特許 7542439 二量体抗原受容体（ＤＡＲ）

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-08-22

(45)【発行日】2024-08-30

(54)【発明の名称】二量体抗原受容体（ＤＡＲ）

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240823BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240823BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240823BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240823BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240823BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240823BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240823BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240823BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240823BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240823BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240823BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240823BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240823BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K19/00

A61P35/00

A61P35/02

A61K35/17

A61K48/00

A61K39/00 H

C12N15/13 ZNA

【請求項の数】 21

(21)【出願番号】P 2020546854

(86)(22)【出願日】2019-03-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-06-24

(86)【国際出願番号】 US2019021681

(87)【国際公開番号】W WO2019173837

(87)【国際公開日】2019-09-12

【審査請求日】2022-02-22

(31)【優先権主張番号】62/640,775

(32)【優先日】2018-03-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】514291864

【氏名又は名称】ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｓｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107489

【弁理士】

【氏名又は名称】大塩 竹志

(72)【発明者】

【氏名】ジ， ヘンリー ホンジュン

(72)【発明者】

【氏名】グオ， ウェンジョン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ヤンリャン

(72)【発明者】

【氏名】カウフマン， ガナー エフ．

(72)【発明者】

【氏名】ディン， ベイ ベイ

【審査官】植原 克典

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／１６８４９３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Gene Therapy，2016年，Vol.23，p.718-726

【文献】Molecular Therapy，2017年，Vol.25, No.8，p.1946-1958

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ

Ｃ０７Ｋ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

第一および第二のポリペプチド鎖を含む抗原結合ドメインを含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物であって、
ａ）前記第一のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に５つの領域：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖可変領域を含む抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）ＣＤ３８抗体重鎖定常領域を含む抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通領域を含む膜貫通領域（ＴＭ）および（ｖ）４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を含み、ならびに
ｂ）前記第二のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に２つの領域：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および（ｉｉ）ＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物。

【請求項2】

第一および第二のポリペプチド鎖を含む抗原結合ドメインを含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物であって、
ａ）前記第一のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に５つの領域：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖可変領域を含む抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖定常領域を含む抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤ２８膜貫通領域を含む膜貫通領域（ＴＭ）、ならびに（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を含み、
ｂ）第二のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に２つの領域：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、前記抗体重鎖定常領域および前記抗体軽鎖定常領域が二量体化ドメインを形成し、前記抗体重鎖可変領域および前記抗体軽鎖可変領域がＣＤ３８タンパク質を結合する抗原結合ドメインを形成する、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）。

【請求項3】

請求項１または２に記載の二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする核酸。

【請求項4】

請求項３に記載の核酸に機能的に連結されたベクター。

【請求項5】

請求項４に記載のベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項6】

前記ベクターが発現ベクターであり、前記発現ベクターが、前記二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする前記核酸の転写および／または翻訳（発現）を指示する、請求項５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項7】

前記宿主細胞または宿主細胞の前記集団が、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球または単球を含む、請求項５または６に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項8】

被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置するのに使用するための、請求項５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を含む医薬組成物。

【請求項9】

被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置するのに使用するための、請求項６または７に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を含む医薬組成物。

【請求項10】

アミノ末端からカルボキシル末端へ順に９個の領域：（１）重鎖リーダー配列、（２）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖可変領域を含む抗体重鎖可変領域、（３）ＣＤ３８抗体重鎖定常領域を含む抗体重鎖定常領域、（４）ＣＤ２８ヒンジ領域、（５）ＣＤ２８膜貫通領域を含む膜貫通領域、（６）４－１ＢＢシグナル伝達配列およびＣＤ３ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）軽鎖リーダー配列、（９）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖可変領域および（１０）ＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む抗体軽鎖定常領域を含む前駆体ポリペプチド。

【請求項11】

（１）前記重鎖リーダー配列が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（３）前記ＣＤ３８抗体重鎖定常領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、（５）前記ＣＤ２８膜貫通領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、（６）前記４－１ＢＢシグナル伝達配列が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ３ζシグナル伝達配列が、配列番号９または２０のアミノ酸配列を含む、（７）前記Ｔ２Ａ切断配列が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、（８）前記軽鎖リーダー配列が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ならびに（１０）前記ＣＤ３８抗体軽鎖定常領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の前駆体ポリペプチド。

【請求項12】

（４）前記ＣＤ２８ヒンジ領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１０または１１に記載の前駆体ポリペプチド。

【請求項13】

配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む、請求項１１または１２に記載の前駆体ポリペプチド。

【請求項14】

請求項１１～１３のいずれか一項に記載の前駆体ポリペプチドをコードする核酸。

【請求項15】

請求項１４に記載の核酸に機能的に連結されたベクター。

【請求項16】

請求項１５に記載のベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項17】

前記ベクターが発現ベクターであり、前記発現ベクターが、前記二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする前記核酸の転写および／または翻訳（発現）を指示する、請求項１６に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項18】

前記宿主細胞または宿主細胞の前記集団が、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球または単球を含む、請求項１６または１７に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。

【請求項19】

被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置するのに使用するための、請求項１６に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を含む医薬組成物。

【請求項20】

被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置するのに使用するための、請求項１７または１８に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を含む医薬組成物。

【請求項21】

前記疾患が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される血液のがんである、請求項１９または２０に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、米国特許法第１１９条に基づき、２０１８年３月９日に出願され、“Ｄｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”と題された米国仮出願第６２／６４０，７７５号の優先権の利益を主張し、その内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本願を通じて、様々な刊行物、特許および／または特許出願が参照されている。本開示が関連する分野の水準をより完全に記載するために、これらの刊行物、特許および／または特許出願の開示は、参照により、その全体が本願中に組み込まれる。

【0003】

本開示は、標的抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体（ＤＡＲ）タンパク質構築物、該二量体抗原受容体をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび該ベクターを保有する宿主細胞を提供する。

【背景技術】

【0004】

とりわけ、がんに関連する抗原を標的とするために、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開発されてきた。第一世代ＣＡＲは、活性化刺激（シグナル１）のみを送達するシグナル伝達ドメイン（ＴＣＲζ）を含有するように操作された（Ｇｅｉｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２（１０）：５９３１－５９３９，１９９９；Ｈａｙｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（１）：１８２－１８７，２００１）（Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（５）：１９７６－１９８２，２００１；Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７（１１）：６１２３－６１３１，２００１；Ｍａｈｅｒら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（１）：７０－７５，２００２）。第一世代ＣＡＲを単独で移植されたＴ細胞は、最適に満たない活性化のため、限られた抗腫瘍有効性を示した（Ｂｅｅｃｈａｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３（６）：６３１－６４２，２０００）。第二世代ＣＡＲである免疫グロブリン－ＣＤ２８－Ｔ細胞受容体（ＩｇＣＤ２８ＴＣＲ）は、第一世代受容体中に共刺激ＣＤ２８（シグナル２）を組み込み（Ｇｅｒｓｔｍａｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（１０）：４５８４－４５９０，１９９７；Ｅｍｔａｇｅら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４（２４）：８１１２－８１２２，２００８；Ｌｏ，Ｍａら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６（１０）：２７６９－２７８０，２０１０）、ＣＡＲ－Ｔ細胞により大きな抗腫瘍能力を与えた（Ｆｉｎｎｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（６）：２７９１－２７９７，１９９８；Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（５）：１９７６－１９８２，２００１，Ｍａｈｅｒら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（１）：７０－７５，２００２）。ＴＣＲζまたはＣＤ２８のシグナルドメインを、ＦｃＲγ、４－１ＢＢおよびＯＸ４０などの類似の機能を有する分子で置き換えることによって、様々なＣＡＲバリアントが開発されてきた（Ｅｓｈｈａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ Ｓ Ａ ９０（２）：７２０－７２４，１９９３）。様々な腫瘍抗原に対するＴＣＲ ＣＡＲ－Ｔ細胞が開発されてきた（Ｍａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１１（４）：２９７－３０６，２００４；Ｍａら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ ６１（１）：１２－２５，２００４；Ｌｏら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６（１０）：２７６９－２７８０，２０１０；Ｋｏｎｇら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１８（２１）：５９４９－５９６０，２０１２；Ｍａら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ ７４（３）：２８６－２９６，２０１４；Ｋａｔｚら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１（１４）：３１４９－３１５９，２０１５；Ｊｕｎｇｈａｎｓら、２０１６ Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ，７６（１４）：１２５７－１２７０）。

【0005】

リダイレクトされた殺腫瘍活性のためにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で操作されたＴ細胞の注入による養子免疫療法は、転移性がんの処置についての潜在的に高度に特異的な様式を表す。Ｂ細胞上に発現される分子であるＣＤ１９を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｂ細胞悪性病変の処置において成功を示しており、ＦＤＡの承認を受けて、いくつかの試験は、持続的な完全奏効を含む最大７０％の応答を示した。
このため、抗体介在性細胞療法において、重鎖結合領域と軽鎖結合領域の両方を別個のポリペプチド鎖中に有する抗体を用いたＣＡＲ処置の強力な有効性を活用する必要性が本分野においてなお存在する。本開示は、本分野におけるこの必要性を充足するために行われた。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【文献】Ｇｅｉｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２（１０）：５９３１－５９３９，１９９９

【文献】Ｈａｙｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（１）：１８２－１８７，２００１

【文献】Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（５）：１９７６－１９８２，２００１

【文献】Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７（１１）：６１２３－６１３１，２００１

【文献】Ｍａｈｅｒら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（１）：７０－７５，２００２

【文献】Ｂｅｅｃｈａｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３（６）：６３１－６４２，２０００

【文献】Ｇｅｒｓｔｍａｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（１０）：４５８４－４５９０，１９９７

【文献】Ｅｍｔａｇｅら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４（２４）：８１１２－８１２２，２００８

【文献】Ｌｏ，Ｍａら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６（１０）：２７６９－２７８０，２０１０

【文献】Ｆｉｎｎｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（６）：２７９１－２７９７，１９９８

【文献】Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（５）：１９７６－１９８２，２００１

【文献】Ｍａｈｅｒら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（１）：７０－７５，２００２

【文献】Ｅｓｈｈａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ Ｓ Ａ ９０（２）：７２０－７２４，１９９３

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）前駆体ポリペプチド：（１）重鎖リーダー配列（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）軽鎖リーダー配列、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域を提供する。

【0008】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）前駆体ポリペプチド：（１）軽鎖リーダー配列（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）重鎖リーダー配列、（９）抗体重鎖可変領域、および（１０）抗体重鎖定常領域を提供する。

【0009】

一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤからなる群より選択される抗体からのヒンジ配列を必要に応じて含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、ＣＤ８αまたはＣＤ２８ヒンジ領域からのヒンジ配列を含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、ＣＰＰＣまたはＳＰＰＣアミノ酸配列を含むヒンジ領域を含む。

【0010】

一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ－１ Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２ Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳまたはＦＧＦＲ２Ｂからの膜貫通領域を含む。

【0011】

一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＮＦＲ２および／またはＣＤ２２６からの２～５個のシグナル伝達配列の任意の順序および任意の組み合わせでの細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を含む。

【0012】

一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む。

【0013】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２つまたは３つの細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、および抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は抗原結合ドメインを形成する。

【0014】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２つまたは３つの細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、および抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は抗原結合ドメインを形成する。

【0015】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、１または２のジスルフィド結合を介して二量体化する、抗体重鎖定常領域と抗体軽鎖定常領域とを含む。

【0016】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤからなる群より選択される抗体に由来し得るヒンジ領域を必要に応じて含む。一実施形態において、ヒンジは、ＣＤ８αまたはＣＤ２８ヒンジ領域を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＰＰＣまたはＳＰＰＣアミノ酸配列を含む。

【0017】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ－１ Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２ Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳおよびＦＧＦＲ２Ｂからの膜貫通領域を含む。

【0018】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＮＦＲ２および／またはＣＤ２２６からの２～５個のシグナル伝達配列の任意の順序および任意の組み合わせでの細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を含む。

【0019】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含む第二のヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。

【0020】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む。

【0021】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む。

【0022】

本開示は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含む必要に応じて存在する（optional）ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅｒ ｒｅｇｉｏｎ）と、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含む膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸を提供する。

【0023】

本開示は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を有する前駆体ポリペプチドをコードする核酸を提供する。

【0024】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含む第二のヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列をコードする核酸を含む細胞内シグナル伝達領域を提供し；同じ核酸または第二の核酸は、（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域をコードし、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。

【0025】

一実施形態において、核酸は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする。

【0026】

一実施形態において、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする。

【0027】

本開示は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含む必要に応じて存在する（optional）ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅｒ ｒｅｇｉｏｎ）と、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含む膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。

【0028】

本開示は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を有する前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。

【0029】

一実施形態において、ベクターは、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクターを含む。

【0030】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中への前駆体ポリペプチドをコードする核酸の一過性導入を指示する。

【0031】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞のゲノム中への前駆体ポリペプチドをコードする核酸の宿主細胞のゲノム中への安定な挿入を指示する。

【0032】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で前駆体ポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳を指示する。例えば、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で前駆体ポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳（例えば、発現）を指示する、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。

【0033】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含む第二のヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達配列をコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供し、同じベクターまたは第二のベクターが、（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域をコードする核酸に機能的に連結されており、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する。一実施形態において、ベクターは、発現ベクターを含む。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。

【0034】

一実施形態において、発現ベクターは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている。

【0035】

一実施形態において、第一の発現ベクターは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されており、第二のベクターは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている。

【0036】

一実施形態において、発現ベクターは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている。

【0037】

一実施形態において、第一の発現ベクターは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されており、第二のベクターは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている。

【0038】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中への第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の一過性導入を指示する。

【0039】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞のゲノム中への第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の宿主細胞のゲノム中への安定な挿入を指示する。

【0040】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳を指示する。例えば、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳（例えば、発現）を指示する、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。

【0041】

本開示は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含む必要に応じて存在する（optional）ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅｒ ｒｅｇｉｏｎ）と、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含む膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0042】

一実施形態において、る宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを保有する。

【0043】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団によって保有される発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中への前駆体ポリペプチドをコードする核酸の一過性導入を指示する発現ベクターを含む。

【0044】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞のゲノム中への前駆体ポリペプチドをコードする核酸の宿主細胞のゲノム中への安定な挿入を指示する。

【0045】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で前駆体ポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳を指示する。例えば、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で前駆体ポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳（例えば、発現）を指示する、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。

【0046】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含む第二のヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域をコードする核酸に機能的に連結されたベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および／または第二のポリペプチド鎖の転写および／または翻訳（例えば、発現）を方向付ける発現ベクターを保有する。一実施形態において、宿主細胞は、第一および／または第二のポリペプチド鎖を発現する。

【0047】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを保有する。

【0048】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている第一のベクターおよび配列番号１４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている第二のベクターを保有する。

【0049】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを保有する。

【0050】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている第一のベクターおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている第二のベクターを保有する。

【0051】

本開示は、被験体における腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（１）重鎖リーダー領域、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）軽鎖リーダー領域、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0052】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含む必要に応じて存在する（optional）ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅｒ ｒｅｇｉｏｎ）と、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含む膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結された発現ベクターを保有する。

【0053】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクターを保有する。

【0054】

本開示は、被験体における腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含む第二のヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。

【0055】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔリンパ球（例えば、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球および単球からなる群より選択される。

【0056】

一実施形態において、宿主細胞は、臍帯血由来のＮＫ細胞または胎盤由来のＮＫ細胞を含むＮＫ細胞を含む。

【0057】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中への第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の一過性導入を指示する。

【0058】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞のゲノム中への第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の宿主細胞のゲノム中への安定な挿入を指示する。

【0059】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団中の発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳を指示する。例えば、発現ベクターは、宿主細胞または宿主細胞の集団中で第一および／または第二のポリペプチドをコードする核酸の転写および／または翻訳（例えば、発現）を指示する、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。

【0060】

一実施形態において、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態は、血液の乳がん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん、前立腺がん、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫および神経膠芽腫を含むがこれらに限定されないがんである。

【0061】

一実施形態において、疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される血液のがんである。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
第一および第二のポリペプチド鎖を含む抗原結合ドメインを含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物であって、
ａ）前記第一のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に５つの領域：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ヒンジ領域またはヒンジ領域なし、（ｉｖ）膜貫通領域（ＴＭ）および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域を含み、ならびに
ｂ）前記第二のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に２つの領域：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、κまたはλ）および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物。
（項目２）
ａ）前記第一のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に５つの領域を含み、（ｉ）前記抗体重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖可変領域を含み、（ｉｉ）前記抗体重鎖定常領域（ＣＨ）が、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体重鎖定常領域を含み、（ｉｉｉ）前記ヒンジ領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域および配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域と配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域とを含むヒンジ領域からなる群より選択され、（ｉｖ）前記膜貫通領域（ＴＭ）が、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤ２８膜貫通領域を含み、かつ（ｖ）前記細胞内シグナル伝達領域が、配列番号７のアミノ酸配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９または２０のアミノ酸配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達を含み、ならびに
ｂ）第二のポリペプチド鎖が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に２つの領域を含み、（ｉ）前記抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖可変領域を含み、かつ（ｉｉ）前記抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）が、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含み、
前記抗体重鎖定常領域および前記抗体軽鎖定常領域が二量体化ドメインを形成し、前記抗体重鎖可変領域および前記抗体軽鎖可変領域がＣＤ３８タンパク質を結合する抗原結合ドメインを形成する、項目１に記載の二量体抗原受容体（ＤＡＲ）。
（項目３）
項目２に記載の二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする核酸。
（項目４）
項目３に記載の核酸に機能的に連結されたベクター。
（項目５）
項目４に記載のベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団。
（項目６）
前記ベクターが発現ベクターであり、前記発現ベクターが、前記二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする前記核酸の転写および／または翻訳（発現）を指示する、項目５に記載の宿主細胞
（項目７）
前記宿主細胞または宿主細胞の前記集団が、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球または単球を含む、項目５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
（項目８）
被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置する方法であって、項目５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を前記被験体に投与することを含む、方法。
（項目９）
被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置する方法であって、項目６に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を前記被験体に投与することを含む、方法。
（項目１０）
アミノ末端からカルボキシル末端へ順に１０個の領域：（１）重鎖リーダー配列、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）軽鎖リーダー配列、（９）抗体軽鎖可変領域および（１０）抗体軽鎖定常領域を含む前駆体ポリペプチド。
（項目１１）
（１）前記重鎖リーダー配列が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（２）前記抗体重鎖可変領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域を含み、（３）前記抗体重鎖定常領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域を含み、（４）前記ヒンジ領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域および配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域と配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ領域とを含むヒンジ領域からなる群より選択され、（５）前記膜貫通領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域を含み、（６）前記細胞内シグナル伝達領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達配列および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択される任意の１つまたは２もしくはそれを超えるシグナル伝達配列の任意の組み合わせを含み、（７）前記Ｔ２Ａ切断配列が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、（８）前記軽鎖リーダー配列が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、（９）前記抗体軽鎖可変領域が、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域を含み、ならびに（１０）前記抗体軽鎖定常領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む、項目１０に記載の前駆体ポリペプチド。
（項目１２）
配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の前駆体ポリペプチド。
（項目１３）
項目１１に記載の前駆体ポリペプチドをコードする核酸。
（項目１４）
項目１１に記載の核酸に機能的に連結されたベクター。
（項目１５）
項目１４に記載のベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団。
（項目１６）
前記ベクターが発現ベクターであり、前記発現ベクターが、前記二量体抗原受容体（ＤＡＲ）をコードする前記核酸の転写および／または翻訳（発現）を指示する、項目１５に記載の宿主細胞
（項目１７）
前記宿主細胞または宿主細胞の前記集団が、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球または単球を含む、項目１５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団。
（項目１８）
被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置する方法であって、項目１５に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を前記被験体に投与することを含む、方法。
（項目１９）
被験体における腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する前記被験体を処置する方法であって、項目１６に記載の宿主細胞または宿主細胞の集団を前記被験体に投与することを含む、方法。
（項目２０）
前記疾患が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される血液のがんである、項目１８に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0062】

【図1】図１は、２つの細胞内シグナル伝達配列を含む例示的な二量体抗原受容体を示す模式図である。

【0063】

【図2】図２は、３つの細胞内シグナル伝達配列を含む例示的な二量体抗原受容体を示す模式図である。

【0064】

【図3】図３は、２つの細胞内シグナル伝達配列を含む例示的な二量体抗原受容体を示す模式図である。

【0065】

【図4】図４は、３つの細胞内シグナル伝達配列を含む例示的な二量体抗原受容体を示す模式図である。

【0066】

【図5】図５は、Ｔ２Ａ切断配列と３つの細胞内シグナル伝達配列とを含む例示的な前駆体ポリペプチド分子を示す模式図である。

【0067】

【図6】図６は、Ｔ２Ａ切断配列と２つの細胞内シグナル伝達配列とを含む例示的な前駆体ポリペプチド分子を示す模式図である。

【0068】

【図7】図７は、Ｔ２Ａ切断配列と３つの細胞内シグナル伝達配列とを含む例示的な前駆体ポリペプチド分子を示す模式図である。

【0069】

【図8】図８は、Ｔ２Ａ切断配列と２つの細胞内シグナル伝達配列とを含む例示的な前駆体ポリペプチド分子を示す模式図である。

【0070】

【図9】図９は、ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を発現するＴ細胞と比較された、ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現するＴ細胞を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ（Ｔ細胞受容体α定常）遺伝子を有する細胞系である。ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0071】

【図10】図１０は、ＲＰＭＩ８２２６標的細胞に対する、ＣＤ３８ ＣＡＲまたはＣＤ３８ ＤＡＲを発現するＴ細胞のパーセント細胞傷害性を示すグラフである。陰性対照（線Ａ）は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物（Ｂ点線）は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物が示されている（線Ｃ）。

【0072】

【図11】図１１は、ＣＤ３８ ＣＡＲ Ｖ１またはＶ２構築物を発現するＴ細胞を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、図１に記載されているものと同じ細胞系（ＴＲＡＣ ＫＯ）である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0073】

【図12】図１２は、ＲＰＭＩ８２２６標的細胞に対する、ＣＤ３８ ＣＡＲ、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）またはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）を発現するＴ細胞のパーセント細胞傷害性を示すグラフである。陰性対照（線Ａ）は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物（線Ｂ）は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物（Ｃ点線）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＣＡＲが示されている（線Ｄ）。

【0074】

【図13】図１３は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）またはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞からのＩＦＮ－γ放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ（Ｔ細胞受容体α定常）遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0075】

【図14】図１４は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）またはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞からのＴＮＦ－α放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ（Ｔ細胞受容体α定常）遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0076】

【図15】図１５は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）またはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞からのＩＬ－２放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0077】

【図16】図１６は、Ｋ５６２またはＲＰＭＩ８２２６細胞とともに共培養されたときの、ＣＡＲ、またはＤＡＲ（Ｖ１）もしくは（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞の増殖能を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ（Ｔ細胞受容体α定常）遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0078】

【図17】図１７は、Ｋ５６２またはＲＰＭＩ８２２６細胞とともに共培養されたときの、ＣＡＲ、またはＤＡＲ（Ｖ１）もしくは（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞の増殖（expansion）の倍数変化を示す棒グラフである。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ（Ｔ細胞受容体α定常）遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ１）構築物は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を有する長いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は、ＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0079】

【図18】図１８は、異種移植動物モデルにおいて評価されたＣＤ３８ ＤＡＲ Ｔ細胞の殺腫瘍活性を示す。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を投与した。試験マウスに、短いヒンジ配列を含む、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞を投与し、シグナル伝達領域はＣＤ２８および長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0080】

【図19】図１９は、異種移植動物モデルにおいて評価されたＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）Ｔ細胞の殺腫瘍活性を示す。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を投与した。試験マウスに、短いヒンジ配列を含む、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物を発現するＴ細胞を投与し、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。

【0081】

【図20】図２０は、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）または（Ｖ３）構築物を発現するＴ細胞を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、活性化Ｔ細胞およびノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ３）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび短縮ＩＴＡＭ領域を有するＣＤ３ζを含む。

【0082】

【図21】図２１は、ＲＰＭＩ８２２６標的細胞に対する、（Ｖ３）と比較したＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）を発現するＴ細胞のパーセント細胞傷害性を示すグラフである。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系（線Ａ）である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物（線Ｂ）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ３）構築物（線Ｃ）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび短縮ＩＴＡＭ領域を有するＣＤ３ζを含む。

【0083】

【図22】図２２は、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物と比較された、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）を発現するＴ細胞からのＩＦＮ－γ放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ３）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび短縮ＩＴＡＭ領域を有するＣＤ３ζを含む。

【0084】

【図23】図２３は、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物と比較された、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）を発現するＴ細胞からのＴＮＦ－α放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ３）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび短縮ＩＴＡＭ領域を有するＣＤ３ζを含む。

【0085】

【図24】図２４は、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）およびＤＡＲ（Ｖ３）Ｔ細胞中のメモリーＴ細胞の割合を測定するためのフローサイトメトリー研究の結果を示す。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび長いＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ３）構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよび短縮ＩＴＡＭ領域を有するＣＤ３ζを含む。

【0086】

【図25】図２５は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、ＣＤ３８ ＤＡＲ第二世代およびＣＤ３８ ＤＡＲ第三世代構築物を発現するＴ細胞を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。２８Ｚ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。

【0087】

【図26】図２６は、ＲＰＭＩ８２２６標的細胞に対する、ＣＤ３８ ＣＡＲ、２つの異なるＣＤ３８第二世代ＤＡＲのうちの１つまたはＣＤ３８第三世代ＤＡＲ構築物を発現するＴ細胞のパーセント細胞傷害性を示すグラフである。陰性対照（線Ａ）は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。２８Ｚ第二世代構築物（線Ｅ）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物（線Ｃ）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物（線Ｄ点線）は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。ＣＤ３８ ＣＡＲを発現する細胞が示されている（線Ｂ）。

【0088】

【図27】図２７は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、２つの異なるＣＤ３８第二世代ＤＡＲのうちの１つまたはＣＤ３８第三世代ＤＡＲを発現するＴ細胞からのＩＬ－２分泌のレベルを示すグラフである。各データの組は、左から右に、Ｋ５６２細胞、ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＴ細胞のみを示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。２８Ｚ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。

【0089】

【図28】図２８は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、２つの異なるＣＤ３８第二世代ＤＡＲのうちの１つまたはＣＤ３８第三世代ＤＡＲを発現するＴ細胞からのＴＮＦ－α分泌のレベルを示すグラフである。各データの組は、左から右に、Ｋ５６２細胞、ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＴ細胞のみを示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。２８Ｚ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。

【0090】

【図29】図２９は、ＣＤ３８ ＣＡＲ、２つの異なるＣＤ３８第二世代ＤＡＲのうちの１つまたはＣＤ３８第三世代ＤＡＲを発現するＴ細胞からのＩＦＮ－γ分泌のレベルを示すグラフである。各データの組は、左から右に、Ｋ５６２細胞、ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＴ細胞のみを示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。２８Ｚ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。

【0091】

【図30】図３０は、異種移植動物モデルにおいて評価されたＣＤ３８ ＣＡＲ Ｔ細胞の殺腫瘍活性を示す。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水、活性化Ｔ細胞またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を投与した。試験マウスに、２８ＺもしくはＢＢＺ第二世代構築物のいずれかまたは第三世代２８ＢＢＺ ＤＡＲ構築物を発現するＴ細胞を投与した。２８Ｚ ＤＡＲ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物）を含む。ＢＢＺ第二世代構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）を含む。２８ＢＢＺ第三世代構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域はＣＤ２８、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ｃ）構築物）を含む。

【0092】

【図31】図３１は、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞を比較するフローサイトメトリー研究の結果を示す。陰性対照は、活性化Ｔ細胞およびノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を含む。ＣＤ３８ Ｖ２ ＤＡＲ構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）。ＣＤ３８ Ｖ３ ＤＡＲ構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物）。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠き、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ４）構築物）。

【0093】

【図32】図３２は、ＲＰＭＩ８２２６標的細胞に対する、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞のパーセント細胞傷害性を示すグラフである。陰性対照（線Ａ）は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ４構築物（線Ｂ）はヒンジ配列を欠き、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ４）構築物）。ＣＤ３８ Ｖ２ ＤＡＲ構築物（Ｃ点線）は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）。ＣＤ３８ Ｖ３ ＤＡＲ構築物（線Ｄ）は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物）。

【0094】

【図33】図３３は、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞からのＩＦＮ－γ放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ Ｖ２ ＤＡＲ構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）。ＣＤ３８ Ｖ３ ＤＡＲ構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物）。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠き、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ４）構築物）。

【0095】

【図34】図３４は、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞からのＴＮＦ－α放出のレベルを示す棒グラフである。各データの組は、左から右に、ＲＰＭＩ８２２６細胞、Ｋ５６２細胞および培地を示す。陰性対照は、ノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系である。ＣＤ３８ Ｖ２ ＤＡＲ構築物は短いヒンジを含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物）。ＣＤ３８ Ｖ３ ＤＡＲ構築物は短いヒンジ配列を含み、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ３）構築物）。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠き、シグナル伝達領域は４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ（ＩＴＡＭ３モチーフのみを有する）シグナル伝達配列を含む（例えば、ＤＡＲ（Ｖ４）構築物）。

【0096】

【図35A】図３５Ａは、ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物の異なる領域のアミノ酸配列を示す。

【0097】

【図35B】図３５Ｂは、ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物Ｖ２ａの第一のポリペプチド、第二のポリペプチドおよび前駆体ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。

【0098】

【図35C】図３５Ｃは、ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物Ｖ３の第一のポリペプチド、第二のポリペプチドおよび前駆体ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。

【0099】

【図35D】図３５Ｄは、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列を含む長いヒンジ配列、ＩＴＡＭ３モチーフのみを有するＣＤ３ζシグナル伝達領域、ＣＤ８ヒンジ配列ならびに抗ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物のアミノ酸配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0100】

別段の定義がなければ、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、別段の定義がなければ当業者によって一般的に理解される意味を有する。一般的に、本明細書に記載されている、細胞培養および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、トランスジェニック細胞の作製、タンパク質化学および核酸化学およびハイブリダイゼーションの技術に関連する用語は、周知であり、本分野において一般的に使用されている。別段の記載がなければ、本明細書中に提供されている方法および技術は、一般に、本分野において周知の慣用的な手順に従って、ならびに本明細書に引用および論述されている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。例えば、 Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）を参照されたい。Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（ｅｄ） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＹ，１９９５；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ＩＲＬ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９６；およびＰａｕｌ（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｗａｔａ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；Ｐａｕｌ（ｅｄ．），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ，１９９３；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓｔｉｔｅｓら、（ｅｄｓ．） Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４ｔｈ ｅｄ．） Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，Ｃａｌｉｆおよびその中に引用されている参考文献；Ｃｏｄｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｎｄ ｅｄ．） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８６、およびＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７，１９７５などの多数の基本的な教科書が、標準的な抗体作製方法を記載している。本明細書中に引用されている参考文献の全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。酵素の反応および富化／精製技術も周知であり、製造業者の仕様に従って本分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されているように行われる。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医化学および薬化学に関連して使用される用語ならびにこれらの研究室手技および技術は、本分野において周知であり、一般的に使用されている。化学的合成、化学的分析、薬学的調製、製剤化および送達、および患者の処置に対しては、標準的な技術を使用することができる。

【0101】

本明細書に記載されている見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、これらの態様は、本明細書を全体として参照することによって理解することができる。

【0102】

本明細書中の文脈によって別段の要求がされていなければ、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに任意の単語の単数での使用は、明示的かつ明確に１つの指示対象に限定されていなければ、複数の指示対象を含む。

【0103】

本明細書における選択肢（例えば、「または」の使用は、当該選択肢の一方または両方またはその任意の組み合わせを意味するように解釈されることが理解される。

【0104】

本明細書において使用される「および／または」という用語は、それ以外のものとともにまたはそれ以外のものなしに、指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示を意味するように解釈されるべきである。例えば、本明細書において、「Ａおよび／またはＢ」などの語句において使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの語句において使用される「および／または」という用語は、以下の態様のそれぞれ：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を包含することが意図される。

【0105】

本明細書において使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」ならびにこれらの文法的変形は、本明細書において使用される場合、列記中の１つの項目または複数の項目が、列記された項目を置換しまたは列記された項目に追加することができる他の項目を除外しないように非限定的であることが意図される。本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語とともに態様が記載されている場合には常に、別途、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている類似の態様も提供されることが理解される。

【0106】

本明細書において使用される「約」という用語は、当業者によって決定された場合に特定の値または組成に対して許容され得る誤差範囲内にある値または組成を表し、これは、１つには、その値または組成がどのようにして測定または決定されるかに、すなわち、測定系の限界に依存する。例えば、「約」または「およそ」は、当該分野での慣行にしたがって、１または１を超える標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」または「およそ」は、測定系の限界に応じて、最大１０％の範囲（すなわち、±１０％）またはそれを超える範囲を意味することができる。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇと５．５ｍｇの間の任意の数を含むことができる。さらに、生物学的系または過程に関しては特に、これらの用語は、最大１桁の規模または最大５倍の値を意味することができる。本開示中に特定の値または組成が与えられている場合、別段の記載がなければ、「約」または「およそ」の意味は、その値または組成に対する許容され得る誤差範囲内にあると考えられるべきである。

【0107】

本明細書において使用される用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」ならびに他の関連する用語は互換的に使用され、アミノ酸のポリマーを表し、いずれかの特定の長さに限定されない。ポリペプチドは、天然のアミノ酸および非天然のアミノ酸を含み得る。ポリペプチドには、組換え形態または化学的に合成された形態が含まれる。ポリペプチドには、タンパク質分解による切断、デュードットＴ２Ａリボソームスキッピング切断（cleavage due dot T2A ribosomal skipping）、水酸化、メチル化、脂質化、アセチル化、ＳＵＭＯ化、ユビキチン化、グリコシル化、リン酸化および／またはジスルフィド結合形成などの翻訳後修飾を未だ受けていない前駆体分子も含まれる。これらの用語は、天然および人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチドアナログ（ムテイン、バリアント、キメラタンパク質および融合タンパク質など）ならびに翻訳後修飾によってまたは他の方法で共有結合的にもしくは非共有結合的に修飾されたタンパク質を包含する。２つのポリペプチド鎖を含む二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0108】

本明細書において使用される用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」ならびに他の関連する用語は互換的に使用され、ヌクレオチドのポリマーを表し、いずれかの特定の長さに限定されない。核酸には、組換え形態および化学的に合成された形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ分子（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログ（例えば、ペプチド核酸および天然に存在しないヌクレオチドアナログ）を用いて生成されたＤＮＡまたはＲＮＡおよびこれらのハイブリッドが含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。一実施形態において、本開示の核酸分子は、抗体またはその断片もしくはｓｃＦＶ、派生物、ムテインもしくはバリアントをコードする連続したオープンリーディングフレームを含む。一実施形態において、核酸は、１種類のポリヌクレオチドまたは２もしくはそれを超える異なる種類のポリヌクレオチドの混合物を含む。二量体抗原受容体をコードする核酸が、本明細書に記載されている。

【0109】

抗原結合タンパク質は、例えば、免疫グロブリンの構造を有することができる。一実施形態において、「免疫グロブリン」は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する四量体分子を表す。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主として関与する約１００～１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主として関与する定常領域を構成する。ヒト軽鎖は、κまたはλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして分類され、それぞれ、抗体のイソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして規定する。軽鎖および重鎖の中で、可変および定常領域は、約１２またはそれを超えるアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖も、約１０を超えるアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））参照（あらゆる目的のために、その全体が参照により組み込まれる）。完全な免疫グロブリンが２つの抗原結合部位を有するように、各軽／重鎖対の可変領域が抗体結合部位を形成する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、四量体免疫グロブリン分子とは異なるが、１つの標的抗原をなお結合する、または２もしくはそれを超える標的抗原を結合する構造を有する合成分子であり得る。例えば、合成抗原結合タンパク質は、抗体断片、１～６もしくはそれを超えるポリペプチド鎖、ポリペプチドの非対称的集合体またはその他の合成分子を含むことができる。標的抗原を特異的に結合する免疫グロブリン様特性を有する二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0110】

本明細書において使用される「抗体」および「複数の抗体」および関連する用語は、完全な免疫グロブリンまたは抗原に特異的に結合するその抗原結合部分を表す。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは完全な抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製され得る。抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディならびに特異的な抗原結合をポリペプチドに付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。

【0111】

抗体としては、組換え的に作製された抗体および抗原結合部分が挙げられる。抗体としては、非ヒト、キメラ、ヒト化および完全ヒト抗体が挙げられる。抗体としては、単一特異的、多重特異的（例えば、二重特異的、三重特異的およびこれより高次の特異性）が挙げられる。抗体としては、四量体抗体、軽鎖単量体、重鎖単量体、軽鎖二量体、重鎖二量体が挙げられる。抗体としては、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ’断片およびＦａｂ断片が挙げられる。抗体としては、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体、アフィボディ、ジスルフィド結合されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ抗体（抗Ｉｄ）、ミニボディが挙げられる。抗体としては、モノクローナルおよびポリクローナル集団が挙げられる。抗体のように挙動する二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0112】

本明細書において使用される「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」または「抗原結合部位」およびその他の関連する用語は、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質の抗原に対する特異性および親和性に寄与するアミノ酸残基（またはその他の部分）を含有する抗原結合タンパク質の部分を表す。その抗原に特異的に結合する抗体に関しては、これは、そのＣＤＲドメインの少なくとも１つの少なくとも一部を含む。抗原結合ドメインを形成する抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域を有する二量体抗原受容体が、本明細書において記載されている。

【0113】

抗体または抗原結合タンパク質または抗体断片の文脈で本明細書において使用される用語「特異的結合」、「特異的に結合する」または「特異的に結合している」およびその他の関連する用語は、他の分子または部分と比較した、抗原への非共有結合または共有結合の優先的結合を表す（例えば、抗体は、他の利用可能な抗原と比較して、特定の抗原に特異的に結合する）。一実施形態において、抗体が、１０^－５Ｍもしくはそれ未満、または１０^－６Ｍもしくはそれ未満、または１０^－７Ｍもしくはそれ未満、または１０^－８Ｍもしくはそれ未満、または１０^－９Ｍもしくはそれ未満、または１０^－１０Ｍもしくはそれ未満の解離定数Ｋ_Ｄで抗原に結合すれば、抗体は標的抗原に特異的に結合する。標的抗原を特異的に結合する二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0114】

一実施形態において、解離定数（Ｋ_Ｄ）は、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して測定することができる。表面プラズモン共鳴は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥシステム（ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＢｉａｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部門、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな相互作用の分析を可能にする光学現象を表す。

【0115】

本明細書において使用される「エピトープ」および関連する用語は、抗原結合タンパク質によって（例えば、抗体またはその抗原結合部分によって）結合される抗原の部分を表す。エピトープは、抗原結合タンパク質によって結合される２つまたはそれを超える抗原の部分を含むことができる。エピトープは、１つの抗原のまたは２もしくはそれを超える抗原の非連続部分（例えば、抗原の一次配列中では連続しないが、抗原の三次構造および四次構造という観点では、抗原結合タンパク質によって結合されるのに互いに十分近接するアミノ酸残基）を含むことができる。一般的には、抗体の可変領域、特にＣＤＲがエピトープと相互作用する。標的抗原（例えば、ＣＤ３８）のエピトープを結合する二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0116】

本明細書において使用される「抗体断片」、「抗体部分」、「抗体の抗原結合断片」または「抗体の抗原結合部分」およびその他の関連する用語は、完全な抗体が結合する抗原を結合する完全な抗体の一部を含む完全な抗体以外の分子を表す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２；Ｆｄ；およびＦｖ断片ならびにｄＡＢ；ダイアボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；特異的な抗原結合をポリペプチドに付与するのに十分である抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは完全な抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製され得る。抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディならびに抗原結合特性を抗体断片に付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。ヒンジ、膜貫通および細胞内シグナル伝達領域に連結されたＦａｂ断片を含む二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0117】

「Ｆａｂ」、「Ｆａｂ断片」という用語およびその他の関連する用語は、可変軽鎖領域（Ｖ_Ｌ）、定常軽鎖領域（Ｃ_Ｌ）、可変重鎖領域（Ｖ_Ｈ）および第一の定常領域（Ｃ_Ｈ１）を含む一価断片を表す。Ｆａｂは、抗原を結合することができる。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である。Ｆ（Ａｂ’）_２は、抗原結合能を有する。Ｆｄ断片は、Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１領域を含む。Ｆｖ断片は、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域を含む。Ｆｖは、抗原を結合することができる。ｄＡｂ断片は、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_ＬドメインまたはＶ_ＨもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号および同第６，６９６，２４５号；米国特許出願公開第２００２／０２５１２号；同第２００４／０２０２９９５号；同第２００４／００３８２９１号；同第２００４／０００９５０７号；同第２００３／００３９９５８号；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４－５４６，１９８９）。ヒンジ、膜貫通および細胞内シグナル伝達領域に連結されたＦａｂ断片を含む二量体抗原受容体が、本明細書に記載されている。

【0118】

「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１またはそれを超える可変および定常領域を有する抗体を表す。一実施形態において、可変および定常ドメインの全てがヒト免疫グロブリン配列に由来する（例えば、完全ヒト抗体）。これらの抗体は、組換え法を通じて、またはヒト重鎖および／もしくは軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝的に改変されているマウスを目的の抗原で免疫することを通じてなど、様々な方法で調製され得、その例は以下に記載されている。完全ヒト抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域を含む二量体抗原受容体が、本明細書において記載されている。

【0119】

「ヒンジ」という用語は、一般的にはタンパク質の２つのドメイン間に見出され、構築物全体の柔軟性および互いに対してドメインの一方または両方の運動を可能にし得るアミノ酸セグメントを表す。構造的には、ヒンジ領域は、約１０～約１００アミノ酸、例えば、約１５～約７５アミノ酸、約２０～約５０アミノ酸または約３０～約６０アミノ酸を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸の長さである。ヒンジ領域は、ＣＤ８ヒンジ領域もしくはその断片、ＣＤ８αヒンジ領域もしくはその断片、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ抗体）のヒンジ領域または抗体の定常ドメインＣＨ１とＣＨ２を連結するヒンジ領域などの、天然に存在するタンパク質のヒンジ領域に由来することができる。ヒンジ領域は抗体に由来することができ、抗体の１またはそれを超える定常領域を含んでもよくもしくは含まなくてもよく、またはヒンジ領域は抗体のヒンジ領域と抗体のＣＨ３定常領域とを含み、またはヒンジ領域は抗体のヒンジ領域と抗体のＣＨ２およびＣＨ３定常領域とを含み、またはヒンジ領域は天然に存在しないペプチドであり、またはヒンジ領域はｓｃＦｖのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に配置される。

【0120】

「リーダー配列」または「リーダーペプチド」または「ペプチドシグナル配列」または「シグナルペプチド」という用語は、ポリペプチドのＮ末端に位置するペプチド配列を表す。リーダー配列は、ポリペプチド鎖を細胞の分泌経路に方向づけ、細胞膜の脂質二重層中へのポリペプチドの組み込みおよび固定を指示することができる。典型的には、リーダー配列は約１０～５０アミノ酸の長さである。リーダー配列は、細胞質から小胞体への前駆体ポリペプチドの輸送を指示することができる。リーダー配列としては、ＣＤ８α、ＣＤ２８またはＣＤ１６リーダー配列を含むシグナル配列が挙げられる。

【0121】

「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、細胞内シグナル伝達ドメインに融合されている細胞外抗原結合タンパク質を含む一本鎖融合タンパク質を表す。ＣＡＲ細胞外結合ドメインは、ヒトモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体の可変重領域と軽領域を融合することによって得られる一本鎖可変断片（ｓｃＦｖまたはｓＦｖ）である。開示されている構築物はＤＡＲであり、標的化のために一本鎖抗体を使用せず、代わりに、別個の重鎖および軽鎖可変ドメイン領域を使用する点で、ＤＡＲはＣＡＲとは異なる。

【0122】

本明細書において使用される「ベクター」および関連する用語は、外来遺伝物質（例えば、核酸導入遺伝子）に機能的に連結することができる核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を表す。ベクターは、細胞（例えば、宿主細胞）中に外来遺伝物質を導入するための媒体として使用することができる。ベクターは、ベクター中への導入遺伝子の挿入のために少なくとも１つの制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含むことができる。ベクターは、ベクター－導入遺伝子構築物を保有する宿主細胞の選択を補助するために、抗生物質耐性または選択可能な特徴を付与する少なくとも１つの遺伝子配列を含むことができる。ベクターは、一本鎖または二本鎖核酸分子であり得る。ベクターは、直鎖または環状核酸分子であり得る。ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓを利用する遺伝子編集法のために使用されるドナー核酸は、ベクターの一種であり得る。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、導入遺伝子に連結することができ、宿主細胞中で複製し、導入遺伝子を転写および／または翻訳することが可能な直鎖または環状二本鎖染色体外ＤＮＡ分子を表す。ウイルスベクターは、典型的には、導入遺伝子に連結することができるウイルスＲＮＡまたはＤＮＡ骨格配列を含有する。ウイルス骨格配列は、感染を無効化するが、宿主細胞ゲノム中へのウイルス骨格および共に連結された導入遺伝子の挿入を保持するように改変することができる。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴、バキュロウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタインバーウイルスベクターが挙げられる。ある種のベクターは、その中にベクターが導入されている宿主細胞中において自律的な複製をすることが可能である（例えば、細菌の複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中に導入されると、宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。

【0123】

「発現ベクター」は、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含有することができるベクターの一種である。発現ベクターは、リボソーム結合部位および／またはポリアデニル化部位を含むことができる。制御配列は、宿主細胞中に形質導入された発現ベクターに連結された導入遺伝子の転写または転写および翻訳を指示する。制御配列（複数可）は、導入遺伝子の発現のレベル、タイミングおよび／または場所を調節することができる。制御配列は、例えば、導入遺伝子に対して直接的に、または１もしくはそれを超える他の分子（例えば、制御配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じてその効果を発揮することができる。制御配列は、ベクターの一部であり得る。制御配列のさらなる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．およびＢａｒｏｎら、１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：３６０５－３６０６に記載されている。二量体抗原受容体をコードする核酸を含む発現ベクターが、本明細書に記載されている。

【0124】

ベクター中に含有される導入遺伝子配列の機能または発現を許容する連鎖が導入遺伝子とベクターとの間に存在する場合に、導入遺伝子はベクターに「機能的に連結」されている。一実施形態において、制御配列が導入遺伝子の発現（例えば、発現のレベル、タイミングまたは場所）に影響を与える場合に、導入遺伝子は制御配列に「機能的に連結」されている。

【0125】

本明細書において使用される用語「形質移入された」または「形質転換された」または「形質導入された」またはその他の関連する用語は、宿主細胞中に外来性核酸（例えば、導入遺伝子）を転移または導入する方法を表す。「形質移入された」または「形質転換された」または「形質導入された」宿主細胞は、外来性核酸（導入遺伝子）を形質移入された、形質転換されたまたは形質導入された宿主細胞である。宿主細胞としては、初代対象細胞およびその子孫が挙げられる。二量体抗原受容体のいずれかの少なくとも一部をコードする外来性核酸が本明細書に記載されており、宿主細胞中に導入することができる。本明細書に記載されている二量体抗原受容体のいずれかの少なくとも一部を含む発現ベクターを宿主細胞中に導入することができ、宿主細胞は、二量体化して本明細書に記載されている二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチドを発現することができる。

【0126】

本明細書に使用されている用語「宿主細胞」または「宿主細胞の集団」または関連する用語は、外来（外来性または導入遺伝子）核酸がその中に導入されている細胞（またはその集団）を表す。外来核酸は、導入遺伝子に機能的に連結された発現ベクターを含むことができ、宿主細胞は、核酸および／または外来核酸（導入遺伝子）によってコードされるポリペプチドを発現するために使用することができる。宿主細胞（またはその集団）は培養された細胞であり得、または被験体から抽出され得る。宿主細胞（またはその集団）としては、初代対象細胞および継代の数に全く関係ないその子孫が挙げられる。宿主細胞（またはその集団）としては、不死化された細胞系が挙げられる。子孫細胞は、親細胞と比べて同一の遺伝物質を保有してもよく、または保有しなくてもよい。宿主細胞は、子孫細胞を包含する。一実施形態において、宿主細胞は、本明細書に開示されているとおりに、抗体を発現するためにいずれかの方法で改変され、形質移入され、形質導入され、形質転換されおよび／または操作されている任意の細胞（その子孫を含む）を記載する。一例において、宿主細胞（またはその集団）は、本明細書に記載されている所望の抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸に機能的に連結された発現ベクターを導入することができる。宿主細胞およびその集団は、宿主のゲノム中に安定的に組み込まれている発現ベクターを保有することができ、または染色体外の発現ベクターを保有することができる。一実施形態において、宿主細胞およびその集団は、いくつかの細胞分裂後に存在するまたは一過性に存在し、いくつかの細胞分裂後に失われる染色体外ベクターを保有することができる。

【0127】

宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌であり得、または真核生物、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母またはその他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）またはハイブリドーマであり得る。一実施形態において、宿主細胞は、所望される抗体をコードする核酸に機能的に連結された発現ベクターを導入することができ、これにより、形質移入された／形質転換された宿主細胞による抗体の発現に適した条件下で培養される形質移入された／形質転換された宿主細胞を生成し、必要に応じて、形質移入された／形質転換された宿主細胞から抗体を回収し（例えば、宿主細胞可溶化液からの回収）または培地から回収する。一実施形態において、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、ＳＰ２／０およびＹＢ２／０を含む非ヒト細胞を含む。一実施形態において、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＴ－１０８０、Ｈｕｈ－７およびＰＥＲ．Ｃ６などのヒト細胞を含む。宿主細胞の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ－７株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら、１９８１，Ｃｅｌｌ ２３：１７５参照）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはその派生物、例えば、Ｖｅｇｇｉｅ ＣＨＯおよび無血清培地中で成長する関連細胞系（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら、１９９８、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２８：３１参照）またはＤＨＦＲを欠損するＣＨＯ株ＤＸ－Ｂ １１（Ｕｒｌａｕｂら、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６－２０参照）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０）細胞系、アフリカミドリザル腎臓細胞系ＣＶ１由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞系（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）（ＭｃＭａｈａｎら、１９９１，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：２８２１参照）、ヒト胎児由来腎臓細胞、例えば、２９３、２９３ＥＢＮＡもしくはＭＳＲ２９３、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常な二倍体細胞、初代組織のインビトロ培養に由来する細胞株、初代外植片、ＨＬ－６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはジャーカット細胞が挙げられる。一実施形態において、宿主細胞は、Ｙ０、ＮＳ０またはＳｐ２０などのリンパ球系細胞を含む。一実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物の宿主細胞であるが、ヒト宿主細胞ではない。典型的には、宿主細胞は、次いで、宿主細胞中で発現することができるポリペプチドをコードする核酸で形質転換されまたは形質移入されることができる培養された細胞である。「トランスジェニック宿主細胞」または「組換え宿主細胞」という用語は、発現されるべき核酸を導入されている（例えば、形質転換されたまたは形質移入された）宿主細胞を表すために使用することができる。宿主細胞は、上記核酸を含むが、上記核酸と機能的に連結するようになるように制御配列が宿主細胞中に導入されなければ、所望のレベルでその核酸を発現しない細胞でもあり得る。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞のみならず、このような細胞の子孫または潜在的な子孫も表すことが理解される。例えば、変異または環境的な影響のために、後続の世代にある種の改変が起こり得るので、このような子孫は、実際には、親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書に使用されている用語の範囲内になお含まれる。

【0128】

宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔリンパ球（例えば、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球、単球を含む。一実施形態において、ＮＫ細胞は、臍帯血由来のＮＫ細胞または胎盤由来のＮＫ細胞を含む。

【0129】

トランスジェニック宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮＳまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓを含む周知のデザイナーヌクレアーゼを含む非ウイルス法を用いて調製することができる。導入遺伝子は、ジンクフィンガーヌクレアーゼなどのゲノム編集技術を用いて、宿主細胞のゲノム中に導入することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼは一対のキメラタンパク質を含み、それぞれが、操作されたジンクフィンガーモチーフ由来のＤＮＡ結合ドメインに融合された制限エンドヌクレアーゼ（例えば、ＦｏｋＩ）の非特異的エンドヌクレアーゼドメインを含有する。ＤＮＡ結合ドメインは、宿主ゲノム中の特異的な配列を結合するように操作することができ、エンドヌクレアーゼドメインは、二本鎖切断を作る。ドナーＤＮＡは、導入遺伝子、例えば、本明細書に記載されているＣＡＲまたはＤＡＲ構築物をコードする核酸のいずれかと、宿主細胞のゲノム中の意図された挿入部位のいずれかの側にある領域に対して相同である隣接配列とを保有する。宿主細胞のＤＮＡ修復機構は、相同的ＤＮＡ修復による導入遺伝子の正確な挿入を可能とする。トランスジェニック哺乳動物宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて調製されてきた（米国特許第９，５９７，３５７号、同第９，６１６，０９０号、同第９，８１６，０７４号および同第８，９４５，８６８号）。トランスジェニック宿主細胞は、正確な導入遺伝子挿入を与えることができるＤＮＡ結合ドメインに融合された非特異的エンドヌクレアーゼドメインを含む点でジンクフィンガーヌクレアーゼと類似するＴＡＬＥＮ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ－Ｌｉｋｅ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ））を用いて調製することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼと同様、ＴＡＬＥＮは宿主のＤＮＡ中に二本鎖切断も導入する。トランスジェニック宿主細胞は、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔｓ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート））を用いて調製することができる。ＣＲＩＳＰＲは、標的特異的なドナーＤＮＡ組み込みのためのガイドＲＮＡに連結されたＣａｓエンドヌクレアーゼを利用する。ガイドＲＮＡは、標的ＤＮＡ中のｇＲＮＡ結合領域の上流にあるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列を含有する保存されたマルチヌクレオチドを含み、Ｃａｓエンドヌクレアーゼが二本鎖標的ＤＮＡを切断する場所である宿主細胞標的部位にハイブリッドを形成する。ガイドＲＮＡは、特異的な標的部位にハイブリッドを形成するように設計することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼおよびＴＡＬＥＮと同様に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、挿入部位に対して相同性を有する隣接配列を有するドナーＤＮＡの部位特異的挿入を導入するために使用することができる。ゲノムを改変するために使用されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の例は、例えば、米国特許第８，６９７，３５９号、同第１０，０００，７７２号、同第９，７９０，４９０号および米国特許出願公開第２０１８／０３４６９２７号中に記載されている。一実施形態において、トランスジェニック宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を用いて調製することができ、宿主標的部位はＴＲＡＣ遺伝子（T細胞受容体アルファ定常（Ｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｌｐｈａ Ｃｏｎｓｔａｎｔ））であり得る。ドナーＤＮＡは、例えば、本明細書に記載されているＣＡＲまたはＤＡＲ構築物をコードする核酸のいずれをも含むことができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系とともに宿主細胞中にドナーＤＮＡを共送達するために、電気穿孔、ヌクレオフェクションまたはリポフェクションを使用することができる。

【0130】

トランスジェニック宿主細胞は、ＣＡＲまたはＤＡＲ構築物を有するレトロウイルスベクターでＴ細胞を形質導入することによって調製することができる。形質導入は、Ｍａら、２００４ Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ６１：１２－２５；およびＭａら、Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ７４（３）：２８６－２９６、２０１４（これらの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているとおりに本質的に実施することができる。抗ＣＤ３８ ＣＡＲまたはＤＡＲ ＭＦＧレトロウイルスベクタープラスミドＤＮＡは、エコトロピックレトロウイルスを作製するために、ＦｕＧｅｎｅ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてＰｈｏｅｎｉｘ－Ｅｃｏ細胞系（ＡＴＣＣ）中に形質移入することができ、次いで、ＰＧ１３パッケージング細胞にＧａｌ－Ｖエンベロープを形質導入して、ヒト細胞を感染するためのレトロウイルスを作製するために、採取一過性ウイルス上清（エコトロピックウイルス（Ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ））を使用することができる。ＰＧ１３細胞からのウイルス上清は、ＣＤ３またはＣＤ３／ＣＤ２８活性化の２～３日後に、活性化Ｔ細胞（またはＰＢＭＣ）を形質導入するために使用することができる。活性化ヒトＴ細胞は、５％ＦＢＳを補充したＡＩＭ－Ｖ成長培地（ＧＩＢＣＯ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中で２日間、製造業者のマニュアルのとおりに１００ｎｇ／ｍＬマウス抗ヒトＣＤ３抗体ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｒａｒｔｉａｎ，ＮＪ）または抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８ＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｇｅｒｍａｎ）で、および３００～１０００Ｕ／ｍＬ ＩＬ２で、正常な健康ドナー末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を活性化することによって調製することができる。１０μｇ／ｍＬのレトロネクチン（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ）で予め被覆された６ウェルプレート中で、３ｍＬのウイルス上清でおよそ５×１０^６個の活性化ヒトＴ細胞を形質導入し、１０００ｇで約１時間、およそ３２℃で遠心分離した。形質導入後、５％ＦＢＳおよび３００～１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ２を補充されたＡＩＭ－Ｖ成長培地中で、形質導入されたＴ細胞を拡大増殖させることができる。

【0131】

本開示のポリペプチド（例えば、抗体および抗原結合タンパク質）は、本分野において公知の任意の方法を用いて作製することができる。１つの例において、ポリペプチドは、宿主細胞中に導入され、発現を促進する条件下で宿主細胞によって発現される組換え発現ベクター中に、ポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、ＤＮＡ）を挿入することによって、組換え核酸法によって作製される。

【0132】

組換え核酸操作のための一般的な技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｖｏｌｓ．１－３，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ ｅｄ．，１９８９中に、またはＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）および定期的な改訂版中に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）は、哺乳動物、ウイルスまたは昆虫遺伝子に由来する１またはそれを超える適切な転写制御エレメントまたは翻訳制御エレメントを担持する発現ベクターに機能的に連結される。このような制御エレメントとしては、転写プロモーター、転写を調節するための必要に応じて存在するオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列ならびに転写および翻訳の終結を調節する配列が挙げられる。発現ベクターとしては、宿主細胞中に複製能を付与する複製開始点（ｏｒｉｇｉｎ ｏｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を含むことができる。発現ベクターは、トランスジェニック宿主細胞の認識を容易にするための選択を付与する遺伝子を含むことができる（例えば、形質転換体）。

【0133】

組換えＤＮＡは、タンパク質を精製するために有用であり得るタンパク質タグ配列の任意の種類をコードすることもできる。タンパク質タグの例としては、ヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグまたはＧＳＴタグを挙げることができるが、これらに限定されない。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞宿主とともに使用するための適切なクローニングおよび発現ベクターは、Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８５）に見出すことができる。

【0134】

発現ベクター構築物は、宿主細胞に適した方法を用いて宿主細胞中に導入することができる。宿主細胞中に核酸を導入するための様々な方法は本分野において公知であり、電気穿孔；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストランまたはその他の物質を利用する形質移入；ウイルス形質移入；非ウイルス形質移入；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが感染性因子である場合）を含むが、これらに限定されない。適切な宿主細胞としては、原核生物、酵母、哺乳動物細胞または細菌細胞が挙げられる。

【0135】

適切な細菌としては、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはバチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）が挙げられる。酵母、例えば、エス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種の酵母なども、ポリペプチドの作製のために使用され得る。組換えタンパク質を発現するために、様々な哺乳動物または昆虫細胞培養系も利用することができる。昆虫細胞中で異種タンパク質を産生するためのバキュロウイルス系はＬｕｃｋｏｗ ａｎｄ Ｓｕｍｍｅｒｓ，（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：４７，１９８８）によって概説されている。適切な哺乳動物宿主細胞系の例としては、内皮細胞、ＣＯＳ－７サル腎臓細胞、ＣＶ－１、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ヒト胎児由来腎臓細胞、ＨｅＬａ、２９３、２９３ＴおよびＢＨＫ細胞系が挙げられる。精製されたポリペプチドは、組換えタンパク質を発現するために適切な宿主／ベクター系を培養することによって調製される。次いで、培地または細胞抽出物からタンパク質が精製される。二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチドのいずれもが、トランスジェニック宿主細胞によって発現されることができる。

【0136】

本明細書に開示されている抗体および抗原結合タンパク質は、細胞－翻訳系を用いて作製することもできる。このような目的のために、ポリペプチドをコードする核酸は、ｍＲＮＡを産生するためにインビトロでの転写を可能にするように、および特定の無細胞系中でのｍＲＮＡの無細胞翻訳が使用できるように（哺乳動物または酵母無細胞翻訳系などの真核生物のまたは細菌の無細胞翻訳系などの原核生物の）修飾されなければならない。

【0137】

本明細書に開示されている様々なポリペプチドのいずれかをコードする核酸は、化学的に合成され得る。細胞中での発現を改善するために、コドン使用頻度を選択し得る。このようなコドン使用頻度は、選択された細胞の種類に依存する。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびその他の細菌ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞に対して、特殊化されたコドン使用頻度パターンが開発されてきた。例えば、Ｍａｙｆｉｅｌｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００３ １００（２）：４３８－４２；Ｓｉｎｃｌａｉｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．２００２（１）：９６－１０５；Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｎ Ｄ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１ １２（５）：４４６－９；Ｍａｋｒｉｄｅｓら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１９９６ ６０（３）：５１２－３８；およびＳｈａｒｐら、Ｙｅａｓｔ．１９９１ ７（７）：６５７－７８を参照されたい。

【0138】

本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、化学合成によって（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８４，Ｔｈｅ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．に記載されている方法によって）も作製することができる。タンパク質への修飾も、化学合成によって作製することができる。

【0139】

本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、タンパク質化学の分野において一般的に知られている、タンパク質に対する単離／精製法によって精製することができる。非限定的な例としては、抽出、再結晶、塩析（例えば、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムを用いた）、遠心分離、透析、限外ろ過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲルろ過、ゲル浸透クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動、向流分配またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。精製後に、ポリペプチドは、ろ過および透析を含むがこれらに限定されない本分野で公知の様々な方法のいずれかによって、異なる緩衝液中に交換されおよび／または濃縮され得る。

【0140】

本明細書に記載されている精製された抗体および抗原結合タンパク質は、少なくとも６５％純粋、少なくとも７５％純粋、少なくとも８５％純粋、少なくとも９５％純粋または少なくとも９８％純粋である。純度の正確な数値にかかわらず、ポリペプチドは、医薬製品として使用するために十分に純粋である。本明細書に記載されている二量体抗原受容体のいずれもが、トランスジェニック宿主細胞によって発現されることができ、次いで、本分野で公知の任意の方法を用いて約６５～９８％純度または高いレベルの純度に精製することができる。

【0141】

ある実施形態において、本明細書の抗体および抗原結合タンパク質は、翻訳後修飾をさらに含むことができる。例示的な翻訳後タンパク質修飾としては、リン酸化、アセチル化、メチル化、ＡＤＰリボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、ＳＵＭＯ化、ビオチン化またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加が挙げられる。その結果、修飾されたポリペプチドは、脂質、多糖または単糖およびホスフェートなどの非アミノ酸要素を含有し得る。一実施形態において、グリコシル化は、１またはそれを超えるシアル酸部分をポリペプチドにコンジュゲートするシアル化であり得る。シアル酸部分は、タンパク質の免疫原性の可能性も低減しながら、溶解度および血清半減期を改善する。Ｒａｊｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１ ３１；４０（３０）：８８６８－７６を参照されたい。

【0142】

一実施形態において、本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、可溶性ポリペプチドとなるように修飾することができ、これは、抗体および抗原結合タンパク質を非タンパク質性ポリマーに連結することを含む。一実施形態において、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号または同第４，１７９，３３７号に記載されている様式で、非タンパク質性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンを含む。

【0143】

本開示は、薬学的に許容され得る賦形剤と混合されて、本明細書に記載された二量体抗原受容体のいずれかを含む治療的組成物を提供する。賦形剤は、担体、安定化剤および賦形剤を包含する。薬学的に許容され得る賦形剤の賦形剤としては、例えば、不活性な希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、流動促進剤および粘着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油またはタルク）が挙げられる。さらなる例としては、緩衝剤、安定化剤、防腐剤、非イオン性界面活性剤、抗酸化剤および等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｆｉｅｒ）が挙げられる。

【0144】

治療用組成物および治療用組成物を調製する方法は本分野において周知であり、例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”（２０ｔｈ ｅｄ．，ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ａ Ｒ．，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ）に見出される。治療用組成物は、非経口投与用に製剤化することができ、例えば、賦形剤、無菌水、生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油または水素化ナフタレンを含有してもよく、含有することができる。本明細書に記載されている抗体（またはその抗原結合タンパク質）の放出を調節するために、生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーが使用され得る。抗体（またはその抗原結合タンパク質）の生体内分布を調節するために、ナノ粒子製剤（例えば、生分解性ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）が使用され得る。他の潜在的に有用な非経口送達系としては、エチレン－酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み可能な注入系およびリポソームが挙げられる。製剤中の抗体（またはその抗原結合タンパク質）の濃度は、投与されるべき薬物の投薬量および投与の経路を含む多数の要因に応じて様々である。

【0145】

本明細書に記載されている二量体抗原受容体のいずれもが、医薬産業において一般的に使用される無毒な酸付加塩または金属錯体などの薬学的に許容され得る塩として必要に応じて投与され得る。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸またはトリフルオロ酢酸などの有機酸、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸、および塩酸、臭化水素酸、硫酸 リン酸などの無機酸が挙げられる。金属錯体としては、亜鉛、鉄などが挙げられる。１つの例において、抗体（またはその抗原結合部分）は、熱的安定性を増加するために酢酸ナトリウムの存在下で製剤化される。

【0146】

本明細書に記載されている二量体抗原受容体のいずれもが経口用に製剤化され得、非毒性の薬学的に許容され得る賦形剤と混合して活性成分を含有する錠剤を含む。経口用製剤は、チュアブル錠剤として、または活性成分が不活性固体希釈剤と混合される硬質ゼラチンカプセル剤、または活性成分が水もしくは油媒体とともに混合される軟質ゼラチンカプセル剤としても提供され得る。

【0147】

本開示は、膜貫通領域および細胞内シグナル伝達領域に連結されたＦａｂ断片を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）を提供する。一実施形態において、ＤＡＲ構築物は、Ｆａｂ断片と膜貫通領域の間にヒンジ領域を必要に応じて含む。ＤＡＲ構造の本開示は、Ｆａｂ型抗体を有するＤＡＲ構造を、同じ抗体のｓｃＦｖ型を有するＣＡＲ構造に匹敵する予想外の驚くべき結果を提供する。さらに、ヒンジ領域、膜貫通領域および２つの細胞内シグナル伝達領域が同じであるので、
ＤＡＲ型およびＣＡＲ型は直接的に匹敵する。さらに、ＤＡＲ型の活性は、その対応するＣＡＲ型より優れていた。

【0148】

本開示は、１つのポリペプチド上の重鎖結合領域と別個のポリペプチド鎖上の軽鎖結合領域とを含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供する。二量体抗原受容体を構成する２つのポリペプチド鎖は、二量体化してタンパク質複合体を形成することができる。二量体抗原受容体は標的抗原に特異的に結合するので、二量体抗原受容体は抗体様特性を有する。二量体抗原受容体は、指向性細胞療法のために使用することができる。

【0149】

本開示は、第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを有するＤＡＲ（二量体抗原受容体）構築物のための構造であって、第一のポリペプチド鎖が抗体の重鎖可変領域を含み、第二のポリペプチド鎖が抗体の軽鎖可変領域を含み、第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖の両方が同じ細胞によって発現されている場合には、第一のポリペプチド鎖が、形質導入された細胞の外側にある領域において、１つまたは複数のジスルフィド結合によって、第二のポリペプチド鎖に連結されている構造を提供する。より具体的には、ＤＡＲ構築物は、順に、抗体重鎖（または軽鎖）であって、可変ドメイン領域およびＣＨ１領域、対応するＣＬ／ＣＫ領域の場合は（カッパ（Ｋ）またはラムダ（Ｌ））を有する抗体重鎖（または軽鎖）と、ヒンジ領域と、膜貫通領域と、１つまたは２つのシグナル伝達ドメインとを含む第一のポリペプチド鎖、ならびに対応するＣＬ／ＣＫ領域を有する抗体軽鎖（または重鎖）可変ドメイン領域（カッパ（Ｋ）またはラムダ（Ｌ））を含む第二のポリペプチド鎖を含み、各第一および第二のポリペプチド鎖中のＣＨ領域は、ヒンジ配列における１つまたは２つのジスルフィド結合で連結されている。

【0150】

本開示は、第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを有するＤＡＲ（二量体抗原受容体）構築物のための構造であって、第一のポリペプチド鎖が抗体の重鎖可変領域を含み、第二のポリペプチド鎖が抗体の軽鎖可変領域を含み、第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖の両方が同じ細胞によって発現されている場合には、第一のポリペプチド鎖が、形質導入された細胞の外側にある領域において、１つまたは複数のジスルフィド結合によって、第二のポリペプチド鎖に連結されている構造を提供する。より具体的には、ＤＡＲ構築物は、順に、抗体重鎖であって、可変ドメイン領域およびＣＨ１領域、対応するＣＬ／ＣＫ領域の場合は（カッパ（Ｋ）またはラムダ（Ｌ））を有する抗体重鎖と、ヒンジ領域と、膜貫通領域と、１つまたは２つのシグナル伝達ドメインとを含む第一のポリペプチド鎖、ならびに対応するＣＬ／ＣＫ領域を有する抗体軽鎖可変ドメイン領域（カッパまたはラムダ）を含む第二のポリペプチド鎖を含み、各第一および第二のポリペプチド鎖中のＣＨ領域は、ヒンジ配列における１つまたは２つのジスルフィド結合で連結されている。

【0151】

一実施形態において、ＤＡＲ構築物は、別個のポリペプチド鎖上に抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域が抗原結合ドメインを形成する。

【0152】

一実施形態において、ヒンジ領域は約１０～約１００アミノ酸の長さである。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８ヒンジ領域またはその断片、ＣＤ８αヒンジ領域またはその断片、抗体の定常ドメインＣＨ１とＣＨ２を連結する抗体（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ）のヒンジ領域からなる群より独立に選択される。ヒンジ領域は抗体に由来することができ、抗体の１またはそれを超える定常領域を含んでもよく、または含まなくてもよい。

【0153】

一実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ－１ Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２ Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳおよびＦＧＦＲ２Ｂからなる群より選択される膜タンパク質配列領域に由来することができる。

【0154】

一実施形態において、シグナル伝達領域は、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球（ｌｙｍｐｈ ｏｏｃｙｔｅ）機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＮＦＲ２、ＣＤ２２６およびこれらの組み合わせからのシグナル伝達領域からなる群より選択される。

【0155】

一実施形態において、二量体抗原受容体の一般的な設計は、第一のポリペプチド鎖と第二のポリペプチド鎖とを含み、第一のポリペプチド鎖は、二量体化領域に接続された抗原結合領域と、ヒンジ領域に接続された二量体化領域と、膜貫通領域に接続されたヒンジ領域と、１または複数の細胞内シグナル伝達配列領域に接続された膜貫通領域とを含み、第二のポリペプチド鎖は、抗原結合ドメインと二量体化ドメインとを含む。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖の一方または両方における抗原結合ドメインは、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、サイトカイン受容体の細胞外領域、単一ドメイン抗体およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖の一方または両方における二量体化ドメインは、κ軽鎖定常領域、λ軽鎖定常領域、ロイシンジッパー、ｍｙｃ－ｍａｘ成分およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。図１～４において、「Ｓ－Ｓ」は、ジスルフィド結合、ロイシンジッパーまたはｍｙｃ－ｍａｘ成分を含む、第一および第二のポリペプチド鎖の二量体化をもたらす任意の化学的結合または会合を表す。

【0156】

本開示は、第一のポリペプチド鎖は重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持し、第二のポリペプチド鎖は軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供する。一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。

【0157】

本開示は、第一のポリペプチド鎖は軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持し、第二のポリペプチド鎖は重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）（例えば、図３および４）を担持する二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供する。一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。

【0158】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）および抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）は、二量体化して二量体化ドメインを形成することができる。一実施形態において、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は、１または２のジスルフィド結合を介して二量体化する。

【0159】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）および抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）は、互いに会合して抗原結合ドメインを形成する。例えば、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は、抗体重鎖定常領域と抗体軽鎖定常領域が二量体化する場合、互いと会合する。

【0160】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とから形成される抗原結合ドメインが標的抗原を結合する。

【0161】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は完全ヒト抗体領域である。

【0162】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、ヒンジ領域は約１０～約１００アミノ酸の長さである。一実施形態において、ヒンジ領域は、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ）からのヒンジ領域またはその断片を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）もしくはＣＤ２８ヒンジ領域またはこれらの断片を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＰＰＣまたはＳＰＰＣアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列の両方（例えば、長いヒンジ領域）、ＣＤ８配列のみ（短いヒンジ）またはＣＤ２８ヒンジ配列のみ（例えば、短いヒンジ領域）を含む。

【0163】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、第一および第二のポリペプチド鎖の膜貫通領域は、独立して、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ－１ Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２ Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳおよびＦＧＦＲ２Ｂに由来することができる。

【0164】

一実施形態において、図１～４に示されている二量体抗原受容体に関しては、第一のポリペプチドの細胞内シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＮＦＲ２、ＣＤ２２６およびこれらの組み合わせからの２～５個のシグナル伝達配列の任意の順序および任意の組み合わせでの細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、４－１ＢＢおよび／またはＣＤ３ζの任意の１つまたは２もしくはそれより多くの任意の組み合わせからの細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８およびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列または４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域のＣＤ３ζ部分は、ＩＴＡＭ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ）（免疫受容活性化チロシンモチーフ））モチーフ１、２および３（例えば、長いＣＤ３ζ）を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域のＣＤ３ζ部分は、ＩＴＡＭモチーフの１つのみ、例えば、ＩＴＡＭ１、２または３のみ（例えば、短いＣＤ３ζ）を含む。

【0165】

本開示は、互いに会合して、ＣＤ３８タンパク質抗原を結合する抗原結合ドメインを形成する第一および第二のポリペプチド鎖を有する二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供する。一実施形態において、ＣＤ３８タンパク質は、ヒト、カニクイザルおよび／またはマウスから得られる。一実施形態において、ＣＤ３８タンパク質は、野生型または変異体ＣＤ３８タンパク質を含む。

【0166】

一実施形態において、二量体抗原受容体の第一のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体重鎖定常領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジまたは配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジまたは配列番号１９のＣＤ２８およびＣＤ８ヒンジ配列を含むヒンジ領域（例えば、長いヒンジ）を含む。一実施形態において、膜貫通領域は配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域である。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、（例えば、図３５Ｂで下線が付されたリーダー配列ありまたはなしで）配列番号１３のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、４－１ＢＢとＣＤ３ζシグナル伝達配列の間に配列番号１３のアミノ酸配列とＣＤ２８シグナル伝達配列（配列番号８）を含む。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、（例えば、図３５Ｃで下線が付されたリーダー配列ありまたはなしで）配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、４－１ＢＢとＣＤ３ζシグナル伝達配列の間に配列番号１６のアミノ酸配列とＣＤ２８シグナル伝達配列（配列番号８）を含む。

【0167】

一実施形態において、二量体抗原受容体の第二のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体軽鎖定常領域は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖の完全長は、（例えば、図３５Ｂで下線が付されたリーダー配列ありまたはなしで）配列番号１４のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖の完全長は、（例えば、図３５Ｃで下線が付されたリーダー配列ありまたはなしで）配列番号１７のアミノ酸配列を含む。

【0168】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する（例えば、図１）。

【0169】

本開示は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列およびＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を含む二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は二量体化ドメインを形成し、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８タンパク質に結合する抗原結合ドメインを形成する（例えば、図１）。

【0170】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン１（例えば、Ｖ１）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、（ａ）第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号１９）を含む長ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）ＣＤ２８シグナル伝達配列（例えば、配列番号８）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0171】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン２（例えば、Ｖ２）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、（ａ）第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）（１）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（２）ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（３）４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζのいずれかを含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。

【0172】

一実施形態において、バージョン２ａ（Ｖ２ａ）ＤＡＲ構築物は、４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。

【0173】

一実施形態において、バージョン２ｂ（Ｖ２ｂ）ＤＡＲ構築物は、ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３－ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。

【0174】

一実施形態において、バージョン２ｃ（Ｖ２ｃ）ＤＡＲ構築物は、４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。

【0175】

一実施形態において、ＤＡＲ Ｖ２ａおよびＶ２ｂは第二世代ＤＡＲ構築物であるのに対して、ＤＡＲ Ｖ２ｃは第三世代ＤＡＲ構築物である。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0176】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン３（例えば、Ｖ３）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、（ａ）第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0177】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン４（例えば、Ｖ４）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を提供し、（ａ）第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に４つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｉｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠く。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0178】

本開示は、前駆体ポリペプチドを提供する。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、会合／集合して二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物を形成する第一および第二のポリペプチド鎖になるように処理することができる。

【0179】

本開示は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に１０個の領域：（１）重鎖リーダー配列、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）軽鎖リーダー配列、（９）抗体軽鎖可変領域および（１０）抗体軽鎖定常領域を含む前駆体ポリペプチドを提供する（図５および６）。非限定的な例において、細胞内シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζおよび／またはＣＤ２８の少なくとも２つの任意の組み合わせの細胞内シグナル伝達配列を含む（図５および６）。当業者であれば他の細胞内シグナル伝達配列の組み合わせが可能であることを理解する。Ｔ２Ａ切断配列は、リボソームスキッピングおよび２つの別個のポリペプチドを生成するタンパク質翻訳の再開を促進するアミノ酸配列である。一実施形態において、前駆体ポリペプチドの集団は、Ｔ２Ａ切断配列において切断されたもしくは切断されていないポリペプチドの混合物ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖リーダー配列において切断されたもしくは切断されていないポリペプチドの混合物を含む。

【0180】

本開示は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に１０個の領域：（１）軽鎖リーダー配列、（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）細胞内シグナル伝達領域、（７）Ｔ２Ａ切断配列、（８）重鎖リーダー配列、（９）抗体重鎖可変領域および（１０）抗体軽鎖定常領域を含む前駆体ポリペプチドを提供する（図７および８）。非限定的な例において、細胞内シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζおよび／またはＣＤ２８の少なくとも２つの任意の組み合わせの細胞内シグナル伝達配列を含む（図７および８）。当業者であれば他の細胞内シグナル伝達配列の組み合わせが可能であることを理解する。Ｔ２Ａ切断配列は、リボソームスキッピングおよび２つの別個のポリペプチドを生成するタンパク質翻訳の再開を促進するアミノ酸配列である。一実施形態において、前駆体ポリペプチドの集団は、Ｔ２Ａ切断配列において切断されたもしくは切断されていないポリペプチドの混合物ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖リーダー配列において切断されたもしくは切断されていないポリペプチドの混合物を含む。

【0181】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、重鎖および軽鎖リーダー配列は、ポリペプチド鎖（例えば、第一および第二のポリペプチド鎖）を細胞の分泌経路へ向かわせ、細胞膜の脂質二重層中へのポリペプチドの組み込みおよび係留を可能にするペプチドシグナル配列を含む。重および軽鎖リーダー配列は、宿主細胞の細胞質から小胞体への前駆体ポリペプチドの輸送を指示することができる。重鎖および軽鎖リーダー配列としては、ＣＤ８α、ＣＤ２８またはＣＤ１６リーダー配列を含むシグナル配列が挙げられる。

【0182】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチドのＮ末端は、第一のペプチドシグナル配列（例えば、重鎖または軽鎖リーダー配列）を含む。

【0183】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチドは、切断配列の後に配置された第二のペプチドシグナル配列（例えば、重鎖または軽鎖リーダー配列）を含むことができる。

【0184】

一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、切断配列において切断されることができ、これにより、それぞれがそのＮ末端にペプチドシグナル配列を有する第一および第二のポリペプチド鎖を生成する。

【0185】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチドのプロセシングとしては、第一および第二のポリペプチド鎖へ前駆体を切断すること、前駆体を分泌することおよび／または細胞膜中に前駆体を係留することが挙げられる。

【0186】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチド鎖が切断されて第一および第二のポリペプチド鎖を生成した後に、（ポリペプチド鎖の１つの）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）と（他のポリペプチド鎖の）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）は二量体化して、二量体化ドメインを形成することができる。一実施形態において、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域は、１または２のジスルフィド結合を介して二量体化する。

【0187】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチド鎖が切断されて第一および第二のポリペプチド鎖を生成した後に、（ポリペプチド鎖の１つの）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）および（ポリペプチド鎖の１つの）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）は、互いに会合して抗原結合ドメインを形成する。例えば、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は、抗体重鎖定常領域と抗体軽鎖定常領域が二量体化する場合、互いと会合する。

【0188】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とから形成される抗原結合ドメインが標的抗原を結合する。

【0189】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域は完全ヒト抗体領域である。

【0190】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、ヒンジ領域は約１０～約１００アミノ酸の長さである。一実施形態において、ヒンジ領域は、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ）からのヒンジ領域またはその断片を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）もしくはＣＤ２８ヒンジ領域またはこれらの断片を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＰＰＣまたはＳＰＰＣアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列の両方（例えば、長いヒンジ領域）、ＣＤ８配列のみ（短いヒンジ）またはＣＤ２８ヒンジ配列のみ（例えば、短いヒンジ領域）を含む。

【0191】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、前駆体ポリペプチド鎖の膜貫通領域は、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ－１ Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２ Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳおよびＦＧＦＲ２Ｂに由来することができる。

【0192】

一実施形態において、図５～８に示されている前駆体ポリペプチドに関しては、第一のポリペプチドの細胞内シグナル伝達領域は、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＴＮＦＲ２、および／またはＣＤ２２６からの２～５個のシグナル伝達配列の任意の順序および任意の組み合わせでの細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、４－１ＢＢおよび／またはＣＤ３ζの任意の１つまたは２もしくはそれより多くの任意の組み合わせからの細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８およびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列または４－１ＢＢおよびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域のＣＤ３ζ部分は、ＩＴＡＭ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ）（免疫受容活性化チロシンモチーフ））モチーフ１、２および３（例えば、長いＣＤ３ζ）を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達領域のＣＤ３ζ部分は、ＩＴＡＭモチーフの１つのみ、例えば、ＩＴＡＭ１、２または３のみ（例えば、短いＣＤ３ζ）を含む。

【0193】

本開示は、１０の領域：（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジと、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは３もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。一実施形態において、完全長前駆体ポリペプチドは、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、完全長前駆体ポリペプチドは、４－１ＢＢとＣＤ３ζシグナル伝達配列との間に配列番号１５のアミノ酸配列とＣＤ２８シグナル伝達配列（配列番号８）とを含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、第一および第二のポリペプチド鎖を放出するためにＴ２Ａ切断可能配列において切断すること、および前駆体を分泌すること、および／または細胞膜中に前駆体を係留することによって処理することができる。第一および第二のポリペプチド鎖は、抗体重鎖定常領域と抗体軽鎖定常領域との間で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して二量体化することができ、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８抗原を結合する抗原結合ドメインを形成することができる。一実施形態において、ヒンジ領域は、必要に応じて存在する。

【0194】

本開示は、１０の領域：（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体重鎖リーダー配列と、（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域と、（３）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域と、（４）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域と、（５）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域と、（６）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列およびＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域および必要に応じて配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列と、（７）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ切断配列と、（８）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖リーダー配列と、（９）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域と、（１０）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域とを含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。一実施形態において、完全長前駆体ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、第一および第二のポリペプチド鎖を放出するためにＴ２Ａ切断可能配列において切断すること、および前駆体を分泌すること、および／または細胞膜中に前駆体を係留することによって処理することができる。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖の放出後に、第一ポリペプチド鎖は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチド鎖は配列番号１７のアミノ酸配列を含む。第一および第二のポリペプチド鎖は、抗体重鎖定常領域と抗体軽鎖定常領域との間で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して二量体化することができ、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域はＣＤ３８抗原を結合する抗原結合ドメインを形成することができる。

【0195】

本開示は、本明細書に記載の第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、第一および第二のポリペプチド鎖、二量体抗原受容体または前駆体ポリペプチドのいずれかをコードする核酸を提供する。

【0196】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を提供する。

【0197】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域をコードする核酸を提供する。

【0198】

一実施形態において、核酸は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする。

【0199】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を提供する。

【0200】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域をコードする核酸を提供する。

【0201】

一実施形態において、核酸は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（例えば、図３および４）を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする。

【0202】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を提供する。

【0203】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域をコードする核酸を提供する。

【0204】

一実施形態において、核酸は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５のを細胞内シグナル伝達配列有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする。

【0205】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を提供する。

【0206】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域をコードする核酸を提供する。

【0207】

一実施形態において、核酸は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする。

【0208】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチド：（１）重鎖リーダー領域、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）軽鎖リーダー領域、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域（例えば、図５および６）をコードする核酸を提供する。

【0209】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチド：（１）軽鎖リーダー領域、（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）重鎖リーダー領域、（９）抗体重鎖可変領域、および（１０）抗体重鎖定常領域（例えば、図７および８）をコードする核酸を提供する。

【0210】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域および必要に応じて配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤ８ヒンジ、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢシグナル伝達配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８シグナル伝達配列、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（長）シグナル伝達および／またはＩＴＡＭ３モチーフを有し、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ（短）シグナル伝達配列からなる群より選択されるシグナル伝達配列の任意の１つまたは２もしくはそれを超える任意の組み合わせを含む細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を提供する。実施形態において、核酸は、配列番号１３または１６（例えば、図３５Ｂまたは３５Ｃにおいて下線が付されるリーダー配列を伴うまたは伴わない）のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、核酸は、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列の間に配列番号１３のアミノ酸配列およびおよびＣＤ２８シグナル伝達配列（配列番号８）を含む第一のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、核酸は、配列番号１６（例えば、図３５Ｃにおいて下線が付されるリーダー配列を伴うまたは伴わない）のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、核酸は、４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達配列の間に配列番号１６のアミノ酸配列およびＣＤ２８シグナル伝達配列（配列番号８）を含む第一のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、ヒンジ領域は必要に応じたものである。

【0211】

一実施形態において、核酸は、配列番号３のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域を含む二量体抗原受容体の第二のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、核酸は、配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖定常領域を含む二量体抗原受容体の第二のポリペプチド鎖をコードする。一実施形態において、核酸は、配列番号１４または１７（例えば、図３５Ｂまたは３５Ｃにおいて下線が付されるリーダー配列を伴うまたは伴わない）のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖の全長をコードする。

【0212】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域をコードする核酸を提供する。

【0213】

一実施形態において、核酸は、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）、Ｔ２Ａ切断配列（配列番号１２）、および第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）をコードする。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）は、図３５ＢおよびＣにおいてそれぞれ下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）は、図３５ＢまたはＣにおいてそれぞれ下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。

【0214】

本開示は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸を提供する。

【0215】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン１（例えば、Ｖ１）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸を提供し、（ａ）第一の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードし：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号１９）を含む長ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）ＣＤ２８シグナル伝達配列（例えば、配列番号８）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0216】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン２（例えば、Ｖ２）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸を提供し、（ａ）第一の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードし：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）（１）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（２）ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（３）４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζのいずれかを含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。

【0217】

一実施形態において、核酸は、４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ａ（Ｖ２ａ）ＤＡＲ構築物をコードする。

【0218】

一実施形態において、核酸は、ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３－ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｂ（Ｖ２ｂ）ＤＡＲ構築物をコードする。

【0219】

一実施形態において、核酸は、４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｃ（Ｖ２ｃ）ＤＡＲ構築物をコードする。一実施形態において、ＤＡＲ Ｖ２ａおよびＶ２ｂは第二世代ＤＡＲ構築物であるのに対して、ＤＡＲ Ｖ２ｃは第三世代ＤＡＲ構築物である。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0220】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン３（例えば、Ｖ３）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸を提供し、（ａ）第一の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードし：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0221】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン４（例えば、Ｖ４）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸を提供し、（ａ）第一の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に４つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードし：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｉｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第二の核酸は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠く。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0222】

本開示は、本明細書に記載の第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、第一および第二のポリペプチド鎖、二量体抗原受容体または前駆体ポリペプチドのいずれかをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する。

【0223】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域。

【0224】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域。

【0225】

一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターは、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を含む。

【0226】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域。

【0227】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域。

【0228】

一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターは、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を含む。

【0229】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域。

【0230】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域。

【0231】

一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターは、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を含む。

【0232】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域。

【0233】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域。

【0234】

一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターは、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を含む。

【0235】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（１）重鎖リーダー領域、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）軽鎖リーダー領域、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域。

【0236】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（１）軽鎖リーダー領域、（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）重鎖リーダー領域、（９）抗体重鎖可変領域、および（１０）抗体重鎖定常領域。

【0237】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域。

【0238】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されているベクターを提供する：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域。

【0239】

一実施形態において、ベクターは、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）および第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0240】

一実施形態において、ベクターは、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）、Ｔ２Ａ切断配列（配列番号１２）、および第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）をコードする核酸に機能的に連結されている。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）は、図３５ＢおよびＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）は、図３５ＢおよびＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。本開示は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。

【0241】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン１（例えば、Ｖ１）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されているベクターを提供し、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号１９）を含む長ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）ＣＤ２８シグナル伝達配列（例えば、配列番号８）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0242】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン２（例えば、Ｖ２）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されているベクターを提供し、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）（１）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（２）ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（３）４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζのいずれかを含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。

【0243】

一実施形態において、ベクターは、４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ａ（Ｖ２ａ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0244】

一実施形態において、ベクターは、ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３－ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｂ（Ｖ２ｂ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0245】

一実施形態において、ベクターは、４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｃ（Ｖ２ｃ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。一実施形態において、ＤＡＲ Ｖ２ａおよびＶ２ｂは第二世代ＤＡＲ構築物であるのに対して、ＤＡＲ Ｖ２ｃは第三世代ＤＡＲ構築物である。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0246】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン３（例えば、Ｖ３）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されているベクターを提供し、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0247】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン４（例えば、Ｖ４）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されているベクターを提供し、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に４つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｉｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠く。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0248】

本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団であって、本明細書に記載されている、第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、第一および第二のポリペプチド鎖、二量体抗原受容体または前駆体ポリペプチドのいずれかをコードする核酸導入遺伝子に機能的に連結された１またはそれを超える発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0249】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団に１またはそれを超える発現ベクターが導入され、ベクターは、本明細書に記載されている二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物のいずれかをコードする核酸導入遺伝子に機能的に連結されている。宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔリンパ球（例えば、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球、単球を含む。一実施形態において、ＮＫ細胞は、臍帯血由来のＮＫ細胞または胎盤由来のＮＫ細胞を含む。

【0250】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、宿主細胞中への導入遺伝子の一過性導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を誘導することができる１またはそれを超える発現ベクターを保有する。発現ベクターは、宿主細胞中での導入遺伝子の転写および／または翻訳を誘導することができる。発現ベクターは、レトロウイルス、レンチウイルスまたはアデノウイルスに由来する核酸骨格配列を含むことができる。発現ベクターは、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。発現ベクターは、リボソーム結合部位および／またはポリアデニル化部位を含むことができる。

【0251】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクターは、トランスジェニック宿主細胞の表面上にディスプレイすることができる二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物の産生を誘導することができ、または二量体抗原受容体を細胞培地中に分泌させることができる。

【0252】

一実施形態において、宿主細胞は、二量体抗原受容体のいずれかをコードする核酸導入遺伝子に機能的に連結された１またはそれを超える発現ベクターを保有することができ、宿主細胞は、二量体抗原受容体構築物を一過性にまたは安定に発現するために、適切な培地中で培養することができる。

【0253】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0254】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0255】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第一の発現ベクターおよび第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第二の発現ベクターを保有し、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域。

【0256】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を保有する。

【0257】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および第二のポリペプチド鎖を発現する。

【0258】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0259】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0260】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第一の発現ベクターおよび第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第二の発現ベクターを保有し、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域。

【0261】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を保有する。

【0262】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および第二のポリペプチド鎖を発現する。

【0263】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0264】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0265】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第一の発現ベクターおよび第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第二の発現ベクターを保有し、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含み：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域。

【0266】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域を保有する。

【0267】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および第二のポリペプチド鎖を発現する。

【0268】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0269】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0270】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第一の発現ベクターおよび第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている第二の発現ベクターを保有し、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含み：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域。

【0271】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域を保有する。

【0272】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および第二のポリペプチド鎖を発現する。

【0273】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（１）重鎖リーダー領域、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）軽鎖リーダー領域、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0274】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、前駆体ポリペプチドを発現する。

【0275】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（１）軽鎖リーダー領域、（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）重鎖リーダー領域、（９）抗体重鎖可変領域、および（１０）抗体重鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0276】

一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、前駆体ポリペプチドを発現する。

【0277】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0278】

本開示は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供する。

【0279】

一実施形態において、ベクターは、第一および第二のポリペプチド鎖（配列番号６および７）をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0280】

一実施形態において、ベクターは、第一のポリペプチド鎖（配列番号６）、Ｔ２Ａ切断配列（配列番号１２）、および第二のポリペプチド鎖（配列番号７）をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0281】

本開示は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されたベクターを提供する。

【0282】

一実施形態において、宿主細胞は、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）および第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）を発現する。一実施形態において、宿主細胞は、配列番号１５または１８）の前駆体ポリペプチドを発現する。

【0283】

一実施形態において、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）は、図３５ＢまたはＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）は、図３５ＢまたはＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。

【0284】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン１（例えば、Ｖ１）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号１９）を含む長ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）ＣＤ２８シグナル伝達配列（例えば、配列番号８）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0285】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン２（例えば、Ｖ２）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されているベクターを提供し、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されている第一のベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）（１）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（２）ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（３）４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζのいずれかを含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。

【0286】

一実施形態において、ベクターは、４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ａ（Ｖ２ａ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0287】

一実施形態において、ベクターは、ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３－ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｂ（Ｖ２ｂ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0288】

一実施形態において、ベクターは、４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含むバージョン２ｃ（Ｖ２ｃ）ＤＡＲ構築物をコードする核酸に機能的に連結されている。一実施形態において、ＤＡＲ Ｖ２ａおよびＶ２ｂは第二世代ＤＡＲ構築物であるのに対して、ＤＡＲ Ｖ２ｃは第三世代ＤＡＲ構築物である。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0289】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン３（例えば、Ｖ３）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されている第一のベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；および（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0290】

本開示は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン４（例えば、Ｖ４）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に４つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されている第一のベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｉｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠く。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0291】

本開示は、二量体抗原受容体構築物を発現するように操作されたトランスジェニック宿主細胞を被験体に投与することによって養子細胞療法を実施する方法をさらに提供する。

【0292】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現（上昇した発現）と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置する方法をさらに提供する。このような方法は、例えば、第一のポリペプチド鎖もしくは第二のポリペプチド鎖のいずれかまたは第一および第二のポリペプチド鎖のいずれかまたは本明細書に記載されている前駆体ポリペプチド鎖のいずれかをコードする核酸に機能的に連結された発現ベクターを保有する宿主細胞を被験体に投与することを含む。一実施形態において、宿主細胞または宿主細胞の集団は、第一および第二のポリペプチド鎖のいずれかまたは本明細書に記載されている前駆体ポリペプチド鎖のいずれかを発現する。

【0293】

一実施形態において、被験体を処置するために使用される宿主細胞または宿主細胞の集団に１またはそれを超える発現ベクターが導入され、ベクターは、本明細書に記載されている二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物のいずれかをコードする核酸導入遺伝子に機能的に連結されている。宿主細胞または宿主細胞の集団は、Ｔリンパ球（例えば、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、γδＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、Ｂリンパ球、単球を含む。一実施形態において、ＮＫ細胞は、臍帯血由来のＮＫ細胞または胎盤由来のＮＫ細胞を含む。

【0294】

一実施形態において、被験体を処置するために使用される宿主細胞または宿主細胞の集団は、宿主細胞中への導入遺伝子の一過性導入または宿主細胞のゲノム中への導入遺伝子の安定な挿入を誘導することができる１またはそれを超える発現ベクターを保有する。発現ベクターは、宿主細胞中での導入遺伝子の転写および／または翻訳を誘導することができる。一実施形態において、導入遺伝子は、第一のポリペプチド鎖もしくは第二のポリペプチド鎖のいずれかまたは第一および第二のポリペプチド鎖のいずれかまたは本明細書に記載されている前駆体ポリペプチド鎖のいずれかをコードする核酸を含む。発現ベクターは、レトロウイルス、レンチウイルスまたはアデノウイルスに由来する核酸骨格配列を含むことができる。発現ベクターは、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含むことができる。発現ベクターは、リボソーム結合部位および／またはポリアデニル化部位を含むことができる。

【0295】

一実施形態において、二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクターは、トランスジェニック宿主細胞の表面上にディスプレイすることができる二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物の産生を誘導することができ、または二量体抗原受容体を細胞培地中に分泌させることができる。

【0296】

一実施形態において、宿主細胞は、二量体抗原受容体のいずれかをコードする核酸導入遺伝子に機能的に連結された１またはそれを超える発現ベクターを保有することができ、宿主細胞は、二量体抗原受容体構築物を一過性にまたは安定に発現するために、適切な培地中で培養することができる。

【0297】

一実施形態において、被験体を処置するために使用される宿主細胞または宿主細胞の集団は自家であり、処置を受けている被験体に由来する。一実施形態において、全血は被験体から取得することができ、所望の細胞（例えば、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞またはマクロファージ）は全血から回収することができる。

【0298】

一実施形態において、被験体を処置するために使用される宿主細胞または宿主細胞の集団は同種異系であり、異なる被験体に由来する。同種異系の細胞は、自家細胞に対して使用されるのと同じ様式で異なる被験体から得た全血から取得することができる。一実施形態において、同種異系の細胞は、妊娠後の胎盤または腱（ｃｈｏｒｄ）組織に由来する。

【0299】

一実施形態において、所望の細胞は、処置を受けるべき被験体からまたは異なる被験体から取得され、第一もしくは第二のポリペプチドのいずれかまたは前駆体ポリペプチドの発現を指示する１またはそれを超える発現ベクターを保有するように操作され、これによりトランスジェニック宿主細胞を生成する。トランスジェニック宿主細胞は、第一もしくは第二のポリペプチドまたは前駆体ポリペプチドを発現することができる。宿主細胞は、二量体化して、被験体中の腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチド鎖を発現することができる。宿主細胞は、二量体化して、被験体中の腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチド鎖を形成するために切断され得る前駆体ポリペプチド鎖を発現することができる。（例えば、発現ベクターを保有するまたはポリペプチド鎖を発現する）トランスジェニック宿主細胞は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を処置するために被験体に投与することができる。

【0300】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置する方法を提供し、ここで、障害は、血液の乳がん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん、前立腺がん、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫および神経膠芽腫を含むがこれらに限定されないがんである。

【0301】

一実施形態において、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される血液のがんである。

【0302】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0303】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0304】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、第一および第二の発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、第一の発現ベクターは第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、第二の発現ベクターは第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）。

【0305】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0306】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、または第一および第二のポリペプチド鎖（例えば、図１および２）を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖は、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する。

【0307】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）細胞内シグナル伝達領域（例えば、図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0308】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（例えば、図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0309】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、第一および第二の発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、第一の発現ベクターは第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、第二の発現ベクターは第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含み：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（例えば、図３および４）。

【0310】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｉｉ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｉｖ）膜貫通領域、および（ｖ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（例えば、図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0311】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、または第一および第二のポリペプチド鎖（例えば、図３および４）を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖は、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する。

【0312】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0313】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0314】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、第一および第二の発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、第一の発現ベクターは第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、第二の発現ベクターは第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含み：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）。

【0315】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）重鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体重鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（例えば、図１および２）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0316】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、または第一および第二のポリペプチド鎖（例えば、図１および２）を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖は、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する。

【0317】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）軽鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）細胞内シグナル伝達領域（図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0318】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に３つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）重鎖リーダー領域、（ｉｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域（図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0319】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、第一および第二の発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、第一の発現ベクターは第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、第二の発現ベクターは第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結され、（ａ）第一のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含み：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；（ｂ）第二のポリペプチド鎖はアミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域をを含む：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（図３および４）。

【0320】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、以下を含む第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に６つの領域を含む第一のポリペプチド鎖：（ｉ）軽鎖リーダー配列、（ｉｉ）抗体軽鎖可変領域、（ｉｉｉ）抗体軽鎖定常領域、（ｉｖ）必要に応じて存在するヒンジ領域、（ｖ）膜貫通領域、および（ｖｉ）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列；ならびに（ｂ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖：（ｉ）抗体重鎖可変領域、および（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（図３および４）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0321】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一のポリペプチド鎖、第二のポリペプチド鎖、または第一および第二のポリペプチド鎖（図３および４）を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖は、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する。

【0322】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（１）重鎖リーダー領域、（２）抗体重鎖可変領域、（３）抗体重鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）軽鎖リーダー領域、（９）抗体軽鎖可変領域、および（１０）抗体軽鎖定常領域（例えば、図５および６）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは切断されて、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチド鎖を形成する。

【0323】

本開示は、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法をさらに提供し、方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に１０の領域を含む前駆体ポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（１）軽鎖リーダー領域、（２）抗体軽鎖可変領域、（３）抗体軽鎖定常領域、（４）必要に応じて存在するヒンジ領域、（５）膜貫通領域、（６）２～５の細胞内シグナル伝達配列を有する細胞内シグナル伝達配列、（７）Ｔ２Ａ切断可能配列領域、（８）重鎖リーダー領域、（９）抗体重鎖可変領域、および（１０）抗体重鎖定常領域（図７および８）を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは切断されて二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチド鎖を形成する。

【0324】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖可変領域、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体重鎖定常領域、（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ヒンジ領域、（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通領域、および（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列および配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0325】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されている発現ベクター：（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤ３８抗体軽鎖定常領域を保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0326】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一および第二の発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、第一の発現ベクターは、配列番号１３または１６のアミノ酸配列をコードする核酸に機能的に連結されており、第二の発現ベクターは、配列番号１４または１７のアミノ酸配列をコードする核酸に機能的に連結されている。

【0327】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一および第二のポリペプチド鎖をコードする核酸に機能的に連結されたベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、ベクターは、配列番号１３および１４、または配列番号１６および１７のアミノ酸配列を含む。

【0328】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列（例えば、ＣＤ３８前駆体、第二世代）を含む前駆体ポリペプチドをコードする発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。

【0329】

一実施形態において、腫瘍抗原の悪影響発現に関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法は、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）、第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）、第一および第二のポリペプチド鎖（配列番号１３および１４、または配列番号１６および１７）または前駆体ポリペプチド（配列番号１５または１８）を発現する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含む。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖（配列番号１３または１６）は、図３５ＢまたはＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。一実施形態において、第二のポリペプチド鎖（配列番号１４または１７）は、図３５ＢまたはＣにおいて下線が付されるリーダー配列を含むかまたは欠如する。一実施形態において、第一および第二のポリペプチド鎖は、二量体化して被験体における腫瘍抗原に特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する。一実施形態において、前駆体ポリペプチドは、切断されて、二量体化して被験体における腫瘍抗原（例えば、ＣＤ３８）二特異的に結合する二量体抗原受容体を形成する第一および第二のポリペプチド鎖を形成する。

【0330】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置する方法を提供し、ここで、障害は、血液の乳がん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん、前立腺がん、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫および神経膠芽腫を含むがこれらに限定されないがんである。

【0331】

一実施形態において、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される血液のがんである。

【0332】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン１（例えば、Ｖ１）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ８およびＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号１９）を含む長ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）ＣＤ２８シグナル伝達配列（例えば、配列番号８）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0333】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１および２）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン２（例えば、Ｖ２）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されている第一のベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）（１）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（２）ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζ、または（３）４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列およびＩＴＡＭモチーフ１、２および３（例えば、配列番号９）を有するＣＤ３－ζのいずれかを含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。 一実施形態において、バージョン２ａ（Ｖ２ａ）ＤＡＲ構築物は、４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。 一実施形態において、バージョン２ｂ（Ｖ２ｂ）ＤＡＲ構築物は、ＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３－ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。 一実施形態において、バージョン２ｃ（Ｖ２ｃ）ＤＡＲ構築物は、４－１ＢＢ（例えば、配列番号７）シグナル伝達配列およびＣＤ２８（例えば、配列番号８）シグナル伝達配列ならびにＩＴＡＭモチーフ１、２および３を有するＣＤ３ζ（例えば、配列番号９）を有する細胞内シグナル伝達領域を含む。一実施形態において、ＤＡＲ Ｖ２ａおよびＶ２ｂは第二世代ＤＡＲ構築物であるのに対して、ＤＡＲ Ｖ２ｃは第三世代ＤＡＲ構築物である。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0334】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）（例えば、図１）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン３（例えば、Ｖ３）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に５つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されている第一のベクター：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ヒンジ配列（例えば、配列番号５）を含む短ヒンジ領域、（ｉｖ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；および（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を保有する。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0335】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、方法は、重鎖可変（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を担持する第一のポリペプチド鎖、および軽鎖可変（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を担持する第二のポリペプチド鎖を含むバージョン４（例えば、Ｖ４）二量体抗原受容体（ＤＡＲ）構築物をコードする核酸に連結されている発現ベクターを保有する宿主細胞または宿主細胞の集団を被験体に投与することを含み、宿主細胞または宿主細胞の集団は、（ａ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に４つの領域を含む第一のポリペプチド鎖をコードする第一の核酸に機能的に連結されており：（ｉ）抗体重鎖可変領域（ＶＨ）、（ｉｉ）抗体重鎖定常領域（ＣＨ）、（ｉｉｉ）ＣＤ２８膜貫通配列（例えば、配列番号６）を含む膜貫通領域（ＴＭ）、および（ｉｖ）４－１ＢＢシグナル伝達配列（例えば、配列番号７）およびＩＴＡＭモチーフ３のみ（例えば、配列番号２０）を有するＣＤ３－ζシグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達領域；（ｂ）第一のベクターは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順に２つの領域を含む第二のポリペプチド鎖をコードする第二の核酸に機能的に連結されている：（ｉ）抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、カッパまたはラムダ）、および（ｉｉ）抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ配列を欠く。一実施形態において、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）は抗ＣＤ３８重鎖可変領域配列（例えば、配列番号１）を含み、抗体重鎖定常領域（ＣＨ）は抗ＣＤ３８重鎖定常領域配列（例えば、配列番号２）を含む。

【0336】

本開示は、腫瘍抗原の有害な発現と関連する疾患、障害または状態を有する被験体を処置する方法を提供し、ここで、障害は、血液の乳がん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん、前立腺がん、頭頸部がん、肺がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫および神経膠芽腫を含むがこれらに限定されないがんである。

【0337】

一実施形態において、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される血液のがんである。

【0338】

【実施例】

【0339】

以下の実施例は、例示であることが意図されており、本開示の実施形態をさらに理解するために使用することができ、いかなる形であれ本教示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。

【0340】

［実施例１］ヒトＰＢＭＣ細胞および初代Ｔ細胞の単離

【0341】

健康なヒトドナーから、バフィコート（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ血液バンク）、新鮮血または白血球除去生成物（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）のいずれかから初代ヒトＴ細胞を単離した。末梢血単核球は、密度勾配遠心分離によって単離した。Ｔ細胞は、製造業者の指示にしたがって、ＥａｓｙＳｅｐ^ＴＭＨｕｍａｎＴ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）を使用して、磁気による負の選択によってＰＢＭＣから単離した。

【0342】

（実施例２）初代Ｔ細胞培養

【0343】

３００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を加えた５％ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充したＣＴＳ（商標） ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ中で、１０^６細胞／ｍＬの密度で初代Ｔ細胞を培養した。単離されたＴ細胞は、新たにまたは凍結したタンクから刺激した。Ｔ Ｃｅｌｌ ＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）３μＬ／ｍＬ当たり１０^６細胞で、２～３日間、細胞を活性化した。形質移入後、３００Ｕ／ｍＬでＩＬ－２を加えた培地中でＴ細胞を培養した。

【0344】

［実施例３］腫瘍細胞系

【0345】

多発性骨髄腫細胞系ＲＰＭＩ８２２６をＡＴＣＣから取得し、ルシフェラーゼおよびＧＦＰ遺伝子を担持するレンチウイルスを用いて形質導入した。ルシフェラーゼおよびＧＦＰ発現を有する単一細胞クローンを選択した（ＲＰＭＩ８２２６－ＦＬｕｃ）。ＲＰＥ遺伝子を担持するレンチウイルスでＫ５６２細胞を形質導入することによって、Ｋ５６２／ＲＰＥ細胞を同様に作製した。両細胞系は、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地（ＡＴＣＣ）中で培養した。

【0346】

［実施例４］ ＣＡＲおよびＤＡＲ Ｔ細胞の調製

【0347】

活性化Ｔ細胞に、ＣＡＲまたはＤＡＲ構築物のいずれかをコードする核酸を導入した。

【0348】

抗ＣＤ３８ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸は、その後に２つの追加のアミノ酸残基ＡｓｐおよびＩｌｅが続く重鎖シグナルペプチド（配列番号１０）、ｍｙｃタグＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号２４）、抗ＣＤ３８重鎖可変領域（配列番号１）、１５アミノ酸リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３），抗ＣＤ３８軽鎖可変領域（配列番号３），ＣＤ８ヒンジ領域（配列番号２１），ＣＤ２８ヒンジ領域（配列番号５），ＣＤ２８膜貫通領域（配列番号６），ＣＤ２８細胞内シグナル伝達領域（配列番号８）およびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達領域（配列番号９）を含んだ。完全長抗ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する。

【0349】

抗ＣＤ３８ ＤＡＲ前駆体ポリペプチドをコードする核酸の例（例えば、Ｖ２ａまたはＶ３）は、配列番号１５または１８のアミノ酸配列を含む。

【0350】

［実施例５］ 細胞傷害性アッセイ

【0351】

電気穿孔の２～３週後に、ＣＡＲ、ＤＡＲおよび対照Ｔ細胞を、ＩＬ－２とともに、一晩、栄養素飢餓状態に供した。これらの細胞を、ＣＤ３８陽性ＲＰＭＩ－８２２６／ＧＦＰ細胞またはＣＤ３８陰性Ｋ５６２／ＲＰＥ細胞の標的細胞混合物とともに共培養した。エフェクター対標的細胞の比は、５：１～０．０８：１の範囲であった。一晩のインキュベーションの後、ＧＦＰ細胞集団を測定して、抗ＣＤ３８Ａ２ ＣＡＲおよびＤＡＲ Ｔ細胞による特異的な標的細胞の殺滅を判定するために、細胞をフローサイトメトリーに供した。

【0352】

［実施例６］サイトカイン分泌アッセイ

【0353】

電気穿孔の２～３週後に、ＣＡＲ、ＤＡＲおよび対照Ｔ細胞を、ＩＬ－２とともに、一晩、栄養素飢餓状態に供した。これらの細胞を、ＣＤ３８陰性Ｋ５６２またはＣＤ３８陽性ＲＰＭＩ８２２６細胞とともに共培養した。エフェクター対標的細胞の比は、２：１であった。一晩のインキュベーション後、製造業者の指示にしたがって、サイトカインＩＬ－２、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦα（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を検出するため、上清を集めるために、細胞を遠心分離した。

【0354】

［実施例７］ エフェクターメモリーＴ細胞を検出する

【0355】

ＤＡＲ Ｔ細胞をＤＰＢＳ５％ヒト血清アルブミンで洗浄し、次いで、４℃で３０～６０分間、抗ＣＤ３ーＢＶ４２１抗体（ＳＫ７，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）およびＰＥまたはＡＰＣコンジュゲートＣＤ３８－Ｆｃタンパク質（Ｃｈｉｍｅｒｉｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色した。ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ Ｐｌｕｓ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅ Ｃｏ）を用いて、ＣＤ３およびＣＤ３８を検出した。エフェクターメモリーＴ細胞およびＴ細胞のセントラルメモリー画分を同定するためのマーカーは、ＣＤ４５ＲＯ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）およびＣＣＲ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）であった。

【0356】

［実施例８］ インビボでの腫瘍殺滅

【0357】

抗ＣＤ３８Ａ２ ＣＡＲＴまたはＤＡＲＴ細胞の殺腫瘍活性を、ＲＰＭＩ８２２６異種移植マウスモデルにおいて試験した。ルシフェラーゼおよびＧＦＰ遺伝子を有するレンチウイルスベクターによって、ＡＴＣＣから得た多発性骨髄腫細胞系ＲＰＭＩ８２２６を形質移入した。ルシフェラーゼおよびＧＦＰ発現を有する単一クローンを選択した（ＲＰＭＩ８２２６－ＦＬｕｃ）。合計７×１０^６細胞のＲＰＭＩ８２２６－Ｆｌｕｃを２００μＬのＰＢＳ中に懸濁し、次いで、各マウスの尾静脈中に静脈内注射した。ＩＶＩＳ画像法からの生物発光に基づいて、極めて小さなまたは極めて大きな腫瘍負荷量を有する動物は除外した。研究で選択された動物を、異なる群に無作為化した。

【0358】

腫瘍接種の３週後に、尾静脈を介して、２００μＬのＰＢＳ中の約１０００万の操作されたＣＡＲまたはＤＡＲ Ｔ細胞の単回処置を施行した。処置対照群として、同じ量のＡＴＣまたはＴＲＡＣ ＫＯ Ｔ細胞または２００μＬのＰＢＳを静脈内に投与した。

【0359】

処置の４または５週後まで、腫瘍細胞接種後に毎週、各マウスの背側上で、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ）を用いて総光子束を測定することによって、腫瘍成長をモニターした。１５０ｍｇ／ｋｇのルシフェリン腹腔内投与から約１０～２０分後に、画像を撮影した。

【0360】

［実施例９］ ＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するＴ細胞の結果

【0361】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）バージョン１のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのバージョン１ ＤＡＲ構築物を発現する（図９）。

【0362】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）バージョン１のいずれかを発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。バージョン１ ＤＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（Ｂ点線）は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｃ）と比べて、インビトロでの細胞殺滅において同等であったが、これより優れているわけではなかった（図１０）。

【0363】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）バージョン１のいずれかを発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力は、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。バージョン１ ＤＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、より高いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌（図１４）およびＩＬ－２分泌（図１５）を示したが、より低いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）（図１３）を示した。

【0364】

ＲＰＭＩ８２２６またはＫ５６２腫瘍標的細胞のいずれかとともに共培養した、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）バージョン１のいずれかを発現するＴ細胞のインビトロでのクローン増殖に対する能力を、フローサイトメトリーを用いて比較した。バージョン１ ＤＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞と同等である倍数変化増殖を示した（図１６および１７）。

【0365】

［実施例１０］ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するＴ細胞の結果

【0366】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ１またはＶ２ｂのいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ１またはＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現する（図１１）。

【0367】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ１またはＶ２ｂのいずれかを発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（Ｃ点線）は、ＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）と比べて、より優れたインビトロ細胞殺滅を示し、ＤＡＲ Ｖ２ｂを発現するＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて（線Ｄ）、インビトロでの細胞殺滅が同様であった（図１２）。

【0368】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（「２８Ｚ」線Ｅ）は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）およびＤＡＲ Ｖ２ａを発現するＴ細胞（「ＢＢＺ」線Ｃ）と比べて、顕著により優れたインビトロ細胞殺滅を示し、ＤＡＲ Ｖ２ｃを発現するＴ細胞（「２８ＢＢＺ」点線Ｄ）と比べて同様の殺滅能を示した（図２６）。

【0369】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ１またはＶ２ｂのいずれかを発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力は、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲまたはＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのＩＬ－２分泌を示した（図１５）。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示し（図１３）、ＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べてより高いレベルを示した。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲまたはＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より低いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図１４）。

【0370】

ＲＰＭＩ８２２６またはＫ５６２細胞のいずれかとともに共培養した、抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ１またはＶ２ｂのいずれかを発現するＴ細胞のインビトロでのクローン増殖に対する能力を測定するために、フローサイトメトリーを使用した。ＤＡＲ Ｖ２ｂ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＲＰＭＩ８２２６細胞とともに共培養すると、ＣＡＲまたはＤＡＲ Ｖ１構築物を発現するＴ細胞と比較してより高いレベルの倍数変化増殖を示した（図１６および１７）。

【0371】

異種移植動物モデルにおけるＣＤ３８ ＤＡＲ Ｔ細胞の殺腫瘍活性を測定するために、インビボ異種移植動物モデルを使用した。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系を投与した。ＣＤ３８ ＣＡＲまたはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞を試験マウスに投与した。４週目に、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ｂ）構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスは、ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスと比べて、有意により少ない腫瘍負荷量を示した（図１８）。

【0372】

［実施例１１］ＤＡＲ Ｖ２ｃ構築物を発現するＴ細胞の結果

【0373】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａ（例えば、「ＢＢＺ」）を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、類似のレベルのＤＡＲ Ｖ２ｃ（例えば、「２８ＢＢＺ」）構築物を発現し、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのＤＡＲ Ｖ２ｃ（「２８ＢＢＺ」）が発現される（図２５）。

【0374】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ｃ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（「２８ＢＢＺ」点線Ｄ）は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）およびＤＡＲ Ｖ２ａ構築物（線Ｃ）を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、顕著により高いレベルのインビトロ細胞殺滅を示したが、ＤＡＲ Ｖ２ｂを発現するＴ細胞（「２８Ｚ」線Ｅ）と比べて、同様のレベルの細胞殺滅を示した（図２６）。

【0375】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ２ｂ構築物のいずれかを発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力を、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのＩＬ－２分泌を示し、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、より高いレベルを示した（図２７）。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲまたはＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、わずかにより高いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図２８）。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示したが、ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）を発現する細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、わずかにより低いレベルのＩＦＮγ分泌を示した（図２９）。

【0376】

異種移植動物モデルにおけるＣＤ３８ ＤＡＲ Ｔ細胞の殺腫瘍活性を測定するために、インビボ異種移植動物モデルを使用した。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系（「ＴＲＡＣ ＫＯ」）を投与した。ＣＤ３８ ＣＡＲまたはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞を試験マウスに投与した。４週目に、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスは、ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスと比べて、有意により少ない腫瘍負荷量を示した（図１９）。

【0377】

別のインビボ異種移植動物モデルにおいて、ＤＡＲ Ｖ２ｂまたはＤＡＲ Ｖ２ｃのいずれかを発現するＴ細胞に対して、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するＴ細胞の殺腫瘍活性を直接比較した。陰性対照マウスは、リン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）または活性化Ｔ細胞（「ＡＴＣ」）またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系（「ＴＲＡＣ ＫＯ」）を投与した。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞を試験マウスに投与した。５週目に、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物（「ＢＢＺ」）を発現するＴ細胞で処置したマウスは、ＣＤ３８ ＣＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）またはＶ２ｃ（「２８ＢＢＺ」）構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスと比べて、測定できるほどより少ない腫瘍負荷量を示した（図３０）。

【0378】

［実施例１２］ ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するＴ細胞の結果

【0379】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ２ｂ構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（例えば、「２８Ｚ」）またはＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのＤＡＲ Ｖ２ａ（例えば、「ＢＢＺ」）構築物を発現する（図２５）。

【0380】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するＴ細胞（「ＢＢＺ」線Ｃ）は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）と比べて、より優れたインビトロ細胞殺滅を示したが、ＤＡＲ Ｖ２ｂを発現するＴ細胞（「２８Ｚ」線Ｅ）を発現するＴ細胞またはＤＡＲ Ｖ２ｃを発現するＴ細胞（「２８ＢＢＺ」点線Ｄ）と比べて、より低い細胞殺滅レベルを示した（図２６）。

【0381】

抗ＣＤ３８キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ２ｂ構築物のいずれかを発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力を、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのＩＬ－２分泌を示し、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、より高いレベルを示した（図２７）。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲまたはＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、わずかにより高いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図２８）。ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＣＡＲ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、わずかにより高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示したが、ＤＡＲ Ｖ２ａ（「ＢＢＺ」）を発現する細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比べて、わずかにより低いレベルのＩＦＮγ分泌を示した（図２９）。

【0382】

異種移植動物モデルにおけるＣＤ３８ ＤＡＲ Ｔ細胞の殺腫瘍活性を測定するために、インビボ異種移植動物モデルを使用した。陰性対照マウスに、リン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系（「ＴＲＡＣ ＫＯ」）を投与した。ＣＤ３８ ＣＡＲまたはＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞を試験マウスに投与した。４週目に、ＣＤ３８ ＤＡＲ（Ｖ２ａ）構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスは、ＣＤ３８ ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスと比べて、有意により少ない腫瘍負荷量を示した（図１９）。

【0383】

別のインビボ異種移植動物モデルにおいて、ＤＡＲ Ｖ２ｂまたはＤＡＲ Ｖ２ｃのいずれかを発現するＴ細胞に対して、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するＴ細胞の殺腫瘍活性を直接比較した。陰性対照マウスは、リン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）または活性化Ｔ細胞（「ＡＴＣ」）またはノックアウトＴＲＡＣ遺伝子を有する細胞系（「ＴＲＡＣ ＫＯ」）を投与した。ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２ａ、Ｖ２ｂまたはＶ２ｃ構築物のいずれかを発現するトランスジェニックＴ細胞を試験マウスに投与した。５週目に、ＣＤ３８ ＤＡＲ Ｖ２Ｂ構築物（「ＢＢＺ」）を発現するＴ細胞で処置したマウスは、ＣＤ３８ ＣＡＲ Ｖ２ｂ（「２８Ｚ」）またはＶ２ｃ（「２８ＢＢＺ」）構築物を発現するＴ細胞で処置したマウスと比べて、測定できるほどより少ない腫瘍負荷量を示した（図３０）。

【0384】

［実施例１３］ ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するＴ細胞の結果

【0385】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ３構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａを発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのＤＡＲ Ｖ３構築物を発現する（図２０および３１）。

【0386】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ３構築物を発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ３を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｃ）は、ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）と比較して、より高いレベルのインビトロ細胞殺滅を示した（図２１）。

【0387】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ３構築物を発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力を、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ３を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａを発現するＴ細胞と比較して、顕著により高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示した（図２２）。ＤＡＲ Ｖ３を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、顕著により高いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図２３）。

【0388】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ３を発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力を、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、Ｖ２ａ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、顕著により高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示した（図３３）。ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より低いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図３４）。

【0389】

ＤＡＲ Ｖ２ａまたはＶ３構築物のいずれかを発現するＴ細胞の集団中でのセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）の存在を検出するために、フローサイトメトリーを使用した。ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａを発現するＴ細胞と比べて、より高い百分率のセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）を示した（図２４）。

【0390】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａまたはＶ３構築物を発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（点線Ｃ）は、ＤＡＲ Ｖ３を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｄ）と比較して、同様のレベルのインビトロ細胞殺滅を示した（図３２）。

【0391】

［実施例１４］ ＤＡＲ Ｖ４構築物を発現するＴ細胞の結果

【0392】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞の発現レベルを、フローサイトメトリーを用いて比較した。トランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ２ａまたはＶ４構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より高いレベルのＤＡＲ Ｖ３構築物を発現する（図３１）。

【0393】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ４構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞（線Ｂ）は、ＤＡＲ Ｖ２ａ構築物（点線Ｃ）またはＤＡＲ Ｖ３（線Ｄ）を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、同様のレベルのインビトロ細胞殺滅を示した（図３２）。ＤＡＲ Ｖ４構築物はヒンジ領域を欠いており、細胞殺滅の結果は、いずれも短いヒンジ領域（例えば、ＣＤ２８ヒンジ配列のみ）を含むＶ２ａまたはＶ３構築物を発現するＴ細胞と比べて、ヒンジ領域を欠如するＤＡＲ構築物がＤＡＲ Ｖ４構築物を発現するＴ細胞の細胞殺滅能力を向上させないことを示す。

【0394】

抗ＣＤ３８二量体抗原受容体（ＤＡＲ）Ｖ２ａ、Ｖ３またはＶ４構築物を発現するＴ細胞のサイトカイン分泌能力を、インビトロサイトカイン分泌アッセイにおいて比較した。ＤＡＲ Ｖ４構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するＴ細胞と比較して、顕著に低下したレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を示した（図３３）。ＤＡＲ Ｖ４構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞は、ＤＡＲ Ｖ３構築物を発現するトランスジェニックＴ細胞と比較して、より低いレベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）分泌を示した（図３４）。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35A】

【図35B】

【図35C】

【図35D】

【配列表】

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