特許 7538721 抗インターロイキン１７Ａ抗体、医薬組成物、およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-14

(45)【発行日】2024-08-22

(54)【発明の名称】抗インターロイキン１７Ａ抗体、医薬組成物、およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/24 20060101AFI20240815BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240815BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61K 51/10 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240815BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240815BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 5/12 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240815BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240815BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240815BHJP

【ＦＩ】

C07K16/24 ZNA

A61K39/395 N

A61K39/395 Y

A61K47/68

A61K49/00

A61K51/10 200

A61P17/06

A61P19/02

A61P25/00

A61P35/00

A61P37/02

A61P43/00 105

C07K16/46

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N5/12

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12P21/08

【請求項の数】 26

(21)【出願番号】P 2020566731

(86)(22)【出願日】2019-05-24

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-09-30

(86)【国際出願番号】 CN2019088344

(87)【国際公開番号】W WO2019228266

(87)【国際公開日】2019-12-05

【審査請求日】2022-05-23

(31)【優先権主張番号】201810539405.0

(32)【優先日】2018-05-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【微生物の受託番号】CCTCC  CCTCC C2017165

【微生物の受託番号】CCTCC  CCTCC C2017102

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】520404676

【氏名又は名称】アケソ バイオファーマ カンパニー，リミティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100092624

【弁理士】

【氏名又は名称】鶴田 準一

(74)【代理人】

【識別番号】100114018

【弁理士】

【氏名又は名称】南山 知広

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100108903

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和広

(72)【発明者】

【氏名】パイヨン リー

(72)【発明者】

【氏名】ユイ シア

(72)【発明者】

【氏名】チョンミン マクスウエル ワン

(72)【発明者】

【氏名】チャン ポン

【審査官】西澤 龍彦

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／０８２１９３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１７／０３２７５７１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１７－５０８４６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１０７４８８２２７（ＣＮ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１４／００１３６８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／２２１１７４（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ

Ｃ１２Ｎ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＬ－１７Ａに結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合部分であって、
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域は、それぞれ配列番号：３１～３３に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号：３４～３６に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む、または
モノクローナル抗体の重鎖可変領域またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号：３７～３９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号：４０～４２に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む、
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号：３１～３３に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号：３４～３６に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号：３７～３９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域はそれぞれ配列番号：４０～４２に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む、
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、および配列番号：１４から選択される、および前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：４、配列番号：８、および配列番号：１２から選択される、または
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：１６、配列番号：２０、配列番号：２４、および配列番号２８から選択される、および前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：１８、配列番号：２２、配列番号：２６、および配列番号：３０から選択される、
請求項１～３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、以下の（１）～（８）：
（１） 配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（２） 配列番号：６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（３） 配列番号：１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（４） 配列番号：１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（５） 配列番号：１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（６） 配列番号：２０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（７） 配列番号：２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（８） 配列番号：２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：３０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
のいずれか一つから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｖ、相補性決定領域断片、単鎖抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、および二重特異性抗体から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀でヒトＩＬ－１７Ａに結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片はマウス以外の種の非ＣＤＲ領域を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６によって産生されるモノクローナル抗体である；または
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７によって産生されるモノクローナル抗体である、
請求項１～８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域をコードする核酸を含む、単離された核酸分子。

【請求項11】

前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域をコードする前記核酸は、以下の（１）～（８）：
（１） 配列番号：１、配列番号：３；
（２） 配列番号：５、配列番号：７；
（３） 配列番号：９、配列番号：１１；
（４） 配列番号：１３、配列番号：１１；
（５） 配列番号：１５、配列番号：１７；
（６） 配列番号：１９、配列番号：２１；
（７） 配列番号：２３、配列番号：２５；および
（８） 配列番号：２７、配列番号：２９
のいずれか一つから選択される、請求項１０に記載の単離された核酸分子。

【請求項12】

請求項１０または１１に記載の単離された核酸分子を含む組換えベクター。

【請求項13】

請求項１２に記載の前記組換えベクターを含む宿主細胞。

【請求項14】

請求項１３に記載の宿主細胞を適切な条件下で培養すること、および前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を細胞培養物から単離することを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を製造する方法。

【請求項15】

受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６；および
受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７
から選択される、ハイブリドーマ細胞株。

【請求項16】

請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片とコンジュゲート部分とを含み、当該コンジュゲート部分は検出可能な標識である、コンジュゲート。

【請求項17】

請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートを含むキット。

【請求項18】

ＩＬ－１７Ａの定性的または定量的な検出のためのキットの製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または請求項１６に記載のコンジュゲートの使用。

【請求項19】

（１）請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートと、（２）薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む医薬組成物。

【請求項20】

腫瘍または自己免疫疾患の予防および／または治療のための薬剤の製造における、または自己免疫疾患の診断のための薬剤の製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートの使用。

【請求項21】

ＩＬ－１７ＡのＩＬ１７ＲＡへの結合を遮断するための薬剤、ＩＬ－１７Ａの活性またはレベルを制御するための薬剤、または細胞内のＩＬ－６の発現を阻害するための薬剤の製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または請求項１６に記載のコンジュゲートの使用。

【請求項22】

ＩＬ－１７ＡのＩＬ１７ＲＡへの結合を遮断するための方法、ＩＬ－１７Ａの活性またはレベルを制御するための方法、または線維芽細胞内のＩＬ－６の発現を阻害するための方法から選択される方法であって、有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートを細胞または必要とする対象に投与することを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法。

【請求項23】

有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートを含む、腫瘍または自己免疫疾患の治療および／または予防のための医薬組成物。

【請求項24】

腫瘍または自己免疫疾患の予防および／または治療のため、または自己免疫疾患の診断のために使用される、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項25】

ＩＬ－１７ＡのＩＬ１７ＲＡへの結合の遮断、ＩＬ－１７Ａの活性またはレベルの制御、または細胞内のＩＬ－６の発現の阻害のために使用される、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項26】

有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片または請求項１６に記載のコンジュゲートを含む、自己免疫疾患の診断のための医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、分子免疫学の分野に属し、抗インターロイキン１７Ａ抗体、その医薬組成物およびその使用に関する。具体的には、本発明は、抗インターロイキン１７Ａモノクローナル抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

インターロイキン１７Ａ（ＩＬ－１７ＡまたはＩＬ １７Ａと略される）は、６つのメンバー、すなわちＩＬ－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａは最初に見出され、ＩＬ－１７とも呼ばれる）、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ（ＩＬ－２５とも命名される）、およびＩＬ－１７Ｆ（Ｓｈｉ Ｐｅｉｑｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３３： ３４５－３５７ （２０１１））を有するＩＬ－１７サイトカインファミリーのメンバーである。ＩＬ－１７ＦはＩＬ－１７Ａと約５０％の相同性を有し、それらのコーディング遺伝子は染色体６ｐ１２（Ｇａｆｆｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＮＡＴ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：５５６－６７ （２００９））の同一セグメントに位置する。ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－１７Ｆはホモ二量体、たとえばＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－１７Ｆ／ＩＬ－１７Ｆ、ならびにヘテロ二量体ＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７Ｆの形で存在しうる。ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－１７Ｆは、受容体に結合することによって生物学的効果を示す（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８１： ２７９９－８０５ （２００８））。

【0003】

ＩＬ－１７受容体（ＩＬ－１７Ｒ）ファミリーは５つのメンバー、すなわちＩＬ－１７ＲＡ、ＩＬ－１７ＲＢ、ＩＬ－１７ＲＣ、ＩＬ－１７ＲＤ、およびＩＬ－１７ＲＥからなる。ＩＬ－１７受容体ファミリーのメンバーは、様々な受容体複合体を形成することができる。中でもＩＬ－１７ＲＡは、このファミリーでこれまでに見出された最大の分子であり、少なくとも４つのリガンドのシグナルを伝達する共通サブユニットであり、主要な生物学的効果を示す（Ｇａｆｆｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＮＡＴ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９： ５５６－６７ （２００９））。ＩＬ－１７ＲＡおよびＩＬ－１７ＲＣ複合体は、ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－１７Ｆに対する細胞応答を媒介する（Ｔｏｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７： ３６－９ （２００６））。

【0004】

自己免疫炎症反応において、ＩＬ－１７ＡはＩＬ－１７Ｆよりもより重要であり、主な理由は、ＩＬ１７ＲＡはＩＬ－１７Ａに対して、ＩＬ－１７Ｆに対する親和性と比較して１００倍大きな親和性を有すること（Ｅｌｙ ｅｔ ａｌ．， ＮＡＴ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０ １２４５－５１ （２００９））、細胞のＩＬ－１７Ａに対する応答は、細胞のＩＬ－１７Ｆに対する応答と比較して１０倍強いこと（Ｄｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３０： ９－１１ （２００９））である。抗ＩＬ－１７Ａ抗体または抗ＩＬ－１７受容体抗体は、ＩＬ－１７Ａのその受容体に対する結合を遮断し、それによってＩＬ－１７Ａの生物活性を遮断するために使用することができる。

【0005】

ＩＬ－１７Ａはいくつかの自己免疫疾患（たとえば、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス等）において重要な役割を果たす。抗ＩＬ－１７Ａモノクローナル抗体セクキヌマブは、中等症から重症の尋常性乾癬、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎の治療薬として、食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって承認されている。

【0006】

乾癬（ｐｓｏｒａとしても知られている）は、慢性自己免疫性皮膚疾患である。その皮膚の組織学的特徴は、表皮ケラチノサイトの過剰増殖、血管新生、ならびに樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＴ細胞浸潤である（Ｎｅｓｔｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ３６１： ４９６－５０９ （２００９））。乾癬は、様々な症状を有し、中でも尋常性乾癬は最も一般的なタイプであり、乾癬に罹患しているすべての患者の９０％を超える割合を占める。乾癬性関節炎（ＰｓＡ）は特殊なタイプの乾癬であり、乾癬発疹（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ ｒａｓｈ）ならびに関節および周りの軟組織における疼痛、腫脹、圧痛、こわばり感、およびジスキネジアを引き起こす。一部の患者は、長期の経過、容易な再発、および後期の関節硬直（ｊｏｉｎｔ ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ）を伴う仙腸骨炎および（または）脊椎炎に罹患しており、障害につながる可能性がある。乾癬の存在は乾癬性関節炎と他の炎症性関節疾患の重要な差異であり、皮膚病変の重症度は関節の炎症の程度とは直接関係していない（Ｔａｎ Ｚｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２０：３５４－３５７（２０１６））。ＩＬ－１７Ａの発現は乾癬の病原性皮膚組織（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ）で有意に増加しており、この増加は乾癬の疾患活動性と密接に関連している（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒｉｔ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， １６０：３１９－２４ （２００９）； Ｌｏｗｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １２８：１２０７－１１ （２００８））。乾癬患者の中で、抗ＩＬ－１７Ａモノクローナル抗体セクキヌマブは優れた有効性を示しており、乾癬患者の疾患活動性を有意に軽減し、乾癬プラークの面積を減らすことができる（Ｌａｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ３７１：３２６－３８（２０１４））；セクキヌマブはまた、関節炎の症状を有意に軽減し、乾癬性関節炎の患者の関節機能を有意に改善することができる（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｄｒｕｇｓ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， １４８２１－３３（２０１５））。セクキヌマブは、中等症から重症の尋常性乾癬および乾癬性関節炎の治療薬としてＦＤＡによって承認されている。

【0007】

関節リウマチ（ＲＡ）は主に、炎症性関節滑膜線維芽細胞の増殖、関節および軟骨の損傷、ＣＤ４⁺ヘルパーＴ細胞の浸潤、および自己抗体を産生する形質細胞を特徴とする。ＩＬ－１７Ａは、関節リウマチの炎症および骨損傷の両方を引き起こす可能性がある。ＩＬ－１７Ａは、健康なヒトや変形性関節症の患者と比較して、関節リウマチ患者のリウマチ滑膜単球で高度に発現しており（Ｓａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．， ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．” １７７：６５２－６１（２０１４））、細胞学的研究はＩＬ－１７Ａが骨吸収およびコラーゲン破壊を刺激することができることを示唆する（Ｋｉｔａｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ． ９２：３９８－４０４（２０１０））。ＩＬ－１７Ａは、軟骨、滑膜細胞、マクロファージ、および骨芽細胞を誘導して、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６等の炎症誘発性サイトカインを分泌し、生物学的効果を発揮する。これらの炎症誘発性サイトカインは、関節リウマチの突然の発症を引き起こし、ＩＬ－１７Ａ誘導ＩＬ－６を介してＴＨ１７細胞の数を維持できるため、正のフィードバックを形成し、相乗的に作用して炎症効果を増幅し、慢性炎症状態を確立する（Ｏｇｕｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２９： ６２８－３６（２００８））。ＩＬ－１７Ａを拮抗すると、関節リウマチの症状を効果的に軽減できる。コラーゲン誘発関節炎のマウスモデルでは、ＩＬ－１７Ａまたはその受容体を中和することで、関節リウマチの症状を消散できる（Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ． ２０１１ Ｍａｙ；４４（３）：２４３－５２）； ＩＬ－１７欠損症は、コラーゲン誘発関節炎から宿主マウスを保護することができるが（Ｎａｋａｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １７１：６１７３－７（２００３））、ＩＬ－１７Ａの過剰発現はそのような状態を悪化させる可能性がある（Ｌｕｂｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆｌａｍｍ Ｒｅｓ ５１：１０２－４（２００２））。

【0008】

強直性脊椎炎（ＡＳ）は慢性自己免疫疾患である。ＡＳの初期の病理学的特徴は、仙腸関節、腱、および靭帯の骨付着点での急性または慢性の炎症であり、後の段階で椎間板炎および椎間関節炎に発展する可能性がある；および、ＡＳのすべての患者で骨密度が低下する現象がある。研究によると、末梢血でＩＬ－１７Ａを分泌するＴｈ１７細胞の数と、ＡＳ患者のＩＬ－１７Ａの濃度の両方が、健康なヒトよりも有意に高いことが示されている（Ｇｒａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． ６８：６７９－８９．（２０１６））。ＩＬ－１７Ａは、マクロファージ、樹状細胞、内皮細胞、線維芽細胞、軟骨細胞、および骨芽細胞等の様々な細胞を活性化することができ、これらは多数の炎症性破壊因子を産生する可能性がある（Ｏｇｕｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２９：６２８－３６（２００８））。骨組織では、ＩＬ－１７Ａは、骨芽細胞に核因子－κＢリガンド（ＲＡＮＫＬ）の受容体活性化因子を発現させ、破骨細胞を活性化し、骨吸収を誘発し、累積的に骨量減少を悪化させ、直接的または間接的に骨破壊を引き起こす（Ｇａｆｆｅｎ， Ｃｕｒｒ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｒｅｐ １１：３６５－３７０（２００９））。ＡＳ患者の中で、抗ＩＬ－１７Ａモノクローナル抗体セクキヌマブは優れた有効性を示しており、強直性脊椎炎の症状および徴候を有意に軽減することができる（Ｇａｆｆｅｎ， Ｃｕｒｒ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｒｅｐ １１：３６５－３７０（２００９））。これらの結果に基づいて、セクキヌマブは強直性脊椎炎の治療薬としてＦＤＡによって承認されている。

【0009】

全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、複数のシステムに影響を与える自己免疫疾患である。具体的には、自己抗原に対する抗体が患者の体に現れ、様々な組織や臓器を直接的または間接的に攻撃する。最も一般的に影響を受ける領域は、皮膚、関節、および腎臓を含む。研究は、ＩＬ－１７ＡはＳＬＥにおいて役割を果たすことが示している。ＳＬＥ患者の末梢血でＩＬ－１７Ａを産生する細胞の比率が増加し、患者の血清中のＩＬ－１７Ａのレベルが異常に高くなっている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ３０：２２１－５ （２０１０））。腎障害を伴うＳＬＥ患者の末梢血単核細胞は、ＩＬ－１７とともに培養すると、より多くの総ＩｇＧ、抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧ、およびＩＬ－６を産生する可能性があり、ＩＬ－１７がＢ細胞の活性化に関与できることを示している（Ｄｏｎｇ Ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ （Ｅｎｇｌ）， １１６：５４３－８（２００３））。ＩＬ－１７ＡがＢＡＦＦ（Ｂ細胞活性化因子）と協働してＢ細胞をアポトーシスから保護し、それによって自己抗体を産生する細胞数を増やすことができることも最近見出された（Ｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２９：３１１－２１（２０１０））

【発明の概要】

【0010】

徹底的な研究と創造的な努力の後、本発明者らは、哺乳動物細胞発現システムを使用して、マウスを免疫するための抗原として組換えＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）を発現させ、マウス脾臓細胞と骨髄腫細胞の融合によって多数のハイブリドーマ細胞サンプルを得た。本発明者らは、多数のサンプルをスクリーニングすることにより、以下の２つのハイブリドーマ細胞株を別々に入手した：
２０１７年９月１２日に受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６（ＩＬ－１７Ａ－１３Ｅ９）；および
２０１７年９月１２日に受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７（ＩＬ－１７Ａ－２Ｇ２）。

【0011】

本発明者らは、驚くべきことに、以下を見出した：
ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する特異的モノクローナル抗体（１３Ｅ９と命名）を分泌および産生することができ、該モノクローナル抗体はＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を非常に効果的に遮断することができること；
ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する特異的モノクローナル抗体（２Ｇ２と命名）を分泌および産生することができ、該モノクローナル抗体はＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を非常に効果的に遮断することができること；
さらに、本発明者らは、抗ＩＬ－１７Ａヒト化抗体（それぞれ、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２；および２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３と命名）を創造的に調製し、これらはすべてヒトＩＬ－１７Ａに効果的に結合し、ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を遮断し、およびＩＬ－１７Ａ受容体の下流シグナル伝達経路の活性化を阻害することができること；
本発明の抗体は、自己免疫疾患、たとえば乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスの予防および／または治療のための薬剤を作り出す可能性がある。

【0012】

したがって、以下の発明が提供される：
本発明の一つの態様は、
モノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）は、それぞれ配列番号：３１～３３に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号：３７～３９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および
モノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）は、それぞれ配列番号：３４～３６に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３、または、それぞれ配列番号：４０～４２に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む、
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関する。

【0013】

軽鎖および重鎖の可変領域が抗原の結合を決定する；各鎖の可変領域は、３つの超可変領域、すなわち相補性決定領域（ＣＤＲ）（重鎖（Ｈ）のＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、軽鎖（Ｌ）のＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によって定義されている、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９１）， Ｖｏｌｕｍｅｓ １－３， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２， Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄを参照のこと）を含む。

【0014】

上記（１）から（２）のモノクローナル抗体のＣＤＲ領域のアミノ酸配列は、当業者に周知の技術的手段、たとえばＶＢＡＳＥ２データベースによって分析される：
本発明の抗体１３Ｅ９、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２は、同一のＣＤＲを有する：
重鎖可変領域の３つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列は次の通りである：
ＨＣＤＲ１： ＳＹＳＦＴＳＤＹＡ （配列番号：３１）、
ＨＣＤＲ２： ＩＴＹＳＧＶＴ （配列番号：３２）、
ＨＣＤＲ３： ＡＲＡＤＹＤＳＹＹＴＭＤＹ （配列番号：３３）；および
軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列は次の通りである：
ＬＣＤＲ１： ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ （配列番号：３４）、
ＬＣＤＲ２： ＫＶＳ （配列番号：３５）、
ＬＣＤＲ３： ＳＱＳＴＨＦＷＴ （配列番号：３６）。

【0015】

本発明の抗体２Ｇ２、２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３は、同一のＣＤＲを有する：
重鎖可変領域の３つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列は次の通りである：
ＨＣＤＲ１： ＳＥＶＦＰＩＡＤ （配列番号：３７）、
ＨＣＤＲ２： ＩＬＰＳＦＧＲＴ （配列番号：３８）、
ＨＣＤＲ３： ＡＲＧＮＹＧＦＡＹ （配列番号：３９）；および
軽鎖可変領域の３つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列は次の通りである：
ＬＣＤＲ１： ＱＳＬＬＮＳＤＧＫＴＹ （配列番号：４０）、
ＬＣＤＲ２： ＬＶＳ （配列番号：４１）、
ＬＣＤＲ３： ＷＱＧＳＨＦＰＱＴ （配列番号： ４２）。

【0016】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで
モノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）は、それぞれ配列番号：３１～３３に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、および
モノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）は、それぞれ配列番号：３４～３６に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む。

【0017】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで
モノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）は、それぞれ配列番号：３７～３９に記載のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３を含む、およびそれぞれ配列番号：４０～４２に記載のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３を含む。

【0018】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで
重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：２０、配列番号：２４、および配列番号２８から選択される、および
軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：４、配列番号：８、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：２２、配列番号：２６、および配列番号：３０から選択される。

【0019】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、
重鎖可変領域のアミノ酸配列は、
配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、および配列番号：１４から選択される、および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：４、配列番号：８、および配列番号：１２から選択される、または
重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：１６、配列番号：２０、配列番号：２４、および配列番号２８から選択される、および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：１８、配列番号：２２、配列番号：２６、および配列番号：３０から選択される。

【0020】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで
重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、以下の（１）～（８）：
（１） 配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（２） 配列番号：６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（３） 配列番号：１０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（４） 配列番号：１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（５） 配列番号：１６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：１８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（６） 配列番号：２０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（７） 配列番号：２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：２６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（８） 配列番号：２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号：３０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
のいずれか一つから選択される。

【0021】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、相補性決定領域断片、単鎖抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、および二重特異性抗体から選択される。

【0022】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで該モノクローナル抗体は、約１００ ｎＭ未満、たとえば約１０ ｎＭ、５ ｎＭ、４ ｎＭ、３ ｎＭ、２．５ ｎＭ、２ ｎＭ以下のＥＣ₅₀でＩＬ－１７Ａタンパク質に結合する；好ましくはＥＣ₅₀は競合ＥＬＩＳＡによって測定される。

【0023】

本発明の一部の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで該モノクローナル抗体は、約１０^-5 Ｍ未満、たとえば約１０^-6 Ｍ、１０^-7 Ｍ、１０^-8 Ｍ、１０^-9 Ｍ、１０^-10 Ｍ以下のＫ_DでＩＬ－１７Ａタンパク質に結合する；好ましくはＫ_DはＦｏｒｔｅｂｉｏ分子相互作用装置によって測定される。

【0024】

本発明の一部の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで該モノクローナル抗体は、約１００ ｎＭ未満、たとえば約１０ ｎＭ、１ ｎＭ、０．９ ｎＭ、０．８ ｎＭ、０．７ ｎＭ、０．６ ｎＭ、０．５ ｎＭ、０．４ ｎＭ、０．３ ｎＭ、０．２ ｎＭ、０．１ ｎＭ以下のＥＣ₅₀でＩＬ－１７Ａタンパク質に結合する；具体的には、ＥＣ₅₀は間接ＥＬＩＳＡ法によって測定される。

【0025】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体は、非ＣＤＲ領域を含む、および該非ＣＤＲ領域は、マウス以外の種、たとえばヒト抗体由来である。

【0026】

本発明の一部の実施形態では、免疫グロブリンの定常領域はヒト化されている、たとえば、重鎖定常領域はＩｇγ－１鎖Ｃ領域（受託番号：Ｐ０１８５７）を使用する；および軽鎖定常領域はＩｇΚ鎖Ｃ領域（受託番号：Ｐ０１８３４）を使用する。

【0027】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ここで
モノクローナル抗体は、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６によって産生される；またはモノクローナル抗体は、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７によって産生される。

【0028】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を使用して、腫瘍または自己免疫疾患を予防および／または治療する、または自己免疫疾患を診断する；好ましくは、自己免疫疾患は、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスから選択される；好ましくは、乾癬は中等症から重症の尋常性乾癬である。

【0029】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を使用して：
ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を遮断する、
ＩＬ－１７Ａ活性またはレベルを制御（たとえば、下方制御）する、または
細胞内のＩＬ－６発現を阻害する。

【0030】

本発明の別の態様は、本発明に記載するモノクローナル抗体のいずれか一つの重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子に関する。

【0031】

本発明の一つまたは複数の実施形態では、単離された核酸分子は、以下の（１）～（８）：
（１） 配列番号：１、配列番号：３；
（２） 配列番号：５、配列番号：７；
（３） 配列番号：９、配列番号：１１；
（４） 配列番号：１３、配列番号：１１；
（５） 配列番号：１５、配列番号：１７；
（６） 配列番号：１９、配列番号：２１；
（７） 配列番号：２３、配列番号：２５；および
（８） 配列番号：２７、配列番号：２９
のいずれか一つから選択されるヌクレオチド配列を含む。

【0032】

本発明の別の態様は、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクターに関する。好ましくは、組換えベクターは、組換え原核生物発現ベクターまたは組換え真核生物発現ベクター等の組換え発現ベクターである。

【0033】

本発明の別の態様は、本発明の組換えベクターを含む宿主細胞に関する。

【0034】

本発明の別の態様は、本発明の宿主細胞を適切な条件下で培養する工程、およびモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を細胞培養物から単離する工程を含む、本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つを製造する方法に関する。

【0035】

本発明の別の態様は、
受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６；および
受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７
から選択される。

【0036】

本発明の別の態様は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片およびコンジュゲート部分を含むコンジュゲートに関し、ここでモノクローナル抗体は本発明に記載されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つであり、コンジュゲート部分は検出可能な標識である；好ましくは、該検出可能な標識は、放射性同位体、蛍光物質等の発光物質、着色物質、または酵素である。

【0037】

本発明の別の態様は、本発明に記載されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つを含む、または本発明のコンジュゲートを含むキットに関する；
好ましくは、該キットはモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を特異的に認識する第二の抗体さらに含む；任意選択で第二の抗体は検出可能な標識をさらに含む；好ましくは、検出可能な標識は、放射性同位体、蛍光物質等の発光物質、着色物質、または酵素である。

【0038】

本発明の別の態様は、ＩＬ－１７Ａの定性的または定量的な検出のためのキットの製造における本発明に記載されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つ、または本発明のコンジュゲートの使用に関する。定性的検出は、試験されるサンプル中のＩＬ－１７Ａの存在の検出を指し、定量的検出は、試験されるサンプル中のＩＬ－１７Ａの濃度または量の検出を指す。

【0039】

本発明の別の態様は、本発明に記載されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つ、または本発明のコンジュゲートを含む医薬組成物に関する；任意選択で、医薬組成物は薬学的に許容される担体、または賦形剤をさらに含む。

【0040】

本発明の別の態様は、自己免疫疾患の予防および／または治療のための薬剤の製造、または自己免疫疾患の診断のための薬剤の製造における、本発明に記載されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つ、または本発明のコンジュゲートに関する；好ましくは、自己免疫疾患は乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスから選択される；好ましくは、乾癬は中等症から重症の尋常性乾癬である。

【0041】

特に、本発明者らは、動物実験（実施例１１）から、１３Ｅ９Ｈ３Ｌ２は乾癬に罹患しているＣ５７ＢＬ／６マウスモデルの表皮の厚さの増加を効果的に阻害できることを見出した。これは、抗体医薬１３Ｅ９Ｈ３Ｌ２がＩＬ－１７Ａおよび皮下注射によって引き起こされた表皮の厚さの増加を有意に阻害できること、同じ標的に対して市販されているモノクローナル抗体薬セクキヌマブと同等の有効性を有することを示している。

【0042】

本発明の一部の実施形態では、自己免疫疾患（たとえば、中等症から重症の尋常性乾癬等の乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または全身性エリテマトーデス）はＩＬ－１７Ａの発現レベルの上昇によって引き起こされる。本明細書に記載の発現レベルの上昇は、健常者の発現レベルより高く、発症レベルに達している発現レベルを指す。

【0043】

本発明の別の実施形態は、以下の薬剤の調製における、本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つまたは本発明のコンジュゲートの使用に関する：
ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を遮断する薬剤、
ＩＬ－１７Ａ活性またはレベルを制御（たとえば、下方制御）する薬剤、または
細胞内のＩＬ－６発現を阻害する薬剤。

【0044】

本発明の別の態様は、細胞または必要とする対象に有効量の本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つまたは本発明のコンジュゲートを投与する工程を含むｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏの方法に関し、該方法は以下から選択される：
ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの結合を遮断する方法、
ＩＬ－１７Ａ活性またはレベルを制御（たとえば、下方制御）する方法、または
線維芽細胞内のＩＬ－６発現を阻害する方法。

【0045】

本発明の特定の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法は非治療的（ｎｏｎ－ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）および／または非診断的（ｎｏｎ－ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）である。

【0046】

インターロイキン６（ＩＬ－６またはＩＬ６と略される）は線維芽細胞、単核球／マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、上皮細胞、ケラチノサイト、および様々な腫瘍細胞によって産生される。インターロイキン６は免疫応答を制御する重要な因子であり、ＩＬ－６およびＩＬ－１は相乗的にＴ細胞増殖を促進し、Ｂ細胞分化を刺激し、身体の炎症応答に関与する（Ｓｃｈｏｅｎｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９６： ４１－１０１ （２００７））。本発明のｉｎ ｖｉｔｒｏ実験（実施例１０）は、抗ＩＬ－１７Ａ抗体は有意にＩＬ－６の分泌を減少させ、ＩＬ－６が媒介する免疫応答を阻害することを示す。

【0047】

本発明の別の態様は、腫瘍または自己免疫疾患を治療および／または予防する方法に関し、該方法は必要とする対象に有効量の本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つまたは本発明のコンジュゲートを投与する工程を含む；好ましくは、該自己免疫疾患は、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスから選択される；好ましくは、乾癬は中等症から重症の尋常性乾癬である。

【0048】

本発明の別の態様は、自己免疫疾患を診断するための方法に関し、該方法は、試験するサンプル（たとえば、組織サンプル、細胞サンプル、または血液サンプル）を適用する工程、または必要とする対象に有効量の本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つまたは本発明のコンジュゲートを投与する工程を含む；好ましくは、該自己免疫疾患は、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスから選択される；好ましくは、乾癬は中等症から重症の尋常性乾癬である。

【0049】

本発明の一部の実施形態では、自己免疫疾患（たとえば、中等症から重症の尋常性乾癬等の乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または全身性エリテマトーデス）はＩＬ－１７Ａの発現レベルの上昇によっておこることを考慮し、したがって診断は、本発明に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれか一つまたは本発明のコンジュゲートを使用してＩＬ－１７Ａの発現レベルの検出によって行うことができる。ＩＬ－１７Ａの発現レベルが健常者の発現レベルより高く、発症レベルに達している場合、診断は陽性結果となる；そうでなければ陰性結果となる。

【0050】

本発明では、別段の定義がない限り、本明細書で使用する科学用語および技術用語は当業者に一般に理解される意味を有する。さらに、細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、および免疫学の実験室操作は、対応する分野で広く使用される定常操作である。一方で、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義および説明を下記に提供する。

【0051】

本明細書で使用する場合、ＩＬ－１７Ａ（インターロイキン－１７Ａ）タンパク質のアミノ酸配列に言及する場合、ＩＬ－１７Ａタンパク質の全長；また、ＩＬ－１７Ａの融合タンパク質、たとえばマウスまたはヒトＩｇＧ Ｆｃタンパク質断片（ｍＦｃまたはｈＦｃ）に融合された断片を含む。しかしながら、当業者は、ＩＬ－１７Ａタンパク質のアミノ酸配列において変異（ｍｕｔａｔｉｏｎ）または変異（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）（置換、欠失、および／または付加を含むが、これらに限定されない）は自然発生しうる、またはそれ自体の生物学的機能に影響することなく人工的に導入されうることを理解するであろう。さらに、ＩＬ－１７Ａタンパク質の配列断片が記載される場合、ＩＬ－１７Ａタンパク質はまた、その天然または人口のバリアントの対応する配列断片を含む。

【0052】

ＩＬ－１７Ａの全長配列（１５５ａａ）は下記の通りであり、ここでシグナルペプチド配列（２３ａａ）に下線を付している。

【0053】

【化1】

【0054】

本明細書で使用する場合、別段の定義がない限り、ＩＬ－１７ＲはＩＬ－１７ＲＡである；その特定のタンパク質配列は、先行技術において知られている配列であり、既存文献またはＧｅｎＢａｎｋにおいて開示されている配列を参照することができる。たとえば、ＩＬ－１７ＲＡ（ＣＤ２１７， ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ： ＮＰ＿０５５１５４．３）である。

【0055】

本明細書で使用する場合、用語ＥＣ₅₀は、最大効果の５０％の濃度、すなわち最大効果の５０％の効果を引き起こす濃度を指す。

【0056】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、一般に二組のポリペプチド鎖（一つの「軽」（Ｌ）鎖および一つの「重」（Ｈ）鎖の各ペア）からなる免疫グロブリン分子を指す。一般的な意味で、重鎖は抗体内のより大きい分子量を有するポリペプチド鎖と解することができる、および軽鎖は抗体内のより小さい分子量を有するポリペプチド鎖を指す。軽さ派Κおよびλ軽鎖として分類される。重鎖は一般にμ、δ、γ、α、またはεとして分類され、抗体のアイソタイプはＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとしてそれぞれ定義される。軽鎖および重鎖において、可変領域および定常領域は約１２個またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接続されており、重鎖はまた約３個またはそれ以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各重鎖は重鎖可変領域（Ｖ_H）および重鎖定常領域（Ｃ_H）からなる。重鎖定常領域は３つのドメイン（Ｃ_H１、Ｃ_H２、およびＣ_H３）からなる。各軽鎖は軽鎖可変領域（Ｖ_L）および軽鎖定常領域（Ｃ_L）からなる。軽鎖定常領域は１つのドメインＣ_Lである。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（たとえば、エフェクター細胞）の典型的な補体系の第一の成分（Ｃ１ｑ）に対する結合を含む、宿主組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介する。Ｖ_HおよびＶ_L領域は、高可変領域（ｈｉｇｈｌｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）（相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる）にさらに細分することができ、およびそれらの間にフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存領域が分布している。各Ｖ_HおよびＶ_Lは、アミノ末端からジカルボキシル末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。各重鎖／軽鎖ペアの可変領域（Ｖ_HおよびＶ_L）はそれぞれ抗体結合部位を形成する。各領域またはドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． （１９８７ ａｎｄ １９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７； Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に従う。特に、重鎖はまた、３つを超える、たとえば６、９、１２個のＣＤＲを含んでもよい。たとえば、本発明の二重特異性抗体において、重鎖は別の抗体に接続したＩｇＧ抗体の重鎖のＣ末端を有するＳｃＦｖであってもよい。そしてこの場合、重鎖は９個のＣＤＲを含む。用語「抗体」は抗体産生のための特定の方法によって制限されない。たとえば、抗体は、具体的には、組換え抗体、モノクローナル抗体、またはポリクローナル抗体を含む。抗体は異なるアイソタイプ、たとえば抗体ＩｇＧ（たとえば、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭであってもよい。

【0057】

本明細書で使用する場合、用語「抗体結合断片」は全長抗体が結合するのと同じ抗原に特異的に結合する、および／または抗原への特異的結合について全長抗体と競合する能力を維持する、全長抗体の断片を含むポリペプチドを指し、「抗原結合部分」としても知られている。一般に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれるＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈ． ７ （Ｐａｕｌ， Ｗ．， ｅｄ．， ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ． （１９８９）を参照されたい。抗体の抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術またはインタクトな抗体の酵素的切断または化学的切断によって生成することができる。場合によっては、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体断片（たとえば、ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重抗体、およびポリペプチドに特異的な抗原結合能力を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部を含むそのようなポリペプチドを含む。

【0058】

本明細書で使用する場合、用語「Ｆｄ断片」は、Ｖ_HおよびＣ_H１ドメインからなる抗体断片を指す；用語「Ｆｖ断片」は、抗体の一本鎖（ｓｉｎｇｌｅ ａｒｍ）のＶ_LおよびＶ_Hドメインからなる抗体断片を指す；用語「ｄＡｂ断片」は、ＶＨドメイン（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６ （１９８９））からなる抗体断片を指す；用語「Ｆａｂ断片」は、Ｖ_L、Ｖ_H、Ｃ_L、およびＣ_H１ドメインからなる抗体断片を指す；および用語「Ｆ（ａｂ’）₂断片」は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む抗体断片を指す。

【0059】

場合によっては、抗体の抗原結合断片は一本鎖抗体（たとえば、ｓｃＦｖ）であり、ＶＬおよびＶＨドメインがペアになってリンカーを介した一価分子を形成し、単一ポリペプチド鎖を精製することを可能にする（たとえば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照のこと）。そのようなｓｃＦｖ分子は一般構造：

【0060】

【化2】

【0061】

を有する。適切な穿孔技術リンカーは繰り返しＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアントからなる。たとえば、アミノ酸配列（ＧＧＧＳ）₄を有するリンカーを使用することができるが、そのバリアントも使用することができる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９３）， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０： ６４４４－６４４８）。本発明で使用することができる他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５）， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８：７２５－７３１， Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ． （２００１）， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３１：９４－１０６， Ｈｕ ｅｔ ａｌ． （１９９６）， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６：３０５５－３０６１， Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ． （１９９９）， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２９３：４１－５６、およびＲｏｏｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （２００１）， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．によって記載されている。

【0062】

場合によっては、抗体の抗原結合断片は二重特異性抗体、つまり二価の抗体であり、Ｖ_HおよびＶ_Lドメインが単一ポリペプチド鎖に発現されている。しかしながら、使用されるリンカーが短すぎて、同一の鎖上の２つのドメインのペアリングができないため、ドメインは他の鎖上の相補的ドメインとペアリングされ、２つの抗原結合部位が生成される（たとえば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）、およびＰｏｌｊａｋ ＲＪ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３（１９９４）を参照のこと。）。

【0063】

抗体の抗原結合断片（たとえば、上記の抗体断片）は、所与の抗体から、当業者に知られている従来技術（たとえば、組換えＤＮＡ技術または酵素的切断または化学的切断）によって得ることができ、抗体の抗原結合断片はインタクトな抗体の場合と同じ方法で特異性についてスクリーニングされる。

【0064】

本明細書で使用する場合、文脈で明確に定義されていない限り、用語「抗体」に言及する場合、インタクトな抗体だけでなく、抗体の抗原結合断片も含む。

【0065】

本明細書で使用する場合、用語「ｍＡｂ」および「モノクローナル抗体」は、抗体、または高度に相同的な抗体の群、すなわち偶発的に起こりうる自然変異を除く同一の抗体分子の群に由来する抗体または抗体の断片を指す。モノクローナル抗体は、抗原上の単一エピトープに対する高い特異性を有する。ポリクローナル抗体は、モノクローナル抗体と比較して、一般に、抗原上の異なるエピトープを認識する少なくとも二つ以上の異なる抗体を含む。モノクローナル抗体は、一般にＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ． （Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５， １９７５）によって初めて報告されたハイブリドーマ技術によって得ることができるが、組換えＤＮＡ技術によっても得ることができる（たとえば、米国薬局方４，８１６，５６７）。

【0066】

本明細書で使用する場合、用語「キメラ抗体」は、軽鎖または／および重鎖の一部が抗体に由来する抗体（特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属していてもよい）を指す。およびおよび軽鎖または／および重鎖の他の部分は、別の抗体に由来する（これは、同じまたは異なる種に由来するか、または同じまたは異なる抗体クラスまたはサブクラスに属していてもよい）。しかし、いずれの場合も、それは標的抗原への結合活性を保持している（米国薬局方４，８１６，５６７からＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．； Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８１：６８５１ ６８５５（１９８４））

【0067】

本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」はヒト免疫グロブリン（受容体抗体）のＣＤＲ領域の全部または一部を非ヒト抗体（ドナー抗体）のＣＤＲ領域で置換して得られる抗体または抗体断片を指し、ここでドナー抗体は、予想される特異性、親和性、または反応性を有する非ヒト（たとえば、マウス、ラット、またはウサギ）抗体であってもよい。さらに、受容体抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）中の一部のアミノ酸残基もまた、対応する非ヒト抗体のアミノ酸残基または他の抗体のアミノ酸残基で置換することもでき、抗体の性能をさらに改善または最適化することもできる。ヒト化抗体に関するより詳細については、たとえばＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２１：５２２ ５２５（１９８６）； Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２：３２３ ３２９（１９８８）； Ｐｒｅｓｔａ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐ Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， ２：５９３ ５９６（１９９２）；およびＣｌａｒｋ， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ ２１： ３９７ ４０２（２０００）を参照されたい。本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。「エピトープ」は当技術分野で「抗原決定基」とも呼ばれる。エピトープまたは抗原決定基は一般にアミノ酸、炭水化物、または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面基からなり、通常、固有の三次元構造特性および固有の電荷特性を有する。たとえば、エピトープは一般に少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の連続した、または非連続のアミノ酸を「線形」または「立体配座」でありうる固有の空間立体配座中に含む。たとえば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ６６， Ｇ．Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ， Ｅｄ． （１９９６））を参照されたい。直線状エピトープでは、タンパク質と相互作用する分子（たとえば、抗体）との間のすべての相互作用点は、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線的に存在する。立体構造エピトープでは、相互作用点は、互いに分離されたタンパク質アミノ酸残基全体に存在する。

【0068】

本明細書で使用する場合、用語「単離された」は、自然状態から人工的な手段によって得られることを指す。特定の「隔離された」物質または成分が自然界に現れる場合、それはその自然環境の変化によるものか、自然環境から隔離されているか、またはその両方でありうる。たとえば、特定の非単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、特定の生きている動物に自然に存在し、そのような自然状態から単離された高純度の同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと呼ばれる。用語「単離された」は、その物質の活性に影響を及ぼさない人工または合成物質または他の不純物の存在を排除するものではない。

【0069】

本明細書で使用する場合、用語「大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現系」は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（株）およびベクターからなる発現系を指し、ここで大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（株）は市販の株由来であり、たとえばＧＩ６９８、ＥＲ２５６６、ＢＬ２１（ＤＥ３）、Ｂ８３４（ＤＥ３）、およびＢＬＲ（ＤＥ３）であるが、これらに限定されない。

【0070】

本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、ポリヌクレオチドを挿入することができる核酸媒体を指す。ベクターが、挿入されたポリヌクレオチドによってコードされたタンパク質の発現を許容する場合、ベクターは発現ベクターと呼ばれる。ベクターは形質転換、軽質導入、またはトランスフェクションによって宿主細胞に導入して、ベクターによって運搬された遺伝子物質因子を宿主細胞において発現させることが可能である。

【0071】

ベクターは当業者に周知であり、プラスミド；ファージミド；コスミド；人工染色体、たとえば酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）；λファージまたはＭ１３ファージ等のファージ、および動物ウイルス等を含むが、これらに限定されない。ベクターとして使用できる動物ウイルスは、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（たとえば単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（たとえば、ＳＶ４０）を含むが、これらに限定されない。ベクターはプロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択配列（ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）、およびレポーター遺伝子を含むがこれらに限定されない、発現を制御する様々な配列を含んでもよい。さらに、ベクターは複製開始点をさらに含んでもよい。

【0072】

本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」はベクターを導入できる細胞を指し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはバチルス・サブティリス（ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等の原核生物、酵母細胞またはアスペルギルス等の真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ細胞またはＳｆ９等の昆虫細胞、または線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、またはヒト細胞等を含むが、これらに限定されない。

【0073】

本明細書で使用する場合、用語「Ｋ_D」は特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指し、抗体と抗原の間の結合親和性を記述するのに使用される。平衡解離定数が小さくなるほど、抗体－抗原結合は堅固になり、抗体と抗原の間の親和性が高くなる。一般に、抗体は抗原に約１０^-5 Ｍ未満、たとえば約１０^-6 Ｍ、１０^-7 Ｍ、１０^-8 Ｍ、１０^-9 Ｍ、１０^-10 Ｍ以下の解離平衡定数（Ｋ_D）で結合し、解離平衡定数は、たとえば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ分子相互作用装置によって測定される。

【0074】

本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」および「ｍＡｂ」は同一の意味を有し、互換的に使用することができる；用語「ポリクローナル抗体」および「ＰｃＡｂ」は同一の意味を有し、互換的に使用することができる；用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は同一の意味を有し、互換的に使用することができる。および本発明において、アミノ酸はほとんどの場合、当分野で知られている一文字および三文字の略号で表される。たとえば、アラニンはＡまたはＡｌａで表すことができる。

【0075】

本明細書で使用する場合、用語「ハイブリドーマ」および「ハイブリドーマ細胞株」は互換的に使用することができ、用語「ハイブリドーマ」および「ハイブリドーマ細胞株」を指す場合、それらはまたハイブリドーマのサブクローンおよび子孫細胞を含む。たとえば、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６またはＬＴ００７を指す場合、それらはまたハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６またはＬＴ００７のサブクローンおよび子孫細胞も指す。

【0076】

本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される担体および／または賦形剤」は、薬理学的および／または生理学的に対象および活性成分に適合性である担体および／または賦形剤を指し、当技術分野で周知であり（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ． Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ， １９ｔｈ ｅｄ． Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９５を参照のこと）、ｐＨ調節剤、界面活性剤、アジュバント、およびイオン強度強化剤（ｉｏｎｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｒ）を含むが、これらに限定されない。たとえば、ｐＨ調節剤は、リン酸バッファーを含むがこれに限定されない；界面活性剤はカチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、または非イオン界面活性剤、たとえばＴｗｅｅｎ－８０を含むが、これに限定されない；およびイオン強度強化剤は塩化ナトリウムを含むが、これに限定されない。

【0077】

本明細書で使用する場合、用語「アジュバント」は非特異的免疫強化剤（ｉｍｍｕｎｅ ｅｎｈａｎｃｅｒ）を指し、これは抗原に対する身体の免疫応答を増強するか、または抗原と一緒に体内に送達されるか、もしくはあらかじめ体内に送達されるときに、免疫応答のタイプを変更することができる。アルミニウムアジュバント（たとえば、水酸化アルミニウム）、フロイントアジュバント（たとえば、完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバント）、コリネバクテリウム・パルバム、リポ多糖、サイトカイン等を含むがこれらに限定されない、様々なアジュバントが存在する。フロイントアジュバントが最も一般的に動物実験で使用される。水酸化アルミニウムアジュバントは、臨床試験でより多く使用されている。

【0078】

本明細書で使用する場合、用語「有効量」は所望の効果を得る、または少なくとも部分的に得るために十分な量を指す。たとえば、疾患（たとえば、ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７Ａ受容体への結合、または過剰なＩＬ－１７Ａ活性に関連する疾患、たとえば自己免疫疾患）を予防するための有効量は、疾患（たとえば、ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７Ａ受容体への結合、または過剰なＩＬ－１７Ａ活性に関連する疾患、たとえば自己免疫疾患）の発症を予防、停止、または遅延させるために十分な量である；治療的有効量は、既に疾患に罹患している患者の疾患およびその合併症を治癒させる、または少なくとも部分的に停止するために十分な量である。そのような有効量を決定することは、当業者の能力の範囲内である。たとえば、治療的使用の有効量は、治療される疾患の重症度、患者自身の免疫系の全体的な状態、年齢、体重、および性別等の患者の全身状態、薬物投与の方法、および同時に行われる他の治療に依存する。

【0079】

本発明の有益な効果
本発明は以下の技術的効果の少なくとも一つを達成する：
（１） 本発明のモノクローナル抗体、たとえば１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３は、すべてＩＬ－１７Ａにとてもよく特異的に結合することができ、ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７Ａリガンドへの結合を効果的に遮断することができ、およびＩＬ－１７Ａ媒介性の線維芽細胞においてＩＬ－６の分泌を特異的に減少させる；
（２） 本発明のモノクローナル抗体、特に１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２は、ＩＬ－６の分泌を阻害することにおいて、同じ標的に対して市販されている薬剤セクキヌマブと同じ効果を有する；
（３） 本発明のモノクローナル抗体は、乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または全身性エリテマトーデス等の抗自己免疫疾患の治療および／または予防に適用される将来性がある。

【0080】

生物材料の保存に関する注記：
２０１７年９月１２日に武漢大学、武漢、中国、４３００７２で、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６（ＩＬ－１７Ａ－１３Ｅ９）；および
２０１７年９月１２日に武漢大学、武漢、中国、４３００７２で、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された、ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７（ＩＬ－１７Ａ－２Ｇ２）。

【図面の簡単な説明】

【0081】

【図1】マウスモノクローナル抗体１３Ｅ９のＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出結果。左から右への４つのレーンのサンプルとそれぞれのローディング量は次のとおりである： 非還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ； 還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ； マーカー、５ μＬ； ＢＳＡ、１ μｇ。

【図2】マウスモノクローナル抗体２Ｇ２のＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出結果。左から右への４つのレーンのサンプルとそれぞれのローディング量は次のとおりである： 非還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ； 還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ； マーカー、５ μＬ； ＢＳＡ、１ μｇ。

【図3】ヒト化モノクローナル抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出結果。左から右への３つのレーンのサンプルとそれぞれのローディングは次のとおりである： ＢＳＡ、１ μｇ； マーカー、５ μＬ；還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ； 非還元タンパク質電気泳動ローディングバッファー中の抗体、１ μｇ。

【図4】抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図5】抗体１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図6】抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図7】抗体セクキヌマブの速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図8】抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図9】抗体２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図10】抗体２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図11】抗体セクキヌマブの速度論的特性パラメーターの検出結果。図中の縦軸はｎｍを単位とした信号値である；横軸は秒を単位とした時間である。

【図12】間接ＥＬＩＳＡ法による抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対する抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１および１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の結合活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図13】間接ＥＬＩＳＡ法による抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対する抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の結合活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図14】競合ＥＬＩＳＡ法による結合について受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１および１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図15】競合ＥＬＩＳＡ法による結合について受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図16】間接ＥＬＩＳＡ法による抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対する抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２Ｈ３Ｌ３の結合活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図17】競合ＥＬＩＳＡ法による抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合について受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の活性の検出。市販薬のセクキヌマブを陽性対照として使用している。

【図18】混合リンパ球によるサイトカインＩＬ－６の分泌に対する抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２、ならびに２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の効果。

【図19】乾癬を伴うＣ５７ＢＬ／６マウスモデルの表皮の厚さに対する抗体医薬１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の効果。

【発明を実施するための形態】

【0082】

本発明の実施形態は、実施例を参照していかに詳細に説明する。当業者は、以下の実施例は本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではないことを理解するであろう。実施例は、当技術分野の文献に記載されている技術または条件に従って実施される（たとえば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋらによって執筆され、Ｈｕａｎｇ Ｐｅｉｔａｎｇらによって翻訳された分子クローニング実験ガイド、第３版、Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓを参照のこと）、または本明細書で特定の技術もしくは条件が指定されていない場合は、製品マニュアルに従って実施される。使用する試薬や器具は、メーカーが特定されていない限り、すべて市販の従来型製品である。

【0083】

以下の実施例において、使用したＢＡＬＢ／ＣマウスはＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒから購入した。使用したＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｇａｌａｘｙ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．から購入した。使用したＭＲＣ５細胞は、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｕｄａｎ ＩＢＳ Ｃｅｌｌ Ｃｅｎｔｅｒからのものである。使用したモノクローナル抗体セクキヌマブ（Ｃｏｓｅｎｔｙｘ（登録商標））は、ノバルティスコーポレーションから購入した。

【実施例】

【0084】

実施例１： 抗ＩＬ－１７Ａ抗体１３Ｅおよび２Ｇ２の調製
１． ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６およびＬＴ００７の調製
抗ＩＬ－１７Ａ抗体を産生するために使用した抗原ＩＬ１７Ａ（２４－１５５）－Ｈｉｓは、ヒトＩＬ－１７Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ： Ｑ１６５５２）成熟ペプチドおよびＨｉｓタグの融合タンパク質である。免疫したＢＡＬＢ／Ｃマウス（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒから購入した）由来の脾臓細胞とマウス骨髄腫細胞をハイブリドーマ細胞に融合し、樹立方法（たとえば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”， ｉｎ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， Ｅｄｓ． Ｇ．Ｃ． Ｈｏｗａｒｄ ａｎｄ Ｄ．Ｒ． Ｂｅｔｈｅｌｌ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ： ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２０００）を特定操作のために参照した。

【0085】

融合タンパク質ＩＬ１７Ａ－ＨｉｓをＴＥＶプロテアーゼで酵素消化し、カラムで精製してＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）タンパク質を得た。間接ＥＬＩＳＡスクリーニングは、ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に特異的に結合する新規の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を得るために、抗原としてＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）タンパク質をコーティングしたマイクロプレートで実施した。

【0086】

間接ＥＬＩＳＡスクリーニングによって得られたハイブリドーマ細胞を競合ＥＬＩＳＡによってスクリーニングして、ＩＬ－１７Ａへの結合について受容体ＩＬ－１７ＲＡ（ＣＤ２１７、ＮＣＢＩ ＧＥＮＥ ＩＤ：ＮＰ_０５５１５４．３）と競合するモノクローナル抗体を分泌することができるハイブリドーマ細胞株を得て、２つの安定したハイブリドーマ細胞株を限定希釈によって得た。

【0087】

ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６（ＩＬ－１７Ａ－１３Ｅ９）は、２０１５年９月１２日に武漢大学、武漢、中国、４３００７２で、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１０２で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された。ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００６によって分泌されたモノクローナル抗体を１３Ｅ９と命名した。

【0088】

ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７（ＩＬ－１７Ａ－２Ｇ２）は、２０１７年９月１２日に武漢大学、武漢、中国、４３００７２で、受託番号ＣＣＴＣＣ ＮＯ： Ｃ２０１７１６５で中国典型培養物保蔵センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託された。ハイブリドーマ細胞株ＬＴ００７によって分泌されたモノクローナル抗体を２Ｇ２と命名した。

【0089】

２． 抗ＩＬ－１７Ａ抗体１３Ｅ９の調製
上記で調製したＬＴ００６細胞株をハイブリドーマ無血清培地（１％ペニシリン－ストレプトマイシンおよび４％Ｇｌｕｔａｍａｘを含み、３７℃、５％ＣＯ₂のインキュベーターで培養）で培養し（ウェルあたり１×１０⁵細胞）、細胞培養上清を、培養７日後の生存率が約２０％になった時点で回収し、高速遠心分離、微孔膜による真空濾過、およびＨｉＴｒａｐプロテインＡ ＨＰカラムによる精製に供し、抗体１３Ｅ９を得た。精製した１３Ｅ９サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、結果を図１に示す。

【0090】

３． 抗ＩＬ－１７Ａ抗体２Ｇ２の調製
上記で調製したＬＴ００７細胞株をハイブリドーマ無血清培地（１％ペニシリン－ストレプトマイシンおよび４％Ｇｌｕｔａｍａｘを含み、３７℃、５％ＣＯ₂のインキュベーターで培養）で培養し（ウェルあたり１×１０⁵細胞）、細胞培養上清を、培養７日後の生存率が約２０％になった時点で回収し、高速遠心分離、微孔膜による真空濾過、およびＨｉＴｒａｐプロテインＡ ＨＰカラムによる精製に供し、抗体２Ｇ２を得た。精製した２Ｇ２サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、結果を図２に示す。

【0091】

実施例２： 抗体１３Ｅ９の配列解析
ＬＴ００６細胞を実施例１の工程２の方法に従って培養した。

【0092】

ｃｅｌｌ／ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ （Ｔｉａｎｇｅｎ、商品番号 ＤＰ４３０）を使用して、培養したＬＴ００６細胞からキットのマニュアルの方法に従ってｍＲＮＡを抽出した。

【0093】

ｃＤＮＡをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標） ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲのキットマニュアルに従って合成し、ＰＣＲによって増幅した。

【0094】

ＰＣＲ増幅産物を直接ＴＡクローニングし、ｐＥＡＳＹ－Ｔ１ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ （Ｔｒａｎｓｇｅｎ ＣＴ１０１）のキットマニュアルを特定操作のために参照した。

【0095】

ＴＡクローニング産物を直接シーケンシングし、シーケンシング結果は下記の通りである：
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３６０ ｂｐ）

【0096】

【化3】

【0097】

そのコードされたアミノ酸配列： （１２０ ａａ）

【0098】

【化4】

【0099】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３３ ｂｐ）

【0100】

【化5】

【0101】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１１ ａａ）

【0102】

【化6】

【0103】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0104】

実施例３： ヒト化抗ＩＬ－１７Ａ抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の設計、調製、および検出
１． 抗ＩＬ－１７Ａ抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の軽鎖および重鎖の設計
ＩＬ－１７Ａタンパク質の三次元結晶構造（ＥＭＢＯ Ｊ． （２００１） ２０ｐ： ５３３２－４１）および実施例２で得られた抗体１３Ｅ９の配列に基づいて、抗体モデルをコンピューターでシミュレートし、変異は抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の可変領域を取得するために、モデルに従って設計した（抗体定常領域配列はＮＣＢＩデータベース由来のものであり、重鎖定常領域はＩｇγ－１鎖Ｃ領域、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８５７、および軽鎖定常領域はＩｇΚ鎖Ｃ領域ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８３４である）。

【0105】

設計した可変領域配列は下記のとおりである：
（１） ヒト化モノクローナル抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３６０ ｂｐ）

【0106】

【化7】

【0107】

そのコードされたアミノ酸配列： （１２０ ａａ）

【0108】

【化8】

【0109】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0110】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３３ ｂｐ）

【0111】

【化9】

【0112】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１１ ａａ）

【0113】

【化10】

【0114】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0115】

（２） ヒト化モノクローナル抗体１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３６０ ｂｐ）

【0116】

【化11】

【0117】

そのコードされたアミノ酸配列： （１２０ ａａ）

【0118】

【化12】

【0119】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0120】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３３ ｂｐ）

【0121】

【化13】

【0122】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１１ ａａ）

【0123】

【化14】

【0124】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0125】

（３） ヒト化モノクローナル抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３６０ ｂｐ）

【0126】

【化15】

【0127】

そのコードされたアミノ酸配列： （１２０ ａａ）

【0128】

【化16】

【0129】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0130】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列は、配列番号１１に示されるように、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列と同じである。

【0131】

そのコードされたアミノ酸配列はまた、配列番号１２に示されるように、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と同じである。

【0132】

２． ヒト化抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の調製
重鎖定常領域はすべてＩｇγ－１鎖Ｃ領域（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８５７）を使用する；軽鎖定常領域はＩｇΚ鎖Ｃ領域（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８３４）を使用する。

【0133】

１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡ、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡ、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡをｐＵＣ５７ Ｓｉｍｐｌｅ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって提供される）ベクターにそれぞれクローニングし、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－１３Ｅ９Ｈ１、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－１３Ｅ９Ｌ１、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－１３Ｅ９Ｈ２、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－１３Ｅ９Ｌ２、およびｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－１３Ｅ９Ｈ３をそれぞれ得、ならびに対応する重鎖を含む断片および対応する軽鎖を含む断片をｐｃＤＮＡ３．１ベクターにそれぞれサブクローニングし、組換えプラスミドｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ１、ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ１、ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ２、ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ２、ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ３およびｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ２を得た。次に、対応する軽鎖組換えプラスミドおよび重鎖組換えプラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ１およびｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ１； ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ２およびｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ２； ｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｈ３およびｐｃＤＮＡ３．１－１３Ｅ９Ｌ２）を２９３Ｆ細胞に同時導入し、細胞培養物を回収して精製し、ヒト化抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２をそれぞれ得た。精製した１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、結果を図３に示す。

【0134】

実施例４： 抗体２Ｇ２の配列解析
ＬＴ００７細胞を実施例１の工程３の方法に従って培養した。

【0135】

細胞／細菌ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｔｉａｎｇｅｎ、商品番号ＤＰ４３０）を使用して、キットマニュアルの方法に従ってｍＲＮＡを培養したＬＴ００７細胞から抽出した。

【0136】

Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標） ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ－ＰＣＲのキットマニュアルに従ってｃＤＮＡを合成し、ＰＣＲによって増幅した。

【0137】

ＰＣＲ増幅した生成物を直接ＴＡクローニングし、ｐＥＡＳＹ－Ｔ１ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ （Ｔｒａｎｓｇｅｎ ＣＴ１０１）のキットマニュアルを特定操作のために参照した。

【0138】

ＴＡクローニングした生成物を直接シーケンシングし、シーケンシング結果は下記のとおりである：
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３５１ ｂｐ）

【0139】

【化17】

【0140】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１７ ａａ）

【0141】

【化18】

【0142】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0143】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３６ ｂｐ）

【0144】

【化19】

【0145】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１２ ａａ）

【0146】

【化20】

【0147】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0148】

実施例５： 抗ＩＬ－１７Ａ抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の設計、調製、および検出
（１） ヒト化モノクローナル抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３４８ ｂｐ）

【0149】

【化21】

【0150】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１６ ａａ）

【0151】

【化22】

【0152】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0153】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３６ ｂｐ）

【0154】

【化23】

【0155】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１２ ａａ）

【0156】

【化24】

【0157】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0158】

（２） ヒト化モノクローナル抗体２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３４８ ｂｐ）

【0159】

【化25】

【0160】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１６ ａａ）

【0161】

【化26】

【0162】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0163】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３６ ｂｐ）

【0164】

【化27】

【0165】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１２ ａａ）

【0166】

【化28】

【0167】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0168】

（３） ヒト化モノクローナル抗体２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の重鎖および軽鎖の配列
重鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３４８ ｂｐ）

【0169】

【化29】

【0170】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１６ ａａ）

【0171】

【化30】

【0172】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0173】

軽鎖可変領域のヌクレオチド配列： （３３６ ｂｐ）

【0174】

【化31】

【0175】

そのコードされたアミノ酸配列： （１１２ ａａ）

【0176】

【化32】

【0177】

下線を付した領域はＣＤＲ領域である。

【0178】

２． ヒト化抗体２Ｇ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の調製およびＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動検出
重鎖定常領域はＩｇγ－１鎖Ｃ領域（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８５７）を使用した；軽鎖定常領域はＩｇΚ鎖Ｃ領域（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ： Ｐ０１８３４）を使用した。

【0179】

２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡ、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡ、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の重鎖ｃＤＮＡおよび軽鎖ｃＤＮＡをｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって提供される）ベクターにそれぞれクローニングし、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｈ１、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｌ１；ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｈ２、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｌ２；およびｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｈ３、ｐＵＣ５７ｓｉｍｐｌｅ－２Ｇ２Ｌ３をそれぞれ得た。次に、対応する重鎖を含むヌクレオチド断片および対応する軽鎖を含むヌクレオチド断片をｐｃＤＮＡ３．１ベクターにそれぞれサブクローニングし、組換えプラスミドｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ１、ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ１、ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ２、ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ２、ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ３、およびｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ３を得た。次に、対応する軽鎖組換えプラスミドおよび重鎖組換えプラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ１およびｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ１；ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ２およびｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ２； ｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｈ３およびｐｃＤＮＡ３．１－２Ｇ２Ｌ３）を２９３Ｆ細胞に同時導入し、細胞培養物を回収して精製し、ヒト化抗体２Ｇ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３をそれぞれ得た。精製したサンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出した。

【0180】

実施例６： 抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）タンパク質に対する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の結合の速度論的パラメーターの測定
抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）タンパク質に対するヒト化抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の結合の速度論的パラメーターを、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ分子相互作用装置によって測定した。

【0181】

ＡＲ２ＧセンサーをＥＤＣ／ＮＨＳによって活性化し、抗体をアミンカップリングによって、活性化されたＡＲ２Ｇセンサーに固定し、センサーを１ Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．５）でブロックした。センサーをＰＢＳＴで３００秒間平衡化した後、センサーに固定された抗体を、抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）タンパク質（実施例１で使用した抗原と同じ）に結合した。ここで、抗原濃度が６．２５－４００ ｎＭ（二重勾配希釈）であった、および結合時間は４２０秒であり、抗原および抗体はＰＢＳＴで６００秒間解離された。

【0182】

抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２、ならびにセクキヌマブの速度論的パラメーターを表１に示し、ならびに速度論的特性パラメーターの検出結果を図４、図５、図６、および図７にそれぞれ示す。

【0183】

【表1】

【0184】

Ｋ_Dは親和定数である；Ｋｏｎは抗原および抗体の結合率である；Ｋｄｉｓは抗原および抗体の解離速度である；Ｋ_D＝Ｋｄｉｓ／Ｋｏｎ。

【0185】

結果は、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のすべては抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に対して、よい親和性を有し、親和性は対照抗体セクキヌマブの親和性と同等である。

【0186】

実施例７：抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に対する２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の結合の速度論的パラメーターの測定
抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に対する、ヒト化抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の速度論的パラメーターを、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ分子相互作用装置によって測定した。

【0187】

ＡＲ２ＧセンサーをＥＤＣ／ＮＨＳによって活性化し、抗体をアミンカップリングによって、活性化されたＡＲ２Ｇセンサーに固定し、センサーを１ Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．５）でブロックした。センサーをＰＢＳＴで３００秒間平衡化した後、センサーに固定された抗体を、抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に結合した。ここで、抗原濃度が６．２５－４００ ｎＭ（二重勾配希釈）であった、および結合時間は４２０秒であり、抗原および抗体はＰＢＳＴで６００秒間解離された。

【0188】

抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３、ならびにセクキヌマブの速度論的パラメーターを表２に示し、ならびに速度論的特性パラメーターの検出結果を図８、図９、図１０、および図１１にそれぞれ示す。

【0189】

【表2】

【0190】

Ｋ_Dは親和定数である；Ｋｏｎは抗原および抗体の結合率である；Ｋｄｉｓは抗原および抗体の解離速度である；Ｋ_D＝Ｋｄｉｓ／Ｋｏｎ。

【0191】

結果は、対照抗体セクキヌマブと比較して、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２は抗原ＩＬ－１７Ａ（２４－１５５）に対して高い親和性を有すること；２Ｇ Ｈ１Ｌ１および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の親和性は対照抗体セクキヌマブの親和性と同様であることを示す。

【0192】

実施例８： ＥＬＩＳＡ法による、抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の抗原に対する結合能の検出
１． 抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の抗原ＩＬ－１７Ａ－Ｈｉｓに対する結合能を非直接ＥＬＩＳＡで検出し、同一の標的に対する市販の薬剤セクキヌマブと比較した。

【0193】

ＩＬ－１７Ａ－Ｈｉｓは公表された配列および当技術分野の従来的技術手段を参照すること、または以下の工程を参照することで調製することができる：
ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓの調製： ヒトＩＬ－１７Ａの全長タンパク質配列をＮＣＢＩタンパク質データベースで見出し、Ｈｉｓ＊６精製タグと融合させた。南京のＧｅｎｓｃｒｉｐｔに融合タンパク質をコードする核酸の合成を委託し、Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）で紹介された標準技術を参照し、ＰＣＲ、酵素消化、ゲル回収、ライゲーション形質転換、コロニーＰＣＲまたは酵素消化同定、等の標準的な分子クローニング技術を使用した。標的遺伝子を哺乳動物細胞発現ベクターにサブクローニングし、標的遺伝子を含む組換え発現ベクターをさらに配列決定して分析した。配列が正しいことを確認した後、中および大量のエンドトキシンフリーの発現プラスミドを調製し、タンパク質発現のためにＨＥＫ２９３細胞を一過性にトランスフェクトした。７日間の培養後、細胞培養液を収集し、Ｎｉセファロースカラム（ＧＥ）を使用してアフィニティー精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＳＥＣ－ＨＰＬＣ標準分析技術を使用して得られたタンパク質サンプルの品質を標準に達するように測定した。
ＥＬＩＳＡ： ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓをマイクロプレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした；ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで３７℃で２時間ブロッキングした後、抗体をそれぞれ添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；およびヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ， １０９－０３５－０８８）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；および次にＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，３０８１７７）を使用して５分間呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を検出した。得られた実験データをＳｏｆｔＭａｘＰｒｏ ６．２．１ソフトウェアで分析・処理し、横軸に抗体濃度、縦軸に吸光度値を用いて４－パラメーター近似曲線をプロットした。

【0194】

実験結果を以下の図１２、図１３、表３および表４に示す。

【0195】

【表3】

【0196】

【表4】

【0197】

実験結果は、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のすべては抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに効果的に結合することができること、およびそれらの結合効率は用量依存であることを示す。同一の実験条件下では、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１の結合ＥＣ₅₀は０．０４４ ｎＭである、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の結合ＥＣ₅₀は０．０４８ ｎＭである、および同一の標的に対するセクキヌマブの結合ＥＣ₅₀は０．０８２ ｎＭ（図１２、表３）である；同一の実験条件下では、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の結合ＥＣ₅₀は０．０４３ ｎＭである、および同一の標的に対するセクキヌマブの結合ＥＣ₅₀は０．０７８ ｎＭである（図１３、表４）。

【0198】

上記の実験結果は、同一の実験条件下では、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のＥＣ₅₀値はすべて、同一標的に対する陽性対照薬剤セクキヌマブより小さく、これはＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の結合活性は、同一標的に対する市販の対照薬剤セクキヌマブの結合活性よりもよいことを示す。

【0199】

２． 抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の、抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対するＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）の結合を遮断する活性を競合ＥＬＩＳＡで検出した。

【0200】

ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）は公表された配列および当技術分野の従来的技術手段を参照すること、または以下の工程を参照することで調製することができる：
ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）の調製： ヒトＩＬ－１７ＲＡの細胞外ドメイン配列をＮＣＢＩタンパク質データベースで見出し、Ｈｉｓ＊６精製タグと融合させた。南京のＧｅｎｓｃｒｉｐｔに融合タンパク質をコードする核酸の合成を委託し、Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）で紹介された標準技術を参照し、ＰＣＲ、酵素消化、ゲル回収、ライゲーション形質転換、コロニーＰＣＲまたは酵素消化同定、等の標準的な分子クローニング技術を使用した。標的遺伝子を哺乳動物細胞発現ベクターにサブクローニングし、標的遺伝子を含む組換え発現ベクターをさらに配列決定して分析した。配列が正しいことを確認した後、中および大量のエンドトキシンフリーの発現プラスミドを調製し、タンパク質発現のためにＨＥＫ２９３細胞を一過性にトランスフェクトした。７日間の培養後、細胞培養液を収集し、Ｎｉセファロースカラム（ＧＥ）を使用してアフィニティー精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＳＥＣ－ＨＰＬＣ標準分析技術を使用して得られたタンパク質サンプルの品質を標準に達するように測定した。品質決定が完了した後、ビオチン化ヒトＩＬ－１７ＲＡ－Ｈｉｓタンパク質サンプルを、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃの市販のキットＥＺ－Ｌｉｎｋ（登録商標）Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎで標識および取得し、特定の調製方法をキットマニュアルに従って実施した。
ＥＬＩＳＡ： ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓをマイクロプレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした；ＰＢＳＴ中の１％ＢＳＡで３７℃で２時間ブロッキングした後、抗体をそれぞれ添加し、抗原と抗体を室温で１０分間反応させた；次に、受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）を添加し、これを抗体と１：１の体積比で十分に混合し、３７℃で３０分間インキュベートした；およびＳＡ－ＨＲＰ（ＫＰＬ，１４－３０－００）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；および次に次にＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，３０８１７７）を使用して５分間呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を検出した。得られた実験データをＳｏｆｔＭａｘＰｒｏ ６．２．１ソフトウェアで分析・処理し、横軸に抗体濃度、縦軸に吸光度値を用いて４－パラメーター近似曲線をプロットした。実験結果を以下の図１４、図１５、および表５、および表６に示す。

【0201】

【表5】

【0202】

【表6】

【0203】

実験結果は、抗体１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２はすべて受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）の抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合を効果的に遮断でき、遮断効率は用量依存的であることを示している。同一の実験条件下で、ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１のＥＣ₅₀は１．４３７ ｎＭであり、ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２のＥＣ₅₀は１．２８１ ｎＭであり、およびＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する同一の標的に対する陽性対照薬剤セクキヌマブのＥＣ₅₀は１．８０７ ｎＭ（表５、図１４）である；ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のＥＣ₅₀は０．８０５ ｎＭである、およびＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する同一の標的に対する市販薬セクキヌマブのＥＣ₅₀は１．５８０ ｎＭである（表６、図１５）。

【0204】

上記の実験結果は、同一の実験条件下では、ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２のＥＣ₅₀はすべて、同一の標的に対する市販の対照薬剤セクキヌマブのＥＣ₅₀より小さく、これはＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の活性は同一の標的に対する市販の対照薬剤セクキヌマブの活性より良いことを示唆している。

【0205】

実施例９： ＥＬＩＳＡ法を用いた、抗体に対する抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の結合活性の検出
１． 抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対する抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の結合活性
実験工程： ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓをマイクロプレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした；ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで３７℃で２時間ブロッキングした後、抗体をそれぞれ添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；およびヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ， １０９－０３５－０８８）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；および次にＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，３０８１７７）を使用して５分間呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を検出した。得られた実験データをＳｏｆｔＭａｘＰｒｏ ６．２．１ソフトウェアで分析・処理し、横軸に抗体濃度、縦軸に吸光度値を用いて４－パラメーター近似曲線をプロットした。

【0206】

実験結果を以下の図１６および表７に示す。ここで、２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１の結合ＥＣ₅₀は０．１７７ ｎＭであり、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の結合ＥＣ₅₀は０．３７２ ｎＭであり、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の結合ＥＣ₅₀は０．４２１ ｎＭである。

【0207】

【表7】

【0208】

実験結果は、抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３はすべて抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓに対して効果的に結合することができ、それらの結合効率は用量依存的であることを示している。

【0209】

２． ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合についてＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）と競合する抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の活性は競合ＥＬＩＳＡによって検出された。実験工程： ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓをマイクロプレートに添加し、４℃で一晩インキュベートした；ＰＢＳT中の１％ＢＳＡで３７℃で２時間ブロッキングした後、抗体をそれぞれ添加し、抗原と抗体を室温で１０分間反応させた；次に、受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）を添加し、これを抗体と１：１の体積比で十分に混合し、３７℃で３０分間インキュベートした；およびＳＡ－ＨＲＰ（ＫＰＬ，１４－３０－００）を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした；および次に次にＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，３０８１７７）を使用して５分間呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４５０ ｎｍの吸光度を検出した。得られた実験データをＳｏｆｔＭａｘＰｒｏ ６．２．１ソフトウェアで分析・処理し、横軸に抗体濃度、縦軸に吸光度値を用いて４－パラメーター近似曲線をプロットした。

【0210】

実験結果を以下の図１７、および表８に示す。ここで、２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１の結合ＥＣ₅₀は２．２６４ ｎＭであり、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の結合ＥＣ₅₀は５．４０８ ｎＭであり、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の結合ＥＣ₅₀は５．９１１ ｎＭである（図１７、表８）。

【0211】

【表8】

【0212】

実験結果は、抗体２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３はすべて、抗原ＩＬ１７Ａ－Ｈｉｓへの結合について受容体ＩＬ１７ＲＡ－Ｈｉｓ（ビオチン）の結合を効果的に遮断することができ、遮断効率は用量依存的であることを示している。

【0213】

実施例１０： 混合ヒト胚性線維芽細胞反応：サイトカインＩＬ－６の分泌
ＭＲＣ５（中国科学院の細胞センターから購入）細胞を５０００細胞／ウェルの９６ウェルプレートにプレーティングし、一晩培養した。３７℃で２０分間インキュベートしたＩＬ－１７および抗体（対照としてｈＩｇＧ）の混合物をＭＲＣ５細胞に添加し、４８時間培養した。４８時間の培養後、細胞上清を回収し、分泌されたＩＬ－６の量をＥＬＩＳＡキット（Ｄａｋｅｗｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入）によって検出した。

【0214】

ＭＲＣ５細胞は、それぞれ１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２、２Ｇ２ Ｈ１Ｌ１、２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２、または２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３（１ ｎＭ、１０ ｎＭ、１００ ｎＭ）、およびセクキヌマブ（１ ｎＭ、１０ ｎＭ、１００ ｎＭ）と混合および培養した。分泌されたＩＬ－６の検出結果を図１８に示す。

【0215】

図１８から、１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１、１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２、および２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２はすべて、ＩＬ－１７によって誘導されるＭＲＣ５細胞のＩＬ－６分泌を効果的に減少させることができることがわかる、ここで：
１００ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌の阻害に対する１３Ｅ９ Ｈ１Ｌ１の効果は、同じ用量の対照抗体セクキヌマブの効果より優れており、１０ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌の阻害効果は１００ ｎＭの濃度の対照抗体セクキヌマブの阻害効果と同等である；
１ ｎＭ、１０ ｎＭ、および１００ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌の阻害に対する１３Ｅ９ Ｈ２Ｌ２の効果はすべて、同じ用量の対照抗体セクキヌマブの効果と同等である；
１０ ｎＭ、および１００ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌に対する１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の阻害効果はすべて、同じ用量の対照抗体セクキヌマブの阻害効果より優れており、１ ｎＭの濃度での効果は対照抗体セクキヌマブの１ ｎＭの濃度での効果と同等である；
１ ｎＭおよび１００ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌の阻害に対する２Ｇ２ Ｈ２Ｌ２の効果は、対照抗体セクキヌマブの１ ｎＭおよび１００ ｎＭの濃度での効果と同等である；
１ ｎＭの濃度でのＩＬ－６の分泌の阻害に対する２Ｇ２ Ｈ３Ｌ３の効果は、同じ用量の対照抗体セクキヌマブの効果より優れている。

【0216】

上記の結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの混合ヒト胚性線維芽細胞反応において、ＩＬ－１７Ａ媒介性ＩＬ－６の分泌の遮断における本発明の抗体の生物学的活性が、同じ標的のための市販薬セクキヌマブの生物学的活性よりもよいか、または少なくとも同等であることを示している。

【0217】

実施例１１： Ｃ５７ＢＬ／６マウスの乾癬モデルの表皮の厚さに対する抗体薬１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２の効果
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを５つのグループに分け、それぞれに８匹のマウスを入れた。
（１）モデリング：
正常群のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１日目から６日目の連続６日間、２５ μＬ／マウスで滑らかな背中に通常の生理食塩水を皮内注射した；
マウスの残りの群には、１日目から４日目まで２ μｇ／２５ μＬ／マウスで組換えヒトＩＬ－１７Ａを皮内注射し、５日目から６日目まで５ μｇ／２５ μＬ／マウスで組換えヒトＩＬ－１７Ａを皮内注射した。
（２）特定の群化および投与：
正常群： 通常の生理食塩水、０ ｍｇ／ｋｇの用量で、週に３回、合計３回投与した；
モデル群： ネガティブアイソタイプコントロール、５０ ｍｇ／ｋｇの用量で、週に３回、合計３回投与した；
セクキヌマブ群： セクキヌマブ、５０ ｍｇ／ｋｇの用量で、週に３回、合計３回投与した；
１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２高用量群： ５０ ｍｇ／ｋｇの用量で、週に３回、合計３回投与した；
１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２低用量群： １０ ｍｇ／ｋｇの用量で、週に３回、合計３回投与した。

【0218】

各群に３回、すなわちモデリングの１日前、モデリング３日目、およびモデリング６日目にそれぞれ皮下投与した。

【0219】

７日目に、マウスの背中の注射部位の皮膚を固定し、病理学的切片を作成し、表皮の厚さを測定した。

【0220】

実験結果を図１９に示す。

【0221】

結果は、統計学的に、セクキヌマブ群（５０ ｍｇ／ｋｇ）、１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２高用量群（５０ ｍｇ／ｋｇ）、および１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２低用量群（１０ ｍｇ／ｋｇ）の表皮の厚さは、モデル群の表皮の厚さより優位に小さかったことを示している（Ｐ＜０．０１）。

【0222】

結果は、抗体１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２（５０ ｍｇ／ｋｇ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの乾癬モデルの表皮の厚さに対する統計学的に有意な阻害効果を示し、セクキヌマブ（５０ ｍｇ／ｋｇ）と同じ活性を有すること；表皮の厚さに対する１３Ｅ９ Ｈ３Ｌ２（１０ ｍｇ／ｋｇ）の阻害効果もまた統計学的に有意であることを示している。

【0223】

本発明の特定の実施形態が詳細に説明されてきたが、当業者は理解するであろう。開示されたすべての教示に従って、それらの詳細に様々な改変および置換を行うことができ、これらの変更はすべて、本発明の保護範囲内にある。本発明の全範囲は、添付の特許請求の範囲およびその任意の同等物によって与えられる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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