▶ メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッドの特許一覧 ▶ クワンチョウ コンスン ファーマシューティカル カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-03
(45)【発行日】2024-09-11
(54)【発明の名称】フェニルプロピオンアミド系化合物及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 5/107 20060101AFI20240904BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20240904BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240904BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240904BHJP
【ＦＩ】
C07K5/107
A61K38/07
A61P17/04
A61P25/04
【請求項の数】
3
(21)【出願番号】P 2022566488
(86)(22)【出願日】2021-04-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-19
(86)【国際出願番号】 CN2021091547
(87)【国際公開番号】W WO2021219134
(87)【国際公開日】2021-11-04
【審査請求日】2023-01-11
(31)【優先権主張番号】202010365940.6
(32)【優先日】2020-04-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】516304780
【氏名又は名称】メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド
(73)【特許権者】
【識別番号】524151484
【氏名又は名称】クワンチョウ コンスン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ジャン ヤン
(72)【発明者】
【氏名】ウー ウェンタオ
(72)【発明者】
【氏名】リー ジューシャン
(72)【発明者】
【氏名】ジュ ウェンユェン
(72)【発明者】
【氏名】チン ジェン
(72)【発明者】
【氏名】チェン シューフイ
【審査官】白井 美香保
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１０９２８００７５（ＣＮ，Ａ）
【文献】特表２０１９－５１７５３０（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／０１５６４４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０９２８００７６（ＣＮ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＣＡＰＬＵＳ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記から選択される、化合物又はその薬学に許容される塩。【化1】
【請求項2】
ｋａｐｐａ受容体アゴニストに関連する疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項3】
前記ｋａｐｐａ受容体アゴニストに関連する医薬は疼痛及び痒みのための医薬であることを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
本出願は出願日が２０２０年４月３０である中国特許出願ＣＮ２０２０１０３６５９４０．６の優先権を主張する。本出願は上記の中国特許出願の全文を引用する。
［技術分野〉
本発明は、疼痛及び痒みに関連する疾患を治療するための医薬の製造におけるフェニルプロピオンアミド系化合物の使用に関し、具体的には、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。
［技術分野〉
本発明は、疼痛及び痒みに関連する疾患を治療するための医薬の製造におけるフェニルプロピオンアミド系化合物の使用に関し、具体的には、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。
【0002】
［背景技術］
本発明の化合物は、新しいｋａｐｐａアゴニストであり、疼痛及び痒みに関連する疾患を治療するための医薬の製造における使用である。
本発明の化合物は、新しいｋａｐｐａアゴニストであり、疼痛及び痒みに関連する疾患を治療するための医薬の製造における使用である。
【0003】
オピオイド受容体は、７つの膜にわたるＧタンパク質共役受容体の重要なクラスであり、ＭＯＲ、ＤＯＲ、ＫＯＲ、ＯＬＲなどのサブタイプを含み、脳、脊髄及び末梢全体に広く分布している。Ｋａｐｐａオピオイド受容体（ＫＯＲ）は、ヒト染色体８ｑ１１．２にある単一遺伝子ＯＰＲＫによってコードされる。ＭＯＲと同様に、ＫＯＲは脳、脊髄及び末梢神経で広く発現している。Ｋａｐｐａオピオイド受容体アゴニストは、少なくとも下記の２つの機序を通じて鎮痛効果を発揮することができる：（ｉ）疼痛シグナルのニューロン輸送の直接阻害効果及び（ｉｉ）間接的な抗炎症効果。
【0004】
中枢作用型オピオイド受容体アゴニストは疼痛を阻害することができるが、鎮静、落ち着きのなさ及び尿量の増加などの局所的な副作用を伴う。末梢オピオイド受容体の活性化は、鎮痛効果を生み出し、中枢神経系の副作用を軽減することができる。このアプローチにより、従来の中枢性オピオイドによる疼痛緩和効果が確認されている。末梢制限性のＫＯＲアゴニストは血液脳関門を通過しないため、脳又は脊髄にあるＫＯＲに影響を与えない。末梢にあるｋａｐｐａ受容体に作用することで、中枢を介した副作用を起こすことなく、疼痛シグナルの伝達を減少することができる。
【0005】
［発明の概要］
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0006】
【化1】
【0007】
ただし、
Ｒ１は、Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルから選択され、前記Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ２は、
Ｒ１は、Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルから選択され、前記Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ２は、
【0008】
【化2】
【0009】
【化3】
【0010】
Ｌ１は、－Ｎ（Ｒｅ）－Ｃ（Ｒｃ）（Ｒｄ）－から選択され、窒素原子は、Ｒ３に連結され、炭素原子は、Ｌ１に連結され、
Ｒ３は、－Ｃ１－３アルキル－フェニルから選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－フェニルは、任意選択で１、２又は３つのＲｆにより置換され、
Ｒａ及びＲｆは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＣＨ３から選択され、
Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキル及び－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－３アルキルから選択され、前記Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキル及び－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲにより置換され、
Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立してＨ、ＮＨ２及びＣＨ３から選択され、
Ｒｅは、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒから選択される。
Ｒ３は、－Ｃ１－３アルキル－フェニルから選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－フェニルは、任意選択で１、２又は３つのＲｆにより置換され、
Ｒａ及びＲｆは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＣＨ３から選択され、
Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキル及び－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－３アルキルから選択され、前記Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキル及び－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲにより置換され、
Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立してＨ、ＮＨ２及びＣＨ３から選択され、
Ｒｅは、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒから選択される。
【0011】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ１は、シクロプロピル、シクロペンチル及び－ＣＨ２－シクロプロピルから選択され、前記シクロプロピル、シクロペンチル及び－ＣＨ２－シクロプロピルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0012】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ１は、
【0013】
【化4】
【0014】
本発明の一部の形態において、上記Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３及び－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－ＣＨ３から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0015】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ２は、
【0016】
【化5】
【0017】
【化6】
【0018】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ２は、
【0019】
【化7】
【0020】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、
【0021】
【化8】
【0022】
【化9】
【0023】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、
【0024】
【化10】
【0025】
本発明の一部の形態において、上記Ｌ１は、－ＮＨ－ＣＨ２－から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３－Ｌ１－は、
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３－Ｌ１－は、
【0026】
【化11】
【0027】
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0028】
【化12】
【0029】
ただし、
Ｒ１は、Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルから選択され、前記Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ２は、
Ｒ１は、Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルから選択され、前記Ｃ３－５シクロアルキル及び－Ｃ１－３アルキル－Ｃ３－５シクロアルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ２は、
【0030】
【化13】
【0031】
【化14】
【0032】
Ｌ１は、－Ｃ（Ｒｃ）（Ｒｄ）－及び－Ｎ（Ｒｅ）－Ｃ（Ｒｃ）（Ｒｄ）－から選択され、
Ｒ３は、－Ｃ１－３アルキル－フェニルから選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－フェニルは、任意選択で１、２又は３つのＲｆにより置換され、
Ｒａ及びＲｆは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＣＨ３から選択され、
Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキルから選択され、前記Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲにより置換され、
Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立してＨ、ＮＨ２及びＣＨ３から選択され、
Ｒｅは、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒから選択される。
Ｒ３は、－Ｃ１－３アルキル－フェニルから選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－フェニルは、任意選択で１、２又は３つのＲｆにより置換され、
Ｒａ及びＲｆは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＣＨ３から選択され、
Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキルから選択され、前記Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲにより置換され、
Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立してＨ、ＮＨ２及びＣＨ３から選択され、
Ｒｅは、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
Ｒは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒから選択される。
【0033】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ１は、シクロプロピル、シクロペンチル及び－ＣＨ２－シクロプロピルから選択され、前記シクロプロピル、シクロペンチル及び－ＣＨ２－シクロプロピルは、任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0034】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ１は、
【0035】
【化15】
【0036】
本発明の一部の形態において、上記Ｒｂは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＨ３及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
本発明の一部の形態において、上記Ｒ２は、
本発明の一部の形態において、上記Ｒ２は、
【0037】
【化16】
【0038】
【化17】
【0039】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ２は、
【0040】
【化18】
【0041】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、
【0042】
【化19】
【0043】
【化20】
【0044】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、
【0045】
【化21】
【0046】
本発明の一部の形態において、上記Ｌ１は、－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＮＨ２）－及び－ＮＨ－ＣＨ２－から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３－Ｌ１－は、
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３－Ｌ１－は、
【0047】
【化22】
【0048】
本発明一部の形態は、更に上記の各変量を任意に組み合わせることにより形成される。
本発明の一部の形態において、上記の化合物又はその薬学的に許容される塩は、下記から選択される。
本発明の一部の形態において、上記の化合物又はその薬学的に許容される塩は、下記から選択される。
【0049】
【化23】
【0050】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、本発明で定義された通りであり、
「＊」の付いた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一エナンチオマー形態又はエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
「＊」の付いた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一エナンチオマー形態又はエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0051】
本発明の一部の形態において、上記の化合物又はその薬学的に許容される塩は、下記から選択される。
【0052】
【化24】
【0053】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、本発明で定義された通りであり、
「＊」の付いた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一エナンチオマー形態又はエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
「＊」の付いた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一エナンチオマー形態又はエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0054】
本発明は、更に下記の式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0055】
【化25】
【0056】
本発明の一部の形態において、上記の化合物、その異性体又はその薬学的に許容される塩は、下記から選択される。
【0057】
【化26】
【0058】
本発明は、ｋａｐｐａ受容体アゴニストに関連する疾患を治療するための医薬の製造における、上記の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明の一部の形態において、上記の使用は、前記ｋａｐｐａ受容体アゴニストに関連する医薬が疼痛及び痒みのための医薬であることを特徴とする。
本発明の一部の形態において、上記の使用は、前記ｋａｐｐａ受容体アゴニストに関連する医薬が疼痛及び痒みのための医薬であることを特徴とする。
【0059】
［定義及び説明］
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【0060】
本明細書で用いられる「薬学的許容される塩」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対するもので、これらは信頼できる医学判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織との接触に適し、毒性、刺激性、アレルギー反応又はほかの問題又は合併症があまりなく、合理的な利益／リスク比に合う。
【0061】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩で、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物と比較的に無毒の酸又は塩基とで製造される。本発明の化合物に比較的に酸性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の塩基でこれらの化合物の中性の形態と接触することで塩基付加塩を得ることができる。薬学的許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミン又はマグネシウム塩あるいは類似の塩を含む。本発明で化合物に比較的塩基性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は、適切な不活性溶媒において十分な量の酸でこれらの化合物の中性の形態と接触することで酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の実例は、無機酸塩及び有機酸塩、さらにアミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、及びグルクロン酸のような有機酸の塩を含み、上記無機酸は、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素イオン、リン酸、リン酸一水素イオン、リン酸二水素イオン、硫酸、硫酸水素イオン、ヨウ化水素酸、亜リン酸などを含み、上記有機酸は、例えば酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸やメタンスルホン酸などの類似の酸を含む。本発明の一部の特定的の化合物は、塩基性及び酸性の官能基を含有するため、任意の塩基付加塩又は酸付加塩に転換することができる。
【0062】
本発明の薬学的許容される塩は、酸基又は塩基性基を含む母体化合物から通常の方法で合成することができる。通常の場合、このような塩の製造方法は、水又は有機溶媒あるいは両者の混合物において、遊離酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させて製造する。
【0063】
別途に説明しない限り、用語「異性体」とは、幾何異性体、シス－トランス異性体、立体異性体、エナンチオマー、光学異性体、エナンチオマー及び互変異性体を含むことを指す。
本発明の化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明は、全てのこのような化合物を想定し、シス及びトランス異性体、（－）－及び（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－及び（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物並びに他の混合物、例えばエナンチオマー又は非エナンチオマーを多く含有する混合物を含み、全てのこれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。アルキル等の置換基に他の不斉炭素原子が存在してもよい。全てのこれらの異性体及びこれらの混合物はいずれも本発明の範囲内に含まれる。
本発明の化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明は、全てのこのような化合物を想定し、シス及びトランス異性体、（－）－及び（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－及び（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物並びに他の混合物、例えばエナンチオマー又は非エナンチオマーを多く含有する混合物を含み、全てのこれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。アルキル等の置換基に他の不斉炭素原子が存在してもよい。全てのこれらの異性体及びこれらの混合物はいずれも本発明の範囲内に含まれる。
【0064】
別途に説明しない限り、用語「エナンチオマー」又は「光学異性体」とは互いに鏡像の関係にある立体異性体である。
別途に説明しない限り、用語「シス－トランス異性体」又は「幾何異性体」とは二重結合又は環構成炭素原子の単結合が自由に回転できないことによるものである。
別途に説明しない限り、用語「シス－トランス異性体」又は「幾何異性体」とは二重結合又は環構成炭素原子の単結合が自由に回転できないことによるものである。
【0065】
別途に説明しない限り、用語「ジアステレオマー」とは分子が二つ又は複数のキラル中心を有し、かつ分子同士は非鏡像の関係にある立体異性体である。
別途に説明しない限り、「（Ｄ）」又は「（＋）」は右旋性を意味し、「（Ｌ）」又は「（－）」は左旋性を意味し、「（ＤＬ）」または「（±）」はラセミ体を意味する。
別途に説明しない限り、「（Ｄ）」又は「（＋）」は右旋性を意味し、「（Ｌ）」又は「（－）」は左旋性を意味し、「（ＤＬ）」または「（±）」はラセミ体を意味する。
【0066】
別途に説明しない限り、楔形実線結合（
【0067】
【化27】
【0068】
【化28】
【0069】
【化29】
【0070】
【化30】
【0071】
【化31】
【0072】
【化32】
【0073】
【化33】
【0074】
【化34】
【0075】
【化35】
【0076】
【化36】
【0077】
別途に説明しない限り、用語「１つの異性体に富む」、「異性体豊富な」、「１つのエナンチオマーに富む」又は「エナンチオマー豊富な」とは、１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１００％未満で、且つこの異性体又はエナンチオマーの含有量が６０％以上、又は７０％以上、又は８０％以上、又は９０％以上、又は９５％以上、又は９６％以上、又は９７％以上、又は９８％以上、又は９９％以上、又は９９．５％以上、又は９９．６％以上、又は９９．７％以上、又は９９．８％以上、又は９９．９％以上であることを意味する。
【0078】
別途に説明しない限り、用語「異性体過剰率」又は「エナンチオマー過剰率」とは、２つの異性体又は２つのエナンチオマーの相対百分率の間の差を意味する。例えば、１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が９０％であり、もう１つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１０％である場合、異性体又はエナンチオマー過剰率（ｅｅ値）は８０％である。
【0079】
光学活性な（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体ならびにＤ及びＬ異性体は、不斉合成又はキラル試薬又はほかの通常の技術を用いて調製することができる。本発明のある化合物の一つの鏡像異性体を得るには、不斉合成又はキラル補助剤を有する誘導作用によって調製することができるが、ここで、得られたジアステレオマー混合物を分離し、かつ補助基を分解させて単離された所要の鏡像異体性を提供する。あるいは、分子に塩基性官能基（例えばアミノ）又は酸性官能基（例えばカルボキシル）が含まれる場合、適切な光学活性な酸又は塩基とジアステレオマーの塩を形成させ、さらに本分野で公知の通常方式の方法によってジアステレオマーの分割を行った後、回収して単離された鏡像異体を得る。また、エナンチオマーとジアステレオマーの分離は、通常、クロマトグラフィー法によって行われ、上記クロマトグラフィーはキラル固定相を使用し、かつ任意の化学誘導法（例えば、アミンからカルバミン酸塩を生成させる）併用する。
【0080】
本発明の化合物は、化合物を構成する一つまた複数の原子には、非天然の原子同位元素が含まれてもよい。例えば三重水素（３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）又はＣ－１４（１４Ｃ）のような放射性同位元素で化合物を標識することができる。又、例えば重水素を水素に置換して重水素化薬物を形成することができ、重水素と炭素で形成された結合は、通常の水素と炭素で形成された結合よりも強く、重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物には、毒性の副作用が軽減され、薬物の安定性が増し、治療効果が向上され、薬物の生物学的半減期が延ばされるという利点がある。本発明の化合物の同位体組成の変換は、放射性であるかいやかに関わらず、本発明の範囲に含まれる。
【0081】
用語「任意」また「任意に」は後記の事項又は状況によって可能であるが必ずしも現れるわけではなく、かつ当該記述はそれに記載される事項又は状況が生じる場合によってその事項又は状況が乗じない場合を含むことを意味する。
【0082】
用語「置換された」は特定の原子における任意の一つ又は複数の水素原子が置換基で置換されたことで、特定の原子価状態が正常でかつ置換後の化合物が安定していれば、置換基は重水素及び水素の変形体を含んでもよい。置換基がケト基（即ち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味する。ケト基置換は、芳香族基で生じない。用語「任意に置換される」は、置換されてもよく、置換されなくてもよく、別途に定義しない限り、置換基の種類と数は化学的に安定して実現できれば任意である。
【0083】
変量（例えばＲ）のいずれかが化合物の組成又は構造に１回以上現れた場合、その定義はいずれの場合においても独立である。そのため、例えば、一つの基が０～２個のＲで置換された場合、上記基は任意に２個以下のＲで置換され、かついずれの場合においてもＲは独立して選択肢を有する。また、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0084】
連結基の数が０である場合、例えば、－（ＣＲＲ）０－は、当該連結基が単結合であることを意味する。
置換基の数が０である場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、－Ａ－（Ｒ）０は当該構造が実際に－Ａとなることを表す。
置換基の数が０である場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、－Ａ－（Ｒ）０は当該構造が実際に－Ａとなることを表す。
【0085】
置換基がない場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、Ａ－ＸのＸがない場合、当該構造が実際にＡとなることを表す。
そのうち一つの変量が単結合の場合、それで連結する２つの基が直接連結し、例えばＡ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚになる。
そのうち一つの変量が単結合の場合、それで連結する２つの基が直接連結し、例えばＡ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚになる。
【0086】
置換基の結合が環上の２つ以上の原子に交差結合できる場合、置換基は環上の任意の原子を通して結合することができ、例えば、構造単位
【0087】
【化37】
【0088】
挙げられた連結基がほかの連結方向を明示しない場合、その連結方向は任意であり、例えば、
【0089】
【化38】
【0090】
【化39】
【0091】
【化40】
【0092】
特に明記しない限り、ある基が一つ以上の結合可能な部位を有する場合、該基の任意の一つ以上の部位は、化学結合によって他の基に結合することができる。該化学結合の結合方式が非局在であり、且つ結合可能な部位にＨ原子が存在する場合、化学結合を結合すると、該部位のＨ原子の個数は、結合された化学結合の個数に応じて相応の価数の基に減少する。前記部位が他の基と結合する化学結合は、直線実線結合（
【0093】
【化41】
【0094】
【化42】
【0095】
【化43】
【0096】
【化44】
【0097】
【化45】
【0098】
【化46】
【0099】
【化47】
【0100】
【化48】
【0101】
【化49】
【0102】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルキル」は直鎖又は分枝鎖の１～３個の炭素原子で構成された飽和炭化水素を表す。前記Ｃ１－３アルキルにはＣ１－２とＣ２－３アルキルなどが含まれ、それは１価（例えばメチル）、２価（例えばメチレン）及び多価（例えばメチン）であってもよい。Ｃ１－３アルキルの実例は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）を含むが、これらに限定されない。
【0103】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルコキシ」は酸素原子を介して分子の残り部分に連結した１～３個の炭素原子を含むアルキルを表す。前記Ｃ１－３アルコキシは、Ｃ１－２、Ｃ２－３、Ｃ３及びＣ２アルコキシなどが含まれる。Ｃ１－３アルコキシの実例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ―プロポキシ又はイソプロポキシを含む）などを含むが、これらに限定されない。
【0104】
別途に定義しない限り、「Ｃ３－５シクロアルキル」は３～５個の炭素原子から構成された環状飽和炭化水素であり、それは単環式環系を表し、上記Ｃ３－５シクロアルキルにはＣ３－４又はＣ４－５シクロアルキルなどが含まれ、それは１価、２価又は多価であってもよい。Ｃ３－５シクロアルキルの実例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルなどを含むが、これらに限定されない。
【0105】
別途に定義しない限り、Ｃｎ－ｎ＋ｍ又はＣｎ－Ｃｎ＋ｍはｎ～ｎ＋ｍ個の炭素の任意の一つの具体的な様態を含み、例えば、Ｃ１－１２はＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、及びＣ１２を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の一つの範囲も含み、例えば、Ｃ１－１２はＣ１－３、Ｃ１－６、Ｃ１－９、Ｃ３－６、Ｃ３－９、Ｃ３－１２、Ｃ６－９、Ｃ６－１２、及びＣ９－１２等を含む。同様に、ｎ員～ｎ＋ｍ員は環における原子数がｎ～ｎ＋ｍ個であることを表し、例えば、３～１２員環は３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、及び１２員環を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の一つの範囲も含み、例えば、３～１２員環は３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、及び６～１０員環等を含む。
【0106】
本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができ、本発明が化合物の絶対配置に関する場合、絶対配置は、当業者の従来の技術的手段によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折（ＳＸＲＤ）、培養された単結晶はＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計によって収集され、光源はＣｕＫα放射線、走査方法：φ／ω走査、関連データを収集した後、更に直接法は（Ｓｈｅｌｘｓ９７）結晶構造解析により、絶対配置を確認できる。
【0107】
本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【0108】
本発明に使用される溶媒は市販品から得ることができる。
本発明は以下の略語を使用する。ａｑは水を表し、ＨＡＴＵはＯ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し、ｅｑは当量、等量を表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＰＥは石油エーテルを表し、ＤＭＦはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＣＢｚはアミン保護基であるベンジルオキシカルボニルを表し、ＢＯＣはアミン保護基であるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、ｒ．ｔ．は室温を表し、Ｏ／Ｎは一晩行うことを表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、Ｂｏｃ２Ｏは二炭酸ジ―ｔ－ブチルを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し、Ｐｄ２（ｄｂａ）３はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムを表す。
本発明は以下の略語を使用する。ａｑは水を表し、ＨＡＴＵはＯ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し、ｅｑは当量、等量を表し、ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＰＥは石油エーテルを表し、ＤＭＦはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＣＢｚはアミン保護基であるベンジルオキシカルボニルを表し、ＢＯＣはアミン保護基であるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、ｒ．ｔ．は室温を表し、Ｏ／Ｎは一晩行うことを表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、Ｂｏｃ２Ｏは二炭酸ジ―ｔ－ブチルを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し、Ｐｄ２（ｄｂａ）３はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムを表す。
【0109】
化合物は本分野の通常の名称又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称が使用された。
［技術効果］
本発明の化合物は有意なＫａｐｐａ受容体アゴニスト効果を有し、ヒト及びＳＤラットの血漿において非常に高い血漿タンパク質非結合率を示し、本発明の化合物は関連する薬物間の相互作用リスクを有さなく、本発明の化合物は優れた薬物動態特性を有する。
［技術効果］
本発明の化合物は有意なＫａｐｐａ受容体アゴニスト効果を有し、ヒト及びＳＤラットの血漿において非常に高い血漿タンパク質非結合率を示し、本発明の化合物は関連する薬物間の相互作用リスクを有さなく、本発明の化合物は優れた薬物動態特性を有する。
【発明を実施するための形態】
【0110】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。当業者にとって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。
【0111】
参照例１：中間体Ｍ１の合成
【0112】
【化50】
【0113】
ステップ１：中間体Ｍ１－２の製造
化合物Ｍ１－１（１．１ｇ、８．５２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解させ、水酸化ナトリウム（４０８．８０ｍｇ、１０．２２ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を加え、次に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．２３ｇ、１０．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液に３０ｍＬの水を加え、飽和硫酸水素カリウム溶液でｐＨを約３に調節し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、６０ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ｍ１－２を得、当該化合物を、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ５．０９ － ５．０７ （ｄ， Ｊ ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２８ － ４．２６ （ｍ， １Ｈ）， １．６３ － １．５３ （ｍ， ２Ｈ）， １．３２ （ｓ， ９Ｈ）， ０．７０ － ０．５８ （ｍ， １Ｈ）， ０．４２ － ０．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０５ － －０．０５ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ｍ１－１（１．１ｇ、８．５２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解させ、水酸化ナトリウム（４０８．８０ｍｇ、１０．２２ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を加え、次に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．２３ｇ、１０．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液に３０ｍＬの水を加え、飽和硫酸水素カリウム溶液でｐＨを約３に調節し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、６０ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ｍ１－２を得、当該化合物を、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ５．０９ － ５．０７ （ｄ， Ｊ ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２８ － ４．２６ （ｍ， １Ｈ）， １．６３ － １．５３ （ｍ， ２Ｈ）， １．３２ （ｓ， ９Ｈ）， ０．７０ － ０．５８ （ｍ， １Ｈ）， ０．４２ － ０．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０５ － －０．０５ （ｍ， ２Ｈ）。
【0114】
下記の中間体は、中間体Ｍ１－２と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0115】
【表1】
【0116】
ステップ２：中間体Ｍ１－３の製造
化合物Ｍ１－２（１．９５ｇ、８．５１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（１．４１ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．７５ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を８０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、順次に水（５０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：０～１０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｍ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３８ － ７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１２ （ｄ， Ｊ ＝２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０ － ４．３６ （ｍ， １Ｈ）， １．６４ － １．６０ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６８ － ０．５６ （ｍ， １Ｈ）， ０．４６ － ０．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０７ － －０．０８ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ｍ１－２（１．９５ｇ、８．５１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（１．４１ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．７５ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を８０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、順次に水（５０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：０～１０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｍ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３８ － ７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１２ （ｄ， Ｊ ＝２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０ － ４．３６ （ｍ， １Ｈ）， １．６４ － １．６０ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６８ － ０．５６ （ｍ， １Ｈ）， ０．４６ － ０．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０７ － －０．０８ （ｍ， ２Ｈ）。
【0117】
下記の中間体は、中間体Ｍ１－３と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0118】
【表2】
【0119】
ステップ３：中間体Ｍ１－４の製造
化合物Ｍ１－３（２．４ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸－酢酸エチル溶液（１０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で０．５時間反応し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ｍ１－４の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．３２ － ７．１９ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１９ － ５．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８２ － １．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７０ － ０．５５ （ｍ， １Ｈ）， ０．４７ － ０．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０８ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ｍ１－３（２．４ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸－酢酸エチル溶液（１０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で０．５時間反応し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ｍ１－４の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．３２ － ７．１９ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１９ － ５．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８２ － １．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７０ － ０．５５ （ｍ， １Ｈ）， ０．４７ － ０．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０８ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）。
【0120】
下記の中間体は、中間体Ｍ１－４と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0121】
【表3】
【0122】
ステップ４：中間体Ｍ１－５の製造
化合物Ｍ１－４の塩酸塩（１．９ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ－Ｄ－フェニルアラニン（１．９７ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（２．８８ｇ、２２．２９ｍｍｏｌ、３．８８ｍＬ）及びＨＡＴＵ（４．２４ｇ、１１．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌した。反応溶液を８０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（４０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～２５％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して、化合物Ｍ１－５を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４４ － ７．２１ （ｍ， １０Ｈ）， ６．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１７ （ｑ， Ｊ ＝ １２．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１０ － ５．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２ － ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ３．１３ － ３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９ － １．７０ （ｍ， １Ｈ）， １．６８ － １．５６ （ｍ， １Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６３ － ０．４９ （ｍ， １Ｈ）， ０．４６ － ０．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０７ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ｍ１－４の塩酸塩（１．９ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ－Ｄ－フェニルアラニン（１．９７ｇ、７．４３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（２．８８ｇ、２２．２９ｍｍｏｌ、３．８８ｍＬ）及びＨＡＴＵ（４．２４ｇ、１１．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌した。反応溶液を８０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（４０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～２５％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して、化合物Ｍ１－５を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４４ － ７．２１ （ｍ， １０Ｈ）， ６．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１７ （ｑ， Ｊ ＝ １２．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１０ － ５．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２ － ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ３．１３ － ３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９ － １．７０ （ｍ， １Ｈ）， １．６８ － １．５６ （ｍ， １Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６３ － ０．４９ （ｍ， １Ｈ）， ０．４６ － ０．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０７ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）。
【0123】
下記の中間体は、中間体Ｍ１－５と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0124】
【表4】
【0125】
ステップ５：中間体Ｍ１の製造
化合物Ｍ１－５（３．４ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸－酢酸エチル溶液（３０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１時間反応を続けた。減圧して有機溶媒を除去して、化合物Ｍ１の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．３５ － ７．１１ （ｍ， １０Ｈ）， ５．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４９ － ４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ － ４．００ （ｍ， １Ｈ）， ３．１６ － ３．１２ （ｍ， １Ｈ）， ２．８７ － ２．８４ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ － １．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７３ － １．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７９ － ０．６０ （ｍ， １Ｈ）， ０．４３ － ０．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０９ － －０．１２ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ｍ１－５（３．４ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸－酢酸エチル溶液（３０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１時間反応を続けた。減圧して有機溶媒を除去して、化合物Ｍ１の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．３５ － ７．１１ （ｍ， １０Ｈ）， ５．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４９ － ４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ － ４．００ （ｍ， １Ｈ）， ３．１６ － ３．１２ （ｍ， １Ｈ）， ２．８７ － ２．８４ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ － １．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．７３ － １．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．７９ － ０．６０ （ｍ， １Ｈ）， ０．４３ － ０．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０９ － －０．１２ （ｍ， ２Ｈ）。
【0126】
下記の中間体は、中間体Ｍ１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0127】
【表5】
【0128】
参考例３：中間体Ａ１の合成
【0129】
【化51】
【0130】
ステップ１：中間体Ａ１－１の製造
化合物Ｍ１の塩酸塩（１．２ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に懸濁し、トリエチルアミン（９９４．０８ｍｇ、９．８２ｍｍｏｌ）を加え、塩化クロロアセチル（５５４．７７ｍｇ、４．９１ｍｍｏｌ、３９０．６８μＬ）をゆっくりと滴下し、反応溶液を２０℃で１８時間撹拌し続けた。反応溶液を５０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、順次に３０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液及び３０ｍＬ飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ａ１－１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．５１ － ７．３８ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３５ － ７．２４ （ｍ， ５Ｈ）， ６．３０ （ｄ， Ｊ ＝７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３８ － ５．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８１ － ４．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２９ － ３．０２ （ｍ， ３Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｍ， ２Ｈ）， １．４８ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．６６ － ０．５０ （ｍ， １Ｈ）， ０．４５ － ０．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０８ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝４４３．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ｍ１の塩酸塩（１．２ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に懸濁し、トリエチルアミン（９９４．０８ｍｇ、９．８２ｍｍｏｌ）を加え、塩化クロロアセチル（５５４．７７ｍｇ、４．９１ｍｍｏｌ、３９０．６８μＬ）をゆっくりと滴下し、反応溶液を２０℃で１８時間撹拌し続けた。反応溶液を５０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、順次に３０ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液及び３０ｍＬ飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ａ１－１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．５１ － ７．３８ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３５ － ７．２４ （ｍ， ５Ｈ）， ６．３０ （ｄ， Ｊ ＝７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３８ － ５．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８１ － ４．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２９ － ３．０２ （ｍ， ３Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｍ， ２Ｈ）， １．４８ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．６６ － ０．５０ （ｍ， １Ｈ）， ０．４５ － ０．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０８ － －０．０９ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝４４３．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0131】
下記の中間体は、中間体Ａ１－１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0132】
【表6】
【0133】
ステップ２：中間体Ａ１－２の製造
化合物Ａ１－１（１．４２ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、化合物（Ｒ）－（＋）－β－メチルフェネチルアミン（６６０．４１ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１．０６ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．３３ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を６０℃で１６時間撹拌し続けた。冷却させ、減圧して有機溶媒を除去し、３０ｍＬの水を加え、ジクロロメタン（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ａ１－２を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝５４２．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ａ１－１（１．４２ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、化合物（Ｒ）－（＋）－β－メチルフェネチルアミン（６６０．４１ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１．０６ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．３３ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を６０℃で１６時間撹拌し続けた。冷却させ、減圧して有機溶媒を除去し、３０ｍＬの水を加え、ジクロロメタン（３０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物化合物Ａ１－２を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝５４２．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0134】
下記の中間体は、中間体Ａ１－２と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0135】
【表7】
【0136】
ステップ３：中間体Ａ１－３の製造
化合物Ａ１－２（１．７ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１．２２ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ）及び二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．３７ｇ、６．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～３０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ａ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４６ － ７．２８ （ｍ， １０Ｈ）， ７．２５ － ７．１８ （ｍ， ５Ｈ）， ６．７７ － ６．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２５ － ５．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７７ － ４．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９０ － ３．０６ （ｍ， ７Ｈ）， １．７５ － １．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．６６ － ０．４８ （ｍ， １Ｈ）， ０．４１ － ０．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０９ － －０．１１ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ａ１－２（１．７ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１．２２ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ）及び二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．３７ｇ、６．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～３０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ａ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４６ － ７．２８ （ｍ， １０Ｈ）， ７．２５ － ７．１８ （ｍ， ５Ｈ）， ６．７７ － ６．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２５ － ５．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７７ － ４．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９０ － ３．０６ （ｍ， ７Ｈ）， １．７５ － １．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．６６ － ０．４８ （ｍ， １Ｈ）， ０．４１ － ０．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０９ － －０．１１ （ｍ， ２Ｈ）。
【0137】
下記の中間体は、中間体Ａ１－３と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0138】
【表8】
【0139】
ステップ４：中間体Ａ１の製造
化合物Ａ１－３（１．０５ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、１０％のパラジウム／炭素（１５０ｍｇ、１５５．３３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で、１５ｐｓｉの水素ガス圧力で１５時間撹拌を続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ａ１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３０ － ７．０９ （ｍ， １０Ｈ）， ７．００ － ６．６４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８０ － ４．６６ （ｍ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．８３ － ３．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５５ － ２．８３ （ｍ， ５Ｈ）， １．７８ － １．５２ （ｍ， ２Ｈ）， １．３６ （ｓ， ９Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．６０ － ０．５２ （ｍ， １Ｈ）， ０．４０ － ０．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０５ － －０．０５ （ｍ， ２Ｈ）。
化合物Ａ１－３（１．０５ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、１０％のパラジウム／炭素（１５０ｍｇ、１５５．３３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で、１５ｐｓｉの水素ガス圧力で１５時間撹拌を続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ａ１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３０ － ７．０９ （ｍ， １０Ｈ）， ７．００ － ６．６４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８０ － ４．６６ （ｍ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．８３ － ３．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５５ － ２．８３ （ｍ， ５Ｈ）， １．７８ － １．５２ （ｍ， ２Ｈ）， １．３６ （ｓ， ９Ｈ）， １．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．６０ － ０．５２ （ｍ， １Ｈ）， ０．４０ － ０．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ０．０５ － －０．０５ （ｍ， ２Ｈ）。
【0140】
下記の中間体は、中間体Ａ１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0141】
【表9】
【0142】
参考例５：中間体Ｂ１の合成
【0143】
【化52】
【0144】
ステップ１：中間体Ｂ１－１の製造
化合物Ａ１（１．９ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）及び化合物Ａ１－Ａ（１．１６ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１．３４ｇ、１０．３３ｍｍｏｌ、１．８０ｍＬ）及びＨＡＴＵ（１．９６ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。１５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、有機相を水（６０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（８０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～４０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｂ１－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝８７０．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ａ１（１．９ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）及び化合物Ａ１－Ａ（１．１６ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１．３４ｇ、１０．３３ｍｍｏｌ、１．８０ｍＬ）及びＨＡＴＵ（１．９６ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。１５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、有機相を水（６０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（８０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０～４０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｂ１－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝８７０．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0145】
ステップ２：中間体Ｂ１の製造
化合物Ｂ１－１（１．４ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解させ、パラジウム炭素（０．２ｇ、１０％の純度）を加え、反応溶液を２０℃で、１５ｐｓｉの水素ガスの圧力下で１５時間反応し続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ｂ１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝８０２．６ ［Ｍ＋Ｎａ］＋。
化合物Ｂ１－１（１．４ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解させ、パラジウム炭素（０．２ｇ、１０％の純度）を加え、反応溶液を２０℃で、１５ｐｓｉの水素ガスの圧力下で１５時間反応し続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物Ｂ１を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝８０２．６ ［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【0146】
参考例６：中間体Ｄ１の合成
【0147】
【化53】
【0148】
ステップ１：中間体Ｄ１－２の製造
化合物Ｄ１－１（３ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（１．３１ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．６３ｇ、９．５１ｍｍｏｌ、１．１３ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液に５０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（６０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、飽和食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：５～２５％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｄ１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３３ － ７．１９ （ｍ， １０Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９５ （ｓ， １Ｈ）， ３．７５ － ３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０６ － ３．００ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ － １．９２ （ｍ， ４Ｈ）， １．３７ （ｓ， ９Ｈ）。
化合物Ｄ１－１（３ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（１．３１ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．６３ｇ、９．５１ｍｍｏｌ、１．１３ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液に５０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（６０ｍＬ×２）で抽出し、抽出した後の有機相を合わせて、飽和食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：５～２５％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｄ１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３３ － ７．１９ （ｍ， １０Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９５ （ｓ， １Ｈ）， ３．７５ － ３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０６ － ３．００ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ － １．９２ （ｍ， ４Ｈ）， １．３７ （ｓ， ９Ｈ）。
【0149】
ステップ２：中間体Ｄ１－３の製造
化合物Ｄ１－２（３．７ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸／酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去して、化合物Ｄ１－３の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３７ - ７．３１ （ｍ， １０Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．３７ － ３．３０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２７ － ３．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４０ － ２．２１ （ｍ， ４Ｈ）。
化合物Ｄ１－２（３．７ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸／酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去して、化合物Ｄ１－３の塩酸塩を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．３７ - ７．３１ （ｍ， １０Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．３７ － ３．３０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２７ － ３．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４０ － ２．２１ （ｍ， ４Ｈ）。
【0150】
ステップ３：中間体Ｄ１－５の製造
化合物Ｄ１－３の塩酸塩（３ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）及び化合物Ｄ１－４（３．４７ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（２．８７ｇ、２２．２３ｍｍｏｌ、３．８７ｍＬ）及びＨＡＴＵ（４．２３ｇ、１１．１１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１４時間撹拌を続けた。反応溶液を１００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（５０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（６０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１５～３０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｄ１－５を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６７ － ７．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４７ － ７．２８ （ｍ， １４Ｈ）， ５．８４ － ５．６８ （ｍ， １Ｈ）， ５．２６ － ５．０１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．７４ － ４．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２７ － ４．１９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０３ － ３．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５１ － ３．２５ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０ － ３．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３０ － ２．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ - １．９６ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９ － １．６５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６０ － １．３０ （ｍ， １４Ｈ）。
化合物Ｄ１－３の塩酸塩（３ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）及び化合物Ｄ１－４（３．４７ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（２．８７ｇ、２２．２３ｍｍｏｌ、３．８７ｍＬ）及びＨＡＴＵ（４．２３ｇ、１１．１１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１４時間撹拌を続けた。反応溶液を１００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（５０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（６０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：１５～３０％の酢酸エチル／石油エーテル）で分離・精製して化合物Ｄ１－５を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６７ － ７．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４７ － ７．２８ （ｍ， １４Ｈ）， ５．８４ － ５．６８ （ｍ， １Ｈ）， ５．２６ － ５．０１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．７４ － ４．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２７ － ４．１９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０３ － ３．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５１ － ３．２５ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０ － ３．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３０ － ２．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ - １．９６ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９ － １．６５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６０ － １．３０ （ｍ， １４Ｈ）。
【0151】
下記の中間体は、中間体Ｄ１－５と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0152】
【表10】
【0153】
ステップ４：中間体Ｄ１の製造
化合物Ｄ１－５（３ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、ピペリジン（３．１２ｇ、３６．６３ｍｍｏｌ、３．６２ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌を続けた。減圧して有機溶媒を除去し、３０ｍＬのアセトニトリルを加えてスラリー化させ、濾過し、濾液をスピン乾燥させ、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：３５％の酢酸エチル／石油エーテル～１０％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物Ｄ１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４１ － ７．２９ （ｍ， １０Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６２ － ４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５ － ３．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４３ － ３．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２９ － ２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５ － １．８７ （ｍ， ２Ｈ）， １．６８ － １．５４ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４ － １．３９ （ｍ， １５Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝５９７．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ｄ１－５（３ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解させ、ピペリジン（３．１２ｇ、３６．６３ｍｍｏｌ、３．６２ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌を続けた。減圧して有機溶媒を除去し、３０ｍＬのアセトニトリルを加えてスラリー化させ、濾過し、濾液をスピン乾燥させ、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：３５％の酢酸エチル／石油エーテル～１０％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物Ｄ１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４１ － ７．２９ （ｍ， １０Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６２ － ４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５ － ３．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４３ － ３．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２９ － ２．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５ － １．８７ （ｍ， ２Ｈ）， １．６８ － １．５４ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４ － １．３９ （ｍ， １５Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝５９７．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0154】
下記の中間体は、中間体Ｄ１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0155】
【表11】
【0156】
参考例８：中間体Ｅ１の合成
【0157】
【化54】
【0158】
ステップ１：中間体Ｅ１－２の製造
化合物Ｅ１－１（２ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）、ピリジン（８８０．００ｍｇ、１１．１３ｍｍｏｌ、８９７．９６μＬ）をテトラヒドロフラン（４５ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、０℃でクロロギ酸フェニル（１．５６ｇ、９．９９ｍｍｏｌ、１．２５ｍＬ）を滴下し、添加完了後、２０℃で２時間反応を続けた。反応完了後、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物を酢酸エチルで希釈し、次に、水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して化合物Ｅ１－２を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝３０１．９［Ｍ－５６＋Ｎａ］＋。
化合物Ｅ１－１（２ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）、ピリジン（８８０．００ｍｇ、１１．１３ｍｍｏｌ、８９７．９６μＬ）をテトラヒドロフラン（４５ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、０℃でクロロギ酸フェニル（１．５６ｇ、９．９９ｍｍｏｌ、１．２５ｍＬ）を滴下し、添加完了後、２０℃で２時間反応を続けた。反応完了後、減圧して有機溶媒を除去し、粗生成物を酢酸エチルで希釈し、次に、水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して化合物Ｅ１－２を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝３０１．９［Ｍ－５６＋Ｎａ］＋。
【0159】
ステップ２：中間体Ｅ１－３の製造
化合物Ｅ１－２（０．６ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、メチルアミン溶液（２Ｍ、８４２．７４μＬ）を加え、添加完了後、５０℃に昇温させて１５時間反応し続けた。冷却させ、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で精製して化合物Ｅ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ４．２６ － ４．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０３ － ３．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７５ － ３．６１ （ｍ， １Ｈ）， ２．７９ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ １２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．９１ － １．８０ （ｍ， ２Ｈ）， １．３８ （ｓ， ９Ｈ）。
ステップ２：中間体Ｅ１の製造
化合物Ｅ１－３（２４９．０３ｍｇ、９６７．７３μｍｏｌ）を酢酸エチル（３ｍＬ）に溶解させ、塩酸－酢酸エチル溶液（４Ｍ、２．４２ｍＬ）を加え、添加完了後、２０℃で１時間反応し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して化合物Ｅ１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ３．８４ － ３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４１ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １３．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１７ － ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１２ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７５ － １．６２ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝１５８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ｅ１－２（０．６ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、メチルアミン溶液（２Ｍ、８４２．７４μＬ）を加え、添加完了後、５０℃に昇温させて１５時間反応し続けた。冷却させ、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で精製して化合物Ｅ１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ４．２６ － ４．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０３ － ３．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７５ － ３．６１ （ｍ， １Ｈ）， ２．７９ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ １２．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．９１ － １．８０ （ｍ， ２Ｈ）， １．３８ （ｓ， ９Ｈ）。
ステップ２：中間体Ｅ１の製造
化合物Ｅ１－３（２４９．０３ｍｇ、９６７．７３μｍｏｌ）を酢酸エチル（３ｍＬ）に溶解させ、塩酸－酢酸エチル溶液（４Ｍ、２．４２ｍＬ）を加え、添加完了後、２０℃で１時間反応し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）で精製して化合物Ｅ１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ３．８４ － ３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４１ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １３．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１７ － ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１２ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７５ － １．６２ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝１５８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0160】
実施例１：化合物１の製造
【0161】
【化55】
【0162】
ステップ１：中間体１－１の製造
化合物Ａ１（２２０ｍｇ、３９８．７９μｍｏｌ）及び化合物Ｄ１（２３７．９６ｍｇ、３９８．７９μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１５４．６２ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、２０８．３８μＬ）及びＨＡＴＵ（２２７．４５ｍｇ、５９８．１８μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌し続けた。反応溶液を６０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（３０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（４０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：５０％の酢酸エチル／石油エーテル～５％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物１－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝１１３０．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ａ１（２２０ｍｇ、３９８．７９μｍｏｌ）及び化合物Ｄ１（２３７．９６ｍｇ、３９８．７９μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（１５４．６２ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、２０８．３８μＬ）及びＨＡＴＵ（２２７．４５ｍｇ、５９８．１８μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で１６時間撹拌し続けた。反応溶液を６０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、水（３０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（４０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：５０％の酢酸エチル／石油エーテル～５％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物１－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝１１３０．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0163】
下記の中間体は、中間体１－１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0164】
【表12】
【0165】
ステップ２：中間体１－２の製造
化合物１－１（２００ｍｇ、１７６．９３μｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）に溶解させ、１０％のパラジウム／炭素（２０ｍｇ、１７６．９３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で、１５Ｐｓｉ水素ガス圧力で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物１－２を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝９０６．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物１－１（２００ｍｇ、１７６．９３μｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）に溶解させ、１０％のパラジウム／炭素（２０ｍｇ、１７６．９３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を２０℃で、１５Ｐｓｉ水素ガス圧力で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を珪藻土で濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、化合物１－２を得、当該化合物は、更に精製することなく、次のステップの反応で直接に使用した。ＭＳ ｍ／ｚ ＝９０６．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0166】
下記の中間体は、中間体１－２と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0167】
【表13】
【0168】
ステップ３：化合物１の製造
化合物１－２（１５５ｍｇ、１７１．０６μｍｏｌ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸／酢酸エチル（５ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で０．５時間撹拌し続けた。減圧して大部分の溶媒を除去し、２０ｍＬの酢酸エチルを加えてスラリー化させ、濾過し、得られたケーキ粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０５％の塩酸）－アセトニトリル］；Ｂ（アセトニトリル）％：８％～３８％、９分）で分離・精製して化合物１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．２６ － ７．０８ （ｍ， ９Ｈ）， ７．０７ － ６．９７ （ｍ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３１ － ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０８ － ３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０ － ３．４９ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２５ － ３．２４ （ｍ， １Ｈ）， ３．１２ － ２．８８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８６ － ２．６８ （ｍ， ３Ｈ）， ２．２５ － ２．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ － １．５０ （ｍ， ７Ｈ）， １．４９ － １．２５ （ｍ， ４Ｈ）， １．２４ － １．１５ （ｍ， ３Ｈ）， ０．７７ － ０．５６ （ｍ， １Ｈ）， ０．４９ － ０．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．１２ － －０．１０ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝７０６．４ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋。
化合物１－２（１５５ｍｇ、１７１．０６μｍｏｌ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解させ、４Ｍの塩酸／酢酸エチル（５ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で０．５時間撹拌し続けた。減圧して大部分の溶媒を除去し、２０ｍＬの酢酸エチルを加えてスラリー化させ、濾過し、得られたケーキ粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０５％の塩酸）－アセトニトリル］；Ｂ（アセトニトリル）％：８％～３８％、９分）で分離・精製して化合物１の塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ７．２６ － ７．０８ （ｍ， ９Ｈ）， ７．０７ － ６．９７ （ｍ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．５０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３１ － ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０８ － ３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０ － ３．４９ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２５ － ３．２４ （ｍ， １Ｈ）， ３．１２ － ２．８８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８６ － ２．６８ （ｍ， ３Ｈ）， ２．２５ － ２．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３ － １．５０ （ｍ， ７Ｈ）， １．４９ － １．２５ （ｍ， ４Ｈ）， １．２４ － １．１５ （ｍ， ３Ｈ）， ０．７７ － ０．５６ （ｍ， １Ｈ）， ０．４９ － ０．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ０．１２ － －０．１０ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝７０６．４ ［Ｍ＋Ｈ］ ＋。
【0169】
下記の化合物は、化合物１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0170】
【表14】
【0171】
実施例３：化合物３の製造
【0172】
【化56】
【0173】
ステップ１：中間体３－１の製造
化合物Ｂ１（０．２ｇ、２５６．４２μｍｏｌ）、化合物Ｅ１の塩酸塩（７０．８１ｍｇ、３０７．７１μｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＨＡＴＵ（１４６．２５ｍｇ、３８４．６４μｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（９９．４２ｍｇ、７６９．２７μｍｏｌ、１３３．９９μＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、有機相を水（３０ｍＬ×２）、飽和食塩水（３０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：０～５％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物３－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝９１９．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物Ｂ１（０．２ｇ、２５６．４２μｍｏｌ）、化合物Ｅ１の塩酸塩（７０．８１ｍｇ、３０７．７１μｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、ＨＡＴＵ（１４６．２５ｍｇ、３８４．６４μｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（９９．４２ｍｇ、７６９．２７μｍｏｌ、１３３．９９μＬ）を加え、反応溶液を２０℃で１５時間撹拌し続けた。反応溶液を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、有機相を水（３０ｍＬ×２）、飽和食塩水（３０ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：０～５％のメタノール／ジクロロメタン）で分離・精製して化合物３－１を得た。ＭＳ ｍ／ｚ ＝９１９．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0174】
下記の中間体は、中間体３－１と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0175】
【表15】
【0176】
ステップ２：化合物３の製造
化合物３－１（０．１９ｇ、２０６．７１μｍｏｌ）を酢酸エチル（４ｍＬ）に溶解させ、塩酸－酢酸エチル溶液（４Ｍ、２ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で２時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０５％のＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ（アセトニトリル）％：１５％～４５％、９分）で分離・精製して化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＭＥＴＨＡＮＯＬ－ｄ４） δ： ７．４１ － ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３３ － ７．２６ （ｍ， ７Ｈ）， ７．２０ － ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７７ － ４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０８ － ３．９４ （ｍ， １Ｈ）， ３．９１ － ３．８２ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１ － ３．７４ （ｍ， １Ｈ）， ３．６８ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２４ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１８ － ３．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．０１ － ２．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０３ － １．８８ （ｍ， ２Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｍ， ６Ｈ）， １．５８ （ｔｄ， Ｊ ＝ ６．８， １４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４７ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， １．３８ － １．３２ （ｍ， ４Ｈ）， ０．７９ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．５６ － ０．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ０．２３ － ０．１０ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝７１９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物３－１（０．１９ｇ、２０６．７１μｍｏｌ）を酢酸エチル（４ｍＬ）に溶解させ、塩酸－酢酸エチル溶液（４Ｍ、２ｍＬ）を加え、反応溶液を２０℃で２時間撹拌し続けた。減圧して有機溶媒を除去し、得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０５％のＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ（アセトニトリル）％：１５％～４５％、９分）で分離・精製して化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＭＥＴＨＡＮＯＬ－ｄ４） δ： ７．４１ － ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３３ － ７．２６ （ｍ， ７Ｈ）， ７．２０ － ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７７ － ４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０８ － ３．９４ （ｍ， １Ｈ）， ３．９１ － ３．８２ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１ － ３．７４ （ｍ， １Ｈ）， ３．６８ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２４ （ｂｒ ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１８ － ３．０５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．０１ － ２．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７３ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０３ － １．８８ （ｍ， ２Ｈ）， １．８３ － １．６７ （ｍ， ６Ｈ）， １．５８ （ｔｄ， Ｊ ＝ ６．８， １４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４７ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， １．３８ － １．３２ （ｍ， ４Ｈ）， ０．７９ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．５６ － ０．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ０．２３ － ０．１０ （ｍ， ２Ｈ）；ＭＳ ｍ／ｚ ＝７１９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0177】
以下化合物使用与化合物３と同様の方法を使用して合成して得られた。
【0178】
【表16】
【0179】
実験例１：Ｋａｐｐａ受容体ｃＡＭＰ試験
溶液及び緩衝液：
実験緩衝液：１×ＨＢＳＳ（＋／＋）（ＳＩＧＭＡ＃Ｈ１３８７）＋２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＬＯＮＺＡ＃１７－７３７Ｅ）
刺激緩衝液（ＳＴＢ）：２００μＭのＩＢＭＸ（ＳＩＧＭＡ＃Ｉ７０１８）及び３μＭのＮＫＨ４７７（ＳＩＧＭＡ＃Ｎ３２９０）実験緩衝液
実験方法及びステップ：
化合物の製造
ＤＭＳＯ（Ａｍｒｅｓｃｏ＃０２３１）で化合物粉末を溶解させ、化合物溶液の濃度は１０ｍＭであった。１μＬの試験化合物を取り、４９μＬのＤＭＳＯを加え、２００μＭの溶液に希釈した。
溶液及び緩衝液：
実験緩衝液：１×ＨＢＳＳ（＋／＋）（ＳＩＧＭＡ＃Ｈ１３８７）＋２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＬＯＮＺＡ＃１７－７３７Ｅ）
刺激緩衝液（ＳＴＢ）：２００μＭのＩＢＭＸ（ＳＩＧＭＡ＃Ｉ７０１８）及び３μＭのＮＫＨ４７７（ＳＩＧＭＡ＃Ｎ３２９０）実験緩衝液
実験方法及びステップ：
化合物の製造
ＤＭＳＯ（Ａｍｒｅｓｃｏ＃０２３１）で化合物粉末を溶解させ、化合物溶液の濃度は１０ｍＭであった。１μＬの試験化合物を取り、４９μＬのＤＭＳＯを加え、２００μＭの溶液に希釈した。
【0180】
ＬＤＶ３８４ウェルプレートを取り、前記のステップで希釈した化合物溶液をそれぞれウェルＡ１～Ｈ１に順次に加え、事前に準備した２００μＭのＵ－５０４８８（Ｔｏｃｒｉｓ＃０４９５／２５）をウェルＰ１に加え、Ａ２～Ａ１１、Ｂ２～Ｈ２２、Ｐ２～Ｐ１１の各ウェルにそれぞれ１０．８μＬのＤＭＳＯを加え、１０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離した。
【0181】
化合物をｂｒａｖｏで連続勾配希釈し、前記のステップで製造したＬＤＶプレートの１列目を開始濃度とし、毎回５μＬを後の列に吸引し、均一にピペッティングした。
希釈完了後、ウェルＡ２４に１０μＬの２００μＭのＵ－５０４８８をＨＰＥ（１００％の阻害率活性）として加え、ウェルＰ２４に１０μＬのＤＭＳＯをＺＰＥ（０％の阻害率活性）として加え、１０００ｒｐｍで遠心分離した。
希釈完了後、ウェルＡ２４に１０μＬの２００μＭのＵ－５０４８８をＨＰＥ（１００％の阻害率活性）として加え、ウェルＰ２４に１０μＬのＤＭＳＯをＺＰＥ（０％の阻害率活性）として加え、１０００ｒｐｍで遠心分離した。
【0182】
Ｅｃｈｏ５５０を使用して実験レイアウトに従い、前のステップで希釈した化合物溶液を実験プレートｃｏｒｎｉｎｇ３８２４に移して、５０ｎｌ／ウェルであった。
実験ステップ
－８０℃の冷蔵庫から凍結保存したＫＯＲ ｃＡＭＰ細胞を取り出し、３７℃のウォーターバスで解凍した。
実験ステップ
－８０℃の冷蔵庫から凍結保存したＫＯＲ ｃＡＭＰ細胞を取り出し、３７℃のウォーターバスで解凍した。
【0183】
解凍完了後、チューブ内の細胞を１５ｍＬの遠心管に吸引し、４ｍＬの実験緩衝液を加えた。
１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を捨て、５ｍＬの実験緩衝液を加え、ピペットで軽くピペッティングして均一に吹き飛ばして混合した。
１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を捨て、５ｍＬの実験緩衝液を加え、ピペットで軽くピペッティングして均一に吹き飛ばして混合した。
【0184】
細胞カウンターで計数し、細胞密度を１．５×１０６細胞／ｍＬに調節した。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用して、化合物を含む実験プレートにＳＴＢを５μＬ／ウェルで加えた。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用して、化合物を含む実験プレートにＳＴＢを５μＬ／ウェルで加えた。
【0185】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用して、化合物を含む実験プレートに製造した細胞懸濁液を５μＬ／ウェルで加えた。
３００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、３７℃のインキュベーターで４０分間培養した。
３００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、３７℃のインキュベーターで４０分間培養した。
【0186】
ｃＡＭＰ標準曲線を作成し、事前にサブパックして凍結保存した２８４８ｎＭのｃＡＭＰ溶液を解凍し、２８４８ｎＭを最高濃度ポイントとして合計１６濃度点で４倍連続勾配希釈した。
希釈したｃＡＭＰ溶液をマルチチャンネルピペットで新しいＣｏｒｎｉｎｇ３８２４実験プレートに移して、１０μＬ／ウェルにし、合計３列を繰り返した。
希釈したｃＡＭＰ溶液をマルチチャンネルピペットで新しいＣｏｒｎｉｎｇ３８２４実験プレートに移して、１０μＬ／ウェルにし、合計３列を繰り返した。
【0187】
４０分間培養した後、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用してＤ２（Ｃｉｓｂｉｏ＃６２ＡＭ４ＰＥＪ）を実験プレート（標準曲線実験プレートを含む）に加え、５μＬ／ウェルにした。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用してＡｃ（Ｃｉｓｂｉｏ＃６２ＡＭ４ＰＥＪ）を実験プレート（標準曲線実験プレートを含む）に加え、５μＬ／ウェルにし、室温で６０分間培養した。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを使用してＡｃ（Ｃｉｓｂｉｏ＃６２ＡＭ４ＰＥＪ）を実験プレート（標準曲線実験プレートを含む）に加え、５μＬ／ウェルにし、室温で６０分間培養した。
【0188】
Ｅｎｖｉｓｉｏｎで実験プレートを読み取った。
実験結果：
実験結果は表１に示された通りである。
実験結果：
実験結果は表１に示された通りである。
【0189】
【表17】
【0190】
結果により、本発明の化合物は有意なＫａｐｐａ受容体アゴニスト作用を有していることが示めされた。
実験例２：血漿タンパク質結合率（ＰＰＢ）試験
１．実験目的
ヒト、ＳＤラットの血漿における試験化合物のタンパク質結合率を測定することである。
実験例２：血漿タンパク質結合率（ＰＰＢ）試験
１．実験目的
ヒト、ＳＤラットの血漿における試験化合物のタンパク質結合率を測定することである。
【0191】
２．実験方法
２．１ 血漿の製造
冷凍保存した血漿を冷たい水道水で解凍した後、３２２０×ｇで５分間遠心分離して懸濁物質及び沈殿物を除去し、血漿のｐＨが測定して、ｐＨが７．０～８．０の血漿のみを実験に使用した。
２．１ 血漿の製造
冷凍保存した血漿を冷たい水道水で解凍した後、３２２０×ｇで５分間遠心分離して懸濁物質及び沈殿物を除去し、血漿のｐＨが測定して、ｐＨが７．０～８．０の血漿のみを実験に使用した。
【0192】
２．２溶液の製造
【0193】
【表18】
【0194】
２．３ 実験操作
実験では、９６ウェル平衡透析プレート（ＨＴＤｉａｌｙｓｉｓデバイス）を使用して、試験化合物及びと対照化合物の血漿タンパク質結合率を測定した。実験を開始する前に、透析膜は説明書に従って前処理され、その後必要に応じて透析装置を組み立てた。ヒト、ＳＤラットのブランク血漿（血漿はＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから購入した）を採取し、試験化合物の作業溶液又はワルファリン作業溶液を加えて、血漿試料における化合物及びワルファリンの最終濃度をいずれも２μＭにした。試料を十分に混合した。５０μＬの試験化合物及びワルファリン血漿試料を試料受けプレートに移し、対応する体積の対応ブランク血漿又は緩衝液を直ちに加え、各試料ウェルの最終体積は１００μＬであり、血漿：透析緩衝液の体積比は１：１であり、試験化合物及び対照化合物のこれらのＴ０試料に停止溶液を加えた。プレートを密封し、８００ｒｐｍで１０分間振とうした。次に、これらのＴ０試料を他の透析試料と一緒に２～８℃で保存し、他の透析完了試料とともに後処理を実行し、１５０μＬの試験化合物及びワルファリン血漿試料を各透析ウェルの投与端に加え、１５０μＬのブランク透析緩衝液を各透析ウェルの対応する受信端に加えた。次に、透析プレートをガス透過性膜で密封し、加湿した５％のＣＯ２インキュベーターに入れ、３７℃、１００ｒｐｍで４時間振とうして培養した。透析終了時、透析装置の緩衝液側及び血漿（マトリックス）側から５０μｌの試料アリコートを新しい９６ウェルプレート（サンプル収集プレート）に入れた。各試料に等量の相対ブランクマトリックス（緩衝液又は血漿）を加えて、１００μＬの最終体積に達し、各ウェルの血漿（マトリックス）：透析緩衝液の体積比は１：１（ｖ：ｖ）であった。すべての試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のためにタンパク質沈殿で更に処理された。また、下記の式で化合物の非結合率（Ｕｎｂｏｕｎｄ）％、結合率（Ｂｏｕｎｄ）％、及び回収率（Ｒｅｃｏｖｅｒｙ）％を計算した。
実験では、９６ウェル平衡透析プレート（ＨＴＤｉａｌｙｓｉｓデバイス）を使用して、試験化合物及びと対照化合物の血漿タンパク質結合率を測定した。実験を開始する前に、透析膜は説明書に従って前処理され、その後必要に応じて透析装置を組み立てた。ヒト、ＳＤラットのブランク血漿（血漿はＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから購入した）を採取し、試験化合物の作業溶液又はワルファリン作業溶液を加えて、血漿試料における化合物及びワルファリンの最終濃度をいずれも２μＭにした。試料を十分に混合した。５０μＬの試験化合物及びワルファリン血漿試料を試料受けプレートに移し、対応する体積の対応ブランク血漿又は緩衝液を直ちに加え、各試料ウェルの最終体積は１００μＬであり、血漿：透析緩衝液の体積比は１：１であり、試験化合物及び対照化合物のこれらのＴ０試料に停止溶液を加えた。プレートを密封し、８００ｒｐｍで１０分間振とうした。次に、これらのＴ０試料を他の透析試料と一緒に２～８℃で保存し、他の透析完了試料とともに後処理を実行し、１５０μＬの試験化合物及びワルファリン血漿試料を各透析ウェルの投与端に加え、１５０μＬのブランク透析緩衝液を各透析ウェルの対応する受信端に加えた。次に、透析プレートをガス透過性膜で密封し、加湿した５％のＣＯ２インキュベーターに入れ、３７℃、１００ｒｐｍで４時間振とうして培養した。透析終了時、透析装置の緩衝液側及び血漿（マトリックス）側から５０μｌの試料アリコートを新しい９６ウェルプレート（サンプル収集プレート）に入れた。各試料に等量の相対ブランクマトリックス（緩衝液又は血漿）を加えて、１００μＬの最終体積に達し、各ウェルの血漿（マトリックス）：透析緩衝液の体積比は１：１（ｖ：ｖ）であった。すべての試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のためにタンパク質沈殿で更に処理された。また、下記の式で化合物の非結合率（Ｕｎｂｏｕｎｄ）％、結合率（Ｂｏｕｎｄ）％、及び回収率（Ｒｅｃｏｖｅｒｙ）％を計算した。
【0195】
％Ｕｎｂｏｕｎｄ＝１００×ＦＣ／ＴＣ、
％Ｂｏｕｎｄ＝１００－％Ｕｎｂｏｕｎｄ、
％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ＝１００×（ＦＣ＋ＴＣ）／Ｔ０。
％Ｂｏｕｎｄ＝１００－％Ｕｎｂｏｕｎｄ、
％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ＝１００×（ＦＣ＋ＴＣ）／Ｔ０。
【0196】
ここで、ＦＣは透析プレートの緩衝液端の化合物の濃度を表し、ＴＣは透析プレートの血漿端の化合物の濃度を表し、Ｔ０はゼロ時点での血漿試料の化合物の濃度を表す。
３．実験結果
実験結果は表２に示された通りである。
３．実験結果
実験結果は表２に示された通りである。
【0197】
【表19】
【0198】
実験結論：本発明の化合物は、ヒト及びＳＤラットの血漿において非常に高い血漿タンパク質非結合率を示している。
実験例３．シトクロムＰ４５０アイソザイム阻害活性試験
１．実験目的
ヒトシトクロムＰ４５０アイソザイムの異なるサブタイプに対する試験化合物の阻害活性を測定することである。
実験例３．シトクロムＰ４５０アイソザイム阻害活性試験
１．実験目的
ヒトシトクロムＰ４５０アイソザイムの異なるサブタイプに対する試験化合物の阻害活性を測定することである。
【0199】
２．実験方法
試験化合物、標準阻害剤（１００ｘ最終濃度）及び混合基質作業溶液を製造し、－８０℃の冷蔵庫で凍結したミクロソーム（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ社から購入）を取り出して解凍した。２０μＬの試験化合物及び標準阻害剤溶液を対応するウェル位置に加え、同時に、２０μＬの対応する溶媒を阻害のない対照ウェル（ＮＩＣ）及びブランク対照ウェル（Ｂｌａｎｋ）のウェル位置に加え、次に、２０μＬの混合基質溶液を対応するウェル位置に加え、ブランクウェル位を除き（２０μＬのＰＢをＢｌａｎｋウェル位に加える）、ヒト肝臓ミクロソーム溶液を製造し（使用後、日付をマークしてすぐに冷蔵庫に戻す）、その後、１５８μＬのヒト肝臓ミクロソーム溶液をすべてのウェル位置に加え、上記の試料プレートを３７℃のウォーターバスに入れてプレインキュベーションし、次に、コエンザイム因子（ＮＡＤＰＨ）溶液を製造し、１０分後、２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液をすべてのウェルに加え、試料プレートを均一に振とうし、３７℃のウォーターバスで１０分間培養し、対応する時点で、４００μＬの冷たいアセトニトリル溶液（内部標準は２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドとラベタロールである）を加えて反応を終了させ、試料プレートを均一に混合した後、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、タンパク質を沈殿させ、２００μＬの上清を取り１００μＬの水に加え、均一に振とうし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで検出した。
試験化合物、標準阻害剤（１００ｘ最終濃度）及び混合基質作業溶液を製造し、－８０℃の冷蔵庫で凍結したミクロソーム（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ社から購入）を取り出して解凍した。２０μＬの試験化合物及び標準阻害剤溶液を対応するウェル位置に加え、同時に、２０μＬの対応する溶媒を阻害のない対照ウェル（ＮＩＣ）及びブランク対照ウェル（Ｂｌａｎｋ）のウェル位置に加え、次に、２０μＬの混合基質溶液を対応するウェル位置に加え、ブランクウェル位を除き（２０μＬのＰＢをＢｌａｎｋウェル位に加える）、ヒト肝臓ミクロソーム溶液を製造し（使用後、日付をマークしてすぐに冷蔵庫に戻す）、その後、１５８μＬのヒト肝臓ミクロソーム溶液をすべてのウェル位置に加え、上記の試料プレートを３７℃のウォーターバスに入れてプレインキュベーションし、次に、コエンザイム因子（ＮＡＤＰＨ）溶液を製造し、１０分後、２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液をすべてのウェルに加え、試料プレートを均一に振とうし、３７℃のウォーターバスで１０分間培養し、対応する時点で、４００μＬの冷たいアセトニトリル溶液（内部標準は２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドとラベタロールである）を加えて反応を終了させ、試料プレートを均一に混合した後、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、タンパク質を沈殿させ、２００μＬの上清を取り１００μＬの水に加え、均一に振とうし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで検出した。
【0200】
３ 実験結果
実験結果は表３に示された通りである。
実験結果は表３に示された通りである。
【0201】
【表20】
【0202】
実験結論：ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａ４－Ｍに対する本発明の化合物の阻害ＩＣ５０はいずれも５０μＭより大きく、関連する薬物相互作用リスクはない。
【0203】
実験例４：肝細胞における代謝安定性（ＨＭＳ）研究
１．実験目的
ヒト及びラットの肝細胞における試験物質の代謝安定性を測定することである。
１．実験目的
ヒト及びラットの肝細胞における試験物質の代謝安定性を測定することである。
【0204】
２．実験材料
２．１ 試験化合物（１０ｍＭ）、対照品：７－エトキシクマリン（７－Ｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、３０ｍＭ）、７－ヒドロキシクマリン（７－Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、参照品、３０ｍＭ）
２．２ 細胞
２．１ 試験化合物（１０ｍＭ）、対照品：７－エトキシクマリン（７－Ｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、３０ｍＭ）、７－ヒドロキシクマリン（７－Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、参照品、３０ｍＭ）
２．２ 細胞
【0205】
【表21】
【0206】
２．３ 緩衝系：
解凍培地：５％のウシ胎児血清及び３０％のＰｅｒｃｏｌｌ溶液及びその他の補助物質を含む、ウィリアムズ培地Ｅ。
解凍培地：５％のウシ胎児血清及び３０％のＰｅｒｃｏｌｌ溶液及びその他の補助物質を含む、ウィリアムズ培地Ｅ。
【0207】
培養培地：２ｍＭのＬ－グルタミン及び２５ｍＭのヒドロキシエチルピペラジンチオスルホン酸を含む、ウィリアムズ培地Ｅ（フェノールレッドを含まない）。
停止溶液：内部標準として２００ｎｇ／ｍｌのトルブタミド及びラベタロールを含む、アセトニトリル。
停止溶液：内部標準として２００ｎｇ／ｍｌのトルブタミド及びラベタロールを含む、アセトニトリル。
【0208】
希釈液：超純水。
３．実験方法
１）正確な量の陽性対照化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、３０ｍＭの溶液を製造した。
３．実験方法
１）正確な量の陽性対照化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、３０ｍＭの溶液を製造した。
【0209】
２）９６ウェルプレートでＤＭＳＯを使用して、１０ｍｍの試験化合物及び３０ｍｍの陽性対照化合物を１ｍｍ及び３ｍｍに希釈した。
３）１ｍｍの試験化合物及び３ｍｍの陽性対照化合物を、アセトニトリルで１００μＭ及び３００μＭの定量溶液に希釈した。
３）１ｍｍの試験化合物及び３ｍｍの陽性対照化合物を、アセトニトリルで１００μＭ及び３００μＭの定量溶液に希釈した。
【0210】
４）凍結保存した細胞を融解させ、培地で分離・懸濁し、次に、予熱した培地で０．５×１０６細胞／ｍＬに希釈した。
５）９６ウェルプレートに１９８μＬの予熱した細胞懸濁液を加えた。
５）９６ウェルプレートに１９８μＬの予熱した細胞懸濁液を加えた。
【0211】
６）あらかじめ標識した９６ウェルプレートに１００μＬの停止溶液（内部標準として２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドと２００ｎｇ／ｍＬラベタロールを含むアセトニトリル）を移した。
７）９６ウェルプレートの各ウェルに一式二部にして、２μＬの１００μｍの試験化合物又は３００μＭの陽性対照定量溶液を加えた。
７）９６ウェルプレートの各ウェルに一式二部にして、２μＬの１００μｍの試験化合物又は３００μＭの陽性対照定量溶液を加えた。
【0212】
８）Ｔ０試料の場合、試料を均一な懸濁液になるよう約１分間混合した後、直ちに２０μＬの各試料を１００μＬの氷冷停止溶液を含むウェルに移し、次に混合した。
９）９５％の加湿インキュベーターで、すべてのプレートを５％のＣＯ２で３７℃で培養し、約６００ｒｐｍの一定に振とうして反応を開始させた。
９）９５％の加湿インキュベーターで、すべてのプレートを５％のＣＯ２で３７℃で培養し、約６００ｒｐｍの一定に振とうして反応を開始させた。
【0213】
１０）１５、３０、６０及び９０分で、試料を混合した後、各時点で２０μＬの各試料を１００μＬの氷冷停止溶液を含むウェルに移し、次に混合した。
１１）Ｔ０及びＴ９０の各ウェルに細胞懸濁液を除く同じ成分を加えることにより、培地対照（ＭＣ）試料プレート（Ｔ０－ＭＣ及びＴ９０－ＭＣと標識する）を製造した。最終濃度表を生成した。
１１）Ｔ０及びＴ９０の各ウェルに細胞懸濁液を除く同じ成分を加えることにより、培地対照（ＭＣ）試料プレート（Ｔ０－ＭＣ及びＴ９０－ＭＣと標識する）を製造した。最終濃度表を生成した。
【0214】
１２）対応する各時点で、インキュベーターからプレートを取り出し、１００μｌの氷冷停止溶液と混合して反応を停止した。
１３）直ちに平板発振器でプレートを５００ｒｐｍで１０分間ボルテックスした。次に、すべての試料プレートを４℃で３２２０ｘｇで２０分間遠心分離した。
１３）直ちに平板発振器でプレートを５００ｒｐｍで１０分間ボルテックスした。次に、すべての試料プレートを４℃で３２２０ｘｇで２０分間遠心分離した。
【0215】
１４）遠心分離した後、３５μＬ／ウェルの試料プレートの上清を、プレートチャートに従って７０μＬの超純水を含むラベル付け済みの別の群の９６ウェルプレートに移した。
１５）分析プレートを４℃で密閉し、ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ分析まで４℃で保存した。
１５）分析プレートを４℃で密閉し、ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ分析まで４℃で保存した。
【0216】
下記の式により、試験化合物及び対照化合物の残存率を取得した。
【0217】
【数1】
【0218】
肝細胞における試験化合物及び対照化合物の消失速度定数ｋは、残存速度に対する時間の対数をプロットすることにより計算し、消失速度ｋを用いて半減期（Ｔ１／２）及び体外の固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ）を得、式は下記に示された通りである。
【0219】
Ｔ１／２＝０．６９３／ｋ
ＣＬｉｎｔ（ｈｅｐ）＝ｋ／ｍＬあたりの細胞数（ｍｉｌｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）
ＣＬｉｎｔ（ｌｉｖｅｒ）＝ＣＬｉｎｔ（ｈｅｐ）×肝臓重量体重比×ｍＬあたりの肝臓での肝細胞数
式における各種のパラメータは下記に示された通りである。
ＣＬｉｎｔ（ｈｅｐ）＝ｋ／ｍＬあたりの細胞数（ｍｉｌｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）
ＣＬｉｎｔ（ｌｉｖｅｒ）＝ＣＬｉｎｔ（ｈｅｐ）×肝臓重量体重比×ｍＬあたりの肝臓での肝細胞数
式における各種のパラメータは下記に示された通りである。
【0220】
【表22】
【0221】
４．実験結果
実験結果は表４に示された通りである。
実験結果は表４に示された通りである。
【0222】
【表23】
【0223】
実験結論：本発明の化合物は、ヒト及びラットのいずれにおいても低いクリアランスを有する。
実験例５：ＳＤラットにおける体内薬物動態特性研究
１．実験目的：
ＳＤラットにおける化合物の体内薬物動態を試験することである。
実験例５：ＳＤラットにおける体内薬物動態特性研究
１．実験目的：
ＳＤラットにおける化合物の体内薬物動態を試験することである。
【0224】
２．実験材料：
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（オス、６～１０週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ＴｅｃＨ Ｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．）
３．実験方法：
化合物１を生理食塩水と混合して、１ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を製造し、注射群投与に使用し、使用のために微多孔性膜で濾過した。試験化合物は３ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により投与され、静脈内投与の溶媒は生理食塩水であった。投与後０、０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、８．０、２４時間後に動物の血漿試料を採取した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用して血漿濃度を測定し、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎＴＭ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態学ソフトを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法で薬物動態パラメーターを計算した。
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（オス、６～１０週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ＴｅｃＨ Ｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．）
３．実験方法：
化合物１を生理食塩水と混合して、１ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を製造し、注射群投与に使用し、使用のために微多孔性膜で濾過した。試験化合物は３ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により投与され、静脈内投与の溶媒は生理食塩水であった。投与後０、０．０８３、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０、８．０、２４時間後に動物の血漿試料を採取した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用して血漿濃度を測定し、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎＴＭ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）薬物動態学ソフトを使用して、非コンパートメントモデル線形対数ラダー法で薬物動態パラメーターを計算した。
【0225】
４．実験結果
実験結果は表５に示された通りである：
実験結果は表５に示された通りである：
【0226】
【表24】
【0227】
実験結論：本発明の化合物は良好な薬物動態特性を有している。