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特許7555916ろ過可能なデュオカルマイシン含有抗体薬物複合体組成物及び関連する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-13
(45)【発行日】2024-09-25
(54)【発明の名称】ろ過可能なデュオカルマイシン含有抗体薬物複合体組成物及び関連する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20240917BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240917BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240917BHJP
A61K 47/16 20060101ALI20240917BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240917BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K47/12
A61K47/16
A61K39/395 E
A61K39/395 T
A61P35/00
【請求項の数】
8
(21)【出願番号】P 2021524477
(86)(22)【出願日】2019-11-04
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-17
(86)【国際出願番号】 EP2019080084
(87)【国際公開番号】W WO2020094561
(87)【国際公開日】2020-05-14
【審査請求日】2022-10-21
(31)【優先権主張番号】18205459.3
(32)【優先日】2018-11-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】516205959
【氏名又は名称】ビョンディス・ビー．ブイ．
【氏名又は名称原語表記】Ｂｙｏｎｄｉｓ Ｂ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ｍｉｃｒｏｗｅｇ ２２， ＮＬ－６５４５ ＣＭ Ｎｉｊｍｅｇｅｎ， Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
(74)【代理人】
【識別番号】110003708
【氏名又は名称】弁理士法人鈴榮特許綜合事務所
(74)【代理人】
【識別番号】100108855
【弁理士】
【氏名又は名称】蔵田 昌俊
(74)【代理人】
【識別番号】100103034
【弁理士】
【氏名又は名称】野河 信久
(74)【代理人】
【識別番号】100179062
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 正
(74)【代理人】
【識別番号】100199565
【弁理士】
【氏名又は名称】飯野 茂
(74)【代理人】
【識別番号】100219542
【弁理士】
【氏名又は名称】大宅 郁治
(74)【代理人】
【識別番号】100153051
【弁理士】
【氏名又は名称】河野 直樹
(74)【代理人】
【識別番号】100162570
【弁理士】
【氏名又は名称】金子 早苗
(72)【発明者】
【氏名】ファン・デン・フーフ、カロルス・ヨハネス・エドガー
【審査官】高橋 樹理
(56)【参考文献】
【文献】Analytical Cheistry，2017年，Vol.89，p.5476-5483
【文献】Molecular Cancer Therapeutics，2014年，Vol.13, No.11，p.2618-2629
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２
Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
(i) 式（Ｉ）：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、ＡｂはＩｇＧ抗体であり、Ｌ－Ｄは式：
【化1】
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によっては式：
【化2】
(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体を組み合わせて、組成物を形成することを含む方法であって、
前記組成物は、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含み、
前記組成物を分子量カットオフが３ｋＤａ～５０ｋＤａのフィルターでろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を形成することを含む、
方法。
【請求項2】
前記組成物は、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記抗体薬物複合体の濃度は、０．１～１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．５～５０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．０～１０ｍｇ／ｍｌである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記酸の濃度は、０．０１％～５％（v/v）、好ましくは０．０５％～２％、より好ましくは０．０５％～１．５％、最も好ましくは０．１％～１％である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記酸は、トリフルオロ酢酸、ギ酸及び塩酸からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記ろ過は遠心ろ過である、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記フィルターは、修飾ポリエーテルスルホン、好ましくはナノセップ（登録商標）オメガフィルターを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記ろ液中に前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が存在するのであれば、さらに、前記ろ液に対して、前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を単離してその量を測定するのに適したクロマトグラフィー分離を行うことを含む、請求項１、６及び７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、デュオカルマイシン含有抗体薬物複合体（ＡＤＣ）及び場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む組成物に関する。特に、この組成物は、ＡＤＣの容易なろ過、及び（存在する場合）複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物からの分離を可能にする。
【0002】
さらに、本発明は、組成物の製造方法及びデュオカルマイシン含有ＡＤＣのバッチを承認する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、製薬業界において最も重要な薬剤の１つである。また、ｍＡｂは、さまざまな細胞毒性薬物と結合し、抗体薬物複合体又は「ＡＤＣ」を形成する。一般に、リンカーは細胞毒性薬物とｍＡｂを連結する。したがって、ＡＤＣは、モノクローナル抗体、リンカー及び細胞毒性薬物を含む。リンカー－薬物と抗体は、表面に露出したリジンの側鎖（P. M. LoRusso et al., Clinical Cancer Research, 2011, 17 (20), 6437-6447）又は鎖間ジスルフィド結合の還元によって生じた遊離システイン（J. Katz et al., Clinical Cancer Research, 2011, 17 (20), 6428-6436; P. D Senter et al., Nature Biotechnology 2012, 30 (7), 631-637）を使用して結合することができる。あるいは、変異させたｍＡｂの適切な位置にある修飾システイン残基の側鎖を介した部位特異的結合による複合体形成であってもよい（C. R. Behrens and B. Liu, MAbs, 2014, 6(1), 46-53）。
【0004】
デュオカルマイシン類は、ＡＤＣの細胞毒性薬物として使用されている（国際公開第2008/083312号、第2010/062171号、第2011/133039号、第2015/177360号）。最初にストレプトマイセス種の培養液から単離されたデュオカルマイシン類は、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ及びＣＣ-１０６５を含む抗腫瘍抗生物質の一種である。デュオカルマイシン類はＤＮＡの副溝に結合し、次いでＤＮＡの不可逆的なアルキル化を引き起こす。これは核酸の構造を破壊し、最終的に腫瘍細胞死につながる。
【0005】
近年、トラスツズマブ デュオカルマジン（ＳＹＤ９８５、トラスツズマブvc-seco-DUBA）などのデュオカルマイシン含有ＡＤＣの前臨床及び臨床開発が行われている（M.M.C. van der Lee et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2015, 14(3), 692-703；J. Black et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2016, 15 (8), 1900-1909；ClinicalTrials.gov NCT02277717）。その潜在的な抗腫瘍活性に基づき、デュオカルマイシン含有ＡＤＣのさらなる研究が期待されている。
【0006】
ＡＤＣの工業的製造では、ｍＡｂとリンカー－薬物の結合の後に、さまざまな精製工程が行われる。これらのバイオ医薬品のバッチ間の再現性を確保するために、品質管理が行われる。遊離のリンカー－薬物、すなわち、複合体を形成していないリンカー－薬物は、その毒性のため、ＡＤＣ組成物において厳密に管理しなければならない不純物の１つである。
【0007】
遊離のリンカー－薬物の含有量を求めるために、最初に遊離のリンカー－薬物に対するＡＤＣの濃度を減少させ、次いで、遊離のリンカー－薬物の量を測定することがしばしば行われてきた。なぜなら、高濃度のＡＤＣが、含有量が非常に少ないリンカー－薬物の量を求めることを困難にするためである。実際に、ＡＤＣの量は約１０ｍｇ／ｍｌであるのに対して、遊離のリンカー－薬物の量は通常１０μｇ／ｍｌ未満、多くの場合０．２μｇ／ｍｌ又は０．１μｇ／ｍｌと、はるかに少ない。通常のクロマトグラフィーによる分析では、大過剰のＡＤＣは、（存在する場合）非常に少量の遊離のリンカー－薬物を隠すことがよくあり、例えば、遊離のリンカー－薬物の濃度が非常に低いと、他の成分によって目立たなくなり、及び／又は検出限界以下となる。
【0008】
したがって、通常、水性の試料からＡＤＣを分離し、試料中の（遊離の）リンカー－薬物の存在を分析することにより、遊離のリンカー－薬物の量を求めることができる。例えば、分子量カットオフが約３０ｋＤａのフィルターを用いた遠心ろ過による水性試料の直接ろ過により、多くの場合、ＡＤＣをフィルター上に残し、遊離のリンカー－薬物を含むろ液を得ることができる（国際公開第2015/095953号の194ページ、カテプシンＢリンカー切断アッセイを参照）。あるいは、試料を冷メタノールで処理し、遠心分離してＡＤＣを沈殿させ、複合体を形成していないリンカー－薬物は上澄み液に残すことにより、ＡＤＣと遊離のリンカー－薬物を分離してきた（L. Chen et al., MAbs, 2016, 8 (7), 1210-1223参照）。
【0009】
しかし、デュオカルマイシン リンカー－薬物の場合、困難であることが判明した。当該技術分野における通常のろ過法又は直接沈殿では、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物を適切に分離することができなかった。例えば、ろ過法では、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、フィルターを通過してろ液に移行するのではなく、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと共にフィルター上に残る傾向がある。これにより、ろ液中の遊離のリンカー－薬物の量が不十分となり、遊離のリンカー－薬物の量の測定が不正確になる。したがって、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物を分離する方法が必要である。同様に、デュオカルマイシン含有ＡＤＣ及び（存在する場合）デュオカルマイシン リンカー－薬物を含む試料中のデュオカルマイシン リンカー－薬物を検出し定量する方法が必要である。
【発明の開示】
【0010】
本発明の一部は、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物のろ過による分離において、アセトニトリルがその分離を促進するという発見に基づく。
【0011】
したがって、本発明のある側面は、(a) 水及びアセトニトリルを含む溶媒; (b) 酸；(c) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む組成物であって、
前記組成物は、３０％～６０％（v/v）のアセトニトリル、好ましくは３５％～５５％のアセトニトリルを含む、組成物に関する。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む組成物であって、
前記組成物は、３０％～６０％（v/v）のアセトニトリル、好ましくは３５％～５５％のアセトニトリルを含む、組成物に関する。
【0012】
本発明の別の側面は、(i) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によって複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液又は凍結乾燥物と、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体を組み合わせて組成物を形成することを含む方法であって、前記組成物は、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、方法に関する。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によって複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液又は凍結乾燥物と、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体を組み合わせて組成物を形成することを含む方法であって、前記組成物は、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、方法に関する。
【0013】
本発明のさらに別の側面は、抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認する方法であって、
1) 抗体薬物複合体のバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％を含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認すること
を含む方法に関する。
1) 抗体薬物複合体のバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％を含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認すること
を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【発明を実施するための最良の形態】
【0015】
本発明は、(a) 水及びアセトニトリルを含む溶媒、(b) 酸、(c) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）を表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む組成物であって、前記組成物は、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む組成物に関する。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）を表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む組成物であって、前記組成物は、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む組成物に関する。
【0016】
本発明で使用する溶媒は、水及びアセトニトリルを含む。本明細書において用語「溶媒」は、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を溶解することが可能な溶媒の混合物を指す。溶媒は、通常、水及びアセトニトリルからなるが、いくつかの態様では別の溶媒を追加してもよい。例えば、Ｃ１～Ｃ６アルコール（例．メタノール又はエタノール）又はポリオールといった他の水混和性有機溶媒を追加してもよい。一般に、追加する溶媒は組成物の２０％（v/v）未満、通常１０％未満、そして、多くの場合は５％未満である。通常、溶媒は水及びアセトニトリルからなる。水の品質は特に限定されないが、実用的な理由から、ＤＩ水、より好ましくはミリＱ水といった比較的純度の高い水が有利である。
【0017】
アセトニトリルは３０％～６０％（v/v）の濃度で使用する。濃度が６０％を超えると、フィルターからのデュオカルマイシン含有ＡＤＣの漏出が多くなる傾向がある。このような漏出は、ろ液中の遊離のリンカー－薬物が低濃度であることと比較して、ＡＤＣの濃度が高くなる原因となり、したがって、例えばマスキングにより、遊離のリンカー－薬物の量を正確に決定することを妨げる。一般に、試料中のＡＤＣの１．０％以上がろ液に移行する場合、そのような漏出は多過ぎ、通常、０．５％以下であれば許容可能できる。漏出があるとしても、ろ液に移行するＡＤＣは、多くの場合０．３％以下、より多くの場合０．２％以下、通常は０．１％以下である。一方、アセトニトリルの濃度が３０％未満では、分離が不十分になる傾向があり；すなわち、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物は（ほとんどの場合）フィルターを通過せず、分離に失敗する。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、デュオカルマイシン リンカー－薬物（複合体を形成していない形態）とデュオカルマイシン含有ＡＤＣとの間の疎水性相互作用が分離を妨げ、又は遅らせると想定している。十分な量のアセトニトリルを溶媒に加えることにより、これらの力に十分に打ち勝つことができ、ろ過による分離が容易となる。アセトニトリルを過剰に添加しないことにより、フィルターの損傷が回避され、デュオカルマイシン含有ＡＤＣの漏出が最小限となるか、防止される。さらに、３０％～６０％（v/v）のアセトニトリルは、ＡＤＣ、抗体又はデュオカルマイシン リンカー－薬物の安定性に影響を与えない。したがって、本発明者らは、驚くべきことに、水、酸及び３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％、最も好ましくは４０％のアセトニトリルを含む組成物中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、容易かつ効率的にろ過できることを見いだした。
【0018】
本発明での使用に適した酸は、有機酸又は無機鉱酸である。本発明で使用する酸は、通常、トリフルオロ酢酸、ギ酸及び塩酸からなる群から選択される。酸の量は重要ではなく、組成物がわずかに酸性であればよい。通常、酸は、組成物のｐＨを７未満とするように用いる。組成物中の酸の濃度は、０．０１％～５％（v/v）、０．０５％～２％、０．０５％～１．５％又は０．１％～１％であってもよい。
【0019】
本発明の組成物において、ＡＤＣの量は特に限定されない。組成物は、典型的には０．１～１００ｍｇ／ｍｌ、より典型的には０．５～５０ｍｇ／ｍｌ、通常１．０～１０ｍｇ／ｍｌのＡＤＣを含む。複合体を形成していない（遊離の）デュオカルマイシン リンカー－薬物の量は、典型的には０～１００μｇ／ｍｌ、より典型的には０～１０μｇ／ｍｌ、しばしは０～１μｇ／ｍｌである。多くの態様において、ＡＤＣの濃度は遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度と比較して少なくとも１，０００倍高い。
【0020】
組成物は追加の成分を含んでいてもよい。例えば、カラムクロマトグラフィー若しくはＵＦ／ＤＦで一般に使用される緩衝剤及び／若しくは塩、マンニトールなどの糖、並びに／又は製剤中に存在してもよい他の賦形剤がある。
【0021】
式（Ｉ）で示されるＡＤＣにおいて、Ａｂは、抗体、又は、例えばＦ（ａｂ’）２若しくはＦａｂ’断片、単鎖（ｓｃ）抗体、ｓｃＦｖ、単一ドメイン（ｓｄ）抗体、ダイアボディ若しくはミニボディのようなその抗原結合断片とすることができる。一般に、抗体又はその抗原結合断片は治療活性を有するものであるが、ＡＤＣの分野において知られているように、抗体単独での有効性は必ずしも必要ではない。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＭ抗体のような任意のアイソタイプであってもよい。好ましくは、抗体はＩｇＧ抗体であり、より好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ２抗体である。抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体であってもよい。好ましくは、抗体はヒト化されている。さらにより好ましくは、抗体はヒト化又はヒトＩｇＧ抗体であり、最も好ましくはヒト化又はヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。好ましくは、前記抗体はκ軽鎖、すなわちヒト化又はヒトＩｇＧ１－κ抗体である。
【0022】
明確にするために述べると、「ヒト化」抗体は、非ヒト種、通常はマウス、ラット又はウサギの抗体に由来する抗原結合相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し、少なくとも部分的にヒトのフレームワークを有する抗体を指す。例えば、非ヒトＣＤＲは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）の可変領域のヒトフレームワーク（フレームワーク領域（ＦＲ）ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）、すなわち、ヒト以外のＣＤＲを支える完全にヒトのフレームワーク内に配置することができる。しかし、ヒトＦＲ中の選択されたアミノ酸は、対応する非ヒトフレームワークのアミノ酸と交換し、例えば、低い免疫原性を維持しながら結合親和性を改善することができる。さらに、非ヒトフレームワークの大部分を保持し、非ヒトＦＲの選択されたアミノ酸のみを対応するヒトアミノ酸と交換して、抗体の結合親和性を維持しながら免疫原性を減少させることができる。これらの選択肢は全て、本発明の目的のための「ヒト化」可変領域であるとみなされる。このヒト化可変領域は、ヒトの定常領域と結合してヒト化抗体を形成する。
【0023】
これらの抗体は、組換えによって、合成によって、又は当該技術分野における他の適切な方法によって製造される。
【0024】
抗体は単一特異性（すなわち、１つの抗原に特異的；そのような抗原は種間で共通するか、類似したアミノ酸配列を有する可能性がある）又は二重特異性（すなわち、２つの異なる抗原に特異的）であり、アネキシンＡｌ、Ｂ７Ｈ４、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡ１５-３、ＣＡ１９-９、ＣＡ２７-２９、ＣＡ１２５、ＣＡ２４２（がん抗原２４２）、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０（腫瘍壊死因子８）、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８（サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼ）、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７（インテグリン関連タンパク質）、ＣＤ５６（神経細胞接着分子）、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ１１５（コロニー刺激因子１受容体）、ＣＤ１２３（インターロイキン３受容体）、ＣＤ１３８（シンデカン１）、ＣＤ２０３ｃ（ＥＮＰＰ３）、ＣＤ３０３、ＣＤ３３３、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ、ＣＬＣＡ-１（Ｃ型レクチン様分子１）、ＣＬＬ-１、ｃ-ＭＥＴ（肝細胞増殖因子受容体）、Ｃｒｉｐｔｏ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＬ、ＥＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、ＥＰｈ（例．ＥｐｈＡ２又はＥＰｈＢ３）、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、ＦＡＰ、ＦｃＲＬ５（Ｆｃ受容体様タンパク質５、ＣＤ３０７）、ＦＧＦＲ（例．ＦＧＦＲ３）、ＦＯＬＲ１（葉酸受容体α）、ＧＣＣ（グアニリルシクラーゼＣ）、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２、ＨＭＷ-ＭＡＡ（高分子量メラノーマ関連抗原）、インテグリンα（例．αｖβ３及びαｖβ５）、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＭ４ＳＦ１（又はＬ６抗原）、ルイスＡ様糖鎖、ルイスＸ、ルイスＹ（ＣＤ１７４）、ＬＩＶ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＮ（ＣＡ９）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン４、ＰＤ-１、ＰＤ-Ｌ１、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ-１、５Ｔ４抗原（又はＴＰＢＧ、栄養芽細胞糖タンパク質）、ＴＦ（組織因子、トロンボプラスチン、ＣＤ１４２）、ＴＦ-Ａｇ、Ｔａｇ７２、ＴＮＦＲ、ＴＲＯＰ２（腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２）、ＶＥＧＦＲ及びＶＬＡからなる群から選択される標的に結合する少なくとも１つのＨＣ及びＬＣ可変領域を含む。
【0025】
適切な抗体の例には、ブリナツモマブ（ＣＤ１９）、エプラツズマブ（ＣＤ２２）、イラツムマブ及びブレンツキシマブ（ＣＤ３０）、バダスツキシマブ（ＣＤ３３）、テツルマブ（ＣＤ３７）、イサツキシマブ（ＣＤ３８）、ビバツズマブ（ＣＤ４４）、ロルボツズマブ（ＣＤ５６）、ボルセツズマブ（ＣＤ７０）、ミラツズマブ（ＣＤ７４）、ポラツズマブ（ＣＤ７９）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、フツキシマブ（ＥＧＦＲ）、オポルツズマブ（ＥＰＣＡＭ）、ファルレツズマブ（ＦＯＬＲ１）、グレンバツムマブ（ＧＰＮＭＢ）、トラスツズマブ及びペルツズマブ（ＨＥＲ２）、エタラシズマブ（インテグリン）、アネツマブ（メソテリン）、パンコマブ（ＭＵＣ１）、エンホルツマブ（ネクチン-４）並びにＨ８、Ａ１及びＡ３（５Ｔ４抗原）が含まれる。
【0026】
好ましい態様では、式（Ｉ）で示される化合物におけるＡｂは抗ＨＥＲ２抗体であり、さらにより好ましいＡｂは抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブである。
【0027】
本発明では、式（Ｉ）で示される化合物におけるＬ－Ｄは、デュオカルマイシン リンカー－薬物の一部分あってもよい。デュオカルマイシンの一部分は、以下の式：
【0028】
【化1】
【0029】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、Ｎ３、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＦ３、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ハロゲン、Ｒａ、ＳＲａ、Ｓ（Ｏ）Ｒａ、Ｓ（Ｏ）２Ｒａ、Ｓ（Ｏ）ＯＲａ、Ｓ（Ｏ）２ＯＲａ、ＯＳ（Ｏ）Ｒａ、ＯＳ（Ｏ）２Ｒａ、ＯＳ（Ｏ）ＯＲａ、ＯＳ（Ｏ）２ＯＲａ、ＯＲａ、ＮＨＲａ、Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、＋Ｎ（Ｒａ）（Ｒｂ）Ｒｃ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）、ＳｉＲａＲｂＲｃ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、ＯＣ（Ｏ）ＯＲａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）Ｒｃ及び水溶性基からなる群から選択され、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは独立して、Ｈ及び任意に置換された（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａａＣＨ２ＣＨ２Ｘ１Ｒａ１、Ｃ１－１５アルキル、Ｃ１－１５ヘテロアルキル、Ｃ３－１５シクロアルキル、Ｃ１－１５ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－１５アリール又はＣ１－１５ヘテロアリールからなる群から選択され、
ａａは１～１０００であり、Ｘ１は、Ｏ、Ｓ及びＮＲｂ１から選択され、Ｒｂ１及びＲａ１は独立して、Ｈ及びＣ１－３アルキルから選択され、
Ｒａ、Ｒｂ及び／又はＲｃの１つ以上の置換基は、水溶性基であってもよく、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃの２つ以上は結合して、１つ以上の置換された炭素環及び／又は複素環を形成してもよい）
のいずれかで示されることが好ましい。
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、Ｎ３、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＦ３、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ハロゲン、Ｒａ、ＳＲａ、Ｓ（Ｏ）Ｒａ、Ｓ（Ｏ）２Ｒａ、Ｓ（Ｏ）ＯＲａ、Ｓ（Ｏ）２ＯＲａ、ＯＳ（Ｏ）Ｒａ、ＯＳ（Ｏ）２Ｒａ、ＯＳ（Ｏ）ＯＲａ、ＯＳ（Ｏ）２ＯＲａ、ＯＲａ、ＮＨＲａ、Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、＋Ｎ（Ｒａ）（Ｒｂ）Ｒｃ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）、ＳｉＲａＲｂＲｃ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、ＯＣ（Ｏ）ＯＲａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）Ｒｃ及び水溶性基からなる群から選択され、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは独立して、Ｈ及び任意に置換された（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａａＣＨ２ＣＨ２Ｘ１Ｒａ１、Ｃ１－１５アルキル、Ｃ１－１５ヘテロアルキル、Ｃ３－１５シクロアルキル、Ｃ１－１５ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－１５アリール又はＣ１－１５ヘテロアリールからなる群から選択され、
ａａは１～１０００であり、Ｘ１は、Ｏ、Ｓ及びＮＲｂ１から選択され、Ｒｂ１及びＲａ１は独立して、Ｈ及びＣ１－３アルキルから選択され、
Ｒａ、Ｒｂ及び／又はＲｃの１つ以上の置換基は、水溶性基であってもよく、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃの２つ以上は結合して、１つ以上の置換された炭素環及び／又は複素環を形成してもよい）
のいずれかで示されることが好ましい。
【0030】
リンカー部分（－Ｌ－）は、薬物と抗体又はその抗原結合断片を連結させるための既知又は適切な部分とすることができる。一般に、当該技術分野において知られているように、抗体から薬物を切り離すために、リンカーは特定の条件で切断可能である。
【0031】
抗体（又はその断片）に結合するリンカーの末端は、通常、比較的温和な条件で、Ａｂの天然又は非天然アミノ酸と反応できる官能基を含む。この官能基は、本明細書では反応性部分（ＲＭ）という。反応性部分の例には、カルバモイルハライド、アシルハライド、活性エステル、無水物、α-ハロアセチル、α-ハロアセトアミド、マレイミド、イソシアネート、イソチオシアネート、ジスルフィド、チオール、ヒドラジン、ヒドラジド、塩化スルホニル、アルデヒド、メチルケトン、ビニルスルホン、ハロメチル及びメチルスルホネートが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【0032】
本発明の好ましい態様では、ＲＭは、
【0033】
【化2】
【0034】
（式中、
Ｘ５は、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｆ、－ＯＨ、－Ｏ－N-スクシンイミド、－Ｏ－(4-ニトロフェニル)、－Ｏ－ペンタフルオロフェニル、－Ｏ－テトラフルオロフェニル、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ４及び－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ４から選択され、
Ｘ６は、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｏ－メシル、－Ｏ－トリフリル及び－Ｏ－トシルから選択され、
Ｒ４は、分岐又は非分岐のＣ１～Ｃ１０アルキル又はアリールである）
である。
Ｘ５は、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｆ、－ＯＨ、－Ｏ－N-スクシンイミド、－Ｏ－(4-ニトロフェニル)、－Ｏ－ペンタフルオロフェニル、－Ｏ－テトラフルオロフェニル、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ４及び－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ４から選択され、
Ｘ６は、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｏ－メシル、－Ｏ－トリフリル及び－Ｏ－トシルから選択され、
Ｒ４は、分岐又は非分岐のＣ１～Ｃ１０アルキル又はアリールである）
である。
【0035】
デュオカルマイシン リンカー－薬物は、複合体を形成した形態（－Ｌ－Ｄ）、又は「遊離」のリンカー－薬物と呼ばれる複合体を形成していない形態（Ｌ－Ｄ）で表すことができる。したがって、以下の式（ＩＩ）で示される部分及び式（ＩＶ）で示される化合物は、それぞれ、好ましいデュオカルマイシン リンカー－薬物の複合体を形成した形態及び複合体を形成していない形態を表す。同様に、式（ＩＩＩ）で示される部分及び式（Ｖ）で示される化合物は、それぞれ、別の好ましいデュオカルマイシン リンカー－薬物の複合体を形成した形態及び複合体を形成していない形態を表す。
【0036】
【化3】
【0037】
（式中、
ｎは０～３であり、
Ｒ５は
ｎは０～３であり、
Ｒ５は
【0038】
【化4】
【0039】
から選択され、
ｙは１～１６であり
Ｒ６は
ｙは１～１６であり
Ｒ６は
【0040】
【化5】
【0041】
から選択される）
【0042】
別のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、複合体を形成した形態については式（ＩＩＩ）で示され、複合体を形成していない形態については式（Ｖ）で示される。
【0043】
【化6】
【0044】
（式中、
Ｖ１は、条件付きで切断可能であるか又は条件付きで変換可能な部分であって、化学的、光化学的、物理的、生物学的又は酵素的な方法で切断又は変換することができ、Ｚはデュオカルマイシン誘導体であり、ｎは０、１、２又は３であり、ｐは０又は１である）
Ｖ１は、条件付きで切断可能であるか又は条件付きで変換可能な部分であって、化学的、光化学的、物理的、生物学的又は酵素的な方法で切断又は変換することができ、Ｚはデュオカルマイシン誘導体であり、ｎは０、１、２又は３であり、ｐは０又は１である）
【0045】
好ましくは、Ｚは上述のとおりの式：
【0046】
【化7】
【0047】
で示されるデュオカルマイシン部分である。本発明で使用するデュオカルマイシン部分（例．Ｚ）の具体例には、
【0048】
【化8-1】
【0049】
【化8-2】
【0050】
が含まれる。
【0051】
デュオカルマイシン リンカー－薬物の特に好ましいものは、複合体を形成した形態で、以下に示すもの：
【0052】
【化9】
【0053】
対応する複合体を形成していない形態（すなわち、vc-seco-DUBA）で以下に示すもの：
【0054】
【化10】
【0055】
である。
【0056】
デュオカルマイシン リンカー－薬物の以下のもの：
【0057】
【化11-1】
【0058】
【化11-2】
【0059】
【化11-3】
【0060】
は、簡潔にするために、複合体を形成した形態でのみ示しているが、当業者であれば理解できるように、対応する複合体を形成していない形態も考えられることを理解されたい。
【0061】
本発明の組成物は、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の、単なるろ過による分離の促進に有用である。このような分離により、大量のＡＤＣに負担をかけることなく、ろ液中の非常に少量の遊離のリンカー－薬物の分析が可能となる。より広い意味で、本発明の組成物は、ＡＤＣ組成物中の遊離のリンカー－薬物の存在及び／又は量の確認をより正確に、便利に、及び実用的にする。
【0062】
遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量の検出及び／又は定量は、いくつかの応用例を示すと、ＡＤＣのゆるぎない精製方法の開発、ＡＤＣの原薬又は医薬品の品質管理、原薬又は医薬品の安定性試験など、さまざまな用途で役に立つ。ＡＤＣのほとんどの医薬としての用途では、遊離のリンカー－薬物がほとんど又はまったく存在しないことを意図している点を理解する必要がある。デュオカルマイシンは強力である。抗体又はその抗原結合断片と複合体を形成した場合、デュオカルマイシンは細胞傷害性の弾頭として抗体が標的とした部位に送達される。しかし、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物により、健康な細胞がランダムに破壊される可能性があり、したがって、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量を厳密に低レベルに制御する必要がある。デュオカルマイシン含有ＡＤＣに遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物が存在した場合、患者に許容できない危険性が生じる可能性がある。したがって、精製処理により全ての遊離のリンカー－薬物の除去が期待されるので、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、本発明のろ過可能な組成物中に存在するとしても、ごく微量である。存在するかどうかにかかわらず、ＡＤＣ組成物中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の非存在を確認し、及び／又は、（存在する場合）検出されたとしてもその量が非常に少ないことを確認する方法があることが重要である。
【0063】
本発明の組成物は、溶媒、酸及びＡＤＣを組み合わせる方法により製造することができる。成分の添加の順序、及び逐次に添加するか、又は同時に添加するかは限定されない。しかし、多くの場合、水溶液又は凍結乾燥物の形態のＡＤＣは、本発明のろ過可能な組成物を形成するために、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせる。
【0064】
したがって、本発明の別の側面は、
(i) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
で示されるＡＤＣ、及び、場合によっては対応する複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液（又は凍結乾燥物）を、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％のアセトニトリルを含む本発明のろ過可能な組成物を形成することを含む方法に関する。
(i) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｍ （Ｉ）
で示されるＡＤＣ、及び、場合によっては対応する複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液（又は凍結乾燥物）を、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％のアセトニトリルを含む本発明のろ過可能な組成物を形成することを含む方法に関する。
【0065】
ＡＤＣの水溶液は、さまざまな供給源から生じる可能性がある。例えば、ＡＤＣ水溶液は、リンカー－薬物と抗体（又はその抗原結合断片）を結合させた反応液から、又は、引き続き精製若しくは単離した反応生成物、すなわち、例えば凍結乾燥物のような精製された形態のデュオカルマイシンＡＤＣから得てもよい。
【0066】
これらのＡＤＣ水溶液中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、通常、未反応のリンカー－薬物である。結合反応では、しばしば、モル過剰のリンカー－薬物が使用されるので、多くの場合、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の除去を確実にする精製が行われる。したがって、これらの供給源からの水溶液は、結合反応の程度を監視し、精製方法を評価することが予定されている可能性がある。
【0067】
ＡＤＣ水溶液の別の供給源は、最終的なＡＤＣ原薬又は医薬品からの試料である。通常、ＡＤＣは注射可能な組成物の形態で送達されるので、多くの場合、原薬及び製剤は水溶液の形態である。そのような水溶液中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物は、もし存在すれば、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の精製中の不完全な除去、及び／又はＡＤＣからのデュオカルマイシン リンカー－薬物の意図しない切断から生じ得る。これらの供給源は、ＡＤＣ組成物の経時的な安定性を測定又は監視し、例えば、保存中に遊離のリンカー－薬物が形成／切断されていないことを確認するための、安定性試験及び／又は参照試料からのものであるかもしれない。
【0068】
あるいは、原薬又は医薬品は凍結乾燥の形態（「凍結乾燥物」）であってもよい。凍結乾燥物は、通常、水で再構成しＡＤＣ水溶液を形成する。この再構成された液体組成物の全部又は一部が、ＡＤＣ水溶液として機能することができる。別の選択肢は、中間の水性再構成溶液を調製することなく、直接、凍結乾燥物と本発明の希釈媒体を組み合わせる方法である。
【0069】
当業者であれば理解できるように、ＡＤＣ水溶液は、溶液のさまざまな供給源を考慮し、緩衝液、塩、糖類（マンニトールなど）、凍結乾燥固化剤などの成分を含む可能性がある。同様に、凍結乾燥物には、緩衝剤、凍結保護剤、界面活性剤、安定剤などの成分が含まれている可能性がある。
【0070】
ＡＤＣ水溶液又は凍結乾燥物で共通する希釈媒体を添加することは、本発明のろ過可能な組成物を形成する便利な方法である。希釈媒体は、３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％、最も好ましくは４０％といった所望の濃度のアセトニトリルを形成するのに十分な量の、水、アセトニトリル及び酸を含む。所望の濃度のアセトニトリルを形成するのに十分な量の希釈媒体を添加することにより、一工程で、本発明のろ過可能な組成物が形成される。
【0071】
本発明の組成物は、フィルターを通過させて、ＡＤＣを実質的に含まないろ液を形成することができる。本発明において使用される用語「実質的に含まない」は、本発明の組成物中に存在するＡＤＣの量が１％以下のろ液を指す。その量は、典型的には０．５％以下、より典型的には０．２％以下、しばしば０．１％以下である。明確にするために述べると、本発明の組成物が２．５ｍｇ／ｍｌのＡＤＣを含む場合、ろ液中には１％又は０．０２５ｍｇ／ｍｌ以下のＡＤＣが存在してもよい。
【0072】
当業者であれば理解できるように、フィルターの分子量カットオフ値は、抗体又は抗原結合断片の分子量の１/３～１/６である。実際には、フィルターの分子量カットオフは、１～１００ｋＤａ、より好ましくは３～５０ｋＤａ、さらにより好ましくは１０～３０ｋＤａである。式（Ｉ）で示されるＡＤＣでは、分子量カットオフが１０ｋＤａのフィルターが特に好ましい。
【0073】
一般に、遠心ろ過が最も便利であると考えられているが、ろ過の方法は特に限定されない。重力ろ過も可能であるが、これは終了するまでに時間がかかる。さまざまな遠心ろ過装置が市販されており、利用できる。例えば、ポール社はナノセップ（登録商標）（オメガメンブレン）及びマイクロセップ（登録商標）遠心ろ過デバイスを製造している。これらのデバイスは、ろ過する試料の体積が異なる。本発明の場合、しばしばより小さなナノセップ（登録商標）（例．容量０．５ｍＬ）が好ましい。通常、遠心分離の時間は１０分～３０分、速度は１２，０００ｇ～１５，０００ｇである。
【0074】
本発明では、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物とＡＤＣの分離を可能にする適切なフィルター材料を使用することができ、当業者はそのようなフィルター材料を決定することができる。有機溶媒（アセトニトリル）がフィルターを損傷する可能性があるため、一部のフィルターの材料は他の素材より強靭である。この損傷では、例えば、フィルターからのＡＤＣの漏出を多くする穴が生じ、フィルターを分離に不適切とする可能性がある。市販のフィルターは、通常、修飾ナイロン、親水性ポリプロピレン、ポリエーテルスルホン又は修飾ポリエーテルスルホン製の膜を有する。本発明の目的において好ましいフィルター材料には、ポール社から販売されているナノセップ（登録商標）オメガフィルターのような、修飾されたポリエーテルスルホン材料が含まれる。
【0075】
ろ過の前に、組成物を均質化することが有用であるかもしれない。均質化は、組成物内でのアセトニトリルが均一に分布することを可能にする適切な装置を用いて行ってもよい。均質化は、デュオカルマイシン含有ＡＤＣと遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の単なるろ過による分離をさらに促進する可能性がある。
【0076】
本発明の組成物を分離装置に導入後、フィルターを通過する液体、すなわち「ろ液」は、式（Ｉ）で示されるＡＤＣを実質的に含まない。次いで、ろ液を分析し、もしデュオカルマイシン リンカー－薬物が存在する場合には、場合によってはろ液中の濃度を測定することができる。任意の適切な技法を使用することができる。通常、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）などの（液体）クロマトグラフィーを使用する。使用するクロマトグラフィーは、例えば、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＨＰＬＣ）、又はより好ましくは、逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＵＰＬＣ）のような逆相クロマトグラフィーである。クロマトグラフィーの条件、例えば、カラム充填剤、移動相、用いる勾配、並びに一般的な注入／結合条件及び溶出条件の適切な選択は、当業者が行う通常の技法である。本発明では、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の検出に、適切な検出器を使用することができる。通常、ＵＶ検出器を使用する。ＵＶ検出器を備えたＵＰＬＣは、有利なことに、少量の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む試料の分析に優れた結果を提供する。
【0077】
前記ろ液中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物（存在する場合）の量の測定（定量）は、通常、水溶液に含まれる遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量と相関する。ＡＤＣを実質的に含まないろ液を得るためのろ過方法において本発明の組成物を使用する場合、クロマトグラフィーによる分離及び検出における遊離のリンカー－薬物の定量限界は、ＡＤＣ １ｍｇあたり０．２μｇ又はそれ以下になる可能性がある。すなわち、定量測定を元のＡＤＣ水溶液、例えば原薬と相関させることにより、ＡＤＣ １ｍｇあたり、少なくとも０．２μｇの遊離のリンカー－薬物は測定することができる。実際、定量限界を、ＡＤＣ １ｍｇあたり０．１μｇや０．０１μｇなどと、低く設定することができる。
【0078】
本発明の特別な応用は、ＡＤＣのバッチを販売許可／承認する方法であって、
1) ＡＤＣのバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくはアセトニトリルを３５％～５５％含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記ＡＤＣを実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記ＡＤＣのバッチを販売許可／承認すること
を含む方法に関する。
1) ＡＤＣのバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくはアセトニトリルを３５％～５５％含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記ＡＤＣを実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記ＡＤＣのバッチを販売許可／承認すること
を含む方法に関する。
【0079】
本明細書において、用語「抗体薬物複合体のバッチ」又は「ＡＤＣのバッチ」は、精製された形態であり、場合によっては非経口製剤又は凍結乾燥物に適した賦形剤を含む、全ての処理段階を完了したＡＤＣの商業規模での生産物を指す。実際、ＡＤＣのバッチの規模は、通常、少なくとも３０Ｌである。ＥＭＡやＦＤＡといった規制当局は、医薬品のこのようなバッチがさまざまな純度及び品質についての基準を満たすことを要求している。ＡＤＣの場合、それらの純度に関する基準の１つは遊離のリンカー－薬物の量である。上記の方法は、デュオカルマイシンＡＤＣと遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の分離における本発明の組成物とその有利な使用が含まれており、そのような遊離のリンカー－薬物が存在するのであれば、それを良く検出する。したがって、ろ液を一般にＲＰ-ＵＰＬＣで分析し、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が規制値（つまり、「前もって定めた値」）を下回っているかどうかを判断する。一般に前もって定めた値は非常に低く、多くの場合、ＡＤＣ １ｍｇに対する遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の最大量は０．２μｇ、好ましくは０．１μｇ、より好ましくは０．０２μｇである。前もって定めた値の決定は、数値により、又は検出限界（ＬＯＤ）試験で行うことができる。後者では、検出限界は前もって定めた値以下である可能性があり、したがって、否定的な結果（遊離のリンカー－薬物なし）は前もって定めた値を満たす（所定のレベル未満である）と見なされる。定量限界（ＬＯＱ）を使用して同様の戦略が採用でき、この場合、遊離のリンカー－薬物は存在するが定量限界を下回る。定量限界は前もって定めた値以下であることから、定量限界未満の検出量は前もって定めた値を下回るとみなされる。いずれの場合も、数量が所定の限度を下回っているので、数値が決まらなくてもバッチが承認される可能性がある。
【0080】
試料中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回ることが示されると、販売、出荷、患者による使用などのために、ＡＤＣのバッチを許可又は承認することができる。本発明において、用語「販売許可／承認」は、ＡＤＣのバッチが少なくとも遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物についての要件を満たしたことを指す。遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物が前もって定めた値を超える試料は、臨床試験での使用に適していないか、市販の医薬品として承認されない（販売又は使用することができない）。このようなバッチは販売許可又は承認されない。通常、医薬品はその品質に関する多く試験に合格する必要があり、これに失敗すると、最終的に販売許可又は承認されない。したがって、本発明における販売許可／承認は、遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の含有量に関するＡＤＣ製品のバッチの販売許可又は承認が得られたことを指し、必ずしも当該バッチについての最終的な販売許可及び／又は承認ではない。
【0081】
この発明は、ろ液が複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含むかどうかを決定する目的で詳細に説明しているが、他の不純物の測定に類似の方法を適用できることは、当業者には容易に明らかである。特に、その組成物とそのろ過は、デュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物を測定することができる試料を提供するために有用である。本発明における用語「デュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物」は、デュオカルマイシン含有ＡＤＣ原薬及び医薬品の合成、精製及び保存中のデュオカルマイシン リンカー－薬物の分解で生じる可能性のある不純物を指す。通常は、分子量が２，０００Ｄａ（典型的なリンカー－薬物の分子）未満の低分子である、これらの不純物は、毒性を引き起こす可能性があるため、規制当局はそのような不純物の１つ以上に対して最大のしきい値（又は前もって定めた値）を設定する可能性がある。本発明の方法により、これらの不純物の存在及び定量が確立される。
【0082】
以下の実施例は、本発明を説明するためのもので、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【0083】
材料と方法
トラスツズマブ デュオカルマジン（ＳＹＤ９８５）及びリンカー－薬物であるvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０）は、国際公開第2011/133039号に記載されている材料及び方法を使用して得た。試薬、溶媒及び緩衝液は、市販のものを使用した。
トラスツズマブ デュオカルマジン（ＳＹＤ９８５）及びリンカー－薬物であるvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０）は、国際公開第2011/133039号に記載されている材料及び方法を使用して得た。試薬、溶媒及び緩衝液は、市販のものを使用した。
【0084】
試料及びブランクは、以下のように準備した。
【0085】
試料及びブランクの調製
デュオカルマイシン含有ＡＤＣ（１０ｍｇ／ｍＬ）及びおそらく複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む試料１００μＬをピペットで採取し、１０Ｋフィルター（ナノセップ（登録商標）オメガ遠心ろ過デバイス）を備えた容器に入れた。０．１３％のギ酸とミリＱ水中の５３％のアセトニトリルの溶液を含む希釈媒体３００μＬを前記容器に加えた。試料と希釈媒体をフィルター上で（例えばボルテックスを使用して）均質化し、１４，０００ｇで１５分間遠心分離し、ろ液を（例えばボルテックスを使用して）均質化し、ＨＰＬＣ用バイアルに移した。
デュオカルマイシン含有ＡＤＣ（１０ｍｇ／ｍＬ）及びおそらく複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む試料１００μＬをピペットで採取し、１０Ｋフィルター（ナノセップ（登録商標）オメガ遠心ろ過デバイス）を備えた容器に入れた。０．１３％のギ酸とミリＱ水中の５３％のアセトニトリルの溶液を含む希釈媒体３００μＬを前記容器に加えた。試料と希釈媒体をフィルター上で（例えばボルテックスを使用して）均質化し、１４，０００ｇで１５分間遠心分離し、ろ液を（例えばボルテックスを使用して）均質化し、ＨＰＬＣ用バイアルに移した。
【0086】
ブランクの調製は、上記と同じ手順に従ったが、デュオカルマイシン含有ＡＤＣ及び複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含む試料の代わりに１００μＬのミリＱ水を使用した。
【0087】
外部標準試料の調製
試料中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度の計算に外部標準試料を使用した。外部標準試料は複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物０．２５μｇ／ｍＬを使用して調製した。
試料中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度の計算に外部標準試料を使用した。外部標準試料は複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物０．２５μｇ／ｍＬを使用して調製した。
【0088】
ＲＰ-ＵＰＬＣ
分析のために、１０μＬのＨＰＬＣ用バイアル中の試料又はブランクを、イソブチル側鎖を有しＴＭＳエンドキャッピングを備えたオクタデシル（Ｃ１８）誘導シリカの逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＵＰＬＣ）カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ １．７μｍ、ＸＢ-Ｃ１８ １００Å、１００×２．１ｍｍ、Phenomenex）に、流速０．５ｍＬ／分、カラム温度４５℃で注入した。溶出方法を以下の表１に示す。移動相Ａの組成はミリＱ水中の０．１％ギ酸で、移動相Ｂの組成はアセトニトリル／メタノール ５０／５０v/v中の０．１％ギ酸である。１０ｍｍの分析セル付きＵＶ検出器を備えた逆相超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を使用した。３２５ｎｍの吸光度を測定した。Waters Empowerソフトウェアで、ピーク面積を決定した。数式（ＶＩ）：
分析のために、１０μＬのＨＰＬＣ用バイアル中の試料又はブランクを、イソブチル側鎖を有しＴＭＳエンドキャッピングを備えたオクタデシル（Ｃ１８）誘導シリカの逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＵＰＬＣ）カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ １．７μｍ、ＸＢ-Ｃ１８ １００Å、１００×２．１ｍｍ、Phenomenex）に、流速０．５ｍＬ／分、カラム温度４５℃で注入した。溶出方法を以下の表１に示す。移動相Ａの組成はミリＱ水中の０．１％ギ酸で、移動相Ｂの組成はアセトニトリル／メタノール ５０／５０v/v中の０．１％ギ酸である。１０ｍｍの分析セル付きＵＶ検出器を備えた逆相超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を使用した。３２５ｎｍの吸光度を測定した。Waters Empowerソフトウェアで、ピーク面積を決定した。数式（ＶＩ）：
【0089】
【数1】
【0090】
を使用して、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を定量した。
【0091】
ＣＬ－Ｄは試料中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度、ＡＬ－Ｄは試料中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物のピーク面積、Ｃｓｔｄは外部標準中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度、Ｎは試料の希釈倍率、Ａｓｔｄは外部標準中の複合体を形成していないデュオカルマイシン含有リンカー－薬物の平均（少なくとも３回の平均）ピーク面積である。
【0092】
数式（ＶＩＩ）：
【0093】
【数2】
【0094】
により、デュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物の量を計算した。
【0095】
Ｃｉは試料中のデュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物の濃度、Ａｉは試料中のデュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物のピーク面積、Ｃｓｔｄ外部標準中の複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の濃度、Ｎは試料の希釈倍率、Ａｓｔｄは上述のとおり、ＲＲＦｉはデュオカルマイシン リンカー－薬物に関連する不純物の相対応答係数である。
【0096】
【表1】
【0097】
実施例１ 外部標準試料
複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物であるvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０）（０．２５μｇ／ｍＬ）をＲＰ-ＵＰＬＣ法で分析した。そのクロマトグラムを図１に示す。図１は、６．２０５分に複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物（vc-seco-DUBA）の明確なピークを示す。
複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物であるvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０）（０．２５μｇ／ｍＬ）をＲＰ-ＵＰＬＣ法で分析した。そのクロマトグラムを図１に示す。図１は、６．２０５分に複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物（vc-seco-DUBA）の明確なピークを示す。
【0098】
実施例２ ＡＤＣの分析
トラスツズマブ デュオカルマジンのバッチから得た試料を上述の試料調製法に従って処理し、ＲＰ-ＵＰＬＣ法で分析した。得られたクロマトグラムは、複合体を形成していないリンカー－薬物であるvc-seco-DUBAの存在を示さなかった。得られたクロマトグラムを図２に示すが、６．２分付近にピークは存在しない。分析の結果は、試料中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量は検出限界を下回り、したがって前もって定めた値（すなわち、合格／不合格検出試験）を下回ったことを示した。したがって、バッチの販売許可／承認は適切であった。
トラスツズマブ デュオカルマジンのバッチから得た試料を上述の試料調製法に従って処理し、ＲＰ-ＵＰＬＣ法で分析した。得られたクロマトグラムは、複合体を形成していないリンカー－薬物であるvc-seco-DUBAの存在を示さなかった。得られたクロマトグラムを図２に示すが、６．２分付近にピークは存在しない。分析の結果は、試料中の遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量は検出限界を下回り、したがって前もって定めた値（すなわち、合格／不合格検出試験）を下回ったことを示した。したがって、バッチの販売許可／承認は適切であった。
【0099】
実施例３ 組成物の比較
トラスツズマブ デュオカルマジン（１０ｍｇ／ｍＬ）及びvc-seco-DUBA（０．２５μｇ／ｍＬ）を含む試料１００μＬを１０Ｋフィルター（ナノセップ（登録商標）オメガ遠心ろ過デバイス）を備えた容器に入れた。異なる比率の水、アセトニトリル（ＡＣＮ）又はメタノール（ＭｅＯＨ）と、さまざまな割合の酸（ギ酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は塩酸）を含む希釈媒体（３００μＬ）を前記容器に加えた。試料と希釈媒体をフィルター上で均質化し、１４，０００ｇで１５分間遠心分離した。ろ液を均質化し、ＨＰＬＣ用バイアルに移した。ろ液中のvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０、すなわち、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物）の量を、表１に示すグラジエントプログラムを使用してＲＰ-ＵＰＬＣ-ＵＶで検出し、数式（ＶＩ）を使用して定量した。結果を表２にまとめる。
トラスツズマブ デュオカルマジン（１０ｍｇ／ｍＬ）及びvc-seco-DUBA（０．２５μｇ／ｍＬ）を含む試料１００μＬを１０Ｋフィルター（ナノセップ（登録商標）オメガ遠心ろ過デバイス）を備えた容器に入れた。異なる比率の水、アセトニトリル（ＡＣＮ）又はメタノール（ＭｅＯＨ）と、さまざまな割合の酸（ギ酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は塩酸）を含む希釈媒体（３００μＬ）を前記容器に加えた。試料と希釈媒体をフィルター上で均質化し、１４，０００ｇで１５分間遠心分離した。ろ液を均質化し、ＨＰＬＣ用バイアルに移した。ろ液中のvc-seco-DUBA（ＳＹＤ９８０、すなわち、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物）の量を、表１に示すグラジエントプログラムを使用してＲＰ-ＵＰＬＣ-ＵＶで検出し、数式（ＶＩ）を使用して定量した。結果を表２にまとめる。
【0100】
【表2】
【0101】
最初の実験は、トラスツズマブ デュオカルマジンと複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物であるvc-seco-DUBAのろ過による分離を、アセトニトリルが促進することを示す。４０％のアセトニトリルとギ酸又はトリフルオロ酢酸を組み合わせて使用した場合に、vc-seco-DUBAが最適に回収された。アセトニトリルに代えてメタノールを使用した場合、vc-seco-DUBAを回収することはできなかった。
【0102】
第２の実験は、アセトニトリルを２５％から５０％に変化させることにより、回収率が１２％から９０％となり、アセトニトリルの量の増加がvc-seco-DUBAの回収に有益であることを示す。アセトニトリルの量が３０％以上であれば、得られた回収率は許容できる。図３は、実験５（３０％ＡＣＮ）、実験１（４０％ＡＣＮ）及び実験１０（５５％ＡＣＮ）のクロマトグラムを示す。グラフから理解できるように、６．２分付近のピークは、回収された遊離のデュオカルマイシン リンカー－薬物の量に対応し、ＡＣＮの割合が増加するにつれて増加する。
【0103】
第３の実験では、さらに、酸の種類又は量の影響を検討した。結果は、酸の種類や量は重要ではなく、組成物のｐＨが７未満であれば十分であることを示す。
以下に、本願の出願当初の請求項を実施の態様として付記する。
［１］ (a) 水及びアセトニトリルを含む溶媒、
(b) 酸、
(c) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ） ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、
場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物
を含む組成物であって、
前記組成物は、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、組成物。
［２］ 前記組成物は、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む、［１］に記載の組成物。
［３］ 前記抗体薬物複合体の濃度は、０．１～１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．５～５０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．０～１０ｍｇ／ｍｌである、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］ 前記酸の濃度は、０．０１％～５％（v/v）、好ましくは０．０５％～２％、より好ましくは０．０５％～１．５％、最も好ましくは０．１％～１％である、［１］～［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］ 前記酸は、トリフルオロ酢酸、ギ酸及び塩酸からなる群から選択される、［１］～［４］のいずれかに記載の組成物。
［６］ 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物は式（ＩＶ）：
（式中、ｎは０～３であり、Ｒ
５
は
から選択され、ｙは１～１６であり、Ｒ
６
は
から選択される）
で示される、［１］～［５］のいずれかに記載の組成物。
［７］ 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物は、式：
で示される、［１］～［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］ 前記ＡｂはＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である、［１］～［７］のいずれかに記載の組成物。
［９］ (i) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ） ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によって複合体を形成していない前記デュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液又は凍結乾燥物と、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体を組み合わせて、組成物を形成することを含む方法であって、
前記組成物は、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、方法。
［１０］ さらに、前記組成物を分子量カットオフが３ｋＤａ～５０ｋＤａのフィルターでろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を形成することを含む、［９］に記載の方法。
［１１］ 前記ろ過は遠心ろ過である、［１０］に記載の方法。
［１２］ 前記フィルターは、修飾ポリエーテルスルホン、好ましくはナノセップ（登録商標）オメガフィルターを含む、［１１］に記載の方法。
［１３］ 前記ろ液中に前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が存在するのであれば、さらに、前記ろ液に対して、前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を単離してその量を測定するのに適したクロマトグラフィー分離を行うことを含む、［１０］～［１２］のいずれかに記載の方法。
［１４］ 抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認する方法であって、
1) 抗体薬物複合体のバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認すること
を含む方法。
［１５］ 前記前もって定めた値が、前記試料中、抗体薬物複合体１ｍｇに対してデュオカルマイシン リンカー－薬物０．２μｇ以下に相当する、［１４］に記載の方法。
以下に、本願の出願当初の請求項を実施の態様として付記する。
［１］ (a) 水及びアセトニトリルを含む溶媒、
(b) 酸、
(c) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ） ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、
場合によっては、(d) 複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物
を含む組成物であって、
前記組成物は、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、組成物。
［２］ 前記組成物は、複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む、［１］に記載の組成物。
［３］ 前記抗体薬物複合体の濃度は、０．１～１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．５～５０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．０～１０ｍｇ／ｍｌである、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］ 前記酸の濃度は、０．０１％～５％（v/v）、好ましくは０．０５％～２％、より好ましくは０．０５％～１．５％、最も好ましくは０．１％～１％である、［１］～［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］ 前記酸は、トリフルオロ酢酸、ギ酸及び塩酸からなる群から選択される、［１］～［４］のいずれかに記載の組成物。
［６］ 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物は式（ＩＶ）：
【化12】
【化13】
【化14】
で示される、［１］～［５］のいずれかに記載の組成物。
［７］ 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物は、式：
【化15】
［８］ 前記ＡｂはＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である、［１］～［７］のいずれかに記載の組成物。
［９］ (i) 式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ） ｍ （Ｉ）
（式中、Ａｂは抗体又はその抗原結合断片であり、Ｌ－Ｄはデュオカルマイシン リンカー－薬物であり、ｍは１～１２の平均ＤＡＲを表す）
で示される抗体薬物複合体、及び、場合によって複合体を形成していない前記デュオカルマイシン リンカー－薬物をさらに含む水溶液又は凍結乾燥物と、(ii) 水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体を組み合わせて、組成物を形成することを含む方法であって、
前記組成物は、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含む、方法。
［１０］ さらに、前記組成物を分子量カットオフが３ｋＤａ～５０ｋＤａのフィルターでろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を形成することを含む、［９］に記載の方法。
［１１］ 前記ろ過は遠心ろ過である、［１０］に記載の方法。
［１２］ 前記フィルターは、修飾ポリエーテルスルホン、好ましくはナノセップ（登録商標）オメガフィルターを含む、［１１］に記載の方法。
［１３］ 前記ろ液中に前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が存在するのであれば、さらに、前記ろ液に対して、前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を単離してその量を測定するのに適したクロマトグラフィー分離を行うことを含む、［１０］～［１２］のいずれかに記載の方法。
［１４］ 抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認する方法であって、
1) 抗体薬物複合体のバッチから試料を得ること、ここで、前記バッチは、デュオカルマイシン リンカー－薬物と複合体を形成した抗体、及び、場合によっては複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物を含み；
2) 前記試料を、水、アセトニトリル及び酸を含む希釈媒体と組み合わせて、前記アセトニトリルを３０％～６０％（v/v）、好ましくは３５％～５５％含むろ過可能な組成物を形成すること；
3) 前記ろ過可能な組成物をろ過し、前記抗体薬物複合体を実質的に含まないろ液を得ること；
4) 前記ろ液を分析し、前記ろ液中の前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物の量が前もって定めた値を下回るかどうかを確認すること；そして
5) 前記複合体を形成していないデュオカルマイシン リンカー－薬物が前記前もって定めた値を下回る場合、前記抗体薬物複合体のバッチを販売許可／承認すること
を含む方法。
［１５］ 前記前もって定めた値が、前記試料中、抗体薬物複合体１ｍｇに対してデュオカルマイシン リンカー－薬物０．２μｇ以下に相当する、［１４］に記載の方法。
【図1】
【図2】
【図3】
