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特許7548584抗ＣＤ７９Ｂ抗体およびキメラ抗原レセプターおよびそれらの使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-02
(45)【発行日】2024-09-10
(54)【発明の名称】抗ＣＤ７９Ｂ抗体およびキメラ抗原レセプターおよびそれらの使用方法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240903BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240903BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20240903BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240903BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240903BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240903BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240903BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240903BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240903BHJP
C12P 21/02 20060101ALN20240903BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20240903BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K19/00
C07K14/725
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/13
A61P35/00
A61K39/395 T
C12P21/02 C
C12P21/08
【請求項の数】
18
(21)【出願番号】P 2021523839
(86)(22)【出願日】2019-10-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-07
(86)【国際出願番号】 US2019058710
(87)【国際公開番号】W WO2020092467
(87)【国際公開日】2020-05-07
【審査請求日】2022-10-20
(31)【優先権主張番号】62/752,889
(32)【優先日】2018-10-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】500039463
【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】チュー、フーリャン
(72)【発明者】
【氏名】ニーラプ、サットヴァ エス．
(72)【発明者】
【氏名】ツァオ、チンチン
(72)【発明者】
【氏名】リウ、チンウェイ
【審査官】鳥居 敬司
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２００９／０１２２５６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１６／０１５９９０６（ＵＳ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１７／１７２９８１（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１７／０１５４２７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１６／０３６１３６０（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ０７Ｋ １６／００－１６／４６
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離されたモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体は、ＣＤ７９ｂに特異的に結合し、以下を含有する、モノクローナル抗体：（Ｉ）：
（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号２３と同一であり；
（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号２４と同一であり；
（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号２５と同一であり；
（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号２８と同一であり；
（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号２９と同一であり；及び
（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号３０と同一である；
【請求項2】
操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲであって、以下の抗原結合ドメインを含有する、ＣＡＲ又はＴＣＲ：（Ｉ）：
（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号２３と同一であり；
（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号２４と同一であり；
（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号２５と同一であり；
（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号２８と同一であり；
（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号２９と同一であり；及び
（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号３０と同一である。
【請求項3】
請求項１の抗体又は請求項２の操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲであって、前記抗体又はＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲの抗原結合ドメインが、配列番号２２のＶＨドメインと少なくとも約９５％同一のＶＨドメイン及び配列番号２７のＶＬドメインと少なくとも約９５％同一のＶＬドメインを含む
抗体又は操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項4】
請求項１の抗体又は請求項２の操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲであって、前記抗体又はＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲの抗原結合ドメインが、配列番号２２のＶＨドメインと同一のＶＨドメイン、及び配列番号２７のＶＬドメインと同一のＶＬドメインを含む；、
抗体又は操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項5】
請求項１又は３の抗体であって、該抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はそれらの抗原結合フラグメントである、
抗体。
【請求項6】
（Ｉ）クローン４５のＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号２３、２４及び２５）及びクローン４５のＶ
Ｌ
ドメインのＣＤＲ１～３（配列番号２８、２９及び３０）を含む抗体をコードするアミノ酸配列；を含み、該抗体がＣＤ７９ｂに結合する、組換えポリペプチド。
【請求項7】
請求項１、３、及び４のいずれか１項に記載の抗体又は請求項６に記載の抗体をコードするアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項8】
請求項１、３、及び４のいずれか１項に記載の抗体又は請求項６に記載の抗体をコードするアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチド分子を含む、宿主細胞。
【請求項9】
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、繊毛細胞又は昆虫細胞である、請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項10】
癌を有する被験体を処置するための方法に用いる為の請求項１，３，及び４のいずれか１項に記載の抗体を含む組成物であって、該方法は、有効量の該抗体を被験体に投与する工程を含む、組成物。
【請求項11】
前記癌が、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項12】
ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ及び／又はＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む、操作されたＣＤ７９ｂ標的化キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、請求項２又は３に記載の抗原結合ドメイン、又は請求項１、３、又は４の抗体又はそのフラグメントによる抗原結合ドメインを有する、ＣＡＲ。
【請求項13】
請求項１２に記載のＣＡＲであって、（ａ）該ＣＡＲが、リンカーによってＶＬドメインに連結されたＶＨドメインを含む抗原結合ドメインを含み、
（ｉ）該リンカーが、リンカー１（配列番号４４又は４５）、リンカー２（配列番号４６又は４７）、リンカー３（配列番号４８又は４９）又はリンカー４（配列番号５０又は５１）であるか、又は
（ｉｉ）前記ＣＡＲが、ＶＬ－リンカー１（配列番号４４又は４５）－ＶＨ、ＶＬ－リンカー２（配列番号４６又は４７）－ＶＨ、ＶＬ－リンカー３（配列番号４８又は４９）－ＶＨ、ＶＬ－リンカー４（配列番号５０又は５１）－ＶＨ、ＶＨ－リンカー１（配列番号４４又は４５）－ＶＬ、ＶＨ－リンカー２（配列番号４６又は４７）－ＶＬ、ＶＨ－リンカー３（配列番号４８又は４９）－ＶＬ又はＶＨ－リンカー４（配列番号５０又は５１）－ＶＬを含む；
（ｂ）前記ＣＡＲが、ヒンジを含み、
該ヒンジが、ＣＤ８ヒンジ１（配列番号５２又は５３）、ＣＤ８ヒンジ２（配列番号５４又は５５）、ＣＤ８ヒンジ３（配列番号５６又は５７）、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号５８又は５９）、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号６０又は６１）、ＩｇＧ４ＣＨ２（配列番号６２又は６３）、ＩｇＧ４ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６４又は６５）又はＩｇＧ４ＣＨ１ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６６又は６７）であるか、又は
（ｃ）該ＣＡＲが、膜貫通ドメインを含み、該膜貫通ドメインが、ＣＤ８ＴＭ１（配列番号６８又は６９）、ＣＤ８ＴＭ２（配列番号７０又は７１）又はＣＤ２８ＴＭ（配列番号７２又は７３）である、
ＣＡＲ。
【請求項14】
請求項１２又は１３に記載のＣＡＲをコードする発現ベクター。
【請求項15】
ＣＤ７９ｂ ＣＡＲを発現するように操作された、請求項１２又は１３に記載の宿主細胞。
【請求項16】
請求項１、３及び４のいずれか１項に記載の抗体を薬学的に許容される担体に含む、被験体において癌を治療する方法に使用するための薬学的組成物。
【請求項17】
ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞及び薬学的に許容される担体を含み、該ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞は、請求項１２又は１３に記載のＣＡＲを発現するように操作されている、被験体において癌を治療する方法に使用するための医薬組成物。
【請求項18】
被検体の癌を処置する為の方法に使用する為の、ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物であって、該方法は、有効量の請求項１２又は１３に記載のＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞を被検体に投与する、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０１８年１０月３０日出願の米国仮出願第６２／７５２，８８９の利益を主張する。この仮出願の全体が、参照により本明細書中に援用される。
配列表の援用
配列表の援用
【0002】
２０１９年１０月２９日に作成された７３ＫＢ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）において計測）の「ＵＴＦＣＰ１４０５ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称のファイルに含まれる配列表が、電子提出によって本明細書とともに出願され、参照により本明細書中に援用される。
背景
１．分野
背景
１．分野
【0003】
本発明は、概して、免疫学および医学の分野に関する。より詳細には、本発明は、ＣＤ７９ｂキメラ抗原レセプターおよびその使用方法に関する。
【背景技術】
【0004】
２．関連技術の説明
ＣＤ１９を標的化するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、Ｂ細胞悪性腫瘍において非常に有効である。最近、２つの抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療用製品が、再発性または治療抵抗性のＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および／または大細胞型Ｂ細胞リンパ腫に対して米国ＦＤＡによって承認された。重要な治験において、１年を超えて継続する永続性の寛解が、これらの患者の約４０～５０％において観察された。しかしながら、約５０～６０％において再発または進行が起き、抵抗性の主な原因は、ＣＤ１９抗原の喪失に起因するとみられる。したがって、これらの患者における成果をさらに改善するために新規標的に対するＣＡＲ Ｔ細胞療法を開発することが急務である。
ＣＤ１９を標的化するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、Ｂ細胞悪性腫瘍において非常に有効である。最近、２つの抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療用製品が、再発性または治療抵抗性のＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および／または大細胞型Ｂ細胞リンパ腫に対して米国ＦＤＡによって承認された。重要な治験において、１年を超えて継続する永続性の寛解が、これらの患者の約４０～５０％において観察された。しかしながら、約５０～６０％において再発または進行が起き、抵抗性の主な原因は、ＣＤ１９抗原の喪失に起因するとみられる。したがって、これらの患者における成果をさらに改善するために新規標的に対するＣＡＲ Ｔ細胞療法を開発することが急務である。
【発明の概要】
【0005】
第１の実施形態において、本開示は、単離されたモノクローナル抗体を提供し、その抗体は、ＣＤ７９ｂに特異的に結合し、（Ｉ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号１０と同一である；（ＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号１３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号１４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号１５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号１８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号１９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号２０と同一である；または（ＩＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号２３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号２４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号２５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号２８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号２９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号３０と同一である、を含む。
【0006】
いくつかの態様において、上記抗体は、配列番号２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。ある特定の態様において、上記抗体は、配列番号１２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号１７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。いくつかの態様において、上記抗体は、配列番号２２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号２７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。
【0007】
ある特定の態様において、上記抗体は、組換え抗体である。上記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡまたはそれらの抗原結合フラグメントであり得る。上記抗体は、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、一価のｓｃＦｖ、二価のｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体であり得る。ある特定の態様において、上記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体または脱免疫化（ｄｅ－ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体である。上記抗体は、造影剤、化学療法剤、トキシンまたは放射性核種に結合体化され得る。さらなる実施形態は、薬学的に許容され得るキャリア中に上記実施形態のＣＤ７９ｂ抗体を含む組成物を提供する。上記実施形態のＣＤ７９抗体をコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド分子も本明細書中に提供される。
【0008】
別の実施形態は、クローン１４のＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号３、４および５）およびクローン１４のＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号８、９および１０）を含む抗体ＶＨドメインを含む組換えポリペプチドを提供する。さらなる実施形態は、クローン１６ａのＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号１３、１４および１５）およびクローン１６ａのＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号１８、１９および２０）を含む抗体ＶＨドメインを含む組換えポリペプチドを提供する。クローン４５のＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号２３、２４および２５）およびクローン４５のＶＨドメインのＣＤＲ１～３（配列番号２８、２９および３０）を含む抗体ＶＨドメインを含む組換えポリペプチドがさらに本明細書中に提供される。さらなる実施形態は、上記実施形態のＣＤ７９ｂポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。上記実施形態のＣＤ７９ｂ抗体または組換えポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチド分子を含む宿主細胞も本明細書中に提供される。その宿主細胞は、哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、繊毛細胞または昆虫細胞であり得る。
【0009】
別の実施形態は、癌を有する被験体を処置するための方法を提供し、その方法は、有効量の上記実施形態のＣＤ７９ｂ抗体を被験体に投与する工程を含む。いくつかの態様において、その癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。ある特定の態様において、その抗体は、薬学的に許容され得る組成物中に存在する。いくつかの態様において、その抗体は、全身投与される。その抗体は、静脈内に、皮内に、腫瘍内に、筋肉内に、腹腔内に、皮下に、または局所的に投与され得る。追加の態様において、その方法は、少なくとも第２の抗癌療法を被験体に投与する工程をさらに含む。いくつかの態様において、第２の抗癌療法は、外科的療法、化学療法、放射線療法、寒冷療法、ホルモン療法、免疫療法またはサイトカイン療法である。ある特定の態様において、第２の抗癌療法は、養子Ｔ細胞療法を含む。
【0010】
さらなる実施形態は、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインおよび／またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む操作されたＣＤ７９ｂ標的化キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を提供する。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号８０または８１と少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一であり得る。ＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、配列番号７４または７５と少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一であり得る。４－１ＢＢシグナル伝達ドメインは、配列番号７６または７７と少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一であり得る。４－１ＢＢシグナル伝達ドメインは、配列番号７８または７９と少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一であり得る。
【0011】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクターによってコードされる。特定の態様において、上記ＣＡＲは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群より選択される抗原結合ドメインを含む。その抗原結合ドメインは、上記実施形態のＣＤ７９ｂ抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦＶ）を含み得る。
【0012】
いくつかの態様において、上記抗原結合ドメインは、（Ｉ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号１０と同一である；（ＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号１３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号１４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号１５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号１８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号１９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号２０と同一である；または（ＩＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号２３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号２４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号２５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号２８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号２９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号３０と同一である、を含む。ある特定の態様において、上記抗原結合ドメインは、配列番号３１、３２または３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一を有するｓｃＦＶを含む。
【0013】
追加の態様において、上記ＣＡＲは、形質導入マーカーおよび／または安全スイッチをさらに含む。その形質導入マーカーは、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）（例えば、配列番号８２または８３）であり得る。ある特定の態様において、その形質導入マーカーおよび／または安全スイッチは、切断型の上皮成長因子（ＥＧＦＲ）（例えば、配列番号４０または４１）である。いくつかの態様において、その形質導入マーカーおよび／または安全スイッチは、２Ａペプチドなどの切断ペプチドによって上記ＣＡＲに連結されている。いくつかの態様において、その２Ａペプチドは、Ｔ２Ａペプチド（配列番号８４または８５）である。
【0014】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、８６、８７または８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0015】
ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、第２の抗原結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ１９抗原結合ドメイン、ＣＤ２０抗原結合ドメインまたはＣＤ２２抗原結合ドメインである。
【0016】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、リンカーを含む。例えば、そのリンカーは、リンカー１（配列番号４４または４５）、リンカー２（配列番号４６または４７）、リンカー３（配列番号４８または４９）またはリンカー４（配列番号５０または５１）であり得る。ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、ヒンジを含む。例えば、そのヒンジは、ＣＤ８ヒンジ１（配列番号５２または５３）、ＣＤ８ヒンジ２（配列番号５４または５５）、ＣＤ８ヒンジ３（配列番号５６または５７）、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号５８または５９）、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号６０または６１）、ＩｇＧ４ＣＨ２（配列番号６２または６３）、ＩｇＧ４ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６４または６５）またはＩｇＧ４ＣＨ１ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６６または６７）であり得る。特定の態様において、上記ＣＡＲは、膜貫通ドメイン（ＴＭ）を含む。例えば、そのＴＭは、ＣＤ８ＴＭ１（配列番号６８または６９）、ＣＤ８ＴＭ２（配列番号７０または７１）またはＣＤ２８ＴＭ（配列番号７２または７３）であり得る。いくつかの態様において、上記ＣＡＲ構築物は、ＶＬ－リンカー１－ＶＨ；ＶＬ－リンカー２－ＶＨ；ＶＬ－リンカー３－ＶＨ；ＶＬ－リンカー４－ＶＨ；ＶＨ－リンカー１－ＶＬ；ＶＨ－リンカー２－ＶＬ；ＶＨ－リンカー３－ＶＬ；またはＶＨ－リンカー４－ＶＬを含む。ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、ＶＬ－－リンカー－－ＶＨ－－ヒンジ－ＴＭ－－シグナル伝達ドメインを含む。他の態様において、上記ＣＡＲは、ＶＨ－－リンカー－ＶＬ－－ヒンジ－ＴＭ－－シグナル伝達ドメインを含む。
【0017】
別の実施形態において、（Ｉ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号１０と同一である；（ＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号１３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号１４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号１５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号１８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号１９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号２０と同一である；または（ＩＩＩ）：（ａ）第１のＶＨＣＤＲは、配列番号２３と同一であり；（ｂ）第２のＶＨＣＤＲは、配列番号２４と同一であり；（ｃ）第３のＶＨＣＤＲは、配列番号２５と同一であり；（ｄ）第１のＶＬＣＤＲは、配列番号２８と同一であり；（ｅ）第２のＶＬＣＤＲは、配列番号２９と同一であり；（ｆ）第３のＶＬＣＤＲは、配列番号３０と同一である、を含む抗原結合ドメインを有する、操作されたＣＤ７９ｂ ＣＡＲまたはＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）が提供される。
【0018】
いくつかの態様において、上記抗原結合ドメインは、配列番号２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。ある特定の態様において、上記抗原結合ドメインは、配列番号１２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号１７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。いくつかの態様において、上記抗原結合ドメインは、配列番号２２のＶＨドメインと少なくとも約８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一のＶＨドメインおよび配列番号２７のＶＬドメインと少なくとも約８０％同一のＶＬドメインを含む。
【0019】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、１つ以上のシグナル伝達ドメインＣＤ３ξ、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７またはそれらの組み合わせを含む。特定の態様において、上記ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。
【0020】
ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクターによってコードされる。
【0021】
ある特定の態様において、上記抗原結合ドメインは、配列番号３１、３２または３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一を有するｓｃＦＶを含む。
【0022】
追加の態様において、上記ＣＡＲは、形質導入マーカーおよび／または安全スイッチをさらに含む。その形質導入マーカーは、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）（例えば、配列番号８２または８３）であり得る。ある特定の態様において、その形質導入マーカーおよび／または安全スイッチは、切断型の上皮成長因子（ＥＧＦＲ）（例えば、配列番号４０または４１）である。いくつかの態様において、その形質導入マーカーおよび／または安全スイッチは、２Ａペプチドなどの切断ペプチドによって上記ＣＡＲに連結されている。いくつかの態様において、その２Ａペプチドは、Ｔ２Ａペプチド（配列番号８４または８５）である。
【0023】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、リンカーを含む。例えば、そのリンカーは、リンカー１（配列番号４４または４５）、リンカー２（配列番号４６または４７）、リンカー３（配列番号４８または４９）またはリンカー４（配列番号５０または５１）であり得る。ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、ヒンジを含む。例えば、そのヒンジは、ＣＤ８ヒンジ１（配列番号５２または５３）、ＣＤ８ヒンジ２（配列番号５４または５５）、ＣＤ８ヒンジ３（配列番号５６または５７）、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号５８または５９）、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号６０または６１）、ＩｇＧ４ＣＨ２（配列番号６２または６３）、ＩｇＧ４ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６４または６５）またはＩｇＧ４ＣＨ１ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６６または６７）であり得る。特定の態様において、上記ＣＡＲは、膜貫通ドメイン（ＴＭ）を含む。例えば、そのＴＭは、ＣＤ８ＴＭ１（配列番号６８または６９）、ＣＤ８ＴＭ２（配列番号７０または７１）またはＣＤ２８ＴＭ（配列番号７２または７３）であり得る。いくつかの態様において、上記ＣＡＲ構築物は、ＶＬ－リンカー１－ＶＨ；ＶＬ－リンカー２－ＶＨ；ＶＬ－リンカー３－ＶＨ；ＶＬ－リンカー４－ＶＨ；ＶＨ－リンカー１－ＶＬ；ＶＨ－リンカー２－ＶＬ；ＶＨ－リンカー３－ＶＬ；またはＶＨ－リンカー４－ＶＬを含む。ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、ＶＬ－－リンカー－－ＶＨ－－ヒンジ－ＴＭ－－シグナル伝達ドメインを含む。他の態様において、上記ＣＡＲは、ＶＨ－－リンカー－ＶＬ－－ヒンジ－ＴＭ－－シグナル伝達ドメインを含む。
【0024】
いくつかの態様において、上記ＣＡＲは、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、８６、８７または８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0025】
ある特定の態様において、上記ＣＡＲは、第２の抗原結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ１９抗原結合ドメイン、ＣＤ２０抗原結合ドメインまたはＣＤ２２抗原結合ドメインである。
【0026】
別の実施形態において、本実施形態のＣＤ７９ｂ ＣＡＲをコードする発現ベクターが提供される。
【0027】
本実施形態のＣＤ７９ｂなどのＣＤ７９ｂ ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように操作された宿主細胞がさらに本明細書中に提供される。いくつかの態様において、その宿主細胞は、Ｔ細胞などの免疫細胞である。いくつかの態様において、そのＴ細胞は、初代ヒトＴ細胞またはＴＩＬである。ある特定の態様において、そのＴ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様において、その初代ヒトＴ細胞は、健康ドナーから得られる。Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞であってもよいし、同種異系Ｔ細胞であってもよい。いくつかの態様において、その細胞は、ＣＲＩＳＰＲシステムまたはトランスポザーゼシステムを用いて操作される（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲで）。
【0028】
ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本実施形態のＣＡＲ Ｔ細胞）および薬学的キャリアを含む薬学的組成物も本明細書中に提供される。被験体の癌を処置するための、有効量のＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本実施形態のＣＡＲ Ｔ細胞）を含む組成物がさらに本明細書中に提供される。別の実施形態において、被験体の癌を処置するための、有効量のＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本実施形態のＣＡＲ Ｔ細胞）を含む組成物の使用が提供される。
【0029】
さらなる実施形態において、被験体の癌を処置するための方法が提供され、その方法は、有効量のＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本実施形態のＣＡＲ Ｔ細胞）を被験体に投与する工程を含む。いくつかの態様において、その癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫または慢性リンパ性白血病）である。ある特定の態様において、その癌は、ＣＤ７９ｂを発現している癌である。
【0030】
いくつかの態様において、上記被験体は、以前にＣＤ１９ ＣＡＲ療法を投与されたことがある。ある特定の態様において、上記被験体は、ＣＤ１９抗原の喪失などに起因して、ＣＤ１９ ＣＡＲ療法に抵抗性である。ある特定の態様において、上記被験体は、ＣＤ１９陰性腫瘍を再発している。
【0031】
ある特定の態様において、上記ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞は、静脈内に、皮内に、腫瘍内に、筋肉内に、腹腔内に、皮下に、または局所的に投与される。追加の態様において、上記方法は、少なくとも第２の抗癌療法を被験体に投与する工程をさらに含む。いくつかの態様において、第２の抗癌療法は、外科的療法、化学療法、放射線療法、寒冷療法、ホルモン療法、免疫療法またはサイトカイン療法である。
【0032】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかしながら、この詳細な説明から当業者には本発明の趣旨および範囲内での様々な変更および改変が明らかになるので、その詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、単に例証として与えられることを理解するべきである。
【0033】
以下の図面は、本明細書の一部を成し、本発明のある特定の態様をさらに実証するために含められる。本発明は、本明細書中に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と併せてこれらの図面の１つ以上を参照することによって、より理解される可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【0035】
【図2A】ＣＤ７９ｂを形質導入された細胞のフローサイトメトリー解析。
【図2B】ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体の結合親和性。
【図2C】ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体の特徴付け。
【図2D】リンパ腫細胞株のクローン１４染色。
【0036】
【図3A】ＣＤ７９ｂ ＣＡＲの構築物を描写している概略図。
【図3B】ＣＤ７９ｂ ＣＡＲおよびＣＤ１９ ＣＡＲのフローサイトメトリー解析。
【図3C】形質導入されていないＴ細胞をコントロールとして用いたときのＣＤ７９ｂ ＣＡＲおよびＣＤ１９ ＣＡＲの細胞傷害率。
【図3D】形質導入されていないＴ細胞をコントロールとして用いたときのＣＤ７９ｂ ＣＡＲおよびＣＤ１９ ＣＡＲのフローサイトメトリー。
【0037】
【図4A】ＣＤ７９ｂ ＣＡＲおよびＣＤ１９エキソン２Δスプライスバリアントと共培養されたＴ細胞。
【図4B】５：１のエフェクター：標的比で４日間インキュベートしたＣＡＲの有効性に関するフローサイトメトリー解析。
【図4C】ＣＤ７９ｂ ＣＡＲを用いたときのＤａｕｄｉ細胞の絶対細胞数。
【図4D】ＣＤ７９ｂ ＣＡＲを用いたときのＣＤ１９ノックダウン細胞の絶対細胞数。
【0038】
【発明を実施するための形態】
【0039】
例証的な実施形態の説明
ＣＤ７９ｂは、汎Ｂ細胞系列マーカーであり、Ｂ細胞レセプター複合体の重要な構成要素である。ＣＤ７９ｂは、正常なＢ細胞およびＢ細胞悪性腫瘍において広く発現され、その発現は通常、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞療法の後に再発するＣＤ１９陰性腫瘍において保持される。したがって、ある特定の実施形態において、本開示は、ＣＤ７９ｂ－ＣＡＲ Ｔ細胞などのための、ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体およびＣＤ７９ｂ特異的ＣＡＲを提供する。
ＣＤ７９ｂは、汎Ｂ細胞系列マーカーであり、Ｂ細胞レセプター複合体の重要な構成要素である。ＣＤ７９ｂは、正常なＢ細胞およびＢ細胞悪性腫瘍において広く発現され、その発現は通常、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞療法の後に再発するＣＤ１９陰性腫瘍において保持される。したがって、ある特定の実施形態において、本開示は、ＣＤ７９ｂ－ＣＡＲ Ｔ細胞などのための、ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体およびＣＤ７９ｂ特異的ＣＡＲを提供する。
【0040】
本研究は、インビトロおよびインビボモデルにおいて本ＣＤ７９ｂ特異的ＣＡＲ Ｔ細胞生成物の有効性を実証した。ヒトＣＤ７９ｂに対して３つのマウスモノクローナル抗体をハイブリドーマ技術によって開発し、それらの抗体が、組換えヒトＣＤ７９ｂに特異的に結合すること、高親和性（１．４４～１７．８ｎＭのＫｄ範囲）を有すること、および複数のリンパ腫細胞株を染色することが実証された。次に、ＣＤ７９ｂ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をクローニングし、ＣＤ３ζおよびＣＤ２８／４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ用のレンチウイルス構築物を開発した。その抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ構築物は、レンチウイルスを用いて、健康ドナー由来の初代ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に７０％超の形質導入効率で形質導入され得ることが実証された。
【0041】
抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｄａｕｄｉバーキットリンパ腫細胞株およびＭｉｎｏマントル細胞リンパ腫細胞株に対して、コントロール抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞に匹敵する有意な細胞傷害活性を示したが、形質導入されていないＴ細胞はそのような活性は示さなかったことが観察された。より重要なことには、抗ＣＤ７９ｂは、ＣＤ１９－ＣＤ７９ｂ＋リンパ腫細胞を溶解したが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９－ＣＤ７９ｂ＋リンパ腫細胞を溶解しなかった。また、ＣＤ４＋抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞およびＣＤ８＋抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞をリンパ腫細胞と共培養すると、ＣＤ４＋抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞とＣＤ８＋抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の両方において有意な脱顆粒が観察された。また、ＮＳＧマウスにおけるＭｉｎｏリンパ腫異種移植モデルに対する抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性をインビボにおいて調べた。ルシフェラーゼで標識されたＭｉｎｏマントル細胞リンパ腫細胞を、２×１０６腫瘍細胞／マウスでＮＳＧマウスにＩＶ注射した。１８日後、マウスを、１０×１０６Ｔ細胞／マウスにおいて、形質導入されていない初代Ｔ細胞、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞または抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞で尾静脈を介して処置した。生物発光イメージングを用いて、腫瘍量を評価した。結果は、形質導入されていないＴ細胞で処置されたマウスでは腫瘍成長の進行を示した。一方で、抗ＣＤ１９－および抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置されたマウスでは、腫瘍成長が阻害され、生存時間が改善された。したがって、これらの結果は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者におけるその新規抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の有効性を示した。これは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞療法後のＣＤ１９喪失に起因する抵抗性を克服するための新規ストラテジーとなり得る。
【0042】
いくつかの態様において、本抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ構築物は、レンチウイルスベクターによってコードされる。そのベクターは、Ｔ細胞などの免疫細胞に形質導入され得る。その構築物は、ＣＤ２８、ＣＤ３ζおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含み得る。その構築物は、ｅＧＦＰまたは切断型のＥＧＦＲドメインなどの形質導入マーカーを含み得る。その形質導入マーカーは、２Ａペプチドなどの切断ペプチドによってＣＡＲに連結され得る。
【0043】
本明細書中に提供されるＣＤ７９ｂ特異的ＣＡＲ免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を投与することによって癌を処置する方法が、本明細書中にさらに提供される。その癌は、ＣＤ７９ｂを発現しているＢ細胞悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫または慢性リンパ性白血病）であり得る。本治療は、抗ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ細胞療法の後にＣＤ１９陰性腫瘍を再発したＢ細胞悪性腫瘍を有する被験体を処置するために使用され得る。
Ｉ．定義
Ｉ．定義
【0044】
本明細書中で使用されるとき、特定の構成要素に関する「本質的に含まない」は、その特定の構成要素が、意図的に組成物に製剤化されていないことおよび／または夾雑物としてでさえもしくは微量でさえ存在しないことを意味するために本明細書中で使用される。ゆえに、ある組成物の任意の意図されない混入に起因する、その特定の構成要素の総量は、０．０５％未満、好ましくは、０．０１％未満である。標準的な分析方法ではその特定の構成要素の量を検出できない組成物が最も好ましい。
【0045】
本明細書中で使用されるとき、「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味し得る。請求項で使用されるとき、語「ａ」または「ａｎ」は、語「～を含む」とともに使用されるとき、１つまたは１つより多いことを意味し得る。
【0046】
請求項での用語「または」の使用は、選択肢だけを指すと明示的に示されない限り、またはそれらの選択肢が相互排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢だけおよび「および／または」を指すという定義を支持する。本明細書中で使用されるとき、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のものを意味し得る。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、述べられている値プラスまたはマイナス５％を意味する。
【0047】
疾患もしくは状態を「処置する」または疾患もしくは状態の処置とは、その疾患の徴候または症状を軽減する目的で、１つ以上の薬物を患者に投与することを含み得るプロトコルを実行することを指す。処置の望ましい効果としては、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復または緩和、および予後の緩解または改善が挙げられる。軽減は、現れる疾患または状態の徴候または症状が現れた後のみならず現れる前に生じ得る。したがって、「処置する」または「処置」は、疾患または望ましくない状態を「予防する」またはそれらの「予防」を含み得る。さらに、「処置する」または「処置」は、徴候または症状の完全な軽減を必要とせず、治癒を必要とせず、詳細には、患者に対して周辺効果しか及ぼさないプロトコルを含む。
【0048】
本願全体にわたって使用される用語「治療効果」または「治療的に有効な」とは、この状態に対する医学的処置に関して被験体の福祉を促進または向上する何らかのことを指す。これには、ある疾患の徴候または症状の頻度または重症度の低下が含まれるが、これらに限定されない。例えば、癌の処置は、例えば、腫瘍サイズの減少、腫瘍の侵襲性の低下、癌の成長速度の低下、または転移の予防を含み得る。癌の処置とは、癌を有する被験体の生存時間の延長のことも指し得る。
【0049】
「被験体」および「患者」とは、ヒトまたは非ヒト、例えば、霊長類、哺乳動物および脊椎動物のことを指す。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。
【0050】
句「薬学的または薬理学的に許容され得る」とは、ヒトなどの動物に適宜投与されたとき、有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応をもたらさない分子実体および組成物のことを指す。抗体またはさらなる活性成分を含む薬学的組成物の調製は、本開示に照らせば当業者に公知である。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与の場合、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓが要求する無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の規格を満たすべきであることが理解される。
【0051】
本明細書中で使用されるとき、「薬学的に許容され得るキャリア」は、当業者に公知であるように、任意のおよびすべての水性溶媒（例えば、水、アルコール溶液／水溶液、食塩水、非経口ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなど）、非水溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル）、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガス）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、色素、流動性および栄養補給剤、そのような同様の材料ならびにそれらの組み合わせを含む。薬学的組成物中の様々な構成要素のｐＨおよび正確な濃度は、周知のパラメータに従って調整される。
ＩＩ．ＣＤ７９ｂ抗体
ＩＩ．ＣＤ７９ｂ抗体
【0052】
ある特定の実施形態において、ＣＤ７９ｂの少なくとも一部に結合し、ＣＤ７９ｂシグナル伝達を阻害する抗体またはそのフラグメントが企図される。本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」は、任意の免疫学的結合剤（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよび遺伝的に改変されたＩｇＧ）ならびに抗原結合活性を保持する抗体ＣＤＲドメインを含むポリペプチドのことを広く指すことを目的としている。抗体は、キメラ抗体、親和性成熟した抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体または抗原結合抗体フラグメントまたは天然リガンドもしくは合成リガンドからなる群より選択され得る。好ましくは、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、モノクローナル抗体またはヒト化抗体である。
【0053】
したがって、公知の手段によっておよび本明細書中に記載されるように、ＣＤ７９ｂ抗原またはそのエピトープが、天然の起源から単離されているか、天然の化合物の合成誘導体またはバリアントであるかにかかわらず、ＣＤ７９ｂ、１つ以上のそのそれぞれのエピトープまたは前述のいずれかの結合体に特異的な、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体、抗体フラグメントならびに結合ドメインおよびＣＤＲ（前述のいずれかの操作された形態を含む）が作製され得る。
【0054】
本実施形態に適した抗体フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる「Ｆｄ」フラグメント；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなる「Ｆｖ」フラグメント；（ｉｖ）ＶＨドメインからなる「ｄＡｂ」フラグメント；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｖｉｉ）ＶＨドメインとＶＬドメインとが、それら２つのドメインが会合して結合ドメインを形成するのを可能にするペプチドリンカーによって連結されている、一本鎖Ｆｖ分子（「ｓｃＦｖ」）；（ｖｉｉｉ）二重特異的一本鎖Ｆｖ二量体（米国特許第５，０９１，５１３号を参照のこと）；および（ｉｘ）遺伝子融合によって構築される多価または多重特異性のフラグメントであるダイアボディ（米国特許出願公開２００５０２１４８６０）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｖ、ｓｃＦｖまたはダイアボディ分子は、ＶＨドメインとＶＬドメインとを連結するジスルフィド架橋の組み込みによって安定化され得る。ＣＨ３ドメインに接続されたｓｃＦｖを含むミニボディも作製され得る。
【0055】
抗体様結合性ペプチド模倣物も実施形態において企図される。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）には、切り詰められた抗体として作用し、血清半減期がより長い、ならびに合成方法がより煩雑でないという一定の利点を有するペプチドである「抗体様結合性ペプチド模倣物」（ＡＢｉＰ）が記載されている。
【0056】
ＣＤ７９ｂに特異的な抗体を作製するために、ＣＤ７９ｂ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質などの抗原を動物に接種することができる。抗原は、免疫応答を高めるために別の分子に結合または結合体化されることが多い。本明細書中で使用されるとき、結合体は、動物において免疫応答を誘発するために用いられる抗原に結合された任意のペプチド、ポリペプチド、タンパク質または非タンパク質性物質である。抗原接種に応答して動物において産生される抗体は、種々の個別の抗体産生Ｂリンパ球から産生される種々の非同一分子（ポリクローナル抗体）を含む。ポリクローナル抗体は、それぞれが同じ抗原上の異なるエピトープを認識し得る、抗体種の混合集団である。ある動物におけるポリクローナル抗体産生に対して厳密な条件が与えられると、その動物の血清中の抗体のほとんどが、その動物が免疫された抗原性化合物上の集合的エピトープを認識する。この特異性は、目的の抗原またはエピトープを認識するそれらの抗体だけを選択する親和性精製によってさらに高められる。
【0057】
モノクローナル抗体は、単一種の抗体であり、すべての抗体産生細胞が単一のＢリンパ球細胞株に由来するので、各抗体分子が同じエピトープを認識する。モノクローナル抗体（ＭＡｂ）を作製するための方法は、一般に、ポリクローナル抗体を調製するための方針と同じ方針で始まる。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体の作製において、マウスおよびラットなどのげっ歯類が使用される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体の作製において、ウサギ細胞、ヒツジ細胞またはカエル細胞が使用される。ラットの使用は、周知であり、一定の利点を提供し得る。マウス（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス）が慣例的に使用され、一般に、安定した融合物を高率でもたらす。
【0058】
ハイブリドーマ技術は、ＣＤ７９ｂ抗原で予め免疫されたマウス由来の単一のＢリンパ球と不死のミエローマ細胞（通常、マウスミエローマ）との融合を必要とする。この技術は、単一の抗体産生細胞を不特定多数の世代にわたって伝播する方法を提供し、同じ抗原特異性またはエピトープ特異性を有する無制限の量の構造的に同一の抗体（モノクローナル抗体）が作製され得る。
【0059】
血漿Ｂ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ５－ＣＤ１９＋）は、免疫されたウサギから調製されたばかりのウサギ末梢血単核球から単離され得、ＣＤ７９ｂ結合細胞についてさらに選択され得る。抗体産生Ｂ細胞を濃縮した後、全ＲＮＡが単離され、ｃＤＮＡ合成され得る。重鎖と軽鎖の両方の抗体可変領域のＤＮＡ配列が、増幅され得、ファージディスプレイＦａｂ発現ベクター内に構築され得、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換され得る。ＣＤ７９ｂに特異的に結合するＦａｂは、複数回の濃縮パニングを通じて選抜され得、配列決定され得る。選択された、ＣＤ７９ｂに結合するヒットは、ヒト胎児腎（ＨＥＫ２９３）細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において哺乳動物発現ベクター系を用いてウサギ型およびウサギ／ヒトキメラ型の完全長ＩｇＧとして発現され得、高速タンパク質液体クロマトグラフィ（ＦＰＬＣ）分離ユニットとともにプロテインＧ樹脂を用いて精製され得る。
【0060】
１つの実施形態において、上記抗体は、キメラ抗体、例えば、異種非ヒト配列、ヒト配列またはヒト化配列（例えば、フレームワーク配列および／または定常ドメイン配列）に移植された非ヒトドナー由来の抗原結合配列を含む抗体である。モノクローナル抗体の軽鎖定常ドメインおよび重鎖定常ドメインをヒト起源の類似のドメインで置き換えてインタクトな外来性抗体の可変領域を残す方法が開発されている。あるいは、ヒト免疫グロブリン遺伝子が導入されたマウスにおいて、「完全ヒト」モノクローナル抗体が産生される。げっ歯類、例えば、マウスのアミノ酸配列とヒトのアミノ酸配列との両方を有する抗体可変ドメインを組換え的に構築することによって、モノクローナル抗体の可変ドメインをよりヒトの形態に変換する方法も開発されている。「ヒト化」モノクローナル抗体では、超可変ＣＤＲだけが、マウスモノクローナル抗体に由来し、フレームワーク領域および定常領域は、ヒトアミノ酸配列に由来する（米国特許第５，０９１，５１３号および同第６，８８１，５５７号を参照のこと）。げっ歯類に特徴的な、抗体内のアミノ酸配列を、ヒト抗体の対応する位置に見られるアミノ酸配列に置き換えることにより、治療で使用している間に有害な免疫反応が起きる可能性が低下すると考えられている。抗体を産生するハイブリドーマまたは他の細胞は、そのハイブリドーマによって産生される抗体の結合特異性を変化させても変化させなくてもよい、遺伝子突然変異または他の変更にも供され得る。
【0061】
様々な動物種においてポリクローナル抗体を産生するための方法、ならびにヒト化抗体、キメラ抗体および完全ヒト抗体をはじめとした様々なタイプのモノクローナル抗体を作製するための方法は、当該分野で周知であり、予測可能性が高い。例えば、以下の米国特許および米国特許出願には、そのような方法の有効な説明が提供されている：米国特許出願番号２００４／０１２６８２８および同２００２／０１７２６７７；ならびに米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，１９６，２６５号；同第４，２７５，１４９号；同第４，２７７，４３７号；同第４，３６６，２４１号；同第４，４６９，７９７号；同第４，４７２，５０９号；同第４，６０６，８５５号；同第４，７０３，００３号；同第４，７４２，１５９号；同第４，７６７，７２０号；同第４，８１６，５６７号；同第４，８６７，９７３号；同第４，９３８，９４８号；同第４，９４６，７７８号；同第５，０２１，２３６号；同第５，１６４，２９６号；同第５，１９６，０６６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，４２０，２５３号；同第５，５６５，３３２号；同第５，５７１，６９８号；同第５，６２７，０５２号；同第５，６５６，４３４号；同第５，７７０，３７６号；同第５，７８９，２０８号；同第５，８２１，３３７号；同第５，８４４，０９１号；同第５，８５８，６５７号；同第５，８６１，１５５号；同第５，８７１，９０７号；同第５，９６９，１０８号；同第６，０５４，２９７号；同第６，１６５，４６４号；同第６，３６５，１５７号；同第６，４０６，８６７号；同第６，７０９，６５９号；同第６，７０９，８７３号；同第６，７５３，４０７号；同第６，８１４，９６５号；同第６，８４９，２５９号；同第６，８６１，５７２号；同第６，８７５，４３４号；および同第６，８９１，０２４号。本明細書に引用されるすべての特許、特許出願公報および他の刊行物ならびにそれらに引用されているすべての特許、特許出願公報および他の刊行物が、参照により本願に援用される。
【0062】
抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源から産生され得る。好ましくは、抗体は、ヒツジ、ネズミ科（例えば、マウスおよびラット）、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマまたはニワトリの抗体である。さらに、より新しい技術によって、ヒト抗体の開発およびヒトコンビナトリアル抗体ライブラリーからのスクリーニングが可能になる。例えば、参照により本明細書中に援用される米国特許第６，９４６，５４６号に記載されているように、バクテリオファージ抗体発現技術によって、動物の免疫化がなくても特異的抗体の作製が可能である。
【0063】
ＣＤ７９ｂに対する抗体が、その抗体の動物種、モノクローナル細胞株または他の起源を問わず、ＣＤ７９ｂの効果を中和または相殺する能力を有することは十分に予想される。ある特定の動物種が、抗体の「Ｆｃ」部分を介した補体系の活性化に起因してアレルギー反応を引き起こす可能性が高いかもしれないという理由で、治療用抗体の作製には好ましくない場合がある。しかしながら、抗体全体を酵素的に消化して、「Ｆｃ」（補体結合）フラグメント、および結合ドメインまたはＣＤＲを有する抗体フラグメントにしてもよい。Ｆｃ部分を除去することにより、その抗原抗体フラグメントが望ましくない免疫学的応答を誘発する可能性は低下するので、Ｆｃを有しない抗体は、予防的または治療的な処置に対して優先され得る。上に記載されたように、他の種において産生された抗体または他の種由来の配列を有する抗体を動物に投与したことに起因する有害な免疫学的結果を低減または排除するために、キメラまたは部分的にヒトまたは完全にヒトになるように抗体を構築してもよい。
【0064】
置換バリアントは、通常、タンパク質内の１つ以上の部位の１つのアミノ酸から別のアミノ酸への交換を含み、他の機能または特性を失ってまたは失わずに、そのポリペプチドの１つ以上の特性を調節するようにデザインされ得る。置換は、保存的であってよく、すなわち、１つのアミノ酸が、形状および電荷が似たアミノ酸で置き換えられる。保存的置換は、当該分野で周知であり、それらとしては、例えば、アラニンからセリンへ；アルギニンからリジンへ；アスパラギンからグルタミンまたはヒスチジンへ；アスパラギン酸からグルタミン酸へ；システインからセリンへ；グルタミンからアスパラギンへ；グルタミン酸からアスパラギン酸へ；グリシンからプロリンへ；ヒスチジンからアスパラギンまたはグルタミンへ；イソロイシンからロイシンまたはバリンへ；ロイシンからバリンまたはイソロイシンへ；リジンからアルギニンへ；メチオニンからロイシンまたはイソロイシンへ；フェニルアラニンからチロシン、ロイシンまたはメチオニンへ；セリンからトレオニンへ；トレオニンからセリンへ；トリプトファンからチロシンへ；チロシンからトリプトファンまたはフェニルアラニンへ；およびバリンからイソロイシンまたはロイシンへの変化が挙げられる。あるいは、置換は、当該ポリペプチドの機能または活性が影響を受けるような非保存的な置換であってもよい。非保存的変更は、通常、ある残基を化学的に似ていない残基で置換すること、例えば、極性アミノ酸または荷電アミノ酸を非極性アミノ酸または非荷電アミノ酸の代わりに用いること、およびその逆を含む。
【0065】
タンパク質は、組換えタンパク質、すなわち、インビトロで合成されたタンパク質であり得る。あるいは、非組換えタンパク質または組換えタンパク質が、細菌から単離され得る。そのようなバリアントを含む細菌が、組成物および方法において実行され得ることも企図される。その結果として、タンパク質は、単離される必要はない。
【0066】
１ｍｌあたり約０．００１ｍｇ～約１０ｍｇの全ポリペプチド、ペプチドおよび／またはタンパク質が組成物に存在することが企図される。したがって、組成物中のタンパク質の濃度は、約、少なくとも約、または多くとも約０．００１、０．０１０、０．０５０、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０ｍｇ／ｍｌまたはそれ以上（またはこれらの中で導き出せる任意の範囲）であり得る。このうち、約、少なくとも約、または多くとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％が、ＣＤ７９ｂに結合する抗体であり得る。
【0067】
抗体、または好ましくは抗体の免疫学的部分が、他のタンパク質との融合タンパク質に化学的に結合体化され得るか、または他のタンパク質との融合タンパク質として発現され得る。本明細書および添付の請求項において、そのような融合タンパク質はすべて、抗体または抗体の免疫学的部分の定義に含まれる。
【0068】
実施形態は、少なくとも１つの作用物質に連結して抗体結合体またはペイロードを形成する、ＣＤ７９ｂに対する抗体および抗体様分子、ポリペプチドおよびペプチドを提供する。診断薬または治療薬としての抗体分子の有効性を高めるために、少なくとも１つの所望の分子または部分を連結することまたは共有結合することまたは複合体化することが従来法である。そのような分子または部分は、少なくとも１つのエフェクター分子またはレポーター分子であり得るが、これらに限定されない。エフェクター分子は、所望の活性、例えば、細胞傷害活性を有する分子を含む。抗体に付着されたエフェクター分子の非限定的な例としては、トキシン、治療的酵素、抗生物質、放射標識されたヌクレオチドなどが挙げられる。対照的に、レポーター分子は、アッセイを用いて検出され得る任意の部分として定義される。抗体に結合体化されるレポーター分子の非限定的な例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光標識、リン光性分子、化学発光分子、クロモフォア、発光分子、光親和性分子、有色粒子、またはビオチンなどのリガンドが挙げられる。
【0069】
抗体を結合体部分に付着または結合体化するためのいくつかの方法が当該分野で公知である。いくつかの付着方法は、例えば、抗体に付着された有機キレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸無水物（ＤＴＰＡ）；エチレントリアミン四酢酸；Ｎ－クロロ－ｐ－トルエンスルホンアミド；および／またはテトラクロロ－３－６－ジフェニルグリコウリル－３を用いる、金属キレート錯体の使用を含む。また、グルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩などのカップリング剤の存在下において酵素とモノクローナル抗体を反応させてもよい。これらのカップリング剤の存在下において、またはイソチオシアネートとの反応によって、フルオレセインマーカーを有する結合体が調製される。
ＩＩＩ．Ｔ細胞療法
ＩＩＩ．Ｔ細胞療法
【0070】
本開示のある特定の実施形態は、Ｔ細胞を入手すること、および標的癌細胞に対する免疫療法としてＴ細胞を被験体に投与することに関する。機能的な抗腫瘍エフェクターＴ細胞の誘導、活性化および拡大のためのいくつかの基本的なアプローチが、過去２０年で報告されてきた。これらとしては、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）などの自己細胞；自己ＤＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）、またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体でコーティングされたビーズ、または標的細胞膜の捕捉によって単離された細胞を用いてエキソビボで活性化されたＴ細胞；抗宿主腫瘍Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を天然に発現している同種異系細胞；および「Ｔ－ボディ」として知られる抗体様腫瘍認識能を示す腫瘍反応性ＴＣＲ分子またはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝的に再プログラムされたまたは「再指示された」非腫瘍特異的な自己細胞または同種異系細胞が挙げられる。これらのアプローチは、本開示の方法において使用され得る、Ｔ細胞を調製および免疫化するための数多くのプロトコルの元となった。
Ａ．Ｔ細胞の調製
Ａ．Ｔ細胞の調製
【0071】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ液またはリンパ系器官に由来する。いくつかの態様において、細胞は、ヒト細胞である。細胞は、通常、初代細胞であり、例えば、被験体から直接単離された細胞、および／または被験体から単離され、凍結された細胞である。いくつかの実施形態において、細胞には、Ｔ細胞または他の細胞型の１つ以上のサブセット（例えば、Ｔ細胞集団全体、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、およびそれらの部分集団、例えば、機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、拡大、再循環、局在化および／または残存能、抗原特異性、抗原レセプターのタイプ、特定の器官もしくはコンパートメントに存在すること、マーカーもしくはサイトカイン分泌のプロファイル、および／または分化の程度によって定義されるもの）が含まれる。処置される被験体に関して、細胞は、同種異系細胞および／または自己細胞であり得る。いくつかの態様において、既存技術などの場合、細胞は、多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）および／または多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）である（例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞）。いくつかの実施形態において、上記方法は、被験体から細胞を単離する工程、それらを本明細書中に記載されるように調製、処理、培養および／または操作する工程、ならびに凍結保存の前または後にそれらを同じ患者に再導入する工程を含む。
【0072】
Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）のサブタイプおよび部分集団に含まれるのは、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞およびそのサブタイプ（例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）または最終分化型エフェクターメモリーＴ（ＴＴＥＭＲＡ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、内在性および獲得型（ａｄａｐｔｉｖｅ）の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞）、アルファ／ベータＴ細胞およびデルタ／ガンマＴ細胞である。
【0073】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞集団の１つ以上は、表面マーカーなどの特異的マーカーが陽性であるかまたは特異的マーカーが陰性である細胞が濃縮されているか、または枯渇している。いくつかの場合において、そのようなマーカーは、ある特定のＴ細胞集団（例えば、非メモリー細胞）上に存在しないかまたは比較的低レベルで発現されるが、ある特定の他のＴ細胞集団（例えば、メモリー細胞）上に存在するかまたは比較的高レベルで発現されるマーカーである。１つの実施形態において、それらの細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞またはＣＤ３＋細胞）は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ４４、ＣＤ１２７および／もしくはＣＤ６２Ｌが陽性であるかまたは高い表面レベルのＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ４４、ＣＤ１２７および／もしくはＣＤ６２Ｌを発現している細胞が濃縮されている（すなわち、ポジティブ選択されている）、かつ／またはＣＤ４５ＲＡが陽性であるかもしくは高い表面レベルのＣＤ４５ＲＡを発現している細胞が枯渇している（例えば、ネガティブ選択されている）。いくつかの実施形態において、細胞は、ＣＤ１２２、ＣＤ９５、ＣＤ２５、ＣＤ２７および／もしくはＩＬ７－Ｒａ（ＣＤ１２７）が陽性であるかまたは高い表面レベルのＣＤ１２２、ＣＤ９５、ＣＤ２５、ＣＤ２７および／もしくはＩＬ７－Ｒａ（ＣＤ１２７）を発現している細胞が濃縮されているかまたは枯渇している。いくつかの例では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＯが陽性である（またはＣＤ４５ＲＡが陰性である）かつＣＤ６２Ｌが陽性である細胞が濃縮されている。
【0074】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞（例えば、Ｂ細胞、単球または他の白血球）上に発現されているマーカー（例えば、ＣＤ１４）のネガティブ選択によってＰＢＭＣサンプルから分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択工程を用いることにより、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が分離される。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団は、１つ以上のナイーブ、メモリーおよび／またはエフェクターＴ細胞の部分集団上に発現されているまたは比較的高い程度に発現されているマーカーのポジティブまたはネガティブ選択によって、さらに部分集団にソーティングされ得る。
【0075】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋細胞は、それぞれの部分集団に関連する表面抗原に基づくポジティブ選択またはネガティブ選択などによって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリーおよび／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮されているかまたは枯渇している。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、投与後の長期生存率、拡大および／または生着を改善するなどの有効性を高めるために行われ、これは、いくつかの態様において、そのような部分集団において特に頑健である。いくつかの実施形態において、ＴＣＭが濃縮されたＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞とを組み合わせることにより、有効性がさらに高まる。
【0076】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞である。この方法では、腫瘍サンプルを患者から入手し、単一の細胞懸濁液を得る。その単一の細胞懸濁液は、任意の好適な様式で、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳＴＭＤｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆ．を用いて腫瘍を脱凝集させて）または酵素的に（例えば、コラゲナーゼまたはＤＮａｓｅ）得ることができる。腫瘍の酵素消化物の単一の細胞懸濁液を、インターロイキン－２（ＩＬ－２）中で培養する。それらの細胞を、コンフルエンス（例えば、約２×１０６リンパ球）になるまで、例えば、約５～約２１日間、好ましくは、約１０～約１４日間、培養する。例えば、それらの細胞を、５日間、５．５日間または５．８日間～２１日間、２１．５日間または２１．８日間、例えば、１０日間、１０．５日間または１０．８日間～１４日間、１４．５日間または１４．８日間、培養し得る。
【0077】
培養されたＴ細胞は、プールされ、急速に拡大され得る。約１０～約１４日間、好ましくは、約１４日間にわたる急速な拡大によって、抗原特異的Ｔ細胞の数が少なくとも約５０倍（例えば、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００倍またはそれ以上）増加する。より好ましくは、約１０～約１４日間、好ましくは、約１４日間にわたる急速な拡大によって、少なくとも約２００倍（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００またはそれ以上）増加する。
【0078】
当該分野で公知であるようないくつかの方法のうちのいずれかによって、拡大が達成され得る。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球と、インターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のいずれか（ＩＬ－２が好ましい）との存在下において非特異的Ｔ細胞レセプター刺激を用いて容易に拡大され得る。その非特異的Ｔ細胞レセプター刺激は、およそ３０ｎｇ／ｍｌの、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体であるＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標），Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．から入手可能）を含み得る。あるいは、Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子（例えば、３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５（ＩＬ－２が好ましい））の存在下において１つ以上の癌抗原（エピトープなどのその抗原性部分、または細胞を含む）で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をインビトロにおいて刺激することによって容易に拡大され得、その癌抗原は、必要に応じてベクターから発現され得、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチドである。そのインビトロで誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現している抗原提示細胞に対してパルスされた同じ癌抗原による再刺激によって急速に拡大される。あるいは、それらのＴ細胞は、例えば、照射された自己リンパ球または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球およびＩＬ－２で再刺激され得る。
【0079】
上記自己Ｔ細胞は、それらの自己Ｔ細胞の増殖および活性化を促進するＴ細胞成長因子を発現するように改変され得る。好適なＴ細胞成長因子としては、例えば、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が挙げられる。好適な改変方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照のこと。特定の態様において、改変された自己Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子を高レベルで発現する。Ｔ細胞成長因子コード配列（例えば、ＩＬ－１２のコード配列）は、Ｔ細胞成長因子コード配列への作動可能な連結が高レベル発現を促進するプロモーターと同様に、当該分野において容易に入手可能である。
Ｂ．遺伝的に操作された抗原レセプター
Ｂ．遺伝的に操作された抗原レセプター
【0080】
上記Ｔ細胞は、操作されたＴＣＲまたはキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）などの抗原レセプターを発現するように遺伝的に操作され得る。例えば、自己Ｔ細胞が、ＣＤ７９ｂなどの癌抗原に対する抗原特異性を有するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するように改変される。好適なＴＣＲとしては、例えば、黒色腫抗原、例えば、ｇｐ１００またはＭＡＲＴ－１に対する抗原特異性を有するものが挙げられる。好適な改変方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ，前出を参照のこと。例えば、上記Ｔ細胞は、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１９：４９６－５１０（２００８）およびＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１４：５３５－４６（２００９）に記載されている形質導入法を用いて、癌抗原に対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように形質導入され得る。
【0081】
いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は、遺伝子操作を介して導入された、１つ以上の抗原レセプターをコードする１つ以上の核酸、およびそのような核酸の遺伝的に操作された生成物を含む。いくつかの実施形態において、それらの核酸は、異種であり、すなわち、通常は、細胞またはその細胞から得られるサンプルに存在せず、例えば、別の生物または細胞から得られた核酸であり、それらは、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞の起源である生物には通常見られない。いくつかの実施形態において、それらの核酸は、天然に見られない核酸（例えば、キメラ）など天然に存在しない。
【0082】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＣＤ７９ｂに特異的に結合する細胞外の抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態において、その抗原は、細胞表面上に発現されているタンパク質である。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＴＣＲ様ＣＡＲであり、抗原は、ＴＣＲと同様に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の状況において細胞表面上で認識される、プロセシングを受けたペプチド抗原（例えば、細胞内タンパク質のペプチド抗原）である。
【0083】
ＣＡＲおよび組換えＴＣＲをはじめとした例示的な抗原レセプター、ならびにそれらのレセプターを操作するための方法および細胞に導入するための方法には、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開番号ＵＳ２００２１３１９６０、ＵＳ２０１３２８７７４８、ＵＳ２０１３０１４９３３７、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記載されているもの、および／またはＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２によって記載されたものが含まれる。いくつかの態様において、遺伝的に操作された抗原レセプターには、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８Ａｌに記載されているものが含まれる。
１．キメラ抗原レセプター
１．キメラ抗原レセプター
【0084】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ａ）細胞内のシグナル伝達ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、およびｃ）抗原結合領域を含む細胞外のドメインを含む。
【0085】
いくつかの実施形態において、操作された抗原レセプターには、活性化型または刺激型のＣＡＲ、共刺激型のＣＡＲ（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照のこと）および／または阻害型のＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１３を参照のこと）をはじめとしたＣＡＲが含まれる。それらのＣＡＲは、一般に、１つ以上の細胞内のシグナル伝達構成要素に、いくつかの態様ではリンカーおよび／または膜貫通ドメインを介して連結された、細胞外の抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は、通常、天然の抗原レセプターを介するシグナル、共刺激レセプターとともにそのようなレセプターを介するシグナル、および／または共刺激レセプターのみを介するシグナルを模倣するかまたはまねる。
【0086】
本開示のある特定の実施形態は、細胞内のシグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上のシグナル伝達モチーフを含む細胞外のドメインを含む、抗原特異的ＣＡＲポリペプチド（免疫原性を低減するようにヒト化されたＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む）をコードする核酸を含む核酸の使用に関する。ある特定の実施形態において、そのＣＡＲは、１つ以上の抗原の間で共有される空間を含むエピトープを認識し得る。ある特定の実施形態において、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の可変領域、および／またはそれらの抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態において、その特異性は、レセプターに結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来する。
【0087】
ヒトＣＡＲ核酸は、ヒト患者に対する細胞免疫療法を増強するために使用されるヒト遺伝子であり得ると企図される。具体的な実施形態において、本発明は、ＣＡＲの完全長ｃＤＮＡまたはコード領域を含む。その抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノクローナル抗体に由来する一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のフラグメント（例えば、参照により本明細書中に援用される米国特許第７，１０９，３０４号に記載されているもの）を含み得る。そのフラグメントは、ヒト抗原特異的抗体の任意の数の異なる抗原結合ドメインでもあり得る。より具体的な実施形態において、そのフラグメントは、ヒト細胞における発現のためにヒトコドン使用頻度に最適化された配列によってコードされる抗原特異的ｓｃＦｖである。
【0088】
配置は、多量体であり得る（例えば、ダイアボディまたは多量体）。その多量体は、軽鎖および重鎖の可変部分がダイアボディに交差対形成することによって形成される可能性が最も高い。その構築物のヒンジ部分には、完全欠失から、１つ目のシステインが維持されること、セリン置換ではなくプロリン置換であること、１つ目のシステインまで切断されることにまで及ぶ複数の選択肢があり得る。Ｆｃ部分は、欠失させることができる。安定したかつ／または二量体化する任意のタンパク質が、この目的にかない得る。Ｆｃドメインのうちの１つだけ、例えば、ヒト免疫グロブリン由来のＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメインを使用することができる。二量体化を改善するように改変されたヒト免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分だけを使用することもできる。ＣＤ８アルファの部分を使用することもできる。
【0089】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲ核酸は、膜貫通ドメインおよび改変されたＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインなどの、他の共刺激レセプターをコードする配列を含む。他の共刺激レセプターとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【0090】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、養子療法によって標的化される特定の細胞型において発現される抗原などの特定の抗原（またはマーカーまたはリガンド）、例えば、癌マーカーおよび／または減衰応答を誘導することを目的とした抗原（例えば、正常細胞型または非罹患細胞型に発現される抗原）に対する特異性を有するように構築される。したがって、上記ＣＡＲは通常、その細胞外の部分に、１つ以上の抗原結合分子（例えば、１つ以上の抗原結合フラグメント、抗原結合ドメインもしくは抗原結合部分）または１つ以上の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、抗体分子の抗原結合部分（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）に由来する一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ））を含む。
【0091】
キメラレセプターをコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ起源、ｃＤＮＡ起源から得ることができるか、または合成することができるか（例えば、ＰＣＲを介して）、またはそれらの組み合わせである。イントロンはｍＲＮＡを安定化することが見出されているので、ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、ｃＤＮＡまたはそれらの組み合わせを使用することが望ましい場合がある。また、ｍＲＮＡを安定化するために内在性または外来性の非コード領域を使用することもさらに有益であり得る。
【0092】
上記キメラ構築物は、裸のＤＮＡとしてまたは好適なベクターに入った状態で免疫細胞に導入され得ることが企図される。裸のＤＮＡを用いたエレクトロポレーションによって細胞を安定的にトランスフェクトする方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許第６，４１０，３１９号を参照のこと。裸のＤＮＡとは、一般に、発現にとって適切な向きでプラスミド発現ベクターに含められたキメラレセプターをコードするＤＮＡのことを指す。
【0093】
あるいは、キメラ構築物を免疫細胞に導入するために、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター）を用いることができる。本開示の方法に従って使用するのに適したベクターは、免疫細胞において非複製性のベクターである。ウイルスに基づくベクターが多数知られており（例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶまたはＢＰＶに基づくベクター）、細胞内に維持されるそのウイルスのコピー数は、その細胞の生存能を維持するほど十分低い。
【0094】
いくつかの態様において、抗原に特異的に結合する構成要素、すなわち認識構成要素は、１つ以上の膜貫通ドメインおよび細胞内のシグナル伝達ドメインに連結される。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合された膜貫通ドメインを含む。１つの実施形態において、そのＣＡＲにおけるドメインの１つと天然に会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの場合において、その膜貫通ドメインは、レセプター複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるためにそのようなドメインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合するのを回避するように、選択されるかまたはアミノ酸置換によって改変される。
【0095】
膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、天然起源または合成起源に由来する。起源が天然である場合、そのドメインは、いくつかの態様において、任意の膜結合型タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域は、Ｔ細胞レセプターのアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマおよびＣＤ３デルタに由来する（すなわち、その膜貫通領域を少なくとも含む）膜貫通領域を含む。あるいは、膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、合成の膜貫通ドメインである。いくつかの態様において、合成の膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインの各末端に見られることがある。
【0096】
具体的な実施形態において、本ＣＡＲ構築物は、軽鎖－リンカー－重鎖－ヒンジ－膜貫通ドメイン－シグナル伝達ドメインを含む。そのリンカーは、リンカー１（配列番号４４または４５）、リンカー２（配列番号４６または４７）、リンカー３（配列番号４８または４９）またはリンカー４（配列番号５０または５１）であり得る。そのヒンジは、ＣＤ８ヒンジ１（配列番号５２または５３）、ＣＤ８ヒンジ２（配列番号５４または５５）、ＣＤ８ヒンジ３（配列番号５６または５７）、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号５８または５９）、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号６０または６１）、ＩｇＧ４ＣＨ２（配列番号６２または６３）、ＩｇＧ４ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６４または６５）またはＩｇＧ４ＣＨ１ＣＨ２ＣＨ３（配列番号６６または６７）であり得る。その膜貫通ドメインは、ＣＤ８ＴＭ１（配列番号６８または６９）、ＣＤ８ＴＭ２（配列番号７０または７１）またはＣＤ２８ＴＭ（配列番号７２または７３）であり得る。そのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８（配列番号７４または７５）、４－１ＢＢ（配列番号７６または７７）、ＯＸ－４０（配列番号７８または７９）および／またはＣＤ３細胞内（配列番号８０または８１）であり得る。そのＣＡＲ構築物は、ＧＦＰ（配列番号８２または８３）、Ｔ２Ａ（配列番号８４または８５）および／またはＥＧＦＲ（配列番号４０または４１）をさらに含み得る。例示的な重鎖（ＨＣ）、リンカーおよび軽鎖（ＬＣ）の組み合わせとしては、ＬＣ－リンカー１－ＨＣ；ＬＣ－リンカー２－ＨＣ；ＬＣ－リンカー３－ＨＣ；ＬＣ－リンカー４－ＨＣ；ＨＣ－リンカー１－ＬＣ；ＨＣ－リンカー２－ＬＣ；ＨＣ－リンカー３－ＬＣ；またはＨＣ－リンカー４－ＬＣが挙げられ得るが、これらに限定されない。
２．Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）
２．Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）
【0097】
いくつかの実施形態において、遺伝的に操作された抗原レセプターには、組換えＴＣＲ、および／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲが含まれる。「Ｔ細胞レセプター」または「ＴＣＲ」とは、可変ａ鎖および可変β鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても知られる）または可変γ鎖および可変δ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても知られる）を含み、ＭＨＣレセプターに結合した抗原ペプチドに特異的に結合することができる分子のことを指す。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、αβ型である。
【0098】
通常、αβ型およびγδ型として存在するＴＣＲは、一般に構造が似ているが、それらを発現しているＴ細胞は、解剖学的位置または機能が異なり得る。ＴＣＲは、細胞表面上にまたは可溶型として見られ得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上に見られ、通常、その表面上で、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識に関与する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または短い細胞質テイルも含み得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ，１９９７を参照のこと）。例えば、いくつかの態様において、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端に短い細胞質テイルを有し得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、シグナル伝達の媒介に関わるＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と会合される。別段述べられない限り、用語「ＴＣＲ」は、その機能的ＴＣＲフラグメントを包含すると理解されるべきである。この用語は、αβ型またはγδ型のＴＣＲをはじめとしたインタクトなまたは完全長のＴＣＲも包含する。
【0099】
したがって、本明細書中の目的では、ＴＣＲへの言及には、任意のＴＣＲまたは機能的フラグメント（例えば、ＭＨＣ分子において結合した特異的な抗原ペプチド、すなわち、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分）が含まれる。交換可能に使用され得る、ＴＣＲの「抗原結合部分」または抗原結合フラグメントとは、ＴＣＲの構造ドメインの一部しか含まないが、完全なＴＣＲが結合する抗原（例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体）に結合する分子のことを指す。いくつかの場合において、抗原結合部分は、特異的なＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの可変ドメイン（例えば、ＴＣＲの可変ａ鎖および可変β鎖）を含み、例えば一般に、各鎖が３つの相補性決定領域を含む。
【0100】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖の可変ドメインは、会合してループ、または免疫グロブリンに類似の相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成し、それにより、抗原認識がもたらされ、ＴＣＲ分子の結合部位を形成することによってペプチド特異性が決定され、ペプチド特異性が決定される。通常、免疫グロブリンと同様に、ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分断される（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識に関与する主要なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は、抗原ペプチドのＮ末端部と相互作用するとも示されているのに対して、ベータ鎖のＣＤＲ１は、そのペプチドのＣ末端部と相互作用する。ＣＤＲ２は、ＭＨＣ分子を認識すると考えられている。いくつかの実施形態において、β鎖の可変領域は、さらなる超可変性（ＨＶ４）領域を含み得る。
【0101】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、定常ドメインを含む。例えば、免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外の部分（例えば、ａ鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリンドメインである、Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、ＶａまたはＶｐ；通常、ＫａｂａｔナンバリングであるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，５ｔｈ ｅｄ．に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接した１つの定常ドメイン（例えば、ａ鎖定常ドメインまたはＣａ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣｐ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含み得る。例えば、いくつかの場合、それらの２本の鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外の部分は、２つの膜近位定常ドメイン、およびＣＤＲを含む２つの膜遠位可変ドメインを含む。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成する短い接続配列を含み、それにより、それらの２本の鎖の間に連結が形成される。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、α鎖およびβ鎖の各々に追加のシステイン残基を有し得るため、ＴＣＲは、定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含む。
【0102】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、正に帯電している。いくつかの場合において、ＴＣＲ鎖は、細胞質テイルを含む。いくつかの場合において、その構造のおかげで、ＴＣＲはＣＤ３のような他の分子と会合することができる。例えば、膜貫通領域とともに定常ドメインを含むＴＣＲは、そのタンパク質を細胞膜に固定し得、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体のインバリアントサブユニットと会合し得る。
【0103】
一般に、ＣＤ３は、哺乳動物においては３つの異なる鎖（γ、δおよびε）およびζ鎖を有し得る多タンパク質複合体である。例えば、哺乳動物では、この複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含み得る。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、これは、これらの鎖が、正に帯電したＴ細胞レセプター鎖と会合できるようにする特性である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の細胞内テイルの各々は、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして知られる保存された単一のモチーフを含むのに対して、各ＣＤ３ζ鎖は、３つ含む。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能に関わる。これらのアクセサリー分子は、負に帯電した膜貫通領域を有し、ＴＣＲから細胞へのシグナルの伝播において役割を果たす。ＣＤ３鎖およびζ鎖は、ＴＣＲと一体となって、Ｔ細胞レセプター複合体として知られる複合体を形成する。
【0104】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、２本の鎖αおよびβ（または必要に応じてγおよびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または一本鎖ＴＣＲ構築物であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ジスルフィド結合などによって連結された２本の別個の鎖（α鎖とβ鎖またはγ鎖とδ鎖）を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態において、標的抗原（例えば、癌抗原）に対するＴＣＲが特定され、細胞に導入される。いくつかの実施形態において、ＴＣＲをコードする核酸は、公的に入手可能なＴＣＲ ＤＮＡ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などによって、種々の起源から得ることができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、生物学的起源、例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可能な起源から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、インビボで単離された細胞から得ることができる。いくつかの実施形態において、高親和性Ｔ細胞クローンが、患者から単離され得、ＴＣＲが単離され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系またはＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスにおいて産生された。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイを用いて、標的抗原に対するＴＣＲが単離される。いくつかの実施形態において、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識によって合成的に作製され得る。
Ｃ．送達方法
Ｃ．送達方法
【0105】
当業者であれば、本開示の抗原レセプターを発現させるために標準的な組換え手法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６（両方が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）によってベクターを構築する能力を充分に備えているだろう。ベクターとしては、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルスおよび植物ウイルス）および人工染色体（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来するもの）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなどに由来するもの）、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター（その複製可能型、複製欠損型およびガットレス型（ｇｕｔｌｅｓｓ ｆｏｒｍｓ）を含む）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、サルウイルス４０（ＳＶ－４０）ベクター、ウシパピローマウイルスベクター、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳癌ウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ポリオウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、マラバウイルス（ｍａｒａｂａ ｖｉｒｕｓ）ベクターおよびＢ群アデノウイルスｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖベクターが挙げられるがこれらに限定されない。
ａ．ウイルスベクター
ａ．ウイルスベクター
【0106】
抗原レセプターをコードするウイルスベクターは、本開示のある特定の態様において提供され得る。組換えウイルスベクターを作製する際、必須ではない遺伝子は、通常、異種（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコード配列で置き換えられる。ウイルスベクターは、ウイルス配列を利用して、核酸および場合によってはタンパク質を細胞に導入する一種の発現構築物である。ある特定のウイルスが細胞に感染する能力またはレセプター媒介性のエンドサイトーシスを介して細胞に侵入する能力、および宿主細胞のゲノムにインテグレートし、ウイルス遺伝子を安定かつ効率的に発現する能力によって、それらのウイルスが、外来核酸を細胞（例えば、哺乳動物細胞）に移行させるための魅力的な候補になった。本発明のある特定の態様の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例を下記に記載する。
【0107】
レンチウイルスは、複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖに加えて、調節機能または構造機能を有する他の遺伝子も含む。レンチウイルスベクターは、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，０１３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。
【0108】
組換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、インビボとエキソビボの両方において遺伝子導入および核酸配列発現のために使用され得る。例えば、非分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルス（ここで、好適な宿主細胞が、パッケージング機能を有する２つ以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、ならびにｒｅｖおよびｔａｔでトランスフェクトされる）は、参照により本明細書中に援用される米国特許第５，９９４，１３６号に記載されている。
ｂ．調節エレメント
ｂ．調節エレメント
【0109】
本開示において有用なベクターに含められる発現カセットは、特に、タンパク質コード配列に作動可能に連結された真核生物転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’への方向で）含む。真核細胞においてタンパク質をコードする遺伝子の転写を制御するプロモーターおよびエンハンサーは、複数の遺伝的エレメントから構成される。細胞機構は、各エレメントによって運ばれる調節情報を集め、統合することができ、それにより、異なる遺伝子が、多くの場合は複雑なパターンである異なるパターンの転写制御を展開することが可能になる。本開示の状況において使用されるプロモーターとしては、構成的プロモーター、誘導性プロモーターおよび組織特異的プロモーターが挙げられる。
（ｉ）プロモーター／エンハンサー
（ｉ）プロモーター／エンハンサー
【0110】
本明細書中に提供される発現構築物は、抗原レセプターの発現を駆動するプロモーターを含む。プロモーターは、一般に、ＲＮＡ合成のための開始部位の位置を特定するように機能する配列を含む。これの最もよく知られている例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺乳動物のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターおよびＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなど、一部のプロモーターでは、ＴＡＴＡボックスを欠き、開始部位自体と重なっている不連続なエレメントが、開始の場所を固定するのを助ける。さらなるプロモーターエレメントが、転写開始の頻度を制御する。通常、これらは、開始部位の３０１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むと示されている。コード配列をプロモーター「の支配下に」するためには、転写読み枠の転写開始部位の５’末端を、選択されたプロモーターの「下流」（すなわち、３’）に置く。「上流」のプロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。
【0111】
プロモーターエレメント間の間隔は、変更がきくことが多く、エレメントが、反転されるかまたは互いに対して移動された場合でも、プロモーターの機能は保存される。ｔｋプロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始めるまで最大５０ｂｐ広げられ得る。プロモーターに応じて、個々のエレメントは、協同的にまたは独自に機能して転写を活性化し得るとみられる。プロモーターは、核酸配列の転写性の活性化に関わるシス作用性制御配列のことを指す「エンハンサー」と併せて使用されてもよいし、使用されなくてもよい。
【0112】
プロモーターは、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって得られることがあるような、ある核酸配列と天然に会合したプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは、「内在性」プロモーターと呼ぶことができる。同様に、エンハンサーは、ある核酸配列の下流または上流に位置する、その配列と天然に会合したエンハンサーであり得る。あるいは、ある核酸配列とその天然の環境では天然には会合していないプロモーターのことを指す、組換えプロモーターまたは異種プロモーターの支配下にコード核酸セグメントを置くことによって、一定の利点が得られる。また、組換えエンハンサーまたは異種エンハンサーは、その天然の環境では核酸配列と天然には会合していないエンハンサーのことを指す。そのようなプロモーターまたはエンハンサーには、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、ならびに他の任意のウイルスまたは原核細胞もしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハンサー、ならびに「天然に存在」しない、すなわち、種々の転写制御領域の種々のエレメントおよび／または発現を変化させる変異を含む、プロモーターまたはエンハンサーが含まれ得る。例えば、組換えＤＮＡの構築において最もよく使用されるプロモーターとしては、βラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ－）プロモーターシステムが挙げられる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成的に作製することに加えて、組換えクローニング、および／またはＰＣＲＴＭをはじめとした核酸増幅技術を用いて、ある配列が、本明細書中に開示される組成物に関連して作製され得る。さらに、核以外のオルガネラ（例えば、ミトコンドリア、葉緑体など）内での配列の転写および／または発現を指示する調節配列も同様に使用できることが企図される。
【0113】
当然、発現のために選択されたオルガネラ、細胞型、組織、器官または生物におけるＤＮＡセグメントの発現を効果的に指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使用することが重要になる。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のために、プロモーター、エンハンサーおよび細胞型の組み合わせを使用することを承知している（例えば、参照により本明細書中に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．１９８９を参照のこと）。使用されるプロモーターは、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター、誘導性プロモーター、および／または導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指示する、適切な条件下において有用なプロモーター（例えば、組換えタンパク質および／または組換えペプチドの大規模生成において有益なプロモーター）であり得る。そのプロモーターは、異種であっても、内在性であってもよい。
【0114】
さらに、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせ（例えば、ｅｐｄ．ｉｓｂ－ｓｉｂ．ｃｈ／のワールドワイドウェブを介したＥｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ ＥＰＤＢに従って）も、発現を駆動するために使用され得る。Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用が、別の実行可能な実施形態である。適切な細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部としてまたはさらなる遺伝的発現構築物として提供される場合、真核細胞は、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質での転写を支持し得る。
【0115】
プロモーターの非限定的な例としては、初期または後期ウイルスプロモーター（例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター）；真核細胞プロモーター（例えば、ベータアクチンプロモーター、ＧＡＤＰＨプロモーター、メタロチオネインプロモーター）；および連鎖状応答エレメントプロモーター（例えば、サイクリックＡＭＰ応答エレメントプロモーター（ｃｒｅ）、血清応答エレメントプロモーター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）およびミニマルＴＡＴＡボックス近傍の応答エレメントプロモーター（ｔｒｅ））が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋに記載されているヒト成長ホルモンミニマルプロモーター、アクセッション番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３－３４１）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣから入手可能，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＴＣＣ４５００７）を使用することも可能である。ある特定の実施形態において、プロモーターは、ＣＭＶ ＩＥ、デクチン－１、デクチン－２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ ＭＬＰ、ベータ－アクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、しかしながら、治療用の遺伝子の発現を駆動するために有用な他の任意のプロモーターも本開示の実施に適用できる。
【0116】
ある特定の態様において、本開示の方法は、エンハンサー配列、すなわち、プロモーターの活性を増加させる核酸配列であって、シスで、かつその向きを問わず、比較的長い距離（標的プロモーターから最大数キロベース離れた距離）にわたって作用する能力を有する核酸配列にも関する。しかしながら、エンハンサーは、所与のプロモーターに対して近位でも機能し得るので、エンハンサーの機能は必ずしもそのような長い距離に限定されない。
（ｉｉ）開始シグナルおよび連結発現
（ｉｉ）開始シグナルおよび連結発現
【0117】
コード配列の効率的な翻訳のために、本開示に提供される発現構築物において特異的な開始シグナルも使用され得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列を含む。外来性の翻訳制御シグナル（ＡＴＧ開始コドンを含む）が提供される必要がある場合がある。当業者であれば、これを判断することおよび必要なシグナルを提供することが容易にできるだろう。インサート全体の翻訳を確保するためには、開始コドンが、所望のコード配列の読み枠と「インフレーム」でなければならないことは周知である。その外来性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然のものまたは合成のものであり得る。適切な転写エンハンサーエレメントを含めることによって、発現効率が高められ得る。
【0118】
ある特定の実施形態において、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用は、多重遺伝子のメッセージ、すなわちポリシストロニックなメッセージを生成するために使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存的翻訳のリボソームスキャニングモデルを迂回し、内部の部位において翻訳を開始することができる。ピコルナウイルス科の２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）由来のＩＲＥＳエレメント、ならびに哺乳動物のメッセージ由来のＩＲＥＳが、報告されている。ＩＲＥＳエレメントは、異種のオープンリーディングフレームに連結できる。各々がＩＲＥＳによって分断された複数のオープンリーディングフレームが、一緒に転写され得、ポリシストロニックなメッセージが生成され得る。ＩＲＥＳエレメントのおかげで、各オープンリーディングフレームが、効率的な翻訳のためにリボソームに接近できるようになる。単一のプロモーター／エンハンサーを用いて複数の遺伝子を効率的に発現して、単一のメッセージを転写することもできる。
【0119】
さらに、本開示に提供される構築物内の遺伝子の連結発現または同時発現をもたらすために、ある特定の２Ａ配列エレメントが使用され得る。例えば、オープンリーディングフレームを連結して単一のシストロンを形成することによって遺伝子を同時発現するために、切断配列が使用され得る。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である。
（ｉｉｉ）複製開始点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、そのベクターは、１つ以上の複製開始部位（「ｏｒｉ」と呼ばれることが多い）、例えば、複製が開始される特異的な核酸配列である、上に記載されたようなＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおける機能が似ているかもしくは高められた遺伝的に操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含み得る。あるいは、上に記載されたような他の染色体外で複製するウイルスの複製起点、または自律複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。
ｃ．選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカー
（ｉｉｉ）複製開始点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、そのベクターは、１つ以上の複製開始部位（「ｏｒｉ」と呼ばれることが多い）、例えば、複製が開始される特異的な核酸配列である、上に記載されたようなＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおける機能が似ているかもしくは高められた遺伝的に操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含み得る。あるいは、上に記載されたような他の染色体外で複製するウイルスの複製起点、または自律複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。
ｃ．選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカー
【0120】
いくつかの実施形態において、本開示の構築物を含む細胞は、マーカーを発現ベクターに含めることによって、インビトロまたはインビボにおいて特定され得る。そのようなマーカーは、発現ベクターを含む細胞を容易に特定できるようにする特定可能な変化を細胞に与える。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するマーカーである。ポジティブ選択マーカーは、そのマーカーが存在することによってその選択が可能になるマーカーであり、ネガティブ選択マーカーは、その存在が選択を妨げるマーカーである。ポジティブ選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
【0121】
通常、薬物選択マーカーを含めることにより、形質転換体のクローニングおよび特定が助けられ、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対する抵抗性を付与する遺伝子が、有用な選択マーカーである。条件の実行に基づいて形質転換体の判別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、比色解析を基礎とする、ＧＦＰなどのスクリーニング可能なマーカーをはじめとした他のタイプのマーカーも企図される。あるいは、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などの、ネガティブ選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素が利用され得る。当業者であれば、免疫学的マーカーをおそらくはＦＡＣＳ解析と併せて使用する方法も承知しているだろう。使用されるマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現されることが可能である限り、重要ではないと考えられている。選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカーのさらなる例は、当業者に周知である。
ｄ．他の核酸送達方法
ｄ．他の核酸送達方法
【0122】
抗原レセプターをコードする核酸のウイルス送達に加えて、以下の方法が、所与の宿主細胞への組換え遺伝子送達のさらなる方法であるので、本開示において考慮される。
【0123】
本開示の免疫細胞へのＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸の導入は、本明細書中に記載されるようにまたは当業者に公知であるように、細胞を形質転換するための核酸送達に適した任意の方法を使用し得る。そのような方法としては、ＤＮＡの直接送達（例えば、エキソビボトランスフェクション、注射（マイクロインジェクションを含む））；エレクトロポレーション；リン酸カルシウム沈殿；ＤＥＡＥ－デキストランに続くポリエチレングリコールの使用；直接的な音波負荷；リポソーム媒介性のトランスフェクションおよびレセプター媒介性のトランスフェクション；微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）；炭化ケイ素繊維を伴った撹拌；アグロバクテリウム媒介性の形質転換；乾燥／阻害媒介性のＤＮＡ取り込み、およびそのような方法の任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。これらの手法などの手法の適用により、オルガネラ、細胞、組織または生物が安定にまたは一過性に形質転換され得る。
ＩＶ．処置方法
ＩＶ．処置方法
【0124】
本実施形態のある特定の態様は、ＣＤ７９ｂシグナル伝達に関連する疾患または障害を予防または処置するために使用され得る。ＣＤ７９ｂのシグナル伝達は、癌細胞の増殖を予防する任意の好適な薬物によって低減され得る。好ましくは、そのような物質は、抗ＣＤ７９ｂ抗体または抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞であり得る。
【0125】
いくつかの実施形態において、本開示は、有効量の本開示のＣＡＲ Ｔ細胞を投与する工程を含む、免疫療法のための方法を提供する。１つの実施形態において、免疫応答を誘発するＣＡＲ Ｔ細胞集団の移入によって、内科疾患または内科障害が処置される。本開示のある特定の実施形態において、免疫応答を誘発するＣＡＲ Ｔ細胞集団の移入によって、癌が処置される。個体の癌を処置するためまたは癌の進行を遅延させるための方法が本明細書中に提供され、その方法は、有効量の抗原特異的細胞療法を個体に投与する工程を含む。本方法は、免疫障害、固形癌および血液癌の処置に適用され得る。詳細には、その癌は、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫などのＢ細胞悪性腫瘍、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫および慢性リンパ性白血病であり得る。
【0126】
本処置方法が有用な腫瘍には、任意の悪性細胞タイプ、例えば、固形腫瘍または血液腫瘍に見られる細胞タイプが含まれる。例示的な固形腫瘍としては、膵臓、結腸、盲腸、胃、脳、頭部、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、黒色腫、前立腺および乳房からなる群より選択される器官の腫瘍が挙げられ得るが、これらに限定されない。例示的な血液腫瘍としては、骨髄の腫瘍、ＴまたはＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽腫、ミエローマなどが挙げられる。本明細書中に提供される方法を用いて処置され得る癌のさらなる例としては、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（消化器癌および消化管間質癌を含む）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、様々なタイプの頭頸部癌、および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【0127】
癌は、具体的には以下の組織タイプの癌であり得るが、これらに限定されない：新生物、悪性；癌腫；癌腫、未分化；巨細胞および紡錘形細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガストリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌・胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞腺癌；乳頭状・濾胞腺癌；非被包性硬化癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細胞腫瘍、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；悪性黒子黒色腫；末端黒子型黒色腫；結節性黒色腫；巨大色素性母斑内悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚腫；胎児性癌；奇形腫、悪性；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍皮質骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；グリオーマ、悪性；上衣腫；アストロサイトーマ；原形質性アストロサイトーマ；細線維性アストロサイトーマ；星芽腫；膠芽腫；乏突起膠腫；希突起芽腫；原始神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節神経芽腫；神経芽腫；網膜芽腫；嗅神経原腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞型、びまん性；悪性リンパ腫、濾胞性；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非切れ込み型細胞ＮＨＬ；巨大病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓｅ）ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ヘアリー細胞白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病。
【0128】
特定の実施形態は、白血病の処置方法に関する。白血病は、血液または骨髄の癌であり、血液細胞、通常は白血球細胞（白血球）の異常な増殖（分裂増殖による生成）を特徴とする。白血病は、血液腫瘍と呼ばれる広範な疾患群の一部である。白血病は、多種多様な疾患を網羅する広義語である。白血病は、急性および慢性の形態に臨床的におよび病理学的に分けられる。
【0129】
本開示の方法のいくつかの実施形態において、個体における活性化されたＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞は、γ－ＩＦＮを産生するＣＤ４Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８Ｔ細胞、ならびに／またはその組み合わせの投与前と比べて細胞溶解活性の増大を特徴とする。γ－ＩＦＮは、例えば、細胞の固定、透過処理、およびγ－ＩＦＮに対する抗体による染色を含む細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）をはじめとした、当該分野で公知の任意の手段によって測定され得る。細胞溶解活性は、当該分野で公知の任意の手段によって、例えば、エフェクター細胞と標的細胞の混合物を用いた細胞殺滅アッセイを使用して、測定され得る。
【0130】
いくつかの実施形態において、被験体には、Ｔ細胞療法の前に骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法が投与され得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、任意の好適な経路によって投与され得る任意の好適なそのような治療であり得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、特に、癌が転移性であり得る黒色腫である場合、例えば、シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含み得る。シクロホスファミドおよびフルダラビンの例示的な投与経路は、静脈内である。同様に、任意の好適な用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが投与され得る。特定の態様では、およそ６０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドが２日間投与され、その後、およそ２５ｍｇ／ｍ２のフルダラビンが５日間投与された。
【0131】
ある特定の実施形態では、自己Ｔ細胞の増殖および活性化を促進するＴ細胞成長因子が、自己Ｔ細胞と同時にまたは自己Ｔ細胞に続いて被験体に投与される。Ｔ細胞成長因子は、自己Ｔ細胞の増殖および活性化を促進する任意の好適な成長因子であり得る。好適なＴ細胞成長因子の例としては、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が挙げられ、これらは、単独でまたは様々な組み合わせで（例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－７、ＩＬ－２およびＩＬ－１５、ＩＬ－７およびＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－７およびＩＬ－１５、ＩＬ－１２およびＩＬ－７、ＩＬ－１２およびＩＬ－１５、またはＩＬ－１２およびＩＬ２）使用され得る。ＩＬ－１２が、好ましいＴ細胞成長因子である。
【0132】
治療有効量の免疫細胞が、非経口投与をはじめとしたいくつかの経路、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内もしくは関節内注射または注入によって投与され得る。
【0133】
到達可能な不連続の固形腫瘍に対しては、腫瘍内注射、すなわち腫瘍脈管構造への注射が特に企図される。局所投与、領域性投与または全身投与も適切であり得る。＞４ｃｍの腫瘍の場合、投与される体積は、約４～１０ｍｌ（特に１０ｍｌ）であり、＜４ｃｍの腫瘍の場合、約１～３ｍｌの体積が使用される（特に３ｍｌ）。単回用量として送達される複数回の注射は、約０．１～約０．５ｍｌ体積を含む。
【0134】
Ｔ細胞集団は、疾患と一致した処置レジメンで、例えば、疾患状態を回復させるためには単回または１日～数日間にわたる数回の投与で、または疾患進行を阻害するためおよび疾患再発を予防するためには長期間にわたる周期的な投与で、投与され得る。製剤において使用される正確な用量は、投与経路および疾患または障害の重症度にも依存し、医師の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。Ｔ細胞の治療有効量は、処置される被験体、苦痛の重症度およびタイプ、ならびに投与様式に依存する。いくつかの実施形態において、ヒト被験体の処置において使用され得る用量は、少なくとも３．８×１０４、少なくとも３．８×１０５、少なくとも３．８×１０６、少なくとも３．８×１０７、少なくとも３．８×１０８、少なくとも３．８×１０９または少なくとも３．８×１０１０Ｔ細胞／ｍ２の範囲である。ある特定の実施形態において、ヒト被験体の処置において使用される用量は、約３．８×１０９～約３．８×１０１０Ｔ細胞／ｍ２の範囲である。追加の実施形態において、Ｔ細胞の治療有効量は、約５×１０６細胞／ｋｇ体重～約７．５×１０８細胞／ｋｇ体重（例えば、約２×１０７細胞～約５×１０８細胞／ｋｇ体重または約５×１０７細胞～約２×１０８細胞／ｋｇ体重）で変動し得る。Ｔ細胞の正確な量は、被験体の年齢、体重、性別および生理学的状態に基づいて、当業者によって容易に決定される。有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から導かれた用量反応曲線から外挿され得る。
Ａ．薬学的組成物
Ａ．薬学的組成物
【0135】
ＣＡＲ Ｔ細胞および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物および製剤も本明細書中に提供される。
【0136】
本明細書中に記載されるような薬学的組成物および製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分（例えば、抗体またはポリペプチド）を１つ以上の自由選択の薬学的に許容され得るキャリア（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）と混合することによって、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で調製され得る。薬学的に許容され得るキャリアは、一般に、使用される投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、それらのキャリアとしては、緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；酸化防止剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム）；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な本明細書中の薬学的に許容され得るキャリアとしては、間質薬物分散剤、例えば、中性で活性な可溶性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに挙げられる。１つの態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ、例えば、コンドロイチナーゼと併用される。
Ｂ．併用療法
Ｂ．併用療法
【0137】
ある特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法は、少なくとも１つのさらなる治療と併用されるＴ細胞集団を含む。そのさらなる治療は、放射線療法、手術（例えば、ランペクトミーおよび乳房切除術）、化学療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイルス治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ治療、モノクローナル抗体治療または前述の組み合わせであり得る。そのさらなる治療は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。
【0138】
いくつかの実施形態において、さらなる治療は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、副作用制限剤（例えば、処置の副作用の発生率および／または重症度を下げることを目的とする作用物質、例えば、抗悪心剤など）の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、手術である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法と手術の併用である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、ガンマ線照射である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する治療、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤および／または化学予防剤である。さらなる治療は、当該分野で公知の化学療法剤の１つ以上であり得る。
【0139】
免疫細胞療法は、免疫チェックポイント療法などのさらなる癌治療の前、最中、後または様々な組み合わせで投与され得る。それらの投与は、同時から数分、数日、数週間までの範囲の間隔で行われ得る。免疫細胞療法がさらなる治療薬とは別に患者に提供される実施形態において、それら２つの化合物が、なおも患者に対して有益な併用効果を発揮できるように、各送達時点の間にかなりの期間が経過しないことを保証するのが一般的である。そのような場合、抗体療法と抗癌療法とが、互いの約１２～２４または７２時間以内に、より詳細には、互いの約６～１２時間以内に患者に提供され得ることが企図される。そのような状況において、それぞれの投与間に数日（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過した場合、処置期間をかなり延長することが望ましい可能性がある。
【0140】
様々な組み合わせが使用され得る。下記の例の場合、免疫細胞療法が、「Ａ」であり、抗癌療法が、「Ｂ」である：
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
【0141】
本実施形態の任意の化合物または治療の患者への投与は、それらの作用物質に毒性がある場合はそれを考慮して、そのような化合物を投与するための一般的なプロトコルに従う。ゆえに、いくつかの実施形態では、併用療法に起因し得る毒性をモニタリングする工程が存在する。
１．化学療法
１．化学療法
【0142】
多種多様の化学療法剤が、本実施形態に従って使用され得る。化学療法剤の例としては、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロスホスファミド）；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウセロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）およびウラシルマスタード）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ））；抗生物質（例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマｌＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１））；ジネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ジネマイシンＡを含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質であるエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラルニシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモミシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラルニシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチンおよびゾルビシン；抗代謝産物（例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリンおよびトリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）およびチオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン）；抗副腎（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、ミトタンおよびトリロスタン）；葉酸補給剤（例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）（例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ））；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクォン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質タンスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸または誘導体が挙げられる。
２．放射線療法
２．放射線療法
【0143】
ＤＮＡ損傷を引き起こす、広く使用されてきた他の因子としては、γ線、Ｘ線および／または腫瘍細胞への放射性同位体の定方向送達として一般的に知られているものが挙げられる。マイクロ波、陽子ビーム照射およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子も企図される。これらの因子のすべてが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対して広範囲のダメージをもたらす可能性が最も高い。Ｘ線の線量の範囲は、長期間（３～４週間）にわたる５０～２００レントゲンという１日線量から、２０００～６０００レントゲンという単回線量までの範囲である。放射性同位体の線量の範囲は、大きく異なり、同位体の半減期、放射される放射線の強度およびタイプ、ならびに腫瘍性細胞による取り込みに依存する。
３．免疫療法
３．免疫療法
【0144】
当業者は、免疫療法が上記実施形態の方法と併用してまたは併せて使用され得ることを理解する。癌の処置の状況において、免疫治療薬は、通常、癌細胞を標的化し、破壊するために免疫エフェクター細胞および免疫エフェクター分子を使用することに頼る。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））が、そのような例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の何らかのマーカーに特異的な抗体であり得る。その抗体は、単独で治療のエフェクターとして機能し得るか、または他の細胞をリクルートして、実際に細胞殺滅に影響し得る。その抗体はまた、薬物またはトキシン（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合体化され得、標的化剤として役立ち得る。あるいは、そのエフェクターは、腫瘍細胞標的と直接または間接的に相互作用する表面分子を有するリンパ球であり得る。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。
【0145】
抗体－薬物結合体（ＡＤＣ）は、殺細胞薬に共有結合的に連結された、併用療法において使用され得るモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含む。このアプローチは、抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性を非常に強力な細胞傷害性薬物と組み合わせることから、豊富なレベルの抗原を有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装した」ＭＡｂをもたらす。また、薬物の標的化送達は、正常組織への曝露を最小限に抑えることから、毒性の低減および治療指数の改善をもたらす。例示的なＡＤＣ薬物としては、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）およびＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）が挙げられる。
【0146】
免疫療法の１つの態様において、腫瘍細胞は、標的化の影響を受けやすい何らかのマーカー、すなわち、他の大部分の細胞上に存在しない何らかのマーカーを有さなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれかが、本実施形態の状況において標的化に好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、Ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニンレセプター、ｅｒｂ Ｂ、ｅｒｂ ｂ２およびｐ１５５が挙げられる。免疫療法の代替の態様は、抗癌効果と免疫刺激効果とを組み合わせることである。ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマ－ＩＦＮなどのサイトカイン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、およびＦＬＴ３リガンドなどの成長因子をはじめとした免疫刺激分子も存在する。
【0147】
免疫療法の例としては、免疫アジュバント、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼンおよび芳香族化合物）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦならびにＴＮＦ；遺伝子治療、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２およびｐ５３；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシド ＧＭ２および抗ｐ１８５が挙げられる。１つ以上の抗癌療法が、本明細書中に記載される抗体療法とともに使用され得ることが企図される。
【0148】
いくつかの実施形態において、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を強めるかまたはシグナルを弱めるかのいずれかである。免疫チェックポイントの遮断によって標的化され得る阻害性免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａレセプター（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＤ１５２としても知られるＣＴＬＡ－４）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的化する。
【0149】
免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、組換え型のリガンドまたはレセプターなどの薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体などの抗体である。免疫チェックポイントタンパク質またはそのアナログの公知の阻害剤が、使用され得、特に、キメラ化型、ヒト化型またはヒト型の抗体が使用され得る。当業者が承知しているように、代替のおよび／または等価な名称が、本開示において述べられるある特定の抗体に対して使用され得る。そのような代替のおよび／または等価な名称は、本開示の文脈において相互交換可能である。例えば、ランブロリズマブが、代替のおよび等価な名称であるＭＫ－３４７５およびペンブロリズマブとしても知られていることが知られている。
【0150】
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１がそのリガンド結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態において、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドであり得る。
【0151】
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＣＴ－０１１からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外の部分またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４である。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブが、使用され得る抗ＰＤ－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）およびＳＣＨ－９００４７５としても知られるペンブロリズマブが、例示的な抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られるＣＴ－０１１も、抗ＰＤ－１抗体である。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ－２２４は、ＰＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性レセプターである。
【0152】
本明細書中に提供される方法において標的化され得る別の免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても知られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）である。ヒトＣＴＬＡ－４の完全ｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見られ、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合したとき「切」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質であるＣＤ２８に似ており、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれＢ７－１およびＢ７－２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達するのに対して、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞にも見られ、それらの細胞の機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞レセプターおよびＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化により、Ｂ７分子に対する阻害性レセプターであるＣＴＬＡ－４が高発現される。
【0153】
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）、それらの抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドである。
【0154】
本方法における使用に適した抗ヒトＣＴＬＡ－４抗体（またはそれ由来のＶＨおよび／もしくはＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を用いて作製され得る。あるいは、当該分野で認められている抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）またはその抗原結合フラグメントおよびバリアントである。他の実施形態において、その抗体は、イピリムマブの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲまたは重鎖ＶＲおよび軽鎖ＶＲを含む。したがって、１つの実施形態において、その抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、その抗体は、ＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープへの結合が競合し、かつ／またはＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、その抗体は、上述の抗体に対して少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）を有する。
４．手術
４．手術
【0155】
癌を有する人のおよそ６０％が、予防的手術、診断的手術または進行度診断手術、根治的手術および緩和手術をはじめとした何らかのタイプの手術を受ける。根治的手術には、癌性組織の全部または一部を物理的に除去、切除および／または破壊する摘出術が含まれ、他の治療（例えば、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子治療、免疫療法および／または代替療法）と併せて使用され得る。腫瘍摘出術とは、腫瘍の少なくとも一部を物理的に除去することを指す。手術による処置には、腫瘍摘出術に加えて、レーザー手術、凍結手術、電気手術および顕微鏡下手術（モース術）が含まれる。
【0156】
癌性細胞、組織または腫瘍の一部または全部を切除する際、身体に空洞が形成され得る。処置は、さらなる抗癌療法によるその領域の灌流、直接注射または局所適用によって達成され得る。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６もしくは７日ごとに、または１、２、３、４および５週間ごとに、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２ヶ月ごとに、反復され得る。これらの処置は、様々な投与量でもあり得る。
５．他の作用物質
５．他の作用物質
【0157】
処置の治療効果を改善するために、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて他の作用物質が使用され得ることが企図される。これらのさらなる作用物質としては、細胞表面レセプターおよびギャップ結合のアップレギュレーションに影響する作用物質、細胞分裂抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導物質に対する過剰増殖細胞の感度を高める作用物質、または他の生物学的作用物質が挙げられる。ギャップ結合数を増加させることによる細胞間のシグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖細胞集団に対する抗過剰増殖効果を高め得る。他の実施形態では、処置の抗過剰増殖の有効性を改善するために、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて細胞分裂抑制剤または分化剤が使用され得る。本実施形態の有効性を改善するために、細胞接着の阻害剤が企図される。細胞接着阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンである。
Ｖ．製品またはキット
Ｖ．製品またはキット
【0158】
免疫細胞を含む製品またはキットも本明細書中に提供される。その製品またはキットは、個体の癌を処置するためもしくは癌の進行を遅延させるためにまたは癌を有する個体の免疫機能を高めるために免疫細胞を使用するための指示を含む添付文書をさらに含み得る。本明細書中に記載される抗原特異的免疫細胞のいずれかが、その製品またはキットに含められ得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。その容器は、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィン）または金属合金（例えば、ステンレス鋼またはハステロイ）などの種々の材料から形成され得る。いくつかの実施形態において、その容器は、製剤およびラベルを保持し、そのラベルは、容器に付着しているかまたは関連付けられており、その容器には、使用法が示されている場合がある。その製品またはキットは、商業的な観点およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含むことがあり、それらの材料としては、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用するための指示を含む添付文書が挙げられる。いくつかの実施形態において、その製品は、１つ以上の別の作用物質（例えば、化学療法剤および抗悪性腫瘍剤）をさらに含む。その１つ以上の作用物質に適した容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。
ＶＩ．実施例
ＶＩ．実施例
【実施例】
【0159】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含められる。以下の実施例に開示される手法は、本発明の実施において十分に機能すると本発明者が発見した手法であり、ゆえにその実施にとって好ましい形式であると考えることができることが当業者によって認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に鑑みて、開示される具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、それらの変更は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、なおも同様または類似の結果をもたらすと認識するはずである。
実施例１－ＣＤ７９ｂ抗体およびＣＡＲの開発
実施例１－ＣＤ７９ｂ抗体およびＣＡＲの開発
【0160】
ＣＤ７９ｂの発現は、Ｂ細胞系統に限定される：リアルタイムＰＣＲを用いて、ＣＤ７９ｂが、Ｍｉｎｏ、Ｄａｕｄｉ、ＨＢＣ－１、Ｊｅｋｏ、ＳＵＤＨＬ６、ＳＵＤＨＬ４およびＵ２９３２を含む広範囲のＢ細胞リンパ腫細胞株において発現されるが、ＪｕｒｋａｔおよびＪ７６Ｔ細胞リンパ腫／白血病細胞株では発現されないことが見出された（図１Ａ）。ＣＤ７９ｂが正常組織上で発現されているかを判定するために、２０種の正常ヒト組織全ＲＮＡを含むＦｉｒｓｔＣｈｏｉｃｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｓｕｒｖｅｙ ＰａｎｅｌをＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手した。ヒト扁桃サンプル由来の精製されたＢ細胞およびＴ細胞から全ＲＮＡを抽出し、それらをそれぞれポジティブコントロールおよびネガティブコントロールとして使用した。ＣＤ７９ｂ転写物は、脾臓およびリンパ節などのリンパ系組織だけに存在し、すべての非リンパ系の正常組織には存在しないことが見出された（図１Ｂ）。
【0161】
公的に入手可能な遺伝子発現データセット（Ｏｎｃｏｍｉｎｅ）を用いて、ＣＤ７９ｂが、ＡＬＬおよび慢性リンパ性白血病（図１Ｃ）および複数のＢ細胞リンパ腫サブタイプ（例えば、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫）（図１Ｄ）において高度に発現されることが見出された。各腫瘍タイプに対するサンプル数は、括弧内に示されている。
【0162】
ヒトＣＤ７９ｂに対する複数のモノクローナル抗体の作製ならびに抗体の重鎖配列および軽鎖配列の特定：ヒトＣＤ７９ｂを発現するマウス線維芽細胞Ｌ細胞でマウスを免疫することによって、抗ヒトＣＤ７９ｂモノクローナル抗体をハイブリドーマ技術によって作製した（図２Ａ）。ＥＬＩＳＡによって、組換えヒトＣＤ７９ｂタンパク質に対する結合能が高い３つのクローンを特定した（図２Ｂ）。これらの３つのモノクローナル抗体の親和性を、Ｏｃｔｅｔ Ａｓｓａｙによってさらに測定し、１．４４、１７．８および２．０ｎＭというＫｄ値をそれぞれ有する３つのクローン、１４（ＩｇＧ１）、１６Ａ（ＩｇＧ２）および４５（ＩｇＧ２）を、さらなる開発のために選択した（図２Ｃ）。モノクローナル抗体クローン＃１４を蛍光色素に結合体化したところ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されている抗ＣＤ７９ｂ抗体に匹敵するＢ細胞リンパ腫細胞株の染色を示した（図２Ｄ）。上記モノクローナル抗体のハイブリドーマの全ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成した。５’－ＲＡＣＥ ＰＣＲ（ｃＤＮＡ末端の迅速増幅）を用いて、重鎖および軽鎖のＶ遺伝子をクローニングした。ＤＮＡ配列によってタンパク質配列を予測した。ハイブリドーマの培養上清を精製し、ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙの質量分析によって重鎖および軽鎖のタンパク質配列を確認した。
【0163】
抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の作製：可変領域の一本鎖フラグメント（ｓｃＦｖ）の特異的配列を使用して、抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲの構築物をいくつか作製した。形質導入されたＴ細胞においてＣＡＲ発現を検出するために、ＣＡＲ－高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）融合構築物または切断型のヒト上皮成長因子レセプター（ｈｕＥＧＦＲｔ）を使用した（図３Ａ）。後者は、重篤な毒性が起こった場合にＣＡＲ Ｔ細胞を除去するための安全スイッチとしても働き得る。Ｔ細胞の活性化に対するシグナル１を提供するためにＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ｚ）鎖を組み込み、シグナル２を提供するために共刺激ドメインであるＣＤ２８または４－１ＢＢを組み込んだ（図３Ａ）。
【0164】
これらの構築物をレンチウイルスベクターｐＨＲ＿ＳＦＦＶにクローニングし、次いでそれを用いて、初代健康ドナーＴ細胞に形質導入した。クローン４５－ＣＤ７９ｂ－ＣＤ２８－ＣＡＲを用いてＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞におけるｅＧＦＰ発現によって測定される代表的な形質導入効率（＞７０％）が図３Ｂに示されている。抗ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ細胞をコントロールとして使用した。
【0165】
ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄで標識されたＤａｕｄｉ細胞に対するＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害活性を、記載のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比での１６時間のフローサイトメトリーアッセイにおけるＡｑｕａ染色によって測定した（図３Ｃ）。２０：１というＥ：Ｔ比での様々な培養条件に対する、死細胞率を伴う代表的なドットプロット（右上の四半分）が図３Ｄに示されている。データは、抗ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ細胞と抗ＣＤ７９ｂ－ＣＡＲ Ｔ細胞の両方が、形質導入されていないコントロールＴ細胞と比べてＤａｕｄｉバーキットリンパ腫細胞に対して高度に細胞傷害性であったことを示している。
【0166】
抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９
＋
リンパ腫細胞とＣＤ１９
－
リンパ腫細胞の両方に対して細胞傷害性である：ＣＤ１９陰性（ＣＤ１９－）リンパ腫細胞に対する抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を測定するために、脱顆粒および細胞傷害性アッセイを、ＣＤ１９を欠くびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株であるＳＵＤＨＬ６を用いて行った。まず、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９によってＣＤ１９をノックアウトし（ＣＤ１９ＫＯＳＵＤＨＬ６）、次いで、これらのリンパ腫細胞に、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物において使用される抗ＣＤ１９抗体クローンＦＭＣ６３に対する結合部位であるエキソン２を欠くＣＤ１９スプライスバリアント（ＣＤ１９Ｄｅｘ２）を形質導入した。
【0167】
形質導入されていない初代Ｔ細胞（コントロールＴ）、クローン－１４－ＣＤ７９ｂ－ＣＤ２８ ＣＡＲ、１４－ＣＤ７９ｂ－４－１ＢＢ ＣＡＲおよびＦＭＣ６３－ＣＤ１９－ＣＤ２８ ＣＡＲを、Ｄａｕｄｉ細胞または上記のＳＵＤＨＬ６細胞（ＣＤ１９ＫＯＳＵＤＨＬ６－ＣＤ１９Ｄｅｘ２）と５：１のＥ：Ｔ比で共培養した。Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄで標識し、標的細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで標識した。２時間後、ゴルジ阻害剤および脱顆粒マーカー（ＣＤ１０７ａ／ｂ）を培養物に加えて、Ｔ細胞の脱顆粒を測定した。腫瘍細胞に対する細胞傷害活性を共培養の４日後に測定した。１４－ＣＤ７９ｂ－ＣＤ２８および１４－ＣＤ７９ｂ－４－１ＢＢ ＣＡＲ Ｔ細胞は、著しく高い脱顆粒および両方の細胞株に対して細胞傷害活性を示したが、コントロールＴ細胞は示さなかった（図４Ａおよび図４Ｂ）。対照的に、ＦＭＣ６３－ＣＤ１９－ＣＤ２８ ＣＡＲは、ＣＤ１９＋Ｄａｕｄｉに対して細胞傷害性であったが、ＣＤ１９ＫＯＳＵＤＨＬ６－ＣＤ１９Ｄｅｘ２腫瘍細胞に対しては細胞傷害性でなかった。
【0168】
４日間の共培養の後に、フローサイトメトリー用のＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄｓを使用して、生細胞の腫瘍細胞の絶対数も測定した（図４Ｃ）。その結果は、生細胞の腫瘍細胞の観察されたパーセンテージと一致した（図４Ｂ）。標的細胞およびエフェクターＴ細胞の代表的なドットプロットが示されている（図４Ａおよび図４Ｂ）。これらの実験を少なくとも３回繰り返し、類似の結果が得られた。
【0169】
抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞は、リンパ腫異種移植片に対してインビボ有効性を示す：インビボにおける抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を試験するために、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現しているＭｉｎｏマントル細胞リンパ腫細胞株をＮＳＧマウスに２×１０６腫瘍細胞／マウスでＩＶ注射した。１８日後、マウスを、形質導入されていない初代Ｔ細胞、抗ＣＤ１９－ＣＤ２８ ＣＡＲ Ｔ細胞またはクローン４５抗ＣＤ７９ｂ－ＣＤ２８ ＣＡＲ Ｔ細胞で、１０×１０６個のＣＡＲ＋Ｔ細胞または形質導入されていないＴ細胞／マウスで尾静脈注射によって処置した。生物発光イメージングを用いて、腫瘍量を評価した（図５Ａ）。その結果は、形質導入されていないＴ細胞で処置されたマウスにおいて進行性の腫瘍成長を示した。対照的に、良好な腫瘍制御および生存時間の著しい改善（ｐ＜０．０５）が、抗ＣＤ１９－と抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ Ｔ細胞の両方で処置されたマウスにおいて観察された（図５Ｂおよび図５Ｃ）。インビトロの結果は、各個別の実験に対して少なくとも３回検証し、インビボの結果は２回検証した。したがって、抗ＣＤ７９ｂ ＣＡＲ療法は、ＣＤ１９を発現しているまたは発現していないＢ細胞悪性腫瘍の処置のために使用することができる。
【0170】
本明細書中に開示および特許請求される方法のすべてが、本開示に鑑みて、過度の実験を行うことなく実施および実行され得る。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態の点から説明してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書中に記載された方法および方法の工程または工程の順序に変更が適用されてもよいことが当業者には明らかだろう。より詳細には、同じまたは類似の結果が達成される限り、化学的かつ生理的に関係するある特定の作用物質を本明細書中に記載される作用物質の代わりに用いてもよいことが明らかだろう。当業者に明らかなそのような類似の代替物および改変のすべてが、添付の請求項によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念の範囲内であるとみなされる。
文献
以下の参考文献は、それらが本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順または他の詳細を提供する範囲で、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994.
Chothia et al., 1988.
Davila et al., 2013.
European patent application number EP2537416
Heemskerk et al. Hum Gene Ther. 19:496-510, 2008.
International Patent Publication No. WO/2014055668 Al.
International Patent Publication No. WO200014257
International Patent Publication No. WO2012/129514
International Patent Publication No. WO2013/071154
International Patent Publication No. WO2013/123061
International Patent Publication No. WO2013/166321
International Patent Publication No. WO2013126726
International Patent Publication No. WO2014031687
Johnson et al. Blood 114:535-46, 2009.
Jores et al., 1990.
Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.
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Liu et al., 2003.
Remington's Pharmaceutical Sciences 22nd edition, 2012.
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U.S. Patent No. 5,091,513
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U.S. Patent No. 5,994,136
U.S. Patent No. 6,013,516
U.S. Patent No. 6,410,319
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U.S. Patent No. 6,451,995
U.S. Patent No. 6,881,557
U.S. Patent No. 6,946,546
U.S. Patent No. 7,070,995
U.S. Patent No. 7,265,209
U.S. Patent No. 7,354,762
U.S. Patent No. 7,446,179
U.S. Patent No. 7,446,190
U.S. Patent No. 7,446,191
U.S. Patent No. 8,252,592
U.S. Patent No. 8,324,353
U.S. Patent No. 8,339,645
U.S. Patent No. 8,398,282
U.S. Patent No. 8,479,118
U.S. Patent No.: 7,446,190
U.S. Patent Publication No. US2002131960
U.S. Patent Publication No. US20050214860
U.S. Patent Publication No. US20130149337
U.S. Patent Publication No. US2013287748
Wu et al., 2012
文献
以下の参考文献は、それらが本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順または他の詳細を提供する範囲で、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
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U.S. Patent No. 8,339,645
U.S. Patent No. 8,398,282
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U.S. Patent Publication No. US2013287748
Wu et al., 2012
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【配列表】