック）Ｔ細胞、（２）同じ抗ＡＦＰ結合部分を含む抗ＡＦＰ ＣＡＲを発現する２×１０^６個のＴ細胞（配列番号６２及び６３）、又は（３）抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１及び抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１（ｎ＝６マウス／群）の両方を発現する２×１０^６個のＴ細胞のいずれかを腫瘍内注射した（ｎ＝６マウス／群）。マウスにおけるＴ細胞注入から得られる健康効果を、それらの全身外観、体重、及び他の有害応答の臨床的徴候（低体温、努力性呼吸、及び後肢麻痺／衰弱を含む）をモニタリングすることによって評価した。

【0539】

図１８に示すように、抗ＡＦＰ ＣＡＲ Ｔ細胞処理及び抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１／抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理の両方は、顕著かつ有意な（^＊＊＊ｐ＜０．０００１；Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較試験）腫瘍増殖阻害をもたらした。全ての抗ＡＦＰ ＣＡＲ－Ｔ処理及び抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１／抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理マウスは、試験期間にわたる正常な歩行、姿勢、及び活動／応答性を示した。加えて、抗ＡＦＰ ＣＡＲ－Ｔ処理及び抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１／抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞処理マウスは、試験中に体重を減少させなかった。全体として、処理されたマウスにおける観察可能な異常パラメーターの欠如は、抗ＡＦＰ ｃａＴＣＲ－１／抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ－１ Ｔ細胞療法の安全性を示す。

【表10-1】

【表10-2】

【表10-3】

【表10-4】

【表10-5】

【表10-6】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図13E】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【配列表】

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