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特許7551282血中ＬＰＳ濃度の測定方法、血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿、並びに、血中ＬＰＳ濃度測定用採血キット
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-06
(45)【発行日】2024-09-17
(54)【発明の名称】血中ＬＰＳ濃度の測定方法、血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿、並びに、血中ＬＰＳ濃度測定用採血キット
(51)【国際特許分類】
G01N 33/66 20060101AFI20240909BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20240909BHJP
G01N 33/92 20060101ALI20240909BHJP
【ＦＩ】
G01N33/66 Z
G01N33/50 Q
G01N33/92 Z
【請求項の数】
2
(21)【出願番号】P 2019129868
(22)【出願日】2019-07-12
(65)【公開番号】P2021015042
(43)【公開日】2021-02-12
【審査請求日】2021-10-20
【審判番号】
【審判請求日】2023-07-28
(73)【特許権者】
【識別番号】000104113
【氏名又は名称】カゴメ株式会社
(72)【発明者】
【氏名】福家 暢夫
【合議体】
【審判長】榎本 吉孝
【審判官】加々美 一恵
【審判官】松本 隆彦
(56)【参考文献】
【文献】ＢＯＤＥ，Ｃ．ｅｔ ａｌ，ＡＬＣＯＨＯＬＩＳＭ：ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＡＮＤ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，１９９７年１１月，ＶＯＬ．２１，ＮＯ．８，ｐｐ．１３６７－１３７３
【文献】芋川浩他、高齢者を対象としたエタノール綿塗擦消毒効果と黄色ブドウ球菌の検出頻度、福岡県立大学看護学研究紀要、２０１１年、Ｖｏｌ．８、Ｎｏ．２、ｐｐ．５３－５９
【文献】エンドトキシンの血中濃度測定法、日本細菌学雑誌、１９９０年、４５（６）、ｐｐ．９３７－９４２
【文献】エンドトキシンキット エンドトキシン－シングルテスト、２０１６年、１－４、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｉｎｆｏ．ｐｄｍａ．ｇｏ．ｊｐ／ｄｏｗｎｆｉｌｅｓ／ｉｖｄ／ＰＤＦ／８９００２７＿２０６００ＡＭＺ００９６７０００＿Ａ＿０１＿０５．ｐｄｆ
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
G01N33/48-33/98
A61B5/15
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿であって、綿に含浸しているエタノール水溶液の濃度は、３０質量％以上５０質量％以下であり、
皮膚を拭く回数は、１回の微量採血につき５回以上である。
【請求項2】
血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットであって、それを構成するのは、少なくとも、穿刺器具及び請求項１のエタノール含浸綿である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明が関係するのは、血中ＬＰＳ濃度の測定方法、血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿、並びに、血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットである。
【背景技術】
【0002】
ＬＰＳは、敗血症の原因物質として知られており、リポポリサッカライド又はリポ多糖ともいわれる。近年、健常者であっても高脂肪食の摂取などにより血中ＬＰＳ濃度が上昇することが報告されており（非特許文献１）、ＬＰＳ濃度の上昇が種々の組織で慢性炎症を惹起し、糖尿病などのメタボリックシンドローム関連疾患の発症に関与することが示唆されている（非特許文献２）。
【0003】
現在、血中ＬＰＳ濃度を測定する際には、腕の静脈から採血した血液を用いることが主流である。また、糖尿病の病態管理の場面では、患者自身が指先を穿刺することでごく微量の血液を出血させ、チップに吸わせることで血糖値を測定する技術が広く普及している。しかしながら、ＬＰＳは環境中に広く存在するため、皮膚に付着した環境由来のＬＰＳにより検出誤差が発生し、正確な濃度が測定できないことが懸念される。これを予防するためには、微量採血の前に、皮膚に付着したＬＰＳを測定に支障がない量まで低減させる必要がある。
【0004】
特許文献１が開示するのは、皮膚外用製剤として利用できるエンドトキシン吸着材であるが、採血後の血液中に吸着体が混入して正確に測定できないと考えられる。ＬＰＳを不活化及び抽出する他の方法として、高温処理、酸又はアルカリ処理、有機溶媒を用いる方法は公知であるが、これらは皮膚を拭くには適さない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】特開２０１６－１０７２６２
【非特許文献】
【0006】
【文献】Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２０１２ Ｆｅｂ；３５（２）：３７５－３８２
【文献】Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２０１１ Ａｕｇ；３４（８）：１８０９－１８１５．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明が解決しようとする課題は、血中ＬＰＳ濃度測定の採血前に、皮膚に付着したＬＰＳを除去することである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
以上を踏まえて、本願発明者が鋭意検討して見出したのは、血中ＬＰＳ濃度の測定方法、血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿、並びに、血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットである。すなわち、３０質量％以上９０質量％以下のエタノール水溶液を含浸させた綿で採血前の皮膚を拭くことにより、皮膚に付着したＬＰＳが除去され、血中ＬＰＳ濃度の測定誤差が低減される。また、３０質量％以上９０質量％以下のエタノール水溶液の含浸綿を備えることにより、従来よりも測定誤差の小さい血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットを提供することができる。この観点から、本発明を定義すると、以下のとおりである。
【0009】
本発明に係る血中ＬＰＳ濃度の測定誤差を低減する方法を構成するのは、少なくとも、拭くことであり、皮膚の微量採血される部分が拭かれる。拭くのに用いられるエタノール水溶液の濃度は、３０質量％以上９０質量％以下であればよく、４０質量％以上８０質量％以下であることが好ましい。また、拭く前と比較して、皮膚に付着したＬＰＳの量を７０％以上、好ましくは８０％以上低減させる。拭く回数は、１回の微量採血につき複数回、好ましくは、５回以上である。また、微量採血された血液は、凍結させないようにする。
【0010】
本発明に係る血中ＬＰＳ濃度測定用のエタノール含浸綿は、綿に含浸しているエタノール水溶液の濃度が３０質量％以上９０質量％以下であればよく、好ましくは４０質量％以上８０質量％以下である。
【0011】
本発明に係る血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットが含有するのは、穿刺器具及び血中ＬＰＳ濃度測定用エタノール含浸綿である。キットに含まれるエタノール含浸綿へのエタノール水溶液の含浸率は、１００％以上であることが好ましい。
【発明の効果】
【0012】
本発明が可能にするのは、血中ＬＰＳ濃度測定の採血前に、皮膚に付着したＬＰＳを除去することである。皮膚に付着したＬＰＳを除去することにより、血中ＬＰＳ濃度の測定誤差を低減することができる。さらに、本発明が可能にするのは、従来よりも測定誤差を低減できる血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットを提供することである。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】血中ＬＰＳ濃度の測定方法の流れ図
【図2】拭く前の皮膚におけるＬＰＳ濃度を示した図
【図3】拭く前後のＬＰＳ濃度の変化をエタノールの濃度毎に示した図
【図4】拭く回数とＬＰＳ濃度の関係を示した図
【図5】凍結保存によるＬＰＳ濃度の変化を示した図
【発明を実施するための形態】
【0014】
＜本実施の形態に係る方法＞
図１が示すのは、血中ＬＰＳ濃度の測定方法の流れである。それを構成するのは、主に、拭くこと（Ｓ１０）、微量採血（Ｓ２０）、及び、測定（Ｓ３０）である。
図１が示すのは、血中ＬＰＳ濃度の測定方法の流れである。それを構成するのは、主に、拭くこと（Ｓ１０）、微量採血（Ｓ２０）、及び、測定（Ｓ３０）である。
【0015】
＜拭くこと（Ｓ１０）＞
拭くこと（Ｓ１０）は、皮膚の微量採血される部分を採血前に拭いて付着したＬＰＳを除去することである。拭くのに用いるのは、脱脂綿又は不織布ワイパー等にエタノール水溶液を浸したもの、又は、市販のエタノール含浸綿である。力加減は、医療機関等で注射及び採血前にアルコール綿で拭く場合と同様であり、拭いた直後の皮膚表面にエタノール水溶液が少し残る程度にしっかり拭くことが好ましく、皮膚が赤くなるほど強くこする必要はない。拭く回数は、１回の微量採血につき１回以上であればよく、複数回であることが好ましく、５回以上であることがより好ましい。
拭くこと（Ｓ１０）は、皮膚の微量採血される部分を採血前に拭いて付着したＬＰＳを除去することである。拭くのに用いるのは、脱脂綿又は不織布ワイパー等にエタノール水溶液を浸したもの、又は、市販のエタノール含浸綿である。力加減は、医療機関等で注射及び採血前にアルコール綿で拭く場合と同様であり、拭いた直後の皮膚表面にエタノール水溶液が少し残る程度にしっかり拭くことが好ましく、皮膚が赤くなるほど強くこする必要はない。拭く回数は、１回の微量採血につき１回以上であればよく、複数回であることが好ましく、５回以上であることがより好ましい。
【0016】
＜ＬＰＳ＞
ＬＰＳは、グラム陰性細菌の外膜構成成分として存在するエンドトキシンの本体である。本発明においては、エンドトキシン及びその類似物質も含む。類似物質を例示すると、（１→３）－β－Ｄ－グルカンが挙げられるが、これに限定されず、エンドトキシン活性をする物質が該当する。
ＬＰＳは、グラム陰性細菌の外膜構成成分として存在するエンドトキシンの本体である。本発明においては、エンドトキシン及びその類似物質も含む。類似物質を例示すると、（１→３）－β－Ｄ－グルカンが挙げられるが、これに限定されず、エンドトキシン活性をする物質が該当する。
【0017】
＜エタノール水溶液＞
エタノール水溶液は、濃度が３０質量％以上９０質量％以上、好ましくは４０質量％以上８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以上６０質量％以下である。エタノール以外の成分として、ＬＰＳを含まない水を用いることが好ましく、その他皮膚への塗布が認められている成分を適宜含有させてもよい。
エタノール水溶液は、濃度が３０質量％以上９０質量％以上、好ましくは４０質量％以上８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以上６０質量％以下である。エタノール以外の成分として、ＬＰＳを含まない水を用いることが好ましく、その他皮膚への塗布が認められている成分を適宜含有させてもよい。
【0018】
＜微量採血（Ｓ２０）＞
微量採血（Ｓ２０）は、拭いた後の皮膚で行い、一般的な器具及び方法を用いることができる。器具を例示すると、針等の穿刺器具及び血液保管用容器から成るもの、或いは、それらが一体となったものが挙げられるが、測定用に１μＬ以上の血液を採取できる器具が好ましい。また、採取中の血液が皮膚に触れる範囲が小さいものが好ましい。微量採血の器具は市販品を用いることができ、例示すると、メディセーフファインタッチ（テルモ製）であるが、これに限定されない。また、理由は定かではないが、採血後の血液は、凍結融解を行った場合にＬＰＳ濃度が低下するという結果が確認されていることから、凍結保存を行わないことが好ましい。
微量採血（Ｓ２０）は、拭いた後の皮膚で行い、一般的な器具及び方法を用いることができる。器具を例示すると、針等の穿刺器具及び血液保管用容器から成るもの、或いは、それらが一体となったものが挙げられるが、測定用に１μＬ以上の血液を採取できる器具が好ましい。また、採取中の血液が皮膚に触れる範囲が小さいものが好ましい。微量採血の器具は市販品を用いることができ、例示すると、メディセーフファインタッチ（テルモ製）であるが、これに限定されない。また、理由は定かではないが、採血後の血液は、凍結融解を行った場合にＬＰＳ濃度が低下するという結果が確認されていることから、凍結保存を行わないことが好ましい。
【0019】
＜測定（Ｓ３０）＞
測定（Ｓ３０）の方法は、６００μＬ以下の微量血液サンプルを測定できるものであればよく、一般的な測定キット等を用いることができる。測定方法を例示すると、比色法、比濁法、ゲル化法等であるが、これに限定されない。
測定（Ｓ３０）の方法は、６００μＬ以下の微量血液サンプルを測定できるものであればよく、一般的な測定キット等を用いることができる。測定方法を例示すると、比色法、比濁法、ゲル化法等であるが、これに限定されない。
【0020】
＜血中ＬＰＳ濃度測定用採血キット＞
血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットを構成するのは、少なくとも、穿刺器具、エタノール含浸綿である。他に血液保管用容器、止血用シール、ＬＰＳ濃度測定機器、郵送用の資材等を適宜追加することができる。
血中ＬＰＳ濃度測定用採血キットを構成するのは、少なくとも、穿刺器具、エタノール含浸綿である。他に血液保管用容器、止血用シール、ＬＰＳ濃度測定機器、郵送用の資材等を適宜追加することができる。
【0021】
＜穿刺器具＞
穿刺器具の種類や形態等は特に限定されず、穿刺器具単独のもの、又は、血液保管用容器と一体となっているものを適宜選択して用いることができる。
穿刺器具の種類や形態等は特に限定されず、穿刺器具単独のもの、又は、血液保管用容器と一体となっているものを適宜選択して用いることができる。
【0022】
＜エタノール含浸綿＞
エタノール含浸綿は、前述のエタノール水溶液を含浸させた綿である。綿は、脱脂綿を用いることが好ましいが、その形状や性状等は特に限定されない。エタノール水溶液の含浸率は１００％以上であることが好ましい。エタノール含浸綿は実施例に記載の方法で作製することができるが、市販品を用いることもできる。市販品を例示すると、サニコットパウチβa（丸三産業株式会社製）等である。
エタノール含浸綿は、前述のエタノール水溶液を含浸させた綿である。綿は、脱脂綿を用いることが好ましいが、その形状や性状等は特に限定されない。エタノール水溶液の含浸率は１００％以上であることが好ましい。エタノール含浸綿は実施例に記載の方法で作製することができるが、市販品を用いることもできる。市販品を例示すると、サニコットパウチβa（丸三産業株式会社製）等である。
【実施例】
【0023】
＜実施例１＞
予め皮膚にＬＰＳを付着させるため、健常者３人に素手で日常生活程度の作業（水道水、ドアノブ、机又は壁への接触、パソコン作業等）を実施させた。その後、５０μＬの大塚蒸留水をマイクロピペットにて指先に半球状に滴下し、３０秒間静置した後、全量を９６穴プレート（ＩＷＡＫＩ、カタログ番号１８６０－０９６）に入れた（拭く前サンプル）。同じ指を１０質量％、３０質量％、５０質量％、７０質量％、９０質量％のエタノール含浸綿でそれぞれ１０回拭いた後、再び５０μＬの大塚蒸留水をピペットマンにて指先に滴下し、３０秒間静置した後、全量を９６穴プレートに入れた（拭いた後サンプル）。指１本当たりに使用するエタノール含浸綿は１種類とした。評価結果は、拭く前サンプルのＬＰＳ濃度を図２に、拭く前後のＬＰＳ濃度を比較したものを図３に示す。
予め皮膚にＬＰＳを付着させるため、健常者３人に素手で日常生活程度の作業（水道水、ドアノブ、机又は壁への接触、パソコン作業等）を実施させた。その後、５０μＬの大塚蒸留水をマイクロピペットにて指先に半球状に滴下し、３０秒間静置した後、全量を９６穴プレート（ＩＷＡＫＩ、カタログ番号１８６０－０９６）に入れた（拭く前サンプル）。同じ指を１０質量％、３０質量％、５０質量％、７０質量％、９０質量％のエタノール含浸綿でそれぞれ１０回拭いた後、再び５０μＬの大塚蒸留水をピペットマンにて指先に滴下し、３０秒間静置した後、全量を９６穴プレートに入れた（拭いた後サンプル）。指１本当たりに使用するエタノール含浸綿は１種類とした。評価結果は、拭く前サンプルのＬＰＳ濃度を図２に、拭く前後のＬＰＳ濃度を比較したものを図３に示す。
【0024】
＜実施例２＞
エタノール濃度は５０質量％のみ使用し、拭く回数を０、１、３、５、７、９、１０回とした。それ以外の操作は、実施例１と同様に行い、拭く回数ごとにサンプリングして、拭いた回数とその効果の関係を評価した。評価結果は図４及び表１に示す。
エタノール濃度は５０質量％のみ使用し、拭く回数を０、１、３、５、７、９、１０回とした。それ以外の操作は、実施例１と同様に行い、拭く回数ごとにサンプリングして、拭いた回数とその効果の関係を評価した。評価結果は図４及び表１に示す。
【0025】
＜実施例３＞
健常者２９名から採血を行った。具体的には、採血部位をアルコール消毒後、真空採血管［ベノジェクトＩＩ真空採血管（ヘパリンナトリウム６５単位入り、５ｍｌ容）、テルモ］ 及び針［ベノジェクトＩＩ採血針Ｓ（２１Ｇ）、及びベノジェクトＩＩホルダーＤ、テルモ）を用いて約５ｍｌの血液を採取し、採取直後から遠心分離を行うまで氷中に保存した。全員からの採血が完了した後、遠心分離（１，２００×ｇ、４℃、１５分間）を行い、ヘパリン血漿を調製した。その後、得られた血漿をサンプルチューブに１００μＬずつ分取した。当日測定する１本を残し、残りの血漿サンプルは－８０℃で保存した。採血当日及び－８０℃で保存後４、１２、２４、３１週目に血漿中ＬＰＳ濃度を評価した。評価結果を図５に示す。
健常者２９名から採血を行った。具体的には、採血部位をアルコール消毒後、真空採血管［ベノジェクトＩＩ真空採血管（ヘパリンナトリウム６５単位入り、５ｍｌ容）、テルモ］ 及び針［ベノジェクトＩＩ採血針Ｓ（２１Ｇ）、及びベノジェクトＩＩホルダーＤ、テルモ）を用いて約５ｍｌの血液を採取し、採取直後から遠心分離を行うまで氷中に保存した。全員からの採血が完了した後、遠心分離（１，２００×ｇ、４℃、１５分間）を行い、ヘパリン血漿を調製した。その後、得られた血漿をサンプルチューブに１００μＬずつ分取した。当日測定する１本を残し、残りの血漿サンプルは－８０℃で保存した。採血当日及び－８０℃で保存後４、１２、２４、３１週目に血漿中ＬＰＳ濃度を評価した。評価結果を図５に示す。
【0026】
＜エタノール含浸綿の作製＞
エタノール（富士フィルム和光純薬、カタログ番号０５７－００４５６）を大塚蒸留水（大塚製薬）で希釈してエタノール水溶液を調製した。医療用脱脂綿（川本産業、カタログ番号６２－３７８４－７８）もしくは不織布ワイパー（ベンコット、旭化成、カタログ番号Ｍ－１）を５枚ずつチャック付きアルミパウチ（アズワン、カタログ番号３－１５８８－０１）に入れ、ぞれぞれのアルミパウチに各濃度のエタノール水溶液を１０～２０ｍＬずつ加え、エタノール含浸綿を作製した。
エタノール（富士フィルム和光純薬、カタログ番号０５７－００４５６）を大塚蒸留水（大塚製薬）で希釈してエタノール水溶液を調製した。医療用脱脂綿（川本産業、カタログ番号６２－３７８４－７８）もしくは不織布ワイパー（ベンコット、旭化成、カタログ番号Ｍ－１）を５枚ずつチャック付きアルミパウチ（アズワン、カタログ番号３－１５８８－０１）に入れ、ぞれぞれのアルミパウチに各濃度のエタノール水溶液を１０～２０ｍＬずつ加え、エタノール含浸綿を作製した。
【0027】
＜ＬＰＳ濃度の測定方法＞
実施例１及び２については次の通り実施した。すなわち、拭く前又は拭いた後のサンプルの入った９６穴プレートの穴に、５０μＬのリムルス試薬（エンドスペシーＥＳ－５０Ｍ、生化学工業、カタログ番号０２０１５０）を加え、３７℃で１時間インキュベートした後、４０５ｎｍの吸光度（対照波長４９２ｎｍ）を測定した。検量線は、エンドトキシン標準品（生化学工業、カタログ番号０１００２０）で作成し、ＬＰＳ濃度（ＥＵ／ｍｌ）を算出した。
実施例１及び２については次の通り実施した。すなわち、拭く前又は拭いた後のサンプルの入った９６穴プレートの穴に、５０μＬのリムルス試薬（エンドスペシーＥＳ－５０Ｍ、生化学工業、カタログ番号０２０１５０）を加え、３７℃で１時間インキュベートした後、４０５ｎｍの吸光度（対照波長４９２ｎｍ）を測定した。検量線は、エンドトキシン標準品（生化学工業、カタログ番号０１００２０）で作成し、ＬＰＳ濃度（ＥＵ／ｍｌ）を算出した。
【0028】
実施例３については次の通り実施した。すなわち、血漿を試験管ミキサーにて約１分間撹拌した後、一部を分取し、大塚蒸留水を用いて１０倍希釈した（氷中）。その後、７０℃で１０分間加熱処理を行い、氷中にて室温程度まで冷却した後に、３７℃のお湯を張った超音波洗浄機（型番Ｗ－１１３、本田電子）で１０分間超音波処理を行った。全てのサンプルを常温に戻し、試験管ミキサーにて約３０秒間撹拌した後、５０μＬ／穴の容量で９６穴プレートに入れた。その後、各穴にリムルス試薬を５０μＬ／穴の容量で加え、３７℃で１時間インキュベートした（プレート１）。また、吸光度測定における血漿の色の影響をキャンセルする目的で、５０μＬの血漿に５０μＬの大塚蒸留水を混合したサンプルも９６穴プレートに調製し、同様に３７℃で１時間インキュベートした（プレート２）。インキュベート後、４０５ｎｍの吸光度（対照波長４９２ｎｍ）を測定した。得られた血漿の吸光度（プレート１）から、ＢＬＡＮＫの吸光度（プレート１）、及び血漿の色に起因する吸光度［吸光度（血漿＋大塚蒸留水）－吸光度（大塚蒸留水）］（プレート２）を差し引いた値を、リムルス試薬と血漿中ＬＰＳの反応に起因する吸光度とした。検量線は、エンドトキシン標準品で作成し、ＬＰＳ濃度（ＥＵ／ｍｌ）を算出した。
【0029】
＜評価結果＞
実施例１について、拭く前サンプルのＬＰＳ濃度には有意な群間差が見られないことが確認された（図２）。また、拭く前後のＬＰＳ濃度の比較では、対応のある検定であるＷｉｌｃｏｘｏｎの符号順位和検定を行った結果、１０質量％以上９０質量％以下の全てのエタノール濃度において、有意なＬＰＳ濃度の低下が見られた（図３）。一方、対応のない検定であるＭａｎｎ－ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定を行った結果、３０質量％以上９０質量％以下においてのみ有意なＬＰＳ濃度の低下が見られた。本試験で使用したリムルス試薬（エンドスペシーＥＳ－５０Ｍ）の検出限界値は０．００１ＥＵ／ｍＬである。血漿中ＬＰＳ濃度を測定する際には血漿を１０倍希釈する必要があることから、拭いた後サンプルのＬＰＳ濃度が０．０１ＥＵ／ｍＬ未満であれば、血漿をサンプルとした場合に検出限界以下になると考えられる（図３）。図３には、実線で０．０１ＥＵ／ｍＬをカットオフ値として示したが、５０質量％エタノールでは、すべての場合でカットオフ値を下回った。以上の結果から、３０質量％以上９０質量％以下のエタノールで拭くことで指先のＬＰＳ濃度を低減できた。さらに、本実施例において最適なエタノール濃度は、５０質量％であったことから、エタノール濃度は、４０質量％以上８０質量％以下であることが好ましく、４０質量％以上６０質量%以下であることがより好ましい。
実施例１について、拭く前サンプルのＬＰＳ濃度には有意な群間差が見られないことが確認された（図２）。また、拭く前後のＬＰＳ濃度の比較では、対応のある検定であるＷｉｌｃｏｘｏｎの符号順位和検定を行った結果、１０質量％以上９０質量％以下の全てのエタノール濃度において、有意なＬＰＳ濃度の低下が見られた（図３）。一方、対応のない検定であるＭａｎｎ－ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定を行った結果、３０質量％以上９０質量％以下においてのみ有意なＬＰＳ濃度の低下が見られた。本試験で使用したリムルス試薬（エンドスペシーＥＳ－５０Ｍ）の検出限界値は０．００１ＥＵ／ｍＬである。血漿中ＬＰＳ濃度を測定する際には血漿を１０倍希釈する必要があることから、拭いた後サンプルのＬＰＳ濃度が０．０１ＥＵ／ｍＬ未満であれば、血漿をサンプルとした場合に検出限界以下になると考えられる（図３）。図３には、実線で０．０１ＥＵ／ｍＬをカットオフ値として示したが、５０質量％エタノールでは、すべての場合でカットオフ値を下回った。以上の結果から、３０質量％以上９０質量％以下のエタノールで拭くことで指先のＬＰＳ濃度を低減できた。さらに、本実施例において最適なエタノール濃度は、５０質量％であったことから、エタノール濃度は、４０質量％以上８０質量％以下であることが好ましく、４０質量％以上６０質量%以下であることがより好ましい。
【0030】
実施例２について、１回以上拭くことでＬＰＳ濃度の低減効果が見られ、３回拭いた場合は、１回拭いたときよりもＬＰＳ濃度が低減した。さらに、５回以上拭くことで拭く前（０回）と比較して、ＬＰＳ濃度の有意な低下が見られた（図４）。また、ＬＰＳ濃度の低減の程度を拭く前の皮膚と中央値で比較すると、５回以上拭いた場合に７０％以上の低減、７回以上拭いた場合には８０％以上の低減が確認された（表１）。
【0031】
【表1】
【0032】
実施例３について、Ｆｒｉｅｄｍａｎ検定において保存期間中に有意な差が認められたため（Ｐ＝１．２２×１０－９）、Ｈｏｌｍ補正－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符号順位検定による群間比較を行った。その結果、未凍結の採血当日の血漿中ＬＰＳ濃度と比較して、－８０℃で保存後４、２４、３１週目では有意に低値を示した（Ｐ＜０．０５）（図５）。－８０℃で保存後４週目から３１週目までの推移をみると途中で上下はあるものの、４週目と３１週目との間に有意差が無いことから、一度凍結した後はＬＰＳ濃度が顕著には変動しないと考えられた。
【産業上の利用可能性】
【0033】
本発明が有用な分野は、健康管理事業及び健康診断事業である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
