特許7550648IP Force 特許公報全文掲載

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関連出願の相互参照 本願は、２０１８年３月１９日に出願した欧州特許出願第１８１６２６８１．３号、２０１８年３月１９日に出願した欧州特許出願第１８１６２６８３．９号、２０１８年５月１６日に出願した欧州特許出願第１８１７２６２５．８号、２０１８年５月１６日に出願した欧州特許出願第１８１７４７０７．２号、２０１８年７月４日に出願した欧州特許出願第１８１８１６８０．２号、２０１８年１０月１２日に出願した米国特許出願第６２／７４５，２３８号、２０１８年１０月１２日に出願した米国特許出願第６２／７４５，２３９号、２０１８年１０月１２日に出願した米国特許出願第６２／７４５，２４０号、および２０１８年１０月１２日に出願した米国特許出願第６２／７４５，２４６号に対する優先権を主張し、これらの特許出願の各々の内容は、全図面を含むその全体が明確に参照により本明細書に組み込まれる。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

本セクションは、本開示の一般概要を示し、その全範囲またはその特色の全てを網羅するものではない。

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 図１は、Ｇｉｂ１１、Ｐ２Ｈ１２、Ｅ２およびＦ８を作出するために使用される遺伝子ファミリーシャフリング技法のグラフィック表示を示す。
【図2A】 図２Ａは、Ｇｉｂ１１についての蛍光偏光アッセイである、破壊アッセイにおける蛍光偏光に基づく生化学的活性の結果（一部の場合では、ＳｌｕＣａｓ９などの野生型Ｃａｓ９のものを超える活性）を示す。菱形は、ｓｇＲＮＡを用いた条件を描写し、四角形は、ｓｇＲＮＡなしの対照条件を描写する。
【図2B】 図２Ｂは、ＳｌｕＣａｓ９についての蛍光偏光に基づく生化学的切断アッセイの結果を示す。菱形は、ｓｇＲＮＡを用いた条件を描写し、四角形は、ｓｇＲＮＡなしの対照条件を描写する。
【図2C】 図２Ｃは、図２Ａおよび図２Ｂにそれぞれ示されているｓｇＲＮＡを用いた条件についての曲線の初期勾配により判定された、切断アッセイにおけるＧｉｂ１１およびＳｌｕＣａｓ９の相対活性を示す。
【図3】 図３は、液体培養での「ｌｉｖｅ－ｄｅａｄ」アッセイにより判定された、Ｇｉｂ１１による「ＮＮＧＧ」ＰＡＭモチーフの認識についての結果を示す。
【図4】 図４は、Ｐ２Ｈ１２についての蛍光偏光に基づく生化学的切断アッセイの結果を示す。菱形は、ｓｇＲＮＡを用いた条件を描写し、四角形は、ｓｇＲＮＡなしの対照条件を描写する。
【図5】 図５は、Ｅ２についてのＢＦＰ破壊に基づく切断アッセイの結果を示す。
【図6】 図６は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓタンパク質のドメイン構成に基づくＧｉｂ１１Ｓｐａ－１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－２およびＧｉｂ１１Ｓｐａ－３の予測ドメイン構造を示す。角括弧に付いている名称ＰＩは、基礎Ｇｉｂ１１配列のＰＩドメインを示す。対応するｃＲＧＮ－Ａ部分は、斜線の入った四角形として（この場合はＧｉｂ１１について）示されており、ｃＲＧＮ－Ｂ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｓｔｅｕｒｉ部分は、白い四角形として示されている。アミノ酸位置は、Ｇｉｂ１１タンパク質（配列番号１）に準拠している。
【図7】 図７は、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－２およびＧｉｂ１１Ｓｐａ－３についてのＢＦＰ破壊に基づく切断アッセイの結果を示す。
【図8】 図８は、Ｆ８についてのＢＦＰ破壊に基づく切断アッセイの結果を示す。
【図9】 図９は、生化学的切断アッセイを使用して評価された、Ｇｉｂ１１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－３、Ｅ２およびＦ８の特異性プロファイルを示す。
【図10】 図１０は、Ｇｉｂ１１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－３、Ｅ２およびＦ８についてのそれらの特異性プロファイルに基づく全体的特異性を示す。
【図11】 図１１は、生化学的切断アッセイを使用して評価された、Ｇｉｂ１１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－１、Ｇｉｂ１１Ｓｐａ－３、Ｅ２およびＦ８の活性プロファイルの分布を示す。ｘ軸上には、左から右に見て、示されているヌクレアーゼごとに活性の降順によりソートした標的ＤＮＡ基質がある。

代表図 図1本件の代表的な図

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