(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-04
(45)【発行日】2024-09-12
(54)【発明の名称】外陰膣障害の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 31/202 20060101AFI20240905BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20240905BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240905BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240905BHJP
【ＦＩ】
A61K31/202
A61P15/02
A61P29/00
A61P17/04
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2021520301
(86)(22)【出願日】2019-10-02
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-13
(86)【国際出願番号】 US2019054234
(87)【国際公開番号】W WO2020076578
(87)【国際公開日】2020-04-16
【審査請求日】2022-07-12
(31)【優先権主張番号】62/743,237
(32)【優先日】2018-10-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/748,875
(32)【優先日】2018-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】520430088
【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ ロチェスター
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】フォスター， デーヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】ファルセッタ ウッド， ミーガン エル．
(72)【発明者】
【氏名】フィップス， リチャード ピー．
【審査官】関 景輔
(56)【参考文献】
【文献】米国特許第０５９１２００６（ＵＳ，Ａ）
【文献】JOGC，2017年，39(3)，pp.131-137
【文献】FALESTTAML et al.，A Much-Needed Model for the Preclinical Testing of New Vulvodynia Therapies，Journal of Lower Genital Tract Disease，2017年，21(4S)，pp.S26-S27
【文献】Fertility and Sterility，2014年，102(4)，pp.1191-1196
【文献】Semin Immunol，2015年，27(3)，pp.200-215
【文献】BJOG，124(2)，2017年，pp.210-218
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／２０２
Ａ６１Ｐ １５／０２
Ａ６１Ｐ ２９／００
Ａ６１Ｐ １７／０４
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
有効量の炎症収束性（ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）メディエーターを含む、女性の対象において、下部生殖管の過敏（ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）の減少もしくは予防における使用のための、薬学的組成物であって、前記炎症収束性（ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）メディエーターが、前記対象の下部生殖管の治療部位に局所的に投与され、
前記過敏が、限局性誘発性外陰部痛（ＬＰＶ）、扁平苔癬、硬化性苔癬、剥離性炎症性膣炎、乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎、および慢性掻痒からなる群から選択される、生殖管の炎症状態に関連し、
前記炎症収束性メディエーターが、（１）レゾルビンＤ２、レゾルビンＤ３、レゾルビンＤ４、レゾルビンＤ５、レゾルビンＥ１、マレシン－１、エピ－マレシン－１、リポキシンＡ４、プロテクチンＤ１、及びプロテクチンＤＸからなる群から選択される；または（２）ＤＨＡ、１４－ＨＤＨＡ、１７－ＨＤＨＡ、及び１８－ＨＥＰＥを含む混合物である、
薬学的組成物。
【請求項2】
前記炎症収束性メディエーターが、マレシン－１である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項3】
前記炎症収束性メディエーターが、プロテクチンＤ１である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項4】
前記生殖管の炎症状態が、ＬＰＶである、請求項１から３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項5】
前記炎症収束性メディエーターが、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項6】
前記炎症収束性メディエーターが、週に１回、週に２～３回、１日１回、１日２回、または１日３回投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
前記対象が二次過敏を引き起こす刺激を受ける前に投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項8】
前記治療部位が、膣前庭を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項9】
前記治療部位が、外部外陰（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｖｕｌｖａ）、前庭、または膣を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項10】
前記治療部位が、外部外陰を含む、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項11】
前記炎症収束性メディエーターが、第２の治療薬との組み合わせで前記対象に投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項12】
前記第２の治療薬が、第２の炎症収束性メディエーターである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項13】
前記第２の治療薬が、抗菌剤または抗ウイルス剤である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月９日に出願された米国仮出願第６２／７４３，２３７号および２０１８年１０月２２日に提出された米国仮出願第６２／７４８，８７５号に対する優先権を主張する。それらの出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１８年１０月９日に出願された米国仮出願第６２／７４３，２３７号および２０１８年１０月２２日に提出された米国仮出願第６２／７４８，８７５号に対する優先権を主張する。それらの出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
政府の利益
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＨＤ０６９３１３の下で政府の支援を受けなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＨＤ０６９３１３の下で政府の支援を受けなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【0003】
本発明は、女性の生殖管の過敏（ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）または／および炎症などの外陰膣障害の治療に関する。
【背景技術】
【0004】
外陰膣障害とは、外陰と膣に影響を与える様々な病気および状態を指す。外陰膣障害のいくつかには、女性生殖管からの疼痛および掻痒などの過敏が含まれる。このような疼痛または掻痒は、効果的な治療法がほとんどない重大な臨床的問題である。例えば、膣前庭（膣口のすぐ周囲の領域）の軽い接触に反応した急性で持続的な疼痛を特徴とする限局性誘発性外陰部痛（ＬＰＶ）は、生涯で３人に１人の女性を苦しめ、著しい心理的苦痛および性機能障害を引き起こす（Ｈａｒｌｏｗ，ＢＬ；Ｋｕｎｉｔｚ，ＣＧ；Ｎｇｕｙｅｎ，ＲＨ；Ｒｙｄｅｌｌ，ＳＡ；Ｔｕｒｎｅｒ，ＲＭ；ＭａｃＬｅｈｏｓｅ，ＲＦ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１４，ｖｏｌ．２１０，ｐｐ．４０ ｅ１－８）。したがって、ＬＰＶは重大な女性の健康問題である。前庭痛は、生活の質の大幅な低下に関連する。ＬＰＶに苦しむ女性は深刻な疼痛を経験するが、病変または感染症などの明らかな病気の兆候は見られない（Ｓａｄｏｗｎｉｋ，ＬＡ．Ｉｎｔ Ｊ Ｗｏｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈ ２０１４，ｖｏｌ．６，ｐｐ．４３７－４９）。病気の起源はほとんど解明されていない。現在利用可能なすべての治療法は、疼痛と心理的苦痛を管理するだけであり、病気の根本的な生物学的原因を対象とはしていない。疼痛および掻痒などの生殖管の過敏の治療が必要である。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、女性生殖管の過敏（疼痛および掻痒など）または／および炎症を含む外陰膣障害の治療に関する。
【0006】
したがって、一態様では、本発明は、対象における外陰膣障害を治療する方法を提供する。特に、本発明は、対象における下部生殖管の過敏（疼痛または掻痒など）を軽減、予防、または治療する方法を提供する。それぞれの方法は、有効量の炎症収束性（ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）メディエーターを対象の下部生殖管の治療部位に局所的に投与することを含む。疼痛または掻痒は、限局性誘発性外陰部痛（ＬＰＶ）、扁平苔癬、硬化性苔癬、剥離性炎症性膣炎、乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎、および慢性掻痒などの生殖管炎症状態に関連する炎症性疼痛または掻痒でありうる。一実施形態では、生殖管の炎症状態はＬＰＶである。治療部位は、膣前庭、外部外陰（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｖｕｌｖａ）、前庭、または膣を含むことができる。
【0007】
この方法を使用するために、炎症収束性メディエーターを０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇで治療部位に投与することができる。炎症収束性メディエーターは、週に１回、週に２～３回、１日１回、１日２回、または１日３回投与できる。特定の例において、対象は、すでに疾患または状態（乳癌または本明細書に記載の他のものに関連する萎縮性外陰膣炎など）であり得るか、対象が二次過敏を引き起こす刺激（例えば、性交とタンポンの使用）を受ける前に、炎症収束性メディエーターが投与される。炎症収束性メディエーターの例には、レゾルビンＤ２、レゾルビンＤ３、レゾルビンＤ４、レゾルビンＤ５、レゾルビンＥ１、マレシン－１、エピ－マレシン－１、リポキシンＡ４、プロテクチンＤ１、プロテクチンＤＸ、１４（Ｓ）－ヒドロキシドコサヘキサエン酸（１４（Ｓ）ＨＤＨＡ）、１７（Ｓ）－ヒドロキシドコサヘキサエン酸、（１７（Ｓ）ＨＤＨＡ）、１８－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１８－ＨＥＰＥ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、オメガ－３脂肪酸、オメガ－６脂肪酸、魚油、魚油抽出物、およびこれらの物質の２つ以上の混合物が挙げられる。混合物の例には、追加の特異的炎症収束性メディエーター（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ ｍｅｄｉａｔｏｒ）前駆体分子（１４－ＨＤＨＡ、１７－ＨＤＨＡ、および１８－ＨＥＰＥ）を含む、約４０体積％のＤＨＡを含む高度に精製された魚油製品であるリピノバ（ＬＩＰＩＮＯＶＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。この方法は、第２の治療薬（例えば、第２の炎症収束性メディエーター、抗菌剤または抗ウイルス剤）を対象に投与することをさらに含むことができる。
【0008】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、本説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1】ＬＰＶ患者の前庭の激しい疼痛部位が外部外陰の疼痛のない部位および関連する生検部位に近接していることを示す図である。
【図2】ＳＰＭ生合成の概略図である。特異的炎症収束性脂質メディエーター（ＳＰＭ）は、オメガ３およびオメガ６ファミリーの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）に由来する。ＰＵＦＡならびに（オメガ３ファミリーの）ＤＨＡおよびＥＰＡなどの他のＳＰＭ前駆体は、マレシン、プロテクチン、レゾルビンなどのＳＰＭを形成する。
【図3A-3B】（Ａ）インビトロＬＰＶモデルにおいて初代ヒト細胞からの炎症誘発性および疼痛促進性メディエーター産生を減少させる能力を調査し、（Ｂ）ＬＰＶの前臨床マウスモデルを使用して疼痛緩和におけるＳＰＭの有効性を評価するための手順を示す一連の図である。
【図4A-4C】外陰細胞または対照患者と比較して、ＬＰＶ患者の前庭細胞で炎症性メディエーター産生が増加していることを示す一連の図である。パネルＡ：生きているＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの用量の低下に応答して放出されたＩＬ－６。＊ｐ＜０．０５ビヒクル対、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓの用量（前庭細胞のみ）、＊＊ｐ＜０．０５前庭細胞対、外陰細胞の特定の用量。ＡＮＯＶＡ、ｎ＝４。前庭細胞は強い応答を示すが、外陰細胞は最大１０００倍の用量に対して有意な応答を示さない。３パネルＢ：培養線維芽細胞をビヒクルまたはザイモサン（１００μｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した後、培地をプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）について分析した。ザイモサンは、対応するビヒクル処理よりもＰＧＥ２の有意な増加を誘発した。ＬＰＶ症状患者からの前庭線維芽細胞は、対照患者からの前庭線維芽細胞と比較してより多くＰＧＥ２を産生した。平均＋／－ＳＥＭ。ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５。パネルＣ：同一の解剖学的部位からの組織検体採取の前に実行された、粘膜皮膚痛覚閾値の対数変換に対してプロットされた線維芽細胞ＰＧＥ２産生の散布図。中心線（赤の実線）は、９５％信頼区間（青の点線）で区切られた線形回帰の近似値を表す。ｔ＝２．５８、ｐ＝０．０４。
【図5A-5D】ＰＧＥ２とＩＬ－６の産生がＳＰＭによって減少することを示す一連の図である。患者の前庭または外陰の線維芽細胞を、リポキシンＡ４（ＬｘＡ４）、レゾルビンＤ２（ＲｖＤ２）、（７Ｒ）－マレシン１またはエピ（７Ｓ）－マレシン１の、５ｎＭの濃度で１０時間前処理し、その後ＩＬ－１β（パネルＡ、１０ｐｇ／ｍｌ）またはブラジキニン（パネルＢ、１００ｎＭ）で４８時間活性化した。培養基を収集し、ＰＧＥ２（パネルＡ）またはＩＬ－６（パネルＢ）の含有量を分析した。患者の線維芽細胞をまた、最初にＩＬ－１βで３０分間活性化し、次に５ｎＭの（７Ｒ）－マレシン１またはＬＸＡ４で１８時間処理し、続いてブースター（ｂｏｏｓｔｅｒ）で６時間処理した。培養基を収集し、ＰＧＥ２（パネルＣ）またはＩＬ－６（パネルＤ）の含有量を分析した。ｎ＝３の平均＋／－ＳＥＭ、ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５活性化のみ（ＳＰＭなし）に対するもの。これらの結果は、いくつかの追加のＬＰＶ患者株で一貫していた。
【図6】ＳＰＭがマウス外陰組織からのＰＧＥ２産生を阻害することを示す図である。マウス外陰組織（４ｍｍパンチ生検）を収集して二分し、培養基中でマレシン１またはＲｖＤ２のいずれかを指定濃度で１８時間前処理した後、ＩＬ－１β（１０ｐｇ／ｍｌ）でさらに１８時間刺激した。培養基を収集し、ＰＧＥ２含有量を分析した。平均＋／－ＳＥＭ、ｎ＝３の同型培養。ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５対ビヒクル。
【図7A-7C】インビボマウス外陰痛モデルの疼痛試験を示す写真および図のセットである。パネルＡ：ザイモサン注射後、炎症と発赤が明らかになる。矢印は注射部位を示している。パネルＢ：電子フォンフライヘア（Ｍｏｕｓｅｍｅｔ）を使用してマウスの外陰に力を加える方法を示す画像。パネルＣ：外陰異痛症を確立して解消するためのインビボマウスモデルの概略図。
【図8】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの代表的な疼痛プロファイルを示す図である。この箱ひげ図シリーズは、誘発、持続、および治療の段階における代表的なマウスの閾値の中央値を示している。毎週収集された測定値は緊密に分散し、閾値は＞３３％で減少し、値がベースラインに戻るマレシン１での治療まで維持された。
【図9】膣洗浄液中のＰＧＥ２が、疼痛閾値と関連していることを示す図である。最大６週間の異痛症の誘発後（疼痛の閾値の減少、赤線で示される）、疼痛を軽減し、疼痛の閾値を上げるために、マレシン１をＣ５７ＢＬ／６マウス外陰に適用した。膣洗浄液試料のＰＧＥ２含有量（青い線）は、誘発段階に急速に増加し、治療により疼痛に関連する炎症が減弱していることを示している。ＳＥＭが示され、ｎ＝８。
【図10】ＳＰＭが外陰線維芽細胞によって産生されることを示す図である。線維芽細胞をＩＬ－１β（１０ｐｇ／ｍｌ）とともに４８時間培養した後、培養基を収集し、ターゲットリピドミック分析（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｌｉｐｉｄｏｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）のために、アルゴンガス下のドライアイス上で直ちに凍結した。検出された主要なＳＰＭは、ＤＨＡに由来する。
【図11】おそらくＳＰＭの産生のため、ＤＨＡ補給がまた、炎症誘発性メディエーターの排出を減少させることを示す図である。前庭または外陰の線維芽細胞をＤＨＡ（２００ｎＭ）で７２時間前処理した後、ＩＬ－１β（１０ｐｇ／ｍｌ）で７２時間活性化した。培養基を収集し、ＰＧＥ２含有量について分析した。ｎ＝３の複製処理試料の平均＋／－ＳＥＭ。ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５対応するビヒクル処理に対して
【図12A-12C】疼痛閾値の手動フォンフライ評価が治療による閾値の改善を示すことを示している写真のセットである。４週間の注射後のザイモサン治療マウスの閾値の低下は、疼痛／感受性の増加を反映している、平均＋／－ＳＥＭ、ｎ＝８生理食塩水、ｎ＝１２ザイモサン、ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５（パネルＡ）。誘発段階後の治療的処置は、疼痛の閾値を増加させた。平均＋／－ＳＥＭ、ｎ＝７、ｐ＞０．０５（パネルＢ）。外陰膣洗浄液は、ＰＧＥ２含有量（パネルＣ）について分析した。ザイモサンを投与されたマウスは、生理食塩水注射されたマウスと比較してそれらの洗浄液中のＰＧＥ２が上昇していた。さらに、治療された異痛症のマウスは、ＰＧＥ２が減少していた。平均＋／－ＳＥＭ、ｎ＝７、ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５。
【図13】ＤＨＡの治療によりマウスが時間とともに回復することを示す図である。マウスが２週間連続して疼痛閾値に少なくとも７０％の改善を示した場合、マウスは回復したと見なされた。ｘ軸の週は、マウスが７０％の改善を示した２週間のうちの最初の週を示す。ＤＨＡ群では、早くも１週目にマウスが回復し始めた。３週目までに、ほとんどのマウスはＤＨＡおよびプラセボ群で回復したが、模擬治療群ではマウスは回復しなかった。
【図14】ＤＨＡによる治療の最初の３週間にわたる改善率（ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ）を示す図である。疼痛閾値の改善率（治療前の最低の疼痛の閾値を超える）は、最初の２週間ではＤＨＡ群で最大であった。３週目までに、改善率はＤＨＡ群とプラセボ群の間で同様であったが、模擬群よりも大きかった。平均＋／－ＳＥＭ。
【図15】外陰膣洗浄液中のＰＧＥ２レベルを示す図である。ＰＧＥ２レベルは、ザイモサン注射で増加し、治療で減退した。治療の最初の３週間の間に、レベルは低下し、ＤＨＡおよびプラセボ群では低いままであった。
【図16】治療により時間とともに回復するマウスを示す図である。マウスは、２週間連続してベースライン閾値（疼痛誘発前）の６６％（＋／－０．５ｇ重）の閾値に達すると回復したと見なされた。ｘ軸で、週は治療週数を示し、２週目以降、１週目と２週目の閾値が６６％の基準を満たした場合、マウスは回復したと見なされた。回復しているマウスの割合は、データポイント上に列挙されている。高リピノバ群と低リピノバ群では、早くも２週目にマウスが回復し始めた。４週目までに、高リピノバ群の８匹（６７％）のマウスが回復し、低用量群では２匹が回復した。回復した他の唯一のマウスは、プラセボ群の１匹のマウスを含んでいた。これらのデータは、リピノバの高用量が回復を誘発するのに最も効果的であることを示している。
【図17A-17B】４週間の治療での改善率を示す図である。Ａ）データは、各治療群の平均パーセント閾値＋／－ＳＥＭとしてグラフ化される。疼痛の閾値の改善率（最後の治療前の疼痛の閾値を超える）は、４週間の治療すべてでリピノバ高群で最大であり、時間とともに徐々に増加し、４週目までに＞５０％の改善を示した。対照群とリピノバ低用量群で改善が見られたが、これらの値はリピノバ高用量群よりも低く、リピノバ低用量群と対照群の差はわずかであった。Ｂ）データは箱ひげ図としてグラフ化される。各ドットは１つのマウスの値を表し、Ｘは中央値を表す。ボックスは上位四分位数と下位四分位数を表し、ひげは最大値と最小値を表示す。この表示は、中央値が高リピノバ群で一貫して高く、４週目に、模擬群の中央値が、その週に特に高い閾値を持つ数匹のマウスによって歪められていることを示している。
【図18A-18B】４週間の治療におけるベースラインパーセントを示す図である。Ａ）データは、各治療群の平均パーセント閾値＋／－ＳＥＭとしてグラフ化されている。疼痛前（ｐｒｅ－ｐａｉｎ）ベースラインスコアのパーセントは、４週間の治療すべてで高リピノバ群で最大であり、４週目までに（群全体で）回復値に達した。ベースラインスコアの回復は対照群とリピノバ低用量群で明らかであったが、これらの値はリピノバ高用量群よりも低く、リピノバ低用量群と対照群の差はわずかであった。Ｂ）データは箱ひげ図としてグラフ化される。各ドットは１つのマウスの値を表し、Ｘは中央値を表す。ボックスは上位四分位数と下位四分位数を表し、ひげは最大値と最小値を表示す。この表示は、中央値が高リピノバ群で一貫して高く、４週目に、模擬群の中央値が、その週に特に高い閾値を持つ数匹のマウスによって歪められていることを示している。
【図19】治療により時間とともに回復するマウスを示す図である。マウスが２週間連続してベースライン閾値の少なくとも７０％に戻った場合、マウスは回復したと見なされた。ｘ軸で、週は研究週を示し、１週目は治療の最初の週を表す。リピノバ群では、早くも２週目にマウスが回復し始めた。５週目までに、ほとんどのマウスはリピノバ高用量群で回復したが、低用量群では２匹、模擬群とプラセボ群ではそれぞれ１匹しか回復しなかった。段階３（中止）の間に、さらに数匹のマウスが低用量、プラセボ、および模擬群で回復し、中止期間中に疼痛閾値の低下を示したマウスはいなかった。中止中、プラセボ群および模擬群と比較して、低用量でより多くのマウスが回復した。段階４（併用療法）では、すべてのマウスが自然に回復し、この段階での治療の効果を評価できなくなった。ｎ＝１２高用量群と低用量群、ｎ＝１１プラセボと模擬。
【図20】ベースライン閾値パーセントを示す図である。値は、群のすべてのマウスの平均ベースライン閾値パーセント＋／－ＳＥＭで表される。ベースラインスコアのパーセントは、リピノバ高用量群で一貫して高かった。ｎ＝１２高用量および低用量群、ｎ＝１１プラセボおよび模擬群。
【図21】治療の最初の３週間での急激な改善率を示す図である。値は、群のすべてのマウスの平均改善％＋／－ＳＥＭとして表される。改善％スコアは、リピノバ高用量群で一貫して高かった。ｎ＝１２高用量および低用量群、ｎ＝１１プラセボおよび模擬群。
【図22A-22B】誘発および治療中のＰＧＥ２レベルを示す図である。パネルＡは、誘発期間中、すべてのマウスの平均ＰＧＥ２レベル＋／－ＳＥＭを示している。平均化するデータポイントの数が多いパネルＡ（４６匹のマウス）では、各群のマウスのみが平均化されるパネルＢ（１１～１２匹のマウス）と比較してＳＥＭが減少している。パネルＢは、ベースラインで、ピークレベル（３週）で、すべての注射が完了した後、次いで治療段階中２週間隔での、ＰＧＥ２の値を示している。ＳＥＭ値は重複しており、群間に統計的に有意な差は存在しないが、高リピノバ群が治療中、ＰＧＥ２のレベルがより低いように見える。ｎ＝１２高用量および低用量群、ｎ＝１１プラセボおよび模擬群。
【図23A-23B】６つのＳＰＭが前処理および後処理として使用された場合に、線維芽細胞からのＩＬ－６およびＰＧＥ２の産生を減少させるのに効果的であることを示す図である。患者の前庭または外陰の線維芽細胞を、レゾルビンＤ３（ＲｖＤ３）、レゾルビンＤ４（ＲｖＤ４）、レゾルビンＤ５（ＲｖＤ５）、レゾルビンＥ１（ＲｖＥ１）、プロテクチンＤ１またはプロテクチンＤＸで５ｎＭの濃度で、１８時間前処理し、活性化の前に再度３０分間前処理し、次いで１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ－１βで４８時間活性化し、２４時間でブースターＳＰＭを投与した。培養基を収集し、ＩＬ－６（パネルＡ）およびＰＧＥ２（パネルＢ）について分析した。ｎ＝６の平均＋／－ＳＥＭ（２事例を３回実行）、ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５活性化のみに対して（ＩＬ－１ｂ）。試験されたすべてのＳＰＭは、前処理（炎症の発症前）を使用した場合に、ＩＬ－６およびＰＧＥ２産生を減少させる効果を示した。
【図24A-24B】後処理として使用した場合、６つのＳＰＭが線維芽細胞からのＩＬ－６およびＰＧＥ２の産生を減少させるのに効果的であることを示す図である。患者の前庭または外陰の線維芽細胞を最初にＩＬ－１βで３０分間活性化し、次にＲｖＤ３、ＲｖＤ４、ＲｖＤ５、ＲｖＥ１、プロテクチンＤ１またはプロテクチンＤＸで５ｎＭの濃度で１８時間処理した後、ブースターＳＰＭ用量で２４時間処理した。培養基を収集し、ＩＬ－６（パネルＡ）およびＰＧＥ２（パネルＢ）の含有量を分析した。ｎ＝６の平均＋／－ＳＥＭ（２事例を３回実行）、ＡＮＯＶＡ＊ｐ＜０．０５活性化のみに対して（ＩＬ－１ｂ）。試験されたすべてのＳＰＭは、炎症が開始された後でも、ＩＬ－６およびＰＧＥ２の産生を減少させる効果を示し、これらのＳＰＭが進行中の炎症の存在下でも効果的であることを示唆している。減少の大きさは、前処理ほど大きくはなかったが、前処理レジメンからの減少と同様に重要であった。
【発明を実施するための形態】
【0010】
本発明は、少なくとも部分的に、ＬＰＶ患者の疼痛部位から単離および培養された線維芽細胞が、「無痛」部位と比較して非常に高レベルの炎症誘発性および疼痛促進性（ｐｒｏ－ｐａｉｎ）メディエーターを産生し、炎症収束性メディエーターと呼ばれる分子のクラスがＬＰＶに対して効果的であるという予期せぬ発見に基づく。
【0011】
ＬＰＶは、閉経前の女性における長年の性交疼痛症（疼痛を伴う性交）の最も一般的な原因であり、膣口を囲む膣前庭に限定された軽い接触による疼痛を特徴とする。ＬＰＶの女性では、慢性的な前庭痛が、生活のあらゆる側面を損ない、影響を及ぼし、線維筋痛症および膀胱痛などの併存疾患を悪化させる。ＬＰＶの壊滅的な影響には、性機能障害、不妊症、うつ病、さらには自殺が含まれる。しかし、ＬＰＶの病因は不明であり、効果的な医学的治療法は存在しない。本発明は、この満たされていないニーズに対処する。
【0012】
本明細書に開示されるように、膣前庭は、前庭部位（図１、「前庭」）から単離された線維芽細胞株によるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）およびインターロイキン－６（ＩＬ－６）などの疼痛促進性および炎症誘発性メディエーターの産生の上昇を含む独特の炎症プロファイルを発現することが発見された。さらに、炎症誘発性メディエーター放出の上昇は、女性の疼痛プロファイルと相関している。したがって、ＬＰＶの効果的な治療法は、有害な炎症誘発性刺激に応答するこれらの細胞の自然な能力を維持しながら、炎症誘発性シグナル伝達を理想的に減少させる。本明細書に記載されている調査は、特定の炎症性刺激に対する過敏症が疼痛の増大につながるメカニズムを特定している。具体的には、ＬＰＶ患者の疼痛は、疼痛部位の生検から培養された線維芽細胞からの炎症誘発性および疼痛促進性メディエーターの産生と直接相関することが実証された（図１、「前庭」）。
【0013】
本明細書に記載されるように、高レベルの疼痛促進性および炎症誘発性メディエーターを産生する線維芽細胞は、激しい、定量化可能な疼痛を有する部位で患者から単離することができる。それらは疼痛促進性メディエーターを豊富に産生し、培養において関連する表現型を維持するので、初代前庭線維芽細胞は、ＬＰＶのモデリングに価値があり、本明細書では局所的な疼痛につながるＬＰＶ患者の非定型炎症性メディエーター産生を解消するために使用できる新しい治療薬を特定するためにうまく使用された。特定された治療薬には、炎症収束性メディエーターが含まれる。
【0014】
炎症収束性メディエーター
本明細書で使用される場合、「炎症収束性メディエーター」は、炎症の消散を促進する脂質由来の化合物または物質を指し、例えば、細胞または生物における炎症の１つの徴候または症状を軽減することができる。炎症収束性メディエーターには、「特異的炎症収束性メディエーター」（ＳＰＭ）と呼ばれる脂質のクラス、それらの前駆体、異なるＳＰＭの混合物、異なるＳＰＭ前駆体の混合物、およびＳＰＭとＳＰＭ前駆体の混合物が含まれる。
本明細書で使用される場合、「炎症収束性メディエーター」は、炎症の消散を促進する脂質由来の化合物または物質を指し、例えば、細胞または生物における炎症の１つの徴候または症状を軽減することができる。炎症収束性メディエーターには、「特異的炎症収束性メディエーター」（ＳＰＭ）と呼ばれる脂質のクラス、それらの前駆体、異なるＳＰＭの混合物、異なるＳＰＭ前駆体の混合物、およびＳＰＭとＳＰＭ前駆体の混合物が含まれる。
【0015】
ＳＰＭは、天然のオメガ３およびオメガ６脂肪酸に由来する炎症収束性、抗疼痛性、および抗炎症性脂質のクラスを表し（例えば、図２を参照）、炎症性の損傷（例えば、感染または傷害）に対する身体の防御能力を損なうことなく治癒を助ける。５～７ＳＰＭは、前駆体の必須脂肪酸ＥＰＡ、ＤＨＡ、アラキドン酸（ＡＲＡ）、およびドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）に由来する強力な内因性生物活性生成物のいくつかのファミリーを含む属であり、それらは、脂肪酸リポキシゲナーゼ、アスピリンによってアセチル化された場合のシクロオキシゲナーゼ２型、およびいくつかのチトクロームＰ４５０オキシダーゼが関与する触媒反応への基質としてＥＰＡ、ＤＨＡ、ＡＬＡ、およびＤＰＡを使用して、１、２、または３分子の分子酸素を、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）に位置的および立体特異的に組み込むことによって生合成される。
【0016】
本発明で使用される場合、「特異的炎症収束性メディエーター」またはＳＰＭという用語は、強力な抗炎症性および消散活性を有し、炎症を起こした組織を炎症を起こしていない健康な状態に戻す炎症反応の内因性調節因子として作用する、ＰＵＦＡ由来の酵素的酸化誘導体に関する。ＳＰＭは、内因性受容体リガンドまたはアロステリック調節因子として機能し、抗炎症作用を巧妙に（ｃｏｎｃｅｉｔｅｄｌｙ）活性化し、炎症の消散を促進、刺激、および誘発する細胞応答を強力に活性化する。「ＳＰＭ前駆体」という用語は、ＰＵＦＡをＳＰＭに変換するために追加の酵素反応を必要とするＰＵＦＡの酵素的酸化誘導体を指す。ＳＰＭ前駆体は、対応するＰＵＦＡ基質自体よりも、ＳＰＭの内因性形成に近い基質である。
【0017】
ＳＰＭには、メディエーターのいくつかのファミリー、リポキシン、レゾルビン（ＥおよびＤシリーズなど）、プロテクチン、マレシンが含まれる。ＳＰＭの例には、レゾルビンＥ１（ＲｖＥ１；５Ｓ，１２，１８－トリヒドロキシ－エイコサ－６Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１４Ｚ，１６Ｅ－ペンタエン酸）、１８Ｓ－レゾルビンＥ１（１８Ｓ－ＲｖＥ１；５Ｓ，１２Ｒ，１８Ｓ－トリヒドロキシ－エイコサ－６Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１４Ｚ，１６Ｅ－ペンタエン酸）、２０－ヒドロキシ－ＲｖＥ１（５Ｓ，１２Ｒ，１８Ｒ，２０－テトラヒドロキシ－エイコサ－６Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１４Ｚ，１６Ｅ－ペンタエン酸）、レゾルビンＥ２（ＲｖＥ２；５Ｓ，１８－ジヒドロキシ－エイコサ－６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１６Ｅ－ペンタエン酸）、レゾルビンＥ３（ＲｖＥ３；１７，１８Ｒ－ジヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１５Ｅ－ペンタエン酸）、１８Ｓ－レゾルビンＥ３（１８Ｓ－ＲｖＥ３；１７，１８Ｓ－ジヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１５Ｅ－ペンタエン酸）、１７，１８－エポキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１５Ｅ－ペンタエン酸、リポキシンＡ５（ＬＸＡ５；５Ｓ，６Ｒ，１５Ｓ－トリヒドロキシ－エイコサ－７Ｅ，９Ｅ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、１５－エピ－リポキシンＡ５（ＬＸＡ５；５Ｓ，６Ｒ，１５Ｒ－トリヒドロキシ－エイコサ－７Ｅ，９Ｅ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、マレシン１（ＭａＲ１；７Ｒ，１４Ｓ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１２Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、７Ｓ－マレシン１（７Ｓ－ＭａＲ１；７Ｓ，１４Ｓ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｅ，１２Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、７Ｓ，１４Ｓ－ジＨＤＨＡ（７Ｓ，１４Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、プロテクチンＤ１（ＰＤ１；１０Ｒ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｅ，１５Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１０Ｓ，１７Ｓ－ＨＤＨＡ（１０Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｓ，２１Ｓ－ジＨＤＨＡ（１４Ｓ，２１Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｓ，２１Ｒ－ジＨＤＨＡ（１４Ｓ，２１Ｒ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｒ，２１Ｓ－ジＨＤＨＡ（１４Ｒ，２１Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｒ，２１Ｒ－ジＨＤＨＡ（１４Ｒ，２１Ｒ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１３Ｓ，１４Ｓ－エポキシ－ＤＨＡ（１３Ｓ，１４Ｓ－エポキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，９Ｅ，１１Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１６，１７Ｓ－ジＨＤＨＡ（１６，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１４Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１６，１７－エポキシ－ＤＨＡ（１６，１７－エポキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１４Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ１（ＲｖＤ１；７Ｓ，８Ｒ，１７Ｓ－トリヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，９Ｅ，１１Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ２（ＲｖＤ２；７Ｓ，１６Ｒ，１７Ｓ－トリヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１２Ｅ，１４Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ３（ＲｖＤ３；４Ｓ，１１Ｒ，１７Ｓ－トリヒドロキシ－ドコサ－５Ｚ，７Ｅ，９Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ４（ＲｖＤ４；４Ｓ，５，１７Ｓ－トリヒドロキシ－ドコサ－６Ｅ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ５（ＲｖＤ５；７Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－５Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、レゾルビンＤ６（ＲｖＤ６；４Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－５Ｅ，７Ｚ，１０Ｚ，１４Ｚ，１６Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発（ａｓｐｉｒｉｎ－ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）レゾルビンＤ１（ＡＴ－ＲｖＤ１；７Ｓ，８Ｒ，１７Ｒ－トリヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，９Ｅ，１１Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発レゾルビンＤ２（ＡＴ－ＲｖＤ２；７Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ－トリヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１２Ｅ，１４Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発レゾルビンＤ３（ＡＴ－ＲｖＤ３；４Ｓ，１１，１７Ｒ－トリヒドロキシ－ドコサ－５Ｚ，７Ｅ，９Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発レゾルビンＤ４（ＡＴ－ＲｖＤ４；４Ｓ，５，１７Ｒ－トリヒドロキシ－ドコサ－６Ｅ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発レゾルビンＤ５（ＡＴ－ＲｖＤ５；７Ｓ，１７Ｒ－ジヒドロキシ－ドコサ－５Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、アスピリン誘発レゾルビンＤ６（ＡＴ－ＲｖＤ６；４Ｓ，１７Ｒ－ジヒドロキシ－ドコサ－５Ｅ，７Ｚ，１０Ｚ，１４Ｚ，１６Ｅ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、７Ｓ，１７Ｓ－ジＨＤＰＡｎ－３（７Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｚ，１９Ｚ－ペンタエン酸（ω－３））、リポキシンＡ４（ＬＸＡ４；５Ｓ，６Ｒ，１５Ｓ－トリヒドロキシ－エイコサ－７Ｅ，９Ｅ，１１Ｚ，１３Ｅ－テトラエン酸）、１５－エピ－リポキシンＡ４（１５－エピ－ＬＸＡ４；５Ｓ，６Ｒ，１５Ｒ－トリヒドロキシ－エイコサ－７Ｅ，９Ｅ，１１Ｚ，１３Ｅ－テトラエン酸）、デルタ１２－プロスタグランジンＪ２（デルタ１２－ＰＧＪ２；１１－オキソ－１５Ｓ－ヒドロキシ－プロスタ－５Ｚ，９，１２Ｅ－トリエン酸）、１５－デオキシ－デルタ１２，１４－プロスタグランジンＪ２（１５－デオキシ－デルタ１２，１４－ＰＧＪ２；１１－オキソ－プロスタ－５Ｚ，９，１２Ｅ，１４Ｅ－テトラエン酸）、１１（１２）－エポキシ－エイコサテトラエン酸（１１（１２）－ＥｐＥＴＥ；１１（１２）－エポキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ－テトラエン酸）、１７（１８）－エポキシ－エイコサテトラエン酸（１７（１８）－ＥｐＥＴＥ；１７（１８－エポキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ－テトラエン酸）、１９（２０）－エポキシ－ドコサペンタエン酸（１９（２０）－ＥｐＤＰＥ；１９（２０）－エポキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ－ペンタエン酸）、１０Ｓ，１７Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１０Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ－ペンタエン酸）、７，１７－ＨＤＰＡｎ－６（７，１７－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ－ペンタエン酸）、７，１４－ＨＤＰＡｎ－６（７，１４－ジヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１２Ｚ，１６Ｚ－ペンタエン酸）、１０Ｓ，１７Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１０Ｓ，１７Ｓ－ジヒドロキシ－ドコサ－７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ペンタエン酸）、および／または７，１７－ＨＤＰＡｎ－６（７，１７ジヒドロキシ－ドコサ－８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ペンタエン酸）が含まれる。
【0018】
ＳＰＭ前駆体の例には、５Ｓ－ＨＥＰＥ（５Ｓ－ヒドロキシ－エイコサ－６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、１１Ｓ－ＨＥＰＥ（１１Ｓ－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１２Ｅ，１４Ｚ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、１２Ｓ－ＨＥＰＥ（１２Ｓ－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１０Ｅ，１４Ｚ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、１２Ｒ－ＨＥＰＥ（１２Ｒ－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１０Ｅ，１４Ｚ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、１５Ｓ－ＨＥＰＥ（１５Ｓ－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ－ペンタエン酸）、４Ｓ－ＨＤＨＡ（４Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－５Ｅ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ、１９Ｚ－ヘキサエン酸）、７Ｓ－ＨＤＨＡ（７Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１０Ｓ－ＨＤＨＡ（１０Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１１Ｓ－ＨＤＨＡ（１１Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，９Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｓ－ＨＤＨＡ（１４Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１４Ｒ－ＨＤＨＡ（１４Ｒ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、２０Ｓ－ＨＤＨＡ（２０Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ヘキサエン酸）、１７Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１７Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ－ペンタエン酸）、１４Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１４Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ－ペンタエン酸）、１０Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１０Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－４Ｚ，７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ－ペンタエン酸）、１７Ｓ－ＨＤＰＡｎ－３（１７Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ－ペンタエン酸）、１４Ｓ－ＨＤＰＡｎ－３（１７Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－７Ｚ，１０Ｚ，１２Ｅ，１６Ｚ，１９Ｚ－ペンタエン酸）、１０Ｓ－ＨＤＰＡｎ－６（１０Ｓ－ヒドロキシ－ドコサ－７Ｚ，１１Ｅ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ－ペンタエン酸）、１５Ｓ－ＨＥＴＥ（１５Ｓ－ヒドロキシエイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ－テトラエン酸）、および／または１５Ｒ－ＨＥＴＥ（１５Ｒ－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ－テトラエン酸）が含まれる。
【0019】
いくつかの実施形態において、炎症収束性メディエーターの例には、レゾルビン、レゾルビンＤ１、レゾルビンＤ２、レゾルビンＤ３、レゾルビンＤ４、レゾルビンＤ５、レゾルビンＤ６、アスピリン誘発レゾルビン、アスピリン誘発レゾルビンＤ１、アスピリン誘発レゾルビンＤ２、アスピリン誘発レゾルビンＤ３、マレシン１、プロテクチンＤ１、プロテクチンＤＸ、１７－ＨＤＨＡ、１４－ＨＤＨＡ、１３－ＨＤＨＡ、７－ＨＤＨＡ、４－ＨＤＨＡ、リポキシン、リポキシン類似体、リポキシンＡ４、リポキシンＡ４類似体、リポキシンＢ４、５，１５－ジヒドロキシエイコサテトラエン酸、トロンボキサンＢ２、１５－ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）、１２－ＨＥＴＥ、１１－ＨＥＴＥ、５－ＨＥＴＥ、レゾルビンＥ（例えば、レゾルビンＥ１、１８Ｓ－レゾルビンＥ１、２０－ヒドロキシ－レゾルビンＥ１、レゾルビンＥ２、１８Ｓ－レゾルビンＥ３）、リポキシンＡ５、リポキシンＢ５、５，１５－ジヒドロキシエイコサペンタエン酸、１８－ヒドロキシエシオサペンタエン酸（ＨＥＰＥ）、１５－ＨＥＰＥ、１２－ＨＥＰＥ、５－ＨＥＰＥ、アネキシンＡ１、リポキシン領域を有する多領域剤（ｍｕｌｔｉ－ｒｅｇｉｏｎ ａｇｅｎｔ）（米国特許第５，４４１，９５１号を参照されたい）、アスピリン誘発脂質メディエーター、アスピリン誘発（ω－３）脂質メディエーター、１６－ジメチル－ＬＸＡ４、１５－エピ－ＬＸＡ４、ベンゾ－ＬＸＡ４類似体、９（ｏ－［９，１２］－ベンゾ－１５－エピ－ＬＸＡ（４）メチルエステル、およびこれらの類似体または模倣物が含まれるが、これらに限定されない。そのようなメディエーターおよびそれらを製造する方法は、例えば、米国特許第７，６１５，５７６号、同第５，４４１，９５１号、同第６，８８７，９０１号、同第７，７３７，１７８号、同第７，５９５，３４１号、同第７，３７８，４４４号、同第７，５８５，８５６号、同第６，７０３，４２３号、同第７，７００，６５０号、同第７，８１２，０５４号、同第７，１３２，４５１号、米国特許出願公開第２０１０／０１０５７７２号、同第２０１０／０１０５７７３号、同第２００９／０１５６６７３号、同第２００６／０２９３２８８号、同第２００３／０１６６７１６号、同第２００８／０３１２３２３号、同第２０１４／００７９６３１号、同第２０１５／０１２６６０２号、同第２０１８／０２００３７５号、および同第２０１８／０２５６５９７号、ならびにＳｅｒｈａｎ ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１２ ２６に記載されている。
【0020】
特定のＳＰＭおよびＳＰＭ前駆体は、魚、甲殻類（オキアミ）、藻類（長鎖ω－３ＰＵＦＡ産生藻類）、軟体動物などの天然資源に由来する、および長鎖ω－３ＰＵＦＡを含む他の生物に由来する油に含まれている。これらの油および１つ以上のそのようなＳＰＭまたはＳＰＭ前駆体を含むまたは濃縮されたそれらの画分もまた、本発明において使用され得る。例には、次のオメガ－３ＰＵＦＡまたはオメガ－６ＰＵＦＡのいずれかに由来するＳＰＭおよびＳＰＭ前駆体が含まれる：ヘキサデカトリエン酸（ＨＴＡ）、ａ－リノレン酸（ＡＬＡ）、ステアリドン酸（ＳＤＡ）、ノナデカテトラエン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ヘネイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸、およびテトラコサヘキサエン酸。これらの脂肪酸は、酵素的酸素化によってＳＰＭ前駆体およびＳＰＭを生じさせる可能性がある。
【0021】
本発明の炎症収束性メディエーターはまた、上記のＳＰＭおよびＳＰＭ前駆体に加えて、抗炎症性および炎症収束性活性を有する、上記の多価不飽和脂肪酸の他のモノ、ジ、およびトリヒドロキシル化およびエポキシ化誘導体を含む。これらの誘導体は、魚、甲殻類、藻類、軟体動物、および海洋生物、植物、微生物などの長鎖ω－３ＰＵＦＡを含む生物、ならびに長鎖ω－３ＰＵＦＡを形成する酵素能力を有するトランスジェニック生物から得られた油に存在し、富化されていることがわかる。同様に、既知のＳＰＭおよび新規のＳＰＭの追加の前駆体が同定され、そのような油に富化されている可能性がある。さらに、ＳＰＭおよびＳＰＭ前駆体は、エステルおよびアミドとして存在し得、これらは、本発明に記載される炎症収束性メディエーターの範囲内にある。エステルは、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、およびリン脂質などの天然エステル、ならびに粗および精製魚油、特にエチルエステル型からのＥＰＡおよびＤＨＡの濃縮を可能にする魚油産業で一般的に使用される工業プロセス中に調製されるエステルであり得る。
【0022】
長鎖ω－３ＰＵＦＡ含有生物から得られた油に見られる任意のＳＰＭ、ＳＰＭ前駆体、またはＳＰＭとＳＰＭ前駆体の混合物は、当技術分野で知られている抽出および分離方法を使用して富化または濃縮することができる。例としては、蒸留技術、クロマトグラフィーによる分別および分離技術がある。
【0023】
ＳＰＭなどの本発明の炎症収束性メディエーターは、正常な宿主防御を損なうことなく炎症および疼痛を解消する。炎症と疼痛の解消は、かつては炎症誘発性シグナル伝達が次第に減少する受動的なプロセスであると考えられていたが、現在ではＳＰＭによって媒介される能動的なプロセスであることが知られている。ＳＰＭは、炎症誘発性シグナル伝達を積極的に減少させ、細菌クリアランスを促進し、疼痛を軽減し、創傷治癒を促進する。ＳＰＭは人体によって自然に生成される可能性があり、実質的に毒性はなく、いくつかは他の苦痛について臨床試験中である。ＳＰＭは従来の抗炎症剤ではなく、免疫抑制剤でもなく、それらは、感染または怪我を感知して反応する身体の能力に影響を与えない。
【0024】
本明細書に開示されるように、炎症収束性メディエーターは、創傷治癒を促進し、細菌クリアランスを促進し、そして疼痛および炎症誘発性シグナル伝達を減少させるので、ＬＰＶの理想的な治療薬となり得る。ＳＰＭはＬＰＶ療法として臨床的に試験されていないが、本明細書に提示された証拠は、炎症収束性メディエーターが疼痛を誘発する炎症誘発性メディエーターの産生を減少させ、ひいてはインビボでのＬＰＶ関連の疼痛を減少させる効果があることを裏付けている。
【0025】
一実施形態では、本発明は、細菌クリアランスを促進し、疼痛を軽減し、創傷治癒を加速するために人体によって自然に生成される、ＳＰＭ、オメガ－３およびオメガ－６脂肪酸に由来する脂質などの分子を含む炎症収束性メディエーターの使用に関する。本明細書に記載のインビトロモデルを使用して、本発明者らは、炎症性刺激の前に投与された場合に、細胞におけるＩＬ－６およびＰＧＥ２産生を減少させるのに非常に効果的な多数のＳＰＭ（レゾルビンＤ２、マレシン－１、エピ－マレシン－１、およびリポキシンＡ４など）を同定した。さらに、これらのＳＰＭの少なくとも２つ（マレシン－１とリポキシンＡ４）は、すでに活性化された細胞のＩＬ－６とＰＧＥ２の減少に非常に効果的であり、疾患プロセス全体を通して効果的であることを示唆している。さらに、線維芽細胞にＳＰＭ前駆体であるドコサヘキサエン酸を補給すると、炎症誘発性シグナル伝達が減少し、ターゲティングリピドミック分析によって検出されるＳＰＭの産生が支持されることがわかった。本明細書に記載の結果は、ＳＰＭまたはそれらの前駆体が効果的なＬＰＶ療法であることを示唆している。
【0026】
また、本明細書に開示されるように、外陰痛（その種の最初のもの）に対する治療的介入を評価するために、ＬＰＶの堅牢で再現性のあるマウスモデルが開発された。このモデルは、リアルタイムの炎症誘発性メディエーターの定量化と、電子フォンフライを介した機械的疼痛検査を組み合わせて、経時的な疼痛と炎症を監視する。発明者らは、マウスに数ヶ月以上続く、安定した異痛症を確立することができた。異痛症の誘発中に、疼痛の閾値が低下する一方で、炎症誘発性メディエーターレベル（例えば、ＰＧＥ２）が収集された外陰膣液内で増加することが見出され、我々のインビトロの発見と一致した。次に、発明者らは、ＰＧＥ２レベルを抑制しながら、疼痛の閾値を増加させる局所マレシン－１またはＤＨＡでマウスを毎日処置した。本明細書に開示されるインビトロおよびインビボの発見は、ＳＰＭの局所適用が外陰痛および炎症を軽減することができ、ＬＰＶの理想的な治療法となるであろうことを示唆している。
【0027】
製剤と使用
上記の炎症収束性メディエーター化合物および関連する組成物は、炎症に関連する過敏などの様々な炎症性障害または状態を治療する方法において有用である。そのために、外陰部痛の発症リスクの増加について見出された最も初期の指標は、性交後の長期にわたる疼痛／過敏の女性の認識である（Ｒｅｅｄ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｅａｌｔｈ ２０１２；２１：１１３９－４３）。したがって、上記の炎症収束性メディエーター化合物および本発明の関連組成物は、女性がこれを問題として認識したときに適用される場合、外陰部痛発症の一次予防モダリティとして使用することができる。
上記の炎症収束性メディエーター化合物および関連する組成物は、炎症に関連する過敏などの様々な炎症性障害または状態を治療する方法において有用である。そのために、外陰部痛の発症リスクの増加について見出された最も初期の指標は、性交後の長期にわたる疼痛／過敏の女性の認識である（Ｒｅｅｄ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｅａｌｔｈ ２０１２；２１：１１３９－４３）。したがって、上記の炎症収束性メディエーター化合物および本発明の関連組成物は、女性がこれを問題として認識したときに適用される場合、外陰部痛発症の一次予防モダリティとして使用することができる。
【0028】
一般に、化合物または組成物は、受け入れられている投与様式のいずれかによって治療上有効な量で投与することができる。好適な投与量の範囲は、治療される疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、使用される化合物の効力、投与の経路および形態、投与が向けられる適応症、関係する開業医の好みと経験などの多くの要因に依存する。そのような疾患を治療する当業者は、過度の実験なしに、個人的な知識および本出願の開示に依存して、所与の疾患に対する本開示の炎症収束性メディエーター化合物の治療有効量を確認することができるであろう。したがって、本開示の化合物または組成物は、局所、膣、経口（頬側および舌下を含む）、直腸、鼻、肺、または非経口（筋肉内、動脈内、髄腔内、皮下および静脈内を含む）投与に好適なものを含む薬学的製剤として、または吸入または吹送による投与に好適な形態で投与することができる。特定の態様では、投与様式は、苦痛の程度に応じて調整することができる便利な毎日の投与レジメンを使用する、局所、膣、または経皮である。
【0029】
特に、化合物または組成物を使用する局所および／または経皮治療は、ＬＰＶなどの対象における下部生殖管の疼痛を軽減または予防するための病状および炎症カスケード状態の局所制御に好ましく、同時に望ましくない副作用が最小限に抑えられ、削減されることを保証する。
【0030】
そのために、本開示の薬学的組成物は、局所投与に好適な可能性がある。その場合、薬学的組成物は、１つ以上の炎症収束性メディエーター、薬学的に許容される局所担体、および任意選択で浸透促進剤を含む。いくつかの態様では、透過促進剤は、塩基を含むことができる。塩基は、約７．５から１３．０の範囲の製剤ｐＨを提供するのに十分な濃度で存在することができる。薬学的組成物は水性であり得る。水性薬学的組成物は、クリーム、ゲル、ローション、ペースト、または溶液であり得る。
【0031】
様々な皮膚透過促進剤が当技術分野で知られており、本発明で使用することができる。好適な促進剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）の例には、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬとして市販されている）およびジエチレングリコールモノメチルエーテルなどのエーテル；ラウリン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ポロキサマー（２３１、１８２、１８４）、Ｔｗｅｅｎ（２０、４０、６０、８０）、レシチン（米国特許第４，７８３，４５０号）などの界面活性剤；エタノール、プロパノール、オクタノール、ベンジルアルコールなどのアルコール；ポリエチレングリコールモノラウレート（ＰＥＧＭＬ、例えば、米国特許第４，５６８，３４３号を参照）などのポリエチレングリコールおよびそのエステル；尿素、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、２－ピロリドン、１－メチル－２－ピロリドン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンなどのアミドおよび他の窒素化合物；テルペン；アルカノン；有機酸、特にクエン酸とコハク酸が含まれるが、これらに限定されない。ＡＺＯＮＥ（登録商標）並びにＤＭＳＯおよびＣ１０ＭＳＯのようなスルホキシドもまた使用されてよい。
【0032】
他の好適促進剤には、典型的には「可塑化」促進剤（”ｐｌａｓｔｉｃｉｚｉｎｇ”ｅｎｈａｎｃｅｒ）と呼ばれるそれらの親油性共促進剤、すなわち、約１５０～１０００の範囲の分子量、約１重量％未満、好ましくは約０．５重量％未満、最も好ましくは約０．２重量％未満の水溶解度を有する促進剤が含まれる。可塑化促進剤のヒルデブランド溶解度パラメータは、約２．５～約１０の範囲であり、好ましくは約５～約１０の範囲である。そのような促進剤は、例えば、米国特許第６，５８６，０００号およびＷＯ０１／４３７７５に記載されている。好ましい親油性促進剤は、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、および脂肪エーテルである。特定の最も好ましい脂肪酸エステルの例には、ラウリン酸メチル、オレイン酸エチル、モノラウリン酸プロピレングリコール、ジラウリン酸プロピレングリセロール、モノラウリン酸グリセロール、モノオレイン酸グリセロール、ｎ－デカン酸イソプロピル、およびミリスチン酸オクチルドデシルが含まれる。脂肪アルコールには、例えば、ステアリルアルコールおよびオレイルアルコールが含まれ、脂肪エーテルには、ジオールまたはトリオール、好ましくはＣ２～Ｃ４アルカンジオールまたはトリオールが１つまたは２つの脂肪エーテル置換基で置換されている化合物が含まれる。追加の浸透促進剤は、局所薬物送達の分野で知られている。例えば、Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ，Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９５）を参照されたい。
【0033】
本明細書に記載の製剤は、例えば皮膚（例えば、外部外陰、前庭、または膣）および周囲組織への局所適用に好適な任意の形態であり得る。それは、例えば、クリーム、ローション、溶液、ゲル、軟膏、ペースト、プラスター、ペイント、生体接着剤などを含み得、および／またはリポソーム、ミセル、および／またはミクロスフェアを含むように調製され得る。そのような製剤は、水性、すなわち水を含み得るか、または非水性であり、任意選択で閉塞性被覆層（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ｏｖｅｒｌａｙｅｒ）と組み合わせて使用され得、その結果、体表面から蒸発する水分は、体表面への適用時およびその後に製剤内に維持される。
【0034】
本発明の製剤は、任意選択で、薬学的に許容される増粘剤および／またはフィルム形成剤を含み得る。増粘剤は、製剤の粘度を増加させて、適用部位を超えるその広がりを抑制する。バルサムモミ（Ｏｒｅｇｏｎ）は、薬学的に許容される増粘剤の例である。フィルム形成剤は、乾燥すると、塗布部位に保護フィルムを形成する。フィルムは有効成分の移動を抑制し、治療される部位との接触を維持する。本発明での使用に好適なフィルム形成剤の例は、フレキシブルコロジオン（Ｆｌｅｘｉｂｌｅ Ｃｏｌｌｏｄｉｏｎ）、ＵＳＰである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ Ｅｄ．（Ｅａｓｔｏｎ．Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５）の１５３０ページに記載されているように、コロジオンは、蒸発してピロキシリンのフィルムを残すピロキシリン（ニトロセルロース）を含むエチルエーテル／エタノール溶液であるフィルム形成剤は、担体としてさらに機能することができる。乾燥してフィルムを形成する溶液は、ペイントと呼ばれることもある。
【0035】
薬学的製剤の分野で周知であるように、軟膏は、典型的にはワセリンまたは他の石油誘導体に基づく半固体製剤である。当業者によって理解されるように、使用される特定の軟膏基剤は、最適な薬物送達を提供し、好ましくは、他の所望の特性、例えば、エモリエント性なども提供するものである。他の担体またはビヒクルと同様に、軟膏基剤は不活性で、安定で、刺激がなく、感作性がないものでなければならない。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ Ｅｄ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５），の１３９９～１４０４ページで説明されているように、軟膏基剤は４つのクラス：油脂性基剤、乳化性基剤、乳剤性基剤、および水溶性基剤、に分類できる。油脂性軟膏基剤には、例えば、植物油、動物から得られる脂肪、および石油から得られる半固体炭化水素が含まれる。吸収性軟膏基剤としても知られる乳化性軟膏基剤は、水をほとんどまたは全く含まず、例えば、ヒドロキシステアリン硫酸塩、無水ラノリンおよび親水性ワセリンを含む。乳剤性軟膏基剤は、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョンまたは水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンのいずれかであり、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラノリン、およびステアリン酸が含まれる。好ましい水溶性軟膏基剤は、様々な分子量のポリエチレングリコールから調製される。繰り返しになるが、詳細については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙを参照されたい。
【0036】
当技術分野でも周知であるように、クリームは、水中油型または油中水型のいずれかの粘性液体または半固体エマルジョンである。クリーム基剤は水洗可能で、油相、乳化剤、水相が含まれている。「内部」相とも呼ばれる油相は、一般に、ワセリンと、セチルまたはステアリルアルコールなどの脂肪アルコールで構成されている。水相は通常、必ずしもそうではないが、体積が油相を超えており、一般に保湿剤を含んでいる。クリーム製剤中の乳化剤は、一般に、非イオン性、陰イオン性、陽イオン性、または両性の界面活性剤である。
【0037】
医薬製剤の分野で働く人々によって理解されるように、ゲルは半固体の懸濁液タイプ系である。単相ゲルは、担体液体全体に実質的に均一に分布した有機高分子を含み、これは典型的には水性であるが、好ましくは、アルコールおよび、任意選択で、油を含む。好ましい「有機高分子」、すなわちゲル化剤は、「カルボマー」ファミリーのポリマー、例えば、ＣＡＲＢＯＰＯＬの下で商業的に入手することができるカルボキシポリアルキレンなどの架橋アクリル酸ポリマーである。ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー、およびポリビニルアルコール；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、およびメチルセルロースなどのセルロース系ポリマー；トラガカントおよびキサンタンガムなどのガム；アルギン酸ナトリウム；およびゼラチンなどの親水性ポリマーもまた好ましい。均一なゲルを調製するために、アルコールまたはグリセリンなどの分散剤を添加することができ、またはゲル化剤を、粉砕、機械的混合または撹拌、あるいはそれらの組み合わせによって分散させることができる。
【0038】
ローションは、摩擦なしに皮膚表面に塗布される製剤であり、通常、活性薬剤を含む粒子が水またはアルコール基剤に存在する液体または半液体の製剤である。ローションは通常、固体の懸濁液であり、好ましくは、本目的のために、水中油型の液体油性エマルジョンを含む。ローションは、より流動性のある組成物を適用するのが容易であるため、広い身体の部位を治療するための好ましい製剤である。ローション中の不溶性物質は、一般的に細かく分割する必要がある。ローションは、典型的には、より良い分散液を生成するための懸濁剤、ならびに活性薬剤を皮膚と接触させて局所化して保持するのに有用な化合物、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどを含む。
【0039】
ペーストは、活性薬剤が好適な基剤に懸濁されている半固体剤形である。基剤の性質に応じて、ペーストは脂肪ペーストまたは単相水性ゲルから作られたものに分けられる。脂肪ペースト中の基剤は、一般に、ワセリンまたは親水性ワセリンなどである。単相水性ゲルから作製されたペーストは、一般に、カルボキシメチルセルロースなどを基剤として組み込んでいる。
【0040】
プラスターは、直接または布などのベース材料に飽和させた後に、体に塗り広げられるペースト状の混合物で構成されている。本発明のベースを含む薬物は、プラスター内に溶解または分散させて、薬用プラスターを作製することができる。
【0041】
生体接着剤は、体組織の表面に接着する製剤である。ポリマー生体接着性製剤は当技術分野で周知であり、例えば、Ｈｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ，”ｉｎ Ｃｈａｓｉｎ，Ｍ．ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．，ｅｄｓ．：Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１２１－１６１（１９９０）；および米国特許第６，２０１，０６５号を参照されたい。特定の脂肪酸エステルを含む好適な非ポリマー生体接着剤もまた当技術分野で知られている（米国特許第６，２２８，３８３号）。
【0042】
本発明に記載の製剤はまた、リポソーム、ミセル、およびミクロスフェアを用いて調製することができる。リポソームは、脂質二重層を含む脂質壁を有する微視的小胞であり、本明細書の薬物送達システムとしても使用することができる。一般に、リポソーム製剤は、難溶性または不溶性の薬学的薬剤に好ましい。本発明で使用するためのリポソーム製剤には、カチオン性（正に帯電した）、アニオン性（負に帯電した）および中性の製剤が含まれる。カチオン性リポソームは容易に入手可能である。例えば、Ｎ［１－２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）リポソームは、商品名ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）で入手可能である。（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ、ニューヨーク州グランドアイランド）。同様に、陰イオン性および中性リポソームもまた、例えば、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（バーミンガム、アラバマ州）から容易に入手可能であるか、または容易に入手可能な材料を使用して容易に調製することができる。そのような材料には、とりわけ、ホスファチジルコリン、コレステロール、ホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレオイルホスハチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が含まれる。これらの材料は、適切な比率でＤＯＴＭＡと混合することもできる。これらの材料を使用してリポソームを作製するための方法は、当技術分野で周知である。
【0043】
ミセルは、それらの極性頭部基が外側の球殻を形成するように配置された界面活性剤分子から構成されることが当技術分野で知られており、疎水性の炭化水素鎖は球の中心に向かって配向し、コアを形成する。ミセルは、界面活性剤を十分に高い濃度で含む水溶液中で形成されるため、ミセルが自然に生じる。ミセルを形成するのに有用な界面活性剤には、ラウリル酸カリウム、オクタンスルホン酸ナトリウム、デカンスルホン酸ナトリウム、ドデカンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、デシルトリメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド、テトラデシルトリメチルアンモニウムクロリド、ドデシルアンモニウムクロリド、ポリオキシル８ドデシルエーテル、ポリオキシル１２ドデシルエーテル、ノノキシノール１０およびノノキシノール３０が含まれるが、これらに限定されない。ミセル製剤は、局所または経皮送達システムに組み込むことによって、または標的部位（例えば、前庭）および周囲の組織に適用される製剤に組み込むことによって、本発明と併せて使用することができる。
【0044】
同様に、ミクロスフェアは、本製剤および薬物送達システムに組み込むことができる。リポソームおよびミセルのように、ミクロスフェアは本質的に薬物または薬物含有製剤をカプセル化する。ミクロスフェアは、必ずしもそうである必要はないが、一般に、合成または天然に存在する生体適合性ポリマーから形成されるが、リン脂質などの荷電脂質から構成されることもある。ミクロスフェアの調製は当技術分野で周知であり、関連するテキストおよび文献に記載されている。
【0045】
当技術分野で知られている様々な添加剤を局所製剤に含めることができる。例えば、比較的少量のアルコールを含む溶剤を使用して、特定の製剤成分を可溶化することができる。本発明の製剤はまた、乳白剤、抗酸化剤、香料、着色剤、ゲル化剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤などの従来の添加剤を含み得る。細菌、酵母、カビなどの微生物の増殖を阻害するために、抗菌剤などの他の薬剤を添加することもできる。例示的な抗菌剤は、典型的には、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のメチルおよびプロピルエステル（すなわち、メチルおよびプロピルパラベン）、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、イミド尿素、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0046】
上記の炎症収束性メディエーター化合物および関連する組成物は、様々な炎症性障害または状態を治療する方法において有用である。この治療法の種類または組み合わせには、以下の例示的な用途が含まれるが、これらに限定されない：放射ポンプディスペンサー（ｒａｄｉａｔｉｎｇ ｐｕｍｐ ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ）を使用する局所／経皮スプレー、治療部位にこすりつけられる局所／経皮軟膏／香油、局所／経皮傷の洗浄用リンス液、疼痛緩和ための局所／経皮ロールオン、水で再構成することができる前記組成物で個別に密閉された含浸ミニスポンジ、微粉化された凍結乾燥材料から構成される創傷用粉末、および部位特異的適用のための前記組成物の段階的かつ連続的な送達のための徐放性表皮／局所用パッチ。
【0047】
治療用組成物は、好ましくは、必要に応じて投与することができる。例えば、過酷な状態の場合、１日あたり約１～４回を毎日のように使用できる。さらに、治療用組成物は、代わりに、状態が必要に応じて治療または修復されるまで、週１回、隔週、三週間ごと、毎週、または毎月投与することができる。さらに、投与は、最初は毎日開始され、その後、臨床的改善に応じて、週１回、毎月などの投与に移行することができる。本発明の組成物は、治療補助剤としてのみ使用されるのではなく、使用者を疼痛のない状態に維持するために使用することもできる。
【0048】
特定の実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の炎症収束性メディエーターを含む組成物の有効用量は、患者に一度に投与することができる。特定の実施形態では、炎症収束性メディエーターを含む組成物の有効用量は、患者に繰り返し投与することができる。患者には、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇの炎症収束性メディエーターを含む組成物の治療量を投与することができる。炎症収束性メディエーターを含む組成物は、５分、１０分、１５分、２０分、または２５分などの期間にわたって投与することができる。投与は、例えば、３時間、６時間、１２時間以上の１時間ごと、または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月以上の隔週（すなわち、２週間ごと）など定期的に繰り返される。最初の治療レジメンの後、治療はより少ない頻度で投与することができる。例えば、隔週で３ヶ月間投与した後、月に１回、６ヶ月または１年以上投与を繰り返すことができる。炎症収束性メディエーターを含む組成物の投与は、例えば、炎症のマーカーまたは症状のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上減少させることができる。
【0049】
ＬＰＶおよび他の女性の生殖管の状態を治療することは、膣または膣周囲の投与を伴う。そのために、膣または膣周囲の剤形は、膣坐剤、クリーム、軟膏、液体製剤、ペッサリー、タンポン、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレーを含み得る。膣または膣周囲送達用の坐剤、クリーム、軟膏、液体製剤、ペッサリー、タンポン、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレーは、治療有効量の選択された活性薬剤および膣または膣周囲の薬物投与に好適な１つ以上の従来の非毒性担体を含む。本発明の膣または膣周囲用の形態は、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙに開示されている従来のプロセスを使用して製造することができる（米国特許第６，５１５，１９８号、第６，５００，８２２号、第６，４１７，１８６号、第６，４１６，７７９号、第６，３７６，５００号、第６，３５５，６４１号、第６，２５８，８１９号、第６，１７２，０６２号、および第６，０８６，９０９号に適合した製剤も参照されたい）。膣または膣周囲の投与単位は、急速にまたは数時間にわたって崩壊するように製造することができる。完全な崩壊の期間は、約１０分～約６時間の範囲、例えば、約３時間未満であり得る。
【0050】
上記の炎症収束性メディエーターは、他の好適な組成物またはキットに含まれ得る。そのような組成物およびキットの例には、避妊デバイスまたは薬剤、潅水、生理用ナプキン、または好ましくはタンポンなどの女性用衛生製品、膣もしくは肛門坐剤または浣腸が含まれ、これらのすべては、１つ以上の他の治療薬（例えば、抗菌剤、抗ウイルス剤、および抗ＳＴＤ剤）を提供することができ、およびこれらのすべては、徐放性組成物として（例えば、徐放性デバイスで）提供することができる。
【0051】
本明細書に開示される方法は、疼痛、掻痒、および他の女性の生殖管の状態を含む様々な外陰膣障害を治療するために使用することができる。
【0052】
疼痛（外陰膣痛）は、特定の障害：感染症（再発性カンジダ症およびヘルペスなど）、炎症性疾患（硬化性苔癬、扁平苔癬、肛門直腸クローン病、剥離性炎症性膣炎など）、腫瘍性障害（パジェット病、扁平上皮癌、および乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎など）、神経障害（帯状疱疹後神経痛、神経の圧迫または損傷、神経腫など）、外傷（女性性器切除および産科的なものなど）、医原性障害（術後、化学療法、外陰膣移植片対宿主病、および放射線照射など）、およびホルモン欠乏症（閉経または外陰膣萎縮の泌尿生殖器症候群、および泌乳性無月経など）によって引き起こされる可能性がある。
【0053】
移植片対宿主（ＧｖＨ）疾患は、移植レシピエントの最大８０％における造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の後遺症であり、過去２０年間でＨＳＣＴ方法は３倍に増加した（Ｇｒａｔｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１００（２００２），ｐｐ．２３７４－２３８６）。ＧｖＨは、移植片の免疫担当Ｔ細胞が、宿主の抗原提示細胞によって示される同種抗原を認識し、免疫不全宿主に対して反応するときに発生する。生殖器ＧＶＨＤは、ＨＳＣＴ後の女性の最大４８％で発生すると推定されており（Ｚａｎｔｏｍｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００６ Ｏｃｔ；３８（８）：５６７－７２）、腫瘍学者によって慢性ＧＶＨＤの一般的な兆候と見なされている。膣の症状には、乾燥、痒み、灼熱感、ヒリヒリした痛み（ｓｏｒｅｎｅｓｓ）、入口疼痛（ｉｎｔｒｏｉｔａｌ ｐａｉｎ）、狭窄症、線維症などがある。身体的所見は、軽症の紅斑と白帯下から、狭窄、線維症、場合によっては膣と外陰の解剖学的構造の完全な閉塞のより重度な所見にまで及ぶ。今日まで、この状態に対する特定の効果的な治療法はなかった。
【0054】
さらに、疼痛は外陰痛によって引き起こされる可能性があり、これは、少なくとも３か月間の外陰の疼痛であり、潜在的な関連要因がある可能性のある明確な特定可能な原因がない。外陰痛は、外陰の灼熱感、刺痛、過敏、およびヒリヒリ感（ｒａｗｎｅｓｓ）からなる慢性的な不快感または疼痛である。この疼痛は次のような可能性がある：全身性（びまん性外陰灼熱感または過敏）、限局性（前庭、陰核などの特定の領域の疼痛、それぞれ膣前庭痛（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ）、陰核痛（ｃｌｉｔｏｒｏｄｙｎｉａ））、混合型（限局性および全身性）、誘発性（例えば、挿入、接触）、自然発症性、混合型（誘発性および自然発症性）、限局性誘発性外陰部痛（ＬＰＶ）、発症（原発性または続発性）、ならびに時間パターンを示すもの（断続性、持続性、恒常性、即時性、遅延性）。
【0055】
治療できる他の女性生殖管の状態の例には、扁平苔癬、硬化性苔癬、および乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎が含まれる。他の状態には慢性掻痒が含まれる。
【0056】
扁平苔癬は、次の２つのタイプのいずれかとして現れる可能性がある：（１）「標準的」、口腔膜および生殖器膜上のはっきりと境界が定められた上部が扁平なプラークからなる、（２）「びらん性」、前庭に由来し、膣管まで様々に伸びるびらん性の紅斑性病変からなる。びらん性扁平苔癬は、一般的に、症候的に、慢性の自発性灼熱痛を特徴とする。
【0057】
硬化性苔癬は、色素脱失、粘膜皮膚マーキングの喪失、および粘膜下出血によって視覚的に特徴づけられる。皮膚表面の弾力性が低下すると、会陰部に裂傷が生じる可能性がある。硬化性苔癬は、小陰唇、陰核、陰唇間溝（ｉｎｔｅｒｌａｂｉａｌ ｓｕｌｃｕｓ）、および大陰唇の内部と肛門周囲領域にも関与する可能性がある。膣入口および隣接する肛門周囲領域の硬化性苔癬による周囲の色素脱失は、「鍵穴分布（ｋｅｙｈｏｌｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）」という説明用語によって特徴付けられている。
【0058】
剥離性炎症性膣炎は、灼熱痛、目に見える炎症、臨床検査での膣分泌物の増加、および顕微鏡での傍基底細胞の証拠を特徴とする。重要な診断上の特徴は、適切なエストロゲン化の存在下で炎症を伴う傍基底細胞の発見であり、顕微鏡研究または他の実験方法での感染性病因の欠如である。
【0059】
乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎は、灼熱痛と性交時痛を特徴とする。臨床検査では、膣のひだ構造（ｒｕｇａｌ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ）の喪失、乾燥、および粘膜の目に見える蒼白がある。治療のための局所エストロゲンの使用は、この群の癌生存者で議論の余地がある。
【0060】
治療できる他の状態には、慢性掻痒が含まれる。掻痒の問題は、硬化性苔癬および扁平苔癬の多くの人の疼痛と同じくらい衰弱させる可能性がある。それは異痛症と同様の神経線維（ｃ線維）によって媒介されるが、微小神経造影によって掻痒は別個の神経サブセットによって媒介される。掻痒のメディエーター（インフラマソーム）は、疼痛のメディエーターに類似しているようである
【0061】
本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「改善」という用語は、疾患、障害、または病状に関連して使用される場合、状態の治療的処置を指し、その目的は症状または状態（疼痛など）の進行または重症度を逆転、緩和、改善、抑制、減速、または停止することである。「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、状態の少なくとも１つの副作用または症状を減少または軽減することを含む。１つ以上の症状または臨床マーカーが減少した場合、治療は一般に「効果的」である。あるいは、状態の進行が減少または停止した場合、治療は「効果的」である。すなわち、「治療」には、症状（疼痛など）またはマーカー（サイトカインなど）の改善だけでなく、治療がない場合に予想される症状の停止または少なくとも進行もしくは悪化の遅延も含まれる。有益なまたは望ましい臨床結果には、１つ以上の症状（複数可）の緩和、欠損の程度の減少、炎症の安定した（すなわち、悪化しない）状態、炎症の遅延または減速、および炎症の改善または緩和、が含まれるがこれらに限定されない。
【0062】
本明細書で使用される「局所」という用語は、本発明の組成物の皮膚および下層組織への投与、ならびに粘膜および下層組織への投与を指す。
【0063】
「低下する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」、「減少する（ｒｅｄｕｃｅ）」、「減少した（ｒｅｄｕｃｅｄ）」、「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」、「低下（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「阻害する」という用語はすべて、本明細書では一般に、参照と比較して統計的に有意な量の減少を意味するために使用される。しかしながら、誤解を避けるために、「減少する（ｒｅｄｕｃｅ）」、「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」または「低下する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「阻害する」は、通常、参照レベルと比較して少なくとも１０％の低下を意味し、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の低下を含むことができ、例えば、参照レベルと比較して所与のエンティティもしくはパラメータが完全に存在しないこと、または所与の治療が存在しないことと比較して１０～９９％の間の任意の低下を含むまでを含めることができる。
【0064】
「予防する」、「予防する」、および「予防」という用語が、所与の状態に対する所与の治療に関連して本明細書で使用される場合、それらは、治療された患者が臨床的に観察可能なレベルの状態を全く発症しないか、または彼／彼女が治療を欠いた場合よりもゆっくりとおよび／またはより少ない程度でそれを発症することを意味する。これらの用語は、患者が状態のいかなる態様もまったく経験しない状況だけに限定されない。例えば、治療が、状態の所与の症状（疼痛など）を引き起こすと予想される刺激へ患者がさらされている間に行われた場合、その状態を「予防」したと言われ、その結果、患者は、他の方法で予想されるよりも少ないおよび／または軽度の状態の症状を経験する。例えば、治療は、患者が炎症の軽度の明白な症状のみを示す結果となることにより、炎症を「予防」することができ、それは、炎症がなかったか、炎症誘発性サイトカイン、炎症メディエーター、および／または関連する下流の細胞事象の産生がなかったに違いないことを意味するものではない。
【0065】
本明細書で使用される場合、「富化された」という用語は、それが作製された供給源よりも高レベルのＳＰＭおよび／またはＳＰＭ前駆体を含む場合の、ＳＰＭおよび／またはＳＰＭ前駆体を含む組成物（例えば、油）を指す。
【0066】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」、「有効量」または「有効用量」という句は、例えば、疼痛、炎症または創傷の治療、予防、または管理において治療的または審美的利益を提供する量であって、例えば疼痛、炎症、および／または創傷治癒の少なくとも１つの症状、徴候、またはマーカーの統計的に有意な低下を提供する量を指す。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、治療有効量は、対象の病歴、年齢、状態、性別、ならびに対象の病状の重症度およびタイプ、ならびに他の薬学的に活性薬剤の投与によって変化し得る。
【0067】
「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、過敏、アレルギー反応、またはその他の問題または合併症がなく、合理的な利益／リスク比に見合ったものである、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに好適な化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために本明細書で使用される。本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、製薬業界で一般的に使用される薬学的に許容される担体と組み合わせた活性薬剤を指す。
【0068】
本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒトまたは動物を意味する。好ましくは、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、例えば炎症の動物モデルを表す対象として、例えば、有利に使用することができる。さらに、本明細書に記載の方法は、家畜および／またはペットを治療するために使用することができる。
【0069】
対象は、治療を必要とする状態（例えば、炎症または他の疼痛を引き起こす状態）またはそのような状態に関連する１つ以上合併症を患っている、または有すると以前に診断または特定されたものであってもよく、任意選択であるが、ある状態またはその状態に関連する１つ以上の合併症の治療をすでに受けている必要はない。あるいは、対象はまた、治療を必要とする状態またはそのような状態に関連する１つ以上の合併症を有すると以前に診断されていないものであり得る。例えば、対象は、状態に対して１つ以上の危険因子を示すか、または状態に関連する１つ以上の合併症を示すか、または危険因子を示さない対象であり得る。例えば、女性対象は、疾患（例えば、乳癌に関連する萎縮性外陰膣炎）が確立された後、または二次曝露事象の前に（例えば、性交を再試行する前に数週間治療する）、疼痛を改善するために本明細書に記載されるように治療され得る。
【0070】
本明細書で使用される場合、「炎症」は、病原体、損傷した細胞、または刺激物などの有害な刺激に対する複雑な生物学的応答を指す。炎症は、有害な刺激を取り除き、組織の治癒過程を開始するための生物による保護の試みである。したがって、「炎症」という用語は、炎症誘発性サイトカイン、炎症メディエーター、および／またはこのように産生されたサイトカインの作用に起因する関連する下流の細胞事象、例えば、発熱、体液蓄積、腫れ、膿瘍の形成、および細胞死の産生をもたらす任意の細胞プロセスを含む。炎症誘発性サイトカインおよび炎症メディエーターには、ＩＬ－１－アルファ、ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＴＮＦ－アルファ、白血球阻害因子（ＬＩＦ）、ＩＦＮ－ガンマ、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ＴＧＦ－ベータ、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、および炎症細胞を化学誘引するケモカインが含まれるが、これらに限定されない。炎症には、急性応答（すなわち、炎症過程が活発である応答）と慢性反応（すなわち、遅い進行と新しい結合組織の形成によって特徴づけられる応答）の両方が含まれ得る。急性および慢性の炎症は、関与する細胞の種類によって区別される場合がある。急性炎症はしばしば多形核好中球を伴い、一方、慢性炎症は通常、リンパ組織球性および／または肉芽腫性応答を特徴とする。
【0071】
本明細書に開示されるように、いくつかの範囲の値が提供される。文脈が明確に別段の指示をしない限り、その範囲の上限と下限との間の、下限の単位の１０分の１までの各介在値もまた具体的に開示されていることが理解される。任意の記載された値または記載された範囲内の介在値と、任意の他の記載された値またはその記載された範囲内の介在値との間のそれぞれのより小さい範囲は、本発明に含まれる。これらのより小さな範囲の上限および下限は、独立して範囲に含めることもかまたは除外することもでき、かついずれかのもしくは両方の制限がより小さな範囲に含まれるまたはどちらの制限もより小さな範囲に含まれない各範囲もまた、記載された範囲で具体的に除外された制限を条件として本発明に含まれる。記載された範囲が一方または両方の制限を含む場合、それらの含まれる制限のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、本発明に含まれる。
【0072】
「約」または「おおよそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容範囲内を意味し、これは、値がどのように、例えば、測定システムの限界を測定または決定されるかに部分的に依存する。例えば、「約」は、所与の値の最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、より好ましくはさらに最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。特に明記されていない限り、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味する。
【実施例】
【0073】
実施例１
本実施例では、線維芽細胞ベースのインビトロＬＰＶモデルが確立された。簡単に言えば、線維芽細胞株は、Ｆａｌｓｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．２１３，ｐｐ．３８ ｅ１－１２ ａｎｄ Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ ２０１５，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．３８６－９６に記載されている方法で、限局性誘発性外陰痛（ＬＰＶ）患者の下部生殖管と無痛の対照の２つの領域（図１）から得られた。
本実施例では、線維芽細胞ベースのインビトロＬＰＶモデルが確立された。簡単に言えば、線維芽細胞株は、Ｆａｌｓｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．２１３，ｐｐ．３８ ｅ１－１２ ａｎｄ Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ ２０１５，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．３８６－９６に記載されている方法で、限局性誘発性外陰痛（ＬＰＶ）患者の下部生殖管と無痛の対照の２つの領域（図１）から得られた。
【0074】
ＬＰＶに罹患した患者（フリードリッヒの基準を満たす）２５および年齢／人種が一致した（ＬＰＶに影響を与える重要な変数）２６，２７の無痛対照から得られた３０対を超える線維芽細胞株が得られた。ライブラリに貢献したすべての対象は、閉経前であり、経口コルチコステロイド、非ステロイド性、免疫調節性、または抗炎症薬の使用が認められず、試料収集時に全身／皮膚の炎症状態がないことが報告された。ワグナーアルゴメーターを使用して、機械的疼痛閾値を（極限法を介して）決定した（０．５～５Ｎ）。線維芽細胞の同一性は、顕微鏡検査および線維芽細胞マーカー（ビメンチン、コラーゲン）によって確認され、低継代（約４）細胞のみが使用される。
【0075】
次に、線維芽細胞株を、Ｃａｎｄｉｄａ ａｂｌｉｃａｎｓなどの刺激でチャレンジした（図３Ａ）。ＬＰＶ患者の疼痛のある前庭から採取した線維芽細胞は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｂｌｉｃａｎｓに感染すると、外陰膣環境内で通常検出可能な用量よりも低い用量でも高レベルのＩＬ－６を産生し、疼痛のない外部外陰からの線維芽細胞は応答が弱いことがわかった（図３Ａ）。Ｃ．ａｂｌｉｃａｎｓは外陰膣酵母感染症の主な原因であり、１９－２２慢性酵母感染症は＞７０％のＬＰＶ患者の先行因子として挙げられている。２３マウスで繰り返される外陰膣感染症は、外陰異痛症と局所過剰神経支配が誘発し、外陰痛の所見がシミュレートされる。２４ＬＰＶは古典的な炎症性疾患として存在しないという事実にもかかわらず、ＬＰＶは炎症性調節不全に関連している。炎症の基本的な兆候は、健康な女性とＬＰＶに苦しむ女性の両方で顕著ではないか、漠然と存在するが、免疫細胞の浸潤と組織化は、ＬＰＶと健康な患者では明らかに異なる。１７
【0076】
さらに、生きている酵母感染症に対して部位特異的な応答があったこと、それにより、外陰前庭内の疼痛部位からの線維芽細胞は、酵母／酵母産物に本質的に感受性があり、外部外陰の疼痛のない部位からの線維芽細胞と比較して、高レベルの疼痛促進性／炎症誘発性メディエーターを産生することがわかった（図４Ｂ）。さらに、健康な女性の前庭からの線維芽細胞が減少したものの、ザイモサン（酵母細胞壁生成物、図４Ｂ）に対して同様の応答を示したので、この応答は、正常な炎症応答の悪化であるように見えた。さらに重要なことに、ＬＰＶ疼痛と炎症の間には強い関連性があり、ＬＰＶ患者の疼痛は、生きた酵母に曝露された場合、疼痛のある部位の生検から培養された線維芽細胞による炎症誘発性および疼痛促進性メディエーターの産生と直接相関していた（図４Ｃ）。
【0077】
実施例２
この実施例では、アッセイを実施して、実施例１に記載のインビトロＬＰＶモデルにおいて、初代ヒト細胞からの炎症誘発性および疼痛促進性メディエーター産生を減少させるＳＰＭの能力を調査した。
この実施例では、アッセイを実施して、実施例１に記載のインビトロＬＰＶモデルにおいて、初代ヒト細胞からの炎症誘発性および疼痛促進性メディエーター産生を減少させるＳＰＭの能力を調査した。
【0078】
低／ナノモル濃度（１～１００ｎＭ）で、既知の各ＳＰＭクラス（Ｅシリーズレゾルビン、Ｄシリーズレゾルビン、マレシン、プロテクチン、およびリポキシン）から合成、精製、および市販されているＳＰＭを試験した。これらの濃度は、毒性なしに、インビトロおよびインビボモデルシステムの両方で炎症を解消するのに効果的であることが示されている。本発明者らは、外陰線維芽細胞および他の細胞において有効であることが証明された２つの処理レジメンのうちの１つを使用した：１）一晩の前処理、続いて炎症誘発性刺激による４８時間の刺激の３０分前に別の処理と、チャレンジ後２４時間でのＳＰＭの第３の投与、または２）炎症性刺激による３０分の前処理後にＳＰＭによる後処理、その後１８時間後のブースター投与。ＳＰＭは炎症過程全体を通して活性があるため、どちらの処理レジメンも興味深いものである。５－７ＬＰＶの発症後に投与されたＳＰＭでさえ、ＬＰＶの疼痛の悪化または拡大を防ぐ可能性がある。
【0079】
データは、試験された８つのＳＰＭ（３つのクラスからの）のうち、少なくとも４つが、前治療戦略を使用して関連する炎症誘発性刺激で処理されたヒト外陰線維芽細胞の疼痛に関連する炎症誘発性メディエーターを減少させるのに非常に効果的であることを示している。リポキシンＡ４、レゾルビンＤ２、マレシン１およびエピ－マレシン１は、前庭と外部外陰（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｖｕｌｖａｒ）の線維芽細胞の両方によるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２、図５Ａ）およびインターロイキン６（ＩＬ－６、図５Ｂ）の産生を有意に減少させた。しかしながら、レゾルビンＤ１、１７（Ｓ）－ＨＤＨＡ、リポキシンＢ４、およびＡＴ－レゾルビンＤ１は、初期試験では顕著な効果を示さなかった。マレシン１およびリポキシンＡ４もまた、治療後レジメンを使用して試験され、この戦略の下で、ＩＬ－６およびＰＧＥ２レベルの両方が有意に減少することが見出された（図５Ｃおよび５Ｄ）。
【0080】
次に、他のクラス（Ｅシリーズレゾルビンおよびプロスタグランジン）のＳＰＭ、およびＩＬ－６およびＰＧＥ２の産生を減少させるのに効果的なメンバーを含むクラス（マレシンなど）からの追加のＳＰＭを同様の選別で調査した。生きているＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ酵母、ザイモサン、ブラジキニン、およびＩＬ－１βはすべて、外陰線維芽細胞で炎症誘発性メディエーターの産生を誘発することが示されている、様々なクラスの炎症性活性化因子として使用できる。３，４，１３，１５炎症誘発性メディエーターのレベルは、ＥＬＩＳＡおよびＥＩＡアッセイを用いて測定した。少なくとも２つの試験で２つ以上の炎症誘発性メディエーターを減少させるのに効果的であったＳＰＭは、前臨床マウスモデルを使用してさらに試験するために調べることができる。いくつかのＳＰＭが炎症誘発性メディエーター産生の減少に有効であることを示す上記の裏付けとなる結果と一致して、発明者らは、前処理（図２３Ａおよび２３Ｂ）および後処理（図２４Ａおよび２４Ｂ）として非常に効果的ないくつかの追加のＳＰＭを特定した。これらの追加の効果的なＳＰＭには、レゾルビンＤ３、レゾルビンＤ４、レゾルビンＤ５、レゾルビンＥ１、プロテクチンＤ１、およびプロテクチンＤＸが含まれる。以下の実施例に示すように、さらなる試験の基準を満たすＳＰＭは、ＬＰＶのマウスモデルで疼痛と炎症のエンドポイントを減少させる能力について試験できる。
【0081】
この研究の前には、ＬＰＶに関連する炎症誘発性／疼痛促進性メディエーターを減少させるのに有効な治療薬は特定されていなかった。したがって、この研究は、ＬＰＶに関連するだけでなく、他の慢性炎症状態においても、過剰な炎症誘発性シグナル伝達を減少させる可能性のある潜在的な治療薬を特定する上で重要な前進を表している。
【0082】
実施例３
この実施例では、ＬＰＶのマウスモデルで疼痛と炎症のエンドポイントを減少させる能力について、いくつかのＳＰＭを試験する。ごく最近、ＬＰＶの最初の動物モデルが開発された。２４この元のモデルは、治療薬の前臨床試験には使用されていない。前臨床試験は、ＬＰＶに切実に必要とされている新しい効果的なＦＤＡ承認の治療法の開発に不可欠なステップである。２８、２９したがって、ヒトの臨床試験の前に使用できるヒトのＬＰＶを正確に反映する前臨床動物モデルに対する緊急の満たされていないニーズがある。この必要性と一致して、ＬＰＶのこの最適化されたマウスモデルは、強力な裏付けデータによって証明されるように、治療薬の前臨床試験のタスクに理想的である。
この実施例では、ＬＰＶのマウスモデルで疼痛と炎症のエンドポイントを減少させる能力について、いくつかのＳＰＭを試験する。ごく最近、ＬＰＶの最初の動物モデルが開発された。２４この元のモデルは、治療薬の前臨床試験には使用されていない。前臨床試験は、ＬＰＶに切実に必要とされている新しい効果的なＦＤＡ承認の治療法の開発に不可欠なステップである。２８、２９したがって、ヒトの臨床試験の前に使用できるヒトのＬＰＶを正確に反映する前臨床動物モデルに対する緊急の満たされていないニーズがある。この必要性と一致して、ＬＰＶのこの最適化されたマウスモデルは、強力な裏付けデータによって証明されるように、治療薬の前臨床試験のタスクに理想的である。
【0083】
ＳＰＭの構造と治療効果は種間で保存されているが、５－７発明者らは、マウスの外陰外植片（４ｍｍパンチ生検）を培養することにより、マウスの外陰組織がインビトロでＳＰＭ処理に応答することを最初に確認した。外植片を、ＩＬ－１βで刺激した後、確立した前処理レジメンの下でＰＧＥ２産生を減少させるマレシン１またはＲＶＤ２の能力を評価するためにアッセイを実施した。
【0084】
ＩＬ－１β処理後の増強されたＰＧＥ２応答は、１ｎＭという低い用量の範囲にわたってマレシン１またはＲｖＤ２で有意に抑制されることが見出された（図６）。これらの結果は、マウスの外陰がヒト線維芽細胞と同様にＳＰＭ処理に反応することを確認した。これらのマウスがいくつかのＳＰＭ受容体（例えば、ＡＬＸ、ＧＰＲ１８）を発現することも決定された。したがって、発明者らは、マウスモデルにおけるＳＰＭへの応答の試験を進めた。
【0085】
マウスモデルでは、ザイモサン（炎症誘発性酵母細胞壁調製物）を使用して、持続性外陰異痛症を誘発し、疼痛閾値試験によって測定した。発明者は当初、手動フォンフライ（ｖｏｎ Ｆｒｅｙ）システム（ＭｖＦ）２４を使用していたが、その後、本明細書に詳述するように電子システムに切り替えた。ＭｖＦは、正中線後部外陰（膣口と肛門の間）にある注射部位に適用したときに異なる力を発揮する、様々な太さ／剛性の一連の「ヘア（ｈａｉｒ）」を採用した（図７Ａ）。ヘアは、外陰表面に対して垂直に、０．１００ｇ～４．０ｇの範囲内で徐々に増加する力で適用された（図７Ｂ）。陽性反応は、外陰刺激に応答した、明確な反射、４つすべての四肢伸展、ジャンプ、または外陰の即時グルーミングのいずれかとして定義された。ＭｖＦ閾値を決定するために、「アップダウン法」に従った。３０異痛症の誘発中、マウスは、２週間の連続した試験で疼痛閾値の＞３３％の減少が観察されるまで、最大６回の注射で週１回、ザイモサン（１０μｌの生理食塩水中１０μｇ／ｍｌ）の注射を受ける（図７Ｃ）。疼痛の閾値試験は、ザイモサン注射の直前に、毎週同じ時間に実施され、注射の最初の２週間後、どのマウスが追加のザイモサン注射を受けるかを決定するために、疼痛試験後に閾値変化の決定が行われた。炎症誘発剤を含まない生理食塩水注射は、陰性対照として機能した。
【0086】
このアプローチを使用して、発明者らは、外陰異痛症を誘発し、機械的閾値決定を介して疼痛応答を測定し、治療応答を評価できることを確認した。ただし、発明者は、モデルの堅牢性を向上させるために、下記を含むいくつかの変更を実装した：１）遺伝的に扱いやすい近交系の使用、２）電子フォンフライ（ＥｖＦ）システムの使用の検証、３）疼痛応答における行動条件付けの影響の評価、４）炎症誘発性メディエーターの定量化のための外陰膣洗浄液の週１回の収集、および５）新しいモデルでの疼痛と炎症を調節する選択されたＳＰＭ（例えば、マレシン１）の能力を試験すること。これらの改善により、元のモデルの２つの重大な欠点が克服される：１）閾値のＭｖＦ決定には時間がかかり、試験ごとに１つの定量値しか生成されない。２）非近交系株を使用すると、遺伝子操作が防止され、研究のばらつきが大きくなる（元のモデル株は非近交系ＣＤ－１）。したがって、発明者らは、一般的に使用される２つの遺伝的に扱いやすいマウス系統、Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃを試験することを選択した。発明者は、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドならびにＣ５７ＢＬ／６マウス（例えば、マレシン）において実施例２で潜在的な疼痛／炎症解消剤として特定された試験の主要なＳＰＭにおいて、最大の成功を収めた。パイロット研究（図７Ｃ）と同じ実験設定を使用するが、ＭｖＦ測定をＭｏｕｓｅｍｅｔ ＥｖＦシステム（Ｔｏｐｃａｔ Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ）に置き換え、他の前述の変更を実装すると、毎週の疼痛試験が各Ｃ５７ＢＬ／６マウスに対し一貫した再現可能な値（５回の試行／マウスの平均）が生成されることがわかった（図８）。まとめると、本発明者らは、ザイモサンを投与されたマウスにおいて、膣のＰＧＥ２の増加を伴う、疼痛閾値の漸進的な低下を見た（図８）。１μｇ／マウス／日のマレシン１で４週間の毎日の処置を開始する前に、異痛症は、異痛症誘発後少なくとも５週間持続することが確認された（図８）。治療により、発明者らは、ＰＧＥ２レベルが抑制され、ベースラインより低いレベルに維持されている間、誘発前の閾値への完全な回復を見た（図９）。これらの印象的な結果は、１つ以上のＳＰＭが効果的であることを示唆している。
【0087】
実施例４
この実施例では、実施例３に記載されているように、ＬＰＶのマウスモデルを使用して、ＳＰＭ前駆体であるＤＨＡが疼痛および炎症性エンドポイントを減少させる能力を調査するためにアッセイを実施した。
この実施例では、実施例３に記載されているように、ＬＰＶのマウスモデルを使用して、ＳＰＭ前駆体であるＤＨＡが疼痛および炎症性エンドポイントを減少させる能力を調査するためにアッセイを実施した。
【0088】
合計３６匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスが、上記のプロトコルを使用して６週間の異痛症誘発を受けた。簡単に言えば、ザイモサンを使用して、持続性外陰異痛症を誘発し、疼痛閾値試験によって測定した。電子フォンフライシステム（ＭＯＵＳＥＭＥＴ（商標）、Ｔｏｐｃａｔ Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ）を使用して、正中線後部外陰（膣口と肛門の間）にある注射部位の外陰に徐々に増加する力を加えた（図７Ａ）。ヘアは、外陰表面に対して垂直に、０．１００ｇから７．０ｇの範囲内で徐々に増加する力で適用された（図７Ｂ）。陽性反応は、（１）反射的で協調的な四肢伸展、（２）ジャンプ、または（３）外陰刺激に応答した外陰の即時グルーミングのいずれかとして定義され、その時点でピーク力が記録された。
【0089】
異痛症の誘発中、マウスは、２週間の連続した試験で疼痛閾値の＞３３％の減少が観察されるまで、最大６回の注射で週１回ザイモサン（１０μｌ生理食塩水中１０ｍｇ／ｍｌ）の注射を受ける（図７Ｃ）。疼痛閾値試験は、ザイモサン注射の直前に、毎週同じ時間に実施され、注射の最初の２週間後、どのマウスが追加のザイモサン注射を受けるかを決定するために、疼痛試験後に閾値変化の決定が行われた。
【0090】
６週間の誘発後、合計３５匹のマウスが異痛症を発症し、以下の治療群に分けられた：ＤＨＡクリーム（１２匹のマウス）、プラセボクリーム（１２匹のマウス）、および模擬（ｍｏｃｋ）治療（１１匹のマウス）。ＤＨＡおよびプラセボクリームマウスは、月曜日から金曜日まで、綿棒を介して指定されたクリームの１日２回の局所塗布と、土曜日と日曜日に１日１回の塗布を合計６週間受けた。ホームケージに放出する前に、剃った領域全体をクリームの薄層でコーティングした。模擬治療を受けるマウスは、滅菌ＰＢＳで湿らせた綿棒で同じ外陰に同じ時間処置された。
【0091】
マウスは、２回の連続した疼痛試験で（６週間の異痛誘発段階の終わりに）それらの最低疼痛閾値から７０％超えて改善したとき、異痛症から「回復」したと判断された。６週間の治療後、各ＤＨＡおよびプラセボ群で９匹のマウスが回復し、模擬治療群で６匹のマウスが回復した（図１３）。「回復」が、ザイモサン注射前の疼痛前の閾値の少なくとも７０％である閾値として定義された場合にも、同じ結果が得られた。したがって、治療の終了時に、ＤＨＡ群とプラセボ群で回復したマウスの数に差はなかった。しかしながら、経時的な回復を見ると、発明者らは、ＤＨＡとプラセボクリームとの間の一時的な治療の違いを見た（図１３）。ＤＨＡクリーム群のマウスは治療の最初の２週間で回復し始めたが、プラセボクリーム群では１匹のマウスしか回復せず、プラセボクリーム群がＤＨＡクリーム群に追いつくまでに３～４週間かかった。全体として、模擬群で回復したマウスは少なかったが、約４週間で回復の証拠が見られ始め、これは、モデルの自然な疼痛の解消を反映している可能性がある。
【0092】
これらの結果と相関して、最初の２週間はＤＨＡ群の方が改善率スコアが高かったのに対し、３週目では改善率スコアに差がないことがわかった（図１４）。模擬マウスの改善率スコアは、ＤＨＡまたはプラセボ群いずれかのスコアよりも低い傾向があった。
【0093】
本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける疼痛閾値および外陰膣ＰＧＥ２のレベルとの間の関連を確立した。膣ＰＧＥ２レベルが高いほど、より高い疼痛感受性が予測される。そのような発見は、ヒトの研究からの結果と一致している。培養された初代ヒト外陰線維芽細胞株によって産生されるＰＧＥ２のレベルは、線維芽細胞は、生検によって収集し、そこから部位で疼痛閾値を予測することができる。本発明者らは、誘発段階および治療段階を通して、生きているマウスに対して週１回外陰膣洗浄を実施し、ＰＧＥ２のレベルが、ザイモサン誘発前では最初は低かったが、ザイモサン注射で急激に上昇し、一連の注射の４週目でピークに達することを見出した（図１５）。これらのレベルは治療前は維持されていたが、その後急速に低下し、プラセボ群とＤＨＡ群では低いままであった。しかしながら、ＤＨＡ群とプラセボ群との間にＰＧＥ２のレベルに有意差はなかった。以前の実験と一致して、ほとんどの外陰膣洗浄液でＩＬ－６レベルが低いか検出できないこともわかった。
【0094】
全体として、ＤＨＡとプラセボ（クリームのみ）は両方とも、６週間の治療コース全体の後に外陰疼痛の結果を同程度に改善した。ただし、ＤＨＡはプラセボよりも迅速に疼痛の結果を改善し、両方とも模擬治療を上回った。プラセボクリームには、鎮静（ｓｏｏｔｈｉｎｇ）作用または保湿作用のある長鎖アルコールと脂肪酸が含まれている。したがって、プラセボ群の改善はまったく驚くべきことではない。将来の試験でこれらの化合物の濃度を下げることは、ＤＨＡ特有の効果の検出を強化するのに役立つ可能性がある。これらの結果は、ＤＨＡクリームがヒトの外陰疼痛を軽減するのに効果的であることを示唆している。
【0095】
実施例５
この実施例では、上記のＬＰＶのマウスモデルを使用して、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）と追加の特異的炎症収束性メディエーター（ＳＰＭ）前駆体分子（１４－ＨＤＨＡ、１７－ＨＤＨＡ、および１８－ＨＥＰＥ）を含む混合物が、疼痛および炎症性エンドポイントを減少させる能力を調査するためにアッセイを実施した。
この実施例では、上記のＬＰＶのマウスモデルを使用して、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）と追加の特異的炎症収束性メディエーター（ＳＰＭ）前駆体分子（１４－ＨＤＨＡ、１７－ＨＤＨＡ、および１８－ＨＥＰＥ）を含む混合物が、疼痛および炎症性エンドポイントを減少させる能力を調査するためにアッセイを実施した。
【0096】
合計５２匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、上記のプロトコルを使用して４週間の異痛症誘発に供した。簡単に言えば、ザイモサン（炎症誘発性酵母細胞壁調製物）を使用して、持続性外陰異痛症を誘発し、疼痛閾値試験によって測定した。電子フォンフライシステム（Ｍｏｕｓｅｍｅｔ、Ｔｏｐｃａｔ Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ）を使用して、正中線後部外陰（膣開口部と肛門の間）にある注射部位の外陰部に徐々に増加する力を加えた（図７Ａ）。ヘアは、外陰表面に対して垂直に、０．１００ｇから７．０ｇの範囲内で徐々に増加する力で適用された（図７Ｂ）。陽性反応は、（１）明確な反射、４つすべての四肢伸展、（２）ジャンプ、または（２）外陰刺激に応答した外陰の即時グルーミングのいずれかとして定義され、その時点でピーク力が記録される。異痛症の誘発中、マウスは週１回ザイモサン（１０μｌ生理食塩水中１０ｍｇ／ｍｌ）の注射を受け、合計４回注射される。毎週の閾値が決定されたが、４回目の注射後にのみ、どのマウスが段階２（薬物試験）を継続するかが決定された。２週間の連続した試験で疼痛閾値の＞３３％の減少（＋／－０．５ｇ重）を示したマウスは、段階２に移行した。疼痛閾値試験は、ザイモサン注射の直前に、毎週同じ時間に実施された。４回目の注射後、マウスは、段階２に入る基準を満たしているかどうかを判断するために、最終ラウンドの閾値テスト（５週目）を受けた。
【0097】
４週間の誘発後、合計４８匹のマウスが異痛症を発症し、以下の治療群に分けられた：リピノバ（ＬＩＰＩＮＯＶＡ）クリーム高用量（１．９体積％リピノバ、１２匹のマウス）、リピノバ低用量（０．７体積％リピノバ、１２匹のマウス）、プラセボ（リピノバを含まないベースクリーム、１１匹のマウス）、および模擬治療（生理食塩水で湿らせた綿棒、１１匹のマウス）。リピノバ（ＬＩＰＩＮＯＶＡ）は、高度精製の魚油製品で、約４０体積％のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）と、追加の特異的炎症収束性メディエーター（ＳＰＭ）前駆体分子（１４－ＨＤＨＡ、１７－ＨＤＨＡ、および１８－ＨＥＰＥ）を含む。マウスは、月曜日から金曜日まで指定されたクリームの１日２回の局所塗布と、土曜日と日曜日の１日１回の塗布を合計４週間受けた。マウスは綿棒を介して約１５秒間クリームの塗布を受けた。ホームケージに放出する前に、剃った領域全体をクリームの薄層でコーティングした。模擬治療を受けるマウスは、滅菌ＰＢＳで湿らせた綿棒で同じ時間処置された。マウスは、２回の連続した疼痛試験でそれらの閾値が疼痛誘発前のベースラインの６６％（＋／－０．５ｇ重）に戻ったときに、異痛症から「回復」したと判断された。４週間の治療後、リピノバ高用量群では８匹のマウスが回復した（６７％）が、低用量群では２匹のマウスだけが回復した（１７％）（図１６）。模擬治療群のマウスは４週間以内に回復しなかったが、プラセボ群では１匹のマウスが回復した（９％）。リピノバ高用量群のマウスは着実な回復を示し、毎週数匹の追加のマウスが回復したが、低用量では、２匹のマウスが早期に回復したが（２週目）、４週目までに追加のマウスは回復しなかった。これらのデータは、回復がリピノバの用量によって影響を受け、より高い用量がより効果的であることを示唆しており、一方、プラセボおよび模擬治療はほとんど効果がなかった。プラセボで回復したマウスが１匹いたが、これはベースクリームの保湿剤に起因する可能性がある。
【0098】
時間の経過に伴う改善率など、追加の測定値を使用して治療の効果を評価した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。改善率は、最後の治療前の疼痛の閾値（段階１の最終週）に対する毎週の閾値の増加率として計算された。図１７Ａでは、データを、群内のすべてのマウスの平均回復率（＋／－ＳＥＭ）としてグラフ化した。各マウスの回復率を決定し、群全体の値を平均した。リピノバ高用量治療群のマウスは、他の群と比較して、毎週一貫して高い回復率スコアを示した。リピノバ低用量のスコアは対照（模擬およびプラセボ）と比較してほとんど差がなかったが、３週目では、低リピノバ群の回復率スコアが対照よりも高リピノバ群に近かった。図１７Ｂでは、同じデータが箱ひげ図としてグラフ化されており、各ドットは個々のマウスの値を表している。繰り返しになるが、このデータは、回復率スコアが高リピノバ群で平均して高いことを示している。このグラフは、４週目に、高リピノバ中央値に類似した模擬群中央値が、その週のみで特に高い改善率スコアを有する２匹のマウスによって歪められていることを示している。全体として、このデータは、高用量のリピノバによる治療が疼痛閾値スコアの改善に最も効果的であることを示している。
【0099】
疼痛閾値はまた、段階１における疼痛誘発前の元のベースラインのパーセントとしてグラフ化された（図１８Ａおよび１８Ｂ）。個々のベースライン値のパーセントを使用して、各マウスの回復を決定した（図１６）。図１８Ａでは、これらの値は、各群の平均（＋／－ＳＥＭ）としてグラフ化された。この場合も、このデータは、リピノバの高用量が、リピノバの低用量を含む他の治療を一貫して上回っていることを示している。４週目までに、高リピノバ群のみが群の６６％パーセントの回復閾値を超え、これはマウスの大部分が４週目までに回復した（６７％）という観察による可能性がある。図１８Ｂの箱ひげ図では、パーセントベースラインスコアが、高リピノバ群のマウスについて一貫して高いことが明らかである。４週目に、模擬群の中央値は高リピノバ群の中央値に近づいたが、これも、その週に特に高い閾値スコアを有する２匹のマウスに起因する可能性がある。
【0100】
実施例６
この実施例では、上記の実施例５で試験したマウスを、上記の方法で１７週間、疼痛と炎症のエンドポイントを減少させるリピノバの効果についてさらに調べた。
この実施例では、上記の実施例５で試験したマウスを、上記の方法で１７週間、疼痛と炎症のエンドポイントを減少させるリピノバの効果についてさらに調べた。
【0101】
異痛症を発症した合計４６匹のマウスを以下の治療群に分けた：リピノバ高用量（１．９％）クリーム（１２匹のマウス）、リピノバ低用量（０．７％）クリーム（１２匹のマウス）、プラセボクリーム（１１匹のマウス）、および模擬治療（１１匹のマウス）。リピノバおよびプラセボで治療したマウスは、月曜日から金曜日まで綿棒を介して指定されたクリームを１日２回局所塗布と、土曜日と日曜日に１日１回塗布を合計６週間受けた。ホームケージに放出する前に、剃った領域全体をクリームの薄層でコーティングした。模擬治療を受けるマウスは、滅菌ＰＢＳで湿らせた綿棒で同じ外陰に同じ時間処置された。
【0102】
６週間の治療後、治療を中止し、マウスをさらに７週間モニターして、回復が持続したかどうかを決定した。これらの７週間の終わりに、プラセボ群のマウスはプラセボ治療を再開し、模擬群のマウスは１．９％リピノバと１％プラモキシンの併用療法を受けた。マウスはさらに３週間続けられ、その時点で、マウスの大部分が自然に回復したため、試験は中止された。
【0103】
マウスは、２回の連続した疼痛試験でそれらの疼痛前のベースライン閾値の少なくとも７０％に戻ったときに、異痛症から「回復」したと判断された。６週間の治療後、１１匹のマウスがリピノバ高用量群で回復したが、他の群で２匹のマウスだけが回復した（図１９）。「回復」を最低の疼痛の閾値（治療前の最後の疼痛の閾値）を少なくとも７０％改善すると定義した場合にも、同じ結果が得られた。
【0104】
段階３での治療効果の寿命を評価したところ（図１９）、発明者らは、高リピノバ群で治療効果が７週間以上持続することを発見したが、低用量群、模擬群、およびプラセボ群でさらなる回復を見続けた。注目すべきことに、低リピノバ群は、模擬群およびプラセボ群と比較して回復の強化を示し、低用量のリピノバは自然回復を促進するのに役立つ可能性があるが、マウスは高用量を投与されたマウスほど迅速かつ完全には回復しない。
【0105】
本発明者らはまた、追加の治療法（高用量のリピノバと１％のプラモキシンの組み合わせ）を試験するために第４段階を追加することを試みた。残念ながら、この時点でマウスは自然に回復し始めた。最終的に、本発明者らは、異痛症がマウスにおいて約２０週間持続する可能性があり、治療への適用および治療中止の効果の両方を試験するための適切な手段（ｗｉｎｄｏｗ）を与えることを見出した。
【0106】
これらの結果と相関して、本発明者らは、ベースラインスコアのパーセントが、治療期間中およびそれ以降、他のどの群よりもリピノバ高用量群で高かったことを見出した（図２０）。治療中、模擬群とプラセボ群のスコアは類似しており、プラセボによる強い影響がないことを示している。
【0107】
本発明者らは、同じ閾値データを調べる別の方法である改善率スコア（図２１）を使用してデータを評価したときに、非常に類似した結果を発見した。この測定値は、開始点（疼痛誘発前）との関連性ではなく、最低スコアに対する改善に注目する。患者の現在の疼痛を評価することはできるが、患者のベースラインが何であるかを必ずしも判断できるとは限らないため、この測定基準は臨床的に意味がある可能性がある。
【0108】
本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける疼痛閾値と外陰膣ＰＧＥ２レベルとの間の関連を確立した。膣ＰＧＥ２レベルが高いほど、より高い疼痛感受性が予測される。そのような発見は、ヒトの研究からの結果と一致していた。培養された初代ヒト外陰線維芽細胞株によって産生されるＰＧＥ２のレベルは、線維芽細胞は、生検によって収集し、そこから部位で疼痛閾値を予測することができる。本発明者らは、誘発および治療期間を通して生きているマウスに対して週１回外陰膣洗浄を実施し、ＰＧＥ２レベルが、ザイモサン誘発前では最初は低かったが、ザイモサン注射で急激に上昇し、一連の注射の３週目でピークに達することを見出した（図２２）。その後、これらのレベルは治療とともに時間とともに減退した。しかしながら、これらのレベルでリピノバ高用量群で低くなる傾向があることを観察したにもかかわらず、治療群間のＰＧＥ２レベルに有意差はなかった、
【0109】
全体として、リピノバは１．９％の高用量で、外陰疼痛の転帰を改善し、６週間以内にマウスを疼痛前の閾値に戻すことができる。しかしながら、治療とＰＧＥ２の外陰膣レベルの減少との間には強い相関関係が存在しない。高用量治療ではレベルが低くなる可能性があることを示唆する傾向があるが、統計的に有意ではない。治療段階では、対照群または低用量のリピノバに有意な改善はなく、これらの各群で回復したのは２匹のマウス（＜２０％）だけであった。ただし、リピノバ低用量群は、中止段階でプラセボ群および模擬群よりも早く回復した。要するに、これらの結果は、リピノバが外陰部痛のマウスモデルにおける炎症の消散を促進し、疼痛を軽減するのに効果的であることを示唆している。
【0110】
要約すると、高用量のリピノバ（１．９％）は、月曜日から金曜日に１日２回、土曜日と日曜日に１日１回、局所塗布を受けたマウスのザイモサン誘発性外陰疼痛を劇的に軽減した。この治療は、低用量のリピノバ（０．７％）または対照（プラセボおよび模擬）よりも効果的であった。同じ時点での他の群の＜１７％の回復と比較して、１．９％のリピノバ（１１／１２、９２％）を投与されたほぼすべてのマウスは、５週間の治療で回復した。時間の経過とともに、低用量リピノバ群（０．７％）のマウスは、特に中止期間中に、プラセボまたは模擬治療マウスと比較して回復の強化を示した。リピノバ治療の効果は、治療中止後８週間以上持続した。ＰＧＥ２レベルは、外陰疼痛の閾値と逆相関しており、より高いＰＧＥ２レベルは、より低い疼痛閾値に対応し、より大きな疼痛感受性が予測された。治療により、閾値が回復し、疼痛の感受性が低下するにつれて、ＰＧＥ２レベルは、時間の経過とともに低下した。ただし、１．９％リピノバ群ではわずかに低い値であったにもかかわらず、治療群間で有意差は見られなかった。これらの結果は、リピノバクリームがヒトの外陰疼痛を軽減するのに非常に効果的であることを示唆している。
【0111】
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２３．Ｄｏｎｄｅｒｓ，Ｇ；Ｂｅｌｌｅｎ，Ｇ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｉｎ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｃａｌ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＶＶＳ）．Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ ２０１２，ｖｏｌ．７８，ｐｐ．１１－４，ＰＭＩＤ：２２０４１０５２，ＰＭＣＩＤ：
２４．Ｆａｒｍｅｒ，ＭＡ；Ｔａｙｌｏｒ，ＡＭ；Ｂａｉｌｅｙ，ＡＬ；Ｔｕｔｔｌｅ，ＡＨ；ＭａｃＩｎｔｙｒｅ，ＬＣ；Ｍｉｌａｇｒｏｓａ，ＺＥ；Ｃｒｉｓｓｍａｎ，ＨＰ；Ｂｅｎｎｅｔｔ，ＧＪ；Ｒｉｂｅｉｒｏ－ｄａ－Ｓｉｌｖａ，Ａ；Ｂｉｎｉｋ，ＹＭ；Ｍｏｇｉｌ，ＪＳ．Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌ ｆｕｎｇａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｃａｕｓｅ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｐａｉｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１１，ｖｏｌ．３，ｐ １０１ｒａ９１，ＰＭＩＤ：２１９３７７５６，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３２４３９０７．
２５．Ｂｅｒｇｅｒｏｎ，Ｓ；Ｂｉｎｉｋ，ＹＭ；Ｋｈａｌｉｆｅ，Ｓ；Ｐａｇｉｄａｓ，Ｋ；Ｇｌａｚｅｒ，ＨＩ．Ｖｕｌｖａｒ ｖｅｓｔｉｂｕｌｉｔｉｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ．Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２００１，ｖｏｌ．９８，ｐｐ．４５－５１，ＰＭＩＤ：１１４３０９５５，ＰＭＣＩＤ：
２６．Ｅｄｗａｒｄｓ，ＲＲ；Ｄｏｌｅｙｓ，ＤＭ；Ｆｉｌｌｉｎｇｉｍ，ＲＢ；Ｌｏｗｅｒｙ，Ｄ．Ｅｔｈｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｐａｉｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐａｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ Ｍｅｄ ２００１，ｖｏｌ．６３，ｐｐ．３１６－２３，ＰＭＩＤ：１１２９２２８１，ＰＭＣＩＤ：
２７．Ｗｏｌｆ，Ｊ；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ；Ａｒｎｏｌｄ，ＣＲ；Ｍａｉｅｒ，ＡＢ；Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｐ，ＲＧ；Ｇｒｕｂｅｃｋ－Ｌｏｅｂｅｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｅｘｐ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ ２０１２，ｖｏｌ．４７，ｐｐ．７４９－５３，ＰＭＩＤ：２２７９００１９，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３４２７８５１．
２８．Ｂｒｏｗｎ，ＣＳ；Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｗａｎ，ＪＹ；Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ，ＬＡ；Ｂａｃｈｍａｎｎ，ＧＡ；Ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ Ｓｔｕｄｙ，Ｇ．Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ ｉｎ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｃｏｎｔｅｍｐ Ｃｌｉｎ Ｔｒｉａｌｓ ２０１３，ｖｏｌ．３６，ｐｐ．１５４－６５，ＰＭＩＤ：２３８１６４９１，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３７７９０７１．
２９．Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｋｏｔｏｋ，ＭＢ；Ｈｕａｎｇ，ＬＳ；Ｗａｔｔｓ，Ａ；Ｏａｋｅｓ，Ｄ；Ｈｏｗａｒｄ，ＦＭ；Ｐｏｌｅｓｈｕｃｋ，ＥＬ；Ｓｔｏｄｇｅｌｌ，ＣＪ；Ｄｗｏｒｋｉｎ，ＲＨ．Ｏｒａｌ ｄｅｓｉｐｒａｍｉｎｅ ａｎｄ ｔｏｐｉｃａｌ ｌｉｄｏｃａｉｎｅ ｆｏｒ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ２０１０，ｖｏｌ．１１６，ｐｐ．５８３－９３，ＰＭＩＤ：２０７３３４３９，ＰＭＣＩＤ：
３０．Ｃｈａｐｌａｎ，ＳＲ；Ｂａｃｈ，ＦＷ；Ｐｏｇｒｅｌ，ＪＷ；Ｃｈｕｎｇ，ＪＭ；Ｙａｋｓｈ，ＴＬ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔａｃｔｉｌｅ ａｌｌｏｄｙｎｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｐａｗ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９４，ｖｏｌ．５３，ｐｐ．５５－６３，ＰＭＩＤ：７９９０５１３，ＰＭＣＩＤ：
３１．Ｂａｇｌｏｌｅ，ＣＪ；Ｍａｇｇｉｒｗａｒ，ＳＢ；Ｇａｓｉｅｗｉｃｚ，ＴＡ；Ｔｈａｔｃｈｅｒ，ＴＨ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ；Ｓｉｍｅ，ＰＪ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｍｏｋｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ ＲｅｌＢ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００８，ｖｏｌ．２８３，ｐｐ．２８９４４－５７，ＰＭＩＤ：１８６９７７４２，ＰＭＣＩＤ：２５７０８５６
３２．Ｃｏｌｕｃｃｉ，Ｍ；Ｍａｉｏｎｅ，Ｆ；Ｂｏｎｉｔｏ，ＭＣ；Ｐｉｓｃｏｐｏ，Ａ；Ｄｉ Ｇｉａｎｎｕａｒｉｏ，Ａ；Ｐｉｅｒｅｔｔｉ，Ｓ．Ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｏｆ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｐｈｏｘｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ（ＤＭＳＯ）ｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ ２００８，ｖｏｌ．５７，ｐｐ．４１９－２５，ＰＭＩＤ：１８５０８２７８，ＰＭＣＩＤ：
３３．Ｇａｌｅｒ，ＢＳ．Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＰＥＮＮＳＡＩＤ（Ｒ） ａｎｄ Ｖｏｌｔａｒｅｎ Ｇｅｌ（Ｒ），ｔｗｏ ｔｏｐｉｃａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ ｓｏｄｉｕｍ．Ｐａｉｎ Ｐｒａｃｔ ２０１１，ｖｏｌ．１１，ｐｐ．２５２－６０，ＰＭＩＤ：２０８５４３０５，ＰＭＣＩＤ：
３４．Ｘｉｅ，Ｙ；Ｓｈｉ，Ｌ；Ｘｉｏｎｇ，Ｘ；Ｗｕ，Ｅ；Ｖｅａｓｌｅｙ，Ｃ；Ｄａｄｅ，Ｃ．Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｂｕｒｄｅｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ．Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｏｐｉｎ ２０１２，ｖｏｌ．２８，ｐｐ．６０１－８，ＰＭＩＤ：２２３５６１１９，ＰＭＣＩＤ：
１．Ｓａｄｏｗｎｉｋ，ＬＡ．Ｅｔｉｏｌｏｇｙ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ．Ｉｎｔ Ｊ Ｗｏｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈ ２０１４，ｖｏｌ．６，ｐｐ．４３７－４９，ＰＭＩＤ：２４８３３９２１，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４０１４３５８．
２．Ｈａｅｆｎｅｒ，ＨＫ；Ｃｏｌｌｉｎｓ，ＭＥ；Ｄａｖｉｓ，ＧＤ；Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｌ；Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｈａｒｔｍａｎｎ，ＥＤ；Ｋａｕｆｍａｎ，ＲＨ；Ｌｙｎｃｈ，ＰＪ；Ｍａｒｇｅｓｓｏｎ，ＬＪ；Ｍｏｙａｌ－Ｂａｒｒａｃｃｏ，Ｍ；Ｐｉｐｅｒ，ＣＫ；Ｒｅｅｄ，ＢＤ；Ｓｔｅｗａｒｔ，ＥＧ；Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，ＥＪ．Ｔｈｅ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｏｗｅｒ Ｇｅｎｉｔａｌ Ｔｒａｃｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ２００５，ｖｏｌ．９，ｐｐ．４０－５１，ＰＭＩＤ：１５８７０５２１，ＰＭＣＩＤ：
３．Ｆａｌｓｅｔｔａ，ＭＬ；Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｗｏｅｌｌｅｒ，ＣＦ；Ｐｏｌｌｏｃｋ，ＳＪ；Ｂｏｎｈａｍ，ＡＤ；Ｈａｉｄａｒｉｓ，ＣＧ；Ｓｔｏｄｇｅｌｌ，ＣＪ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｐａｉｎ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．２１３，ｐｐ．３８ ｅ１－１２，ＰＭＩＤ：２５６８３９６３，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４４８５６０５．
４．Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｆａｌｓｅｔｔａ，ＭＬ；Ｗｏｅｌｌｅｒ，ＣＦ；Ｐｏｌｌｏｃｋ，ＳＪ；Ｓｏｎｇ，Ｋ；Ｂｏｎｈａｍ，Ａ；Ｈａｉｄａｒｉｓ，ＣＧ；Ｓｔｏｄｇｅｌｌ，ＣＪ；Ｍｅｓｓｉｎｇ，ＳＰ；Ｉａｄａｒｏｌａ，Ｍ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ．Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｉｎ ｔｏ ｙｅａｓｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ－ａｆｆｌｉｃｔｅｄ ａｎｄ ｐａｉｎ－ｆｒｅｅ ｗｏｍｅｎ．Ｐａｉｎ ２０１５，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．３８６－９６，ＰＭＩＤ：２５６７９４６９，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４３７８５２９．
５．Ｂｕｃｋｌｅｙ，ＣＤ；Ｇｉｌｒｏｙ，ＤＷ；Ｓｅｒｈａｎ，ＣＮ；Ｓｔｏｃｋｉｎｇｅｒ，Ｂ；Ｔａｋ，ＰＰ．Ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３，ｖｏｌ．１３，ｐｐ．５９－６６，ＰＭＩＤ：２３１９７１１１，ＰＭＣＩＤ：
６．Ｓｅｒｈａｎ，ＣＮ；Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ；Ｄａｌｌｉ，Ｊ．Ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｄｅ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ ｌｉｐｉｄ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．２７，ｐｐ．２００－１５，ＰＭＩＤ：２５８５７２１１，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４５１５３７１．
７．Ｓｅｒｈａｎ，ＣＮ；Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ；Ｄａｌｌｉ，Ｊ；Ｌｅｖｙ，ＢＤ．Ｌｉｐｉｄ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．７，ｐ ａ０１６３１１，ＰＭＩＤ：２５３５９４９７，ＰＭＣＩＤ：
８．Ｈａｒｌｏｗ，ＢＬ；Ｋｕｎｉｔｚ，ＣＧ；Ｎｇｕｙｅｎ，ＲＨ；Ｒｙｄｅｌｌ，ＳＡ；Ｔｕｒｎｅｒ，ＲＭ；ＭａｃＬｅｈｏｓｅ，ＲＦ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ：ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｆｒｏｍ ２ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１４，ｖｏｌ．２１０，ｐｐ．４０ ｅ１－８，ＰＭＩＤ：２４０８０３００，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３８８５１６３．
９．Ｃｕｉ，ＪＧ；Ｈｏｌｍｉｎ，Ｓ；Ｍａｔｈｉｅｓｅｎ，Ｔ；Ｍｅｙｅｒｓｏｎ，ＢＡ；Ｌｉｎｄｅｒｏｔｈ，Ｂ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｔａｃｔｉｌｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｍｏｎｏｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｐａｉｎ ２０００，ｖｏｌ．８８，ｐｐ．２３９－４８，ＰＭＩＤ：１１０６８１１１，ＰＭＣＩＤ：
１０．Ｌｉｎ，ＣＲ；Ａｍａｙａ，Ｆ；Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｌ；Ｗａｎｇ，Ｈ；Ｔａｋａｄａ，Ｊ；Ｓａｍａｄ，ＴＡ；Ｗｏｏｌｆ，ＣＪ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＥＰ４ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｉｎ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２００６，ｖｏｌ．３１９，ｐｐ．１０９６－１０３，ＰＭＩＤ：１６９６６４７１，ＰＭＣＩＤ：
１１．Ａｋｏｐｉａｎｓ，ＡＬ；Ｒａｐｋｉｎ，ＡＪ．Ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ：Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｌｏｃａｌｉｚｅｄ Ｐｒｏｖｏｋｅｄ Ｐａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｖｕｌｖａｒ Ｖｅｓｔｉｂｕｌｅ （Ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ）．Ｓｅｍｉｎ Ｒｅｐｒｏｄ Ｍｅｄ ２０１５，ｖｏｌ．３３，ｐｐ．２３９－４５，ＰＭＩＤ：２６１３２９２８，ＰＭＣＩＤ：
１２．Ｂａｋｅｒ，ＤＡ；Ｐｅｒｅｓｌｅｎｉ，Ｔ；Ｋｏｃｉｓ，Ｃ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ［４］．Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１６，ｖｏｌ．１２７ Ｓｕｐｐｌ １，ｐｐ．１Ｓ－２Ｓ，ＰＭＩＤ：２７１７６１５８，ＰＭＣＩＤ：
１３．Ｆａｌｓｅｔｔａ，ＭＬ；Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｗｏｅｌｌｅｒ，ＣＦ；Ｐｏｌｌｏｃｋ，ＳＪ；Ｂｏｎｈａｍ，ＡＤ；Ｈａｉｄａｒｉｓ，ＣＧ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ．Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｖｕｌｖａｒ ｐａｉｎ．Ｊ Ｐａｉｎ ２０１６，ＰＭＩＤ：２７５４４８１８，ＰＭＣＩＤ：
１４．Ｌｅｃｌａｉｒ，Ｎ；Ｔｈｏｒｍｅｒ，Ｇ；Ｓｏｒｇｅ，Ｉ；Ｒｉｔｔｅｒ，Ｌ；Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｖ；Ｈｉｒｓｃｈ，ＦＷ．Ｗｈｏｌｅ－Ｂｏｄｙ Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ－Ｗｅｉｇｈｔｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ Ｏｓｔｅｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１６，ｖｏｌ．１１，ｐ ｅ０１４７５２３，ＰＭＩＤ：２６７９９９７０，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４７２３０７２．
１５．Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｐｉｅｋａｒｚ，ＫＨ；Ｍｕｒａｎｔ，ＴＩ；ＬａＰｏｉｎｔ，Ｒ；Ｈａｉｄａｒｉｓ，ＣＧ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｂｙ ｖｕｌｖａｒ ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｖｕｌｖａｒ ｖｅｓｔｉｂｕｌｉｔｉｓ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２００７，ｖｏｌ．１９６，ｐｐ．３４６ ｅ１－８，ＰＭＩＤ：１７４０３４１６，ＰＭＣＩＤ：
１６．Ｍｏｒｇａｎ，ＴＫ；Ａｌｌｅｎ－Ｂｒａｄｙ，ＫＬ；Ｍｏｎｓｏｎ，ＭＡ；Ｌｅｃｌａｉｒ，ＣＭ；Ｓｈａｒｐ，ＨＴ；Ｃａｎｎｏｎ－Ａｌｂｒｉｇｈｔ，ＬＡ．Ｆａｍｉｌｉａｌｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｖｅｓｔｉｂｕｌｅｃｔｏｍｙ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１６，ｖｏｌ．２１４，ｐｐ．６０９ ｅ１－７，ＰＭＩＤ：２６６２７７２６，ＰＭＣＩＤ：
１７．Ｔｏｍｍｏｌａ，Ｐ；Ｂｕｔｚｏｗ，Ｒ；Ｕｎｋｉｌａ－Ｋａｌｌｉｏ，Ｌ；Ｐａａｖｏｎｅｎ，Ｊ；Ｍｅｒｉ，Ｓ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｓｔｉｂｕｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１５，ｖｏｌ．２１２，ｐｐ．４７６ ｅ１－８，ＰＭＩＤ：２５４４８５１６，ＰＭＣＩＤ：
１８．Ｔｏｍｍｏｌａ，Ｐ；Ｕｎｋｉｌａ－Ｋａｌｌｉｏ，Ｌ；Ｐａｅｔａｕ，Ａ；Ｍｅｒｉ，Ｓ；Ｋａｌｓｏ，Ｅ；Ｐａａｖｏｎｅｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ．Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１６，ＰＭＩＤ：２７４５７１１８，ＰＭＣＩＤ：
１９．Ｃａｓｓｏｎｅ，Ａ．Ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．ＢＪＯＧ ２０１５，ｖｏｌ．１２２，ｐｐ．７８５－９４，ＰＭＩＤ：２５０５２２０８，ＰＭＣＩＤ：
２０．Ｄａｖｉｅｓ，Ｓ；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅ；Ｗｈｉｔｅ，Ｄ．Ｈｏｗ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｖａｇｉｎａｌ ｙｅａｓｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｕｅ ｔｏ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｔｈｅｒ ｔｈａｎ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ．Ｓｅｘ Ｔｒａｎｓｍ Ｉｎｆｅｃｔ ２０１３，ｖｏｌ．８９，ｐｐ．１６５－６，ＰＭＩＤ：２３１８０８６１，ＰＭＣＩＤ：
２１．Ｇｉｒａｌｄｏ，Ｐ；ｖｏｎ Ｎｏｗａｓｋｏｎｓｋｉ，Ａ；Ｇｏｍｅｓ，ＦＡ；Ｌｉｎｈａｒｅｓ，Ｉ；Ｎｅｖｅｓ，ＮＡ；Ｗｉｔｋｉｎ，ＳＳ．Ｖａｇｉｎａｌ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎ ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌ ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ．Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０００，ｖｏｌ．９５，ｐｐ．４１３－６，ＰＭＩＤ：１０７１１５５４，ＰＭＣＩＤ：
２２．Ｈａｒｒｉｏｔｔ，ＭＭ；Ｌｉｌｌｙ，ＥＡ；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，ＴＥ；Ｆｉｄｅｌ，ＰＬ，Ｊｒ．；Ｎｏｖｅｒｒ，ＭＣ．Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ｆｏｒｍｓ ｂｉｏｆｉｌｍｓ ｏｎ ｔｈｅ ｖａｇｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．３６３５－４４，ＰＭＩＤ：２０７０５６６７，ＰＭＣＩＤ：３０６８７０２．
２３．Ｄｏｎｄｅｒｓ，Ｇ；Ｂｅｌｌｅｎ，Ｇ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｉｎ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｃａｌ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＶＶＳ）．Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ ２０１２，ｖｏｌ．７８，ｐｐ．１１－４，ＰＭＩＤ：２２０４１０５２，ＰＭＣＩＤ：
２４．Ｆａｒｍｅｒ，ＭＡ；Ｔａｙｌｏｒ，ＡＭ；Ｂａｉｌｅｙ，ＡＬ；Ｔｕｔｔｌｅ，ＡＨ；ＭａｃＩｎｔｙｒｅ，ＬＣ；Ｍｉｌａｇｒｏｓａ，ＺＥ；Ｃｒｉｓｓｍａｎ，ＨＰ；Ｂｅｎｎｅｔｔ，ＧＪ；Ｒｉｂｅｉｒｏ－ｄａ－Ｓｉｌｖａ，Ａ；Ｂｉｎｉｋ，ＹＭ；Ｍｏｇｉｌ，ＪＳ．Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌ ｆｕｎｇａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｃａｕｓｅ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｐａｉｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１１，ｖｏｌ．３，ｐ １０１ｒａ９１，ＰＭＩＤ：２１９３７７５６，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３２４３９０７．
２５．Ｂｅｒｇｅｒｏｎ，Ｓ；Ｂｉｎｉｋ，ＹＭ；Ｋｈａｌｉｆｅ，Ｓ；Ｐａｇｉｄａｓ，Ｋ；Ｇｌａｚｅｒ，ＨＩ．Ｖｕｌｖａｒ ｖｅｓｔｉｂｕｌｉｔｉｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ．Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２００１，ｖｏｌ．９８，ｐｐ．４５－５１，ＰＭＩＤ：１１４３０９５５，ＰＭＣＩＤ：
２６．Ｅｄｗａｒｄｓ，ＲＲ；Ｄｏｌｅｙｓ，ＤＭ；Ｆｉｌｌｉｎｇｉｍ，ＲＢ；Ｌｏｗｅｒｙ，Ｄ．Ｅｔｈｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｐａｉｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐａｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ Ｍｅｄ ２００１，ｖｏｌ．６３，ｐｐ．３１６－２３，ＰＭＩＤ：１１２９２２８１，ＰＭＣＩＤ：
２７．Ｗｏｌｆ，Ｊ；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ；Ａｒｎｏｌｄ，ＣＲ；Ｍａｉｅｒ，ＡＢ；Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｐ，ＲＧ；Ｇｒｕｂｅｃｋ－Ｌｏｅｂｅｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｅｘｐ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ ２０１２，ｖｏｌ．４７，ｐｐ．７４９－５３，ＰＭＩＤ：２２７９００１９，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３４２７８５１．
２８．Ｂｒｏｗｎ，ＣＳ；Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｗａｎ，ＪＹ；Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ，ＬＡ；Ｂａｃｈｍａｎｎ，ＧＡ；Ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ Ｓｔｕｄｙ，Ｇ．Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ ｉｎ ｐｒｏｖｏｋｅｄ ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｄｙｎｉａ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｃｏｎｔｅｍｐ Ｃｌｉｎ Ｔｒｉａｌｓ ２０１３，ｖｏｌ．３６，ｐｐ．１５４－６５，ＰＭＩＤ：２３８１６４９１，ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３７７９０７１．
２９．Ｆｏｓｔｅｒ，ＤＣ；Ｋｏｔｏｋ，ＭＢ；Ｈｕａｎｇ，ＬＳ；Ｗａｔｔｓ，Ａ；Ｏａｋｅｓ，Ｄ；Ｈｏｗａｒｄ，ＦＭ；Ｐｏｌｅｓｈｕｃｋ，ＥＬ；Ｓｔｏｄｇｅｌｌ，ＣＪ；Ｄｗｏｒｋｉｎ，ＲＨ．Ｏｒａｌ ｄｅｓｉｐｒａｍｉｎｅ ａｎｄ ｔｏｐｉｃａｌ ｌｉｄｏｃａｉｎｅ ｆｏｒ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ２０１０，ｖｏｌ．１１６，ｐｐ．５８３－９３，ＰＭＩＤ：２０７３３４３９，ＰＭＣＩＤ：
３０．Ｃｈａｐｌａｎ，ＳＲ；Ｂａｃｈ，ＦＷ；Ｐｏｇｒｅｌ，ＪＷ；Ｃｈｕｎｇ，ＪＭ；Ｙａｋｓｈ，ＴＬ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔａｃｔｉｌｅ ａｌｌｏｄｙｎｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｐａｗ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９４，ｖｏｌ．５３，ｐｐ．５５－６３，ＰＭＩＤ：７９９０５１３，ＰＭＣＩＤ：
３１．Ｂａｇｌｏｌｅ，ＣＪ；Ｍａｇｇｉｒｗａｒ，ＳＢ；Ｇａｓｉｅｗｉｃｚ，ＴＡ；Ｔｈａｔｃｈｅｒ，ＴＨ；Ｐｈｉｐｐｓ，ＲＰ；Ｓｉｍｅ，ＰＪ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｏｂａｃｃｏ ｓｍｏｋｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ ＲｅｌＢ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００８，ｖｏｌ．２８３，ｐｐ．２８９４４－５７，ＰＭＩＤ：１８６９７７４２，ＰＭＣＩＤ：２５７０８５６
３２．Ｃｏｌｕｃｃｉ，Ｍ；Ｍａｉｏｎｅ，Ｆ；Ｂｏｎｉｔｏ，ＭＣ；Ｐｉｓｃｏｐｏ，Ａ；Ｄｉ Ｇｉａｎｎｕａｒｉｏ，Ａ；Ｐｉｅｒｅｔｔｉ，Ｓ．Ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｏｆ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｐｈｏｘｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ（ＤＭＳＯ）ｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ ２００８，ｖｏｌ．５７，ｐｐ．４１９－２５，ＰＭＩＤ：１８５０８２７８，ＰＭＣＩＤ：
３３．Ｇａｌｅｒ，ＢＳ．Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＰＥＮＮＳＡＩＤ（Ｒ） ａｎｄ Ｖｏｌｔａｒｅｎ Ｇｅｌ（Ｒ），ｔｗｏ ｔｏｐｉｃａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ ｓｏｄｉｕｍ．Ｐａｉｎ Ｐｒａｃｔ ２０１１，ｖｏｌ．１１，ｐｐ．２５２－６０，ＰＭＩＤ：２０８５４３０５，ＰＭＣＩＤ：
３４．Ｘｉｅ，Ｙ；Ｓｈｉ，Ｌ；Ｘｉｏｎｇ，Ｘ；Ｗｕ，Ｅ；Ｖｅａｓｌｅｙ，Ｃ；Ｄａｄｅ，Ｃ．Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｂｕｒｄｅｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ ｏｆ ｖｕｌｖｏｄｙｎｉａ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ．Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｏｐｉｎ ２０１２，ｖｏｌ．２８，ｐｐ．６０１－８，ＰＭＩＤ：２２３５６１１９，ＰＭＣＩＤ：
【0112】
前述の実施例および好ましい実施形態の記載は、特許請求の範囲によって定義される本発明を限定するものではなく、例示するものとして解釈されるべきである。容易に理解されるように、上記の特徴の多数の変形および組み合わせは、特許請求の範囲に記載される本発明から逸脱することなく利用することができる。そのような変形は、本発明の範囲からの逸脱とは見なされず、そのようなすべての変形は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。本明細書において言及されるすべての参考文献は、その全体が参考により組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A-5D】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18A】
【図18B】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22A-22B】
【図23A】
【図23B】
【図24A】
【図24B】
