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特許7548924がんの処置における増強された有効性のためのＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-02
(45)【発行日】2024-09-10
(54)【発明の名称】がんの処置における増強された有効性のためのＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240903BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240903BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240903BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240903BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240903BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 U ZNA
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61P43/00 121
A61P35/00
A61P35/04
A61K45/00
【請求項の数】
54
(21)【出願番号】P 2021552562
(86)(22)【出願日】2020-02-28
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-26
(86)【国際出願番号】 US2020020494
(87)【国際公開番号】W WO2020180727
(87)【国際公開日】2020-09-10
【審査請求日】2023-02-22
(31)【優先権主張番号】62/814,648
(32)【優先日】2019-03-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/966,760
(32)【優先日】2020-01-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】597160510
【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】キャロライン・リオット
(72)【発明者】
【氏名】フランク・キューネルト
【審査官】柴原 直司
(56)【参考文献】
【文献】Clin. Exp. Metastasis，2015年，32, [8]，p.847-856
【文献】J.Pancreatol.，2019年，2, [1]，p.6-10
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ４５／００－４５／０６
Ａ６１Ｋ ３９／３９５
Ａ６１Ｐ ３５／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
方法において、プログラム死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する抗体と組み合わせて使用するためのＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）に特異的に結合する抗体を含む医薬であって、
前記方法は（ａ）腫瘍を有する対象を選択すること；並びに（ｂ）対象に、治療有効量の抗ＩＬ－４Ｒ抗体及び治療有効量の抗ＰＤ－１抗体を投与することを含み、
該抗ＰＤ－１抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲｓ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１は配列番号１３のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号１４のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号１５のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号１６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号１７のアミノ酸配列を含み；そしてＬＣＤＲ３は配列番号１８のアミノ酸配列を含む、
前記医薬。
【請求項2】
腫瘍は、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、脳がん、子宮頸がん、肛門がん、子宮がん、結腸がん、肝がん、膵がん、肺がん、子宮内膜がん、骨がん、精巣がん、皮膚がん、腎がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、唾液腺がん、骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、又はＢ細胞性慢性リンパ性白血病を含む、請求項１に記載の医薬。
【請求項3】
腫瘍は２型免疫依存性がんを含む、請求項１に記載の医薬。
【請求項4】
２型免疫依存性がんは、膵がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんを含む、請求項３に記載の医薬。
【請求項5】
腫瘍は膵がんを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項6】
腫瘍は非小細胞肺がんを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項7】
腫瘍は肺扁平上皮がんを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項8】
腫瘍は原発性、転移性、又は再発性である、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項9】
対象は事前に抗腫瘍治療剤又は抗腫瘍治療を用いて処置されていた、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項10】
対象はＰＤ－１阻害剤を用いて処置されていた、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項11】
腫瘍は治療剤又は治療を用いた事前の処置に対して抵抗性であるか又は非反応性である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項12】
対象は少なくとも１つのサイトカインのアップレギュレーションを示す、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項13】
少なくとも１つのサイトカインはＩＬ－４及びＩＬ－１３の少なくとも１つを含む、請求項１２に記載の医薬。
【請求項14】
対象は、少なくとも１つのサイトカインの増加した産生を示す、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項15】
少なくとも１つのサイトカインはＩＬ－４を含む、請求項１４に記載の医薬。
【請求項16】
対象は腫瘍において増加したヒアルロン酸（ＨＡ）含有量を示す、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項17】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含むＨＣＶＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含むＬＣＶＲを含み、ここで：ＨＣＤＲ１は配列番号３のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ２は配列番号４のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ１は配列番号６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号７のアミノ酸配列を有し；そしてＬＣＤＲ３は配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項18】
前記抗ＩＬ－４Ｒ抗体のＨＣＶＲは配列番号１のアミノ酸配列を含み、そして前記抗ＩＬ－４Ｒ抗体のＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の医薬。
【請求項19】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１７または１８に記載の医薬。
【請求項20】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで軽鎖は配列番号１０のアミノ酸配列を有する、請求項１７～１９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項21】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号９のアミノ酸配列を有し、そして軽鎖は配列番号１０のアミノ酸配列を有する、請求項１７～１９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項22】
前記抗ＩＬ－４Ｒ抗体はデュピルマブ又はその生物学的に同等なものである、請求項１～２１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項23】
抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項24】
抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号１９のアミノ酸配列を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項25】
抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで軽鎖は配列番号２０のアミノ酸配列を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項26】
抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号１９のアミノ酸配列を有し、そして軽鎖は配列番号２０のアミノ酸配列を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項27】
抗ＰＤ－１抗体はセミプリマブ又はその生物学的に同等なものである、請求項１～２６のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項28】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体の１つ又はそれ以上の用量は、抗ＰＤ－１抗体の１つ又はそれ以上の用量と組み合わせて使用するためのものである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項29】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体の少なくとも１つの用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１～約５０ｍｇを含む、請求項２８の医薬。
【請求項30】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体の少なくとも１つの用量は、約０．０５～約１０００ｍｇを含む、請求項２８に記載の医薬。
【請求項31】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体の各用量は、直前の投薬の０．５～１２週間後に使用されるためのものである、請求項２８～３０のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項32】
抗ＰＤ－１抗体の少なくとも１つの用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇを含む、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項33】
抗ＰＤ－１抗体の少なくとも１つの用量は、約０．０５～約５００ｍｇを含む、請求項２８～３１のいずれか１項の医薬。
【請求項34】
抗ＰＤ－１抗体の各用量は、直前の投薬の０．５～１２週間の使用のためのものである、請求項３２又は３３に記載の医薬。
【請求項35】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、抗ＰＤ－１抗体と同時に使用するためのものである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項36】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、抗ＰＤ－１抗体に先立つ使用のためのものである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項37】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、抗ＰＤ－１抗体の後の使用のためである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項38】
患者において、腫瘍退縮を促進し、腫瘍成長を遅延させ、腫瘍細胞量を減少し、腫瘍負荷を減少し、かつ／又は腫瘍再発を予防する、請求項１～３７のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項39】
未処置の対象又は単剤療法としていずれかの抗体で処置された対象と比較して、処置された対象において少なくとも約１０％多く腫瘍退縮を促進する、請求項１～３８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項40】
未処置の対象又は単剤療法としていずれかの抗体で処置された対象と比較して、腫瘍細胞又は腫瘍サイズの少なくとも３０％又はそれ以上の減少をもたらす、請求項１～３８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項41】
少なくとも１つのさらなる治療剤を投与するか又は少なくとも１つのさらなる治療を行うことをさらに含む、請求項請求項１～４０のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項42】
さらなる治療剤又は治療は、化学療法、シクロホスファミド、外科手術、放射線、がんワクチン、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤、ＣＤ２８活性化因子、同時刺激受容体に対するアゴニスト、腫瘍特異的抗原に対する抗体、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、細胞毒、化学療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカイン、ＡＤＣ、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、及び／又は栄養補助食品を含む、請求項４１に記載の医薬。
【請求項43】
腫瘍の処置又は腫瘍の成長の阻害における、使用のための医薬送達システムであって、（ａ）ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）に特異的に結合する抗体及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物；並びに（ｂ）プログラム死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する抗体及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を含み、ここで該抗ＰＤ－１抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲｓ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲｓ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１は配列番号１３のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号１４のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号１５のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号１６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号１７のアミノ酸配列を含み；そしてＬＣＤＲ３は配列番号１８のアミノ酸配列を含む、
前記医薬送達システム。
【請求項44】
医薬組成物（ａ）及び（ｂ）は互いに分離している、請求項４３に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項45】
医薬組成物（ａ）は、抗ＩＬ－４Ｒ抗体の１つ又はそれ以上の用量を含む、請求項４３又は４４に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項46】
少なくとも１つの用量は、約５～１０００ｍｇの抗ＩＬ－４Ｒ抗体を含む、請求項４５に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項47】
医薬組成物（ｂ）は抗ＰＤ－１抗体の１つ又はそれ以上の用量を含む、請求項４３～４６のいずれか１項に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項48】
少なくとも１つの用量は抗ＰＤ－１抗体約５～５００ｍｇを含む、請求項４７に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項49】
抗ＩＬ－４Ｒ抗体はデュピルマブである、請求項４８に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項50】
抗ＰＤ－１抗体はセミプリマブである、請求項４３～４９のいずれか１項に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項51】
シクロホスファミド、がんワクチン、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ２８活性化因子、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤、同時刺激受容体に対するアゴニスト、腫瘍特異的抗原に対する抗体、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、細胞毒、化学療法剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、ＡＤＣ、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、及び栄養補助食品からなる群から選択される少なくとも１つのさらなる治療剤をさらに含む、請求項４３～５０のいずれか１項に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項52】
腫瘍の処置又は腫瘍の成長の阻害における使用のための、請求項４３～５１のいずれか１項に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項53】
腫瘍は２型免疫依存性がんを含む、請求項５２に記載の、使用のための医薬送達システム。
【請求項54】
キットであって、該キットは、請求項４３～５３のいずれか１項に記載の使用のための医薬送達システム、及び抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた抗ＩＬ－４Ｒ抗体の、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害するための使用についての書面での指示を含む、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本開示は、治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤と組み合わせた治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置するための方法に関する。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＰＤ－１遮断の抗腫瘍有効性を増強する。
本開示は、治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤と組み合わせた治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置するための方法に関する。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＰＤ－１遮断の抗腫瘍有効性を増強する。
【背景技術】
【0002】
背景
２型免疫は様々ながん型において腫瘍成長及び転移を促進する。いくつかの２型関連サイトカイン、ケモカイン又は受容体ががんに関与しており、そして様々なヒト腫瘍において過剰発現される。例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－４Ｒα、及びＩＬ－３３は多数のヒトがん型において過剰発現され、そして膀胱がん、乳がん又は卵巣がんにおいて不良な予後と関連している（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。２型免疫は、多数の２型サイトカイン及びケモカインの産生を特徴とし（例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、ＩＬ－３３）、そしてアレルギー応答又は抗寄生虫感染症の間に組織においてよく見られる。２型免疫応答はまた、組織修復応答及び線維症に寄与する（非特許文献４；非特許文献５）。
２型免疫は様々ながん型において腫瘍成長及び転移を促進する。いくつかの２型関連サイトカイン、ケモカイン又は受容体ががんに関与しており、そして様々なヒト腫瘍において過剰発現される。例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－４Ｒα、及びＩＬ－３３は多数のヒトがん型において過剰発現され、そして膀胱がん、乳がん又は卵巣がんにおいて不良な予後と関連している（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。２型免疫は、多数の２型サイトカイン及びケモカインの産生を特徴とし（例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、ＩＬ－３３）、そしてアレルギー応答又は抗寄生虫感染症の間に組織においてよく見られる。２型免疫応答はまた、組織修復応答及び線維症に寄与する（非特許文献４；非特許文献５）。
【0003】
膵管腺癌（ＰＤＡＣ）は、米国におけるがん関連死の第三の主要な原因であり、５年生存率は８％である。この非常に悪い予後は主にＰＤＡＣが大部分の治療に対して抵抗性であるためである。特に、免疫チェックポイント阻害（ＩＣＢ）免疫療法（例えば、抗ＰＤ－１又は抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４））は、ＰＤＡＣ患者において臨床応答を生じることができない。ＰＤＡＣにおける強い薬物抵抗性に主に寄与するものは、その独特な線維形成性間質 － がん関連線維芽細胞、免疫細胞及び大量の細胞外マトリックス成分からなる密な線維化及び間質反応 － であり、これは薬物灌流及びＴ細胞浸潤の物理的バリアとして作用し、そしてＴ細胞機能を阻害する重度の免疫抑制性環境を作り出す（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。
【0004】
前臨床研究は、ＩＬ－１３、ＩＬ－４Ｒ、又はＴＳＬＰの遺伝子破壊又は遮断が、膵がん、乳がん及び結腸直腸がんにおいて腫瘍成長及び転移負荷を減少させることができるということを示した。さらに、血清ＩＬ－４及びＴＳＬＰは、膵がん患者において生存を予測することが示された（非特許文献９；非特許文献１０）。２型免疫依存性腫瘍形成の機序は、線維症形成の誘導、抗腫瘍サーベイランスの阻害又は増加したグルコース及びグルタミンがん細胞代謝を含む（非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。総合すると、これらのデータは、２型免疫が様々ながん型において腫瘍成長及び転移を促進するということを実証する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【文献】Ｊｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．、３（６）：１６１５－２８、２０１４
【文献】Ｆｏｒｍｅｎｔｉｎｉ ｅｔ ａｌ．、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓ．、２７（１０）：１３６９－７６、２０１２
【文献】Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌ Ｏｎｃｏｌ． １０（１）：１１３－２５、２０１５
【文献】Ｗｙｎｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５（５）：２７１－８２、２０１５
【文献】Ｇｉｅｓｅｃｋ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８（１）：６２－７６、２０１７
【文献】Ｏｌｉｖｅ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３２４（５９３３）：１４５７－６１、２００９
【文献】Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２１（３）：４１８－２９、２０１２
【文献】Ｆｅｉｇ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．、１１０（５０）：２０２１２－１７、２０１３
【文献】Ｐｉｒｏ ｅｔ ａｌ．、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６（９）： ｅ１３２２２４２、２０１７
【文献】Ｄｅ Ｍｏｎｔｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ、２０８（３）：４６９－７８、２０１１
【文献】ＤｅＮａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、１６（２）：９１－１０２、２００９
【文献】Ｌｉｏｕ ｅｔ ａｌ、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．、１９（７）：１３２２－３３、２０１７
【文献】Ｐｅｄｒｏｚａ－Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ、２０８（３）：４７９－９０、２０１１
【文献】Ｖｅｎｍａｒ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、１８５３（５）：１２１９－２８、２０１５
【文献】Ｏｓｔｒａｎｄ－Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６５：６０１５－１９、２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
したがって、２型免疫応答を特徴とするがん及びがん型サブセット並びに事前の治療に対して抵抗性であるがんを含むがんを処置するための新しい有効な治療の必要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
要旨
一態様において、開示される技術は、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法に関し、該方法は：（ａ）腫瘍を有する対象を選択すること；並びに（ｂ）それを必要とする対象に、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤を投与することを含む。一実施形態において、対象は、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、脳がん、子宮頸がん、膀胱がん、肛門がん、子宮がん、結腸がん、肝がん、膵がん、肺がん、子宮内膜がん、骨がん、精巣がん、皮膚がん、腎がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、唾液腺がん、骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病からなる群から選択される腫瘍を有する。一実施形態において、腫瘍は２型免疫依存性がんを含む。別の実施形態において、２型免疫依存性がんとしては、膵がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんが挙げられる。別の実施形態において、腫瘍は膵がんを含む。一実施形態において、腫瘍は原発性、転移性、又は再発性である。一実施形態において、対象は１つ又はそれ以上の抗がん治療で処置されていた。一実施形態において、対象は事前の治療に対して抵抗性であるか又は不適切に応答性である腫瘍を有する。一実施形態において、対象は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤など）を用いた処置に対して抵抗性であるか又は非反応性である腫瘍を有する。
一態様において、開示される技術は、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法に関し、該方法は：（ａ）腫瘍を有する対象を選択すること；並びに（ｂ）それを必要とする対象に、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤を投与することを含む。一実施形態において、対象は、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、脳がん、子宮頸がん、膀胱がん、肛門がん、子宮がん、結腸がん、肝がん、膵がん、肺がん、子宮内膜がん、骨がん、精巣がん、皮膚がん、腎がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、唾液腺がん、骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病からなる群から選択される腫瘍を有する。一実施形態において、腫瘍は２型免疫依存性がんを含む。別の実施形態において、２型免疫依存性がんとしては、膵がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんが挙げられる。別の実施形態において、腫瘍は膵がんを含む。一実施形態において、腫瘍は原発性、転移性、又は再発性である。一実施形態において、対象は１つ又はそれ以上の抗がん治療で処置されていた。一実施形態において、対象は事前の治療に対して抵抗性であるか又は不適切に応答性である腫瘍を有する。一実施形態において、対象は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤など）を用いた処置に対して抵抗性であるか又は非反応性である腫瘍を有する。
【0008】
一実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、抗ＩＬ－４抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－４トラップ、ＩＬ－１３トラップ、及び抗ＩＬ－４Ｒ抗体からなる群から選択される。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は抗ＩＬ－４抗体（例えば、パスコリツマブ（ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ））である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は抗ＩＬ－１３抗体（例えば、トラロキヌマブ、レブリキズマブ、デクトレクマブ（ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ）、ＧＳＫ６７９５８６、又はＭＥＤＩ７８３６）である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体（例えば、ロミルキマブ（ｒｏｍｉｌｋｉｍａｂ））である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、ピトラキンラのようなＩＬ－４ムテイン又は抗ＩＬ－４Ｒ抗体）である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は抗ＩＬ－４Ｒ抗体である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＩＬ－４又はＩＬ－１３トラップである。
【0009】
別の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。別の実施形態において、ＨＣＶＲは３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含み、そしてＬＣＶＲは３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ここで： ＨＣＤＲ１は配列番号３のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ２は配列番号４のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ１は配列番号６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号７のアミノ酸配列を有し；そしてＬＣＤＲ３は配列番号８のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号９のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで軽鎖は配列番号１０のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号９のアミノ酸配列を有し、そして軽鎖は配列番号１０のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はデュピルマブ又はその生物学的に同等なもの（ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）である。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、デュピルマブ、パスコリツマブ、ＡＭＧ３１７、ＭＥＤＩ２０４５、ＭＥＤＩ９３１４、トラロキヌマブ、レブリクジマブ（ｌｅｂｒｉｋｚｉｍａｂ）、アンルキンズマブ（ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）、デクトレクマブ、ＧＳＫ６７９５８６、ＭＥＤＩ７８３６、ロミルキマブ、ＩＬ－４トラップ、ＩＬ－１３トラップ、ＡＥＲ－００３、及びピトラキンラからなる群から選択される。
【0010】
一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び抗ＰＤ－Ｌ２抗体から選択される。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む抗ＰＤ－１抗体である。別の実施形態において、ＨＣＶＲは３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含み、そしてＬＣＶＲは３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ここで： ＨＣＤＲ１は配列番号１３のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ２は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；ＨＣＤＲ３は配列番号１５のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ１は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１７のアミノ酸配列を有し；そしてＬＣＤＲ３は配列番号１８のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１１／１２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対を含む。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで重鎖は配列番号１９のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、ここで軽鎖は配列番号２０のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、個々で重鎖は配列番号１９のアミノ酸配列を有し、そして軽鎖は配列番号２０のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤はセミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）又はその生物学的に同等なものである。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ＢＩ ７５４０９１、ＰＦ－０６８０１５９１、シンチリマブ（ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ）、ＡＧＥＮ２０３４、スパルタリズマブ（ｓｐａｒｔａｌｉｚｕｍａｂ）、カムレリズマブ（ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、ＪＮＪ－６３７２３２８３、及びＭＣＬＡ－１３４からなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、Ｈ１Ｈ８３１４Ｎ、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５、及びＣＫ－３０１からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
【0011】
別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の用量は、抗ＰＤ－１抗体の１つ又はそれ以上の用量と組み合わせて投与される。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１つの用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１～約５０ｍｇ／ｋｇを含む。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１つの用量は、阻害剤約０．０５～約１０００ｍｇを含む。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤の少なくとも１つの用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇを含む。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤の少なくとも１つの用量は、阻害剤約０．０５～約５００ｍｇを含む。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＰＤ－１阻害剤の前に投与される。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＰＤ－１阻害剤の後に投与される。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＰＤ－１阻害剤と同時に投与される。別の実施形態において、上記方法は、患者において、腫瘍退縮を促進し、腫瘍成長を遅延させ、腫瘍細胞量を減少し、腫瘍負荷を減少し、かつ／又は腫瘍再発を予防する。別の実施形態において、上記方法は、未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、処置された対象において少なくとも約１０％多く腫瘍退縮を促進する。別の実施形態において、上記方法は、未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、腫瘍細胞又は腫瘍サイズの少なくとも３０％又はそれ以上の減少をもたらす。
【0012】
別の実施形態において、上記方法はさらに、少なくとも１つのさらなる治療剤を投与するか又は少なくとも１つのさらなる治療を行うことをさらに含む。別の実施形態において、さらなる治療剤又は治療は、化学療法、シクロホスファミド、外科手術、放射線、がんワクチン、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤、ＣＤ２８活性化因子、同時刺激受容体に対するアゴニスト、腫瘍特異的抗原に対する抗体、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、細胞毒、化学療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカイン又はその誘導体（例えば、ＩＬ－１２又はＩＬ－２）、ＡＤＣ、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、及び／又は栄養補助食品を含む。
【0013】
別の態様において、開示される技術は：（ａ）ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物；並びに（ｂ）プログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を含む医薬送達システムに関する。一実施形態において、医薬組成物（ａ）及び（ｂ）は互いに分離している。別の実施形態において、医薬組成物（ａ）はＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。別の実施形態において、少なくとも１つの用量はＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約５～１０００ｍｇを含む。別の実施形態において、医薬組成物（ｂ）はＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。別の実施形態において、少なくとも１つの用量はＰＤ－１阻害剤約５～５００ｍｇを含む。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、抗ＩＬ－４抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、ＩＬ－４トラップ、ＩＬ－１３トラップ、及び抗ＩＬ－４Ｒ抗体からなる群から選択される。別の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、デュピルマブ、パスコリツマブ、ＡＭＧ３１７、ＭＥＤＩ２０４５、ＭＥＤＩ９３１４、トラロキヌマブ、レブリクジマブ、アンルキンズマブ、デクトレクマブ、ＧＳＫ６７９５８６、ＭＥＤＩ７８３６、ロミルキマブ、ＩＬ－４トラップ、ＩＬ－１３トラップ、ＡＥＲ－００３、及びピトラキンラからなる群から選択される。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び抗ＰＤ－Ｌ２抗体からなる群から選択される。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ＢＩ ７５４０９１、ＰＦ－０６８０１５９１、シンチリマブ、ＡＧＥＮ２０３４、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３、及びＭＣＬＡ－１３４からなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である。別の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、Ｈ１Ｈ８３１４Ｎ、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５、及びＣＫ－３０１からなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
【0014】
別の実施形態において、医薬送達システムは、シクロホスファミド、がんワクチン、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、ＣＤ２８活性化因子、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤、同時刺激受容体に対するアゴニスト、腫瘍特異的抗原に対する抗体、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、細胞毒、化学療法剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、ＡＤＣ、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、及び栄養補助食品からなる群から選択される少なくとも１つのさらなる治療剤をさらに含む。別の実施形態において、医薬送達システムは、腫瘍の処置又は腫瘍の成長の阻害における使用のためのものである。別の実施形態において、腫瘍は２型免疫依存性がんを含む。
【0015】
別の態様において、開示される技術は、（ａ）ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物；（ｂ）ＰＤ－１阻害剤及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を有する医薬送達システム；及びＰＤ－１阻害剤と組み合わせたＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害するための使用についての書面での指示を含むキットに関する。
【0016】
別の態様において、開示される技術は、ＰＤ－１阻害剤と組み合わせた、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法における使用のためのＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤に関し、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の各阻害剤を投与することを含む。別の態様において、開示される技術は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤と組み合わせた、腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法における使用のためのＰＤ－１阻害剤に関し、該方法はそれを必要とする対象に治療有効量の各阻害剤を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】図１Ａは、実施例１に記載される試験に従うベースラインでの３０～１１０ｍｍ３腫瘍体積からの腫瘍体積減少を示す線グラフである。アスタリスク（＊）はアイソタイプコントロール（ＩｇＧ）と比較した統計的有意性の程度を示す。
【図2A】図２Ａは、実施例１に記載される反復試験に従うベースラインでの腫瘍体積５０～１１０ｍｍ３からの腫瘍体積減少を示す線グラフである。アスタリスク（＊）は、アイソタイプ・コントロール（ＩｇＧ）と比較した統計的有意性の程度を示す。
【図3A】図３Ａは、実施例３に記載されるように、発がん性ＫＲＡＳを発現するように操作され、付随してＰ５３腫瘍抑制因子の機能を喪失した同系膵腫瘍オルガノイド細胞（ＫＰ細胞）を、皮下（Ｓｕｂ－Ｃｕ）又は同所に（Ｏｒｔｈｏ）に移植されたＢａｌｂ／ｃマウスにおける正常と比較したＩＬ－４及びＩＬ－１３ ｍＲＮＡの発現を示す棒グラフである。
【図3B】図３Ｂは、実施例３に記載されるように、発がん性ＫＲＡＳを発現するように操作され、付随してＰ５３腫瘍抑制因子の機能を喪失した同系膵腫瘍オルガノイド細胞（ＫＰ細胞）を、皮下（Ｓｕｂ－Ｃｕ）又は同所に（Ｏｒｔｈｏ）に移植されたＢａｌｂ／ｃマウスにおけるＩＬ－４サイトカイン産生を示す棒グラフである。
【図4A】図４Ａは、実施例４に記載される研究に従うベースラインでの腫瘍体積７０～１００ｍｍ３から４０日までの腫瘍体積減少を示す線グラフである。アスタリスク（＊）は、アイソタイプコントロール（ＩｇＧ）と比較した統計的有意性の程度を示す。
【図4C】図４Ｃは、実施例４に記載される研究の終わりに腫瘍溶解物において測定された全身インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦａ）サイトカインレベルを示す一対の棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【0018】
詳細な説明
当然のことながら、方法及び実験条件は変わり得るので、本開示は記載されるそのような特定の方法及び実験条件に限定されない。また当然のことながら、本明細書において使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためであり、かつ限定することを意図されず、そして本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
当然のことながら、方法及び実験条件は変わり得るので、本開示は記載されるそのような特定の方法及び実験条件に限定されない。また当然のことながら、本明細書において使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためであり、かつ限定することを意図されず、そして本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【0019】
別の定義がなければ、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、開示される発明が属する分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で使用されるように、特定の記載される数値を参照して使用される場合、用語「約」は、その値が記載された値から１％以下だけ変動し得るということを意味する。例えば、本明細書で使用されるように、表現「約１００」は９９及び１０１、並びにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【0020】
本明細書に記載される方法及び材料と類似するか又は等価ないずれの方法及び材料も本開示の実施において使用することができるが、好ましい方法及び材料がここで記載される。
【0021】
本開示は、治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤と組み合わせて治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんを処置する方法を含む。いくつかの実施形態において、開示される方法は、がんにおける２型免疫依存性腫瘍形成促進（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ）機序を標的とし、したがって線維増生特徴を示すものを含む腫瘍を処置するか又は該腫瘍の成長を阻害するための新しく高度に有効な方法を提供する。いくつかの実施形態において、開示された方法は、抗腫瘍剤と組み合わせて、ＩＬ－４Ｒ遮断又は２型免疫応答経路を標的とする他の免疫療法を使用して２型免疫依存性がんを処置し、該抗腫瘍剤としては、限定されないが、ＩＣＢ（例えば、化学療法、二重特性抗体、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞）が挙げられる。
【0022】
本明細書において使用されるように、「２型免疫遺伝子遺伝子シグネチャー」は、１つ又はそれ以上の２型サイトカイン、２型ケモカイン、２型受容体、及び２型下流標的遺伝子のアップレギュレーション又は過剰発現を指し：これらとしてはＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ２５、ＩＬ１７ＲＢ、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＣＣＬ２４、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＣＬ１、ＭＵＣ５Ｂ、ＣＣＬ２６、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＰＯＳＴＮ、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１７、ＦＣＥＲ２、ＣＣＲ３、ＩＬ６、ＣＣＬ８、ＣＲＬＦ２、ＩＬ３３、ＴＳＬＰ、ＩＬ－４Ｒ、ＣＣＲ４、ＰＴＧＤＲ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＩＬ１ＲＬ１、ＤＰＰ４、ＩＬ－４、ＩＬ５、及びＩＬ－１３が挙げられる。実施例３において実証されるように、例えば、ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子発現は、２型免疫依存性がんである膵がんのインビボモデルにおいて大幅にアップレギュレートされることが見出された。
【0023】
本明細書で使用されるように、「２型免疫依存性がん」は、強い２型免疫遺伝子シグネチャーを示すヒトがん又はヒトがんのサブセットのようながん又はがんのサブセットを指す。
【0024】
本明細書で使用されるように、「２型免疫経路遮断」は、２型免疫遺伝子シグネチャーの任意の遺伝子を標的とする免疫療法を指す。
【0025】
腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法
本開示は、対象においてがんを処置するか、寛解するか、もしくはがんの少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度を低減するため、又はがんの成長を阻害するための方法を含む。この態様において、開示された方法は、腫瘍を有する対象を選択すること、並びに治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤（例えば、抗ＩＬ－４抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、抗ＩＬ－４Ｒ抗体、又は本明細書に記載されるいずれかの他の「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤」）及び治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体、又は本明細書に記載されるいずれかの他の「ＰＤ－１阻害剤」）を、それを必要とする対象に投与することを含む。
本開示は、対象においてがんを処置するか、寛解するか、もしくはがんの少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度を低減するため、又はがんの成長を阻害するための方法を含む。この態様において、開示された方法は、腫瘍を有する対象を選択すること、並びに治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤（例えば、抗ＩＬ－４抗体、抗ＩＬ－１３抗体、抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤、抗ＩＬ－４Ｒ抗体、又は本明細書に記載されるいずれかの他の「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤」）及び治療有効量のプログラム死１（ＰＤ－１）阻害剤（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及び／もしくはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体、又は本明細書に記載されるいずれかの他の「ＰＤ－１阻害剤」）を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【0026】
本開示において、任意の特定の抗ＩＬ－４Ｒ抗体及び／又は任意の特定の抗ＰＤ－１抗体への言及は、それぞれ代表的なＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び代表的なＰＤ－１阻害剤を説明するために提供され、そして他のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤の組み合わせも使用され得るので、本開示の範囲を限定しない。
【0027】
本明細書で使用されるように、用語「処置すること」、「処置する」、又は同様のものは、少なくとも１つの症状もしくは徴候の重症度を軽減もしくは低減すること、一時的に又は永続的のいずれかで症状の因果関係を排除する
こと、腫瘍成長を遅延させるかもしくは阻害すること、腫瘍細胞量もしくは腫瘍負荷を低減すること、又は腫瘍退縮を促進すること、腫瘍の縮小、壊死及び／もしくは消失を引き起こすこと、腫瘍再発を予防すること、転移を予防もしくは阻害すること、転移性腫瘍成長を阻害すること、外科手術の必要を除外すること、腫瘍を縮小して外科手術を容易にすること、切除率を増加させること、並びに／又は対象の生存期間を増加することを意味する。多くの実施形態において、用語「腫瘍」、「がん」及び「悪性腫瘍」は交換可能に使用され、そして１つ又はそれ以上の成長を指す。
こと、腫瘍成長を遅延させるかもしくは阻害すること、腫瘍細胞量もしくは腫瘍負荷を低減すること、又は腫瘍退縮を促進すること、腫瘍の縮小、壊死及び／もしくは消失を引き起こすこと、腫瘍再発を予防すること、転移を予防もしくは阻害すること、転移性腫瘍成長を阻害すること、外科手術の必要を除外すること、腫瘍を縮小して外科手術を容易にすること、切除率を増加させること、並びに／又は対象の生存期間を増加することを意味する。多くの実施形態において、用語「腫瘍」、「がん」及び「悪性腫瘍」は交換可能に使用され、そして１つ又はそれ以上の成長を指す。
【0028】
いくつか実施形態において、腫瘍は２型免疫依存性がんを含む。２型免疫依存性がんの例としては、限定されないが、膵がん（例えば、ＰＤＡＣ）、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、肺がん、リンパ腫、及び膀胱がんが挙げられる。
【0029】
本明細書で使用されるように、表現「それを必要とする対象」は、がんの１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候を示すヒトもしくは非ヒト哺乳動物、及び／又は固形腫瘍を含むがんと診断されたヒトもしくは非ヒト哺乳動物及び上記のものの処置を必要とするヒトもしくは非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態において、用語「対象」及び「患者」は交換可能に使用される。本明細書で開示される方法は、それを必要とする対象を選択する工程を含み得る。例えば、ヒト対象は、原発腫瘍もしくは転移性腫瘍及び／又は肥大したリンパ節、腫大した腹部、胸部痛／胸部圧迫感、不明の体重減少、発熱、寝汗、持続する疲労感、食欲喪失、脾臓の拡大、痒みを含むがこれらに限定されない１つもしくはそれ上の症状もしくは徴候と診断されていてよい。この表現は、原発腫瘍、定着腫瘍、又は再発腫瘍を有する対象を含む。特定の実施形態において、この表現は、固形腫瘍を有し、かつ又は固形腫瘍のための処置を必要とするヒト対象を含む。他の実施形態において、この表現は、ヘム腫瘍（例えば、リンパ腫又は白血病）を有し、かつ／又はヘム腫瘍のための処置を必要とするヒト対象を含む。この表現はまた、原発性又は転移性腫瘍（進行悪性腫瘍）を有する対象を含む。この表現はまた、２型免疫依存性がんを含む腫瘍を有する対象を含み、これらとしては、限定されないが、膵がん、非小細胞肺がん、肺扁平上皮細胞がん、及びホジキンリンパ腫が挙げられる。
【0030】
特定の実施形態において、この表現は、従来の治療（例えば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤単剤療法、ＰＤ－１阻害剤単剤療法、カルボプラチン、又はドセタキセルのような抗がん剤を用いた処置）に対して耐性であるか又は抵抗性であるか又は従来の治療により不適切に制御される腫瘍を有する患者を含む。特定の実施形態において、この表現は、１つ又はそれ以上の系統の従来の治療（例えば、外科的切除された）で処置されていたが、その後再発した腫瘍を有する患者を含む。特定の実施形態において、表現は、治療的手術もしくは治療的放射線の候補ではなく、又は従来の抗がん治療が例えば毒性副作用に起因して勧められない腫瘍を有する対象を含む。
【0031】
他の実施形態において、表現「それを必要とする対象」は、処置されていたがその後再発したか又は転移した悪性腫瘍を有する患者を含む。例えば、腫瘍を有する患者は、腫瘍退縮をもたらす１つ又はそれ以上の抗がん剤を用いた処置を受けていたかもしれないが；しかし、その後、その１つ又はそれ以上の抗がん剤に対して抵抗性のがんを再発し（例えば、化学療法耐性がん）、本開示の方法で処置され得る。特定の実施形態において、この表現は、少なくとも１つのサイトカイン、例えばＩＬ－４及び／又はＩＬ－１３のアップレギュレーションを示す患者を含む。特定の実施形態において、この表現は、少なくとも１つのサイトカインの増加した産生、例えばＩＬ－４の増加した産生を示す患者を含む。特定の実施形態において、この表現は、腫瘍における増加したヒアルロン酸（ＨＡ）含有量を示す患者を含む。
【0032】
特定の実施形態によれば、本開示は、腫瘍を処置するか、腫瘍の成長を遅延させるか又は腫瘍の成長を阻害するための方法を含む。特定の実施形態において、本開示は、腫瘍退縮を促進する方法を含む。特定の実施形態において、本開示は、腫瘍細胞量を減少するか又は腫瘍負荷を減少する方法を含む。特定の実施形態において、本開示は、処置された対象の生存を増加させる方法、反応を増加する方法、又は反応の持続期間を増加する方法を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、膵がん、乳がん、結腸直腸がん、脳がん、皮膚がん、腎がん、卵巣がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんを有する対象において腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害する方法を含む。
【0033】
いくつかの実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を、さらなる治療剤又は治療（例えば、レジメン又は手順）と組み合わせて投与することを含む。特定の実施形態において、開示された方法は、抗がん薬のようなさらなる治療剤の投与を含む。本明細書で使用されるように、「抗がん薬」は、がんを処置するために有用な任意の薬剤を意味し、これらとしては、限定されないが、細胞毒並びに代謝拮抗薬、アルキル化剤、アントラサイクリン類、抗生物質、有糸分裂阻害薬、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、生物製剤（例えば、抗体及びインターフェロン）及び放射性薬剤のような薬剤が挙げられる。本明細書で使用されるように、「細胞毒又は細胞傷害性薬剤」は化学療法剤のことも指しており、そして細胞に対して有害な任意の薬剤を意味する。例としては、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンビアスチン（ｖｉｎｂｉａｓｔｉｎｅ）、コイキシン（ｃｏｉｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン並びにそれらのアナログ又はホモログが挙げられる。さらなる治療剤又は治療は、抗腫瘍有効性を増加するため、１つもしくはそれ以上の治療の毒性効果を低減するため、及び／又は１つもしくはそれ以上の治療の投薬量を低減するために投与され得る。様々な実施形態において、さらなる治療剤又は治療は：化学療法、シクロホスファミド、外科手術、放射線、がんワクチン、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）阻害剤（例えば、イピリムマブ）、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）アゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン含有－３（ＴＩＭ３）阻害剤、Ｂ及びＴリンパ球減衰器（ＢＴＬＡ）阻害剤、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのような「ＶＥＧＦ－トラップ」又はＵＳ７，０８７，４１１に示されるような他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質、又は抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、又はラニビズマブ）又はＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、又はパゾパニブ））、アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）阻害剤（例えば、ネスバクマブ（ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ））、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、同時刺激受容体に対するアゴニスト（例えば、ＣＤ２８に対するアゴニスト）、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、及びＣＡ１９－９］、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、細胞毒、化学療法剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、及びＩＬ－１５、抗体－薬物結合体（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、及び抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、腫瘍溶解性ウイルス、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９－標的化Ｔ細胞）、副腎皮質ステロイドのような抗炎症薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、並びに抗酸化剤のような栄養補助食品の１つ又はそれ以上を含み得る。
【0034】
特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤は、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、及びビンクリスチン）及び／又は外科手術を含む治療と組み合わせて投与され得る。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤は、抗腫瘍療法と組み合わせて投与され得、これらとしては、限定されないが、化学療法、放射線、外科手術又は本明細書の他所に記載されるような従来の抗腫瘍療法が挙げられる。
【0035】
特定の実施形態において、開示される方法は、腫瘍成長の増加した阻害、 － 例えば、処置された対象におけるより多くの腫瘍退縮をもたらす。例えば、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、処置された対象において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％多く腫瘍退縮を促進する。
【0036】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、腫瘍成長及び腫瘍発生の遅延をもたらし、例えば、腫瘍成長は、未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、処置された対象において約３日、３日より多く、約７日、７日より多く、１５日より多く、１か月より多く、３か月より多く、６か月より多く、１年より多く、２年より多く、又は３年より多く遅延され得る。
【0037】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、腫瘍細胞の全ての証拠の完全な消失をもたらす（「完全寛解」）か、腫瘍細胞もしくは腫瘍サイズの少なくとも３０％もしくはそれ以上の減少をもたらす（「部分応答」）か、又は新しい測定可能な腫瘍を含めて腫瘍細胞の完全もしくは部分的な消失をもたらす。腫瘍減少は、当該分野で公知のいずれかの方法、例えば、Ｘ線、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、細胞学、組織学又は分子遺伝学的分析により測定することができる。
【0038】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、「標準治療」（ＳＯＣ）療法（例えば、化学療法、外科手術又は放射線）を受けた対象と比較して、対象の増加した全生存（ＯＳ）又は無増悪生存（ＰＦＳ）をもたらす。特定の実施形態において、ＰＦＳは、いずれかの１つ又はそれ以上のＳＯＣ療法を受けた対象と比較して、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１年、少なくとも２年、又は少なくとも３年だけ増加する。特定の実施形態において、ＯＳは、いずれかの１つ又はそれ以上のＳＯＣ療法を受けた対象と比較して、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月、少なくとも７か月、少なくとも８か月、少なくとも９か月、少なくとも１０か月、少なくとも１１か月、少なくとも１年、少なくとも２年、又は少なくとも３年だけ増加する。
【0039】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、処置された対象において例えば２％より多く、３％より多く、４％より多く、５％より多く、６％より多く、７％より多く、８％より多く、９％より多く、１０％より多く、２０％より多く、３０％より多く、４０％より多く又は５０％より多く増加した応答及び増加した応答持続期間をもたらす。
【0040】
特定の実施形態において、投与された阻害剤の組み合わせは、単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して有害副作用の増加が無いように安全であり、かつ対象により十分許容される。
【0041】
特定の実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を対象に投与することを含み、ここで該対象は、ＩＬ－４及び／又はＩＬ－１３のような少なくとも１つのサイトカインのアップレギュレーションを示す。いくつかの実施形態において、対象は、抗腫瘍処置を必要としない対象と比較して、少なくとも１つのサイトカイン（例えば、ＩＬ－４及び／又はＩＬ－１３）のより高いアップレギュレーションを示す。
【0042】
特定の実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を対象に投与することを含み、ここで該対象は、ＩＬ－４の増加した産生のような、少なくとも１つのサイトカインの増加した産生を示す。いくつか実施形態において、対象は、抗腫瘍処置を必要としていない対象と比較して、少なくとも１つのサイトカイン（例えば、ＩＬ－４）の増加した産生を示す。
【0043】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を投与する開示された方法は、単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）の有意に増加した産生をもたらす。いくつかのこのような実施形態において、これらの開示された方法は、増強された腫瘍退縮及び抗腫瘍活性をさらにもたらす。
【0044】
特定の実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を対象に投与することを含み、ここで該対象は、腫瘍における増加したヒアルロン酸（ＨＡ）含有量を示す。いくつかのこのような実施形態において、対象は２型免疫依存性がんを有していない対象よりも高いＨＡ含有量を示す。
【0045】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を対象に投与する開示された方法は、腫瘍におけるヒアルロン酸（ＨＡ）含有量の減少をもたらす。
【0046】
特定の実施形態において、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及び治療有効量のＰＤ－１阻害剤を対象に投与する開示された方法は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の有意に増加した密度をもたらし、それにより組み合わせ療法の細胞傷害性抗腫瘍有効性を増強する。いくつかのこのような実施形態において、これらの開示された方法は、増強された腫瘍退縮及び抗腫瘍活性をさらにもたらす。
【0047】
ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤
本明細書で開示される方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用されるように、「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤」（本明細書では「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路アンタゴニスト」、「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路遮断剤」などとも呼ばれる）は：（ｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のそれらのそれぞれの受容体への結合；（ｉｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のシグナル伝達及び／もしくは活性；並びに／又は（ｉｉｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のそれらのそれぞれの受容体への結合から生じる下流シグナル伝達／活性の少なくとも１つを阻害するか又は減弱する任意の薬剤である。例となるＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤としては、限定されないが、抗ＩＬ－４抗体（例えば、米国特許第７７４０８４３号、及び米国特許出願公開第２０１００２９７１１０号、同第２０１６０２０７９９５号に開示される抗体）、抗ＩＬ－１３抗体（例えば、米国特許第７５０１１２１号、同第７６７４４５９号、同第７８０７７８８号、同第７９１０７０８号、同第７９１５３８８号、同第７９３５３４３号、同第８０８８６１８号、同第８６９１２３３号、同第９６０５０６５号、米国特許出願公開第２００６００７３１４８号、同第２００８００４４４２０号、及びＥＰ２６２７６７３Ｂ１に開示される抗体）、ＩＬ－４及びＩＬ－１３に結合する二重特異性抗体（例えば、米国特許第８３８８９６５号、米国特許出願公開第２０１１０００８３４５号、同第２０１３０２５１７１８号、同第２０１６０２０７９９５号に開示される抗体）、並びにＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤（以下に記載される）が挙げられる。ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を特定する本明細書において引用される刊行物の部分は、参照により本明細書に加入される。
本明細書で開示される方法は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用されるように、「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤」（本明細書では「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路アンタゴニスト」、「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路遮断剤」などとも呼ばれる）は：（ｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のそれらのそれぞれの受容体への結合；（ｉｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のシグナル伝達及び／もしくは活性；並びに／又は（ｉｉｉ）ＩＬ－４及び／もしくはＩＬ－１３のそれらのそれぞれの受容体への結合から生じる下流シグナル伝達／活性の少なくとも１つを阻害するか又は減弱する任意の薬剤である。例となるＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤としては、限定されないが、抗ＩＬ－４抗体（例えば、米国特許第７７４０８４３号、及び米国特許出願公開第２０１００２９７１１０号、同第２０１６０２０７９９５号に開示される抗体）、抗ＩＬ－１３抗体（例えば、米国特許第７５０１１２１号、同第７６７４４５９号、同第７８０７７８８号、同第７９１０７０８号、同第７９１５３８８号、同第７９３５３４３号、同第８０８８６１８号、同第８６９１２３３号、同第９６０５０６５号、米国特許出願公開第２００６００７３１４８号、同第２００８００４４４２０号、及びＥＰ２６２７６７３Ｂ１に開示される抗体）、ＩＬ－４及びＩＬ－１３に結合する二重特異性抗体（例えば、米国特許第８３８８９６５号、米国特許出願公開第２０１１０００８３４５号、同第２０１３０２５１７１８号、同第２０１６０２０７９９５号に開示される抗体）、並びにＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）阻害剤（以下に記載される）が挙げられる。ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を特定する本明細書において引用される刊行物の部分は、参照により本明細書に加入される。
【0048】
いくつかの実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、抗体、低分子化合物、核酸、ポリペプチド又はその機能性フラグメント又は変異体であり得る。適切なＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤抗体の非限定的な例としては、抗ＩＬ－４抗体、抗ＩＬ－１３抗体、及び抗ＩＬ－４／ＩＬ－１３二重特異性抗体、抗ＩＬ－４Ｒ抗体、及び前述のもののいずれかの抗原結合フラグメントが挙げられる。適切なＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の他の非限定的な例としては：抗ＩＬ－４ ＲＮＡｉ分子及び抗ＩＬ－１３ ＲＮＡｉのようなＲＮＡｉ分子、抗ＩＬ－４アンチセンスＲＮＡ及び抗ＩＬ－１３アンチセンスＲＮＡのようなアンチセンス分子、並びにドミナントネガティブＩＬ－４タンパク質、ドミナントネガティブＩＬ－１３タンパク質のようなドミナントネガティブタンパク質が挙げられる。
【0049】
本明細書で使用されるように、「ＩＬ－４Ｒ阻害剤」（本明細書では「ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤」、「ＩＬ－４Ｒαアンタゴニスト」、「ＩＬ－４Ｒ遮断剤」、「ＩＬ－４Ｒα遮断剤」などとも呼ばれる）は、ＩＬ－４Ｒα又はＩＬ－４Ｒリガンドに結合するか又は相互作用し、そして正常な生物学的シグナル伝達機能１型及び／又は２型ＩＬ－４受容体を阻害するか又は減弱する任意の薬剤である。１型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－４Ｒα鎖及びγｃ鎖を含む二量体受容体である。２型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－４Ｒα鎖及びＩＬ－１３Ｒα１鎖を含む二量体受容体である。１型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－４と相互作用して刺激されるが、２型ＩＬ－４受容体はＩＬ－４及びＩＬ－１３の両方と相互作用して刺激される。従って、本開示の方法において使用することができるＩＬ－４Ｒ阻害剤は、ＩＬ－４媒介シグナル伝達、ＩＬ－１３媒介シグナル伝達、又はＩＬ－４及びＩＬ－１３媒介シグナル伝達の両方を遮断することにより機能し得る。従って本開示のＩＬ－４Ｒ阻害剤は、ＩＬ－４及び／又はＩＬ－１３の１型又は２型受容体との相互作用を防止し得る。
【0050】
ＩＬ－４Ｒ阻害剤のカテゴリーの非限定的な例としては、ＩＬ－４ムテイン（例えば、ピトラキンラ）、低分子ＩＬ－４Ｒ阻害剤、抗ＩＬ－４Ｒアプタマー、ペプチドベースのＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、「ペプチボディ」分子）、「レセプターボディ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｏｄｉｅｓ）」（例えば、ＩＬ－４Ｒ成分のリガンド結合ドメインを含む操作された分子）、及びヒトＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合フラグメントが挙げられる。本明細書で使用されるように、ＩＬ－４Ｒ阻害剤はまた、ＩＬ－４及び／又はＩＬ－１３に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含む。
【0051】
本開示の状況において使用することができる適切なＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の他の非限定的な例としては、例えば、ピトラキンラ（ＡＥＲ－００１； ＢＡＹ－１６－９９９６）、アエロデルム（ａｅｒｏｄｅｒｍ）（ＡＥＲ－００３）、並びに当該分野においてデュピルマブ、パスコリツマブ、ＡＭＧ－３１７、ＭＩＬＲ１４４４Ａ、ＣＡＴ－３５４、ＱＡＸ５７６、アンルキンズマブ （ＩＭＡ－６３８）、ＩＳＩＳ－３６９６４５（ＡＩＲ－６４５）、ＩＭＡ－０２６、ＡＰＧ－２０１、ＣＮＴＯ－６０７、ＭＫ－６１０５、ＭＥＤＩ９３１４、ＭＥＤＩ２０４５、トラロキヌマブ、レブリキズマブ、ロミルキマブ、及びＤＯＭ－０９１０と呼ばれ、知られている抗体が挙げられる。
【0052】
抗ＩＬ－４Ｒα抗体及びその抗原結合フラグメント
本開示の特定の例となる実施形態によれば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、抗ＩＬ－４Ｒα抗体又はその抗原結合フラグメントである。本開示全体を通して使用される用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖）を含む免疫グロブリン分子、さらにはそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。典型的な抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと呼ばれる）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられたより保存的な領域に組み入れられた相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられた超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。本開示の異なる実施形態において、抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であっても、天然もしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ又はそれ以上のＣＤＲの対照分析（ｓｉｄｅ－ｂｙ－ｓｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）に基づいて規定され得る。
本開示の特定の例となる実施形態によれば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、抗ＩＬ－４Ｒα抗体又はその抗原結合フラグメントである。本開示全体を通して使用される用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖）を含む免疫グロブリン分子、さらにはそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。典型的な抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと呼ばれる）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられたより保存的な領域に組み入れられた相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられた超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。本開示の異なる実施形態において、抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であっても、天然もしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ又はそれ以上のＣＤＲの対照分析（ｓｉｄｅ－ｂｙ－ｓｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）に基づいて規定され得る。
【0053】
本開示全体を通して使用される用語「抗体」は、その抗原結合フラグメント、すなわち、完全抗体分子の抗原結合フラグメントを含む。本開示全体を通して使用される用語抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在するか、酵素的に得ることができるか、合成の、又は遺伝子操作された、ポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば完全抗体分子から、タンパク質分解消化又は抗体可変ドメイン及び場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を含む組み換え遺伝子操作技術のような任意の適切な標準的な技術を使用して誘導され得る。このようなＤＮＡは、公知であり、かつ／又は例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ－抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、又は合成することができる。ＤＮＡは、例えば配列決定され、そして１つ又はそれ以上の可変ドメイン及び／又は定常ドメインを、適切な構成に配置するために、又はコドンを導入し、システイン残基を生成し、アミノ酸を改変、負荷もしくは欠失などするために、化学的又は分子生物学技術を使用することにより操作され得る。
【0054】
抗原結合フラグメントの非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；及び（ｖｉｉ）抗体の超可変性領域を模倣したアミノ酸残基（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、又は束縛（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。他の操作された分子、例えばドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインもまた、本開示全体を通して使用される表現「抗原結合フラグメント」内に包含される。
【0055】
抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズ又はアミノ酸組成のものであってもよく、そして一般的には、１つ又はそれ以上のフレームワーク配列に隣接するかそれらとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと関連するＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨ及びＶＬドメインは、互いに対して任意の適切な配置に位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり、そしてＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＬ二量体を含有していてもよい。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体ＶＨ又はＶＬドメインを含有し得る。
【0056】
特定の実施形態において、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結された少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本開示の抗体の抗原結合フラグメント内に見出され得る可変ドメイン及び定常ドメインの非限定的な例となる構成としては：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；及び（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬが挙げられる。上に列挙された例となる構成のいずれかを含めて可変ドメイン及び定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接連結されていても、完全又は部分的ヒンジ又はリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子において隣接する可変及び／又は定常ドメインの間に可動性又は半可動性の連結を生じる少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）アミノ酸からなるものであり得る。さらに、本開示の抗体の抗原結合フラグメントは、互いにかつ／又は１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと（例えば、ジスルフィド結合により）非共有結合により結合した上に列挙された可変ドメイン及び定常ドメインの構成のいずれかのホモダイマー又はヘテロダイマー（又は他の多量体）を含み得る。
【0057】
本開示全体を通して使用される用語「抗体」は多選択性（例えば、二重特異性）抗体も含む。多選択性抗体又は抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、ここで各可変ドメインは、別個の抗原に又は同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。いずれの多選択性抗体形式も、当該分野で利用可能な慣用の技術を使用して本開示の抗体又は抗体の抗原結合フラグメントの状況における使用のために適合され得る。例えば、本開示は、免疫グロブリンの一方のアームがＩＬ－４Ｒα又はそのフラグメントに対して特異的であり、そして免疫グロブリンの他方のアームが、第二の治療標的に特異的であるか又は治療的部分と結合体化している二重特異性抗体の使用を含む方法を含む。本開示の状況において使用することができる例となる二重特異性形式としては、限定されないが、例えば、ｓｃＦｖベースの二重特異性形式又は二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）二重特異性形式、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合物、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブ・イントゥ・ホール、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールとの共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、及びＭａｂ２二重特異性形式（前述の形式の総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０１２、ｍＡｂｓ ４（６）：６５３－６６３、及びそこで引用される参考文献を参照のこと）が挙げられる。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸結合体を使用して構築することができ、例えばここで、直交性化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して部位特異的抗体－オリゴヌクレオチド結合を生成し、これは次いで自己集合して、規定された組成、原子価及び配置を有する多量体複合体となる。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２０１３、１３５（１）：３４０－４６を参照のこと）。
【0058】
本開示の方法において使用される抗体はヒト抗体であってもよい。本開示全体を通して使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変ドメイン及び定常ドメインを有する抗体を含むことを意図される。それにもかかわらず、本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲにおいて、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされていないアミノ酸残基を含んでいてもよい（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発又はインビボでの体細胞変異により導入される変異）。しかし、本開示全体を通して使用される用語「ヒト抗体」は、マウスのような別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフト化された抗体を含むことを意図されない。
【0059】
本開示の方法において使用される抗体は、組み換えヒト抗体であってもよい。本開示全体を通して使用される用語「組み換えヒト抗体」は、組み換え手段により製造、発現、生成又は単離される全てのヒト抗体、例えば宿主細胞へトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下にさらに記載される）、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下にさらに記載される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０：６２８７－６２９５）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡを配列に対してスプライシングすることを含むいずれかの他の手段により製造、発現、生成又は単離された抗体を含むことを意図される。このような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する。しかし、特定の実施形態において、このような組み換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列にトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）を受け、それ故組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、そしてそれらに関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しないかもしれない配列である。
【0060】
特定の実施形態によれば、本開示の方法において使用される抗体はＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する。用語「特異的に結合する」又は同様のものは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、生理条件下で比較的安定な抗原との複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するか否かを決定するための方法は、当該分野で周知であり、そして例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。例えば、本開示の文脈において使用されるように、ＩＬ－４Ｒαに「特異的に結合する」抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定して、ＩＬ－４Ｒα又はその一部に、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満又は約０．５ｎＭ未満のＫＤで結合する抗体を含む。しかし、ヒトＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＩＬ－４Ｒα分子のような他の抗原に対して交差反応性を有していてよい。
【0061】
本開示の特定の例となる実施形態によれば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、米国特許第７，６０８，６９３号に示される抗ＩＬ－４Ｒ抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗ＩＬ－４Ｒα抗体又はその抗原結合フラグメントである。特定の例となる実施形態において、本開示の方法の状況において使用することができる抗ＩＬ－４Ｒα抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。特定の実施形態によれば、抗ＩＬ－４Ｒα抗体又はその抗原結合フラグメントは、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）及び３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ここれでＨＣＤＲ１は配列番号３のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号４のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号７のアミノ酸配列を含み；そしてＬＣＤＲ３は配列番号８のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１を含むＨＣＶＲ及び配列番号２を含むＬＣＶＲを含む。特定の実施形態において、本開示の方法は抗ＩＬ－４Ｒ抗体の使用を含み、ここで該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む例となる抗体は、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））として知られる完全ヒト抗ＩＬ－４Ｒ抗体である。特定の例となる実施形態によれば、本開示の方法は、デュピルマブ、又はその生物学的に同等なものの使用を含む。デュピルマブに関して用語「生物学的に同等なもの」は、同じモル用量で同様の実験条件下で、単回用量又は複数回用量のいずれかで投与された場合に、デュピルマブの吸収の速度及び／又は程度と有意な差異を示さない吸収の速度及び／又は程度を有する薬学的等価物又は薬学的代替物である抗ＩＬ－４Ｒ抗体又はＩＬ－４Ｒ結合タンパク質又はそのフラグメントを指す。本開示の状況において、この用語は、それらの安全性、純度及び／又は効力において、デュピルマブと臨床的に意味のある差異を有していない、ＩＬ－４Ｒに結合する抗原結合タンパク質を指す。
【0062】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１に対して９０％、９５％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。
【0063】
本開示の特異手の実施形態によれば、抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２に対して９０％、９５％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。
【0064】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、５以下のアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、２以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
【0065】
配列同一性は、当該分野で公知の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、及びＢＬＡＳＴ）により測定され得る。
【0066】
本開示はまた、がんを処置するための方法における抗ＩＬ－４Ｒ抗体の使用を含み、ここで該抗ＩＬ－４Ｒ抗体は、１つ又はそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列の変異体を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して、例えば、１０又はそれ以下、８又はそれ以下、６又はそれ以下、４又はそれ以下などの保存的アミノ酸置換を含むＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＩＬ－４Ｒ抗体の使用を含む。
【0067】
本開示の方法の状況において使用することができる他の抗ＩＬ－４Ｒα抗体としては、例えば、ＡＭＧ３１７と呼ばれ当該分野で公知である抗体（Ｃｏｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．、２０１０、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．、１８１（８）：７８８－７９６）、又はＭＥＤＩ９３１４、又は米国特許第７，１８６，８０９号、米国特許第７，６０５，２３７号、米国特許第７，６３８，６０６号、米国特許第８，０９２，８０４号、米国特許第８，６７９，４８７号、もしくは米国特許第８，８７７，１８９号に示される抗ＩＬ－４Ｒα抗体のいずれかが挙げられる。抗ＩＬ－４Ｒα抗体を特定する本明細書において引用される刊行物の部分は、参照により本明細書に加入される。
【0068】
本開示の方法の状況において使用される抗ＩＬ－４Ｒα抗体は、ｐＨ依存性結合特徴を有していてもよい。例えば、本開示の方法における使用のための抗ＩＬ－４Ｒα抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＩＬ－４Ｒαへの減少した結合を示し得る。あるいは、本開示の抗ＩＬ－４Ｒα抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでその抗原に対して増強された結合を示し得る。表現「酸性ｐＨ」は、約６．２未満のｐＨ値、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０又はそれ以下を含む。本開示全体をとおして使用されるように、表現「中性ｐＨ」は約７．０～約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、及び７．４のｐＨ値を含む。
【0069】
特定の例において、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＩＬ－４Ｒαに対する減少した結合」は、酸性ｐＨでＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤ値 対 中性ｐＨでＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤ値の比に関して表される（又は逆も同様）。例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントは、その抗体又はその抗原結合フラグメントが約３．０又はそれ以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合に、本開示の目的のための「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＩＬ－４Ｒαに対する減少した結合」を示すとみなされ得る。特定の例となる実施形態において、本開示の抗体又は抗原結合フラグメントについての酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０、又はそれ以上であってよい。
【0070】
ｐＨ依存性結合特徴を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでの特定の抗原に対する減少した（又は増強された）結合について抗体の集団をスクリーニングすることにより得られ得る。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変により、ｐＨ依存性特徴を有する抗体が得られ得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤＲ内）の１つ又はそれ以上のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで減少した抗原結合を有する抗体が得られ得る。本開示全体をとおして使用されるように、表現「酸性ｐＨ」は６．０又はそれ以下のｐＨを意味する。
【0071】
ＰＤ－１阻害剤
本明細書で開示される方法は、治療有効量のＰＤ－１阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用されるように、「ＰＤ－１阻害剤」は、ＰＤ－１の活性又は発現を阻害、遮断、抑制又は妨害することができる任意の分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、抗体、低分子化合物、核酸、ポリペプチド、又はそのフラグメントもしくは変異体であってよい。適切なＰＤ－１阻害剤抗体の非限定的な例としては、抗ＰＤ－１抗体及びその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに抗ＰＤ－Ｌ２抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。適切なＰＤ－１阻害剤の他の非限定的な例としては、抗ＰＤ－１ ＲＮＡｉ分子、抗ＰＤ－Ｌ１ ＲＮＡｉ、及び抗ＰＤ－Ｌ２ ＲＮＡｉのようなＲＮＡｉ分子、抗ＰＤ－１アンチセンスＲＮＡ、抗ＰＤ－Ｌ１アンチセンスＲＮＡ、及び抗ＰＤ－Ｌ２アンチセンスＲＮＡのようなアンチセンス分子、並びにドミナントネガティブＰＤ－１タンパク質、ドミナントネガティブＰＤ－Ｌ１タンパク質、及びドミナントネガティブＰＤ－Ｌ２タンパク質のようなドミナントネガティブタンパク質が挙げられる。前述のＰＤ－１阻害剤のいくつかの例は、例えば、ＵＳ ９３０８２３６、ＵＳ １００１１６５６、及びＵＳ ２０１７０２９０８０８（ＰＤ－１阻害剤を特定するこれらの部分は参照により本明細書に加入される）に記載される。
本明細書で開示される方法は、治療有効量のＰＤ－１阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用されるように、「ＰＤ－１阻害剤」は、ＰＤ－１の活性又は発現を阻害、遮断、抑制又は妨害することができる任意の分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、抗体、低分子化合物、核酸、ポリペプチド、又はそのフラグメントもしくは変異体であってよい。適切なＰＤ－１阻害剤抗体の非限定的な例としては、抗ＰＤ－１抗体及びその抗原結合フラグメント、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに抗ＰＤ－Ｌ２抗体及びその抗原結合フラグメントが挙げられる。適切なＰＤ－１阻害剤の他の非限定的な例としては、抗ＰＤ－１ ＲＮＡｉ分子、抗ＰＤ－Ｌ１ ＲＮＡｉ、及び抗ＰＤ－Ｌ２ ＲＮＡｉのようなＲＮＡｉ分子、抗ＰＤ－１アンチセンスＲＮＡ、抗ＰＤ－Ｌ１アンチセンスＲＮＡ、及び抗ＰＤ－Ｌ２アンチセンスＲＮＡのようなアンチセンス分子、並びにドミナントネガティブＰＤ－１タンパク質、ドミナントネガティブＰＤ－Ｌ１タンパク質、及びドミナントネガティブＰＤ－Ｌ２タンパク質のようなドミナントネガティブタンパク質が挙げられる。前述のＰＤ－１阻害剤のいくつかの例は、例えば、ＵＳ ９３０８２３６、ＵＳ １００１１６５６、及びＵＳ ２０１７０２９０８０８（ＰＤ－１阻害剤を特定するこれらの部分は参照により本明細書に加入される）に記載される。
【0072】
抗ＰＤ－１抗体及びその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法において使用されるＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法において使用されるＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントである。
【0073】
用語「抗体」、「抗原結合フラグメント」、「ヒト抗体」、「組み換え抗体」及び他の関連する用語は上で定義されている。抗ＰＤ－１抗体及びその抗原結合フラグメントの文脈において、本開示は、免疫グロブリンの一方のアームがＰＤ－１又はそのフラグメントに特異的であり、そして免疫グロブリンの他方のアームが第二の治療標的に特異的であるか治療部分に結合している二重特異性抗体の使用を含む。本開示の状況において使用することができる例となる二重特異性形式としては、限定することなく、例えば、ｓｃＦｖベース又は二特異性抗体二重特異性形式、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合物、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブ・イントゥ・ホール、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールとの共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、及びＭａｂ２二重特異性形式（前述の形式の総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２、ｍＡｂｓ ４（６）：６５３－６６３、及びそこで引用される参考文献を参照のこと）が挙げられる。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸結合を使用して構築することができ、例えばここで、直交化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチド結合体を生成し、次いでこれが自己集合して規定された組成、原子価及び配置を有する多量体複合体となる。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２０１３、１３５（１）：３４０－４６を参照のこと）。
【0074】
用語「特異的に結合する」又は同様のものは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、生理条件下で比較的安定な抗原との複合体を形成するということを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するか否かを決定するための方法は、当該分野で周知であり、これらとしては、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。例えば、本開示の文脈において使用されるＰＤ－１に「特異的に結合する」抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定して、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ又は約０．５ｎＭ未満のＫＤでＰＤ－１又はその部分に結合する抗体を含む。しかし、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－１分子のような他の抗原に対して交差反応性を有する。
【0075】
特定の例となる実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体、又はその抗原結合フラグメントは、米国特許第９，９８７，５００号（これはその全体として参照により本明細書に加入される）に示される抗ＰＤ－１抗体のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の例となる実施形態において、本開示の状況において使用することができる抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。特定の実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）及び３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ここでＨＣＤＲ１は配列番号１３のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２は配列番号１４のアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３は配列番号１５のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号１６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号１７のアミノ酸配列を含み；そしてＬＣＤＲ３は配列番号１８のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１１を含むＨＣＶＲ及び配列番号１２を含むＬＣＶＲを含む。特定の実施形態において、本開示の方法は抗ＰＤ－１抗体の使用を含み、ここで該抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む例となる抗体は、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０としても知られる）（ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標））として知られる完全ヒト抗ＰＤ－１抗体である。
【0076】
特定の例となる実施形態によれば、本開示の方法は、ＲＥＧＮ２８１０、又はその生物学的に同等なものの使用を含む。本明細書で使用される抗ＰＤ－１抗体に関する用語「生物学的に同等なもの」は、同じモル用量で同様の実験条件下で単回用量又は複数回用量のいずれかで投与された場合に、参照抗体（例えば、ＲＥＧＮ２８１０）の吸収の速度及び／又は程度と有意な差異を示さない吸収の速度及び／又は程度を有する薬学的等価物又は薬学的代替物である抗ＰＤ－１抗体又はＰＤ－１結合タンパク質又はそれらのフラグメントを指す；用語「生物学的に同等なもの」はまた、ＰＤ－１に結合し、かつ安全性、純度及び／又は効力に関してＲＥＧＮ２８１０と臨床的に意味のある差異を有していない抗原結合タンパク質を含む。
【0077】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１１に対して９０％、９５％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。
【0078】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１２に対して９０％、９５％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。
【0079】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体又はその抗原結合フラグメントは、５以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１、又はその抗原結合フラグメントは、２以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
【0080】
配列同一性は、当該分野で公知の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、及びＢＬＡＳＴ）により測定され得る。
【0081】
本開示はまた、がんを処置するための方法における抗ＰＤ－１抗体の使用を含み、ここで該抗ＰＤ－１抗体は、１つ又はそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して、例えば１０又はそれ以下、８又はそれ以下、６又はそれ以下、４又はそれ以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－１抗体の使用を含む。
【0082】
本開示の状況において使用することができる他の抗ＰＤ－１抗体としては、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６０８、ピディリズマブ、ＢＩ ７５４０９１、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１としても知られる）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０としても知られる）、シンチリマブ、ＡＧＥＮ２０３４、ＪＮＪ－６３７２３２８３、ＭＣＬＡ－１３４として当該分野で呼ばれ、知られている抗体、又は米国特許第６８０８７１０号、同第７４８８８０２号、同第８００８４４９号、同第８１６８７５７号、同第８３５４５０９号、同第８６０９０８９号、同第８６８６１１９号、同第８７７９１０５号、同第８９００５８７号、及び同第９９８７５００号、並びに特許公開公報ＷＯ２００６／１２１１６８、ＷＯ２００９／１１４３３５に示される抗ＰＤ－１抗体のいずれかが挙げられる。抗ＰＤ－１抗体を特定する本明細書に引用される刊行物の部分は、参照により本明細書に加入される。
【0083】
本開示の方法の状況において使用される抗ＰＤ－１抗体は、ｐＨ依存性結合特徴を湯し得る。例えば、本開示の方法における使用のための抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１に対して減少した結合を示し得る。あるいは、本開示の抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでその抗原に対して増強された結合を示し得る。表現「酸性ｐＨ」は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、又はそれ以下のｐＨ値を含む。本明細書で使用される表現「中性ｐＨ」は、約７．０～約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、及び７．４のｐＨ値を含む。
【0084】
特定の例において、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１に対して減少した結合」は、酸性ｐＨでのＰＤ－１に対する抗体結合のＫＤ値 対 中性ｐＨでのＰＤ－１に対する抗体結合のＫＤ値の比（又は逆もまた同様）に関して表される。例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントは、その抗体又はその抗原結合フラグメントが約３．０又はそれ以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合に、本開示の目的のために「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１に対して減少した結合」を示すとみなされ得る。特定の例となる実施形態において、本開示の抗体又は抗原結合フラグメントについての酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０又はそれ以上であり得る。
【0085】
ｐＨ依存性結合特徴を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで特定の抗原に対する減少した（又は増強された）結合について抗体の集団をスクリーニングすることにより得られ得る。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変によりｐＨ依存性特徴を有する抗体が得られ得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えばＣＤＲ内）の１つ又はそれ以上のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで減少した抗原結合を有する抗体が得られ得る。本明細書で使用される表現「酸性ｐＨ」は６．０又はそれ以下のｐＨを表す。
【0086】
抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法において使用されるＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである。例えば、本開示の状況において使用されるＰＤ－Ｌ１に「特異的に結合する」抗体は、約１ｘ１０－８Ｍ又はそれ以下のＫＤ（例えば、より小さいＫＤはより緊密な結合を示す）でＰＤ－Ｌ１又はその部分に結合する抗体を含む。「高親和性」抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又は溶液－アフィニティーＥＬＩＳＡにより測定して、少なくとも１０－８Ｍ、好ましくは１０－９Ｍ、より好ましくは１０－１０Ｍ、なおより好ましくは１０－１１Ｍ、なおより好ましくは１０－１２ＭのＫＤとして表される、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。しかし、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－Ｌ１分子のような他の抗原に対して交差反応性を有し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法において使用されるＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである。例えば、本開示の状況において使用されるＰＤ－Ｌ１に「特異的に結合する」抗体は、約１ｘ１０－８Ｍ又はそれ以下のＫＤ（例えば、より小さいＫＤはより緊密な結合を示す）でＰＤ－Ｌ１又はその部分に結合する抗体を含む。「高親和性」抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又は溶液－アフィニティーＥＬＩＳＡにより測定して、少なくとも１０－８Ｍ、好ましくは１０－９Ｍ、より好ましくは１０－１０Ｍ、なおより好ましくは１０－１１Ｍ、なおより好ましくは１０－１２ＭのＫＤとして表される、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。しかし、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－Ｌ１分子のような他の抗原に対して交差反応性を有し得る。
【0087】
特定の例となる実施形態によれば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、又はその抗原結合フラグメントは、米国特許第９，９３８，３４５号（これはその全体として参照により本明細書に加入される）に示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の例となる実施形態において、本開示の状況において使用することができる抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ここでＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態によれば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合フラグメントは、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）及び３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含み、ここでＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合フラグメントは、米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。
【0088】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１、又はその抗原結合フラグメントは、米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＬＣＶＲアミノ酸配列と９０％、９５％、９８％又は９９％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。
【0089】
本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１、又はその抗原結合フラグメントは、５以下のアミノ酸置換を有する、米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本開示の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－Ｌ１、又はその抗原結合フラグメントは、２以下のアミノ酸置換を有する米国特許第９，９３８，３４５号においてＨ１Ｈ８３１４Ｎと名付けられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
【0090】
配列同一性は、当該分野で公知の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、及びＢＬＡＳＴ）により測定され得る。
【0091】
本開示はまた、がんを処置する方法における抗ＰＤ－Ｌ１抗体の使用を含み、ここで、該抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、１つ又はそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列と比較して例えば、１０又はそれ以下、８又はそれ以下、６又はそれ以下、４又はそれ以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体の使用を含む。
【0092】
本開示の方法の状況において使用することができる他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、当該分野においてＭＤＸ－１１０５、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱＴＭ）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩＴＭ）、アベルマブ （ＢＡＶＥＮＣＩＯＴＭ）、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＳＴＩ－１０１４、ＣＸ－０７２、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、３、１７０００４（２０１７年３月））、ＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ （ＡＡＣＲ）、２０１６－０４－０４ Ａｂｓｔｒａｃｔ ４６０６）と呼ばれそして知られている抗体、又は特許公報ＵＳ７９４３７４３、ＵＳ８２１７１４９、ＵＳ９４０２８９９、ＵＳ９６２４２９８、ＵＳ ９９３８３４５、ＷＯ ２００７／００５８７４、ＷＯ ２０１０／０７７６３４、ＷＯ ２０１３／１８１４５２、ＷＯ ２０１３／１８１６３４、ＷＯ ２０１６／１４９２０１、ＷＯ ２０１７／０３４９１６、もしくはＥＰ３１７７６４９に示される他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれかが挙げられる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体を特定する本明細書において引用される刊行物の部分は、参照により本明細書に加入される。
【0093】
医薬組成物及び投与
開示された方法は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤をＰＤ－１阻害剤と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含み、ここでこれら阻害剤は別個の医薬組成物又は組み合わせた（単一の）医薬組成物内に含有される。本開示の医薬組成物は、薬学的に許容しうる担体、賦形剤、及び適切な導入、送達、耐性などをもたらす他の薬剤とともに製剤化され得る。多数の適切な処方を、全ての製薬化学者に公知の処方集において見ることができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ。これらの処方としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮＴＭ）、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油及び油注水乳剤、カーボワックス乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｃａｒｂｏｗａｘ）（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、及びカーボワックスを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．、１９９８、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２：２３８－３１１も参照のこと。
開示された方法は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤をＰＤ－１阻害剤と組み合わせてそれを必要とする対象に投与することを含み、ここでこれら阻害剤は別個の医薬組成物又は組み合わせた（単一の）医薬組成物内に含有される。本開示の医薬組成物は、薬学的に許容しうる担体、賦形剤、及び適切な導入、送達、耐性などをもたらす他の薬剤とともに製剤化され得る。多数の適切な処方を、全ての製薬化学者に公知の処方集において見ることができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ。これらの処方としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮＴＭ）、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油及び油注水乳剤、カーボワックス乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｃａｒｂｏｗａｘ）（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、及びカーボワックスを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．、１９９８、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２：２３８－３１１も参照のこと。
【0094】
特定の実施形態において、本開示の医薬組成物は、治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤（例えば抗ＩＬ－４Ｒ抗体）及び／又は治療有効量のＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）並びに薬学的に許容しうる担体を含む。特定の実施形態において、開示された医薬組成物は、静脈内注射のような注射による投与のために処方される。
【0095】
様々な送達システムが知られており、そして本開示の医薬組成物を投与するために使用することができる、例えば、リポソーム中の封入、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することができる組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照のこと）。投与方法としては、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。組成物は、任意の都合の良い経路により、例えば注入もしくはボーラス注射により、上皮もしくは皮膚粘膜裏層（ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び直腸粘膜など）を介した吸収により投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与されてもよい。
【0096】
本開示の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて皮下又は静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本開示の医薬組成物の送達において容易に有用性を有する。このようなペン型送達デバイスは、再使用可能であっても使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型デバイスは、一般的に医薬組成物を含む交換式カートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与されてカートリッジが空になると、空のカートリッジを容易に廃棄し、そして医薬組成物を含む新しいカートリッジと交換することができる。その後ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスにおいて、交換式カートリッジは存在しない。むしろ使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバー中に保持された医薬組成物を予め充填して販売される。リザーバー中の医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
【0097】
特定の状況において、１つ又は両方の医薬組成物を、制御放出系で送達する場合がある。一実施形態において、ポンプを使用してもよい。別の実施形態において、ポリマー材料を使用してもよい。Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａを参照のこと。さらに別の実施形態において、制御放出系を、組成物の標的の近くに配置することができ、従って全身用量の一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、ＭＥＤＩＣＡＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＯＦ ＣＯＮＴＲＯＬＬＥＤ ＲＥＬＥＡＳＥ、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５－１３８を参照のこと）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３において考察される。
【0098】
適切な注射可能製剤は、静脈内、皮下、皮内、及び筋肉内の注射、点滴注入などのための投薬形態を含み得る。これらの注射可能製剤は公知の方法により製造され得る。例えば、注射可能製剤は、例えば、上記の抗体又はその塩を、注射用に従来使用される滅菌水性媒体又は油性媒体に溶解、懸濁、又は乳化することにより製造され得る。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤などを含有する等張液があり、これらはアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などのような適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このようにして製造された注射剤は好ましくは適切なアンプル中に充填される。
【0099】
有利には、上記の経口又は非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に適合するように合わせられた単位用量で投薬形態に製造される。このような単位用量の投薬形態としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。
【0100】
医薬組成物の注射可能製剤は公知の方法により製造され得る。例えば、注射可能製剤は、例えば、阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＩＬ－４Ｒ抗体）又はその塩を、注射のために従来使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に、溶解、懸濁又は乳化することにより製造され得る。注射のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤などを含有する等張液などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などのような適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このようにして製造された注射可能製剤は、好ましくは適切な注射アンプル中に充填される。いくつかの実施形態において、注射可能製剤は、一定濃度の阻害剤（例えば抗ＰＤ－１抗体又は抗ＩＬ－４Ｒ抗体）及び１つ又はそれ以上の薬学的に許容しうる溶媒（例えば、蒸留水、食塩水など）を含み得る。
【0101】
本開示の状況において使用することができる抗ＩＬ－４Ｒ抗体を含む例となる医薬組成物は、例えば、米国特許第８，９４５，５５９号に開示されており、その抗ＩＬ－４Ｒ抗体を含む医薬組成物を特定する部分は、参照により本明細書に加入される。本開示の状況において使用することができる抗ＰＤ－１抗体を含む医薬組成物は、例えば、ＵＳ ２０１９／００４０１３７に開示されており、その抗ＰＤ－１抗体を含む医薬組成物を特定する部分は、参照により本明細書に加入される。
【0102】
医薬送達システム
いくつかの実施形態において、開示された方法における使用のための医薬組成物は：（ｉ）治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を含む医薬組成物；及び（ｉｉ）治療有効量のＰＤ－１阻害剤を含む医薬組成物、を含む医薬送達システムで提供され得る。本開示のこの態様において、これら医薬組成物は互いに分離しているが、単一の医薬送達システムで提供されてもよく、又はキットとして提供されてもよく － すなわち、本明細書に開示されるような腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害するためのＰＤ－１阻害剤と組み合わせたＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の使用のための書面での指示を添付した医薬送達システム。特定の実施形態において、医薬送達システムは、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。特定の実施形態において、医薬送達システムは、ＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。
いくつかの実施形態において、開示された方法における使用のための医薬組成物は：（ｉ）治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を含む医薬組成物；及び（ｉｉ）治療有効量のＰＤ－１阻害剤を含む医薬組成物、を含む医薬送達システムで提供され得る。本開示のこの態様において、これら医薬組成物は互いに分離しているが、単一の医薬送達システムで提供されてもよく、又はキットとして提供されてもよく － すなわち、本明細書に開示されるような腫瘍を処置するか又は腫瘍の成長を阻害するためのＰＤ－１阻害剤と組み合わせたＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の使用のための書面での指示を添付した医薬送達システム。特定の実施形態において、医薬送達システムは、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。特定の実施形態において、医薬送達システムは、ＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を含む。
【0103】
いくつかの実施形態において、医薬送達システムは、上述のさらなる治療剤のいずれかのような、１つ又はそれ以上のさらなる治療剤をさらに含む。例えば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を含む医薬組成物及びＰＤ－１阻害剤を含む医薬組成物を含む医薬送達システムは、シクロホスファミド、がんワクチン、ＬＡＧ３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、ＴＩＭ３阻害剤、ＣＤ２８活性化因子、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ３８阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのような「ＶＥＧＦトラップ」又はＵＳ７，０８７，４１１に示されるような他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質、又は抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、又はラニビズマブ）又はＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、又はパゾパニブ））、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、ＴＧＦβ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、同時刺激受容体に対するアゴニスト（例えば、ＣＤ２８に対するアゴニスト）、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ４阻害剤、ＣＸＣＬ１２阻害剤，、腫瘍特異的抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、ＭＡＧＥ３、ＣＥＡ、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、ＰＳＡ、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、及びＣＡ１９－９］、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌）、ＧＭ－ＣＳＦ、細胞毒、化学療法剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、及びＩＬ－１５のようなサイトカイン、ＡＤＣ（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、及び抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９－標的Ｔ細胞）、副腎皮質ステロイドのような抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、及び抗酸化剤のような栄養補助食品から選択される１つ又はそれ以上のさらなる治療剤をさらに含み得る。一実施形態において、医薬送達システムは、それを必要とする対象において外科手術と組み合わせて使用される。
【0104】
投与レジメン
いくつかの実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＰＤ－１阻害剤と組み合わせた治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を、それを必要とする対象に連続して投与することを含み、ここで各阻害剤は、１つ又はそれ以上の用量で、例えば特定の治療投薬レジメンの一部として対象に投与される。特定の実施形態において、本開示の方法は、がん、好ましくは２型免疫依存性がん、例えば膵がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、前立腺がん、腎がん、肺がん、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんを処置するための付加的又は相乗的な活性のために阻害剤を投与することを含む。
いくつかの実施形態において、開示された方法は、治療有効量のＰＤ－１阻害剤と組み合わせた治療有効量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤を、それを必要とする対象に連続して投与することを含み、ここで各阻害剤は、１つ又はそれ以上の用量で、例えば特定の治療投薬レジメンの一部として対象に投与される。特定の実施形態において、本開示の方法は、がん、好ましくは２型免疫依存性がん、例えば膵がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、前立腺がん、腎がん、肺がん、ホジキンリンパ腫、又は膀胱がんを処置するための付加的又は相乗的な活性のために阻害剤を投与することを含む。
【0105】
本明細書で使用される「連続して投与すること」は、阻害剤の各用量が、異なる時点で、例えば所定の間隔（例えば、数時間、数日、数週間又は数ヶ月）だけ間を空けた異なる日に対象に投与されるということを意味する。いくつかの実施形態において、開示された方法は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の単一の初期用量、続いてＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の二次用量、そして場合により続いて、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の三次用量を対象に連続して投与することを含む。特定の実施形態において、該方法は、ＰＤ－１阻害剤の単一の初期用量、続いてＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の二次用量、そして場合により続いてＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の三次用量を対象に連続して投与することをさらに含む。
【0106】
いくつかの実施形態において、治療投薬レジメンは、ＰＤ－１阻害剤の１つ又はそれ以上の用量と組み合わせてＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つ又はそれ以上の用量を投与することを含む。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の１つもしくはそれ以上の用量及び／又はＰＤ－１阻害剤の１つもしくはそれ以上の用量は、約１日に１回、２日ごとに１回、３日ごとに１回、４日ごとに１回、５日ごとに１回、６日ごとに１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１か月に１回、２か月ごとに１回、３か月ごとに１回、４か月ごとに１回の頻度、又はそれ以下の頻度で対象に投与される。
【0107】
本明細書で使用される表現「と組み合わせて」は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤がＰＤ－１阻害剤の前に、後に、又は同時に投与されることを意味する。用語「と組み合わせて」はまた、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤の連続的又は同時の投与も含む。
【0108】
例えば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤がＰＤ－１阻害剤の「前に」投与される場合、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤の投与の１５０時間より前、約１５０時間、約１００時間、約７２時間、約６０時間、約４８時間、約３６時間、約２４時間、約１２時間、約１０時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分、又は約１５分前に投与され得る。ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤がＰＤ－１阻害剤の「後に」投与される場合、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤の投与の約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約６０時間、約７２時間後に、又は７２時間よりも後に投与され得る。ＰＤ－１阻害剤と「同時」のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の投与は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤の投与の１５分以内に（前、後、又は同時に）、別個の投薬形態で対象に投与されるか、又はＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤の両方を含む単一の組み合わせ投薬製剤として対象に投与されることを意味する。
【0109】
特定の実施形態において、開示された方法は、本明細書において列挙される薬剤又は治療のいずれか１つのようなさらなる（例えば、第三の）治療剤又は治療の投与を含む。
【0110】
本明細書で使用されるように、用語「初期」、「二次」、「三次」などは、投与の時系列を指す。従って、「初期用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも呼ばれる）；「二次用量」は初期用量の後に投与される用量であり；そして「三次用量」は二次用量の後に投与される用量である。初期、二次、及び三次用量は、全て同じ量のＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤又はＰＤ－１阻害剤を含有していてもよい。しかし特定の実施形態では、初期、二次及び／又は三次用量に含有される量は、処置の過程において互いに異なっている（例えば、必要に応じて上方又は下方に調整される）。特定の実施形態において、１つ又はそれ以上の（例えば、１、２、３、４、又は５）用量は、処置レジメンの初めに「負荷用量」として投与され、続いてその後の用量がより低い頻度で投与される（例えば、「維持量」）。例えば、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤又はＰＤ－１阻害剤は、がんを有する患者に、患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの負荷用量で投与され、続いて約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ ｍｇ／ｋｇ１つ又はそれ以上の維持量で投与され得る。
【0111】
本開示の１つの例となる実施形態において、各二次及び／又は三次用量は、直前の投薬の１／２～１４週又はそれ以上（例えば、１／２、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２週又はそれ以上）後に投与される。本明細書で使用される句「直前の投薬」は、一連の複数回の投与において、抗ＰＤ－１抗体の用量が、次の用量の投与前に介在する投薬無く対象に投与されることを意味する。
【0112】
同様に、「初期処置サイクル」は、処置レジメンの初めに投与される処置サイクルであり；「二次処置サイクル」は、初期処置サイクルの後に投与される処置サイクルであり；そして「三次処置サイクル」は、二次処置サイクルの後に投与される処置サイクルである。本開示の状況において、処置サイクルは互いに同じでも異なっていてもよい。
【0113】
投薬量
特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１～１０ｍｇ／ｋｇを含む。例えば、少なくとも１用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、１、０．３、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇを含み得る。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１用量は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約０．０５～１０００ｍｇ、例えばＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約５、１０、１５、２０、２５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｍｇ又はそれ以上を含む。一実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＲＥＧＮ６６８（デュピルマブ）である。
特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１～１０ｍｇ／ｋｇを含む。例えば、少なくとも１用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、１、０．３、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇを含み得る。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤の少なくとも１用量は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約０．０５～１０００ｍｇ、例えばＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約５、１０、１５、２０、２５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｍｇ又はそれ以上を含む。一実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤はＲＥＧＮ６６８（デュピルマブ）である。
【0114】
特定の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤の少なくとも１用量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、対象の体重１ｋｇあたり約０．１、１、０．３、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇを含む。特定の実施形態において、ＰＤ－１阻害剤の少なくとも１用量は、ＰＤ－１阻害剤約０．０５～５００ｍｇ、例えば、ＰＤ－１阻害剤約５、１０、１５、２０、２５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｍｇ又はそれ以上を含む。一実施形態において、ＰＤ－１阻害剤はＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）である。
【0115】
本明細書に開示される方法に従って対象に投与されるＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤及びＰＤ－１阻害剤の量は、治療有効量である。本明細書で使用されるように、用語「治療有効量」は、以下の１つ又はそれ以上を生じる各阻害剤の量を意味する：未処置の対象又は単剤療法としていずれかの阻害剤で処置された対象と比較して、（ａ）がん － 例えば、腫瘍病変の症状もしくは徴候の重症度もしくは持続期間の減少；（ｂ）腫瘍成長の阻害、もしくは腫瘍壊死、腫瘍縮小及び／もしくは腫瘍消失の増加；（ｃ）腫瘍成長及び発生の遅延；（ｄ）腫瘍転移の阻害；（ｅ）腫瘍成長の再発の予防；（ｆ）がんを有する対象の生存の増加；並びに／又は（ｇ）従来の抗がん治療の使用もしくは必要性の減少（例えば、外科手術の必要の除去、又は化学療法もしくは細胞傷害性薬剤の使用の減少もしくは除去）。
【0116】
ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤（例えば、抗ＩＬ－４Ｒ抗体）の場合、治療有効量は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤約０．０５ｍｇから約１０００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６９０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７９０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８９０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９９０ｍｇ、又は約１０００ｍｇであり得る。特定の実施形態において、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、６００ｍｇ、又は９００ｍｇが対象に投与される。
【0117】
ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）の場合、治療有効量は、該抗体約０．０５ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約４５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約７５ｍｇ～約３５０ｍｇ、又は約１００ｍｇ～約３００ｍｇであり得る。例えば、様々な実施形態において、ＰＤ－１阻害剤の量は、ＰＤ－１阻害剤約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、又は約５００ｍｇであり得る。
【0118】
特定の実施形態において、対象に投与されるＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤（例えば、抗ＩＬ－４Ｒ抗体）及び／又はＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）の個々の用量の量は、治療有効量より少ない、すなわち治療量以下であってよい。例えば、阻害剤の治療有効量が３ｍｇ／ｋｇを含む場合、治療量以下の用量は、３ｍｇ／ｋｇより少ない量、例えば、２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇを含む。本明細書において定義されるように、「治療量以下の用量」は、それ自体では治療効果をもたらさない阻害剤の量を指す。しかし、特定の実施形態において、阻害剤の複数の治療量以下の用量が投与されて、集合的に対象において治療効果を達成し得る。
【実施例】
【0119】
開示された技術は、次に以下の実施例を用いて説明される。これら及び本明細書内の他の実施例の使用は、説明のみのためであり、本発明又は任意の例示された形態の範囲及び意味をいかなるようにも限定しない。同様に、本発明は、本明細書に記載される任意の特定の好ましい実施形態に限定されない。実際に、本発明の改変及び変形は、本明細書を読めば当業者に明らかとなり得、そしてその精神及び範囲から逸脱することなく改変及び変形を行うことができる。従って本発明は、特許請求の範囲の権利がある等価物の完全な範囲とともに、特許請求の項によってのみ限定されるべきである。また、使用される数（例えば、量、温度、など）に関して正確さを確実にするために努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差が占めるはずである。別の指示がなければ、部数は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、そして圧力は大気圧又は大気圧付近である。
【0120】
実施例１：膵がんモデルにおいて抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたＩＬ－４Ｒ抗体のインビボで増強された有効性
この実施例は、ＫＰオルガノイド細胞皮下移植モデル － すなわち、ヒト膵がん、２型免疫依存性がんのマウスモデルを使用して、インビボでの単剤療法のみ及び抗ＰＤ－１治療と組み合わせたＩＬ－４Ｒ遮断の増強された抗腫瘍有効性を実証する研究に関する。この研究において、一処置群あたり８～１０匹のマウスにＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植し、そして腫瘍保有マウスの処置を、開始腫瘍体積が３０～１１０ｍｍ３の範囲に及ぶときに開始した。
この実施例は、ＫＰオルガノイド細胞皮下移植モデル － すなわち、ヒト膵がん、２型免疫依存性がんのマウスモデルを使用して、インビボでの単剤療法のみ及び抗ＰＤ－１治療と組み合わせたＩＬ－４Ｒ遮断の増強された抗腫瘍有効性を実証する研究に関する。この研究において、一処置群あたり８～１０匹のマウスにＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植し、そして腫瘍保有マウスの処置を、開始腫瘍体積が３０～１１０ｍｍ３の範囲に及ぶときに開始した。
【0121】
この実施例において使用されたＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は、ＲＥＧＮ１１０３として識別されるマウス抗ＩＬ－４Ｒ抗体であり、これはヒトＩＬ－４Ｒに特異的なＲＥＧＮ６６８として認識される（デュピルマブとしても知られる）ヒトモノクローナル抗体のマウスサロゲート抗体である。ＲＥＧＮ１１０３は、配列番号２１／２２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含み、そしてヒトＩＬ－４Ｒに対するデュピルマブの親和性と類似した範囲のマウスＩＬ－４Ｒに対する親和性を有する。さらに、ＲＥＧＮ１１０３は、それぞれ１．９ｎＭ及び１１ｐＭのＩＣ５０で細胞株のＩＬ－４及びＩＬ－１３依存性増殖を阻害する。
【0122】
この実施例において使用されたＰＤ－１阻害剤は、ＲＰＭＩ－１４として識別される抗マウスＰＤ－１クローン（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）であり、これはマウス同系腫瘍モデルに一般的に使用されるサロゲート抗ＰＤ－１抗体である。
【0123】
研究設計
膵がんのインビボモデルにおいて２型免疫応答が活性化されたか否かを評価するために、ＩＬ－４及びＩＬ－１３発現レベル並びにＩＬ－４サイトカイン産生を、膵がんの移植ベースモデルにおいて評価した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、同時のＰ５３腫瘍抑制因子機能喪失（ＫＰ）とともに発がん性ＫＲＡＳを発現するように操作された同系腫瘍オルガノイド細胞を皮下又は同所に移植し、そして腫瘍を移植４週間後に採取した。
膵がんのインビボモデルにおいて２型免疫応答が活性化されたか否かを評価するために、ＩＬ－４及びＩＬ－１３発現レベル並びにＩＬ－４サイトカイン産生を、膵がんの移植ベースモデルにおいて評価した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、同時のＰ５３腫瘍抑制因子機能喪失（ＫＰ）とともに発がん性ＫＲＡＳを発現するように操作された同系腫瘍オルガノイド細胞を皮下又は同所に移植し、そして腫瘍を移植４週間後に採取した。
【0124】
ＫＰオルガノイド細胞皮下移植モデルを、単剤療法で及び／又は抗ＰＤ－１ ＩＣＢ治療と組み合わせたインビボでのＩＬ－４Ｒ遮断の抗腫瘍有効性を評価するためにも使用した。
【0125】
材料及び方法
動物． Ｂａｌｂ／ｃマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、そして実験をＩＡＣＵＣによって承認されたガイドラインに従って行った。
動物． Ｂａｌｂ／ｃマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、そして実験をＩＡＣＵＣによって承認されたガイドラインに従って行った。
【0126】
ＫＰオルガノイド生成． 正常膵臓上皮オルガノイドを、野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスの膵臓組織から単離した。膵臓組織をすりつぶし、そしてコラゲナーゼＰ緩衝液（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ、５０－１００－３３９８）中で３７℃にて１５分間消化した。細胞懸濁液を５００μｍフィルターに通し、次いで再び１００μｍフィルターに通した。次いで完全オルガノイド培地を用いて細胞をマトリゲルオーバーレイ（ＶＷＲ、３５４２３４）に播種した；１ｘ Ｐ／Ｓ／Ｌ－グルタミン、１ｘ Ｂ２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１ｍＭ Ｎ－アセチルシステイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｎＭ ｈガストリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、５０ｎｇ／ｍｌ ｍＥＧＦ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１μｇ／ｍｌ ｍＲＳＰＯ１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、２５ｎｇ／ｍｌ ｈノギン（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、１００ｎｇ／ｍｌ ｈＦＧＦ１０（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、及び１０ｍＭニコチンアミド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）（Ｂｏｊ ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｏｎｃｏｌ、３（１）：ｅ１０１４７５７、２０１５）を補充したＤＭＥ／Ｆ１２。
【0127】
次いで、結果として得られたオルガノイドを１０ｎＭ Ｒｏｃｋ阻害剤 Ｙ－２７６３２（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｙ０５０３）を添加した完全オルガノイド培地を上に乗せた成長因子減少マトリゲルで維持した。継代するために、細胞回収液（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して２時間氷上でオルガノイドをマトリゲルから洗い流し、次いでＡｃｃｕｔａｓｅを使用して解離させて細胞懸濁液にした。継代を１：４比で週に１回行った。
【0128】
オルガノイドのレンチウイルス形質導入のために、膵臓オルガノイドを解離させて単細胞懸濁液とし、そしてＫＲａｓＶ１２発現のため、及びｐ５３発現の喪失のため、又はポリブレン（８μｇ／ｍｌ）の存在下でのスピンフェクション（ｓｐｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）法を使用したｐ５３Ｒ１７５Ｈの発現のためにレンチウイルスを用いて形質導入した。
【0129】
次いで、形質導入したＫＰ－オルガノイドを、同系Ｂａｌｂ／ｃマウスの膵臓の膵頭中に同所移植し（移植あたり５０：５０ ＰＢＳ／マトリゲル溶液中０．１－０．５Ｅ６細胞）、これは移植後１か月以内に腫瘍成長をもたらした。
【0130】
結果として得られたＫＰ腫瘍を採取し、そして膵がん細胞をコラゲナーゼＸＩ／ディスパーゼ溶液を終夜３７℃で使用して単離した。次いで細胞をＰＢＳで洗浄し、そして完全オルガノイド培地を上に乗せた増殖因子減少マトリゲルに再懸濁した。
【0131】
処置
各処置群（以下の表１に列挙される）において、８～１０匹のマウスにＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植し、そして腫瘍が定着した（ベースラインで３０～１１０ｍｍ３腫瘍体積）ときに処置を開始した。ＲＥＧＮ１１０３（抗ｍＩＬ－４Ｒ抗体）２５ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロールｍＩｇＧ１ Ａｂを、抗ｍＰＤ１（クローンＲＰＭＩ－１４）１０ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロール ラットＩｇＧ２ａと組み合わせて、ＫＰ細胞注射（０．１Ｅ６～０．５Ｅ６細胞）の１３日後に開始して、３～４日ごとに７回用量をマウスに腹腔内注射した。
各処置群（以下の表１に列挙される）において、８～１０匹のマウスにＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植し、そして腫瘍が定着した（ベースラインで３０～１１０ｍｍ３腫瘍体積）ときに処置を開始した。ＲＥＧＮ１１０３（抗ｍＩＬ－４Ｒ抗体）２５ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロールｍＩｇＧ１ Ａｂを、抗ｍＰＤ１（クローンＲＰＭＩ－１４）１０ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロール ラットＩｇＧ２ａと組み合わせて、ＫＰ細胞注射（０．１Ｅ６～０．５Ｅ６細胞）の１３日後に開始して、３～４日ごとに７回用量をマウスに腹腔内注射した。
【0132】
【表1】
【0133】
Ｂａｌｂ／ｃマウスに、５０：５０ ＰＢＳ／マトリゲル液中１Ｅ５～２．５Ｅ５同系ＫＰオルガノイド由来細胞を皮下投与した。細胞をＩＭＰＡＣＴ試験を使用してインビボ移植の前に試験した。ノギスにより週に２回腫瘍を測定し、そして体積を（Ｌ＊Ｗ２）／２［ここでＬは最長直径であり、そしてＷは垂直直径である］により算出した。
【0134】
結果
ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子発現は、ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子の発現がない正常膵臓と比較して、同所及び皮下移植された腫瘍において大幅にアップレギュレートされることが見出された。同様に、ＥＬＩＳＡアッセイにより測定されたＩＬ－４サイトカイン産生は、同所及び皮下腫瘍モデルの両方において大幅にアップレギュレートされたが、正常膵臓はＩＬ－４サイトカインの産生を示さなかった。これらのデータは、膵がんのＫＰオルガノイド細胞移植腫瘍モデルが高レベルのＩＬ－４及びＩＬ－１３を発現することを示し、これらは２つの中心的な２型関連サイトカインであり、それにより２型免疫応答が膵がんのこれらのインビボモデルにおいて活性化されることを示した。
ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子発現は、ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子の発現がない正常膵臓と比較して、同所及び皮下移植された腫瘍において大幅にアップレギュレートされることが見出された。同様に、ＥＬＩＳＡアッセイにより測定されたＩＬ－４サイトカイン産生は、同所及び皮下腫瘍モデルの両方において大幅にアップレギュレートされたが、正常膵臓はＩＬ－４サイトカインの産生を示さなかった。これらのデータは、膵がんのＫＰオルガノイド細胞移植腫瘍モデルが高レベルのＩＬ－４及びＩＬ－１３を発現することを示し、これらは２つの中心的な２型関連サイトカインであり、それにより２型免疫応答が膵がんのこれらのインビボモデルにおいて活性化されることを示した。
【0135】
さらに、抗ＩＬ－４Ｒ処置は、インビボでのＰＤ－１遮断の抗腫瘍有効性を増強した。ベースラインで３０～１１０ｍｍ３腫瘍体積での処置研究の結果を図１Ａ及び１Ｂに示す。ベースラインで５０～１１０ｍｍ３腫瘍体積の腫瘍を有する処置されたマウスのサブグループの結果を図２Ａ及び２Ｂに示す。抗ｍＰＤ－１単剤療法は、８匹のうち４匹のマウスが腫瘍退縮を示して部分的抗腫瘍有効性を示し、２匹の完全寛解を含んでいたが、抗ｍＩＬ－４Ｒ単剤療法は抗腫瘍活性を示さなかった。しかし、抗ＩＬ－４Ｒ及び抗ＰＤ－１の組み合わせ療法は、１０匹のマウスのうち７匹が腫瘍退縮を示して劇的に増強された抗腫瘍有効性を示し、６匹の完全寛解を含んでいた。これは予想外に優れた結果であった。
【0136】
従って、２型免疫依存性がんにおけるＩＬ－４／ＩＬ－１３ ２型免疫応答は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路の遮断により有効に標的化することができる。この研究は、２型免疫依存性がんの代表である膵がんの皮下動物モデルにおいて、抗ＩＬ－４Ｒ療法が抗ＰＤ－１処置の抗腫瘍有効性を驚くべき程度まで実質的に増強することを示す。
【0137】
実施例２：ヒト膵がん及び他のヒトがん型におけるサブセットは強い２型免疫シグネチャーを示す
ヒトがん型内及びヒトがん型にわたる２型免疫応答活性化の程度を評価するために、２型免疫遺伝子シグネチャーを設計し、これは２型関連サイトカイン、ケモカイン、及びそれらの受容体、さらには２型免疫下流標的遺伝子（ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ２５、ＩＬ１７ＲＢ、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＣＣＬ２４、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＣＬ１、ＭＵＣ５Ｂ、ＣＣＬ２６、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＰＯＳＴＮ、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１７、ＦＣＥＲ２、ＣＣＲ３、ＩＬ６、ＣＣＬ８、ＣＲＬＦ２、ＩＬ３３、ＴＳＬＰ、ＩＬ－４Ｒ、ＣＣＲ４、ＰＴＧＤＲ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＩＬ１ＲＬ１、ＤＰＰ４、ＩＬ－４、ＩＬ５、及びＩＬ－１３）を含んでいた。この２型免疫シグネチャーを、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ （ＴＣＧＡ）データベースから入手可能な多数のヒトがん型の発現プロフィール － すなわち、ＢＲＣＡ（乳がん）、ＣＯＡＤ（結腸腺がん）、ＧＢＭ（多形神経膠芽腫）、ＫＩＲＣ（腎細胞がん）、ＬＧＧ（低悪性度神経膠腫）、ＬＵＡＤ（肺腺がん）、ＬＵＳＣ（肺扁平上皮がん）、ＯＶ（卵巣がん）、ＰＡＡＤ（膵臓腺がん）、ＰＲＡＤ（前立腺腺がん）、及びＳＫＣＭ（皮膚黒色腫）に適用した。ＦＰＫＭ（１００万のマップされたリードあたりの転写物１キロ塩基あたりのフラグメント）での上位四分位点正規化発現値を元の入力として使用した。ヒートマップに示された全ての腫瘍サンプルにわたって各遺伝子発現についてＺ－スコアを生成した。Ｔｈ２シグネチャースコア計算のために、Ｚ－スコアの上限（最高Ｚ－スコア）を＋４に設定し；そしてＺ－スコアの下限（最低Ｚ－スコア）を－４に設定した。次いでＴｈ２シグネチャー遺伝子リストの各々の遺伝子についてのＺ－スコアの合計を、各サンプルについて計算した。複合発現（Ｚ－スコア）はサンプルのＴｈ２シグネチャーレベルを表す。
ヒトがん型内及びヒトがん型にわたる２型免疫応答活性化の程度を評価するために、２型免疫遺伝子シグネチャーを設計し、これは２型関連サイトカイン、ケモカイン、及びそれらの受容体、さらには２型免疫下流標的遺伝子（ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ２５、ＩＬ１７ＲＢ、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＣＣＬ２４、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＣＬ１、ＭＵＣ５Ｂ、ＣＣＬ２６、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＰＯＳＴＮ、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１７、ＦＣＥＲ２、ＣＣＲ３、ＩＬ６、ＣＣＬ８、ＣＲＬＦ２、ＩＬ３３、ＴＳＬＰ、ＩＬ－４Ｒ、ＣＣＲ４、ＰＴＧＤＲ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＩＬ１ＲＬ１、ＤＰＰ４、ＩＬ－４、ＩＬ５、及びＩＬ－１３）を含んでいた。この２型免疫シグネチャーを、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ （ＴＣＧＡ）データベースから入手可能な多数のヒトがん型の発現プロフィール － すなわち、ＢＲＣＡ（乳がん）、ＣＯＡＤ（結腸腺がん）、ＧＢＭ（多形神経膠芽腫）、ＫＩＲＣ（腎細胞がん）、ＬＧＧ（低悪性度神経膠腫）、ＬＵＡＤ（肺腺がん）、ＬＵＳＣ（肺扁平上皮がん）、ＯＶ（卵巣がん）、ＰＡＡＤ（膵臓腺がん）、ＰＲＡＤ（前立腺腺がん）、及びＳＫＣＭ（皮膚黒色腫）に適用した。ＦＰＫＭ（１００万のマップされたリードあたりの転写物１キロ塩基あたりのフラグメント）での上位四分位点正規化発現値を元の入力として使用した。ヒートマップに示された全ての腫瘍サンプルにわたって各遺伝子発現についてＺ－スコアを生成した。Ｔｈ２シグネチャースコア計算のために、Ｚ－スコアの上限（最高Ｚ－スコア）を＋４に設定し；そしてＺ－スコアの下限（最低Ｚ－スコア）を－４に設定した。次いでＴｈ２シグネチャー遺伝子リストの各々の遺伝子についてのＺ－スコアの合計を、各サンプルについて計算した。複合発現（Ｚ－スコア）はサンプルのＴｈ２シグネチャーレベルを表す。
【0138】
この２型免疫シグネチャーヒートマップの解析は、膵がん、非小細胞肺がん、及び肺扁平上皮がんが最小の不均一性で２型免疫シグネチャーの最も強い全体発現を示すということを示した。他のがん型内のサブセットも強い全体の２型免疫シグネチャーを示し、これらとしては、乳がん及び結腸がんにおけるサブセットが挙げられる。しかし、他のがん型（例えば、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、神経膠腫、黒色腫、前立腺）は、全体にシグネチャーの低い発現を示した。要約すれば、これらのデータは、ヒト膵がん及び肺がんにおいて、さらには乳がん及び結腸がんを含む他のヒトがん型において強い２型免疫活性を示す。
【0139】
実施例３：ＩＬ－４及びＩＬ－１３サイトカインは、膵がんインビボモデルにおいて大幅にアップレギュレートされそして産生される
この実施例は、膵がんの移植ベースのモデルにおいてＩＬ－４及びＩＬ－１３発現レベル並びにＩＬ－４サイトカイン産生を評価することにより、膵がんのインビボモデルにおいて２型免疫応答が活性化されるか否かの研究に関する。動物及びＫＰオルガノイド生成に関する実施例１に記載される材料及び方法はこの実施例３についても同じである。
この実施例は、膵がんの移植ベースのモデルにおいてＩＬ－４及びＩＬ－１３発現レベル並びにＩＬ－４サイトカイン産生を評価することにより、膵がんのインビボモデルにおいて２型免疫応答が活性化されるか否かの研究に関する。動物及びＫＰオルガノイド生成に関する実施例１に記載される材料及び方法はこの実施例３についても同じである。
【0140】
Ｂａｌｂ／ｃマウスに、がん性ＫＲＡＳを発現するように操作され、付随してＰ５３腫瘍抑制因子の機能を喪失した同系膵腫オルガノイド細胞（ＫＰ細胞）を皮下（Ｓｕｂ－Ｃｕ）、又は同所に（Ｏｒｔｈｏ）移植し、そして移植の４週間後に腫瘍を採取した（条件あたりｎ＝４～５匹）。
【0141】
サイトカイン測定． プロテアーゼ阻害剤カクテルを添加した組織タンパク質抽出試薬（Ｔ－ＰＥＲ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ）中に腫瘍サンプルを再懸濁し、そしてＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩ （Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて機械的にホモジナイズした。腫瘍タンパク質抽出物中のタンパク質含有量を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ＰｉｅｒｃｅＴＭ ６６０ｎｍタンパク質アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ）を使用することにより測定した。サイトカイン濃度を、カスタムＭＳＤキット及びＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ１２０プレートリーダー（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用することにより決定した。
【0142】
結果
ＩＬ－４及びＩＬ－１３両方の遺伝子発現は、ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子の発現が無い正常膵臓と比較して同所及び皮下に移植された腫瘍において大幅にアップレギュレートされることが見出された（図３Ａ）。同様に、ＥＬＩＳＡアッセイにより測定されたＩＬ－４サイトカイン産生は、同所及び皮下の腫瘍モデルの両方においてアップレギュレートされたが、正常膵臓はＩＬ－４サイトカインの産生を示さなかった（図３Ｂ）。これらのデータは、膵がんのＫＰオルガノイド細胞移植腫瘍モデルが高レベルのＩＬ－４及びＩＬ－１３（２つの中心的２型免疫関連サイトカイン）を発現することを示し、それにより２型免疫応答が膵がんのこれらのインビボモデルにおいて活性化されるということを示した。従って、ＩＬ－４／ＩＬ－１３誘導２型免疫応答を、ＩＬ－４Ｒ遮断により有効に標的化することができる（Ｈａｒｂ ｅｔ ａｌ．、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ、５０（１）：５－１４、２０１９；Ｌｅ Ｆｌｏｃ’ｈ ｅｔ ａｌ．、Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｄｅｃ ２０１９）。
ＩＬ－４及びＩＬ－１３両方の遺伝子発現は、ＩＬ－４及びＩＬ－１３遺伝子の発現が無い正常膵臓と比較して同所及び皮下に移植された腫瘍において大幅にアップレギュレートされることが見出された（図３Ａ）。同様に、ＥＬＩＳＡアッセイにより測定されたＩＬ－４サイトカイン産生は、同所及び皮下の腫瘍モデルの両方においてアップレギュレートされたが、正常膵臓はＩＬ－４サイトカインの産生を示さなかった（図３Ｂ）。これらのデータは、膵がんのＫＰオルガノイド細胞移植腫瘍モデルが高レベルのＩＬ－４及びＩＬ－１３（２つの中心的２型免疫関連サイトカイン）を発現することを示し、それにより２型免疫応答が膵がんのこれらのインビボモデルにおいて活性化されるということを示した。従って、ＩＬ－４／ＩＬ－１３誘導２型免疫応答を、ＩＬ－４Ｒ遮断により有効に標的化することができる（Ｈａｒｂ ｅｔ ａｌ．、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ、５０（１）：５－１４、２０１９；Ｌｅ Ｆｌｏｃ’ｈ ｅｔ ａｌ．、Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｄｅｃ ２０１９）。
【0143】
実施例４：組み合わせた抗ＩＬ－４Ｒ及び抗ＰＤ－１遮断はより大きな腫瘍において増強された抗腫瘍有効性を一貫して生じる
この実施例は、実施例１の反復研究であり、そしてより大きな腫瘍に対する組み合わせた抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－組み合わせ治療の有効性を評価した。詳細には、この研究において、定着した腫瘍が７０～１００ｍｍ３の範囲の体積を有していたときに開始された。
この実施例は、実施例１の反復研究であり、そしてより大きな腫瘍に対する組み合わせた抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－組み合わせ治療の有効性を評価した。詳細には、この研究において、定着した腫瘍が７０～１００ｍｍ３の範囲の体積を有していたときに開始された。
【0144】
結果
抗ＩＬ４Ｒ単剤療法は、腫瘍成長制御の傾向を示したが、抗ｍＰＤ－１単剤療法は、全体的な抗腫瘍活性を示さなかった。対照的に、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ療法は、単剤療法対照アームと比較して有意に増強された抗腫瘍有効性を示し、７匹のマウスのうち４匹において腫瘍成長を制御した。この処置研究の結果を図４Ａ及び４Ｂに示す。
抗ＩＬ４Ｒ単剤療法は、腫瘍成長制御の傾向を示したが、抗ｍＰＤ－１単剤療法は、全体的な抗腫瘍活性を示さなかった。対照的に、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ療法は、単剤療法対照アームと比較して有意に増強された抗腫瘍有効性を示し、７匹のマウスのうち４匹において腫瘍成長を制御した。この処置研究の結果を図４Ａ及び４Ｂに示す。
【0145】
さらに、全身のインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦａ）サイトカインレベルを、研究の終了時点で腫瘍溶解物において測定した。ＩＦＮｇ及びＴＮＦａ産生は、単剤群又はアイソタイプコントロール群と比較して、組み合わせ処置群において有意に増加した（図４Ｃ）。特に、最も高いレベルの腫瘍内ＩＦＮｇ（＞５０ｐｇ／ｍＬ）は、各処置群における最も応答性の腫瘍に対応していた。全体的に、前述の知見は、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療が増加したＩＦＮｇ依存性抗腫瘍活性を誘導したということを示す。
【0146】
実施例５：組み合わせた抗ＩＬ－４Ｒ及び抗ＰＤ－１遮断は癌間質及び免疫変調活性を示す
この実施例は実施例１の反復研究であるが、ＰＤＡＣ腫瘍保有マウスにおける抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療の間質及び免疫変調活性を調べた。間質含有量の組織学的分析をこの短いエンドポイント処置研究において行い、ここでは処置群あたり８～１０匹のマウスに、ＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植した。腫瘍体積が５０～１００ｍｍ３に達したときに処置を開始した。過剰な腫瘍退縮を避けて偏りの無い組織学的分析を可能にするために、２回の処置投薬の後に腫瘍を採取した。処置群の処置体積のパーセント変化を図５Ａに示す。
この実施例は実施例１の反復研究であるが、ＰＤＡＣ腫瘍保有マウスにおける抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療の間質及び免疫変調活性を調べた。間質含有量の組織学的分析をこの短いエンドポイント処置研究において行い、ここでは処置群あたり８～１０匹のマウスに、ＫＰ腫瘍オルガノイド細胞を移植した。腫瘍体積が５０～１００ｍｍ３に達したときに処置を開始した。過剰な腫瘍退縮を避けて偏りの無い組織学的分析を可能にするために、２回の処置投薬の後に腫瘍を採取した。処置群の処置体積のパーセント変化を図５Ａに示す。
【0147】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、膵腫瘍微小環境の顕著な成分であり、腫瘍母地内の薬物灌流を阻害することが示されている（Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２１（３）：４１８－２９、２０１２、Ｊａｃｏｂｅｔｚ ｅｔ ａｌ．、Ｇｕｔ、６２（１）：１１２－２０、２０１３）。ＨＡの酵素的枯渇は、ＰＤＡＣ前臨床モデルにおいて細胞傷害性抗腫瘍有効性を増強することが示されており、そして化学療法又は免疫チェックポイント遮断と組み合わせて膵臓がん患者において試験される。膵腫瘍の微小環境におけるＨＡ含有量を、組織化学染色方法を使用してビオチン化ＨＡ結合タンパク質（ＨＡＢＰ）及びディジタル病理分析を使用して決定した（図５Ｂ）。
【0148】
免疫染色． サンプルを１０％中性ホルマリン中で１６～２４時間固定し、そしてパラフィン包埋のために７０％エタノール中に移した。全ての染色はマウス組織の５ｕＭパラフィン切片に対して行った。
【0149】
免疫染色のために、切片を脱パラフィンし、脱水し、そして抗原賦活化をＲＴＵ ＡＲ Ｃｉｔｒａ液（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ、Ｓａｎ Ｒａｍｏｎ、ＣＡ）を用いて行い、Ｈ２Ｏ２を使用して内因性ペルオキシダーゼをブロックした。非特異的タンパク質結合を１０％ヤギ血清（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＡ）を用いてブロックした。切片を抗ＣＤ８一次抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）とともに終夜４℃で、そして西洋ワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともにインキュベートした。残りの工程を適切なＶｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ．）及びＤＡＢペルオキシダーゼ基質（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ．）を使用してヘマトキシリン対比染色を用いて行った。ＨＡＢＰ沈着及びＣＤ８ Ｔ細胞密度についてのディジタル定量を、Ｉｎｄｉｃａ ＬａｂｓからのＨＡＬＯ画像解析プラットフォームを使用して行った。
【0150】
ＨＡ組織化学． ビオチン化ＨＡ結合タンパク質（ｂＨＡＢＰ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｄａｎｖｅｒｓ ＭＡ ＵＳＡを使用した。切片を脱パラフィンし、再水和し、そして３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックした後、ｂＨＡＢＰ（１％ＢＳＡ中１：２００）とともに終夜４℃でインキュベートした。残りの工程をＶｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣキットＳｔａｎｄａｒｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ． Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ ＣＡ）及びＤＡＢペルオキシダーゼ基質（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ．）を使用して、ヘマトキシリン対比染色を用いて行った。
【0151】
結果
図５Ａは、研究の終わりの腫瘍体積のパーセント変化（ベースラインと比較）を示す。ＨＡ含有量は、抗ＰＤ－１単剤療法及びアイソタイプ・コントロール群と比較して、抗ＩＬ－４Ｒ単剤療法群及び抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群において劇的に減少した（図５Ｂ）。ＨＡ含有量のこの減少は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）マーカーＣＤ８の組織学的定量により示されるように、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群における腫瘍母地内のＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤の増加と明確に関連していた（図５Ｃ）。さらに、増加したＴ細胞浸潤は、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群における顕著な相乗的抗腫瘍有効性と関連していた。
図５Ａは、研究の終わりの腫瘍体積のパーセント変化（ベースラインと比較）を示す。ＨＡ含有量は、抗ＰＤ－１単剤療法及びアイソタイプ・コントロール群と比較して、抗ＩＬ－４Ｒ単剤療法群及び抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群において劇的に減少した（図５Ｂ）。ＨＡ含有量のこの減少は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）マーカーＣＤ８の組織学的定量により示されるように、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群における腫瘍母地内のＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤の増加と明確に関連していた（図５Ｃ）。さらに、増加したＴ細胞浸潤は、抗ＩＬ－４Ｒ／ＰＤ－１組み合わせ治療群における顕著な相乗的抗腫瘍有効性と関連していた。
【0152】
前述のデータは、２型免疫分極化線維性膵腫瘍の状況において、ＩＬ－４Ｒ遮断が二重作用機序により抗腫瘍活性を及ぼすことを示す：（ｉ）強力な間質変調及びＨＡ沈着の調節；並びに（ｉｉ）抗ＰＤ－１治療と組み合わせた場合のＴＩＬ浸潤の有意な増強。
【0153】
実施例６：移植された腫瘍に対する抗ＩＬ－４Ｒ抗体と組み合わせた抗ヒトＰＤ－１抗体の有効性
この実施例における実験のために、ヒトＰＤ－１の細胞外部分並びにこのタンパク質のマウスバージョンの膜貫通及び細胞内部分を発現するヒト化マウスを、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）技術（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ ２００３、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２１：６５２－６５９；ＵＳ ９，９８７，５００も参照のこと）を使用して生成した。
この実施例における実験のために、ヒトＰＤ－１の細胞外部分並びにこのタンパク質のマウスバージョンの膜貫通及び細胞内部分を発現するヒト化マウスを、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）技術（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ ２００３、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２１：６５２－６５９；ＵＳ ９，９８７，５００も参照のこと）を使用して生成した。
【0154】
この研究に使用した例となる抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する完全ヒト抗体（セミプリマブ）であり、配列番号１３－１４－１５－１６－１７－１８のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３及び配列番号１１／１２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。この実施例において使用された例となるＩＬ－４／ＩＬ－１３経路阻害剤は実施例１に記載される。
【0155】
膵臓上皮オルガノイドをＰＤ－１ヒト化マウスから単離し、そして実施例１に記載されるように処理してＫＰ－腫瘍オルガノイド細胞（膵がん細胞）を得た。
【0156】
ＰＤ－１ヒト化マウスに１．５ｘ１０６ ＫＰ－腫瘍オルガノイド細胞を０日目に移植し、そして腫瘍が定着したら処置を開始した。マウスにＲＥＧＮ１１０３（抗ｍＩＬ－４Ｒ抗体）２５ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロールＡｂをセミプリマブ１０ｍｇ／ｋｇ又はアイソタイプ・コントロールと組み合わせてＫＰ細胞注射の１３日後に開始して（０．１Ｅ６～０．５Ｅ６細胞）、３～４日ごとに７回用量について腹腔内注射した。腫瘍体積をノギス測定により実験期間の間、週に２回モニタリングした。
【0157】
抗ＩＬ－４Ｒ処置は、セミプリマブの抗腫瘍有効性を増強する。腫瘍退縮及び完全寛解は、セミプリマブ単剤療法と比較して組み合わせ治療を用いて処置されたマウスにおいて見られた。
【0158】
実施例７：臨床試験
臨床試験において、膵がん、肺がん、多発性骨髄腫、乳がん及び結腸がんを有する患者に、デュピルマブと組み合わせてセミプリマブを投与した。セミプリマブ及びデュピルマブを投与された患者は、単剤療法としていずれかの薬物を投与された患者よりも高い腫瘍阻害を示した。
臨床試験において、膵がん、肺がん、多発性骨髄腫、乳がん及び結腸がんを有する患者に、デュピルマブと組み合わせてセミプリマブを投与した。セミプリマブ及びデュピルマブを投与された患者は、単剤療法としていずれかの薬物を投与された患者よりも高い腫瘍阻害を示した。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【配列表】