(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-13
(45)【発行日】2024-09-25
(54)【発明の名称】組織接着性シートを調製するための方法
(51)【国際特許分類】
A61L 24/04 20060101AFI20240917BHJP
A61L 24/00 20060101ALI20240917BHJP
A61L 24/10 20060101ALI20240917BHJP
A61L 24/08 20060101ALI20240917BHJP
A61L 24/06 20060101ALI20240917BHJP
A61L 31/04 20060101ALI20240917BHJP
A61L 31/14 20060101ALI20240917BHJP
A61L 31/06 20060101ALI20240917BHJP
【ＦＩ】
A61L24/04 100
A61L24/00 260
A61L24/10
A61L24/08
A61L24/04 200
A61L24/06
A61L31/04 100
A61L31/14 500
A61L31/04 120
A61L31/06
A61L31/04 110
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2021577637
(86)(22)【出願日】2020-07-09
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-09-09
(86)【国際出願番号】 EP2020069445
(87)【国際公開番号】W WO2021009016
(87)【国際公開日】2021-01-21
【審査請求日】2023-05-25
(31)【優先権主張番号】19186041.0
(32)【優先日】2019-07-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】517112672
【氏名又は名称】ガット テクノロジーズ ビー．ブイ．
【氏名又は名称原語表記】ＧＡＴＴ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ Ｂ．Ｖ．
(74)【代理人】
【識別番号】100088605
【弁理士】
【氏名又は名称】加藤 公延
(74)【代理人】
【識別番号】100130384
【弁理士】
【氏名又は名称】大島 孝文
(72)【発明者】
【氏名】ペリカーン， フーベルト クレメンス
(72)【発明者】
【氏名】ケーレヴェール， アブラハム ライニール
(72)【発明者】
【氏名】ベンダー， ヨハネス キャスパー マティアス エリザベス
【審査官】参鍋 祐子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１７－５３１４８８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１７－００８３１５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５２３２９６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００６－５２３１１３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００１－５２１８３４（ＪＰ，Ａ）
【文献】Biomacromolecules，2017年，Vol.18，pp.2529-2538
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｌ ２４／００
Ａ６１Ｌ ３１／００
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
組織接着性シートを調製する方法であって、前記方法が：三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであって、前記反応性求電子性基は、血液中のアミン基と反応して、共有結合を形成することができる基である、ステップと、
前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、前記反応性ポリマー粒子を前記繊維状シートの前記相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む、方法。
【請求項2】
前記組織接着性シートが生体吸収性である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記繊維状シートの繊維が１～５００μｍの平均直径を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記反応性ポリマー粒子が１０～１００μｍの体積加重平均直径を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記繊維状シートが、フェルト構造、織物構造又は編物構造を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記繊維状シートが０．５～２５ｍｍの非圧縮平均厚さを有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記繊維状シートが２００ｍｇ／ｃｍ３未満の非圧縮密度を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記繊維状シートが、ゼラチン、コラーゲン、セルロース、変性セルロース、カルボキシメチルデキストラン、ＰＬＧＡ、ヒアルロン酸ナトリウム／カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、キトサン又はこれらの組合せを含有する繊維を少なくとも５０ｗｔ．％含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記方法が、５～９０％の前記反応性ポリマー粒子を前記繊維状シートに含浸させるステップを含み、パーセンテージが前記繊維状シートの重量によって計算される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記反応性ポリマー粒子が、少なくとも１０ｗｔ．％の前記水溶性求電子性ポリマーを含有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記水溶性求電子性ポリマーが、ポリオキサゾリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリウレタン及びこれらの組合せから選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子を、誘電体によって互いに電気的に絶縁され、ＡＣ発電機のそれぞれの極に接続されている下電極と上電極の間に配置し、それにより前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子を前記電場に供す、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子が、前記繊維状シート及び前記反応性ポリマー粒子を前記電場に供す間に前記下電極と前記上電極の間に通される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記繊維状シートが少なくとも０．１秒間前記電場に供される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
［発明の技術分野］
本発明は、組織接着性シートを調製する方法であって、前記方法が：
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む、方法に関する。
本発明は、組織接着性シートを調製する方法であって、前記方法が：
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む、方法に関する。
【0002】
本発明は、繊維状シート内の反応性ポリマー粒子の有効な分布、及び優れた接着特性を有する組織接着性シートの生成を可能にする。
【0003】
［発明の背景］
実質組織に対する外科手技中の主な課題の１つは、出血の制御を達成することである。縫合制御、電気焼灼及び超音波封止は、例えば肝臓又は腎臓の手術中に不十分であることが多い。結果として、肝臓切除又は腎部分切除などの手技には、出血を制御するための代替的手法が必要である。この目的のために、広範な局所的止血製品が開発されており、臨床的に入手可能である。
実質組織に対する外科手技中の主な課題の１つは、出血の制御を達成することである。縫合制御、電気焼灼及び超音波封止は、例えば肝臓又は腎臓の手術中に不十分であることが多い。結果として、肝臓切除又は腎部分切除などの手技には、出血を制御するための代替的手法が必要である。この目的のために、広範な局所的止血製品が開発されており、臨床的に入手可能である。
【0004】
Ｂｏｅｒｍａｎら（Ｎｅｘｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ＮＨＳ－Ｅｓｔｅｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｐｏｌｙ（２－ｏｘａｚｏｌｉｎｅ）ｓ、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１７）、１８、２５２９～２５３８）は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）－官能性ポリ（２－オキサゾリン）（ＮＨＳ－ＰＯｘ）をゼラチンパッチにコーティングすることによって得られる合成の非生物活性止血製品について記載しており、これはポリマー、宿主の血液タンパク質、ゼラチン、及び組織の間の共有結合性架橋の形成によって作用して創傷部位を封止し、外科手術中の失血を防止する。
【0005】
米国特許出願公開第２０１０／０２３３２４６号は、２成分反応性ポリエチレングリコール粉末を含浸させたコラーゲンスポンジ又はシートを含む生体適合性ポリマーデバイスであって、前記反応性粉末が、求核性基を有する第１のポリエチレングリコール及び求電子性基を有する第２のポリエチレングリコールを含み、ポリエチレングリコール粉末が、乾燥状態で非反応性のままである生体適合性ポリマーデバイスについて記載している。
【0006】
米国特許出願公開第２０１１／０２５０２５７号は、無水繊維状シートであって、求電子性基又は求核性基を含有する繊維状ポリマーの第１の成分、及び前記シートが生物学的組織と接触している水性媒体に曝露される際、第１の成分と架橋し、生物学的組織に接着性の架橋ヒドロゲルを形成することができる第２の成分を含み、第２の成分が、第１の成分が求核性基を含有する場合、求電子性基を含有するか、若しくは第１の成分が求電子性基を含有する場合、求核性基を含有する繊維状ポリマーであるか、又は第２の成分が第１の成分の繊維状ポリマー上のコーティングであり、前記コーティングが、第１の成分が求核性基を含有する場合、求電子性基を含有するか、若しくは第１の成分が求電子性基を含有する場合、求核性基を含有するか、又は第２の成分が、第１の成分の繊維状ポリマーの間隙内に分散及び捕捉された乾燥粉末であり、前記粉末が、第１の成分が求核性基を含有する場合、求電子性基を含有するか、若しくは第１の成分が求電子性基を含有する場合、求核性基を含有する、無水繊維状シートについて記載している。
【0007】
国際公開第２０１１／１２４６４０号は、
ａ）乾燥形態の生体材料のマトリックスを含むスポンジを用意するステップ、
ｂ）１種の反応性ポリマー材料を乾燥粉末の形態で用意するステップ、
ｃ）ｂ）の材料が前記スポンジの少なくとも１つの表面に存在するようにａ）とｂ）とを接触させるステップ、及び
ｄ）ｂ）の材料をａ）のスポンジに固着させるステップ
を含む、止血スポンジの製造方法について記載している。
固着は、十分に長時間溶融させることによって達成することができる。
ａ）乾燥形態の生体材料のマトリックスを含むスポンジを用意するステップ、
ｂ）１種の反応性ポリマー材料を乾燥粉末の形態で用意するステップ、
ｃ）ｂ）の材料が前記スポンジの少なくとも１つの表面に存在するようにａ）とｂ）とを接触させるステップ、及び
ｄ）ｂ）の材料をａ）のスポンジに固着させるステップ
を含む、止血スポンジの製造方法について記載している。
固着は、十分に長時間溶融させることによって達成することができる。
【0008】
国際公開第２０１２／０５７６２８号は、求電子的に活性化されたポリオキサゾリン（ＥＬ－ＰＯｘ）の乾燥物を少なくとも１重量％含む、組織接着性の医療製品であって、前記ＥＬ－ＰＯｘが、少なくとも１個のペンダント求電子性基を含む少なくとも２個の反応性求電子性基を含む、組織接着性の医療製品について記載している。ＥＬ－ＰＯｘの他に、医療製品は、求核的に活性化されたポリオキサゾリン（ＮＵ－ＰＯｘ）を含有してもよい。組織接着性製品の例として、接着性組織テープ、組織封止剤、止血多孔質材及びインプラントが挙げられる。
【0009】
国際公開第２０１６／０５６９０１号は、コーティングメッシュ、コーティングフォーム又はコーティング粉末から選択される接着性止血製品であって、前記止血製品が、
少なくとも５ｖｏｌ．％の多孔性を有し、反応性求核性基を含有する求核性ポリマーを含む外面を含む多孔質固体基材、及び
固体基材の少なくとも一部を覆う接着性コーティングであって、前記コーティングが、求電子的に活性化されたポリオキサゾリン（ＥＬ－ＰＯｘ）を含み、前記ＥＬ－ＰＯｘが、平均少なくとも１個の反応性求電子性基を含有するコーティング
を含む、接着性止血製品について記載している。
少なくとも５ｖｏｌ．％の多孔性を有し、反応性求核性基を含有する求核性ポリマーを含む外面を含む多孔質固体基材、及び
固体基材の少なくとも一部を覆う接着性コーティングであって、前記コーティングが、求電子的に活性化されたポリオキサゾリン（ＥＬ－ＰＯｘ）を含み、前記ＥＬ－ＰＯｘが、平均少なくとも１個の反応性求電子性基を含有するコーティング
を含む、接着性止血製品について記載している。
【0010】
接着性止血製品は、多孔質固体基材を用意するステップ、基材をＥＬ－ＰＯｘ及び溶媒を含むコーティング液でコーティングするステップ、並びに溶媒を除去するステップを含む方法によって生成される。
【0011】
米国特許第６，７３３，８４５号は、繊維若しくはフィラメントのネットワークが密に接触している剛性若しくは可撓性マトリックスを含む複合材を生成するために、前記ネットワークに粉末を静電含浸するための方法であって、粉末及び前記繊維若しくはフィラメントのネットワークを、互いに電気的に分離絶縁されている２つの電極間に配置し、前記電極をＡＣ電圧静電ジェネレータの反対に帯電した極にそれぞれ接続し、前記電極間にある前記粉末及び前記繊維若しくはフィラメントのネットワークを、ＡＣ電圧が少なくとも５ｋＶである静電場に少なくとも２秒間にわたって同時に供す方法について記載している。
【0012】
［発明の概要］
本発明者らは、外科手技中に植込式止血構築物又は封止構築物として好適に適用することができる組織接着性シートを調製するための方法を開発した。本発明の方法は、
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む。
本発明者らは、外科手技中に植込式止血構築物又は封止構築物として好適に適用することができる組織接着性シートを調製するための方法を開発した。本発明の方法は、
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む。
【0013】
血液が間隙空間に入る際に本発明の組織接着性シートによって吸収されると、シート内の反応性ポリマー粒子が血液によって「湿潤」されるとすぐに溶解し始め、それにより求電子性ポリマーが、血液及び組織中の反応性求核性基と反応することが可能になり、いずれも止血に寄与する血液凝固及び組織封止が生じる。反応性ポリマー粒子を含有する繊維状シートの止血特性は、繊維状シート内の反応性ポリマー粒子による「深い」含浸、及びその均質な分布から利益を得る。本発明の方法は、両方の望ましい特性の達成を可能にする。
【0014】
それに加え、本発明の方法は、液体による含浸とは異なり、繊維状シートの構造的一体性又は機械的特性に影響を及ぼさないという利点をもたらす。さらに、振盪又は振動を利用する機械的含浸方法に比べ、本発明の方法は機械的応力を課さず、特に非常に小さい（＜１００μｍ）反応性ポリマー粒子によってより有効な含浸を達成する。
【0015】
本発明の別の態様は、本発明の方法によって得られる組織接着性シートに関する。
【0016】
［発明の詳細な説明］
本発明の第１の態様は、組織接着性シートを調製する方法であって、前記方法が：
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む、方法に関する。
本発明の第１の態様は、組織接着性シートを調製する方法であって、前記方法が：
三次元の相互接続した間隙空間を含む繊維状シートを用意するステップと、
少なくとも３個の反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む反応性ポリマー粒子を用意するステップであり、反応性求電子性基が、共有結合の形成下で血液中のアミン基と反応することができる、ステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を２つの電極間に配置するステップと、
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を０．１～４０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供し、反応性ポリマー粒子を繊維状シートの相互接続した間隙空間に含浸させるステップ
を含む、方法に関する。
【0017】
本明細書で使用される「組織接着性」という用語は、シートと組織の間の共有結合の形成により、組織接着性シートが組織に密着する能力を指す。これらの共有結合の形成には、典型的に水の存在が必要である。
【0018】
本明細書で使用される「間隙空間」という用語は、繊維状シート内の空隙（「空の」）空間を指す。繊維状シート内の間隙空間は、反応性ポリマー粒子のシートへの導入を可能にする。血液及び他の体液も間隙空間に入ることができ、それにより反応性ポリマー粒子内の水溶性求電子性ポリマーの溶解が可能になる。
【0019】
本発明によって用いられる「反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマー」は、共有結合の形成下で、組織及び血液中のアミン基と反応できる少なくとも３個の反応性基を担持する。この水溶性求電子性ポリマーは、少なくとも１ｋＤａの分子量、及び少なくとも５０ｇ／Ｌの２０℃の蒸留水への溶解度を有する。
【0020】
本明細書で使用される「吸水能」という用語は、組織接着性シートが吸水する能力の尺度である。吸水能は、乾燥シートの試料を秤量し（重量＝Ｗｄ）、その後試料を蒸留水（３７℃）に４５分間浸漬させることによって決定される。次に、試料を水から取り出し、基材の外側に密着した水を除去した後、試料を再び秤量する（重量＝Ｗｗ）。吸水能＝１００％×（Ｗｗ－Ｗｄ）／Ｗｄである。吸水能は、基材の多孔性、及び基材が水の存在下で膨張する能力の指標である。
【0021】
本明細書で使用される「コラーゲン」という用語は、動物の身体における種々の結合組織の細胞外空間内の主な構造タンパク質を指す。コラーゲンは、特徴的な３本のポリペプチド鎖の三重らせんを形成する。石灰化の程度に応じて、コラーゲン組織は強固である（骨）か、又は柔軟である（腱）か、又は強固から柔軟までの勾配を有する（軟骨）かのいずれかでありうる。別段指示されない限り、「コラーゲン」という用語は、ゼラチン以外の変性コラーゲンも包含する。
【0022】
本明細書で使用される「ゼラチン」という用語は、家畜のウシ、ニワトリ、ブタ及び魚などの動物の皮膚、骨及び結合組織から抽出されるコラーゲンの部分加水分解によって生成される、ペプチドとタンパク質の混合物を指す。加水分解の間に、個々のコラーゲンストランド間の天然の分子結合が、より容易に再構成する形態へと分解される。
【0023】
本明細書で使用される「ポリオキサゾリン」という用語は、ポリ（Ｎ－アシルアルキレンイミン）又はポリ（アロイルアルキレンイミン）を指し、さらにＰＯｘと称される。ＰＯｘの例は、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）である。「ポリオキサゾリン」という用語は、ＰＯｘのコポリマーも包含する。
【0024】
反応性ポリマー粒子は、粒子密度がシート全体で実質的に同じであるという意味で、繊維状シートの間隙空間内に均質に分布される場合がある。反応性ポリマー粒子は、シートの厚さを通して不均一に分布される場合もある。特定の用途では、例えば反応性ポリマー粒子の密度が、出血創傷に貼り付けられることが意図されるシートの側面付近で最も低く、シートの反対側面付近で最も高いという点で、反応性ポリマー粒子の密度が勾配を示すと有利である場合がある。
【0025】
反応性ポリマー粒子の直径分布は、好適にはＳｔａｉｎｌｅｓｓ Ｓｔｅｅｌ Ｓａｍｐｌｅ Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ Ｕｎｉｔとの組合せのＭａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ２０００を使用するレーザー回折によって決定されてもよい。試料分散ユニットにおよそ１２０ｍｌのシクロヘキサンを充填し、ユニットを１８００ｒｐｍの撹拌速度で５～１０分間安定させ、その後バックグラウンド測定（ブランク測定）を行う。試料管を振盪し、２０回水平に回転させる。次に、シクロヘキサンを含有する試料分散ユニットに約５０ｍｇを分散させる。試料を分散ユニットに導入したら、すべての粒子が適正に分散されることを保証するために、試料を１８００ｒｐｍで１分３０秒撹拌し、その後測定を行う。分散された粒子に超音波処理は実施されない。平均粒径は、Ｄ［４，３］、体積加重平均直径（ΣｎｉＤｉ４）／（ΣｎｉＤｉ３）として表される。
【0026】
好ましい実施形態では、本発明の方法は、５～９０％、より好ましくは１０～８０％、さらにより好ましくは２０～７５％、最も好ましくは５０～７０％の反応性ポリマー粒子を繊維状シートに含浸させるステップを含み、前記パーセンテージは、繊維状シートの重量によって計算される。
【0027】
特に好ましい実施形態によると、本発明の組織接着性シートは生体吸収性である、つまりシート、反応性ポリマー粒子、及び組織接着性シートの任意の他の成分は、最終的に身体に吸収される。シート及び反応性ポリマー粒子の吸収には、典型的に、その中に含有されるポリマーの化学分解（例えば、加水分解）が必要である。ヒトの身体による組織接着性シートの完全な生体吸収は、典型的に１～１０週間、好ましくは２～８週間で達成される。
【0028】
本発明の組織接着性シートは、好ましくは滅菌である。
【0029】
本発明の組織接着性シートは、典型的に０．５～２５ｍｍの非圧縮平均厚さを有する。より好ましくは、非圧縮平均厚さは、１～１０ｍｍの範囲、最も好ましくは１．５～５ｍｍの範囲である。
【0030】
組織接着性シートは、好ましくは２００ｍｇ／ｃｍ３未満、より好ましくは１５０ｍｇ／ｃｍ３未満、最も好ましくは１０～１００ｍｇ／ｃｍ３の非圧縮密度を有する。
【0031】
本発明の組織接着性シートは、好ましくは本質的に無水である。典型的に、組織接着性シートは、５ｗｔ．％以下、より好ましくは２ｗｔ．％以下、最も好ましくは１ｗｔ．％以下の水分含有量を有する。
【0032】
組織接着性シートの吸水能は、好ましくは少なくとも５０％であり、より好ましくは１００％～８００％の範囲、最も好ましくは２００％～５００％の範囲にある。
【0033】
本発明の方法で利用される繊維状シートは、好ましくは耐水性である、すなわちシートは水溶性でなく、且つ中性のｐＨ条件（ｐＨ７）及び３７℃の温度で水中で崩壊しない。
【0034】
繊維状シートの繊維は、好ましくは１～５００μｍ、より好ましくは２～３００μｍ、最も好ましくは５～２００μｍの平均直径を有する。繊維の平均直径は、好適には顕微鏡を使用して決定することができる。
【0035】
典型的に、繊維状シートの繊維の少なくとも５０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも８０ｗｔ．％が、１～３００μｍの直径及び少なくとも１ｍｍの長さを有する。
【0036】
好ましくは、繊維状シートの繊維の少なくとも５０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも８０ｗｔ．％が、少なくとも１０００のアスペクト比（長さの直径に対する比）を有する。
【0037】
繊維状シートは、ゼラチン、コラーゲン、セルロース、変性セルロース、カルボキシメチルデキストラン、ＰＬＧＡ、ヒアルロン酸ナトリウム／カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、キトサン又はこれらの組合せを含有する繊維を少なくとも５０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも８０ｗｔ．％、最も好ましくは少なくとも９０ｗｔ．％含む。
【0038】
本発明の実施形態では、繊維状担体構造体は、酸化再生セルロースを含まない。
【0039】
好ましい繊維状シートは、空気透過性が少なくとも０．１Ｌ／分×ｃｍ２、より好ましくは少なくとも０．５Ｌ／分×ｃｍ２である開気孔構造を有する。空気透過性は、ＥＮ ＩＳＯ ９２３７：１９９５（繊維－布の空気透過性の決定）によって決定される。
【0040】
繊維状シート中の繊維は、エレクトロスピニング、エレクトロブローンスピニング、及び高速回転噴霧器スピニングなどの当技術分野で公知の方法によって生成されてもよい。高速回転噴霧器スピニングによる繊維状シートの生成は、米国特許出願公開第２０１５／００１０６１２号に記載される。繊維状シートとして、市販の止血繊維状シートを使用することもできる。
【0041】
本発明の方法で利用される反応性ポリマー粒子は、好ましくは少なくとも１０ｗｔ．％の水溶性求電子性ポリマーを含有する。より好ましくは、反応性ポリマー粒子は、少なくとも５０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも９０ｗｔ．％の水溶性求電子性ポリマーを含有する。
【0042】
本発明の方法は、振盪又は振動を利用する含浸技術とは異なり、非常に小さい反応性ポリマー粒子を繊維状シートに有効に分布させることができるという利点をもたらす。これは、小さい粒子が、高い表面／体積比に起因してより大きな粒子より速く溶解するために有利である。したがって、非常に小さい反応性ポリマー粒子を含有する組織接着性シートの止血特性は、より大きな反応性ポリマー粒子を含有する組織接着性シートよりも一般的に優れている。したがって、非常に好ましい実施形態では、反応性ポリマー粒子は、１０～１００μｍの範囲、より好ましくは１５～８０μｍの範囲、最も好ましくは２０～７０μｍの範囲の体積加重平均直径（Ｄ［４，３］、（ΣｎｉＤ４）／（ΣｎｉＤ３））を有する。
【0043】
特定の好ましい実施形態によると、反応性ポリマー粒子の少なくとも８０ｖｏｌ．％は、５～２００μｍの範囲、より好ましくは１０～１２０μｍの範囲、最も好ましくは１２～１００μｍの範囲の直径を有する。
【0044】
本発明の反応性ポリマー粒子は、種々の方法、例えば摩砕によって、ポリマー溶液を噴霧乾燥することによって、凍結乾燥によって、ポリマー溶融物を噴霧冷却することによって、粉末混合物を造粒することによって、又は流動床コーティングによって調製されてもよい。
【0045】
反応性ポリマー粒子に含有される水溶性求電子性ポリマーは、典型的に少なくとも２ｋＤａ、より好ましくは少なくとも５ｋＤａ、最も好ましくは１０～１００ｋＤａの分子量を有する。
【0046】
水溶性求電子性ポリマーは、少なくとも１００ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも２００ｇ／Ｌの２０℃の蒸留水への溶解度を有する。
【0047】
本発明によって利用される水溶性求電子性ポリマーは、好ましくは少なくとも４個の反応性求電子性基、より好ましくは少なくとも８個の反応性求電子性基、さらにより好ましくは少なくとも１６個の反応性求電子性基、最も好ましくは少なくとも３２個の反応性求電子性基を含有する。
【0048】
反応性ポリマー粒子中に存在する水溶性求電子性ポリマーは、好ましくはポリオキサゾリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリウレタン（例えば、国際公開第２０１７／１７１５５１号に記載される）及びこれらの組合せから選択される。さらにより好ましくは、求電子性ポリマーは、ポリオキサゾリン、ポリエチレングリコール及びこれらの組合せから選択される。最も好ましくは、求電子性ポリマーはポリオキサゾリンである。
【0049】
反応性求電子性基を含むポリオキサゾリンは、繰り返し単位が以下の式（Ｉ）：
（ＣＨＲ１）ｍＮＣＯＲ２
（式中、Ｒ２及びＲ１のそれぞれは、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１～２２アルキル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたアラルキル、任意選択で置換されたアリールから独立的に選択され、ｍは２又は３である）
によって表されるポリオキサゾリンに由来することが好ましい。
（ＣＨＲ１）ｍＮＣＯＲ２
（式中、Ｒ２及びＲ１のそれぞれは、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１～２２アルキル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたアラルキル、任意選択で置換されたアリールから独立的に選択され、ｍは２又は３である）
によって表されるポリオキサゾリンに由来することが好ましい。
【0050】
好ましくは、式（Ｉ）のＲ１及びＲ２は、Ｈ及びＣ１～８アルキル、さらにより好ましくはＨ及びＣ１～４アルキルから選択される。Ｒ１は、最も好ましくはＨである。式（Ｉ）の整数ｍは、好ましくは２に等しい。
【0051】
好ましい実施形態によると、ポリオキサゾリンはポリマーであり、さらにより好ましくは２－アルキル－２－オキサゾリンのホモポリマーであり、前記２－アルキル－２－オキサゾリンは、２－メチル－２－オキサゾリン、２－エチル－２－オキサゾリン、２－プロピル－２－オキサゾリン、２－ブチル－２－オキサゾリン及びこれらの組合せから選択される。好ましくは、ポリオキサゾリンは、２－プロピル－２－オキサゾリン又は２－エチル－オキサゾリンのホモポリマーである。最も好ましくは、ポリオキサゾリンは、２－エチル－オキサゾリンのホモポリマーである。
【0052】
特定の好ましい実施形態によると、水溶性求電子性ポリマーは、少なくとも２０個のオキサゾリン単位、より好ましくは少なくとも３０個のオキサゾリン単位、最も好ましくは少なくとも８０個のオキサゾリン単位を含む。求電子性ポリマーは、好ましくはオキサゾリン残基あたり平均少なくとも０．０５個の反応性求電子性基を含む。さらにより好ましくは、求電子性ポリマーは、オキサゾリン残基あたり平均少なくとも０．１個の反応性求電子性基を含む。最も好ましくは、求電子性ポリマーは、オキサゾリン残基あたり平均０．１２～０．５個の反応性求電子性基を含む。
【0053】
水溶性求電子性ポリマーは、典型的に平均少なくとも１０個、より好ましくは少なくとも２０個の反応性求電子性基を担持する。
【0054】
ポリオキサゾリンは、その側鎖（ペンダント反応性求電子性基）、その末端又は両方に反応性求電子性基を担持してもよい。本発明によって利用されるポリオキサゾリンは、有利には１又は複数のペンダント反応性求電子性基を含有する。典型的に、ポリオキサゾリンは、モノマーあたり０．０３～０．５個のペンダント反応性求電子性基、より好ましくはモノマーあたり０．０４～０．３５個のペンダント反応性求電子性基、さらにより好ましくはモノマー当たり０．０５～０．２５個のペンダント反応性求電子性基を含有する。
【0055】
本発明によって適用される反応性求電子性基を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、好ましくは少なくとも３つのアーム、より好ましくは少なくとも４つのアームを含む、反応性求電子性基で末端化されたマルチアームＰＥＧ又は星型ＰＥＧである。
【0056】
組織接着性シート中の反応性ポリマー粒子は、好ましくはカルボン酸エステル、スルホン酸エステル、ホスホン酸エステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ－ニトロフェニルエステル、ｐ－ニトロチオフェニルエステル、酸ハロゲン化物基、無水物、ケトン、アルデヒド、イソシアネート、チオイソシアネート、イソシアノ、エポキシド、活性化ヒドロキシル基、オレフィン、グリシジルエーテル、カルボキシル、スクシンイミジルエステル、スルホスクシンイミジルエステル、マレイミド（マレイミジル）、エテンスルホニル、イミドエステル、アセトアセテート、ハロアセタール、オルトピリジルジスルフィド、ジヒドロキシフェニル誘導体、ビニル、アクリレート、アクリルアミド、ヨードアセトアミド及びこれらの組合せから選択される反応性求電子性基を担持する水溶性求電子性ポリマーを含む。より好ましくは、反応性求電子性基は、カルボン酸エステル、スルホン酸エステル、ホスホン酸エステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ－ニトロフェニルエステル、ｐ－ニトロチオフェニルエステル、酸ハロゲン化物基、無水物（ａｎｈｙｉｎｉｄｒｉｄｅｓ）、ケトン、アルデヒド、イソシアネート、チオイソシアネート、イソシアノ、エポキシド、活性化ヒドロキシル基、グリシジルエーテル、カルボキシル、スクシンイミジルエステル、スルホスクシンイミジルエステル、イミドエステル、ジヒドロキシフェニル誘導体及びこれらの組合せから選択される。さらにより好ましくは、反応性求電子性基は、ハロアセタール、オルトピリジルジスルフィド、マレイミド、ビニルスルホン、ジヒドロキシフェニル誘導体、ビニル、アクリレート、アクリルアミド、ヨードアセトアミド、スクシンイミジルエステル及びこれらの組合せから選択される。最も好ましくは、反応性求電子性基は、マレイミド、ビニル、アクリレート、アクリルアミド、スクシンイミジルエステル、スルホスクシンイミジルエステル及びこれらの組合せから選択される。
【0057】
利用されてもよいスクシンイミジルエステルの例として、スクシンイミジルグルタレート、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルスクシンアミド、スクシンイミジルカーボネート、ジスクシンイミジルスベレート、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）、ビス（２－スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチルスルホン、３、３’－ジチオビス（スルホスクシンイミジル－プロピオネート）、スクシンイミジルカルバメート、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－ｌ－カルボキシレート、ジチオビス－スルホスクシンイミジルプロピオネート、ジスルホ－スクシンイミジルタータレート；ビス［２－（スルホ－スクシンイミジルオキシカルボニルオキシエチルスルホン）］、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシネート）（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｃｌｙｌｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ジチオビス－（スクシンイミジルプロピオネート）が挙げられる。
【0058】
利用されてもよいジヒドロキシフェニル誘導体の例として、ジヒドロキシフェニルアラニン、３，４－ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）、ドパミン、３，４－ジヒドロキシヒドロケイ皮酸（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｈｙｄｒｏｃｃｉｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＯＨＡ）、ノルエピネフリン、エピネフリン、及びカテコールが挙げられる。
【0059】
本発明の有利な実施形態では、水溶性求電子性ポリマーの他に、反応性ポリマー粒子は、共有結合の形成下で水溶性求電子性ポリマーの反応性求電子性基と反応できる少なくとも２個の反応性求核性基を含有する求核性架橋剤を追加的に含有する。求核性架橋剤を導入することにより、血液がシートに入る際に水溶性求電子性ポリマーが求核性架橋剤と反応するため、シートの止血及び接着特性が改善される場合があるという利点がもたらされる。この架橋反応は、血液の流れを固定するヒドロゲルの形成につながり、ヒドロゲル中の反応性求電子性基と組織中のアミン／チオール基との間に共有結合が形成されることにより、このヒドロゲルが組織に張り付く。水溶性求電子性ポリマーと求核性架橋剤を単一の粒子内で組み合わせることにより、これらの２種の反応性成分が止血シート全体に均質に分布できること、輸送及び取扱い時に分離が生じないこと、並びに粒子が血液と接触した際に、これらの成分が即座に互いに反応できることが保証される。
【0060】
反応性求電子性基を担持する水溶性ポリマーと求核性架橋剤の組合せを含有する反応性ポリマー粒子、すなわち反応性ハイブリッド粒子は、好ましくは減圧下の湿式造粒及びそれに続く乾燥によって生成されてもよい。造粒液体は、造粒中に、水溶性求電子性ポリマーと求核性架橋剤との間にあまり又は全く反応が生じないように選択されるべきである。これは、例えば、これら２種の成分のうちの少なくとも１種が不溶性である造粒液体を利用することによって達成することができる。最も好ましくは、反応性求電子性基を担持する水溶性ポリマーが造粒液体中で不溶性である。
【0061】
特に好ましい実施形態によると、反応性ポリマー粒子は、（ｉ）水溶性求電子性ポリマーを含有する求電子性粒子、及び（ｉｉ）求核性架橋剤を含有する求核性粒子を含む粒子凝集物である。
【0062】
求電子性粒子は、好ましくは少なくとも３０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも５０ｗｔ．％、最も好ましくは少なくとも８０ｗｔ．％の水溶性求電子性ポリマーを含有する。
【0063】
求核性粒子は、好ましくは少なくとも３０ｗｔ．％、より好ましくは少なくとも５０ｗｔ．％、最も好ましくは少なくとも８０ｗｔ．％の求核性架橋剤を含有する。
【0064】
求核性架橋剤は、好ましくは少なくとも３個の反応性求核性基を含有する。求核性架橋剤の反応性求核性基は、好ましくはアミン基、チオール基及びこれらの組合せから選択される。より好ましくは、これらの反応性求核性基はアミン基である。好ましい実施形態によると、求核性架橋剤中に存在する反応性求核性基は、第一級アミン基である。
【0065】
好ましくは、求核性架橋剤は、タンパク質、キトサン、反応性求核性基を担持する合成ポリマー、反応性求核性基を担持する炭水化物ポリマー及びこれらの組合せから選択される。さらにより好ましくは、求核性架橋剤は、ゼラチン、コラーゲン、キトサン及びこれらの組合せから選択される。
【0066】
本発明の方法では、繊維状シート及び反応性ポリマー粒子は、好ましくは０．５～３０ｋＶ／ｍｍの電場、より好ましくは１～１０ｋＶ／ｍｍの電場に同時に供される。
【0067】
特に好ましい実施形態によると、繊維状シート及び反応性ポリマー粒子は、交番電場に同時に供される。好ましくは、電場は、少なくとも１０ｓ－１の周波数、より好ましくは少なくとも５０ｓ－１の周波数、最も好ましくは１００ｓ－１の周波数で交番する。
【0068】
繊維状シートの含浸は、本発明の方法において、繊維状シートに隣接する反応性ポリマー粒子の層を作成し、繊維状シート及び隣接する反応性ポリマー粒子の層を２つの電極間に配置することによって有効に達成されてもよい。含浸はまた、反応性ポリマー粒子の層によって分離される２つ以上の繊維状シートを含有する積層体を作成し、この積層体を２つの電極間に配置することによって達成されてもよい。
【0069】
本発明の方法の好ましい実施形態では、繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を、誘電体によって互いに電気的に絶縁され、ＡＣ発電機のそれぞれの極に接続されている下電極と上電極の間に配置し、それにより繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を電場に同時に供す。
【0070】
繊維状シート及び反応性ポリマー粒子は、繊維状シート及び反応性ポリマー粒子を電場に同時に供す間、好ましくは下電極と上電極の間に通される。したがって、一巻きの繊維状シートに、反応性ポリマー粒子を本発明の方法によって半連続的に好適に含浸させることができる。
【0071】
好ましい実施形態では、繊維状シート及び反応性ポリマー粒子は、少なくとも０．１秒間、より好ましくは少なくとも５秒間、最も好ましくは少なくとも３０秒間にわたって電場に同時に曝露される。
【0072】
本発明の別の態様は、本明細書で以前に記載された方法によって得られる組織接着性シートに関する。
【0073】
本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに例示される。
【実施例】
【0074】
概して、乾燥後の残留含水量（乾燥粉末、造粒物及び／又は繊維状シート中の）が明示されない場合は常に、レベルは２．０％ｗ／ｗ未満である。
【0075】
４０μｍ以下のＤ［４，３」を有する粉末を、摩砕に続いて２５０メッシュふるい（Ｈａｖｅｒ ａｎｄ Ｂｏｅｃｋｅｒ、シリアル番号４７１８１３１５）でふるい分けすることによって生成した。ふるいを通過しなかった粒子は、すべての粉末が２５０メッシュ未満になるまで再び摩砕し、再びふるい分けした。
【0076】
（水溶性求電子性ポリマー（ＮＨＳ－ＰＯｘ）の調製）
２０％ＮＨＳエステル基を含有するＮＨＳ側鎖活性化ポリ［２－（エチル／ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル／ＮＨＳ－エステル－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル）－２－オキサゾリン］ターポリマー（＝ＥＬ－ＰＯｘ、２０％ＮＨＳ）を、以下のように合成した：
ポリ［２－（エチル／メトキシ－カルボニル－エチル）－２－オキサゾリン］コポリマー（ＤＰ＝＋／－１００）を、６０％ ２－エチル－２－オキサゾリン（ＥｔＯｘ）及び４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル－２－オキサゾリン（ＭｅｓｔＯｘ）を使用してＣＲＯＰによって合成した。４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル基（１Ｈ－ＮＭＲ）を含有する統計的コポリマーが得られた。第二に、４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル基を含有するポリマーをエタノールアミンと反応させ、４０％ ２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基（１Ｈ－ＮＭＲ）を有するコポリマーを得た。その後、２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基の半分を無水コハク酸と反応させ、１Ｈ－ＮＭＲによって６０％ ２－エチル基、２０％ ２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基及び２０％ ２－カルボキシ－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル基を有するターポリマーを得た。最後に、２－カルボキシ－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル基を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）によって活性化し、ＥＬ－ＰＯｘ、２０％ＮＨＳを得た。１Ｈ－ＮＭＲによると、ＮＨＳ－ＰＯｘは２０％ＮＨＳ－エステル基を含有していた。ＮＨＳ－ＰＯｘを２～８℃の間で水中に溶解し（３００ｍＬ中６０ｇ）、マイナス８０℃で３０分間冷却して凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。この乾燥（白色）粉末を、０．２５ｍｍの台形穴を有する間隔ふるいと組み合わされた、１２歯押し込み型ローターを備えたＲｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用し、平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで、又は卓上コーヒーグラインダーを使用して平均粒径が約７０μｍ（Ｄ［４，３］）になるまでのいずれかで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
２０％ＮＨＳエステル基を含有するＮＨＳ側鎖活性化ポリ［２－（エチル／ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル／ＮＨＳ－エステル－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル）－２－オキサゾリン］ターポリマー（＝ＥＬ－ＰＯｘ、２０％ＮＨＳ）を、以下のように合成した：
ポリ［２－（エチル／メトキシ－カルボニル－エチル）－２－オキサゾリン］コポリマー（ＤＰ＝＋／－１００）を、６０％ ２－エチル－２－オキサゾリン（ＥｔＯｘ）及び４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル－２－オキサゾリン（ＭｅｓｔＯｘ）を使用してＣＲＯＰによって合成した。４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル基（１Ｈ－ＮＭＲ）を含有する統計的コポリマーが得られた。第二に、４０％ ２－メトキシカルボニル－エチル基を含有するポリマーをエタノールアミンと反応させ、４０％ ２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基（１Ｈ－ＮＭＲ）を有するコポリマーを得た。その後、２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基の半分を無水コハク酸と反応させ、１Ｈ－ＮＭＲによって６０％ ２－エチル基、２０％ ２－ヒドロキシ－エチル－アミド－エチル基及び２０％ ２－カルボキシ－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル基を有するターポリマーを得た。最後に、２－カルボキシ－エチル－エステル－エチル－アミド－エチル基を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）によって活性化し、ＥＬ－ＰＯｘ、２０％ＮＨＳを得た。１Ｈ－ＮＭＲによると、ＮＨＳ－ＰＯｘは２０％ＮＨＳ－エステル基を含有していた。ＮＨＳ－ＰＯｘを２～８℃の間で水中に溶解し（３００ｍＬ中６０ｇ）、マイナス８０℃で３０分間冷却して凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。この乾燥（白色）粉末を、０．２５ｍｍの台形穴を有する間隔ふるいと組み合わされた、１２歯押し込み型ローターを備えたＲｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用し、平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで、又は卓上コーヒーグラインダーを使用して平均粒径が約７０μｍ（Ｄ［４，３］）になるまでのいずれかで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0077】
（ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末の染色）
２０ｇのＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を水に溶解し、高速分散装置（Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘ、ＩＫＡ）を使用して５０ｍｇのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ ＦＣＦ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合した。混合（２分）直後、溶液を－７８℃で凍結し、その後一晩凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される残留水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。次に、乾燥（青色）粉末を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して、平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）の青色染色ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末が得られるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
２０ｇのＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を水に溶解し、高速分散装置（Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘ、ＩＫＡ）を使用して５０ｍｇのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ ＦＣＦ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合した。混合（２分）直後、溶液を－７８℃で凍結し、その後一晩凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される残留水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。次に、乾燥（青色）粉末を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して、平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）の青色染色ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末が得られるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0078】
（求核性架橋剤（ＮＵ－ＰＯｘ）の調製）
アルキル側鎖にエチル及びアミン基を含有するポリオキサゾリンを、ＥｔＯｘ及びＭｅｓｔＯｘのＣＲＯＰ、並びにそれに続くエチレンジアミンでのメチルエステル側鎖のアミド化によって合成し、ポリ（２－エチル／アミノエチルアミドエチル－２－オキサゾリン）コポリマー（ＮＵ－ＰＯｘ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲによると、ＮＵ－ＰＯｘは１０％ＮＨ２を含有していた。ＮＵ－ＰＯｘを２～８℃の間で水中に溶解し（３００ｍＬ中６０ｇ）、マイナス８０℃で３０分間冷却して凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。この乾燥粉末を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
アルキル側鎖にエチル及びアミン基を含有するポリオキサゾリンを、ＥｔＯｘ及びＭｅｓｔＯｘのＣＲＯＰ、並びにそれに続くエチレンジアミンでのメチルエステル側鎖のアミド化によって合成し、ポリ（２－エチル／アミノエチルアミドエチル－２－オキサゾリン）コポリマー（ＮＵ－ＰＯｘ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲによると、ＮＵ－ＰＯｘは１０％ＮＨ２を含有していた。ＮＵ－ＰＯｘを２～８℃の間で水中に溶解し（３００ｍＬ中６０ｇ）、マイナス８０℃で３０分間冷却して凍結乾燥した。そのようにして得られた凍結乾燥粉末を、Ｒｏｔａｖａｐ中４０℃で、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって決定される水分含有量が０．８％ｗ／ｗ未満になるまで乾燥した。この乾燥粉末を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して平均粒径が３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0079】
（反応性ポリマー粒子（ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒）の調製）
青色又は白色（非染色）ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を、高せん断混合機中で約１～２％ｗ／ｗのＩＰＡを含有する均質な雪状粉末が得られるまで、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）で湿潤させた。この後、ＮＵ－ＰＯｘ粉末を添加して混合した。湿潤された青色ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を、１：１のモル比でＮＵ－ＰＯｘ粉末と混合し、前記モル比は、ＮＨＳ－ＰＯｘによって提供されるＮＨＳ基の数のＮＵ－ＰＯｘによって提供されるアミン基の数に対する比を指す。
青色又は白色（非染色）ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を、高せん断混合機中で約１～２％ｗ／ｗのＩＰＡを含有する均質な雪状粉末が得られるまで、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）で湿潤させた。この後、ＮＵ－ＰＯｘ粉末を添加して混合した。湿潤された青色ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を、１：１のモル比でＮＵ－ＰＯｘ粉末と混合し、前記モル比は、ＮＨＳ－ＰＯｘによって提供されるＮＨＳ基の数のＮＵ－ＰＯｘによって提供されるアミン基の数に対する比を指す。
【0080】
混合後、１Ｈ－ＮＭＲによって決定されるＩＰＡ含有量が０．１％ｗ／ｗ未満になるまで、湿潤造粒物を減圧下で乾燥した。乾燥した造粒物を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して平均粒径が５０μｍ又は３５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0081】
１Ｈ－ＮＭＲ分光法を使用し、ＮＨＳ－ＰＯＸ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物（１：１）を分析した。２５ｍｇの造粒物を、２０分間超音波処理することによってトリフルオロ酢酸（０．２０ｍＬ）に溶解した。造粒物の完全な溶解後、試料を、内部標準としてマレイン酸（２．５ｍｇ／ｍＬ）を含有する重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ６）（０．８０ｍＬ）で希釈し、ＮＭＲ管に移し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを記録した。得られたスペクトルから、造粒物中に存在するＮＨＳ及びアミン基のモル比とともに、ＮＨＳ－ＰＯｘに結合したＮＨＳの量を計算することができる。造粒物中のＮＨＳ－ＰＯｘに結合したＮＨＳの量は、ＮＨＳ－ＰＯｘ出発材料に結合したＮＨＳの量と同等であり、造粒中に崩壊又は架橋が生じないことを示す。
【0082】
ＮＭＲ試料における全ポリマー回収率、すなわち、ＮＨＳ－ＰＯｘとＮＵ－ＰＯｘの組合せを、既知の量の内部標準（マレイン酸）、並びに異なる濃度のＮＨＳ－ＰＯｘ及びＮＵ－ＰＯｘの記録された１Ｈ－ＮＭＲスペクトルから作成した検量線を使用して決定した。全ポリマー回収率は９９パーセントと測定され、不溶性の架橋材料が形成されなかったことを示す。
【0083】
ＮＨＳ－ＰＯＸ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物（１：１）を、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに分析した。２０ｍｇの造粒物を、無水酢酸（１．００ｍＬ）で５０℃で１時間処理した。次に、メタノール（２．００ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でさらに１時間撹拌した。アリコート（０．７５ｍＬ）を取り、すべての揮発物を減圧下で除去した。試料を、ＳＥＣ分析の溶離液である５０ｍＭの塩化リチウムを含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２．５０ｍＬ）に溶解した。ＳＥＣをポリ（メチルメタクリレート）標準に対して測定し、得られたサイズ排除クロマトグラムからＭｎ、Ｍｗ及びＰＤＩを決定した。ＰＤＩは１．５以下であり、造粒中に架橋が生じなかったことを示す。このサイズ排除クロマトグラフィー方法の分析検証により、０．０５ｍｏｌ％のレベルのＮＨＳ－ＰＯｘとＮＵ－ＰＯｘの意図的な架橋によってＰＤＩが２．５より高くまで増加したことが示された。
【0084】
（反応性ポリマー粒子（ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８顆粒）の調製）
反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を前述の通り調製した。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を、Ｐ１８８粉末とともに高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、１．５％、２．５％、３．５％、５％及び１０％ｗ／ｗのＰ１８８でコーティングされた反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を調製した。コーティング造粒物を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して平均粒径が４０μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を前述の通り調製した。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を、Ｐ１８８粉末とともに高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、１．５％、２．５％、３．５％、５％及び１０％ｗ／ｗのＰ１８８でコーティングされた反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を調製した。コーティング造粒物を、Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ２００を使用して平均粒径が４０μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまで粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0085】
そのようにして得られた造粒物の粒径分布は、およそ９０ｖｏｌ．％＜８０μｍ、５０ｖｏｌ．％＜４０μｍ及び１０ｖｏｌ．％＜１０μｍであった。
【0086】
１Ｈ－ＮＭＲ分光法を使用し、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８造粒物を分析した。２５ｍｇの粉末を、２０分間超音波処理することによってトリフルオロ酢酸（０．２０ｍＬ）に溶解した。造粒物の完全な溶解後、試料を重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ６）（０．８０ｍＬ）で希釈し、ＮＭＲ管に移し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを記録した。得られたスペクトルから、未反応ＮＨＳの量は、ＮＨＳ－ＰＯｘと比べて９８パーセントと計算された。
【0087】
ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８造粒物を、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに分析した。２０ｍｇの造粒物を、無水酢酸（１．００ｍＬ）で５０℃で１時間処理した。次に、メタノール（２．００ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でさらに１時間撹拌した。アリコート（０．７５ｍＬ）を取り、すべての揮発物を減圧下で除去した。試料を、ＳＥＣ分析の溶離液である５０ｍＭの塩化リチウムを含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２．５０ｍＬ）に溶解した。ＳＥＣをポリ（メチルメタクリレート）標準に対して測定し、得られたサイズ排除クロマトグラムからＭｎ、Ｍｗ及びＰＤＩを決定した。ＰＤＩは１．５以下であり、造粒中に架橋が生じなかったことを示す。
【0088】
（反応性ポリマー粒子（ＮＨＳ－ＰＯｘ／ジェリータ Ｓｐｏｎ顆粒）の調製）
０．２％ｗ／ｗ未満の水分含有量を有する事前乾燥されたゼラチン粉末（ジェリータ－ＳＰＯＮ（登録商標）、前Ｇｅｌｉｔａ Ｍｅｄｉｃａｌ ＧｍｂＨ）７．０１ｇを、２０，０００ｒｐｍで動作する高せん断混合機を使用してジクロロメタン（２００ｍＬ）に２０分間分散させた。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ（７．０２ｇ）を添加し、５分間撹拌を続けた。ＮＨＳ－ＰＯｘは溶解しなかった。すべての揮発物を減圧下で懸濁液から除去した。得られた粉末を、平均粒径が９５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまでコーヒーグラインダーを使用して摩砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止し、減圧下でさらに乾燥させ、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
０．２％ｗ／ｗ未満の水分含有量を有する事前乾燥されたゼラチン粉末（ジェリータ－ＳＰＯＮ（登録商標）、前Ｇｅｌｉｔａ Ｍｅｄｉｃａｌ ＧｍｂＨ）７．０１ｇを、２０，０００ｒｐｍで動作する高せん断混合機を使用してジクロロメタン（２００ｍＬ）に２０分間分散させた。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ（７．０２ｇ）を添加し、５分間撹拌を続けた。ＮＨＳ－ＰＯｘは溶解しなかった。すべての揮発物を減圧下で懸濁液から除去した。得られた粉末を、平均粒径が９５μｍ以下（Ｄ［４，３］）になるまでコーヒーグラインダーを使用して摩砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止し、減圧下でさらに乾燥させ、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0089】
そのようにして得られた造粒物の粒径分布は、およそ９０ｖｏｌ．％＜１９０μｍ、５０ｖｏｌ．％＜８０μｍ及び１０ｖｏｌ．％＜１５μｍであった。
【0090】
造粒物を１Ｈ－ＮＭＲ分光分析によって分析した。この目的のために、５％（ｖ／ｖ）酢酸を含有する重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）（１．０ｍＬ）を２５ｍｇの造粒物に添加した。試料を２０分間超音波処理することにより、ＮＨＳ－ＰＯｘを選択的に抽出した。分散液を０．２２μｍフィルターに通し、ＮＭＲ管に移して１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを記録した。得られたスペクトルから、未反応ＮＨＳの量は、ＮＨＳ－ＰＯｘと比べて９７パーセントと計算された。
【0091】
造粒物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析によってさらに分析した。上述の濾過されたＮＨＳ－ＰＯｘ抽出物のアリコート（０．１５ｍＬ）を、ＳＥＣ分析の溶離液である５０ｍＭの塩化リチウムを含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１．００ｍＬ）で希釈した。試料をＳＥＣによってポリ（メチルメタクリレート）標準に対して分析したところ、ＰＤＩは１．４５であり、架橋が生じなかったことを示す。
【0092】
（反応性ポリマー粒子（ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／ＰＥＧ３０００顆粒）の調製）
反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を前述の通り調製した。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を、ＰＥＧ（ＭＷ ３ｋＤａ）粉末とともに、高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、５％及び１０％ｗ／ｗのＰＥＧ３０００でコーティングされた反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を調製した。Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ ２００を使用してコーティング造粒物を粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を前述の通り調製した。次に、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を、ＰＥＧ（ＭＷ ３ｋＤａ）粉末とともに、高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、５％及び１０％ｗ／ｗのＰＥＧ３０００でコーティングされた反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物を調製した。Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ ２００を使用してコーティング造粒物を粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0093】
１Ｈ－ＮＭＲ分光法を使用し、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／ＰＥＧ３０００造粒物を分析した。２５ｍｇの粉末を、２０分間超音波処理することによってトリフルオロ酢酸（０．２０ｍＬ）に溶解した。造粒物の完全な溶解後、試料を重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ６）（０．８０ｍＬ）で希釈し、ＮＭＲ管に移し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを記録した。得られたスペクトルから、未反応ＮＨＳの量は、ＮＨＳ－ＰＯｘと比べて９６パーセントと計算された。
【0094】
ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／ＰＥＧ造粒物を、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに分析した。２０ｍｇの造粒物を、無水酢酸（１．００ｍＬ）で５０℃で１時間処理した。次に、メタノール（２．００ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でさらに１時間撹拌した。アリコート（０．７５ｍＬ）を取り、すべての揮発物を減圧下で除去した。試料を、ＳＥＣ分析の溶離液である５０ｍＭの塩化リチウムを含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２．５０ｍＬ）に溶解した。ＳＥＣをポリ（メチルメタクリレート）標準に対して測定し、得られたサイズ排除クロマトグラムからＭｎ、Ｍｗ及びＰＤＩを決定した。ＰＤＩは１．５以下であり、造粒中に架橋が生じなかったことを示す。
【0095】
（反応性ポリマー粒子（ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＥＧ）の調製）
ＮＨＳ－ＰＯｘ（Ｄ［４，３］≦３５μｍ）を、ＰＥＧジアミン（ＭＷ １０ｋＤａ）粉末とともに高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、５％ｗ／ｗのＮＵ－ＰＥＧでコーティングされたＮＨＳ－ＰＯｘを調製した。Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ ２００を使用してコーティング造粒物を粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
ＮＨＳ－ＰＯｘ（Ｄ［４，３］≦３５μｍ）を、ＰＥＧジアミン（ＭＷ １０ｋＤａ）粉末とともに高せん断混合機中６５℃で１０分間加熱し、その後周囲条件まで冷却することにより、５％ｗ／ｗのＮＵ－ＰＥＧでコーティングされたＮＨＳ－ＰＯｘを調製した。Ｒｅｔｓｃｈ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｍｉｌｌ ＺＭ ２００を使用してコーティング造粒物を粉砕し、ａｌｕ－ａｌｕバッグで真空封止した。
【0096】
１Ｈ－ＮＭＲ分光法を使用し、ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＥＧ反応性ポリマー粒子を分析した。２５ｍｇの粉末を、２０分間超音波処理することによってトリフルオロ酢酸（０．２０ｍＬ）に溶解した。造粒物の完全な溶解後、試料を重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ６）（０．８０ｍＬ）で希釈し、ＮＭＲ管に移し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを記録した。得られたスペクトルから、未反応ＮＨＳの量は、ＮＨＳ－ＰＯｘと比べて９５パーセントと計算された。
【0097】
ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＥＧ反応性ポリマー粒子を、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに分析した。２０ｍｇの粉末を、無水酢酸（１．００ｍＬ）で５０℃で１時間処理した。次に、メタノール（２．００ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でさらに１時間撹拌した。アリコート（０．７５ｍＬ）を取り、すべての揮発物を減圧下で除去した。試料を、ＳＥＣ分析の溶離液である５０ｍＭの塩化リチウムを含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２．５０ｍＬ）に溶解した。ＳＥＣをポリ（メチルメタクリレート）標準に対して測定し、得られたサイズ排除クロマトグラムからＭｎ、Ｍｗ及びＰＤＩを決定した。ＰＤＩは１．５以下であり、造粒中に架橋が生じなかったことを示す。
【0098】
（繊維状シート）
本発明による組織接着性シートの調製において繊維状シートして使用するために、以下の市販の止血製品を選択した：
ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）：８層の還元架橋ゲルフォーム繊維からなる粘着性繊維状シート。それぞれ約２ｍｍ厚の８つの層は、寸法が５０ｍｍ×７５ｍｍである。ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）の水分含有量は、１５％以下である。製品を真空オーブン中４０℃で数時間乾燥させ、水分含有量を２．０％ｗ／ｗ以下（重量測定によって決定される）まで低減させた後、凝集粒子を含浸させた。
サージセル（ＳＵＲＧＩＣＥＬ）（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）：再生セルロースの制御された酸化（ＯＲＣ）によって調製された、吸収性不織布からなる粘着性繊維状シート。寸法は５．１ｃｍ×１０．２ｃｍであり、水分含有量は２．０％ｗ／ｗ以下であった
サージセル（登録商標）ＮＵ－ニット（ＮＵ－ＫＮＩＴ）（登録商標）／サージセル（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）ハイブリッド：複数のサイズ（例えば、１５．２ｃｍ×２２．９ｃｍ）で入手可能な、再生セルロースの制御された酸化（ＯＲＣ）によって調製された繊維の高密度の吸収性編地をサージセル（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）に縫い付け、５．１ｃｍ×１０．２ｃｍの寸法に切断した。
ＰＥＭ：酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、並びに寸法（長さ、幅）９７．０～１０２．５ｍｍ、及び厚さ１．４０～２．５０ｍｍのポリグラクチン９１０からなる粘着性繊維状シートを以下の通り調製した。ポリ（グリコリド－コ－ラクチド）（ＰＧＬ、９０／１０ｍｏｌ／ｍｏｌ）を溶融紡糸し繊維にした。８０デニールのマルチフィラメントヤーンを固め、８００デニールの固められたヤーンにした。固められたヤーンをおよそ１１０℃で捲縮した。捲縮ヤーンを約１．２５’’の長さを有する短繊維に切断した。捲縮短繊維２０ｇを精密に秤量し、マルチローラーカード機のフィードコンベヤーベルト上に均一に広げた。環境条件（温度：２１℃／５５％ＲＨ）を制御した。次いで、短繊維をカーディングして不織バットを作成した。バットをピックアップローラーから取り外し、４つの均等な部分に切断した。これらを収集方向に垂直な梳毛機の中に再フィードした。この２回目の通過後、バットを秤量し（１９．８ｇ：布収率９９％）、圧縮してフェルトにした。圧縮フェルトをＯＲＣ布の上に正確に広げ、ニードルパンチ加工装置に２回通過させることによって堅固に付着させた。多層布を刈り込み、３台の別個のイソプロピルアルコール浴で洗い流し、スピン仕上げ剤及び機械油を取り除いた。洗い流した多層布を７０℃のオーブンで３０分間乾燥し、冷却して秤量した。水分含有量は２．０％ｗ／ｗ以下であった。
本発明による組織接着性シートの調製において繊維状シートして使用するために、以下の市販の止血製品を選択した：
ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）：８層の還元架橋ゲルフォーム繊維からなる粘着性繊維状シート。それぞれ約２ｍｍ厚の８つの層は、寸法が５０ｍｍ×７５ｍｍである。ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）の水分含有量は、１５％以下である。製品を真空オーブン中４０℃で数時間乾燥させ、水分含有量を２．０％ｗ／ｗ以下（重量測定によって決定される）まで低減させた後、凝集粒子を含浸させた。
サージセル（ＳＵＲＧＩＣＥＬ）（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）：再生セルロースの制御された酸化（ＯＲＣ）によって調製された、吸収性不織布からなる粘着性繊維状シート。寸法は５．１ｃｍ×１０．２ｃｍであり、水分含有量は２．０％ｗ／ｗ以下であった
サージセル（登録商標）ＮＵ－ニット（ＮＵ－ＫＮＩＴ）（登録商標）／サージセル（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）ハイブリッド：複数のサイズ（例えば、１５．２ｃｍ×２２．９ｃｍ）で入手可能な、再生セルロースの制御された酸化（ＯＲＣ）によって調製された繊維の高密度の吸収性編地をサージセル（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）に縫い付け、５．１ｃｍ×１０．２ｃｍの寸法に切断した。
ＰＥＭ：酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、並びに寸法（長さ、幅）９７．０～１０２．５ｍｍ、及び厚さ１．４０～２．５０ｍｍのポリグラクチン９１０からなる粘着性繊維状シートを以下の通り調製した。ポリ（グリコリド－コ－ラクチド）（ＰＧＬ、９０／１０ｍｏｌ／ｍｏｌ）を溶融紡糸し繊維にした。８０デニールのマルチフィラメントヤーンを固め、８００デニールの固められたヤーンにした。固められたヤーンをおよそ１１０℃で捲縮した。捲縮ヤーンを約１．２５’’の長さを有する短繊維に切断した。捲縮短繊維２０ｇを精密に秤量し、マルチローラーカード機のフィードコンベヤーベルト上に均一に広げた。環境条件（温度：２１℃／５５％ＲＨ）を制御した。次いで、短繊維をカーディングして不織バットを作成した。バットをピックアップローラーから取り外し、４つの均等な部分に切断した。これらを収集方向に垂直な梳毛機の中に再フィードした。この２回目の通過後、バットを秤量し（１９．８ｇ：布収率９９％）、圧縮してフェルトにした。圧縮フェルトをＯＲＣ布の上に正確に広げ、ニードルパンチ加工装置に２回通過させることによって堅固に付着させた。多層布を刈り込み、３台の別個のイソプロピルアルコール浴で洗い流し、スピン仕上げ剤及び機械油を取り除いた。洗い流した多層布を７０℃のオーブンで３０分間乾燥し、冷却して秤量した。水分含有量は２．０％ｗ／ｗ以下であった。
【0099】
（含浸方法）
機械
Ｆｉｂｒｏｌｉｎｅ ＳＬ－Ｐｒｅｇ実験室機械は、最大２００Ｈｚの周波数で最大４０ｋＶの電圧を最大６０秒間印加することにより、電極間で粒子を動かす。２つの電極プレートは、約５０×４０ｃｍのサイズである。上プレートを接地させる。
機械
Ｆｉｂｒｏｌｉｎｅ ＳＬ－Ｐｒｅｇ実験室機械は、最大２００Ｈｚの周波数で最大４０ｋＶの電圧を最大６０秒間印加することにより、電極間で粒子を動かす。２つの電極プレートは、約５０×４０ｃｍのサイズである。上プレートを接地させる。
【0100】
以下の標準設定を使用した：４０ｋＶ、１００Ｈｚ、２０～３０秒。
【0101】
アレイ
３Ｄ印刷ＰＭＭＡアレイを下電極プレートに取り付けた後、粉末を重力法によってアレイに注入した。掻取りカートン又は金属スパチュラを使用し、アレイに反応性ポリマー粉末を充填した。アレイは５０×７５×４ｍｍであり、２２×３３＝７２６個の正方形ウェル（各ウェルの内のり寸法：２×２×２ｍｍ）を含有していた。７２６個のウェルの合計体積は、およそ５．８ｍＬであった。
３Ｄ印刷ＰＭＭＡアレイを下電極プレートに取り付けた後、粉末を重力法によってアレイに注入した。掻取りカートン又は金属スパチュラを使用し、アレイに反応性ポリマー粉末を充填した。アレイは５０×７５×４ｍｍであり、２２×３３＝７２６個の正方形ウェル（各ウェルの内のり寸法：２×２×２ｍｍ）を含有していた。７２６個のウェルの合計体積は、およそ５．８ｍＬであった。
【0102】
スペーサ
スペーサマスクをアレイの上に配置した。スペーサを使用すると、交番電界に供した際に粒子の上下移動が可能になる。スペーサが使用されない場合、担体への浸透及びそこを通る分布が制限される。
スペーサマスクをアレイの上に配置した。スペーサを使用すると、交番電界に供した際に粒子の上下移動が可能になる。スペーサが使用されない場合、担体への浸透及びそこを通る分布が制限される。
【0103】
異なる基材に対して異なるスペーサ高さが必要である。ＴＵＦＴ－ＩＴ及びＳＮｏＷの場合、高さは３ｍｍのマスクであった。これにより、電極の距離は３＋４ｍｍ＝７ｍｍになる。ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの場合、高さは１．５ｍｍのマスクであった。これにより、電極の距離は１．５＋４ｍｍ＝５．５ｍｍになる。
【0104】
（出血実験）
標準化されたｅｘ－ｖｉｖｏ及びｉｎ－ｖｉｖｏブタ出血モデルを使用して止血有効性を評価した。すべてのモデルは、ヘパリンを使用して凝血時間を延長させ、活性化凝固時間（ＡＣＴ）を約２～３倍にした。
標準化されたｅｘ－ｖｉｖｏ及びｉｎ－ｖｉｖｏブタ出血モデルを使用して止血有効性を評価した。すべてのモデルは、ヘパリンを使用して凝血時間を延長させ、活性化凝固時間（ＡＣＴ）を約２～３倍にした。
【0105】
ｅｘ－ｖｉｖｏモデル：
実際のｉｎ－ｖｉｖｏ環境を可能な限り厳密に模倣するために、屠殺場からのヘパリン処置された新鮮な血液で灌流された新鮮な肝臓を有する、生きたｅｘ－ｖｉｖｏブタモデル。肝臓を灌流機に取り付け、灌流機によって酸素化、血液のｐＨ、温度及び血圧を生体境界内に維持する。２つの肝臓及び１０リットルのヘパリン処置された血液（５０００単位／Ｌ）を屠殺場で収集する。肝臓は氷上で、血液は周囲温度で輸送する。収集後２時間以内に、肝臓を病変について検査し、これを手袋及びシアノアクリレート糊で閉じる。
灌流パラメータ：流量６００ｍｌ／分、圧力１０～１２ｍｍＨｇ、温度３７℃（＋／－１℃）、カルボゲン １分に０．２５リットル
平坦な丸形回転擦過ツールを用いて肝臓表面に円形の出血創傷（直径８ｍｍ）を作成し、パンチされた出血部の深さが常に３ｍｍになるようにゴムアンレーを用いる。
肝臓が適正に灌流されたら（色及び温度を点検する）、以下の手順に従って試料を試験する：試料を適切なサイズ（２．７×２．７ｃｍ）に切断する；カメラをオンにする；カメラで部位数を確認する；８ｍｍの生検をパンチする；生検を切断除去する；ガーゼで血液を出血部から除去する（２ｘ）；事前に秤量されたガーゼで血液を３０秒間収集する；出血をスコア付けする（２名の研究者によって）；事前に湿潤されたガーゼ（食塩水）によって試料を出血部に置き、わずかな圧力で１分間抑える；５分間観察し（接着及び止血を点検し、スコア付けする）、３０分後に繰り返す。
実際のｉｎ－ｖｉｖｏ環境を可能な限り厳密に模倣するために、屠殺場からのヘパリン処置された新鮮な血液で灌流された新鮮な肝臓を有する、生きたｅｘ－ｖｉｖｏブタモデル。肝臓を灌流機に取り付け、灌流機によって酸素化、血液のｐＨ、温度及び血圧を生体境界内に維持する。２つの肝臓及び１０リットルのヘパリン処置された血液（５０００単位／Ｌ）を屠殺場で収集する。肝臓は氷上で、血液は周囲温度で輸送する。収集後２時間以内に、肝臓を病変について検査し、これを手袋及びシアノアクリレート糊で閉じる。
灌流パラメータ：流量６００ｍｌ／分、圧力１０～１２ｍｍＨｇ、温度３７℃（＋／－１℃）、カルボゲン １分に０．２５リットル
平坦な丸形回転擦過ツールを用いて肝臓表面に円形の出血創傷（直径８ｍｍ）を作成し、パンチされた出血部の深さが常に３ｍｍになるようにゴムアンレーを用いる。
肝臓が適正に灌流されたら（色及び温度を点検する）、以下の手順に従って試料を試験する：試料を適切なサイズ（２．７×２．７ｃｍ）に切断する；カメラをオンにする；カメラで部位数を確認する；８ｍｍの生検をパンチする；生検を切断除去する；ガーゼで血液を出血部から除去する（２ｘ）；事前に秤量されたガーゼで血液を３０秒間収集する；出血をスコア付けする（２名の研究者によって）；事前に湿潤されたガーゼ（食塩水）によって試料を出血部に置き、わずかな圧力で１分間抑える；５分間観察し（接着及び止血を点検し、スコア付けする）、３０分後に繰り返す。
【0106】
ブタｉｎ－ｖｉｖｏモデル：
麻酔したブタ（家畜ブタ、雌、体重範囲：４０ｋｇ、成体）で標準化組合せ貫通脾臓破裂を引き起こした。脾臓及び他の臓器にアクセスするため、正中線開腹術を行った。このモデルを使用する際、複数の種類の外科手技を行った：
円形生検パンチを使用し、肝臓及び／又は脾臓に被膜下標準化病変（直径０．８ｍｍ）を作製する。およそ２×２ｃｍの試験品を使用して損傷を覆い、用手タンポナーデを適用する。
メスを使用し、肝臓及び／又は脾臓に被膜下標準化病変を作製する。標準的な技術を使用して所望の肝葉又は脾臓の端部を切除し、切断断面を露出したままにする。７．５×５ｃｍ又は１０×５ｃｍの試験品を使用して切除面を覆い、用手タンポナーデを適用する。
左右の腎臓を特定し、鈍的解剖と鋭的解剖の組合せを使用して単離する。左右の腎臓を片手で掴めるように解剖し、腎臓の尾極（およそ直径２．５±１ｃｍ×深さ１±０．５ｃｍ）をメスでギロチン式に切り取る。標的貼付部位を吸引して血液を払拭し、その直後に試験品を活動性出血部位に貼り付ける。７．５×５ｃｍ又は１０×５ｃｍの試験品を使用して切除面を覆い、用手タンポナーデを適用する。同じ手順を腎臓の頭極で繰り返す。
麻酔したブタ（家畜ブタ、雌、体重範囲：４０ｋｇ、成体）で標準化組合せ貫通脾臓破裂を引き起こした。脾臓及び他の臓器にアクセスするため、正中線開腹術を行った。このモデルを使用する際、複数の種類の外科手技を行った：
円形生検パンチを使用し、肝臓及び／又は脾臓に被膜下標準化病変（直径０．８ｍｍ）を作製する。およそ２×２ｃｍの試験品を使用して損傷を覆い、用手タンポナーデを適用する。
メスを使用し、肝臓及び／又は脾臓に被膜下標準化病変を作製する。標準的な技術を使用して所望の肝葉又は脾臓の端部を切除し、切断断面を露出したままにする。７．５×５ｃｍ又は１０×５ｃｍの試験品を使用して切除面を覆い、用手タンポナーデを適用する。
左右の腎臓を特定し、鈍的解剖と鋭的解剖の組合せを使用して単離する。左右の腎臓を片手で掴めるように解剖し、腎臓の尾極（およそ直径２．５±１ｃｍ×深さ１±０．５ｃｍ）をメスでギロチン式に切り取る。標的貼付部位を吸引して血液を払拭し、その直後に試験品を活動性出血部位に貼り付ける。７．５×５ｃｍ又は１０×５ｃｍの試験品を使用して切除面を覆い、用手タンポナーデを適用する。同じ手順を腎臓の頭極で繰り返す。
【0107】
ラットｉｎ－ｖｉｖｏモデル：
体重２７０～３００グラムの範囲の１００匹の雄Ｗｉｓｔａｒ（ＷＵ）ラットを使用する。すべてのラットを、手術の少なくとも１５分前に０．０２ｍｇ／ｋｇの皮下ブプレノルフィン（ｂｕｐｒｅｎｏｆｉｎｅ）によって処置する。誘導チャンバ内で、加圧空気と酸素の１：１混合物中５％のイソフルランを吸入させることにより、誘導麻酔を投与する。維持用量は、鼻口部マスクを通して投与する３．５％のイソフルランである（同様に加圧空気と酸素の１：１混合物中）。ラットを剪毛し、ヨウ素及び滅菌カバーを用いて皮膚消毒することによって準備する。ラットを、頭部を尾部より高くした状態で１５度傾斜した台に固定する（ｍｕｒａｋｉｍｉ ２００８）。加熱パッド及びランプを用いて体温を３８℃に維持し、厳密な無菌技術を使用して、４～５ｃｍの正中線開腹術によって手術を行う。腹部正中線切開によって腹部を開き、左外側肝葉を単離する。葉を腰の強い紙片に置いて切除を行う。肝葉の遠位部を、メスを用いて端部からおよそ３ｍｍ切り取る。左外側肝葉の創傷付近に１枚のパッチ（１５ｍｍ×２５ｍｍ）を優しく貼り付け、その後湿潤したガーゼで１分間用手タンポナーデを適用する。次いで、肝正中葉の右部分を準備し、部分的切除を行い、同じ寸法の２枚目のパッチを同様に貼り付ける。
体重２７０～３００グラムの範囲の１００匹の雄Ｗｉｓｔａｒ（ＷＵ）ラットを使用する。すべてのラットを、手術の少なくとも１５分前に０．０２ｍｇ／ｋｇの皮下ブプレノルフィン（ｂｕｐｒｅｎｏｆｉｎｅ）によって処置する。誘導チャンバ内で、加圧空気と酸素の１：１混合物中５％のイソフルランを吸入させることにより、誘導麻酔を投与する。維持用量は、鼻口部マスクを通して投与する３．５％のイソフルランである（同様に加圧空気と酸素の１：１混合物中）。ラットを剪毛し、ヨウ素及び滅菌カバーを用いて皮膚消毒することによって準備する。ラットを、頭部を尾部より高くした状態で１５度傾斜した台に固定する（ｍｕｒａｋｉｍｉ ２００８）。加熱パッド及びランプを用いて体温を３８℃に維持し、厳密な無菌技術を使用して、４～５ｃｍの正中線開腹術によって手術を行う。腹部正中線切開によって腹部を開き、左外側肝葉を単離する。葉を腰の強い紙片に置いて切除を行う。肝葉の遠位部を、メスを用いて端部からおよそ３ｍｍ切り取る。左外側肝葉の創傷付近に１枚のパッチ（１５ｍｍ×２５ｍｍ）を優しく貼り付け、その後湿潤したガーゼで１分間用手タンポナーデを適用する。次いで、肝正中葉の右部分を準備し、部分的切除を行い、同じ寸法の２枚目のパッチを同様に貼り付ける。
【0108】
ここに記載されるすべてのｅｘ－ｖｉｖｏ及びｉｎ－ｖｉｖｏ手順を通して、止血製品は事前に湿潤されたガーゼ（食塩水）によって穏やかな圧力で貼り付けられ、１分間保持される。製品の貼付後、凝固及び組織への接着をスコア付けする。
【0109】
パッチのスコア付けシステム：凝固
＋＋＋＋ タンポナーデ直後に達成
＋＋＋ タンポナーデ後＜１０秒で達成
＋＋ タンポナーデ後＜３０秒で達成
＋ タンポナーデ後３分以内に達成
＋／－ ３分後に達成、第２のタンポナーデを適用
－ 達成されず
＋＋＋＋ タンポナーデ直後に達成
＋＋＋ タンポナーデ後＜１０秒で達成
＋＋ タンポナーデ後＜３０秒で達成
＋ タンポナーデ後３分以内に達成
＋／－ ３分後に達成、第２のタンポナーデを適用
－ 達成されず
【0110】
パッチのスコア付けシステム：貼付の１０分後
＋＋＋＋ 非常に強力な接着（除去時にパッチが破損する）
＋＋＋ 強力な接着（除去時にパッチが破損する）
＋＋ 強力な接着（パッチは破損することなく除去可能）
＋ 中等度の接着（パッチは破損することなく除去可能）
＋／－ 軽度の接着（パッチは破損することなく除去可能）
－ 達成されず
＋＋＋＋ 非常に強力な接着（除去時にパッチが破損する）
＋＋＋ 強力な接着（除去時にパッチが破損する）
＋＋ 強力な接着（パッチは破損することなく除去可能）
＋ 中等度の接着（パッチは破損することなく除去可能）
＋／－ 軽度の接着（パッチは破損することなく除去可能）
－ 達成されず
【0111】
［実施例１］
〔タフト－ＩＴへの７０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ又は３５μｍ染色ＮＨＳ－ＰＯｘの含浸〕
タフト－ＩＴへの７０μｍＮＨＳ－ＰＯｘの含浸（ｎ＝１８６）
非含浸タフト－Ｉｔの平均重量は０．７４ｇであった
平均含浸は０．９３ｇであり、これは約５６％の全体的な含浸効率に相当する（含浸効率＝
３４％のＮＨＳ－ＰＯｘがアレイから回収され、含浸に再使用されたことを考慮すると、平均損失は８．９％ｗ／ｗであった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
〔タフト－ＩＴへの７０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ又は３５μｍ染色ＮＨＳ－ＰＯｘの含浸〕
タフト－ＩＴへの７０μｍＮＨＳ－ＰＯｘの含浸（ｎ＝１８６）
非含浸タフト－Ｉｔの平均重量は０．７４ｇであった
平均含浸は０．９３ｇであり、これは約５６％の全体的な含浸効率に相当する（含浸効率＝
【数1】
３４％のＮＨＳ－ＰＯｘがアレイから回収され、含浸に再使用されたことを考慮すると、平均損失は８．９％ｗ／ｗであった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0112】
二重タフト－ＩＴへの３５μｍ青色ＮＨＳ－ＰＯｘの含浸（ｎ＝２６）
非含浸タフト－Ｉｔの平均重量は１．５５ｇであった
平均含浸は２．７８ｇであり、これは約６４％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ＮＨＳ－ＰＯｘをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
ここでも、非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
非含浸タフト－Ｉｔの平均重量は１．５５ｇであった
平均含浸は２．７８ｇであり、これは約６４％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ＮＨＳ－ＰＯｘをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
ここでも、非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0113】
［実施例２］
〔ＰＥＭへの５０μｍ又は３５μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘの含浸〕
ＰＥＭへの５０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝１８６）
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７１ｇであった
平均含浸は１．６５ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
〔ＰＥＭへの５０μｍ又は３５μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘの含浸〕
ＰＥＭへの５０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝１８６）
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７１ｇであった
平均含浸は１．６５ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0114】
ＰＥＭへの３５μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝２０）
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７２ｇであった
平均含浸は１．５３ｇであり、これは約６８％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約５％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７２ｇであった
平均含浸は１．５３ｇであり、これは約６８％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約５％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0115】
［実施例３］
〔ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの５０μｍ又は３５μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘの含浸〕
ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの５０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝５）
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５６ｇであった
平均含浸は３．４７ｇであり、これは約５５％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
〔ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの５０μｍ又は３５μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘの含浸〕
ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの５０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝５）
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５６ｇであった
平均含浸は３．４７ｇであり、これは約５５％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約１０％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0116】
ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの３５μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物の含浸（ｎ＝１２）
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった
平均含浸は２．８７ｇであり、これは約６５％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約５％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった
平均含浸は２．８７ｇであり、これは約６５％の全体的な含浸効率に相当する
平均損失は約５％であったが、ポリマーをアレイから回収し、含浸に再使用する必要はなかった。
非含浸シートの重量と含浸レベル（グラム単位）の間に相関は観察されなかった。
【0117】
［実施例４］
〔ＰＥＭへの４０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８（５及び１０％）顆粒の含浸〕
５％Ｐ１８８：
非含浸ＰＥＭの平均重量は１．０４ｇであった（ｎ＝１１）
平均含浸は２．５０ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
〔ＰＥＭへの４０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８（５及び１０％）顆粒の含浸〕
５％Ｐ１８８：
非含浸ＰＥＭの平均重量は１．０４ｇであった（ｎ＝１１）
平均含浸は２．５０ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
【0118】
１０％Ｐ１８８
非含浸ＰＥＭの平均重量は１．０３ｇであった（ｎ＝６）
平均含浸は２．５６ｇであり、これは約７１％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＰＥＭの平均重量は１．０３ｇであった（ｎ＝６）
平均含浸は２．５６ｇであり、これは約７１％の全体的な含浸効率に相当する
【0119】
５％ＰＥＧ３０００：
非含浸ＰＥＭの重量は０．９６ｇであった（ｎ＝１）
含浸は２．１９ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＰＥＭの重量は０．９６ｇであった（ｎ＝１）
含浸は２．１９ｇであり、これは約７０％の全体的な含浸効率に相当する
【0120】
１０％ＰＥＧ３０００：
非含浸ＰＥＭの重量は１．０２ｇであった（ｎ＝１）
含浸は２．４８ｇであり、これは約７１％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＰＥＭの重量は１．０２ｇであった（ｎ＝１）
含浸は２．４８ｇであり、これは約７１％の全体的な含浸効率に相当する
【0121】
ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＥＧ：
非含浸ＰＥＭの重量は１．０１ｇであった（ｎ＝１）
含浸は１．４７ｇであり、これは約５９％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＰＥＭの重量は１．０１ｇであった（ｎ＝１）
含浸は１．４７ｇであり、これは約５９％の全体的な含浸効率に相当する
【0122】
［実施例５］
〔ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの４０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８（１．５、２．５、３．５、５及び１０％）顆粒の含浸〕
１．５％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５５ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．９０ｇであり、これは約５５％の全体的な含浸効率に相当する
〔ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドへの４０μｍＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ／Ｐ１８８（１．５、２．５、３．５、５及び１０％）顆粒の含浸〕
１．５％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５５ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．９０ｇであり、これは約５５％の全体的な含浸効率に相当する
【0123】
２．５％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５３ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．７７ｇであり、これは約５４％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５３ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．７７ｇであり、これは約５４％の全体的な含浸効率に相当する
【0124】
３．５％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．４５ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．１９ｇであり、これは約４５％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．４５ｇであった（ｎ＝１）
平均含浸は１．１９ｇであり、これは約４５％の全体的な含浸効率に相当する
【0125】
５％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった（ｎ＝１２）
平均含浸は２．８７ｇであり、これは約６５％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった（ｎ＝１２）
平均含浸は２．８７ｇであり、これは約６５％の全体的な含浸効率に相当する
【0126】
１０％Ｐ１８８：
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった
平均含浸は２．６１ｇであり、これは約６３％の全体的な含浸効率に相当する
非含浸ＮＵ－ニット／ＳＮｏＷハイブリッドの平均重量は１．５２ｇであった
平均含浸は２．６１ｇであり、これは約６３％の全体的な含浸効率に相当する
【0127】
［実施例６］
〔ＰＥＭへの１００μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ジェリータＳｐｏｎ顆粒の含浸〕
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７９ｇであった（ｎ＝１）
２サイクル（１回は２０秒、１回は３０秒）後の平均含浸は１．１５ｇであり、これは約６０％の全体的な含浸効率に相当する
造粒物は膨らみがあったため、アレイに適用できる造粒物の量は限られていた。合理的な含浸効率（又は負荷％）を達成するために、２サイクルが必要であった。
〔ＰＥＭへの１００μｍ反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ジェリータＳｐｏｎ顆粒の含浸〕
非含浸ＰＥＭの平均重量は０．７９ｇであった（ｎ＝１）
２サイクル（１回は２０秒、１回は３０秒）後の平均含浸は１．１５ｇであり、これは約６０％の全体的な含浸効率に相当する
造粒物は膨らみがあったため、アレイに適用できる造粒物の量は限られていた。合理的な含浸効率（又は負荷％）を達成するために、２サイクルが必要であった。
【0128】
［実施例７］
タフト－Ｉｔは、０．７５グラムのゼラチン繊維から作製され、最大１グラムのＮＨＳ－ＰＯｘを保持することができる（実施例１を参照されたい）。１ｇのＮＨＳ－ＰＯｘを超えて負荷容量を増加させるために、０．５グラムの標準的なジェリータＳｐｏｎをｎ＝８層の間に均等に分散させることにより、いわゆる「タフト－Ｉｔ－プラス」を標準的なタフト－Ｉｔから作製した。
タフト－Ｉｔは、０．７５グラムのゼラチン繊維から作製され、最大１グラムのＮＨＳ－ＰＯｘを保持することができる（実施例１を参照されたい）。１ｇのＮＨＳ－ＰＯｘを超えて負荷容量を増加させるために、０．５グラムの標準的なジェリータＳｐｏｎをｎ＝８層の間に均等に分散させることにより、いわゆる「タフト－Ｉｔ－プラス」を標準的なタフト－Ｉｔから作製した。
【0129】
タフト－Ｉｔの密度を増加させることにより、２つの主な結果が得られる：［１］バルク材料が増加し、より良好な止血が達成される＋［２］より多くのＮＨＳ－ＰＯｘを保持する能力が増大し、止血が改善する。
【0130】
タフト－Ｉｔ－プラスに７０μｍのＮＨＳ－ＰＯｘを含浸させた。二重スペーサを使用して、ＮＨＳ－ＰＯｘの負荷を担体あたり１．５ｇまで増加させることができた（各３ｍｍの二重マスクにより、粉末とアレイの厚さは３＋３＋４ｍｍ、電極間の全高は１０ｍｍになる）。
【0131】
［実施例８］
実施例１～７に記載の含浸シートを使用して出血実験を行った。
実施例１～７に記載の含浸シートを使用して出血実験を行った。
【0132】
試験した試料の概要を表１に示す。
【0133】
【表1】
【0134】
出血試験の結果を表２及び３に要約する（ＮＴ＝試験せず）。
【0135】
【表2】
【0136】
【表3】
【0137】
［実施例９］
実験を行い、止血パッチのｉｎ－ｖｉｖｏでの性能に対する反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物のＮＵ－ＰＯｘ含有量の効果を決定した。
実験を行い、止血パッチのｉｎ－ｖｉｖｏでの性能に対する反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物のＮＵ－ＰＯｘ含有量の効果を決定した。
【0138】
（含浸方法）
止血パッチ（ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）；５０×７５ｍｍ、およそ０．７ｇ）に、１：０．１０、１：０．２０及び１：０．４０のモル比でのアセトン造粒によって作製された反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を含浸させ、前記モル比は、ＮＨＳ－ＰＯｘによって提供されるＮＨＳ基の数のＮＵ－ＰＯｘによって提供されるアミン基の数に対する比を指す。同じ止血パッチに、反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末も含浸させた。
止血パッチ（ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）；５０×７５ｍｍ、およそ０．７ｇ）に、１：０．１０、１：０．２０及び１：０．４０のモル比でのアセトン造粒によって作製された反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ顆粒を含浸させ、前記モル比は、ＮＨＳ－ＰＯｘによって提供されるＮＨＳ基の数のＮＵ－ＰＯｘによって提供されるアミン基の数に対する比を指す。同じ止血パッチに、反応性ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末も含浸させた。
【0139】
Ｆｉｂｒｏｌｉｎｅ ＳＬ－Ｐｒｅｇ実験室機械を使用し、１グラムの造粒物／粉末をパッチ全体に分布させた。次に、止血パッチを固着させ、乾燥させ、１ｇのシリカを含有するａｌｕ－ａｌｕパウチに装填し、真空封止した。
【0140】
機械
Ｆｉｂｒｏｌｉｎｅ ＳＬ－Ｐｒｅｇ実験室機械は、最大２００Ｈｚの周波数で最大４０ｋＶの電圧を最大６０秒間の期間印加することにより、電極間で粒子を動かす。２つの電極プレートは、約５０×４０ｃｍのサイズである。上プレートを接地させる。
Ｆｉｂｒｏｌｉｎｅ ＳＬ－Ｐｒｅｇ実験室機械は、最大２００Ｈｚの周波数で最大４０ｋＶの電圧を最大６０秒間の期間印加することにより、電極間で粒子を動かす。２つの電極プレートは、約５０×４０ｃｍのサイズである。上プレートを接地させる。
【0141】
以下の標準設定を使用した：４０ｋＶ、１００Ｈｚ、２０秒。
【0142】
アレイ
３Ｄ印刷ＰＭＭＡアレイを下電極プレートに取り付けた後、粉末を重力法によってアレイに注入した。掻取りカートン又は金属スパチュラを使用し、アレイに反応性ポリマー粉末を充填した。アレイは５０×７５×４ｍｍであり、２２×３３＝７２６個の正方形ウェル（各ウェルの内のり寸法：２×２×２ｍｍ）を含有していた。７２６個のウェルの合計体積は、およそ５．８ｍＬであった。
３Ｄ印刷ＰＭＭＡアレイを下電極プレートに取り付けた後、粉末を重力法によってアレイに注入した。掻取りカートン又は金属スパチュラを使用し、アレイに反応性ポリマー粉末を充填した。アレイは５０×７５×４ｍｍであり、２２×３３＝７２６個の正方形ウェル（各ウェルの内のり寸法：２×２×２ｍｍ）を含有していた。７２６個のウェルの合計体積は、およそ５．８ｍＬであった。
【0143】
スペーサ
スペーサマスクをアレイの上に配置した。スペーサを使用すると、交番電界に供した際に粒子の上下移動が可能になる。スペーサが使用されない場合、担体への浸透及びそこを通る分布が制限される。タフト－ＩＴの場合、これは３ｍｍのマスクであった。これにより、電極の距離は３＋４ｍｍ＝７ｍｍになる。
スペーサマスクをアレイの上に配置した。スペーサを使用すると、交番電界に供した際に粒子の上下移動が可能になる。スペーサが使用されない場合、担体への浸透及びそこを通る分布が制限される。タフト－ＩＴの場合、これは３ｍｍのマスクであった。これにより、電極の距離は３＋４ｍｍ＝７ｍｍになる。
【0144】
ＮＨＳ－ＰＯｘ：ＮＵ－ＰＯｘ造粒物（０、１０、２０及び４０パーセントのＮＵ－ＰＯｘからのアミン基、パーセンテージはＮＨＳ－ＰＯｘによって提供されるＮＨＳ基の数に基づいて計算される）又はＮＨＳ－ＰＯｘ粉末を含有する止血パッチのｉｎ ｖｉｖｏでの性能を、非ヘパリン処置ｉｎ－ｖｉｖｏブタモデルで評価した。試験されたパッチの詳細を表４に示す。
【0145】
【表4】
【0146】
（ｉｎ ｖｉｖｏ試験）
成体雌家畜ブタ（４０～５０ｋｇ）に試験を行った。抗凝固剤は適用しなかった。パッチ性能を脾臓と肝臓の両方で試験した。脾臓又は肝臓の位置を特定し、試験期間の経過とともに必要に応じて表出させ、食塩水で浸したスポンジで覆うことによりそれらの天然の湿度を維持した。
成体雌家畜ブタ（４０～５０ｋｇ）に試験を行った。抗凝固剤は適用しなかった。パッチ性能を脾臓と肝臓の両方で試験した。脾臓又は肝臓の位置を特定し、試験期間の経過とともに必要に応じて表出させ、食塩水で浸したスポンジで覆うことによりそれらの天然の湿度を維持した。
【0147】
異なる種類の損傷を作成した：
肝臓：擦傷、生検パンチ及び切除傷
脾臓：切除傷
肝臓：擦傷、生検パンチ及び切除傷
脾臓：切除傷
【0148】
適切にサイズ調整された肝実質の部分を擦過／パンチし、中等度から重度の出血を引き起こした。外科用メス及び１×１ｃｍ２の鋳型によって肝臓の擦傷を作成し、８ｍｍの円形生検パンチを使用して円形パンチを作成した。肝臓及び脾臓の切除傷は、外科用ナイフを使用して作成した。
【0149】
組織の切除又は乱切の直後にパッチを貼り付けた：
生検パンチ及び擦傷に対して２×２ｃｍ片
切除傷に対して完全な７．５×５ｃｍのパッチ
生検パンチ及び擦傷に対して２×２ｃｍ片
切除傷に対して完全な７．５×５ｃｍのパッチ
【0150】
試験パッチを出血組織に貼り付け、食塩溶液で事前に湿潤されたガーゼを使用して圧迫することによって穏やかにプレスした。タンポナーデは、最初に１０秒間の期間、次に３０秒間の間隔をおき、合計５分間まで適用した。
【0151】
含浸されていないタフト－ＩＴパッチを基準として使用した（タフト－ＩＴと呼ぶ）。
【0152】
ｉｎ ｖｉｖｏ試験の結果を表５に要約する。
【0153】
【表5】
【0154】
パッチ１～４は非常に強力な組織接着を示した一方、タフト－ＩＴパッチでは軽度の接着しか観察されなかった。
【0155】
パッチ１及び２は、貼付後にごくわずかな膨張しか示さなかった。パッチ３～４は、より大きな、しかし依然として許容可能な膨張を示した。
【0156】
［実施例１０］
止血パッチ（ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）；５０×７５ｍｍ、およそ０．７ｇ）に、ＮＨＳ－ＰＯｘの溶液、ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末、又はＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物のいずれかを含浸させた。使用したＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物は、１：０．２０のモル比でのアセトン造粒によって作製された（実施例９を参照されたい）。
止血パッチ（ジェリータ タフト－Ｉｔ（登録商標）；５０×７５ｍｍ、およそ０．７ｇ）に、ＮＨＳ－ＰＯｘの溶液、ＮＨＳ－ＰＯｘ粉末、又はＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物のいずれかを含浸させた。使用したＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物は、１：０．２０のモル比でのアセトン造粒によって作製された（実施例９を参照されたい）。
【0157】
ＮＨＳ－ＰＯｘをイソプロピルアルコールとジクロロメタンの１：１混合物（２００ｇ／Ｌ）に溶解することにより、ＮＨＳ－ＰＯｘを含有する噴霧溶液を調製した。実験室ガラス噴霧器及び加圧空気を使用し、この噴霧溶液５ｍＬを１回の噴霧サイクルでパッチに含浸させた。このようにして送達されたＮＨＳ－ＰＯｘの全量は、パッチあたり１グラムであった。含浸後、パッチを４０℃のオーブン内で２時間乾燥させ、その後乾燥器で２日間保管した後、１ｇのシリカを含有するａｌｕ－ａｌｕパウチに装填して真空封止した。
【0158】
さらに、実施例９に記載の手順を使用し、１グラムのＮＨＳ－ＰＯｘ粉末又は１グラムのＮＨＳ－ＰＯｘ／ＮＵ－ＰＯｘ造粒物をパッチに含浸させた。
【0159】
そのように調製されたパッチの性能を、ｅｘ ｖｉｖｏ肝臓灌流モデルで、軽度（＜２０ｍＬ／分）及び重度の出血（＞５０ｍＬ／分）の条件下で三連で試験した。平坦な丸形回転擦過ツールを用いて肝臓表面に円形の出血創傷（直径８ｍｍ）を作成し、パンチされた出血部の深さが常に３ｍｍになるようにゴムアンレーを用いた。結果を表６に示す。
【0160】
【表6】